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ES2558608T3 - Derivados hetero-bicíclicos como inhibidores del VHC - Google Patents

Derivados hetero-bicíclicos como inhibidores del VHC Download PDF

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ES2558608T3
ES2558608T3 ES12810310.8T ES12810310T ES2558608T3 ES 2558608 T3 ES2558608 T3 ES 2558608T3 ES 12810310 T ES12810310 T ES 12810310T ES 2558608 T3 ES2558608 T3 ES 2558608T3
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ES
Spain
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mmol
compound
mixture
residue
stirred
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ES12810310.8T
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English (en)
Inventor
Koen Vandyck
Wim Gaston Verschueren
Pierre Jean-Marie Bernard Raboisson
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Janssen Sciences Ireland ULC
Original Assignee
Janssen Sciences Ireland ULC
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Publication date
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Abstract

Un compuesto de Fórmula I**Fórmula** o un estereoisómero del mismo, en donde: Y es CH, N o CR4; W es carbonilo, sulfonilo o CR5R6;**Fórmula** independientemente se selecciona de un grupo que comprende**Fórmula** R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde R1 se selecciona de alquilo C1-4, alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo, y fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo; R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquil C1-4-amino, alquil C1-4-carbonilamino, alquiloxi C1-4- carbonilamino; R3 es hidrógeno o alquilo C1-4; R4 es hidrógeno, alquilo C1-4 o fluoro; R5 y R6, cada uno independientemente, son alquilo C1-4; o CR5R6 juntos forman cicloalquilo C3-7, oxetano, tetrahidrofurano; o sales farmacéuticamente aceptables o un solvato del mismo.

Description

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DESCRIPCION
Derivados hetero-bidclicos como inhibidores del VHC Campo tecnico
Esta invencion se refiere a derivados hetero-bidclicos, en particular, pero no limitada a derivados de quinolinona y quinazolinona, que son inhibidores del virus de la hepatitis C (VHC), a su smtesis y a su uso, solos o en combinacion con otros inhibidores del VHC, en el tratamiento o la profilaxis del VHC.
Tecnica de Antecedentes
El VHC es un virus de ARN de cadena sencilla, de sentido positivo, perteneciente a la familia de virus Flaviviridae en el genero hepacivirus. El genoma viral se traduce en un marco de lectura abierto sencillo que codifica multiples protemas estructurales y no estructurales.
Despues de la infeccion aguda inicial, una mayona de individuos infestados desarrollan hepatitis cronica debido a que el VHC se replica preferiblemente en los hepatocitos, pero no es directamente citopatico. En particular, la falta de una respuesta de linfocitos T vigorosa y la alta propension del virus a mutar parecen fomentar una tasa elevada de infeccion cronica. La hepatitis cronica puede progresar a una fibrosis hepatica, que conduce a la cirrosis, la enfermedad hepatica en fase terminal y CHC (carcinoma hepatocelular), haciendola la causa principal de trasplantes de tugado.
Existen seis genotipos del VHC principales y mas de 50 subtipos, que se distribuyen de manera diferente geograficamente. El VHC genotipo 1 es el genotipo predominante en Europa y en los EE.UU. La extensa heterogeneidad genetica del VHC tiene importantes implicaciones diagnosticas y clmicas, explicando quizas las dificultades en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta a la terapia actual.
La transmision del VHC puede producirse a traves del contacto con sangre o productos de la sangre contaminados, por ejemplo despues de una transfusion de sangre o el uso de farmacos por via intravenosa. La introduccion de ensayos de diagnostico utilizados en los analisis de sangre ha conducido a una tendencia a la baja en la incidencia del VHC post-transfusion. Sin embargo, dado el lento progreso de la enfermedad hepatica en fase terminal, las infecciones existentes continuaran constituyendo una carga medica y economica seria durante decadas.
Terapias para el VHC actuales se basan en interferon-alfa (IFN-a) (pegilado) en combinacion con ribavirina. Esta terapia de combinacion proporciona una respuesta virologica sostenida en el 40% de los pacientes infestados por el VHC genotipo 1 y aproximadamente el 80% de los infestados por los genotipos 2 y 3. Ademas de la eficacia limitada en el VHC genotipo 1, esta terapia de combinacion tiene efectos secundarios significativos, incluyendo smtomas similares a la gripe, alteraciones hematologicas y smtomas neuropsiquiatricos. Por lo tanto, existe una necesidad de tratamientos mas eficaces, mas convenientes y mejor tolerados.
La experiencia con los farmacos contra el VIH, en particular con los inhibidores de la proteasa del VIH, ha ensenado que la farmacocinetica sub-optima y regfmenes de dosificacion complejos resultan rapidamente en incumplimientos involuntarios. Esto, a su vez, significa que la concentracion valle (concentracion plasmatica minima) de 24 horas para los respectivos farmacos en un regimen de VIH cae con frecuencia por debajo del umbral de CI90 o DE90 durante largos periodos del dfa. Se considera que un nivel valle de 24 horas de al menos la CI50, y mas realfsticamente de la CI90 o DE90, es esencial para ralentizar el desarrollo de mutantes resistentes a farmacos. El logro de la farmacocinetica y la tasa de metabolismo de los farmacos, necesarias para permitir niveles valle de este tipo, proporciona un desaffo exigente para el diseno de farmacos.
La protema NS5A del VHC esta situada aguas abajo de la protema NS4B y aguas arriba de la protema NS5B. Tras la escision post-traduccion por parte de la serina proteasa NS3/4A del virus, la NS5A madura en una fosfoprotema de tres dominios, con contenido en zinc, que existe en forma de una especie hipofosforilada (56-kDa, p56) o hiperfosforilada (58-kDa, p58). La NS5A del VHC esta implicada en multiples aspectos del ciclo de vida viral, incluyendo la replicacion viral y el ensamblaje de partfculas infecciosas, asf como la modulacion del entorno de su celula huesped. Aunque no se ha atribuido funcion enzimatica alguna a la protema, se resena que interactua con numerosos factores virales y celulares.
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Un cierto numero de patentes y solicitudes de patente describen compuestos con actividad inhibidora del VHC, en particular la fijacion como objetivo de NS5A. El documento WO2006/133326 describe derivados de estilbeno, mientras que los documentos WO 2008/021927 y WO 2008/021928 describen derivados de bifenilo que tienen actividad inhibidora de la NS5A del VHC. El documento WO 2008/048589 describe derivados de 4-(feniletinil)-1H- pirazol y su uso antiviral. El documento WO 2008/070447 describe una amplia gama de compuestos inhibidores del VHC, incluido un resto bencimidazol. Los documentos WO-2010/017401 y WO-2010/065681 describen ambos inhibidores de bis-imidazol de NS5A del VHC. El documento WO2011/119860 describe derivados de 3H- imidazo[4,5-b]piridina para el tratamiento del VHC.
Existe una necesidad de inhibidores del VHC que puedan superar las desventajas de la actual terapia del VHC tales como efectos secundarios, eficacia limitada, el surgimiento de la resistencia y fracasos en el cumplimiento, asf como mejorar la respuesta de carga viral sostenida.
La presente invencion concierne a un grupo de derivados hetero-bidclicos inhibidores del VHC, en particular, pero no limitada a derivados de quinolinona y quinazolinona, con propiedades utiles en relacion con uno o mas de los siguientes parametros: eficacia antiviral, perfil favorable del desarrollo a la resistencia, toxicidad y genotoxicidad reducida o ausente, farmacocinetica y farmacodinamica favorables, facilidad de formulacion y administracion, e interacciones farmaco-farmaco, limitadas o ausentes, con otras sustancias medicamentosas, en particular otros agentes anti-VHC.
Los compuestos de la invencion tambien pueden ser atractivos, debido al hecho de que carecen de actividad contra otros virus, en particular contra el VIH. Pacientes infestados por el VIH sufren a menudo co-infecciones tales como el VHC. El tratamiento de tales pacientes con un inhibidor del VHC, que tambien inhibe el VIH, puede conducir a la aparicion de cepas resistentes del VIH.
Descripcion de la Invencion
En un aspecto, la presente invencion proporciona compuestos de Formula I
imagen1
o un estereoisomero del mismo, en donde: Y es CH o N, CR4;
W es carbonilo, sulfonilo o CR5R6;
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independientemente se selecciona de un grupo que comprende
imagen4
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R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 0 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde
R1 se selecciona de alquilo C1-4, alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo, y fenilo opcionalmente
sustituido con 1 0 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo;
R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquil C1-4-amino, alquil C1-4-carbonilamino, alquiloxi C1-4-
carbonilamino;
R3 es hidrogeno o alquilo C1-4;
R4 es hidrogeno, alquilo C1-4 o fluoro;
R5y R6, cada uno independientemente, son alquilo C1-4; o CR5R6 juntos forman cicloalquilo C3-7, oxetano, tetrahidrofurano; o sales farmaceuticamente aceptables o un solvato del mismo.
Adicionalmente, la invencion se refiere a un producto que contiene (a) un compuesto de acuerdo con la presente invencion, y (b) otro inhibidor de HCV, como una preparation combinada para uso simultaneo, separado o 15 secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.
En un aspecto adicional, la invencion concierne al uso de compuestos de formula la-c, o subgrupos de los mismos, tal como se especifica en esta memoria, para la inhibition del VHC. Alternativamente, se proporciona el uso de dichos compuestos para la fabrication de un medicamento para inhibir el VHC.
En una primera realization, la presente invencion proporciona un subgrupo de compuestos de formula I, que se 20 pueden representar por la formula (la);
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Ia
De particular interes son compuestos de formula I o subgrupos de los mismos tal como se define en esta memoria, que son de acuerdo con las formulas lb y Ic.
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O
En una realization preferida, — se selecciona independientemente entre un grupo que comprende
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Preferiblemente, al menos un
Mas preferiblemente, compuestos de la invention proporciona compuestos que pueden representarse por la formula Id
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En una realization adicional de la invention, R2 se selecciona del grupo que comprende alquil C1-4-carbonilamino o 10 alquiloxi C1-4-carbonilamino.
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En aun otra realizacion de la invencion, R1 se selecciona entre alquilo C3-4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado de halo y metilo.
En aun otra realizacion de la invencion, R3 es hidrogeno.
En una realizacion adicional, R y R' son identicos.
En aun otra realizacion, R2 es alquil Ci-4-carbonilamino o alquiloxi C-M-carbonilamino, y R3es hidrogeno.
En un aspecto adicional, la invencion proporciona un compuesto de formula I o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o profilaxis (o la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis) de la infeccion por el VHC. Genotipos del VHC representativos en el contexto de tratamiento o profilaxis de acuerdo con la invencion incluyen, pero no se limitan a determinar el genotipo 1b (prevalente en Europa) y 1a (prevalente en America del Norte). La invencion tambien proporciona un metodo para el tratamiento o la profilaxis de la infeccion por VHC, en particular, del genotipo 1a o 1b, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto segun se define antes en esta memoria.
Las formas estereoisomericas puras de los compuestos y compuestos intermedios tal como se menciona en esta memoria se definen como isomeros sustancialmente libres de otras formas enantiomericas o diastereomericas de la misma estructura molecular basica de dichos compuestos o compuestos intermedios. En particular, la expresion "estereoisomericamente puros" se refiere a compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomerico de al menos 80% (es decir, mmimo 90% de un isomero y maximo 10% de los otros isomeros posibles) hasta un exceso estereoisomerico de 100% (es decir, 100% de un isomero y nada del otro), mas en particular, compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomerico de 90% hasta 100%, incluso mas en particular que tienen un exceso estereoisomerico de 94% hasta 100%, y lo mas en particular que tienen un exceso estereoisomerico de 97% hasta 100%. Las expresiones "enantiomericamente puro" y "diastereomericamente puro" deben entenderse de una manera similar, pero a continuacion, teniendo en cuenta el exceso enantiomerico y el exceso diastereomerico, respectivamente, de la mezcla en cuestion.
Formas o estereoisomeros de los compuestos y compuestos intermedios de esta invencion estereoisomericamente puros se pueden obtener mediante la aplicacion de procedimientos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los enantiomeros pueden separarse unos de otros mediante cristalizacion selectiva de sus sales diastereomericas con acidos o bases opticamente activos. Ejemplos de los mismos son acido tartarico, acido dibenzoiltartarico, acido ditoluoiltartarico y acido canfosulfonico.
Alternativamente, los enantiomeros pueden separarse por tecnicas cromatograficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoqmmicamente isomericas puras tambien se pueden derivar de las correspondientes formas estereoisomericas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reaccion se produzca estereoespedficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisomero espedfico, dicho compuesto se sintetizara por metodos de preparacion estereoespedficos. Estos metodos emplearan ventajosamente materiales de partida enantiomericamente puros.
Los racematos diastereomericos de los compuestos de formula I pueden obtenerse por separado por metodos convencionales. Metodos de separacion ffsica apropiados que pueden emplearse ventajosamente son, por ejemplo, cristalizacion selectiva y cromatograffa, p. ej., cromatograffa en columna o cromatograffa de fluidos supercnticos.
Los compuestos de formula I y subgrupos de compuestos de formula I segun se definen antes en esta memoria tienen varios centros de quiralidad. De interes son los centros estereogenicos del anillo de pirrolidina en el atomo de carbono 2. La configuracion en esta posicion puede ser la correspondiente a L-prolina, es decir,
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o la correspondiente a D-prolina, es decir,
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Tambien de interes es la configuracion del grupo -CR1R2R3, en la que R3es H: cuando Ri se selecciona entre alquilo 5 C3-4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi, entonces se prefiere la configuracion S; cuando R1 se selecciona de fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo; despues se prefiere la configuracion R.
Las sales por adicion farmaceuticamente aceptables comprenden las formas de sales por adicion de acidos y bases no toxicas y terapeuticamente activas de los compuestos de formula (I) o subgrupos de los mismos. De interes son 10 las formas libres, es decir, formas no salinas de los compuestos de formula I, o de cualquier subgrupo de compuestos de formula I especificado en esta memoria.
Las sales por adicion de acidos farmaceuticamente aceptables se pueden obtener convenientemente tratando la forma de base con un acido apropiado de este tipo. Acidos apropiados comprenden, por ejemplo, acidos inorganicos tales como hidracidos halogenados, p. ej., acido clorhndrico o bromhidrico, sulfurico, nftrico, fosforico y acidos 15 similares; o acidos organicos tales como, por ejemplo, acetico, propionico, hidroxiacetico, lactico, piruvico, oxalico (es decir, etanodioico), malonico, succmico (es decir, acido butanodioico), maleico, fumarico, malico (es decir, acido hidroxil-butanodioico), tartarico, citrico, metanosulfonico, etanosulfonico, bencenosulfonico, p-toluenosulfonico, ciclamico, salicilico, p-aminosalic^lico, pamoico y acidos similares. Inversamente, dichas formas de sal pueden convertirse por tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre.
20 Los compuestos de formula (I) que contienen un proton de caracter acido tambien se pueden convertir en sus sales por adicion de bases, en particular, formas de sales por adicion de metales o de aminas, mediante tratamiento con
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bases organicas e inorganicas apropiadas. Formas de sales de caracter basico apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinoterreos, p. ej., las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases organicas, p. ej., las sales de benzatina, N-metil- D-glucamina, hidrabamina, y sales con aminoacidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.
El termino "solvatos" abarca cualesquiera solvatos farmaceuticamente aceptables que los compuestos de formula I, asf como las sales de los mismos, son capaces de formar. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, p. ej., etanolatos, propanolatos, y similares.
Algunos de los compuestos de formula I tambien pueden existir en formas tautomericas. Por ejemplo, formas tautomericas de grupos amida (-C(=O)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-). Las formas tautomericas, aunque no se indica explfcitamente en las formulas estructurales representadas en esta memoria, pretenden estar incluidas dentro del alcance de la presente invencion.
Tal como se utiliza en esta memoria, "alquilo C1-4" como un grupo o parte de un grupo define grupos hidrocarburo saturados, de cadena lineal o ramificada, que tienen de 1 a 4 atomos de carbono tales como, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. Para el fin de la presente invencion, de interes entre alquilo C1-4 es alquilo C3-4, es decir, grupos hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tienen 3 o 4 atomos de carbono tales como 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. De particular interes puede ser alquilo C3-4 ramificado tal como 2-propilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo.
