ES2563038T3

ES2563038T3 - Método para secar una composición proteica, una composición proteica seca y una composición farmacéutica que comprende la proteína seca

Info

Publication number: ES2563038T3
Application number: ES08749902.6T
Authority: ES
Inventors: Svend Havelund; Simon Bjerregaard Jensen
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2007-04-30
Filing date: 2008-04-30
Publication date: 2016-03-10
Anticipated expiration: 2028-04-30
Also published as: EP2152245B1; EP2502618A3; EP2502618A2; EP2152245A2; US9387176B2; CN101674812A; US20100179090A1; JP5496082B2; JP2010526039A; CN101674812B; WO2008132224A2; WO2008132224A3

Abstract

Un proceso para secar una solución proteica que comprende: a) Seleccionar un pH objetivo de la proteína seca, donde el pH objetivo está entre 6.0 y 8.5 b) Seleccionar un pH objetivo para la solución proteica, donde el pH objetivo está entre 7.4 y 11.0 c) Proporcionar una fase acuosa, d) Añadir una proteína, e) Opcionalmente, añadir excipientes, f) Ajustar el pH con una base no volátil y, opcionalmente, un ácido no volátil hasta el pH objetivo de la proteína seca, donde la base tiene una presión de vapor por debajo de 65 Pa a temperatura ambiente y donde el ácido tiene una presión de vapor por debajo de 65 Pa a temperatura ambiente, g) Ajustar el pH con una base volátil hasta el pH objetivo de la solución proteica que se va a secar, donde la base tiene una presión de vapor por encima de 65 Pa a temperatura ambiente o donde la base es una mezcla azeotrópica acuosa que incluye una base que tiene una presión de vapor por encima de 65 Pa a temperatura ambiente y h) Secar por aspersión, liofilizar por aspersión o liofilizar la solución proteica, donde los pasos d, e, f y g se pueden llevar a cabo en cualquier orden mientras se agita de manera continua, donde la proteína se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, análogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, análogos de GLP-1 y derivados de GLP-1, glucagón y/o cualquier combinación de estos.

Description

5

10

15

20

25

30

35

DESCRIPCION

Metodo para secar una composicion proteica, una composicion proteica seca y una composicion farmaceutica que comprende la protema seca

CAMPO DE LA INVENClON

La presente invencion se refiere a un metodo para secar soluciones proteicas y al producto proteico seco. La invencion tambien se refiere a composiciones farmaceuticas que contienen tal protema seca, a metodos para tratar la diabetes y la hiperglucemia utilizando la protema seca de la invencion y al uso de tal protema seca en el tratamiento de la diabetes e hiperglucemia.

ANTECEDENTES DE LA INVENClON

El secado es un proceso de transferencia de masa que da como resultado la eliminacion de la humedad acuosa por evaporacion a partir de un solido, semisolido o lfquido para finalizar en un estado solido.

Un posible metodo de secado es el secado al vado, donde se suministra el calor por radiacion o conduccion (o microondas) de contacto a la vez que el vapor producido se elimina mediante el sistema de vado. Otra tecnica es el secado en tambor, donde se utiliza una superficie calentada para proporcionar la energfa y los aspiradores extraen el vapor del habitaculo.

La liofilizacion o secado por congelacion es un metodo de secado utilizado comunmente en la industria bioqmmica. El disolvente se congela antes del secado y a continuacion se sublima, es decir, se hace pasar a la fase gaseosa directamente de la fase solida, por debajo del punto de fusion del disolvente. La liofilizacion se lleva a cabo a menudo al alto vado para permitir que el secado ocurra con una velocidad razonable. Durante la congelacion puede tener lugar la desnaturalizacion de la protema y peptidos, lo que da lugar a un producto liofilizado con una calidad deficiente. El secado por aspersion tiene una amplia gama de aplicaciones en la industria qmmica, la industria alimentaria y las industrias bioqmmica y farmaceutica. El secado por aspersion se ha utilizado en la industria farmaceutica desde el inicio de la decada de 1940. Es un metodo util para el procesamiento de los agentes farmaceuticos debido a que ofrece un medio para obtener polvos con propiedades predeterminadas, tales como la forma y distribucion del tamano de partmulas. Ademas, se pueden realizar varios procesos de formulacion en un paso en un secador por aspersion: estos incluyen la encapsulacion, formacion del complejo e incluso polimerizaciones. El secado por aspersion es tambien un metodo conveniente para secar agentes farmaceuticos sensibles al calor, tales como farmacos proteicos con una perdida de actividad minima.

La solicitud de patente internacional WO 00/00176 divulga una formulacion de micropartmulas que se puede obtener mediante el secado por aspersion de una solucion sustancialmente pura de un agente terapeutico sin la produccion concomitante de una concentracion elevada no deseada de sal u otros excipientes. Se dice que la sal no es deseable debido a que no tiene un efecto estabilizante, de hecho la estabilidad podra ser superior con cantidades reducidas de sal. Las micropartmulas de insulina se pueden obtener disolviendo Zn-insulina en acido (HCl), anadiendo alcali (NaOH) para proporcionar una solucion de insulina, p. ej., a un pH superior a 7 y secando por aspersion la solucion de insulina. El acido clorhndrico y el hidroxido de sodio anadidos generan un contenido salino en la formulacion de micropartmulas secadas por aspersion. Ademas, la formulacion obtenida tendra, tras la adicion de agua, el mismo pH que la solucion proteica introducida en el secador por aspersion.

La publicacion de patente internacional WO 95/24183 se refiere a metodos y composiciones para el suministro

5

10

15

20

25

30

35

pulmonar de insulina. Los polvos de insulina se producen mezclando insulina cristalina a granel en excipientes que contienen tampon de citrato de sodio (manitol y/o rafinosa) para proporcionar una concentracion final de solidos de 7.5 mg/mL y un pH de 6.7 ± 0.3 y a continuacion secando por aspersion la solucion de insulina. La publicacion de patente internacional WO 05/092301 se refiere al secado por aspersion de una solucion de insulina transparente a un pH por debajo del punto isoelectrico de la insulina, preferentemente inferior a 5.4.

El documento WO 2006/023943 divulga un proceso para el secado por aspersion de la insulina proporcionando una solucion de insulina y ajustando el pH con una base no volatil para formar una solucion proteica con un pH objetivo de 8.3 antes del secado por aspersion.

El GLP-1 humano es un peptido con 37 residuos aminoaddicos que se origina a partir del preproglucagon el cual se sintetiza, entre otros, en las celulas L del fleon distal, en el pancreas y en el cerebro. El GLP-1 es una hormona del intestino importante con una funcion reguladora sobre el metabolismo de la glucosa y el metabolismo y secrecion gastrointestinales. El GLP-1 estimula la secrecion de insulina en una manera dependiente de la glucosa, estimula la biosmtesis de insulina, promueve la preservacion de celulas beta, disminuye la secrecion de glucagon, vaciado gastrico y toma de alimentos. El GLP-1 humano se hidroliza en GLP-1(7-37) y GLP-1(7-36)-amida, que son ambos peptidos insulinotropicos.

La hormona terapeutica insulina es una protema con un peso molecular bajo que tiene influencia sobre el nivel de glucosa sangumea. Millones de personas la utilizan a diario para el tratamiento medico de la diabetes. La diabetes es una enfermedad cronica provocada por la deficiencia absoluta o relativa de insulina y la resistencia a la insulina, que da como resultado niveles de glucosa sangumea elevados (hiperglucemia) lo que acarrea complicaciones a largo plazo.

En la actualidad, el tratamiento de la diabetes, tanto la diabetes de tipo 1 como la diabetes de tipo 2, se basa en gran medida en el denominado tratamiento con insulina intensivo. De acuerdo con este regimen, se trata a los pacientes con multiples inyecciones diarias de insulina que comprenden una o dos inyecciones diarias de insulina de accion prolongada para satisfacer los requisitos basales de insulina suplementadas con inyecciones intravenosas rapidas de la insulina de accion inmediata para satisfacer los requisitos de insulina relacionados con las comidas.

La molecula de insulina esta constituida por dos cadenas, A y B, con 21 y 30 residuos respectivamente. La cadena A esta formada por dos fragmentos helicoidales separados por una parte elongada corta unida a una de las helices mediante un enlace disulfuro intracatenario. Dos enlaces disulfuro adicionales unen la cadena A con la cadena B mas larga. En la forma biologicamente activa la insulina existe como un monomero en el cual la cadena B contiene una region helicoidal central flanqueada por dos partes elongadas. En presencia de iones divalentes como el zinc, los monomeros se ensamblan en hexameros, donde cada uno de los dos iones de zinc centrales esta coordinado mediante tres residuos de histidina. La insulina es susceptible de fibrilacion, un proceso de plegamiento erroneo que conduce a un ensamblaje bien ordenado de tipo beta-cruzado. Se proporciona proteccion de la fibrilacion en celulas p captando el monomero susceptible con hexameros de zinc. Cuando la fibrilacion tiene lugar durante el secado por aspersion de la insulina, la boquilla se puede obstruir, lo que conlleva interrupciones en el proceso de secado.

Otro factor importante cuando se quiere evitar la obstruccion de las boquillas de secado por aspersion es que la protema que se va secar este adecuadamente disuelta en la solucion. La protema dispersada en la solucion de entrada tambien puede conllevar la obstruccion del equipo.

Ademas, el pH de la protema seca es muy importante. A menudo es deseable obtener un producto seco con un pH

5

10

15

20

25

30

35

espedfico, p. ej., un pH comparable al pH fisiologico.

COMPENDIO DE LA INVENCION

La presente invencion trata sobre un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1 para secar una solucion proteica, donde

a) Se obtiene una solucion proteica al mezclar una protema con agua que comprende opcionalmente excipientes y ajustar el pH con una base volatil, una base no volatil y, opcionalmente, un acido no volatil para hacer que la solucion proteica se vuelva alcalina, y

b) Secar la solucion proteica.

DEFINICIONES

Una “solucion proteica” tal y como se menciona en la presente se refiere a una solucion de insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1 o glucagon que se han solubilizado sin utilizar acidos y con valores de pH por encima del punto isoelectrico de la protema.

Con “base volatil” se hace referencia a una base que, en cierto grado, se evaporara al calentar y/o a presion reducida, p. ej., bases que tienen una presion de vapor por encima de 65 Pa a temperature ambiente o una mezcla azeotropica acuosa que incluye una base que tiene una presion de vapor por encima de 65 Pa a temperatura ambiente.

Una “base no volatil” tal como se menciona en la presente se refiere a una base que no se evapora o que se evapora tan solo parcialmente al calentar, p. ej., bases con una presion de vapor por debajo de 65 Pa a temperatura ambiente.

Un “acido no volatil” tal como se menciona en la presente se refiere a un acido que no se evapora o que se evapora tan solo parcialmente al calentar, p. ej., acidos con una presion de vapor por debajo de 65 Pa a temperatura ambiente, tal como el acido fosforico.

Un “acido fuerte” tal como se menciona en la presente se refiere a un acido que tiene un valor de pKa por debajo de -1, tal como acido clorlddrico y acido sulfurico.

Con “insulina”, tal y como se utiliza en la presente, se hace referencia a la insulina humana, insulina porcina o insulina bovina con puentes disulfuro entre CysA7 y CysB7 y entre CysA20 y CysB19 y un puente disulfuro interno entre CysA6 y CysA11 o un analogo de insulina o uno de sus derivados.

Con “GLP-1”, tal y como se utiliza en la presente, se hace referencia al peptido similar al glucagon 1. El GLP-1 humano es un peptido con 37 residuos aminoaddicos. El GLP-1 humano se hidroliza en GLP-1(7-37) y GLP-1(7-36)- amida que son ambos peptidos insulinotropicos.

Con “pH de la solucion proteica/solucion de insulina/solucion de GLP-1/solucion de glucagon” se hace referencia al pH de la solucion proteica/de insulina/de GLP-1/de glucagon tras el ajuste con bases volatiles y no volatiles y antes del secado por aspersion de la solucion proteica.

