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ES2436620T3 - Método para reducir la inflamación gastro-intestinal usando la bacteria Bifidobacterium animalis o un producto lácteo fermentado que comprende dicha bacteria - Google Patents

Método para reducir la inflamación gastro-intestinal usando la bacteria Bifidobacterium animalis o un producto lácteo fermentado que comprende dicha bacteria Download PDF

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ES2436620T3
ES2436620T3 ES09805954.6T ES09805954T ES2436620T3 ES 2436620 T3 ES2436620 T3 ES 2436620T3 ES 09805954 T ES09805954 T ES 09805954T ES 2436620 T3 ES2436620 T3 ES 2436620T3
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bifidobacterium animalis
bacteria
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Isabelle Chambaud
Artem Khlebnikov
Laurie H. Glimcher
Wendy S. Garrett
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Gervais Danone SA
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Gervais Danone SA
Harvard University
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Abstract

La cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010, depositada bajo el número CNCM I-2494 para suuso en la reducción de la inflamación gastrointestinal

Description

Método para reducir la inflamación gastro-intestinal usando la bacteria Bifidobacterium animalis o un producto lácteo fermentado que comprende dicha bacteria
Introducción
5 La presente invención se refiere a un método para la prevención, tratamiento y reducción de la inflamación gastrointestinal en un sujeto mediante la administración de una cepa de Bifidobacterium específica, concretamente un producto lácteo fermentado que comprende la cepa de Bifidobacterium específica mencionada, para la prevención, tratamiento y reducción de la inflamación gastrointestinal, en particular para la prevención y tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), colitis ulcerosa (CU) y/o enfermedad de Crohn (EC) .
10 Antecedentes
El lumen gastrointestinal se encuentra masivamente colonizado por bacterias y para la mayoría de los metazoos esta relación es mutuamente beneficiosa. La barrera de células epiteliales es esencial para la simbiosis de los huéspedes procariotas y eucariotas, ya que crea una frontera necesaria para la coexistencia mediante la prevención de la inflamación de la mucosa en respuesta a estímulos luminales bacterianos y otros. No obstante,
15 este balance está alterado en algunos individuos, lo que da lugar a una inflamación gastrointestinal persistente (EII), que se manifiesta como dos enfermedades principales, la enfermedad de Crohn (EC) y la colitis ulcerosa (CU), y podría además contribuir al Síndrome del colon irritable (SCI).
Garret et al. (Colitis ulcerosa comunicable inducida por deficiencia de T-bet en el sistema inmune innato. Cell 131, 34-45 (2007)) ha desarrollado un robusto modelo de ratón de colitis ulcerosa cuyas características 20 fisiopatológicas y respuesta al tratamiento con anti-TNF se asemeja a la enfermedad humana. Se encontró que la deficiencia de un gen regulador particular en el sistema inmune innato (resultante a partir de una doble eliminación de los genes T-bet y RAG2; llamado TRUC por “T-betRAG2 colitis ulcerosa”) dio lugar a una colitis ulcerosa agresiva, espontánea y comunicable y a una aumentada susceptibilidad a la colitis en huéspedes inmunológicamente intactos. Se mapeó la patogénesis de la enfermedad como una producción excesiva de la
25 citoquina proinflamatoria TNF- en las células dendríticas del colon. El sistema inmune de la mucosa manifestó una respuesta hiperactiva mediante la sobreproducción de TNF-
en las células dendríticas del colon, una citoquina que es citotóxica para las células epiteliales gastrointestinales. La subsiguiente ruptura de la barrera epitelial del colon conduce a un cambio de la población bacteriana comensal hacia una flora colitogénica. Esta flora colitogénica podría entonces transmitirse tanto vertical como horizontalmente a huéspedes genéticamente intactos.
30 US 2009/0238796 da a conocer el tratamiento de la colitis ulcerosa, la enfermedad de Crohn y los desórdenes intestinales inflamatorios no infecciosos mediante preparaciones comerciales que contienen bifidobacterias y ácido 5-aminosalicílico. US 2009/0110633 da a conocer el tratamiento de la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn con preparaciones comerciales que contienen Bifidobacterium lactis, Lactobacillus acidofilus y fibra adicional.
35 Descripción detallada de la invención
Sorprendentemente, usando el modelo robusto de ratón que se describe arriba, se encontró que la inflamación gastrointestinal en un paciente se podría disminuir mediante la administración de un producto lácteo fermentado que comprende la cepa probiótica Bifidobacterium animalis subsp lactis DN 173 010, más concretamente la preparación probiótica fermentada disponible comercialmente (ex Danone S.A.) llamada Activia ®,
40 que comprende dicha Bifidobacterium animalis subsp lactis DN 173 010.