El termino "cicloalquilo C3-6" como un grupo o parte del mismo, define grupos hidrocarbonados dclicos saturados que tienen de 3 a 6 atomos de carbono que juntos forman una estructura dclica. Ejemplos de cicloalquilo C3-6 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
"Alcoxi C1-4" tal como un grupo o parte de un grupo significa un grupo de formula -O-alquilo C1-4, en donde alquilo C1- 4 es como se define arriba. Ejemplos de alcoxi C1-4 son metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi.
El termino "halo" es generico para fluoro, cloro, bromo y yodo.
Tal como se utiliza en esta memoria, el termino "(=O)" u "oxo" forma un resto carbonilo cuando esta fijado a un atomo de carbono. Cabe senalar que un atomo solo puede estar sustituido con un grupo oxo cuando la valencia del atomo asf lo permita.
Tal como se utiliza en esta memoria para el fin de definir "arilo" como un grupo o parte del mismo significa una estructura de anillo aromatico que comprende opcionalmente uno o dos heteroatomos seleccionados entre N, O y S, en particular de N y O. Dicha estructura de anillo aromatico puede tener 5 o 6 atomos en el anillo.
Tal como se utiliza en esta memoria, el prefijo "hetero" en la definicion de un grupo significa que el grupo comprende al menos 1 heteroatomo seleccionado entre N, O y S, en particular N y O. Por ejemplo, el termino "heteroarilo" significa una estructura de anillo aromatico tal como se define para el termino "arilo" que comprende al menos 1 heteroatomo seleccionado entre N, O y S, en particular de N y O, por ejemplo furanilo, oxazolilo, piridinilo. Alternativamente, el termino "heterocicloalquilo C3-6" significa grupo hidrocarbonado ciclico saturado tal como se define para "cicloalquilo C3-6" comprende, ademas, al menos 1 heteroatomo seleccionado entre N, O y S, en particular de N y O, por ejemplo tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo.
En los casos en los que no se especifique la posicion de un grupo en un resto de la molecula (por ejemplo, un sustituyente en el fenilo) o este representada por un enlace flotante, este grupo puede estar situado en cualquier atomo de un resto de este tipo, siempre y cuando la estructura resultante sea qmmicamente estable. Cuando cualquier variable esta presente mas de una vez en la molecula, cada una de las definiciones es independiente.
Siempre que se utilice en esta memoria, la expresion "compuestos de formula I", o "los presentes compuestos" o expresiones similares, pretende incluir los compuestos de formula I, incluyendo las posibles formas estereoisomericas y las sales farmaceuticamente aceptables y solvatos de los mismos.
Metodos de sintesis generales
Esquema la
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En el esquema 1 se describen bloques de construction utilizados en la srntesis de compuestos de formula I. a- amino-cetona Ila (Esquema 1, A1 = NH2), con X un halogeno, en particular bromo o yodo, se acopla con un derivado 5 III adecuadamente protegido, en donde PG’ es un grupo protector en el nitrogeno, preferiblemente terc- butoxicarbonilo, en presencia de un reactivo de acoplamiento para la acilacion del grupo amino, preferiblemente HATU, en presencia de una base tal como DIPEA. El compuesto intermedio, asf formado, se cicla a un compuesto de imidazol de formula general IV mediante tratamiento con acetato de amonio, preferiblemente a una temperatura comprendida entre 0°C y 150°C.
10 Alternativamente, el imidazol intermedio IV puede obtenerse mediante el acoplamiento de una a-halo-cetona lib, en donde X y A1 representan cada uno independientemente un atomo de halogeno, X se selecciona preferiblemente de yodo o bromo y A1 se selecciona preferiblemente entre cloro, bromo o yodo, con una compuesto III adecuadamente protegido, en donde PG’ es un grupo protector en el nitrogeno, preferiblemente terc.-butoxicarbonilo, en presencia de una base adecuada, por ejemplo DIPEA, seguido de ciclacion para el compuesto intermedio imidazol IV tal como 15 se describe arriba. Este compuesto intermedio IV se puede transformar en un ester boronico de formula V bajo condiciones catalizadas por Pd, por ejemplo en presencia de Pd(dppf)Cl2, b/s(pinacolato)diboro y una base, por ejemplo acetato de potasio. De manera similar, los compuestos de formula IVa se pueden transformar en compuestos de formula Va segun se representa en el Esquema lb. IVa se puede obtener por separation del grupo protector PG’ (p. ej., utilizando HCl en dioxano o TMSOTf/lutidina en CH2CI2 en el caso de que PG’ sea igual a terc.- 20 butiloxicarbonilo), seguido del acoplamiento de la amina resultante con un acido de formula R’(CO)OH en condiciones de formation de enlace amida tipicas (p. ej., mediante tratamiento con HATU o HBTU y una base tal como DIPEA o el uso de EDCI/HOBt/DIPEA).
Esquema Ib
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Otros bloques de construction se describen en los esquemas 2a, 2b, 2c y 3a, 3b, 3c, 3d, 3e. Esquema 2a
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5 En el esquema 2a, el derivado de acido VI se convierte en un p-cetoester VII por metodos conocidos en la bibliograffa, por ejemplo mediante activation del acido carboxilico con DCC o CDI, seguido, por ejemplo, de la reaction con acido de Meldrum y subsiguiente descarboxilacion en presencia de un alcohol, o como una alternativa mediante condensation con una sal de magnesio de malonato de monoalquilo seguido de descarboxilacion. El p- cetoester VII (Ralk se refiere a alquilo C1-4) se condensa luego con VIII o X, seguido por ciclacion a IXa y IXb, 10 respectivamente (X' es un halogeno seleccionado entre yodo o bromo, preferiblemente bromo). Esta condensacion puede llevarse a cabo en tolueno en presencia de acido acetico. La ciclacion a los compuestos de formulas IXa y IXb se puede realizar termicamente por calentamiento a reflujo en Dowtherm™ A (mezcla de oxido de difenilo y bifenilo). Un ejemplo preferido del grupo protector PG es benciloxicarbonilo (CBz).
Esquema 2b
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Alternativamente, compuestos de la formula general IXc se pueden obtener mediante una secuencia de Sonogashira/ciclacion carbonilativa catalizada por Pd tal como se describe en el Esquema 2b. Partiendo del compuesto de yodo-anilina A.I., bajo procesos similares a los descritos en Applied Catalysis, A: General 2009, 369, 5 1-2, 125-132 y referencias citadas en el mismo.
Esquema 2c
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Compuestos de la formula general IXd, en donde R4 es igual a H o alquilo C1-4, se pueden obtener tal como se muestra en el Esquema 2c. El compuesto VIII (X' es halogeno seleccionado entre yodo o bromo, preferiblemente 10 bromo) se puede convertir en el compuesto A.IV, por ejemplo mediante tratamiento de VIII con BCI3 en un disolvente tal como benceno, a una temperatura mas baja que la temperatura ambiente, por ejemplo mediante enfriamiento con hielo, seguido de tratamiento con AICI3 y nitrilo A.III (R4 es igual a H o alquilo C1-4), por ejemplo a reflujo en benceno. Despues de la hidrolisis, se puede obtener el compuesto A.IV. La formacion del enlace amida a partir de A.IV y VI resulta en la formacion de compuesto A.V. Esta reaccion puede efectuarse convirtiendo el compuesto VI a un haluro 15 de acido, por ejemplo un fluoruro de acido o cloruro de acido, seguido de reaccion con A.IV en presencia de una base. Otro ejemplo es la formacion de A.V de VI y A.IV mediante el uso del reactivo de acoplamiento cloruro de 4- (4,6-dimetoxi[1.3.5]triazin-2-il)-4-metilmorfolinio o sal de BF4 (DMTMM) . La ciclacion de A.V, en condiciones basicas, por ejemplo KOH en EtOH, o NaOH en dioxano, da como resultado compuesto IXd.
Esquema 3a
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La smtesis de compuestos de la formula XIII se describe en el Esquema 3a. La formacion del enlace amida a partir de XI (X' es un halogeno seleccionado entre yodo o bromo, preferiblemente bromo) y VI resulta en la formacion de 5 compuesto XII. Esta reaccion puede llevarse a cabo mediante la conversion de compuesto VI a un haluro de acido, por ejemplo un fluoruro de acido o cloruro de acido, seguido de reaccion con XI en presencia de una base. Otro ejemplo es la formacion de XII a partir de VI y XI mediante el uso del reactivo de acoplamiento cloruro de 4-(4,6- dimetoxi[1.3.5]triazin-2-il)-4-metilmorfolinio (DMTMM). Compuestos XII se convierten luego en compuestos de la formula general XIII en condiciones basicas, por ejemplo KOH o Na2CO3 en etanol.
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Compuesto de formula general A.XI (X' es un halogeno seleccionado entre yodo o bromo, preferiblemente bromo) se puede obtener tal como se muestra en el Esquema 3b. Utilizando metodos descritos en la bibliografia (documento WO2007039578; Tet. Lett. 2001, 42, 33, 5601-5603), el fluoruro A. VI se puede convertir en A.IX. Este ultimo se 15 acopla con haluro de acido A.X (en que X'' es igual a cloro o fluoro) en presencia de una base, por ejemplo trietilamina, seguido de ciclacion en el compuesto A.XI en condiciones basicas tales como, por ejemplo, K2CO3 2N acuoso a reflujo.
Esquema 3c
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El compuesto de formula general A.XVI se puede obtener tal como se muestra en el Esquema 3c. La dialquilacion de ester A.XII con el haluro de alquilo apropiado, por ejemplo Mel en el caso de R5 = R6 = metilo, en presencia de una base, por ejemplo NaH, resulta en el compuesto A.XIII. Este ester se puede convertir en el compuesto A.XIV 5 mediante subsiguiente hidrolisis, formacion de azida de acilo (por ejemplo mediante tratamiento del acido correspondiente de A.XIII con difenilfosforil azida) y reaccion de Curtius. Despues de la reduccion del compuesto A.XIV a A.XV, este ultimo compuesto se convierte en el compuesto A.XVI mediante acoplamiento con acido VI, por ejemplo mediante tratamiento con HATU y una base tal como trietilamina, y la subsiguiente ciclacion en el compuesto A.XVI bajo condiciones acidas, por ejemplo en acido acetico a 50°C.
10 Esquema 3d
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A.XVII
AXIV
Un procedimiento alternativo para la smtesis de compuesto A.XIV (por ejemplo en el caso de que R5 y R6, junto con el carbono que los conecta, formen un oxetano) se representa en el esquema 3d. El anion, generado mediante una 15 reaccion de transmetalacion, por ejemplo butil-litio y compuesto A.XVII a baja temperatura, por ejemplo -78°C, se puede hacer reaccionar con una sulfinamida A.XVIII. Despues de la desproteccion de la sulfinamida formada, en condiciones acidas, se obtiene el compuesto A.XIV, que se puede transformar adicionalmente en A.XVI tal como se describe en el Esquema 3c.
Esquema 4
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Los bloques de construction A.XIX, obtenidos por metodos similares a los descritos en los esquemas 2 (a, b, c) y los esquemas 3 (a, b, c y d) y V (Esquema 1) se pueden convertir en la estructura XIV, utilizando las condiciones de Suzuki-Miyaura (esquema 4). Una reaction de Suzuki-Miyaura similar se puede realizar cuando V esta sustituido 5 con Va y/o A.XIX con A.XIXa, dando como resultado compuestos con la formula general XXI, XXIII o I. A.XIXa puede obtenerse a partir de A.XIX mediante la separation selectiva del grupo protector PG (p. ej., mediante el uso de HCl en dioxano, TMSOTf/lutidina en CH2O2, o TFA en CH2O2 en caso de que PG sea igual a terc.- butiloxicarbonilo o HBr en HOAc/H2O en caso de que PG sea igual a benciloxicarbonilo), seguido del acoplamiento de la amina resultante con un acido de formula R(CO)OH en condiciones de formation de enlace amida tfpicas (p.
10 ej., mediante tratamiento con HATU o HBTU y una base tal como DIPEA o el uso de EDCI/HOBt/DIPEA) (esquema 3e).
Esquema 3e
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Esquema 5
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Cuando PG' y PG en los esquemas 1 a 4 representan R'(C=O)- y R(C=O)-, respectivamente, los compuestos de estructura general XIV caen bajo la definicion de los compuestos de formula I. En ese caso, el esquema 4 describe 5 la smtesis de compuestos de formula I. Alternativamente, XIV se puede desproteger segun se describe en el esquema 5. Por ejemplo, mediante tratamiento con un acido (por ejemplo HCl en iPrOH) cuando PG o PG' representan terc.-butiloxicarbonilo (Boc). El compuesto XX puede transformarse en un compuesto de formula Ie, en donde R y R' son identicos, mediante la formacion de amidas clasica entre un acido R-(C=O)OH y bisamina XX segun se describe en el esquema 6. Metodos preferidos son el uso de HATU en presencia de una base tal como 10 DIPEA, o HOBt en presencia de EDCI y NEt3.
Esquema 6
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XX le
En los casos en los que PG' difiere de PG, es posible una desproteccion selectiva, tal como se describe en el 15 Esquema 5, resultando en los compuestos XVIII o XIX partiendo de XIV. Por ejemplo, en el caso de que PG' sea igual a ferc.-butiloxicarbonilo (Boc) y PG sea igual a benciloxicarbonilo (Cbz), la desproteccion selectiva puede llevarse a cabo por separacion del grupo protector de Boc en condiciones acidas tal como HCl en iPrOH a temperatura ambiente, o mediante la separacion del grupo protector de Cbz en condiciones reductoras tales como hidrogeno en presencia de un catalizador, p. ej. Pd(OH)2.
Cuando PG' represents R'(C=O)- o PG represents R(C=O)-, la srntesis de compuestos XIV tal como se describe en los esquemas 1 a 4 results en compuestos de formula XXI (Esquema 7) o XXIII (Esquema 8), respectivamente. Los compuestos XXI y XXIII se pueden obtener a partir del compuesto XIX y R'(C=O)OH o xViII y R(C=O)OH, respectivamente, bajo condiciones tipicas de formacion de amidas. Estos compuestos pueden entonces ser 5 transformados en compuestos de formula I. La desproteccion selectiva de XXI a XXII, seguido de la formacion del enlace amida entre XXII y R(C=O)-OH resulta en compuestos de la formula I. Una secuencia de reaccion analoga se puede aplicar entonces para transformar XXIII en XXIVy en adelante a compuestos de formula I.
Esquema 7
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XXII
Esquema 8
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XXIV
15 En un aspecto adicional, la presente invencion concierne a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I tal como se especifica en esta memoria, y un soporte farmaceuticamente aceptable. Una cantidad terapeuticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para estabilizar o para reducir la infeccion por el VHC en sujetos infectados, o una cantidad suficiente para prevenir la infeccion por VHC en sujetos en riesgo de ser infectados. Todavfa en un aspecto adicional, esta 20 invencion se refiere a un procedimiento para preparar una composicion farmaceutica tal como se especifica en esta memoria, que comprende mezclar mtimamente un soporte farmaceuticamente aceptable con una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I, tal como se especifica en esta memoria.
Por lo tanto, los compuestos de la presente invencion o cualquier subgrupo de los mismos pueden formularse en diversas formas farmaceuticas para fines de administracion. Como composiciones apropiadas se pueden citar todas 25 las composiciones empleadas habitualmente para administrar farmacos sistemicamente. Para preparar las
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composiciones farmaceuticas de esta invencion, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal por adicion o complejo metalico, como el ingrediente activo, se combina en mezcla mtima con un soporte farmaceuticamente aceptable, soporte que puede adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion. Estas composiciones farmaceuticas son deseables en forma de dosificacion unitaria adecuada, particularmente, para la administracion por via oral, rectal, percutanea, o por inyeccion parenteral. Por ejemplo, en la preparacion de las composiciones en forma de dosificacion oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmaceuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares, en el caso de preparaciones lfquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y disoluciones; o soportes solidos tales como almidones, azucares, caolm, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosas, en cuyo caso se emplean obviamente soportes farmaceuticos solidos. Para composiciones parenterales, el soporte comprendera habitualmente agua esteril, al menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Por ejemplo, se pueden preparar disoluciones inyectables, en las que el soporte comprende solucion salina, solucion de glucosa o una mezcla de solucion salina y solucion de glucosa. Tambien se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear soportes lfquidos, agentes de suspension y similares apropiados. Tambien se incluyen preparados en forma solida destinados a convertirse, poco antes de su uso, en preparados en forma lfquida. En las composiciones adecuadas para la administracion percutanea, el soporte comprende opcionalmente un agente que mejora la penetracion y/o un agente humectante adecuado, combinado opcionalmente con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones secundarias, aditivos que no introducen un efecto deletereo significativo en la piel. Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar tambien a traves de inhalacion oral o insuflacion en forma de una disolucion, una suspension o un polvo seco utilizando cualquier sistema de administracion conocido en la tecnica.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmaceuticas arriba mencionadas en forma de dosificacion unitaria para facilidad de administracion y uniformidad de dosificacion. Forma de dosificacion unitaria, tal como se utiliza en esta memoria, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada una de las unidades una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el soporte farmaceutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificacion unitaria son comprimidos (incluyendo comprimidos con muesca o recubiertos), capsulas, pfldoras, supositorios, paquetes de polvos, pastillas, disoluciones o suspensiones inyectables y similares, y multiplos segregados de los mismos.