Con “pH de la protema/insulina/GLP-l/glucagon secos” se hace referencia al pH de la protema/insulina/GLP- 1/glucagon secos/secados por aspersion cuando se mezclan al menos 20 mg de protema seca/secada por

5

10

15

20

25

30

35

40

aspersion con 0.5 mL de agua desmineralizada, lo que da lugar a una concentracion de al menos 40 mg de protema/insulina/GLP-1 por mL de agua desmineralizada, y se mide el pH. El pH de la protema/insulina/GLP-1 secos se puede medir mezclando hasta aproximadamente 300 mg de la protema/insulina/GLP-1 secos/secados por aspersion con 0.5 mL de agua desmineralizada y midiendo el pH. Por ejemplo, se mide el pH mezclando de aproximadamente 20 a aproximadamente 250 mg de protema/insulina/GLP-1/glucagon secos/secados por aspersion con 0.5 mL de agua desmineralizada, mezclando de aproximadamente 20 a aproximadamente 200 mg de protema/insulina/GLP-1/glucagon secos/secados por aspersion con 0.5 mL de agua desmineralizada, mezclando de aproximadamente 20 a aproximadamente 150 mg de protema/insulina/GLP-1/glucagon secos/secados por aspersion con 0.5 mL de agua desmineralizada o mezclando de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mg de protema/insulina/GLP-1/glucagon secos/secados por aspersion con 0.5 mL de agua desmineralizada y midiendo el pH.

Con “pH objetivo de la protema seca” se hace referencia al pH de la protema/insulina/GLP-1/glucagon secos que se desea obtener para la proteina seca, p. ej., el pH en el que la estabilidad qrnmica de la proteina seca es optima o el pH de la proteina seca que es comparable al pH fisiologico.

Con “pH objetivo de la solucion proteica” se hace referencia al pH que sena deseable que tuviera la solucion proteica/solucion de insulina/solucion de GLP-1/solucion de glucagon cuando deba secarse, p. ej., el pH que es optimo para la proteina disuelta debido a su elevada solubilidad o bajo potencial de agregacion.

Con “analogo”, tal y como se utiliza en la presente, se hace referencia a un polipeptido que tiene una estructura molecular que se puede derivar formalmente de la estructura de la proteina, eliminando y/o intercambiando al menos un residuo aminoaddico que esta presente en la proteina de origen natural y/o anadiendo al menos un residuo aminoaddico. Los residuos aminoaddicos anadidos y/o intercambiados pueden ser residuos aminoaddicos codificables u otros residuos de origen natural o residuos aminoaddicos puramente sinteticos. Los analogos de insulina podran ser aquellos en los que la posicion 28 de la cadena B podra modificarse del residuo de Pro natural a uno de Asp, Lys o Ile. En otro aspecto, la Lys de la posicion B29 de la insulina se modifica a Pro o Glu. Asimismo, la Asn de la posicion A21 podra modificarse en Ala, Gin, Glu, Gly, His, Ile, leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr o Val, en particular en Gly, Ala, Ser o Thr y, preferentemente, en Gly. Ademas, la Asn en la posicion B3 podra modificarse en Lys, Thr, Ser, Gin, Glu o Asp. Algunos ejemplos adicionales de analogos de insulina son la des(B30) insulina humana; analogos de la des(B30) insulina humana; analogos de insulina donde se ha eliminado PheBI; analogos de insulina donde la cadena A y/o la cadena B tienen una extension N-terminal y analogos de insulina donde la cadena A y/o la cadena B tienen una extension C terminal. Por lo tanto, se podran anadir una o dos Arg a la posicion B1.

Se utiliza un sistema sencillo para describir los analogos del peptido GLP-1. Por lo tanto, por ejemplo, [Gly8]GLP-1(7- 37) designa un analogo de GLP-1(7-37) derivado formalmente de GLP-1(7-37) sustituyendo el residuo aminoaddico de origen natural en la posicion 8 (Ala) por Gly. Los analogos de GLP-1 podran ser aquellos en los que la Lys de origen natural en la posicion 34 de GLP-1(7-37) haya sido sustituida por Arg. Se sobreentendera que todos los aminoacidos en los que no se especifica el isomero optico son el isomero L.

En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 17 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 15 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 10 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 8 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 7 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 6 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se

5

10

15

20

25

30

han modificado un maximo de 5 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 4 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 3 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se han modificado un maximo de 2 aminoacidos. En algunos aspectos de la invencion, se ha modificado 1 aminoacido.

Con “des(B30) insulina”, “des(B30) insulina humana” se hace referencia a la insulina o a uno de sus analogos en los que esta ausente el residuo aminoaddico B30.

Con “insulina original” se hace referencia a la insulina natural tal como la insulina humana o insulina porcina. Como alternativa, la insulina original puede ser un analogo de insulina.

Con “derivado”, tal y como se utiliza en la presente, se hace referencia a una protema de origen natural o a uno de sus analogos que han sido modificados qmmicamente, p. ej., introduciendo un sustituyente en una o mas posiciones del esqueleto proteico u oxidando o reduciendo grupos de los residuos aminoaddicos en la protema o acilando un grupo amino o un grupo hidroxi libres.

DESCRIPCION DE LA INVENCION

Con el proceso de la invencion, es posible obtener un polvo proteico seco con un pH que es diferente del pH de la solucion proteica que esta seca.

La presente invencion trata sobre un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1 para secar un proceso para secar una solucion proteica, donde

b) Secar la solucion proteica.

En un aspecto de la invencion, el proceso comprende:

a) Seleccionar un pH objetivo de la protema seca,

b) Seleccionar un pH objetivo para la solucion proteica,

c) Proporcionar una fase acuosa,

d) Anadir una protema,

e) Opcionalmente, anadir excipientes,

f) Ajustar el pH con una base no volatil y opcionalmente un acido no volatil hasta el pH objetivo de la protema seca,

g) Ajustar el pH con una base volatil hasta el pH objetivo de la solucion proteica que se va a secar, y

h) Secar por aspersion la solucion proteica,

donde los pasos d, e, f y g se pueden llevar a cabo en cualquier orden mientras se agita de manera continua. En un aspecto de la invencion, los pasos d, e y f se pueden llevar a cabo en cualquier orden mientras se agita de manera

5

10

15

20

25

30

35

continua.

En un aspecto, la solucion proteica se ajusta con una base volatil y una base no volatil. En un aspecto del proceso, la solucion proteica se obtiene a una temperatura por debajo de aproximadamente 8 °C, por debajo de aproximadamente 6 °C, por debajo de aproximadamente 5 °C, por debajo de aproximadamente 4 °C, por debajo de aproximadamente 3 °C, por debajo de aproximadamente 2 °C o por debajo de aproximadamente 1 °C.

En un aspecto, el punto de congelacion del agua se hace disminuir y la solucion proteica se obtiene a una temperatura por debajo de 0 °C.

En un aspecto, la solucion proteica tiene un pH o un pH objetivo por encima de aproximadamente 7.4, por encima de aproximadamente 7.6, por encima de aproximadamente 7.8, por encima de aproximadamente 8.0, por encima de aproximadamente 8.2, por encima de aproximadamente 8.4 o por encima de aproximadamente 8.6. La tendencia de las protemas a fibrilar es menos pronunciada cuando el pH de la solucion proteica esta comprendido entre

aproximadamente: CD y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente CD y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente: 7.8 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 7.8 y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente: 8.0 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 8.0 y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente: 8.2 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 8.4 y aproximadamente 11.0, entre

aproximadamente: 8.6 y aproximadamente 10.0, entre aproximadamente 8.8 y aproximadamente 10.0, entre

aproximadamente 9.0 y aproximadamente 10.0 o entre aproximadamente 9.2 y aproximadamente 10.0.

En un aspecto de la invencion, se anade la protema a una solucion acuosa. La solucion acuosa puede ser agua pura o puede contener excipientes o un compuesto alcalino. En un aspecto de la invencion, el pH de la solucion proteica se ajusta con una solucion alcalina que comprende una base no volatil. La base no volatil se puede seleccionar a partir del grupo constituido por sales de metales alcalinos, hidroxidos de metales alcalinos, sales de metales alcalinoterreos, hidroxidos de metales alcalinoterreos y aminoacidos o una combinacion de estos. Por ejemplo, el pH se puede ajustar con hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, hidroxido de calcio, oxido de calcio o cualquier combinacion de estos.

En un aspecto de la invencion, el pH de la solucion proteica se ajusta con una solucion alcalina que comprende una base volatil. La base volatil se puede seleccionar a partir del grupo constituido por hidroxidos de amonio, hidroxidos de tetraalquilamonio, aminas secundarias, aminas terciarias, arilaminas, aminas alifaticas o bicarbonato de amonio o una combinacion. Por ejemplo, la base volatil puede ser bicarbonato, carbonato, amomaco, hidrazina o una base organica tal como las aminas alifaticas inferiores, p. ej., trimetilamina, trietilamina, dietanolaminas, trietanolamina y sus sales. Ademas, la base volatil puede ser hidroxido de amonio, etilamina o metilamina o una combinacion de estos.

Despues de anadir hidroxido de amonio a una solucion acuosa que contiene insulina, la protema, por ejemplo, insulina, se disolvera mas rapidamente.

En un aspecto de la invencion, se ajusta el pH de la solucion proteica con una solucion alcalina que comprende una base volatil y una base no volatil. En un aspecto, el pH de la solucion proteica se ajusta con hidroxido de sodio hasta el pH objetivo de la protema seca y con hidroxido amonio para obtener el pH seleccionado para la solucion proteica que se va a secar por aspersion.

En un aspecto de la invencion, se utiliza la base volatil para ajustar el pH de la solucion proteica con al menos

5

10

15

20

25

30

35

aproximadamente 0.5 unidades de pH, al menos aproximadamente 0.7 unidades de pH, o al menos aproximadamente 0.9 unidades de pH, o al menos aproximadamente 1.1 unidades de pH, o al menos aproximadamente 1.3 unidades de pH o al menos aproximadamente 1.5 unidades de pH.

En solucion, el patron de autoasociacion de la insulina es una funcion compleja de la concentracion proteica, iones metalicos, pH, fuerza ionica y composicion del disolvente. Para algunas de las soluciones utilizadas en la actualidad que contiene insulina, iones de zinc, sales y compuestos fenolicos, se debe considerar el siguiente equilibrio:

6 ln ^ 3 ln2

3 ln2 + 2 Zn2+ H ^ ln6 (Ta)

Ta T3R3 ^ Ra

donde In es insulina, In2 es insulina dimerica, Ina es insulina hexamerica, Ta es la insulina hexamerica en la conformacion Ta, T3R3 es la insulina hexamerica en la conformacion T3R3 y Ra es la insulina hexamerica en el estado Ra hexamerico.

Los patrones de degradacion conocidos de la insulina incluyen a) la formacion de fibrillas; b) desamidaciones en A18, A21 y B3; c) dimerizaciones mediante una transamidacion o la formacion de la base de Schiff; d) reacciones de intercambio de disulfuro.

De acuerdo con Brange (Stability of Insuline, Kluwer Academic Press, 1994), cada una de estas reacciones de degradacion ocurren mucho mas rapidamente en el estado monomerico que en el estado hexamerico. Por lo tanto, el medio mas eficaz para estabilizar las preparaciones de insulina es desplazando el equilibrio anterior hacia la derecha tanto como sea posible. Ademas de este efecto general de la accion de masas, la reactividad de los residuos seleccionados se modifica adicionalmente dependiendo de su implicacion directa en el cambio conformacional T^-R. Por lo tanto, la reactividad de B3Asn es mucho mas baja en el estado R (cuando el residuo se encuentra en una helice alfa) que en el estado T. La interconversion entre las conformaciones Ta, T3R3 y Ra del hexamero de insulina con dos zinc se modula mediante la union del ligando a las formas T3R3 y Ra. Los aniones tales como el cloruro tienen afinidad por la cuarta posicion de coordinacion en los iones metalicos de T3R3 y Ra, mientras que los conservantes tales como el fenol se unen a las cavidades hidrofobas situadas cerca de las superficies de las formas T3R3 y Ra (Derewenda, Nature y Brzovic, Biochemistry 33, 130557, 1994).

Por lo tanto, las condiciones que favorecen la conformacion Ra de la insulina en solucion suponen una ventaja tanto durante el proceso de secado, con el fin de evitar la desnaturalizacion de la insulina, como durante el almacenamiento, con el fin de maximizar la estabilidad qmmica.

En un aspecto de la invencion, la solucion proteica comprende fenol. En un aspecto, la solucion proteica comprende al menos aproximadamente 2 moles de fenol por mol de protema, o al menos aproximadamente 3 moles de fenol por mol de protema o al menos aproximadamente 4 moles de fenol por mol de protema. En un aspecto, la solucion proteica comprende aproximadamente 4 moles de fenol por mol de insulina. En un aspecto, la solucion proteica comprende aproximadamente 4 moles de fenol por mol de insulina y la solucion proteica comprende zinc. Cuando la solucion proteica comprende insulina, el fenol estabiliza el hexamero de insulina.

La protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1 y derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos.

5

10

15

20

25

30

35

En un aspecto de la invencion, la solucion proteica comprende una protema seleccionada a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina y la solucion ademas comprende zinc. El contenido de zinc de la solucion proteica que comprende insulina puede estar comprendido en el intervalo de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 iones de zinc por hexamero de insulina, o el contenido de zinc puede estar comprendido en el intervalo de aproximadamente 2.1 a aproximadamente 3 iones de zinc por hexamero de insulina o el contenido de zinc puede estar comprendido en el intervalo de aproximadamente 2.2 a aproximadamente 2.7 iones de zinc por hexamero de insulina. El contenido de zinc de la solucion proteica que comprende insulina puede ser de aproximadamente 2.3 iones de zinc por hexamero de insulina.

En un aspecto de la invencion, la solucion proteica comprende un tampon, un detergente, un estabilizante, un inhibidor de proteasa, un sabor, un portador, un agente protector de absorcion, un agente de relleno o un agente para mejorar las propiedades de fluidez o un potenciador de la penetracion.

En un aspecto de la invencion, la solucion proteica comprende glicilglicina. Cuando se anade glicilglicina a la solucion proteica, la protema se disuelve mas rapidamente. En un aspecto, se anade glicilglicina a una solucion acuosa que comprende insulina. La concentracion de glicilglicina en la solucion estara comprendida entre aproximadamente 4 mM y aproximadamente 200 mM. En un aspecto de la invencion, en el metodo para secar o secar por aspersion una solucion proteica se determina un pH objetivo de la protema seca. El pH de la solucion proteica que se va secar o secar por aspersion es superior al pH objetivo de la protema seca. El pH de la solucion proteica podra estar al menos aproximadamente 0.5 unidades de pH por encima del pH de la protema seca. El pH de la solucion proteica podra estar al menos aproximadamente 0.7, al menos aproximadamente 0.9, al menos aproximadamente 1.1, al menos aproximadamente 1.3, o al menos aproximadamente 1.5, o al menos aproximadamente 2.0 o al menos aproximadamente 2.5 unidades de pH por encima del pH de la protema secada por aspersion.

En un aspecto de la invencion, el pH o el pH objetivo de la protema secada por aspersion esta comprendido entre

aproximadamente 6.0 y aproximadamente 8.5, entre aproximadamente 6.2 y aproximadamente 8.4, entre

aproximadamente 6.4 y aproximadamente 8.3, entre aproximadamente 6.6 y aproximadamente 8.2, entre

aproximadamente 6.8 y aproximadamente 8.1, entre aproximadamente 7.0 y aproximadamente 8.0, entre

aproximadamente 7.2 y aproximadamente 7.9, entre aproximadamente 7.4 y aproximadamente 7.8 o entre aproximadamente 7.6 y aproximadamente 7.7.

En un aspecto de la invencion, la solucion proteica se seca o se seca por aspersion para obtener un contenido acuoso por debajo de aproximadamente un 10%. El contenido de agua podra estar por debajo de aproximadamente un 6%, por debajo de aproximadamente un 4%, por debajo de aproximadamente un 2% o por debajo de aproximadamente un 1% calculado/medido segun la perdida en un ensayo de secado (gravimetrico) segun se menciona en la parte experimental.

En un aspecto de la invencion, la protema que se va secar o secar por aspersion se selecciona a partir del grupo constituido por insulina humana AspB28; insulina humana LysB28ProB29 e insulina humana LysB3GluB29.

En un aspecto, la invencion se refiere a una protema seca que se puede obtener segun el proceso de la invencion.

En un aspecto, la invencion se refiere a una protema seca tal y como se describe en los ejemplos.

En un aspecto, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad

5

10

15

20

25

30

35

terapeuticamente eficaz de una protema seca, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o combinaciones de estos de acuerdo con la invencion, donde la composicion se puede proporcionar para el tratamiento de la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en pacientes que necesiten un tratamiento de este tipo.

En un aspecto, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema seca, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos junto con un portador farmaceuticamente aceptable y/o un aditivo farmaceuticamente aceptable, donde la composicion se puede proporcionar para el tratamiento de la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en pacientes que necesiten un tratamiento de este tipo.

En un aspecto de la invencion, se proporciona un metodo para tratar la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica que comprende la protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos.

En un aspecto de la invencion, se proporciona un metodo para tratar la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica que comprende la protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos, opcionalmente junto con un portador farmaceuticamente aceptable y/o aditivos farmaceuticamente aceptables.

En un aspecto de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica para tratar la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, donde la composicion comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon, mezclada con una o dos protemas secadas por aspersion de acuerdo con la invencion, tales como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon opcionalmente junto con portadores y/o aditivos farmaceuticamente aceptables.

En un aspecto de la invencion, se proporciona un metodo para tratar la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica que comprende una protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon, mezclada con una o dos protemas secadas de acuerdo con la invencion, tales como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon opcionalmente junto con un portador farmaceuticamente aceptable y/o aditivos farmaceuticamente aceptables.

Un aspecto de la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion

5

10

15

20

25

30

35

de estos, opcionalmente junto con un portador farmaceuticamente aceptable y/o un aditivo farmaceuticamente aceptable, que se puede proporcionar para el tratamiento pulmonar de la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en pacientes que necesiten un tratamiento de este tipo.

En un aspecto, la invencion se refiere a la aplicacion de una composicion farmaceutica para el tratamiento pulmonar de la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, donde la composicion farmaceutica comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos, opcionalmente en una mezcla con insulina o un analogo de insulina que tiene un inicio de accion rapido, junto con portadores y/o aditivos farmaceuticamente aceptables.

En un aspecto de la invencion, se proporciona un metodo para la produccion de una composicion farmaceutica para su uso en el tratamiento de la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y otros estados que causan hiperglucemia, donde la composicion se usa por via pulmonar y comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con la invencion, tal como insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos, opcionalmente en una mezcla con insulina o un analogo de insulina que tiene un inicio de accion rapido, junto con un portador farmaceuticamente aceptable y/o aditivos farmaceuticamente aceptables.

PRODUCCION DE INSULINA

La insulina o un precursor de esta se puede producir mediante la conocida smtesis de peptidos o mediante la conocida produccion recombinante en microorganismos transformados adecuados. Por lo tanto, la insulina se puede producir mediante un metodo que comprende cultivar una celula hospedadora que contiene una secuencia de ADN que codifica el polipeptido y capaz de expresar el polipeptido en un medio nutriente adecuado en condiciones que permiten la expresion del peptido, tras lo cual se recupera el peptido resultante a partir del cultivo.

Cuando se estan preparando los derivados de insulina que se van a utilizar en la formulacion farmaceutica de acuerdo con la invencion, el producto de partida para la sustitucion, la insulina original o el analogo de insulina o un precursor de estos, se puede producir mediante la conocida smtesis de peptidos o mediante la conocida produccion recombinante en microorganismos transformados adecuados. Por lo tanto, el producto de partida de tipo insulina se puede producir mediante un metodo que comprende cultivar una celula hospedadora que contiene una secuencia de ADN que codifica el polipeptido y capaz de expresar el polipeptido en un medio nutriente adecuado en condiciones que permiten la expresion del peptido, tras lo cual se recupera el peptido resultante a partir del cultivo. Se hace referencia a la solicitud de patente internacional WO 2005/012347.

COMPOSICIONES FARMACEUTICAS

La protema seca de esta invencion se puede administrar, por ejemplo, por via subcutanea, oral, nasal o pulmonar.

Para la administracion subcutanea, se formula la insulina seca de manera analoga a la formulacion de la insulina conocida. Ademas, para la administracion subcutanea, la insulina seca de esta invencion se administra de manera analoga a la administracion de la insulina conocida y, por lo general, los medicos estaran familiarizados con este procedimiento.

La insulina seca de esta invencion se podra administrar por inhalacion en un modo de dosis eficaz para incrementar

5

10

15

20

25

30

35

40

los niveles de insulina circulante y/o para disminuir los niveles de glucosa circulante. Una administracion de este tipo puede ser eficaz para tratar trastornos tales como la diabetes o hiperglucemia. Lograr dosis eficaces de insulina requiere la administracion de una dosis inhalada de insulina seca de esta invencion de entre mas de aproximadamente 0.5 pg/kg y 50 pg/kg. El facultativo experto, que tendra en cuenta factores que incluyen el nivel de insulina, niveles de glucosa sangumea, la condicion ffsica del paciente, el estado pulmonar del paciente o similares, puede determinar una cantidad terapeuticamente eficaz.

De acuerdo con la invencion, se podra suministrar la insulina seca de esta invencion por inhalacion para lograr una rapida absorcion de esta. La administracion por inhalacion puede conllevar una farmacocinetica comparable a la de la administracion subcutanea de insulina. La inhalacion de insulina seca de esta invencion conduce a una elevacion rapida del nivel de insulina circulante seguida por un descenso rapido de los niveles de glucosa sangumea. Normalmente, diferentes dispositivos de inhalacion proporcionan una farmacocinetica similar cuando se comparan tamanos de partmula similares y niveles de deposito en el pulmon similares.

De acuerdo con la invencion, la insulina seca de esta invencion se podra suministrar mediante uno cualquiera de una variedad de dispositivos de inhalacion conocidos en la tecnica para la administracion de un agente terapeutico por inhalacion. Estos dispositivos incluyen inhaladores dosificadores, nebulizadores, generadores de polvo seco, pulverizadores y similares. La insulina seca de esta invencion se suministra mediante un pulverizador o inhalador de polvo seco. Existen varios rasgos deseables de un dispositivo de inhalacion para administrar la insulina seca de esta invencion. Por ejemplo, el suministro mediante un dispositivo de inhalacion es convenientemente fiable, reproducible y exacto. El dispositivo de inhalacion debera suministrar partmulas pequenas, por ejemplo, partmulas inferiores a aproximadamente 10 pm, por ejemplo, aproximadamente 1-5 pm, para una buena respirabilidad. Algunos ejemplos espedficos de dispositivos de inhalacion comercializados adecuados para llevar a la practica esta invencion son Turbohaler™ (Astra), Rotahaler® (Glaxo), Diskus® (Glaxo), inhalador Spiros™ (Dura), dispositivos comercializados por Inhale Therapeutics, AERx™ (Aradigm), el nebulizador Ultravent® (Mallinckrodt), el nebulizador Acorn II® (Marquest Medical Products), el inhalador dosificador Ventolin® (Glaxo), el inhalador de polvo Spinhaler® (Fisons) o similares.

Como reconoceran los expertos en la tecnica, la formulacion de la protema seca de la invencion, la cantidad de la formulacion suministrada y la duracion de la administracion de una unica dosis dependen del tipo de dispositivo de inhalacion empleado. Para algunos sistemas de suministro en aerosol, tales como nebulizadores, la frecuencia de administracion y la duracion del penodo en el cual el sistema se activa dependeran principalmente de la concentracion del conjugado de insulina en el aerosol. Por ejemplo, se pueden utilizar periodos de administracion mas cortos con concentraciones mas elevadas del conjugado de insulina en la solucion del nebulizador. Los dispositivos tales como los inhaladores dosificadores pueden producir concentraciones de aerosol mas elevadas y se pueden operar durante periodos mas cortos para suministrar la cantidad deseada del conjugado de insulina. Los dispositivos tales como inhaladores de polvo suministran el agente activo hasta que se expulsa una descarga de agente concreta desde el dispositivo. En este tipo de inhalador, la cantidad de insulina seca de esta invencion en una cantidad de polvo concreta determina la dosis administrada en una unica administracion.

El tamano de la partmula de la insulina seca de esta invencion en la formulacion suministrada mediante el dispositivo de inhalacion es crucial en lo que se refiere a la capacidad de la insulina para alcanzar los pulmones y las vfas respiratorias bajas o alveolos. La insulina seca de esta invencion se puede formular de manera que al menos aproximadamente un 10% del conjugado de insulina suministrado se deposite en el pulmon, por ejemplo, de aproximadamente un 10 a aproximadamente un 20% o mas. Se sabe que la maxima eficacia del deposito pulmonar

5

10

15

20

25

30

35

40

para seres humanos que respiran a traves de la boca se obtiene con tamanos de partmulas de entre aproximadamente 2 pm y aproximadamente 3 pm. El deposito pulmonar disminuye sustancialmente cuando los tamanos de partmula son superiores a aproximadamente 5 pm. Los tamanos de partmula inferiores a aproximadamente 1 pm provocan que el deposito pulmonar disminuya y se vuelva mas diffcil suministrar una masa suficiente de partmulas que sea terapeuticamente eficaz. Por lo tanto, las partmulas de protema seca suministradas mediante la inhalacion tienen un tamano de partmula inferior a aproximadamente 10 pm, por ejemplo, en el intervalo comprendido entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 5 pm. La formulacion de la protema seca se selecciona para generar el tamano de partmula deseado en el dispositivo de inhalacion escogido.

