ES2331420T3 - Composiciones basadas en el factor inmuno-estimulante t-4 ("tisf") para el tratamiento de la carencia de globulos rojos, granulocitos y plaquetas. - Google Patents

Abstract

Composición que comprende el factor inmunoestimulante T-4 ("TISF") para tratar las carencias de uno o más tipos de células sanguíneas, en donde el tipo de células se elige entre el grupo formado por glóbulos rojos, plaquetas y glóbulos blancos.

Description

Composiciones basadas en el factor inmuno-estimulante T-4 ("TISF") para el tratamiento de la carencia de glóbulos rojos, granulocitos y plaquetas.

Referencia cruzada a aplicaciones relacionadas

Esta solicitud reivindica la prioridad a tenor del 35 U.S.C. \NAK 119(e) de la Solicitud Serial Provisional de E.E.U.U. nº 60/501,959, presentada el 10 de Septiembre de 2003.

Antecedentes de la invención

La sangre de los mamíferos contiene una amplia variedad de diferentes tipos de células, comprendidos los glóbulos rojos (eritrocitos), las plaquetas y los glóbulos blancos (leucocitos). A su vez, los glóbulos blancos (leucocitos) comprenden varios tipos diferentes de células, especialmente los linfocitos, los monocitos y muchos diferentes tipos de granulocitos como los neutrófilos, los eosinófilos y los basófilos. Todos estos diversos tipos de células constituyen la mayor parte del complejo y crítico sistema inmunológico de los mamíferos. La mayoría de ellas tienen una vida corta y deben sustituirse cada pocas horas, días, semanas o meses, y todas ellas se forman por la diferenciación y proliferación de un tipo único de células madre pluripotentes que residen en la médula ósea.

El proceso por el que una única clase de células madre se diferencia para formar muchas células maduras diferentes que no pueden proliferar por sí mismas se llama hematopoyesis. Supone la formación de precursores para cada una de las diferentes clases de células de una única clase de células madre, que se da en la médula ósea, y la proliferación y diferenciación en los tipos especializados de células, que se da principalmente en la médula ósea, el bazo, el timo y los ganglios linfáticos. El proceso lo controla un complejo sistema de señales que trata de mantener un equilibrio adecuado entre todos estos tipos diferentes de células para que el sistema inmunológico funcione eficazmente.

Algunas afecciones patológicas e infecciones afectan dramáticamente a la hematopoyesis, lo que resulta en la merma de ciertos tipos de células sanguíneas. Por ejemplo, la infección por VIH produce anemia (deficiencia de glóbulos rojos), neutropenia (deficiencia de neutrófilos) o trombocitopenia (deficiencia de plaquetas) o diversas combinaciones de estas afecciones, incluida la pancitopenia, que es una deficiencia de todos los diferentes tipos de células sanguíneas. Véase N. K. Banda, et al., Depletion of CD34+CD4+ Cells in Bone Marrow from HIV-1 Infected Individuals, (Merma de células CD34+CD4+ en la médula ósea de individuos afectados por VIH), Biol. Blood and Marrow Transplantation, 5(3), 162-172 (1999). Véase también D. Fuchs, et al., AIDS, 5 (2), 209-212 (1991). De igual modo, ciertos regímenes de radiación y quimioterapia pueden comprometer seriamente el sistema inmunológico al mermar uno o más de estos tipos de células. Véase C.L. Mackall, Stem Cells (Células madre) 18, 10-18 (2000). La radioterapia, por ejemplo, puede destruir la mayoría de las muy sensibles y extremadamente raras células madre, lo que produce incapacidad para regenerar rápidamente los componentes celulares de la sangre.

Tanto si la causa es un trastorno orgánico, como una infección o un tratamiento terapéutico, la carencia severa de cualquiera de estos componentes celulares en la sangre y en el sistema inmunológico puede dar lugar a la aparición de síntomas físicos directos (como anemia, donde se da una merma de glóbulos rojos, o alteraciones hemorrágicas, cuando hay merma de plaquetas) o bien a una considerable susceptibilidad a infecciones secundarias. Por lo tanto, se necesitan métodos para tratar las carencias de diversos tipos de células sanguíneas, y así mismo métodos para prevenir dichas carencias que de otro modo se originarían por tratamientos u otros trastornos como cánceres o infecciones virales. La presente invención suministra métodos para aumentar los niveles de diversos tipos de células sanguíneas en sujetos que experimenten carencia en el nivel de uno o más tipos de células sanguíneas.

