ES2319511T3 - Moduladores ciclicos fusionados de la funcion del receptor nuclear de hormonas. - Google Patents

Abstract

Un compuesto seleccionado entre [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-Hexahidro-N-[(4-metilfenil)sulfonil]-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carboxamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-Hexahidro-N-(2-metilpropil)-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5,-a]pirazina-7- (1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-(Ciclohexilmetil)hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7 (1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-(2,6-Difluorofenil)hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina- 7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-(1,3-Benzodioxol-5-ilmetil)hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a] pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-Hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-[2-(3,4-Dimetoxifenil)etil]hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-Hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-N-3-piridinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina- 7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-Hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-(Ciclohexilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-(2,6-Difluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a] pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-(1,3-Benzodioxol-5-ilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-Hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-[2-(3,4-Dimetoxifenil)etil]hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)hexahidro-1,3-dioxo-N-2-propinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7 (1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)-N-(ciclohexilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,3-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)-N-(ciclohexilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-1,3-dioxo-6-N-2-propinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a] pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)-N-(2,6-difluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)-N-[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-il-2-(3-cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-N-[(4-metilfenil)sulfonil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carboxamida; Ácido [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(1-ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-alfa,1,3-trioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7 (1H)-acético, éster metílico; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-1,3-dioxo-N-2-propinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)-N-(2,6-difluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a] pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)-N-[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; y [5S-(5alfa,8alfa,8aBeta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-il-2-(1-ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo.

Description

Moduladores cíclicos fusionados de la función del receptor nuclear de hormonas.

Esta solicitud reivindica la prioridad, y es una continuación en parte, de la Solicitud de EE.UU. de la Serie No. 10/025.233, presentada el 19 de diciembre de 2001, y de la Solicitud de EE.UU. de la Serie No. 60/214.392, presentada el 28 de junio de 2000, de la Solicitud de EE.UU. de la Serie No. 60/284.617, presentada el 18 de abril de 2001, y de la Solicitud de EE.UU. de la Serie No. 60/284.438, presentada el 18 de abril de 2001, y reivindica, adicionalmente, prioridad de y es continuación en parte de la Solicitud de EE.UU. de la Serie No. 09/885.798, presentada el 20 de junio de 2001, y de la Solicitud de EE.UU. de la Serie No. 09/885.827, presentada el 20 de junio de 2001.

La presente invención se refiere a compuestos cíclicos fusionados, al uso de estos compuestos en el tratamiento de trastornos asociados con el receptor nuclear de hormonas, tales como el cáncer, y a composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos.

Los receptores nucleares de hormonas (NHR's, en sus siglas en inglés) constituyen una extensa superfamilia de factores de transcripción dependientes del ligando y específicos para la secuencia. Los miembros de esta familia influyen sobre la transcripción de manera directa, a través de una fijación específica a los genes diana promotores (Evans, en Science 240: 889-895 (1988), o indirecta, a través de interacciones proteína-proteína con otros factores de transcripción (Jonat et al., Cell 62:1189-1204 (1990), Schuele et al., Cell 62:1217-1226 (1990), y Yang-Yen et al., Cell 62:1205-1215 (1990)). La superfamilia de receptores nucleares de hormonas (conocida en la técnica también como "superfamilia de receptores de hormonas esteroides/tiroideas") incluye receptores para una variedad de ligandos hidrófobos, incluidos cortisol, aldosterona, estrógeno, progesterona, testosterona, vitamina D3, hormona tiroidea y ácido retinoico (Evans, 1988, véase más arriba). Además de estos receptores nucleares de hormona convencionales, la superfamilia contiene una serie de proteínas que carecen de ligandos conocidos, designados como receptores nucleares de hormona huérfanos (Mangelsdorf et al., Cell 83:835-839 (1995), O'Malley et al., Mol. Endocrinol. 10:1293 (1996), Enmark et al., Mol. Endocrinol. 10, 1293-1307 (1996), y Giguere, Endocrin. Rev. 20, 689-725 (1999)). Los receptores nucleares de hormona convencionales son, por lo general, transactivadores en presencia de un ligando y pueden ser represores activos o inertes desde el punto de vista transcripcional, en ausencia de un ligando. Otros, sin embargo, se comportan como activadores o represores constitutivos. Estos receptores nucleares de hormonas huérfanos se encuentran bajo el control de ligandos ubicuos que no han sido identificados, o que no necesitan fijar un ligando para ejercer estas actividades.

En común con otros factores transcripcionales, los receptores nucleares de hormonas tienen una estructura modular, que está compuesta por tres dominios distintos: un dominio N-terminal de tamaño variable, que contiene una función de activación de la transcripción AF-1, un dominio de fijación de ADN, altamente conservado y un dominio de fijación de ligando moderadamente conservado. El dominio de fijación del ligando no sólo es responsable de fijar el ligando específico, sino que contiene también una función de activación de la transcripción denominada AF-2, y un dominio de dimerización (Wurtz et al., Nature Struc. Biol. 3, 87-94 (1996), Parker et al., Nature Struc. Biol. 3, 113-115 (1996), y Kumar et al., Steroids 64, 310-319 (1999)). Aunque la secuencia global de proteínas de estos receptores puede variar de forma importante, todos ellos comparten tanto una disposición estructural común, indicativa de una divergencia de un arquetipo ancestral, como una homología sustancial (en especial, identidad de secuencia) en el dominio de fijación del ligando.

Los receptores nucleares de hormona que fijan esteroides (SB-NHR's, siglas en inglés) comprenden una subfamilia de receptores nucleares de hormonas. Estos receptores están relacionados entre sí por compartir una homología de secuencia más importante, en especial en el dominio de fijación de ligandos (LBD, siglas en inglés), que frente a los otros miembros de la superfamilia NHR (Evans, 1988, véase más arriba), y todos ellos utilizan ligandos basados en esteroides. Algunos ejemplos de esta subfamilia de NHR's son el receptor de andrógeno (AR), el receptor de estrógeno (ER), el receptor de progesterona (PR), el receptor de glucocorticoides (GR), el receptor mineralocorticoide (MR), el receptor de aldosterona (ALDR), y el receptor de esteroides y xenobióticos (SXR) (Evans et al., documento WO 99/35246). Sobre la base de la intensa homología de secuencia en el LBD, numerosos receptores huérfanos pueden ser miembros también de la subfamilia SB-NHR.

En conformidad con la elevada homología de secuencia hallada en el LBD para cada uno de los SB-NHR's, los ligandos naturales para cada uno de ellos se derivan de un núcleo esteroide común. Ejemplos de algunos de los ligandos basados en esteroides utilizados por miembros de SB-NHR's incluyen cortisol, aldosterona, estrógeno, progesterona, testosterona y dihidrotestosterona. La especificidad de un ligando basado en esteroides por un SB-NHR con respecto a otro se obtiene por la sustitución diferencial sobre el núcleo esteroide. La fijación de alta afinidad a un SB-NHR particular, junto con un alto nivel de especificidad por ese SB-NHR particular, se puede lograr mediante cambios estructurales mínimos sobre el núcleo esteroide (por ejemplo, Waller et al., Toxicol. AppL Pharmacol. 137, 219-227 (1996), y Mekenyan et al., Environ. Sci. Technol. 31, 3702-3711 (1997), afinidad de fijación para progesterona frente al receptor de andrógeno en comparación con la testosterona).

Se han descrito numerosos agonistas y antagonistas esteroides y no esteroides derivados sintéticamente para los miembros de la familia SB-NHR. Muchos de estos ligandos agonistas y antagonistas se utilizan clínicamente en el hombre para tratar una diversidad de trastornos médicos. RU486 es un ejemplo de un agonista sintético de la PR, que se utiliza como agente de control de la natalidad (Vegeto et al., Cell 69:703-713 (1992), y Flutamida es un ejemplo de un antagonista del AR, que se usa en el tratamiento del cáncer de próstata (Neri et al., Endo. 91, 427-437 (1972)). Tamoxifeno es un ejemplo de un modulador específico de los tejidos de la función ER, que se utiliza en el tratamiento del cáncer de mama (Smigel, J. Natl. Cancer Inst. 90, 647-648 (1998)). Tamoxifeno puede funcionar como antagonista del ER en el tejido mamario mientras actúa como agonista del ER en el tejido óseo (Grese et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 14105-14110 (1997)). Debido a los efectos selectivos para los tejidos registrados para Tamoxifeno, este agente y otros semejantes se denominan "agonista parcial" o "antagonista parcial". Además de ligandos no endógenos derivados sintéticamente, es posible obtener ligandos no endógenos a partir de fuentes alimentarias (Regal et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 223, 372-378 (2000), y Hempstock et al., J. Med. Food 2, 267-269 (1999)). Los fitoestrógenos flavonoides son un ejemplo de ligando no natural de SB-NHR's fácilmente obtenibles de una fuente alimentaria como la soja (Quella et al., J. Clin. Oncol. 18, 1068-1074 (2000), y Banz et al., J. Med. Food 2, 271-273 (1999)). La capacidad de modular la actividad transcripcional del NHR individual por la adición de un ligando de molécula pequeña los convierte en dianas óptimas para el desarrollo de agentes farmacéuticos para diversos estados patológicos.

Como se ha mencionado anteriormente, los ligandos no naturales pueden ser diseñados sintéticamente para actuar como moduladores de la función de los NHR's. En el caso de los SB-NHR's, el diseño de un ligando no natural puede incluir la identificación de una estructura nuclear que imita el sistema nuclear esteroide natural. Esto se puede lograr por medio del rastreo aleatorio frente a varios SB-NHR's, o mediante enfoques directos usando las estructuras cristalinas disponibles de una variedad de dominios de fijación de ligandos de NHR (Bourguet et al., Nature 375, 377-382 (1995), Brzozowski et al., Nature 389, 753-758 (1997), Shian et al., Cell 95, 927-937 (1998), y Tanenbaum et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5998-6003 (1998)). La sustitución diferencial sobre el núcleo esteroide de simulación puede dar como resultado la formación de una serie de agonistas y antagonistas de alta afinidad con especificidad por, por ejemplo, ER frente a PR frente a AR frente a GR frente a MR. Se ha informado de un método de sustitución diferencial, por ejemplo, para los moduladores basados en quinolina de NHR esteroide en J. Med. Chem. 41, 623 (1999); y en los documentos WO 9749709; US 5696133; US 5696130; US 5696127; US 5693647; US 5694646; US 5688810; US 5688808 y WO 9619458.

Los compuestos de la presente invención comprenden un núcleo que actúa como mimético esteroide, y son útiles como moduladores de la función de los receptores nucleares de hormonas que fijan esteroides, así como otros NHR tal como se describe más adelante.

En este documento se describen compuestos cíclicos condensados de la siguiente fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables, solvatos y estereoisómeros de los mismos, donde dichos compuestos son especialmente útiles como moduladores de la función receptora de la hormona nuclear:

1

Como se usa en la fórmula I, y a lo largo de esta memoria descriptiva, los símbolos tienen los siguientes significados a menos que se indique otra cosa y, para cada caso, se seleccionan independientemente:

\quad

G es un grupo arilo o heterociclo (por ejemplo, heteroarilo), donde dicho grupo es mono- o policícilico, y está opcionalmente sustituido en una o más posiciones, preferiblemente con hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, halo, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, CN, R^{1}OC=O, R^{1}C=O, R^{1}C=S, R^{1}HNC=O, R^{1}R^{2}NC=O, HOCR^{3}R^{3'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2}, NR^{4}R^{5}, SR^{1}, S=OR^{1}, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1}, SO_{2}NR^{1}R^{1'}, (R^{1}O) (R^{1'}O)P=O, (R^{1})(R^{1'})P=O o (R^{1'})(NHR^{1})P=O; E es C=Z_{2}, CR^{7}R^{7'} (por ejemplo, CHR^{7}), SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2};

\quad

Z_{1} es O, S, NH o NR^{6};

\quad

Z_{2} es O, S, NH o NR^{6};

\quad

A_{1} es CR^{7} o N;

\quad

A_{2} es CR^{7} o N;

\quad

Y es J-J'-J'' donde J es (CR^{7}R^{7'})n y n = 0-3, J' es un enlace O, S, S=O, SO_{2}, NH, NR^{6}, C=O, OC=O, NR^{1}C=O, CR^{7}R^{7'}, C=CR^{8}R^{8'}, R^{2}P=O, OPOOR^{2}, OPO_{2}, OSO_{2}, C=N, NHNH, NHNR^{6}, NR^{6}NH, N=N, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido o arilo o arilo sustituido y J'' es (CR^{7}R^{7})n y n = 0-3, donde Y no es un enlace (es decir, si J' es un enlace, entonces en al menos uno de J o J'' (cada uno definido como (CR^{7}R^{7'})n), n no es cero);

\quad

W es CR^{7}R^{7'}-CR^{7}R^{7'}, CR^{8}=CR^{8'}, CR^{7}R^{7'}-C=O, NR^{9}-CR^{7}R^{7'}, N=CR^{8}, N=N, NR^{9}-NR^{9'}, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido o arilo o arilo sustituido;

\quad

Q es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloaquenilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclo (por ejemplo, heteroarilo) o heterociclo sustituido (por ejemplo, heteroarilo sustituido), halo, CN, R^{1}OC=O, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, HOCR^{7}R^{7'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2}, C=OSR^{1}, SO_{2}R^{1} o NR^{4}R^{5};

\quad

M es un enlace, O, CR^{7}R^{7'} o NR^{10}, y M' es un enlace o NR^{10}, con la condición de que al menos uno de M o M' debe ser un enlace;

\quad

L es un enlace, (CR^{7}R^{7'})n, NH, NR^{5} o N(CR^{7}R^{7'})n, donde n = 0-3;

\quad

cada un de R^{1} y R^{1'} es independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido;

\quad

R^{2} es un alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido;

\quad

cada uno de R^{3} y R^{3'} es independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, halo, CN, hidroxilamina, hidroxiamina, alcoxilo o alcoxilo sustituido, amino, NR^{1}R^{2}, tiol, alquiltio o alquiltio sustituido;

\quad

R^{4} es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido; arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

R^{5} es alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

R^{6} es alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, CN, OH, OR^{1}, R^{1} C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

cada uno de R^{7} y R^{7'} son independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, halo, CN, OR^{1}, nitro, hidroxilamina, hidroxilamida, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NOR^{1}, tiol, alquiltio o alquiltio sustituido, R^{1}C=O, R^{1}(C=O)O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SOR^{1}, PO_{3}R^{1}R^{1'}, R^{1}R^{1'}NC=O, C=OSR^{1}, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

cada uno de R^{8} y R^{8'} es independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, nitro, halo, CN, OR^{1}, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NOR^{1}, alquiltio o alquiltio sustituido, C=OSR^{1}, R^{1}OC=O, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, R^{1}R^{1'}NC=O, SO_{2}OR^{1}, S=OR^{1}, SO_{2}R^{1}, PO_{3}R^{1}R^{1'} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

cada uno de R^{9} y R^{9'} es independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'}; y

\quad

R^{10} es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}R^{1'}NC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'}.

Los compuestos de fórmula I y las sales de los mismos que comprenden un núcleo que sirve como un mímico de esteroide (y que no requiere la presencia de un compuesto de tipo esteroide (por ejemplo, estructura análoga de ciclopentanopetidrofenantreno) son nuevos, excepto:

cuando E es C=O, cada uno de M y M' es un enlace, Z_{1} es O, Q es H y A_{1} y A_{2} son CH: (i) G-L- no es fenilo, 4-clorofenilo o bencilo cuando W es -CH=CH- y Y es -CH_{2}-CH_{2}-; (ii) G-L- no es fenilo cuando W es -CH=CH- o -CH_{2}-CH_{2}- y Y es -CH_{2}-; (iii) G-L- no es fenilo, 4-metoxifenilo, 4-clorofenilo, o ciertos grupos (opcionalmente sustituidos con arilo)-alquilo (C_{1}-C_{3}) (por ejemplo, bencilo), cuando W y Y son -CH_{2}-CH_{2}-; y (iv) G-L- no es 4-clorofenilo o bencilo cuando W y Y son fenileno;

cuando B es C=O, cada uno de M y M' es un enlace, Z_{1} es O, y A_{1} y A_{2} son CH: (i) G-L- no es bencilo cuando Q es -CO_{2}CH_{3}, W es -CH=CH- y Y es -CH_{2}- o -CH_{2}-CH_{2}-; y (ii) G-L- no es fenilo cuando Q es metilo, W es -CH=CH- y Y es -CH_{2}-;

cuando E es C=S, cada uno de M' y M' es un enlace, Z_{1} es O, Q es H, A_{1} y A_{2} son CH, W es -CH=CH- y Y es -CH_{2}- o -CH_{2}-CH_{2}-, G-L- no es fenilo; y

cuando E es C=O, cada uno de M y M' es un enlace, Z_{1} es O, Q es H, Y es -CH_{2}-CH_{2}-, y W es -CH=CH- o -CH_{2}-CH_{2}-, G-L- no es 4-clorofenilo (i) cuando A_{1} y A_{2} son C-CH_{3}; y (ii) cuando A1 es C-isopropilo y A_{2} es C-CH_{3}.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos de fórmula I que son un objeto de la presente invención se definen en la reivindicación adjunta 1.

Los siguientes son definiciones de términos usados en la presente memoria descriptiva. La definición inicial proporcionada para un grupo o término en este documento se aplica a ese grupo o término a lo largo de la presente memoria descriptiva de forma individual o como parte de otro grupo, a menos que se indique otra cosa.

Los términos "alquilo" y "alk" se refieren a un radical alcano (hidrocarburo) de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 12 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6 átomos de carbono. Dichos grupos ejemplares incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilfenilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo y similares. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, uno o más de los siguientes grupos: halo (por ejemplo, un sustituyente halo individual o múltiples sustituyentes halo que forman, en último caso, grupos tales como un grupo perfluoroalquilo o un grupo alquilo que tiene Cl_{3} o CF_{3}), alcoxi, alquiltio, hidroxi, carboxi (es decir, -COOH), alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, amino (es decir, -NH_{2}), carbamoílo o carbamoílo sustituido, carbamato o carbamato sustituido, urea o urea sustituida, amidinilo o amidinilo sustituido, tiol (-SH), arilo, heterociclo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, -S-arilo, -S-heterociclo, -S=O-arilo, -S=O-heterociclo, -S(O)_{2}-arilo, -S(O)_{2}-heterociclo,
-NHS(O)_{2}-arilo, -NHS(O)_{2}-heterociclo, -NHS(O)_{2}NH-arilo, -NHS(O)_{2}NH-heterociclo, -P(O)_{2}-arilo, -P(O)_{2}-heteroci-
clo, -NHP(O)_{2}-arilo, -NHP(O)_{2}-heterociclo, -NHP(O)_{2}NH-arilo, -NHP(O)_{2}NH-heterociclo, -O-arilo, -O-heterociclo, -NH-arilo, -NH-heterociclo, -NHC=O-arilo, -NHC=O-heterociclo, -OC=O-arilo, -OC=O-heterociclo, -NHC=ONH-arilo, -NHC=ONH-heterociclo, -OC=OO-arilo, -OC=OO-heterociclo, -OC=ONH-arilo, -OC=ONH-heterociclo,
-NHC=OO-arilo, -NHC-OO-heterociclo,-C=ONH-arilo, -C=ONH-heterociclo, -C=OO-arilo, -C=OO-heterociclo, -N(alquil)S(O)_{2}-arilo, -N(alquil)S(O)_{2}-heterociclo, -N(alquil)S(O)_{2}NH-arilo, N(alquil)S(O)_{2}NH-heterociclo, -N(alquil)P(O)_{2}-arilo, -N(alquil)P(O)_{2}-heterociclo, -N(alquil)P(O)_{2}NH-arilo, N(alquil)P(O)_{2}NH-heterociclo, -N(alquil)-arilo, -N(alquil)-heterociclo, -N(alquil)C=O-arilo, -N(alquil)C=O-heterociclo, -N(alquil)C=ONH-arilo, -N(alquil)C=ONH-heterociclo, -OC=ON(alquil)-arilo, -OC=ON(alquil)-heterociclo, -N(alquil)C=OO-arilo, -N(alquil)C=OO-heterociclo,
-C=ON(alquil)-arilo, -C=ON(alquil)-heterociclo, -NHS(O)_{2}N(alquil)-arilo, NHS(O)_{2}N(alquil)-heterociclo,
NHP(O)_{2}N(alquil)-arilo, NHP(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -NHC=ON(alquil)-arilo, -NHC=ON(alquil)-heterociclo, -N(alquil)S(O)_{2}N(alquil)-arilo, -N(alquil)S(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -N(alquil)P(O)_{2}N(alquil)-arilo, -N(alquil)P(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -N(alquil)C=ON(alquil)-arilo y -N(alquil)C=ON(alquil)-heterociclo, así como por OR^{13} donde R^{13} se define a continuación en el Esquema XV. En los sustituyentes ejemplares mencionados anteriormente, grupos tales como "arilo" y "heterociclo" pueden estar opcionalmente sustituidos por sí mismos.

El término "alquenilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 12 átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Dichos grupos ejemplares incluyen etenilo o alilo. "Alquenilo sustituido" se refiere a un grupo alquenilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos indicados anteriormente como sustituyentes alquilo ejemplares.

El término "alquinilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 12 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono a carbono. Dichos grupos ejemplares incluyen etinilo. "Alquinilo sustituido" se refiere a un grupo alquinilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos indicados anteriormente como sustituyentes alquilo ejemplares.

El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo de hidrocarburo totalmente saturado que contiene de 1 a 4 anillos y de 3 a 8 carbonos por anillo. Dichos grupos ejemplares incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc. "Cicloalquilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, nitro, ciano, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos indicados anteriormente como sustituyentes alquilo ejemplares, y los que se han mencionado previamente como sustituyentes arilo preferidos en la definición de G. Los sustituyentes ejemplares también incluyen sustituyentes cíclicos espiro-enlazados o condensados, especialmente cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido.

El término "cicloalquenilo" se refiere a un grupo de hidrocarburo cíclico parcialmente insaturado que contiene de 1 a 4 anillos y de 3 a 8 carbonos por anillo. Dichos grupos ejemplares incluyen ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, etc. "Cicloalquenilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquenilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, nitro, ciano, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos indicados anteriormente como sustituyentes alquilo ejemplares, y los mencionados previamente como sustituyentes arilo preferidos en la definición de G. Los sustituyentes ejemplares también incluyen sustituyentes cíclicos espiro-enlazados o condensados, especialmente cicloalquilo o cicloalquilo sustituido.

Los términos "alcoxi" o "alquiltio" se refieren a un grupo alquilo como se ha descrito anteriormente unido a través de un enlace oxígeno (-O-) o un enlace azufre (-S-), respectivamente. Los términos " alcoxi sustituido" o " alquiltio sustituido" se refieren a un grupo alquilo sustituido como se ha descrito anteriormente unido a través de un enlace oxígeno o azufre, respectivamente.

El término "alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo alcoxi unido a través de un grupo carbonilo.

El término "alquilcarbonilo" se refiere a un grupo alquilo unido a través de un grupo carbonilo. El término "alquilcarboniloxi" se refiere a un grupo alquilcarbonilo unido a través de un enlace oxígeno.

Los términos "arilalquilo", "arilalquilo sustituido", "cicloalquilalquilo", "cicloalquilalquilo sustituido", "cicloalquenilalquilo", "cicloalquenilalquilo sustituido", "heterocicloalquilo" y "heterocicloalquilo sustituido" se refieren a grupos arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo y heterociclo unidos a través de un grupo alquilo, sustituido en el grupo arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo o heterociclo y/o el alquilo donde se indique como "sustituido".

El término "arilo" se refiere a grupos de hidrocarburo aromáticos cíclicos que tienen de 1 a 5 anillos aromáticos, especialmente grupos monocíclicos o bicíclicos tales como fenilo, bifenilo o naftilo. Cuando contienen dos o más anillos aromáticos (bicíclicos, etc.), los anillos aromáticos del grupo arilo pueden unirse en un solo punto (por ejemplo, bifenilo) o condensarse (por ejemplo, naftilo, fenantrenilo y similares). "Arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 3 sustituyentes, en cualquier punto de unión. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, nitro, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, ciano, alquil-S(O)_{m}- (m = 0, 1 ó 2), alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos indicados anteriormente como sustituyentes alquilo ejemplares y que se han mencionado previamente como sustituyentes arilo preferidos en la definición de G. Los sustituyentes ejemplares también incluyen sustituyentes cíclicos condensados, tales como grupo heterociclo o cicloalquenilo, o heterociclo o cicloalquenilo sustituidos.

"Carbamoílo" se refiere al grupo -CONH- que está unido en un extremo al resto de la molécula y en el otro a hidrógeno o a un resto orgánico (tal como alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterociclo, alquilcarbonilo, hidroxilo y nitrógeno sustituido). "Carbamato" se refiere al grupo -O-CO-NH- que está unido en un extremo al resto de la molécula y en el otro a hidrógeno o a un resto orgánico (tal como los que se han indicado anteriormente). "Urea" se refiere al grupo -NH-CO-NH- que está unido en un extremo al resto de la molécula y en el otro a hidrógeno o a un resto orgánico (tal como los indicados anteriormente). "Amidinilo" se refiere al grupo -C(=NH)(NH_{2}). "Carbamoílo sustituido", "carbamato sustituido", "urea sustituida" y "amidinilo sustituido" se refiere a grupos carbamoilo, carbamato, urea o amidinilo como se han descrito anteriormente en los que uno o más de los grupos nitrógeno se reemplazan por un resto orgánico (tal como los indicados anteriormente).

Los términos "heterociclo", "heterocíclico" y "heterociclo" se refieren a grupos cíclicos, incluyendo aromáticos (es decir, "heteroarilo"), totalmente saturados, o parcial o totalmente insaturados (por ejemplo, sistemas de anillos monocíclicos de 4 a 7 miembros, bicíclicos de 7 a 11 miembros o tricíclicos de 10 a 16 miembros) que tienen al menos un heteroátomo en al menos un anillo que contiene un átomo de carbono. Cada anillo del grupo heterocíclico que contiene un heteroátomo puede tener 1, 2, 3 ó 4 heteroátomos seleccionados entre átomos de nitrógeno, átomos de oxigeno y/o átomos de azufre, donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y los heteroátomos de nitrógeno pueden estar opcionalmente cuaternizados. (El término "heteroarilio" se refiere a un grupo heteroarilo que tiene un átomos de nitrógeno cuaternario y por lo tanto una carga positiva). El grupo heterocíclico puede estar unido al resto de la molécula en cualquier heteroátomo o átomo de carbono del anillo o del sistema de anillos. Los grupos heterocíclicos monocíclicos ejemplares incluyen azetidinilo, pirrolidinilo, pirrolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolodinilo, 2-oxoazepinilo, azepinilo, hexahidrodiazepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, triazolilo, tetrazolilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, sulfóxido sulfóxido de tiamorfolinilo, sulfona de tiamorfolinilo, 1,3-dioxolano y tetrahidro-1,1-dioxotienilo y similares. Los grupos heterocíclicos bicíclicos ejemplares incluyen indolilo, isoindolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, benzofurazanilo, cromonilo, coumarinilo, benzopiranilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,2-b]piridinilo) o furo[2,3-b]piridinilo), dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxo-quinazolinilo), triazinilazepinilo, tetrahidroquinolinilo y similares. Los grupos heterocíclicos tricíclicos ejemplares incluyen carbazolilo, bencidolilo, fenantrolinilo, acridinilo, fenantridinilo, xantenilo y similares.

"Heterociclo sustituido", "heterocíclico sustituido" y "heterociclo sustituido" (tales como "heteroarilo sustituido") se refieren a grupos heterociclo, heterocíclicos o heterociclo sustituidos con uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero sin limitación, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, nitro, oxo (es decir, = O), ciano, alquil-S(O)_{m}- (m = 0, 1 ó 2), alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos indicados anteriormente como sustituyentes alquilo ejemplares, y los mencionados como sustituyentes heterociclo preferidos en la definición de G.

El término "nitrógeno cuaternario" se refiere a un átomo de nitrógeno tetravalente cargado positivamente incluyendo, por ejemplo, el nitrógeno cargado positivamente en un grupo tetraalquilamonio (por ejemplo, tetrametilamonio, N-metilpiridinio), el nitrógeno cargado positivamente en especies de amonio protonadas (por ejemplo, trimetil-hidroamonio, N-hidropiridinio), el nitrógeno cargado positivamente en N-óxidos de amina (por ejemplo, N-óxido de N-metil-morfolina, N-óxido de piridina) y el nitrógeno cargado positivamente en un grupo N-amino-amonio (por ejemplo, N-aminopiridinio).

Los términos "halógeno" o "halo" se refieren a cloro, bromo, fluoro o yodo.

Los términos "hidroxilamina" e "hidroxilamida" se refieren a los grupos OH-NH-CO-, respectivamente.

Cuando un grupo funcional se denomina "protegido", esto significa que el grupo es una forma modificada para mitigar, especialmente impedir, reacciones secundarias indeseadas en el sitio protegido. Los grupos protectores adecuados para los procedimientos y compuestos descritos en este documento incluyen, sin limitación, los que se describen en los libros de texto convencionales, tales como Greene, T. W. y col., Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, N.Y. (1991).

Cuando se usa un término tal como "(CRR)n", éste representa una cadena alquilo opcionalmente sustituida que existe entre los dos fragmentos a los que está unido, y la longitud de dicha cadena se define por el intervalo descrito para el término n. Un ejemplo de esto es n = 0-3, que implica de cero a tres (CRR) unidades existentes entre los dos fragmentos, que se unen a las unidades primaria y terminal (CRR). En la situación en la que el término n se establece como cero (n = 0) entonces existe un enlace entre los dos fragmentos unidos a (CRR).

A menos que se indique otra cosa, se asume que cualquier heteroátomo con valencias insatisfechas tendrá átomos de hidrógeno suficientes para satisfacer las valencias.

Los grupos divalentes, tales como los de la definición de W (por ejemplo, NR^{9}-CR^{7}R^{7'}) pueden unirse en cualquier dirección al resto de la molécula (por ejemplo,

1000

para el grupo mencionado anteriormente dentro de la definición de W).

Anión carboxilato se refiere a un grupo -COO- cargado negativamente.

Los compuestos de fórmula I forman sales que también están dentro del alcance de esta invención. Se entiende que la referencia a un compuesto de fórmula I incluye referencia a sales del mismo, a menos que se indique otra cosa. El término "sal(es)", como se emplea en este documento, representa sales ácidas y/o básicas formadas con ácidos y bases inorgánicas y/u orgánicas. Además, cuando un compuesto de fórmula I contiene tanto un resto básico tal como, pero sin limitación, piridina o imidazol, como un resto ácido tal como, pero sin limitación, un ácido carboxílico, pueden formarse zwiteriones ("sales internas") y se incluyen dentro del término "sal(es)", como se usa en este documento. Se prefieren sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables), aunque también son útiles otras sales, por ejemplo, en las etapas de aislamiento o purificación que pueden emplearse durante la preparación. Pueden formarse sales de los compuestos de la fórmula I, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto I con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el que la sal precipita o en un medio acuoso seguido de liofilización.

Los compuestos de fórmula I que contienen un resto básico, tal como, pero sin limitación, un anillo amina o piridina o imidazol, pueden formar sales con una diversidad de ácidos orgánicos e inorgánicos. Las sales de adición de ácidos ejemplares incluyen acetatos (tales como los formados con ácido acético o ácido trihaloacético, por ejemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, ciclopentanepropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, hidroxietanosulfonatos (por ejemplo, 2-hidroxietanosulfonatos), lactatos, maleatos, metanosulfonatos, naftalenosulfonatos (por ejemplo, 2-naftalenosulfonatos), nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, fenilpropionatos (por ejemplo, 3-fenilpropionatos), fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como los formados con ácido sulfúrico), sulfonatos (tales como los mencionados anteriormente), tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos tales como tosilatos, undecanoatos y similares.

Los compuestos de fórmula I que contienen un resto ácido, tal como, pero sin limitación, un ácido carboxílico, pueden formar sales con una diversidad de bases orgánicas e inorgánicas. Las sales básicas ejemplares incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como benzatinas, diciclohexilaminas, hidrabaminas (formadas con N,N-bis(dehidroabietil)etilenediamina), N-metil-D-glucaminas, N-metil-D-glicamidas, t-butil aminas, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden estar cuaternizados con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), dialquilsulfatos (por ejemplo, dimetil, dibutil, dietil y diamil sulfatos), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, peristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo) y otros.

Los solvatos de los compuestos de la invención también se contemplan en este documento. Los solvatos de los compuestos de fórmula I incluyen, por ejemplo, hidratos.

Los compuestos de la fórmula I, y sales de los mismos, pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo, en forma de una amida o imino éter). Todas estas formas tautoméricas se incluyen en este documento como parte de la presente invención.

Todos los estereoisómeros de los compuestos de la presente invención (por ejemplo, los que pueden existir debido a los carbonos asimétricos sobre diversos sustituyentes), incluyendo formas enantioméricas y formas diastereoméricas, se incluyen dentro del alcance de esta invención. Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la invención pueden estar, por ejemplo, sustancialmente libres de otros isómeros (por ejemplo, en forma de un isómero óptico puro o sustancialmente puro que tiene una actividad especificada), o puede mezclarse, por ejemplo, en forma de racematos o con todos los demás estereoisómeros u otros estereoisómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden tener la configuración S o R como se define por las Recomendaciones de la IUPAC 1974. Las formas racémicas pueden resolverse por procedimientos físicos, tales como, por ejemplo, cristalización fraccionada, separación o cristalización de derivados diastereoméricos o separación por cromatografía sobre una columna quiral. Los isómeros ópticos individuales pueden obtenerse a partir de los racematos por cualquier procedimiento adecuado, incluyendo, sin limitación, procedimientos convencionales tales como, por ejemplo, formación de sal con un ácido óptimamente activo seguido de cristalización.

Todos los isómeros configuracionales de los compuestos de la presente invención se incluyen en forma de una mezcla o en forma pura o sustancialmente pura. La definición de compuestos de la presente invención incluyen isómeros de alqueno cis (Z) y trans (E), así como isómeros cis y trans de anillos de hidrocarburo o heterociclo cíclicos.

A lo largo de la memoria descriptiva, los grupos y sustituyentes de los mismos pueden elegirse para proporcionar restos y compuestos estables.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse por procedimientos tales como los que se ilustran en los siguientes Esquemas I a XV. Los disolventes, temperaturas, presiones y otras condiciones de reacción pueden seleccionarse fácilmente por un especialista en la técnica. Los materiales de partida están disponibles en el mercado, se preparan fácilmente por un especialista en la técnica o se preparan por los procedimientos ilustrados en las Figuras 1 a 3. Pueden emplearse técnicas combinatorias en la preparación de compuestos, por ejemplo, cuando los intermedios poseen grupos adecuados para estas técnicas. Véase lo siguiente para procedimientos alternativos que pueden emplearse en la preparación de compuestos de la presente invención: Tetrahedron, 27, 3119 (1971); Tetrahedron, 30, 2977 (1974); Tetrahedron. Let, 31, 2631 (1969); J. Org. Chem., 35, 3097 (1970); Bull. Chem. Soco Jpn., 67, 3082 (1994); Bull. Chem. Soco Jpn., 65, 61 (1992); Patente Europea (EP) Nº 406119; Patente de Estados Unidos Nº 4.397.857; Pons y col., Eur. J. Org. Chem., 853-859 (1998); Kucharczyk y col., J. Med. Chem., 1654-1661 (1993); y Documento de Patente Alemana (DE) Nº 3227055.

