ES2386474B1

ES2386474B1 - Aditivos para alimentación animal.

Info

Publication number: ES2386474B1
Application number: ES201130070A
Authority: ES
Inventors: Enrique PABLOS PÉREZ
Original assignee: Norel SA
Current assignee: Norel SA
Priority date: 2011-01-21
Filing date: 2011-01-21
Publication date: 2013-07-09
Anticipated expiration: 2031-01-21
Also published as: WO2012098282A1; JP6012111B2; US20180085418A1; MX354661B; EP2666364A4; US20140037698A1; MX2013008342A; ES2386474A1; US10398748B2; EP2666364A1; JP2015508278A; EP2666364B1

Abstract

Aditivos para alimentación animal.#En la presente invención se describe la combinación de sales de ácidos orgánicos con al menos un principio activo de origen vegetal, preferentemente aceites esenciales y parcialmente protegida con grasas y/o aceites vegetales, que evitan que dichos principios activos sean digeridos por las enzimas estomacales en el proceso digestivo. Son preferidas las sales sódicas de un ácido de cadena corta, preferentemente de ácido butírico. Los aceites esenciales preferidos son jengibre, piperina, orégano, ajo, timol, carvacrol, cinamaldehído y/o cualquiera de sus combinaciones. La combinación de las sales de ácidos orgánicos junto con aceites esenciales y protegidas con grasas y/o aceites vegetales son utilizadas como potentes promotores o estimulantes del crecimiento animal, como bactericidas orgánicos frente a bacterias patógenas presentes en dichos animales y como moduladores de su respuesta inmune.

Description

ADITIVOS PARA ALIMENTACIÓN ANIMAL.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

5: La presente invención se refiere a aditivos para la alimentación animal a base de sales de

ácidos orgánicos combinadas con productos activos de origen vegetal y todo ello recubierto

con grasas y/o aceites vegetales. Dichas sales de ácidos orgánicos son utilizadas como

promotores o estimulantes del crecimiento animal, moduladores de la respuesta inmune y

bactericidas. Por tanto, la presente invención se engloba dentro del campo de la producción

1 O: animal y más específicamente dentro de los campos de la alimentación y de la salud animal.

ESTADO DE LA TÉCNICA

La tendencia en la alimentación animal en Europa en los últimos años es la búsqueda de

15: una dieta que no sólo cubra las necesidades alimenticias de los animales, sino que además

refuerce su estado sanitario y reduzca los problemas patológicos sin utilizar medicamentos,

para así conseguir mejorar su producción y los rendimientos económicos del ganadero. Una

de las vías de control del estado sanitario y de la inmunidad del animal es por medio del

control de la flora intestinal.

20

La utilización de aditivos ha sido una práctica habitual en la alimentación animal con el fin

de mejorar el rendimiento productivo, mejorar la salud así como para lograr un

aprovechamiento más eficiente de los alimentos. Debido a la prohibición del uso de

antibióticos como sustancias promotoras del crecimiento en la Unión Europea (Directiva

25: 1831/2003/CEE) se han buscado aditivos que, en muchos casos demuestran una mejora

productiva respecto incluso a los propios antibióticos (Dipeolu et al., 2005). Diferentes

estudios realizados en los últimos años han puesto de manifiesto que los ácidos orgánicos

son una buena alternativa. Su modo de acción radica, por un lado, en la reducción de pH a

nivel estomacal lo que limita el desarrollo de patógenos y ayuda en la digestión de

30: proteínas y, por otro lado, en la habilidad que algunos de éstos ácidos orgánicos tienen de

entrar en las bacterias y bloquear su metabolismo. En este sentido, el ácido butírico,

también llamado ácido butanoico, se viene estudiando desde hace varios años,

observándose efectos beneficiosos en varias especies: cerdos, aves, rumiantes, etc., incluso

en peces. Junto con el ácido acético y el propiónico, el butírico pertenece al grupo de

35: Ácidos Grasos Volátiles (AGV) de cadena corta. Esta demostrado que los AGV de cadena

corta pueden inhibir el crecimiento del grupo de bacterias Enterobacteriaceae (Salmonella,

Escherichia coli, etc.) (Van Immerseel et al. 2004). Esta inhibición se da gracias a que la

forma no disociada de los ácidos grasos volátiles es capaz de atravesar la membrana de las

bacterias, interferir en su metabolismo y producirle la muerte. Por otro lado, el anión del

ácido interfiere con la transcripción genética de las bacterias, lo que impide que las mismas

5: se puedan reproducir y causar una infección. El ácido butírico tiene mejor coeficiente de

difusión que otros AGV, provocando que atraviese la pared bacteriana con mayor facilidad

que otros ácidos.

Junto al efecto antibacteriano, el ácido butírico presenta efectos adicionales que lo hacen

1 O: único: por ejemplo, estimula la secreción pancreática (Katoh y Tsudo, 1984; Sano et al,

1995), mejora la absorción de electrolitos, reduce la incidencia de diarrea, aumenta la

regeneración intestinal de las microvellosidades, junto con un aumento en la longitud de las

mismas (Galfi y Bokori 1990, Lesson et al. 2005), a la vez que también incrementa el área

de absorción intestinal dando lugar a un mayor peso promedio de las aves y a una mejor

15: conversión del alimento. Así, todos estos estudios, ponen de manifiesto que el ácido

butírico es beneficioso para el ganado, tanto a nivel nutricional, como a nivel de salubridad.

Cabe destacar que la forma libre del ácido butírico es dificil de manejar por su alta

corrosividad y volatilidad. Para solucionar dicho problema se han desarrollado diferentes

20: presentaciones del mismo: sales del ácido butírico, sales del ácido butírico

microencapsuladas y sales de ácido butírico en forma protegida con una matriz de grasas

y/o aceites vegetales, que protegen parte del ingrediente activo y consiguen la liberación

lenta de este promotor natural del crecimiento, asegurándose así su acción potenciadora del

crecimiento y bactericida en todo el tracto digestivo del animal, a la vez que proporcionan

25: la mayor concentración protegida posible, para incluir el producto en el rango de promotor

natural del crecimiento de liberación lenta. Esta sal de ácido en forma protegida es

comercializada con el nombre de Gustor BP-70 (Norel, SA, España), a partir de aquí y a lo

largo de toda la invención lo llamaremos BP-70.

30: La protección parcial de las sales del ácido butírico con los aceites y/o grasas vegetales

permite que el butirato sódico actúe eficazmente a lo largo de todo el tracto digestivo del

animal, asegurándose la llegada del principio activo desde los tramos iniciales del digestivo

hasta las secciones más distales de dicho tracto gastrointestinal, actuando no sólo como

promotor natural del crecimiento, sino también como modulador de la respuesta inmune y

35: como bactericida, reduciendo la posibilidad de infección por parte de bacterias patógenas.

La efectividad de Gustor BP-70 se demuestra a niveles donde las sales del ácido butírico no

protegido no actúan (ciego/heces) y a niveles donde dichas sales, en forma encapsulada,

aún no han podido actuar (buche), siendo un producto completo y eficaz en la lucha contra

infecciones bacterianas, específicamente contra Salmonella enteriditis, en la nutrición de

5: aves (Femández-Rubio C et al, 2009).