Breve resumen de la invención

Se ha observado que el factor inmuno-estimulante T-4 ("TISF") proporciona una actividad de sobre-inmunización, según parece debido a su capacidad para estimular la producción de IL-2 por espacio de varios días en el sitio donde se lo necesita. Véase la patente de E.E.U.U. nº 5,616,554. En dicha patente se describe la molécula como una proteína 50K Dalton con un punto isoeléctrico de 6,5. En el presente documento queda demostrado que la misma entidad molecular contiene la capacidad de fomentar la hematopoyesis, posiblemente por su conocido mecanismo de acción para estimular los linfocitos CD4+. Se supone que los linfocitos CD4+ pueden regular la producción de todo tipo de células sanguíneas en la médula ósea, incluidos los glóbulos rojos, las plaquetas y los granulocitos. Así pues, una carencia en linfocitos CD4 podría llevar a la pancitopenia observada en sujetos con riesgo inmunológico, incluidos los pacientes de cáncer sometidos a quimioterapia, o con afecciones virales o bajo otro tipo de condiciones químicas inducidas.

En la patente anterior se observaba que la administración de TISF aumenta la eficacia de la vacuna contra el moquillo en perros, aumenta el título de anticuerpo al virus de la gripe en ratones y reduce los síntomas del virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) en gatos. Así pues, muestra capacidad para mejorar la eficacia de un sistema inmunológico saludable. Se ha observado así mismo que el TISF también actúa en la estimulación de ciertos tipos de células sanguíneas en las que se ha desarrollado una carencia de dichas células. Así, se ha observado que el TISF acelera la recuperación del índice de plaquetas tras una carencia de plaquetas inducida por quimioterapia en un sistema murino modelo.

Es bien sabido que los pacientes de SIDA sufren una grave carencia de linfocitos CD4+, pero lo que no es tan sabido es que muchos sujetos inmunodeficientes tienen anemia, granulocitopenia y trombocitopenia concomitantes. De hecho, un paradigma emergente en oncología es que los pacientes de cáncer sufren una grave carencia crónica de linfocitos CD4+. C.L. Mackall, Stem Cells, 18, 10-18 (2000).

En el presente documento consta la observación hecha en estudios con gatos infectados con el virus de inmunodeficiencia felina (VIF) y el virus de leucemia felina, a saber, que cuando se aumentaron los linfocitos mediante la administración de TISF (que es sobre lo que trata el estudio y la Patente de E.E.U.U. nº 5,616,554), también aumentaron los glóbulos rojos, las plaquetas y los granulocitos. Véanse las Figuras 1, 2, 3 y 4. Sobre la base de estas observaciones preliminares, se usó un ratón modelo con carencia de plaquetas inducida por quimioterapia para confirmar el efecto del TISF en la recuperación de plaquetas. Véase T.R. Ulrich, et al., Blood, 86, 971-71 (1995). Los datos constan en la Figura 5.

Dichos datos indican que la administración de TISF puede acelerar la recuperación del índice de plaquetas que sigue a la carencia inducida por quimioterapia. Se observó que las dosis eficaces serian las comprendidas entre 0,1 \mu/kg
y 500 mg/kg. La administración puede hacerse por vía parenteral, intraperitoneal, tópica u oral. El régimen de tratamiento puede ser una, dos o tres dosis al día, una a la semana, dos a la semana o una al mes. Se sugiere la aplicación clínica al tratamiento de pancitopenias en pacientes de cáncer y otras afecciones virales o inmunodeficientes químicamente inducidas. Se halla en progreso una ulterior comprobación de estas observaciones en otros animales modelo de carencias hematológicas.

En un aspecto, la presente invención proporciona un método para aumentar los niveles de tipos específicos de células sanguíneas en pacientes que muestran carencia de uno o más tipos de células sanguíneas. El método incluye la administración de una cantidad efectiva de ISF a sujetos a los que se les haya diagnosticado carencia de glóbulos rojos, plaquetas o glóbulos blancos.

