ES2393951A1

ES2393951A1 - Derivados de galatos de alquilo como antioxidantes y surfactantes

Info

Publication number: ES2393951A1
Application number: ES201130985A
Authority: ES
Inventors: Juan Carlos Morales Sánchez; Ricardo LUCAS RODRÍGUEZ; Olivia SÁNCHEZ MALDONADO; Francesc Comelles Folch; José Luis Parra Juez; Isabel Medina Mendez
Original assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Current assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Priority date: 2011-06-14
Filing date: 2011-06-14
Publication date: 2013-01-02
Anticipated expiration: 2031-06-14
Also published as: WO2012172143A3; ES2393951B1; WO2012172143A2

Abstract

Derivados de galatos de alquilo como antioxidantes y surfactantes.Compuesto de fórmula general (I) o una de sus sales, donde: R1 representa a CH2OH o COOH y R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal o ramificada, donde la cadena hidrocarbonada puede opcionalmente presentar una o varias insaturaciones elegidas independientemente entre insaturaciones de tipo alquenilo o alquinilo; siempre que, cuando R1 representa CH2OH y R2 representa una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, opcionalmente con una o varias insaturaciones alquenilo, la longitud de la cadena hidrocarbonada es C4-C12. Su procedimiento de obtención y su uso como surfactante y oxidante, en particular como parte de una composición en forma de emulsión.

Description

Derivados de galatos de alquilo como antioxidantes y surfactantes.

5 La presente invención se refiere a un grupo de compuestos derivados de galatos de alquilo con propiedades antioxidantes y surfactantes, a su procedimiento de obtención y a su uso como antioxidante en composiciones alimentarias, cosméticas y farmacéuticas, preferentemente en forma de emulsión.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

10 Los antioxidantes son compuestos capaces de retardar o prevenir la oxidación de otras moléculas o materiales. La oxidación es un proceso que deteriora el estado de todo tipo de materiales. Por esta razón los antioxidantes se usan principalmente como conservantes de alimentos y cosméticos, así como en otros procesos tales como en la prevención de la degradación del caucho y la gasolina.

15 En el caso de los alimentos, las emulsiones son especialmente sensibles a la oxidación. Los antioxidantes que se vienen utilizando para conservar las emulsiones son los tocoferoles y derivados de tocoferol (EP1634502), el ácido ascórbico y el ascorbil palmitato, el butil-hidroxi-anisol (BHA) y el butil-hidroxi-tolueno (BHT) y algunos galatos de alquilo como el galato de propilo, galato de octilo y galato de dodecilo (US6261541).

20 Una serie de derivados de galatos de alquilo se describieron como agentes blaqueantes de la piel y antioxidantes donde el grupo alquilo podía ser de longitud C1-C18 e incluir alguna insaturación y alguno de los grupos hidroxilos podían estar sustituidos por un monosacárido (US7282520B2, JP2004075815 y JP2000319116).

25 Recientemente se han descrito un nuevo tipo de compuestos, los fenoles lipídicos, que están demostrando gran efectividad como antioxidantes en emulsiones. Es el caso de los ésteres de ácido clorogénico (Laguerre y col. J. Agric. Food Chem. 2010, 2869), los ésteres del ácido rosmarínico (Laguerre y col. J. Agric. Food Chem. 2009, 11335) y los ésteres de hidroxitirosol (Medina y col. J. Agric. Food Chem. 2009, 9773), donde precisamente los derivados modificados con cadenas alquílicas de tamaño medio (C8-C12) son los antioxidantes más eficaces.

30 Adicionalmente, se ha demostrado para el caso de los ésteres de hidroxitirosol que los antioxidantes más eficaces, el octanoato de hidroxitirosol y el decanoato de hidroxitirosol además también son los mejores surfactantes de la serie de derivados alquílicos (Lucas y col. J. Agric. Food Chem. 2010, 9778).

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

35 La presente invención proporciona un grupo de compuestos derivados de galatos de alquilo que debido a sus propiedades antioxidantes y surfactantes, pueden ser usados como antioxidantes en emulsiones y por lo tanto tener aplicación en productos alimentarios, agroquímicos, cosméticos, de higiene personal o en productos farmacéuticos.

40 En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general (I)

OH

o una de sus sales, donde:

R1 representa a CH2OH o COOH y R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal o ramificada, donde la

45 cadena hidrocarbonada puede opcionalmente presentar una o varias insaturaciones elegidas independientemente entre insaturaciones de tipo alquenilo o alquinilo;

siempre que, cuando R1 representa CH2OH y R2 representa una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, opcionalmente con una o varias insaturaciones alquenilo, la longitud de la cadena hidrocarbonada es C4-C12.

En una realización preferida de los compuestos de fórmula general (I), el anillo de piranosa es una glucosa.

En otra realización preferida de la presente invención, el anillo de piranosa del compuesto de fórmula general (I) representa un ácido glucurónico.

En otra realización preferida adicional, el compuesto de fórmula (I) de la presente invención se caracteriza porque la unión del monosacárido, preferentemente glucosa o ácido glucurónico, al anillo fenólico puede ser alfa o beta. Preferentemente, dicha unión es beta.

En los compuestos de fórmula general (I), R2 es una cadena hidrocarbonada que puede ser lineal o ramificada. Además, esta cadena hidrocarbonada puede ser una cadena saturada, monoinsaturada o poliinsaturada. Así mismo, las insaturaciones pueden ser de tipo alquenilo, alquinilo o de ambos. Preferentemente, R2 es una cadena hidrocarbonada saturada.