El uso como bactericida del butirato sódico ha sido principalmente utilizado en el

tratamiento de Salmonella enteritis, ya que es una de las principales bacterias patógenas

que afectan a los animales y al hombre. Dentro de las bacterias patógenas también se

1 O: encuentra la bacteria Clostridium perfringens, que como consecuencia de la producción de

diferentes toxinas causa la enteritis necrótica, resultando en una necrosis extensiva de la

mucosa intestinal, afectando principalmente a pollos, pavos, patos y aves silvestres. C.

perfringens habita de forma natural en el intestino, proliferando bajo determinadas

circunstancias, como por ejemplo, exceso de nutrientes no degradados ni digestibles que

15: aparecen con más frecuencia en los cambios de dieta, especialmente cuando el animal

recibe dietas mal balanceadas o con materias primas de mala calidad, mala respuesta

inmune del tejido linfoide asociado al intestino (GALT) debido al excesivo desgaste del

epitelio intestinal como consecuencia de la molienda de los alimentos, presencia de

micotoxinas, coccidiosis, etc, desequilibrios en la flora microbiana intestinal, entre otros.

20: En 1972, con la salida al mercado del coccidiostato Monensina pareció detenerse la

aparición de casos por infecciones de C. perfringens pero con la tendencia de la eliminación

de los antibióticos como promotores de crecimiento y de coccidiostatos adicionados al

pienso, está apareciendo de nuevo una casuística creciente de dicha enfermedad infecciosa.

25: Por tanto, para solventar el creciente problema del incremento de enfermedades infecciosas

en animales de engorde, utilizados para alimentación humana, y además potenciar en

dichos animales el crecimiento de los mismos, la presente invención ha desarrollado un

nuevo aditivo para alimentación animal que comprende sales de ácidos orgánicos,

preferentemente, ácido butírico, junto con productos activos de origen natural,

30: preferentemente, aceites esenciales, todo ello parcialmente recubierto con grasas y/o aceites

vegetales. Dicho aditivo es capaz de inhibir el crecimiento bacteriano, especialmente de

bacterias Gram +y coccidios, además de mejorar el estado del epitelio intestinal e

incrementar el peso de los animales tratados. El recubrimiento parcial de los principios

activos que forman dicho aditivo alimenticio para animales: la sal de un ácido orgánico y

35: los aceites esenciales; con las grasas y/o aceites de origen vegetal, protege a dichos

principios activos de la digestión estomacal, pero permitiéndoles que sean activos a lo largo

de todo el tracto gastrointestinal de los animales, ya que mediante dicho recubrimiento

parcial de los principios activos, se consiguen fases del producto con diferentes cantidades

de grasa (0%-50% de grasa) que serán digeridas y por tanto liberadas en diferentes puntos

5: del tracto gastrointestinal del animal: la parte no protegida con la grasa se liberará y

ejercerá su efecto en las primeras fases del tracto gastrointestinal, hasta la altura del

intestino delgado; en cambio, la parte protegida con la grasa no se liberará hasta que ésta se

empiece a digerir por acción de las lipasas pancreáticas. Dada la lenta digestión de la grasa,

estudios in-vitro han demostrado que parte del principio activo puede llegar a las partes más

1 O: distales del tracto gastrointestinal, ejerciendo también allí su acción.

Por otro lado, el aditivo para alimentación descrito en la presente invención, es también

capaz de potenciar el desarrollo del epitelio intestinal, favoreciendo el crecimiento de villis

intestinales, que como consecuencia de la enteritis necrótica inducida en los animales

15: descritos en los ejemplos de la presente invención, dichas villis están disminuidas en

número y tamaño. Además, el incremento del desarrollo del epitelio intestinal favorece la

mejor absorción de los alimentos produciendo así un incremento en el crecimiento y

engorde de los animales tratados con el mismo. El aditivo para alimentación descrito en la

presente invención también es capaz de disminuir la incidencia de enfermedades

20: bacterianas como pueden ser la enteritis necrótica o las causadas por la Salmonella

enteriditis, gracias a su acción moduladora de la respuesta inmune y a su acción bactericida

frente a los patógenos del tipo C. perfringens y S. enterica, entre otros. El uso conjunto de

la sal del ácido orgánico junto con aceites esenciales vegetales y todo ello parcialmente

recubierto con grasas y/o aceites vegetales es capaz de potenciar el efecto promotor

25: fisiológico del butirato, por ejemplo, como se ha comentado previamente, en el desarrollo

de villis intestinales, además de potenciar su efecto bactericida.

El otro principio activo preferido como ingrediente de la combinación con las sales de

ácidos orgánicos son los aceites esenciales. Las sinergias de los aceites esenciales con las

30: sales de ácidos orgánicos que destacan, son, desde el punto de vista nutricional, su acción

como estimuladores de la digestibilidad, por favorecer el equilibrio y control de la flora

microbiana, también destaca por su acción como estimuladores de la inmunidad y por sus

propiedades antimicrobianas y antioxidantes.

5: Además, en la presente invención se describe el uso de la combinación de dichas sales de ácidos orgánicos junto con aceites esenciales ambos protegidos con aceites y/o grasas de origen animal, como aditivo para piensos animales actuando como un promotor natural del crecimiento además de como bactericida e inmunomodulador, siendo capaz de reducir los niveles de bacterias patógenas, específicamente de C. perfringes A y S. enterica y de mejorar la respuesta inmune con la que los animales se protegen de infecciones bacterianas.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

1 O: Breve descripción de la invención

15: En la presente invención se describe un nuevo aditivo para alimentación animal que actúa como promotor natural del crecimiento animal y que comprende sales de ácidos orgánicos combinadas con productos activos de origen natural, preferentemente aceites esenciales. Dicha combinación está parcialmente protegida de la digestión estomacal mediante una envuelta parcial de grasas y/o aceites vegetales. Dicha envuelta, al ser parcial, no impide la acción, a lo largo de todo el tracto intestinal, incluso hasta las partes más distales del mismo, de los principios activos mencionados.

20 25: Se denominan promotores o estimulantes del crecimiento a los aditivos que forman parte integral de la dieta animal y que cumplen con la función de mejorar el aumento de peso diario de los animales (GDP), así como la conversión de la ración consumida. En la presente invención, los promotores o estimulantes del crecimiento pueden ser administrados de diferentes maneras, ya sean inyectados, en implantes o como un aditivo en el alimento o piensos de los animales. En la presente invención, el efecto sobre el crecimiento se mide como incremento de peso.

30 35: A los efectos de la presente invención, el término ácido orgánico se refiere a compuestos que contienen en su fórmula uno o más grupos carboxílicos (-COOH), generadores de protones, que pueden tener además diferentes grupos funcionales tales como hidroxiácidos, cetoácidos, ácidos aromáticos, compuestos heterocíclicos, así como amidas y lactonas. Los ácidos orgánicos utilizados en la presente invención son preferentemente ácidos grasos volátiles, preferentemente de cadena corta y entre los que se pueden seleccionar: ácido butírico, ácido propiónico, ácido fórmico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido láurico, ácido cúprico, ácido caprílico, ácido caproico, ácido acético, entre otros. Las proporciones en las

que se encuentra el ácido orgánico en el aditivo para alimentación animal descrito en la presente invención, suelen variar entre un 30 y un 70% en peso de producto total húmedo, siendo la proporción preferida de un 50%.