Convenientemente para la administracion como un polvo seco, la protema seca de esta invencion se prepara en una forma particulada con un tamano de partmula inferior a aproximadamente 10 pm, por ejemplo, entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 pm. El tamano de partmula es eficaz para el suministro en los alveolos del pulmon del paciente. El polvo seco esta compuesto principalmente por partmulas producidas de manera que la mayona de las partmulas tengan un tamano en el intervalo deseado. Convenientemente, al menos aproximadamente un 50% del polvo seco esta compuesto por partmulas que tiene un diametro inferior a aproximadamente 10 pm.

Normalmente, las partmulas se separan a partir de una formulacion de polvo seco en un recipiente y a continuacion se transportan al pulmon de un paciente mediante una corriente de aire portadora. Normalmente, en los inhaladores de polvo seco actuales, la fuerza para romper el solido esta proporcionada unicamente por la inhalacion del paciente. En otro tipo de inhalador, un flujo de aire generado por la inhalacion del paciente activa un motor impulsor que desaglomera las partmulas.

Las formulaciones de protema seca de esta invencion para la administracion a partir de un inhalador de polvo seco normalmente incluyen un polvo seco finamente dividido que contiene la protema seca, pero el polvo tambien puede incluir un agente de relleno, un portador, un excipiente, otro aditivo o similares. Se pueden incluir aditivos en una formulacion de polvo seco del conjugado de insulina, por ejemplo, para diluir el polvo segun se requiera para el suministro a partir de un inhalador de polvo particular, para facilitar el procesamiento de la formulacion, para proporcionar propiedades de polvo convenientes a la formulacion, para facilitar la dispersion del polvo a partir del dispositivo de inhalacion, para estabilizar la formulacion (por ejemplo, antioxidantes o tampones), para proporcionar sabor a la formulacion o similares. Convenientemente, el aditivo no afecta de manera adversa a las vfas respiratorias el paciente. La protema seca se puede mezclar con un aditivo a un nivel molecular o la formulacion solida puede incluir partmulas de la protema conjugada mezclada con las partmulas del aditivo o que recubren estas. Los aditivos normales incluyen mono-, di- y polisacaridos; alcoholes polihndricos y otros polioles tales como, por ejemplo, lactosa, glucosa, rafinosa, melezitosa, lactitol, maltitol, trehalosa, sacarosa, manitol, almidon o combinaciones de estos; surfactantes, tales como sorbitoles, difosfatidilcolina o lecitina; o similares. Normalmente un aditivo, tal como un agente de relleno, esta presente en una cantidad eficaz para un objetivo descrito anteriormente, a menudo entre aproximadamente un 50% y aproximadamente un 99% en peso de la formulacion. Tambien se pueden incluir en la formulacion agentes adicionales conocidos en la tecnica de la formulacion de una protema tal como una protema analoga de la insulina.

La solucion proteica podra combinarse opcionalmente con portadores o excipientes farmaceuticos que sean adecuados para la administracion respiratoria y pulmonar. Tales portadores podran actuar simplemente como agentes de relleno cuando se desee reducir la concentracion de insulina en el polvo que se esta suministrando a un

5

10

15

20

25

30

35

40

paciente, pero tambien podran servir para potenciar la estabilidad de las composiciones de insulina y para mejorar la dispersabilidad del polvo dentro de un dispositivo de dispersion de polvo con el fin de proporcionar un suministro mas eficaz y reproducible de la insulina y para mejorar las caractensticas de manejo de la insulina tales como la fluidez y consistencia para facilitar la produccion y el rellenado con el polvo.

Los materiales portadores adecuados podran estar en forma de un polvo amorfo, un polvo cristalino o una combinacion de polvos amorfos y cristalinos. Los materiales adecuados incluyen carbohidratos, p. ej., monosacaridos tales como la fructosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa y similares; disacaridos tales como la lactosa, trehalosa, celobiosa y similares; ciclodextrinas tales como la 2-hidroxipropilciclodextrina; y polisacaridos tales como la rafinosa, maltodextrinas, dextranos y similares; (b) aminoacidos tales como la glicina, arginina, acido aspartico, acido glutamico, cistema, lisina y similares; (c) sales organicas preparadas a partir de bases y acidos organicos tales como el citrato de sodio, ascorbato de sodio, gluconato de magnesio, gluconato de sodio, clorhidrato de trometamina y similares; (d) peptidos y protemas tales como el aspartamo, albumina serica humana, gelatina y similares; (e) alditoles tales como manitol, xilitol y similares. Un grupo preferido de portadores incluye la lactosa, trehalosa, rafinosa, maltodextrinas, glicina, citrato de sodio, clorhidrato de trometamina, albumina serica humana y manitol. Tales materiales portadores podran combinarse con la insulina antes del secado por aspersion, es decir, anadiendo el material portador a la solucion proteica o la fase acuosa que se prepara para el secado por aspersion. De esta manera, el material portador se formara simultaneamente con las partmulas proteicas y como parte de estas.

Normalmente, cuando el portador se forma por secado por aspersion junto con la protema, la protema estara presente en cada partmula individual con un porcentaje en peso comprendido en el intervalo entre un 5% y un 95%, preferentemente entre un 20% y un 80%. El resto de la partmula sera principalmente material portador (que normalmente esta entre un 5% y un 95%, que habitualmente esta entre un 20% y un 80% en peso), pero tambien incluira un tampon o tampones y podra incluir otros componentes tal como se ha descrito anteriormente.

Como alternativa, los portadores se podran preparar por separado en una forma de polvo seco y combinarse con la protema en polvo seco mezclandolos. Los portadores en polvo preparados por separado normalmente seran cristalinos (para evitar la absorcion de agua), pero en algunos casos podran ser amorfos o mezclas de formas cristalinas y amorfas. El tamano de las partmulas portadoras se podra seleccionar para mejorar la fluidez del polvo de insulina, habitualmente estara comprendido en el intervalo entre 25 m y 100 m. Las partmulas portadoras en este intervalo de tamano por lo general no penetraran en la region alveolar del pulmon y a menudo se separaran de la insulina en el dispositivo de suministro antes de la inhalacion. Por lo tanto, las partmulas que penetran en la region alveolar del pulmon estaran constituidas esencialmente por insulina y tampon. Un material portador preferido es el manitol cristalino que tiene un tamano comprendido en el intervalo mencionado anteriormente. Los polvos de insulina secos de la presente invencion tambien se podran combinar con otros componentes activos. Por ejemplo, podra ser deseable combinar pequenas cantidades de amilina analogos de amilina activos con los polvos de insulina para mejorar el tratamiento de la diabetes. La amilina es una hormona que se secreta con la insulina a partir de las celulas 0 pancreaticas en individuos normales (no diabeticos). Se cree que la amilina modula la actividad de la insulina in vivo y se ha propuesto que la administracion simultanea de la amilina con la insulina podna mejorar el control de la glucosa sangumea. La combinacion de la amilina en polvo seco con la insulina en las composiciones de la presente invencion proporcionara un producto especialmente conveniente para lograr tal administracion simultanea. La amilina se podra combinar con la insulina entre un 0.1% en peso y un 10% en peso (en funcion del peso total de insulina en una dosis), preferentemente entre un 0.5% en peso y un 2.5% en peso. La amilina se

5

10

15

20

25

30

35

40

puede adquirir de proveedores comerciales, tales como Amylin Corporation, San Diego, California y se puede formular facilmente en las composiciones de la presente invencion. Por ejemplo, se podra disolver la amilina en soluciones adecuadas acuosas o de otro tipo junto con la insulina, y opcionalmente portadores, y secar por aspersion la solucion para producir el producto en polvo.

Se puede producir un pulverizado que incluye la protema seca de esta invencion forzando el paso con presion de una suspension o solucion del conjugado proteico a traves de una boquilla. El tamano y la configuracion de la boquilla, la presion aplicada y la tasa de alimentacion del lfquido se pueden escoger para lograr el tamano de partmula y corriente de salida deseados. Se puede producir un electropulverizado, por ejemplo, mediante un campo electrico conectado con una alimentacion de la boquilla o capilar. Convenientemente, las partfculas del conjugado de insulina suministradas mediante un pulverizador tienen un tamano de partmula inferior a aproximadamente 10 pm, por ejemplo, en el intervalo entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 5 pm.

Las formulaciones de la protema seca de esta invencion adecuadas para su uso con un pulverizador incluiran normalmente protemas en una solucion acuosa con una concentracion entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 20 mg de conjugado proteico por mL de solucion. La formulacion puede incluir agentes tales como un excipiente, un tampon, un agente de isotonicidad, un conservante, un surfactante y, por ejemplo, zinc. La formulacion tambien puede incluir un excipiente o agente para la estabilizacion de los cristales, tal como un tampon, un agente reductor, una protema de relleno o un carbohidrato. Las protemas de relleno utiles en la formulacion de conjugados proteicos secos incluyen la albumina, protamina o similares. Los carbohidratos tfpicos utiles en la formulacion de conjugados proteicos incluyen la sacarosa, manitol, lactosa, trehalosa, glucosa o similares. La formulacion cristalina tambien puede incluir un surfactante, que puede reducir o evitar la agregacion inducida superficialmente del conjugado de insulina provocada por la atomizacion de la solucion al formar un aerosol. Se pueden emplear diversos surfactantes convencionales, tales como alcoholes y esteres de acidos grasos y polioxietileno y esteres de acidos grasos y sorbitol y polioxietileno. Por lo general, las cantidades estaran comprendidas en el intervalo entre aproximadamente un 0.001 y aproximadamente un 4% en peso de la formulacion. Las composiciones farmaceuticas que contienen una protema secada de acuerdo con la invencion tambien se podran administrar por via nasal. La composicion farmaceutica se podra administrar como una composicion lfquida, una composicion seca o un gel. Para el suministro del farmaco mediante la nariz, los cristales podran ser superiores a 10 pm con el fin de asegurar el deposito en la cavidad nasal y para evitar que las partfculas se vean arrastradas hacia la region traqueobronquial y pulmonar. Se carece de un conocimiento claro del lfmite del tamano superior, pero probablemente existe un tamano de partmula superior por encima del cual las partmulas, por varias razones, no demostraran eficacia y tal vez puedan incluso provocar una irritacion local.

Las composiciones farmaceuticas que contienen una protema secada de acuerdo con la presente invencion tambien se podran administrar por via parenteral a los pacientes que necesiten un tratamiento de este tipo. La administracion parenteral se podra realizar mediante una inyeccion subcutanea, intramuscular o intravenosa por medio de una jeringuilla, opcionalmente una jeringuilla de tipo bolfgrafo. Como alternativa, se puede realizar una administracion parenteral por medio de una bomba de infusion.

Se pueden preparar composiciones inyectables de la protema seca de la invencion utilizando las tecnicas convencionales de la industria farmaceutica que conllevan disolver y mezclar los ingredientes segun sea necesario para obtener el producto final deseado. Por lo tanto, de acuerdo con un procedimiento, se disuelve un cristal que comprende la insulina de acuerdo con la invencion en una cantidad de agua que es algo inferior al volumen final de

5

10

15

20

25

30

35

40

la composicion que se va preparar. Se anaden un agente isotonico, un conservante y un tampon segun sea necesario y se ajusta el valor del pH de la solucion, si es necesario, utilizando un acido, p. ej., acido clortudrico, o una base, p. ej., hidroxido de sodio acuoso segun sea necesario. Finalmente, se ajusta el volumen de la solucion con agua para obtener la concentracion deseada de los ingredientes.

En un aspecto adicional de la invencion, se selecciona el tampon a partir del grupo constituido por acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, glicina, arginina, dihidrogenofosfato de sodio, hidrogenofosfato de disodio, fosfato de sodio y tris(hidroximetil)aminometano, bicina, tricina, acido malico, succinato, acido maleico, acido fumarico, acido tartarico, acido aspartico o mezclas de estos. Cada uno de estos tampones espedficos constituye un aspecto alternativo de la invencion.

