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ES2489815A1 - Nuevos p-terfenilos hexakis-sustituidos con grupos bilaterales para el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y otras enfermedades - Google Patents

Nuevos p-terfenilos hexakis-sustituidos con grupos bilaterales para el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y otras enfermedades Download PDF

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ES2489815A1
ES2489815A1 ES201330235A ES201330235A ES2489815A1 ES 2489815 A1 ES2489815 A1 ES 2489815A1 ES 201330235 A ES201330235 A ES 201330235A ES 201330235 A ES201330235 A ES 201330235A ES 2489815 A1 ES2489815 A1 ES 2489815A1
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Luis GONZÁLEZ BULNES
Santos FUSTERO LARDIÉS
Ignacio IBÁÑEZ SÁNCHEZ
Silvia CATALÁN MUÑOZ
José ALCAMÍ PERTEJO
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CT DE INVESTIGACION PRINCIPE FELIPE
Instituto de Salud Carlos III
Centro de Investigacion Principe Felipe
Universitat de Valencia
Universidad Catolica de Valencia San Vicente Martir
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CT DE INVESTIGACION PRINCIPE FELIPE
Instituto de Salud Carlos III
Centro de Investigacion Principe Felipe
Universitat de Valencia
Universidad Catolica de Valencia San Vicente Martir
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Abstract

Nuevos p-terfenilos hexakis-sustituidos con grupos bilaterales para el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y otras enfermedades.#La invención consiste en nuevos compuestos p-terfenilos hexakis-sustituidos con grupos bilaterales y composiciones farmacéuticas que los contengan con utilidad como agentes farmacéuticos.#Debido a su capacidad de interaccionar con un bucle interno de ARN y de mimetizar una {al}-hélice proteica, estos compuestos son efectivos especialmente en el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) así como otras enfermedades, tales como enfermedades causadas por otros virus ARN, enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser usados para modular la función de bucles internos de ARN, o enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados como agonistas o inhibidores de dominios proteicos de {al}-hélice en interacción con otras biomoléculas.

Description

imagen1
NUEVOS pTERFENILOS HEXAKISSUSTITUIDOS CON GRUPOS BILATERALES PARA EL TRATAMIENTO DE LA INFECCIÓN POR EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH1) Y OTRAS ENFERMEDADES
DESCRIPCIÓN
SECTOR DE LA TECNICA
La invención consiste en nuevos compuestos pterfenilos hexakissustituidos con grupos bilaterales y composiciones farmacéuticas que los contengan con utilidad como agentes farmacéuticos.
Debido a su capacidad de interaccionar con un bucle interno de ARN y de mimetizar una αhélice proteica, estos compuestos son efectivos especialmente en el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH1) así como otras enfermedades, tales como enfermedades causadas por otros virus ARN, enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser usados para modular la función de bucles internos de ARN, o enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados como agonistas o inhibidores de dominios proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
ESTADO DE LA TECNICA
Según el informe 2011 de la Organización Mundial de la Salud sobre la respuesta internacional al SIDA, en 2010 la infección por VIH afectó a 34 millones de personas en todo el mundo, causando 2,7 millones de nuevos casos y 1,8 millones de muertes.
En los últimos años la terapia antiretroviral ha disminuido las tasas de incidencia y mortalidad de la enfermedad. El tratamiento se basa en combinaciones de tres o cuatro fármacos que inhiben la proteasa, la transcriptasa reversa o la integrasa del virus, o bien bloquean su entrada en la célula. Sin embargo, esta terapia no elimina la infección1,2. La aparición de resistencias y la falta de una vacuna efectiva refuerzan aún más la necesidad de identificar nuevos fármacos que actúen sobre dianas alternativas del virus. Por tanto en la actualidad sigue existiendo una necesidad muy importante de desarrollar nuevas terapias que consigan eliminar la infección causada por VIH.
imagen2
El ARN desempeña un papel central en el functionamiento de los seres vivos3, y muchas moléculas de ARN humanas, bacterianas y virales poseen un potencial terapéutico 5 considerable, que aún permanece sin explotar. Actualmente se usan dos estrategias para abordar este tipo de receptores. La primera se basa en la generación de agentes antisentido
o ARNi, diseñados para aparearse con el ARN diana y de esta manera promover su degradación o bloquear su traducción. La segunda estrategia consiste en la síntesis de pequeñas moléculas orgánicas diseñadas para reconocer específicamente las cavidades
10  formadas por estructuras terciarias de ARN y así interferir con su función4.
Los motivos de ARN funcionales y estructurados no son fácilmente accesibles a los agentes antisentido y tienen la ventaja de una fuerte conservación de secuencia y/o estructura tridimensional. Este factor es importante para el desarrollo de antiinfecciosos, ya que podría 15 resultar en una aparición más lenta de resistencias a los fármacos que actúen sobre estas estructuras. Sin embargo, exceptuando diversos antibióticos que interaccionan con sitios del ARN ribosómico bacteriano, el desarrollo de nuevos fármacos dirigidos a ARN se ha visto obstaculizado por las dificultades impuestas por estas estructuras, que poseen una diversidad fisicoquímica limitada y son muchas veces flexibles4,5. Para que esta estrategia
20  tenga éxito, es imperativo identificar nuevos esqueletos químicos y nuevos mecanismos de reconocimiento específico de ARN estructurado.
El elemento de reconocimiento de Rev (RRE) es una estructura fuertemente conservada de 350 nucleótidos localizada en el gen env del ARN del virus de la inmunodeficiencia humana 25 tipo 1 (VIH1). Dentro del subdominio IIB del RRE, el surco mayor inusualmente ensanchado de un bucle interno GGCG:ACGGUA forma un complejo de alta afinidad6 con la αhélice rica en argininas de Rev (Fig. 1, a), una proteína tipo hélicevueltahélice formada por 116 aminoácidos y codificada por el virus 7,8. Esta interacción inicial entre el bucle interno IIB y la αhélice de unión a ARN de Rev (designada en lo sucesivo como Rev3450) es esencial para 30 la viabilidad del virus, ya que dispara una cascada de eventos que permiten el transporte de moléculas no procesadas de ARN viral al citoplasma de la célula infectada en la fase tardía del ciclo viral9. Estos eventos incluyen la incorporación de moléculas adicionales de Rev al
imagen3
complejo10 a través de contactos hélicehélice e interacciones con otros sitios del RRE7, y la asociación de la ribonucleoproteína RRERev al factor de transporte celular Crm17.
Diversos trabajos publicados en los últimos años indican que Rev tiene efectos pleiotrópicos11: además de transportar el ARN viral al citoplasma, esta proteína promueve la traducción y el empaquetamiento del ARN viral11 12 e interfiere con la integración del cDNA viral en el genoma de la célula hospedadora12. Claramente, Rev representa una importante diana para la terapia antiVIH1.
La presente invención comprende el diseño in silico y la síntesis orgánica de compuestos paraterfenílicos hexakissustituidos con grupos bilaterales. La introducción de sustituyentes en orto y a ambos lados de un esqueleto pterfenílico asegura una proyección de cadenas laterales en un abanico de 360o en el espacio, de manera similar a lo observado en el complejo de alta afinidad entre la αhélice de Rev y RRE, donde dos tercios de la proteína están rodeados por ARN. Esta conformación, junto a su composición química, permite a los compuestos unirse de manera específica al bucle interno IIB del ARN RRE del virus VIH1. La invención contiene la confirmación, mediante experimentos in vitro, de que estos pterfenilos hexakissustituidos efectivamente reconocen este bucle mimetizando la αhélice de unión a ARN de Rev, siendo capaces de inhibir la interacción entre RRE y Rev3450. Asímismo, la invención describe ensayos celulares que demuestran que los inhibidores más potentes bloquean la replicación del virus VIH1 in vivo, y ejercen este efecto en las fases postranscripcionales del ciclo de vida del virus.
Los compuestos descritos en esta invención actúan sobre el sistema RRERev viral, una diana terapéutica esencial para la replicación del VIH1 que hasta el momento no ha sido explotada. Las moléculas se basan en un esqueleto orgánico de estructura novedosa, no antibiótico y no peptídico, diseñado para reconocer una estructura de ARN viral fuertemente conservada. Por este motivo, la aparición de resistencias a este tipo de compuestos podría ser más lenta que la observada para los compuestos actualmente usados en clínica, que actúan sobre dianas proteicas menos conservadas. Además, RRE y Rev están codificados por el virus y ningún factor celular interviene en la interacción RRERev. Por tanto, los inhibidores RRERev pueden bloquear la replicación del virus VIH1 con menores efectos en componentes celulares y por ende menor toxicidad.
imagen4
La solicitud de patente americana US2005/0215563 hace referencia a una amplia familia de compuestos para el tratamiento de enfermedades relacionadas con o receptivas de la inhibición de la interacción entre una αhélice proteíca y otra proteína o sitio de unión. Entre otras dianas, la solicitud extiende la aplicación de los compuestos hacia posibles 5 tratamientos contra infecciones causadas por HIV1, citando en particular la inhibición de la proteína gp41 para bloquear la entrada del virus en la célula y, de manera mucho más indirecta, una hipotética inhibición de la proteína Rev. La figura 14 de la solicitud US2005/0215563 describe diversos compuestos con actividad inhibitoria gp41. Estos compuestos son conceptualmente y estructuralmente diferentes de los compuestos p
10  terfenílicos hexakissustituidos con grupos bilaterales descritos en la presente invención.
Por tanto, la presente invención aporta nuevos compuestos pterfenilos hexakissustituidos con grupos bilaterales farmacológicamente activos, representados por la fórmula general I, para la prevención y tratamiento de infecciones causadas por el virus VIH1. Debido a su 15 capacidad de interaccionar con un bucle interno de ARN y de mimetizar una αhélice proteica, estos compuestos también pueden ser activos para tratar otras enfermedades, tales como enfermedades causadas por otros virus ARN, enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser usados para modular la función de bucles internos de ARN, o enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan
20  ser utilizados como agonistas o inhibidores de dominios proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
25  La invención proporciona nuevos compuestos paraterfenílicos hexakissustituidos con grupos bilaterales y composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos definidos por la Fórmula (I) para su uso en el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH1) y/o otras enfermedades causadas por otros virus ARN, enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la
30  función de bucles internos de ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición o mimetismo de dominios proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
imagen5
Los compuestos de la presente invención son capaces de unirse al bucle interno IIB del ARN RRE del virus VIH1, inhibir la interacción entre RRE y Rev3450, y bloquer la replicación del virus VIH1 sin mostrar toxicidad celular a las concentraciones evaluadas.
Los compuestos de la presente invención están representados por la siguiente Fórmula (I):
imagen6
(I)
10 donde:
A, B y C representan independientemente uno del otro anillos de seis átomos seleccionados del grupo que consiste en benceno, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, ciclohexano, oxano, piperidina y piperazina,
15 
los anillos de seis átomos A, B y C están unidos en para mediante enlaces simples,
los sustituyentes R1, R2, R3, R4, R5 y R6 ocupan posiciones orto o meta respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
20 los sustituyentes R7 y R8 ocupan posiciones para respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el 25 anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
imagen7
R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo, y
R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo, alquilo, aril alcoxi y aril éster.
El término “alquilo” o “alquil”, según se utiliza en la presente memoria, comprende hidrocarburos que contienen de 1 a 12 átomos de carbono, cíclicos o acíclicos, saturados o insaturados, ramificados o no ramificados, sustituidos o no sustituidos con diferentes grupos funcionales, como por ejemplo metilo, hexilo, isopropilo, propenilo, etc.
El término “halo” o “halógeno”, según se utiliza en la presente memoria, comprende flúor, cloro, bromo y yodo.
El término “alcoxi”, según se utiliza en la presente memoria, comprende hidrocarburos de 1 a 12 átomos de carbono unidos a átomo de oxígeno. Los átomos de carbono podrán formar cadenas cíclicas o acíclicas, saturadas o insaturadas, ramificadas o no ramificadas, sustituidas o no sustituidas con diferentes grupos funcionales. Algunos ejemplos son metoxi, etoxi, ciclohexilmetoxi, morfolinmetoxi, etc.
El término “arilo”, según se utiliza en la presente memoria, comprende anillos aromáticos de 5 a 6 átomos que pueden ser carbono, nitrógeno, oxígeno y azufre, sustituidos o no sustituidos con diferentes grupos funcionales en una o varias posiciones, como por ejemplo trifluorometilbenceno, piridina, tiofeno, etc.
imagen8
Los compuestos preferidos de la presente invención se seleccionan de un grupo de moléculas definidas por la Formula general (I), donde:
A, B y C son benceno,
R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y meta respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos,
R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno A, y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1C6) alcoxi, (C1C6) alquil amida sustituida o no sustituida, (C1C6) alquil ester sustituido o no sustituido, (C1C6) hidroxialquilo, (C1C6) haloalquilo, (C1C6) alcoxialquilo, y (C1C8) alquilo,
R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos, y
R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1C10) alcoxi, (C1C10) alquil amina, (C1C10) alquil guanidina, (C1C10) alquil amida, (C1C10) alquil éster, (C1C10) hidroxialquilo, (C1C10) alcoxialquilo, (C1C10) haloalquilo, (C1C10) alquilo, aril alcoxi, y aril éster.