Esquema I

2

Como se ilustra en el Esquema I, los compuestos de fórmula I pueden obtenerse a partir de intermedios de azabiciclo-3-etilcarboxilato de fórmula II. Los intermedios de fórmula II pueden prepararse, por ejemplo, a partir de las estrategias sintéticas descritas en Bull. Chem. Soc. Jpn., 65, 61 (1992), Tetrahedron Let. 31, 2603 (1990), Chem. Commun. 597 (1999), Tetrahedron Lett. 38, 4021, (1997), Tetrahedron Lett. 40, 7929 (1999), Synlett. 1, 29 (1991), J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1601 (1988), J. Org. Chem. 31, 1059 (1966), Synthesis 10, 925 (1990), Tetrahedron Lett. 40, 8447 (1999), Patente de Estados Unidos Nº 4775668 y documento EP Nº 266576 y las referencias de estos documentos, por un especialista en la técnica (incorporados en este documento como referencia en su totalidad). Además de una mezcla racémica de un compuesto de fórmula II, pueden sintetizarse antípodos individuales, por ejemplo, de acuerdo con procedimientos indicados en los documentos anteriores. Los procedimientos ejemplares para preparar compuestos de la fórmula II se describen adicionalmente a continuación en las Figuras 1 a 3.

El tratamiento de II con un intermedio de fórmula Z_{2} = C=N-L-G produce un intermedio de fórmula III. Los intermedios de fórmula Z_{2} = C-N-L-G pueden obtenerse, por ejemplo, a partir de isocianatos, tioisocianatos y carbodiimidas disponibles en el mercado o pueden prepararse fácilmente por un especialista en la técnica. Un intermedio de fórmula III puede calentarse con o sin la presencia de una base, tal como DBU o trietilamina, para producir un compuesto de fórmula IV, que es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M' y M es un enlace y E es C=Z_{2}. Los isómeros ópticos individuales de un compuesto de Fórmula IV (también conocidos como antípodos), pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales (endo o exo) de un compuesto de fórmula IV pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

Esquema II

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El Esquema II describe un procedimiento para preparar compuestos de fórmula I en la que un intermedio de fórmula II se trata con un reactivo de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl en presencia de una base, tal como NaHCO_{3}, para producir un intermedio de fórmula V. Los intermedios de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl pueden obtenerse a partir de fuentes disponibles en el mercado o pueden prepararse fácilmente por un especialista en la técnica. En esta etapa pueden emplearse como alternativa equivalentes de fosgeno tales como carbonildiimidazoles y en cualquier otra parte de estos Esquemas cuando sea apropiado, en lugar de Cl-E-Cl. El intermedio de fórmula V puede hacerse reaccionar con una amina de fórmula H2N-L-G en presencia de una base, tal como diisopropilamina o trietilamina, con o sin un reactivo de acoplamiento, tal como DMAP, para dar un intermedio de fórmula VI. Los intermedios de amina de fórmula H2N-L-G pueden obtenerse a partir de fuentes disponibles en el mercado o pueden prepararse fácilmente por un especialista en la técnica. El intermedio de fórmula VI puede convertirse en un compuesto de fórmula VII por calentamiento con o sin la presencia de una base, tal como DBU o trietilamina. Un compuesto de fórmula VII es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M y M' es un enlace y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante o técnicas convencionales.

Esquema III

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El Esquema III describe un procedimiento para preparar compuestos de fórmula I en la que un intermedio de fórmula II se saponifica para dar un ácido de fórmula VIII por tratamiento con una base, tal como hidróxido sódico. Después, el ácido puede acoplarse con una amina de fórmula H_{2}N-L-G mediante una diversidad de reactivos de acoplamiento, por ejemplo, como se describe en The Practice Of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 2ª Ed., Bodanszy, Miklos, 1993 (incorporado en este documento como referencia en su totalidad), para producir un intermedio de amida de fórmula IX. El intermedio de fórmula IX puede calentarse, con o sin la presencia de una base tal como trietilamina, con un reactivo de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl, para producir un compuesto de fórmula VII, que es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M y M' es un enlace y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

Esquema IV

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Como se muestra en el Esquema IV, una ruta para los compuestos de fórmula I en la que E es C=Z2 y Z_{2} = N-CN, implica el tratamiento de un intermedio de fórmula II con una ciano-tiourea sustituida de fórmula NC-NH-C(S)-NH-L-G, en presencia de un reactivo de acoplamiento soluble en agua (WSCD) tal como clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, como se describe en Tetrahedron. Let. 30, 7313 (1989) (incorporado en este documento como referencia en su totalidad), para producir un intermedio de fórmula X. Las ciano-tiureas sustituidas de fórmula NC-NH-C(S)-NH-L-G pueden obtenerse a partir de fuentes disponibles en el mercado o pueden prepararse fácilmente por un especialista en la técnica. Un intermedio de fórmula X puede calentarse con o sin la presencia de una base, tal como DBU para producir un compuesto de fórmula XI, que es un compuesto de fórmula I en la que, además de que E es C=N-CN, cada uno de M y M' es un enlace. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula XI pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de formula XI pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

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Esquema V

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Como se ilustra en el Esquema V, un compuesto de fórmula XII, que es un compuesto de fórmula I en la que Q = H, puede convertirse en un compuesto de fórmula I en la que Q es igual a los sustituyentes que se han definido en este documento distintos de H, por tratamiento con una base tal como LDA y un haluro de alquilo tal como yoduro de metilo, preferiblemente en un disolvente como tetrahidrofurano a bajas temperaturas (por ejemplo, -78ºC) para producir un compuesto de fórmula IV, que es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M' y M es un enlace y E es C=Z_{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula IV pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula XII o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula IV pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los isómeros endo o exo individuales correspondientes de un compuesto de fórmula XII o por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales. Los compuestos de la fórmula XII pueden obtenerse, por ejemplo, empleando el procedimiento del Esquema I, en el que Q = H.

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Esquema VI

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Como se muestra en el Esquema VI, los compuestos de fórmula I pueden sintetizarse por medio de una ruta con soporte sólido. Como tal, la ruta sintética anterior permite la síntesis de bibliotecas combinatorias de compuestos de fórmula I, por ejemplo, mediante procedimientos convencionales de síntesis en fase sólida automatizada. El tratamiento de un compuesto de fórmula II con un agente protector tal como carbonato de di-tercbutilo, seguido de hidrólisis del grupo éster por tratamiento con una base, tal como hidróxido sódico, produce un intermedio de fórmula VIII. El intermedio de fórmula VIII puede unirse a un soporte sólido, tal como una resina de Merrifield modificada, por tratamiento con un reactivo de acoplamiento tal como cloruro de 2,6-dicloro-benzoílo en presencia de piridina y DMF, para producir un intermedio con soporte sólido de fórmula XIV. La retirada del grupo protector puede conseguirse por tratamiento con un ácido, tal como ácido trifluoroacético en DMF con sonicación, para producir un compuesto de fórmula XV, que puede hacerse reaccionar con un intermedio de fórmula Z_{2} = C=N-L-G, para producir un intermedio de fórmula XVI. El producto final, IV, puede formarse y liberarse del soporte sólido por calentamiento del intermedio de fórmula XVI con o sin una base, tal como DBU. Un compuesto de fórmula IV es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M' y M es un enlace y E es C=Z_{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula IV pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula IV pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

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Esquema VII

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El Esquema VII una estrategia alternativa para la síntesis de compuestos de fórmula I sobre un soporte sólido. Como se ha descrito para el Esquema VI, un intermedio de fórmula XV puede sintetizarse fácilmente. El intermedio de fórmula XV puede tratarse, con o sin la presencia de una base tal como trietilamina o NaHCO_{3}, con un reactivo de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl, para producir un intermedio de fórmula XVII. El intermedio de fórmula XVII puede hacerse reaccionar con una amina de fórmula H_{2}N-L-G en presencia de una base, tal como diisopropilamina, con o sin un reactivo de acoplamiento, tal como 4-dimetilamino piridina, para dar un intermedio de fórmula XVIII. El producto final VII puede formarse y liberarse del soporte sólido por calentamiento del intermedio de fórmula XVIII con o sin una base, tal como DBU. Un compuesto de fórmula VII es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M y M' es un enlace y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

Esquema VIII

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Como se ha descrito en el Esquema II, un intermedio de fórmula VI puede sintetizarse fácilmente. Como se muestra en el Esquema VIII, el tratamiento de un intermedio de fórmula VI con una O-difenilfosfinilhidroxilamina sustituida de fórmula Ph_{2}POONH-R^{10} e hidruro potásico como se describe en Synthesis, 7, 592 (1982) y Tetrahedron Let., 29, 1777 (1988) (ambos incorporados en este documento como referencia en su totalidad), produce un intermedio de fórmula XXII. El intermedio de fórmula XXII puede calentarse con o sin una base, tal como trietilamina, para producir un compuesto de fórmula XXIII, que es un compuesto de fórmula I en la que M es un enlace, M' es NR^{10} y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula XXIII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta de un compuesto de fórmula XXIII pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

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Esquema IX

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Como se ha descrito en el Esquema VI, un intermedio de fórmula XIII puede sintetizarse fácilmente. Como se muestra en el Esquema IX, el intermedio ácido de fórmula XIII puede acoplarse con una amina de fórmula H_{2}N-L-G mediante el uso de una variedad de reactivos de acoplamiento, como se describe en el Esquema III, para producir un intermedio de amida de fórmula XXIV. El tratamiento del intermedio de fórmula XXIV con hidruro potásico y una O-difenilfosfinilhidroxilamina sustituida de fórmula Ph_{2}POONHR^{10}, como se ha descrito en el Esquema VIII, seguido de la retirada del grupo protector de BOC por tratamiento con un ácido, tal como ácido trifluoroacético, produce un intermedio de fórmula XXV. El intermedio de fórmula XXV puede tratarse con un reactivo de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl, para producir un intermedio que puede calentarse con o sin una base, tal como trietilamina, para producir un compuesto de fórmula XXVI, que es un compuesto de fórmula I en la que M' es un enlace, M es NR^{10} y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula XXVI pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula XIII o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros alfa o beta individuales de un compuesto de fórmula XXVI pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

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Esquema X

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Como se ha descrito en el Esquema IX, un intermedio de fórmula XXIV puede sintetizarse fácilmente. Como se muestra en el Esquema X, el tratamiento de un intermedio de fórmula XXIV con agentes adecuados para formar un resto de hidroxilamida, tal como TMSCl seguido de MoO5(DMF)_{2} como se describe en J. Org. Chem., 54, 5852 (1989) y J. Org. Chem., 59, 8065 (1994) (ambos incorporados en este documento como referencia en su totalidad), y para la desprotección de un grupo BOC, tal como etanol saturado con gas HCl, da como resultado la generación de un intermedio de hidroxilamida de fórmula XXVII. El intermedio de fórmula XXVII puede tratarse con un reactivo de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl, para producir un compuesto de fórmula XXVIII, que es un compuesto de fórmula I en la que M es O, M' es un enlace y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula XXVIII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula XIII o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula XXVIII pueden obtenerse, por ejemplo, por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

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Esquema XI

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Como se muestra en el Esquema XI, el tratamiento de un intermedio de fórmula H_{2}N-L-G con un reactivo de tipo fosgeno de fórmula Cl-E-Cl como se describe en Oppi. Briefs 17, 235 (1985), da como resultado un intermedio de fórmula XXXII. El intermedio de fórmula XXXII puede hacerse reaccionar con un intermedio de fórmula II para producir un intermedio de fórmula VI. Como se ha descrito en el Esquema II, un intermedio de fórmula VI puede convertirse fácilmente un intermedio de fórmula VII, que es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M y M' es en un enlace y E es C=Z_{2}, SO_{2}, P=OR^{2} o P=OOR^{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula VII pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los isómeros endo o exo individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

Esquema XII

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Como se ha descrito en el Esquema III, un compuesto de fórmula IX puede prepararse fácilmente por el procedimiento descrito. Como se ilustra en el Esquema XII, el tratamiento de un compuesto de fórmula IX, con un reactivo de aldehído de fórmula R^{7}CHO, que puede obtenerse a partir de fuentes comerciales o sintetizarse fácilmente por un especialista en la técnica, produce un intermedio de imina de fórmula XXXIII. El tratamiento del intermedio de fórmula XXXIII, con una base tal como DBU, da como resultado un compuesto de fórmula XXXIV, que es un compuesto de fórmula I en la que cada uno de M y M' es un enlace y E es CHR^{7}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula XXXIV pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula XXXIV pueden obtenerse por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

Esquema XIII

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Como se ha descrito en el Esquema I un compuesto de fórmula IV, en el que Z_{2} = S, puede prepararse fácilmente por el procedimiento descrito. Como se ilustra en el Esquema XIII, el tratamiento de un compuesto de fórmula IV, en la que Z_{2} = S, con un agente capaz de eliminar de forma reductora el azufre, tal como níquel Raney, produce un compuesto de fórmula XXXV, que es un compuesto de fórmula I, en el que cada uno de M y M' es un enlace y E es CH_{2}. Los antípodos individuales de un compuesto de fórmula XXXV pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula XXXV pueden obtenerse pueden obtenerse por separación de una mezcla resultante por técnicas convencionales.

Esquema XIV

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El Esquema XIV describe un procedimiento para preparar compuestos de fórmula I en la que un intermedio de fórmula II (en la que Z_{1} es O) se saponifica para dar un ácido de fórmula VIII por tratamiento con una base, tal como hidróxido sódico. Después, el ácido puede acoplarse con una amina de fórmula H2N-L-G mediante una diversidad de reactivos de acoplamiento, por ejemplo, como se describe en The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 2ª Ed., Bodanszy, Miklos, 1993 (incorporado en este documento como referencia en su totalidad), para producir un intermedio de amida de fórmula IX. El intermedio de fórmula IX puede tratarse con un reactivo de fórmula R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} (en el que X^{1} y X^{2} son independientemente F, Br, Cl o I, o X^{1} y X^{2} se toman junto con el carbono al que están unidos para formar C=O), para producir un compuesto de fórmula XXXVI, que es un compuesto de fórmula I en la que Z_{1} es O, M y M' son enlaces y E es CR^{7}R^{7'} (tal como cuando uno de R^{7} y R^{7'} es H, alquilo C_{1-4} o haloalquilo C_{1-4} y el otro es R^{1}OC=O).

Cuando el intermedio de fórmula R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} es una cetona (X^{1} y X^{2} se toman junto con el carbono al que están unidos para formar C=O), las aminas de fórmula IX pueden condensarse con estos compuestos de carbonilo intermedios, por ejemplo, en presencia de hidróxido sódico en agua a una temperatura comprendida entre 0º y 25ºC usando los procedimientos descritos por D. A. Johnson et. al., J. Org. Chem. 31, 897 (1966) y Uozumi et. al., Tetrahedron Letters, 42 407-410 (2001). (Véase el Esquema XII anterior para cuando el intermedio de fórmula R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} es un aldehído). Cuando el intermedio de fórmula R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} es un dihaluro (X^{1} y X^{2} son halógenos), la condensación puede realizarse, por ejemplo, en presencia de una base por calentamiento de la mezcla de IX y R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} en un disolvente inerte. Los dihaluros preferidos de fórmula R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} son bromofluoroacetato de etilo y bromodifluoroacetato de etilo. Los ejemplos de bases adecuadas incluyen sales alcalinas de carbonato, tales como potasio, sodio y litio, y bases de hidruro tales como hidruro sódico. Los ejemplos de disolventes inertes incluyen éteres tales como éter dietílico, tetrahidrofurano y dioxano: ésteres tales como acetato de etilo; amidas tales dimetilformamida; y acetonitrilo. Aunque la ciclación de los compuestos de fórmula IX y R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} puede realizarse a temperatura ambiente, la reacción se realiza preferiblemente por calentamiento a una temperatura superior a la temperatura ambiente. Los dihaluros, aldehídos y cetonas de fórmula R^{7}R^{7'}-C-X^{1}X^{2} pueden prepararse por procedimientos conocidos y muchos de ellos están disponibles en el mercado. Por ejemplo, véase March, J. Advanced Organic Chemistry; 3ª ed., John Wiley: New York, 1985. Otras rutas sintéticas que pueden emplearse para la conversión de compuestos de IX en compuestos de fórmula XXXVI son análogas a las que se encuentran en los documentos WO-9414817, US-5.643.855, WO-0107440, WO-9910313, WO-991 0312 y JP-46016990 y las referencias de los mismos. Los isómeros ópticos individuales de un compuesto de fórmula XXXVI (también conocidos como antípodos) pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso de los antípodos individuales correspondientes de un compuesto de fórmula II o por separación de la mezcla racémica por técnicas convencionales. Los isómeros \alpha o \beta individuales de un compuesto de fórmula XXXVI pueden aislarse a partir de la mezcla resultante, por ejemplo, por técnicas convencionales.

Esquema XV

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Como se muestra en el Esquema XV, compuestos de fórmula I en la que Z_{1} es O, M y M' son enlaces E es CR^{7}R^{7'} pueden prepararse transformando las imidazolinonas de fórmula XXVII. El éster de fórmula XXXVII se hidroliza, por ejemplo, con hidróxido sódico en un disolvente tal como metanol o etanol de aproximadamente 0 a 50ºC para proporcionar el ácido carboxílico correspondiente. El ácido puede convertirse en el éster correspondiente (R^{7'} = COOR^{1}) o amida (R^{7'} = CONR^{1}R^{1}) de fórmula XXXVIII por tratamiento con cloruro de tionilo o cloruro de oxalilo para formar el cloruro de ácido seguido de tratamiento con el alcohol R^{1}-OH o amina H-NR^{1}R^{1'} apropiados, respectivamente.

El tratamiento del cloruro de ácido con amoniaco produce la amida sin sustituir, R^{7'} = CONH^{2}, que puede deshidratarse tal como por procedimientos convencionales para formar el nitrilo, R^{7'} = CN.

Como alternativa, la esterificación del ácido carboxílico puede realizarse haciendo reaccionar el ácido con un haluro de alquilo apropiado en presencia de una base tal como carbonato potásico en un disolvente inerte tal como dimetilformamida, por ejemplo, de aproximadamente 0º a 60ºC para dar el éster de fórmula XXXVIII (R^{7'} = COOR^{1}).

La amida del compuesto XXXVIII (R^{7'} = CONR^{1}R^{1}), también puede obtenerse por acoplamiento con 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC) entre el ácido carboxílico y la amina apropiada H-NR^{1}R^{1'}. El procedimiento de DCC se describe por Bodanszky, M. y Bodanszky, A; en Practice of Peptide Synthesis, Vol. 21; Springer-Verlag, New York: (1984).

La reducción del ácido o éster carboxílico con un agente reductor tal como hidruro de aluminio en un disolvente tal como tetrahidrofurano, por ejemplo, de 0º a 80ºC, produce el alcohol correspondiente, un compuesto de fórmula XXXVIII en la que R^{7'} = CH_{2}OH.

El tratamiento del alcohol con un R^{13}-haluro (donde R^{13} es alquilo (por ejemplo, alquilo C_{1}-C_{6}) o alquilo sustituido; alquenilo (por ejemplo, alquenilo C_{1}-C_{6}) o alquenilo sustituido; cicloalquilo (por ejemplo cicloalquilo C_{3}-C_{6}) o cicloalquilo sustituido; heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido; arilo o arilo sustituido (por ejemplo, sustituido por alquilo y sustituyentes adicionales); heterociclo o heterociclo sustituido (por ejemplo, heteroarilo o heteroarilo sustituido, tales como heteroarilo sustituido por alquilo y sustituyentes adicionales), en presencia de una base tal como carbonato potásico, en un disolvente inerte tal como acetonitrilo, produce compuestos de fórmula XXXVIII, en la que R^{7'} = CH_{2}OR^{13}.

Otras sustituciones de R^{7'} también pueden obtenerse a partir del grupo CO_{2}Et de los compuestos de fórmula XXXVII usando transformaciones de grupos funcionales, tales como las conocidas por un especialista en la técnica.

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Esquema XVI

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El Esquema XVI describe otra estrategia para incorporar la sustitución adicional en un compuesto de fórmula l. Como se ilustra en el Esquema XVI, un compuesto de fórmula XXXIX, que puede prepararse de acuerdo con los Esquemas anteriores, puede incubarse en presencia de una enzima adecuada o microorganismo dando como resultado la formación de un análogo hidroxilado de fórmula XL. Dicho procedimiento puede emplearse para producir la incorporación regioespecífica así como enantioespecífica de un grupo hidroxilo en una molécula de fórmula XXXIX mediante un microorganismo específico o por una serie de microorganismos diferentes. Dichos microorganismos pueden ser, por ejemplo, bacterias, levaduras u hongos que se encuentran en la naturaleza y pueden obtenerse a partir de distribuidos tales como ATCC o identificarse para el uso en este procedimiento tal como por procedimientos conocidos por un especialista en la técnica. El compuesto XL es un compuesto de fórmula I en la que Y es como se ha descrito anteriormente y A_{1} y A_{2} son preferiblemente CR^{7}.

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Esquema XVII

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El Esquema XVII describe otra estrategia para incorporar la sustitución adicional en un compuesto de fórmula I. Como se ilustra en el Esquema XVII, un compuesto de fórmula XLI, que puede prepararse de acuerdo con los Esquemas anteriores, puede incubarse en presencia de una enzima adecuada o un microorganismo dando como resultado la formación de un análogo de diol de fórmula XLII. Dicho procedimiento puede emplearse para producir una transformación regioespecífica así como enantioespecífica de un compuesto de fórmula XLI en un 1-2 diol de fórmula XLII mediante un microorganismo específico o por una serie de microorganismos diferentes. Dichos microorganismos pueden ser, por ejemplo, bacterias, levaduras u hongos que se encuentran en la naturaleza y pueden obtenerse a partir de distribuidores tales como ATCC o identificarse para el uso en este procedimiento tal como por procedimientos conocidos por un especialista en la técnica. El Compuesto XLII es un compuesto de fórmula I en la que Y es como se ha descrito anteriormente y A_{1} y A_{2} son preferiblemente CR^{7}.

En este documento también se describen los procedimientos de los Esquemas XVI y XVII.

Por lo tanto, en una realización, la presente descripción describe un procedimiento para la preparación de un compuesto de la siguiente fórmula XL, o una sal del mismo.

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en la que los símbolos son como se han definido en este documento,

que comprende las etapas de poner en contacto un compuesto de la siguiente fórmula XXXIX, o una sal del mismo:

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en la que los símbolos son como se han definido anteriormente;

con una enzima o microorganismo capaz de catalizar la hidroxilación de dicho compuesto XXXIX para formar dicho compuesto XXXL y realizar dicha hidroxilación.

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En otra realización preferida, la presente descripción describe un procedimiento para la preparación de un compuesto de la siguiente fórmula XLII, o una sal del mismo:

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en la que los símbolos son como se han definido en este documento,

que comprende las etapas de poner en contacto un compuesto de fórmula XLI, o una sal del mismo:

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en la que los símbolos son como se han definido anteriormente;

con una enzima o microorganismo capaz de catalizar la apertura del anillo de epóxido del compuesto XLI para formar el diol de dicho compuesto XLII, y realizar dicha apertura del anillo y formación del diol.

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Todas las estereoconfiguraciones de los centros quirales no especificados de los compuestos de las fórmulas XXXIX, XL, XLI y XLII se contemplan en los procedimientos de la presente invención, solas (es decir, sustancialmente libres de otros estereoisómeros) o en una mezcla con otras formas estereoisoméricas. La conversión de un isómero de forma selectiva (por ejemplo, hidroxilación del isómero exo con preferencia a hidroxilación del isómero endo) cuando se pone en contacto una mezcla isomérica es una realización preferida de la invención. La conversión en un isómero de forma selectiva (por ejemplo, hidroxilación en el lado exo "isómero exo" con preferencia al lado endo "isómero endo" o a la apertura regioselectiva de un epóxido para formar únicamente uno de los dos regioisómeros posibles de un trans diol) es una realización preferida de la invención. La hidroxilación de un intermedio aquiral para formar un isómero óptico individual del producto hidroxilado también es una realización preferida de la invención. La resolución de una mezcla racémica de un intermedio por hidroxilación selectiva, o apertura de anillo epóxido y formación de diol, para generar uno de los dos isómeros ópticos posibles también es una realización preferida de la invención. El término "resolución", como se usa en este documento, representa la resolución parcial, así como, preferiblemente, completa.

El término "procedimiento enzimático", como se usa en este documento, representa un procedimiento de la presente invención que emplea una enzima o microorganismo. El término "hidroxilación", como se usa en este documento, representa la adición de un grupo hidroxilo a un grupo metileno como se ha descrito anteriormente. La hidroxilación puede realizarse, por ejemplo, por contacto con oxígeno molecular de acuerdo con los procedimientos de la presente invención. La formación del diol puede realizarse, por ejemplo, por contacto con agua de acuerdo con los procedimientos de la presente invención. El uso de "una enzima o microorganismo" en los procedimientos de la presente invención incluye el uso de dos o más, así como una sola, enzima o microorganismo.

La enzima o el microorganismo empleado en la presente invención puede ser cualquier enzima o microorganismo capaz de catalizar las conversiones enzimáticas descritas en este documento. Los materiales enzimáticos o microbianos, sin tener en cuenta su origen o pureza, pueden emplearse en el estado libre o inmovilizados sobre un soporte tal como por adsorción física o atrapamiento. Los microorganismos o enzimas adecuadas para el uso en la presente invención pueden seleccionarse explorando la actividad deseada, por ejemplo, poniendo en contacto un microorganismo o enzima candidata con un compuesto de partida XXXIX o XLI o una sal del mismo, y observando la conversión en el compuesto correspondiente XL o XLII o una sal del mismo. La enzima puede estar, por ejemplo, en forma de enzimas de animales o plantas o mezclas de las mismas, células de microorganismos, células trituradas o extractos de células, o puede ser de origen sintético.

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Los microorganismos ejemplares incluyen los de los géneros: Streptomyces o Amycolatopsis. Son microorganismos particularmente preferidos los de las especies Streptomyces griseus, especialmente Streptomyces griseus ATCC 10137, y Amycolatopsis orientalis tales como ATCC 14930, ATCC 21425, ATCC 35165, ATCC 39444, ATCC 43333, ATCC 43490, ATCC 53550, ATCC 53630, y especialmente ATCC 43491. El término "ATCC" como se usa en este documento se refiere al Número de Acceso de la Colección Americana de Cultivos Tipo, 10801 University Blvd., Manassas Virginia 20110-2209, donde se hace referencia al depositario para el organismo. Debe apreciarse que también se contemplan mutantes de estos organismos por la presente invención, para uso en los procedimientos descritos en este documento, tales como los modificados por el uso de medios químicos, físicos (por ejemplo, rayos-X) o biológicos (por ejemplo, por técnicas de biología molecular).

Las enzimas preferidas incluyen las obtenidas a partir de microorganismos, particularmente los microorganismos descritos anteriormente. Las enzimas pueden aislarse, por ejemplo, por procedimientos de extracción y purificación tal como por procedimientos conocidos para los especialistas en la técnica. Una enzima puede usarse, por ejemplo, en su estado libre o en forma inmovilizada. Una realización de la invención es aquella en la que una enzima se adsorbe sobre un vehículo adecuado, por ejemplo, tierra de diatomeas (Celite Hyflo Supercel poroso), polipropileno microporoso (polvo de polipropileno Enka Accurel®), o un adsorbente polimérico no iónico tal como Amberlite® XAD-2 (poliestireno) o XAD-7 (poliacrilato) de Rohm y Haas Co. Cuando se emplea para inmovilizar una enzima, un vehículo puede controlar el tamaño de partículas de la enzima y evitar la agregación de las partículas de la enzima cuando se usa en un disolvente orgánico. La inmovilización puede realizarse, por ejemplo, por precipitación de una solución acuosa de la enzima con acetona fría en presencia del Celite Hyflo Supercel seguido de secado al vacío, o en el caso de un adsorbente polimérico no iónico, incubando soluciones de la enzima con adsorbente en un agitador, retirando el exceso de la solución y secando las resinas adsorbentes de enzima al vacío. Aunque es deseable usar la mínima cantidad de enzima posible, la cantidad de enzima requerida variará dependiendo de la actividad específica de la enzima usada.

La hidroxilación que se ha descrito anteriormente puede realizarse in vivo. Por ejemplo, la enzima hepática puede, con respecto al isómero endo, hidroxilar de forma selectiva el isómero exo de un compuesto de la presente invención. En la reacción de los procedimientos de la presente invención fuera del cuerpo, puede emplearse hidroxilasa microsomal hepática como enzima para la catálisis.

Estos procedimientos también pueden realizarse usando células microbianas que contienen una enzima que tiene la capacidad de catalizar las conversiones. Cuando se usa un microorganismo para realizar la conversión, estos procedimientos se realizan convenientemente mediante la adición de las células y el material de partida al medio de reacción deseado.

Cuando se emplean microorganismos, las células pueden usarse en forma de células húmedas intactas o células secadas tal como células liofilizadas, secadas por pulverización o secadas por calor, o en forma de célula de material celular tratado tal como células rotas o extractos celulares. También pueden emplearse extractos celulares inmovilizados sobre polipropileno de Celite® o Accurel® como se ha descrito anteriormente. También se contempla el uso de organismos modificados por ingeniería genética. La célula huésped puede ser cualquier célula, por ejemplo, Escherichia coli, modificada para contener un gen o genes para expresar una o más enzimas capaces de realizar la catálisis como se ha descrito anteriormente.

Cuando se emplean uno o más microorganismos, los procedimientos enzimáticos de la presente invención pueden realizarse con posterioridad la fermentación del microorganismo (fermentación y conversión en dos etapas) o de forma concurrente con ella, es decir, en último caso, por fermentación y conversión in situ (fermentación y conversión en una sola etapa).

El crecimiento de los microorganismos puede realizarse por un especialista en la técnica mediante el uso de un medio apropiado. Los medios apropiados para el crecimiento de microorganismos incluyen los que proporcionan los nutrientes necesarios para el crecimiento de las células microbianas. Un medio típico para el crecimiento incluye fuentes de carbono necesarias, fuentes de nitrógeno y elementos (por ejemplo, en cantidades traza). También pueden añadirse inductores. El término "inductor", como se usa en este documento, incluye cualquier compuesto que potencia la formación de la actividad enzimática deseada dentro de la célula microbiana.

Las fuentes de carbono pueden incluir azúcares tales como maltosa, lactosa, glucosa, fructosa, glicerol, sorbitol, sacarosa, almidón, manitol, propilenglicol y similares; ácidos orgánicos tales como acetato sódico, citrato sódico y similares; y alcoholes tales como etanol, propanol y similares.

Las fuentes de nitrógeno pueden incluir N-Z amina A, licor de maíz fermentado, harina de soja, extracto de carne de vaca, extractos de levadura, molasas, levadura de pan, tristona, nutrisoja, peptona, Yeastamin, aminoácidos tales como glutamato sódico y similares, nitrato sódico, sulfato de amonio y similares.

Los elementos traza pueden incluir magnesio, manganeso, calcio, cobalto, níquel, hierro, sales de sodio y potasio. También pueden añadirse fosfatos en una cantidad traza o, preferiblemente, en cantidades superiores a las cantidades traza.

El medio empleado puede incluir más de una fuente de carbono o nitrógeno u otro nutriente.

Los medios preferidos para el crecimiento incluyen medios acuosos.

La agitación y el aireamiento de la mezcla de reacción afectan a la cantidad de oxígeno disponible durante el procedimiento de conversión cuando se realiza, por ejemplo, en cultivos de matraces agitados o en tanques de fermentación durante el crecimiento de los microorganismos.

La incubación del medio de reacción se realiza preferiblemente a una temperatura comprendida entre aproximadamente 4 y aproximadamente 60ºC. El tiempo de reacción puede variarse apropiadamente dependiendo de la cantidad de enzima usada y de su actividad específica. Los tiempos de reacción pueden reducirse aumentando la temperatura de reacción y/o aumentando la cantidad de enzima añadida a la solución de reacción.

También se prefiere emplear un líquido acuoso como medio de reacción, aunque también puede emplearse un líquido orgánico, o una mezcla de líquidos orgánicos/acuosos no miscibles (bifásica). La cantidad de enzima o de microorganismo empleada con respecto al material de partida se selecciona para que permita la catálisis de las conversiones enzimáticas de la presente invención.

Los disolventes para la fase orgánica de un sistema de disolventes bifásico pueden ser cualquier disolvente orgánico inmiscible en agua, tal como tolueno, ciclohexano, xileno, triclorotrifluoroetano y similares. La fase acuosa es convenientemente agua, preferiblemente agua desionizada, o una solución de tampón acuosa adecuada, especialmente una solución de tampón fosfato. El sistema de disolventes bifásico comprende preferiblemente entre aproximadamente el 10 y el 90 por ciento en volumen de la fase orgánica y entre aproximadamente el 90 y 10 por ciento en volumen de la fase acuosa, y más preferiblemente contiene de un 20 o aproximadamente un 20 por ciento en volumen de la fase orgánica y de un 80 o aproximadamente un 80 por ciento en volumen de la fase acuosa.

Una realización ejemplar de dichos procedimientos comienza con la preparación de una solución acuosa de la enzima o enzimas o microbios que van a usarse. Por ejemplo, la enzima o enzimas preferidas o los microbios pueden añadirse a una cantidad adecuada de un disolvente acuoso, tal como un tampón fosfato o similar. Esta mezcla se ajusta preferiblemente para que se mantenga a un pH deseado.

Los compuestos XL y XLII producidos por estos procedimientos de la presente invención pueden aislarse y purificarse, por ejemplo, por procedimientos tales como extracción, destilación, cristalización y cromatografía en columna.

Otros compuestos de la fórmula I, tales como compuestos en los que M es CR^{7}R^{7'} o compuestos en los que M o M' es distinto de un enlace y E es CHR^{7}, pueden prepararse fácilmente por un especialista en la técnica, por ejemplo, por procedimientos análogos a los descritos en este documento.

Los compuestos de fórmula I también pueden prepararse, cuando sea apropiado, por los procedimientos descritos en la Solicitud de Estados Unidos con Nº de Serie 10/025.116, presentada simultáneamente con este documento por Mark Salvati y col., titulada "Fused Heterocíclico Succinimide Compounds and Analogs Thereof, Modulators of Nuclear Hormona Receptor Function" tal como por conversión y/o separación microbiana/enzimática, como se describe en ese documento.

Los procedimientos ejemplares para la preparación de compuestos de fórmula II (empleados en los Esquemas anteriores) se ilustran en las siguientes Figuras 1 a 3.

23

Como se muestra en la Figura 1, un derivado de glioxilato de etilo puede tratarse con NH_{4}Cl ac. saturado y el dieno apropiado de fórmula A para dar el compuesto de fórmula II, en la que Q = H. Dicha ciclación puede potenciarse por adición de sales de metales, tales como, pero sin limitación, trifluorometanosulfonato de yterbio (III) como se describe en los documentos citados anteriormente. Puede prepararse un intermedio de fórmula II, en la que Q \neq H, por protección del nitrógeno secundario con un grupo protector tal como BOC, seguido de tratamiento con intermedios reactivos de fórmula Q-X, en la que X representa un grupo saliente o X es un centro electrófilo que puede reaccionar para producir en último lugar la definición de Q que se ha descrito anteriormente, en presencia de una base, tal como LDA, o un agente de acoplamiento que ya se conoce por un especialista en la técnica, seguido de desprotección del grupo BOC con un ácido tal como HCl etanólico saturado.