En otra realización preferida adicional, el compuesto de fórmula (I) se caracteriza porque cuando R1 = CH2OH y el anillo de piranosa representa glucosa, R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C12 lineal, siendo preferente que R2 sea una cadena hidrocarbonada C4-C12 lineal y saturada.

De forma más preferente, el compuesto de fórmula (I) se caracteriza porque la unión de la glucosa con el anillo fenólico tiene estereoquímica beta y R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C12 lineal, siendo preferente que R2 sea una cadena hidrocarbonada C4-C12 lineal y saturada.

De forma aún más preferente, el compuesto de fórmula (I) de la presente invención, cuando R1 es glucosa, se elige entre el grupo que consiste en:

3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de butilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de decilo, y 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de dodecilo.

De forma especialmente preferente, el compuesto de fórmula (I) de la presente invención, cuando R1 es glucosa, se elige entre el grupo que consiste en:

3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo, y 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de decilo.

En otra realización preferida adicional, el compuesto de fórmula (I) se caracteriza porque cuando R1 = COOH y el anillo de piranosa representa ácido glucurónico, R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal, siendo preferente que R2 es una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal y saturada.

De forma aún más preferente R2 es una cadena hidrocarbonada C8-C16 lineal y saturada.

De forma especialmente preferente, el compuesto de fórmula (I) se caracteriza porque la unión del ácido glucurónico con el anillo fenólico tiene estereoquímica beta y R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal. Preferentemente, R2 es una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal y saturada.

De forma aún más preferente, R2 es una cadena hidrocarbonada C8-C16 lineal y saturada.

De forma especialmente preferente, el compuesto de fórmula (I) de la presente invención, cuando R1 es ácido glucurónico, se elige entre el grupo que consiste en:

3-O-(�-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo, y 3-O-(�-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexadecilo

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere al procedimiento de obtención del compuesto de fórmula general (I) de la invención, que comprende las siguientes etapas:

a.: protección mediante un grupo acetal de dos grupos fenólicos contiguos del correspondiente galato de acilo (II), donde R2 tiene el mismo significado que en el compuesto de fórmula (I) para obtener el derivado (III);

b.: reacción de (III) con el donador de glicosilo (IV), donde R1 representa a CH2OH o COOH y X representa a un grupo saliente para dar el derivado (V);

c.: desprotección del grupo acetal del derivado (V) para obtener (VI);

d.: desprotección del resto de grupos protectores del derivado (VI) para obtener el compuesto de fórmula general (I),

donde el orden de las etapas de desprotección c y d se puede invertir.

El procedimiento de la invención se puede observar en el siguiente esquema:

R1O X

OH O O(IV) HO OH HO O OAc R1OO OAcO OAc

AcO OAc

O OR2 O OR2 OAc (V) O OR2(II) (III)

OH OH R1O O

OHOH R1OO

AcO HO OAc OH

(I)

OAc OH (VI) O OR2 O OR2

En una realización preferida, el compuesto (III) se prepara por reacción de (II) con un dimetil acetónido y un ácido en un disolvente orgánico para formar el grupo dimetil acetal. Preferentemente, el dimetil acetónido puede ser acetona

: o dimetoxipropano y en una realización más preferida puede ser dimetoxipropano. Preferentemente, el ácido puede ser ácido canforsulfónico, ácido toluensulfónico, ácido acético, ácido fosfórico o ácido cítrico y en una realización más preferida puede ser ácido canforsulfónico. Preferentemente, el disolvente puede ser cloroformo, diclorometano, tetrahidrofurano o éter etílico y en una realización más preferida puede ser cloroformo.

En una realización preferida, el compuesto (V) se prepara por reacción de (III) con un dador de glicosilo (IV) en presencia de un catalizador y en un disolvente orgánico. El sustituyente X es un grupo saliente habitual en química orgánica tal como, por ejemplo, Cl, F, SPh, ONHCCl3. Preferentemente, el dador de glucosilo (IV) puede ser el tricloroacetimidato de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucopiranosilo, el cloruro de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucopiranosilo, el fluoruro de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucopiranosilo, el tiofenilo de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucopiranosilo, el cloruro de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucurunopiranosilo, el fluoruro de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucurunopiranosilo, el tiofenilo de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucurunopiranosilo y en una realización más preferida puede ser el tricloroacetimidato de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucopiranosilo (Schmidt, R. R.; Kinzy, W. Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 1994, 50, 21–123)

: o el tricloroacetimidato de 2,3,4-O-triacetil glucurunopiranosilo (Lucas y col. Carbohydrate Res. 2009, 344, 1340). El catalizador puede ser preferentemente trifluoro boro eterato, ácido tríflico o triflato de trimetilsililo y en una realización más preferida puede ser trifluoro boro eterato. El disolvente orgánico puede ser diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano o éter etílico y en una realización más preferida puede ser diclorometano.

En una realización preferida, el compuesto (VI) se obtiene por tratamiento del compuesto (V) con un ácido fuerte. Preferentemente, el ácido puede ser ácido trifluoroacético, ácido perclórico, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico o ácido bromhídrico y en una realización más preferida puede ser ácido trifluoroacético.

