ES2305547T3 - Microtomo. - Google Patents
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Abstract
Micrótomo que comprende: - un dispositivo de alojamiento con un soporte (3) para alojar al menos una sección de un objeto de tratamiento (4), y - un dispositivo de separación (6, 10, 13), - al menos una fuente de radiación láser (10) y - medios para el enfoque (6; 13) de la radiación láser, en el que el foco de radiación (22) generado por el enfoque - puede moverse respecto al soporte (3), - y dirigirse a un lugar de las superficies de separación (19; 20) del objeto de tratamiento (4) para provocar en dicho lugar una separación de material, caracterizado porque están previstos medios para la introducción pulsada (14) del foco de radiación en el lugar de la superficie de separación, que están concebidos para generar pulsos con una duración de actuación < 1*10- 12 segundo y porque el micrótomo está configurado para generar una zona de superficie de separación, situada paralelamente respecto a la superficie.
Description
Micrótomo.
La invención se refiere a un micrótomo con un
dispositivo de alojamiento con un soporte para alojar al menos un
tramo de un objeto de tratamiento, así como con un dispositivo
separador. Otro aspecto de la invención se refiere a un
procedimiento para someter a microtomía objetos de tratamiento.
Los micrótomos del tipo mencionado anteriormente
y los procedimientos correspondientes para la microtomía sirven
para separar finas rodajas de un objeto de tratamiento que se ha de
analizar, por ejemplo, para analizarlas mediante un procedimiento
microscópico. Los micrótomos se utilizan frecuentemente para obtener
finos cortes de tejido de una muestra de tejido, que puedan
examinarse mediante un microscopio de luz transmitida.
En el estado de la técnica se conocen micrótomos
que comprenden un dispositivo de sujeción para el objeto de
tratamiento y una cuchilla que puede moverse respecto a dicho
dispositivo de sujeción. La cuchilla está fijada sobre un carro,
pudiendo desplazarse fácilmente, y el filo cortante de la cuchilla
puede moverse de un lado a otro en un plano de separación. El
objeto de tratamiento puede sujetarse en el dispositivo de sujeción
y desplazarse perpendicularmente respecto al plano de separación
junto con el soporte del dispositivo de sujeción.
Un procedimiento de microtomía con el micrótomo
conocido se efectúa de tal forma que, mediante el movimiento de
desplazamiento orientado perpendicularmente respecto al plano de
separación, el objeto de tratamiento se pone en tal posición que
durante un movimiento de desplazamiento del carro, con la cuchilla
se separe una fina rodaja del objeto de tratamiento, en el plano de
separación. A continuación, la cuchilla se vuelve a mover a su
posición inicial y el objeto de tratamiento se posiciona, mediante
un movimiento de desplazamiento de aproximación generalmente muy
pequeño, < 10 \mum del soporte respecto a la cuchilla, en
sentido perpendicular respecto al plano de separación, de tal forma
que al volver a desplazarse la cuchilla se vuelva a separar una
fina rodajita del objeto de tratamiento.
Este procedimiento se repite varias veces
periódicamente, hasta que se haya obtenido una fina rodaja de la
zona del objeto de tratamiento, que se ha de examinar.
Para evitar que el objeto de tratamiento se
deforme durante el procedimiento de corte con el micrótomo conocido,
suele ser necesario solidificar y/o apoyar el objeto de tratamiento
mediante medidas adicionales. Como medida adicional de este tipo se
conoce el procedimiento de congelar los objetos de tratamiento antes
de la microtomía, pudiendo reducirse su capacidad de deformación
por el enfriamiento. Un inconveniente de este procedimiento es que
los llamados cortes de congelación, obtenidos a partir de objetos de
tratamiento congelados, generalmente, no muestran muchos detalles
del objeto de tratamiento y, además, por la congelación se generan
artefactos en el objeto de tratamiento. Otro inconveniente conocido
de la congelación es que una deformación del objeto de tratamiento
y de la fina rodajita separada no puede evitarse por completo
mediante la congelación. Además, la congelación del objeto de
tratamiento requiere un trabajo adicional que impide la realización
rápida de rodajitas que puedan examinarse a microscopio,
encareciendo la realización en general.
Además, como medida para apoyar un objeto de
tratamiento se conoce incorporarlo en un material de inclusión. En
los objetos de tratamiento en forma de muestras de tejido,
generalmente, es preciso impregnar el objeto de tratamiento
completamente con el material de inclusión para lograr una
solidificación suficiente de la muestra.
Como materiales de inclusión se conocen
parafinas y diversos plásticos. Para conseguir una impregnación
total se conoce el procedimiento de extraer al objeto de
tratamiento, mediante un proceso químico de varias etapas, el agua
o medio de fijación que contenga y sustituirlo por un fluido que
pueda mezclarse bien con el material de inclusión. A continuación,
puede realizarse la impregnación con el material de inclusión en
estado líquido, eventualmente licuado por calentamiento, y después
puede solidificarse el material de inclusión, por ejemplo, mediante
el enfriamiento a partir de un estado calentado previamente o
mediante una reacción de reticulación química.
La incorporación o la impregnación con un
material de inclusión requieren aún más tiempo y un mayor aparato
técnico que la congelación del objeto de tratamiento. Por la
inclusión o impregnación, frecuentemente, se produce una alteración
del objeto de tratamiento, detectándose artefactos durante el examen
posterior de las rodajitas obtenidas. Estos artefactos son
típicamente una contracción o dilatación de la muestra. En el caso
de muestras de tejido suelen producirse también alteraciones de la
muestra causadas por la inhibición o la influencia en los procesos
metabólicos en tejidos.
Frecuentemente, los finos cortes obtenidos con
los micrótomos conocidos tienen que someterse además a un
tratamiento posterior. Por ejemplo, se conoce la microdisección de
estos cortes. En la microdisección, con un rayo láser enfocado se
circunda una zona del corte de muestra con un movimiento
bidimensional y, de esta manera, la zona circundada del corte se
separa del conjunto del corte de muestra. Un procedimiento de
microdisección se conoce, por ejemplo, por el documento WO97/29354.
El procedimiento de la microdisección permite separar de un corte
la zona que se ha de microdiseccionar, pero previamente es preciso
realizar dicho corte mediante la microtomía de la muestra. Durante
esta microtomía previa se producen las desventajas antes descritas
como, por ejemplo, la necesidad de una solidificación o inclusión
del objeto de tratamiento.