En concreto son compuestos preferidos de la presente invención:
JB399:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS358:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',4''dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS311:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
imagen9
IIS478:
2,2',2'',2'''(3',4dimetoxi4''((4(trifluorometil)bencil)oxi)[1,1':4',1''terfenil]
2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina
IIS530:
2,2',2'',2'''(4''(ciclohexilmetoxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
5 
IIS420: 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi2',6'dimetil[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS375:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)4metoxi3',5'dimetil[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS792:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2'etil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS758:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3'etil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
10 
tetrail)tetraetilamina
IIS806:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',6'dietil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4
ol
IIS711:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',5'dietil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
15 
imagen10
JB399
CF3
imagen11OH
H2N
NH2 H2N
imagen12NH 2
NH 2 H2N
NH 2 H2
CH 3
CH3
CH 3
imagen13
imagen14
H2N
NH2 H2N
NH 2
NH 2 H2N
NH 2 H2
OMe OMe OMe
imagen15
IIS358 IIS311 IIS478 IIS530
imagen16
OH
H2N
NH 2 H2N
imagen17NH2
CH 3
CH3
H2N
NH 2 H2N
NH2
OMe OMe
imagen18
IIS792 IIS758
imagen19
imagen20
De entre ellos, los compuestos más preferidos de la presente invención son:
imagen21
IIS806: 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',6'dietil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol IIS711: 2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',5'dietil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina IIS420: 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi2',6'dimetil[1,1':4',1''terfenil]4ol IIS375: 2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)4metoxi3',5'dimetil[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 representa (a) la estructura tridimensional del complejo formado por el bucle interno IIB del RRE y la αhélice de unión a ARN de la proteína Rev, Rev3450 6 y (b) una superposición de la conformación de mínima energía de un pterfenilo hexakissustituido con grupos bilaterales sobre la αhélice Rev3450. Ambos sistemas están orientados con sus ejes largos perpendiculares al plano del papel.
La Figura 2 representa un análisis de resonancia de plasmón superficial (SPR) de la interacción entre un pterfenilo con sustituciones bilaterales (IIS478) y las horquillas de ARN RRE, RREc y TARc. Se muestran los sensogramas SPR (izquierda) y las curvas de unión en estado estacionario (derecha), para las interacciones RRE:IIS478 (arriba), RREc:IIS478 (en medio) y TARc:IIS478 (abajo), obtenidas a 25 oC y pH 7.4. Las concentraciones de ligando abarcaron un rango entre 0.1 y 100 �M. Se fijaron cantidades similares de los tres ARN (aproximadamente 300 RUs) en los canales del chip SPR. Los parámetros de la interacción y los valores χ2 del ajuste de las curvas se indican en los gráficos.
La Figura 3 representa espectros de RMN de varias interacciones representativas entre RRE y moléculas bifenílicas y terfenílicas. Se muestra la asignación de la región aromática H5H6 de los espectros TOCSY (obtenidos a 27 oC con un tiempo de mezcla de 60 ms) correspondientes a las interacciones RRE:IIS420, RRE:IIS806 y RRE:JB398. Los picos cruzados H5H6 de pirimidina están etiquetados con el nombre y número de residuo de la secuencia RRE (SEQ ID No.1). En todos los casos, el espectro de RRE libre (1:0) está superpuesto sobre los espectros de complejos con proporciones molares RRE:ligando crecientes.
imagen22
5 
La Figura 4 representa un modelo computacional apoyado en datos de RMN de un complejo entre RRE e IIS311, construido a partir de la estructura tridimensional 1ETF6.
La Figura 5 representa curvas de inhibición de la interacción RRERev3450 por los terfenilos
10  IIS420 e IIS375 y el antibiótico de referencia neomicina B, obtenidas mediante un ensayo de desplazamiento basado en anisotropía de fluorescencia. Los gráficos representan anisotropía normalizada en función del logaritmo de la concentración de compuesto (�M), e indican el valor R2 del ajuste utilizado para obtener el valor IC50 de los compuestos. Los experimentos fueron realizados a 25oC y con 60 nM RRE y 10 nM frevp.
15 La Figura 6 representa ensayos celulares. (a) Ensayos antiVIH1 mostrando la actividad antiviral (NL4.3Ren) y la viabilidad celular en presencia de diferentes concentraciones de los compuestos. Los resultados se expresan como porcentaje de RLUs en el que el 100% representa infecciones con el vehículo utilizado para disolver los compuestos. (b) Ensayo
20  postintegración. Los gráficos muestran la actividad de los compuestos activos en transfecciones de plásmidos luciferasa bajo el control del genoma completo del VIH1 (NL4.3Luc). Los resultados se expresan como porcentaje de RLUs en el que el 100% representa transfecciones con el vehículo utilizado para disolver los compuestos.
25  DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Es un objeto de la presente invención, compuestos pterfenilos hexakissustituidos con grupos bilaterales de Formula (I):
30 
imagen23
(I)
5 donde:
A, B y C representan independientemente uno del otro anillos de seis átomos seleccionados del grupo que consiste en benceno, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, ciclohexano, oxano, piperidina y piperazina,
10 
los anillos de seis átomos A, B y C están unidos en para mediante enlaces simples,
los sustituyentes R1, R2, R3, R4, R5 y R6 ocupan posiciones orto o meta respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
15 Los sustituyentes R7 y R8 ocupan posiciones para respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el
20  anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el 25 anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
imagen24
R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el
5  anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo, y
R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en
10  hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo, alquilo, aril alcoxi y aril éster.
El término “alquilo” o “alquil”, según se utiliza en la presente memoria, comprende
15  hidrocarburos que contienen de 1 a 12 átomos de carbono, cíclicos o acíclicos, saturados o insaturados, ramificados o no ramificados, sustituidos o no sustituidos con diferentes grupos funcionales, como por ejemplo metilo, hexilo, isopropilo, propenilo, etc.
El término “halo” o “halógeno”, según se utiliza en la presente memoria, comprende flúor, 20 cloro, bromo y yodo.
El término “alcoxi”, según se utiliza en la presente memoria, comprende hidrocarburos de 1 a 12 átomos de carbono unidos a átomo de oxígeno. Los átomos de carbono podrán formar cadenas cíclicas o acíclicas, saturadas o insaturadas, ramificadas o no ramificadas,
25  sustituidas o no sustituidas con diferentes grupos funcionales. Algunos ejemplos son metoxi, etoxi, ciclohexilmetoxi, morfolinmetoxi, etc.
El término “arilo”, según se utiliza en la presente memoria, comprende anillos aromáticos de 5 a 6 átomos que pueden ser carbono, nitrógeno, oxígeno y azufre, sustituidos o no
30  sustituidos con diferentes grupos funcionales en una o varias posiciones, como por ejemplo trifluorometilbenceno, piridina, tiofeno, etc.
imagen25
En un aspecto preferente de la presente invención, se proporcionan compuestos definidos por la Fórmula general (I), donde:
A, B y C son benceno,
R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y meta respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos,
R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno A, y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1C6) alcoxi, (C1C6) alquil amida sustituida o no sustituida, (C1C6) alquil ester sustituido o no sustituido, (C1C6) hidroxialquilo, (C1C6) haloalquilo, (C1C6) alcoxialquilo, y (C1C8) alquilo,
R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos, y
R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1C10) alcoxi, (C1C10) alquil amina, (C1C10) alquil guanidina, (C1C10) alquil amida, (C1C10) alquil éster, (C1C10) hidroxialquilo, (C1C10) alcoxialquilo, (C1C10) haloalquilo, (C1C10) alquilo, aril alcoxi y aril éster.
. En otro aspecto preferente de la presente invención, se proporcionan compuestos seleccionados del grupo que comprende:
JB399:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS358:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',4''dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS311:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS478:
2,2',2'',2'''(3',4dimetoxi4''((4(trifluorometil)bencil)oxi)[1,1':4',1''terfenil]
2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina
imagen26
IIS530:
2,2',2'',2'''(4''(ciclohexilmetoxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS420:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi2',6'dimetil[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS375:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)4metoxi3',5'dimetil[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS792:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2'etil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS758:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3'etil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS806:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',6'dietil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4
ol
e IIS711: 2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',5'dietil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de Fórmula
(I)
útil para el tratamiento de una enfermedad en un mamífero, tal como un ser humano.
En aún otro aspecto de la presente invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende: (a) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I); y
(b)
un excipiente farmacéuticamente aceptable, útil para el tratamiento de una enfermedad en un mamífero, tal como un ser humano.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de Fórmula
(I)
o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto para reconocer específicamente el bucle interno IIB del ARN RRE del virus VIH1.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de Fórmula
(I)
o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto para inhibir la interacción RRERev3450 del VIH1.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de Fórmula
(I)
o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto para bloquear la replicación del VIH1 in vivo.
imagen27
En aún otro aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de Fórmula (I) o composición farmacéutica que comprende dicho compuesto para prevenir y/o tratar infecciones por VIH1 y enfermedades relacionadas, tales como: infecciones causadas por otros virus ARN como el virus del síndrome respiratorio agudo severo, el virus de la gripe y el virus Ébola entre otros; enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados para modular la función de bucles internos de ARN tales como los contenidos en la telomerasa o en el sitio interno de entrada al ribosoma de oncogenes humanos como lmyc (relevantes para el tratamiento de diversos tipos de cáncer incluyendo neuroblastoma entre otros), en las subunidades ribosómicas y biointerruptores bacterianos (relevantes para el tratamiento de infecciones causadas por bacterias como Staphilococcus aureus  Pseudomonas aeruginosa entre otras), o en regiones funcionales de moléculas de ARN viral como el dominio 3’X del virus de la hepatitis C (relevantes para el tratamiento de infecciones causadas por éste y otros virus ARN); y enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados como agonistas o inhibidores de proteínas con dominios αhélice en interacción con otras biomoléculas, como el factor de transcripción cmyc en interacción con ADN y proteínas como Max (relevante para el tratamiento de diversos tipos de cáncer tales como el linfoma de Burkitt y los cánceres de colon y próstata entre otros), o las proteínas Rev y Gag en interacción con la señal de empaquetamiento del virus VIH1, o la proteína Rev en interacción con otros monómeros de Rev.
Adicionalmente también es un objeto de la presente invención el uso de un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH1) y/o otras enfermedades causadas por otros virus ARN, enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la función de bucles internos de ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición o mimetismo de dominios proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
Es también un objeto de la presente invención un método de tratamiento en humanos de infecciones por VIH1 y enfermedades relacionadas, tales como: infecciones causadas por otros virus ARN como el virus del síndrome respiratorio agudo severo, el virus de la gripe y el virus Ébola entre otros; enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados para modular la función de bucles internos de ARN tales como los contenidos en la telomerasa o en el sitio interno de entrada al ribosoma de oncogenes humanos como lmyc (relevantes para el tratamiento de diversos tipos de cáncer incluyendo neuroblastoma entre otros), en las subunidades ribosómicas y biointerruptores bacterianos (relevantes para el tratamiento de infecciones causadas por bacterias como Staphilococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa entre otras), o en regiones funcionales de moléculas de ARN viral como el dominio 3’X del virus de la hepatitis C (relevantes para el tratamiento de infecciones causadas por éste y otros virus ARN); y enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados como agonistas o inhibidores de proteínas con dominios αhélice en interacción con otras biomoléculas, como el factor de transcripción cmyc en interacción con ADN y proteínas como Max (relevante para el tratamiento de diversos tipos de cáncer tales como el linfoma de Burkitt y los cánceres de colon y próstata entre otros), o las proteínas Rev y Gag en interacción con la señal de empaquetamiento del virus VIH1, o la proteína Rev en interacción con otros monómeros de Rev
imagen28
Y finalmente es también otro objeto de la presente invención, un procedimiento para la obtención de los compuestos de Fórmula general (I), que comprende la formación de sucesivos enlaces CC por acoplamientos de Suzuki entre halogenuros, ariltriflatos y ésteres borónicos de los anillos de 6 miembros A, B y C conteniendo grupos bilaterales, catalizados por paladio. En este procedimiento, los derivados halogenuro de A y C introducen R1, R2, R5, y R6 en la molécula final de acuerdo con la Fórmula (I), y el éster borónico de B introduce R3 y R4 en la molécula final de acuerdo con la Fórmula (I).