24

Como se muestra en la Figura 2 (donde se indican las condiciones preferidas), el intermedio quiral disponible en el mercado (D o L puro), N-(terc-butoxicarbonil)-L-4-hidroxiprolina, B, puede tratarse con un agente reductor, tal como BH_{3}\cdotTHF, para producir un alcohol primario, que después puede protegerse de forma selectiva con un agente tal como TBSOTf, en presencia de una base (por ejemplo, 2,3-lutidina) para producir el alcohol intermedio C. El alcohol secundario de C puede protegerse después de forma diferencial por tratamiento con un agente tal como TsCL, en presencia de una base (por ejemplo, piridina), seguido de desprotección del alcohol primario (que puede realizarse por tratamiento con un ácido, tal como ácido paratoluenosulfónico), para producir el alcohol intermedio D. El alcohol resultante D puede oxidarse, tal como en condiciones convencionales de Swern, para producir el intermedio de aldehído correspondiente E. El intermedio de aldehído E puede tratarse directamente con bencilamina y cianofosfonato de dietilo para dar el intermedio F. El tratamiento de intermedio F con una base, tal como base de Hüning, con calentamiento, produce el intermedio bicíclico G. El tratamiento de G con una base, tal como metóxido sódico, convierte el intermedio de nitrilo G directamente en el intermedio de este H. El tratamiento del intermedio H con un agente para retirar el grupo bencilo, tal como paladio o sobre carbón con gas hidrógeno, da como resultado la formación de un intermedio de fórmula IIa en la que Q = Halógeno. Como alternativa, el intermedio de fórmula H puede tratarse con intermedio reactivo de fórmula Q-X, en la que X representa un grupo saliente o X es un centro electrófilo que puede reaccionar para producir, en último lugar, la definición de Q que se ha descrito anteriormente, en presencia de una base, tal como LDA, o un agente de acoplamiento que se conoce fácilmente por un especialista en la técnica, que, después del tratamiento con un agente tal como paladio sobre carbón, produce un intermedio de fórmula IIa en la que Q \neq H. Los diversos intermedios de la Figura 2 pueden purificarse, por ejemplo, por purificación sobre sílice, o pueden, por ejemplo, llevarse simplemente a continuación in situ a la siguiente etapa (por ejemplo, convirtiendo D en F sin aislar E).

El procedimiento de la Figura 2 es nuevo, como los intermedios preparados en él, y todos ellos forman parte de la presente invención.

Por lo tanto, por ejemplo, el siguiente procedimiento es nuevo, como las etapas individuales e intermedios producidos en él (por ejemplo, E, F, G, H, J y IIa): un procedimiento para la preparación de un compuesto de la siguiente fórmula IIa:

25

en la que

BOC es t-butoxicarbonilo; y

Q es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, cicloalquilo o cialoalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, halo, CN, R^{1}OC=O, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, HOCR^{7}R^{7'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2}, C=OSR^{1}, SO_{2}R^{1} o NR^{4}R^{5}; que comprenden las etapas de

(i)

tratar un compuesto de la siguiente fórmula B:

\vskip1.000000\baselineskip

26

\vskip1.000000\baselineskip

\quad

con un agente reductor para reducir el grupo ácido carboxílico en hidroximetilo, seguido de protección de dicho hidroxi para producir un compuesto de la siguiente fórmula C:

\vskip1.000000\baselineskip

27

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\quad

en la que Prol es un grupo protector de hidroxilo;

(ii)

proteger el grupo hidroxilo no protegido del compuesto de fórmula C, seguido de desprotección de Prol-O- para formar el hidroxilo, produciendo un compuesto de la siguiente fórmula D:

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28

\quad

en la que Pro2 es un grupo protector;

(iii)

oxidar el grupo hidroximetilo de D, produciendo un aldehído de la siguiente fórmula E:

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29

\newpage

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(iii)

tratar E con bencilamina y cianofosfonato de dietilo, produciendo un compuesto de la siguiente fórmula F:

30

(iv)

tratar dicho compuesto de la fórmula F con una base, con calentamiento, para producir un compuesto de la siguiente fórmula G:

31

(v)

tratar dicho compuesto de la fórmula G con una base para convertir el grupo nitrilo en metoxicarbonilo, produciendo un compuesto de la siguiente fórmula H:

32

\quad

y

(vi)

retirar el grupo bencilo de dicho compuesto de la fórmula H para formar dicho compuesto de la fórmula IIa, en la que, opcionalmente, dicho compuesto de la fórmula H se pone en contacto con un compuesto Q-X, donde X es un grupo saliente o X es un centro electrófilo que puede reaccionar para formar un grupo Q, antes de dicha retirada para formar los compuestos de la fórmula IIa en la que Q es distinto de hidrógeno.

El procedimiento de la Figura 2 es especialmente útil para la preparación de aminoácidos no naturales IIa que pueden emplearse, por procedimientos análogos a los que usan los compuestos de la fórmula II, en la preparación del los compuestos de fórmula I de la presente invención.

33

Como se muestra en la Figura 3 (donde se indican las condiciones preferidas), el intermedio de imina activado M puede generarse por las reacciones de un isocianto de sulfonilo activado, tal como isocianato de p-toluenosulfonilo, con glioxilato de etilo y calentamiento. La imina M puede experimentar ciclacion con un intermedio de dieno apropiado de fórmula A para dar un intermedio de fórmula II'. Dicha ciclación puede potenciarse por la adición de sales de metales, tales como, pero sin limitación, trifluorometanosulfonato de Yterbio (III), como se describe en las referencias citadas previamente. El grupo protector de etoxilo puede retirarse del intermedio II' mediante varios reactivos, tales como los conocidos por un especialista en la técnica, tal como bromuro de hidrógeno en ácido acético, para producir un intermedio de fórmula II. El intermedio de fórmula II' puede tratarse con intermedios reactivos de fórmula Q-X, en la que X representa un grupo saliente o X es un centro electrófilo que puede reaccionar para producir en último lugar la definición de Q que se ha descrito anteriormente, en presencia de una base, tal como LDA, o un agente de acoplamiento que ya se conoce por un especialista en la técnica, para producir el intermedio de fórmula T. El grupo protector de tosilo puede retirarse del intermedio T mediante varios reactivos conocidos por un especialista en la téc-
nica, tales como bromuro de hidrógeno en ácido acético, para producir un intermedio de fórmula II, en la que Q \neq H.

Un subgénero preferido del compuesto descrito en este documento incluye compuestos de la fórmula I o sales de los mismos en la que uno o más preferiblemente todos, de los siguientes sustituyentes son como se definen a continuación:

\quad

G es un grupo arilo (especialmente, fenilo o naftilo) o heterociclo (por ejemplo, heteroarilo), en el que dicho grupo es mono- o policíclico, y que está opcionalmente sustituido en una o más posiciones, preferiblemente con hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquilo sustituido con uno o más halógenos (por ejemplo, perfluoroalquilo), heterociclo, alquilo sustituido con hidroxi, alilo o alilo sustituido, alquinilo, Cl, F, Br, I, CN, R^{1}OC=O, R^{1}C=O, R^{1}HNC=O, R^{1}R^{2}NC=O, HOCR^{3}R^{3'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2}, NR^{4}R^{5}, SR^{1}, S=OR^{1}, SO_{2}R^{1}, SO2OR^{1}, SO_{2}NR^{1}R^{1'}, (R^{1}O)(R^{1'}O)P=O, (R^{1})(R^{1})P=O, o(R^{1})(NHR^{1})p=O;

\quad

B es C = Z_{2}, CHR^{7}, SO_{2}, P = OR^{2}, o P=OOR^{2};

\quad

Z_{1} es O, S o NR^{6};

\quad

Z_{2} es O, S o NR^{6};

\quad

A_{1} es CR^{7} (especialmente, CH);

\quad

A_{2} es CR^{7} (especialmente, CH);

\quad

Y es J-J'-J'' donde J es (CR^{7}R^{7'})n y n = 0-2, J' es un enlace o NH, NR^{6}, C=O, cicloalquilo (especialmente, ciclopropilo o ciclobutilo), o cicloalquenilo (especialmente, ciclobutenilo o ciclopentenilo), y J'' es (CR^{7}R^{7'})n y n = 1-2, donde Y no es un enlace;

\quad

W es CR^{7}R^{7'}-CR^{7}R^{7'}, CR^{8}=CR^{8'}, CR^{7}R^{7'}-C=O, NR^{9}-CR^{7}R^{7'}, cicloalquilo (especialmente, ciclopropilo o ciclobutilo) o cicloalquenilo (especialmente, ciclobutenilo o ciclopentenilo);

\quad

Q es H, alquilo C_{1-6}, alquilo sustituido con uno o más halógenos (por ejemplo, perfluoroalquilo), alquilo C_{1-6} sustituido con hidroxi, alquenilo (por ejemplo, alilo), alquinilo, Cl, F, Br, I, arilalquilo (por ejemplo bencilo) o arilalquilo sustituido, CN, R^{1}OC=O, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, HOCR^{7}R^{7'}, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2} o NR^{4}R^{5};

\quad

M es un enlace o NR^{10}, y M' es un enlace o NR^{10}, con la condición de que al menos uno de M o M' debe ser un enlace;

\quad

L es un enlace, (CR^{7}R^{7'})n, NH, o NR^{5} donde n = 0-1;

\quad

Cada uno de R^{1} y R^{1'} es independientemente H, alquilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo o heterocicloalquilo;

\quad

R^{2} es alquilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo o heterocicloalquilo;

\quad

Cada uno de R^{3} y R^{3'} es independientemente H, alquilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, Cl, F, Br, I, CN, alcoxi, amino, NR^{1}R^{2}, tiol o alquiltio;

\quad

R^{4} es H, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, R^{1}C=O, R^{1} NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

R^{5} es alquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

R^{6} es alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

Cada uno de R^{7} y R^{7'} es independientemente H, alquilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, Cl, F, Br, I, CN, OR^{1}, nitro, hidroxilamina, hidroxilamida, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NOR^{1}, tiol, alquiltio, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

Cada uno de R^{8} y R^{8'} es independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, halo, CN, OR^{1}, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NOR^{1}, alquiltio o alquiltio sustituido, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\global\parskip1.000000\baselineskip

\quad

Cada uno de R^{9} y R^{9'} es independientemente H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'}; y

\quad

R^{10} es H, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}R^{1'}NC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'}.

\vskip1.000000\baselineskip

Un subgénero más preferido de los compuestos descritos en este documento incluye compuestos de la fórmula I o sales de los mismos en la que uno o más, preferiblemente todos, de los siguientes sustituyentes son como se definen a continuación:

\quad

G es un grupo arilo o heteroarilo, donde dicho grupo es mono- o policíclico, y que está opcionalmente sustituido en una o más posiciones con hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{3}, alilo o alilo sustituido, alquinilo, Cl, F, Br, I, CN, R^{1}C=O, R^{1}HNC=O, R^{1}R^{2}NC=O, haloalquilo (especialmente, perfluoroalquilo), hidroxilalquilo C_{1}-C_{3}, HOCR^{3}R^{3'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NR^{4}R^{5}, o SR^{1};

\quad

B es C = Z_{2}, CHR^{7} o SO2;

\quad

Z_{1} es O, S, o NCN;

\quad

Z_{2} es O, S, o NCN;

\quad

A_{1} es CR^{7} (especialmente, CH);

\quad

A_{2} es CR^{7} (especialmente, CH);

\quad

Y es J, ciclopropilo, o ciclobutilo, donde J = (CR^{7}R^{7'})n y n = 1-3;

\quad

W es CR^{7}R^{7'}=CR^{7}R^{7'}, CR^{8}=CR^{8'}, CR^{7}R^{7'}=C=O, ciclopropilo, o ciclobutilo;

\quad

Q es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, alquinilo, Cl, F, Br, I, CN, R^{1}OC=O, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, haloalquilo (especialmente, perfluoroalquilo), hidroxialquilo C_{1}-C_{6}, HOCR^{7}R^{7'}, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2} o NR^{4}R^{5};

\quad

M es un enlace y M' es un enlace;

\quad

L es un enlace, (CR^{7}R^{7'})n, NH, o NR^{5}, donde n = 0-1;

\quad

Cada uno de R^{1} y R^{1'} es independientemente H, alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo o perfluoroalquilo;

\quad

R^{2} es alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo o perfluoroalquilo;

\quad

Cada uno de R^{3} y R^{3'} es independientemente H, alquilo, perfluoroalquilo, Cl, F, Br, I, CN, alcoxi, amino, NR^{1}R^{2}, tiol o alquiltio;

\quad

R^{4} es H, alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

R^{5} es alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

Cada uno de R^{7} y R^{7'} es independientemente H, alquilo, arilalquilo, heteroarilo, perfluoroalquilo, heteroarilalquilo, Cl, F, Br, I, CN, OR^{1}, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NOR^{1}, tiol, alquiltio, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'}; y

\quad

R^{10} es H, alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo (especialmente, heteroarilalquilo), arilo, heteroarilo (tal como heteroarilio), arilalquilo, CN, R^{1}C=O, R^{1}R^{1'}NC=O, SO_{2}OR^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'}.

\vskip1.000000\baselineskip

Otro subgénero más preferido de los compuestos descritos en este documento incluye uno o más, preferiblemente todos, de los siguientes sustituyentes son como se definen a continuación:

\quad

G es un grupo arilo o heteroarilo, donde dicho grupo es mono- o policíclico, y que está opcionalmente sustituido en una o más posiciones con hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{3}, alilo o alilo sustituido, alquinilo, Cl, F, Br, I, CN, R^{1}C=O, R^{1}HNC=O, haloalquilo (especialmente, perfluoroalquilo), hidroxialquilo C_{1}-C_{3}, HOCR^{3}R^{3'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NR^{4}R^{5}, o SR^{1};

\quad

E es C=Z_{2};

\quad

Z_{1} es O;

\quad

Z_{2} es O o NCN;

\quad

A_{1} es CR^{7} (especialmente, CH);

\quad

A_{2} es CR^{7} (especialmente, CH);

\quad

Y es J, donde J = (CR^{7}R^{7'})n y n = 1-3;

\quad

W es CR^{7}R^{7'}-CR^{7}R^{7'}, CR^{8}=CR^{8'} o CR^{7}R^{7'}-C=O;

\quad

Q es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, alquinilo, Cl, F, Br, I, CN, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, haloalquilo (especialmente, perfluoroalquilo), hidroxialquilo hidroxialquilo C_{1}-C_{4}, HOCR^{7}R^{7'}, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2} o NR^{4}R^{5};

\quad

M es un enlace y M' es un enlace;

\quad

L es un enlace;

\quad

Cada uno de R^{1} y R^{1'} es independientemente H, alquilo o perfluoroalquilo;

\quad

R^{2} es alquilo o perfluoroalquilo;

\quad

Cada uno de R^{3} y R^{3'} es independientemente H, alquilo, perfluoroalquilo, Cl, F, Br, CN, alcoxilo, amino, NR^{1}R^{2}, tiol o alquiltio;

\quad

R^{4} es H, alquilo, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

R^{5} es alquilo, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O o SO_{2}NR^{1}R^{1'};

\quad

Cada uno de R^{7} y R^{7'} es independientemente H, alquilo, arilalquilo, heteroarilo, perfluoroalquilo, heteroarilalquilo, Cl, F, Br, I, CN, OR^{1}, amino, NHR^{4} NR^{2}R^{5} NOR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O o SO_{2}NR^{1}R^{1'}; y

\quad

R^{10} es H, alquilo, arilo, heteroarilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, CN, R^{1}C=O, R^{1}R^{1'}NC=O o SO_{2}NR^{1}R^{1'}.

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Un subgénero particularmente preferido de los compuestos descritos en este documento o sales de los mismos en los que uno o más, preferiblemente todos, de los siguientes sustituyentes son como se definen a continuación:

\quad

G es un grupo arilo (especialmente, fenilo o naftilo) o heterociclo (especialmente grupos heterocíclicos benzo fundidos tales como indol, benzotiofeno, benzotiazol, benzotiadiazol, bencisoxazol, benzoxadiazol, oxidobenzotiofeno, benzofurano o benzopirano), donde dicho grupo es mono- o policíclico, y está opcionalmente sustituido en una o más posiciones, tales como las posiciones de 1 a 5 (preferiblemente de las posiciones 1 a 2), con sustituyentes seleccionados de uno o más hidrógenos, NH_{2}, alquilo (especialmente que tiene de 1 a 4 carbonos) o alquilo sustituido (especialmente que tiene de 1 a 4 carbonos y sustituido con halo, tal como el grupo alquilo sustituido CF_{8}), halo (especialmente F, Cl, Br o I), heterociclo (tal como tetrazol u oxazol), CN, nitro, SR^{1} o R^{1}O (especialmente donde R^{1} es alquilo);

\quad

E es C=Z2 o CHR^{7} (especialmente donde R^{7} es hidrógeno);

\quad

Z_{1} es O o S;

\quad

Z_{2} es O, S, o NR^{8} (especialmente donde R^{6} es CN o fenilo);

\quad

A_{1} es CR^{7} (especialmente donde R^{7} es hidrógeno);

\quad

A_{2} es CR^{7} (especialmente donde R^{7} es hidrógeno);

\quad

Y es (CR^{7}R^{7'})n y n = 1-2 (especialmente donde R^{7} y R^{7'} son hidrógeno);

\quad

W es CR^{7}R^{7'}-CR^{7}R^{7'}, CR^{8}=CR^{8'} o NR^{9}-CR^{7}R^{7'} (especialmente donde R^{7}, R^{7'}, R^{8} y R^{8'} son hidrógeno y R^{9} es como se ha definido en este subgénero preferido);

\quad

Q es H, alquilo (especialmente que tiene de 1 a 4 carbonos), alquenilo (que tiene especialmente de 1 a 4 átomos de carbono), arilalquilo (especialmente bencilo) o sustituido arilalquilo (especialmente bencilo sustituido, tal como bencilo sustituido con halo);

\quad

M es un enlace o NH (especialmente un enlace) y M' es un enlace;

\quad

L es un enlace;

\quad

cada uno de R^{1} y R^{1'} es independientemente alquilo (especialmente que tiene de 1 a 4 carbonos) o sustituido alquilo (especialmente que tiene de 1 a 4 carbonos y sustituido con halo), heterociclo (tal como imidazol o isoxazol) o heterociclo sustituido (tal como imidazol sustituido con metilo), arilo (especialmente fenilo) o arilo sustituido (especialmente fenilo sustituido con uno o más halo, nitro, alquilo sustituido con halo sustituido tal como CF_{3}, o alquilo que tiene de 1 a 4 carbonos), arilalquilo (especialmente bencilo o fenetilo) o arilalquilo sustituido (especialmente bencilo sustituido tal como bencilo halo- y/o nitro-sustituido); y

\quad

cada uno de R^{9} y R^{9'} es independientemente H, alquilo (que tiene especialmente de 1 a 4 carbonos), alquenilo (que tiene especialmente de 1 a 4 carbonos), arilalquilo (especialmente bencilo), R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O o SO_{2}R^{1} (donde especialmente cada R^{1} es independientemente como se ha definido en este subgénero preferido).

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En este subgénero particularmente preferido, G-L- puede seleccionarse, por ejemplo, entre fenilo opcionalmente sustituido, naftilo opcionalmente sustituido y grupos heterocíclicos bicíclicos condensados opcionalmente sustituidos tales como grupos heterocíclicos benzo-condensados funcionalmente sustituidos (por ejemplo, unidos al resto de la molécula a través de la porción benceno), especialmente dichos grupos en los que el anillo heterocíclico unido a benceno tiene 5 miembros, ejemplificados por benzoxazol, benzotiazol, benzotiadiazol, benzoxadianol o benzotiofeno, por ejemplo:

34

35

36

donde

X = halo (especialmente, F, Cl), OH, CN, NO_{2} o

37

(por ejemplo,

38

X' = halo (especialmente Cl, F o I), CH_{3}, CF_{3}, CN o OCH_{3};

U es O o S (donde S puede estar opcionalmente oxigenado, por ejemplo, con SO);

U^{1} es CH_{3} o CF_{3};

cada U^{2} es independientemente N, CH o CF;

U^{3} es N, O o S;

U^{4} y U^{5}, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros opcionalmente sustituido que puede estar parcialmente insaturado o ser aromático y que contiene de 1 a 3 heteroátomos en el anillo;

cada U^{6} es independientemente CH o N; y

39

representa doble(s) enlace(s) opcional(es) dentro del anillo formado por U^{3}, U^{4} y U^{5}.

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Se prefieren especialmente compuestos de la fórmula I que tienen la siguiente estructura, o sales de los mismos:

40

en la que R^{9} y U^{2} son como se han definido anteriormente, tales como arilcarbonilo opcionalmente sustituido o ariloxicarbonilo opcionalmente sustituido, y X^{a} es un sustituyente arilo, tal como nitro.

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También se prefieren especialmente compuestos de la fórmula I que tienen la siguiente estructura o sales de los mismos:

41

donde

n es o 2;

Q es H, metilo o etilo;

G' es

42

cada G^{8} es independientemente CN, NO_{2}, CF_{3}, Cl, Br, F, OCH_{3}, SCH_{3}, I, CH_{3}, C(O)-CH o

43

G^{b} es CN, H, F, Br, NO_{2} o

44

G^{c} es CH o N;

G^{d} es S o O;

G^{c} es H o F;

A =

45

R^{1a} es

46

R^{1b} es

47

R^{1c} es

48

y

R^{1d} es -CH_{3}, o

49

Los compuestos de la presente invención, así como otros compuestos que se describen en este documento, modulan la función de los receptores nucleares de hormona (NHR), e incluyen compuestos que son, por ejemplo, agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de andrógeno (AR), el receptor de estrógeno (ER), el receptor de progesterona (FR), el receptor de glucocorticoide (GR), el receptor mineralocorticoide (MR), el receptor de esteroide y xenobióticos (SXR), otros NHR que fijan esteroides, los receptores huérfanos u otros NHR. Se prefiere la modulación selectiva de uno de estos NHR en relación con la de otros dentro de la familia NHR. "Modulación" incluye, por ejemplo, activación (por ejemplo, actividad agonista tal como actividad agonista selectiva del receptor de andrógeno) o inhibición (por ejemplo, actividad antagonista).

Por consiguiente, los presentes compuestos son de utilidad en el tratamiento de trastornos asociados con NHR. Un "trastorno asociado con NHR", tal como se usa en este documento, indica una alteración o trastorno que puede ser tratado mediante la modulación de la función de un NHR en un sujeto, en donde el tratamiento comprende la prevención (por ejemplo, tratamiento profiláctico), el alivio parcial o la curación del trastorno o alteración. La modulación puede tener lugar a nivel local, por ejemplo, dentro de determinados tejidos del sujeto, o de manera más extensa en todo el sujeto que está siendo tratado de dicho trastorno o alteración.

Los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de una diversidad de alteraciones y trastornos que incluyen, pero no se limitan a los descritos más adelante.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor de estrógeno, preferentemente de forma selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor de estrógeno. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: osteoporosis, sensación de calor durante la menopausia, sequedad vaginal, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de endometrio, cánceres que expresan el receptor de estrógeno tales como los mencionados anteriormente y otros, contracepción, interrupción de la gestación, menopausia, amenorrea, y dismenorrea.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor de progesterona, preferentemente de manera selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor de progesterona. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: cáncer de mama, otros cánceres que contienen el receptor de progesterona, endometriosis, caquexia, contracepción, menopausia, sincronía del ciclo, meningioma, dismenorrea, fibroides, interrupción de la gestación, inducción del parto, y osteoporosis.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor de glucocorticoide, preferentemente de manera selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor de glucocorticoide. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, cáncer de próstata, cáncer de mama, enfermedad de Alzheimer, trastornos psicóticos, drogodependencia, diabetes mellitus no insulino-dependiente, y como agentes de bloqueo de los receptores de dopamina o, también, como agentes para el tratamiento de trastornos mediados por el receptor de dopamina.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor mineralocorticoide, preferentemente de manera selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor mineralocorticoide. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: síndrome de abstinencia de medicamentos y enfermedades inflamatorias.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor de aldosterona, preferentemente de manera selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor de aldosterona. Una aplicación de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: insuficiencia cardiaca congestiva.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor de andrógeno, preferentemente de manera selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor de andrógeno. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: hirsutismo, acné, seborrea, enfermedad de Alzheimer, alopecia androgénica, hipogonadismo, hiperpilosidad, hipertrofia prostática benigna, adenomas y neoplasias prostáticas (tales como cáncer metastásico de próstata avanzado), tratamiento de células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógeno como es el caso en los cánceres de mama, cerebro, piel, ovario, vejiga, linfático, de hígado y riñón, modulación en el cáncer pancreático de la expresión de VCAM, y aplicaciones en el mismo para el tratamiento de cardiopatías, inflamación e inmunomodulación, modulación de la expresión de VGEF, y aplicaciones en el mismo para usarlos como agentes anti-angiogénicos, osteoporosis, supresión de la espermatogénesis, libido, caquexia, endometriosis, síndrome del ovario poliquístico, anorexia, suplemento de andrógeno contra la reducción de los niveles de testosterona en el hombre, relacionada con la edad, menopausia masculina, sustitución hormonal masculina, disfunciones sexuales masculinas y femeninas, e inhibición de la atrofia muscular en pacientes ambulatorios. Por ejemplo, se contempla la modulación integral de AR, siendo especialmente preferida la modulación selectiva para la próstata de AR ("SARM", siglas en inglés) para el tratamiento de las etapas iniciales del cáncer de próstata.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como antagonistas (preferentemente, selectivos) del receptor de andrógeno mutado, hallado en muchas líneas tumorales. Ejemplos de tales mutantes son los que se observan en líneas celulares representativas de tumores prostáticos tales como LNCap, (mutación de T877A, Biophys. Acta, 187, 1052 (1990)), PCa2b, (mutaciones de L701H y T877A, J. Urol., 162, 2192 (1999)), y CWR22 (mutación de H874Y, Mol. Endo. 11, 450 (1997)). Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: adenomas y neoplasias de la próstata, cáncer de mama y cáncer de endometrio.

Los compuestos de la fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas, o antagonistas parciales del receptor de esteroides y xenobióticos, preferentemente de manera selectiva respecto a ese receptor, en una serie de trastornos clínicos que implican la modulación de la vía del receptor de esteroides y xenobióticos. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a: tratamiento de la disregulación de la homeostasis del colesterol, atenuación del metabolismo de agentes farmacéuticos mediante la co-administración de un agente (compuesto en la presente invención) que modula los efectos reguladores del P450 de SXR.

Además de los NHR mencionados anteriormente, existe también una serie de NHR para los cuales pueden no estar caracterizados ligandos activadores o desactivadores. Estas proteínas se clasifican como NHR debido a la intensa homología de secuencias con respecto a otros NHR, y se conocen como receptores huérfanos. Debido a que los receptores huérfanos exhiben una fuerte homología de secuencias frente a otros NHR, los compuestos de la fórmula I incluyen aquéllos que sirven como moduladores de la función de los NHR huérfanos. Los ejemplos de receptores huérfanos que son modulados por moduladores de NHR tales como compuestos dentro del alcance de la fórmula incluyen, pero no se limitan a los enumerados en la Tabla 1. En la Tabla 1 se relacionan también ejemplos de las aplicaciones terapéuticas de dichos receptores huérfanos, aunque no están limitadas a ellas.

TABLA 1 Ejemplos de receptores nucleares de hormona huérfanos, forma (M = monómera, D = heterodímera, H = homodímera), expresión tisular y aplicaciones terapéuticas diana. (SNC = sistema nervioso central)

50

Por lo tanto, la presente invención propone el uso de los compuestos definidos en las reivindicaciones para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos asociados a NHR, que comprende la etapa de administrar a un sujeto que lo necesita al menos un compuesto de la fórmula I en una cantidad eficaz para ello. Se pueden emplear otros agentes terapéuticos, tales como los que se describen más adelante, junto con los compuestos de la invención en los presentes usos (por ejemplo, por separado o formulados conjuntamente como una dosis fija). En los usos de la presente invención, el o los citados agentes terapéuticos adicionales pueden ser administrados antes, simultáneamente o después de la administración del o de los compuestos de la presente invención.

La presente invención ofrece, igualmente, composiciones farmacéuticas que comprenden al menos uno de los compuestos mencionados en la reivindicación 1, capaz de tratar un trastorno asociado con NHR, en una cantidad eficaz para ello, y un portador farmacéuticamente aceptable (vehículo o diluyente). Las composiciones de la presente invención pueden contener otros agentes terapéuticos, tal como se describe más adelante, y pueden ser formuladas, por ejemplo, empleando vehículos o diluyentes sólidos o líquidos convencionales, así como aditivos farmacéuticos de un tipo apropiado al modo de administración deseado (por ejemplo, excipientes, aglutinantes, conservantes, estabilizadores, saborizantes, etc.) de acuerdo con técnicas bien conocidas en la ciencia de la formulación farmacéutica.

Es necesario señalar que los compuestos de la presente invención, tal como se definen en la reivindicación 1, son, sin limitaciones de su mecanismo de acción, útiles para tratar cualquiera de los trastornos o alteraciones enumeradas o descritas en este documento, tales como enfermedades inflamatorias o cánceres, u otras enfermedades proliferativas, y en composiciones para tratar dichas alteraciones o trastornos. Estas alteraciones o trastornos incluyen, sin limitaciones, cualquiera de los descritos anteriormente, así como los que se describen a continuación, tales como: conservación de la fuerza y función musculares (por ejemplo, en ancianos); reversión o prevención de la debilidad o declive funcional relacionado con la edad ("ARFD", siglas en inglés) en el anciano (por ejemplo, sarcopenia); tratamiento de los efectos secundarios catabólicos de los glucocorticoides; prevención y/o tratamiento de la reducción de masa, densidad o crecimiento óseos (por ejemplo, osteoporosis y osteopenia); tratamiento del síndrome de fatiga crónica (CFS, siglas en inglés); mialgia crónica; tratamiento del síndrome de fatiga aguda y pérdida de masa muscular tras cirugía electiva (por ejemplo, rehabilitación post-quirúrgica); aceleración de la cicatrización de heridas; aceleración de la consolidación de fracturas óseas (tal como aceleración de la recuperación de pacientes con fracturas); aceleración de la consolidación de fracturas complicadas, por ejemplo osteogénesis por distracción; en la sustitución de articulaciones; prevención de la formación de adhesiones post-quirúrgicas; aceleración de la reparación o crecimiento de piezas dentales; mantenimiento de la función sensorial (por ejemplo, audición, visión, olfato y gusto); tratamiento de la enfermedad periodontal; tratamiento de la consunción secundaria a fracturas y consunción relacionada con la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), hepatopatía crónica, SIDA, emaciación, caquexia cancerosa, recuperación de quemaduras y traumatismos, estado catabólico crónico (por ejemplo, coma), trastornos de la alimentación (por ejemplo, anorexia) y quimioterapia; tratamiento de cardiomiopatías; tratamiento de la trombocitopenia; tratamiento del retraso del crecimiento en relación con la enfermedad de Crohn; tratamiento del síndrome del intestino corto; tratamiento del síndrome del intestino irritable; tratamiento de la enfermedad intestinal inflamatoria; tratamiento de la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa; tratamiento de complicaciones asociadas al trasplante; tratamiento de la estatura fisiológica baja, incluidos niños con déficit de hormona del crecimiento, y de la estatura baja asociada con una enfermedad crónica; tratamiento de la obesidad, y retraso del crecimiento asociado con la obesidad; tratamiento de la anorexia (por ejemplo, asociada con caquexia o envejecimiento); tratamiento del hipercortisolismo y síndrome de Cushing; enfermedad de Paget; tratamiento de la osteoartritis; inducción de la secreción pulsátil de hormona del crecimiento; tratamiento de osteocondrodisplasias; tratamiento de la depresión, nerviosismo, irritabilidad y estrés; tratamiento de la energía mental reducida y de la baja autoestima (por ejemplo, motivación/asertividad); mejoría de la función cognitiva (por ejemplo, tratamiento de la demencia, incluida la enfermedad de Alzheimer, y pérdida de la memoria reciente); tratamiento del catabolismo en relación con la disfunción pulmonar y la dependencia de la ventilación; tratamiento de la disfunción cardiaca (por ejemplo, asociada con valvulopatías, infarto de miocardio, hipertrofia cardiaca o insuficiencia cardiaca congestiva); reducción de la tensión arterial; protección cintra la disfunción ventricular o prevención de lesiones por reperfusión; tratamiento de adultos bajo diálisis crónica; reversión o ralentización del estado catabólico del envejecimiento; atenuación o reversión de las respuestas catabólicas de proteínas post-traumatismo (por ejemplo, reversión del estado catabólico asociado con cirugía, insuficiencia cardiaca congestiva, miopatía cardiaca, quemaduras, cáncer, EPOC, etc.); reducción de la caquexia y pérdida de proteínas debidas a enfermedades crónicas tales como cáncer o SIDA; tratamiento de la hiperinsulinemia, incluida la nesidioblastosis; tratamiento de pacientes inmunosuprimidos; tratamiento de la consunción en conexión con la esclerosis múltiple u otros trastornos neurodegenerativos; promoción de la reparación de la mielina; mantenimiento del espesor de la piel; tratamiento de la homeostasis metabólica y de la homeostasis renal (por ejemplo, en el anciano débil); estimulación de osteoblastos, remodelamiento óseo y crecimiento condral; regulación de la ingesta de alimentos; tratamiento de la resistencia a la insulina, incluida NIDDM (siglas en inglés de diabetes mellitus no insulino-dependiente), en mamíferos (por ejemplo, seres humanos); tratamiento de la resistencia a la insulina en el corazón; mejoría de la calidad del sueño y corrección del hiposomatotropismo relativo de la senectud, debido a un incremento del sueño REM y un descenso de la latencia REM; tratamiento de la hipotermia; tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva; tratamiento de la lipodistrofia (por ejemplo, en pacientes bajo terapias contra VIH o SIDA tales como inhibidores de la proteasa); tratamiento de la atrofia muscular (por ejemplo, debida a inactividad física, reposo en cama o situaciones de resistencia reducida al peso); tratamiento de trastornos musculo-esqueléticos (por ejemplo, en el anciano); mejoría de la función pulmonar global; tratamiento de trastornos del sueño; y tratamiento del estado catabólico en enfermedades críticas prolongadas; tratamiento del hirsutismo, acné, seborrea, alopecia androgénica, anemia, hiperpilosidad, hipertrofia prostática benigna, adenomas y neoplasias de la próstata (por ejemplo, cáncer metastásico avanzado de la próstata), y células tumorales malignas que contienen un receptor de andrógeno tal como sucede en los cánceres de mama, cerebro, piel, ovario, vejiga, linfático, hepático y renal; cánceres de piel, páncreas, endometrio, pulmón y colon; osteosarcoma; hipercalcemia de tipo maligno; enfermedad ósea metastásica; tratamiento de la espermatogénesis; endometriosis y síndrome del ovario poliquístico; anulación de la pre-eclampsia, eclampsia gestacional y parto prematuro; tratamiento del síndrome premenstrual; tratamiento de la sequedad vaginal; reducción de los niveles de testosterona en el hombre, relacionada con la edad, menopausia masculina, hipogonadismo, sustitución hormonal masculina, disfunción sexual masculina y femenina (por ejemplo, disfunción eréctil, impulso sexual disminuido, bienestar sexual, disminución de la libido), contracepción masculina y femenina, pérdida del cabello, síndrome de Reaven y estímulo del rendimiento/potencia ósea y muscular; y los trastornos, enfermedades y alteraciones designadas colectivamente como "Síndrome X", o Síndrome Metabólico, tal como se describe en Johansson, J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 727-34 (1997).