En una de sus materializaciones, la presente invención proporciona un método para estimular la producción de glóbulos rojos (eritrocitos) en sujetos a los que se les ha diagnosticado carencia de glóbulos rojos; el método incluye la administración al sujeto de una cantidad de TISF (factor inmunoestimulante T-4) que sea suficiente para elevar el índice de glóbulos rojos del sujeto. En una materialización de este tipo, al sujeto se le ha diagnosticado anemia.

En otra materialización, la presente invención proporciona un método para estimular la producción de granulocitos en sujetos a los que se les ha diagnosticado un nivel de granulocitos más bajo de lo deseable; el método incluye la administración al sujeto de una cantidad de TISF (factor inmunoestimulante T-4) que sea suficiente para elevar su índice de granulocitos.

En otra materialización más, la presente invención proporciona un método para estimular la producción de plaquetas en sujetos a los que se les ha diagnosticado un nivel de plaquetas más bajo de lo deseable; el método incluye la administración al sujeto de una cantidad de TISF (factor inmunoestimulante T-4) suficiente para elevar su índice de plaquetas.

En la presente solicitud se describe un protocolo terapéutico para el tratamiento de sujetos que experimentan carencia de uno o más tipos de células sanguíneas. Dicho protocolo incluye el diagnóstico en el sujeto de la carencia de un tipo específico de célula sanguínea, para pasar luego al tratamiento del sujeto con TISF en cantidad adecuada para que aumente el nivel del tipo de célula sanguínea del que el sujeto presenta carencia.

En la presente solicitud se describe un protocolo terapéutico para el tratamiento de sujetos que poseen un nivel de glóbulos rojos más bajo de lo deseable, seguido de la administración a dicho sujeto de una cantidad de TISF suficiente para elevar su índice de glóbulos rojos. En dicha materialización, el paciente puede ser un sujeto afectado de anemia.

En la presente solicitud se describe un protocolo terapéutico para el tratamiento de sujetos que poseen un nivel de granulocitos más bajo de lo deseable, seguido de la administración a dicho sujeto de una cantidad de TISF suficiente para elevar su índice de granulocitos.

En la presente solicitud se describe un protocolo terapéutico para el tratamiento de sujetos que poseen un nivel de plaquetas más bajo de lo deseable, seguido de la administración a dicho sujeto de una cantidad de TISF suficiente para elevar su índice de plaquetas.

El sujeto de cada una de las anteriores materializaciones es un mamífero. El sujeto puede ser canino, bovino o felino. Son preferibles las materializaciones en las que el sujeto es un ser humano. El TISF usado en la presente invención puede ser de origen animal o bien proceder de un cultivo de células. En las materializaciones preferentes, el TISF se produce con un método de cultivo de células como el descrito en la Patente de EEUU nº. 5,616,554, donde el ADN que codifica el TISF procedía de un mamífero. Las fuentes de mamíferos preferidas para el TISF son la canina, bovina, felina y humana, y muy a menudo lo más preferible es utilizar TISF producido a partir de ADN procedente de la misma especie que el sujeto del tratamiento.

Breve descripción de los dibujos

En las Figuras 1-4 se resumen los resultados de la administración de una dosis única de TISF a gatos infectados con virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) o con leucemia felina. La Figura 1 muestra índices aumentados de linfocitos; la Figura 2 muestra índices aumentados de glóbulos rojos, y la Figura 3 muestra índices aumentados de granulocitos. En cada caso, en las Figuras se aprecia que los animales que tenían una carencia específica de células sanguíneas presentaron una mejora sustancial tras recibir una dosis única de TISF, mejora que, según se observó, fue mayor en el caso de animales con carencias graves.

En la Fig. 4 se aprecia el aumento del índice de plaquetas subsiguiente a la administración de TISF a 23 gatos infectados con el virus de inmunodeficiencia felina (VIF) o con el virus de leucemia felina. Muestra un aumento del 200% de media en el índice de plaquetas.

La Fig. 5 es un gráfico de la caída y recuperación del índice de plaquetas en ratones en el que se indujo la carencia de plaquetas mediante tratamiento quimioterapéutico, como se explica en T.R. Ulrich, et al., Blood 86, 971-71 (1995). En él se demuestra que los ratones que recibieron TISF (al que se denomina S-Celergin) junto con quimioterapia habían recuperado el índice de plaquetas anterior al tratamiento a las dos semanas aproximadamente, mientras que los ratones que no recibieron TISF no habían recuperado un nivel significativo de plaquetas transcurridos 19 días.