Los compuestos de formula I muestran actividad contra el VHC y pueden ser utilizados en el tratamiento y la profilaxis de la infeccion por VHC o enfermedades asociadas con el VHC. Estas ultimas incluyen fibrosis progresiva del tngado, inflamacion y necrosis que conduce a cirrosis, enfermedad hepatica de fase terminal y carcinoma hepatocelular. Ademas de ello, se sabe que un cierto numero de los compuestos de esta invencion activos contra cepas mutadas del VHC. Adicionalmente, los compuestos de esta invencion pueden tener propiedades atractivas en terminos de biodisponibilidad, mostrar un perfil farmacocinetico favorable, incluyendo una semivida aceptable, AUC (area bajo la curva), valores pico y de valle, y carecen de fenomenos desfavorables tales como comienzo insuficientemente rapido o retencion de tejido.
La actividad antiviral in vitro contra el VHC de los compuestos de formula I se puede someter a ensayo en un sistema de replicon del VHC celular basado en Lohmann et al. (1999) Science 285: 110-113, con modificaciones adicionales descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 y Lohmann et al. (2003) Journal of Virology 77: 3007-3019 para el genotipo 1b y por Yi et al (2004) Journal of Virology 78: 7904-7915 para el genotipo 1a (incorporado aqrn como referencia), que se ejemplifica adicionalmente en la seccion de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo de infeccion completa para el VHC, es ampliamente aceptado como el modelo mas robusto y eficiente actualmente disponible de la replicacion autonoma del ARN del VHC. Se apreciara que es importante distinguir entre compuestos que interfieren espedficamente con las funciones del VHC y los que ejercen efectos citotoxicos o citostaticos en el modelo de replicon del VHC y, como consecuencia, provocan una disminucion en el ARN del VHC o una concentracion de la enzima informadora ligada. Los ensayos son conocidos en el campo para la evaluacion de la citotoxicidad celular basada, por ejemplo, en la actividad de enzimas mitocondriales utilizando colorantes fluorogenicos redox tal como resazurina. Ademas, existen tamices de recuento celular para la evaluacion de la inhibicion no selectiva de la actividad del gen informador ligado, tales como la luciferasa de la luciernaga. Tipos de celulas apropiados pueden equiparse mediante transfeccion estable con un gen informador de luciferasa, cuya expresion depende de un promotor del gen constitutivamente activo, y tales celulas pueden utilizarse como un contador de pantalla para eliminar inhibidores no selectivos.
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Debido a sus propiedades anti-VHC, los compuestos de formula I o subgrupos de los mismos, segun se especifica en esta memoria, son utiles en la inhibicion de la replicacion del VHC, en particular en el tratamiento de animales homeotermos, en particular seres humanos, infestados con el VHC, y para la profilaxis de infecciones por el VHC en animales homeotermos, en particular seres humanos. La presente invencion se refiere, ademas, a un metodo de tratamiento de un animal homeotermo, en particular un ser humano, infestado por el VHC, o que esta en riesgo de infeccion por el VHC, comprendiendo dicho metodo la administracion de una cantidad terapeutica o profilacticamente eficaz de un compuesto de formula I, segun se define antes en esta memoria.
Por lo tanto, los compuestos de formula I tal como se especifica en esta memoria, pueden ser utilizados como una medicina, en particular como una medicina anti-VHC. Dicho uso como una medicina o metodo de tratamiento comprende la administracion sistemica a sujetos infestados por el VHC o a sujetos susceptibles a la infeccion por el VHC de una cantidad eficaz para aliviar o prevenir los smtomas y estados asociados con la infeccion por el VHC.
La presente invencion tambien se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de una infeccion por el VHC.
En general, se contempla que una cantidad diaria antiviral eficaz sena de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg, o de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida en forma de dos, tres, cuatro o mas sub-dosis a intervalos apropiados a lo largo del dfa. Dichas sub-dosis se pueden formular como formas de dosificacion unitaria, por ejemplo, que contienen aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg, o aproximadamente 1 a aproximadamente 300 mg, o aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg, o aproximadamente 2 a aproximadamente 50 mg de ingrediente activo por forma de dosificacion unitaria.
Terapia de combinacion
La invencion tambien se refiere a una combinacion de un compuesto de formula I, a una sal farmaceuticamente aceptable o solvato del mismo, y a otro compuesto antiviral, en particular, otro compuesto anti-VHC. El termino "combinacion" se refiere a un producto que contiene (a) un compuesto de formula I, segun se define antes en esta memoria, y (b) otro inhibidor anti-VHC, en forma de un preparado combinado para uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.
Las combinaciones de la presente invencion pueden utilizarse como medicamentos. Por consiguiente, la presente invencion se refiere al uso de un compuesto de formula (I) o cualquier subgrupo del mismo segun se define anteriormente para la fabricacion de un medicamento util para inhibir la actividad del VHC en un mairnfero infestado con virus VHC, en donde dicho medicamento se utiliza en una terapia de combinacion, comprendiendo dicha terapia de combinacion, en particular, un compuesto de formula (I) y al menos otro agente anti-VHC, p. ej., IFN-a, IFN-a pegilado, ribavirina, albuferon, taribavirina, nitazoxanida Debio025 o una combinacion de los mismos.
Otros agentes que se pueden combinar con los compuestos de la presente invencion incluyen, por ejemplo, inhibidores nucleosidos y no nucleosidos de la polimerasa del VHC, inhibidores de proteasa, inhibidores de helicasa, inhibidores de NS4B y agentes que inhiben funcionalmente el sitio interno de entrada en el ribosoma (IRES) y otros agentes que inhiben la union del VHC celular o la entrada del virus, la traduccion del ARN del VHC, la transcripcion del ARN del VHC, la replicacion o la maduracion del VHC, reunion o liberacion del virus. Compuestos espedficos de estas clases incluyen inhibidores de la proteasa del VHC tales como telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC-435350 (TMC-435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375, VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT-450, EP-013420 (y congeneres) y VBY-376; los inhibidores de la polimerasa del VHC nucleosidos utiles en la invencion incluyen TMC649128, R7128, PSI-7851,PSI 7977, IDX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX- 08189, PSI-6130, PSI-938 y PSI-879 y diversos otros analogos de nucleosidos y nucleotidos, e inhibidores del VHC que incluyen los derivados como nucleosidos modificados 2'-C-metilo, nucleosidos modificados 4 'aza y nucleosidos modificados 7'-desaza. Inhibidores de la polimerasa del VHC no nucleosidos utiles en la invencion incluyen HCV- 796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A-837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y TMC647055.
Los siguientes ejemplos estan destinados a ilustrar la invencion y no deben interpretarse como una limitacion de su alcance.
Parte experimental:
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Metodos LCMS
Metodo A: Informacion general: fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 2 min, tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,01 [90/10] a 0,9 [20/80] a 1,5 [20/80] a 1,51 [90/10]; caudal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50°C
Metodo A1: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3 * 30 mm Metodo A2: Xtimate C18 2,1 * 30 mm, 3 um Metodo A3: SHIMADZU Shim pack 2 * 30
Metodo B: Agilent 1100, YMC-Pack ODS-AQ, 50x2,0 mm 5 pm fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05% Tiempo de parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [40/60] a 8 [100/0]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50°C
Metodo C: Agilent 1100, YMC-Pack ODS-AQ, 50x2,0 mm 5 pm fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05% Tiempo de parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80] a 8 [90/10]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50°C
Metodo D: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3 * 30 mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%); B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 2 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,01 [100/0] a 0,9 [70/30] a 1,5 [70/30] a 1.51 [100/0]; caudal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50°C
Metodo E: Cromatograffa lfquida: Waters Alliance 2695, detector de UV: Waters 996 PDA, intervalo 210 - 400 nm; detector de masas: Waters ZQ, fuente de iones: ES +, ES- Columna utilizada: SunFire C18 3,5 p 4,6x100 mm fase movil A: NH4OOCH 10 mM + HCOOH al 0,1% en H2O; fase movil B: CH3OH; temp. de la columna: 50°C; caudal:1,5 mL/min. tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0 [65/35] a 7 [5/95] a 9,6 [5/95] a 9,8 [65/35] a 12 [65/35].
Metodo F: Xtimate C18 2,1 * 30 mm, 3 um, fase movil A: H2O (1,5 mL de TFA/4 L); B: CH3CN (0,75 mL de TFA/4 L) Tiempo de parada: 3 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,0 [90/10] a 1,35 [20/80] a 2,25 [20/80] a 2,26 [90/10]; 3,0 [90/10] caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna.: 50°C
Metodo G: Condiciones generales: fase movil A: H2O (1,5 mL de TFA/4 L); B: CH3CN (0,75 mL de TFA/4 L) Tiempo de parada: 2 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,0 [100/0] a 0,9 [40/60] a 1,5 [40/60] a 1,51 [100/0]; 2,0 [100/0] caudal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50°C Metodo G1: Xtimate C18, 2,1 * 30 mm, 3um
Metodo H: Condiciones generales: fase movil A: H2O (TFA al 0,1%); B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80]; 9,5 [90/10] caudal: 0,8 mL/min; temp de la columna: 50°C Metodo H1: Agilent TC-C 18,2.1 * 50 mm, 5um
Metodo I: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3 * 30 mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 7 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,01 [90/10] a 6,0 [20/80] a 6,5 [20/80] a 6,51 [90/10]; caudal: 0,8 mL/min; temp de la columna: 50°C
Metodo J: Agilent TC-C18, 50x2,1mm, 5 pm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 10 min; Tiempo de parada: 0,5 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [15/85] a 9,5 [100/0]; caudal: 0,8 mL/min; temp de la columna: 50°C
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Compuesto PR-2 (30 g, 123 mmol) en THF (120 mL), etano-1,2-diol (53,6 g, 864 mmol), trietoximetano (54,6 g, 369 mmol) y TsOH (3 g, 3,69 mmol) se anadieron a 25°C. La mezcla se agito a reflujo durante 5 horas. La mezcla se vertio en NH4Q acuoso (400 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro en vado. El residuo obtenido se 5 purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (hexano: acetato de eter = 10:1), dando como resultado el compuesto PR-3 (8,4 g).
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A una disolucion agitada de compuesto PR-3 (8,4 g, 29,3 mmol) en THF/H2O (100 mL, 1:1) se anadio NaOH (5,85 g, 146 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 1 hora y se trato con acetato de etilo (20 mL). La capa 10 inorganica se separo, se ajusto a pH = 4 con HCl 2N y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL). La capa organica reunida se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado, resultando el compuesto PR-4 (5,9 g).
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Se disolvio Compuesto PR-5 (15,7 g, 63,1 mmol) en CH2Cl2 seco (250 mL) y se anadio DMF (1,5 mL) a la disolucion. Cloruro de oxalilo (13,5 mL, 157,5 mmol) se anadio gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se 15 agito durante 0,5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro en vado y el residuo (PR-6, 22 g) se utilizo directamente sin purificacion adicional.
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A la disolucion de compuesto PR-6 (bruto 22 g) en THF seco (250 mL) se anadio 2-amino-4-bromobenzamida (7,6 g, 35,3 mmol) y NaOH 1 N (ac. 85 mL, 85 mmol). La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. La 20 mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con NaOH 1 N en agua (15 mL), salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en vado, dando como resultado un residuo bruto (17 g). El residuo bruto, obtenido de manera similar a la descrita arriba (25 g), y Na2CO3 (17,8 g, 168 mmol) en etanol (250 mL) y H2O (250 mL) se calento a reflujo durante 2 horas. El disolvente organico se separo en vado. La mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 200 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera,
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se secaron sobre Na2SO4 y se purificaron mediante cromatograffa en columna de gel de sHice (eluyente: acetato de etilo). Las fracciones deseadas se evaporaron hasta sequedad. El residuo obtenido se agito en acetato de etilo (50 mL), el precipitado se separo mediante filtracion y se lavo con acetato de etilo, resultando el compuesto QA-1 (17 g).
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Se disolvio compuesto QA-1 (8 g, 18,6 mmol) en HOAc (80 mL) y se anadio HBr al 40% (40 mL). La mezcla se agito a 80°C durante la noche. La mayor parte del disolvente se separo en vado. El precipitado se separo mediante filtracion y se lavo con metil-t-butil-eter. El solido se co-evaporo con tolueno (2 x 20 mL), dando como resultado un residuo bruto (6,5 g). Parte de este residuo (6,4 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metil-butanoico (4,5 g, 25,6 mmol), EDCI (4,9 g, 25,6 mmol) y HOBt (1,15 g, 8,5 mmol) en CH2Cl2 (120 mL) se enfriaron luego a 0°C. Se anadio DIPEA (14,8 mL, 85,0 mmol). La mezcla se agito durante 1,5 horas a 20°C. La capa organica se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (100 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente en gradiente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 100:0 a 0:100), resultando el compuesto QA-2 (3,3 g).
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Compuesto PR-7 (7,0 g, 23,21 mmol) en THF (70 mL) se agito a 0°C. Se anadieron gota a gota dicloruro de oxalilo (7 mL, 46,2 mmol) y DMF (2 gotas) y la mezcla se agito durante 10 min a 0°C. La mezcla se agito y se sometio a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfrio y se evaporo en vado, resultando el compuesto PR-8 (7 g)
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PR-8 QA-3
A la disolucion del compuesto PR-8 (7 g, 21 mmol) en THF (70 mL) se anadio 2-amino-4-bromobenzamida (4,5 g, 21 mmol) e NaOH 1 N (42 mL, 42 mmol). La mezcla se agito durante 1 hora a 25°C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. Se recogieron las capas organicas, se lavo con NaOH 0,5 N, salmuera, se seco y se concentro en vado, dando como resultado un residuo bruto (9 g) .Este residuo (9 g) y Na2CO3 (5,7 g, 54 mmol) en H2O (200 mL) y THF (200 mL) se agito y se sometio a reflujo durante 2 horas. La mezcla se concentro en vado y se extrajo con CH2Cl2 (2 veces), se lavo con salmuera, se seco y se evaporo en vado. El residuo se disolvio en CH2Cl2 y se lavo con HCl 1 N
(3 veces), salmuera, se seco y se evaporo en vado, resultando QA-3 (4,4 g). Metodo A2; Rt: 1,27 min. m/z =: 484,0 (m + H)+ Masa exacta: 483,1
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Al compuesto PR-2 (10 g, 41,2 mmol) en THF (100 mL), se anadieron a 25°C 1,3-propanodiol (22 g, 288-mmol), 5 ortoformiato de trietilo (18,3 g, 123,6 mmol) y acido tolueno-4-sulfonico (1 g, 0,2 mmol). La mezcla se agito a reflujo durante 2 horas. La mezcla se vertio en NH4Cl acuosa (400 mL), se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL) y se separo. Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (hexano: acetato de eter = 5:1) y el compuesto obtenido (3,8 g) se disolvio en THF/H2O (40 mL, 1:1). Se anadio NaOH (2,52 g, 63 mmol) 10 y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora y se trato con acetato de etilo (20 mL). La capa inorganica reunida se separo, el pH se ajusto a 4 con HCl 2N y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 20 mL). La capa organica reunida se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado resultando el compuesto PR- 9 (5,9 g).
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15 Dicloruro de oxalilo (2,5 mL, 13,11 mmol) se anadio gota a gota a una mezcla del compuesto PR-9 (2,5 g, 8,74 mmol), 2-amino-4-bromobenzamida (2,5 g, 10,49 mmol) en diclorometano (20 mL) y piridina (20 mL) a temperatura ambiente. La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo:acetato de eter = 1:1). El compuesto intermedio amida obtenido (0,98 g), Na2CO3 (1,08 g. 10,15 mmol), H2O (5 mL) y CH3CH2OH (5 mL) se agito durante 2 horas a 20 reflujo. La mayor parte del CH3CH2OH se separo en vado y el residuo obtenido se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter, resultando el compuesto QA-4 (0,89 g).
