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ES2548520T3 - Proceso para la producción de carotenoides - Google Patents

Proceso para la producción de carotenoides Download PDF

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ES2548520T3 ES07740954.8T ES07740954T ES2548520T3 ES 2548520 T3 ES2548520 T3 ES 2548520T3 ES 07740954 T ES07740954 T ES 07740954T ES 2548520 T3 ES2548520 T3 ES 2548520T3
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Abstract

Un método para producir una composición que contiene carotenoides, que comprende las siguientes etapas 1) a 3): 1) llevar a cabo la extracción en un cultivo de un microorganismo, un concentrado del cultivo o una sustancia seca del mismo con al menos uno que se selecciona de entre el grupo que consiste en metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, acetona, metiletilcetona y tetrahidrofurano; 2) concentrar la solución de extracto que se obtiene para obtener un precipitado; y 3) lavar el precipitado con al menos uno que se selecciona de entre el grupo que consiste en metanol, metanol que contiene agua, etanol, etanol que contiene agua, n-propanol, n-propanol que contiene agua, isopropanol, isopropanol que contiene agua, acetona y metiletilcetona.

Description

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E07740954
29-09-2015
Etapa 3: Etapa de concentración de la solución de extracto, y depósito
2,3 kg de la solución de extracto que se obtuvo en la etapa 2 de este ejemplo se concentraron a presión reducida utilizando un evaporador para obtener una solución concentrada (aproximadamente 80 g) que contenía un 5 precipitado y también una solución retirada (aproximadamente 2 kg de acetona). La solución concentrada se agitó mientras se enfriaba a una temperatura ambiente de 5 ºC durante 1 hora.
Etapa 4: Etapa de filtración del precipitado, y secado
Aproximadamente 80 g de la solución concentrada enfriada que se obtuvo en la etapa 3 de este ejemplo se filtraron a presión reducida para obtener un aglomerado de precipitado que contenía carotenoides. Se añadieron 20 g de acetona en el aglomerado, y la sustancia resultante se filtró y lavó, y luego se secó a presión reducida a 35 ºC durante una noche para obtener 2,13 g de precipitado seco. Los contenidos de astaxantina y carotenoides en esta sustancia seca eran del 34 % y 71 %, respectivamente.
15 Etapa 5: Etapa de lavado con etanol, y secado
A 2,13 g de precipitado seco que se obtuvo en la etapa 4 de este ejemplo, se añadieron 80 g de etanol, y el precipitado resultante se agitó y lavó a temperatura ambiente durante 1 hora en el estado en el que el carotenoide que correspondía al 1,8 % estaba suspendido. La sustancia lavada resultante se muestreó por filtración a presión reducida y se secó a presión reducida a 35 ºC durante una noche para obtener 1,49 g de sustancia seca lavada con etanol. Los contenidos de astaxantina y carotenoides en esta sustancia seca lavada con etanol eran del 47 % y 98 %, respectivamente.
25 Etapa 6: Etapa de recuperación de los disolventes por destilación a presión reducida
Aproximadamente 100 g (aproximadamente 120 ml) del filtrado generado en la etapa 4 se destiló a presión reducida para recuperar 80 g de acetona el lado de solución retirada. Aproximadamente 80 g (aproximadamente 100 ml) del filtrado generado en la etapa 5 se destiló a presión reducida para recuperar 76 g de etanol en el lado de solución retirada.
[Ejemplo 6] Producción de carotenoides altamente puros que contienen astaxantina con un alto contenido utilizando disolvente recuperado --3
35 A 25 g de células bacterianas secas que se obtuvieron en la etapa 1 del Ejemplo 5, se añadieron 1,1 kg de solución retirada (acetona) que se obtuvo en la etapa 3 del Ejemplo 5, y la sustancia resultante se trató por extracción de carotenoides y filtración de las células bacterianas conforme a la etapa 2 del Ejemplo 5 para obtener 1,2 kg de solución de extracto. La solución de extracto se concentró a presión reducida conforme a la etapa 3 del Ejemplo 5 para obtener aproximadamente 40 g de solución concentrada enfriada. La solución concentrada enfriada se trató conforme a la etapa 4 del Ejemplo 5 para obtener un precipitado por filtración. Luego, se añadieron 10 g de acetona recuperada en la etapa 6 del Ejemplo 5, y la sustancia resultante se lavó y se secó conforme a la etapa 5 del Ejemplo 5 para obtener 0,72 g de sustancia seca lavada con etanol. Mientras que los contenidos de astaxantina y carotenoides en la sustancia secada a presión reducida pero antes de lavarse con etanol eran respectivamente del 33 % y 70 %, los contenidos de astaxantina y carotenoides en la sustancia seca lavada con etanol eran
45 respectivamente del 46 % y el 97 %.
A partir de lo anterior, se confirmó que la reutilización de disolventes recuperados no presentaba ningún problema.
[Ejemplo 7] Producción de carotenoides altamente puros que contienen astaxantina con un alto contenido --4