Por el documento WO02/057746A se conoce un
dispositivo de microdisección, en el que, mediante un corte situado
perpendicularmente respecto a la superficie de una fina muestra, se
separa una zona de dicha muestra mediante una radiación láser.
H. Lubatschowski et al describen en un
artículo relativo a la "Apllication of ultrashort laser pulses for
intrastromal refractive surgery", Graefe's Arch. Clin. Exp.
Ophthalmol 238; 33-39, 2000, el uso de sistemas
láser que generan pulsos láser ultracortos con una duración de 100 a
200 femtosegundos, en el ámbito de la cirugía refractiva
intraestromal. Para sus análisis utilizan un sistema láser de zafiro
y titanio acoplado con el modo Kerr-Lens, con un
refuerzo "chirped pulse" subsiguiente.
El documento DE10020559 describe un dispositivo
para tratar materiales con pulsos láser ultracortos. El dispositivo
comprende un dispositivo para generar una secuencia de pulsos láser
con una duración inferior a 300 ps y una tasa de repetición
comprendida entre 100 Khz y 1 GHz. El dispositivo se utiliza
especialmente para conseguir por fotodisrupción un efecto de corte
o una ablación de material.
La invención tenía el objetivo de proporcionar
un micrótomo y un procedimiento para la microtomía, que permitieran
una microtomía más cuidadosa de un objeto de tratamiento.
Según la invención, el objetivo se consigue
mediante un micrótomo del tipo mencionado al principio, en el que
el dispositivo de separación comprende al menos una fuente de
radiación láser y medios para el enfoque de la radiación láser,
pudiendo moverse el foco de radiación, generado por el enfoque,
respecto al soporte, y dirigirse a un lugar de la superficie de
separación del objeto de tratamiento para provocar en dicho lugar
una separación de material. Asimismo, el micrótomo según la
invención comprende medios para la incorporación pulsada del foco
de radiación en el lugar de la superficie de separación, que están
configurados para generar pulsos con una duración de actuación
inferior a 1 picosegundo (1*10^{-12} segundo).
Por duración de actuación se entiende el tiempo
durante el cual el foco de radiación actúa en el lugar de la
superficie de separación. La energía necesaria para cortar por cada
pulso láser se sitúa en el intervalo de un picojoule (PJ) a un
milijoule (mJ), preferentemente en el intervalo de varios
picojoules. También se ha mostrado que es ventajosa una energía de
pulso de 100 nanojoules (nJ).
Una duración de actuación inferior a un
picosegundo, un llamado pulso ultracorto, asimismo ha resultado ser
especialmente ventajosa para la mayoría de los materiales
(especialmente para tejidos biológicos). Las duraciones de
actuación que pueden realizarse técnicamente en la actualidad se
sitúan en un rango que baja hasta veinte femtosegundos
(20*^{10-15} segundos), aunque, siempre que puedan
realizarse técnicamente, también puede ser conveniente emplear
duraciones de actuación aún más cortas para el micrótomo según la
invención. Las frecuencias de los pulsos que actúan son,
preferentemente, superiores a 1000 hertzios. Se ha mostrado que es
especialmente ventajoso que la frecuencia de pulsos sea superior a
100.000 hertzios. Resulta especialmente preferible que la
frecuencia de pulsos se sitúe entre 100 kHz y 10 MHz.
La duración de actuación y la frecuencia de
pulsos posibles para el procedimiento y el dispositivo según la
invención pueden variarse dentro de amplios márgenes, sin que el
procedimiento según la invención ya no pueda realizarse debido a la
variación. En particular, la duración de pulsos y la frecuencia de
pulsos pueden adaptarse al material que se tenga que someter a la
microtomía.
La duración de actuación del pulso puede ser más
largo o más corto que la pausa entre dos pulsos o coincidir con
ésta, siendo preferible una duración de pulsos más corta que la
pausa entre dos pulsos.
Si se elige una duración de pulsos
suficientemente corta, del rango de pocos femtosegundos, la
frecuencia de pulsos puede variarse dentro de amplios márgenes. Por
ejemplo, con una duración de pulsos de 100 fs pueden realizarse,
por ejemplo, unas frecuencias de pulso de 1 kHz, pero también de 1
MHz.
La separación de material en el micrótomo según
la invención se consigue por un calentamiento local del material a
través del proceso de la absorción multifotónica en el lugar de la
superficie de separación, al que está dirigido el foco de
radiación, y una gasificación/evaporación resultante del material.
Además de este efecto primario deseado, la llamada rotura óptica,
pueden producirse también efectos secundarios. Especialmente en
caso de elevadas energías de pulso, en casos aislados, como efecto
secundario pueden producirse mayores burbujas de gas y de
cavitación que, en comparación con pequeñas burbujitas de gas,
tienen una reducida relación superficie-volumen y,
por consiguiente, emiten su contenido de gas eventualmente sólo de
forma lenta al entorno. Esto sería desventajoso para el efecto de
corte deseado. Además, las mayores burbujitas de cavitación pueden
causar deformaciones y entorpecer el posicionamiento preciso del
foco de radiación y, por tanto, el guiado preciso del corte. Además,
dentro del objeto de tratamiento pueden producirse ondas de presión
que eventualmente podrían perjudicar la precisión del procedimiento
de corte.
El efecto fotodisruptivo, es decir, el efecto de
corte deseado del rayo láser, requiere generalmente cierta
intensidad mínima en el lugar de la superficie de separación.
Típicamente, para objetos de tratamiento constituidos por un
material transparente, esta intensidad es de aprox. 10^{12}
W/cm^{2} o superior. Los efectos secundarios, en cambio, no
dependen de la intensidad del láser, sino de la energía láser, y su
dimensión y su cantidad aumentan a medida que aumenten las energías
láser. Por consiguiente, para reducir o evitar los efectos
secundarios, convenientemente ha de lograrse una baja energía láser
y una alta intensidad del láser. Esto se puede conseguir, por
ejemplo, mediante la incorporación pulsada del foco de radiación en
el lugar de la superficie de separación.