En una realización preferida, el compuesto (I) se obtiene por tratamiento del compuesto (VI) con medio básico en un disolvente orgánico protonado. Preferentemente, el medio básico puede ser carbonato sódico, carbonato potásico, o hidróxido de amonio y en una realización más preferida puede ser carbonato sódico. Preferentemente, el disolvente puede ser metanol, etanol, tert-butanol y en una realización más preferida puede ser metanol. De forma especialmente preferente, la desprotección del compuesto (VI) para obtener el compuesto (I) tiene lugar con carbonato sódico en metanol.

En una realización especialmente preferida, el procedimiento de obtención del compuesto de fórmula general (I) de la invención, comprende las siguientes etapas:

a.: protección mediante un dimetil acetal de dos grupos fenólicos contiguos del correspondiente galato de acilo (II), donde R2 tiene el mismo significado que en el compuesto de fórmula (I) para obtener el derivado (III);

b.: reacción de (III) con el donador de glicosilo (IV) elegido entre el grupo que consiste en tricloroacetimidato de 2,3,4,6-tetra-O-acetil-D-glucopiranosilo y tricloroacetimidato de 2,3,4-tri-O-acetil-D-glucurunopiranosilo;

c.: desprotección del grupo acetal del derivado (V) para obtener el compuesto de fórmula general (VI) mediante tratamiento con un ácido fuerte;

d.: desprotección del resto de grupos protectores del derivado (VI) para obtener (I) con una base en un disolvente orgánico protonado;

donde el orden de las etapas de desprotección c y d se puede invertir.

Un tercer aspecto de la presente invención se refiere al uso de los compuestos de fórmula general (I) de la invención como antioxidantes en productos alimentarios, agroquímicos, cosméticos, de higiene personal o en productos farmacéuticos.

En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de los compuestos de fórmula (I) descritos anteriormente como surfactantes, en particular en productos alimentarios, agroquímicos, cosméticos-dermatológicos, de higiene personal o farmacéuticos.

Debido al carácter anfifílico de estos derivados de galatos de alquilo, los compuestos de fórmula (I) descritos en la presente invención poseen propiedades surfactantes, además de antioxidantes, lo que los convierte en aditivos muy útiles para ser usados en productos de las industrias agroquímica, alimentaria, cosmética-dermatológica y farmacéutica.

Los compuestos de la presente invención son adecuados para usarse como antioxidantes o/y surfactantes en preparaciones alimenticias, en particular como parte de una composición en forma de emulsión, tales como, pero sin limitarse a, alimentos en general, complementos alimenticios, alimentos funcionales o nutracéuticos. Asimismo se pueden usar en productos cosméticos o dermatológicos tales como, pero sin limitarse a, productos de higiene personal (jabón, champú gel, desodorante, cremas, lociones etc.) o productos para el bronceado y para la protección solar que pueden presentarse en forma de aceite, loción, gel, spray o crema.

Los compuestos de la presente invención son adecuados también como antioxidantes o/y surfactantes en productos agroquímicos tales como, pero sin limitarse a, herbicidas, pesticidas o insecticidas.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y gráficas se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

Listado de compuestos

Hidroxitirosol 1 Octanoato de hidroxitirosol 2 Ácido gálico 3 Galato de butilo 4 Galato de hexilo 5 Galato de octilo 6 Galato de decilo 7 Galato de dodecilo 8 Galato de hexadecilo 9 Galato de octadecilo 10 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de butilo 11 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexilo 12 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo 13 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de decilo 14 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de dodecilo 15 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexadecilo 16 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octadecilo 17 3-O-(D-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de butilo 18 3-O-(D-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo 19 3-O-(D-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexadecilo 20

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

FIG. 1. Medidas de tensión superficial frente a logaritmo de la concentración de la serie de galatos de alquilo 4-9 (el ácido gálico 3 se incluye como referencia).

FIG. 2. Medidas de tensión superficial frente a logaritmo de la concentración de la serie de glucosil galatos de alquilo 11-16 (el ácido gálico 3 se incluye como referencia).

FIG. 3. Medidas de tensión superficial frente a logaritmo de la concentración de la serie de glucurunosil galatos de alquilo 18-20 (el ácido gálico 3 se incluye como referencia).

FIG. 4. Relación entre el logaritmo de la cmc y la longitud de la cadena alquílica de la serie de derivados galatos de alquilo, para aquellos compuestos que muestran propiedades surfactantes.

FIG. 5. Relación entre la tensión superficial a la CMC y la longitud de la cadena alquílica de las series de galatos de alquilo 4-8, glucosil- y glucurunosil galatos de alquilo 11-15 y 18-20, respectivamente.

EJEMPLOS

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la efectividad de los compuestos de la invención.

EJEMPLO 1.- Síntesis de compuestos de formula general (I).

R1O X

OH O O(IV) HO OH HO O AcO

OAc R1OO O OAc AcO

OAc

O OR2 O OR2 OAc (V) O OR2(II) (III)

OH OH R1O O

OHOH R1OO

AcO HO OAc OH

(I)

OAc OH (VI) O OR2 O OR2

En general, estos compuestos se obtienen a partir de los correspondientes galatos de alquilo (II) que están disponibles comercialmente. La ruta sintética seguida se refleja a continuación:

Procedimiento general para la preparación de los derivados de tipo (III).