Descripción detallada de la invención

Tal como se usa en el presente documento, el término "hematopoyesis" se refiere a los procesos mediante los cuales se forman nuevas células sanguíneas a partir de células madre y subsiguientemente se desarrollan en etapas precursoras hasta convertirse en células sanguíneas maduras. Comprende también la regulación de dicho proceso y la formación de precursores inmaduros de las células sanguíneas maduras, así como el proceso de diferenciación y los procesos de selección positiva y negativa implicados.

El término "TISF" se refiere a un polipéptido de mamífero o a una mezcla de polipéptidos de origen mamífero; la preparación de TISF y su caracterización como entidad original se explican en la Patente de E.E.U.U. nº 5,616,554. El TISF aparece denominado unas veces como Epithyme^{TM} y otras como S-Celergin, tanto en este documento como en otras referencias. Se ha descrito una serie de factores que estimulan diversas etapas del desarrollo de linfocitos CD4+. El TISF estimula una población de células normalmente insensible en una etapa posterior del proceso, mientras que un factor que estimula una etapa más temprana del proceso aparece descrito en, por ejemplo, Beardsley, et al., PNAS 80: 6005 (1983). Así pues, el TISF es eficaz, como se explica en la Patente de EEUU nº 5,616,554, para la estimulación de T-linfocitos maduros, lo que resulta en un aumento de la actividad antiviral o antitumoral. En el presente documento se da a conocer su eficacia en el tratamiento de afecciones caracterizadas por la carencia de al menos un tipo de de células sanguíneas elegidas del grupo formado por glóbulos rojos, plaquetas y glóbulos blancos. El TISF proporciona un alivio en dichas afecciones al estimular la formación de más células del tipo requerido para paliar dicha
carencia.

El término "granulocitos" se refiere a cualquier miembro de la clase de leucocitos caracterizada por la presencia de muchos gránulos en el citoplasma, y comprende los neutrófilos, los eosinófilos y los basófilos.

El TISF puede obtenerse de un animal huésped por depuración, pero es preferible obtenerlo por depuración de un cultivo de células con métodos como los que se explican en la Patente de E.E.U.U. nº 5,616,554. El TISF puede ser de origen felino, canino o bovino; en una de las materializaciones preferidas, el TISF administrado a un sujeto tiene su origen en la misma especie que la del sujeto del tratamiento. El TISF puede usarse para el tratamiento de trastornos hematopoyéticos en sujetos caninos, felinos y bovinos, así como en sujetos humanos.

El TISF puede administrarse por vía parenteral, intra-peritoneal, tópica u oral. A menudo la preferida es la administración parenteral, aunque a veces se prefiere la intra-peritoneal. El TISF, o el compuesto que estimula las células CD4+ del mismo modo que lo hace el TISF, puede mezclarse con diluyentes, excipientes, agentes estabilizadores, agentes solubilizadores u otros agentes indicados y aceptables desde el punto de vista farmacéutico, y puede incorporarse opcionalmente a una matriz liposomal o de liberación retardada para su administración.

Hay dos documentos donde se describen los excipientes y diluyentes farmacéuticos adecuados, así como los requisitos para su uso en formulaciones farmacéuticas, a saber: el de Remington, Pharmaceutical Sciences (Alfonso Gennaro et al., eds., 17th edn., Mack Publishing Co., Easton Pa., 1985), un texto de referencia clásico en este campo, en el USP/NF, y el de Lachman et al. (The Theory & Practice of Industrial Pharmacy, 2nd ed., Lea & Febiger, Philadelphia Pa., 1976). En el caso de la administración rectal y vaginal, las composiciones se administran mediante métodos y excipientes empleados habitualmente en la administración de materiales farmacéuticos a dichas regiones. Por ejemplo, se pueden usar supositorios, cremas (por ej., manteca de coco) o geles, así como cualquier tipo normal de aplicadores vaginales, cuentagotas, jeringuillas o enemas, según crea conveniente alguien experimentado en la técnica. Las inyecciones intravenosas, intramusculares, intraperitoneales o de otro tipo de administración suelen ser ventajosas, especialmente para el TISF, ya que puede estar expuesto a degradación si se administra por vía oral o tópica; las composiciones adecuadas para dicha administración son bien conocidas por los experimentados en la técnica y pueden identificarse por analogía con otras composiciones farmacéuticas de polipéptidos.