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Mediante la incorporación pulsada del foco de
radiación, estos efectos negativos, por tanto, pueden evitarse o al
menos reducirse. Resulta especialmente ventajoso que los pulsos de
foco de radiación tengan elevadas intensidades, pero poca energía,
es decir, que la energía del pulso se concentre en un pequeño
volumen, ya que, de esta manera, pueden evitarse efectos
secundarios negativos, como la generación antes descrita de mayores
burbujitas de gas y de cavitación. Mediante un pulso individual - en
función del objeto de tratamiento y los parámetros de separación
ajustados - puede originarse una separación parcial o completa en el
lugar de la superficie de separación, situado en la zona del foco
de radiación. A continuación, en caso de una separación local
parcial, mediante la actuación de uno o varios pulsos adicionales en
el mismo lugar de la superficie de separación, puede conseguirse
una separación total; después de un movimiento relativo del soporte
respecto al foco de radiación, en un lugar contiguo, puede
originarse entonces otra separación de material, pudiendo
realizarse un corte coherente a lo largo de la superficie de
separación.
El micrótomo según la invención provoca una
separación de material por la actuación del foco de radiación de un
rayo láser. Dicha actuación causa un calentamiento local del
material del objeto de tratamiento y, como consecuencia de este
calentamiento, una conversión local del material al estado
gaseiforme. Durante un movimiento relativo entre el foco de
radiación y el soporte (con el objeto de tratamiento), el foco de
radiación actúa en varios lugares, contiguos entre sí, de la
superficie de separación, por lo que puede realizarse un corte
coherente.
El micrótomo según la invención evita el peligro
de una deformación del objeto de tratamiento o de la fina rodaja
separada del objeto de tratamiento, que existe en los micrótomos
conocidos que trabajan con cuchillas u hojas, debido a la fuerza
cortante. Por lo tanto, al usar el micrótomo según la invención no
es necesario incluir, impregnar ni solidificar y/o apoyar de otra
manera el objeto de tratamiento antes de la microtomía. De esta
manera, se evitan los artefactos como consecuencia de acciones de un
material de inclusión o de un proceso de congelación.
El micrótomo según la invención permite un libre
guiado de corte.
Como ventaja sorprendente del micrótomo según la
invención se ha mostrado que mediante el micrótomo también es
posible separar tejido vivo obteniendo finas rodajitas en forma
vital.
La fuente de radiación láser del micrótomo emite
preferentemente una radiación láser con una longitud de ondas en el
intervalo espectral visible (VIS) o infrarrojo cercano (NIR), o sea,
por ejemplo, entre 700 nm y 1400 nm, para que la radiación láser
experimente sólo un reducido debilitamiento, por ejemplo, como
consecuencia de la absorción/dispersión, dentro de un objeto de
tratamiento habitual.
Preferentemente, en cada una de las tres
direcciones en el espacio puede realizarse un movimiento relativo
entre el foco de radiación y el soporte. Para ello, por ejemplo,
puede preverse un dispositivo de movimiento 3D conectado con el
soporte. Por la movilidad relativa tridimensional del foco de
radiación respecto al soporte y, por tanto, respecto al objeto de
tratamiento alojado por el soporte, con el micrótomo según la
invención pueden realizarse guiados de corte de una manera mucho
más variable en comparación con los micrótomos conocidos. Por
ejemplo, es posible extraer una fina rodaja de la superficie de un
objeto de tratamiento, de tal forma que se produzcan una primera
zona de la superficie de separación, situada paralelamente a la
superficie, y una segunda zona de la superficie de separación,
situada perpendicularmente respecto a dicha superficie circundando
la primera zona de la superficie de separación. Por consiguiente, ya
no es necesario separar del objeto de examen siempre todo un plano
de la superficie de separación, que se extienda hasta los bordes del
objeto de tratamiento, como es el caso en los micrótomos conocidos,
sino que también puede separarse zonas parciales (por ejemplo zonas
con contornos rectangulares o redondos) de un tal plano de la
superficie de separación. De esta manera, es posible una
preparación muy cuidadosa de un objeto de tratamiento, separando del
objeto de tratamiento sólo las partes que sean esenciales para el
examen.
La profundidad de penetración del foco de la
radiación láser depende del poder de absorción del material/de los
materiales del objeto de tratamiento para la radiación láser
empleada para cortar. La fuente de radiación láser de un micrótomo
según la invención se concibe, preferentemente, de tal forma que aún
con una profundidad de penetración \geq 10 \mum pueda lograrse
una separación del material, referido a un tejido biológico como
objeto de tratamiento. Esta profundidad de profundidad corresponde
al espesor de una rodajita necesaria para un examen microscópico o
incluso supera dicho espesor. En muchos tejidos biológicos, con el
micrótomo según la invención puede cortarse con una profundidad de
2 mm o superior.
En función de las propiedades del objeto de
tratamiento, especialmente del poder de absorción de éste, con el
dispositivo según la invención también es posible lograr una
separación de material a una distancia de la superficie del objeto
de tratamiento, que supere el espesor habitual de una fina rodajita
que ha de originarse para un examen. De esta manera, con el
micrótomo según la invención, es posible separar de un modo mucho
más racional rodajitas desde una gran profundidad de un objeto de
examen, de lo que es posible con los micrótomos conocidos, ya que
no es necesario avanzar hasta la profundidad deseada separando
muchas rodajitas finas.
Según una forma de realización ventajosa del
micrótomo según la invención, los medios para enfocar la radiación
láser están configurados para mover el foco de radiación en al menos
una dirección en el espacio, respecto al soporte. Por ejemplo, de
tal forma que los medios de enfoque estén configurados para
modificar la divergencia/convergencia del rayo láser y, por tanto,
la distancia focal, y/o de tal forma que los medios de enfoque
mismos sean móviles respecto al soporte, puede lograrse un
movimiento relativo del foco de radiación respecto al soporte (y el
objeto de tratamiento correspondiente) que pueda controlarse de
manera sencilla y precisa a lo largo del sentido de radiación.
Preferentemente, los medios para enfocar la radiación láser
comprenden medios ópticos deslizables o giratorias, por ejemplo,
espejos y/o lentes, para provocar un movimiento relativo del foco
de radiación en una, dos o tres direcciones en el espacio. Por
ejemplo, para modificar la posición del foco de radiación puede
incorporarse un medio óptico en el rayo láser o se puede inclinar un
medio óptico dispuesto en el rayo láser, que reduzca o alargue el
camino óptico.
Según otra forma de realización ventajosa están
previstos medios para guiar la radiación láser, a fin de mover el
foco de radiación en al menos una dirección en el espacio respecto
al soporte. Estos medios pueden estar realizados, por ejemplo, como
espejos giratorios alrededor de uno o dos ejes.