Los presentes compuestos poseen utilidad terapéutica en la modulación de la activación/proliferación de células inmunológicas, por ejemplo, a modo de inhibidores competitivos de las reacciones de unión de ligando/receptor intercelulares en las que intervienen CAMs (Moléculas de Adhesión Celular) y Leucointegrinas. Por ejemplo, los presentes compuestos modulan LFA-ICAM1 y son especialmente útiles como antagonistas de LFA-ICAM1, y en el tratamiento de todos los trastornos asociados con LFA-ICAM1 tales como trastornos inmunológicos. Los usos preferidos para los presentes compuestos incluyen, pero no se limitan a: trastornos inflamatorios tales como los que son consecuencia de una respuesta del sistema inmune no específico en un mamífero (por ejemplo, síndrome de distrés respiratorio del adulto, shock, toxicidad del oxígeno, síndrome de lesiones orgánicas múltiples, secundarias a la septicemia, síndrome de lesiones orgánicas múltiples, secundarias a traumatismo, lesión por reperfusión de tejidos debido a una anastomosis cardiopulmonar, infarto de miocardio o utilización con agentes trombolíticos, glomerulonefritis aguda, vasculitis, artritis reactiva, dermatosis con componentes inflamatorios, ictus, lesión térmica, hemodiálisis, leucoféresis, colitis ulcerosa, enterocolitis necrotizante y síndrome asociado con la transfusión de granulocitos), y trastornos resultantes de una respuesta del sistema inmune específico en un mamífero (por ejemplo, psoriasis, rechazo del trasplante de órgano/tejido, reacciones de injerto contra receptor y enfermedades autoinmunes, incluidos el síndrome de Raynaud, tiroiditis autoinmune, dermatitis, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, diabetes mellitus insulino-dependiente, uveítis, enfermedad intestinal inflamatoria incluidas la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, y lupus sistémico eritematoso). Los presentes compuestos se pueden utilizar en el tratamiento del asma o como adyuvante para minimizar la toxicidad de la terapia con citoquinas en el tratamiento de diversos cánceres. Los presentes compuestos se pueden usar en el tratamiento de todas las enfermedades actualmente susceptibles de tratamiento con terapia de esteroides. Los presentes compuestos se pueden emplear para el tratamiento de estos y otros trastornos, solos o junto con otros agentes inmunosupresores o antiinflamatorios. De acuerdo con la invención, un compuesto según la presente invención se puede administrar antes del inicio de la inflamación (de modo que se suprime la inflamación prevista), o después del comienzo de la inflamación. Cuando se administra de forma profiláctica, el o los compuestos inmunosupresores se suministran, preferentemente, antes de que se produzca cualquier respuesta o síntoma inflamatorio (por ejemplo, antes de, durante o poco después del trasplante de un órgano o tejido, pero antes de los síntomas de rechazo del injerto). La administración profiláctica de un compuesto de la fórmula I previene o atenúa cualquier respuesta inflamatoria subsiguiente (tal como, por ejemplo, rechazo de un órgano o tejido trasplantado, etc.). La administración de un compuesto de la fórmula I atenúa cualquier inflamación existente (tal como, por ejemplo, el rechazo de un órgano o tejido trasplantado).

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar para cualquiera de los usos descritos en este documento por cualquier medio apropiado, por ejemplo, por vía oral como en forma de comprimidos, cápsulas, gránulos o polvos; sublingual; bucal; parenteral, tales como inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraesternal o técnicas de infusión (por ejemplo, en forma de soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas inyectables estériles); nasal, incluida la administración sobre las membranas nasales como por nebulización de inhalación; tópica, por ejemplo, en forma de una crema o ungüento; o rectal, en forma de supositorios; en formulaciones unitarias de dosificación que contienen vehículos o diluyentes atóxicos, farmacéuticamente aceptables. Los presentes compuestos se pueden administrar, por ejemplo, en una forma adecuada para la liberación inmediata o la liberación prolongada. La liberación inmediata o prolongada puede lograrse por medio del uso de composiciones farmacéuticas adecuadas que comprenden los presentes compuestos o, especialmente en el caso de la liberación prolongada, por el uso de dispositivos tales como implantes subcutáneos o bombas osmóticas. Los presentes compuestos se pueden administrar también a través de liposomas.

Los ejemplos de composiciones para administración por vía oral incluyen suspensiones que pueden contener, por ejemplo, celulosa microcristalina para impartir densidad, ácido algínico o alginato sódico como agente de suspensión, metilcelulosa como potenciador de la viscosidad, y edulcorantes o agentes saborizantes tales como los conocidos en la técnica; y comprimidos de liberación inmediata que contienen, por ejemplo, celulosa microcristalina, fosfato dicálcico, almidón, estearato de magnesio y/o lactosa y/u otros excipientes, aglutinantes, dispersantes, desintegrantes, diluyentes y lubricantes tales como los conocidos en la técnica. Los compuestos de la presente invención se pueden suministrar también a través de la cavidad bucal por administración sublingual y/o bucal. Ejemplos de las formas que se pueden usar incluyen comprimidos moldeados, comprimidos o comprimidos liofilizados. Los ejemplos de composiciones incluyen aquéllas que formulan el o los presentes compuestos con diluyentes de rápida disolución tales como manitol, lactosa, sacarosa y/o ciclodextrinas. También pueden estar incluidos en estas formulaciones los excipientes de alto peso molecular tales como celulosas (avicel) y polietilenglicoles (PEG). Estas formulaciones pueden incluir, igualmente, un excipiente que contribuya a la adhesión a la mucosa tales como hidroxipropilcelulosa (HPC), hidroxipropil-metilcelulosa (HPMC), carboximetilcelulosa sódica (SCMC), el copolímero de anhídrido maleico (por ejemplo, Gantrez), y agentes de control de la liberación tales como el copolímero poliacrílico (por ejemplo, Carbopol 934). Asimismo, se pueden agregar lubricantes, deslizantes, saborizantes, agentes colorantes y estabilizadores para facilitar la fabricación y su uso.

Los ejemplos de composiciones para la administración por inhalación nasal en forma de aerosol incluyen soluciones en solución salina que pueden contener, por ejemplo, alcohol bencílico u otros conservantes apropiados, promotores de la absorción para aumentar la biodisponibilidad, y/u otros agentes de solubilización o dispersión tales como los conocidos en la técnica.

Los ejemplos de composiciones para administración parenteral incluyen soluciones o suspensiones inyectables que pueden contener, por ejemplo, diluyentes o disolventes atóxicos adecuados, aceptables para la administración parenteral tales como manitol, 1,3-butanodiol, agua, solución de Ringer, una solución isotónica de cloruro sódico, u otros agentes dispersantes, humectantes y de suspensión adecuados que incluyen mono- y diglicéridos sintéticos, y ácidos grasos, incluido el ácido oleico, o Cremaphor.

Los ejemplos de composiciones para administración por vía rectal incluyen supositorios que pueden contener, por ejemplo, un excipiente no irritante apropiado tal como mantequilla de cacao, ésteres de glicéridos sintéticos o polietilenglicoles, que a temperatura normal son sólidos, pero se licúan y/o disuelven en la cavidad rectal para liberar el medicamento.

Los ejemplos de composiciones para administración tópica incluyen un vehículo tópico tal como Plastibase (aceite mineral gelificado con polietileno).

El experto en la técnica puede determinar la cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención, e incluye ejemplos de cantidades de dosificación para el adulto humano que van desde aproximadamente 1 hasta 100 (por ejemplo, 15) mg/kg de peso corporal de compuesto activo por día, que se pueden administrar en una sola dosis o en forma de dosis divididas individuales, de 1 a 4 veces al día. Se debe entender que pueden variar el nivel específico de dosis y la frecuencia de dosificación para cualquier sujeto particular, lo que dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y duración de acción de ese compuesto, la especie, edad, peso corporal, estado general de salud, sexo y dieta del sujeto, la forma y hora de administración, la velocidad de excreción, combinación de medicamentos, y la gravedad del trastorno particular. Los sujetos preferidos para tratamiento incluyen animales, muy preferentemente especies de mamíferos tales como los humanos, y animales domésticos tales como perros, gatos y similares, afectos de trastornos asociados con NHR.

Como se ha mencionado anteriormente, los compuestos de la presente invención se pueden usar solos o en combinación entre sí y/u otros agentes terapéuticos adecuados que son de utilidad en el tratamiento de trastornos asociados con NHR, por ejemplo, un antibiótico u otro material farmacéuticamente activo.

Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden combinar con agentes promotores del crecimiento tales como, por ejemplo, y sin estar limitados a ellos, TRH, dietilestilbesterol, teofilina, encefalinas, prostaglandinas de la serie E, los compuestos descritos en la Patente de EE.UU. No. 3.239.345, por ejemplo, zeranol, y compuestos descritos en la Patente de EE.UU. No. 4.036.979, por ejemplo, sulbenox, o los péptidos descritos en la Patente de EE.UU. No. 4.411.890.

Los compuestos de la invención se pueden usar también en combinación con secretagogos de la hormona del crecimiento tales como GHRP-6, GHRP-1 (como se describe en la Patente de EE.UU. No. 4.411.890 y en los documentos WO 89/07110 y WO 89/07111), GHRP-2 (según se describe en el documento WO 93/04081), NN703 (Novo Nordisk), LY444711 (Lilly), MK-677 (Merck), CP424391 (Pfizer) y B-HT920, o con el factor liberador de hormona del crecimiento y sus análogos, u hormona del crecimiento y sus análogos, o somatomedinas incluidas IGF-1 e IGF-2, o con agonistas alfa-adrenérgicos tales como clonidina, o agonistas 5-HT_{D} de serotinina tales como sumatriptan, o agentes que inhiben la somatostatina o su liberación tales como fisostigmina y piridostigmina, PTH(1-34) o bifosfonatos tales como MK-217 (alendronato).

Un uso todavía adicional de los compuestos de la invención es en combinación con estrógeno, testosterona, un modulador selectivo de receptor de estrógeno tales como tamoxifeno o raloxifeno, u otro modulador del receptor de andrógeno tal como los que se describen en Edwards, J.P. et al., Bio Med. Chem. Let. 9, 1003-1008 (1999), y Hamann, L.G. et al., J. Med. Chem., 42, 210-212 (1999).

Un uso adicional de los compuestos de esta invención es en combinación con agonistas del receptor de progesterona ("PRA", siglas en inglés) tales como levonorgestrel, acetato de medroxiprogesterona (MPA).

Los compuestos de la presente invención se pueden usar solos o en combinación entre sí y/o con otros moduladores de los receptores nucleares de hormonas u otros agentes terapéuticos adecuados, útiles en el tratamiento de los trastornos mencionados anteriormente, y que incluyen: agentes antidiabéticos; agentes anti-osteoporosis; agentes anti-obesidad; agentes antiinflamatorios; agentes ansiolíticos; antidepresivos; agentes anti-hipertensión; agentes antiplaquetarios; agentes antitrombóticos y trombolíticos; glicósidos cardiacos; agentes reductores del colesterol/lípidos; antagonistas del receptor mineralocorticoide; inhibidores de la fosfodiesterasa; inhibidores de la tirosin-quinasa proteica; miméticos de la hormona tiroidea (incluidos agonistas del receptor de la hormona tiroidea); agentes anabólicos; terapia contra el VIH o SIDA; terapias útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y otros trastornos cognitivos; terapias útiles en el tratamiento de los trastornos del sueño; agentes anti-proliferativos; y agentes antitumorales.

Los ejemplos de agentes antidiabéticos adecuados para ser usados en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen biguanidas (por ejemplo, metformina), inhibidores de la glucosidasa (por ejemplo, acarbosa), insulinas (incluidos secretagogos de insulina o sensibilizadores para la insulina), meglitinidas (por ejemplo, repaglinida), sulfonilureas (por ejemplo, glimepirida, gliburida y glipizida), combinaciones de biguanida/gliburida (por ejemplo, Glucovance®), tiazolidinodionas (por ejemplo, troglitazona, rosiglitazona y pioglitazona), agonistas de PPAR alfa, agonistas de PPAR beta, agonistas duales de PPAR alfa/beta, inhibidores de SGLT2, inhibidores de la glucógeno fosforilasa, inhibidores de la proteína fijadora de ácidos grasos (aP2) tales como los que se describen en la Serie de EE.UU. No. 09/519.079, presentada el 6 de marzo de 2000, el péptido similar al glucagón-1 (GLP-1), e inhibidores de la dipeptidil-peptidasa IV (DP4).

Los ejemplos de agentes anti-osteoporosis apropiados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen alendronato, risedronato, PTH, fragmento de PTH, raloxifeno, calcitonina, agonistas esteroides o no esteroides del receptor de progesterona, antagonistas del ligando RANK, antagonistas del receptor sensible al calcio, inhibidores de TRAP, moduladores selectivos del receptor de estrógeno (SERM) e inhibidores de AP-1.

Los ejemplos de agentes anti-obesidad adecuados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de aP2 tales como los descritos en la Serie de EE.UU. No. 09/519.079, presentada el 6 de marzo de 2000, antagonistas de PPAR gamma, agonistas de PPAR delta, agonistas adrenérgicos beta 3 tales como AJ9677 (Takeda/Dainippon), L750355 (Merck) o CP331648 (Pfizer), u otros agonistas beta 3 conocidos, según se describen en las Patentes de EE.UU. No. 5.541.204, 5.770.615, 5.491.134, 5.776.983 y 5.488.064, un inhibidor de lipasa tal como orlistat o ATL-962 (Alizyme), un inhibidor de la recaptación de serotonina (y dopamina) tal como sibutramina, Topiramato (Johnson & Johnson), o axoquina (Regeneron), un medicamento beta receptor del tiroides tal como un ligando del receptor del tiroides según se describe en los documentos WO 97/21993 (U. Cal SF), WO 99/00353 (KaroBio) y GB 98/284425 (KaroBio), y/o un agente anorexígeno tal como dexanfetamina, fentermina, fenilpropanolamina o mazindol.

Los ejemplos de agentes antiinflamatorios apropiados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen prednisona, dexametasona, Enbrel®, inhibidores de la ciclooxigenasa (es decir, inhibidores de COX-1 y/o COX-2 tales como AINEs, aspirina, indometacina, ibuprofeno, piroxicam, Naproxeno®, Celebrex®, Vioxx®), agonistas/antagonistas de CTLA4, antagonistas del ligando CD40, inhibidores de IMPDH tales como micofenolato (CellCept®), antagonistas de la integrina, antagonistas de la integrina alfa-4 beta-7, inhibidores de la adhesión celular, antagonistas del interferón gamma, ICAM-1, antagonistas del factor de necrosis tumoral (TNF) (por ejemplo, infliximab, OR1384), inhibidores de la síntesis de prostaglandinas, budesonida, clofazimina, CNI-1493, antagonistas de CD4 (por ejemplo, priliximab), inhibidores de la protein-quinasa activados por el mitógeno p38, inhibidores de la tirosin-quinasa proteica (PTK), inhibidores de IKK y terapias para el tratamiento del síndrome del intestino irritable (por ejemplo, los abridores Zelmac® y Maxi-K® como los descritos en la Patente de EE.UU. No. 6.184.231 B1).

Los ejemplos de agentes ansiolíticos apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen diazepam, lorazepam, buspirona, oxazepam y pamoato de hidroxizina.

Los ejemplos de antidepresivos apropiados para el uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen citalopram, fluoxetina, nefazodona, sertralina y paroxetina.

Los ejemplos de agentes anti-hipertensión apropiados para el uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen bloqueadores beta-adrenérgicos, bloqueadores de los canales de calcio (tipo L y tipo T; por ejemplo, diltiazem, verapamilo, nifedipina, amlodipina y mibefradil), diuréticos (por ejemplo, clorotiazida, hidroclorotiazida, flumetiazida, hidroflumetiazida, bendroflumetiazida, metilclorotiazida, triclorotiazida, politiazida, benztiazida, ácido etacrínico ticrinafeno, clorotalidona, furosemida, musolimina, bumetanida, triamtreneno, amilorida, espironolactona), inhibidores de la renina, inhibidores de la ECA (por ejemplo, captopril, zofenopril, fosinopril, enalapril, ceranopril, cilazopril, delapril, pentopril, quinapril, ramipril, lisinopril), antagonistas del receptor de AT-1 (por ejemplo, losartan, irbesartan, valsartan), antagonistas del receptor de ET (por ejemplo, sitaxsentan, atrsentan y compuestos descritos en las Patentes de EE.UU. No. 5.612.359 y 6.043.265), el antagonista dual ET/AII (por ejemplo, los compuestos descritos en el documento WO 00/01389), inhibidores de la endopeptidasa neutra (NEP), inhibidores de la vasopeptidasa (inhibidores duales de NEP-ECA) (por ejemplo, omapatrilat y gemopatrilat), y nitratos.

Los ejemplos de agentes antiplaquetarios adecuados para ser usados en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen bloqueadores de GPIIb/IIa (por ejemplo, abciximab, eptifibatida, tirofiban), antagonistas de P2Y12 (por ejemplo, clopidogrel, ticlopidina, CS-747), antagonistas del receptor de tromboxano (por ejemplo, ifetroban), aspirina, e inhibidores de PDE-III (por ejemplo, dipiridamol), con o sin aspirina.

Los ejemplos de glicósidos cardiacos apropiados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen digital y uabaína.

Los ejemplos de agentes reductores del colesterol/lípidos adecuados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de la HMG-CoA reductasa (por ejemplo, pravastatina, lovastatina, atorvastatina, simvastatina, NK-104 (también conocida como itavastatina, o nisvastatina o nisbastatina), y ZD-4522 (también conocida como rosuvastatina, o atavastatina o visastatina)), inhibidores de la escualeno sintetasa, fibratos, secuestradores de los ácidos biliares, inhibidores de ACAT, inhibidores de MTP, inhibidores de la lipooxigenasa, inhibidores de la absorción de colesterol, e inhibidores de la proteína de transferencia del éster de colesterol (por ejemplo, CP-529414).

Los ejemplos de antagonistas adecuados del receptor mineralocorticoide para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen espironolactona y eplerinona.

Los ejemplos de inhibidores adecuados de la fosfodiesterasa para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de PDEIII tales como cilostazol, e inhibidores de PDE V tales como sildenafilo.

Los ejemplos de miméticos de la hormona tiroidea adecuados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen tirotropina, politiroide, KB-130015 y dronedarona.

Los ejemplos de agentes anabólicos apropiados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen testosterona, TRH dietilestilbesterol, estrógenos, agonistas \beta, teofilina, esteroides anabolizantes, dehidroepiandrosterona, encefalinas, prostaglandinas de la serie E, ácido retinoico y compuestos como los descritos en la Patente de EE.UU. No. 3.239.345, por ejemplo Zeranol®, la Patente de EE.UU. No. 4.036.979, por ejemplo, Sulbenox®, o péptidos como los descritos en la Patente de EE.UU. No. 4.411.890.

Los ejemplos de terapias adecuadas contra el VIH o SIDA para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen sulfato de indinavir, saquinavir, mesilato de saquinavir, ritonavir, lamivudina, zidovudina, combinaciones de lamivudina/zidovudina, zalcitabina, didanosina, estavudina y acetato de megestrol.

Los ejemplos de terapias apropiadas para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y trastornos cognitivos para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen donezepil, tacrina, revastigmina, 5HT6, inhibidores de la secretasa gamma, inhibidores de la secretasa beta, bloqueadores del canal SK, bloqueadores de Maxi-K, y bloqueadores de KCNQs.

Los ejemplos de terapias adecuadas para el tratamiento de trastornos del sueño para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen análogos de melatonina, antagonistas del receptor de melatonina, agonistas de ML1B, y antagonistas del receptor de GABA/NMDA.

Los ejemplos de agentes antiproliferativos adecuados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen ciclosporina A, paclitaxel, FK 506 y adriamicina.

Los ejemplos de agentes antitumorales apropiados para usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen paclitaxel, adriamicina, epotilonas, cisplatino y carboplatino.

Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar, adicionalmente, en combinación con suplementos nutricionales tales como los que se describen en el documento US 5.179.080, especialmente en combinación con proteína del suero de leche o caseína, aminoácidos (tales como leucina, aminoácidos ramificados e hidroximetilbutirato), triglicéridos, vitaminas (por ejemplo, A, B6, B12, folato, C, D y E), minerales (por ejemplo, selenio, magnesio, cinc, cromo, calcio y potasio), carnitina, ácido lipoico, creatina y coenzima Q-10.

Además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con agentes terapéuticos utilizados en el tratamiento de disfunciones sexuales que incluyen, pero no se limitan a inhibidores de PDE5 tales como sildenafilo o IC-351; con un agente anti-resorción, terapias de sustitución hormonal, análogos de la vitamina D, calcitoninas, calcio elemento y suplementos de calcio, inhibidores de la catepsina K, inhibidores de MMP, antagonistas del receptor de vitronectina, antagonistas de Src SH2, inhibidores de la H+-ATPasa vascular, agonistas del receptor de progesterona, ipriflavona, fluoruro, antagonistas de RANK, PTH y sus análogos y fragmentos, Tibolona, inhibidores de la HMG CoA reductasa, SERM's, inhibidores de p38, prostanoides, inhibidores de la 17-beta hidroxiesteroide deshidrogenasa e inhibidores de Src quinasa.

Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en combinación con contraceptivos masculinos tales como nonoxinol 9 o agentes terapéuticos para el tratamiento de la caída del cabello tales como minoxidil y finasterida, o agentes quimioterapéuticos tales como con agonistas de LHRH.

Debido a su uso preferencial contra el cáncer o la angiogénesis, los compuestos de la presente invención se pueden administrar solos o en combinación con otros agentes y tratamientos anticancerosos y citotóxicos de utilidad en el tratamiento del cáncer u otras enfermedades proliferativas, por ejemplo, cuando el segundo medicamento tiene un mecanismo de acción similar o diferente que el de los presentes compuestos de la fórmula I. Los ejemplos de clases de agentes anticancerosos y citotóxicos útiles en combinación con los presentes compuestos incluyen, pero no se limitan a: agentes alquilantes tales como mostaza nitrogenada, sulfonatos de alquilo, nitrosoureas, etileniminas, y triazenos; inhibidores de EGFR tales como inhibidores de EGFR de molécula pequeña, anticuerpos EGFR tales como C225 (Erbitux); antimetabolitos tales como antagonistas de folato, análogos de purina y análogos de pirimidina; antibióticos tales como antraciclinas, bleomicinas, mitomicina, dactinomicina y plicamicina; enzimas tales como L-asparaginasa; inhibidores de farnesil proteína transferasa; inhibidores de la 5\alpha reductasa; inhibidores de la 17\beta-hidroxi esteroide deshidrogenasa tipo 3; agentes hormonales tales como glucocorticoides, estrógenos/antiestrógenos, andrógenos/antiandrógenos, progestinas y antagonistas de la hormona liberadora de la hormona luteinizante, acetato de octreotida; agentes disruptores de microtúbulos tales como ecteinascidinas o sus análogos y derivados; agentes estabilizadores de microtúbulos tales como taxanos, por ejemplo, paclitaxel (Taxol®), docetaxel (Taxotere®) y sus análogos, y epotilonas tales como las epotilonas A-F y sus análogos; productos derivados de plantas tales como los alcaloides de la vinca, epipodofilotoxinas, taxanos; e inhibidores de la topoisomerasa; inhibidores de la prenil proteína transferasa; y agentes diversos tales como hidroxiurea, procarbazida, mitotano, hexametilmelamina, complejos coordinadores de platino tales como cisplatino y carboplatino; y otros agentes usados como anticancerosos y citotóxicos tales como modificadores de la respuesta biológica, factores de crecimiento; inmunomoduladores y anticuerpos monoclonales. Los compuestos de la invención se pueden usar también en combinación con radioterapia.

Los ejemplos representativos de estas clases de agentes anticancerosos y citotóxicos incluyen, pero no están limitados a: hidrocloruro de mecloroetamina, ciclofosfamida, clorambucilo, melfalan, ifosfamida, busulfan, carmustin, lomustina, semustina, estreptozocina, tiotepa, dacarbazina, metotrexato, tioguanina, mercaptopurina, fludarabina, pentastatina, cladribina, citarabina, fluoro-uracilo, hidrocloruro de doxorrubicina, daunorrubicina, idarrubicina, sulfato de bleomicina, mitomicina C, actinomicina D, safracinas, saframicinas, quinocarcinas, discodermolides, vincristina, vinblastina, tartrato de vinorrelbina, etopósido, fosfato de etopósido, tenipósido, paclitaxel, tamoxifeno, estramutina, fosfato sódico de estramutina, flutamida, buserelina, leuprolida, pteridinas, diinesos, levamisol, aflacon, interferón, interleuquinas, aldesleuquina, filgrastim, sargramostim, Rituximab, BCG, tretinoína, hidrocloruro de irinotecan, betametosona, hidrocloruro de gemcitabina, altretamina y topoteca, y cualquiera de sus análogos y derivados.

Los miembros preferidos de estas clases incluyen, pero no se limitan a paclitaxel, cisplatino, carboplatino, doxorrubicina, carminomicina, daunorrubicina, aminopterina, metotrexato, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743 o porfiromicina, 5-fluoro-uracilo, 6-mercaptopurina, gemcitabina, citosina arabinósido, podofilotoxina o derivados de podofilotoxina tales como etopósido, fosfato de etopósido o tenipósido, melfalan, vinblastina, vincristina, leurosidina, vindesina y leurosina.

Los ejemplos de agentes anticancerosos y otros citotóxicos incluyen los siguientes: derivados de epotilónide según se describen en la Patente Alemana No. 4138042.8; los documentos WO 97/19086, WO 98/22461, WO 98/25929, WO 98/38192, WO 99/01124, WO 99/02224, WO 99/02514, WO 99/03848, WO 99/07692, WO 99/27890, WO 99/28324, WO 99/43653, WO 99/54330, WO 99/54318, WO 99/54319, WO 99/65913, WO 99/67252, WO 99/67253 y WO 00/00485; inhibidores de la quinasa, dependientes de ciclina, según se describen e el documento WO 99/24416 (véase también la Patente de EE.UU. No. 6.040.321); e inhibidores de prenil proteína transferasa, según se describen en los documentos WO 97/30992 y WO 98/54966; y agentes tales como los que describen de forma genérica y específica en la Patente de EE.UU. No. 6.011.029 (cuyos compuestos se pueden utilizar junto con cualquier modulador de NHR (incluidos, sin estar limitados a, los de la presente invención) tales como moduladores de AR, moduladores de ER, con moduladores de LHRH, o con la castración quirúrgica, en especial en el tratamiento del cáncer).

Las combinaciones de la presente invención se pueden formular o co-administrar también con otros agentes terapéuticos, que se seleccionan por su especial utilidad en la administración de terapias asociadas con los trastornos mencionados anteriormente. Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden formular con agentes para prevenir las náuseas, la hipersensibilidad y la irritación gástrica tales como antieméticos y antihistamínicos H_{1} y H_{2}.

En lo que se refiere al tratamiento del cáncer, los compuestos de esta invención se usan, de forma especialmente preferida, solos o en combinación con tratamientos anticancerosos tales como radioterapia y/o con agentes citostáticos y/o citotóxicos tales como, pero sin estar limitados a ellos, agentes de interacción con el ADN tales como cisplatino o doxorrubicina; inhibidores de farnesil proteína transferasa tales como los que se describen en la Patente de EE.UU. No. 6.011.029; inhibidores de la topoisomerasa II tales como etopósido; inhibidores de la topoisomerasa I tales como CPT-11 y topotecan; agentes estabilizadores de los túbulos tales como paclitaxel, docetaxel, otros taxanos o epotilonas; agentes hormonales tales como tamoxifeno; inhibidores de la timidilato sintasa tales como 5-fluoro-uracilo; antimetabolitos tales como metotrexato; agentes anti-angiogénicos tales como angiostatina, ZD6474, ZD6126 y comberstatina A2; inhibidores de la quinasa tales como los anticuerpos her2 específicos, Iressa e inhibidores de CDK; inhibidores de la histona desacetilasa tales como CI-994 y MS-27-275. Estos compuestos pueden estar combinados también con agentes que suprimen la producción de la testosterona circulante tales como agonistas o antagonistas de LHRH o con castración química. Ejemplos de terapias de combinación (por ejemplo, para el tratamiento del cáncer de próstata) para utilizar con un compuesto de la presente invención incluyen un modulador de LHRH o prednisona.

La presente invención contempla, asimismo, kits, por ejemplo, para el tratamiento del cáncer de próstata (tal como un vial), que contiene una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, en donde dicho compuesto se encuentra opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable, y un segundo envase (tal como un vial) que contiene una formulación farmacéutica que comprende uno o múltiples agentes (tal como un modulador de LHRH) que se usará en combinación con dicho compuesto de la presente invención, en donde dicho(s) agente(s) se encuentran, opcionalmente, en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Por ejemplo, las terapias conocidas contra el cáncer metastásico de próstata avanzado incluye la "terapia de ablación completa de andrógenos", con la que se inhibe el crecimiento del tumor mediante el control de aporte de andrógenos a los tejidos prostáticos por medio de la castración química (la castración actúa inhibiendo la producción de testosterona (T) y dihidrotestosterona (DHT) circulantes, seguida de la administración de antagonistas del receptor de andrógeno (AR) (que inhibe la función T/DHT derivada de la conversión de los precursores de andrógeno circulantes de T/DHT por parte del tejido prostático)). Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar como antagonistas de AR en la terapia de ablación completa, solos o en combinación con otros antagonistas de AR Tales como flutamida, casodex, nilutamida o acetato de ciproterona.

La presente invención ofrece compuestos que pueden ser utilizados para tratar pacientes afectos de cáncer de próstata resistente a los antagonistas del receptor de andrógeno ajenos a la fórmula I de esta invención (a sus sales), tales como bicalutamida. Por lo tanto, los Compuestos se pueden usar en un método para tratar el cáncer de próstata resistente a un antagonista de receptor de andrógeno diferente de los de la fórmula I o sus sales, que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo necesite un compuesto capaz de reducir la tasa de crecimiento de la masa tumoral de dicho cáncer en una cantidad que sea eficaz para ello. La expresión "reducir la tasa de crecimiento de dicha masa tumoral" indica la reducción de la tasa de crecimiento (e incluye, por supuesto, la estabilización o reducción del tamaño) de dicha masa tumoral después del tratamiento, con respecto a la tasa de crecimiento tras el tratamiento con dicho antagonista del receptor de andrógeno diferente del de la fórmula I o sus sales. Los compuestos de la fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención son los compuestos preferidos a los que se hace alusión.

También se contempla el uso de un antiestrógeno y/o un inhibidor de aromatasa en combinación con un compuesto de la presente invención para ayudar, por ejemplo, a aliviar los efectos secundarios asociados con la terapia antiandrogénica tales como ginecomastia. Los ejemplos de antiestrógeno y/o inhibidores de aromatasa incluyen anastrozol (Arimidex), citrato de tamoxifeno (Nolvadex), exemestano (Aromasin), citrato de toremifeno (Fareston), letrozol (Femara), hidrocloruro de raloxifeno (Evista), Faslodex o 923 (Wyeth Ayerst).

Los compuestos de la presente invención pueden emplearse como adyuvantes de la cirugía.

Otra aplicación de los presentes compuestos es en combinación con la terapia de anticuerpos tales como la terapia de anticuerpos contra el PSCA, aunque sin estar limitada a ella. Una aplicación adicional es en concierto con una vacuna/agentes moduladores de la inmunidad para el tratamiento del cáncer.

Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar de acuerdo con los métodos descritos en la Solicitud Provisional de Patente de EE.UU. de la Serie No. 60/284.438, titulada "Moduladores Selectivos del Receptor de Andrógeno y Métodos para su Identificación, Diseño y Uso", presentada el 18 de abril de 2001 por Mark E. Salvati et al., la cual se incorpora en su totalidad a este documento como referencia (que incluye, pero no se limita a la referencia a todos los compuestos específicos dentro de la fórmula I de la presente invención), y la Solicitud de Patente de EE.UU. de la Serie No. 09/885.827, titulada "Moduladores Selectivos del Receptor de Andrógeno y Métodos para su Identificación, Diseño y Uso", presentada el 20 de junio de 2001 por Mark E. Salvati et al., y que se incorpora en su totalidad a este documento como referencia (que incluye, pero no se limita a la referencia a todos los compuestos específicos dentro de la fórmula I de la presente invención).

Los agentes terapéuticos adicionales citados anteriormente, cuando se emplean en combinación con los compuestos de la presente invención, se pueden usar, por ejemplo, en las cantidades indicadas en el "Physician's Desk Reference" (PDR) (vademécum de referencia en EE.UU.), o de la forma determinada de otra manera por los expertos en la técnica.

Los siguientes ensayos se pueden usar para establecer la actividad de un compuesto como modulador de NHR. Se determinó que diversos compuestos de la presente invención poseen actividad moduladora del AR usando el ensayo de transactivación y los ensayos de fijación a AR convencionales, como se describe a continuación. A las concentraciones estudiadas, ciertos compuestos de la fórmula I mostraron escasa o nula actividad in vivo en el ensayo empleado (por ejemplo, compuestos del Ejemplo 97).

Ensayos de Transactivación Ensayo Específico de AR

Los compuestos de la presente invención se analizaron en ensayos de transactivación de una construcción indicadora transfectada, utilizando el receptor de andrógeno endógeno de las células hospedadoras. El ensayo de transactivación ofrece un método para identificar agonistas funcionales y agonistas parciales que imitan, o antagonistas que inhiben el efecto de las hormonas nativas, en este caso, dihidrotestosterona (DHT). Este ensayo se puede utilizar para predecir la actividad in vivo, dado que existe una buena correlación entre ambas serie de datos. Véase, por ejemplo, T. Berger et al., J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 773 (1992), cuya descripción se incorpora a este documento por
referencia.

Para el ensayo de transactivación, se introduce un plásmido indicador por transfección (un procedimiento para inducir a las células a aceptar genes ajenos) en las correspondientes células. Este plásmido indicador comprende el ADNc para una proteína indicadora tal como fosfatasa alcalina secretada (SEAP), controlada por las secuencias corriente arriba del antígeno específico de próstata (PSA), que contienen los elementos de respuesta androgénica (AREs). Este plásmido indicador actúa como indicador de la actividad moduladora de la transcripción del AR. De este modo, el indicador actúa como sustituto de los productos (ARNm y, luego, proteína) expresados normalmente por un gen bajo el control del AR y su hormona nativa. Al objeto de detectar antagonistas, el ensayo de transactivación se lleva a cabo en presencia de una concentración constante de la hormona AR natural (DHT), conocida por inducir una señal indicadora definida. Las concentraciones crecientes de un supuesto antagonista reducirán la señal indicadora (por ejemplo, la producción de SEAP). Por otra parte, la exposición de las células transfectadas a concentraciones crecientes de un supuesto agonista aumentará la producción de la señal indicadora.

Para este ensayo, se obtuvieron células LNCaP y MDA 453 de la "American Type Culture Collection" (Rockville, MD), y se las mantuvo en RPMI 1640 o medio DMEM suplementado con suero bovino fetal (FBS; Gibco) al 10%, respectivamente. Las correspondientes células se transfectaron de forma pasajera por electroporación, de acuerdo con el procedimiento optimizado descrito por Heiser, 130 Methods Mol. Biol. 117 (2000) con el plásmido indicador pSEAP2/PSA540/Potenciador. El plásmido indicador se construyó de la forma siguiente: se utilizó ADN genómico placentario humano comercial para generar por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) un fragmento que contuvo el sitio BgIII (posición 5284) y el sitio HindIII en la posición 5831 del promotor del antígeno específico de próstata humano (nº de acceso U37672), Schuur et al., J. Biol. Chem. 271 (12):7043-51 (1996). Este fragmento se sub-clonó en el pSEAP2/básico (Clontech), digerido previamente con BgIII y HindIII, para generar la construcción pSEAP2/PSA540. A continuación, se amplificó por PCR un fragmento portador del fragmento de la secuencia corriente arriba del PSA humano entre las posiciones -5322 y -3873, a partir de ADN genómico humano. Con los cebadores se introdujeron un sitio XhoI y un sitio BgIII. El fragmento resultante se sub-clonó en pSEAP2/PSA540 digerido con XhoI y BgIII, respectivamente, para generar la construcción pSEAP2/PSA540/Potenciador. Se recogieron células LNCaP y MDA 453 en medios que contuvieron FBS al 10% tratado con carbón. Cada suspensión celular se distribuyó en dos cubetas Gene Pulser (Bio-Rad) que, a continuación, recibieron 8 \mug de la construcción indicadora, y se sometieron a electroporación usando un Pulsador de Genes Bio-Rad a 210 voltios y 960 \muFaraday. Después de la transfección, se lavaron las células y se incubaron con medios que contuvieron suero bovino fetal tratado con carbón en ausencia (blanco) o presencia (control) de dihidrotestosterona 1 nM (DHT; Sigma Chemical), y en presencia o ausencia del antiandrógeno convencional bicalutamina o de los compuestos de la presente invención, en concentraciones dentro del intervalo de 10^{-10} a 10^{-5} M (muestra). Se utilizaron duplicados para cada muestra. Las diluciones de los compuestos se efectuaron en un puesto de trabajo de laboratorio Biomek 2000. Después de 48 horas, se analizó en una fracción del sobrenadante la actividad de SEAP usando el Sistema de Ensayo del Gen Indicador Quimioluminiscente Phospha-Light (Tropix, Inc.). Se determinó la viabilidad de las células remanentes usando el Ensayo Acuoso No Radiactivo de Proliferación Celular CellTiter 96 (MTS Assay, Promega). En pocas palabras, se agrega a las células una mezcla de un compuesto de tetrazolio (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, zwitterión, MTS) y un reactivo de acoplamiento de electrones (metosulfato de fenazina; PMS). El MTS (reactivo de Owen) es bio-reducido por las células en un formazán que es soluble en el medio de cultivo de tejido y, por lo tanto, se puede medir directamente su absorbancia a 490 nm en las placas de ensayo de 96 pocillos, sin necesidad de un procesamiento adicional. La cantidad del producto formazán, medida por la cantidad de absorbancia a 490 nm, es directamente proporcional al número de células vivas en el cultivo. Se homologó la lectura para cada replicado de SEAP por medio del valor Abs490, derivado del ensayo MTS. Para el modo antagonista, el % de inhibición se calculó como:

% de Inhibición = 100 x (1- [promedio de control - promedio blanco/promedio muestra - promedio blanco])

Se trazaron gráficamente los datos y se cuantificó la concentración de compuesto que inhibió 50% del SEAP homologado (CI_{50}).