Los galatos de alquilo (II) se disuelven junto con cantidades catalíticas de ácido canforsulfónico en cloroformo seco. A continuación se añade 2,2-dimetoxipropano y la mezcla de reacción se agita a 60ºC durante 16 horas. Se añade trietilamina para neutralizar el medio ácido de la reacción y se evapora el disolvente en un rotavapor. El crudo de la reacción se purifica por cromatografía flash en silica gel utilizando mezclas de acetato de etilo y hexano como eluyentes, que varían en función de la diferente polaridad del grupo alquilo que contiene el compuesto. Los rendimientos de la reacción variaron entre el 40 y 60%.

Procedimiento general para la preparación de los derivados de tipo (V).

Los derivados de galatos de alquilo protegidos (III) (1 eq.) se disuelven junto el dador de glicosilo (IV) que será el tricloroacetimidato de 2,3,4,6-O-tetraacetil glucopiranosilo (1.2-1.5 eq.) o el tricloroacetimidato de 2,3,4-O-triacetil glucurunopiranosilo (1.2-1.5 eq.) en diclorometano seco (1 mL para cada 100 mg de derivado de alquil galato). A continuación se añade trifluoro boro eterato (0.1-0.15 eq.) y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 30-60 minutos. Se termina la reacción por adición de trietilamina. Se elimina el disolvente en un rotavapor y el crudo de la reacción se purifica por cromatografía flash en silica gel utilizando mezclas de acetato de etilo y hexano como eluyentes, que varían en función de la diferente polaridad del grupo alquilo que contiene el compuesto. Los rendimientos de la reacción variaron entre el 75 y 95%.

Procedimiento general para la preparación de los derivados de tipo (VI).

Los derivados protegidos de glicosil galatos de alquilo (V) se disuelven en ácido trifluoroacético puro seco (1 mL para cada 100 mg de derivado de glicosil alquil galato). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 24 horas. Se elimina el disolvente en un rotavapor y se co-evapora el crudo de reacción 2-3 veces con tolueno. Finalmente, el crudo de la reacción se purifica por cromatografía flash en silica gel utilizando mezclas de acetato de etilo y hexano como eluyentes, que varían en función de la diferente polaridad del grupo alquilo que contiene el compuesto. Los rendimientos de la reacción variaron entre el 65 y 85%.

Procedimiento general para la preparación de los derivados de tipo (I).

Los derivados parcialmente protegidos de glicosil galatos de alquilo (VI) se disuelven en metanol (2 mL por cada 100 mg de derivado glicosil alquil galato). Se añade carbonato sódico (0.3 eq por cada eq. de derivado glicosil alquil galato). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 hora y se añade resina ácida amberlita® IR-120 hasta que el pH es neutro. Finalmente, la mezcla de reacción se filtra, se elimina a vacío el disolvente para obtener los compuestos de tipo (I). Los rendimientos de la reacción variaron entre el 90 y 95%.

EJEMPLO 2.- Medidas de tensión superficial y parámetros físico-químicos de galatos de alquilo y de los glucosil y glucurunosil galatos de alquilo.

Se realizaron medidas de tensión superficial de los galatos de alquilo y de los derivados glucosil y glucurunosil galatos de alquilo (I) utilizando el método de Wilhelmy en un tensiómetro Krüss K12. Se prepararon muestras a una concentración inicial y posteriormente se hicieron sucesivas diluciones. Las propiedades de agregación en micelas se evidencian a partir de las isotermas de adsorción cuando se representan en una gráfica la tensión superficial frente al logaritmo de la concentración. El perfil típico de un compuesto con propiedades surfactantes consiste en una caída lineal de la tensión superficial cuando aumenta la concentración, seguida de una estabilización de la tensión superficial cuando se alcanza la saturación de la interfase. La intersección de estas dos partes lineales determina la concentración micelar crítica (CMC).

Los valores de tensión superficial frente al logaritmo de la concentración para los galatos de alquilo 4-9 se muestran en la Figura 1. Se puede observar que los tres compuestos poseen buenas propiedades surfactantes, el galato de hexilo 5, el galato de octilo 6 y el galato de decilo 7. Mientras tanto los compuestos galato de butilo 4 y galato de dodecilo 8 tienen un perfil de compuesto surfactante pero con muy baja efectividad.

Los valores de tensión superficial frente al logaritmo de la concentración para los glucosil galatos de alquilo 11-16 se muestran en la Figura 2. Se puede observar que hay cinco compuestos que poseen muy buenas propiedades surfactantes, el 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de butilo 11, el 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5dihidroxibenzoato de hexilo 12, el 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo 13, el 3-O-(D-Dglucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de decilo 14, el 3-O-(D-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de dodecilo 15.

Los valores de tensión superficial frente al logaritmo de la concentración para los glucurunosil galatos de alquilo 1820 se muestran en la Figura 3. Se puede observar que hay dos compuestos que poseen muy buenas propiedades surfactantes, 3-O-(D-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo 19 y el 3-O-(D-D-glucurunopiranosil)-4,5dihidroxibenzoato de hexadecilo 20. Mientras tanto el compuesto 3-O-(D-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de butilo 18 tiene un perfil de compuesto surfactante pero con muy baja efectividad.

A continuación se calcularon distintos parámetros físico-químicos para los galatos de alquilo 4-8, los glucosil galatos de alquilo 11-15 y los glucurunosil galatos de alquilo 18-20 que se resumen en la Tabla 1. Además de los valores de CMC, se calcularon también los siguientes datos: la tensión superficial para la CMC (DCMC) relacionada con la eficacia del surfactante, pC20 (correspondiente a -log C20, siendo C20 la concentración necesaria para disminuir en 20 unidades la tensión superficial del agua pura, es decir, 52 mN/m) relacionado con el rendimiento del surfactante, la adsorción máxima de surfactante [max y el área ocupada por molécula en la interfase saturada (A). Los valores de los compuestos 9, 10, 16 y 17 no se incluyen pues no fueron suficientemente solubles o no mostraron perfiles típicos de compuestos surfactantes.