Los medios para guiar la radiación láser pueden
combinarse de forma ventajosa con los medios descritos anteriormente
para mover el soporte. Por ejemplo, una componente de dirección de
movimiento puede realizarse mediante el guiado del rayo láser y las
otras dos componentes de dirección de movimiento pueden realizarse
mediante el movimiento del soporte. Asimismo, resulta ventajoso
realizar dos componentes de dirección de movimiento mediante el
guiado del rayo láser y realizar la tercera componente restante
mediante el movimiento del soporte.
Asimismo resulta ventajoso prever tanto medios
para guiar el rayo láser como medios para el movimiento relativo
entre el soporte y la óptica para el movimiento relativo del foco de
radiación respecto al soporte, en una o varias direcciones en el
espacio. De esta manera puede conseguirse, por ejemplo, un ajuste
aproximado y fino mediante los diferentes medios para el movimiento
relativo.
Según otra forma de realización ventajosa, los
medios para enfocar la radiación láser presentan una abertura
numérica \geq 0,65, preferentemente una abertura numérica \geq
1,2. Una ventaja esencial al utilizar las grandes aberturas
numéricas citadas es que se logra un fuerte ángulo de enfoque y que
en las zonas de la radiación láser, situadas delante y detrás del
foco de radiación, visto en el sentido de radiación, existe una
densidad de energía de radiación que es baja en relación con la
densidad de energía de radiación en el foco de radiación, por lo
que se consigue una separación delimitada nítidamente del material
en la zona del foco de radiación, evitándose la separación de
material en las zonas situadas por delante y por detrás.
Según otra forma de realización ventajosa, los
medios para la incorporación pulsada pueden actuar en conjunto con
la fuente de radiación láser. De esta forma, mediante medios para la
interrupción pulsada de la alimentación de energía de la fuente de
radiación láser puede generarse una radiación láser pulsada y, por
consiguiente, una incorporación pulsada del foco de radiación en el
lugar de la superficie de separación.
Los medios para la incorporación pulsada pueden
trabajar, especialmente, según el principio del refuerzo "chirped
pulse". En cuanto al principio del refuerzo "chirped pulse"
se remite al documento DE10020559 y, en particular, al apartado
[0009] de éste, así como a la publicación mencionada allí, D.
Strickland, G. Mourou, Opt. Commun. 56, 219 (1985).
Según una forma de realización ventajosa del
micrótomo según la invención, los medios para la incorporación
pulsada pueden estar preparados para interrumpir de forma pulsada un
rayo láser generado continuamente y/o desviarlo de forma pulsada
del lugar de la superficie de separación. De esta manera se consigue
una incorporación pulsada del foco de radiación en el lugar de la
superficie de separación sin interrumpir la emisión de la radiación
láser desde la fuente de radiación láser. De manera ventajosa, el
rayo puede ser absorbido. Sin embargo, alternativamente, el rayo
también puede ser reflejado y de esta manera ser desviado del lugar
de la superficie de separación a un lugar situado fuera del objeto
de tratamiento o a un punto del objeto de tratamiento que no sea
relevante para el examen previsto del objeto de tratamiento.
Según otra forma de realización ventajosa del
micrótomo con incorporación pulsada del foco de radiación están
previstos medios de control que controlen la secuencia temporal de
las pausas de radiación y/o que estén conectados con medios para
registrar la secuencia temporal de las pausas de radiación y/o que
controlen el movimiento relativo entre el foco de radiación y el
soporte, en función de la secuencia temporal de las pausas de
radiación. Los medios de control sirven para la sincronización de
los pulsos de radiación láser con el movimiento relativo entre el
foco de radiación y el soporte. Por "secuencia temporal" de las
pausas de radiación se entienden aquí la duración y la frecuencia
de las pausas de radiación. Al emplear dichos medios de control, en
función de la secuencia de las interrupciones de radiación o de los
efectos de la radiación, un movimiento entre el soporte y el foco
de radiación y, de esta forma, la duración de actuación de los
distintos pulsos de la radiación láser se dirige hacia los lugares
de la superficie de separación, que ha de separarse. Los medios de
control, o bien, (a) pueden controlar tanto la secuencia temporal
de los pulsos de radiación como el movimiento relativo, o bien, (b)
pueden simplemente registrar la secuencia temporal de los pulsos de
radiación y, en función de ellos, controlar el movimiento relativo.
En el caso del tipo de control (b) puede reaccionarse, por ejemplo,
a frecuencias de pulso que varíen en función de la carga y de la
alimentación energética de la fuente de radiación láser.
Asimismo, pueden estar previstos medios de
control que estén conectados con medios para registrar el movimiento
relativo entre el foco de radiación y el soporte y que controlen la
secuencia temporal de las pausas de radiación en función del
movimiento relativo. Esta forma de realización resulta ventajosa,
especialmente si tiene lugar un control manual del movimiento
relativo por el usuario del micrótomo. También estos medios de
control sirven para la sincronización de los pulsos de la radiación
láser con el movimiento relativo entre el foco de radiación y el
soporte. Así, en función del movimiento relativo controlado
manualmente puede controlarse la actuación o la interrupción de la
radiación láser pulsada por los medios de control. De esta manera,
se puede evitar que en caso de movimientos relativos rápidos no se
produzca ninguna separación o sólo una separación incompleta en la
superficie de separación, ya que en este caso puede elevarse la
frecuencia de pulsos o la duración de actuación. Asimismo, se puede
evitar que se introduzca una energía de radiación demasiado elevada
en un lugar, cuando no tiene lugar ningún movimiento relativo o un
movimiento relativo lento, ya que, en este caso, los medios de
control pueden reducir la frecuencia y/o la duración de actuación o
impedir por completo la actuación del foco de radiación en el lugar
de la superficie de separación.
Según otra forma de realización ventajosa están
previstos medios para el control del movimiento relativo entre el
soporte y el foco de radiación a lo largo de una superficie de
separación curvada. Para dirigir el movimiento de relativo a lo
largo de una superficie de separación curvada, generalmente, es
preciso realizar el movimiento relativo en al menos dos,
generalmente en tres direcciones en el espacio. El movimiento
relativo puede lograrse mediante medios para el guiado o medios
para el enfoque de la radiación láser, o bien, mediante un
dispositivo de movimiento que actúe en conjunto con el soporte o la
fuente de radiación láser, o bien, mediante una combinación de los
medios citados anteriormente. Con la forma de realización ventajosa,
de los objetos de examen con una superficie curvada puede separarse
una fina rodaja paralela a la superficie. Además, con esta forma de
realización se consigue separar de un objeto de tratamiento una
fina rodaja situada en cualquier orientación y configuración en el
objeto de tratamiento.