Para el modo agonista, el % de control se refirió al efecto del compuesto ensayado, comprado con el efecto máximo observado con la hormona natural, en este caso, DHT, y se calculó como:

% de Control = 100 x promedio muestra - promedio blanco/promedio control - promedio blanco

Los datos se trazaron gráficamente y se cuantificó la concentración de compuesto que activa a niveles de 50% del SEAP homologado para el control (CE_{50}).

Ensayo de Especificidad de GR

El plásmido indicador utilizado estuvo compuesto por el ADNc de la proteína indicadora SEAP, según se ha descrito para el ensayo de transactivación específico de AR. La expresión de la proteína indicadora SEAP se controló por medio de las secuencias de repetición terminal larga del virus del tumor mamario de ratón (MMTV LTR), que contienen tres elementos de respuesta hormonal (HREs) que pueden ser regulados tanto por GR como por PR, véase, por ejemplo, G. Chalepakis et al., Cell 53(3), 371 (1988). Este plásmido se transfectó en células A549, que expresan GR endógeno, para obtener un ensayo de transactivación específico para GR. Las células A549 se obtuvieron en la "American Type Culture Collection" (Rockville, MD) y se mantuvieron en RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS; Gibco). La determinación de la actividad antagonista específica para GR de los compuestos de la presente invención fue idéntica a la descrita para el ensayo de transactivación específica para AR, excepto que la DHT se sustituyó por dexametasona 5 nM (Sigma Chemicals), un agonista específico para GR. La determinación de la actividad agonista específica para GR de los compuestos de la presente invención se llevó a cabo del modo descrito en el ensayo de transactivación específico para AR, en donde se mide la activación del sistema indicador específico para GR por medio de la adición del compuesto de ensayo, en ausencia de un ligando para agonistas conocidos específicos para GR.

Ensayo Específico para PR

El plásmido indicador usado estuvo compuesto por el ADNc para la proteína indicadora SEAP, según se ha descrito para el ensayo de transactivación específico para AR. La expresión de la proteína indicadora SEAP estuvo controlada por las secuencias de repetición terminal larga del virus del tumor mamario de ratón (MMTV LTR), que contienen tres elementos de respuesta hormonal (HREs) que pueden ser regulados tanto por GR como por PR. Este plásmido se transfectó en T47D, que expresan PR endógeno, para obtener un ensayo de transactivación específico para PR. Las células T47D se obtuvieron de la "American Type Culture Collection" (Rockville, MD) y se mantuvieron en medio DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS; Gibco). La determinación de la actividad antagonista específica para PR de los compuestos de la presente invención fue idéntica a la descrita para el ensayo de transactivación específica para AR, excepto que se sustituyó DHT por Promegastone 1 nM (NEN), un agonista específico para PR. La determinación de la actividad agonista específica para PR de los compuestos de la presente invención se llevó a cabo de la forma descrita para el ensayo de transactivación de AR, en donde se mide la activación del sistema indicador específico para PR mediante la adición de un compuesto de ensayo, en ausencia de un ligando para los agonistas conocidos específicos para PR.

Ensayo de Fijación de AR

Para el ensayo de fijación de células enteras, se incubaron a 37ºC células humanas LNCaP (T877A, mutante AR) o MDA 453 (AR normal) en placas de microtitulación de 96 pocillos, que contuvieron RPMI 1640 o DMEM suplementado con FBS-CA tratado con carbón al 10% (Cocaleco Biologicals), respectivamente, con el objetivo de eliminar cualquier ligando endógeno que pudiera estar complejado con el receptor en las células. Después de 48 horas, se llevó a cabo un análisis de saturación para determinar la K_{d} para la dihidrotestosterona tritiada, [^{3}H]-DHT, o un ensayo de fijación competitiva para evaluar la capacidad de los compuestos de ensayo para competir con [^{3}H]-DHT. Para el análisis de saturación, se agregaron a las células medios (RPMI 1640 o DMEM - CA-FBS al 0,2%) que contuvieron [^{3}H]-DHT (en concentraciones dentro del intervalo de 0,1 nM hasta 16 nM), en ausencia (fijación total) o presencia (fijación no específica) de un exceso molar de 500 veces de DHT no marcada. Después de 4 h a 37ºC, se retiró una parte alícuota de los medios de fijación total a cada concentración de [^{3}H]-DHT, para calcular la cantidad de [^{3}H]-DHT libre. Se retiró el medio remanente, las células se lavaron tres veces con PBS y se sembraron en placas UniFilter GF/B (Packard), se agregó Microscint (Packard), y las placas se sometieron a recuento en un dispositivo Top-Counter (Packard) para evaluar la cantidad de [^{3}H]-DHT fijada.

Para el análisis de saturación, la diferencia entre la fijación total y la fijación no específica se definió como fijación específica. La fijación específica se evaluó por medio del análisis Scatchard para determinar la K_{d} para [^{3}H]-DHT. Véase, por ejemplo, D. Rodbard, Mathematics and statistics of ligand assays: an illustrated guide: en: J. Langon y J.J. Clapp, eds., Ligand Assay, Masson Publishing U.S.A., Inc., Nueva York, págs. 45-99 (1981), cuya descripción se ha incorporado por referencia a este documento.

Para los estudios de competición, se agregaron a las células medios que contuvieron [^{3}H]-DHT 1 nM y compuestos de la invención ("compuestos de ensayo"), en concentraciones dentro del intervalo desde 10^{-10} hasta 10^{-5} M. Se utilizaron dos replicados para cada muestra. Después de 4 horas a 37ºC, las células se lavaron, se sembraron y se contaron de la forma descrita anteriormente. Los datos se trazaron gráficamente como la cantidad de [^{3}H]-DHT (% de control en ausencia del compuesto de ensayo) que permanece por encima del rango de la curva de respuesta a la dosis para un compuesto determinado. Se cuantificó la concentración de compuesto de ensayo que inhibió 50% de la cantidad de [^{3}H]-DHT fijada en ausencia de un ligando competidor (CI_{50}) después de la transformación log-logit. Los valores de Ki se determinaron por la aplicación de la ecuación de Cheng-Prusoff de los valores de CI_{50}, en donde:

K_{i} = \frac{CI_{50}}{(1 + (^{3}H-DHT) / K_{d} \ para \ ^{3} H-DHT)}

Después de la corrección para la fijación no específica, se determinaron los valores de CI_{50}. La CI_{50} se define como la concentración de ligando competidor necesario para reducir la fijación específica en 50%. Las K_{d} para [^{3}H]-DHT en MDA 453 y LNCaP fueron 0,7 y 0,2 nM, respectivamente.

Ensayo de Proliferación Celular de la Próstata Humana

Los compuestos de la presente invención fueron analizados ("compuestos de ensayo") en la proliferación de líneas celulares de cáncer de próstata humana. Con tal fin, se incubaron durante 72 horas células MDA PCa2b, una línea celular derivada de la metástasis de un paciente cuya castración fracasó, Navone et al., Clin. Cancer Res. 3, 2493-500 (1977), con y sin los compuestos de ensayo, y se cuantificó la cantidad de [^{3}H]-timidina incorporada en el ADN como la forma de evaluar el número de células y, por lo tanto, su proliferación. La línea celular MDA PCa2b se mantuvo en medio BRFF-HPC1 (Biological Research Faculty & Facility Inc., MD), suplementado con FBS al 10%. Para el ensayo, las células se sembraron en microplacas de 96 pocillos bio-recubiertas y se incubaron a 37ºC en FBS al 10% (tratado con carbón)/BRFF-BMZERO (sin andrógenos). Después de 24 horas, las células se trataron en ausencia (blanco) o presencia de DHR 1 nM (control), o con compuestos de ensayo (muestra) de la presente invención en concentraciones dentro del intervalo de 10^{-10} a 10^{-5} M. Se utilizaron duplicados para cada muestra. Las diluciones del compuesto se llevaron a cabo en un puesto de trabajo de laboratorio Biomek 2000. 72 horas más tarde, se agregaron 0,44 \muCi de [^{3}H]-timidina (Amersham) a cada pocillo, y se incubó durante otras 24 horas adicionales, a lo que siguieron una tripsinización y la recogida de las células sobre filtros GF/B. Se agregó micro-scint PS a los filtros antes de someterlos a recuento en un dispositivo TopCount de Beckman.

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La inhibición porcentual se calculó como:

% de Inhibición = 100 x (1- [promedio_{control}-promedio_{blanco}/promedio_{muestra}-promedio_{blanco}])

Los datos se trazaron gráficamente y se cuantificó la concentración del compuesto que inhibió 50% de la incorporación de [^{3}H]-timidina (CI_{50}).

Ensayo de Transactivación de Mioblastos de Ratón C2C12

Se desarrollaron dos ensayos de transactivación funcional para evaluar la eficacia de los agonistas de andrógeno en una base de células musculares, usando un indicador de luciferasa. El primer ensayo (ARTA Stable 1) utiliza una línea celular, Stable 1 (clon nº 72) que expresa de forma estable el receptor de andrógeno de rata de longitud completa, pero requiere la transfección transitoria de un potenciador/indicador. Esta línea se derivó de células mioblásticas de ratón C2C12. El segundo ensayo (ARTA Stable 2) utiliza una línea celular, Stable 2 (clon nº 133), derivada de Stable 1, que expresa de forma estable tanto rAR como el indicador potenciador/luciferasa.

La construcción de potenciador/indicador usada en este sistema es pGL3/2XDR-I/luciferasa. Se ha comunicado que 2XDR-1 es un elemento de respuesta específico para AR en células CV-1, Brown et al., The Journal of Biological Chemistry 272, 8227-8235 (1997). Fue desarrollado por mutagénesis aleatoria de una secuencia potenciadora de consenso AR/GR.

ARTA Stable 1

1.

Se siembran células Stable 1en un formato de 96 pocillos, con una densidad de 6.000 células/pocillo en DMEM rico en glucosa, sin rojo fenol (Gibco BRL, nº de catálogo 21063-029), que contuvo 10% de FBS tratado con carbón y dextrano (HyClone, nº de catálogo SH30068.02), solución tampón HEPES 50 mM (Gibco BRL, nº de catálogo 15630-080), 1X MEM piruvato sódico (Gibco BRL, nº de catálogo 11360-070).

2.

48 horas más tarde, las células se transfectan con pGL3/2XDR-1/luciferasa, usando el reactivo LipofectAMINE Plus® (Gibco BRL, nº de catálogo 10964-013). Específicamente, se diluyen 5 ng/pocillo de ADN de pGL3/2XDR-1/luciferasa y 50 ng/pocillo de ADN de esperma de salmón (como portador) con 5 \mul/pocillo de medio Opti-MEMem (GibcoBRL, nº de catálogo 31985-070). Se agregan a esto 0,5 \mul/pocillo del reactivo Plus. Esta mezcla se incuba durante 15 minutos a temperatura ambiente. En un recipiente separado, se diluyen 0,385 \mul/pocillo de reactivo LipofectAMINE con 5 \mul/pocillo de Opti-MEM. A continuación, se combina la mezcla de ADN con la mezcla de LipofectAMINE, y se incuba durante 15 minutos adicionales a temperatura ambiente. Durante este período, se retiran los medios de las células y se sustituyen con 60 \mul/pocillo de Opti-MEM. A esto se agregan 10 \mul/pocillo de la mezcla de transfección de ADN/LipofectAMINE. Las células se incuban durante 4 horas.

3.

Se retira la mezcla de transfección de las células y se sustituye con 90 \mul de medio, como en el nº 1 anterior.

4.

Se disponen en cada pocillo 10 \mul/pocillo de una dilución apropiada de medicamento.

5.

24 horas más tarde, se utiliza el Sistema de Ensayo de Luciferasa Steady-Glo® para detectar la actividad, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Promega, nº de catálogo E2520).

ARTA Stable 2

1.

Se siembran células Stable 2 en un formato de 96 pocillos, con una densidad de 6.000 células/pocillo en DMEM rico en glucosa, sin rojo fenol (Gibco BRL, nº de catálogo 21063-029), que contuvo 10% de FBS tratado con carbón y dextrano (HyClone, nº de catálogo SH30068.02), solución tampón HEPES 50 mM (Gibco BRL, nº de catálogo 15630-080), 1X MEM piruvato sódico (Gibco BRL, nº de catálogo 11360-070), 0,5X Antibiótico-Antimicótico, 800 \mug/ml de geneticina (Gibco BRL, nº de catálogo 10131-035) y 800 \mug/ml de higromicina \beta (Gibco BRL, nº de catálogo 10687-010).

2.

48 horas más tarde, se retiran los medios de las células y se sustituyen con 90 \mul (de medio) fresco. Se disponen en cada pocillo 10 \mul/pocillo de la dilución apropiada del medicamento.

3.

24 horas más tarde, se utiliza el Sistema de Ensayo de Luciferasa Steady-Glo® para detectar la actividad, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Promega, nº de catálogo E2520).

Véase la Solicitud de Patente de EE.UU. de la Serie No. 09/885.831, titulada "Líneas Celulares y Ensayos Basados en Células para la Identificación de Moduladores de Receptores de Andrógeno", presentada el 20 de junio de 2001 por Jacek Ostrowski et al. (nº de Expediente de Agente D0177), la cual se incorpora en su totalidad a este documento por referencia.

Ensayos de Proliferación Ensayo de Proliferación de Células Mamarias de Ratón

Se determinó la capacidad de los compuestos de la presente invención ("compuestos de ensayo") para modular la función del AR analizando dichos compuestos en un ensayo de proliferación, utilizando para ello la línea celular mamaria de ratón que responde a los andrógenos, derivada del tumor Shionogi, Hiraoka et al., Cancer Res. 47, 6560-6564 (1987). Se establecieron clones estables, dependientes de AR, de la línea Shionogi parental haciendo pasar fragmentos tumorales por los procedimientos generales descritos originalmente en Tetuo et al., Cancer Research 25, 1168-1175 (1965). A partir del procedimiento anterior, se aisló, caracterizó y utilizó una línea estable, SC114, para el ensayo de los compuestos de ejemplo. Las células SC114 se incubaron con o sin los compuestos de ensayo durante 72 horas, y se cuantificó la cantidad de [^{3}H]-timidina incorporada al ADN como variable sustitutiva para evaluar el número de células y, por lo tanto, la velocidad de proliferación, tal como se describe en Suzuki et al., J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 37, 559-567 (1990). La línea celular SC114 se mantuvo en MEM que contuvo testosterona 10^{-8} M y 2% de FBS tratado con DCC. Para el ensayo, las células se sembraron en microplacas de 96 pocillos en el medio de mantenimiento y se incubaron a 37ºC. Al día siguiente, se cambió el medio por medio exento de suero [F-12 de Ham:MEM (1;1, en volumen) que contuvo BSA al 0,1%], con (modo antagonista) o sin (modo agonista) testosterona 10^{-8} M y los compuestos de ensayo de la presente invención, en concentraciones dentro del intervalo de 10^{-10} a 10^{-5} M. Se utilizaron duplicados para cada muestra. Las diluciones de los compuestos se llevaron a cabo en un puesto de trabajo de laboratorio Biomek 2000. 72 horas más tarde, se agregaron 0,44 \muCi de [^{3}H]-timidina (Amersham) a cada pocillo, y se incubó durante 2 horas más, tras lo que se efectuó la tripsinización y la recogida de las células en filtros GF/B. Se agregó PS de micro-scint a los filtros antes de someterlos a recuento en un dispositivo TopCount de Beckman. Para el modo antagonista, la inhibición porcentual se calculó como:

% de Inhibición = 100 x (1- [promedio_{muestra} - promedio_{blanco}/promedio_{control} - promedio_{blanco}])

Los datos se trazaron gráficamente y se cuantificó la concentración de compuesto que inhibió 50% de la incorporación de [^{3}H]-timidina (CI_{50}).

Para el modo agonista, el % de control se estableció como el efecto del compuesto de ensayo, comparado con el efecto máximo observado con la hormona natural, en este caso, DHT, y se calculó como:

% de Control = 100 x (promedio_{muestra} - promedio_{blanco}/promedio_{control} - promedio_{blanco})

Los datos se trazaron gráficamente, y se cuantificó la concentración de compuesto que inhibió 50% de la incorporación de [^{3}H]-timidina (CE_{50}).

Ensayo In Vitro para Medir la Transrepresión de AP-1 Inducida por GR:

El ensayo AP-1 es un ensayo indicador de luciferasa basado en células. Se transfectaron de forma estable células A549, que contienen receptor glucocorticoide endógeno, con un sitio de fijación del ADN de AP-1 unido al gen de luciferasa. Seguidamente, las células se cultivaron en RPMI + suero bovino fetal al 10% (tratado con carbón) + Penicilina/Estreptomicina con 0,5 mg/ml de geneticina. Las células se siembran el día anterior al ensayo, con una densidad de aproximadamente 40.000 células/pocillo. El día del ensayo, se retira n los medios por aspiración y se agregan 20 \mul de solución tampón de ensayo (RPMI sin rojo fenol + FCS al 10% (tratado con carbón) + Pen/Estrep.) a cada pocillo. En este momento, se agregan a cada pocillo 20 \mul de solución tampón de ensayo (experimentos de control), los compuestos de la presente invención ("compuestos de ensayo") (disueltos en DMSO y añadidos a concentraciones diversas), o dexametasona (100 nM en DMSO, control positivo). A continuación, las placas se pre-incuban durante 15 min a 37ºC, tras lo que se efectúa la estimulación de las células con 10 ng/ml de PMA. Seguidamente, se incuban las placas durante 7 horas a 37ºC, tras lo cual se agregan 40 \mul de reactivo de sustrato de luciferasa a cada pocillo. La actividad se mide por el análisis en un luminómetro, comparando con los experimentos de control tratados con solución tampón o dexametasona. Actividad se considera la inhibición porcentual del sistema indicador en comparación con el control de tampón con 10 ng/ml de PMA solo. El control, dexametasona, a una concentración de \leq10 \muM suprime típicamente la actividad en 65%. Los compuestos de ensayo que demuestran una inhibición de la inducción de PMA de 50% o mayor a una concentración de compuesto de ensayo de \leq10 \muM se consideran activos.

Ensayo Antagonista de AR en el Ensayo del Peso Húmedo de la Próstata

La actividad de los compuestos de la presente invención como antagonistas de AR se investigó en un modelo de rata macho inmadura, que es un ensayo convencional y reconocido de la actividad antiandrogénica de un compuesto determinado, según se describe en L.G. Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med. 83, 175 (1953); P.C. Walsh y R.F. Gittes, "Inhibition of extratesticular stimuli to prostate growth in the castrated rat by antiandrogens", Endocrinology 86, 624 (1970); y B.J. Furr et al., "ICI 176.334: A novel non-steroid, peripherally selective antiandrogen", J. Endocrinol. 113, R7-9 (1987), cuyas descripciones se incorporan a este documento como referencias.

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La base es el hecho de que los órganos sexuales accesorios masculinos, tales como la próstata y las vesículas seminales, juegan un papel importante en la función reproductiva. El crecimiento de estas glándulas y el mantenimiento de su tamaño y función secretora son estimulados por la presencia continua de testosterona (T) sérica, que es el principal andrógeno del suero (>95%) producido por las células de Leydig en el testículo, bajo el control de la hormona luteinizante (LH) pituitaria y la hormona folículo-estimulante (FSH). La 5\alpha-reductasa convierte la testosterona en su forma más activa, dihidrotestosterona (DHT), en el interior de la próstata. Los andrógenos suprarrenales contribuyen también con aproximadamente 20% a la DHT total en la próstata de rata, comparado con el 40% que se registra en el varón de 65 años de edad. F. Labrie et al., Clin. Invest. Med. 16, 475-492 (1993). Sin embargo, ésta no es una vía fundamental, ya que tanto en animales como en el hombre la castración conduce a una involución prácticamente completa de la próstata y de las vesículas seminales, sin necesidad de una adrenalectomía simultánea. Por lo tanto, bajo condiciones normales, las suprarrenales no contribuyen de forma significativa al crecimiento del tejido prostático. M.C. Luke y D.S. Coffey, "The Physiology of Reproduction", ed. E. Knobil y J.D. Neill,1, 1435-1487 (1994). Dado que los órganos sexuales masculinos son los tejidos que mejor responden a la modulación de la actividad androgénica, se utiliza este modelo para determinar el crecimiento dependiente de los andrógenos de los órganos sexuales accesorios en ratas inmaduras castradas.

Ratas inmaduras machos (Sprague-Dawley de 19-20 días de edad, Harlan Sprague-Dawley) fueron castradas bajo anestesia con metorfano. 5 días después de la cirugía, estas ratas castradas (60-70 g, 23-25 días de edad) fueron tratadas durante 3 días. Los animales recibieron por vía subcutánea (s.c.) 1 mg/kg de propionato de testosterona (TP) en vehículo oleoso de aceite de cacahuete, y se administraron los compuestos de ensayo antiandrogénicos (compuestos de la presente invención) por vía oral, junto con la alimentación (vía oral) en disoluciones/suspensiones de 80% de PEG 400 y 20% de Tween 80 (PEGTW). Los animales recibieron (volumen/peso) 0,5 ml de vehículo/100 mg de peso corporal. Los grupos experimentales tuvieron la siguiente composición:

1.

Control Vehículo

2.

Propionato de testosterona (TP) (3 mg/rata/día, subcutáneo)

3.

TP más Casodex (administrada por vía oral en PEGTW, diariamente), un antiandrógeno reconocido, como compuesto de referencia.

4.

Para demostrar actividad antagonista, se administró un compuesto de la presente invención ("compuesto de ensayo") (por vía oral en PEGTW, diariamente) con TP (s.c., como en el grupo 2), en una gama de dosis.

5.

Para demostrar actividad agonista, se administró un compuesto de la presente invención solo (por vía oral en PEGTW, diariamente), en una gama de dosis.

Al final del tratamiento de 3 días, los animales fueron sacrificados, y se determinó el peso de la próstata ventral. Para comparar datos procedentes de diferentes experimentos, se estandarizaron, en primer lugar, los pesos de los órganos sexuales como mg por 100 g de peso corporal, y el incremento del peso de los órganos inducido por TP se consideró el incremento máximo (100%). Para los análisis estadísticos se usó ANOVA, seguida del test exacto de Student o de Fischer de una cola.

El aumento y la pérdida de peso de los órganos sexuales reflejan las variaciones del número de células (contenido de ADN) y de la masa celular (contenido de proteínas), dependiendo de la concentración de andrógeno en suero. Véase Y. Okuda et al., J. Urol. 145, 188-191 (1991), cuya descripción se incorpora como referencia a este documento. Por lo tanto, la medición del peso húmedo del órgano es suficiente para indicar la bioactividad de los andrógenos y antagonistas de andrógenos. En la rata inmadura castrada, la administración de andrógenos exógenos aumenta las vesículas seminales (SV) y la próstata ventral (VP) de manera dependiente de la dosis.

El incremento máximo del peso del órgano fue de 4 a 5 veces con la administración de 3 mg/rata/día de testosterona (T), o de 1 mg/rata/día de propionato de testosterona (TP) durante 3 días. Las CE_{50} de T y TP fueron de aproximadamente 1 mg y 0,03 mg, respectivamente. El aumento de peso de VP y SV se correlacionó también con el incremento de la concentración sérica de T y TP. Aunque la administración de T mostró concentraciones 5 veces más altas de T y DHT en suero 2 horas después de la inyección subcutánea, comparada con TP, posteriormente estos elevados niveles se redujeron muy rápidamente. Por el contrario, las concentraciones séricas de T y DHT en los animales tratados con TP fueron bastante consistentes durante las 24 horas y, por consiguiente, TP exhibió una potencia entre 10 y 30 veces mayor que la de T libre.

En este modelo de rata inmadura castrada, se administró también un antagonista de AR conocido (Casodex) simultáneamente con 0,1 mg de TP (DE_{80}), lo que inhibió el incremento de los pesos de VP y SV, mediados por la testosterona, de manera dependiente de la dosis. Los efectos antagonistas fueron similares con la administración oral o subcutánea. Los compuestos de la invención exhibieron también actividad antagonista de AR al suprimir el incremento mediado por la testosterona de los pesos de VP y SV.

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Ensayo Agonista de AR en el Ensayo del Peso Húmedo de la Próstata y del Músculo Elevador de Ano

Se investigó la actividad de los compuestos de la presente invención como agonistas de AR en un modelo de rata macho inmadura, que es un ensayo reconocido de los efectos anabólicos en el músculo y efectos sostenidos sobre los órganos sexuales para un compuesto determinado, tal como se describe en L.G. Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med. 83, 175 (1953); B.L. Beyler et al., "Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals", J. Amer. Med. Women's Ass. 23, 708 (1968); H. Fukuda et al., "Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay", Nago Dai. Yak. Ken. Nem. 14, 84 (1966), cuyas descripciones se incorporan como referencia a este documento.

La base de este ensayo se encuentra en la acción bien definida de los agentes androgénicos sobre el mantenimiento y crecimiento de tejidos musculares y órganos sexuales accesorios en animales y en el hombre. Se ha caracterizado suficientemente la capacidad de los esteroides androgénicos tales como testosterona (T) para conservar la masa muscular. El tratamiento de animales o del hombre, tras la castración, con una fuente exógena de T da como resultado una reversión de la atrofia muscular. Los efectos de T sobre la atrofia muscular del músculo elevador del ano en la rata han sido bien caracterizados. M. Masuoka et al., "Constant cell population in normal, testosterone deprived and testosterone stimulated levator ani muscles", Am. J. Anat. 119, 263 (1966); Z. Gori et al., "Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats. L Quantitative data", Boll. -Soc. Ital. Biol. Sper. 42, 1596 (1966); Z. Gori et al., "Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats. II. Electron-microscopic observations", Boll. -Soc. Ital. Biol. Sper. 42, 1600 (1966); A. Boris et al., Steroids 15, 61 (1970). Tal como se ha descrito anteriormente, los efectos de los andrógenos en el mantenimiento de los órganos sexuales accesorios masculinos tales como la próstata y las vesículas seminales, están bien definidos. La castración tiene como consecuencia una rápida involución y atrofia de la próstata y las vesículas seminales. Este efecto se puede revertir por la adición exógena de andrógenos. Dado que tanto el músculo elevador del ano como los órganos sexuales masculinos son los tejidos que mejor responden a los efectos de los agentes androgénicos, se utiliza este modelo para determinar la reversión dependiente de andrógenos de la atrofia del músculo elevador del ano y de los órganos sexuales accesorios en la rata inmadura castrada. Se adquirieron ratas sexualmente maduras (200-250 g, 6-8 semanas de edad, Sprague-Dawley, Harlan) ya castradas por el proveedor (Taconic). Las ratas se dividieron en grupos y se trataron diariamente durante 7 a 14 días con uno de los siguientes elementos:

1.

Control Vehículo

2.

Propionato de testosterona (TP) (3 mg/rata/día, subcutáneo)

3.

TP más Casodex (administrado por vía oral en PEGTW, diariamente), un antiandrógeno reconocido como compuesto de referencia.

4.

Para demostrar actividad antagonista, se administró un compuesto de la presente invención ("compuesto de ensayo") (por vía oral en PEGTW, diariamente) con TP (s.c., según se administra en el grupo 2), en una gama de dosis.

5.

Para demostrar actividad agonista, se administró un compuesto de la presente invención ("compuesto de ensayo") solo (por vía oral, en PEGTW, diariamente), en una gama de dosis.

Al término del tratamiento de 7-14 días de duración, los animales fueron sacrificados con dióxido de carbono, y se pesaron el músculo elevador del ano, las vesículas seminales y la próstata ventral. Para comparar datos de diferentes experimentos, se estandarizaron, en primer lugar, los pesos del músculo elevador del ano y de los órganos sexuales como mg por 100 g de peso corporal, y se consideró que el incremento de peso de los órganos inducido por TP fue el aumento máximo (100%). Para el análisis estadístico se utilizó Súper-ANOVA (un factor).

El incremento y la pérdida de peso de los órganos sexuales reflejan las variaciones del número de células (contenido de ADN) y de la masa celular (contenido de proteínas), dependiendo de la concentración sérica de andrógenos. Véase Y. Okuda et al., J. Urol. 145, 188-191 (1991), cuya descripción se incorpora como referencia a este documento. Por lo tanto, la medición del peso húmedo del órgano es suficiente para indicar la bioactividad de los andrógenos y antagonistas de andrógenos. En la rata inmadura castrada, la administración de andrógenos exógenos aumenta el músculo elevador del ano, las vesículas seminales (SV) y la próstata de manera dependiente de la dosis.

El incremento máximo del peso del órgano fue de 4 a 5 veces con la administración de 3 mg/rata/día de testosterona (T), o de 1 mg/rata/día de propionato de testosterona (TP) durante 3 días. Las CE_{50} de T y TP fueron de aproximadamente 1 mg y 0,03 mg, respectivamente. El aumento de peso de VP y SV se correlacionó también con el incremento de la concentración sérica de T y DHT. Aunque la administración de T mostró concentraciones 5 veces más altas de T y DHT en suero 2 horas después de la inyección subcutánea, comparada con TP, posteriormente estos elevados niveles se redujeron muy rápidamente. Por el contrario, las concentraciones séricas de T y DHT en los animales tratados con TP fueron bastante consistentes durante las 24 horas y, por consiguiente, TP exhibió una potencia entre 10 y 30 veces mayor que la de T libre.

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Ensayo del Xenoinjerto de MDA de Próstata Humana PCa2b

Ensayo Antitumoral In Vivo: se mantuvieron tumores de próstata humana MDA-PCa-2b en ratones sin pelo Balb/c nu/nu. Los tumores se propagaron como trasplantes subcutáneos en ratones adultos sin pelo de sexo masculino (4-6 semanas de edad), usando fragmentos tumorales obtenidos de ratones donantes. El paso tumoral tuvo lugar cada 5-6 semanas.

Para el ensayo de eficacia antitumoral, el número requerido de animales necesarios para detectar una respuesta significativa se combinó al comienzo del experimento, y cada uno de ellos recibió un implante subcutáneo de un fragmento de tumor (\sim 50 mg) con un trócar de calibre 13. Se permitió el crecimiento de los tumores hasta aprox. 100-200 mg (se excluyeron los tumores fuera de estos límites), y los animales se distribuyeron uniformemente a distintos grupos de tratamiento y control. El tratamiento de cada animal se basó en el peso corporal individual. Los animales tratados fueron analizados diariamente en busca de toxicidad/mortalidad relacionadas con el tratamiento. Cada grupo de animales se pesó antes de iniciar el tratamiento (Peso 1) y, luego, nuevamente después de la última dosis de tratamiento (Peso 2). La diferencia del peso corporal (Peso2 - Peso1) ofrece una medida de la toxicidad relacionada con el tratamiento.

La respuesta tumoral se determinó midiendo los tumores con un calibre dos veces a la semana, hasta que estos alcancen un tamaño "diana" predeterminado de 0,5 g. El peso de los tumores (mg) se calculó a partir de la fórmula: Peso del tumor = (longitud x ancho^{2})/2.

La variable de respuesta tumoral se expresó en términos de inhibición del crecimiento del tumor (% T/C), definida como la relación de la mediana de los pesos tumorales de los tumores tratados (T) con respecto a la del grupo de control (C).

Para calcular la lisis de células tumorales, se determinó, en primer lugar, el tiempo de duplicación del volumen tumoral (TDVT) con la fórmula:

TDVT = Mediana del tiempo (días) que tardan los tumores de control en alcanzar el tamaño diana - Mediana del tiempo (días) que tardan los tumores de control en alcanzar la mitad del tamaño diana

Y, log de la lisis celular = (T-C) / (3,32 x TDVT)

Las evaluaciones estadísticas de los datos se llevaron a cabo usando el test de Wilcoxon generalizado de Gehan.

Tumor Prostático de Dunning

El tumor prostático de Dunning R3327H es un adenocarcinoma de la próstata derivado espontáneamente y bien diferenciado, que responde a los andrógenos (Smolev JK, Heston WD, Scott WW, y Coffey DS, Cancer Treat. Rep. 61, 273-287 (1977)). El crecimiento de la sub-línea R3327H ha sido seleccionado por su crecimiento altamente dependiente de andrógenos y reproducible en la rata macho intacta. Por lo tanto, este modelo y otras sub-líneas de este tumor se han utilizado extensamente para evaluar las actividades antitumorales in vivo de antiandrógenos tales como flutamida y bicalutamida/Casodex (Maucher A y von Angerer, J. Cancer Res. Clin. Oncol. 119, 669-674 (1993), Furr B.J.A. Euro. URL 18 (supl. 3), 2-9 (1990), Shain S.A. y Huot RI, J. Steroid Biochem. 31, 711-718 (1988).

Al comienzo del estudio, las piezas de tumores Dunning (aproximadamente 4 x 4 mm) se trasplantan de forma subcutánea en el flanco de ratas Copenhague maduras machos (6-7 semanas de edad, Harlan-Sprague Dawley, Indianápolis, MD). Alrededor de 6 semanas después del implante, los animales con tumores de tamaño mensurable (aproximadamente 80-120 mm^{2}) se distribuyen aleatoriamente a grupos de tratamiento (8-10 ratas/grupo), y se inician los tratamientos. Un grupo de ratas se somete a castración para que sirva como control negativo de crecimiento tumoral. Los animales son tratados a diario con compuestos de la presente invención, antiandrógenos convencionales tales como bicalutamida, o vehículo (control), durante un promedio de 10 a 14 semanas. Los compuestos de ensayo se disuelven en un vehículo de (2,5 mg/ml de peso corporal) polietilenglicol al 10% y Tween 80 al 0,05% en carboximetilcelulosa al 1%, PEG/CMC (Sigma, St. Louis, MO). Los experimentos terapéuticos típicos incluyen tres grupos de tres dosis crecientes de cada compuesto convencional o de ensayo (en un intervalo de 300-3 mg/kg).

Los tumores en el grupo de vehículo (control) alcanzan un tamaño de 1500 a 2500 mm^{3}, en tanto que el grupo de animales castrados muestra, típicamente, la detención del crecimiento del tumor durante las 14 semanas de observación. Cabe esperar que los animales tratados por vía oral con 20 mg/kg de bicalutamida o flutamida muestren una reducción de hasta 40% de los volúmenes tumorales comparados con el control después de 14 semanas de tratamiento. El tamaño de los tumores se mide semanalmente por medio de un calibre vernier (Froboz, Suiza), realizando mediciones perpendiculares de longitud y ancho. Los volúmenes de los tumores se miden en mm^{3} usando la fórmula: Longitud x Ancho X Altura = Volumen. Las diferencias estadísticas entre los grupos de tratamiento y de control se evalúan usando el análisis ANOVA múltiple, seguido del test t de Student no paramétrico de una cola.