Se pretende que la presente invención abarque todas las formas ionizadas farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, sales) y solvatos (por ejemplo, hidratos) de los compuestos de Fórmula (I) independientemente de si se especifican tales formas y solvatos, ya que se conoce bien en la técnica que pueden usarse agentes farmacéuticos en una forma ionizada o solvatada.
Los compuestos de Fórmula (I) pueden contener uno o más centros quirales y existir en formas ópticamente activas. Cuando un compuesto de Fórmula (I) o una sal del mismo contiene un único centro quiral, puede existir en dos formas enantioméricas. La presente invención incluye enantiómeros individuales y mezclas de estos enantiómeros, que pueden obtenerse mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica.
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Cuando un compuesto de Fórmula (I) o una sal del mismo contiene más de un centro quiral, puede existir en formas diastereoméricas. La presente invención incluye cada diastereómero y mezclas de estos diastereómeros, que pueden obtenerse mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica.
Los compuestos de Fórmula (I) pueden formar sales orgánicas e inorgánicas, por ejemplo, con ácidos inorgánicos u orgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido sulfúrico, ácido maleico, acético ácido, ácido succínico, ácido benzoico, ácido palmítico, ácido dodecanoico y aminoácidos ácidos, tales como ácido glutámico, hidróxidos de metales alcalinos, por ejemplo, hidróxido de sodio; con aminoácidos, por ejemplo, lisina o arginina. Las sales formadas con compuestos de Fórmula (I) pueden usarse en la presente invención siempre que sean farmacéuticamente aceptables. Tales sales y solvatos correspondientes también se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Profármacos de los compuestos de Fórmula (I) también son el objeto de la presente invención. Tal como se conoce en la técnica, los profármacos se alteran  n vivo y se transforman en un compuesto de la presente invención. Se pretende que todos los métodos convencionales de uso de los compuestos de la presente invención, tanto si se especifica la administración del profármaco como si no, comprendan la administración de un profármaco que se convierte in vivo en un compuesto según la presente invención.
Es posible una variedad de vías de administración de los compuestos y las composiciones de la presente invención incluyendo, pero sin limitarse necesariamente a, parenteral (por ejemplo, inyección intravenosa, intraarterial, intramuscular, subcutánea), oral (por ejemplo, en la dieta o por inhalación), tópica, nasal, rectal, o mediante microportadores de liberación lenta, dependiendo del estado que va a tratarse. La administración oral, parenteral e intravenosa son modos de administración preferidos. La formulación de los compuestos de la presente invención que va a administrarse variará según la vía de administración seleccionada (por ejemplo, disolución, emulsión, gel, aerosol, cápsula). Formas farmacéuticas adicionales según la presente invención son, por ejemplo, disoluciones, suspensiones, pomadas, cremas, pastas, geles, tinturas, barras de labios, gotas, jarabes, aerosoles y pulverizaciones.
imagen30
Una composición apropiada de la presente invención que comprende el compuesto o los compuestos de Fórmula (I) puede preparase en un vehículo o portador fisiológicamente aceptable y adyuvantes y conservantes opcionales. Para disoluciones o emulsiones, los portadores adecuados incluyen, por ejemplo, suspensiones, emulsiones o disoluciones acuosas o alcohólicas/acuosas, incluyendo medios salinos y tamponados, agua estéril, cremas, pomadas, lociones, aceites, pastas y portadores sólidos. Los vehículos parenterales pueden incluir disolución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, disolución de Ringer con lactato, o aceites fijos. Los vehículos intravenosos pueden incluir diversos aditivos, conservantes, o reconstituyentes de fluidos, nutrientes o electrolitos. (Véase Remington’s Pharmaceutical Science, 16ª edición, Mack, Ed. (1980)).
Las composiciones preferidas para su administración parenteral están en forma de disoluciones, suspensiones, emulsiones, dispersiones y composiciones liofilizadas de los compuestos de la invención, preferiblemente en forma de suspensiones, emulsiones, dispersiones o disoluciones acuosas isotónicas. Estas composiciones son preferiblemente estériles, o bien procesándose en un entorno estéril durante todo su proceso de preparación
o bien esterilizándose al final de dicho proceso. Además, su fabricación se lleva a cabo habitualmente en condiciones estériles, al igual que el llenado, por ejemplo, en ampollas o viales y el sellado de los envases. Estas composiciones pueden estar listas para su aplicación o pueden presentarse en forma sólida (por ejemplo como un liofilizado) que requiere reconstitución antes de su aplicación.
Las composiciones parenterales según la presente invención pueden comprender excipientes, por ejemplo vehículos, estabilizadores (agentes reductores, antioxidantes y/o agentes secuestrantes), agentes de tamponamiento, conservantes, agentes isotonizantes, emulsionantes, solubilizantes, agentes aumentadores de la viscosidad y/o agentes de carga y se preparan mediante procedimientos convencionales bien conocidos por los expertos de la técnica.
Una vía preferida de administración es la oral. Las composiciones orales farmacéuticas en forma oral sólida (comprimidos, cápsulas blandas, cápsulas duras o cualquier otra) según la presente invención comprenden excipientes, siempre que sean compatibles con el principio activo de la composición, incluyendo, pero sin limitarse a, diluyentes, aglutinantes, disgregantes, surfactantes, deslizantes, lubricantes, antioxidantes o secuestrantes de radicales libres, componentes de recubrimiento, opacificantes o plastificantes.
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Si se prepara una composición sólida en forma de comprimidos, el compuesto de la presente invención puede mezclarse con un vehículo farmacéutico, ejemplos del cual incluyen sílice, almidón, lactosa, estearato de magnesio y talco. Los comprimidos pueden recubrirse con sacarosa u otra sustancia apropiada o pueden tratarse de modo que tengan una actividad sostenida o retrasada y de modo que liberen una cantidad predeterminada de principio activo de manera continua. Pueden obtenerse cápsulas de gelatina mezclando el principio activo con un diluyente e incorporando la mezcla resultante en cápsulas de gelatina blanda o dura. Un jarabe o elixir puede contener el principio activo junto con un edulcorante, un antiséptico (por ejemplo metilparabeno y/o propilparabeno), un aromatizante y un colorante apropiado. Los gránulos o polvos dispersables en agua pueden contener el principio activo mezclado con dispersantes o agentes humectantes o con agentes de suspensión tales como polivinilpirrolidona, así como con edulcorantes o correctores del sabor.
El término “portador farmacéuticamente aceptable” tal como se usa en la presente invención incluye cualquier disolvente, medios de dispersión, recubrimientos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, y similares que sean compatibles con la actividad de los compuestos y sean fisiológicamente aceptables para el sujeto.
La “cantidad eficaz” tal como se usa en la presente invención incluye la cantidad del compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, éster, isómero, solvato o profármaco del mismo que permite que realice su función prevista, es decir, tratamiento profiláctico y/o terapéutico de infecciones por VIH1 así como otras enfermedades, tales como infecciones causadas por otros virus ARN, o enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados para modular la función de bucles de ARN, o como agonistas o inhibidores de proteínas con dominios αhélice en interacción con otras biomoléculas.
Puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz de la sustancia activa de la presente invención mediante una vía apropiada en una sola dosis o múltiples dosis. La cantidad terapéuticamente eficaz dependerá de varios factores, incluyendo actividad biológica, modo de administración, frecuencia de tratamiento, tipo de tratamiento concurrente, si lo hay, edad, peso corporal, sexo, salud general, gravedad del estado que va a tratarse, así como propiedades farmacocinéticas apropiadas. Un experto en la técnica puede determinar la dosificación apropiada basándose en los factores anteriores.
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Los compuestos de la invención pueden administrarse inicialmente con una dosificación adecuada que puede ajustarse según se requiera, dependiendo de la respuesta clínica. En general pueden obtenerse resultados satisfactorios cuando los compuestos de la invención se administran a un ser humano a una dosificación diaria de entre aproximadamente 0.05 mg y 100 mg por Kg de peso corporal (medida como la forma sólida). Una dosis preferida aproximada oscila entre 0.1 – 50 mg/Kg/día, más preferiblemente entre aproximadamente 1
– 20 mg/Kg/día.
El compuesto puede administrase en forma de composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto una vez al día o en diferentes momentos en el día, de manera profiláctica o terapéutica, preferiblemente en una cantidad eficaz contra la infección por VIH1 o la enfermedad relacionada, a un mamífero, por ejemplo, un ser humano, que requiere tal tratamiento. En el caso de un individuo que tiene un peso corporal de aproximadamente 75 kg, la dosis diaria de la mezcla administrada es desde aproximadamente 0.004 g hasta aproximadamente 7.5 g, preferiblemente desde aproximadamente 0.075 g hasta aproximadamente 0.150 g, de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, éster, isómero, solvato o profármaco del mismo.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden desde aproximadamente el 0.05% hasta aproximadamente el 80% (en peso) de una mezcla de un compuesto de Fórmula (I).
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden formularse, si se desea, de modo que proporcionen una liberación inmediata o modificada del principio activo después de su administración a un paciente.
Las formas de administración de dosis unitaria según la presente invención comprenden desde aproximadamente el 0.05% hasta aproximadamente el 80% del compuesto de Fórmula (I).
imagen33
Las formas de dosis unitaria según la presente invención se refieren, por ejemplo, a comprimidos recubiertos y sin recubrir, microcápsulas, cápsulas duras y blandas, grageas, dosis en polvo, ampollas, viales y supositorios.
La presente invención se refiere especialmente al uso de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, isómero, solvato y/o profármaco, como tal o en forma de una formulación farmacéutica con al menos un portador farmacéuticamente aceptable para el tratamiento terapéutico y también profiláctico de infecciones por VIH1 y enfermedades relacionadas.
Obtención de los compuestos de la invención
1.Diseño computacional de inhibidores RRERev.
Tomando como base la estructura tridimensional de Rev3450 unido al bucle interno IIB del RRE6 (Fig. 1, a), los inventores se propusieron diseñar ligandos orgánicos que mimetizaran la distribución tridimensional de las cadenas laterales de la αhélice Rev3450 en su complejo con el ARN. A este respecto, otros autores habían indicado que moléculas pterfenílicas trisortosustituidas podían mimetizar una cara de un péptido en conformación αhélice mediante la adopción de una conformación escalonada que reproducía el ángulo de orientación de tres cadenas laterales aminoacídicas, y que algunos de estas moléculas eran capaces de inhibir interacciones proteínaproteína13. Para el propósito de esta invención, los inventores pensaron que la introducción de sustituyentes a ambos lados de un esqueleto paraterfenílico permitiría una proyección de cadenas laterales en un abanico de 360o similar a la observada en el complejo IIBRev3450, donde dos tercios de la αhélice están rodeados por ARN. Un análisis conformacional in sílico de una molécula pterfenílica hexakisortosustituida con grupos bilaterales modelo confirmó esta predicción: mientras que la orientación orto de los sustituyentes indujo una conformación escalonada, la presencia de sustituyentes a ambos lados de los anillos aseguró una amplia proyección de cadenas laterales en el espacio (Fig. 1, b). Cálculos de “docking” posteriores apoyaron la hipótesis de que estas moléculas podrían unirse al bucle RRE mimetizando la αhélice Rev3450. En estos
imagen34
cálculos se encajaron diversas moléculas pterfenílicas hexakissustituidas, así como distintos isómeros posicionales de moléculas tetrakis pbifenílicas y tris pterfenílicas, en la estructura RRE6 (códigos PDB 1ETF and 1ETG). Los mejores resultados se obtuvieron para los ligandos pterfenílicos hexakisortosustituidos con grupos bilaterales (definidos por la 5 Formula I), cuyas conformaciones de unión reprodujeron de manera aproximada la orientación de Rev3450 en su complejo con RRE. Después de evaluar distintas posibilidades para los sustituyentes de los anillos de benceno mediante cálculos adicionales, los inventores concluyeron que cadenas laterales compuestas por grupos 2aminoetilo serían sintéticamente accesibles y podrían dar lugar a interacciones apropiadas con el esqueleto
10  azúcarfosfato del bucle interno del RRE.
2.Síntesis de pbifenilos y pterfenilos con sustituciones bilaterales.
Tomando como base las predicciones computacionales, los inventores sintetizaron
15  moléculas pbifenílicas y pterfenílicas con sustituciones bilaterales en los anillos de benceno, descritas por la Fórmula (I). Las síntesis se basaron en una sucesión de acoplamientos de Suzuki, catalizados por paladio1416, entre aril halógenos y esteres aril borónicos, como se muestra en el siguiente esquema:
20 
imagen35
Esquema 1a
25  Para el caso de los compuestos preferidos de la presente invención el esquema sintético es el siguiente:
imagen36
Esquema 1b
A pesar de la aparente simplicidad de la ruta sintética, según los datos obtenidos este tipo 5 de estructuras terfenílicas polisustituidas no había sido descrito hasta el momento.