La invención se refiere a la reducción de la inflamación gastrointestinal en un sujeto que lo necesite mediante la administración a dicho sujeto de una cantidad efectiva de Bifidobacterium animalis subsp lactis cepa DN-173 010. La cepa de Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010 se ha depositado bajo el número 1-2494 en la CNCM el 20 de Junio del 2000. Esta cepa se conoce con el código DN-173 010 y está protegida, por su uso
45 como un modulador de glicosilación de la superficie de la célula gastrointestinal, por la patente europea EP 1 297
176.
Bifidobacterium animalis es una bacteria anaerobia Gram-positiva en forma de vara, que se puede encontrar en el intestino grueso de la mayoría de los mamíferos, incluido el hombre. Bifidobacterium animalis y se describieron anteriormente como dos especies distintas. En la actualidad, ambas se consideran Bifidobacterium
50 animalis con las subespecies animalis y lactis, respectivamente. Ambos nombres antiguos, Bifidobacterium animalis y Bifidobacterium lactis, se usan todavía en las etiquetas de productos, ya que estas especies se usan frecuentemente como un probiótico. En el contexto de esta invención, los nombres de Bifidobacterium lactis y Bifidobacterium animalis subsp lactis pueden utilizarse indistintamente.
La invención también se refiere a la reducción de la inflamación gastrointestinal en un sujeto que lo necesite 55 mediante la administración a dicho sujeto de una cantidad efectiva de un producto lácteo fermentado que comprende dicha cepa específica Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010.
Según una realización específica, dicho producto lácteo fermentado comprende además dos iniciadores clásicos de yogur, la bacteria del ácido láctico Streptococcus thermophilus y el Lactobacillus bulgaricus. Aunque el término Activia ® es una marca propietaria de Danone S.A., el término se utilizará en esta solicitud para indicar el producto lácteo fermentado que comprende la cepa probiótica Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010
5 junto con la cepa de S. thermophilus y la cepa L. bulgaricus.
Según una de las realizaciones, la cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494, o el producto fermentado según la invención es para ser administrado durante al menos 14 días, más preferiblemente durante al menos 28 días.
Según una de las realizaciones, la cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo
10 el número CNCM 1-2494, o el producto fermentado según la invención es para ser administrado en una cantidad de al menos 103 ufc por ingesta, preferiblemente entre 103 y 1012 ufc por ingesta, más preferiblemente entre 106 y 1011 por ingesta, muy preferiblemente alrededor de 1010 ufc por ingesta.
Según una de las realizaciones, la cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494, o el producto fermentado según la invención es para ser administrado en una cantidad de
15 al menos 103 ufc por ingesta, preferiblemente entre 103 y 1011 ufc por ingesta, más preferiblemente entre 106 y 1012 por ingesta, muy preferiblemente alrededor de 1010 ufc por ingesta, dos veces al día durante al menos 14 días, preferiblemente durante al menos 21 días, más preferiblemente durante al menos 28 días.
Según una de las realizaciones, la cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494 es para ser administrada como una composición farmacéutica, combinada además con un 20 soporte farmacéutico aceptable, que puede comprender excipientes.
Según una de las realizaciones, la composición farmacéutica también comprende al menos otro agente activo contra la EII.
El término “composición farmacéutica” se pretende que signifique “fármaco” o “OTC (producto de venta sin receta)”. Según otra realización, el producto lácteo fermentado que comprende la citada bacteria Bifidobacterium 25 animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494 es para ser administrada como un
yogur.
La invención se refiere a un método para la prevención, tratamiento y reducción de la inflamación gastrointestinal en un sujeto mediante la administración de la citada cepa de Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494, concretamente un producto lácteo fermentado que
30 comprende la citada cepa de Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 12494 para la prevención, tratamiento y reducción de la inflamación gastrointestinal, en particular para la prevención y tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), colitis ulcerosa (CU) y/o enfermedad de Crohn (EC).
Según una de las realizaciones, la reducción de la inflamación gastrointestinal se define como una disminución de la citoquina proinflamatoria TNF-en el colon. Por lo tanto, la invención se refiere a un método para
35 la reducción de la citoquina proinflamatoria TNF-en el colon, que comprende la etapa de administrar al citado sujeto una cantidad efectiva de cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494, o de una cantidad efectiva de producto lácteo fermentado que comprende la cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN 173 010, depositada bajo el número CNCM 1-2494, en particular el producto Activia ®.