Las sales de los ácidos orgánicos utilizadas en la presente invención son preferentemente sal sódica, sal cúprica, sal potásica, sal cálcica, entre otras. Las proporciones en las que se encuentra la sal del ácido orgánico en el aditivo para alimentación animal descrito en la presente invención, suele variar entre un 30 y un 70% en peso del producto total húmedo, siendo la proporción preferida de un 60%.

En la presente invención se utiliza preferentemente la sal sódica del ácido butírico (butirato sódico), aunque puede ser utilizada cualquiera de las sales de los ácidos descritos previamente.

A los efectos de la presente invención, el término principio activo de origen vegetal se refiere a toda materia de origen vegetal a la que se le atribuye una actividad apropiada capaz de ejercer un efecto beneficioso sobre el organismo al que se le aplica. Los productos activos de origen vegetal utilizados en la presente invención son preferentemente, aceites esenciales. A los efectos de la presente invención, el término aceite esencial se refiere a una sustancia o sustancias orgánicas volátiles, pertenecientes a diferentes clases de compuestos, por ejemplo, hidrocarburos, ésteres, alcoholes, aldehídos, algunos ácidos, fenoles y sus derivados, lactonas, etc.; todos, productos de largas cadenas, de biosíntesis vegetal, llamados metabolitos secundarios de las plantas. El término aceite esencial se aplica también a las sustancias sintéticas similares, preparadas a partir del alquitrán de hulla, y a las sustancias semi-sintéticas preparadas a partir de los aceites naturales esenciales. Los aceites esenciales utilizados en la presente invención, pueden seleccionarse de entre cualquiera de los de la siguiente lista: jengibre, piperina, orégano, ajo, timol, carvacrol, cinamaldehído, etc. Las proporciones en las que se encuentran los principios activos de origen vegetal en el aditivo para alimentación animal descrito en la presente invención, suelen variar entre el 1 y el 20% en peso de producto total húmedo, siendo la proporción preferida de un 1 0% en el producto final.

A los efectos de la presente invención, el término grasa y/o aceite vegetal se refiere a un compuesto orgánico obtenido a partir de semillas u otras partes de las plantas en cuyos tejidos se acumula como fuente de energía. Las grasas y/o aceites, vegetales, utilizados en

la presente invención para recubrir la combinación de la sal de ácido orgánico y los

productos activos de origen natural, preferentemente, aceites esenciales, pueden

seleccionarse de entre otros: estearina de palma (parte más sólida obtenida después del

fraccionamiento del aceite de palma) o jabón cálcico de ácidos grasos de aceite de palma

5: (PFAD) (saponificación con calcio de los ácidos grasos). Las proporciones en las que se

encuentran dichas grasas y/o aceites vegetales recubriendo la sal del ácido orgánico y los

aceites esenciales, descritos en la presente invención, suelen variar entre un 30-60% del

peso de producto total húmedo, siendo la proporción preferida de un 30%.

1 O: Además, en la presente invención se describe el uso de dicho aditivo, promotor natural del

crecimiento animal, además de para la mejora de los parámetros productivos de los

animales (por ejemplo incremento del peso de los mismos), como modulador de la

respuesta inmune y como bactericida, siendo capaz de disminuir la incidencia de

enfermedades bacterianas en dichos animales, como por ejemplo la enteritis necrótica en

15: aves, aunque puede ser utilizado para otro tipo de enfermedades bacterianas como por

ejemplo: Salmonella enteritis, Escherichia coli, Campylobacter spp., etc y en otros

animales, como por ejemplo: conejos, cerdos, etc.

A los efectos de la presente invención, se define el término bactericida como cualquier

20: producto, agente o sustancia capaz de eliminar o matar bacterias. A los efectos de la

presente invención, el efecto o la acción bactericida se mide como los cambios

macroscópicos producidos en el intestino de los animales debidos a la infección bacteriana.

También, a los efectos de la presente invención, la modulación de la respuesta inmune se

mide como la variación de la expresión génica, con respecto a animales control sin recibir

25: el aditivo de la invención en su alimentación, infectados o no, de genes que codifican para

citocinas, preferentemente, IL-1p, IL-2, CD38y y TNFSF15.

Descripción de las figuras

30: Figura l. Peso de los animales de los grupos A=control y B=BP-70+ Jengibre y piperina en

el día 17 del ensayo experimental. En el eje Y se indica el peso expresado en gramos. En el

eje X se indica el tiempo expresado en días. *indica las diferencias significativas

estadísticamente respecto al grupo control infectado pero no tratado (plt;0.05). BP-70:

butirato de sodio (60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo). El

35: porcentaje de jengibre y piperina incluido en el aditivo es un de 5% del peso del producto

total húmedo de cada uno dichos aceites esenciales, es decir 5% de jengibre y 5% de p1penna. Figura 2. Peso de los animales de los grupos A=control y B=BP-70+ Jengibre y piperina en el día 24 del ensayo experimental. En el eje Y se indica el peso expresado en gramos. En el eje X se indica el tiempo expresado en días. *indica las diferencias significativas estadísticamente respecto al grupo control infectado pero no tratado (plt;0.05). BP-70: butirato de sodio (60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo). El porcentaje de jengibre y piperina incluido en el aditivo es un de 5% del peso del producto total húmedo de cada uno dichos aceites esenciales, es decir 5% de jengibre y 5% de p1penna. Figura 3. Comparación de los cambios macroscópicos en muestras de intestino sufridos por el grupo de animales tratados con los aditivos BP-70+ Jengibre y piperina (Grupo B) respecto a los cambios macroscópicos que presentaba el grupo de animales control infectados pero no tratados (Grupo A). En el eje Y se indica la puntuación de los cambios macroscópicos de cada grupo. *indica las diferencias significativas estadísticamente respecto al grupo control (plt;0.05). BP-70: butirato de sodio (60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo). El porcentaje de jengibre y piperina incluido en el aditivo es un de 10% total del peso del producto húmedo, es decir 5% de jengibre y 5% de p1penna. Figura 4. Niveles relativos de la expresión (Eje Y) de los genes IL-1 p, IL-2, IL-8, IL-1 O,

CD3y8, LITAF y RNFSF 15 en los grupos de animales tratados con BP-70 o BP-70+ Jengibre y piperina respecto al grupo de animales no infectados y no tratados (Grupo A). BP-70: butirato de sodio (70% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo). BP-70+Jengibre +piperina: butirato de sodio (60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo) + 5% jengibre + 5% piperina. El área cuadrada de la caja abarca el 50% de todas las mediciones, la línea horizontal del interior de la caja representa la mediana de la muestra y las líneas verticales representan el 50% de las mediciones que se salen fuera de los valores de la caja. Los asteriscos indican la significación estadística con un valor de p lt;0.05. Los niveles de expresión relativos de los genes analizados indican la expresión en tanto por 1 de cada gen con respecto a los niveles de expresión de cada gen en el Grupo A. La Figura 4A muestra los niveles relativos de expresión de los genes indicados en el Grupo C (animales no infectados y tratados con BP-70) vs Grupo A (animales no infectados y no tratados).