En una primera fase se sintetizó el siguiente grupo de tetrakis (2aminoetilo) 11’ bifenilos, con cadenas laterales 2aminoetílicas ocupando las posiciones bilaterales 3,5 y 2’,6’ (JB398), 2,6 y 2’,6’ (SC30), y 3,5 y 3’,5’ (JB391):
10 
imagen37
JB391: 3,3',5,5'tetrakis(2aminoetil)[1,1'biphenyl]4,4'diol JB398: 2',3,5,6'tetrakis(2aminoetil)4'metoxi[1,1'biphenyl]4ol SC30: 2,2',2'',2'''(4,4'dimetoxi[1,1'biphenyl]2,2',6,6'tetrail)tetraetilamina
15 
Por impedimento estérico, las cadenas bilaterales 2aminoetílicas en posiciones 2’ y 6’ (orto) de JB398 inducen la adopción por este bifenilo de una conformación escalonada, similar a la adoptada por los pterfenilos 3,2’,2’’trissustituídos que se comportan como miméticos de αhélice13. Este impedimento estérico está maximizado en SC30, donde las cuatro cadenas
20 2aminoetílicas ocupan posiciones orto respecto a los carbonos que enlazan los dos anillos de benceno. Por el contrario, las cadenas bilaterales 2aminoetílicas de JB391 son meta, permitiendo a esta molécula adoptar una conformación plana.
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A continuación se sintetizaron las siguientes moléculas terfenílicas siguiendo el método descrito anteriormente:
imagen39
JB399
imagen40
OH
H2N
NH 2 H2N
imagen41NH2
CH 3
CH3
H2N
NH 2 H2N
NH2
OMe OMe
imagen42
IIS792 IIS758
imagen43
imagen44
5 
JB399: 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS358:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',4''dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS311:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS478:
2,2',2'',2'''(3',4dimetoxi4''((4(trifluorometil)bencil)oxi)[1,1':4',1''terfenil]
10 
2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina
IIS530:
2,2',2'',2'''(4''(ciclohexilmetoxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS420:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi2',6'dimetil[1,1':4',1''terfenil]4ol
IIS375:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)4metoxi3',5'dimetil[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
15 
tetrail)tetraetilamina
IIS792:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2'etil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
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IIS758:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3'etil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
IIS806:
2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',6'dietil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4
ol
IIS711:
2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',5'dietil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
tetrail)tetraetilamina
El primero de los terfenilos sintetizados (JB399) contiene cuatro cadenas 2aminoetílicas que ocupan las posiciones bilaterales 3,5 y 2”,6” de los dos bencenos terminales, pero no posee sustituyentes en el anillo central. En este caso, se espera una conformación escalonada para el enlace 4’1” que une el segundo y tercer anillo de benceno, pero no para el otro. Los 3,5,2”,6” tetrakis (2aminoetilo) terfenilos de la segunda serie contienen un solo grupo metoxi (IIS358, IIS311, IIS478 e IIS530) o etilo (IIS792 e IIS771) en la posición 2’ del anillo central. Por impedimento estérico, estos terfenilos adoptarán una conformación escalonada en torno a los dos enlaces bencenobenceno. Los compuestos de esta serie contienen distintos grupos unidos al carbono 4 (para en estructura, estas moléculas serían los mejores miméticos de Rev3450.
Funcionalidad de los compuestos de la invención
1.Compuestos pterfenílicos bilateralmente sustituidos se unen específicamente a la horquilla RRE con baja estequiometría.
La interacción entre los compuestos bifenílicos y terfenílicos sintetizados y el ARN RRE (SEQ. ID. No 1) se analizó mediante experimentos de resonancia superficial de plasmón (SPR)17. Además de RRE, se inmovilizaron otras dos horquillas de ARN control en los chips SPR: RREc (SEQ. ID. No 2) y TARc (SEQ. ID. No 3). La horquilla RREc contiene una oposición G:G en lugar del bucle interno GGCG:ACGGUA que forma el sitio de alta afinidad de Rev, mientras que en la horquilla TARc el bucle interno de RRE se sustituye por el pequeño bucle interno UCU, reconocido por la proteína Tat del virus VIH118. De esta forma, los inventores de la presente invención han podido estudiar simultáneamente la interacción con RRE, RREc y TARc, obteniendo datos acerca de la especificidad de unión de los compuestos. Además, la metodología SPR permite la deducción de la estequiometría de las interacciones, que también están relacionadas con la especificidad de la interacción entre un ligando y una determinada molécula de ARN. Estas consideraciones son importantes en el campo del reconocimiento de ácidos nucléicos4,19 .
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Los candidatos pusieron a punto la metodología SPR analizando la interacción de RRE con un péptido TRQARRNRRRRWRERQRAAAAR, identificado en lo sucesivo como revp (SEQ ID. No. 4), así como con el antibiótico neomicina B. revp contiene el tracto Rev3450 rico en argininas (TRQARRNRRRRWRERQR) que forma la αhélice crítica para la interacción con RRE20. Para la interacción RRErevp, las curvas de unión se ajustaron con un modelo de un sitio de unión e indicaron una constante de disociación Kd de 4.2 ± 3.4 nM y una estequiometría 1:1. Este resultado indica que una sola molécula de revp interacciona con el sitio de alta afinidad de la horquilla RRE, formado por el bucle interno IIB6 (Fig. 1, a). La especificidad de la interacción RRE:revp se cuantificó calculando las relaciones Kd(RREc)/Kd(RRE) y Kd(TARc)/Kd(RRE), que resultaron ser 14.5 y 4.4, respectivamente. La Kd obtenida para revp mediante SPR concuerda muy bien con los valores de Kd publicados en la literatura para la interacción entre secuencias de RRE y péptidos similares21,22. En el caso de neomicina B, las curvas de unión se ajustaron con un modelo de dos sitios, y se obtuvo una constante de disociación de 2.2 ± 1.4 �M para la interacción entre dos moléculas de antibiótico y el sitio de mayor afinidad. Estos resultados también coincidieron con las Kd y estequiometrías de unión publicadas en la literatura para la interacción entre este antibiótico y RRE22 . Con relaciones Kd(RREc)/Kd(RRE) y Kd(TARc)/Kd(RRE) de 0.9 y 2.3, respectivamente, la especificidad de la interacción RRE:neomicina resultó ser limitada, como se indicó en trabajos anteriores23 .
Tabla 1. Parámetros de interacción RREbifenilo y RREterfenilo determinados mediante experimentos SPR a 25oC: constantes de disociación en el equilibrio (Kd), estequiometrías de unión (n), y especificidad de la interacción, cuantificada mediante los cocientes Kd(RREc)/Kd(RRE) y Kd(TARc)/Kd(RRE) en relación a las horquillas control RREc y TARc.
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compuestoa
Kd (RRE) (M·106) ns (RRE) )( )( RREK RREK d cd )( )( RREK TARK d cd
JB398
31.1 ± 5.0 4.31 ± 0.3 3.7
SC30
>100
JB399b
14.4 ± 6.8 0.71 ± 0.1 11.7
IIS358
13.0 ± 9.0 1.12 ± 1.0 1.9 6.0
IIS311
9.4 ± 5.7 1.32 ± 0.6 4.9 3.2
IIS478c
14.0 ± 5.1 1.42 ± 0.4 10.3 9.6
IIS530b
46.2 ± 32.0 2.51 ± 1.1 1.3 4.0
IIS792c
8.1 ± 1.8 1.31 ± 0.1 1.2 1.6
IIS758c
16.7 ± 1.6 4.61 ± 0.2 1.3 2.0
IIS806c
8.1 ± 1.1 2.11 ± 0.1 1.1 1.3
IIS771c
17.6 ± 1.8 2.71 ± 0.1 1.0 1.7
aLas curvas de interacción se ajustaron mediante funciones modelo de uno o dos sitios de
5  unión (indicado con superíndices s=1 o s=2). Cuando s=2, los valores Kd y n corresponden al sitio de mayor afinidad. Los experimentos se llevaron a cabo a pH 6.25 excepto donde se indica. bValores determinados usando un rango de concentraciones de ligando de 0.125 µM. cValores determinados a pH 7.4. A pH 6.25 se obtuvieron valores muy similares de Kd, ns y
10  Kd(RREc)/Kd(RRE): 12.1 ± 3.1 µM, 2.12 ± 0.4 moléculas y 10.2, respectivamente. dValores determinados a pH 7.4, usando un rango de concentraciones de ligando de 0.125 µM.
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Cuando los ligandos bifenílicos y terfenílicos se evaluaron mediante estos experimentos, los mejores resultados se obtuvieron para las moléculas tetrakis (2aminoetilo) terfenílicas, algunas de las cuales fueron capaces de unirse a la horquilla RRE con afinidades de 8 �M y estequiometrías de unión que oscilaron entre una y dos moléculas para el sitio de mayor afinidad (Fig. 2 y Tabla 1). Los terfenilos conteniendo un grupo relativamente polar (metoxi) en el anillo de benceno central, particularmente IIS358, IIS311 e IIS478, dieron lugar a los mejores datos de especificidad, con relaciones Kd(RREc)/Kd(RRE) y Kd(TARc)/Kd(RRE) de hasta 10.3 y 9.6, respectivamente (Tabla 1 y Fig. 2), comparables a las obtenidas con el péptido revp (14.5 y 4.4). Los compuestos terfenílicos conteniendo grupos hidrofóbicos (metilo y etilo) en el anillo central mostraron más afinidad por la horquilla RRE. Aunque la especificidad de estos compuestos respecto a RREc y TARc disminuyó, su interacción con RRE ocurrió con estequiometrías bajas (Tabla 1). Estos datos son indicativos de que los ligandos se unen a un sitio específico en la horquilla RRE.
2.Experimentos de espectroscopia de RMN demuestran una interacción específica entre el bucle interno de RRE y ligandos terfenílicos con substituciones bilaterales.
La interacción entre RRE y los compuestos bifenílicos y terfenílicos también se evaluó mediante experimentos monoy bidimensionales de espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN) (Fig. 3). Esta técnica permitió no sólo examinar la fortaleza de las interacciones, sino también la localización del sitio de unión de los ligandos en el ARN, y detectó diferencias significativas a este respecto entre los distintos compuestos. Los bifenilos JB391, JB398 y SC30 apenas produjeron cambios detectables en el espectro TOCSY de RRE, incluso a relaciones molares RRE:ligando elevadas (1:6) (Fig. 3, abajo), o bien indujeron cambios que no afectaron de manera específica a los residuos del bucle interno. La unión del antibiótico de referencia neomicina B, evaluado mediante la misma metodología, también afectó de manera similar a residuos de los dos tallos que flanquean el bucle interno. Por el contrario, los compuestos de la serie 3,5,2”,6” tetrakis (2aminoetilo) terfenílica únicamente dieron lugar a cambios de desplazamiento químico en nucleótidos del bucle interno o inmediatamente adyacentes, particularmente C20, U23 y C25 (Fig. 3). Estas variaciones resultaron ser más pronunciadas para los terfenilos conteniendo grupos hidrofóbicos (metilo y etilo) en el anillo de benceno central. Los terfenilos IIS358 e IIS311, conteniendo un grupo más polar (metoxi) en el anillo central, y en menor medida JB399, dieron lugar a variaciones similares pero menos pronunciadas. De toda la serie 3,5,2”,6” tetrakis (2aminoetilo) terfenílica, IIS420 e IIS806, conteniendo dos grupos metilo y etilo, respectivamente, en las posiciones bilaterales 2’ y 6’ del benceno central dieron lugar a los mayores cambios de desplazamiento químico, así como a los picos de complejo más estrechos (Fig. 3, arriba y en medio). El bucle RRE pudo ser valorado con dos equivalentes
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5  molares de estos compuestos. En general, estos resultados son consistentes con las constantes de disociación y estequiometrías de unión determinadas mediante experimentos SPR (Tabla 1).
El hecho de que únicamente los nucleótidos del bucle o los inmediatamente adyacentes
10  resulten afectados por la interacción indica claramente que los ligandos terfenílicos se unen específicamente al bucle interno de RRE. Además, en los complejos de RRE con los mejores ligandos (IIS420 e IIS806) se observaron NOEs intermoleculares débiles entre hidrógenos de los ligandos y protones del ARN situados en el surco mayor (resultados no mostrados). Estos contactos demuestran que la interacción con el bucle RRE tiene lugar en
15  el surco mayor, como ocurre con Rev3450 4 (Fig. 1, a), e indican que los ligandos pterfenílicos hexaquissustituidos con grupos bilaterales ocupan el sitio de unión de la αhélice Rev3450 en el ARN RRE (Fig. 4). El examen de los espectros NOESY también reveló que IIS420 e IIS806 pueden provocar un cambio conformacional en el RRE similar al inducido por la unión de Rev3450. Al igual que ocurre con esta α−hélice4,23, la unión de IIS420 o IIS806 a RRE
20  induce la adopción, por parte de la guanina G22 del bucle, de una conformación anti en lugar de la conformación syn observada en el bucle aislado2325 .