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A una disolucion agitada de compuesto QA-4 (0,89 g, 1,92 mmol) y lutidina (0,41 g, 3,84 mmol) en CH2CI2 seco (10 mL) a 0°C se anadio gota a gota TMSOTf (1,7 g, 7,68 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 30 minutos, se enfrio bruscamente con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo; las capas organicas 5 reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en vado. El residuo obtenido se utilizo como tal en la siguiente reaccion (0,3 g). Metodo A2; Rt: 0,68 min. m/z =: 368,0 (M+H)+ Masa exacta: 367,0. NEt3 (0,5 mL, 2,46 mmol) se anadio a la disolucion del residuo obtenido anteriormente (0,3 g), acido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,22 g, 1,23 mmol), HOBt (0,17 g, 1,23 mmol) y EDCI (0,24 g, 1,23 mmol) en diclorometano (15 mL) en un bano de agua helada. La mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a 10 temperatura ambiente. A continuacion, la mezcla se diluyo con diclorometano (20 mL) y se lavo con NaHCO3 saturado, salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (hexano:acetato de eter = 1:1), resultando el compuesto QA-5 (0,2 g). Metodo A2; Rt: 1,14 min. m/z =: 547,1 (M+Na)+ Masa exacta: 524,1
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15 Cloruro de oxalilo (2,9 mL, 33 mmol) se anadio gota a gota a la mezcla de compuesto PR-1 (5 g, 22 mmol), 2-amino- 4-bromobenzamida (4,7 g, 22 mmol) y piridina (50 mL). La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa (eter de petroleo: acetato de eter = 5:1), resultando un compuesto intermedio (3,6 g). Metodo A2; Rt: 1,15 min. m/z =: 447,7 (M+Na)+ Masa exacta: 425,1 El compuesto intermedio anterior obtenido (3,6 g,), Na2CO3 (2,7 g 25,4 mmol), H2O (20 mL) y 20 CH3CH2OH (20 mL) se agito durante 2 horas a reflujo. La mayor parte de CH3CH2OH se separo en vado. El residuo
se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter, resultando el compuesto QA-6 (3,4 g)
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Compuesto QA-6 (3,4 g, 8,4 mmol) se disolvio en diclorometano (30 mL) y se anadio gota a gota HCl/dioxano (3 mL) a la mezcla a 0°C. La mezcla de reaccion se agito durante 5 horas a temperatura ambiente. El disolvente se separo en vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter y el residuo bruto obtenido se utilizo como tal (2,7 g). A una 5 disolucion de este producto bruto (2,7 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (2,75 g, 15,76 mmol), HOBt (2,42 g, 17,33 mmol) y EDCI (3,32 g, 17,33 mmol) en diclorometano (20 mL) enfriado en un bano de agua helada, se anadio DIPEA (14 mL, 78,8 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 12 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluyo con diclorometano (20 mL), se lavo con NaHCO3 saturado, salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice 10 (hexano: acetato de eter = 1:1), resultando el compuesto QA-7 (2,5 g). SFC: Columna: AD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 9,99 min
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Compuesto PR-10 (2,0 g, 7,3 mmol) en CH2Cl2 (20 mL) se agito a 0°C. Dicloruro de oxalilo (2,3 g, 18,2 mmol) y DMF (2 gotas) se anadieron gota a gota y la mezcla se agito durante 10 minutos a 0°C. La mezcla se agito durante 1 hora 15 a 20°C. La mezcla se enfrio y se evaporo en vado. El residuo se diluyo dos veces con tolueno (2 x 10 mL) y se evaporo, resultando un residuo (PR-11, 2,5 g).
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A la disolucion de compuesto PR-11 (2,5 g) en THF (30 mL) se anadio 2-amino-4-bromobenzamida (1,57 g, 7,3 mmol) y NaOH 1 N (14,6 mL, 14,6 mmol). La mezcla se agito durante 1 hora a 25°C. La mezcla se extrajo con 20 acetato de etilo (2 veces). Las capas organicas se reunieron, se lavaron con NaOH 0,5 N, salmuera, se seco y se concentro en vado, resultando un residuo (3,5 g) que se agito con Na2CO3 (2,32 g, 21,9 mmol) en H2O (50 mL) y
THF (50 mL) y se sometio a reflujo durante 2 horas. Los componentes volatiles se separaron en vado. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (2 veces), se lavo con salmuera, se seco y los componentes volatiles se separaron en vado. El residuo se disolvio en CH2Cl2 y se lavo con HCl 1 N (3 veces), salmuera, se seco y los componentes volatiles se separaron en vado, resultando el compuesto QA-8 (1,5 g). Metodo A2; Rt: 1,15 min. m/z =: 453,9 (M+H)+ Masa 5 exacta: 453,1
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ClCOCOCl (44,4 mL, 510,2 mmol) se anadio gota a gota a la mezcla de PR-13 (100,6 g, 374 mmol), 2-amino-4- bromobenzamida (73,2 g, 340 mmol) y piridina (760 mL) bajo nitrogeno a 0°C. La mezcla se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El disolvente se separo en vado. NaHCO3 saturado se anadio al residuo y la mezcla
10 resultante se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas organicas reunidas se lavaron con NaHCO3 saturado, salmuera y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa (CH2Ch:MeOH = 50:1), resultando un compuesto intermedio de amida (50,6 g). Metodo A2; Rt: 1,15 min. m/z =: 490,1 (M+Na)+ Masa exacta: 467.1 Una disolucion del compuesto intermedio arriba obtenido (50.61g), Na2CO3 (34,51 g, 325,6 mmol), H2O (300 mL) y CH3CH2OH (300 mL) se agitaron durante 3 horas a reflujo.
15 EtOH se separo en vado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en vado. El residuo obtenido se lavo con t-butil-metil-eter resultante en el compuesto QA-9 (39,2 g). Metodo A2; Rt: 1,37 min. m/z = 448,1 (M+H)+ Masa exacta: 447,1
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Se disolvio QA-9 (39,2 g, 87,5 mmol) en diclorometano (400 mL). HCl/dioxano (470 mL) se anadio gota a gota a la 20 mezcla a 0°C. La mezcla de reaccion se agito durante 3,5 horas a temperatura ambiente. El disolvente se separo cuidadosamente en vado. El residuo obtenido se lavo con metil-t-butil-eter, resultando un residuo (30,8 g) Metodo A2; Rt: 0,92 min. m/z = 348,1 (M+H)+ Masa exacta: 347,1
DIPEA (54,2 mL, 308 mmol) se anadio, a 0°C, a una disolucion del residuo anterior (30,84 g, 61,6 mmol), acido (S)- 2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (11,9 g, 67,8 mmol) y HBTU (35,0 g, 92,4 mmol) en diclorometano (265 25 mL) bajo una atmosfera de nitrogeno. A continuacion, la mezcla de reaccion se agito durante 3 horas bajo atmosfera de nitrogeno a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con NaHCO3 saturado, salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo:acetato de etilo = 1:1), resultando un compuesto QA-10 (31,1 g). Metodo A2; Rt: 1,28 min. m/z =: 507,2 (M+H)+Masa exacta: 506,1
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Compuesto SC-1 (100 g, 296 mmol) se disolvio en CHCI3 (3720 mL). 1,2-etano-ditiol (53 mL, 592 mmol) y complejo de trifluoruro de boro-acido acetico (44 mL, 296 mmol) se anadieron bajo proteccion de N2. La mezcla se sometio a reflujo durante 16 horas. El solido se filtro y se seco en alto vado, resultando tiocetal intermedio (98 g) .En un recipiente de fluoropolfmero, NIS (183 g, 811 mmol, 4,8 eq) se disolvio en CH2Cl2 seco (1600 mL). Fluoruro de hidrogeno-piridina se anadio a -75°C. La mezcla se agito a -75°C durante 10 minutos. Parte del tiocetal arriba obtenido (70 g, 169 mmol) en CH2Cl2 (1000 mL) seco se anadio gota a gota. La mezcla se agito a -75°C durante 15 minutos. La mezcla se diluyo con CH2O2 (800 mL) y se hizo pasar a traves de una almohadilla de gel de alumina basica. El disolvente se concentro a 600 mL y se lavo con disolucion saturada de Na2SO3 (500 mL) y disolucion saturada de K2CO3 (500 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se evaporo a vado dando como resultado el compuesto SC-2 (48 g).
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Pd(PPh3)4 (6,5 g, 5,6 mmol, 0,2 eq) y Pd(dppf)2Cl2 (4 g, 5,6 mmol, 0,2 eq) se anadieron a la mezcla de compuesto SC-2 (10 g, 28 mmol, 1 eq), tributil( 1 -etoxi vinil)estano (10 g, 28 mmol, 1 eq) y dioxano seco (200 mL). La mezcla se agito a 70°C bajo N2 durante 4 horas. La mezcla se enfrio a 20°C. Se anadieron H2O (50 mL) y NBS (20 g, 112 mmol) y la mezcla se agito a 20°C bajo N2 durante 12 horas. CH2Cl2 (200 mL) y H2O (100 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se evaporo. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente: eter de petroleo: acetato de etilo = 3:1) dando como resultado el compuesto SC-3 (2 g).
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Se disolvio compuesto SC-3 (2 g, 5 mmol) en CH3CN (20 mL). Se anadieron Boc-L-prolina (4,3 g, 20 mmol) y trietilamina (2,4 mL, 17,5 mmol). La mezcla se agito a 25°C durante 3 horas. El disolvente se separo en vado, resultando un residuo bruto (4 g). Este residuo (4 g) se disolvio en tolueno (40 mL). CH3COONH4 se anadio (7,7 g, 100 mmol). La mezcla se agito a 100°C durante 2 horas. La disolucion se diluyo con acetato de etilo (20 mL) y se lavo con H2O (2 x 10 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se evaporo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente: eter de petroleo:acetato de etilo = 6: 4), resultando el compuesto SC-4 (2,6 g).
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Pd(dppf)Cl2 (0,54 g, 0,74 mmol) se anadio a la mezcla de compuesto SC-4 (4,8 g, 7,4 mmol), KOAc (1,45 g, 14,8 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,76 g, 14,8 mmol) y tolueno (48 mL). La mezcla se agito a 85°C durante 12 horas. Despues de enfriar, el disolvente se evaporo en vado, se anadio CH2Cl2 y la mezcla 5 se lavo con H2O (200 mL) y disolucion saturada de Na2CO3 (200 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4, se filtro y se concentro en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente: C^C^/acetato de etilo = 1:3), resultando el compuesto SC-5 (2,8 g).
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10 El compuesto SC-4 (2,6 g, 5 mmol) en CH2Cl2 (26 mL) y HCl 4N/dioxano (2 mL, 8 mmol) se anadio a 0°C. La mezcla se agito a 25°C durante 20 minutos. El disolvente se separo en vado, resultando un residuo (2,5 g). Metodo A2; Rt: 0,95 min. m/z: 415,9 (M+H)+ Masa exacta: 415,1. Este residuo (2,5 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilbutanoico (1,9 g, 11 mmol), EDCI (2,1 g, 11 mmol) y HOBt (1,5 g, 11 mmol) en C^Ch (25 mL) se enfrio a 0°C y se anadio DIPEA (8,7 mL, 50 mmol). La mezcla se agito a 20°C durante 12 horas. La mezcla se diluyo con CH2CI2 15 (20 mL) y H2O (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (5 mL), salmuera y se
seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eter de petroleo/acetato de etilo = 1:8), resultando el compuesto SC-6 (2,2 g). Metodo A2; Rt: 0,97 min.
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20 Pd(dppf)Cl2 (0,14 g, 0,19 mmol) se anadio a la mezcla de compuesto SC-6 (2,2 g, 3,8 mmol), 4,4,4'4',5,5,5',5'- octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,95 g, 7,6 mmol), CH3C0OK (0,75 g, 7,6 mmol) y tolueno seco (45 mL). La mezcla se agito a 85°C durante 12 horas. Despues de enfriar, el disolvente se evaporo en vado, se anadio CH2CI2 y la mezcla se lavo con H2O (200 mL) y se disolucion saturada de Na2CO3 (200 mL). Las capas organicas reunidas se
secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de s^lice (eluyente: eter de petroleo/acetato de etilo = 1:3), resultando el compuesto SC-7 (2,05 g). Metodo A2; Rt: 0,98 min. m/z: 621,1 (M+H)+Masa exacta: 620,3
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5 Pd(PPh3)4 (0,4 g, 0,35 mmol) se anadio a la mezcla de compuesto SC-8 (3,3 g, 7 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil- 2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,6 g, 14 mmol), KOAc (1,4 g, 14 mmol) y tolueno (75 mL). La mezcla se agito a 85°C durante 12 horas. Despues de enfriar, se anadio CH2CI2 y la mezcla se lavo con disolucion saturada de Na2CO3 (200 mL) y salmuera (200 mL). El agua se extrajo con CH2CI2 (3 x 200 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en 10 columna de gel de silice (eluyente: CH2Cl2/metanol = 10:1). El disolvente se elimino en vado, resultando el compuesto SC-9 (1,6 g). Metodo A2; Rt: 1,11 min. m/z: 516,1 (M+H)+ Masa exacta: 515,3
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Compuesto SC-8 (10 g, 21 mmol) se disolvio en CH2Cl2 (100 mL) y se anadio gota a gota HCl 4N/dioxano (50 mL). La mezcla se agito durante 30 minutos a 25°C. El disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se co-evaporo 15 con tolueno (2 x 20 mL) y se utilizo para la siguiente etapa sin purificacion adicional. Metodo A2; Rt: 0,96 min. m/z:
368,1 (M+H)+ Masa exacta: 367,1
El residuo arriba obtenido acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (5,6 g, 32 mmol), EDCI (6,1 g, 32 mmol) y HOBt (1,4 g, 10 mmol) en CH2Cl2 (180 mL) se enfrio a 0°C. Se anadio gota a gota DIPEA (18,6 g, 106 mmol). La mezcla se agito durante 1 hora a 25°C. La capa organica se lavo con capa acuosa saturada de NaHCO3 20 (20 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en
columna de gel de silice (gradiente de eluyente: acetato de etilo:metanol: de 100:0 a 20:1), resultando el compuesto SC-10 (9,9 g) en forma de un polvo bianco. Metodo A2; Rt: 1,02 min. m/z: 527,1 (M+H)+ Masa exacta: 526,1
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Una mezcla del compuesto SC-10 (2 g, 3,80 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,9 g, 25 7,6 mmol), Pd(dppf)Cl2, (0,28 g, 0,38 mmol), KOAc (0,75 g, 7,6 mmol) en dioxano seco (20 mL) se agito durante 2
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horas a 100°C bajo una atmosfera de N2. El solido se filtro y el filtrado se evaporo a sequedad. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sHice (gradiente de eluyente: eter de petroleo: acetato de etilo: de 100:0 a 0:100), resultando el compuesto SC-11 (1,88 g) en forma de un polvo blanco. Metodo A2; Rt: 1,08 min. m/z:
573,1 (M+H)+ Masa exacta: 572,3
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SC-2 (20 g, 55,5 mmol), tributil(1 -etoxivinil)estano (20 g, 55,5 mmol), Pd(PPh3)4 (13 g, 12 mmol) y Pd(ddpf)Cl2 (8 g, 12 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano (100 mL) a 20°C. La mezcla se agito a reflujo durante 4 horas. La mezcla se vertio en H2O (30 mL) a 20°C. Se anadio NBS (40 g, 110,0 mmol) y la mezcla resultante se agito a 20°C durante 12 horas. La mezcla se vertio en H2O (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro en vado, resultando SC-3 bruto (21 g). El residuo obtenido se utilizo para la siguiente reaccion sin purificacion. Cs2CO3 (20,0 g, 61,38 mmol) se anadio a una disolucion agitada de PR-4 (7,6 g, 27,81 mmol) en DMF (40 mL). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 0,5 horas. Se anadio SC-3 bruto (21,0 g, 52,23 mmol) a la mezcla. La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 2 horas. La mezcla se lavo con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (eluyente: hexano: acetato de eter = 5:1), resultando 1,4-dioxa-7-aza-espiro[4.4]nonano-7,8-dicarboxilato de (S)-8-(2-(7-bromo-9,9-difluoro-9H-fluoren-2-il)-2- oxoetil)-7-terc.-butilo (8 g).