En un aspecto adicional de la invencion, la formulacion comprende ademas un conservante farmaceuticamente aceptable que se podra seleccionar a partir del grupo constituido por fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p- hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bendlico, clorobutanol y trimerosal, bronopol, acido benzoico, imidurea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorofenesina (3-p-clorofenoxipropano-1,2-diol) o mezclas de estos. En un aspecto adicional de la invencion, el conservante esta presente en una concentracion comprendida entre 0.1 mg/mL y 20 mg/mL. En un aspecto adicional de la invencion, el conservante esta presente en una concentracion comprendida entre 0.1 mg/mL y 5 mg/mL. En un aspecto adicional de la invencion, el conservante esta presente en una concentracion comprendida entre 5 mg/mL y 10 mg/mL. En un aspecto adicional de la invencion, el conservante esta presente en una concentracion comprendida entre 10 mg/mL y 20 mg/mL. Cada uno de estos conservantes espedficos constituye un aspecto alternativo de la invencion. El experto en la tecnica esta familiarizado con el uso de un conservante en composiciones farmaceuticas. Por razones de conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19.a edicion, 1995.

En un aspecto adicional de la invencion, la formulacion ademas comprende un agente isotonico que se podra seleccionar a partir del grupo constituido por una sal (p. ej., cloruro de sodio), un azucar o azucar polilddrico, un aminoacido (p. ej., glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, acido aspartico, triptofano, treonina), un alditol (p. ej., glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol), polietilenglicol (p. ej., PEG400) o mezclas de estos. Se podra utilizar cualquier azucar tal como mono-, di- o polisacaridos, o glucanos hidrosolubles incluidos, por ejemplo, fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, almidon soluble, hidroxietilalmidon y carboximetilcelulosa-Na. En un aspecto, el aditivo de tipo azucar es sacarosa. Se define un azucar polihudrico como un hidrocarburo C4-C8 que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol. En un aspecto, el aditivo de tipo azucar politudrico es manitol. Los azucares o azucares politudricos mencionados anteriormente se podran utilizar individualmente o combinados. No existe un lfmite fijo para la cantidad utilizada, siempre que el azucar o azucar politudrico sea soluble en la preparacion lfquida y no tenga un efecto adverso frente a los efectos estabilizantes logrados utilizando los metodos de la invencion. En un aspecto, la concentracion de azucar o azucar politudrico esta comprendida entre aproximadamente 1 mg/mL y aproximadamente 150 mg/mL. En un aspecto adicional de la invencion, el agente isotonico esta presente con una concentracion entre 1 mg/mL y 50 mg/mL. En un aspecto adicional de la invencion, el agente isotonico esta presente con una concentracion entre 1 mg/mL y 7 mg/mL. En un aspecto adicional de la invencion, el agente isotonico esta presente con una concentracion entre 8 mg/mL y 24 mg/mL.

5

10

15

20

25

30

En un aspecto adicional de la invencion, el agente isotonico esta presente con una concentracion entre 25 mg/mL y 50 mg/mL. Cada uno de estos agentes isotonicos espedficos constituye un aspecto alternativo de la invencion. El experto en la tecnica esta familiarizado con el uso de un agente isotonico en las composiciones farmaceuticas. Por razones de conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19.a edicion, 1995.

Los agentes isotonicos tipicos son el cloruro de sodio, manitol, dimetilsulfona y glicerol y los conservantes tipicos son el fenol, m-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo y alcohol bendlico.

Algunos ejemplos de tampones adecuados son el acetato de sodio, glicilglicina, HEPES (acido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinoetanosulfonico) y fosfato de sodio.

Las composiciones que contienen la protema seca de esta invencion tal como la insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon se pueden utilizar en el tratamiento de estados que son sensibles a la insulina. Por lo tanto, se puede utilizar en el tratamiento de la diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 e hiperglucemia, por ejemplo, tal y como se observa a veces en personas gravemente heridas y personas que se han sometido a cirugfa mayor. El nivel de la dosis optima para cada paciente dependera de varios factores, incluidos la eficacia de la insulina espedfica empleada, la edad, el peso corporal, la actividad ffsica y la dieta del paciente, de una posible combinacion con otros farmacos y de la gravedad del estado que se va a tratar. Se recomienda que el experto en la tecnica determine la dosis diaria de la protema seca de esta invencion para cada paciente individual de manera similar a la de las composiciones farmaceuticas conocidas.

Cuando sea oportuno, se podra utilizar la protema seca de esta invencion en una mezcla con otros tipos de protemas, p. ej., analogos de insulina con un inicio de accion mas rapido. Los ejemplos de tales analogos de insulina se describen, p. ej., en las solicitudes de patente europea que tienen los n.os de publicacion EP 214826 (Novo Nordisk A/S), EP 375437 (Novo Nordisk A/S) y EP 383472 (Eli Lilly & Co.).

Se resumira la invencion en los siguientes parrafos:

1. Un proceso para secar una solucion proteica, donde

b) secar la solucion proteica.

2. Un proceso de acuerdo con el parrafo 1, que comprende:

a) Seleccionar un pH objetivo de la protema seca,

b) Seleccionar un pH objetivo para la solucion proteica,

c) Proporcionar una fase acuosa,

d) Anadir una protema,

e) Opcionalmente, anadir excipientes,

5

10

15

20

25

30

h) Secar por aspersion la solucion proteica,

donde los pasos d, e, f y g se pueden llevar a cabo en cualquier orden mientras se agita de manera continua.

3. Un proceso de acuerdo con el parrafo 2, donde los pasos d, e y f se pueden llevar a cabo en cualquier orden mientras se agita de manera continua.

4. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-3, donde la solucion proteica se obtiene a una temperature por debajo de 8 °C.

5. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-4, donde la solucion proteica se obtiene a una temperature por debajo de 6 °C, por debajo de 5 °C, por debajo de 4 °C, por debajo de 3 °C, por debajo de 2 °C o por debajo de 1 °C.

6. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-5, donde el punto de congelacion de la fase acuosa se hace disminuir y se obtiene una solucion proteica a una temperature por debajo de 0 °C.

7. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-6, donde el metodo de secado se selecciona a partir del grupo constituido por secado por aspersion, liofilizacion por aspersion, secado en lecho fluido, liofilizacion y secado al vado.

8. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-7, donde la solucion proteica tiene un pH por encima de 7.4.

9. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-8, donde la solucion proteica tiene un pH por encima de 7.6, por encima de 7.8, por encima de 8.0, por encima de 8.2, por encima de 8.4 o por encima de 8.6.

10. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-8, donde la solucion proteica tiene un pH entre 7.4 y 11.0.

11. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-8 y 10, donde la solucion proteica tiene un pH entre

aproximadamente 7.6 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 7.6 y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente 7.8 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 7.8 y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente 8.0 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 8.0 y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente 8.2 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 8.4 y aproximadamente 11.0, entre

aproximadamente 8.6 y aproximadamente 10.0, entre aproximadamente 8.8 y aproximadamente 10.0, entre

12. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-11, donde la base no volatil se selecciona a partir del grupo constituido por sales de metales alcalinos, hidroxidos de metales alcalinos, sales de metales alcalinoterreos, hidroxidos de metales alcalinoterreos y aminoacidos o una combinacion de estos.

13. El proceso de acuerdo con el parrafo 12, donde la base no volatil es hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, hidroxido de calcio, oxido de calcio o cualquier combinacion de estos.

5

10

15

20

25

30

14. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-13, donde la base volatil se selecciona a partir del grupo constituido por hidroxidos de amonio, hidroxidos de tetraalquilamonio, aminas secundarias, aminas terciarias, arilaminas, aminas alifaticas o bicarbonato de amonio o una combinacion de estos.

15. El proceso de acuerdo con el parrafo 14, donde la base volatil es hidroxido de amonio, etilamina o metilamina o una combinacion de estos.

16. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-15, donde la base volatil ajusta el pH de la solucion proteica con al menos 0.5 unidades de pH.

17. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-16, donde la base volatil ajusta el pH de la solucion proteica con al menos 0.7 unidades de pH, o al menos 0.9 unidades de pH o al menos 1.1 unidades de pH, o al menos 1.3 unidades de pH o al menos 1.5 unidades de pH.

18. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-17, donde el pH de la solucion proteica se ajusta con una solucion que comprende hidroxido de sodio e hidroxido de amonio.

19. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-18, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1 y derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos.

20. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-19, donde la solucion proteica comprende una protema

seleccionada a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina y

ademas la solucion comprende zinc.

21. El proceso de acuerdo con el parrafo 20, donde la solucion proteica comprende fenol.

22. El proceso de acuerdo con los parrafos 20-21, donde la solucion proteica comprende aproximadamente 4 moles de fenol por mol de protema.

23. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-22, donde la solucion proteica comprende un tampon, un

detergente, un estabilizante, un inhibidor de proteasa, un sabor, un portador, un agente protector de

absorcion, un agente de relleno o un agente para mejorar las propiedades de fluidez o un potenciador de la penetracion o una combinacion de estos.

24. El proceso de acuerdo con el parrafo 23, donde la solucion proteica comprende glicilglicina.

25. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-24, donde el pH de la solucion proteica esta por encima del pH

de la protema seca.

26. El proceso de acuerdo con el parrafo 25, donde el pH de la solucion proteica esta al menos 0.5 unidades de pH por encima del pH de la protema seca.

27. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-26, donde el pH de la solucion proteica esta al menos 0.7, al

menos 0.9, al menos 1.1, al menos 1.3 o al menos 1.5 unidades de pH por encima del pH de la protema

seca.

28. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-27, donde el pH de la protema seca esta entre aproximadamente

5

10

15

20

25

30

6.0 y aproximadamente 8.5.

29. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-28, donde el pH de la protema seca esta entre aproximadamente

6.2 y aproximadamente 8.4, entre aproximadamente 6.4 y aproximadamente 8.3, entre aproximadamente

6.6 y aproximadamente 8.2, entre aproximadamente 6.8 y aproximadamente 8.1, entre aproximadamente

7.0 y aproximadamente 8.0, entre aproximadamente 7.2 y aproximadamente 7.9, entre aproximadamente

7.4 y aproximadamente 7.8 o entre aproximadamente 7.6 y aproximadamente 7.7.

30. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-29, donde la solucion proteica se seca para obtener un contenido acuoso de la protema secada por aspersion por debajo de aproximadamente un 10%, por debajo de aproximadamente un 6%, por debajo de aproximadamente un 4%, por debajo de aproximadamente un 2% o por debajo de aproximadamente un 1%.

31. El proceso de acuerdo con los parrafos 1-30, donde la protema es un analogo de insulina y se selecciona a partir del grupo constituido por insulina humana AspB28; insulina humana LysB28ProB29 e insulina humana LysB3GluB29.

32. La protema seca que se puede obtener mediante el proceso de los parrafos 1-31.

33. La composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada por aspersion de acuerdo con el parrafo 32.

34. La composicion farmaceutica de acuerdo con el parrafo 33, donde la composicion es para el tratamiento pulmonar, parenteral, nasal u oral de la diabetes o hiperglucemia.

35. La composicion farmaceutica para el tratamiento de la diabetes o hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con el parrafo 32, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos.

36. Un metodo para tratar la diabetes en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con cualquiera de los parrafos 32 o una composicion farmaceutica de acuerdo con los parrafos 33-35.

37. Un metodo de acuerdo con el parrafo 36, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos.

38. La protema secada tal como se ha descrito en los ejemplos.

1a. Un proceso para secar una solucion proteica, donde

a) Se obtiene una solucion proteica al mezclar una protema con agua que comprende opcionalmente excipientes y ajustar el pH para que se vuelva alcalino, y

b) Secar la solucion proteica.

5

10

15

20

25

30

2a. Un proceso para producir una protema seca a partir de una solucion proteica comprende:

a) Seleccionar un pH objetivo de la protema seca,

b) Seleccionar un pH objetivo para la solucion proteica,

c) Proporcionar una fase acuosa,

d) Anadir una protema,

e) Opcionalmente, anadir excipientes,

f) Ajustar el pH con una base no volatil hasta el pH objetivo de la protema seca,

h) Secar por aspersion la solucion proteica,

donde los pasos d, e, f y g se pueden llevar a cabo en cualquier orden a la vez que se agita de manera continua.

3a. El proceso de acuerdo con el parrafo 1a, donde la solucion proteica se ajusta con una base volatil y una base no volatil.

4a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-3a, donde la solucion proteica se obtiene a una temperatura por debajo de 8 °C.