Compuesto: PM HL B CMC (mM) Dcmc (mN/m ) C20 (mM) pC20 D (mol/cm2) A (Å2)

Galato de butilo (4): 226. 2 11.1 0.60 54.0 - - 3.103 x 1010 53.5

Galato de hexilo (5): 264, 4 9,2 0,073 41,1 0,029 4,54 4,712 x 1010 35,3

Galato de octilo (6): 282. 3 8.9 0.05 42.2 0.016 4.80 6.589 x 1010 25.2

Galato de decilo (7): 310. 4 8.1 0.017 46.7 0.012 4.92 6.143 x 1010 27.0

Galato de dodecilo (8): 338. 4 7.4 0.0041 64.1 - - 5.172 x 1010 32.1

Glc-Galato de butilo (11): 388. 4 14.7 2.40 37.5 0.90 3.04 6.066 x 1010 27.4

Glc-Galato de hexilo (12): 416. 4 13.8 1.30 33.5 0.09 4.05 3.024 x 1010 54.9

Glc-Galato de octilo (13): 444. 5 12.9 0.50 31.0 0.055 4.26 3.926 x 1010 42.3

Glc-Galato de decilo (14): 472. 12.1 0.032 39.5 0.009 5.04 3.994 x 10 41.6

5: 10

Glc-Galato de dodecilo (15): 500. 6 11.5 0.010 44.3 0.004 8 5.32 3.871 x 1010 42.9

GlcA-Galato de butilo (18): 401. 3 15.0 2.70 520 0.002 7 2.57 4.554 x 1010 36.4

GlAc-Galato de octilo (19): 457. 4 13.1 0.18 30.0 0.008 5 5.07 2.966 x 1010 56.0

GlcA-Galato de hexadecilo(20): 569. 7 10.5 0.10 37.0 0.022 4.66 3.674 x 1010 45.2

Brij 30 ® (éster alquiletoxilado): 362, 5 9,4 0,0035 30,0 0,002 4 5,62 3,80 x 10-10 44,0

Tween 20 ® (monolaurato de sorbitánpolioxietileno): 1227 16,6 0,0169 35,0 0,002 5 5,61 3,560 x 1010 46,6

Tabla 1: Parámetros de peso molecular (PM), HLB, CMC, tensión superficial, área por molécula, C20, pC20, D y A de los galatos de alquilo 4-10, los glucosil galatos de alquilo 11-15 y los glucurunosil galatos de alquilo 18-20 y de diversos surfactantes no iónicos convencionales.

Se observa en cada una de las series que al aumentar el tamaño de la cadena alquílica disminuye el valor de la CMC. Esto se debe a que el proceso de auto-agregación en micelas es más rápido cuanto más hidrofóbica es la cadena del compuesto para evitar el contacto con las moléculas de agua. También se observa una relación lineal entre el logaritmo de la CMC y el tamaño de la cadena alquílica para la serie de los galatos de alquilo y la serie de los glucosil galatos de alquilo (ver Figura 4). En cambio no se observa este comportamiento lineal en la serie de los glucurunosil galatos de alquilo.

Es importante destacar que para un valor determinado de tamaño de cadena, las series de los glucosil galatos de alquilo y los glucurunosil galatos de alquilo muestran valores de CMC mayores que para la serie de los galatos de alquilo. Las diferencias disminuyen cuando aumenta la longitud de la cadena alquílica.

Los mayores valores de CMC obtenidos para los glucosil y glucurunosil galatos de alquilo con respecto a los galatos de alquilo para una misma longitud de cadena alquílica, son debidos al mayor carácter hidrófilo que imparten a las moléculas los grupos polares glucosil y glucurunosil. Dado que el proceso de micelización está directamente relacionado con las hidrofobicidad de las moléculas, es lógico que para estos compuestos menos hidrófobos, la formación de micelas experimente un retraso.

Por otra parte, el hecho que las diferencias entre las CMC de las distintas series disminuyan a medida que la longitud de la cadena hidrocarbonada aumenta, es una consecuencia lógica de la pérdida de influencia la naturaleza de los grupos hidrófilos ante un incremento progresivo del tamaño de los grupos hidrófobos.

Con respecto a la eficacia de estos compuestos como surfactantes, reflejada por el valor DCMC, se observa que los derivados de la serie de los glucosil galatos de alquilo y los glucurunosil galatos de alquilo muestran valores mucho mejores que para los correspondientes galatos de alquilo. Así por ejemplo, los valores de DCMC para el glucosil galato de hexilo, el glucosil galato de octilo y el glucurunosil galato de octilo (30-33.5 mN/m) son del mismo rango de los que muestran buenos surfactantes de uso común como son el Brij 30 o el Tween 20 (ver sus valores en la Tabla 1). En cambio, los mejores surfactantes de la serie de los galatos de alquilo, como son los de cadena de hexilo, octilo y decilo tienen valores de DCMC entre 40 y 46 mN/m. Estos valores indican que la modificación del azúcar sobre la estructura de galato de alquilo convierte a los nuevos compuestos en mejores surfactantes que los galatos de alquilo.