3.Ligandos bifenílicos y terfenílicos inhiben la interacción RRERev3450 in vitro.
25  Empleando un ensayo basado en anisotropía de fluorescencia, los inventores evaluaron la capacidad de los distintos ligandos bifenílicos y terfenílicos de inhibir la interacción entre RRE y Rev3450. Para este experimento se empleó un péptido GTRQARRNRRRRWRERQRAAAAR etiquetado con el fluoróforo FITC (identificado en lo sucesivo como frevp; SEQ ID. No. 5) y la horquilla de ARN RRE (SEQ. ID. No 1). Los
30  resultados se muestran en la Tabla 2 y Fig. 5.
imagen50
Tabla 2. Inhibición de la interacción RRERev4550. Concentraciones inhibitorias 50 (IC50) de moléculas bifenílicas y terfenílicas, obtenidas mediante un ensayo de polarización de fluorescencia.
10 
15 
20 
25 
30 
compuesto
IC50 a (M·106)
JB391
5.6 ± 4.2
JB398
22.1 ± 5.8
SC30
308.7 ± 68.9
JB399
23.4 ± 3.6
IIS358
808.0 ± 461.7
IIS311
162.2 ± 117.6
IIS478
232.0 ± 32.7
IIS530
75.5± 39.9
IIS792
93.6 ± 24.4
IIS758
78.1 ± 6.5
IIS806
56.4 ± 13.5
IIS771
77.2 ± 15.5
IIS420
7.0 ± 0.6
IIS375
32.2 ± 2.3
imagen51
aObtenidos con 60 nM RRE y 10 nM frevp. No se detectó desplazamiento RREfrevp para los fragmentos 2,6(2aminoetil)4metoxi1bromobenceno y 2,6(2aminoetil)4benciloxi1bromobenceno, utilizados como control.
5  Este ensayo fue validado midiendo los valores IC50 y Ki del péptido revp y el antibiótico de referencia neomicina B. La constante de inhibición Ki obtenida para revp (7.0 ± 1.4 nM) concordó muy bien con la constante de disociación Kd determinada independientemente mediante SPR (4.2 ± 3.4 nM). El valor Ki obtenido para el antibiótico de referencia neomicina B (3.5 ± 0.4 �M) también coincidió con la Kd calculada por SPR (2.2 ± 1.4 �M) y con valores
10  Ki previamente publicados en la literatura22 .
Cuando los ligandos bifenílicos y terfenílicos se evaluaron mediante este ensayo, los resultados indicaron que algunos de ellos eran capaces de inhibir la interacción RRERev3450 con valores IC50 de hasta 7.0 µM (Fig. 5 y Tabla 2) y valores Ki de hasta 3.8 �M. De 15 manera similar a lo observado con los experimentos SPR y RMN para la interacción RREligando, la composición de los sustituyentes del anillo de benceno central tuvo un impacto importante en la actividad inhibitoria de la serie tetrakis (2aminoetilo) terfenílica. Los compuestos más potentes resultaron ser nuevamente aquellos conteniendo grupos hidrofóbicos en el anillo de benceno central. Los más activos fueron IIS420 e IIS375, con 20 dos grupos metilo en las posiciones bilaterales 2’ y 6’ de este anillo, que exhibieron concentraciones IC50 de 7.0 y 32.2 �M, respectivamente (valores Ki de 3.8 y 17.4 �M) (Fig. 5), seguidos por JB399, IIS806, IIS771 e IIS758 (con valores IC50 de 23.4, 56.4, 77.2 y
78.1 �M, respectivamente). Las moléculas terfenílicas conteniendo un sustituyente más polar (metoxi) en el anillo central, exhibieron valores IC50 más altos. Los bifenilos JB391 y
25  JB398, con valores IC50 de 5.6 y 22.1 �M, respectivamente, resultaron ser sorprendentemente activos en este ensayo. Sin embargo, estas moléculas interaccionan pobremente con el bucle RRE (e.g. Fig. 3, abajo), por lo que es probable que ambas inhiban la interacción RREfrevp a través de un mecanismo diferente.
30  4. Los inhibidores de RRERev3450 bloquean la replicación del VIH1 in vivo y producen este efecto a nivel posttranscripcional.
imagen52
Los terfenilos IIS420, IIS758, IIS375, IIS771, IIS792, IIS806 y, en menor medida, el bifenilo JB391 mostraron actividad antiviral sin citotoxicidad tras ser evaluados con un ensayo celular, como se muestra en la Tabla 3a y en la Figura 6.
5  Tabla 3. Resultados de los ensayos celulares de inhibición de la replicación del virus. (a) Actividad antiVIH (EC50, NL4.3Ren) y viabilidad celular (CC50). (b) Actividad antiVIH en pasos posteriores a la integración del virus en la célula (EC50, postintegración). Todos los valores están expresados en �M, y los intervalos de confianza y el valor R2 del ajuste se muestran cuando es posible.
10 
Tabla 3a
EC50 �M
CC50 �M
compuesto
(NL4.3 (viabilidad
Ren)
celular)
Neomicina
>100
>100
B
JB391
>50<100 >100
JB398
>100 >100
JB399
>100 >100
IIS358
>100 >100
IIS311
>100 >100
IIS478
>100 >100
IIS530
>100 >100
IIS792
46.3 >100
Int. conf.
35.061.2
95%
R²
0.7029
IIS758
15.5 >100
Int. conf.
11.421.1
95%
imagen53
R²
0.7912
IIS806
64.1 >100
Int. conf.
49.283.5
95%
R²
0.7861
IIS771
42.6 >100
Int. conf.
32.356.1
95%
R²
0.8583
IIS420
3.4 >100
Int. conf.
1.76.9
95%
R2
0.9712
IIS375
40.6 >100
Int. conf.
28.957.2
95%
R2
0.9885
Tabla 3b
Compuesto
EC50 �M (postintegración)
Int. conf. 95% R2
IIS420
IIS375 IIS758
5.0
21.4 17.0
0.734.0 0.8648
15.329.9 0.9931 3.680.7 0.8629
5 
IIS420 resultó ser el inhibidor más potente, con un valor de EC50 de 3.4 �M (Tabla 3a). Esta molécula es un 3,5,2’,2”,6’,6” hexakis pterfenilo con sustituciones bilaterales en los tres anillos incluyendo dos grupos metilo en el benceno central, y exhibió el valor IC50 más bajo de la serie terfenílica en los experimentos de inhibición de la interacción RRERev3450 (Tabla 10 2). IIS758 (EC50 15.52 �M) también mostró una actividad antiVIH significativa, seguido por IIS375, IIS771, IIS792 e IIS806, con valores EC50 de 40.6, 42.6, 46.3 y 64.1 �M, respectivamente. En consonancia con los resultados de los ensayos in vitro de unión a RRE
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e inhibición RRERev3450, los compuestos más activos in vivo contienen grupos hidrofóbicos (metilo o etilo) en el anillo de benceno central. El bifenilo JB391 también exhibió actividad en el ensayo NL4.3Ren, pero no la suficiente para calcular con fiabilidad su valor EC50 (>50<100 �M). El control de neomicina B no inhibió la replicación del VIH1 a las concentraciones evaluadas. Ninguno de los compuestos mostró toxicidad a concentraciones por debajo de la concentración máxima evaluada, 100 �M (Tabla 3a).
Con objeto de evaluar la actividad de los compuestos más activos en las etapas transcripcionales y posttranscripcionales del ciclo de vida del virus, también se utilizaron plásmidos luciferasa bajo el control del genoma completo del VIH1. De esta manera, se evaluó específicamente la actividad antiVIH de los inhibidores en estas etapas, que incluyen la transcripción y el transporte del ARN viral al citoplasma. IIS420 fue nuevamente el compuesto más potente en este ensayo (Tabla 3b), con un valor EC50 de 5.0 �M semejante al obtenido en los ensayos de infección (Tabla 3a), lo que sugiere que su diana principal se encuentra en estas etapas. IIS758 y IIS375 también fueron capaces de inhibir los pasos posteriores a la integración del VIH1. IIS758 lo hizo con una potencia similar a la mostrada en el ensayo de infección, mientras que IIS375 incluso exhibió un valor EC50 menor (Tablas 3a y 3b). Otros compuestos, como IIS771 o JB391, no fueron activos en este ensayo (Fig. 6b).
Para descartar un mecanismo de acción inespecífico en el que la inhibición se debiera al bloqueo de la actividad luciferasa, utilizamos un ensayo basado en células HeLa TetOn Luc. En este ensayo, la luciferasa se expresa de manera independiente del LTR del VIH1 al ser activada con doxiciclina. IIS420 e IIS375 no inhibieron la actividad luciferasa a 100 �M, descartando una posible actividad inespecífica.
Obtención de las composiciones farmacéuticas de la presente invención
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan de una manera conocida en sí misma, por ejemplo por medio de procedimientos convencionales de mezclado, granulado, recubrimiento, disolución, emulsionado o liofilización. Opcionalmente, la fabricación de las composiciones según la presente invención incluye más etapas, tales como encapsulado liposómico.
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En particular, un comprimido puede preparase mediante compresión y moldeo, opcionalmente con uno o más componentes auxiliares. Los comprimidos preparados por compresión pueden prepararse comprimiendo el compuesto activo de la presente invención en una máquina adecuada en una forma de flujo libre, por ejemplo, un polvo o gránulos,
5  opcionalmente mezclado con componentes, tales como aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, agentes tensioactivos o de dispersión. Los comprimidos moldeados pueden prepararse moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto activo en polvo con cualquier portador adecuado.
10  En particular, puede prepararse un jarabe o suspensión añadiendo el compuesto activo de la presente invención a una disolución concentrada acuosa de un azúcar, por ejemplo, sacarosa, a la que también puede añadirse cualquier componente auxiliar. Tales componentes auxiliares pueden incluir aromatizantes, un agente para retardar la cristalización del azúcar o un agente para aumentar la solubilidad de cualquier otro
15  componente, por ejemplo, tal como un alcohol polihidroxilado, por ejemplo, glicerol o sorbitol.
Las formulaciones para administración rectal pueden prepararse con un portador convencional, por ejemplo, manteca de cacao o Witepsol S55 (marca registrada comercial).
20  Pueden encontrarse detalles específicos relacionados con aspectos particulares de procedimientos convencionales de desarrollo galénico en “Encyclopedia of pharmaceutical technology” de Swarbrick y Boylan (19882001 NY, publicado por M. Dekker).
Alternativamente, los compuestos de la presente invención pueden prepararse en liposomas
25  o microesferas (o micropartículas), comprendiendo tales métodos esencialmente disolver los compuestos de la presente invención en una disolución acuosa, añadir los fosfolípidos y lípidos apropiados, junto con surfactantes si se requiere, y dializar y sonicar el material, según sea necesario. Se detallan técnicas de encapsulado liposómico en el libro de Claudio Nastruzzi “Lipospheres in drug targets and delivery: approaches, methods, and applications”
30  (Boca Raton 2005, publicado por CRC Press) y en “Lipospheres in drug targets and delivery: approaches, methods, and applications” de Lasic y Papahadjopoulos (1998 Amsterdam, NY, publicado por Elsevier).
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EJEMPLOS
Se describe la invención adicionalmente mediante los siguientes ejemplos de realización, que son realizaciones preferidas de la invención. Estos ejemplos son ilustrativos y no limitativos. Debe entenderse por tanto que puede haber otras realizaciones que se encuentran dentro del espíritu y alcance de la invención tal como se define por las reivindicaciones adjuntas al presente documento.
Ejemplo 1: Diseño basado en estructura de inhibidores RRERev.
Modelado molecular. El análisis conformacional de una molécula terfenílica hexakissustituida con grupos bilaterales se llevó a cabo utilizando el campo de fuerzas Merck MMFF9424 integrado en el paquete de programas MOE (CGC Inc.). Se hicieron variaciones sistemáticas de las torsiones bencenobenceno en intervalos de 30º y se minimizó la energía potencial de los confórmeros. Los cálculos de docking de moléculas biy terfenílicas con diferentes patrones de sustitución se realizaron utilizando la estructura de RRE 1ETF6 y el algoritmo Dock 5.025 .