El movimiento relativo entre el foco de
radiación y el soporte puede producirse de forma automática o
manual. La dirección manual puede realizarse, por ejemplo, a través
de una unidad de mando que actúe en conjunto con los medios de
dirección, por ejemplo un joystick, que permita al usuario la
dirección manual del movimiento relativo mediante el medio de
enfoque, los medios de guiado y/o el dispositivo de movimiento.
El micrótomo según la invención comprende, de
manera ventajosa, medios para observar el objeto de tratamiento.
Los medios de observación pueden estar configurados, por ejemplo,
como lupa, microscopio o similar. Sirven, por ejemplo, para
preparar el procedimiento de separación de material, realizando con
la ayuda de los medios de observación una definición de la
orientación y configuración de la superficie de separación y, por
consiguiente, del movimiento relativo entre el foco de radiación y
el soporte. Asimismo, los medios de observación pueden servir para
observar el procedimiento de separación de material mismo, por
ejemplo, para realizar de esta manera un control del movimiento
relativo ejercido automáticamente o para realizar un control manual
del movimiento relativo.
Los medios de observación pueden comprender,
especialmente, un microscopio óptico que pueda hacerse funcionar
según el procedimiento de luz incidente y/o de luz transmitida.
Resulta especialmente idóneo un microscopio óptico, cuyo eje de
radiación se sitúe aproximadamente de forma paralela al eje de
radiación del rayo láser, en la zona del foco de radiación,
coincidiendo especialmente con éste. Además, resulta adecuado
especialmente un microscopio óptico que pueda trabajar no sólo como
microscopio de luz incidente sino también como microscopio de luz
transmitida, para poder emplear siempre el procedimiento
microscópico adecuado en función de la naturaleza del objeto de
tratamiento, es decir, especialmente de sus dimensiones geométricas
y propiedades de absorción para la observación de la radiación
empleada.
Además, los medios de observación pueden
comprender medios para representar al menos una sección del objeto
de tratamiento, con la ayuda de la radiación láser dispersada hacia
atrás. De este modo, es posible de una manera sencilla una
observación del objeto de tratamiento sin necesidad de dispositivos
de iluminación adicionales.
Los medios de representación citados
anteriormente pueden comprender, en particular, un detector para
detectar la radiación dispersada hacia atrás desde la sección del
objeto de tratamiento, medios para detectar la radiación coherente,
reflejada desde un plano de referencia, y medios para generar una
representación gráfica de la sección del objeto de tratamiento,
mediante la superposición de la radiación láser dispersada hacia
atrás desde la sección del objeto de tratamiento y la radiación
coherente, reflejada desde el plano de referencia. Esta forma de
realización resulta especialmente ventajosa si la intensidad de los
distintos pulsos láser puede ajustarse de tal forma que no se
produzca un efecto de separación de material (un "efecto
fotodisruptivo") y especialmente si la intensidad de los pulsos
láser puede ajustarse más baja para la representación del objeto de
tratamiento que para la separación de material. Gracias a estas
características, se consigue la representación de la muestra con el
método de la tomografía de coherencia óptica (TCO). Una descripción
detallada del procedimiento de representación por TCO se halla en
el documento DE10020559A1, especialmente en sus apartados 0037, 0038
y 0041-0051.
Haciendo referencia a dicha publicación para
información de solicitud de patente, el procedimiento TCO puede
resumirse brevemente como procedimiento de representación en el que
se divide una radiación coherente como, por ejemplo, una radiación
láser, una primera parte de la radiación láser se dirige hacia un
objeto que se ha de representar, en este caso el objeto de
tratamiento, y una segunda parte se dirige hacia un plano de
referencia. Las partes de radiación reflejadas desde el objeto que
se ha de representar y el plano de referencia se detectan y se
ponen en congruencia, y mediante el escaneo tridimensional del
objeto que se ha de representar puede producirse una representación
tridimensional, siendo detectada la interferencia de los pulsos
superpuestos mediante un fotodetector.
Con la ayuda del procedimiento TCO es posible
representar estructuras con una resolución de hasta 1 \mum. El
procedimiento TCO tiene una profundidad de penetración que depende
del poder de absorción del material examinado. Incluso en tejidos
de fuerte dispersión se consigue generalmente una profundidad de
penetración > 2 mm.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Otro aspecto de la invención es un procedimiento
para realizar la microtomía con las características de la
reivindicación 14. El procedimiento resulta especialmente adecuado
para realizarse con el micrótomo según la invención.
Algunas formas de procedimiento ventajosas se
indican en las reivindicaciones 15 - 21 y corresponden a una
realización del procedimiento mediante formas de realización
ventajosas del micrótomo según la invención. A este respecto, se
remite a la descripción que antecede.
En algunos casos resulta ventajoso que en una
primera fase del procedimiento de corte se separen de la superficie
de separación una o varias zonas distanciadas entre sí, y que en una
última fase del procedimiento de corte se produzca una separación
completa a lo largo de la superficie de separación, siendo separadas
las zonas situadas entre las zonas distanciadas. La división del
procedimiento de separación en una primera fase y una última fase,
pudiendo ser la última fase, por ejemplo, una segunda fase
directamente seguida a la primera fase, resulta ventajosa para
evitar deformaciones durante el procedimiento de separación y para
evitar deformaciones de la fina rodaja separada.
En la primera fase, preferentemente, en varias
zonas delimitadas localmente se provoca una separación de material.
Entre estas zonas permanecen zonas no separadas, es decir,
"puentes". Estos puentes siguen sujetando la rodaja, separada
sólo parcialmente después de la primera fase, al objeto de
tratamiento, evitando de esta manera la deformación de la rodaja.
En las fases siguientes del procedimiento de separación se produce
entonces una separación selectiva de los puentes que pueden ser
detectados con precisión por el foco de radiación debido a las
formas estabilizadas del objeto de tratamiento y la posición
estabilizada de la rodaja que se ha de separar, dentro del objeto
de tratamiento.
Además, gracias a esta variante del
procedimiento se evita que se introduzcan grandes cantidades de
energía en una zona delimitada estrechamente, por lo que se evitan
desventajas como la formación de grandes burbujas de gas o de
cavitación, así como alteraciones del material del objeto de
tratamiento a consecuencia de influjos térmicos. En particular, las
pequeñas burbujitas de gas en la zona de las zonas separadas en la
primera fase pueden haberse emitido ya al entorno cuando se realice
la separación en la última fase.