Cuando el valor de DCMC se representa frente al número de carbonos de la cadena alquílica se observa para las tres series de derivados un valor mínimo correspondiente a un tamaño de cadena intermedio, entre 6 y 8 carbonos (ver Figura 5). Se puede ver claramente que la introducción de un monosacárido neutro como la glucosa o de uno cargado como el ácido glucurónico en la cabeza polar de los galatos de alquilo resulta en unos nuevos derivados que poseen mejores propiedades surfactantes que los propios galatos de alquilo y además con propiedades similares a otros surfactantes comerciales (como Brij 30 o el Tween 20).

Los resultados obtenidos para los compuestos con 4 carbonos en la cadena sugieren que estos derivados de galato con un número inferior de carbonos tendrán propiedades surfactantes significativamente inferiores a los compuestos de la presente invención.

EJEMPLO 3.- Medidas de actividad antioxidante de galatos de alquilo y de los glucosil y glucurunosil galatos de alquilo.

Se realizaron medidas de capacidad antioxidante de los galatos de alquilo y de los derivados glucosil y glucurunosil galatos de alquilo (I) utilizando dos métodos distintos, el ensayo de capacidad de captación de radicales DPPH (1,1difenil-2- picrilhidrazilo) y el ensayo de capacidad reductora FRAP (“ferric reducing antioxidant power”, capacidad antioxidante de hierro reducido) (ver Tablas 2 y 3). Las medidas experimentales de valores de DPPH EC50 y de valores FRAP se han realizado siguiendo protocolos descritos previamente (Nenadis y col. J. Am. Oil Chem. Soc. 2002, 79, 1191; Benzie y col. Anal. Biochem. 1996, 239, 70). Se utilizaron como controles el ácido gálico, el hidroxitirosol y el octanoato de hidroxitirosol.

Los resultados obtenidos en el ensayo de capacidad de captación de radicales DPPH muestran valores muy similares para los galatos de alquilo y el ácido gálico. En el caso de los derivados glucosil y glucurunosil galatos de alquilo (I) este valor disminuye en términos generales, aunque menos para los glucurunosil galatos de alquilo que para los glicosil derivados. La pérdida de un hidroxilo fenólico en los nuevos derivados de tipo (I) parece que afecta negativamente a su capacidad de captación de radicales.

Los resultados obtenidos en el ensayo de capacidad reductora FRAP muestra que el número de electrones donados disminuye cuando aumenta el tamaño de la cadena alquílica de los galatos de alquilo y de los nuevos derivados de tipo (I). A su vez, los valores de FRAP fueron menores para los compuestos de tipo (I) que para los galatos de alquilo. Sin embargo, es importante destacar que los valores obtenidos de capacidad de captación de radicales y de capacidad reductora para los nuevos derivados, los glucosil y glucurunosil galatos de alquilo (I) parecen ser muy satisfactorios en su conjunto para poder actuar como antioxidantes óptimos en distintas matrices. De hecho, los valores de DPPF y FRAP de los nuevos derivados de tipo (I) son mejores que los descritos para el hidroxitirosol y el octanoato de hidroxitirosol, dos compuestos fenólicos que han mostrado ser excelentes antioxidantes en aceites y emulsiones.

Compuesto: DPPH EC50 FRAP

Hidroxitirosol (1): 0.720 ± 0.000 1.144 ± 0.095

Octanoato de hidroxitirosol (2)Ácido gálico (3): 0.686 ± 0.033 0.205 ± 0.001 1.128 ± 0.120 4.411± 0.121

Galato de butilo (4): 0.227 ± 0.002 2.827± 0.092

Galato de hexilo (5): 0.253 ± 0.004 2.552± 0.060

Galato de octilo (6): 0.264 ± 0.001 1.643± 0.072

Galato de decilo (7): 0.255 ± 0.001 1.417± 0.089

Galato de dodecilo (8): 0.238 ± 0.002 1.565± 0.025

Galato de hexadecilo (9): 0.261 ± 0.001 1.136± 0.053

Galato de octadecilo (10): 0.258 ± 0.001 0.965± 0.082

Tabla 2: Medida de capacidad de captación de radicales DPPH y de capacidad reductora FRAP de los galatos de alquilo 4-10. Los controles son hidroxitirosol 1, octanoato de hidroxitirosol 2 y ácido gálico 3.

Compuesto: DPPH EC50 FRAP

Glc-galato de butilo (11): 0.479 ± 0.000 2.436± 0.078

Glc-galato de hexilo (12): 0.458 ± 0.001 1.863± 0.025

Glc- galato de octilo (13): 0.614 ± 0.009 1.388± 0.111

Glc- galato de decilo (14): 0.496 ± 0.004 1.496± 0.087

Glc- galato de dodecilo (15): 0.490 ± 0.009 1.144± 0.063

Glc- galato de hexadecilo (16): 0.674 ± 0.006 0.250± 0.056

Glc- galato de octadecilo (17): 0.500 ± 0.002 0.232± 0.048

GlcA- galato de butilo (18): 0.590 ± 0.0101 3.785± 0.10

GlcA- galato de octilo (19): 0.661 ± 0.0026 1.252± 0.075

GlcA- galato de hexadecilo (20): 0.466 ± 0.0134 0.224± 0.062

Tabla 3: Medida de capacidad de captación de radicales DPPH y de capacidad reductora FRAP de los glucosil galatos de alquilo 11-17 y glucurunosil galatos de alquilo 18-20.