A una disolucion agitada de 1,4-dioxa-7-aza-espiro[4.4]nonano-7,8-dicarboxilato de (S)-8-(2-(7-bromo-9,9-difluoro- 9H-fluoren-2-il)-2-oxoetil)-7-terc.-butilo (8 g) en xileno (80 mL) en un autoclave, se anadio NH4OAc (20 g, 260 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 140°C durante 1 hora. La mezcla se lavo con agua (90 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL); la capa organica reunida se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa ffquida de alto rendimiento preparativa sobre RP-18 (eluyente: CH3CN en H2O (NH4HCO3 al 0,5%) de 40% a 80%, v/v). Las fracciones puras se recogieron y los componentes volatiles se separaron en vado. La capa acuosa se liofilizo hasta sequedad, resultando SC-12 (4,12 g). Metodo A2; Rt: 1,12 min. m/z: 576,1 (M+H)+ Masa exacta: 575,1
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A una disolucion agitada de compuesto SC-12 (4,5 g, 7,85 mmol) y 2,6-lutidina (1,68 g, 15,7 mmol) en CH2Cl2 seco (50 mL) a 0°C, se anadio gota a gota TMSOTf (7 g, 31,4 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 30 minutos, se enfrio bruscamente con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en vado, resultando (S)-8- (5-(7-bromo-9,9-difluoro-9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1,4-dioxa-7-azaespiro[4.4]nonano (2 g). NEt3 (0,5 g, 45 mmol) se anadio a una disolucion agitada de (S)-8-(5-(7-bromo-9,9-difluoro-9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1,4- dioxa-7-azaespiro[4.4]nonano (2 g, 4,2 mmol), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,89 g, 5 mmol), EDCI (0,96 g, 5 mmol) y HOBt (0,67 g, 5 mmol) en cH2CI2 seco (50 mL). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 2 horas, se enfrio bruscamente con Na2CO3 acuoso saturado, y se extrajo con CH2CI2 (3 x 10 mL). La capa organica reunida se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo obtenido se
purifico mediante cromatografia fiquida de alto rendimiento preparativa sobre RP-18 (eluyente: CH3CN en H2O (NH4HCO3 al 0,5%) de 30% a 70%), v/v). Las fracciones puras se recogieron y los componentes volatiles organicos se separaron en vado. La capa acuosa se liofilizo a sequedad resultando SC-13 (1,2 g) en forma de un solido blanco. Metodo A2; Rt: 1,09 min. m/z: 633,3 (M+H)+ Masa exacta: 632,1
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A una disolucion agitada de compuesto SC-13 (1,2 g, 1,9 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (0,1 g, 0,137 mmol) en dioxano seco (25 mL), se anadieron 4,4,4l,4l,5,5,5l,5'-octametil-2,2l-bi(1,3,2-dioxaborolano) (0,72 g, 2,8 mmol) y KOAc (0,37 g, 3,76 mmol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 30 minutos, se enfrio bruscamente con agua, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La capa organica reunida se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se 10 concentro en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (hexano: acetato de eter = 1:1), resultando el compuesto SC-14 (0,756 g) en forma de un solido amarillo.
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3-bromoanilina (186 g, 1080 mmol) se anadio a una mezcla de 2-(3-etoxi-3-oxopropanoil)pirrolidina-1-carboxilato de (S)-bencilo (460 g, 1440 mmol) en tolueno que contiene acido acetico (86,4 g, 1440 mmol) y se sometio a reflujo 15 durante 8 horas utilizando un aparato Dean Stark para separar el agua de reaccion. La mezcla se concentro a presion reducida y se seco en vado. El producto bruto se utilizo en la siguiente etapa sin purificacion adicional (662 g). Un matraz equipado con un agitador, cabeza de destilacion y embudo de goteo se purgo con nitrogeno. Se anadio Dowtherm™ A (90 mL) y luego se calento a 240°C. Una disolucion del residuo obtenido anteriormente (662 g) en Dowtherm™ A (900 mL) se anadio durante 10 min, al tiempo que la temperatura se mantuvo en el intervalo 20 230-245°C. La mezcla se calento durante otra 1 hora a 240°C y despues se enfrio a temperatura ambiente. Se
anadieron eter de petroleo (2000 mL) y heptano (2400 mL). Se formo un residuo oleoso y el disolvente se decanto. El residuo oleoso recogido se purifico mediante cromatografia en columna de resolucion instantanea (eluyente: CH2Cl2:EtOAc = 10:1 a 1:3), resultando el compuesto 4 (38 g). Metodo B; Rt: 5,20 min. m/z: 429,0 (M+H)+ Masa exacta: 428.1 Columnas: Ad-H de 50 mm * 4,6 mm, 3 um Caudal: 4 mL/min; Fase movil: A: CO2 B: EtOH 25 (dietilamina al 0,05%), 5% a 40% de B en A; Temperatura: 40°C, isomero 4a: Rt: 1,53 min; 4b Rt: 1,73 min.
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Se disolvio compuesto QO-1 (1,85 g, 4,3 mmol) en CHCI3 (10 mL). Se anadio HCl conc. (10 mL) y la mezcla se agito en un tubo sellado a 60°C durante 1 hora. El disolvente se separo en vacio. El residuo obtenido (1,6 g) se disolvio en metanol (30 mL) y se anadio NEt3 (1,8 mL, 13,0 mmol). A continuacion, se anadio gota a gota a 0°C Boc2O (1,1 g, 5,2 mmol). Despues de la adicion, la mezcla se agito durante 0,5 h a 20°C. El disolvente se separo en vacio y el residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de silice (gradiente de eluyente: eter de petroleo: acetato de etilo: de 100:0 a 0:100), resultando el compuesto QO-2 (1,08 g). Metodo A2; Rt: 0,97 min. m/z =: 392,9 (M+H)+ Masa exacta: 392,1
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Compuesto QO-1 (1 g, 2,3 mmol) y Selectfluor (0,81 g, 2,3 mmol) en DMA (10 mL) se agitaron a 150°C durante 15 min. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se vertio en NaHCO3 pre-enfriado saturado (100 mL). El precipitado se filtro, se lavo con H2O y se purifico mediante cromatografia en gel de silice. (Eluyente: CH2Ch/EtOAc, 1/1). Las fracciones recogidas se reunieron y se concentraron en vacio. El residuo obtenido se solidifico mediante THF (3 mL), resultando el compuesto QO-3 (0,13 g). Metodo A2; Rt: 1,55 min. m/z =: 447,0 (M+H)+ Masa exacta:
446,1
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Acetonitrilo (23,7 g, 580 mmol) se anadio a 3-bromoanilina (10 g, 58 mmol) en tolueno (70 mL). La mezcla se enfrio a 0°C y se anadio gota a gota BCU (1 M en CH2Cl2, 64 mL, 64 mmol) al tiempo que se mantenia la temperatura por debajo de 10°C. A continuacion, se anadio AlCh (11,6 g, 87 mmol) en pequenas porciones a 0°C. La mezcla de reaccion se calento a 90°C durante 5 horas. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se enfrio bruscamente con HCl acuoso (2 N, 100 mL). La mezcla se calento a 50°C durante 1 hora, se enfrio a temperatura ambiente y se separo. La capa organica se separo y se lavo con agua y salmuera. La capa organica se recogio, se seco y se concentro, resultando 1-(2-amino-4-bromofenil) etanona (4 g). Metodo A2; Rt: 0,98 min. m/z = 215,7 (M+H)+ Masa exacta: 215,0
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Se agitaron compuesto PR-13 (10,6 g, 43,9 mmol), tamiz molecular de 4 A (1,0 g) y 1 -(2-amino-4- bromofenil)etanona (9,4 g, 43,9 mmol) en xileno (100 mL) y se sometio a reflujo durante 1 hora. Se anadio 4-(4,6- dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinio BF4(DMTMM.BF4, 15,8 g, 48,3 mmol) y la mezcla se agito y se sometio a
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reflujo durante 12 horas. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice en columna (eluyente: eter de petroleo/CH2Cl2 = 5:1 y despues con eter de petroleo/acetato de etilo = 1/1 v/v), resultando el compuesto QO-4 (10,9 g).
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Compuesto QO-4 (10,0 g, 22,9 mmol) y NaOH (co-evaporado con tolueno, 3,2 g, 80 mmol) en dioxano (100 mL) se agito durante 1 hora a 100°C bajo N2. La mezcla se vertio en NH4Cl al 10% (200 mL). La mezcla se extrajo con CH2CI2 (2 x 100 mL). Las capas organicas se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna sobre gel de sflice (eluyente: CH2Cl2 despues acetato de etilo). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se separo en vado. A la quinolinona obtenida (3,0 g) en CH2CI2 (30 mL), se anadio gota a gota HCl 4 N/dioxano (30 mL). La mezcla se agito durante 2 horas a 20°C y despues los componentes volatiles se separaron en vado. El residuo obtenido (3,0 g), acido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1,9 g, 10,8 mmol), EDCI (2,1 g, 10,8 mmol) y HOBt (0,49 g, 3,6 mmol) en CH2Cl2 (30 mL) se agitaron a 0°C. Se anadio DIPEA (4,7 g, 36 mmol). La mezcla se agito durante 2 horas a 20°C. Se anadio H2O (30 mL) y la mezcla se separo mediante filtracion. El solido se recogio y se seco, resultando el compuesto QO-5. El filtrado se separo y la capa organica se lavo con H2O (2x30 mL) y salmuera, se seco y se evaporo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente: acetato de etilo, despues acetato de etilo:CHaOH = 10:1). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se concentro en vado, resultando mas compuesto QO-5 (3 g en total).
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A una disolucion agitada del compuesto PR-14 (6 g, 22,3 mmol) en CH2Cl2/piridina (100 mL, 1/1) a 0°C, se anadio gota a gota (COCl)2 (5,6 g, 44,6 mmol). La mezcla se agito a 25°C durante 0,5 horas. A continuacion, la mezcla se anadio a una disolucion de 1-(2-amino-4-bromofenil)etanona (4,7 g, 22,3 mmol) en CH2Cl2 (30 mL). La mezcla se agito a 25°C durante 1 hora. La mezcla se vertio en H2O (100 mL), se extrajo con CH2O2 (3 x 50 mL) y se separo. Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (hexano: acetato de eter = 5:1), resultando el compuesto QO-6 (9 g) en forma de un solido.
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Al compuesto QO-6 (9 g, 19,3 mmol), en tolueno (100 mL), se anadio NaOH (3 g, 77,2 mmol) a 25°C. La mezcla se agito a reflujo durante 1 hora. La mezcla se vertio en NH4Cl acuoso (50 mL), se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL) y se separo. Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (hexano: acetato de eter = 10:1), resultando el compuesto QO-7 (3,5 g). Metodo A2; Rt: 1,25 min. m/z =: 449,1 (M + H)+Masa exacta: 448,1
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A una disolucion del compuesto QO-7 (3,5 g, 7,83 mmol) en CH2CI2 (100 mL) se anadio gota a gota TFA (10 mL) a 25°C. La mezcla se agito a 25°C durante 0,5 horas. El disolvente se separo en vado. El residuo se lavo con t-butil- metil-eter y se seco en vado, el solido resultante (2,4 g) se agito en CH2CI2 (100 mL) con acido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1,45 g, 8,3 mmol), hAtU (3,15 g, 8,3 mmol) y NEt3 (0,84 g, 8,3 mmol) a 25°C. La mezcla se agito a 25°C durante 1 hora. La mezcla se vertio en H2O (50 mL), se extrajo con CH2CI2 (3 x 50 mL) y se separo. Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (hexano: acetato de eter = 5:1), resultando el compuesto QO-8 (1,5 g) en forma de un solido. Metodo A2; Rt: 1,11 min. m/z =: 506,2 (M+H)+ Masa exacta: 505,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 6 ppm 0,85 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1,15 - 1,37 (m, 2 H), 1,37 - 1,56 (m, 2 H), 1,56 - 1,79 (m, 3 H), 1,82 -2,11 (m, 3 H), 2.23 -2.43 (m, 2 H), 3,55 (s, 3 H), 3,93 (t , J = 8,7 Hz, 1 H), 4,45 (dt, J = 11,7, 5,9 Hz, 1 H), 4,73 (dd, J = 10,3, 7,4 Hz, 1 H), 5,89 (s ancho, 1 H), 7,44 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 1 H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,73 (d, J = 0,9 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 11,63 (s ancho, 1H).
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1-(2-amino-4-bromo-5-fluorofenil)etanona (0,36 g, 1,57 mmol) y el compuesto PR-12 (0,34 g, 1,57 mmol) en xileno (8 mL) se sometieron a reflujo durante 1 hora. Se anadio DMTMM.BF4 (0,57 g, 1,73 mmol) y la mezcla se agito y se calento a reflujo durante 8 horas. El disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice. (Gradiente de eluyente: eter de petroleo/acetato de etilo de 1 a 1/2), resultando el compuesto QO-9 (0,5 g).
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Compuesto QO-9 (0,5 g, 1,16 mmol) y NaOH (0,16 g, 4,0 mmol) en dioxano seco (5 mL) se agitaron a 100°C durante 1 hora bajo N2. La mezcla se vertio en disolucion de NH4CI al 10% (20 mL). El residuo se extrajo con CH2CI2 (2x10 mL), se seco sobre Na2SO4 y se evaporo en vado. El residuo obtenido (0,5 g) se disolvio en CH2Cl2 (5 mL). HCl 4 N/dioxano (2 mL) se anadio a 0°C y la mezcla se agito a continuacion a 25°C durante 20 min. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido (0,5 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,45 g, 2,55 mmol), eDcI (0,49 g, 2,55 mmol) y HOBt (0,34 g, 2,55 mmol) en CH2Cl2 (10 mL) se enfrio hasta 0°C y se anadio DIPEA (2,3 mL, 11,6 mmol). La mezcla se agito a 20°C durante 12 horas. La mezcla se diluyo con CH2Cl2 (20 mL) y H2O (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (5 mL), salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente: metanol/CH2Cl2 = 15%), resultando el compuesto QO-10 (150 mg) en forma de un polvo blanco. Metodo A2; Rt: 0,92 min. m/z = 470,1 (M + H)+ Masa exacta: 469,0
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Se disolvio 4-bromo-1-fluoro-2-nitrobenceno (50 g, 227 mmol) en etanol (600 mL). Subsiguientemente, se anadio una suspension de Na2SO3 (71,6 g, 568 mmol) en etanol (1000 mL) y agua (1250 mL). La suspension se agito a 70°C durante 15 horas. Luego, a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se acidifico con HCl (2 N) a pH = 2 y se concentro en vado. El residuo restante se disolvio bajo reflujo en salmuera (1000 mL). Subsiguientemente, se anadio agua (100 mL) y la disolucion se enfrio en un bano de hielo. El precipitado se recogio mediante filtracion, resultando acido 4-bromo-2-nitrobencenosulfonico (57,3 g, 89%).
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A una disolucion de cloruro de tionilo (50 mL) se anadio acido 4-bromo-2-nitrobencenosulfonico (30 g, 106 mmol) y DMF (1 gota) y la mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 4 horas. Tras el enfriamiento, la mezcla de reaccion se sometio a destilacion azeotropica con tolueno tres veces. El residuo se disolvio en una cantidad minima de tolueno y despues la mezcla resultante se anadio a una mezcla de disolucion acuosa concentrada de hidroxido de amonio (1 mL) y THF (10 mL) a -10°C. Despues de agitar durante 2 horas, la reaccion se inactivo mediante la adicion de acido clorddrico 6 M acuoso hasta pH = 4. La capa organica se separo y despues se seco y se concentro en vado. El eter de petroleo se anadio a la suspension resultante y el producto se recogio mediante filtracion en vado, dando como resultado 4-bromo-2-nitrobencenosulfonamida.