Para construir un modelo mejorado de un complejo RREterfenilo, se llevaron a cabo cálculos de docking con los programas Autodock 3.0526 y Gold 5.027 apoyados en los resultados de RMN. En base a los datos de RMN (Fig. 3), el sitio de unión del terfenilo IIS311 se definió alrededor de la base C20 y en el surco mayor del bucle interno. Los cálculos permitieron una total flexibilidad del ligando, que fue previamente minimizado con el campo de fuerzas MMFF94s de MOE (CGC Inc.). A pesar de que tanto Autodock como Gold están parametrizados para proteínas, ambos programas permiten emplear ARN como receptor y un trabajo previo había mostrado que Autodock 3.05 se comporta satisfactoriamente con este tipo de dianas28 . Los cálculos con Gold emplearon la función de ajuste GoldScore, optimizada para predecir conformaciones de unión de ligandos27 . Para los cálculos con Autodock, se asignaron cargas Amber 199429 y PEOE30 a los átomos de ARN y terfenilo, respectivamente, y la carga negativa de los grupos fosfato de ARN fue neutralizada28. Con objeto de tener en cuenta la posible flexibilidad del ARN, se utilizaron como dianas varias estructuras de RRE depositadas en el PDB: aislado (estructuras 1CSL31 y 1DUQ32) y unido al péptido Rev3450 (1ETF y 1ETG6) y a péptidos alternativos (1G7033 y 1I9F34). Los mejores resultados (Fig. 4) se obtuvieron con estructuras de RRE extraídas de complejos con Rev3450 (1ETF y 1ETG) y con estructuras de RRE aislado (1CSL y 1DUQ). Ambos algoritmos dieron lugar a energías de unión considerablemente peores con estructuras de RRE extraídas de complejos con péptidos diferentes a Rev3450 (1G70 y 1I9F). Estos resultados refuerzan la idea de que las moléculas pterfenílicas bilateralmente sustituidas mimetizan la estructura de Rev3450 en su complejo con el bucle interno de RRE. Estos resultados se muestran en la Figura 4.
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Ejemplo 2: Muestras de ARN y péptido.
El ARN RRE (SEQ ID No. 1) utilizado en los experimentos de espectroscopia de RMN y polarización de fluorescencia (FP) se adquirió de Dharmacon (Thermo Fisher Scientific Inc.) y, tras eliminar los grupos protectores 2’ACE, se purificó siguiendo un protocolo basado en electroforesis en gel y diálisis. Para los experimentos de SPR, RRE biotinilado en 5’ y dos ARN control 5’biotinaRREc (SEQ ID No. 2) y 5’biotinaTARc (SEQ ID No. 3) se adquirieron de Microsynth AG ya purificados por HPLC, y se microdializaron en un tampón HBSEP (10 mM HEPES pH 7,40, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA y 0,005% (v/v) de surfactante P20) antes de su inmovilización en chips de estreptavidina. En comparación con RRE, la horquilla RREc contiene una oposición G:G en lugar del bucle interno GGCG:ACGGUA que forma el sitio de alta afinidad de Rev, mientras que en la horquilla TARc el bucle interno de RRE es sustituido por el pequeño bucle interno UCU, reconocido por la proteína Tat del virus VIH118 .
 3450 rico en argininas (TRQARRNRRRRWRERQR) que forma la αhélice esencial para la interacción con el bucle interno del RRE20 . Con el fin de poner a punto los experimentos de FP y SPR, se utilizó un péptido similar pero sin etiquetar, succinilTRQARRNRRRRWRERQRAAAARamida (SEQ ID No. 4; identificado como revp), que también se adquirió de Genscript Inc. Ambos péptidos contienen aminoácidos AAAAR adicionales en su extremo Cterminal que favorecen la conformación αhélice21. El antibiótico de referencia neomicina B fue suministrado por Sigma. Este antibiótico, los péptidos revp y frevp, y los compuestos bifenílicos y terfenílicos, fueron disueltos en agua y congelados hasta su utilización en los ensayos de RMN, SPR, FP y celulares.
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Ejemplo 3: Experimentos de SPR indican qué compuestos pterfenílicos bilateralmente sustituidos son capaces de unirse a la horquilla RRE de manera específica y con baja estequiometría.
5  Los experimentos de resonancia de plasmón superficial (SPR) se llevaron a cabo a 25 ºC en un equipo Biacore T100 (GE Healthcare), empleando chips de cuatro canales derivatizados con estreptavidina (tipo SA serie S), y una de las siguientes disoluciones acuosas como fase móvil: 10 mM MES (pH 6.25), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA y 0.005% P20, o bien 10 mM HEPES (pH 7.40), 150 mM NaCl, 3 mM EDTA y 0.005% P20. Después de inmovilizar
10  aproximadamente 300 unidades de respuesta (RU) de las horquillas RRE, RREc y TARc en los chips, los compuestos fueron inyectados durante períodos de 10 minutos a concentraciones que oscilaron entre 0.01 o 0.1 µM y 100 o 200 �M, permitiendo a continuación un período de disociación de 10 minutos. La velocidad de flujo empleada en los experimentos fue 20 ÉL/min. Los canales de los chips fueron regenerados con disoluciones
15  acuosas compuestas por 0.51.0 M NaCl y 10100 mM NaOH, dependiendo del ligando.
Las constantes de disociación en el equilibrio de los complejos ARNligando (Kd) fueron calculadas ajustando las curvas de unión a ecuaciones de uno o dos sitios:
RU ⋅ C
RU = max + RI 1 + Kd ⋅ C
20 
RU ⋅ C RU ⋅ C
max1 max 2
RU =++ RI
1 + K ⋅ C 1 + K ⋅ C
d1 d 2
donde RU es la respuesta en la región de estado estacionario de los sensogramas, C es la concentración de compuesto libre en equilibrio con el complejo, RUmax es la respuesta máxima, y RI es un parámetro de compensación característico del índice de refracción de la 25 muestra. En estos modelos, Kd, RUmax y RI son parámetros ajustables, y la estequiometría de cada sitio de unión se determinó comparando los valores de RUmax extraídos del ajuste con los valores teóricos calculados a partir de los pesos moleculares de ARN y compuesto y de la cantidad de ARN inmovilizado en la celda de flujo35. La ecuación de dos sitios de unión únicamente fue empleada en caso de mejorar significativamente el ajuste obtenido con el 30 modelo de un solo sitio. La especificidad de la interacción con RRE fue cuantificada
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calculando los cocientes Kd(RREc)/Kd(RRE) y Kd(TARc)/Kd(RRE). Todos los experimentos de SPR fueron doblemente referenciados36 . Los resultados se muestran en la Tabla 1 y la Figura 2.
Ejemplo 4: Experimentos de espectroscopía de RMN demuestran una interacción específica entre el bucle interno de RRE y ligandos terfenílicos bilateralmente sustituidos.
Los espectros de RMN se obtuvieron utilizando espectrómetros Bruker Avance 500 MHz y Bruker Avance 600 MHz equipado con criosonda, y se analizaron mediante Topspin 1.3 (Bruker Biospin) y Sparky 3.11037 . Las muestras de RRE (habitualmente a una concentración de 60 �M) fueron previamente microdializadas en una disolución acuosa compuesta por 10 mM fosfato sódico (pH 6.0) y 0.1 mM EDTA. La interacción entre estas muestras de RRE y los compuestos bifenílicos y terfenílicos fue monitorizada a través de experimentos monodimensionales y bidimensionales (TOCSY) en D2O. Partiendo de RRE aislado, el ARN fue valorado progresivamente con ligando hasta obtener una proporción molar RRE:ligando entre 1:2 y 1:6, dependiendo de los cambios observados en los espectros. La interacción entre RRE y el antibiótico de referencia neomicina B fue monitorizada mediante un procedimiento similar. Los resultados se muestran en la Figura 3.
Los complejos de RRE con los mejores ligandos (IIS420, IIS375 e IIS806) se estudiaron empleando mayor concentración de ARN (entre 0.12 y 0.18 mM) y proporciones molares RRE:terfenilo 1:1 y 1:2. Estos sistemas fueron examinados con más detalle mediante series de experimentos dqfCOSY, TOCSY y NOESY (con tiempos de mezcla entre 100 y 800 ms), así como con experimentos monodimensionales de transferencia de saturación. Todos estos experimentos fueron obtenidos en D2O a varias temperaturas (habitualmente 13, 25 y 38 ºC).
Una muestra de RRE aislado (0.39 mM), previamente microdializada en una disolución acuosa compuesta por 10 mM fosfato sódico (pH 6.0) 50 mM NaCl y 0.1 mM EDTA, también se estudió mediante experimentos bidimensionales TOCSY, dqfCOSY y NOESY (normalmente con tiempos de mezcla de 80 y 250 ms) obtenidos a tres temperaturas diferentes (13, 27 y 38 ºC) en D2 2O. Estos espectros fueron utilizados para identificar la mayor parte de los protones de RRE, utilizando como apoyo análisis previos de secuencias RRE38 .
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Ejemplo 5: Experimentos de polarización de fluorescencia indican que los ligandos bifenílicos y terfenílicos inhiben la interacción RRERev3450 in vitro.
La capacidad de los ligandos bifenílicos y terfenílicos de inhibir la interacción RRERev3450 se evaluó mediante un ensayo de desplazamiento basado en anisotropía de fluorescencia. Para este experimento se empleó el péptido frevp etiquetado con el fluoróforo FITC (SEQ ID. No. 5) y la horquilla de ARN RRE (SEQ. ID. No 1). Los experimentos se realizaron a 25 ºC utilizando un lector de placas Víctor X5 (Perkin Elmer Inc.) provisto de filtros de excitación y emisión de 480 y 535 nm, respectivamente, placas de 96 pocillos, y un tampón acuoso compuesto por 30 mM HEPES (pH 6.8), 100 mM KCl, 10 mM fosfato sódico, 10 mM acetato amónico, 10 mM cloruro de guanidinio, 2 mM MgCl2, 20mM NaCl, 0.5 mM EDTA y 0.001% (v/v) Triton X10039 .
RRE (a una concentración de 2 o 60 nM) y frevp (10 nM) fueron incubados en presencia de concentraciones crecientes de inhibidor durante 5 minutos. Los datos de anisotropía se recopilaron a continuación cada 5 minutos durante un total de 15 minutos, para comprobar que se alcanzara un estado de equilibrio. Los valores de IC50 fueron calculados ajustando la anisotropía observada (Aobs) a la siguiente ecuación mediante el programa GraphPad Prism (GraphPad Software Inc.):
( − A
Ab f )
A +
Aobs = f
[I ]
1 + ()m
IC50
donde Af y Ab son los valores de anisotropía medidos para frevp aislado y unido a RRE, respectivamente, [I] es la concentración total de inhibidor, IC50 es la concentración de inhibidor necesaria para producir una inhibición del 50%, y m es la pendiente de la parte lineal de la curva sigmoidea.
Las constantes de inhibición (Ki) fueron calculadas a partir de los valores de IC50 utilizando la siguiente ecuación:
[L]
log(Ki ) t
log(IC50 ) = log(10 ⋅ (1 + )) Kd
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donde [L]t es la concentración total de frevp y Kd es la constante de disociación RREfrevp. Estos valores únicamente se calcularon para inhibidores competitivos capaces de unirse específicamente al bucle interno de RRE con bajas estequiometrías, según los experimentos de SPR y/o RMN. Los resultados se muestran en la Figura 5 y en la Tabla 2.
Ejemplo 6: Plásmidos, virus y células.
El vector pNL4.3Luc fue generado clonando el gen luciferasa en la región nef del clon proviral pNL4.340. El plásmido pNL4.3Ren fue generado clonando el gen renilla en la región nef del clon proviral pNL4.341 .
Células MT2 (American Type Culture Collection, Rockville, MD)42  2 al 5% y pasadas dos veces a la semana.
Ejemplo 7: Ensayos celulares muestran que los inhibidores de RRERev3450 bloquean la replicación del VIH1 in vivo y producen este efecto a nivel posttranscripcional.
Evaluación de la actividad antiVIH1. Los sobrenadantes infecciosos fueron obtenidos mediante transfección de los plásmidos en células 293T mediante fosfato cálcico. Estos sobrenadantes fueron utilizados para infectar células MT2 en placas de 96 pocillos de fondo en U en presencia de diferentes concentraciones de los compuestos. La cuantificación de la actividad antiviral se realizó 48 horas después de la infección. Para ello, las células fueron lisadas con 100 ÉL/pocillo del tampón apropiado (Luciferase Assay System Kit with Reporter Lysis Buffer o Renilla Lysis Buffer, Promega, Madison, WI). Las unidades relativas de luminiscencia (RLUs) se obtuvieron en un luminómetro (Berthold Detection Systems, Pforzheim, Germany) después de añadir el sustrato a los extractos celulares. La viabilidad celular fue evaluada en células tratadas de igual manera que en los ensayos de infección pero sin infectar. Después de 48 horas, la viabilidad se cuantificó
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mediante el sistema CellTiter Glo (Promega) siguiendo las instrucciones del fabricante. La concentración inhibidora 50% (EC50) y la concentración citotóxica 50 % (CC50) se calcularon mediante el programa GraphPad Prism. Los resultados se muestran en la Tabla 3a y Figura 6a. Para el ensayo HeLa TetOn Luc, se sembraron células HeLa TetOn Luc en placas de 5  
10  muestran en la Tabla 3a y Figura 6a.