5a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-4a, donde la solucion proteica se obtiene a una temperatura por debajo de 6 °C, por debajo de 5 °C, por debajo de 4 °C, por debajo de 3 °C, por debajo de 2 °C o por debajo de 1 °C.

6a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-5a, donde el punto de congelacion de la fase acuosa se hace disminuir y se obtiene una solucion proteica a una temperatura por debajo de 0 °C.

7a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-6a, donde el metodo de secado se selecciona a partir del grupo constituido por secado por aspersion, liofilizacion por aspersion, secado en lecho fluido, liofilizacion y secado al vacm.

8a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-7a, donde la solucion proteica tiene un pH por encima de 7.4.

9a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-8a, donde la solucion proteica tiene un pH por encima de 7.6, por encima de 7.8, por encima de 8.0, por encima de 8.2, por encima de 8.4 o por encima de 8.6.

10a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-8a, donde la solucion proteica tiene un pH entre 7.4 y 11.0.

11a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-8a y 10a, donde la solucion proteica tiene un pH entre aproximadamente 7.6 y aproximadamente 11.0, entre aproximadamente 7.6 y aproximadamente 10.5, entre

aproximadamente 8.2 y aproximadamente 11.0 entre aproximadamente 8.4 y aproximadamente 11.0, entre

5

10

15

20

25

30

35

aproximadamente 8.6 y aproximadamente 10.0, entre aproximadamente 8.8 y aproximadamente 10.0, entre aproximadamente 9.0 y aproximadamente 10.0 o entre aproximadamente 9.2 y aproximadamente 10.0.

12a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-11a, donde la base no volatil se selecciona a partir del grupo constituido por sales de metales alcalinos, hidroxidos de metales alcalinos, sales de metales alcalinoterreos, hidroxidos de metales alcalinoterreos y aminoacidos o una combinacion de estos.

13a. El proceso de acuerdo con el parrafo 12a, donde la base no volatil es hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, hidroxido de calcio, oxido de calcio o cualquier combinacion de estos.

14a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-11a, donde la base volatil se selecciona a partir del grupo constituido por hidroxidos de amonio, hidroxidos de tetraalquilamonio, aminas secundarias, aminas terciarias, arilaminas, aminas alifaticas o bicarbonato de amonio o una combinacion de estos.

15a. Proceso de acuerdo con el parrafo 14a, donde la base volatil es hidroxido de amonio, etilamina o metilamina o una combinacion de estos.

16a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-15a, donde la base volatil ajusta el pH de la solucion proteica con al menos 0.5 unidades de pH.

17a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-16a, donde la base volatil ajusta el pH de la solucion proteica con al menos 0.7 unidades de pH, o al menos 0.9 unidades de pH, o al menos 1.1 unidades de pH, o al menos 1.3 unidades de pH o al menos 1.5 unidades de pH.

18a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-17a, donde el pH de la solucion proteica se ajusta con una solucion que comprende hidroxido de sodio e hidroxido de amonio.

19a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-18a, donde la solucion proteica comprende fenol.

20a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-19a, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, exendina, analogos y derivados de exendina y/o cualquier combinacion de estos.

21a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-20a, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por amilina, analogos de amilina, derivados de amilina, a-MSH, analogos de a-MSH, derivados de a-MSH y/o cualquier combinacion de estos.

22a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-20a, donde la solucion proteica comprende una protema seleccionada a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina y la solucion ademas comprende zinc.

23a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-22a, donde la solucion proteica comprende un tampon, un detergente, un estabilizante, un inhibidor de proteasa, un sabor, un portador, un agente protector de absorcion, un agente de relleno o un agente para mejorar las propiedades de fluidez o un potenciador de la penetracion o una combinacion de estos.

24a. El proceso de acuerdo con el parrafo 23a, donde la solucion proteica comprende glicilglicina.

25a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-24a, donde el pH de la solucion proteica esta por encima

5

10

15

20

25

30

35

del pH de la protema seca.

26a. El proceso de acuerdo con el parrafo 25a, donde el pH de la solucion proteica esta al menos 0.5 unidades de pH por encima del pH de la protema seca.

27a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-26a, donde el pH de la solucion proteica esta al menos 0.7, al menos 0.9, al menos 1.1, al menos 1.3 o al menos 1.5 unidades de pH por encima del pH de la protema seca.

28a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-27a, donde el pH de la protema seca esta entre aproximadamente 6.0 y aproximadamente 8.5.

29a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-28a, donde el pH de la protema seca esta entre

aproximadamente 6.2 y aproximadamente 8.4, entre aproximadamente 6.4 y aproximadamente 8.3, entre

aproximadamente 6.6 y aproximadamente 8.2, entre aproximadamente 6.8 y aproximadamente 8.1, entre

aproximadamente 7.0 y aproximadamente 8.0, entre aproximadamente 7.2 y aproximadamente 7.9, entre

aproximadamente 7.4 y aproximadamente 7.8 o entre aproximadamente 7.6 y aproximadamente 7.7.

30a. El proceso acuerdo con los parrafos 1a-29a, donde la solucion proteica se seca para obtener un contenido acuoso de la protema secada por aspersion por debajo de aproximadamente un 10%, por debajo de aproximadamente un 6%, por debajo de aproximadamente un 4%, por debajo de aproximadamente un 2% o por debajo de aproximadamente un 1%.

31a. El proceso de acuerdo con los parrafos 1a-30a, donde la protema es un analogo de insulina y se selecciona a partir del grupo constituido por insulina humana AspB28; insulina humana LysB28ProB29 e insulina humana LysB3GluB29.

32a. La protema seca se puede obtener mediante el proceso de los parrafos 1a-31a.

33a. La composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada por aspersion de acuerdo con el parrafo 32a.

34a. La composicion farmaceutica de acuerdo con el parrafo 33a, donde la composicion es para el tratamiento pulmonar, parenteral, nasal u oral de la diabetes o hiperglucemia. 35a. La composicion farmaceutica para el tratamiento de la diabetes o hiperglucemia en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con el parrafo 32a, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, exendina, analogos y derivados de exendina y/o cualquier combinacion de estos.

36a. Un metodo para tratar la diabetes en un paciente que necesite un tratamiento de este tipo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de una protema secada de acuerdo con cualquiera de los parrafos 32a o una composicion farmaceutica de acuerdo con los parrafos 33a-35a. 37a. Un metodo de acuerdo con el parrafo 36a, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1, derivados de GLP-1, exendina, analogos y derivados de exendina y/o cualquier combinacion de estos.

5

10

15

20

25

30

35

38a. La protema secada tal como se ha descrito en los ejemplos.

METODOS ANALITICOS

Se determino el contenido HMWP mediante un metodo de cromatograffa isocratica de exclusion por tamano basado en un metodo de la Farmacopea Europea. Se utilizo una columna Insulin HMWP 7.8 x 300 mm de Waters con una fase movil constituida por un 65% de una solucion de L-arginina de 1.0 mg/mL, un 20% de acetonitrilo y un 15% de acido acetico glacial con un flujo de 0.5 mL/min. Los volumenes de inyeccion fueron de 100 pL. La temperatura de la columna fue temperatura ambiente. Se realizo la deteccion mediante absorbancia ultravioleta a 276 nm. Se analizaron los cromatogramas basandose en el area del pico frente al area total del pico.

Se determino la pureza con un metodo de cromatograffa en fase inversa utilizando una columna Sunfire C18, 3.5 pm, d.i. 150 x 4.6 mm de Waters. La temperatura de la columna fue de 35 °C y el caudal fue 1 mL/min. Se utilizo un sistema de gradiente con una fase movil A que contema un 1.4% (p/p) de sulfato de sodio, un 0.2% (p/p) de acido o- fosforico, un 7.7% (p/p) de acetonitrilo, pH 3.6 y una fase movil B que contema un 42.8% (p/p) de acetonitrilo en agua. El sistema de gradiente comenzo isocraticamente con aproximadamente un 42% de fase movil B durante 30 min. A continuacion se incremento la fase movil B de manera lineal desde un 42% hasta un 80% a lo largo de 3 min y permanecio en modo isocratico durante 2 min. A continuacion las condiciones iniciales volvieron a un 42% de fase movil B a lo largo de 1 min y se mantuvo durante 20 min. La deteccion se realizo mediante absorbancia ultravioleta a 214 nm. El volumen de inyeccion fue de 10 pL. Se analizaron los cromatogramas basandose en el area del pico frente al area total del pico. El metodo detecta impurezas relacionadas con la insulina incluidas las formas desamido de la insulina y se describen como impurezas relacionadas con la insulina.

Se determino la distribucion del tamano de partfculas en volumen de los polvos secados por aspersion utilizando un aparato de difraccion laser, Mastersizer (Malvern Instruments, Reino Unido) operado en modo humedo. El aparato se equipo con un sistema de dispersion humeda (Unidad de Dispersion de Muestra con un Volumen Pequeno QS de Malvern) en el cual se suspendieron las micropartfculas en isopropanol que contema aproximadamente un 0.05% de Tween 80. A continuacion la muestra se midio y basandose en los datos de dispersion se calculo la distribucion del tamano de partfculas utilizando un software de Malvern. El diametro mediano en volumen D[v,0.5] es el diametro donde un 50% de la distribucion esta por encima y un 50% por debajo.

La distribucion del tamano de partfculas aerodinamica de los polvos secados por aspersion se determino utilizando un espectrometro Aerodynamic Particle Sizer® (APS) modelo 3321 (TSI incorporado), que es un instrumento para clasificar por tamanos las partfculas basado en laser que mide el diametro aerodinamico de partfculas individuales basandose en las velocidades de las partfculas inmediatamente despues de una boquilla de aceleracion del flujo. Se obtuvo un aerosol a partir de los polvos con un Dispersor de polvo a Pequena Escala, modelo 3433 (TSI incorporado). A partir de estas medidas, se determinaron las distribuciones del tamano casi en tiempo real. El diametro aerodinamico mediano masico (MMAD, por sus siglas en ingles) es el diametro aerodinamico donde un 50% de la distribucion esta por encima y un 50% por debajo.

Se determino el contenido en humedad residual del polvo secado por aspersion segun la perdida al secar a 110 °C durante 3 horas como mmimo utilizando un analizador termogravimetrico Pyris TGA1 de Perkin Elmer. El cambio del peso provocado por la perdida de humedad se registro y se expreso en porcentaje en peso.

5

10

15

20

25

30

EJEMPLOS

EJEMPLO 1 (no de acuerdo con la reivindicacion 1)

Disolucion de insulina humana a pH 9.5 se dispersaron 10.0 g de insulina humana en 387.3 g de agua enfriada con hielo. Se coloco la dispersion en un bano de hielo y se midio el pH como pH de 5.03. A continuacion se anadio hidroxido de sodio 0.2 N enfriado con hielo en porciones hasta un pH de 8.99. Despues de 45 minutos, el pH disminuyo hasta 8.77 y a lo largo de las siguientes 4 horas se anadio hidroxido de sodio 0.2 N enfriado con hielo hasta un pH de 8.75. La solucion aun no era transparente y se coloco en un frigonfico durante toda la noche.

Al dfa siguiente se midio el pH como 8.75 y la solucion todavfa no era transparente. Se ajusto el pH hasta 9.48 con hidroxido de sodio 0.2 N enfriado con hielo y a continuacion se coloco la solucion no transparente en el frigonfico durante los siguientes 5 dfas.

Despues de 5 dfas, la solucion era transparente y se ajusto el pH desde 9.37 hasta 7.59 con cloruro de hidrogeno 0.2 N.

EJEMPLO 2

A) Secado por aspersion de la solucion proteica con una base volatil y

B) Medida del pH de la protema secada por aspersion.

Se dispersaron 9.5 g de insulina humana en 200 g de agua enfriada con hielo. La suspension se coloco en un bano de hielo y se midio el pH inicial como pH 5.12. Se ajusto el pH hasta 7.04 con 5.8 g de hidroxido de sodio 0.2 N enfriado con hielo. La solucion se mantuvo en el bano de hielo durante otras 2 horas y a continuacion se anadio agua desmineralizada hasta un peso total de 240 g.

Se procesaron adicionalmente 50 g de la solucion con un pH de 7.04. Se ajusto el pH desde 7.04 hasta 7.50 con NH4OH 1 N enfriado con hielo y a continuacion se coloco en un frigonfico durante toda la noche. Al dfa siguiente se midio el pH como 7.32 y se ajusto el pH con NH4OH 1 N enfriado con hielo hasta un pH de 8.06. A continuacion se anadio agua hasta 60.0 g. La concentracion final de insulina humana fue de aproximadamente 30 mg/mL.