En conclusión, estos datos revelan que tanto los galatos de alquilo como los nuevos derivados glucosil y glucurunosil galatos de alquilo (I) se comportan como buenos o muy buenos surfactantes y muy buenos antioxidantes. De esta manera se los puede considerar como antioxidantes surfactantes. Estos resultados abren las puertas a potenciales nuevas aplicaciones de estos antioxidantes surfactantes, por ejemplo, en las industrias alimentaria, agroquímica, farmacéutica, de detergentes, de higiene personal o de protección solar.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto de fórmula general (I)

OH R1

HO

5 o una de sus sales, donde: R1 representa a CH2OH o COOH y R2 representa una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal o ramificada, donde la cadena hidrocarbonada puede opcionalmente presentar una o varias insaturaciones elegidas independientemente entre insaturaciones de tipo alquenilo o alquinilo;

10 siempre que, cuando R1 representa CH2OH y R2 representa una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, opcionalmente con una o varias insaturaciones alquenilo, la longitud de la cadena hidrocarbonada es C4-C12.
2.

Compuesto de fórmula general (I) según la reivindicación 1, caracterizado porque el anillo de piranosa es una glucosa.
3.

Compuesto de fórmula general (I) según la reivindicación 1, caracterizado porque el anillo de piranosa es un ácido glucurónico.
4. Compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque 20 el anillo de piranosa se une con estereoquímica beta al anillo fenólico.
5.- Compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 2 o 4, caracterizado porque R2 es una cadena hidrocarbonada C4-C12 lineal.

25 6.- Compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 2, 4 o 5, caracterizado porque R2 es una cadena hidrocarbonada C4-C12 saturada.
7.- Compuesto de fórmula general (I) según la reivindicación 6, caracterizado porque dicho compuesto se elige entre el grupo que consiste en

30 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de butilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de decilo, y 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de dodecilo.
8.- Compuesto de fórmula general (I) según la reivindicación 7, caracterizado porque dicho compuesto se elige entre

el grupo que consiste en 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexilo, 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo, y

40 3-O-(�-D-glucopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de decilo.
9.- Compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 3 o 4, caracterizado porque R2 es una cadena hidrocarbonada C4-C22 lineal.

45 10.- Compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 3, 4 o 9, caracterizado porque R2 es una cadena hidrocarbonada C4-C22 saturada.
11.- Compuesto de fórmula general (I) según la reivindicación 10, caracterizado porque R2 es una cadena hidrocarbonada lineal saturada de tamaño C8 a C16.
12.- Compuesto de fórmula general (I) según la reivindicación 11, caracterizado porque dicho compuesto se elige

entre el grupo que consiste en 3-O-(�-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de octilo, y 3-O-(�-D-glucurunopiranosil)-4,5-dihidroxibenzoato de hexadecilo.

55 13.- Procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula general (I) tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que comprende las siguientes etapas: a. protección mediante un grupo acetal de dos grupos fenólicos contiguos del correspondiente galato de acilo (II), donde R2 tiene el mismo significado que en el compuesto de fórmula (I) tal como se define en la reivindicación 1 para obtener el derivado (III);

5 b. reacción de (III) con el donador de glicosilo (IV), donde R1 representa a CH2OH o COOH y X representa a un grupo saliente para dar el derivado (V);

c. desprotección del grupo acetal del derivado (V) para obtener (VI);

10 d. desprotección del resto de grupos protectores del derivado (VI) para obtener el compuesto de fórmula general (I); donde el orden de las etapas de desprotección c y d se puede invertir.

R1 O X

OH O

O

(IV)

HO OH HO

O

OAc R1 OO O

AcO

OAc

AcO

OAc

O OR2 O OR2 OAc

(V)

O OR2

(II) (III)

OH OH R1 O O

OH

OH R1 OO

AcO HO OAc OH

(I)

OAc OH (VI)

O OR2 O OR2 15 14.- Procedimiento según la reivindicación 13, caracterizado porque el grupo protector acetal en la etapa (a) es un dimetil acetal.
15.- Procedimiento según la reivindicación 14, caracterizado porque se hace reaccionar dimetoxipropano con el compuesto (II) para obtener el grupo dimetilacetal.
16. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, caracterizado porque el donador de glicosilo (IV) en la etapa (b) se elige entre el grupo que consiste en tricloroacetimidato de 2,3,4,6-tetra-O-acetil-Dglucopiranosilo y tricloroacetimidato de 2,3,4-tri-O-acetil-D-glucurunopiranosilo.
17.- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, caracterizado porque la desprotección de

(V) para obtener (VI) se realiza mediante tratamiento con un ácido fuerte.
18.- Procedimiento según la reivindicación 17, caracterizado porque el ácido fuerte es ácido trifluoracético.
19.- Procedimiento, según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 18, caracterizado porque la desprotección de

(VI) para obtener (I) se realiza con una base en un disolvente orgánico protonado.
20.- Procedimiento según la reivindicación 19, caracterizado porque la base es carbonato sódico y el disolvente 35 orgánico protonado es metanol.
21.- Uso de un compuesto de fórmula general (I) tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 como surfactante.

40 22.- Uso de un compuesto de fórmula general (I) tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 como surfactante y antioxidante.
23.- Uso de un compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 21 o 22, caracterizado porque dicho compuesto forma parte de una composición en forma de emulsión.

45 24.- Uso de un compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, caracterizado porque dicho compuesto forma parte de una composición alimenticia, un producto cosmético, un producto de higiene personal, un producto para la protección solar, un producto agroquímico, un detergente o una composición farmacéutica.