La Figura 4B muestra los niveles relativos de expresión de los genes indicados en el Grupo D (animales no infectados y tratados con BP-70+ Jengibre+piperina) vs Grupo A (animales no infectados y no tratados). La Figura 4C muestra los niveles relativos de expresión de los genes indicados en el Grupo F (animales infectados y tratados con BP-70+ Jengibre+piperina) vs Grupo A (animales no infectados y no tratados). Figura 5. Nivel relativo de la expresión (Eje Y) del gen TNFSF15 en los diferentes grupos de tratamiento: BP-70 (Grupos C y E) o BP-70+Jengibre +piperina (Grupos D y F), en comparación con los animales no tratados y no infectados (Grupo A). BP-70: butirato de sodio (70% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo). BP-70+ Jengibre + piperina: butirato de sodio ( 60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo)+ 5% jengibre+ 5% piperina. Grupo B: animales infectados pero no tratados; Grupo C: animales no infectados y tratados con BP-70; Grupo D: animales no infectaos y tratados con BP-70+ J engibre+piperina; Grupo E: animales infectados y tratados con BP-70; Grupo F: animales infectados y tratados con BP-70+Jengibre+piperina. El área cuadrada de la caja abarca el 50% de todas las mediciones, la línea horizontal del interior de la caja representa la mediana de la muestra y las líneas verticales representan el 50% de las mediciones que se salen fuera de los valores de la caja. Los asteriscos indican la significación estadística con un valor de p lt;0.05. Los niveles de expresión relativos de los genes analizados indican la expresión en tanto por 1 de cada gen con respecto a los niveles de expresión de cada gen en el Grupo A. Figura 6. Niveles relativos de expresión (Eje Y) de los genes IL-1 p, IL-2, IL-8, IL-1 O, CD3y8, LITAF y RNFSF15 en el grupo de animales infectados y tratados con BP-70+ Jengibre+piperina (Grupo F), en comparación con los animales no tratados e infectados (Grupo B). BP-70+ Jengibre y piperina: butirato de sodio (60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo) + 5% jengibre + 5% piperina. El área cuadrada de la caja abarca el 50% de todas las mediciones, la línea horizontal del interior de la caja representa la mediana de la muestra y las líneas verticales representan el 50% de las mediciones que se salen fuera de los valores de la caja. Los asteriscos indican la significación estadística con un valor de p lt;0.05. Los niveles de expresión relativos de los genes analizados indican la expresión en tanto por 1 de cada gen con respecto a los niveles de expresión de cada gen en el Grupo B. Figura 7. Niveles relativos de expresión (Eje Y) del gen TNFSF 15 en los grupos de animales infectados y tratados con BP-70 (Grupo E) o con BP-70+ Jengibre + piperina (Grupo F), en comparación con los animales no tratados e infectados (Grupo B). BP-70: butirato de sodio (70% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo). BP-70+ Jengibre + piperina: butirato de sodio ( 60% peso húmedo) protegido con grasa vegetal (30% peso húmedo)+ 5% jengibre+ 5% piperina. El área cuadrada de la caja abarca el 50% de todas las mediciones, la línea horizontal del interior de la caja representa la mediana de la muestra y las líneas verticales representan el 50% de las mediciones que se salen fuera de los valores de la caja. Los asteriscos indican la significación estadística con un valor de p lt;0.05. Los niveles de expresión relativos de los genes analizados indican la expresión en tanto por 1 de cada gen con respecto a los niveles de expresión de cada gen en el Grupo B

Descripción detallada de la invención

Uno de los objetos de la presente invención se refiere a aditivos para alimentación animal que comprenden la combinación de sales de ácidos orgánicos con al menos un principio activo de origen vegetal, todo ello parcialmente recubierto con aceites y/o grasas vegetales.

En una realización preferida, los aditivos de la invención se caracterizan porque los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: butírico, láctico, cítrico, láurico, cúprico, caprílico, caproico, acético, entre otros, siendo preferido el ácido butírico.

En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque las sales de ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: sódica, cálcica, cúprica o potásica. Las proporciones en las que se encuentra la sal del ácido orgánico en el aditivo para alimentación animal descrito en la presente invención, suele variar entre un 30% y un 70% en peso húmedo del producto final, siendo más preferible una proporción del60%.

En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque la sal preferida es la sal sódica y el ácido orgánico preferido es el ácido butírico, siendo por tanto, preferida en los aditivos de la invención, la sal sódica del ácido butírico.

En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque la sal del ácido orgánico se encuentra preferentemente a una concentración del 60% en peso húmedo del producto final.

5: En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque los principios activos de origen vegetal son preferentemente aceites esenciales y pueden seleccionarse de entre cualquiera de la lista: jengibre, piperina, orégano, timol, ajo, carvacrol, cinamaldehído y 1o cualquiera de sus combinaciones, siendo preferentemente utilizada la combinación de aceite esencial de jengibre y piperina.

1 O: En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque los principios activos vegetales se encuentran preferentemente en una proporción de entre el 1% y el 20% del peso húmedo del producto final, siendo la proporción preferida de un 10% del peso húmedo del producto final.

15 20: En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque en la combinación de aceites esenciales de jengibre y piperina se utiliza preferentemente un 5% de aceite de jengibre y un 5% de aceite de piperina. En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque el recubrimiento parcial de la combinación de las sales de ácidos orgánicos con los principios activos de origen vegetal, con aceites y/o grasas vegetales, es aproximadamente entre un 30-60% del peso húmedo del producto final, siendo más preferentemente un recubrimiento de un 30%.

25: En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque los aceites y/o grasas vegetales que recubren parcialmente la combinación de las sales de ácidos orgánicos con los principios activos de origen vegetal, se seleccionan entre: estearina de palma o jabón cálcico de ácidos grasos de aceite de palma (PFAD), siendo preferida la estearina de palma.

30: En otra realización preferida, los aditivos de la invención, se caracterizan porque la sal es preferentemente la sal sódica del ácido orgánico butírico, el principio activo de origen vegetal está formado preferentemente por la combinación de aceites esenciales, siendo éstos preferentemente el aceite esencial de jengibre y el de piperina y la cubierta de aceites y/o grasas vegetales está preferentemente formada por estearina de palma.

35: En otra realización preferida, los aditivos de la invención se caracterizan porque la concentración de butirato sódico es preferentemente de un 60%, la concentración de la

combinación de aceites esenciales de jengibre y piperina es preferentemente de un 10% y la cubierta de estearina de palma es preferentemente de un 30%.

5: En otra realización preferida, la combinación de aceites esenciales de jengibre y piperina está formada preferentemente por un 5% de aceite de jengibre y un 5% de aceite de p1penna.

1 O: Otro de los objetos descritos en la presente invención se refiere al uso de los aditivos descritos anteriormente, para alimentación animal, como promotores del crecimiento de los animales, preferentemente de pollos, conejos y cerdos.