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Una suspension de 4-bromo-2-nitrobencenosulfonamida (21,2 g, 75 mmol) en HI al 57% (250 mL) se calento a 90°C durante 4 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de color purpura oscuro se diluyo con acetato de etilo (500 mL) y se lavo sucesivamente siguiente mediante Na2S2O3 ac. saturado, NaHCO3 ac. saturado y salmuera. La capa organica incolora se seco sobre MGSO4 anhidro, se filtro y se concentro hasta sequedad. El producto bruto se purifico mediante cromatograffa lfquida de alta resolucion (eluyente: CH3CN/H2O de 22/78 a 52/48 con NH3H2O al 0,01% como tampon), resultando 2-amino-4-bromo-bencenosulfonamida (18,6 g). Metodo B; Rt: 3,36 min. m/z = 250,9 (M+H)+ Masa exacta: 249,9
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Trietilamina (40,5 mL, 296 mmol) se anadio a una disolucion de 2-amino-4-bromobencenosulfonamida (18,6 g, 74 mmol) en acetona (200 mL). Compuesto PR-6 (12,8 g, 48 mmol) se anadio a la mezcla de reaccion bajo enfriamiento. Despues de agitar durante 5 horas, la mezcla de reaccion se diluyo con agua y se acidifico por HCl 2 N a pH 4. El precipitado resultante se recogio mediante filtracion y despues se transfirio a otro matraz. Una disolucion de K2CO3 (15 g) se anadio en agua (100 mL) y la mezcla de reaccion se sometio a reflujo durante 2 horas hasta que la reaccion se volvio homogenea. La mezcla de reaccion se acidifico mediante HCl 2 N hasta pH = 4. El precipitado se separo mediante filtracion y se lavo con agua. El producto bruto se purifico mediante cromatograffa ffquida de alta resolucion (eluyente: CH3CN/H2O de 35/65 a 65/35 con CF3COOH al 0,75% como tampon), resultando compuesto TD-1 (8,3 g, 45%). Metodo A2; Rt: 1,05 min. m/z =: 487,8 (M+Na)+Masa exacta: 465,0
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Compuesto TD-1 (2 g, 4,3 mmol) se disolvio en CH3COOH (20 mL). Se anadio HBr al 40% (30 mL) y la mezcla se agito a 50°C durante 3 horas. El disolvente se evaporo en vado. El residuo obtenido se lavo con terc-butil-metil-eter. El solido se filtro y se seco en alto vado. Una disolucion del polvo amarillo resultante (1,7 g) y Boc2O (1,8 g, 8,2 mmol) en metanol (15 mL) se enfrio a 0°C. Se anadio trietilamina (2,3 mL, 16,4 mmol). La mezcla se agito a 20°C durante 2 horas y el disolvente se separo en vado. Se anadio CH2Cl2 (10 mL) y la mezcla se lavo con H2O (10 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se solidifico mediante eter de petroleo (5 mL) y se filtro. Despues se seco bajo alto vado, se obtuvo el compuesto TD-2 (1,7 g) Metodo G; Rt: 1,26 min. m/z =: 453,9 (M+Na)+ Masa exacta: 431,0
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A oxetan-3-ona (5 g, 69 mmol) en THF (50 mL) se anadieron secuencialmente 2-metilpropano-2-sulfinamida (8,34 g, 69 mmol) y Ti(OEt)4 (20 mL). La reaction se calento hasta 50°C durante 5 horas. La reaction se enfrio a temperatura ambiente y se enfrio bruscamente con agua (200 mL). El precipitado se filtro y el filtrado se extrajo con CH2CI2 (2 x 50 mL). La capa organica reunida se separo y se lavo con agua (50 mL) y salmuera (50 mL). La capa organica se seco y se concentro. El producto bruto se purifico mediante cromatografia en columna (CH2CI2) resultando el compuesto OA-1 (5,5 g, rendimiento 46%).
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4-bromo-1-yodo-2-nitrobenceno (3 g, 9,18 mmol) se disolvio en THF anhidro (20 mL) bajo atmosfera de N2, y el matraz se enfrio a -78°C. La mezcla se agito durante 5 minutos y se anadio lentamente n-BuLi (4,4 mL, 2.5 mol/L). La mezcla de reaccion se volvio oscura y se continuo agitando a -78°C durante 15 minutos. Despues, se anadio lentamente compuesto OA-1 (1,92 g, 11 mmol) a la mezcla. La reaccion se agito durante 30 minutos a -78°C y despues se calento a temperatura ambiente. La mezcla se vertio en agua (50 mL) y se extrajo con CH2CI2 (2 x 20 mL). Las fases organicas se separaron y se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente: eter de petroleo / acetato de etilo = 3/1), resultando el compuesto OA-2 (1,3 g, 38% de rendimiento). Metodo A2; Rt: 1,04 min. m/z = 378,7 (M+H)+ Masa exacta: 378,0
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Compuesto OA-2 (1,3 g, 3,45 mmol) se disolvio en MeOH (10 mL) y se anadio lentamente HCl/dioxano (4N, 10 mL). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla se concentro, dando lugar a un residuo (0,89 g). Metodo A2; Rt: 0,60 min. m/z = 272,7 (M+H)+. Al residuo obtenido (0,89 g) en un matraz de 50 mL, se anadieron HATU (1,49 g, 3,94 mmol), trietilamina (0,66 g, 6,56 mmol) y acido (S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina-2- carboxflico (0,84 g, 3,94 mmol). El residuo se disolvio en CH2CI2 (10 mL). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 40 minutos. La mezcla se enfrio bruscamente con agua (20 mL) y se extrajo con CH2CI2 (2 x 10 mL). Las fases se separaron y la fase organica se lavo con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y luego se concentro. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente: eter de petroleo/acetato de etilo = 2/1) resultando un compuesto intermedio nitro (1,27 g) .Este compuesto intermedio nitro (1 g, 2,1 mmol) se disolvio en MeOH/agua (20 mL 1:1), se anadieron polvo de Fe (0,35 g, 6,3 mmol) y NH4Cl (0,55 g, 10,5 mmol) y la mezcla se agito a reflujo durante 3 horas. La mezcla de reaccion se enfrio a
temperatura ambiente y despues se concentro a sequedad. El residuo obtenido se lavo con agua (10 mL), y se extrajo con CH2CI2 (2 x 10 mL). La capa organica se separo y se concentro en vado, dando como resultado un compuesto intermedio (0,77 g).Metodo A2; Rt: 1,07 min. m/z =: 464,0 (M+Na)+ Masa exacta: 441,1. Este compuesto intermedio (0,77 g, 1,75 mmol) se disolvio en AcOH (20 mL). La disolucion resultante se agito a 80°C durante 30 5 minutos. La mezcla de reaccion se concentro en vado y el residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo: acetato de etilo = 1:1) resultando el compuesto OA-3 (0,49 g, 66%). Metodo B; Rt: 4,06 min. m/z = 422,0 (M+H)+ Masa exacta: 421,1
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Pd(PPhb)4(0,14 g, 0,12 mmol) se anadio a una mezcla de compuesto SC-9 (0,5 g, 1,2 mmol), compuesto QO-1 (0,41 10 g, 1,2 mmol), Na2CO3 (0,51 g , 4,8 mmol), THF (20 mL) y H2O (10 mL) bajo atmosfera de N2. La mezcla se agito bajo irradiacion de microondas a 80°C durante 15 minutos. CH2CI2 (20 mL) y H2O (15 mL) se anadieron a la mezcla de reaccion. La capa organica se separo, se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se evaporo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (eluyente: acetato de etilo: eter de petroleo 3:1), resultando el compuesto 1 (0,43 g). Metodo A2; Rt: 0,89 min. m/z =: 736,3 (M+H)+ Masa 15 exacta: 735,3
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Compuesto 1 (0,43 g, 0,58 mmol) se disolvio en CHCh (4,3 mL). Se anadio HCl concentrado (4,3 mL). La mezcla se agito a 60°C en un tubo sellado durante 1 hora. El disolvente se evaporo en vado, dando como resultado el compuesto 2 (0,6 g). Metodo A2; Rt: 0,92 min. m/z = 502,3 (M+H)+ Masa exacta: 501,3
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A una solucion de acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,49 g, 2,78 mmol) en acetonitrilo (20 mL), se anadieron EDCI (0,53 g, 2,78 mmol) y HOBt (0,38 g, 2,78 mmol). Despues de agitar durante 1 hora a 10°C, se anadio compuesto 2 (0,6 g). Despues, la mezcla se enfrio a 0°C y se anadio DIPEA (1,5 g, 11,6 mmol). La mezcla se agito a 10°C durante 12 horas. El solido se filtro, el filtrado obtenido se concentro y se diluyo con CH2CI2 (20 mL) y HCl 1 N (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con disolucion acuosa saturada de NaHCO3 (5 mL) y salmuera y despues se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vacio. El compuesto 3 obtenido, una mezcla de dos diastereoisomeros 3a y 3b, se purifico mediante cromatografia liquida de alta resolucion (columna: Grace Vydac 250 * 20 mm * 5um, Fase movil A: agua (que contiene TFA al 0,075%, %V/V Fase movil B: acetonitrilo (que contiene TFA al 0,025%, %V/V Caudal: 30 mL/min; Gradiente: 35-50% B (v/v) de 0 a 11 min). Las dos fracciones puras se recogieron y se basificaron con NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volatiles se separaron en vacio. El residuo se extrajo con CH2Ch (2 x 10 mL). La capa organica se lavo con salmuera (10 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vacio. El residuo obtenido se lavo con acetonitrilo (1 mL) y t-butil-metil-eter (1 mL). El solido se seco bajo alto vacio, resultando los dos diastereoisomeros separados compuesto 3a (14 mg) y compuesto 3b (26 mg).
3a: Metodo B; Rt: 4,71 min. m/z: 816,3 (M+H)+Masa exacta: 815,4
SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Caudal: 2,35 mL/min, fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 8,39 min
SFC: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A:CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 7,67 min
3b: Metodo B; Rt: 4,79 min. m/z: 816,3 (M+H)+Masa exacta: 815,4
SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 7,41 min
SFC: Columna: OD-H 150 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al
0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 9,60 min
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Una mezcla de compuesto QO-2 (1,0 g, 2,5 mmol), compuesto SC-5 (1,4 g, 2,5 mmol), Na2CO3 (2,1 g, 20 mmol), Pd(PPh3)4 (0,29 g, 0,25 mmol) en H2O (10 mL), etanol (10 mL) y tolueno (10 mL) se agito durante 1 hora a 100°C bajo atmosfera de N2. Se anadio agua (10 mL) y la mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 30 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4. Despues de la filtracion, el disolvente se separo en vacio. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de silice (eluyente gradiente: primero, acetato de etilo:
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metanol: de 100:0 a 10:1, y luego diclorometano: metanol: de 10:1 a 1:1), resultando el compuesto 4 (1,04 g) Metodo A2; Rt: 0,99 min m/z: 750,3 (M+H)+ Masa exacta: 749,3;
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El compuesto 4 (1 g, 1,3 mmol) se disolvio en CH2CI2 (10 mL). Se anadio HCl 4 N/dioxano (10 mL). La mezcla se agito durante 20 minutos a 25°C. El disolvente se separo en vado. El residuo se co-evaporo con tolueno (10 mL), resultando 0,85 g de residuo. Metodo A2; Rt: 0,84 min. m/z: 550,1 (M+H)+ Masa exacta: 549,2. A este residuo (0,85 g, 1,3 mmol) en CH2CI2 (10 mL) se anadieron acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,51 g, 2,9 mmol), EDCI (0,59 g, 2,9 mmol) y HOBt (0,09 g, 0,67 mmol) y la mezcla se enfrio a 0°C. A continuacion, se anadio DIPeA (2,3 mL, 13,3 mmol) y la mezcla se agito durante 1,5 horas a 25°C. Se anadieron agua (20 mL) y diclorometano (20 mL) y la capa organica se separo y se seco sobre Na2SO4. Despues de la filtracion, el disolvente se separo en vado. Compuesto 5 (mezcla de diastereoisomeros 5a y 5b) se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (gradiente de eluyente: acetato de etilo: metanol: de 100:0 a 6:1), dando como resultado un solido de color amarillo claro. El solido obtenido se lavo con acetonitrilo y se purifico adicionalmente mediante cromatograffa de fluido supercntico (Columna: OJ 250 mm * 30 mm, 5 um; Fase movil: A: CO2 supercntico, B: isopropanol; dietilamina al 0,05%), A:B = 65:35 a 55 mL/min, Temp. de la Columna: 38°C, Presion de la Boquilla: 100 bares, Temp. de la Boquilla: 60°C, Temp. del Evaporador: 20°C, Temp: del Cortador 25°C, Longitud de onda: 220 nm). La fraccion obtenida de compuesto 5a y 5b se lavo con acetonitrilo y se purifico adicionalmente mediante cromatograffa de fluido supercntico (Columna: OJ 250 mm * 30 mm, 5 um; Fase movil: A: CO2 supercntico, B: isopropanol (dietilamina al 0,05%), A:B = 65:35 a 55 mL/min, Temp. de la Columna 38°C, Presion de la Boquilla: 100 bares, Temp. de la Boquilla: 60°C, Temp. del Evaporador: 20°C, Temp: del Cortador 25°C, Longitud de onda: 220 nm). Esto dio como resultado el compuesto 5a (148 mg) y 5b (200 mg).
5a: Metodo C; Rt: 3,66 min. m/z: 864,4 (M+H)+ Masa exacta: 863,4;
SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: iPrOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 8,18 min
5b: Metodo C; Rt: 3,72 min. m/z: 864,4 (M+H)+ Masa exacta: 863,4;
SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: iPrOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 8,77 min
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A una disolucion agitada del compuesto QO-8 (900 mg, 1,78 mmol), compuesto SC-7 (922 mg, 1,49 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (100 mg, 1,9 mmol) en THF seco (20 mL) se anadio Na2CO3 (10 mL, 2 N). La mezcla de reaccion se agito a reflujo durante 20 minutos, se enfrio bruscamente con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). La capa organica reunida se lavo con salmuera, se seco sobre Na2S04 y despues de la filtracion, el filtrado obtenido se concentro en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa lfquida de alta resolucion (Columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 20 mm * 5 um A: H2O + TFA al 0,1%. B: MeCN Caudal (mL/min): 40). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron mediante NaHCO3 saturado. El disolvente organico se
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concentro en vado. El precipitado se filtro, se lavo con H2O (10 mL) y se seco en alto vado, resultando el compuesto 6 (450 mg).