Ensayos de Transfección. Células MT2 se mantuvieron en cultivo sin estímulos y antes del ensayo se resuspendieron en 350 ÉL de RPMI sin suero y antibióticos y se transfectaron a 320 V, 1500 �F y resistencia máxima con los plásmidos a una concentración de 0.5 �g/106 15 células con un Easyject plus Electroporator (Equibio, Middlesex, UK). Después de la transfección, las células fueron inmediatamente cultivadas en RPMI completo suplementado con suero fetal bovino, glutamina y antibióticos, y tratadas o no con diferentes concentraciones de compuestos. Las células fueron recogidas 48 horas después y lisadas con el buffer de lisis Luciferasa (Promega). Las RLUs fueron cuantificadas en un
20  luminómetro. Los resultados se muestran en la Tabla 3b y Figura 6b.
Ejemplo 8: Síntesis de compuestos bifenílicos y terfenílicos bilateralmente sustituidos.
Los fragmentos de partida 1 y 2 fueron piezas clave para la introducción de la agrupación
25  amínica en la molécula final. El fragmento 1 se preparó a partir del reactivo comercial 4bromo3,5dimetilfenol (6). El grupo fenol de 6 se alquiló con yodometano y, a continuación, se llevó a cabo la oxidación del éster metílico resultante. La esterificación del ácido carboxílico 8 dio lugar al compuesto 9, cuya posterior reducción con LiBH4 (borohidruro de litio), seguida del tratamiento con NBS (Nbromosuccinimida) y NaCN (cianuro sódico)
30  originó el fragmento 1 con buen rendimiento (Esquema 2).
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Reactivos y condiciones: (a) CH3I, K2CO3, acetona, reflujo, 12 h, cuantitativo; (b) KMnO4, tBuOH:H2O, 100 ºC, 18 h, 68%; (c) MeOH, H2SO4, temp. ambiente, 12 h, 85%; (d) LiBH4, THF, temp. ambiente, 12 h, 95%; (e) NBS, PPh3, THF, temp. ambiente, 12 h, 85%; (f) NaCN,
5 KI, éter 18corona6, CH3CN:H2O, temp. ambiente, 24 h, 68%.
Esquema 2
La síntesis del fragmento 2 se muestra en el Esquema 3. La reacción entre el reactivo comercial 12 con formaldehido dio lugar al alcohol 13. La posterior protección selectiva del grupo fenol en el compuesto 13 originó los intermedios 14ac. La bromación de los
10  derivados 14 seguida de la sustitución nucleófila con NaCN llevó a la obtención de una pequeña quimioteca de derivados 2 bromofenólicos Oprotegidos.
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Reactivos y condiciones: (a) HCHO, aq NaOH 25%, 40 ºC, 48 h, 51%; (b) BrCH2R5, K3PO4, acetona, temp. ambiente, 12 h; (c) NBS, PPh3, THF, temp. ambiente, 24 h; (d) NaCN, KI, éter 18corona16, CH3CN:H2O, temp. ambiente, 24 h.
Esquema 3
Como se mencionó anteriormente, la ruta sintética propuesta se basa en una secuencia de reacciones de acoplamiento cruzado de tipo Suzuki mediante el empleo de diferentes ésteres aril borónicos. Los ésteres borónicos 3 utilizados proceden de fuentes comerciales a excepción de 3d y 3e.
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Los derivados vinílicos 3d y 3e se sintetizaron tal como se muestra en el Esquema 4. En primer lugar, se preparó el dialdehido  mediante la reacción de Duff a partir de 4bromofenol comercial. Ambos precursores 16a y 16b siguieron la misma ruta sintética que consistió en la protección del fenol con bencilo (Bn), posterior reacción de Wittig con MePh3PBr, y por último, formación del éster borónico catalizada por paladio mediante radiación por microondas.
Br Br
imagen67(b) O
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R3
R4 R3 OH OBn
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12: R3, R4= H 16a: R3, R4= CHO
(a) 17a: R3= CHO 50% 17b: R3= H 96%
16b: R3= H, R4= CHO
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18a: R3= vinil 45% 3d: R3= vinil 40% 18b: R3= H 78% 3e: R3= H 55%
Reactivos y condiciones: (a) Reacción de Duff, TFA, hexametilentetramina, 150 ºC, 48 h, 50%; (b) BrBn, K3PO4, acetona, reflujo, 8 h; (c) MePh3PBr, NaH, THF, 0 ºC, 16 h; (d)
10 bis(pinacolato) de boro, KOAc, PdCl2(dppf), dioxano, 30 min, 120 ºC MW.
Esquema 4
Una vez preparados los sustratos de partida, se desarrolló la síntesis complementaria de sistemas bifenílicos combinando los fragmentos 1 y 2 (Esquema 5). De ese modo, aunque las moléculas objetivo fueran más complejas, fue posible evaluar la afinidad por el ARN viral
15 y la actividad inhibitoria de las estructuras biarílicas.
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ºC MW, 60%; (b) Pd(OAc)2, PPh3, K3PO4, DMSO, 12 h, 125 ºC MW, 20a 42%, 20b 44%.
Esquema 5
5  Como se muestra en el Esquema 5, el intermedio 19a se obtuvo a través de una reacción de acoplamiento cruzado catalizada por paladio entre el compuesto 2a y bis(pinacolato) de boro. Un posterior acoplamiento de éster borónico 19a con los fragmentos 1 y 2a dio lugar a los bifenilos 20a y 20b respectivamente. Además, se pudo observar que la reacción de homoacoplamiento de 1 era posible a través de un proceso onepot en el cual el intermedio
10  borónico se formaba in situ (Esquema 6).
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Reactivos y condiciones: (a) bis(pinacolato) de boro, K3PO4, PdCl2(dppf), DME, 60 min, 125 ºC MW, 84%.
Esquema 6
15  El siguiente paso de la secuencia sintética consistió en el tratamiento de los nitrilos 20ac con una disolución del complejo de boro tetrahidrofurano seguido de HCl 4M en dioxano para dar las sales de amonio 22ab (Esquema 7). Adicionalmente, los derivados bencilados 20ab se sometieron a una hidrólisis previa para dar los alcoholes 21ab.
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Reactivos y condiciones: (a) Pd/C (10 mol%), H2 1 atm, temp. ambiente, 2 h, quantitativo; (b) 5 BH3, THF, reflujo, 5 dias entonces HCl 4 M en dioxano.
Esquema 7
Basándose en la estrategia sintética propuesta, el terfenilo deseado 5 se preparó como se
indica a continuación. En primer lugar, se llevó a cabo la reacción de acoplamiento cruzado
de tipo Suzuki entre el sintón de partida 1 y los distintos ésteres aril borónicos 3ae 10 empleando las condiciones de reacción optimizadas (Esquema 8). La eliminación del grupo
bencilo en los compuestos 23de y la posterior transformación de los fenoles 23ac y 24ab
en sus correspondientes triflatos, generó  con buenos rendimientos. Por otra parte, la
preparación de los ésteres borónicos 19bd (Esquema 9), previa al acoplamiento con los
triflatos 25, se llevó a cabo mediante una reacción de acoplamiento con bis(pinacolato) de 15 boro catalizada por paladio bajo radiación microondas, siguiendo el mismo procedimiento
descrito anteriormente para 2a (R5= Ph).
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Reactivos y condiciones: (a) K3PO4, PdCl2(dppf), CH3CN:H2O (7:3), 30 min, 120 ºC MW; (b) H2, Pd(OH)2, EtOH, temp. ambiente, 12 h; (c) Tf2O, pyridine, CH2Cl2, temp. ambiente, 2 h.
Esquema 8
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Reactivos y condiciones: (a) bis(pinacolato)de boro, KOAc, PdCl2(dppf), dioxano, 30 min, 120 ºC MW.
Esquema 9
A continuación, un último acoplamiento de Suzuki entre los triflatos 25 y los ésteres 10 borónicos 19 generó los derivados terfenílicos deseados 4ag, los cuales fueron transformados en sus correspondientes sales de amonio 5 por medio de una reducción con BH3/THF seguida de un tratamiento con HCl 4M en dioxano.
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Reactivos y condiciones: (a) K3PO4, PdCl2(dppf), CH3CN:H2O (7:3), 30 min, 120 ºC MW; (b) 5 BH3, THF, reflujo, 5 dias entonces HCl 4 M en dioxano.
Esquema 10
Adicionalmente, se procedió a eliminar el grupo bencilo de los derivados 4ae empleando condiciones estándar de reacción para dar las sales de amonio correspondientes 5hl de forma cuantitativa, tal como se muestra en el Esquema 11. De esta manera, se ha
10  preparado una variada quimioteca de biy terfenilos estratégicamente funcionalizados con el fin de evaluar su afinidad por el ARN viral y actividad inhibitoria frente al virus VIH1.
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Reactivos y condiciones: (a) Pd/C (10 mol%), H2 1 atm, temp. ambiente, 2 h,cuantitativo.
Esquema 11
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Bibliografía
1.
Richman, D.D. et al. The challenge of finding a cure for HIV infection. Science 323, 13047 (2009).
2.
Ward, C.J. New drugs for HIV1: challenges and novel candidates. Expert Rev Anti Infect Ther 8, 10935 (2010).
3.
Sharp, P.A. The centrality of RNA. Cell 136, 57780 (2009).
4.
Gallego, J. & Varani, G. Targeting RNA with Small Molecule Drugs: Therapeutic Promise and Chemical Challenges. Acc. Chem. Res. 34, 836843 (2001).
5.
Hermann, T. Drugs targeting the ribosome. Curr Opin Struct Biol 15, 35566. (2005).
6.
Battiste, J.L. et al. a HelixRNA Major Groove Recognition in an HIV1 Rev PeptideRRE RNA Complex. Science 273, 15471551 (1996).
7.
Daugherty, M.D., Booth, D.S., Jayaraman, B., Cheng, Y. & Frankel, A.D. HIV Rev response element (RRE) directs assembly of the Rev homooligomer into discrete asymmetric complexes. Proc Natl Acad Sci U S A 107, 124816 (2010).
8.
DiMattia, M.A. et al. Implications of the HIV1 Rev dimer structure at 3.2 A resolution for multimeric binding to the Rev response element. Proc Natl Acad Sci U S A 107, 58104 (2010).
9.
Pollard, V.W. & Malim, M.H. The HIV1 Rev protein. Annu Rev Microbiol 52, 491532 (1998).
10.
Pond, S.J., Ridgeway, W.K., Robertson, R., Wang, J. & Millar, D.P. HIV1 Rev protein assembles on viral RNA one molecule at a time. Proc Natl Acad Sci U S A 106, 14048 (2009).
11.
Groom, H.C., Anderson, E.C. & Lever, A.M. Rev: beyond nuclear export. J Gen Virol 90, 130318 (2009).
12.
Blissenbach, M., Grewe, B., Hoffmann, B., Brandt, S. & Uberla, K. Nuclear RNA export and packaging functions of HIV1 Rev revisited. J Virol 84, 6598604 (2010).
13.
Yin, H. et al. Terphenylbased helical mimetics that disrupt the p53/HDM2 interaction. Angewandte ChemieInternational Edition 44, 27042707 (2005).
14.
Suzuki, A. Carbon–carbon bonding made easy. Chem. Commun., 47594763 (2005).
15.
Leadbeater, N. Fast, easy, clean chemistry by using water as a solvent and microwave heating: the Suzuki coupling as an illustration. Chem. Commun., 28812902 (2005).
16.
Nicolaou, K.C., Bulger, P.G. & Sarlah, D. PalladiumCatalyzed CrossCoupling Reactions in Total Synthesis. Angew Chem Int Ed Engl 44, 44424489 (2005).
17.
Tanious, F.A., Nguyen, B. & Wilson, W.D. Biosensorsurface plasmon resonance methods for quantitative analysis of biomolecular interactions. Methods Cell Biol 84, 5377 (2008).
18.
Dingwall, C. et al. HIV1 tat protein stimulates transcription by binding to a Urich bulge in the stem of the TAR RNA structure. EMBO J 9, 414553 (1990).
19.
GonzalezBulnes, L. & Gallego, J. Analysis of mixed DNAbisnaphthalimide interactions involving groove association and intercalation with surfacebased and solution methodologies. Biopolymers doi: 10.1002/bip.22114(2012).
20.
Kjems, J., Calnan, B.J., Frankel, A.D. & Sharp, P.A. Specific binding of a basic peptide from HIV1 Rev. EMBO J 11, 111929 (1992).
21.