15: Otro de los objetos descritos en la presente invención se refiere al uso, en alimentación animal en animales de cría alimentados con los aditivos descritos previamente, como moduladores de la respuesta inmune. En una realización preferida, la modulación de la respuesta inmune comprende una variación de la expresión de alguno de los genes que codifican para alguna de las siguientes citocinas: aumentando la expresión de IL-1 ~' IL-2, CD3y8 y/o disminuyendo la expresión de TNFSF15.

20 25: Otro de los objetos descritos en la presente invención se refiere al uso, en alimentación animal, en animales de cría alimentados con los aditivos descritos previamente, como bactericidas, al inhibir el crecimiento tanto de bacterias Gram+, preferentemente bacterias del género Clostridium, más preferentemente C. perfringens, Gram-, preferentemente bacterias de la familia Enterobacteriaceae, más preferentemente de los géneros Salmonella, Eschericia y Campylobacter e incluso protozoos, como es el caso de los protozoos de la familia de Eimeria y Criptosporideos.

Los ejemplos que se describen a continuación tienen como objetivo ilustrar la presente invención, pero sin limitar el alcance de la misma.

30: Ejemplo l. Examen patológico macroscópico e histopatológico en pollos de engorde a los que se les induce enteritis necrótica y tratados con diferentes aditivos alimenticios.

35: Se utilizaron pollos de engorde convencionales (híbridos Bábolna, Bábolna, Hungría) que tenían un día de edad cuando entraron a formar parte de los diferentes grupos de tratamiento descritos en la presente invención. Aunque los ejemplos son realizados en

pollos de engorde (ganadería avícola), los aditivos alimenticios potenciadores del

crecimiento animal y con acción bactericida natural, descritos en la presente invención,

pueden ser utilizados en cualquier otro tipo de ganadería, como por ejemplo: porcina,

cunícola, ovina, bovina, etc.

5

Los pollos de engorde fueron alimentados con una dieta convencional libre de

medicamentos y rica en proteínas (25% de harina de pescado). Dicho alimento no

presentaba coccidiostáticos (agentes útiles en el tratamiento o prevención de la coccidiosis

en hombres y/o animales). Los animales no tenían restricción de agua y fueron guardados

1O: en jaulas a una densidad de 30 animales/m2 . Los lechos, bebederos y comederos fueron

esterilizados previamente en autoclave. La temperatura ambiente fue establecida en 32 ±

4 °C, disminuyendo hasta 24 ± 4oc a medida que los animales crecían.

Para producirles la enteritis necrótica, dichos animales fueron inoculados con la cepa alfa

15: toxigénica tipo A de C. perfringens (ATCC 13124). Dicha cepa fue crecida en medio de

cultivo Reinforced Clostridial Medium (BD, MD, USA) a una temperatura de 37°C durante

24 horas en anaerobiosis haciendo uso del sistema Anaerocult A (Merck, Darmstadt,

Alemania). Posteriormente, dichos cultivos bacterianos fueron centrifugados (3000 g, 1O

min., 5°C, centrífuga Universal320R, Hettich centrifugas) y el pellet obtenido resuspendido

20: en una solución de suero fosfato salino (PBS) estéril. El título de C. perfringens fue de 3-

4x1 08 unidades formadoras de colonias (CFU)/ml. La enteritis necrótica muestra signos

clínicos sólo si están presentes factores de predisposición, por lo tanto dichos animales

fueron infectados oralmente con coccidios mediante la vacunación con la vacuna viva

atenuada Paracox 5® (Ceva-Phylaxia) y con C. perfringens A.

25

En la Tabla 1 se muestra el protocolo de infección y vacunación utilizado en la presente

invención. Brevemente, los animales fueron vacunados frente a la enfermedad de Gumboro

o enfermedad de bursitis infecciosa (IBD, en sus siglas en inglés). Es una enfermedad

altamente contagiosa en pollos jóvenes causada por el virus de la enfermedad de bursitis

30: infecciosa (IBDV) y que se caracteriza por la inmunosupresión y la mortalidad de los

animales, generalmente a la edad de 3 a 6 semanas de vida. La vacuna frente a dicha

enfermedad ( CEV AC Gumbo L®, Ceva-Phylaxia) se les administró en el agua el día 16,

para producir en los animales una moderada inmunosupresión y ser más propensos a

padecer la enteritis necrótica. Posteriormente, se procedió la inoculación, por vía oral a

35: través de sonda nasogástrica, de 2mL de una suspensión de C. perfringens (6.8x108 UFC)

durante tres veces al día (8.00 am, 12.00 am y 16.00 pm) en los días 18, 19, 20 y 21. El día 19, se les administró además, una dosis 10 veces mayor de la habitual, de la vacuna viva atenuada Paracox-5® (Ceva-Phylaxia), para inducirles la infección por coccidios y predisponer a los animales a la enfermedad clínica. La vacuna Paracox-5® es una vacuna

5 viva atenuada que contiene ooquistes esporulados derivados de líneas precoces de coccidios que son patógenas para los pollos: Eimeria acervulina, Eimeria brunetti, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria necatrix, Eimeria praecox y Eimeria tenella. Los animales control también fueron tratados con las vacunas frente a la enfermedad de Gumboro y con la vacuna de Paracox-5®.

10 Tabla l. Protocolo de infección y vacunación

Los pollos de engorde (n=24), incluidos en el presente ejemplo fueron divididos en tres

15 grupos (12 animales/grupo, Tabla 2). Todas las aves fueron tratadas con las vacunas frente a la enfermedad de Gumboro y con la vacuna de Paracox-5® en los días indicados en la Tabla l. Todos los animales de cada grupo fueron infectados oralmente con C. perfringens A (6-8xl08 CFU). El grupo de animales control fue alimentado con la dieta base descrita, sin ningún aditivo. En cambio, al otro grupo de animales se le administró en la dieta una

20 concentración de 1.5 g/Kg de pienso, del aditivo descrito en la presente invención: butirato sódico junto con jengibre y piperina, estando ambos principios recubiertos en un 30% en peso húmedo, con grasas vegetales, específicamente con estearina de palma. Se utilizó como butirato sódico, la composición de Norel, S.A. llamada BP-70 a la que se le añadieron como aceites esenciales el jengibre ( CAS 84696-15-1) ( 5% en peso húmedo)

25 obtenido de Ventós S.A. (Barcelona, España) y la piperina (5% en peso húmedo) obtenida de la empresa Sensient Fragances S.A. (Granada, España). El BP-70 está formado por un 70% en peso húmedo de butirato sódico y un 30% en peso húmedo de grasas vegetales. El 30% de la grasa vegetal protege aproximadamente el 43% del butirato sódico total, así por tanto, el producto BP-70 se puede decir que está formado por un 30% de butirato sódico

30 protegido y por un 40% de butirato sódico sin proteger. Los aceites esenciales de jengibre y piperina, quedan recubiertos con los mismos porcentajes que el butirato sódico. Todos los aditivos para piensos fueron suministrados por N orel, SA, España. El peso corporal de los animales se midió durante el experimento en los días 1, 4, 7, 10, 14, 18, 21. Todos los animales fueron sacrificados en el día 25.

Tabla 2: Diseño Experimental.