Se prepararon micropartfculas solidas y secas en un minisecador por aspersion B-290 Buchi (Buchi, Labortecknik AG Flawil, Suiza) equipado con una boquilla de doble fluido de corriente conjunta de 0.7 mm. Se atomizo la solucion de insulina humana en una corriente de aire caliente en una camara de secado con una tasa de alimentacion del lfquido de 2 mL/min y un flujo de aire atomizante de 600-800 litros/hora.

El aire de secado tuvo una temperatura de entrada de 150 °C y un caudal de aire de secado de 35 m3/hora. La temperatura de salida fue de aproximadamente 70 °C.

Se capturaron las micropartfculas solidas mediante un separador ciclonico conectado con la camara de secado y a continuacion se combinaron y se almacenaron en condiciones secas.

La insulina humana secada por aspersion (el pH de la solucion proteica fue de 8.06 antes del secado por aspersion) se redisolvio en agua desmineralizada con concentraciones de 40 mg/mL, 80 mg/mL y 160 mg/mL para investigar si las diferentes concentraciones teman alguna influencia sobre el valor del pH medido:

5

10

15

20

25

30

se anadieron 25.3 mg a 633 pL de agua: se midio el pH como 6.95

se anadieron 43.5 mg a 545 pL de agua: se midio el pH como 6.95

se anadieron 81.7 mg a 510 pL de agua: se midio el pH como 7.01

EJEMPLO 3

Secado por aspersion de insulina aspart (insulina humana B28Asp) disuelta con diversas proporciones de base volatil y no volatil.

Se prepararon diversas soluciones de insulina aspart con y sin excipientes estabilizantes antes del secado por aspersion:

Preparacion A

Solucion A1: se suspendieron 16 g de insulina aspart en 150 mL de agua en un bano de hielo. A continuacion, se anadieron 2.6 mL de amomaco acuoso concentrado enfriado con hielo (25% p/p) en porciones hasta alcanzar un pH de 7.53 y se obtuvo una solucion transparente. Finalmente, se anadio agua hasta un volumen total de 200 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 80 mg/mL.

Solucion A2: se diluyeron adicionalmente 65 mL de la solucion A1 hasta 130 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 40 mg/mL.

Preparacion B

Solucion B1: se suspendieron 16 g de insulina aspart en 150 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 2.2 mL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 750 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.52 y se obtuvo una solucion transparente. Finalmente, se anadio agua hasta un volumen total de 200 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 80 mg/mL.

Solucion B2: se diluyeron adicionalmente 65 mL de la solucion B1 hasta 130 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 40 mg/mL.

Preparacion C

Solucion C1: se suspendieron 16 g de insulina aspart en 150 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 4.4 mL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 750 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.48 y se obtuvo una solucion transparente. Finalmente, se anadio agua hasta un volumen total de 200 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 80 mg/mL.

Solucion C2: se diluyeron adicionalmente 65 mL de la solucion C1 hasta 130 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 40 mg/mL.

Preparacion D

Solucion D1: se suspendieron 16 g de insulina aspart en 150 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 6.6 mL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 370 pL de amomaco acuoso

5

10

15

20

25

30

concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.47 y se obtuvo una solucion transparente. Finalmente, se anadio agua hasta un volumen total de 200 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 80 mg/mL.

Solucion D2: se diluyeron adicionalmente 65 mL de la solucion D1 hasta 130 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 40 mg/mL.

Preparacion E

Solucion E1: se suspendieron 16 g de insulina aspart en 150 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 6.6 mL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 370 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.47 y se obtuvo una solucion transparente. Finalmente, se anadio agua hasta un volumen total de 200 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 80 mg/mL.

Solucion E2: se diluyeron adicionalmente 65 mL de la solucion E1 hasta 130 mL. La concentracion de insulina aspart fue de 40 mg/mL.

Preparacion F

Se suspendieron 1.8 g de insulina aspart en 40 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 175 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.83.

Se anadieron ademas a la solucion 1.1 mL de una solucion de ZnCh 0.1 M y 3.6 mL de una solucion de fenol 0.32 M.

Finalmente, el pH se ajusto a 7.99 con 85 pL de amomaco acuoso diluido (8% p/p) y se anadio agua hasta un volumen total de 60 mL. La solucion fue transparente y la concentracion de insulina aspart fue de 30 mg/mL.

Preparacion G

Se suspendieron 1.8 g de insulina aspart en 40 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 288 pL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 120 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.86.

Se anadieron ademas a la solucion 1.1 mL de una solucion de ZnCl2 0.1 M y 3.6 mL de una solucion de fenol 0.32 M.

Finalmente, el pH se ajusto a 8.03 con 80 pL de amomaco acuoso diluido (8% p/p) y se anadio agua hasta un volumen total de 60 mL. La solucion fue transparente y la concentracion de insulina aspart fue de 30 mg/mL.

Preparacion H

Se suspendieron 1.8 g de insulina aspart en 40 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 864 pL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 50 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.85.

5

10

15

20

25

30

Finalmente, el pH se ajusto a 7.98 con 60 pL de amomaco acuoso diluido (8% p/p) y se anadio agua hasta un volumen total de 60 mL. La solucion fue transparente y la concentracion de insulina aspart fue de 30 mg/mL.

Preparacion I

Se suspendieron 1.8 g de insulina aspart en 40 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 150 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.99.

Se anadieron ademas a la solucion 4.6 mL de una solucion de glicilglicina 0.25 M, 1.1 mL de una solucion de ZnCl2 0.1 M y 3.6 mL de una solucion de fenol 0.32 M.

Finalmente, el pH se ajusto a 7.98 con 245 pL de amomaco acuoso diluido (8% p/p) y se anadio agua hasta un volumen total de 60 mL. La solucion fue transparente y la concentracion de insulina aspart fue de 30 mg/mL.

Preparacion J

Se suspendieron 1.8 g de insulina aspart en 40 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 288 pL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 125 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 8.18.

Finalmente, el pH se ajusto a 7.98 con 125 pL de amomaco acuoso diluido (8% p/p) y se anadio agua hasta un volumen total de 60 mL. La solucion fue transparente y la concentracion de insulina aspart fue de 30 mg/mL.

Preparacion K

Se suspendieron 1.8 g de insulina aspart en 40 mL de agua en un bano de hielo. Inicialmente, se anadieron en porciones 288 pL de NaOH 1 N enfriado con hielo y a continuacion 125 pL de amomaco acuoso concentrado (25% p/p) enfriado con hielo hasta alcanzar un pH de 7.93.

Se anadieron ademas a la solucion 1.1 mL de una solucion de ZnCl2 0.1 M y 1.9 mL de una solucion de fenol 0.32 M.

Finalmente, el pH se ajusto a 7.98 con 40 pL de amomaco acuoso diluido (8% p/p) y se anadio agua hasta un volumen total de 60 mL. La solucion fue transparente y la concentracion de insulina aspart fue de 30 mg/mL.

Se prepararon micropartfculas solidas y secas en un minisecador por aspersion B-290 Buchi (Buchi, Labortecknik AG Flawil, Suiza) equipado con una boquilla de doble fluido de corriente conjunta de 0.7 mm. Se atomizo la alimentacion lfquida (preparacion A1, A2, B1, B2, C1, C2, D1, D2, E1, E2, F, G, H, I, J y K) en una corriente de aire caliente en una camara de secado con una tasa de alimentacion del lfquido de 2 mL/min y un flujo de aire atomizante de 600-800 litros/hora.

El aire de secado tuvo una temperatura de entrada de 150 °C y un caudal de aire de secado de 35 m3/hora. La temperatura de salida vario entre 41 y 61 °C.

Se estudio la inestabilidad qmmica de la insulina mediante un analisis de HPLC tal y como se describe en Hvass, 2003 (A. Hvass, M. Hach y M.U. Jars. Complementary analytical HPLC methods for insulin-related degradation products. American Biotechnology Laboratory 21(2): 8-12, 2003) tras el almacenamiento durante 1 mes a 40 °C. Se analizaron los dfmeros con enlace covalente y los polfmeros de elevado peso molecular (HMWP, por sus siglas en 5 ingles) mediante cromatograffa de exclusion por tamano (SE, por sus siglas en ingles). Se utilizo la cromatograffa en fase inversa (RP, por sus siglas en ingles) (pH 3.6) con una elucion en gradiente para la separacion de los productos de degradacion (formas desamido de la insulina y otras impurezas relacionadas con la insulina).

Se determino el contenido en humedad de las microparffculas secas segun la perdida al secar a 110 °C durante 3 horas como mmimo utilizando un analizador termogravimetrico Pyris TGA1 de Perkin Elmer. El cambio del peso 10 provocado por la perdida de humedad se registro y se expreso en porcentaje en peso.

Se utilizo un espectrometro Aerodynamic Particle Sizer® (APS) para determinar la distribucion del tamano de parffculas (diametro aerodinamico mediano masico).

Se midio el pH de la insulina secada por aspersion disolviendo los polvos secados por aspersion en agua desmineralizada hasta una concentracion de aproximadamente 40 mg/mL y midiendo el pH con un potenciometro 15 (Radiometer, Dinamarca).

Los resultados de la caracterizacion de las preparaciones A-K secadas por aspersion se enumeran en la Tabla 1.

Tabla 1. Polvos de insulina aspart secada por aspersion

ID de la preparacion: Humedad (%) pH de la solucion pH de la insulina secada por aspersion MMADA) (pm) Impurezas relacionadas con la insulina aspartB) (%) HMWPC) (%)

A1: 5.6 7.5 5.35 2.7 1.1 0.43

A2: 6.6 7.5 6.03 3.3 1.4 0.45

B1: 6.3 7.5 6.04 3.0 1.1 2.17

B2: 7.0 7.5 6.17 4.8 1.3 0.75

C1: 6.7 7.5 6.27 3.3 0.8 0.63

C2: 7.1 7.5 6.44 4.0 1.4 0.67

D1: 5.9 7.5 6.66 3.3 0.3 0.26

D2: 5.8 7.5 6.89 3.9 1.0 2.87

E1: 6.6 7.5 7.43 3.2 0.4 0.22

E2: 5.2 7.5 7.43 3.9 0.7 0.31

F: 6.9 8.0 4.91 2.6 2.0 0.35

G: 9.3 8.0 5.16 2.6 1.9 0.51

H: 9.6 8.0 6.33 2.8 1.4 0.35

I: 7.2 8.0 5.04 2.7 2.3 0.30

J: 8.2 8.0 5.79 2.8 1.9 0.24

K: 8.9 8.0 5.37 2.7 1.8 0.47

A) MMAD es el diametro aerodinamico mediano masico determinado por APS

B) Impurezas relacionadas con la insulina aspart formadas tras el almacenamiento durante 1 mes a 40 °C, medidas por RP-HPLC (incluidas las formas desamido y de otro tipo de degradacion de la insulina aspart)

C) Polfmeros de peso molecular elevado formados tras el almacenamiento durante 1 mes a 40 °C, medidos por SE- HPLC

EJEMPLO 4 (no de acuerdo con la reivindicacion 1)

Secado por aspersion de insulina aspart se dispersaron 361.8 g de insulina aspart en 4.5 litros de agua desmineralizada enfriada con hielo. Se ajusto el pH a 7.68 con NaOH 0.2 enfriada con hielo. Se anadio agua hasta 9 5 litros. La concentracion final de insulina aspart fue de 37 g/L. Se filtro la solucion a traves de un filtro esteril (0.2 pm) antes de secar por aspersion.

El secado por aspersion de la solucion de insulina aspart se realizo en un secador por aspersion a escala piloto (modelo Mobile Mino, Niro, Dinamarca) con una boquilla de doble fluido con un diametro de orificio de 1.0 mm. Se utilizo nitrogeno tanto como gas de secado como gas de atomizacion.

10 Las temperaturas de entrada y de salida fueron de 110 y 62 °C respectivamente. El flujo de alimentacion fue de aproximadamente 1 kg/h y la relacion de gas/alimentacion fue de aproximadamente 11.

El secador por aspersion se equipo con filtros de bolsa y separador ciclonico. El polvo se recogio simultaneamente a partir de los filtros de bolsa y separador ciclonico durante el secado por aspersion.

Se analizo la distribucion del tamano de partfculas tanto por difraccion laser (Mastersizer, Malvern) como por 15 espectroscopfa aerodinamica de clasificacion por tamano de partfculas (APS, por sus siglas en ingles). Se estudio la integridad qmmica de la insulina aspart secada por aspersion tras un almacenamiento de 1 mes a 40 °C mediante SE o RP-HPLC tal y como se describe en el ejemplo 2.