El término “administración” se pretende que signifique “administración oral”, es decir que el sujeto ingerirá
40 por vía oral una bacteria según la presente invención, o una composición que comprende la bacteria según la presente invención, o se pretende que signifique “administración directa”, es decir, que se administrará directamente in situ una bacteria según la presente invención o una composición que comprende la bacteria según la presente invención, concretamente por colonoscopia, o por vía rectal con supositorios.
La administración oral de la composición que contiene la bacteria según la presente invención puede ser en 45 forma de cápsulas de gelatina, cápsulas, pastillas, en polvo, granulados o soluciones orales o suspensiones.
En una realización preferida de la invención, dicha composición es una composición alimenticia la cual se puede usar en la producción de nuevos alimentos o ingredientes alimenticios como se define en el reglamento CE Nº. 258/97, y particularmente en la fabricación de alimentos funcionales. Un alimento puede ser considerado funcional si se demuestra satisfactoriamente que ejerce un efecto beneficioso sobre una o más funciones diana en el
50 organismo, más allá de sus efectos nutricionales usuales, mejorando el estado de salud y de bienestar y/o reduciendo el riesgo de enfermedad.
En una realización preferida de la invención, dicha bacteria es para ser administrada en forma de producto lácteo. En particular, el producto lácteo es un producto lácteo fermentado y más concretamente el producto lácteo fermentado es un yogur.
55 Dicha composición puede constituir, en concreto, un envasado probiótico, por ejemplo, en forma de cápsula o de cápsula de gelatina.
El término “probióticos” se pretende que signifique suplementos dietéticos que contienen potencialmente bacterias o levaduras beneficiosas. De acuerdo con la definición adoptada en la actualidad por la FAO/WHO, los probióticos son: “Microorganismos vivos los cuales, cuando se administran en cantidades adecuadas, confieren un
5 beneficio para la salud en el huésped”. Las bacterias del ácido láctico son el tipo más común de microbios utilizado. Las bacterias del ácido láctico se han usado en la industria alimentaria durante muchos años, porque son capaces de convertir los azúcares (incluyendo la lactosa) y otros carbohidratos en ácido láctico. Esto no sólo proporciona el sabor ácido característico de los alimentos lácteos fermentados como el yogur, sino que también, mediante la reducción del pH, puede crear menores oportunidades de crecer para los organismos de descomposición, creando
10 por lo tanto enormes beneficios para la salud en la prevención de infecciones gastrointestinales. Las cepas del género de Lactobacillus y Bifidobacterium son las bacterias probióticas más ampliamente utilizadas.
Los cultivos de bacterias probióticas tienen por objeto ayudar a la flora intestinal de origen natural del cuerpo a reestablecerse. A veces son recomendadas por los médicos, y, más frecuentemente por nutricionistas, después de un proceso con antibióticos, o como una parte del tratamiento de la candidiasis intestinal relacionada. Se
15 reivindica que los probióticos fortalecen el sistema inmunológico para combatir las alergias y otras enfermedades inmunológicas.
De acuerdo con una realización, el sujeto es un mamífero, preferiblemente un niño humano, un humano adulto o un anciano humano, más preferiblemente un humano adulto.
Preferiblemente, el método según la invención es para tratar sujetos diagnosticados según el criterio ROME 20 III. Más preferiblemente, el método según la invención es para reducir la inflamación gastrointestinal de pacientes diagnosticados que sufren SCI predominantemente con diarrea (SCI-D), de acuerdo con el criterio ROME III.
El ROME es un proceso desarrollado para clasificar los desórdenes gastrointestinales funcionales basado en síntomas clínicos. El término “criterio ROME III* “ se pretende que signifique criterio para el síndrome del colon irritable como sigue: Dolor o malestar abdominal recurrente** al menos 3 días al mes en los últimos 3 meses
25 asociado con 2 o más de los siguientes:
1.
Mejoría con la deposición
2.
Aparición asociada a un cambio en la frecuencia de las deposiciones
3.
Aparición asociada a un cambio en la forma (apariencia) de las deposiciones.
* Cumple los criterios para los tres últimos meses con aparición de síntomas al menos 6 meses antes del 30 diagnóstico.