Otro aspecto de la invención es el uso de un
dispositivo que comprenda un dispositivo de alojamiento con un
soporte para alojar al menos una sección de un objeto de
tratamiento, y un dispositivo de separación, al menos una fuente de
radiación láser y medios para enfocar la radiación láser, pudiendo
moverse el foco de radiación, generado por el enfoque, respecto al
soporte, y dirigirse a un lugar de la superficie de separación del
objeto de tratamiento para provocar en dicho lugar una separación
de material para la microtomía del objeto de tratamiento.
Este modo de uso del dispositivo descrito
anteriormente permite un guiado de libre elección del corte durante
la microtomía. Se puede realizar un corte a una profundidad de libre
elección del objeto de tratamiento y en una posición de libre
elección, siendo influenciados estos parámetros por la abertura y
las propiedades de absorción de radiación del tejido que se ha de
cortar. La superficie de corte no tiene que ser plano en este modo
de uso, pudiendo ser irregular y/o curvada. No es precisa la
fijación del objeto de tratamiento.
Una forma de realización ventajosa del micrótomo
según la invención se describe a continuación, haciendo referencia
a las figuras adjuntas. Muestran:
La figura 1 una representación esquemática del
micrótomo según la invención, y
la figura 2 una representación esquemática, en
sección transversal, de un objeto de tratamiento en un soporte.
El micrótomo representado en la figura 1
presenta una placa de vidrio 3 como soporte para un objeto de
tratamiento ("muestra") 4. La placa de vidrio 3 está unida con
una unidad de desplazamiento XYZ 2. Al colocar la muestra 4 sobre
la placa de vidrio 3, en el caso de muestras flexibles, blandas se
consigue un alisamiento ventajoso. Este efecto alisador puede
aumentarse eventualmente mediante una segunda placa de vidrio (no
representada), introduciendo y prensando la muestra entre dicha
segunda placa de vidrio y la placa de vidrio 3.
En una cara de la placa de vidrio 3 está
dispuesto un objetivo de enfoque 6 que presenta varias lentes (no
representadas) dispuestas en forma de telescopio. La distancia entre
las lentas y la distancia de las lentes respecto a la placa de
vidrio 3 puede variarse. De esta manera se modifica la
divergencia/convergencia de un rayo láser 11 que pasa a través del
objetivo de enfoque 6. El eje óptico 7 del objetivo de enfoque 6 es
perpendicular al plano de la placa de vidrio 3.
También en el eje óptico 7 del objetivo de
enfoque 6, en la cara de la placa de vidrio 3, opuesta al objetivo
de enfoque 6, está dispuesta una fuente de luz adicional 16. La
fuente de luz adicional 16 sirve para iluminar la muestra 4 para
representar la muestra o partes de la muestra mediante un
procedimiento óptico por microscopio de luz transmitida.
La unidad de desplazamiento XYZ 2 va fijada a
una carcasa 1. A dicha carcasa 1 va fijada también la fuente de luz
adicional 16. Dentro de la carcasa 1 están dispuestos el objetivo de
enfoque 6 y un generador láser 10 con una fuente de radiación láser
que emite el rayo láser 11. Inicialmente, el rayo láser 11 se
extiende de forma aproximadamente paralela respecto al plano de la
placa de vidrio 3, siendo desviado para ello en aprox. 90º mediante
un espejo 12 parcialmente permeable, y después se extiende
coaxialmente respecto al eje óptico del objetivo de enfoque 6.
Al girar o desplazar el espejo 12 es posible
acodar el rayo láser respecto al eje óptico 7 y, por tanto,
desplazar el foco de radiación del rayo láser en las direcciones
paralelas respecto al plano de la placa de vidrio 3. Al espejo 12
va fijado un dispositivo de movimiento 30 que sirve para desplazar y
girar el espejo. Preferentemente, el espejo puede girarse en dos
ejes perpendiculares uno respecto al otro, situándose su punto de
intersección, preferentemente, en el eje central del rayo láser 11.
El dispositivo de movimiento 30 está conectado con un ordenador 14
que controla el giro del espejo 12 y, por tanto, el ángulo de
desviación del rayo láser por el espejo 12. Un giro del espejo 12
desde la posición representada en la figura 1 provoca una
modificación de la trayectoria del rayo en la zona entre el espejo
12 y la muestra 4. De esta forma, el rayo láser especialmente ya no
se extiende coaxialmente respecto al eje óptico del objetivo de
enfoque 6.
Entre el espejo 12 parcialmente permeable y el
generador de láser 10 con la fuente de radiación láser está
dispuesto un dispositivo de enfoque previo 13 en el eje de radiación
del rayo láser 11, que permite modificar la divergencia o
convergencia del rayo láser. Por la modificación de la divergencia o
convergencia puede desplazarse la posición del foco de radiación en
la dirección de radiación detrás del objetivo de enfoque 6, a lo
largo del eje óptico del objetivo de enfoque 6. El dispositivo de
enfoque previo 13 se compone de varias lentes (no representadas),
preferentemente de dos lentes dispuestas en forma de telescopio y
cuya distancia entre ellas puede modificarse para modificar de esta
manera la divergencia/convergencia del rayo láser.
Entre el espejo 12 parcialmente permeable y el
objetivo de enfoque 6 está dispuesto un espejo de iluminación 12a
parcialmente permeable en la trayectoria del rayo láser 11. Por el
espejo de iluminación 12a, la luz emitida desde una fuente de luz 5
dispuesta al lado del rayo láser para iluminar la muestra es
proyectada a la muestra para permitir la representación
microscópica de la muestra 4 mediante el procedimiento microscópico
de luz incidente.
El rayo láser 11 no es desviado por el espejo de
iluminación 12a parcialmente permeable, sino que atraviesa dicho
espejo de iluminación en dirección hacia el objetivo de enfoque
6.
Detrás del espejo 12 parcialmente permeable, en
el eje óptico 7 está dispuesta una cámara digital 8. Dicha cámara
digital 8 detecta la radiación reflejada por la muestra 4 o la
radiación emitida por la fuente de luz adicional 16, que atraviesa
la muestra. La cámara digital 8 está conectada con el ordenador 14
que procesa los datos de video transmitidos por la cámara 8
emitiendo una representación de la muestra 4 en un monitor 15.