: Fraccion ciclonica Fraccion del filtro de bolsa

Ds0A) (Mm): 4.2 2.5

MMADB) (Mm): 3.5 2.1

Rendimiento (%): 78 23

HMWP formado por mes a 40 °C (%): 0.2 0.4

Impurezas relacionadas con la insulina formadas por mes a 40 °C (%): 0.8 1.3

A) D50 es el diametro mediano en volumen determinado por difraccion laser

B) MMAD es el diametro aerodinamico mediano masico determinado por APS

EJEMPLO 5 (no de acuerdo con la reivindicacion 1)

Estabilidad en el almacenamiento de polvos secos de insulina aspart liofilizada con diversos valores de pH se dispersaron 0.806 g de insulina aspart en 10 mL de agua enfriada con hielo. Se coloco la suspension en un bano de 5 hielo y se midio el pH inicial como pH 4.58. Se ajusto el pH a 7.39 con hidroxido de sodio 0.2 N enfriado con hielo, para solubilizar de esta manera la insulina aspart. Se anadio agua desmineralizada hasta un peso total de 20.4 g.

Se dividio la insulina aspart solubilizada en 6 alfcuotas de 2.5 mL, que se ajustaron a un pH de 7.0, 7.7, 8.0, 8.5, 9.0 y 9.5 respectivamente. Se anadio agua desmineralizada hasta un peso total de 3.06 g.

Las soluciones de insulina aspart se liofilizaron en un aparato Christ Alpha 2-4 LSC (Christ Alpha, Alemania) en 10 alfcuotas de 0.9 mL en viales de vidrio utilizando un programa de liofilizacion estandar.

Se midio el pH de los polvos de insulina aspart liofilizada anadiendo 0.5 mL de agua desmineralizada a aproximadamente 33 mg de polvo de insulina aspart y a continuacion se midio el pH con un potenciometro equipado con un electrodo de pH despues de 15 minutos.

Se estudio la integridad qmmica de la insulina aspart secada por aspersion tras un almacenamiento seco (por 15 encima de gel de sflice) durante 2 semanas a 40 °C respecto a los controles a -18 °C mediante SE-HPLC tal y como se describe en el ejemplo 2.

Tabla 3. Polvos de insulina aspart liofilizada

pH de la solucion: pH de la insulina liofilizada HMWPA) (%)

7.0: 6.69 0.20

7.7: 7.58 0.17

8.0: 7.83 0.11

8.5: 8.42 0.07

9.0: 8.81 0.10

9.5: 9.27 0.10

A) Dfmeros y poKmeros de peso molecular elevado formados tras su almacenamiento durante 2 semanas a 40 °C, medido por SE-HPLC

EJEMPLO 6 (no de acuerdo con la reivindicacion 1)

Estabilidad en el almacenamiento de polvos secos de insulina aspart secada por aspersion con diversos valores de pH se dispersaron 20.6 g de insulina aspart en 300 mL de agua enfriada con hielo. Se coloco la suspension en un 5 bano de hielo y se midio el pH inicial como pH 4.63. Se ajusto el pH a 7.50 con 100 mL de hidroxido de sodio 0.1 N enfriado con hielo, para solubilizar de esta manera la insulina aspart.

Se dividio la insulina aspart solubilizada en 6 alfcuotas de 65 g, que se ajustaron a un pH de 7.0, 7.7, 8.0, 8.5, 9.0 y 9.5 respectivamente con NaOH 0.1 N enfriada con hielo. Se anadio agua desmineralizada en cada alfcuota hasta un peso total de 80.0 g. La concentracion de insulina aspart fue de aproximadamente 38 mg/mL.

10 Se prepararon micropartfculas solidas y secas en un minisecador por aspersion B-290 Buchi (Buchi, Labortecknik AG Flawil, Suiza) equipado con una boquilla de doble fluido de corriente conjunta de 0.7 mm. Se atomizo la alimentacion lfquida (80 mL) en una corriente de aire caliente en una camara de secado con una tasa de alimentacion del lfquido de 2 mL/min y un flujo de aire atomizante de 600-800 litros/hora.

El aire de secado tuvo una temperatura de entrada de 150 °C y un caudal de aire de secado de 35 m3/hora. La 15 temperatura de salida vario entre 49 y 61 °C. Se capturaron las micropartfculas solidas mediante un separador ciclonico conectado con la camara de secado y a continuacion se combinaron y se almacenaron en condiciones secas.

Se midio el pH de la insulina aspart secada por aspersion disolviendo los polvos secados por aspersion en agua desmineralizada hasta una concentracion de 70-80 mg/mL y midiendo el pH con un potenciometro (Radiometer, 20 Dinamarca).

Se estudio la integridad qrnmica de la insulina aspart secada por aspersion tras un almacenamiento seco (por encima de gel de sflice) durante 4 semanas a 40 °C respecto a los controles a -18 °C mediante SE-HPLC y RP- HPCL tal y como se describe en el ejemplo 2.

Tabla 3. Estabilidad de los polvos de insulina aspart secada por aspersion

pH de la solucion: pH de la insulina aspart secada por aspersion HMWPA) (%) PurezaB) (%)

7.5: 7.28 0.28 98.2

7.7: 7.54 0.26 98.3

8.0: 7.82 0.22 98.3

8.5: 8.26 0.19 98.4

5

10

15

20

25

30

9.0: 8.58 0.23 98.2

9.5: 9.00 1.34 95.0

A) Dfmeros y poKmeros de peso molecular elevado formados tras su almacenamiento durante 4 semanas a 40 °C, medidos por SE-HPCL

B) Pureza de la insulina aspart secada por aspersion tras su almacenamiento durante 4 semanas a 40 °C, medida por RP-HPLC

Ejemplo 7

Se disolvieron 20 000 nmol de un analogo de GLP1 acilado en la lisina, N-epsilon-26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi- 4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}etoxi)acetil][AibB,Arg34]GLP-1-(7-37) en agua hasta 4000 nmol/L (peso molecular 4113 g/mol). Se ajustaron 2 mL de la solucion a un pH 7.6 con hidroxido de sodio y se dividio adicionalmente en 2 partes de las cuales a una se anadio amomaco (25% en agua) hasta un pH de 9.6. De manera similar, a 2 mL de la solucion se anadio hidroxido de sodio hasta un pH de 8.7, se dividio en 2 partes y a una se le anadio amomaco (25% en agua) hasta un pH de 10.3. Finalmente, a 1 mL de la solucion de los analogos de GLP1 se le anadio hidroxido de sodio hasta un pH de 10.3. Las 5 muestras se liofilizaron y se redisolvieron para obtener una concentracion de 40 mg/mL. Se midieron los valores de pH en las muestras como 7.5, 7.5, 8.6, 8.6 y 9.7 respectivamente.

EJEMPLO 8 (no de acuerdo con la reivindicacion 1)

Secado por aspersion de un analogo de GLP-1 con una base volatil se disolvieron 180 mg (43 800 nmol) de un analogo de GLP1 acilado en la lisina, N-epsilon-26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-(17-

carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37) en 7 mL de agua desmineralizada y se ajusto el pH desde un pH de 7.53 a un pH de 7.03 con acido clorhndrico 0.2 N. A continuacion, se ajusto la solucion hasta un pH de 9.96 con amomaco acuoso al 0.25% p/p y se anadio agua desmineralizada para obtener una concentracion final del analogo de GLP-1 de 20 mg/mL.

La solucion se atomizo en una corriente de aire caliente en una camara de secado de un minisecador por aspersion B-290 Buchi (Buchi, Labortecknik AG Flawil, Suiza) equipado con una boquilla de doble fluido de corriente conjunta de 0.7 mm con una tasa de alimentacion del lfquido de 2 mL/min y un flujo de aire atomizante de 600-800 litros/hora. El aire de secado tuvo una temperatura de entrada de 150 °C y un caudal de aire de secado de 35 m3/hora. La temperatura de salida fue de aproximadamente 63 °C. Se capturaron las micropartfculas solidas mediante un separador ciclonico conectado con la camara de secado.

El polvo se redisolvio en agua desmineralizada para obtener una concentracion de 120 mg/mL y se midio el pH como un pH de 6.9.

Ejemplo 9 (no de acuerdo con la reivindicacion 1)

Inestabilidad qmmica de la insulina aspart con valores de pH sumamente alcalinos se solubilizaron 720 mg de insulina en 9 mL de agua desmineralizada. Se ajustaron 2.25 mL de la solucion desde un pH de 7.6 hasta un pH de 10.0 con una solucion de hidroxido de amonio 2 N. Otros 2.25 mL de la solucion se ajustaron a un pH de 11.0 con una solucion de hidroxido de amonio 2 N. Otros 2.25 mL mas de la solucion se ajustaron a un pH de 12.0 con una

solucion de hidroxido de amonio 2 N y una solucion de hidroxido de sodio 1 N. Y finalmente, se ajustaron 2.25 mL de la solucion a un pH de 12.6 con una solucion de hidroxido amonio 2 N y una solucion de hidroxido de sodio 1 N.

Las cuatro soluciones con el pH ajustado se mantuvieron el frigonfico a 3-8 °C durante 24 horas tras las cuales se ajustaron las cuatro soluciones a un pH neutro con acido clortndrico 1 N con el fin de detener la degradacion 5 qmmica.

Se estudio la inestabilidad qmmica de la insulina en las soluciones neutralizadas mediante un analisis por HPLC de fase inversa y exclusion por tamano tal y como se describe en el ejemplo 2.

Tabla 4. Estabilidad qmmica de las soluciones de insulina aspart con diversos valores de pH

pH de la solucion HMWPA) (%) PurezaB) (%)

7.6: 0.0 97.2

10.0: 0.5 97.8

11.0: 1.8 92.2

12.0: 49.8 7.8

12.6: 39.5 2.3

A) Dfmeros y polfmeros con un peso molecular elevado formados tras el almacenamiento durante 24 horas a 3-8 °C, medidos por HPLC-SE

B) Pureza de la insulina aspart tras el almacenamiento durante 24 horas a 3-8 °C, medida por RP-HPLC

10

Claims

5

10

15

20

25

30

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para secar una solucion proteica que comprende:

a) Seleccionar un pH objetivo de la protema seca, donde el pH objetivo esta entre 6.0 y 8.5

b) Seleccionar un pH objetivo para la solucion proteica, donde el pH objetivo esta entre 7.4 y 11.0

c) Proporcionar una fase acuosa,

d) Anadir una protema,

e) Opcionalmente, anadir excipientes,

f) Ajustar el pH con una base no volatil y, opcionalmente, un acido no volatil hasta el pH objetivo de la protema seca, donde la base tiene una presion de vapor por debajo de 65 Pa a temperatura ambiente y donde el acido tiene una presion de vapor por debajo de 65 Pa a temperatura ambiente,

g) Ajustar el pH con una base volatil hasta el pH objetivo de la solucion proteica que se va a secar, donde la base tiene una presion de vapor por encima de 65 Pa a temperatura ambiente o donde la base es una mezcla azeotropica acuosa que incluye una base que tiene una presion de vapor por encima de 65 Pa a temperatura ambiente y

h) Secar por aspersion, liofilizar por aspersion o liofilizar la solucion proteica, donde los pasos d, e, f y g se pueden llevar a cabo en cualquier orden mientras se agita de manera continua, donde la protema se selecciona a partir del grupo constituido por insulina, analogos de insulina, derivados de insulina, GLP-1, analogos de GLP-1 y derivados de GLP-1, glucagon y/o cualquier combinacion de estos.
2. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, donde la solucion proteica se obtiene a una temperatura por debajo de 8 °C.
3. El proceso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2, donde la base volatil ajusta el pH de la solucion proteica con al menos 0.5 unidades de pH.
4. El proceso de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, donde la solucion proteica comprende un tampon, un detergente, un estabilizante, un inhibidor de proteasa, un sabor, un portador, un agente espesante o un agente para mejorar las propiedades de fluidez o un potenciador de la penetracion o una combinacion de estos.
5. El proceso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, donde la solucion proteica comprende glicilglicina y/o fenol.
6. El proceso de acuerdo con las reivindicaciones 1-5, donde la solucion proteica comprende 4 moles de fenol por mol de protema.
7. El proceso de acuerdo con las reivindicaciones 1-6, donde el pH de la solucion proteica esta por encima del pH de la protema seca.