Grupo de animales: BP-70 +Jengibre +piperina (g/kg pienso) Paracox-5® Gumboro C. perfringens A

A (n=12): - + + +

B (n=12): 1.5 g/kg + + +

Grupo A=control, Grupo B= BP-70+ Jeng1bre+p1penna, Group C= aceites esenciales.

1 O 15: En la Figura 1 se muestra que ya en el día 1 7, justo el día anterior a la infección con C. perfringens A, el grupo de animales tratados con BP-70+ Jengibre+piperina (Grupo B) presentaba un incremento de su masa corporal respecto al grupo control infectado pero no tratado con ningún aditivo alimenticio (Grupo A) (p=0.002). Posteriormente se realizó otro análisis de peso corporal de cada uno de los grupos de animales incluidos en el estudio en el día 24, un día antes del sacrificio de los mismos. Como se observa en la Figura 2 y al igual que sucedió con el análisis de peso realizado en día 17 (Figura 1 ), dicho análisis puso de manifiesto que el tratamiento con BP-70+ J engibre+piperina, mostró una tasa de crecimiento corporal significativamente mayor que el grupo de animales control infectados pero no tratados con ningún aditivo alimenticio (p=0.001 ).

20 25: A continuación se procedió a la realización de un análisis histopatológico de las muestras recogidas de distintos órganos de cada grupo de animales: hígado, bazo y la sección distal del yeyuno. Las muestras frescas fueron sumergidas inmediatamente en formol al 10% para su conservación hasta que fuesen utilizadas en los análisis posteriores. Las lesiones microscópicas se clasificaron de acuerdo con el método de Gholamiandehkordi et al. (2007), con pequeñas desviaciones: O=negativo; 1 =inflamación del intestino; 2=necrosis focal (1.2 cm) o cambios degenerativos en la mucosa (la apariencia grasosa); 3=necrosis irregular (3-4 cm) y 4=necrosis difusa. La presencia de enteritis (por lo generallinfo-histiocítica) también se indicó.

30: En la Figura 3 se muestra una comparación de la gravedad de las lesiones macroscópicas que presentaba el grupo de animales tratados con BP-70+ Jengibre+piperina (Grupo B)

respecto al grupo de animales control infectados pero no tratados con ningún aditivo. Como

se puede observar en dicha Figura 3, el Grupo B (BP-70+ Jengibre+piperina) mostró

puntuaciones significativamente más bajas que el grupo control (p=0.001). Por tanto,

dichos resultados ponen de manifiesto que el tratamiento con BP-70+ Jengibre+piperina

5: (Grupo B) disminuye significativamente las lesiones macroscópicas que presentaban los

pollos de engorde infectados con C. perfringes A respecto al grupo de animales control que

presentaban infección pero a los que no se les administró ningún tipo de aditivo (Grupo A).

Así, mediante el presente ejemplo se pone de manifiesto que el tratamiento el aditivo

1O: alimenticio descrito en la presente invención, butirato sódico junto con aceites esenciales

vegetales, jengibre y piperina, y todo ello parcialmente recubierto con grasas vegetales,

produce un incremento significativo en el peso de los animales a los que se les indujo

necrosis entérica artificial mediante la inoculación de C. perfringens A y que han sido

tratados con dicho aditivo (Grupo B) respecto al grupo de animales control, que también

15: presentaban la infección pero que no han sido tratados con dicho aditivo (Grupo A).

También, el presente ejemplo pone de manifiesto la mejora de las lesiones, principalmente

intestinales (producidas por la infección con C. perfringens A), que presentan las muestras

extraídas del grupo de animales tratado con el aditivo de la invención (Grupo B) respecto al

grupo de animales control no tratados con ningún aditivo (Grupo A).

20

Ejemplo 2. Determinación de la respuesta inmune del tejido linfoide asociado al

intestino (GAL T) en pollos de engorde que padecen enteritis necrótica y que son

tratados con diferentes aditivos alimenticios.

25: Para determinar la respuesta inmune del GALT, se realizó otro ensayo experimental

también con pollos de engorde (n=48) que fueron divididos en seis grupos (6

animales/grupo, Tabla 3). Todas las aves, al igual que en el Ejemplo 1, también fueron

tratados con vacunas de Gumboro y Paracox-5® en los días indicados en la Tabla l. Los

grupos A, C y D están formados por los pollos de engorde no infectados con C. perfringes

30: A, mientras que los grupos B, E y F están formados por los pollos de engorde infectados

por vía oral, con C. perfringens A (6-8x108 CFU). La dieta básica de los animales es la

misma que la descrita en el Ejemplo 1, pero complementada con diferentes aditivos para

piensos: (i) 1,5 g de BP-70/Kg. de alimento (grupos C y E), (ii) 1,5 g de BP-

70+ Jengibre+piperina/kg de alimento (Grupos D y F). Todos los aditivos para piensos

35: fueron suministrados por Norel, SA, (Madrid, España).

Tabla 3. Diseño Experimental

Grupo: BP-70 (g/kg pienso) BP-70+Jengibre + piperina (g/kg pienso) Vacuna Paracox-5® Vacuna Gumboro Clostridium. perfringens A

A: - - + + -

B: - - + + +

e: 1.5 g/kg - + + -

D: - 1.5 g/kg + + -

E: 1.5 g/kg - + + +

F: - 1.5 g/kg + + +

Los pollos fueron sacrificados en el día 22 y se tomaron muestras intestinales de

5: aproximadamente 5 cm de largo del yeyuno entre el divertículo de Meckel y la región

ilíaca. Las secciones intestinales fueron cortadas longitudinalmente, y se lavaron tres veces

con PBS helado que contenía 100 U/ml de penicilina y 100 11g/ml de estreptomicina

(Fischer científico). La capa de la mucosa se raspó con un portaobjetos de vidrio estéril y el

tejido intestinal fue sumergió inmediatamente en 1 ml de Trizol helado (Invitrogen), para

1 O: posteriormente extraer el ARN según se indica en las instrucciones del fabricante. Las

muestras fueron homogeneizadas y se mantenidas a -80°C hasta ser procesadas.

Para evaluar la respuesta inflamatoria e inmune después de inducir en los animales la

infección con la enteritis necrótica y comparar el efecto de cada uno de los tratamientos con

15: los diferentes aditivos descritos en la Tabla 3, se evaluaron los cambios en los niveles de

expresión de diferentes citocinas mediante la técnica de PCR cuantitativa (qRT-PCR). Las

citocinas analizadas fueron: interleucina-1 beta (IL-1 ~), interleucina-2 (IL-2), interleucina-8

(IL-8), interleucina-1 O (IL-1 0), receptor CD3y8, lipopolisacárido de necrosis tumoral

inducida por el factor alfa (LITAF) y factor 15 de la superfamilia del factor de necrosis

20: tumoral (TNFSF15). Los genes control usados de referencia fueron: gliceraldehído-3-

fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y ~-actina. Los cebadores utilizados para cada uno de los

genes mencionados se muestran en la Tabla 4. Las interleucinas-1, 2, 8 y 10 son miembros

de la familia de las interleucina, indispensables en la respuesta inmune celular y humoral.