Ensayo del Peso de la Próstata de la Rata Madura

Se investigó la actividad de los compuestos de la presente invención en un modelo de rata macho madura, que es una variación del ensayo del peso del músculo elevador del ano y de la próstata húmeda descrito anteriormente. Los anteriores ensayos in vivo son estudios reconocidos para determinar los efectos anabólicos sobre el músculo y los efectos sostenidos sobre los órganos sexuales para un compuesto determinado, tal como se describe en L.G. Hershberger et al., 83 Proc. Soc. Expt. Biol. Med. 175 (1953); B.L. Beyler et al., "Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals", 23 J. Amer. Med. Women's Ass., 708 (1968); H. Fukuda et al., "Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay", 14 Nago Dai. Yak. Ken. Nem. 84 (1966), cuyas descripciones han sido incorporadas como referencia a este documento. La base de este ensayo radica en la acción bien definida de los agentes androgénicos sobre el mantenimiento y crecimiento de tejidos musculares y órganos sexuales accesorios en animales y en el hombre.

Los órganos sexuales accesorios masculinos, tales como la próstata y las vesículas seminales, desempeñan una función importante en la función reproductiva. El crecimiento de estas glándulas y el mantenimiento de su tamaño y función secretora son sostenidos por la presencia continua de testosterona sérica (T), que es el principal andrógeno en suero (>95%) producido por las células de Leydig en el testículo, bajo el control de la hormona luteinizante (LH) pituitaria y de la hormona folículo-estimulante (FSH). La 5\alpha-reductasa convierte la testosterona en su forma más activa, dihidrotestosterona (DHT), en el interior de la próstata. Los andrógenos suprarrenales contribuyen también con aproximadamente 20% a la DHT total en la próstata de rata, comparado con el 40% que se registra en el varón de 65 años de edad. F. Labrie et al., 16 Clin. Invest. Med. 16, 475-492 (1993). Sin embargo, ésta no es una vía fundamental, ya que tanto en animales como en el hombre la castración conduce a una involución prácticamente completa de la próstata y de las vesículas seminales, sin necesidad de una adrenalectomía simultánea. Por lo tanto, bajo condiciones normales, las suprarrenales no contribuyen de forma significativa al crecimiento del tejido prostático. M.C. Luke y D.S. Coffey, "The Physiology of Reproduction", ed. E. Knobil y J.D. Neill,1, 1435-1487 (1994). Dado que los órganos sexuales masculinos y el músculo elevador del ano son los tejidos que mejor responden a la modulación de la actividad androgénica, se utiliza este modelo para determinar la actividad de los compuestos que modulan la vía del receptor de andrógeno en la rata madura.

Junto con su actividad mitogénica sobre tejidos tales como la próstata, vesícula seminal y músculo, la testosterona también actúa como regulador negativo de su propia biosíntesis. La producción de testosterona en las células de Leydig del testículo está controlada por el nivel de LH circulante, liberada desde la glándula pituitaria. Por su parte, los niveles de LH están controlados por el nivel de LHRH producido en la región del hipotálamo. Los niveles de testosterona en sangre sirven para inhibir la secreción de LHRH y, subsiguientemente, reducen los niveles de LH y, en último término, los niveles de testosterona circulante. Por medio de la medición de los niveles en sangre de LH y la medida en que éstos resultan afectados por los compuestos de la presente invención ("compuestos de ensayo"), es posible determinar el nivel de actividad agonista o antagonista de dichos compuestos en el eje hipotalámico de este ciclo endocrino.

Conjuntos comparables de ratas Harlan Sprague-Dawley (40-42 días de edad, 180-220 g) recibieron por vía oral, junto con la alimentación, los compuestos de ensayo en disolución/suspensión de PEG 400 al 80% y Tween 20 al 20% (PEGTW) durante 14 días. Dos grupos de control, uno intacto y uno castrado, recibieron por vía oral solamente el vehículo PEGTW. Los animales recibieron (volumen/peso) 0,5 ml de vehículo/100 mg de peso corporal, Los grupos experimentales fueron los siguientes:

1.

Intacto vehículo (vía oral, PEGTW, a diario)

2.

Control vehículo (vía oral, PEGTW, a diario)

3.

Bicalutamida (Casodex, un antiandrógeno reconocido, como compuesto de referencia), o un compuesto de la presente invención, por vía oral en PEGTW, a diario (en una gama de dosis). Al final de los 14 días de tratamiento, los animales fueron sacrificados, y se extrajeron quirúrgicamente la próstata ventral, las vesículas seminales y el músculo elevador del ano, cuyos pesos se determinaron. Para comparar datos de diferentes experimentos, se estandarizaron, en primer lugar, los pesos de los órganos como mg por 100 g de peso corporal, y se expresaron como porcentaje del valor del órgano respectivo en el grupo intacto.

La hormona luteinizante de rata (rLH) se determinó cuantitativamente con el kit Biotrak [^{125}I] (Amersham Pharmacia Biotek), siguiendo las instrucciones del fabricante. El ensayo se basa en la competición por parte de la LH presente en el suero por la fijación de [^{125}I] rLH a una perla Amerlex-M/suspensión de anticuerpo. La radiactividad remanente tras la incubación con el suero y subsiguientes lavados se extrapola a una curva estándar para obtener una lectura en ng/ml.

El aumento y la pérdida de peso de los órganos sexuales y del músculo elevador del ano reflejan las variaciones del número de células (contenido de ADN) y de la masa celular (contenido de proteínas), dependiendo de la concentración del andrógeno en suero, véase Y. Okuda et al., J. Urol. 145, 188-191 (1991), cuya descripción se incorpora a este documento como referencia. Por lo tanto, la medición del peso húmedo del órgano es suficiente para indicar la bioactividad de los andrógenos y antagonistas de andrógenos. En el ensayo de rata madura, los agentes agonistas activos carecerán de efecto o aumentarán el peso de uno o más de los órganos que responden a los andrógenos (músculo elevador del ano, próstata, vesícula seminal), y carecerán de efecto o tendrán un efecto supresor sobre la secreción de LH. Los compuestos con actividad antagonista reducirán el peso de uno o más de los órganos que responden a los andrógenos (músculo elevador del ano, próstata, vesícula seminal), y carecerán de efecto o mostrarán un efecto supresor reducido sobre la secreción de LH.

Ensayo del Xenoinjerto de Próstata Humana CWR22

Ensayo Antitumoral In Vivo: se mantuvieron los tumores de próstata humana CWR22 en ratones Balb/c nu/nu sin pelo. Los tumores se propagaron como trasplantes subcutáneos en ratones sin pelo adultos de sexo masculino (4-6 semanas de edad), utilizando fragmentos tumorales obtenidos de ratones donantes. El paso tumoral tuvo lugar cada 5-6 semanas.

Para el ensayo de eficacia antitumoral, el número requerido de animales necesarios para detectar una respuesta significativa se combinó al comienzo del experimento, y cada uno de ellos recibió un implante subcutáneo de un fragmento de tumor (\sim 50 mg) con un trócar de calibre 13. Se permitió el crecimiento de los tumores hasta aprox. 100-200 mg (se excluyeron los tumores fuera de estos límites), y los animales se distribuyeron uniformemente a distintos grupos de tratamiento y control. El tratamiento de cada animal se basó en el peso corporal individual. Los animales tratados fueron analizados diariamente en busca de toxicidad/mortalidad relacionadas con el tratamiento. Cada grupo de animales se pesó antes de iniciar el tratamiento (Peso 1) y, luego, nuevamente después de la última dosis de tratamiento (Peso 2). La diferencia del peso corporal (Peso2 - Peso1) ofrece una medida de la toxicidad relacionada con el tratamiento.

La respuesta tumoral se determinó midiendo los tumores con un calibre dos veces a la semana, hasta que estos alcancen un tamaño "diana" predeterminado de 0,5 g. El peso de los tumores (mg) se calculó a partir de la fórmula: Peso del tumor = (longitud x ancho^{2})/2.

La variable de respuesta tumoral se expresó en términos de inhibición del crecimiento del tumor (% T/C), definida como la relación de la mediana de los pesos tumorales de los tumores tratados (T) con respecto a la del grupo de control (C).

Para calcular la lisis de células tumorales, se determinó, en primer lugar, el tiempo de duplicación del volumen tumoral (TDVT) con la fórmula:

TDVT = Mediana del tiempo (días) que tardan los tumores de control en alcanzar el tamaño diana - Mediana del tiempo (días) que tardan los tumores de control en alcanzar la mitad del tamaño diana

Y, log de la lisis celular = (T-C) / (3,32 x TDVT)

Las evaluaciones estadísticas de los datos se llevaron a cabo usando el test de Wilcoxon generalizado de Gehan.

Los siguientes Ejemplos ilustran realizaciones de la presente invención, así como ejemplos de referencia, y no pretenden limitar el alcance de las reivindicaciones.

Los siguientes Ejemplos 1 a 217 son Ejemplos de Referencia.

Abreviaturas

En este documento se usan las siguientes abreviaturas:

DBU = 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno

4-DMAP = 4-dimetilaminopiridina

ee = exceso enantiomérico

DMF = dimetilformamida

Et = etilo

EtOAc = acetato de etilo

LDA = diisopropilamida de litio

Base de Hünig = N,N-diisopropiletilamina

Me = metilo

RT = tiempo de retención

TFA = ácido trifluoroacético

THF = tetrahidrofurano

TLC = cromatografía de capa fina

\Delta = calor

t-Bu = terc-butilo

pH = fenilo

PhCH_{3} = tolueno

Pd/C = paladio sobre carbón activado

TsCl = cloruro de tosilo

TBSOTf = sulfonato de terc-butildimetilsililo trifluorometano

TBS = terc-butildimetilsilano

Mel = yoduro de metilo

(BOC)_{2}O = dicarbonato di-terc-butilo

TEA = trietilamina

n-BuLi = n-butilitio

ta = temperatura ambiente

CL = cromatografía líquida

EtOH = etanol

DCE = dicloroetano

DMSO = dimetilsulfóxido

Ra-Ni = Níquel Raney

MS = tamices moleculares

EM(EN) = Espectrometría de Masas por Electronebulización

H = horas

Ac = acetilo

DEAD = azodicarboxilato de dietilo

DPPA = difenilfosforil azida

Ejemplo 1 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (1B)

51

A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[[[3-(trifluorometil)fenil]amino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (1A)

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52

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Se disolvió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (0,253 g, 0,15 mmol) en tolueno y se añadió isocianato de 3-(trifluorometilfenilo) (0,311 g, 0,166 mmol). La reacción se calentó a 70ºC durante 3 h y después se enfrió a -20ºC durante 12 h. El compuesto 1A precipitó después de la refrigeración, se filtró y se aclaró con tolueno frío. Después del secado al vacío se recuperaron 0,097 g de 1A y se llevaron a la siguiente etapa sin purificación adicional.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (1B)

Se disolvió el Compuesto intermedio 1A (0,150 g, mmol) en tolueno (5 ml) y se añadió DBU (0,1 ml). La reacción se calentó a 80ºC durante 1,5 h y después el tolueno se retiró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona al 10%-30% en hexanos para dar 0,76 g del compuesto 1B en forma de un sólido blanco. HPLC: 92% a 2,93 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía TFA al 0,1%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 309,09 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 2 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (2C) (Procedimiento alternativo para la preparación de 1B)

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53

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A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-(clorocarbonil)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (2A)

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54

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A una suspensión de NaHCO_{3} (2,5 g, 30 mmol) en CH_{2}Cl_{2} a 25ºC se le añadió fosgeno (solución al 20%, 5,9 g, 12 mmol). Se añadió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (0,5 g, 3,0 mmol) y la reacción se agitó a 25ºC durante 2 h. Después el bicarbonato se retiró por filtración y se aclaró con CH_{2}Cl_{2}. El producto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con MeOH al 1%-2% en CH_{2}Cl_{2} para dar 0,367 g del Compuesto intermedio 2A en forma de un aceite amarillo.

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B. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[[[3-(trifluorometil)fenil]amino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (2B)

55

Se disolvieron el Compuesto intermedio 2A (0,100 g, 0,44 mmol) y 3-trifluorometilanilina (0,075 ml, 0,44 mmol) en 5,0 ml de tolueno. Después se añadieron 4-DMAP catalítico y diisopropilamina (0,3 ml, 2,1 mmol). La reacción se calentó a 50ºC durante 14 h. Los compuestos orgánicos volátiles después se retiraron y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con metanol al 0,5%-1,0%/CH_{2}Cl_{2} para dar 0,39 g del Compuesto intermedio 2B en forma de un aceite amarillo pálido.

C. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (2C)

El compuesto del título se preparó como se describe en el Ejemplo 1, etapa B.

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Ejemplo 3 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-2-[1-naftalenil]5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (3B)

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56

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A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[(1-naftalenilamino)carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (3A)

57

A una solución de trifosgeno (0,20 g, 1,39 mmol) en dicloroetano se le añadió 1-naftilamina (0,136 g, 0,46 mmol) 25ºC. La solución se calentó a 70ºC durante 30 min y después se enfrió a 25ºC. Después se añadió trietilamina (0,58 ml, 4,17 mmol) y la reacción se calentó a 70ºC. Después de 2 h, la reacción se enfrió a 25ºC y se añadió éster etílico del ácido 2-azabiciclo [2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (0,209 g, 1,25 mmol). La reacción se agitó a 25ºC durante 14 h. Los compuestos orgánicos volátiles después se retiraron al vacío y el residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con (4:1-1:1) acetato de etilo/hexanos para dar 0,190 g del Compuesto intermedio 3A en forma de un sólido blanco.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-2-[1-naftalenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (3B)

Se disolvió el Compuesto intermedio 3A (0,150 g) en tolueno (5 ml) y se añadió DBU (0,1 ml). La reacción se calentó a 80ºC durante 1,5 h y después el tolueno se retiró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona al 10%-30% en hexanos para dar 0,76 g del Compuesto 3B en forma de un sólido blanco. HPLC: 95% a 3,067 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 291,2 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 4 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2,3,8,8a-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-3-tioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)- ona (4B)

58

A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[[[3-(trifluorometil)fenil]amino]tioxometil]-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (4A)

59

A una solución de éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (0,253 g, 1,5 mmol) en tolueno (7,0 ml) se le añadió isocianato de 3-(trifluorometilfenilo) (0,339 g, 1,66 mmol). Después de 14 h a 25ºC, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NaOH 1 N (2 x 10 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y el material bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de acetona al 0-20% en hexano para producir 188 mg (34%) del compuesto intermedio 4B.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2,3,8,8a-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-3-tioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-1(5H)- ona (4B)

Se disolvió el compuesto intermedio 4A (180 mg, 0,5 mmol) en tolueno anhidro (5 ml) y se añadió DBU (0,042 ml). La reacción se calentó a 80ºC durante 1,5 h y después se enfrió a 25ºC. Los volátiles se retiraron al vacío y el residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con un gradiente de acetona al 0-20%/hexano para dar el compuesto 4B puro (67 mg) en forma de un aceite amarillo. HPLC: 66,9% a 2,980 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía TFA al 0,1%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 343,07 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 5 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8,8a-Dihidro-8a-metil-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (5)

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60

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Se disolvió el Compuesto intermedio 1B (0,020 g, 0,06 mmol, del Ejemplo 1) en THF anhidro (2,0 ml) y se enfrió a -78ºC. Después se añadió lentamente LDA (solución 2,0 M en THF, 0,195 ml). Después de 1 h, se añadió MeI (0,008 ml, 0,12 mmol) y la reacción se calentó lentamente a 25ºC. Después la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para dar el compuesto 5 puro (0,008 g) en forma de un sólido blanco. HPLC: 100% a 3,620 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 323,0 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 6 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2,3,8,8a-Tetrahidro-8a-metil-3-tioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-1(5H)-ona (6)

61

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A una solución del Compuesto 4B (0,056 g, 0,173 mmol, Ejemplo 4) en THF a -78ºC se le añadió diisopropilamina de litio (solución 2,0 M en THF, 0,173 ml). Después de 2 h, se añadió MeI (0,022 ml, 0,35 mmol) y la reacción se calentó a 25ºC durante 2 h. Después se añadió H_{2}O y la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El producto en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona al 10% en hexanos para dar 0,034 g del Compuesto 6 en forma de un sólido blanco. HPLC: 90% a 4,023 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 339,0 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 7 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-2-(3,5-Diclorofenil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (7Bi y 7Bii, respectivamente)

62

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A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[[[3, 5-diclorofenil]amino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (7A)

63

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A una solución de isocianato de 3,5-diclorofenilo (3,01 g, 16 mmol) en tolueno (100 ml) se le añadió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (2,70 g, 16,0 mmol) en tolueno y la reacción se agitó a 25ºC durante 14 h. Se añadió un sólido blanco formado después de 14 h y éter dietílico para precipitar más producto. Después la reacción se filtró y se aclaró con éter dietílico frío. El intermedio de urea bruto, 2,81 g de un sólido blanco, se aisló por filtración, se secó y se usó directamente en la siguiente etapa.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-2-(3,5-Diclorofenil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (7Bi y 7Bii)

Se añadió el Compuesto 7A (0,025 g, 0,070 mmol) a una suspensión de MS de 4 \ring{A} activado recientemente (0,050 g) en tolueno (2,0 ml). Después se añadió DBU (0,42 ml, 2,96 mmol) seguido de calentamiento a 80ºC durante 2 h. Después, la mezcla se enfrió a 25ºC y se filtró a través de celite aclarando con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos se lavaron con HCl 1 N y después se secaron sobre sulfato sódico anhidro. La RMN bruta mostró una mezcla del Compuesto 7Bi y del Compuesto 7Bii, en una relación de 2:1,5, respectivamente. Los diastereómeros se separaron por TLC preparativa sobre SiO_{2} eluyendo con cloruro de metileno. Esto dio 0,006 g del Compuesto 17Bi en forma de un sólido blanco y 0,008 g del Compuesto 17Bii en forma de un sólido blanco. 17Bi: HPLC: 100% a 3,383 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 312,1 [M+H]^{+}. 17Bii: HPLC: 99% a 3,497 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 311,2 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 8 Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-etanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (8B)

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64

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A. Éster etílico del ácido 2-[[[3-(trifluorometil)fenil]amino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.2]octano-3-carboxílico (8A)

65

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A una solución de éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.2]octano-3-carboxílico (50 mg, 0,27 mmol) en tolueno anhidro (10 ml) se le añadió isocianato de 3-(trifluorometilfenilo) (55,5 mg, 0,3 mmol). La reacción se agitó a 25ºC durante una noche, y después se concentró al vacío y se purificó por TLC preparativa sobre gel de sílice eluyendo con acetona al 30% en hexanos para proporcionar 37 mg (37%) del Compuesto intermedio 8A.

B. Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-etanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (8B)

A una solución del Compuesto intermedio 8A (37 mg, 0,1 mmol) en tolueno anhidro (10 ml) se le añadió DBU (20 \mul, 0,11 mmol). La solución se calentó a 80ºC durante 2 horas. El disolvente se retiró por evaporación rotatoria y el material bruto se purificó por TLC preparativa sobre gel de sílice eluyendo con acetona al 30% en hexanos para proporcionar 16 mg (49%) del Compuesto 8B en forma de un sólido blanco. HPLC: 99% a 3,433 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 325,2 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 9 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (9Fi y 9Fii, respectivamente) Ruta de Síntesis de Soporte Sólido

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66

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A. Formación de Resina de Merrifield Modificada (9A)

67

A una suspensión de NaH (60% en aceite mineral, 0,353 g, 8,84 mmol) en DMF a 0ºC se le añadió lentamente 3-(4-hidroxifenil)-1-propanol (1,3 g, 8,55 mmol), y después se calentó a 25ºC y se agitó durante 1 h. La resina de Merrifield (5 g, 0,57 mmol/g) se lavó secuencialmente con cloruro de metileno, DMF y después se suspendió en 20 ml de DMF. A la resina se le añadió el alcóxido formado previamente durante un período de tiempo de 5 minutos. La reacción después se calentó a 80ºC durante 13 h. Después de enfriar a 25ºC, la reacción se filtró y se aclaró secuencialmente con DMF (3 x 50 ml), hexanos (2 x 50 ml), cloruro de metileno (3 x 50 ml), metanol (2 x 50 ml) y cloruro de metileno (3 x 50 ml) y se secó al vacío para dar una resina blanca (4,6 g). La RMN de protones de fase sólida demostró la incorporación del engarce de 3-(4-hidroxifenil)-1-propanol, para formar la Resina 9A.

B. 2-(1,1-Dimetiletil) éster del ácido endo/exo-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2,3-dicarboxílico (9B)

68

Se disolvió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (10,0 g, 59,0 mmol) en una mezcla de dioxano (120 ml), agua (60 ml) y NaOH 1 N (66 ml). Después se añadió (BOC)_{2}O (14,4 g, 218,25 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 14 h. Los extractos orgánicos volátiles se retiraron al vacío y después se añadió más agua (200 ml) y la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 200 ml). La capa acuosa después se ajustó a pH = 4-5 con la adición de KHSO_{4} al 5%. La mezcla después se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron para dar el Compuesto intermedio 9B bruto en forma de un sólido blanco (8,5 g). Este material se usó sin purificación adicional.

C. 2-(1,1-dimetiletil) 3-(Resina de Merrifield Modificada) éster del ácido endo/exo-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2,3-dicarboxílico (9C)

69

A la Resina 9A se le añadió DMF (15 ml) seguido de agitación durante 15 minutos. Después se añadió el Compuesto 9B (0,275 g, 1,14 mmol) en DMF seguido de piridina (0,152 ml, 1,88 mmol). Se añadió cloruro de 2,6-diclorobenzoílo (0,163 ml, 1,14 mmol) y la reacción se agitó durante 1 día. Después se añadieron cantidades idénticas de ácido, piridina y cloruro seguido de agitación durante 2 días. Después, la reacción se filtró y se aclaró secuencialmente con DMF (3 x 20 ml), metanol (3 x 20 ml) y cloruro de metileno (6 x 20 ml) y se secó al vacío para dar la Resina 9C en forma de un polvo blanco.

D. Éster de Resina de Merrifield Modificada del ácido endo/exo-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (9D)

70

Se suspendió la Resina 9C (1 g) en TFA al 50%/DMF (30 ml) y se sonicó a 60ºC durante 18 h. Después, la reacción se filtró y se lavó con DMF (5 x 20 ml), metanol (2 x 20 ml) y cloruro de metileno (2 x 20 ml) y se secó al vacío para dar 0,7 g de la Resina 9D en forma de un polvo blanco.

E. Éster de Resina de Merrifield Modificada del ácido endo/exo-2-[[[3-(trifluorometil)fenil]amino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (9E)

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71

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Se suspendió la Resina 9D (0,50 g) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se añadió isocianato de 3-(trifluorometilfenilo) (0,5 ml, 1,25 mmol) y la reacción se agitó durante 24 h. La resina se filtró y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (8 x 20 ml) y se secó al vacío para dar la Resina 9E en forma de un sólido amarillo.

F. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3-(2H, 5H)-diona (9Fi y 9Fii)

A la Resina 9E se le añadió tolueno seco (10 ml) y 0,25 g de tamices moleculares de 4 \ring{A} activados. Después se añadió DBU (0,25 ml) y la reacción se calentó a 80ºC durante 1,5 h. La reacción se filtró y se aclaró con CH_{2}Cl_{2} y los extractos orgánicos se lavaron una vez con HCl 1 N seguido de secado sobre sulfato sódico anhidro. El proceso resultante produjo 24 mg (rendimiento del 26% a partir de la carga de la resina de Merrifield) de mezclas 4 a 1 de los Compuestos 9Fi y 9Fii, respectivamente. La separación de los Compuestos 9Fi y 9Fii se consiguió por HPLC preparativa (metanol acuoso al 0%-100% durante 20 minutos, columna de fase inversa YMC ODSA, 20 x 100 mm) para producir 0,005 g del Compuesto 9Fi en forma de un sólido blanco y 0,019 g del Compuesto 9Fii en forma de un sólido blanco. Véase el Ejemplo 11 y 12 para caracterización.

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Ejemplo 10 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-Tetrahidro-2-(2-naftalenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (10Ci y 10ii, respectivamente)

72

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A. Éster de Resina de Merrifield Modificada del ácido endo/exo-2-(clorocarbonil)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (10A)

73

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La Resina 9D (0,50 g, sintetizada como se describe en el Ejemplo 9) se suspendió en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se añadieron fosgeno (al 20% en tolueno, 4,5 g) y NaHCO_{3} (1,5 g). La resina se agitó durante 22 h a 22ºC y después se filtró aclarando con CH_{2}Cl_{2} (5 x 50 ml). Después, la resina se secó al vacío para dar la Resina 10A en forma de una resina amarilla.

B. Éster de Resina de Merrifield Modificada del ácido endo/exo-2-[(2-naftalenilandno)carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (10B)

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74

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La Resina 10A (0,70 g) se suspendió en CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y se añadió 2-naftal amina (0,58 g, 4,0 mmol). Se añadieron base de Hünig (0,88 ml) y 4-DMAP catalítico y la mezcla se agitó a 70ºC durante 20 h. Después de enfriar a 22ºC, la resina se filtró y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (8 x 20 ml) y se secó al vacío para dar la Resina 10B en forma de un sólido amarillo.

C. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-Tetrahidro-2-(2-naftalenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (10Ci y 10Cii)

A la Resina 10B (0,70 g) se le añadió tolueno seco (10 ml) y 0,25 g de tamices moleculares 4 \ring{A} activados. Después se añadió DBU (0,65 ml, 4,0 mmol) y la reacción se calentó a 80ºC durante 2,0 h. La reacción se filtró y se aclaró con CH_{2}Cl_{2} y los extractos orgánicos se lavaron dos veces con HCl 1 N (30 ml) seguido de secado sobre sulfato sódico anhidro. El proceso resultante produjo 13 mg (rendimiento del 11%) de una mezcla 1,5 a 1 del Compuesto 10Ci y 10Cii, respectivamente. La separación de la mezcla se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2}, eluyendo con MeOH al 1% en CH_{2}Cl_{2} para dar 6 mg de 10Ci en forma de un sólido blanco y 4 mg del Compuesto 10Cii en forma de un sólido blanco. 10Ci: HPLC: 99% a 2,94 minutos (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O, + TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm) EM (ES): m/z 293,0 [M+H]^{+}. 10Cii: HPLC: 99% a 3,09 minutos (columna YMC SS ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm) EM (ES): m/z 293,0 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 11 (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-Tetrahidro-2[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (11)

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75

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A una suspensión de tamices moleculares de 4 \ring{A} recién activado (1,5 g) en tolueno (15 ml) se le añadió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (0,50 g, 2,96 mmol) en tolueno. Después de 15 min, se añadió isocianato de 3-(trifluorometil)-fenilo (0,41 ml, 2,96 mmol) y la reacción se agitó a 25ºC durante 14 h. Después se añadió DBU (0,42 ml, 2,96 mmol) seguido de calentamiento a 80ºC durante 2 h. Después, la mezcla se enfrió a 25ºC y se filtró a través de celite aclarando con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos se llevaron a sequedad y se dejaron en reposo absoluto en el DBU restante a 35ºC durante 5 h. La mezcla en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para producir 735 mg (rendimiento del 80,1%) del Compuesto 11 en forma de un sólido blanco. HPLC: 98% a 3,117 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 311,1 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 12 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (12i y 12ii, respectivamente)

76

Se preparó LDA por tratamiento con diisopropil amina (0,091 ml, 0,650 mmol) en THE a -78ºC con n-BuLi (1,6 M en hexanos, 0,304 ml). Después de 20 min, se añadió lentamente el Compuesto 11 (0,100 g, 0,325 mmol) al LDA en THF. La reacción se calentó lentamente a -20ºC y se dejó en reposo durante 15 min. Después, la reacción se enfrió a -78ºC y se interrumpió por la adición de NH_{4}Cl saturado. La solución después se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 30 ml) y los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El material en bruto se purificó por TLC preparativa sobre SiO_{2} eluyendo con CH_{2}Cl_{2} para dar una mezcla 1:3 del Compuesto 12i (Compuesto 11) y 12ii (0,091 g, 91%) en forma de un sólido blanco. 12ii: HPLC: 98% a 2,987 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 311,1 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 13 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-[[2-(3,4-Diclorofenil)octahidro-1-oxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-3-ilideno]ami- no](13Bi y 13Bii, respectivamente)

77

A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[(cianoimino)[(3,4-diclorofenil)amino]metil]-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (13A)

78

Se combinaron éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (169 mg, 1,0 mmol, 1 equiv.) en dimetilformamida con N-ciano-N'-(3,4-diclorofenil)-tiourea (246 mg, 1,0 mmol, 1 equiv.) y clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (288 mg, 1,5 mmol, 1,5 equiv.). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se interrumpió con ácido cítrico acuoso 1 M y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos combinados se secaron y se concentraron al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetona al 30% en hexanos para proporcionar 192 mg (50,4%) del Compuesto 13A en forma de un semi-sólido blanco. HPLC: 100% a 3,260 minutos (columna YMC Combiscreen ODS-A S5 eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante un gradiente de 4 minutos). EM (ES): m/z 381. [M+H]^{+}.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-[[2-(3,4-Diclorofenil)octahidro-1-oxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-3-ilideno]amino] (13Bi y 13Bii)

Se combinó el Compuesto 13A (180 mg, 0,47 mmol, 1 equiv.) en tolueno anhidro con DBU (72 mg, 0,47 mmol, 1 equiv.). La solución se calentó a 60ºC durante 1 h. La TLC (placa de SiO_{2}, CH_{3}OH al 1% en CH_{2}Cl_{2}) mostró que no quedaba material de partida, mientras que el control por LC indicó un pico con el mismo tiempo de retención que el material de partida. La reacción se interrumpió con NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos combinados se secaron y se concentraron al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con CH_{3}OH al 0,5% en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar dos isómeros. El Compuesto 13Bi se obtuvo con un rendimiento del 52% (82 mg) en forma de un semi-sólido blanco. HPLC: 100% a 3,297 minutos (columna YMC Combiscreen ODS-AS5 eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante un gradiente de 4 minutos). MS(ES): 335,08 [M^{+-}]. El Compuesto 13Bii se obtuvo con un rendimiento del 25% (40 mg) en forma de un sólido blanco. HPLC: 100% a 3,323 minutos (columna YMC Combiscreen ODS-A S5 eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante un gradiente de 4 minutos). EM (ES): m/z 335,06 [M]^{+-} y 337,07 [M+2H]^{+}.

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Ejemplo 14 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-8a-[(4-Bromofenil)metil]-2-(3,5-Diclorofenil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (14)

79

Se añadió el Compuesto 7Bi (0,217 g, 0,701 mmol, preparado como se describe en el Ejemplo 7) LDA recién preparada (1,227 mmol de n-BuLi, 1,402 mmol de diisopropilamina) en THF a -78ºC. Después de la adición, la reacción se calentó lentamente a -20ºC y se mantuvo a esta temperatura durante 20 minutos. Después, la mezcla se enfrió a -78ºC y se añadió bromuro de 4-bromobencilo (0,175 g, 0,701 mmol) en THF. Después, la reacción se calentó a 0ºC y después de 2 h, se interrumpió por la adición de NH_{4}Cl acuoso saturado. Después, la solución se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 30 ml) y se secó sobre sulfato sódico anhidro. El material resultante se purificó por TLC sobre gel de sílice preparativa eluyendo con CH_{2}Cl_{2} para dar el Compuesto 14 (0,083 g) en forma de un aceite transparente. HPLC: 98% a 4,160 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 481,1 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 15 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-Hexahidro-2-(2-naftalenil)-3-(fenilimino)-5,8-metanoimidazol[1,5-a]piridina-1(5H)-ona (15B)

80

A. N-(2-Naftalenil)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxamida (15A)

81

El Compuesto intermedio 9B (1,00 g, 4,15 mmol, como se prepara en el Ejemplo 9) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (8,0 ml) y se añadieron TEA (2,31 ml, 16,6 mmol) y cloruro de 2,6-diclorobenzoílo (0,549 ml, 4,15 mmol). La mezcla se agitó durante 14 h y se añadió 2-aminonaftal (0,593 g, 4,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seguido de la adición de 4-DMAP (0,010 g). Después de 3 h, la reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó una vez con HCl 1 N (40 ml), una vez con NaHCO_{3} acuoso saturado (40 ml) y se secó sobre sulfato sódico anhidro. El intermedio bruto (1,00 g, 2,73 mmol) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (2,0 ml) y se trató con TFA (2,0 ml) a 20ºC. Después de 3 h, la reacción se interrumpió con NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 30 ml) y se secó sobre sulfato sódico anhidro. La reacción bruta se purificó por HPLC de fase inversa preparativa para dar 0,770 g del Compuesto 15A en forma de un sólido blanco.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-Hexahidro-2-(2-naftalenil)-3-(fenilimino)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1(5H)-ona (15B)

Se disolvió el Compuesto intermedio 15A (0,050 g, 0,188 mmol) en dicloroetano (2,0 ml) y se añadieron dicloruro de fenilisocianuro (0,026 ml, 0,188 mmol), 4-DMAP (0,010 g) y DBU (0,084 ml, 0,564 mmol) y la reacción se calentó a 90ºC en un tubo cerrado herméticamente. Después de 14 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa sobre SiO_{2} eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/acetona (9:1) para dar 0,063 g del Compuesto 15B en forma de un aceite castaño. HPLC: 93% a 3,590 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 368,37 [M+H]^{+}

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Ejemplo 16 Hexahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1(5H)-ona (16)

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82

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Se disolvió el Compuesto 4B (0,020 g, 0,062 mmol, como se describe en el Ejemplo 4) en EtOH absoluto (2,0 ml) y se añadió Ra-Ni (exceso). Después de 3 h a 25ºC, la reacción se retiró por filtración a través de celite aclarando con EtOH. El material bruto se purificó por TLC preparativa eluyendo con acetona al 30% en hexanos, produciendo 0,6 mg del Compuesto 16 en forma de un sólido blanco. HPLC: 100% a 2,437 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 297,3 [M+H]^{+}.

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Preparación alternativa del Compuesto 16 A. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-Hexahidro-3-tioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-1(5H)-ona (16A)

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83

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Se disolvió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (0,250 g, 0,15 mmol) en tolueno y se añadió isotiocianato de 3-(trifluorometilfenilo) (0,334 g, 0,166 mmol). La reacción se agitó a 25ºC durante 14 h y después se añadió NaOH 1 N (4 ml). Después de media hora, la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 25 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y después el disolvente se retiró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona al 10%-30% en hexanos para dar 0,378 g del compuesto 16A en forma de un sólido amarillo.

B. Hexahidro-2-[3-trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1(5H)-ona (16b o 16)

El Compuesto 16A (0,020 g, 0,062 mmol) se disolvió en etanol (2 ml) y Ra-Ni (\sim0,020 g). Después de 3 h, la mezcla de reacción se filtró a través de celite, se concentró, y el residuo resultante se purificó por TLC preparativa sobre sílice eluyendo con acetona al 30% en hexanos para dar 0,8 mg de 16B en forma de un sólido blanco. HPLC: 99% a 2,437 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía TFA al 0,1%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 297,3 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 17 [5R-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)] y [5R-(5\alpha,8\alpha,8\alpha\beta)]-Tetrahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3 (2H,5H)-diona (17i y 17ii, respectivamente)

84

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Se disolvió éster etílico del ácido R-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (0,169 g, 1,0 mmol) en tolueno (10 ml) con tamices moleculares de 4 \ring{A} recién activados (0,200 g). A esto se le añadió una solución de isocianato de 4-nitro-1-naftilo (0,210 g, 1,0 mmol), preparada de forma análoga al procedimiento descrito en el Ejemplo 3 etapa A) en 5 ml de tolueno. Después de 15 h, la reacción se completó por LC, y se añadió DBU (0,224 ml, 1,5 mmol) y la reacción se calentó a 80ºC durante 1,5 h. Después de enfriar a ta, la reacción se filtró y después se vertió en HCl 1 N y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 30 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro y después se concentraron. La mezcla en bruto se determinó que era una relación 1:2 del Compuesto 17i y 17ii, respectivamente. La mezcla de reacción se separó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/acetona (acetona al 1%) para dar el Compuesto 17i: HPLC: 98% a 2,923 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 338,1 [M+H]^{+} y el Compuesto 17ii: HPLC: 96% a 2,753 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 338,1 [M+H]^{+}. Se determinó que ambos tenían un ee del 94% mediante análisis de HPLC quiral.