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

N.º solicitud: 201130985

ESPAÑA

Fecha de presentación de la solicitud: 14.06.2011

Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoría

56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas

A

Ali, S. et al. “Mutiniside, new antioxidantphenolic glucoside from Abutilon muticum” Journal of Asian Natural Products Research, 2009, Vol.11, N. 5, Páginas 457-64. Ver Resumen y Figura 1. 1-24

A

US 7282520 B2 (LION CORPORATION) 16/10/2007. Ver columna 1, líneas 1-10 y 50-57; columna 2, líneas 1-27; ejemplos 31 y 35. 1-24

A

SIDDIQUI, A. et al. “Isolation of phytoconstituentand hypotensive activity of Terminalia arjunabark”. Indian Journal of Heterocyclic Chemistry, 2004, Vol.14, N. 2, páginas 115-118. Ver Resumen. Base de datos de HCAPLUS [Recuperado el 21/08/2012]. STN International, Columbus, OHIO (EEUU). 1-24

A

MEDINA, I. et al. “Effect of Lipophilization of Hydroxytyrosol on Its Antioxidant Activity in Fish Oils and Fish Oil-in-Water Emulsions”.Journal of Agricultural Food Chemistry, 2009, Vol. 57, N. 20, páginas 9773–9779. Ver Resumen; Figura 1. 1-24

Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud

El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:

Fecha de realización del informe 28.08.2012

Examinador N. Martín Laso Página 1/4

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

Nº de solicitud: 201130985

CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

C07D309/10 (2006.01) A61K47/10 (2006.01) C11D3/20 (2006.01) A23L3/3463 (2006.01)

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

C07D, A61K, C11D, A23L

Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)

INVENES, EPODOC, WPI, NPL, XPESP, BIOSIS, CAS.

Informe del Estado de la Técnica Página 2/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201130985

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 28.08.2012

Declaración

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)

Reivindicaciones Reivindicaciones 1-24 SI NO

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)

Reivindicaciones Reivindicaciones 1-24 SI NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).

Base de la Opinión.-

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Informe del Estado de la Técnica Página 3/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201130985

1. Documentos considerados.-

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

Documento

Número Publicación o Identificación Fecha Publicación

D01

Ali, S. et al. “Mutiniside, new antioxidantphenolic glucoside from Abutilon muticum”.Journal of Asian Natural Products Research, 2009, Vol.11, N. 5, páginas 457-64. 2009

D02

US 7282520 B2 (LION CORPORATION) 16.10.2007

D03

SIDDIQUI, A. et al. “Isolation of phytoconstituentand hypotensive activity of Terminalia arjunabark”. Indian Journal of Heterocyclic Chemistry, 2004, Vol.14, N. 2, páginas 115-118. Ver Resumen. Base de datos de HCAPLUS [Recuperado el 21/08/2012].STN International, Columbus, OHIO (EEUU). 2004

D04

MEDINA, I. et al. “Effect of Lipophilization of Hydroxytyrosol on Its Antioxidant Activity in Fish Oils and Fish Oil-in-Water Emulsions”. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2009, Vol. 57, N. 20, páginas 9773–9779. 10.06.2009
2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración

La solicitud se refiere a glucosil y glucuronosil galatos de formula general I, a un procedimiento de síntesis de dichos compuestos y a su uso como surfactantes y antioxidantes.

El documento D01 divulga el compuesto mutiniside, galato de hexilo que presenta un alcohol metoxilado y que está funcionalizado con una glucosa. Dicho compuesto ha sido aislado de un extracto de la planta Abutilon muticum, presentando actividad antioxidante (Resumen, Figura 1).

El documento D02 divulga compuestos galato esterificados con grupos alquílicos de 1-18 C y que pueden estar funcionalizados con monosacáridos, entre los que se encuentran los compuestos galato de propilo-glucósido y galato de metilo-glucósido. Dichos compuestos se utilizan como antioxidantes en composiciones cosméticas (Columna 1, líneas 1531, 50-67; columna 2, líneas 1-27; ejemplos 31 y 35).

El documento D03 divulga un compuesto glucosil-galato esterificado con una cadena alquílica de 16 C. Dicho compuesto ha sido aislado del extracto hidroalcohólico de la planta Terminalia arjuna bark, presentado actividad hipotensiva (Resumen).

El documento D04 divulga galatos de ácidos grasos de hidroxitirosol que presentan cadenas alquílicas de 7-11 C. Dichos compuestos presenta buena actividad antioxidante cuando se presentan en emulsiones (Resumen; Figura 1).

Ninguno de dichos documentos, tomados solos ni en combinación, divulgan ni dirigen al experto en la materia hacia glucosil galatos que presenten una unidad di-orto-fenol y que estén esterificados con una cadena alquílica de 4-12 C ni hacia glucuronosil galatos que presenten una cadena alquílica de 4-22 C, como son los de formula I definidos en la solicitud, donde la unidad difenol le cofiere actividad antioxidante y la distinta longitud de la cadena alquílica propiedad surfactante, pudiendo ser utilizados como antioxidantes en emulsiones y tener así aplicación en distintos tipos de productos.

Por lo tanto, la invención definida en las reivindicaciones 1-24 de la solicitud es nueva y posee actividad inventiva (Art. 6.1 y
8.1 LP 11/1986).

Informe del Estado de la Técnica Página 4/4