El receptor CD3 (Cluster de Diferenciación 3) es un receptor de destino se encuentra en

25: todas las células-T, el LITAF es una citocina de la familia del TNF que se libera después de

la inducción LPS y el TNFSF15 está presente en las células endoteliales y también participa

en la proliferación, diferenciación y apoptosis de las células del sistema inmune.

Para analizar las diferencias significativas que presentaron cada uno de los grupos de

tratamiento descritos previamente en el nivel de expresión de los genes analizados se utilizó

el test de ANOV A.

Tabla 4. Cebadores utilizados en la técnica qRT-PCR

ARN: Tamaño No Acceso al

Cebadores

producto: GenBank

Gen Directo Inverso (bp)

GAPDH SEQ IDNO. 1 SEQIDNO. 2 264 NM 204305 ~-actina SEQIDNO. 3 SEQIDNO. 4 169 NM 205518 IL-1~ SEQIDNO. 5 SEQIDNO. 6 80 NM 204524 IL-2 SEQIDNO. 7 SEQIDNO. 8 148 NM 204153 IL-8 SEQIDNO. 9 SEQ IDNO. 10 200 NM 205498 IL-10 SEQ IDNO. 11 SEQ IDNO. 12 94 NM 001004414 CD3y8 SEQ IDNO. 13 SEQ IDNO. 14 166 NM 205512.1 LITAF SEQ IDNO. 15 SEQ IDNO. 16 229 NM 204267 TNFSF15 SEQ ID NO. 17 SEQ IDNO. 18 292 NM 001024578

Para poner de manifiesto los efectos inmunomoduladores que proporcionan los aditivos

1O: alimenticios administrados a los diferentes grupos de animales descritos en el presente

ejemplo infectados o no con C. perfringens, se compararon los grupos de animales C y D

tratados con alguno de los aditivos mencionados y que no presentaban infección respecto al

grupo de animales control no tratado y no infectado (Grupo A). Y por otro lado, se

compararon los grupos de animales: E y F tratados con los aditivos BP-70 o BP-

15: 70+jengibre+piperina, respectivamente y que presentaban enteritis necrótica, respecto al

grupo de animales infectado con C. perfringens pero no tratado con ningún aditivo de los

descritos en la presente invención (Grupo B).

En primer lugar se comparó el nivel de expresión de las citocinas analizadas en el grupo de

20: animales control no tratados y que no han sido infectados con C. perfringens A (Grupo A)

respecto a los grupos de animales no infectados con C. perfringens A pero tratados con los

aditivos: alimentarios BP-70 (Grupo C) y BP-70+Jengibre+piperina (Grupo D), para

analizar los efectos inmunomoduladores naturales de dichos aditivos.

La Figura 4 A, B y e muestra el efecto inmunomodulador de los aditivos: BP-70 y BP-

70+ Jengibre+piperina, sobre el nivel de expresión de los genes IL-1 ~' IL-2, IL-8, IL-1 O,

eD3y8, LITAF y TNFSF15. Los ratios relativos de expresión de dichos genes en los grupos

5: tratados e y E, se compararon con los animales no tratados (Grupo A). Ninguno de los

grupos estaba infectado con C. perfringens A. La Figura 4 A muestra que el tratamiento con

BP-70 (Grupo e) no produjo ningún cambio en los niveles de expresión de los genes

analizados. Los mayores cambios en el perfil de expresión de las genes analizados se

produjeron debido al tratamiento con el aditivo BP-70+ Jengibre+piperina (Grupo D)

1 O: (Figura 4B). Tres de los genes investigados estaban sobreexpresados en el grupo de

animales que tomaban BP-70+ Jengibre+piperina (Grupo D), respecto al grupo de animales

control que no lo tomaban (Grupo A). Dichos genes fueron: IL-1 ~ (p=0.028), IL-2

(p=0,026) y eD3y8 (p=O.Oll). Por otro lado, uno de los genes analizados, TNFSF15,

mostró una infraexpresión (p=0.004). Esta infraexpresión se reprodujo también (Figura 4C)

15: cuando se comparó el grupo de animales control no infectados y sin tratamiento (Grupo A)

con el grupo de animales infectados y tratados con el aditivo descrito en la presente

invención BP+ 70+ J engibre+piperina (grupo F). La sobreexpresión de los genes IL-1 ~ e IL-

2 indica la activación de la cascada de la respuesta inmune, dando lugar a la estimulación

de la proliferación y maduración de los linfocitos. Estas observaciones se ven confirmadas

20: por el aumento de la expresión génica de eD3y8 que representa un recuento total elevado

de células T.

Por otro lado, en la Figura 5 se muestra el nivel de expresión de cada una de las citocinas

analizadas: IL-1~, IL-2, IL-8, IL-10, eD3y8, LITAF y TNFSF15, en cada uno de los grupos

25: de animales tratados con cada uno de los aditivos descritos en el presente ejemplo y que

estaban o no infectados con C. perfringes A (Grupos e a F), así como en el grupo de

animales control infectado con C. perfringes A, pero no tratado con ninguno de dichos

aditivos (Grupo B). La Fig. 5 pone de manifiesto que el tratamiento con BP-

70+ Jengibre+piperina (Grupo E), produjo una infraexpresión del gen TNFSF15 tanto en el

30: grupo de animales control sin infectar y sin tomar ningún aditivo en su dieta (Grupo A),

como en el grupo de animales infectados pero que tampoco tomaban ningún aditivo en su

dieta (Grupo B).

En segundo lugar se analizaron los efectos inmunomoduladores que proporcionan los

aditivos alimenticios administrados a los animales de los grupos E (BP-70) y F (BP-

35: 70+ Jengibre+piperina), tratados con los aditivos mencionados y que presentaban enteritis

necrótica, respecto al grupo de animales infectado con C. perfringens pero no tratado con

ningún aditivo de los descritos en la presente invención (Grupo B).

En la Figura 6 se muestra el nivel de expresión de los genes IL-1 ~' IL-2, IL-8, IL-1 O,

5: CD3y8, LITAF y TNFSF15 en el grupo de animales infectados con C. perfringes A y que

están tratados con el aditivo alimenticio descrito en la presente invención, BP-

70+ Jengibre+piperina (Grupo F), respecto al nivel de expresión de dichos genes que

presentaba el grupo de animales control infectado con C. perfringes A pero que no ha sido

alimentado con los aditivos utilizados en el presente ejemplo (Grupo B). Dicho análisis se

1 O: realiza con el fin de analizar los efectos de dichos aditivos en la evolución de la infección.

Como se puede observar en dicha Figura 6, se produjo un incremento significativo en los

niveles de expresión de la citocina IL-2 respecto al grupo control no tratado (Grupo B).

Además, dicho grupo de animales tratado con BP-70+ Jengibre+piperina presentó un

descenso en los niveles de expresión de TNFSF15 respecto al grupo de animales control no

15: tratados (Grupo B).

De la misma manera, en la Figura 7, se muestra el nivel de expresión de las citocina

TNFSF15 en el grupo de animales infectados y tratados con BP-70+ Jengibre+piperina

(Grupo F) respecto al grupo de animales control infectados pero no tratados (Grupo B). El

20: tratamiento con BP-70+ Jengibre+piperina (Grupo F) produjo una infraexpresión de

TNFSF15, respecto al grupo control (Grupo B).