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Ejemplo 18 (6\alpha,9\alpha,9a\alpha)-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-6,9-metano-2H-pirido[1,2-d][1,2,4]triazina-1,4(3H,9aH)-diona (18D)

85

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A. 1,1-Dimetiletil éster del ácido 3-[[[3-trifluorometil)fenil]amino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (18A)

86

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Se disolvió el Compuesto intermedio 9B (964 mg, 4 mmol, 1 equiv., Ejemplo 9) en 20 ml de tetrahidrofurano y se añadió 1-metil-2-pirrolidinona (487 \mul, 4 mmol, 1 equiv.) seguido de cloroformiato de metilo (309 \mul, 4 mmol, 1 equiv.). La mezcla se agitó a ta durante 15 min. Después se añadió 3-(trifluorometil)anilina (49,9 \mul, 4 mmol, 1 equiv.) y la reacción se agitó a ta durante 72 h. La reacción se interrumpió mediante la adición de agua y ácido cítrico acuoso 0,1 M. La mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos combinados se secaron, se concentraron al vacío, y se purificaron por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con metanol al 0,3% en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 640 mg (41,6%) del Compuesto intermedio 18A.

B. 1,1-Dimetiletil éster del ácido 3-[[1-[3-(trifluorometil)fenil]hidrazino]carbonil]-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (18B)

87

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Se disolvió el Compuesto 18A (308 mg, 0,8 mmol, 1 equiv.) en 15 ml de tetrahidrofurano. Se añadió hidruro sódico (60% en aceite, 38 mg, 0,96 mmol, 1,2 equiv.) y la mezcla se agitó a ta durante 15 min. Después se añadió o-difenilfosfinilhidroxilamina (224 mg, 0,96 mmol, 1,2 equiv.) y la reacción se agitó a ta durante 1 h. El análisis LC indicó que el material de partida se había consumido. Se añadió agua y la reacción se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos combinados se secaron y se concentraron al vacío para proporcionar el Compuesto 18B en forma de un semi-sólido con rendimiento cuantitativo. El compuesto se usó sin purificación adicional. LC: T.R.= 3,39 min (tiempo de retención) (columna YMC Combiscreen ODS-A S5 eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante un gradiente de 4 minutos).

C. 1-[3-(Trifluorometil)-fenil]hidrazida del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (18C)

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88

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Se disolvió el Compuesto 18B (136 mg, 0,34 mmol, 1 equiv.) en 5 ml de CH_{2}Cl_{2}. Se añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y la mezcla se agitó a ta durante 1 h. El análisis LC mostró la completa conversión en el Compuesto 18C. El material bruto se concentró al vacío y se usó en la siguiente etapa.

D. (6\alpha,9\alpha,9\alphaa)-Tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-6,9-metano-2H-pirido[1,2-d][1,2,4]triazina-1,4(3H, 9aH)-diona (18D)

Se disolvió el Compuesto 18C en 10 ml de CH_{2}Cl_{2}, y se añadió base de Hünig (10 equiv.) para llevar el pH a un valor de 10. La mezcla se enfrió a 10ºC. Se disolvió trifosgeno (aprox. 1,5 equiv.) en CH_{2}Cl_{2} y se añadió gota a gota a la mezcla de reacción. La reacción se agitó a 0ºC y después se dejó en agitación a ta durante una noche. El análisis por LC indicó que el material de partida se había consumido. La mezcla se lavó con NH_{4}Cl acuoso saturado seguido de NaCl acuoso saturado. La capa de CH_{2}Cl_{2} se secó, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con metanol al 2% en CH_{2}Cl_{2}. El material se purificó adicionalmente por LC preparativa para proporcionar 15 mg (14%) del Compuesto 18D en forma de un sólido amarillo claro. HPLC: 100% a 2,523 min (tiempo de retención) (columna YMC Combiscreen ODS-A S5 eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante un gradiente de 4 minutos.) EM (IQPA): m/z 326,2 [M+H]^{+}

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Ejemplo 19 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-8,8a-Dihidro-2-(1H-indol-3-il)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (19Bi y 19Bii, respectivamente)

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89

A. 3-Isocianatoindol (19A)

90

A una solución de ácido indol-3-carboxílico (1 g, 6,20 mmol, 1 equiv.) en 30 ml de tetrahidrofurano se le añadió trietilamina (0,86 ml, 6,20 mmol, 1 equiv.) y difenilfosforil azida (1,3 ml, 6,20 mmol, 1 equiv.). La reacción se agitó a ta durante una noche. La mezcla se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 25% en hexanos para proporcionar un rendimiento cuantitativo de la azida intermedia. La azida se calentó a 100ºC en 60 ml de tolueno durante 5 h. La concentración al vacío produjo la conversión completa en el Compuesto 19A que se usó directamente en la siguiente etapa.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-8,8a-Dihidro-2-(1H-indol-3-il)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-di-ona (19Bi y 19Bii)

Al Compuesto 19A (6,20 mmol, 1 equiv.) en 50 ml de tolueno a ta en una atmósfera de Ar se le añadió una solución de éster etílico del ácido 2-azabiciclo [2.2.1]heptano-3-carboxílico (1,03 g, 6,20 mmol, 1 equiv.) en 10 ml de tolueno con tamices moleculares de 4 \ring{A}. El análisis por TLC después de varias horas indicó que el material de partida se había consumido. Se añadió DBU (0,93 ml, 6,20 mmol, 1 equiv.) y la reacción se calentó a 80ºC durante 3 h. La mezcla se enfrió, se filtró, y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetona al 50% en hexanos para proporcionar 120 mg (7%) del Compuesto 19Bi en forma de cristales castaños amarillentos. 495 mg más (29%) del material fueron una mezcla 4:1 de 19Bi y 19Bii, respectivamente. HPLC: 94% a 2,17 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos, que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (IQPA): m/z 279,8 [M+H]^{+}

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Ejemplo 20 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2-(Benzo[b]tiofeno-3-il)-8,8a-dihidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5)-diona (20B)

91

A. 3-Aminobenzotiofeno (20A)

92

A una solución de éster metílico del ácido 3-amino-benzo[b]tiofeno-2-carboxílico (1 g, 4,83 mmol, 1 equiv.) en 1-metil-2-pirrolidinona (8 ml) se le añadió piperazina (2,08 g, 24,13 mmol, 5 equiv.). La reacción se agitó a 130ºC durante una noche. Se añadió hielo, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron dos veces con agua, se secaron, y se concentraron al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 40% en hexanos para proporcionar 600 mg (83%) del Compuesto 20A en forma de un aceite amarillo.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2-(Benzo[b]tiofeno-3-il)-8,8a-dihidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (20B)

Se añadió el Compuesto 20A (480 mg, 3,22 mmol, 1 equiv.) a una mezcla de fosgeno (20% en tolueno, 6,38 g, 12,88 mmol, 4 equiv.) y NaHCO_{3} (2,7 g, 32,2 mmol, 10 equiv.) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml). La mezcla resultante se agitó a ta en una atmósfera de N_{2} durante 10 min, se filtró para retirar el NaHCO_{3} y se concentró al vacío sin calentamiento. Al isocianato resultante se le añadió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-3-carboxílico (599 mg, 3,54 mmol, 1,1 equiv.) en 25 ml de tolueno tamices moleculares de 4 \ring{A}. La reacción se agitó a ta durante una noche. Se añadió DBU (0,48 ml, 3,22 mmol, 1 equiv.) y la reacción se calentó a 76ºC durante 2 h. La mezcla se enfrió, se filtró a través de celite, y se vertió en una solución de NH_{4}Cl acuosa saturada. La mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con metanol al 0,6% en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 480 mg (50,4%) del Compuesto 20B en forma de un sólido amarillo claro. HPLC: 99% a 2,57 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos, que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 297,1 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 21 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-2-(1,2-Bencisoxazol-3-il)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (21Bi y 21Bii, respectivamente)

93

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A. Éster etílico del ácido endo/exo-2-[(1,2-bencisoxazol-3-ilamino)-2-azabiciclo[2.2.2]octano-3-carboxílico (21A)

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94

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Se añadió 1,2-benzoisoxazol-3-amina (134 mg, 1 mmol, 1 equiv.) a fosgeno (20% en tolueno, 0,5 ml, 1 mmol, 1 equiv.) en 5 ml de acetato de etilo a -5ºC. La reacción se dejó calentar a ta y después se calentó a reflujo durante 40 min. La mezcla se enfrió a ta y se añadió éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (422 mg, 2,5 mmol, 2,5 equiv.). La reacción se agitó a reflujo durante 2 h. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 148 mg (45,0%) del Compuesto 21A en forma de un sólido amarillo claro.

B. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha) y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-2-(1,2-Benzoisoxazol-3-il)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H, 5H)-diona (21Bi y 21Bii)

Se disolvió el Compuesto intermedio 21A (140 mg, 0,42 mmol, 1 equiv.) en tolueno con tamices moleculares de 4 \ring{A}. Se añadió DBU (65 mg, 0,42 mmol, 1 equiv.) y la reacción se agitó a 80ºC durante 1 h. La mezcla se inactivó con HCl acuoso al 5% y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos orgánicos se secaron, se concentraron al vacío, y se purificaron por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 16 mg (13,4%) del Compuesto 21Bi y 47 mg (39,5%) del Compuesto 21Bii. Compuesto 21Bi: HPLC: 93% a 2,367 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 284,12 [M+H]^{+}. Compuesto 21Bii: HPLC: 95% a 2,517 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm) EM (ES): m/z 284,13 [M+H]^{+}.

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Ejemplos 22 a 88

Los siguientes compuestos adicionales de la Tabla 2 se prepararon usando los procedimientos descritos en este documento por modificación de los procedimientos descritos en este documento fácilmente visibles para un especialista en la técnica. De los siguientes compuestos, aquellos que se prepararon de una forma enantioméricamente pura se indica en la caja de la estructura por la nomenclatura (R) o (S). En aquellos compuestos en los que no se indica fueron mezclas racémicas que pueden separarse fácilmente por un especialista en la técnica o prepararse de forma enantioméricamente pura por los procedimientos descritos en este documento.

TABLA 2

95

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105

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Ejemplo 89 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1S-exo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico y 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1S-endo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico

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106

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Este ejemplo ilustra un procedimiento para obtener un compuesto de fórmula IIa, compuesto que es útil como un intermedio de la preparación de compuestos de fórmula I (véase; por ejemplo, la Figura 2 de este documento).

A 1,1-Dimetiletil éster del ácido (2S-trans)-4-hidroxi-2-[[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]metil]-1-pirrolidinacarboxílico (89A)

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Se disolvió N-(terc-butoxicarbonil)-L-4-hidroxiprolina (10,0 g, 43,3 mmol) en THF y se enfrió a 0ºC. Después se añadió borano/THF (solución 1,0 M, 86,6 ml) durante un período de 15 min. Después, la reacción se calentó a 25ºC seguido de calentamiento a reflujo durante 16 h. El matraz de reacción después se retiró de la fuente de calor y se añadió lentamente metanol anhidro (35 ml). Después de enfriar a 25ºC, el disolvente se retiró al vacío y el intermedio de diol en bruto resultante se usó directamente. El diol en bruto (1,81 g, 8,34 mmol) se disolvió en cloruro de metileno (50 ml), se añadió 2,6-lutidina (1,46 ml, 12,51 mmol) y la mezcla se enfrió a -78ºC. Después se añadió dimetilsililtrifluorometanosulfonato de terc-butilo (1,92 ml, 8,34 mmol). Después de 2 h, la mezcla se vertió en HCl 1 N (100 ml), se extrajo con cloruro de metileno (2 x 100 ml) y los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El alcohol en bruto resultante se purificó por cromatografía en columna sobre SiO_{2} eluyendo con acetona en cloroformo (acetona al 0-5-10%) para dar 1,011 g (37% para las 2 etapas) del Compuesto 89A en forma de un aceite transparente.

B. 1,1-Dimetiletil éster del ácido (2S-trans)-2-hidroximetil-4-[[(4-metilfenil)sulfonil]oxi]-1-pirrolidinacarboxílico (89B)

108

Se disolvió el Compuesto intermedio 89A (3,41 g, 10,3 mmol) en piridina anhidra (30,0 ml) y se enfrió a 0ºC. Después se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (5,89 g, 30,9 mmol) en porciones durante un período de 10 minutos. Después, el matraz se puso en frigorífico a 4ºC durante 48 h. La solución resultante se vertió en HCl 1 N (300 ml), se extrajo con cloruro de metileno (3 x 200 ml) y los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El intermedio de tosilato en bruto se disolvió en THF (50 ml), a lo que después se añadió H_{2}O (0,5 ml) seguido de pTSA-H_{2}O (1,03 mmol). Una vez que la reacción se había completado según se determinó por el análisis por TLC, la mezcla se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado (150 ml) y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico. El alcohol en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-5-10%) para dar 2,71 g (71% para las 2 etapas) del Compuesto intermedio 89B en forma de un aceite transparente.

C. 1,1-Dimetiletil éster del ácido (2S-trans)-2-[ciano[(fenilmetil)amino]metil]-4-[[(4-metilfenil)-sulfonil]oxi]-1-pirrolidinacarboxílico (89C)

109

A una solución de cloruro de oxalino (solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 2,82 ml) en CH_{2}Cl_{2} (40 ml) a -78ºC se le añadió dimetilsulfóxido anhidro (0,462 ml, 6,51 mmol). La mezcla se dejó en reposo durante 15 min, después de lo cual se añadió lentamente una solución del Compuesto 89B (1,61 g, 4,34 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml). Después de 30 min más, se añadió trietilamina (1,81 ml, 13,02 mmol) y la reacción se calentó lentamente a 0ºC. La reacción después se interrumpió con H_{2}O (25 ml) y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (100 ml). Después, la mezcla se lavó secuencialmente con HCl 1 N (1 x 100 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (50 ml), y agua (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro y los componentes orgánicos volátiles se retiraron al vacío. El aldehído intermedio en bruto (1,60 g, 4,34 mmol) se disolvió en THF (25 ml) y se añadió cianofosfonato de dietilo (90%, 0,95 ml, 5,64 mmol) seguido de bencilamina (1,23 ml, 11,3 mmol). Después de 2 h, la reacción se completó, según se observó por TLC y, los extractos orgánicos volátiles se retiraron al vacío. La mezcla de reacción en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-2-3%) para dar 1,48 g (70%) del Compuesto intermedio 89C en forma de un sólido blanco. Se determinó que el Compuesto 89C era una mezcla \sim1:1 de diastereómeros por espectroscopía de RMN.

D. 1,1-Dimetiletil éster del ácido (1S-endo)-6-ciano-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (89Di); 1,1-Dimetiletil éster del ácido (1S-exo)-6-ciano-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (89Dii)

110

Se disolvió el Compuesto intermedio 89C (1,48 g, 3,05 mmol) en dicloroetano (25 ml) y se añadió diisopropil etilamina (1,45 ml). La mezcla se calentó a 100ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 18 h. Los extractos volátiles después se retiraron al vacío y el material en bruto resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-2-3%), para producir una mezcla del Compuesto intermedio 89Di (0,591 g, 62%) y del Compuesto intermedio 89Dii (0,370 g, 38%) en forma de aceites transparentes. Las asignaciones estructurales para los Compuestos 89Di y 89Dii se hicieron después de experimentos de RMN NOE, COESY y DEPT.

E. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1S-endo)-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (89E)

111

Se disolvió el Compuesto intermedio 89Di (0,400 g, 1,28 mmol) en NaOMe (0,5 M, 12,8 ml) y se calentó a 60ºC durante 5 h. La reacción se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente HCl 3 N (4,0 ml). Después de 2 h a 0ºC la reacción se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado (50 ml). La mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El éster en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con cloroformo/acetona (acetona al 0-2-4%) para dar 0,320 g (0,92 mmol, 72%) del Compuesto intermedio 89E en forma de un aceite transparente.

F. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1S-exo)-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (89F)

112

Se disolvió el Compuesto intermedio 89Dii (0,400 g, 1,28 mmol) en NaOMe (0,5 M, 12,8 ml) y se calentó a 60ºC durante 5 h. La reacción se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente HCl 3 N (4,0 ml). Después de 2 h a 0ºC, la reacción se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado (50 ml). La mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El éster en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con cloroformo/acetona (acetona al 0-2-4%) para dar 0,290 g (0,85 mmol, 66%) del Compuesto intermedio 89F en forma de un aceite transparente.

G. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1S-endo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (89G)

113

Se disolvió el Compuesto intermedio 89E (0,280 g, 0,81 mmol) EtOH absoluto (10,0 ml) y se añadió Pd/C (Pd al 10%, 0,080 g). Se introdujo una atmósfera de H_{2} mediante un globo y la reacción se agitó a 25ºC durante 20 h. El Pd se retiró por filtración a través de celite seguido de aclarado con EtOAc. Los volátiles se retiraron al vacío para dar el Compuesto 89G (0,205 g, 99%) en forma de un aceite amarillo viscoso. El Compuesto 89G se usó directamente sin purificación. MS(ES) = m/z 257,18 [M+H]^{+}. TR de HPLC = 1,223 min (95%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O + TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm).

H. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1S-exo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (89H)

114

Se disolvió el Compuesto intermedio 89F (0,310 g, 0,89 mmol) EtOH absoluto (10,0 ml) y se añadió Pd/C (Pd al 10%, 0,080 g). Se introdujo una atmósfera de H_{2} mediante un globo y la reacción se agitó a 25ºC durante 20 h. El Pd se retiró por filtración a través de celite, seguido de aclarado con EtOAc. Los volátiles se retiraron al vacío para el Compuesto 89H (0,210 g, 92%) en forma de un aceite amarillo viscoso. El Compuesto 89H se usó directamente sin purificación. MS(ES) = m/z 257,16 [M+H]^{+} TR de HPLC = 1,293 min (90%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm).

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Ejemplo 90 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[4-ciano-3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (90i) 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-[4-ciano-3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (90ii)

115

A una solución de 4-isocianato-2-(trifluorometil)-benzonitrilo (1,0 mmol) en tolueno (4 ml) con tamices moleculares de 4 \ring{A} activados (0,300 g) se le añadió el Compuesto 89G (0,220 g, 0,856 mmol) en tolueno (6 ml). Después de 10 h a 25ºC, se añadió DBU (0,166 ml, 1,11 mmol) y la reacción se calentó a 81ºC durante 2 h. Después, la reacción se enfrió a 25ºC y se vertió en HCl 1 N (50 ml). Después, la solución se extrajo con cloruro de metileno (3 x 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-2-4-8%) para dar el Compuesto 90i (0,155 g, 42%) EM (ES): m/z 437,09 [M+H]^{+}. TR de HPLC = 3,280 min (100%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O, + TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm) y el Compuesto 90ii (0,061 g, 16%) EM (ES): m/z 437,09 [M+H]^{+}. TR de HPLC = 3,133 min (100%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm); ambos en forma de espumas blancas.

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Ejemplo 91 5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-4-(Hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2(3H)-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (91)

116

Se disolvió el Compuesto 90i (0,115 g, 0,264 mmol) en cloruro de metileno anhidro (3 ml) y se añadió TFA anhidro (1,0 ml) a 25ºC. Después de 1 h, la reacción se concentró al vacío y el residuo resultante se disolvió en cloruro de metileno y se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado. Esta solución después se extrajo con cloruro de metileno (3 x 10 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. Esto dio 0,089 g (97%) del Compuesto libre 91 en forma de un sólido amarillo. EM (ES): m/z 359,09 [M+Na]^{+}. TR de HPLC = 1,477 min (100%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm).

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Ejemplo 92 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1R-endo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (92H) y 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1R-exo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (92I)

117

Este ejemplo ilustra un procedimiento preferido para obtener un compuesto de fórmula IIa, compuesto que es útil como un intermedio en la preparación de compuestos de fórmula I (véase, por ejemplo, la Figura 2 mostrada en este documento).

A. 1-(1,1-Dimetiletil) 2-etil éster del ácido (2R-cis)-4-hidroxi-1,2-pirrolidinadicarboxílico (92A)

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118

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Se suspendió cis-4-hidroxi-D-prolina (10,0 g, 131,1 mmol) en EtOH absoluto (100 ml) y se burbujeó HCl anhidro (g) a través de la reacción hasta que se consiguió una solución homogénea. Ésta se dejó a 25ºC durante 1 h y después los extractos orgánicos volátiles se retiraron al vacío. La sal de HCl resultante se trituró con éter dietílico y se filtró para dar el éster etílico en bruto en forma de un polvo blanco. La sal de éster etílico se usó directamente en la siguiente reacción.

La sal (\sim12 g) se suspendió en acetona y se enfrió a 0ºC. Después se añadió Na_{2}CO_{3} acuoso al 10% (6,0 ml) seguido de BOC_{2}O (1,37 g, 6,29 mmol) y después la reacción se calentó lentamente a 25ºC. Después de 12 h, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 100 ml). Después, los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para dar el Compuesto 92A en bruto en forma de un polvo blanco. Este material se usó sin purificación adicional.

B. 1-(1,1-Dimetiletil) 2-etil éster del ácido (2R-trans)-4-[[(4-metilfenil)sulfonil]oxi]-1,2-pirrolidina-dicarboxílico (92B)

119

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Se disolvió el Compuesto 92A en bruto (1,41 g, 5,44 mmol) en THF (50 ml) y se añadió Ph_{3}P (1,86 g, 70,8 mmol). La mezcla se enfrió a 0ºC y se añadió DEAD (1,11 ml, 70,8 mmol). Después de 15 min, se añadió paratoluenosulfonato de metilo (1,32 g, 70,8 mmol) y la solución se calentó lentamente a 25ºC. Después de 14 h, la reacción se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice eluyendo con acetona en cloroformo (acetona al 0-2-3%) para dar 0,845 g del compuesto deseado 92B en forma de un aceite amarillo. TR de HPLC = 3,373 min (95%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm). Este material se usó sin purificación adicional.

C. 1,1-Dimetil éster del ácido (2R-trans)-2-(hidroximetil)-4-[[(4-metilfenil)sulfonil]oxi-1-pirrolidinacarboxílico (92C)

120

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Se disolvió el Compuesto en bruto 92B (5,50 g, 13,32 mmol) en THF (150 ml) y se enfrió a 0ºC. Después se añadió lentamente LiBH_{4} (2,0 M en THF, 16,7 ml, 33,3 mmol) y la reacción se dejó calentar a 25ºC lentamente. Después de 12 h, la mezcla se enfrió a 0ºC y la reacción se interrumpió con agua (10 ml) y después con AcOH (2,0 ml). Después de 15 min, la solución se vertió en NaHCO_{3} saturado y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. Esto dio el compuesto 92C en bruto (3,91 g) en forma de un aceite amarillo, que se usó sin purificación adicional. TR de HPLC = 3,043 min (100%) (columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm).

D. 1,1-Dimetiletil éster del ácido (2R-trans)-2-[ciano[(fenilmetil)amino]metil]-4-[[(4-metilfenil)-sulfonil]oxi]-1-pirrolidinacarboxílico (92D)

121

A una solución de oxalilo (solución 2,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 2,82 ml) en CH_{2}Cl_{2} (40 ml) a -78ºC se le añadió dimetilsulfóxido anhidro (0,462 ml, 6,51 mmol). La mezcla se dejó en reposo durante 15 min, después de lo cual se añadió lentamente una solución del compuesto 92C (1,61 g, 4,34 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml). Después de 30 min más, se añadió trietilamina (1,81 ml, 13,02 mmol) y la reacción se calentó lentamente a 0ºC. Después, la reacción se interrumpió con H_{2}O (25 ml) y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (100 ml). Después, la mezcla se lavó secuencialmente con HCl 1 N (1 x 100 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (50 ml) y agua (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro y los extractos orgánicos volátiles se retiraron al vacío. El aldehído intermedio en bruto (1,60 g, 4,34 mmol) se disolvió en THF (25 ml) y se añadió cianofosfonato de dietilo (90%, 0,95 ml, 5,64 mmol) seguido de bencilamina (1,23 ml, 11,3 mmol). Después de 2 h, la reacción se completó, según se observó por el análisis de TLC y los extractos orgánicos volátiles se retiraron al vacío. La mezcla de reacción en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-2-3%) para dar 1,48 g (70%) del Compuesto intermedio 92D en forma de un sólido blanco. Se determinó que el Compuesto 92D era una mezcla \sim1:1 mezcla de diastereómeros por espectroscopía de RMN.

E. 1,1-Dimetiletil éster del ácido (1R-endo)-6-ciano-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (92Ei); 1,1-Dimetiletil éster del ácido (1R-exo)-6-ciano-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (92Eii)

122

Se disolvió el compuesto intermedio 92D (1,48 g, 3,05 mmol) en dicloroetano (25 ml) y se añadió diisopropil etilamina (1,45 ml). La mezcla se calentó a 100ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 18 h. Después, los componentes volátiles se retiraron al vacío y el material en bruto resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-2-3%), para producir una mezcla del compuesto intermedio 92Ei (0,591 g, 62%) y el compuesto intermedio 92Eii (0,370 g, 38%) en forma de aceites transparentes. Las asignaciones estructurales para los Compuestos 92Ei y 92Eii se realizaron después de experimentos de RMN NOE, COESY y DEPT.

F. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1R-endo)-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (92F)

123

Se disolvió el Compuesto intermedio 92Ei (0,400 g, 1,28 mmol) en NaOMe (0,5 M, 12,8 ml) y se calentó a 60ºC durante 5 h. La reacción se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente HCl 3 N (4,0 ml). Después de 2 h a 0ºC, la reacción se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado (50 ml). La mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El éster en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con cloroformo/acetona (acetona al 0-2-4%) para dar 0,320 g (0,92 mmol, 72%) del compuesto intermedio 92F en forma de un aceite transparente.

G. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1R-exo)-5-(fenilmetil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (92G)

124

Se disolvió el compuesto intermedio 92Eii (0,400 g, 1,28 mmol) en NaOMe (0,5 M, 12,8 ml) y se calentó a 60ºC durante 5 h. La reacción se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente HCl 3 N (4,0 ml). Después de 2 h a 0ºC la reacción se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado (50 ml). La mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El éster en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con cloroformo/acetona (acetona al 0-2-4%) para dar 0,290 g (0,85 mmol, 66%) del compuesto intermedio 92G en forma de un aceite transparente.

H. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1R-endo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (92H)

125

Se disolvió el compuesto intermedio 92F (0,280 g, 0,81 mmol) en EtOH absoluto (10,0 ml) y se añadió Pd/C (Pd al 10%, 0,080 g). Se introdujo una atmósfera de H_{2} mediante un globo y la reacción se agitó a 25ºC durante 20 h. El Pd se retiró por filtración a través de celite seguido de aclarado con EtOAc. Los extractos volátiles se retiraron al vacío para dar el compuesto 92H (0,205 g, 99%) en forma de un aceite amarillo viscoso. El Compuesto 92H se usó directamente sin purificación adicional. MS(ES) = m/z 257,18 [M+H]^{+}. TR de HPLC = 1,223 min (95%) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm).

I. 2-(1,1-Dimetiletil) 6-metil éster del ácido (1R-exo)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano-2,6-dicarboxílico (92I)

126

Se disolvió el compuesto 92G (0,310 g, 0,89 mmol) en EtOH absoluto (10,0 ml) y se añadió Pd/C (Pd al 10%, 0,080 g). Se introdujo una atmósfera de H_{2} mediante un globo y la reacción se agitó a 25ºC durante 20 h. El Pd se retiró por filtración a través de celite, seguido de aclarado con EtOAc. Los extractos volátiles se retiraron al vacío para dar el compuesto 92I (0,210 g, 92%) en forma de un aceite amarillo viscoso. El Compuesto 921 puede usarse directamente sin purificación adicional. MS(ES) = m/z 257,16 [M+H]^{+} TR de HPLC = 1,293 min (90%) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm).

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Ejemplo 93 [5R-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-4-[Octahidro-7-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2-il]-2- (trifluorometil)benzonitrilo (93i) [5R-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-4-[Octahidro-7-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2-il]-2- (trifluorometil)benzonitrilo (93ii)

127

A una solución de 4-isocianato-2-(trifluorometil)-benzonitrilo (1,0 mmol) en tolueno (4 ml) con tamices moleculares de 4 \ring{A} activados (0,300 g) se le añadió el Compuesto 92H o 92I (0,220 g, 0,856 mmol) (los compuestos se epimerizaron para forma el mismo producto) en tolueno (6 ml). Después de 10 h a 25ºC, se añadió DBU (0,166 ml, 1,11 mmol) y la reacción se calentó a 81ºC durante 2 h. Después, la reacción se enfrió a 25ºC y se vertió en HCl 1 N (50 ml). Después, la solución se extrajo con cloruro de metileno (3 x 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El material bruto resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con acetona/cloroformo (acetona al 0-2-4-8%) para dar el Compuesto 93i (0,155 g, 42%) EM (ES): m/z 437,09 [M+H]^{+}. TR de HPLC = 3,280 min (100%) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O, + TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm) y el Compuesto 93ii (0,061 g, 16%) EM (ES): m/z 437,09 [M+H]^{+}. TR de HPLC = 3,133 min (100%) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm; gradiente de MeOH al 10-90%/H_{2}O+ TFA al 0,1%; 4 ml/min, detección a 220 nm); ambos en forma de espumas blancas.

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Ejemplo 94 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]hexahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (94)

128

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Se añadió el Compuesto 89G (0,220 g, 0,856 mmol) a una suspensión de tamices moleculares de 4 \ring{A} recién activados (0,300 g) en tolueno seco (10,0 ml). A esta mezcla se le añadió 4-nitronaftal-1-isocianato (0,214 g, 1,0 mmol). Después de agitar a 25ºC durante 14 h, se añadió DBU (0,166 ml, 1,11 mmol) y la reacción se calentó a 80ºC durante 2 h. Después de 2 h, la reacción se enfrió a 25ºC y después se vertió en HCl 1 N (50 ml). Esta solución se extrajo con cloruro de metileno (3 x 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice eluyendo con acetona al 0-2-6% en cloroformo para dar 0,211 g del compuesto 94 en forma de una espuma amarilla. HPLC: 95% a 3,130 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). MS(ES): m/z 439,19 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 95 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-Tetrahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-5,8 metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (95)

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129

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Se disolvió el compuesto 94 (0,160 g, 0,37 mmol) en cloruro de metileno (5,0 ml) y se añadió TFA (1,5 ml) a 25ºC. Después de 1,5 h, la reacción se concentró al vacío y se disolvió de nuevo en cloruro de metileno. Esta solución se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno (3 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados después se secaron sobre sulfato sódico anhidro. La concentración al vacío dio 0,115 g del compuesto 95 en forma de un sólido amarillo. HPLC: 93% a 1,747 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 369,07 [M+MeOH]^{+}.

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Ejemplo 96 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-7-[(4-Fluorofenil)sulfonil]tetrahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-5,8-metanoimidaz o[1,5-a]pirazina- 1,3(2H,5H)-diona (96)

130

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Se disolvió el compuesto 94 (0,025 g, 0,074 mmol) en piridina (0,5 ml) y después se añadió cloruro de 4-fluorofenilsulfonilo (0,028 g, 0,148 mmol). Después de 16 h a 25ºC, la reacción se concentró al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice eluyendo con acetona al 5% en cloroformo para dar 0,029 g del compuesto 96 en forma de un sólido amarillo. HPLC: 99% a 3,107 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 497,2 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 97 (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2-(7-Fluoro-3-benzofuranil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona y (5\alpha,8\alpha, 8a\beta)-2-(7-Fluoro-3-benzofuranil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (97Ei y 97Eii, respectivamente)

131

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A. Ácido 7-fluoro-2-benzofuranocarboxílico (97A)

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132

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Los reactivos 3-fluorosalicilaldehído (1,000 g, 7,14 mmol) y bromomalonato de etilo (1,900 g, 7,29 mmol) se hicieron reaccionar de acuerdo con el procedimiento informado por Tanaka (J. Am. Chem. Soc. 1951, 73, 872) para producir 562 mg (44%) del compuesto 97A.

B. 3-Bromo-7-fluorobenzofurano (97B)

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133

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El compuesto 97A (562 mg, 3,12 mmol) se sometió a descarboxilación en las condiciones descritas por Tanaka (J. Am. Chem. Soc. 1951, 73, 872), seguido de bromación y desbromación de acuerdo con los procedimientos descritos por Mochida et al. (Documento EP 355827 A2) para producir 186 mg (28%) del compuesto 97B.

C. Ácido 7-fluoro-3-benzofuranocarboxílico (97C)

134

El compuesto 97B (186 mg, 0,87 mmol) se sometió a litiación seguido de carboxilación, de acuerdo con los procedimientos descritos por Cugnon de Sévricourt et. al., Bull. Soc. Chim. 144 (1977), para producir 36 mg (23%) del compuesto 97C.

D. Azida del ácido 7-fluoro-3-benzofuranocarboxílico (97D)

135

A una solución del compuesto 97C (36 mg, 0,20 mmol) en THF (2 ml) se le añadió, mediante una jeringa a temperatura ambiente, Et_{3}N (33 \mul, 0,24 mmol) y DPPA (52 \mul, 0,24 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 2 h, momento en el que la reacción se interrumpió por la adición de H_{2}O (2 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con Et_{2}O (1 x 5 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a presión reducida para dar un residuo incoloro que se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-5% en hexanos) produciendo 36 mg (88%) del compuesto 97D.

E. (5\alpha,8\alpha,8a\alpha)-2-(7-Fluoro-3-benzofuranil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona y (5\alpha,8\alpha,8a\beta)-2-(7-Fluoro-3-benzofuranil)tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridina-1,3(2H,5H)-diona (97Ei y 97Eii, respectivamente)

Una solución del compuesto 97D (36 mg, 0,18 mmol) en tolueno (1,5 ml) se calentó a 95ºC durante 2 h. La reacción se enfrió antes de añadir 50 mg de tamices moleculares de 4 \ring{A} recién activados (en polvo) y una solución de éster etílico del ácido 2-azabiciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico (32 mg, 0,19 mmol) en tolueno (1,5 ml). La mezcla resultante se agitó durante una noche, se trató con DBU (30 \mul, 0,20 mmol) y se calentó a 85ºC durante 2 h. Después de enfriar, el material se filtró a través de Celite eluyendo con CH_{2}Cl_{2} (50 ml), se lavó con una solución 1 N de HCl (2 x 25 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, hexanos del 20 al 5% en CH_{2}Cl_{2}) para dar 23 mg (44%) del compuesto 97Ei junto con 19 mg (36%) del compuesto 97Eii en forma de sólidos blancos. Compuesto 97Ei: HPLC: 100% a 2,93 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 301 [M+H]^{+}. Compuesto 97Eii: HPLC: 100% a 3,00 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 301 [M+H]^{+}.

También se prepararon los correspondientes compuestos en los que el grupo 7-fluoro-3-benzofuranilo se reemplaza con cada uno de los siguientes grupos: 2-metilo,4,5,6,7-tetrafluoro-3-benzofuranilo, 3-benzofuranilo, 2-benzofuranilo, y 2-metil-3-benzofuranilo.

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Ejemplo 98 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[4-ciano-3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-8a-metil-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (98)

136

Se añadió el compuesto 90i (0,100 g, 0,229 mmol) a LDA recién preparado (0,048 ml de diisopropil amina, 0,186 ml, BuLi 1,6 M) en THF (3,0 ml) a -78ºC. Después de 30 min, se añadió yoduro de metilo (0,029 ml, 0,458 mmol) y la reacción se calentó lentamente a -20ºC durante 1 h y después se interrumpió con cloruro de amonio acuoso saturado. La mezcla después se extrajo con cloruro de metileno (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío, para dar 0,077 g del compuesto 98 en bruto que se usó sin purificación adicional. HPLC: 93% a 3,243 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 473,12 [M+NaH]^{+}.