Tan, R., Chen, L., Buettner, J.A., Hudson, D. & Frankel, A.D. RNA recognition by an isolated alpha helix. Cell 73, 103140 (1993).
22.
Lacourciere, K.A., Stivers, J.T. & Marino, J.P. Mechanism of neomycin and Rev peptide binding to the Rev responsive element of HIV1 as determined by fluorescence and NMR spectroscopy. Biochemistry 39, 563041 (2000).
23.
Hendrix, M., Priestley, E.S., Joyce, G.F. & Wong, C.H. Direct observation of aminoglycosideRNA interactions by surface plasmon resonance. J Am Chem Soc 119, 36418 (1997).
24.
Halgren, T.A. Merck molecular force field .1. Basis, form, scope, parameterization, and performance of MMFF94. Journal of Computational Chemistry 17, 490519 (1996).
25.
Moustakas, D.T. et al. Development and validation of a modular, extensible docking program: DOCK 5. Journal of ComputerAided Molecular Design 20, 601619 (2006).
26.
Morris, G.M. et al. Automated Docking using a Lamarckian Genetic Algorithm and an Empirical Binding Free Energy Function. J. Comp. Chem. 19, 16391662 (1998).
27.
Verdonk, M.L., Cole, J.C., Hartshorn, M.J., Murray, C.W. & Taylor, R.D. Improved proteinligand docking using GOLD. Proteins 52, 60923. (2003).
28.
Detering, C. & Varani, G. Validation of automated docking programs for docking and database screening against RNA drug targets. J Med Chem 47, 4188201. (2004).
29.
Cornell, W.D. et al. A second generation force field for the simulation of proteins, nucleic acids, and Organic Molecules. J. Am. Chem. Soc. 117, 51795197 (1995).
30.
Gasteiger, J. & Marsili, M. Iterative Partial Equalization of Orbital Electronegativity a Rapid Access to Atomic Charges. Tetrahedron 36, 32193228 (1980).
31.
Ippolito, J.A. & Steitz, T.A. The structure of the HIV1 RRE high affinity rev binding site at 1.6 A resolution. J Mol Biol 295, 7117 (2000).
32.
Hung, L.W., Holbrook, E.L. & Holbrook, S.R. The Crystal Structure of the Rev Binding Element of HIV1 Reveals Novel Base Pairing and Conformational Variability. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 51075112 (2000).
33.
Gosser, Y. et al. PeptideTriggered Conformational Switch in HIV1RRE RNA Complexes. Nature Struct. Biol. 8, 146152 (2001).
34.
Zhang, Q., Harada, K., Cho, H.S., Frankel, A.D. & Wemmer, D.E. Structural characterization of the complex of the Rev response element RNA with a selected peptide. Chem Biol 8, 51120 (2001).
35.
Nguyen, B., Tanious, F.A. & Wilson, W.D. Biosensorsurface plasmon resonance: quantitative analysis of small moleculenucleic acid interactions. Methods 42, 15061 (2007).
36.
Myszka, D.G. Improving biosensor analysis. J Mol Recognit 12, 27984 (1999).
37.
Goddard, T.D. & Kneller, D.G. Sparky 3.110. University of California, San Francisco, USA (2004).
38.
Peterson, R.D., Bartel, D.P., Szostak, J.W., Horwath, S.J. & Feigon, J. 1H NMR Studies of the HighAffinity Rev Binding Site of the Rev Responsive Element of HIV1 mRNA: Base Pairing in the Core Binding Element. Biochemistry 33, 53575366 (1994).
39.
Luedtke, N.W. & Tor, Y. Fluorescencebased methods for evaluating the RNA affinity and specificity of HIV1 RevRRE inhibitors. Biopolymers 70, 10319 (2003).
40.
Adachi, A. et al. Production of acquired immunodeficiency syndromeassociated retrovirus in human and nonhuman cells transfected with an infectious molecular clone. J Virol 59, 28491 (1986).
41.
GarciaPerez, J., SanchezPalomino, S., PerezOlmeda, M., Fernandez, B. & Alcami,
J. A new strategy based on recombinant viruses as a tool for assessing drug susceptibility of human immunodeficiency virus type 1. J Med Virol 79, 12737 (2007).
42.
Harada, S., Koyanagi, Y. & Yamamoto, N. Infection of HTLVIII/LAV in HTLVIcarrying cells MT2 and MT4 and application in a plaque assay. Science 229, 5636 (1985).
imagen83
imagen84

Claims (12)

  1. imagen1
    REIVINDICACIONES
    1. Compuesto de Fórmula general (I)
    imagen2
    5 
    (I)
    donde:
    10  A, B y C representan independientemente uno del otro anillos de seis átomos seleccionados del grupo que consiste en benceno, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, ciclohexano, oxano, piperidina y piperazina,
    los anillos de seis átomos A, B y C están unidos en para mediante enlaces 15 simples,
    los sustituyentes R1, R2, R3, R4, R5 y R6 ocupan posiciones orto o meta respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
    20  los sustituyentes R7 y R8 ocupan posiciones para respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
    R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del 25 otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil
    imagen3
    amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
    R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
    R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
    R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo, alquilo, aril alcoxi y aril éster,
    y sus sales, ésteres, isómeros, solvatos, hidratos y profármacos.
  2. 2. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque en la Fórmula general (I)
    A, B y C son benceno,
    R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y meta respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos,
    R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno A, y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1C6) alcoxi, (C1C6) alquil amida sustituida o no sustituida, (C1C6) alquil ester sustituido o no sustituido, (C1C6) hidroxialquilo, (C1C6) haloalquilo, (C1C6) alcoxialquilo, y (C1C8) alquilo,
    imagen4
    R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos,
    R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1C10) alcoxi, (C1C10) alquil amina, (C1C10) alquil guanidina, (C1C10) alquil amida, (C1C10) alquil éster, (C1C10) hidroxialquilo, (C1C10) alcoxialquilo, (C1C10) haloalquilo, (C1C10) alquilo, aril alcoxi, y aril éster.
    y sus sales, ésteres, isómeros, solvatos, hidratos y profármacos.
  3. 3. Compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado por estar seleccionado del grupo que comprende:
    2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',4''dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol 2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
    tetrail)tetraetilamina
    2,2',2'',2'''(3',4dimetoxi4''((4(trifluorometil)bencil)oxi)[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina 2,2',2'',2'''(4''(ciclohexilmetoxi)3',4dimetoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
    tetrail)tetraetilamina 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)4''metoxi2',6'dimetil[1,1':4',1''terfenil]4ol 2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)4metoxi3',5'dimetil[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
    tetrail)tetraetilamina 2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2'etil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol 2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3'etil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6
    tetrail)tetraetilamina
    59 
    imagen5
    2'',3,5,6''tetrakis(2aminoetil)2',6'dietil4''metoxi[1,1':4',1''terfenil]4ol
    2,2',2'',2'''(4''(benciloxi)3',5'dietil4metoxi[1,1':4',1''terfenil]2,3'',5'',6tetrail)tetraetilamina, y sus sales, esteres, isómeros, solvatos, hidratos y profármacos.
    5 
  4. 4.
    Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso como medicamento.
  5. 5.
    Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para el
    10  tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH1) y/o otras enfermedades causadas por otros virus ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la función de bucles internos de ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición o mimetismo de dominios
    15  proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
  6. 6. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o terapéutico de infecciones causadas por virus ARN.
    20 
  7. 7. Uso de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado por que el tratamiento profiláctico y/o terapéutico esta destinado al virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH1).
    25  8. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o terapéutico de, enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la función de bucles internos de ARN.
    30  9. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o terapéutico de enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición
    imagen6
    o mimetismo de dominios proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
  8. 10. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de Fórmula
    5  general (I), de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o su sal farmacéuticamente aceptable, éster, solvato, isómero, hidrato o profármaco y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  9. 11. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 para el
    10  tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH1) y/o enfermedades causadas por otros virus ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la función de bucles internos de ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición o mimetismo de dominios
    15  proteicos de αhélice en interacción con otras biomoléculas.
  10. 12. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10 y 11 caracterizada por contener de 0,05% 80% (en peso) de al menos un compuesto de Fórmula general (I).
    20 
  11. 13.
    Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 formulada para su administración parenteral, oral, tópica, nasal y/o rectal.
  12. 14.
    Método de obtención de los compuestos de Fórmula general (I) de acuerdo con
    25  cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende la formación de sucesivos enlaces CC por acoplamientos de Suzuki entre halogenuros, ariltriflatos y ésteres borónicos de los anillos de 6 miembros A, B y C conteniendo grupos bilaterales, catalizados por paladio, caracterizado por qué los derivados halogenuro de A y C introducen R1, R2, R5, y R6 y el éster borónico
    30  de B introduce R3 y R4 en los compuestos de Fórmula general (I).
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017034997A1 (en) 2015-08-21 2017-03-02 Portola Pharmaceuticals, Inc. Phenylpiperazine proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (pcsk9) modulators and their use
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US10865185B2 (en) 2015-08-21 2020-12-15 Srx Cardio, Llc Composition and methods of use of tetrahydroisoquinoline small molecules to bind and modulate PCSK9 protein activity
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CN110872213A (zh) * 2018-08-31 2020-03-10 西安力邦肇新生物科技有限公司 Gabaa受体变构增强化合物及其制备和用途
US12115154B2 (en) 2020-12-16 2024-10-15 Srx Cardio, Llc Compounds for the modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9)
CN113582863B (zh) * 2021-08-19 2023-05-26 沈阳农业大学 一种氨乙基联苯类化合物及其制备方法和用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110046147A1 (en) * 2007-08-25 2011-02-24 Universitat Des Saarlandes 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 inhibitors for the treatment of hormone-related diseases

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3720690A (en) 1970-04-10 1973-03-13 Fisons Pharmaceuticals Ltd Pharmaceutically active bis-carboxychromone compounds
US6071319A (en) * 1998-12-22 2000-06-06 Chevron Chemical Company Llc Fuel additive compositions containing aromatic esters of polyalkylphenoxyalkanols and aliphatic amines
EP1408986B1 (en) * 2001-05-08 2008-09-24 Yale University Proteomimetic compounds and methods
US7579350B2 (en) 2005-03-11 2009-08-25 The Scripps Research Institute Scaffolds for α-helix mimicry
JP5544775B2 (ja) * 2008-07-29 2014-07-09 住友化学株式会社 燐光発光性化合物を含む組成物及び該組成物を用いてなる発光素子
WO2010083501A2 (en) * 2009-01-16 2010-07-22 University Of South Florida Alpha-helix mimetic using a 2,5-oligopyrimidine scaffold
CN102781898B (zh) * 2009-11-05 2014-12-24 菲布他丁有限合伙公司 使用q2拟肽的gpbp抑制

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110046147A1 (en) * 2007-08-25 2011-02-24 Universitat Des Saarlandes 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 inhibitors for the treatment of hormone-related diseases

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CLOUSER, C.L. et al.¿Anti-HIV-1 activity of resveratrol derivatives and synergistic inhibition of HIV-1 by the combination of resveratrol and decitabine.¿ Biological & Medicinal Chemistry Letters 2012, Volumen 22, páginas 6642-6646. [Disponible en línea el 06.09.2012]. Ver página 6642, resumen; página 6643, figura 1; página 6644, columna 1, párrafos 1-2; esquema 2; página 6645, columna 2, párrafo 3; tablas 1 y 2. *
ORTEGA, A. et al. ¿Synthesis and evaluation of arylquinones as BACE1 inhibitors, ¿ -amyloid peptide aggregation inhibitors, and destabilizers of preformed ¿-amyloid fibrils¿. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2011, Volumen 21, páginas 2183-2187. [Disponible en línea el 13.03.2011]. Ver página 2183, resumen; página 2184, figura 1. *
SINGH, S.B. et al.¿Isolation, structure, and HIV-1-integrase inhibitory activity of structurally diverse fungal metabolites.¿ Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 2003, Volumen 30, páginas 721-731. [Disponible en línea el 09.01.2003]. Ver página 721, resumen; página 727, compuestos 8 y 9; página 728, tabla 1. *
STEVENS, C.B. et al. ¿Synthesis of tetrahydroxybiphenyls and tetrahydroxyterphenyls and their evaluation as amyloid-¿ aggregation inhibitors¿. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2013, Volumen 23, páginas 1703-1706. [Disponible en línea el 04.02.2013]. Ver página 1703, resumen; página 1704, esquema 1. *
TSYGANKOVA, I.G. & ZHENODAROVA, S.M. ¿The Structure-Activity Correlation in a Series of Stilbene Derivatives and Related Compounds, the Inducers of Apoptosis¿. Russian Journal of General Chemistry 2011, Volumen 81, Número 5, páginas 913-919. [Disponible en línea el 13.03.2011]. Ver página 913, resumen; página 915, tabla 1. *

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