De acuerdo con los resultados mostrados en el presente ejemplo, el tratamiento con butirato

sódico+ aceites esenciales, ejemplificado en la presente invención mediante el tratamiento

25: con BP-70+ Jengibre+piperina, fue capaz de mostrar una acción moduladora significativa en

la respuesta inmune produciendo un incremento en la expresión de los genes que codifican

para las citocinas IL-1 ~' IL-2 y CD3y8 y un descenso en la expresión del gen que codifica

para la citocina TNFSF15, dando lugar a un efecto protector frente a la infección artificial

producida por C. perfringens A. Además, como se ha puesto de manifiesto en los resultados

30: mostrados en el Ejemplo 1, el tratamiento con el aditivo descrito en la presente invención,

también es capaz de inducir un incremento en la ganancia de peso de los animales

sometidos a dicho tratamiento y disminuir la gravedad de las lesiones histológicas que

presentan dichos animales como consecuencia de la infección con C. perfringens A.

BIBLIOGRAFIA

l. Dipeolu et al., Biocatalytic amide reduction usmg elostridium sporogenes. Biotechnol Lett. 2005 Nov;27(22):1803-7.

2.: Femández-Rubio e, Ordóñez e, Abad-González J, Garcia-Gallego A, Honrubia MP, Mallo JJ, Balaña-Fouce R. Butyric acid-based feed additives help protect broiler chickens from Salmonella Enteritidis infection. Poult Sci. 2009 May;88(5):943-8.

3.: Gálfi P, Bokori J. Feeding trial in pigs with a diet containing sodium n-butyrate. Acta Vet Hung. 1990;38(1-2):3-17.

4.: Gholamiandehkordi AR, Timbermont L, Lanckriet A, Van Den Broeck W, Pedersen K, Dewulf J, Pasmans F, Haesebrouck F, Ducatelle R, Van Immerseel F. Quantification of gut lesions in a subclinical necrotic enteritis model. A vian Pathol. 2007 Oct;36(5):375-82.

5.: Katoh K y Tsuda T, Effects of acetylcholine and short-chain fatty acids on acinar cells ofthe exocrine pancreas in sheep. J Physiol. 1984 Nov;356:479-89.

6.: Leeson S, Namkung H, Antongiovanni M, Lee EH. Effect of butyric acid on the performance and carcass yield of broiler chickens.Poult Sci. 2005 Sep;84(9): 1418-

22.

7.: Sano H, Nakamura E, Takahashi H, Terashima Y. Plasma insulin and glucagon responses to acute challenges of acetate, propionate, n-butyrate and glucose in growing gilts (Sus scrofa). eomp Biochem Physiol A Physiol. 1995 Apr;110(4):375-8.

8.: Van Immerseel, F., V. Fievez, J. De Buck, F. Pasmans, A. Martel, F. Haesebrouck, and R. Ducatelle. 2004. Microencapsulated short-chain fatty acids in feed modify colonization and invasion early after infection with Salmonella Enteritidis in young chickens. Poult. Sci. 83:69-74.

Claims

REIVINDICACIONES

1.-Aditivo para alimentación animal que comprende la combinación de sales de ácidos orgánicos con al menos un principio activo de origen vegetal, parcialmente recubierta dicha combinación con aceites y/o grasas vegetales.
2.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 1 donde los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: butírico, propiónico, fórmico, láctico, cítrico, láurico, cúprico, caprílico, caproico o acético.
3.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 1 donde las sales de ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: sódica, cálcica, cúprica o potásica.
4.-Aditivo para alimentación animal según las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado porque la sal del ácido orgánico es preferentemente la sal sódica del ácido butírico.
5.-Aditivo para alimentación animal según las reivindicaciones 1 a 4 caracterizado porque la sal del ácido orgánico se encuentra preferentemente en una proporción de entre un 30-70% en peso húmedo, siendo más preferible una proporción del 60%.
6.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 1 donde los principios activos de origen vegetal son preferentemente aceites esenciales y pueden seleccionarse de entre cualquiera de la lista: jengibre, piperina, orégano, timol, carvacrol, cinamaldehído, ajo y/o cualquiera de sus combinaciones.
7.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 6 donde el principio activo de origen vegetal es preferentemente una combinación de aceites esenciales de jengibre y de p1penna.
8.-Aditivo para alimentación animal según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque los principios activos vegetales se encuentran preferentemente a una concentración de entre un 1-20% en peso húmedo, preferentemente a una concentración del 10%.
9.-Aditivo para alimentación animal según las reivindicaciones 7 y 8 caracterizado porque la concentración preferida de jengibre y piperina es del 5% en peso húmedo de jengibre y 5% en peso húmedo de piperina.

5

10.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 1 caracterizado porque el recubrimiento parcial de la combinación de las sales de ácidos orgánicos con los principios activos de origen vegetal, con aceites y/o grasas vegetales, es aproximadamente entre un 30-60% en peso húmedo, siendo más preferentemente un recubrimiento de un 30%.

1 O

11.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 1 O donde los aceites y/ o grasas vegetales que recubren parcialmente la combinación de las sales de ácidos orgánicos con los principios activos de origen vegetal, se seleccionan entre: estearina de palma o jabón cálcico de ácidos grasos de aceite de palma (PFAD).

15 20 25

12.-Aditivo para alimentación animal según las reivindicaciones 1 a 11 caracterizado porque la sal es preferentemente la sal sódica del ácido orgánico butírico, el principio activo de origen vegetal es preferentemente una combinación de aceite esencial de jengibre y piperina y la cubierta de aceites y/o grasas vegetales está preferentemente formada por estearina de palma. 13.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 12 caracterizado porque la concentración de butirato sódico es preferentemente un 60% peso húmedo, la concentración de la combinación de aceites esenciales de jengibre y piperina es preferentemente un 10% peso húmedo y la cubierta de estearina de palma es preferentemente de un 30% peso húmedo.

30

14.-Aditivo para alimentación animal según la reivindicación 13 caracterizado porque la concentración de jengibre es del 5% en peso húmedo y la concentración de piperina es del 5% en peso húmedo. 15.-Uso de los aditivos para alimentación animal de las reivindicaciones 1 a 14 como promotores del crecimiento de los animales.

35

16.-Uso según la reivindicación 15 donde los animales son preferentemente pollos, conejos y cerdos.
17.-Uso de los aditivos para alimentación animal de las reivindicaciones 1 a 14 como moduladores de la respuesta inmune, en animales de cría alimentados con los mismos.

5

18.-Uso según la reivindicación 17 caracterizado porque la modulación de la respuesta inmune comprende una variación de la expresión de alguno de los genes que codifican para alguna de las siguientes citocinas: aumentando la expresión de IL-1~, IL-2 y CD3y8 y/o disminuyendo la expresión de TNFSF15.

1 O

19.-Uso de los aditivos para alimentación animal de las reivindicaciones 1 a 14 como bactericidas en animales de cría alimentados con los mismos.
20.-Uso según la reivindicación 19 caracterizado porque la acción bactericida es ejercida sobre bacterias Gram+, Gram -, y protozoos.