Metodo H; Rt: 3,68 min. m/z: 818,5 (M+H)+ Masa exacta: 817,4;
SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 8,24 min
1H RMN (600 MHz, DMSO-da) 6 ppm 0,88 (d, J = 6,5 Hz, 3 H), 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,92 (d, J = 6,6 Hz, 3 H ), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1,19 - 1,36 (m, 3 H), 1,45 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 1,54 (q, J = 12,0 Hz, 1 H ), 1,60 - 1,69 (m, 1 H), 1,70 - 1,80 (m, 2 H), 1,89 - 2,09 (m, 5 H), 2,10 - 2,21 (m, 2 H), 2.31 - 2.44 (m, 2 H ), 3,54 (s, 3 H), 3,56 (s, 3 H), 3,83 (t, J = 6,2 Hz, 2 H), 3,95 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,08 (t, J = 8.4 Hz, 1 H), 4,48 (dt, J = 11,0, 6,3 Hz, 1 H), 4,79 (t, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,09 (dd, J = 7,0, 3,4 Hz, 1 H), 5,88 (s, 1 H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,57 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,71 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,72 (s , 1 H), 7,84 (s ancho, 1 H), 7,86 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,93 -.8,00 (m, 3 H), 8,05 (s, 1 H), 8,08
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Una mezcla de compuesto QO-10 (0,12 g, 0,26 mmol), compuesto SC-11 (0,15 g, 0,26 mmol), Pd(PPh3)4 (0,030 g, 0,026 mmol) y Na2CO3 (0,22 g, 2,05 mmol) en una mezcla de tolueno, etanol y H2O (1:1:1, 4,5 mL) se agito durante 2 horas a 100°C bajo una atmosfera de N2. Los componentes volatiles se separaron en vado. Se anadieron diclorometano (15 mL) y agua (10 mL). La capa organica se separo y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente gradiente: primero: eter de petroleo: EtOAc: de 100:0 a 0:100, luego EtOAc: metanol: de 100:0 a 10:1). El solido obtenido se lavo con acetonitrilo y se co-evaporo con metanol. El solido obtenido se purifico adicionalmente mediante cromatograffa de fluidos supercffticos (Columnas: OD-3 150x4.6mm D.I., 3 um, Caudal: 2,5 mL/min, Fase movil: 40% de metanol (dietilamina al 0,05%) en CO2), resultando el compuesto 7 (0,1 g) en forma de un polvo blanco. Metodo H; Rt: 3,39 min. m/z: 834,5 (M+H)+ Masa exacta: 833,4 SFC: Columna: OD-H 150 mm x 4,6 mm; 3um. Caudal: 2,5 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 6,56 min
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Compuesto QO-15 (0,30 g, 0,63 mmol), compuesto SC-5 (0,35 g, 0,63 mmol), Pd(PPh3)4 (0,22 g, 0,19 mmol) y Na2CO3 (0,27 g, 2,5 mmol) en tolueno (3 mL), etanol (3 mL) y H2O (3 mL) se sometieron a reflujo bajo N2 durante 12 horas. Los componentes volatiles se separaron en vado. La mezcla se extrajo con CH2O2 (2x10 mL). Las capas organicas se lavaron con salmuera, se secaron y se evaporaron en vado, resultando un residuo (0,5 g). Este residuo (0,50 g) en CH2Cl2 (5 mL) se agito a 0°C. Se anadio HCl 4 N/dioxano (5 mL). La mezcla se agito durante 1 hora a 20°C y se separaron los componentes volatiles en vado, resultando un residuo (0,50 g). este residuo (0,5 g) en CH2Cl2 (5 mL) se anadieron acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,13 g, 0,76 mmol), EDCI (0,22 g,
1,14 mmol) y HOBt (0,043 g, 0,32 mmol) y la mezcla se agito a 0°C. A continuacion, se anadio DIPEA (0,4 g, 3,2 mmol). La mezcla se agito durante 2 horas a 20°C y subsiguientemente se lavo con H2O (2 veces), y salmuera, se seco sobre Na2SO4 y el disolvente se separo en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa l^quida de alta resolucion (C18, eluyente: CH3CN / H2O de 15/85 a 35/65, con CF3CO0H al 0,1% como tampon). Las 5 fracciones puras se recogieron y la mezcla se basifico con NaHCO3 a pH = 9. El disolvente organico se evaporo y la mezcla se separo mediante filtracion. El solido se seco y se evaporo en vado, resultando el compuesto 8 (140 mg). Metodo H; Rt: 3,52 min. m/z: 890,3 (M+H)+ Masa exacta: 889,4; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 3 um. Caudal: 2,5 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 2,9 min; SFC: Columna: OD-3 150 mm x 4,6 mm; 3 um. Caudal: 2,5 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%);
10 40% de B en A : Rt: 5,2 min
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Una disolucion de Na2CO3 (0,24 g, 2,3 mmol) en H2O (6 mL) se anadio a una mezcla de compuesto SC-9 (0,6 g, 1,16 mmol), compuesto QA-1 (0,5 g, 1,16 mmol), etanol (6 mL) y tolueno (12 mL). se anadio Pd(PPh3)4 (55 mg, 0,058 mmol) a la mezcla en una porcion bajo nitrogeno. La mezcla se agito durante 10 horas a 90°C. A continuacion, 15 la disolucion se enfrio a temperatura ambiente y se filtro. El filtrado se concentro en vado. El residuo obtenido se disolvio en CH2O2 (20 mL) y se lavo con agua (3 x 10 mL). La disolucion se seco sobre Na2SO4 y se concentro a presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (gradiente de eluyente: EtOAc: diclorometano = 1:3 a 2:1 y EtOAc: MeOH = 100:1 a 100:5). Se recogio la fraccion deseada, el disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se seco en vado, resultando el compuesto 9 (0,52 g). Metodo A2; Rt: 1,03 20 min. m/z: 737,3 (M+H)+ Masa exacta: 736,3
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(Eoc)jO. NEU, 20% Pd(OH)jHC. rmetano’l
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Una mezcla de compuesto 9 (0,52 g, 0,71 mmol), (Boc)2O (0,307 g, 1,41 mmol), NEt3 (0,212 g, 2,1 mmol) y Pd(OH)2 al 20%/C (0,5 g) en metanol (5 mL) se hidrogeno (1 atm) a 10°C durante 1,5 horas. La mezcla se filtro y los componentes volatiles se separaron en vado. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (10 mL) y se lavo con H2O (5 mL). La 5 capa organica se seco sobre Na2SO4 y se evaporo en vado. El residuo se lavo con terc,.butil-metil-eter (3 mL). El solido se filtro y se seco en alto vado, resultando el compuesto 10 (0,47 g). Metodo A2; Rt: 1,03 min. m/z: 703,3 (M+H)+ Masa exacta: 702,4
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Compuesto 10 (0,47 g, 0,67 mmol) se disolvio en CH2Cl2 (5 mL) y HCl/dioxano (4N) (0,5 mL, 2 mmol) se anadio gota 10 a gota a 0°C. La mezcla se agito a 10°C durante 1 hora. El disolvente se separo en vado y el residuo obtenido se solidifico con t-butil-metil-eter (2 mL). El solido se filtro y se seco en alto vado, resultando un polvo de color amarillo. Metodo A2; Rt: 0,79 min. m/z: 503,1 (M+H)+ Masa exacta: 502,3. Este polvo se anadio a una disolucion que se obtuvo mediante el tratamiento de acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,28 g, 1,61 mmol) en acetonitrilo (5 mL) con EDCI (0,31 g, 1,61 mmol) y HOBt (0,217 g, 1,61 mmol) a 20°C durante 1 hora. La suspension 15 se enfrio a 0°C y se anadio DIPEA (0,35 g, 2,7 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla se concentro y se diluyo con CH2CI2 (20 mL) y disolucion acuosa 1 N de HCl (5 mL). La capa organica se separo, se lavo con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, y se concentro en vado para obtener el compuesto bruto. La mezcla bruta se purifico mediante cromatograffa lfquida de alta resolucion preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fraccion deseada se recogio y el valor pH de la solucion se ajusto a
aproximadamente 8 mediante la adicion de NaHCO3 solido. El exceso de acetonitrilo se separo a presion reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL), las capas organicas se reunieron y secaron sobre Na2SO4. La disolucion obtenida se concentro y el residuo se seco adicionalmente en vado, resultando el compuesto 11 (0,1 g). Metodo B; Rt: 5,06 min. m/z: 817,3 (M+H)+ Masa exacta: 816,4, SFC: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. 5 Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 7,5 min; SFC: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 5,25 min
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10 compuesto QA-2 (0,73 g, 1,6 mmol, 1 eq), tolueno (10 mL) y etanol (10 mL). Se anadio Pd(PPh3)4 (0,18 g, 0,16 mmol, 0,1 eq). La mezcla se agito a 100°C durante 3 horas bajo una atmosfera de N2. Se anadieron CH2Cl2 (10 mL) y H2O (5 mL). La capa organica se separo, se seco sobre Na2SO4 y se evaporo, resultando un residuo bruto (3 g). Una parte de este material bruto (0,9 g) se purifico mediante cromatograffa lfquida de alta resolucion (columna: Grace Vydac 250 * 20mm * 5 um Fase movil A: agua, Fase movil B: acetonitrilo; Caudal: 30 mL/min; Gradiente: 35 - 15 50% de B (v/v) de 0 a 11 min). La fraccion pura se recogio y se evaporo en vado, resultando el compuesto 12 (0,1 g)
Metodo H; Rt: 3,56 min. m/z: 865,4 (M+H)+ Masa exacta: 864,4; SFC: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 4,80 min; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 9,0 min
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Na2CO3 (0,94 g, 8,9 mmol) en H2O (5 mL) se anadio a una mezcla de compuesto SC-5 (0,5 g, 0,89 mmol) y compuesto TD-2 (0,38 g, 0,89 mmol) en tolueno (5 mL) y etanol (5 mL). N 2 se burbujeo a traves de la disolucion y, a continuacion. se anadio Pd(PPh3)4 (0,1 g, 0,089 mmol). La mezcla se agito a 100°C durante 3 horas bajo una 25 atmosfera de N2. Se anadieron CH2O2 (20 mL) y H2O (10 mL) y, despues de la separacion, la capa organica se seco sobre Na2SO4 y el disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (eluyente: acetato de etilo: petroleo de 75% a 100%), resultando el compuesto 13 (0,5 g). Metodo A2; Rt: 1,05 min. m/z: 787,4 (M+H)+Masa exacta: 786,3;
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HCl/dioxano (2 mL) se anadio a la mezcla de compuesto 13 (0,5 g, 0,64 mmol, 1 eq) y CH2CI2 (5 mL) a 0°C. La mezcla se agito a 20°C durante 10 min. El disolvente se separo en vado. Metodo A2; Rt: 0,84 min. m/z: 587,1 (M+H)+ Masa exacta: 586,2. Al residuo obtenido en CH2CI2 (5 mL), se anadieron acido (S)-2-(metoxicarbonilamino) - 3-metilbutanoico (0,24 g), EDCI (0,27 g, 1,4 mmol) y HOBt (0,19 g, 1,4 mmol), la mezcla se enfrio a 0°C y se anadio DIPEA (1,1 mL, 6,4 mmol, 10 eq). La mezcla se agito a continuacion a 20°C durante 12 horas. La mezcla se diluyo con CH2CI2 (20 mL) y H2O (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (5 mL), salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante cromatografia Kquida de alta resolucion (columna: Grace Vydac 250 * 20 mm * 5 u; Fase movil A: agua (que contiene TFA al 0,075%, %V/V) Fase movil B: acetonitrilo (conteniendo TFA al 0,025%, %V/V; Caudal: 30 mL/min; Gradiente:.35- 50% de B (v/v) de 0 a 11 min) La fraccion relevante se recogio y se basifico con disolucion saturada de NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volatiles se separaron en vado. El residuo se extrajo con CH2CI2 (2 x 10 mL). La capa organica se lavo con salmuera (10 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se separo mediante cromatografia de fluidos supercriticos (Columna: AS 250 mm x 30 mm, 5 um; Fase movil:. A: CO2 supercritico, B: MeOH (dietilamina al 0,05%, A: B = 60: 40 a 50 mL/min; Temp. de la columna: 38°C; Presion de la Boquilla: 100 bares; Temp. de la Boquilla 60°C; Temp. del Evaporador: 20°C; Temp. del Cortador: 25°C; Longitud de onda:. 220 nm). La fraccion relevante se recogio y el disolvente se separo en vado El residuo se disolvio en CH2CI2 (5 mL) y se lavo con disolucion saturada de NaHCO3 (2 x 5 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se evaporo. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter (2 mL) y se filtro. El solido se seco bajo alto vado, resultando el compuesto 14 (0,153 g). Metodo C; Rt: 3,98 min. m/z: 901,3 (M+H)+ Masa exacta: 900,3; SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 7,44 min
SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: EtOH (diertilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A: Rt: 8,90 min
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A compuesto OA-3 (0,49 g, 1,16 mmol), se anadieron 2-(5-(9,9-difluoro-7-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)- 9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)pirrolidin-1 -carboxilato de (S)-terc-butilo (0,78 g, 1,4 mmol,), Pd(dppf)Cl2 (45 mg, 0.058 mmol), THF (10 mL) y Na2CO3 acuoso (2 mL, 2N). La mezcla se lavo abundantemente con gas nitrogeno (3 veces). La mezcla de reaccion se agito a 80 grados durante 15 minutos, se enfrio bruscamente con agua (10 mL) y 5 se extrajo con CH2Cl2 (2 x 5 mL). Las fases se separaron y la fase organica se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. Despues de la separacion de los componentes volatiles, el residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de silice (eluyente: CH2Cl2/metanol = 10/1), resultando el compuesto 15 (0,49 g). Metodo A; Rt: 0,99 min. m/z: 779,4 (M+H)+Masa exacta: 778,4;
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10 Compuesto 15 (0,2 g, 0,28 mmol) se disolvio en CH2O2 (5 mL) y se anadio lentamente TFA (5 mL). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos y se separaron los componentes volatiles, resultando un residuo (0,19 g). A una disolucion de parte del residuo obtenido (45 mg) en CH2Cl2 (5 mL) se anadieron acido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (26 mg, 0,15 mmol), EDCI (29 mg, 0,15 mmol), HOBt (8 mg, 0,058 mmol) y NEt3 (23 mg, 0,23 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavo con agua 15 (10 mL) y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (2 x 10 mL). La capa organica reunida se seco sobre Na2SO4, y
despues de la filtracion, el filtrado se concentro, resultando un residuo. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia liquida de alta resolucion (Columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 30 mm * 4 um. Metodo: de 30 a 50% de B en A en 12 minutos A: H2O + TfA al 0,1% B: MeCN. Caudal (mL/min): 25), a las fracciones que contenian producto, se anadio Na2CO3 hasta que el valor del pH era 9. El disolvente organico se separo en vacio y la capa 20 acuosa se extrajo con CH2O2 (2 x 20 mL). La capa organica se separo, se seco sobre Na2SO4 y despues de la filtracion, se separo el disolvente, resultando el compuesto 16 (11 mg). Metodo B; Rt: 4,58 min. m/z: 892,4 (M+H)+ Masa exacta: 893,3; SFC: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 6,17 min
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25 Compuesto QO-3 (0,2 g, 0,44 mmol), compuesto SC-9 (0,25 g, 0,49 mmol), Pd(PPh3)4 (0,10 g, 0,088 mmol) y Na2CO3 (0,21 g, 1,98 mmol) en THF (8 mL) y H2O (2,4 mL) se agitaron a 80°C bajo irradiacion de microondas durante 5 minutos. El disolvente se separo en vacio, el residuo obtenido se disolvio en CHCl3 y se filtro. El filtrado se concentro y se purifico mediante TLC preparativa. (Eluyente: acetato de etilo/metanol, 10:1), resultando el compuesto 17 (0,25 g).
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Compuesto 17 (0,24 g, 0,32 mmol) en CHCI3 (10 mL) y HCl concentrado (10 mL) se agito a 60°C en un tubo sellado durante 2 horas. La capa acuosa se separo y se concentro en vacio. El residuo (0,2 g) se co-evaporo con tolueno y THF y se anadio a una disolucion que se formo mediante la adicion de EDCI (0,25 g, 1,32 mmol) y HOBt (0,18 g, 1,32 mmol) a una disolucion de acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metil-butanoico (0,23 g, 1,32 mmol) en CH3CN (5 mL) y agitacion a 10°C durante 1 hora. Despues, la mezcla se enfrio a 0°C y se anadio DIPEA (1 mL, 5,6 mmol). La mezcla se agito a 10°C durante la noche. El disolvente se separo en vacio y el compuesto 18 obtenido (mezcla de diastereoisomeros 18a y 18b) se purifico mediante HPLC preparativa. (C18, eluyente: CH3CN, H2O, TFA, 40:60:0,05). Se obtuvieron dos fracciones. Las fracciones se neutralizaron con NaHCO3 saturado. El disolvente organico se separo en vacio. El precipitado resultante se filtro y se seco en alto vacio, resultando 18a (33 mg; 99% ee) de 18b (33 mg; 90% ee). Compuesto 18b se purifico mediante SFC. Columna: OD 250 mm * 30 mm, 5 um; Fase movil: A: CO2 supercritico B: EtOH; dietilamina al 0,05%; A: B = 60: 40 a 50 mL/min; Temp. de la columna: 38°C; Presion de la Boquilla: 100 bares; Temp. de la Boquilla 60°C; Temp. del Evaporador: 20°C; Temp. del Cortador: 25°C; Longitud de onda:. 220 nm). Las fracciones recogidas se reunieron y se concentraron en vacio. El residuo se lavo con NaHCO3 saturado y se seco en alto vacio. Resulto el compuesto 18b. (26 mg, 99% ee).
18a; Metodo B; Rt: 4,75 min. m/z: 833,4 (M+H)+ Masa exacta: 834,6; SFC: Columna: Od-3 150 mm x 4,6 mm; 3 um. Caudal: 2,5 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 6,08 min 18b; Metodo B; Rt: 4,87 min. m/z: 833,4 (M+H)+ Masa exacta: 834,5; sFc: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: C02 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A : Rt: 4,25 min
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Una mezcla de compuesto OA-3 (0,46 g, 1,09 mmol), SC-9 (0,67 g, 1,3 mmol), Pd(dppf)Cl2 (45 mg, 0,058 mmol), THF (10 mL) y Na2CO3 acuoso (2 mL, 2N) se lavo abundantemente con gas nitrogeno durante tres veces. La mezcla de reaccion se agito a 80 grados durante 15 minutos. La mezcla se enfrio bruscamente con agua (10 mL) y se extrajo con CH2CH (2 x 5 mL). Las fases se separaron y la fase organica se lavo con salmuera y se seco sobre Na2SO4. Despues de la separacion de los componentes volatiles, el residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de silice (eluyente: CH2Cl2/metanol = 10/1), resultando el compuesto 19 (0,42 g).