Las composiciones de la invención pueden administrarse por cualquier vía clínicamente indicada, por ejemplo, por aplicación a la superficie de las membranas mucosas (incluidas las intranasales, orales, oculares, gastrointestinales, rectales, vaginales o genito-urinarias). También se pueden usar otros modos de administración: parenteral (por ej., intravenosa (IV), subcutánea, intraperitoneal o intramuscular). Como el TISF es un polipéptido, y por lo tanto expuesto a degradación si se administra por vía oral o tópica, muchas veces se prefieren los métodos de administración parenteral (inyección) que implican descarga intravenosa. Para maximizar la eficacia de su utilización, muchas veces se prefiere la descarga intravenosa del TISF, descarga que puede efectuarse simultáneamente a la descarga de otro nutriente, hidratación o agentes terapéuticos, según se crea conveniente. Para la administración intravenosa, es conveniente disolver el TISF en una solución acuosa o isotónica, por ejemplo suero fisiológico; si es necesario, se puede añadir solución tampón fosfatada para asegurar la estabilidad de la composición. A los experimentados en la técnica les resultarán conocidos más detalles de las composiciones adecuadas para la administración del TISF por analogía con otras composiciones farmacéuticas que contienen polipéptidos como ingredientes activos.

La cantidad de TISF que debe administrarse depende del sujeto concreto y de las indicaciones correspondientes: cuando se deban tratar múltiples citopenias o una pancitopenia, se puede aumentar la dosificación adecuadamente, mientras que para el tratamiento de una carencia en un solo tipo de célula sanguínea puede que sea conveniente una dosificación más baja. El modo y frecuencia de administración pueden determinarse también según el efecto deseado, como apreciarán los experimentados en la técnica, mientras que la eficacia del régimen elegido puede comprobarse fácilmente observando las mejoras en los niveles de las células sanguíneas que interesan, lo que permite optimizar el régimen para el sujeto concreto del tratamiento. En general, el TISF se administrará en composiciones que liberan cantidades de TISF del orden de 1 \mug a 500 mg por kilogramo de peso corporal del sujeto. Las dosis preferidas oscilan por lo general entre 5 \mug/kg y 100 mg/kg aproximadamente, y más preferiblemente entre 10 \mug/kg y 50 mg/kg aproximadamente. A menudo la dosis preferida contiene de 10 \mug/kg a 10 mg/kg aproximadamente.

La administración puede repetirse si lo considera necesario alguien experimentado en la técnica, considerando la gravedad de la carencia de células sanguíneas en el sujeto y los demás tratamientos que esté recibiendo el mismo, o bien puede descargarse de forma continua en el sujeto por medio de un sistema de descarga de fluido por vía intravenosa. Aunque se ha demostrado que una sola administración de TISF produce efectos que duran de varios días a varias semanas, también se prevé la repetición de la administración a intervalos que van desde varias horas hasta de un mes, tipo de administración que cae dentro del ámbito de la invención. Así pues, el TISF se puede administrar de una a tres veces al día, o bien una o dos veces por semana, o bien una o dos veces al mes. La determinación de la dosis necesaria y la frecuencia del tratamiento requerida forma parte de la habilidad normal en la técnica, ya que la dosificación y la frecuencia se pueden ajustar hasta conseguir el efecto deseado. La observación del progreso se realiza fácilmente mediante técnicas bien conocidas a fin de determinar el índice de células sanguíneas del tipo que interese para un sujeto en concreto.

Puesto que el TISF puede usarse para aliviar por adelantado los efectos secundarios de las terapias antivirales, antitumorales o de otro tipo, se prevé también que el TISF pueda mezclarse o administrarse, sin que suponga limitarse a ellos, junto con agentes terapéuticos tales como los agentes antiretrovirales del tipo inhibidores de la proteasa del VIH e inhibidores de la transcriptasa inversa, los tratamientos radioterapéuticos y agentes terapéuticos antineoplásicos como los agentes alquilantes, los análogos nucleósidos de purina y los corticosteroides. Por lo tanto, se prevén composiciones que contengan TISF mezclado con otros agentes terapéuticos, como ocurre con los protocolos de tratamiento que utilizan TISF en combinación con dichos agentes.