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Ejemplo 99 [5S-(5\alpha, 8\alpha, 8a\alpha)]-4-(Hexahidro-1,3-dioxo-8a-metil-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazin-2(3H)-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (99)

137

El compuesto 98 (0,070 g, 0,156 mmol) se disolvió en cloruro de metileno (2,0 ml) y se añadió TFA (0,75 ml) a 25ºC. Después de 30 min, la reacción se interrumpió con NaHCO_{3} acuoso saturado y después se extrajo con cloruro de metileno (3 x 30 ml). Después, los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El material bruto se purificó por TLC preparativa eluyendo con acetona al 25% en cloroformo para dar 0,031 g del compuesto 99 en forma de un sólido blanco. HPLC: 86% a 1,817 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 351,15 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 100 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-7-Benzoil-2-[4-ciano-3-(trifluorometil)fenil]tetrahidro-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3 (2H,5H)-diona (100)

138

El compuesto 99 (0,023 g, 0,066 mmol) se disolvió en cloruro de metileno (2,0 ml) y después se añadieron TEA (0,018 ml, 0,132 mmol) y 4-DMAP (cat.) seguido de cloruro de benzoílo (0,011 ml, 0,099 mmol). Después de 3 h, la reacción se concentró al vacío y después se purificó por TLC preparativa sobre sílice eluyendo con acetona al 7% en cloroformo para dar 0,021 g del compuesto 100 en forma de una espuma blanca. HPLC: 100% a 2,927 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 455,10 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 101 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-7-(4-Fluorobenzoil)tetrahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H, 5H)-diona (101)

139

El compuesto 95 (0,077 g, 0,228 mmol) se disolvió en cloruro de metileno (2,0 ml) y se añadieron TEA (0,127 ml, 0,912 mmol) y 4-DMAP (0,001 g). La reacción se enfrió a 0ºC y se añadió cloruro de 4-fluorobenzoílo (0,040 ml, 0,342 mmol). Después, la reacción se calentó lentamente a 25ºC. Después de 3 h, la reacción se diluyó con cloruro de metileno (50 ml) y después se lavó sucesivamente con HCl 1 N y NaHCO_{3} acuoso saturado y después se secó sobre sulfato sódico anhidro. El material en bruto se purificó por TLC preparativa sobre gel de sílice eluyendo con acetona al 5% en cloroformo para dar 0,022 g del compuesto 101 en forma de un sólido amarillo. HPLC: 100% a 2,960 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 461,07 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 102 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-(4-Ciano-1-naftalenil)tetrahidro-7-(5-isoxazolilcarbonil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (102A), {}\hskip0.3cm 4-Fluorofenil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8\alpha)]-2-(4-ciano-1-naftalenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (102B), {}\hskip0.3cm [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-(4-Ciano-1-naftalenil)tetrahidro-7-(1-metil-1H-imidazol-4-il)sulfonil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (102C) y [5S-(5\alpha, 8\alpha,8a\alpha)1-2-(4-Ciano-1-naftalenil)-N-(4-fluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)- carboxamida (102D) Síntesis de Bibliotecas de Fase en Solución

El procedimiento siguiente es un procedimiento general para la síntesis de compuestos de fórmula I en un formato de librería de fase de solución. A continuación se proporciona una descripción más detallada de compuestos individuales obtenidos mediante este procedimiento combinatorio.

Una serie de materiales de partida de amina libre, análogos a la estructura de [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-Tetrahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-5,8 metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (0,05 mmol, preparado como se describe en el Ejemplo 95) se disolvió en diclorometano (1,5 ml) en un tubo de poliestireno con una frita gruesa. Después se añadió N,N-(Diisopropil)aminometil poliestireno (3,49 mmol/g, 60 mg) a cada recipiente de reacción seguido de la adición del cloruro de ácido deseado, isocianato, cloroformiato o cloruro de sulfonilo (0,10 mmol) en 0,5 ml de dicloroetano mediante un sintetizador automático. Los recipientes de reacción se agitaron a 25ºC durante 24 h y después se añadió a cada recipiente de reacción Tris-(2-Aminoetil)amina Poliestireno HL (malla de 200-400, 3,3 mmol/g, 75 mg) y los recipientes se agitaron de nuevo durante 18 h a 25ºC. El líquido de cada tubo se secó en tubos de STR de 2,5 ml y la resina se aclaró con diclorometano (3 x 0,25 ml). Los tubos pretarados después se concentraron y se analizaron por HPLC analítica y LC-MS. HPLC: (Columna Phenomenex-Prime de 5 \mu C-18 de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía TFA al 0,1%, 4 ml/min, controlando a 220 nm).

A. [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)1-2-(4-Ciano-1-naftalenil)tetrahidro-7-(5-isoxazolilcarbonil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (102A)

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140

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Se disolvió [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-4-(Hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2(3H-il)-1-naftalenocarbonitrilo (0,030 g, 0,094 mmol) en diclorometano (2,0 ml) en un tubo de poliestireno con una frita gruesa. Después se añadió N,N-(Diisopropil)aminometil poliestireno (3,49 mmol/g, 65 mg) a cada recipiente de reacción seguido de la adición de cloruro de ácido isoxazólico (0,025 g, 0,19 mmol). El tubo se agitó a 25ºC durante 24 h y después se añadió Tris-(2-Aminoetil)amina Poliestireno HL (malla de 200-400, 3,3 mmol/g, 75 mg) a cada recipiente de reacción y se agitó de nuevo durante 18 h a 25ºC. El líquido se secó en el tubo de STR de 2,5 ml pretarado y la resina se aclaró con diclorometano (3 x 0,25 ml). La concentración al vacío dio el compuesto 102A en bruto (0,058 g) en forma de un sólido amarillo. No fue necesaria purificación. HPLC: 100% a 2,237 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 414,11 [M+H]^{+}.

B. 4-Fluorofenil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-(4-ciano-1-naftalenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (102B)

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Se disolvió [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-4-(Hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2(3H)-il)-1-naftalenocarbonitrilo (0,030 g, 0,094 mmol) en diclorometano (2,0 ml) en un tubo de poliestireno con una frita gruesa. Después se añadió N,N-(Diisopropil)aminometil poliestireno (3,49 mmol/g, 65 mg) a cada recipiente de reacción seguido de la adición de cloroformiato de 4-fluorofenilo (0,033 g, 0,19 mmol). El tubo se agitó a 25ºC durante 24 h y después se añadió Tris-(2-Aminoetil)amina Poliestireno HL (malla de 200-400, 3,3 mmol/g, 75 mg) al recipiente de reacción y se agitó de nuevo durante 18 h a 25ºC. El líquido se seco en un tubo STR de 2,5 ml pretarado y la resina se aclaró con diclorometano (3 x 0,25 ml). La concentración al vacío dio el compuesto 102B en bruto (0,053 g) en forma de un sólido amarillo. No fue necesaria purificación. HPLC: 93% a 2,987 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 457,07 [M+H]^{+}.

C. [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-(4-Ciano-1-naftalenil)tetrahidro-7-[(1-metil-1H-imidazol-4-il)sulfonil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (102C)

142

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Se disolvió [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-4-(Hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2(3H-il)-1-naftalenocarbonitrilo (0,030 g, 0,094 mmol) en diclorometano (2,0 ml) en un tubo de poliestireno con una frita gruesa. Después se añadió N,N-(Diisopropil)aminometil poliestireno (3,49 mmol/g, 65 mg) a cada recipiente de reacción seguido de la adición de cloruro de imidazolsulfonilo (0,034 g, 0,19 mmol). El tubo se agitó a 25ºC durante 24 h y después se añadió Tris-(2-Aminoetil)amina Poliestireno HL (malla de 200-400, 3,3 mmol/g, 75 mg) al recipiente de reacción y se agitó de nuevo durante 18 h a 25ºC. El líquido se secó en un tubo STR de 2,5 ml pretarado y la resina se aclaró con diclorometano (3 x 0,25 ml). La concentración al vacío dio el compuesto 102C en bruto (0,043 g) en forma de un sólido amarillo. No fue necesaria purificación. HPLC: 70% a 1,603 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 463,07 [M+H]^{+}.

D. [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-(4-Ciano-1-naftalenil)-N-(4-fluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxamida (102D)

143

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Se disolvió [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-4-(Hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazin-2(3H)-il)-1-naftalenocarbonitrilo (0,030 g, 0,094 mmol) en diclorometano (2,0 ml) en un tubo de poliestireno con una frita gruesa. Después se añadió N,N-(Diisopropil)aminometil poliestireno (3,49 mmol/g, 65 mg) a cada recipiente de reacción seguido de la adición de isocianato de 4-fluorofenilo (0,026 g, 0,19 mmol). El tubo se agitó a 25ºC durante 24 h y después se añadió Tris-(2-Aminoetil)amina Poliestireno HL (malla de 200-400, 3,3 mmol/g, 75 mg) al recipiente de reacción y se agitó de nuevo durante 18 h a 25ºC. El líquido se secó en tubo STR de 2,5 ml pretarado y la resina se aclaró con diclorometano (3 x 0,25 ml). La concentración al vacío dio el compuesto 102D en bruto (0,058 g) en forma de un sólido amarillo. No fue necesaria purificación. HPLC: 100%, a 2,890 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 456,4 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 103 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Tetrahidro-2-(4-nitro-1-naftalenil)-7-(fenilmetil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5E)- diona (103)

144

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Se disolvió la sal TFA del compuesto 95 (0,010 g, 0,022 mmol) en DMF (0,5 ml) seguido de la adición de K_{2}CO_{9} (0,009 g, 0,088 mmol) y bromuro de bencilo (0,005 ml, 0,044 mmol). Después de 1 h, la DMF se retiró al vacío y el producto en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice eluyendo con acetona al 5% en cloroformo. Esto dio 0,008 g del compuesto 103 en forma de un sólido amarillo. La RMN de protones mostró un sistema de anillos de hidantoína intacto. HPLC: 100% a 2,280 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm), EM (ES): m/z 461,12 [M+H+MeOH]^{+}.

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Ejemplos 104 a 199

Se prepararon compuestos adicionales de la presente invención por procedimientos análogos a los descritos anteriormente. Los compuestos de los Ejemplos 104 a 199 tienen la siguiente estructura (L es un enlace):

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145

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En la que G, X, el nombre del compuesto, el tiempo de retención, la masa molecular, y el procedimiento empleado, son como se muestran en la Tabla 3. Las técnicas cromatográficas usadas para determinar los tiempos de retención de los compuestos de la Tabla 3 son como se muestran a continuación: CLEM = Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con MeOH al 10-90%/H_{2}O durante 4 minutos que contenía TFA al 0,1%; 4 ml/min, controlando a 220 nm. CLEM* = Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con MeOH al 10-90%/H_{2}O durante 2 minutos que contenía TFA al 0,1%; 4 ml/min, controlando a 220 nm. LC = Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con MeOH al 10-90%/H_{2}O durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm. La masa molecular de los compuestos presentados en la Tabla 3 se determinó por EM (ES) por la fórmula m/z.

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Ejemplos 200 a 217

Se prepararon compuestos adicionales de la presente invención por procedimientos análogos a los descritos anteriormente. Los compuestos de los Ejemplos 200 a 217 tienen la siguiente estructura (L es un enlace):

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179

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En la que G, X, el nombre del compuesto, el tiempo de retención, la masa molecular, y el procedimiento empleado, son como se muestran en la Tabla 4. Las técnicas cromatográficas usadas para determinar los tiempos de retención de los compuestos de la Tabla 4 son como se muestran a continuación: CLEM = Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con MeOH al 10-90%/H_{2}O durante 4 minutos que contenía TFA al 0,1%; 4 ml/min, controlando a 220 nm. CLEM* = Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con MeOH al 10-90%/H_{2}O durante 2 minutos que contenía TFA al 0,1%; 4 ml/min, controlando a 220 nm. LC = Columna YMC S5 ODS de 4,6 x 50 mm eluyendo con MeOH al 10-90%/H_{2}O durante 4 minutos que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm. La masa molecular de los compuestos presentados en la Tabla 4 se determinó por EM (ES) por la fórmula m/z.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Ejemplo 218

(Referencia)

4-Isocianato-2-trifluorometil benzonitrilo

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A. Procedimiento general para la conversión de anilinas en isocianatos: (218A)

Ar-NH_{2} \rightarrow Ar-NCO

A una solución de aril/heteroaril amino (5 mmol, 1,0 equiv.) en cloruro de metileno anhidro (200 ml) a 0ºC se le añadió bicarbonato sódico (50 mmol, 10,0 equiv.). A esta suspensión agitada se le añadió una solución de fosgeno (20 mmol, solución al 20% en tolueno). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 1 h y después se continuó agitando a temperatura ambiente hasta que la reacción se completó. La reacción se controló por la retirada de las alícuotas que se filtraron y concentraron al vacío para retirar el exceso de fosgeno. El residuo se hizo reaccionar con piperidina en exceso en cloruro de metileno. La reacción de la anilina de partida a urea (como se determinó por LC-MS) indicó el progreso de la reacción. Cuando la reacción se había completado según mostró el análisis por (CLEM), la mezcla de reacción se filtró para deshacerse de los extractos inorgánicos y el filtrado se concentró al vacío para obtener el isocianato en bruto que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

B. 4-Isocianato-2-trifluorometil benzonitrilo (218B)

A una solución de 3-trifluorometil-fenilamina (0,372 g, 2 mmol) en diclorometano anhidro (50 ml) a 0ºC se le añadió bicarbonato sódico (1,7 g, 20 mmol) seguido de una solución de fosgeno (4 ml, solución al 20% en tolueno). La mezcla de reacción se calentó a ta durante 1 h y se agitó durante 3 h más. La mezcla de reacción se concentró al vacío para generar el compuesto 218B que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

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Ejemplo 219

(Referencia)

1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico y 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-[3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico (219Bi y 219Bii)

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187

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A. Procedimiento general para la formación de un sistema de hidantoína: (219Aii y 219Aiii)

188

A una solución de una mezcla de los compuestos 89G y 89H (5 mmol, 1,0 equiv.) en cloroformo anhidro (50 ml) se le añadieron tamices moleculares (1 g, 4 \ring{A}, activados, triturados). A esta suspensión agitada se le añadió una solución del isocianato de arilo/heteroarilo, compuesto 219Ai (5 mmol, 1,0 equiv., obtenido como se describe en el ejemplo 218) en tolueno anhidro (50 ml). Después los compuestos 89G y 89H se convirtieron en la urea intermedia, como se determinó por CLEM, se añadió 1,5,7-triazabiciclo[4.4.0]dec-5-eno-7-il poliestireno (2,5 g, 7,5 mmol, Novabiochem Producto Nº 01-64-0332, Nº de Lote A26683, 2,7 mmol/g). En los casos en los que la reacción fue lenta, la mezcla de reacción se calentó a 55ºC durante 1 h. Después de que el intermedio de urea se hubiera consumido (según se determinó por LC-MS), la mezcla de reacción se enfrió y se filtró a través de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado combinado se concentró al vacío. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con EtOAc/hexanos dio los compuestos 219Aii y 219Aiii.

B. 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(8H)-carboxílico y 1,1-Dimetiletil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-[3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-di-oxo-5,8-metanoimidazo[1,5-]pirazina-7(8H)-carboxílico (219Bi 219Bii)

A una solución que contenía una mezcla de los compuestos 89G y 89H (1,28 g, 5 mmol) en cloroformo anhidro (50 ml) se le añadieron tamices moleculares (1 g, 4 \ring{A}, activados). A esta suspensión agitada se le añadió una solución de isocianato de 3-trifluorometilfenilo (0,935 g, 5 mmol) en tolueno anhidro (50 ml). Después de que se consumieran los compuestos 89G y 89H (según se determinó por LC-MS), se añadió 1,5,7-triazabiciclo[4.4.0]dec-5-eno-7-il poliestireno (2,5 g, 7,5 mmol, Novabiochem Producto Nº 01-64-0332, Lote Nº A26683, 2,7 mmol/g) y se agitó a ta. Después de que se hubiera consumido el intermedio de urea (según se determinó por LC-MS), la reacción se filtró a través de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado combinado se concentró al vacío. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con EtOAc del 10% al 50%/hexanos dio el compuesto 219Bi (0,50 g) y el compuesto 219Bii (0,96 g), que sumaban 1,46 g (3,55 mmol, rendimiento del 71%). Compuesto 219Bi: HPLC: 100% a 3,41 min (tiempo de retención). Compuesto 219Bii: 100% a 3,21 min (tiempo de retención) (Columna YMC ODS-A de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido trifluoroacético al 0,1%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 434,03 [M+Na]^{+}.

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Ejemplo 220

(Referencia)

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)1-Tetrahidro-2-(3-(trifluorometil)fenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona y [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Tetrahidro-2-(3-(trifluorometil)fenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (220Bi y 220Bii)

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A. Procedimiento General para la retirada del grupo Boc: (220A)

190

A una muestra seca del compuesto 219Bi (2 mmol, 1,0 equiv.) se le añadió ácido trifluoroacético en exceso (25 ml, solución al 20% en cloruro de metileno). Después de que el compuesto 219Bi se hubiera consumido (según se determinó por CLEM), la mezcla de reacción se concentró al vacío para producir la sal TFA de la amina libre. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (50 ml) y se extrajo con bicarbonato sódico acuoso saturado (50 ml). La capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno (3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para producir la base libre del compuesto 220A, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

B. [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-Tetrahidro-2-(3-(trifluorometil)fenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona y [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Tetrahidro-2-(3-(trifluorometil)fenil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (220Bi y 220Bii)

Se añadió ácido trifluoroacético (al 20% en cloruro de metileno, 12 ml) a una matraz que contenía el compuesto 219Bi (0,50 g, 1,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 1 h. Después de que el material de partida se hubiera consumido (según se determinó por LC-MS), la mezcla de reacción se concentró al vacío para producir la sal TFA del compuesto 220Bi. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (50 ml) y se extrajo con bicarbonato sódico acuoso saturado (50 ml). La capa acuosa se extrajo con cloruro de etileno (3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío para producir el compuesto 220Bi (0,37 g, rendimiento del 99%). HPLC: 100% a 1,94 min (tiempos de retención) (Columna YMC ODS-A de 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contenía ácido trifluoroacético al 0,1%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ES): m/z 312,1 [M+H]^{+}. El compuesto 220Bii se sintetizó como se ha descrito anteriormente. EM (ES): m/z 312,1 [M+H]^{+}.

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Ejemplo 221 [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a] pirazina-7(1H)-carbotioamida {}\hskip0.3cm y {}\hskip0.3cm [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-(4-Ciano-3-(trifluorometil)fenil)-N-(1,1-dimetiletil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carboxamida, {}\hskip0.3cm [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[4-Ciano-3-(trifluoro- metil)fenil]octahidro-1,3-dioxo-7-(1-oxopropil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina, {}\hskip0.3cm 1-Metil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[4-ciano-3-(trifluorometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-car- boxílico, {}\hskip0.3cm [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-7-[(1-Metiletil)sulfonil]tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (221Bi y 221Bii, 221Ci, 221Cii, 221D)

191

A. Procedimiento General para la síntesis de bibliotecas: (221A)

Se prepararon solución madre (0,1 M en cloruro de metileno anhidro) de cloruro de ácidos, cloroformiatos, cloruros de sulfonilo, isocianatos, isotiocianatos, anhídridos y cloruros de carbamoílo. También se preparó una solución madre (0,1 M en cloruro de metileno anhidro) de los compuestos 220Bi. Todas las reacciones se realizaron en Bohdan mini blocks. Todas las reacciones se agitaron sobre un agitador Innova 2100 a 400 rpm durante 24 h. Las HPLC preparativas se realizaron usando una columna Shimadzu VP-ODS de 20 x 50 mm, usando metanol acuoso al 10%-90% que contenía TFA al 0,1% como eluyente, a un caudal de 20 ml por min, usando detección por Espectrometría de Masas. Todos los productos purificados se pesaron y caracterizaron por LS-EM. La RMN de protones se obtuvo para asegurar la identidad y la pureza.

Acrónimos

PVP = Poli(4-vinilpiridina), reticulado al 2%.

STR = Tubo de Síntesis Rack (capacidad de 2,5 ml, formato de 96 pocillos).

PS-DMAP = Equivalente de DMAP, unido a Polímero, 1,5 mmol/g, Argonaut.

B. Síntesis de tioureas y urea [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida y (221Bi y 221Bii)

192

A los pocillos de un miniblock se le añadió una solución madre de los compuestos 220Bi (300 \mul, 0,1 M, 30 \mumol) seguido de una solución del isocianato o isotiocianato (300 \mul, 0,1 M, 30 \mumol). Los pocillos se cerraron con un material de caucho forrado de teflón y se agitaron a ta durante 24 h. La mezcla de reacción se secó en un tubo de síntesis rack. Los pocillos del mini-block se lavaron con cloruro de metileno (3 x 300 \mul) se secaron en el STR. Los disolventes se evaporaron al vacío. Los productos brutos se purificaron por HPLC preparativa. Compuesto 221Bi: Tiempo de retención: 1,10 min. EM (ES): m/z 448,38 [M+H]^{+}. Compuesto 221Bii: Tiempo de retención: 1,45 min. EM (ES): m/z 411,45 [M+H]^{+}. Los tiempos de retención y MS se determinaron como se indica a continuación.

Entrada de Flujo MS, detección HPLC-ELS

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

B

Detector:

ELS

C. Síntesis de amidas y carbamatos [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[4-Ciano-3-(trifluorometil)fenil]octahidro-1,3-dioxo-7-(1-oxopropil)-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina y 1-Metil éster del ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-2-[4-ciano-3-(trifluo- rometil)fenil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carboxílico (221Ci y 221Cii)

193

A los pocillos del miniblock se le añadieron PVP (100 mg, 1 mmol), una solución madre de los compuestos 220Bi (300 \mul, 0,1 M, 30 \mumol) seguido de una solución madre del cloruro de ácido, cloroformiato o anhídrido (600 \mul, 0,1 M, 60 \mumol). Los pocillos se taparon con un material de caucho forrado de teflón y se agitaron a ta durante 24 h. La mezcla de reacción se secó en un tubo de síntesis rack. La resina se lavó con cloruro de metileno (3 x 300 \mul) y se secó en el STR. Los disolventes se evaporaron a presión reducida. Los productos brutos se purificaron por HPLC preparativa. Compuesto 221Ci: Tiempo de retención: 1,22 min. EM (ES): m/z 368,41 [M+H]^{+}. Compuesto 221Cii: Tiempo de retención: 1,23 min. EM (ES): m/z 370,38 [M+H]^{+}. Los tiempos de retención y MS se determinaron como se indica a continuación.

Entrada de Flujo MS, detección HPLC-ELS

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

B

Detector:

ELS

D. Síntesis de sulfonamidas [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\alpha)]-7-[(1-Metiletil)sulfonil]tetrahidro-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo [1,5-a]pirazina-1,3(2H,5H)-diona (221D)

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A los pocillos del se les añadieron PVP (100 mg, 1 mmol), PS-DMAP (25 mg, 37 \mumol), una solución madre de los compuestos 220Bi (300 \mul, 0,1 M, 30 \mumol) seguido de una solución del cloruro de sulfonilo (600 \mul, 0,1 M, 60 \mumol). Los pocillos se taparon con un material de caucho forrado de teflón y se agitaron a ta durante 24 h. La mezcla de reacción se secó en un tubo de síntesis rack. La resina se lavó con cloruro de metileno (3 x 300 \mul) y se drenó en el STR. Los disolventes se evaporaron a presión reducida. Los productos en bruto se purificaron por HPLC preparativa. Compuesto 221D: Tiempo de retención: 1,34 min. EM (ES): m/z 418,40 [M+H]^{+}. Los tiempos de retención y MS se determinaron como se indica a continuación.

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Entrada de Flujo MS, detección HPLC-ELS

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

B

Detector:

ELS

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Ejemplo 222

(Referencia)

(5\alpha,6\alpha,8\alpha,8a\alpha)-4-(Octahidro-6-hidroxi-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzoni- trilo y (5\alpha,6\beta,8\alpha,8a\alpha)-4-(Octahidro-6-hidroxi-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-2-il)-2-(trifluorometil) benzonitrilo (222i y 222ii)

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A una solución del compuesto 61 (0,200 g, 0,601 mmol) en THF (4,0 ml) a 0ºC se le añadió gota a gota BH_{3}\cdotTHF (solución 1 M en THF, 1,20 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1,5 h, después se añadió tampón fosfato (pH = 7,2, 3,5 ml) seguido de EtOH (1,5 ml) y H_{2}O_{2} al 30% en agua (2,5 ml). La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 3 h. Se añadieron EtOAc (50 ml) y agua (50 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró al vacío. El sólido resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc en hexano del 20% al 50% para dar el compuesto 222i (35 mg) en forma de un sólido blanco y el compuesto 222ii (40 mg) en forma de un sólido blanco. Compuesto 222i: HPLC: 100% a 2,96 min (tiempo de retención) (Columna YMC S-5 ODS-A de 4,6 x 50 mm, eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 min que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ESI): m/z 351,99 [M+H]. Compuesto 222i: HPLC: 96% a 2,90 mm (tiempo de retención) (Columna YMC S-5 ODS-A de 4,6 x 50 mm, eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 min que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ESI): m/z 351,97 [M+H].

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Ejemplo 223

(Referencia)

(5\alpha,6\beta,7\alpha,8\alpha,8a\alpha-4-(Octahidro-6,7-dicloro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-2-il)-2-(trifluorometil)ben- zonitrilo y (5\alpha,6\alpha,7\beta,8\alpha8a\alpha)-4-(Octahidro-6,7-dicloro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]piridin-2-il)-2-(trifluo- rometil)benzonitrilo y (1a\alpha,2\beta,6a\beta,7\beta,7a\alpha)-4-(Octahidro-4,6-dioxo 2,7-metanoimidazo[1,5-a]oxireno[d]piridin- 5(4H)-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (223i y 223ii y 223iii)

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196

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A una solución del compuesto 61 (0,20 g, 0,60 mmol) en acetona (4,0 ml) y ácido acético (0,8 ml) a 0ºC se le añadió salmuera (0,8 ml), seguido de la adición gota a gota de lejía (1,6 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta, se agitó a ta durante 1 h y después se concentró al vacío. La fase acuosa resultante se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y la mitad del material se purificó sobre un sistema de cromatografía automatizado ISCO (columna de gel de sílice de 30 g, eluyendo con EtOAc al 10-100% en hexano durante 45 min, 35 ml/min, controlando a 220 nm ) para dar el compuesto 223i (9 mg) en forma de un sólido blanco, el compuesto 223ii (4 mg) en forma de un sólido blanco y el compuesto 223iii (3 mg) en forma de un sólido blanco. Compuesto 223i: HPLC: 100% a 3,817 min (tiempo de retención) (Columna YMC S-5 ODS-A de 4,6 x 50 mm, eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 min que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ESI): m/z 402,13 [M-H]. Compuesto 223ii: HPLC: 90% a 3,75 min (tiempo de retención) (Columna YMC S-5 ODS-A de 4,6 x 50 mm, eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 min que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ESI): m/z 402,10 [M-H]. Compuesto 223iii: 100% a 3,173 min (tiempo de retención) (Columna YMC S-5 ODS-A de 4,6 x 50 mm, eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 min que contenía ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, controlando a 220 nm). EM (ESI): m/z 348,14 [M-H].

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Ejemplos 224 a 491

Se prepararon compuestos adicionales de la presente invención por procedimientos análogos a los descritos anteriormente. Los compuestos de los Ejemplos 224 a 491 tienen la siguiente estructura (L es un enlace):

\quad

Donde la estructura, el nombre del compuesto, el tiempo de retención, la masa molecular y el procedimiento empleado, se muestran en la Tabla 5. La configuración absoluta para los siguientes compuestos no se determinó. Por simplicidad en la nomenclatura, el compuesto 222i se designa en este documento como que tiene una configuración "R" y el compuesto 222ii como que tiene una configuración "S". Los productos enantioméricamente puros obtenidos a partir del compuesto 222i se designan en este documento como que tienen una configuración "R" y los productos enantioméricamente puros obtenidos a partir del compuesto 222ii se designan en este documento como que tienen una configuración "S".

\newpage

\global\parskip0.900000\baselineskip

Las técnicas cromatográficas usadas para determinar los tiempos de retención de los compuestos de la Tabla 5 son como se muestran a continuación:

A EM de inyección de Flujo, detección de HPLC-UV

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

A

Detector:

UV, 220 nm

\vskip1.000000\baselineskip

B EM de inyección de flujo, detección de HPLC-ELS

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

B

Detector:

ELS

Detector:

UV, 220 nm

\vskip1.000000\baselineskip

C LC(uv)-EM

Instrumento:

LVL-L3604 CLEM

Fuente:

MetECN_Data\Data0001\52827-040-01_File0002. CLEM

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\WELLER.met

Columna:

PrimeSphere 5u C18-HC de 30 x 4,6 (2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Detector:

UV, 220 nm

\vskip1.000000\baselineskip

D Datos de EM a partir de CLEM, detección de HPLC-UV

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

A

Detector:

UV, 220 nm

\global\parskip1.000000\baselineskip

E Datos de EM a partir de CLEM, detección de HPLC-ELS

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\Wellere.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Canal:

B

Detector:

ELS

Detector:

UV, 220 nm

\vskip1.000000\baselineskip

F A. LC(uv)-EM

Instrumento:

LVL-L3604 CLEM

Fuente:

MetECN_Data\Data0001\52827-040-01_File0002. CLEM

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\WELLER.met

Columna:

Phenom-Prime S5 C18 de 4,6 x 30 mm (grad. de 2 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

5 ml/min

Tiempo de Gradiente:

2 min

Detector:

UV, 220 nm

\vskip1.000000\baselineskip

G B. LC(uv)-EM

Fuente:

MetECN_Data\Data0001\52827-040-01_File0002. CLEM

Método:

C:\CLASS-VP\METHODS\WELLER.met

Columna:

Columna YMC S5 ODS de 4,8 x 50 mm (grad. de 4 min)

Disolventes:

MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0,1%-MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0,1%

Caudal:

4 ml/min

Tiempo de Gradiente:

220 min

Detector:

UV, 220 nm

\vskip1.000000\baselineskip

La masa molecular de los compuestos presentados en la Tabla 5 se determinó por EM (ES) por la fórmula m/z.

En la siguiente Tabla 5, los Ejemplos de Referencia se marcan con un asterisco ("*").

197

198

199

200

201

202

203

204

205

206

207

208

209

210

211

212

213

214

215

216

217

218

219

220

221

222

223

224

225

226

227

228

229

230

231

232

233

234

235

236

237

238

239

240

241

242

243

244

245

246

247

248

249

250

251

252

253

254

255

256

257

258

259

260

261

262

263

264

265

266

267

268

269

270

271

272

273

274

275

276

277

278

279

280

281

282

283

284

285

Claims (7)

1. Un compuesto seleccionado entre:

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-
a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Hexahidro-N-[(4-metilfenil)sulfonil]-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pira-
zina-7(1H)-carboxamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Hexahidro-N-(2-metilpropil)-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5,-a]pirazina-7-
(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-(Ciclohexilmetil)hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7
(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-(2,6-Difluorofenil)hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-
7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-(1,3-Benzodioxol-5-ilmetil)hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]
pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-[2-(3,4-Dimetoxifenil)etil]hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Hexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-N-3-piridinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-
carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-2-(1-naftalenil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pi-
razina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-(Ciclohexilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-(2,6-Difluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]
pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-(1,3-Benzodioxol-5-ilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-Hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo
[1,5-a]pirazina-7(1H)carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-[2-(3,4-Dimetoxifenil)etil]hexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-ilhexahidro-1,3-dioxo-2-[3-(trifluorometil)fenil]-5,8-metanoimidazo[1,5-
a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pi-
razina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)hexahidro-1,3-dioxo-N-2-propinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo
[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(8-Ciano-5-quinolinil)-N-(ciclohexilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,3-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)-N-(ciclohexilmetil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo
[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-1,3-dioxo-6-N-2-propinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)-N-(2,6-difluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo
[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)-N-[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-il-2-(3-cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(3-Cloro-4-ciano-2-metilfenil)hexahidro-N-[(4-metilfenil)sulfonil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carboxamida;

Ácido [5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(1-ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-alfa,1,3-trioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-acético, éster metílico;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-N-(2-metilpropil)-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-1,3-dioxo-N-2-propinil-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pira-
zina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)-N-(2,6-difluorofenil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-N-[3-(4-morfolinil)propil]-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo
[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida;

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-2-(1-Ciano-4-isoquinolinil)-N-[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida; y

[5S-(5\alpha,8\alpha,8a\beta)]-N-1,3-Benzodioxol-5-il-2-(1-ciano-4-isoquinolinil)hexahidro-1,3-dioxo-5,8-metanoimidazo
[1,5-a]pirazina-7(1H)-carbotioamida,

o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo.

2. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2 que comprende adicionalmente otro agente anticancerígeno.

4. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo para la preparación de un medicamento para modular la función de un receptor nuclear de hormonas.

5. Uso de acuerdo con la reivindicación 4, donde dicho receptor nuclear de hormonas es un receptor nuclear de hormonas de unión a esteroides, receptor de andrógenos, receptor de estrógenos, receptor de progesterona, receptor de glucocorticoides, receptor de mineralocorticoides, receptor de aldosterona, receptor de RORbeta o receptor de COUP-TF2.

6. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo para la preparación de un medicamento para tratar enfermedades proliferativas, cánceres, hipertrofia prostática benigna, adenomas y neoplasias de la próstata, células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógenos, enfermedad cardiaca, afecciones o trastornos angiogénicos, hirsutismo, acné, hiperpilosidad, inflamación, modulación inmune, seborrea, endometriosis, síndrome del ovario poliquístico, alopecia androgénica, hipogonadismo, osteoporosis, supresión de espermatogénesis, líbido, caquexia, anorexia, inhibición de la atrofia muscular en paciente ambulatorios, suplementación de andrógenos para niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombres, cánceres que expresan el receptor de estrógenos, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer endometrial, sofocos, sequedad vaginal, menopausia, amenorrea, dismenorrea, anticoncepción, interrupción del embarazo, cánceres que contienen el receptor de progesterona, endometriosis, sincronía del ciclo, meniginoma, fibroides, inducción del parto, enfermedades autoinmunes, enfermedad de Alzheimer, trastornos psicóticos, dependencia de drogas, Diabetes Mellitus no insulinodependiente, trastornos mediados por el receptor de dopamina, insuficiencia cardiaca congestiva, desregulación de la homeostasis del colesterol y atenuación del metabolismo de un agente farmacéutico.

7. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o estereoisómero del mismo para uso en el tratamiento de enfermedades proliferativas, cánceres, hipertrofia prostática benigna, adenomas y neoplasias de la próstata, células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógenos, insuficiencia cardiaca, afecciones o trastornos angiogénicos, hirsutismo, acné, hiperpilosidad, inflamación, modulación inmune, seborrea, endometriosis, síndrome del ovario poliquístico, alopecia androgénica, hipogonadismo, osteoporosis, supresión de la espermatogénesis, líbido, caquexia, anorexia, inhibición de la atrofia muscular en paciente ambulatorios, suplementación de andrógenos para niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombres, cánceres que expresan el receptor de estrógenos, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer endometrial, sofocos, sequedad vaginal, menopausia, amenorrea, dismenorrea, anticoncepción, interrupción del embarazo, cánceres que contienen el receptor de progesterona, endometriosis, sincronía del ciclo, meniginoma, fibroides, inducción del parto, enfermedades autoinmunes, enfermedad de Alzheimer, trastornos psicóticos, dependencia de drogas, Diabetes Mellitus no insulinodependiente, trastornos mediados por el receptor de dopamina, insuficiencia cardiaca congestiva, desregulación de la homeostasis del colesterol y atenuación del metabolismo de un agente farmacéutico.