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Compuesto 19 (0,2 g, 0,28 mmol) se disolvio en CH2CI2 (5 mL) y se anadio lentamente TFA (5 mL). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla se concentro, resultando un residuo (0,19 g). A parte
de este residuo (110 mg) en CH2CI2 (5 mL) se anadieron acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (105 mg, 0,60 mmol), EDCI (114 mg, 0,60 mmol), HOBt (13,5 mg, 0,1 mmol) y NEt3 (60 mg, 0,6 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavo con agua (10 mL) y se extrajo con CH2O2 (2 x 10 mL). La capa organica reunida se seco y se concentro, resultando un residuo que se purifico mediante cromatograffa 5 lfquida de alta resolucion (MeCN/H2O (Columna: Diamonsil C 18 150 * 20 mm * 5 urn. Metodo: de 20 a 40% de B en A en 14 min. A: H2O + TFA al 0,1% B: MeCN Caudal (mL/min): 40)). A las fracciones que conteman producto se anadio Na2CO3 hasta que el valor del pH era 9, se separo el disolvente organico y la capa de agua se lavo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). La capa organica se separo y se concentro a sequedad, resultando el compuesto 20 (40 mg). Metodo C; Rt: 3,48 min. m/z: 845,5 (M+H)+ Masa exacta: 844,4; SFC: Columna: OD-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um.
10 Caudal: 2,35 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 8,48 min
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compuesto TD-1 (0,9 g, 1,9 mmol), etanol (10 mL) y tolueno (20 mL). Se anadio Pd(PPh3)4 (0,11 g, 0,095 mmol). La mezcla se agito a 90°C durante 10 horas en proteccion de N2. El disolvente organico se separo en vado. El residuo 15 se extrajo con CH2Ch(10 mL). La capa organica se lavo con salmuera (5 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado. El residuo se purifico mediante columna de resolucion instantanea (eluyente: CH2Cl2/metanol = 10:1). El disolvente se evaporo, resultando el compuesto 21 (1,7 g).
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15
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25
imagen96
Compuesto 21 (1,7 g, 1,1 mmol) se disolvio en CH3COOH (20 mL). Se anadio HBr al 40% en H2O (10 mL). La mezcla se agito a 50°C durante 3 horas. El disolvente se evaporo en vacio. El residuo se lavo con la mezcla de terc- butil-metil-eter y metanol (1:1). El solido se filtro y se seco en alto vacio, resultando un residuo (1,7 g). Parte de este residuo (0,7 g) se anadio a una disolucion preformada formada por la adicion de EDCI (0,46 g, 2,4 mmol) y HOBt (0,32 g, 2,4 mmol) a acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,42 g, 2,4 mmol) en acetonitrilo (14 mL) y se agito a 10°C durante 1 hora. La suspension se enfrio hasta 0°C y se anadio DIPEA (1 g, 8 mmol). La mezcla se agito a 10°C durante 12 horas. El solido se filtro. El filtrado se concentro y se diluyo con CH2Cl2 (20 mL) y HCl 1 N (5 mL). La capa organica se separo y se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (5 mL), salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vacio. El residuo se purifico mediante cromatografia liquida de alta resolucion; Columna: Grace Vydac 250 * 20mm * 5 um Fase movil A: agua; que contiene TFA al 0,075%, %V/V Fase movil B: acetonitrilo (que contiene TFA al 0,025%, %V/V Caudal: 30 mL/min; Gradiente: 35-50% de B (v/v) de 0 a 11 min). Las fracciones puras se recogieron y se basificaron con NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volatiles se separaron en vacio. El residuo se extrajo con CH2CI2 (2 x 15 mL). La capa organica se lavo con salmuera (10 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vacio. El residuo se separo mediante cromatografia de fluido supercritico (Columna: AS 250 mm * 30 mm, 5 um; Fase movil: A. CO2 supercritico, B: MeOH (dietilamina al 0,05%), A:B = 60:40 en 50 mL/min; Temp. de la columna: 38°C; Presion de la Boquilla: 100 bares; Temp. de la Boquilla 60°C; Temp. del Evaporador: 20°C; Temp. del Cortador: 25°C; Longitud de onda:. 220 nm). Las fracciones se recogieron y el disolvente se separo en vacio. El residuo se disolvio en CH2Ch (5 mL) y se lavo con disolucion saturada de NaHCO3 (5 mL) y salmuera (5 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se evaporo, resultando el compuesto 22 (98 mg); Metodo B; Rt: 4,94 min. m/z: 853,3 (M+H)+ Masa exacta: 852,4; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 2,5 mL/min, Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 4,53 min.
imagen97
A una disolucion agitada de SC-14 (800 mg, 1,18 mmol), QA-10 (713 mg, 1,42 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (100 mg) en THF seco (10 mL), se anadio Na2CO3 (5 mL, ac. 2 N). La mezcla de reaccion se agito a reflujo mediante
5
10
15
20
25
30
35
40
45
calentamiento en un bano de aceite precalentado a 90°C, durante 20 minutos. La mezcla se enfrio bruscamente a continuacion con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las capas organicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron en vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa Kquida de alta resolucion (Columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 20 mm * 5 um. Metodo: 34 a 64% de B en A: H2O + TFA al 0,1% B: MeCN. Caudal (mL/min): 25). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron mediante NaHCO3 saturado. La mezcla se concentro en vado. El producto obtenido se purifico adicionalmente mediante cromatograffa de fluidos supercriticos (columna: Chiralpak oD-3 50 * 4,6 mm D.I., 3 um Fase movil: A: metanol (dietilamina al 0,05%), B: CO2, A/B = 40/60, Caudal: 2,5 mL/min, longitud de onda: 220 nm). Las fracciones puras se recogieron y se separaron los componentes volatiles en vado. El residuo obtenido se disolvio en diclorometano (20 mL). La capa organica se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (10 mL) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se separo en vado, resultando el compuesto 23 (247 mg).
Metodo B; Rt: 5,84 min. m/z: 977,7 (M+H)+ Masa exacta: 976,4; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 ppm 12,29 - 12,54 (1 H, m), 12,03 (1 H, s ancho), 8,12 - 8,21 (1 H, m), 8,01 - 8,11 (2 H, m ), 7,91 - 8,01 (3 H, m), 7,79 - 7,91 (2 H, m), 7.62 - 7.76 (2 H, m), 7,54 (1 H, d, J = 7,3 Hz), 7,32 (1 H, d, J = 8,3 Hz), 5,01 - 5,15 (1 H, m), 4,67 - 4,81 (1 H, m), 4,37 - 4,52 (1 H, m), 3,81 - 4,13 (7 H, m), 3,70 - 3,80 (1 H, m), 3,54 (6 H, s ancho), 2,31 - 2,46 (3 H, m), 2,16 - 2,29 (1 H, m), 1,82 -2,16 (5 H, m), 1,56 - 1,82 (3 H, m), 1.37 -1.51 (1 H, m), 1,16 -1,36 (2 H, m), 0,71 -0,99 (12 H, m).
Ejemplos biologicos - actividad anti-VHC de compuestos de formula I
Ensayo del Replicon
Los compuestos de formula (I) se examinaron en cuanto a la actividad inhibidora en el replicon del VHC. Este ensayo celular se basa en una construccion de expresion bicistronica, segun se describe por Lohmann et al. (Science (1999) 285: 110-113; Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019) con modificaciones descritas por Krieger et al. Journal of Virology (2001) 75: 4614-4624), y Lohmann et al. (Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019) para el genotipo 1b y por Yi et al. (Journal of Virology (2004) 78: 7904-7915) para el genotipo 1a en una estrategia de rastreo multi-objetivo.
Transfeccion estable
El metodo era como sigue. El ensayo utilizo la lmea celular transfectada establemente Huh-7 luc/neo (a la que se alude de aqu en adelante como Huh-Luc). Esta lmea celular alberga un ARN que codifica una construccion de expresion bicistronica que comprende las regiones NS3-NS5B tipo salvaje del VHC tipo 1b, traducida a partir de un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (EMCV), precedida por una porcion de informador (luciferasa de luciernaga (FfL)), y una porcion de marcador seleccionable (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construccion esta flanqueada por NTRs (siglas inglesas de regiones no transducidas) 5' y 3' del VHC tipo 1b. El cultivo continuado de las celulas del replicon en presencia de G418 (neoR) depende de la replicacion del ARN del VHC. Las celulas del replicon transfectadas establemente que replican ARN del VHC autonomamente y a niveles altos, codificando, entre otros, luciferasa, se utilizaron para el rastreo de los compuestos antivirales.
Las celulas de replicon se sembraron en placas de 384 pocillos en presencia de los compuestos de ensayo y control que se anadieron en diversas concentraciones. Despues de una incubacion durante tres dfas, la replicacion del VHC se midio sometiendo a ensayo la actividad de luciferasa (utilizando sustratos estandar de ensayo de luciferasa y los reactivos y un dispositivo de representacion en imagenes de microplacas Perkin Elmer Viewlux™ ultraHTS). Celulas de replicon en los cultivos control tienen una elevada expresion de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto se monitorizo en las celulas Huh-Luc, lo que permite una curva de dosis- respuesta para cada uno de los compuestos de ensayo. Se calcularon despues los valores de CE50, que representan la cantidad de compuesto requerida para reducir el nivel de actividad de luciferasa detectado en un 50% o, mas espedficamente, para reducir la capacidad de replicarse del ARN del replicon del VHC geneticamente ligado.
Resultados
En los casos en los que un compuesto de formula (I) se sometio a ensayo mas de una vez en el ensayo de replicon, el promedio de todos los resultados del ensayo se da en esta Tabla 1.
ESTRUCTURA
Compuesto n°. HCV-REP-HUH7LUC_CEs0 (nM)
o if If "1 ~~°\ n NH \ J. H ° r° °=< \ (Sf I Jl N L J X // (S) ? O 1
3
3a 0,021
3b 1,13
0 HN^'0 0 ^ V fV'l \ F Y.—NH 0 ^ 0 HN1'" 0
5
5a 0,014
5b 0,228
O 0 H / y i.i. \,f o. cLy..cfy m:' HN '* N °J"° '
6 0,012
o j 1 iT /o7 -Nro (W^NH Nu ■ li k l o-Jor Q-O /
7 0,008
8 0,004
ESTRUCTURA
Compuesto n°. HCV-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
/ X X v f XXX _ oX xfo ^xky
cy H Y „ Vxx^rxnx^N” Y° N ':='' '''—'' '''—'' nX^n / Ml T > rY o CX HN \ °x
11 0,149
o J V X ^ ^NH HIX T1 F c /® (XvXW-; fn 'wN »«0 11 1WNy6i' (sf Y/ N HN * Xo ' /
12 0,007
/ °s0..., x°r ii r ]] f, c <W^VrC, °; X 'Y' Xn NH ' °-J o r 1
14 0,008
/ O J ° ° X NH N' VY H " Xf Y>__, H X > -y o XXy (S)f X'' v-n HN - ^ 0x, X u 0 /
16 0,011
ESTRUCTURA
Compuesto n°. HCV-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
o K PP o ]l ll '] Ko" 11.. - L. '1 Ya _ N-1 P o ; N
18
18a 0,030
18b 4,4
o : V'N''ll '''] °W° ™!?V P-M 0-'0 r /
20 0,023
o-" n ~ nh\ N' W W VW'O'' >nh Tj> nfs> o )(S) / NH \ o^P
22 0,012
0 F, F Y'^0“CrVi',C' H N—! 0 ./ \ 0^ 1 Zl H \(S> ... HN \ HP \ ^0 0 \ O 0
23 0,006
Transfeccion transitoria
En un ajuste transitorio, una lmea celular de hepatoma Huh-7 lunet fue transfectada transitoriamente con un ARN de replicacion autonoma que codifica una construccion de expresion bicistronica. Esta construccion comprende un gen 5 informador de luciferasa de luciernaga que precede a la region NS3-NS5B subgenomica de VHC (genotipo 1a H77 o 1b Coni). La traduccion de la region subgenomica del VHC esta mediada por un sitio de entrada de ribosoma interno del virus de la encefalomiocarditis. La construccion esta ademas flanqueada por regiones 5' y 3' no traducidas de VHC (genotipo 1a H77 o 1b Con 1, respectivamente), que permiten la replicacion del ARN.
Las celulas se sembraron en placas de 384 pocillos en presencia de compuestos de ensayo y de control, que se anadieron en diversas concentraciones. Despues de una incubacion de dos d^as, la replicacion del ARN del replicon subgenomico del VHC se midio mediante ensayo de la actividad de luciferasa (utilizando sustratos y reactivos estandares de ensayo de luciferasa y un dispositivo de representacion en imagenes de microplacas Perkin Elmer 5 ViewLuxTM ultraHTS). Celulas que contienen replicon subgenomico de HCV en los cultivos de control tienen una alta expresion de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. Se monitorizo la actividad inhibidora del compuesto, lo que permite una curva de dosis-respuesta para cada uno de los compuestos de ensayo. Despues se calcularon los valores de CE50, que representan la cantidad de compuesto requerida para disminuir el nivel de actividad de luciferasa detectada en un 50% o, mas espedficamente, para reducir la capacidad de replicacion del ARN 10 subgenomico del VHC geneticamente ligado.
Cribados inversos
Lmeas de celulas de cribado inverso incluyen una lmea de celulas de hepatoma Huh-7 contiene una construccion de promotor-Luc inmediata-temprano principal de citomegalovirus humano (Huh7-CMV-Luc) y una lmea de celulas T MT4 que contiene un informador Luc de repeticion terminal largo (MT4-LTR Luc).
Compuesto numero
CE501b (Transitoria) nM CE501a (Transitoria) nM CC50 MT4-LTR-luc (MM) CC50 Huh7-CMV-Iuc (MM)
3a
0,025 0,008 > 0,984 > 0,984
3b
1,36 0,941 > 0,984 > 0,984
5a
0,013 0,007 > 0,984 > 0,984
5b
0,63 0,210 > 0,984 > 0,984
6
0,013 0,005 > 0,984 > 0,984
7
0,021 0,042 > 0,984 > 0,984
8
0,005 0,003 0,77 > 0,984
11
0,025 1,47 > 0,984 > 0,984
12
0,005 0,047 > 0,984
14
0,017 0,005 > 0,984 > 0,984
16
0,033 0,040 > 0,984 > 0,984
18a
0,037 0,011 > 0,984 > 0,984
18b
6,7 65,6 > 0,984 > 0,984
20
< 0,019 0,46 > 0,984 > 0,984
22
0,012 0,054 > 0,984 > 0,984
23
0,005 0,005 > 0,984 > 0,984
15

Claims (10)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de Formula I
    imagen1
    5 o un estereoisomero del mismo, en donde: Y es CH, N o CR4;
    W es carbonilo, sulfonilo o CR5R6;
    imagen2
    imagen3
    independientemente se selecciona de un grupo que comprende
    10
    imagen4
    15
    R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde
    R1 se selecciona de alquilo C1-4, alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo, y fenilo opcionalmente
    sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo;
    R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquil C1-4-amino, alquil C1-4-carbonilamino, alquiloxi C1-4-
    carbonilamino;
    R3 es hidrogeno o alquilo C1-4;
    R4 es hidrogeno, alquilo C1-4 o fluoro;
    R5 y R6, cada uno independientemente, son alquilo C1-4; o CR5R6 juntos forman cicloalquilo C3-7, oxetano, tetrahidrofurano; o sales farmaceuticamente aceptables o un solvato del mismo.
  2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, que es de formula la
    imagen5
    la
  3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, que es de formula lb
    imagen6
    5 4. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es de formula Ic
    imagen7
  4. 5. El compuesto de formula I, la, lb o Ic de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde cada
    D
    uno de
    se selecciona independientemente entre un grupo que comprende
    imagen8
  5. 6. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde al menos un
    imagen9
  6. 7. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde R2 es alquil C1-4- carbonilamino o alquiloxi C1-4-carbonilamino, y R3 es hidrogeno.
    5 8. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde Ri se selecciona
    entre alquilo C3-4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado de halo y metilo.
  7. 9. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, que es de formula Id
    imagen10
    10 10. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las
    reivindicaciones 1 a 9, y un soporte farmaceuticamente aceptable.
  8. 11. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 10, para uso como un medicamento.
  9. 12. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o una composicion farmaceutica de 15 acuerdo con la reivindicacion 10, para uso en la prevencion o el tratamiento de una infeccion por VHC en un
    mamifero.
  10. 13. Un producto, que contiene (a) un compuesto segun se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, y (b) otro inhibidor del VHC, en forma de un preparado combinado para el uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.
    20
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