Administración del TISF

El TISF puede administrarse a un sujeto por diferentes medios, a saber, por administración parenteral (especialmente la intravenosa), oral, tópica e intraperitoneal. La dosis mínima eficaz de TISF, según se determinó, es aproximadamente 1 \mug/kg del peso corporal del sujeto receptor; preferiblemente, a un animal se le administra al menos 5 \mug de TISF por kilogramo del peso corporal del sujeto, con un límite superior de aproximadamente 500 mg/kg. El TISF se puede administrar con toda eficacia solo o en combinación con otro inmuno-potenciador y se puede incluir en una solución isotónica para administración intravenosa.

Para un tratamiento eficaz de la infección por virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) o leucemia felina, se les puede administrar a los gatos una inyección de 1 ml del susodicho producto. Para el tratamiento de infecciones caninas o humanas se usan dosis mayores, en consonancia con la mayor masa y superficie corporal del individuo en tratamiento.

La presente invención se entenderá mejor mediante los siguientes ejemplos, que son representativos de ciertas materializaciones preferidas de la misma, pero que de ningún modo han de interpretarse como restrictivos del ámbito de la invención.

Ejemplo I

La Dra. Janet Yamamoto, de la Universidad de California en Davis, suministró gatos de uno a tres años de edad. A dichos gatos se les infectó a modo de experimento con la cepa Petaluma del VIF como control de un ensayo de vacuna (véase Pedersen et al., Science 235: 790-93 (1987). Según comprobó la Dra. Yamamoto, todos los gatos eran VIF-positivos, pero no manifestaban síntoma alguno cuando llegaron al laboratorio de ensayos.

El protocolo básico de ensayo es como sigue:

1.

Dejar a los felinos que descansen y se aclimaten durante unas dos semanas.

2.

Obtener muestras de sangre previamente al inicio del tratamiento para la determinación de la línea base del índice de linfocitos y/o las ratios T4/T8.

3.

Formar al azar con los felinos grupos de tratamiento o de control.

4.

Administrar a los felinos del grupo de tratamiento una inyección subcutánea de 1.0 ml de TISF felino en forma depurada o semidepurada.

5.

Obtener muestras de sangre con carácter semanal antes de cada inyección. Observar las señales clínicas y registrar los hallazgos.

6.

Obtener médula ósea y/o muestra de sangre para usarla en el ensayo de detección de VIF en animales de tratamiento y control (por ej., mediante tinción adecuada de frotis de sangre).

Los gatos a los que inicialmente se les diagnosticó carencia de uno o más tipos de células sanguíneas y que fueron tratados con TISF mostraron por término medio una mejora estadísticamente significativa, mejora cuyo porcentaje fue mayor en aquellos animales con carencias graves. Véanse las Figuras 1-4.

Ejemplo II

Siguiendo los procedimientos indicados en T.R. Ulrich et al., Blood 86, 971-76 (1995), se trataron ratones con un agente quimioterapéutico, él solo o con el agente más TISF. Luego se determinaron los niveles de plaquetas de cada sujeto cada pocos días posteriormente al tratamiento. Cuatro días después del tratamiento, todos los animales mostraban una caída sustancial en los niveles de plaquetas, de menos de la mitad por término medio del nivel anterior al tratamiento. Posteriormente, los sujetos que no recibieron TISF mostraron pocos cambios entre los días 4 y 19. Los sujetos tratados con TISF ya mostraban el día 7 una mejora estadísticamente significativa en los niveles de plaquetas, y para el día 13 sus plaquetas ya habían recuperado los niveles anteriores al tratamiento.

La descripción detallada de la invención anterior y las materializaciones preferentes, sobre todo en lo referente a las composiciones y procesos de los productos, ha de considerarse meramente ilustrativa de las materializaciones concretas. No obstante, se entiende que aquellos experimentados en la técnica percibirán materializaciones adicionales. Las materializaciones descritas en el presente documento, junto con las materializaciones adicionales, han de considerarse pertenecientes al ámbito de la invención.

Claims (2)

1. Composición que comprende el factor inmunoestimulante T-4 ("TISF") para tratar las carencias de uno o más tipos de células sanguíneas, en donde el tipo de células se elige entre el grupo formado por glóbulos rojos, plaquetas y glóbulos blancos.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que la carencia de glóbulos rojos es atribuible a la anemia.