Las etapas de cultivo bacteriano, extracción y concentración y depósito se llevaron a cabo como las etapas 1 a 3 del Ejemplo 5, y aproximadamente 80 g de la solución concentrada enfriada que se obtiene en la etapa 3 se filtraron a presión reducida conforme a la etapa 4 del Ejemplo 5 para obtener un aglomerado precipitado que contenía carotenoides. Se añadieron 20 g de acetona en el aglomerado, y la sustancia resultante se filtró y lavó. Luego, una
55 parte del aglomerado se muestreó con el fin de comprobar el contenido de carotenoides en el precipitado. La etapa de secado se omitió. Luego se añadieron 80 g de etanol en el aglomerado, y la sustancia resultante se volvió a filtrar y lavar. El aglomerado que se obtuvo por filtración y lavado se secó a presión reducida a 35 ºC durante una noche para obtener 1,50 g de sustancia seca lavada con etanol. Mientras que los contenidos de astaxantina y carotenoides en la sustancia secada a presión reducida pero antes de lavarse con etanol eran respectivamente de 33 % y 70 %, los contenidos de astaxantina y carotenoides en la sustancia seca lavada con etanol eran respectivamente del 46 % y 97 %.
De los aproximadamente 100 g (aproximadamente 120 ml) del filtrado que se obtuvieron por filtración del precipitado que se llevó a cabo conforme la etapa 4 del Ejemplo 5, se recuperaron 85 g de acetona. De los aproximadamente 80 65 g (aproximadamente 100 ml) del filtrado que se obtuvo en la etapa de lavado con etanol que se llevó a cabo conforme a la etapa 5 del Ejemplo 5, se recuperaron 75 g de etanol contaminado con una cantidad traza de acetona.
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29-09-2015
[Ejemplo 8] Producción de carotenoides altamente puros que contienen astaxantina con un alto contenido utilizando disolventes recuperados --4
A 25 g de las células bacterianas secas que se utilizaron en el Ejemplo 7, se añadieron 1,1 kg de la solución retirada
5 (acetona) que se obtuvo en el Ejemplo 7, y la sustancia resultante se trató por extracción de carotenoides y filtración de las células bacterianas conforme con la etapa 2 del Ejemplo 5 para obtener 1,1 kg de solución de extracto. La solución de extracto se concentró a presión reducida conforme a la etapa 3 del Ejemplo 5 para obtener aproximadamente 40 g de solución concentrada enfriada. La solución concentrada enfriada se trató conforme a la etapa 4 del Ejemplo 5 para obtener un precipitado por filtración. Luego, se añadieron 10 g de la acetona que se
10 obtuvo en el Ejemplo 7 en el aglomerado precipitado, y la sustancia resultante se filtró y lavó. La etapa de secado se omitió como en el Ejemplo 7. Se añadieron 40 g de etanol recuperado en el Ejemplo 7 a la misma, y la sustancia resultante se volvió a filtrar y lavar. El aglomerado obtenido por la filtración y lavado se secó a presión reducida a 35 ºC durante una noche para obtener 0,73 g de sustancia seca lavada con etanol. Mientras que los contenidos de astaxantina y carotenoide en la sustancia secada a presión reducida pero antes de lavarse con etanol eran
15 respectivamente de 34 % y 71 %, los contenidos de astaxantina y carotenoides en la sustancia seca lavada con etanol eran respectivamente del 46 % y 97 %.
En el Ejemplo 8, se confirmó que incluso cuando se utiliza el etanol contaminado con acetona recuperado por destilación a presión reducida, no se reconoce una reducción en la capacidad del lavado. Sin embargo,
20 considerando que el etanol se recupera y se reutiliza una pluralidad de veces, se considera preferible proporcionar algunos medios para filtrar el precipitado bajo tal condición para que la acetona permanezca en el precipitado a un nivel mínimo posible, antes de la etapa de lavado con etanol.
[Ejemplo 9] Producción de carotenoides altamente puros que contienen astaxantina con un alto contenido --5
25 El procedimiento se llevó de la misma manera que en el Ejemplo 5 excepto que en el lavado se llevó a cabo con acetona en vez de con etanol. Los contenidos de astaxantina y carotenoides en la sustancia seca que se obtenían eran respectivamente del 45 % y el 91 %.
30 [Ejemplo de referencia 1] Medición de la concentración de astaxantina disuelta a temperatura ambiente
La concentración de astaxantina (producida por Sigma) que se disuelve a temperatura ambiente se midió y se muestra en la Tabla 1.
35 Tabla 1
Tipo
Disolvente Concentración % (p/p)
Hidrocarburos
Hexano 0,003
Ciclohexano
0,001
Tolueno
0,03
Benceno
0,05
Alcoholes
Metanol 0,003
Etanol
0,002
Isopropanol
0,002
Cetonas
Acetona 0,02
Metiletilcetona
0,03
Metilisobutilcetona
0,02
Ciclohexanona
0,2
Éteres
1,4-dioxano 0,3
Tetrahidrofurano
0,7
Halógenos
Diclorometano 2,3
Cloroformo
0,7
Como está claro en la Tabla 1, se descubrió que la concentración disuelta en disolventes distintos de disolventes halógenos que tiene carcinogenicidad o mutagenicidad era del 1 % o menos. A partir de lo presente, se reveló que siempre que se utilice un disolvente orgánico general que tenga un nivel relativamente bajo de peligrosidad en una
40 distribución líquido-líquido de la técnica convencional, es muy difícil realizar una purificación de alto nivel utilizando una solución que tenga una concentración de carotenoides que exceda el 1 %. Esto es un grave problema para la producción industrial.
15
imagen13

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