En lugar de la cámara 8 también puede estar
previsto un dispositivo ocular (no representado) que permite la
observación directa de la muestra. Además, puede estar previsto un
dispositivo ocular con una cámara digital 8 montada en él, que
permita tanto una observación directa como una observación de la
muestra en el monitor.
Entre el dispositivo de enfoque previo 13 y el
generador de láser 12 con la fuente de radiación láser está
dispuesto un espejo de desviación 12b parcialmente permeable en la
trayectoria del rayo láser 11. El espejo de desviación 12b
parcialmente permeable desvía una parte de la radiación láser
reflejada por el objeto de examen 4 hacia una unidad de detección
TCO 9. La unidad de detección TCO 9 está conectada con el ordenador
14 y transmite datos de video a dicho ordenador 14 que a partir de
ellos calcula una representación de la muestra mediante el método
de la tomografía de coherencia óptica emitiendo dicha representación
por el monitor 15. Alternativamente, esta representación de la
muestra mediante el método de la tomografía de coherencia óptica
puede calcularse ya en la unidad de detección TCO 9 y representarse
directamente en una pantalla o similar o transmitirse al ordenador
14 para su representación.
El ordenador 14 sirve además para dirigir el
movimiento relativo entre el foco de radiación y la placa de vidrio
3 que sirve de soporte para la muestra 4. Para este fin, el
ordenador 14 está conectado con el dispositivo de enfoque previo
13, el dispositivo de movimiento 30 y la unidad de desplazamiento
XYZ 2.
Además, el ordenador 14 controla la conexión y
desconexión del generador de láser 10 con la fuente de radiación
láser y la actuación pulsada del foco de radiación del rayo láser en
el lugar de la superficie de separación de la muestra 4. Para este
fin, el ordenador 14 está conectado con el generador de láser 10
dotado de la fuente de radiación láser.
Por lo tanto, el ordenador 14 puede realizar
también una coordinación entre la radiación láser pulsada, es
decir, la frecuencia de pulsos y la duración de actuación, y el
movimiento relativo entre el foco de radiación y la muestra o placa
de vidrio 3, que se consigue mediante el desplazamiento de la unidad
de desplazamiento XYZ, la modificación de la
convergencia/divergencia en el dispositivo de enfoque previo 13 y/o
el giro/desplazamiento del dispositivo de movimiento 30.
Como se puede ver en la figura 2, la muestra 4,
sujeta por la fuerza de gravedad, yace de forma enrasada sobre la
placa de vidrio 3. En la muestra 4 existen varias inclusiones 21 que
pueden ser burbujas de gas, cuerpos sólidos de otra consistencia o
similares.
El rayo láser 11 atraviesa la placa de vidrio 3
perpendicularmente respecto al plano de dicha placa, como rayo
convergente 17. Por la convergencia del rayo 17 se genera un foco de
radiación 22 que en un lugar de una superficie de separación 19
provoca una separación de material. Al desplazar la placa de vidrio
3 en una dirección perpendicular respecto al eje longitudinal del
rayo láser 11 ó 17, el foco de radiación 22 se mueve a lo largo de
la superficie de separación 19.
Además, el micrótomo según la invención permite,
mediante el movimiento de la placa de vidrio 3 en las tres
direcciones en el espacio, el guiado del foco de radiación 22 a lo
largo de una superficie de separación curvada, por ejemplo, para
originar una concavidad tal como está representada por ejemplo como
superficie de separación 20, por ejemplo en la figura 2. La
componente del movimiento de desplazamiento en la dirección del eje
longitudinal del rayo láser 11 ó 17 puede lograrse también
modificando la convergencia/divergencia en el dispositivo de
enfoque previo 13. Para guiar el foco de radiación 22 a lo largo de
la superficie de separación 20, en este caso, un movimiento de
desplazamiento de la placa de vidrio 3 en dos direcciones en el
espacio (dirección XY) se combina con una modificación de la
posición del foco de radiación en relación con la placa de vidrio 3
en una dirección perpendicular respecto a la dirección XY, mediante
la modificación de la convergencia/divergencia por medio del
dispositivo de enfoque previo 13.
La luz láser que incide en el foco de radiación
22 a través del rayo láser 17 convergente (flecha A en la figura 1)
es reflejada parcialmente por el material de la muestra 4 en la zona
del foco de radiación y proyectada hacia atrás en forma de un rayo
láser de reflección 18 divergente (flecha B en la figura 1). El rayo
láser de reflección 18 atraviesa el objetivo de enfoque 6 y el
dispositivo de enfoque previo 13 en la dirección contraria a la del
rayo láser, emitido por la fuente de radiación láser, en su trayecto
hacia la muestra 4. El rayo láser de reflección 18 puede ser
detectado por la unidad de detección TCO y utilizarse para la
representación de la muestra mediante el procedimiento de la
tomografía de coherencia óptica.
En una forma de realización ventajosa del
procedimiento de microtomía según la invención con el micrótomo
según la invención, el usuario define en primer lugar, por ejemplo
con la ayuda de una reproducción de la muestra 4 obtenida mediante
la cámara 8 o la unidad de detección TCO, un borde de una superficie
(por ejemplo, un rectángulo o un círculo) y, a continuación,
indicando la profundidad de corte define el volumen que se ha de
extraer. Entonces, este volumen se separa mediante la exploración
automática mediante el movimiento relativo del foco de radiación a
lo largo de la superficie predefinida, a la profundidad predefinida
y rodeando la superficie a continuación varias veces a lo largo de
sus bordes, acercando el foco de radiación al mismo tiempo, de
forma continua o gradual, desde la profundidad de la muestra hasta
la superficie.
Claims (22)
1. Micrótomo que comprende:
- -
- un dispositivo de alojamiento con un soporte (3) para alojar al menos una sección de un objeto de tratamiento (4), y
- -
- un dispositivo de separación (6, 10, 13),
- -
- al menos una fuente de radiación láser (10) y
- -
- medios para el enfoque (6; 13) de la radiación láser,
en el que el foco de radiación (22) generado por
el enfoque
- -
- puede moverse respecto al soporte (3),
- -
- y dirigirse a un lugar de las superficies de separación (19; 20) del objeto de tratamiento (4) para provocar en dicho lugar una separación de material,
caracterizado porque están previstos
medios para la introducción pulsada (14) del foco de radiación en el
lugar de la superficie de separación, que están concebidos para
generar pulsos con una duración de actuación < 1*10^{-12}
segundo y porque el micrótomo está configurado para generar una zona
de superficie de separación, situada paralelamente respecto a la
superficie.