** ”Malestar” quiere decir una sensación incómoda no descrita como dolor.
Otros síntomas que no son esenciales pero apoyan el diagnóstico de SCI:
! Frecuencia anormal de las deposiciones (mayor que tres movimientos intestinales/día o menos que 3 movimientos intestinales/semana)
35 ! Forma anormal de la deposición (deposición grumosa/dura o blanda/acuosa)
! Paso anormal de las heces (con esfuerzo, urgencia, o sensación de evacuación incompleta);
! Paso de moco;
! Hinchazón o sensación de distensión abdominal.
Algunas o todos los síntomas de SCI pueden ocurrir al mismo tiempo-algunos síntomas pueden ser más acusados 40 que otros.
Todos los criterios que se requieren para ser diagnosticada como SCI-D están descritos por el criterio ROME III (Longstreth et al., 2006).
La invención ahora se aclarará adicionalmente mediante varios ejemplos sin ser limitada por ello.
Se entiende que las reivindicaciones del método pueden formularse alternativamente como una
45 reivindicación de un segundo uso médico (Composición para usar), en particular en aquellas jurisdicciones donde las reivindicaciones del método no se permiten para la concesión de una patente; por lo tanto, dichas reivindicaciones implícitamente se dan a conocer aquí.
Descripción de las figuras Figura 1 Efecto de 4 semanas de consumo de los productos Activia y placebo sobre el grado de colitis en ratones TRUC y comparación con un grupo control (RAG2-/-) Figura 2 Efecto de 4 semanas de consumo de Activia, producto placebo y agua sobre el grado de colitis en 5 ratones TRUC
Figura 3 Efecto de 4 semanas de administración de cultivos vivos de B. Lactis a diferentes edades (4, 8 y 12 semanas) y comparado con la administración de medio de cultivo solo (MRS) Figura 4 Efecto de 4 semanas de consumo de los productos Activia y placebo en la citoquina
proinflamatoria TNF-en el colon. 10 Ejemplos Ejemplo 1: El consumo de Activia ® mejora la colitis de TRUC (Figura 1)
Productos
El producto de ensayo era un producto lácteo fermentado (Activia ®, Danone Research, Palaiseau), que comprendía la cepa probiótica Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173 010 (1,25x1010 unidades formadoras de colonias 15 (ufc) por tarro) junto con las dos cepas iniciadoras clásicas de yogur, Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus (1,2x10 ufc/tarro). El producto de ensayo no tenía sabor.
El control es un producto lácteo no-fermentado a base de leche sin probióticos y con bajo contenido de lactosa <4 g/tarro como en el producto de ensayo (leche acidificada).
Intervención del producto
20 Los ratones TRUC (n=20) se alimentaron a las cuatro semanas de edad con el producto de ensayo (n=10) o con el producto control (leche acidificada no-fermentada) (n=10) diariamente durante un periodo de 4 semanas.
Análisis microbiano
Se recogieron las heces de los ratones TRUC antes y después del suplemento (4 y 8 semanas de edad, respectivamente) así como de 10 ratones control (RAG2-/-). Se extrajo DNA y RNA fecal y se llevó a cabo qPCR 25 para cuantificar los diferentes grupos taxonómicos bacterianos.
Grado histológico de colitis
Se evaluó la inflamación colónica mediante análisis histológico al final del suplemento (8 semanas de edad) por un patólogo ciego al genotipo y a la intervención del tratamiento.
Resultados
30 Se pudo comprobar que Activia ® mejora la colitis de TRUC.
Ejemplo 2: Los productos no bacterianos de Activia ® mejoran la colitis de TRUC (Figura 2)
Experimental: véase más arriba-Medida de resultado: Grado histológico de colitis.
Ejemplo 2: Bifidobacterium animalis subsp lactis 173 010B mejora la colitis de TRUC (Figura 3)
Experimental
35 Experimental: Se hizo crecer durante toda la noche la Bifidobacterium animalis lactis 173 010 en medio MRS y a una población bacteriana de 4-5x108 ufc se recogieron de este cultivo y se administraron después a ratones BALB/c TRUC con edades de 4 (n=10), 8 (n=15), o 12 (n=15) semanas durante 4 semanas. Como control, se administró el mismo volumen de medio MRS solo de la misma manera que el cultivo vivo.
Grado histológico de colitis
40 Se ensayó la inflamación colónica mediante análisis histológico al final del suplemento por un patólogo ciego al genotipo y a la intervención del tratamiento.