2. Micrótomo según la reivindicación 1,
caracterizado porque los medios para el enfoque (6; 13) de la
radiación láser están concebidos para mover el foco de radiación en
al menos una dirección en el espacio, respecto al soporte.
3. Micrótomo según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque están previstos medios para guiar (12)
la radiación láser para mover el foco de radiación en al menos una
dirección en el espacio, respecto al soporte.
4. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque los medios para el enfoque
(6; 13) de la radiación láser presentan una abertura numérica \geq
0,65, preferentemente una abertura numérica \geq 1,2.
5. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque los medios para la
introducción pulsada están concebidos para interrumpir el rayo de
forma pulsada y/o desviarlo del lugar de la superficie de
separación.
6. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque los medios para la
introducción pulsada actúan en conjunto con la fuente de radiación
para interrumpir el rayo de forma pulsada.
7. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque están previstos medios de
control (14)
- -
- que controlan la secuencia temporal de las pausas de radiación y/o que están conectados con medios para detectar las secuencias temporales de las pausas de radiación y/o
- -
- que controlan el movimiento relativo entre el foco de radiación y el soporte en función de la secuencia temporal de las pausas de radiación.
8. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque están previstos medios de
control
- -
- que están conectados con medios para detectar el movimiento relativo entre el foco de radiación y el soporte, y
- -
- que controlan la secuencia temporal de las pausas de radiación en función del movimiento relativo.
9. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque están previstos medios para
dirigir el movimiento relativo entre el soporte (3) y el foco de
radiación (22) a lo largo de una superficie de separación (20)
curvada.
10. Micrótomo según una de las reivindicaciones
precedentes, caracterizado porque están previstos medios para
la observación (9, 8, 14, 15, 5, 16) del objeto de tratamiento.
11. Micrótomo según la reivindicación 10,
caracterizado porque los medios de observación comprenden un
microscopio óptico que puede hacerse funcionar según el
procedimiento de luz incidente y/o de luz transmitida.
12. Micrótomo según la reivindicación 10 u 11,
caracterizado porque los medios de observación comprenden
medios (9, 14) para la representación de al menos una sección del
objeto de tratamiento, con la ayuda de la radiación láser dispersada
hacia atrás.
13. Micrótomo según la reivindicación 12,
caracterizado porque los medios de representación
comprenden:
- -
- un detector (9) para registrar la radiación dispersada hacia atrás desde la sección del objeto de tratamiento,
- -
- medios para registrar (9) la radiación coherente, reflejada desde un plano de referencia, y medios para generar (9, 14) una representación gráfica de la sección del objeto de tratamiento mediante la superposición de la radiación láser dispersada hacia atrás desde la sección del objeto de tratamiento y la radiación coherente, reflejada desde el plano de referencia.
14. Procedimiento para la microtomía de objetos
de tratamiento (4), con los siguientes pasos:
- -
- alojamiento de al menos una sección del objeto de tratamiento por un soporte (3) de un dispositivo de alojamiento,
- -
- separación al menos parcial del objeto de tratamiento mediante un dispositivo de corte,
- -
- siendo emitida una radiación láser (11) por una fuente de radiación (10) asignada al dispositivo de corte y
- -
- siendo enfocada una radiación láser y
caracterizado porque el foco de radiación
(22) es guiado de forma pulsada, con una duración de actuación de
un pulso < 1*10^{-12} segundo, a un lugar de una zona de la
superficie de separación (19; 22) de un objeto de tratamiento,
situada paralelamente respecto a la superficie, para generar en
dicho lugar una separación de material, siendo movido el foco de
radiación (22) en dos o tres direcciones en el espacio respecto al
soporte (3), de tal forma que el objeto de tratamiento se someta a
microtomía.
15. Procedimiento según la reivindicación 14,
caracterizado porque el foco de radiación es guiado a lo
largo de una superficie curvada (20).
16. Procedimiento según la reivindicación 14 ó
15, caracterizado porque la secuencia de los pulsos y el
movimiento relativo entre el soporte y el foco de radiación son
controlados entre sí en cuanto al tiempo.
17. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 14 a 16, caracterizado porque la superficie
de separación se predetermina antes del proceso de corte y el foco
de radiación es guiado automáticamente a lo largo de dicha
superficie de separación.
18. Procedimiento según la reivindicación 17,
caracterizado porque antes del procedimiento de corte se
realiza una representación de al menos una sección del objeto de
tratamiento mediante un procedimiento de representación por
microscopio óptico y la predeterminación de la superficie de
separación se realiza a base de dicha representación.
19. Procedimiento según la reivindicación 17,
caracterizado porque antes del procedimiento de corte se
realiza una representación de al menos una sección del objeto de
tratamiento, mediante el procedimiento de la tomografía de
coherencia óptica, y la predeterminación de la superficie de
separación se realiza a base de dicha representación.
20. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 14 a 17, caracterizado porque durante el
procedimiento de corte se realiza una reproducción de al menos una
sección del objeto de tratamiento mediante un procedimiento de
representación por microscopio óptico y/o el procedimiento de la
tomografía de coherencia óptica, y se le facilita al usuario una
reproducción de dicha representación, con cuya ayuda puede guiar el
foco de radiación.
21. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 14 a 20, caracterizado porque en una primera
fase del procedimiento de corte se separan de la superficie de
separación una o varias zonas distanciadas entre sí, y en una
última fase del procedimiento de corte se produce una separación
completa a lo largo de la superficie de separación, siendo
separadas las zonas situadas entre las zonas distanciadas.
22. Uso de un dispositivo que comprende
- -
- un dispositivo de alojamiento con un soporte (3) para alojar al menos una sección de un objeto de tratamiento (4), y
- -
- un dispositivo de separación (6, 10, 13),
- -
- al menos una fuente de radiación láser (10) y
- -
- medios para el enfoque (6; 13) de la radiación láser,
en el que el foco de radiación (22) generado por
el enfoque
- -
- puede moverse respecto al soporte (3),
caracterizado porque el foco de radiación
puede guiarse a un lugar de la zona de la superficie de separación
(19; 20) del objeto de tratamiento (4), situada paralelamente
respecto a la superficie, para provocar en dicho lugar una
separación de material para someter a microtomía un objeto de
tratamiento (4), y porque están previstos medios para la
introducción pulsada (14) del foco de radiación en el lugar de la
superficie de separación, que están configurados para generar
pulsos con una duración de actuación < 1*10^{-12} segundo.
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