Resultados
La cepa probiótica de Activia ® B. animalis lactis DN-173010 tiene un efecto sobre la severidad de la colitis TRUC aunque no en la misma medida que Activia ®. El efecto de la cepa 173 010B es visible a lo largo del curso de la 45 enfermedad TRUC, ya sea en puntos tempranos o tardíos. Estos resultados sugieren que el efecto de Activia ® en la
colitis TRUC no puede ser reducido al efecto de la cepa 173 010B sola. Otros/as componentes /características de este producto lácteo también tienen un efecto sobre la colitis TRUC.
Ejemplo 4: El consumo de Activia ® reduce la inflamación en los ratones TRUC; Activia ® reduce la producción excesiva de la citoquina proinflamatoria TNF- en el colon (Figura 4).
5 Experimental: véase más arriba-Medida de resultado: Nivel de TNF-colónico (pg/ml)
Conclusiones
La microbiota intestinal es esencial para la generación de la colitis ulcerosa (CU) la cual ocurre espontáneamente en ratones deficientes en T-bet RAG2 (TRUC) (Garret et al.). En este modelo de inflamación intestinal, la modulación microbiana en respuesta al tratamiento antibiótico conduce a una mejora del grado de la
10 CU. Esto plantea la posibilidad de que otros medios de manipulación de la microbiota intestinal, en concreto intervenciones alimentarias, también pueden tener un impacto sobre la inflamación en este modelo. El objetivo de este estudio es el de determinar la estructura microbiana de la microbiota intestinal de los ratones TRUC y probar el efecto de alimentos que contienen bacterias vivas sobre la inflamación gastrointestinal crónica.
Se ensayaron los efectos de la intervención nutricional mediante i) histología del colon, e ii) análisis 15 cuantitativo de la microbiota intestinal.
El mapeo de la microbiota intestinal mediante análisis de qPCR a tiempo real de muestras de materia fecal de ratones TRUC y RAG2-/- (control) reveló diferencias significativas en las poblaciones bacterianas, incluyendo una reducción drástica de la bifidobacteria en TRUC. Para probar si la leche fermentada que contiene bifidobacteria podría mejorar la colitis en este modelo, los ratones TRUC consumieron o bien leche fermentada que contenía
20 Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010B o bien un producto control (leche acidificada no-fermentada) durante un periodo de 4 semanas. Curiosamente, el consumo de este producto mostró un descenso significativo de la inflamación intestinal como se demostró mediante histología y de hecho coincidió con las alteraciones de la microbiota intestinal. Estos resultados muestran que el consumo de leche fermentada conteniendo Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010 es capaz de disminuir la CU, posiblemente por efecto inmune directo o por crear
25 unas condiciones desfavorables para supuestas bacterias patógenas que podrían estar implicadas en la progresión de la enfermedad en este modelo animal.

Claims (8)

  1. REIVINDICACIONES
    1. La cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010, depositada bajo el número CNCM I-2494 para su uso en la reducción de la inflamación gastrointestinal.
  2. 2. El producto lácteo fermentado que comprende la cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010, 5 depositada bajo el número CNCM I-2494 para su uso en la reducción de la inflamación gastrointestinal.
  3. 3.
    El producto lácteo fermentado para su uso según la reivindicación 2, en el que dicho producto comprende además la bacteria del ácido láctico Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus.
  4. 4.
    La cepa o el producto lácteo fermentado para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el
    que la bacteria Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010, depositada bajo el número CNCM I-2494 10 es para ser administrada durante al menos 14 días.
  5. 5.
    La cepa o el producto lácteo fermentado para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que alrededor de 103 y 1012 ufc de dicha cepa es para ser administrada a un sujeto por ingesta.
  6. 6.
    La cepa o el producto lácteo fermentado para su uso según la reivindicación 5, en el que alrededor de 103 y 1012 ufc de dicha cepa es para ser administrada a un sujeto dos veces al día durante al menos 28 días.
    15 7. La cepa o el producto lácteo fermentado para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha cepa es para ser administrada en forma de composición farmacéutica.
  7. 8.
    La cepa o el producto lácteo fermentado para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, en el que el producto lácteo fermentado es un yogur.
  8. 9.
    La cepa Bifidobacterium animalis subsp lactis DN-173010, depositada bajo el número CNCM I-2494, para
    20 su uso en la prevención y el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), la colitis ulcerosa (CU) y/o la enfermedad de Crohn (EC).
    Figura 1 Figura 2 Figura 3 Figura 4
ES09805954.6T 2009-11-02 2009-11-02 Método para reducir la inflamación gastro-intestinal usando la bacteria Bifidobacterium animalis o un producto lácteo fermentado que comprende dicha bacteria Active ES2436620T3 (es)

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