ES2349410T3 - Formulación farmacéutica de agente de leucotrieno b4 (ltb4) estabilizado. - Google Patents

Abstract

Una formulación farmacéutica de agente LTB4 estabilizado, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente LTB4, una sal del mismo, un éster del mismo o un éter del mismo en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable en un pH alcalino entre 8.2 y 14 que es efectivo para estabilizar el agente LTB4, incrementando así la vida útil de la formulación o un vehículo reactivo alcalino, farmacéuticamente aceptable; en donde el agente LTB4 es uno o más de los ácidos grasos poliinsaturados seleccionados del grupo que consiste en LTB4, 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-deshidro-LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4, ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenoico ("5-HETE"), 14,15-dihidro-5- HETE, 17,18-deshidro-5-HETE y en donde un vehículo reactivo alcalino es una sustancia (o sustancias) inerte farmacéuticamente aceptable , la cual crea un micro-pH alcalino entre 8.2 y 14 alrededor de cada partícula de LTB4, en el caso de la formulación de LTB4 estabilizado que está en forma ultracongelada, cristalina o amorfa sólida, cuando el agua es absorbida en las partículas de la mezcla o cuando el agua se agrega en pequeñas cantidades a la mezcla.

Description

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

(a)

Campo de la Invención

La invención se refiere a una formulación farmacéutica novedosa de un agente LTB4 con un pH alcalino que es efectivo para estabilizar el agente LTB4 y para proporcionar una formulación con una vida útil incrementada. De esta manera, la invención se refiere a una composición que comprende un agente LTB4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable a un pH alcalino.

(b)

Descripción de la Técnica Anterior

El leucotrieno B4, por sí mismo, es un ácido graso tetrainsaturado de veinte átomos de carbono y es una molécula relativamente inestable. Las soluciones acuosas isotónicas de LTB4 a pH 7.0-7.6, las cuales son adecuadas para la administración a humanos y animales son estables solo durante períodos de tiempo cortos (semanas a meses) cuando se almacenan a temperaturas que varían de 2ºC a 25ºC (y superiores a 25ºC). En realidad, los agentes de LTB4 están sometidos a oxidación, isomerización de enlaces dobles (el LTB4 contiene dos enlaces dobles cis y dos enlaces dobles trans), racemización (el LTB4 contiene dos centros quirales), esterificación (el LTB4 contiene un grupo carboxílico), lactonización, entre otras alteraciones estructurales posibles.

Aunque los agentes de LTB4 tienen una gran utilidad farmacéutica, su uso como agentes terapéuticos en animales o humanos es problemático, debido a su insuficiente estabilidad y vida útil en solución a temperaturas entre 2ºC y 25ºC.

La bibliografía científica indica que hasta la fecha, las formulaciones de LTB4 para la administración a humanos y animales son soluciones acuosas a pH 7.0-7.5 las cuales se almacenan a temperaturas muy bajas (-20ºC o inferiores) para evitar la degradación. Alternativamente, el LTB4 se utiliza como soluciones etanólicas, también almacenadas a una baja temperatura para evitar la degradación, las cuales se diluyen con una solución tampón (pH 7.0-7.5) o se evaporan a sequedad y se redisuelven nuevamente en una solución tampón (pH 7.0-7.5) inmediatamente antes del uso. Estas formulaciones son inadecuadas para el uso del LTB4 como un agente terapéutico en humanos y animales (vida útil poco práctica y corta).

WO03/105823 divulga soluciones que comprenden derivados HETE, agua y edetato disódico a unos valores de pH entre 6.5 y 8 para el tratamiento de la sequedad de la boca.

Dado el potencial de los agentes de LTB4 como agentes terapéuticos para la profilaxis y el tratamiento de infecciones y cáncer en humanos y animales, sería sumamente deseable proporcionar una formulación farmacéutica novedosa del agente de LTB4.agente LTB4 agente LTB4

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Una finalidad de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica novedosa de un agente LTB4 a un pH alcalino que sea efectivo para estabilizar el agente LTB4 y para proporcionar una formulación con una vida útil incrementada, según la reivindicación 1.

De acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica de agente de LTB4, que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente LTB4, una sal del mismo, un éster del mismo o un éter del mismo en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable a un pH alcalino entre 8.2 y 14 que es efectivo para estabilizar el agente de LTB4, incrementando con lo cual la vida útil de la formulación. De esta manera, la invención se refiere a una composición que comprende un agente de LTB4, una sal del mismo, un éster del mismo o un éter del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable en un pH alcalino.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el pH alcalino preferido varía entre 8.2 y 14, especialmente entre 8.5 y 12.5 , preferiblemente, entre 8.5 y 11.5, más preferiblemente entre 9.5 y 11.5, tal como aproximadamente 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3,

11.4 u 11.5. En otro aspecto preferido, el pH alcalino preferido varía entre 8.5 y 9.5, entre 9.0 y 10.0, entre 9.5 y 10.5 o entre 10.0 y 11.5.

La formulación farmacéutica de un agente LTB4 comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente LTB4 en asociación con un vehículo reactivo, alcalino, farmacéuticamente aceptable. Además, la presente solicitud describe otro aspecto con relación a un vehículo farmacéuticamente aceptable a un pH alcalino que es efectivo para estabilizar la formulación farmacéutica en cuestión, esta realización también incluye un vehículo reactivo, alcalino, farmacéuticamente aceptable.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el vehículo es un vehículo acuoso. De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el vehículo es un sólido particulado revestido con una matriz alcalina o constituido de una matriz alcalina y el

vehículo puede seleccionarse del grupo que consiste en solventes orgánicos o una mezcla de los mismos y agua.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la formulación estabilizada comprende agua y al menos 50% (vol/vol), preferiblemente al menos 60% (vol/vol), más preferiblemente al menos 70% (vol/vol), tal como aproximadamente 75% (vol/vol), especialmente al menos 80% (vol/vol) de un co-solvente. La matriz alcalina y el vehículo pueden seleccionarse del grupo que consiste en solventes orgánicos o una mezcla de los mismos y agua.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, , la formulación estabilizada comprende agua y al menos 50% (vol/vol), preferiblemente al menos 60% (vol/vol), más preferiblemente al menos 70% (vol/vol), tal como aproximadamente 75% (vol/vol), especialmente al menos 80% (vol/vol) de un co-solvente. En una realización preferida de la invención, la formulación estabilizada comprende agua y de 1 a 49% de un co-solvente o agua y de 50 a 99% de un co-solvente. El co-solvente puede seleccionarse del grupo que consiste de etanol, propilenglicol, polietilenglicol, alcohol isopropílico, alcohol bencílico, propanodiol, glicerol, glicofurol, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida y mezclas de los mismos. En una realización preferida de la invención, la formulación estabilizada comprende al menos 90% (vol/vol) del cosolvente.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la formulación está en una forma líquida o ultracongelada o en una forma cristalina o en una forma amorfa sólida, preferiblemente en una forma líquida o en una forma ultracongelada.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el vehículo acuoso se selecciona del grupo que consiste en agua, soluciones de hidróxido de metales alcalinos, tal como solución de hidróxido de sodio, soluciones salinas tampón , tal como Solución Salina Amortiguada con Fosfato (PBS, por sus siglas en ingles), solución acuosa que contiene co-solvente, tal como solución acuosa que contiene alcohol, soluciones de azúcar o una mezcla de las mismas. La solución acuosa que contiene co-solvente contiene típicamente de aproximadamente 1% a aproximadamente 49% (vol/vol) de co-solvente.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el co-solvente presente en la solución acuosa que contiene co-solvente se selecciona del grupo que consiste de etanol, propilenglicol, polietilenglicol, alcohol isopropílico, alcohol bencílico, propanodiol, glicerol, glicofurol, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida y mezclas de los mismos.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la formulación se estabiliza a una temperatura que varía de -25°C a 45°C, preferiblemente de 0°C a 40°C, tal como de 2°C a 35°C, especialmente de 5°C a 25°C, cuando el vehículo es un vehículo acuoso y la formulación está en una forma líquida y una temperatura que varía de -25°C a 45°C, preferiblemente de -20°C a 40°C, más preferiblemente de 10°C a 30°C, especialmente de 0°C a 20°C, más preferiblemente de 0°C a 10°C, cuando el vehículo es un vehículo orgánico, tal como un vehículo que contiene alcohol

o la formulación está en una forma ultracongelada. Otros intervalos de temperatura más preferidos, cuando el vehículo es un vehículo orgánico, tal como un vehículo que contiene alcohol o la formulación está en una forma ultracongelada

 ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA), ácido dietilenotriaminopenta-acético

(DTPA), ácido nitrilotri-acético (NTA), ácido glutámico y ácido aspártico,  EGTA, and  DTPA

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la sal farmacéuticamente aceptable puede seleccionarse de un grupo que consiste de las sales de iones de sodio y potasio.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la formulación estabilizada puede estabilizarse además en forma ultracongelada al comprender Albúmina de Suero Humano (HSA, por sus siglas en inglés) en la formulación.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el agente quelatante está presente en cantidades de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 1.0 por ciento en peso de la formulación del agente LTB4, más preferiblemente el agente quelatante está presente en cantidades de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 40 por ciento en peso de la formulación del agente LTB4.

Los agentes de LTB4 preferidos de acuerdo con la presente invención incluyen, sin limitación, los siguientes:  leucotrieno B4 [ácido 5S,12R-dihidroxi-6,8,10,14(Z,E,E,Z)-eicosatetrae-noico] (“LTB4”),  LTB4, 14,15-dihidro-LTB4 (“LTB3”) 17,18-deshidro-LTB4 (“LTB5”), 19-hidroxi

LTB4, 20-hidroxi-LTB4,

 Ester metílico de LTB4,

 ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenoico (“5-HETE”), 14,15

dihidro-5-HETE, 17,18-deshidro-5-HETE y,

 una sal de los mismos, un derivado de éster de los mismos y un derivado de éter de los mismos.

En una realización preferida de la invención, los agentes LTB4 de acuerdo con la presente invención se seleccionan del grupo que consiste en LTB4, LTB3, LTB5, 20hidroxi-LTB4, 20,20,20-trifluorometil-LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 18-hidroxi-LTB4, 3-hidroxiLTB4, 2-hidroxi-LTB4, 4-hidroxi-LTB4, análogos 5-desoxi de los mismos, y sales, ésteres o éteres de los mismos.

Aún más preferiblemente, los agentes LTB4 de acuerdo con la presente invención se seleccionan del grupo que consiste en LTB4, LTB3, LTB5, 20-hidroxi-LTB4, y sales, ésteres o éteres de los mismos.

El agente LTB4 está presente preferiblemente en cantidades de aproximadamente 0.1 g/ml a 25 mg/ml en la formulación, preferiblemente de 1 g/ml a 25 mg/ml en la formulación, más preferiblemente de aproximadamente 1 g/ml a 1 mg/ml en la formulación.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La figura 1 ilustra que el agente quelatante EDTA mejora la estabilidad de una solución acuosa de sal de Na de LTB4 a pH 7.4.

La figura 2 ilustra el efecto de la concentración de LTB4 sobre la estabilidad de soluciones acuosas de sales de Na de LTB4.

La figura 3 ilustra el efecto del pH (solución tampón de fosfato/glicina) sobre la estabilidad de una solución acuosa de sal de Na de LTB4 a 1.75 mg/ml.

La figura 4 ilustra el efecto del pH (solución tampón de fosfato) sobre la estabilidad de soluciones acuosas de sal de Na de LTB4 a 17.5 g/ml.

La figura 5 ilustra el efecto de diferentes concentraciones de amortiguador (solución tampón de fosfato/glicina) sobre la estabilidad de soluciones acuosas de sal de Na de LTB4.

La figura 6 ilustra que la albúmina de suero humano (HSA) y/o el pH alcalino (solución tampón de fosfato) mejora la estabilidad de soluciones acuosas ultracongeladas (que contienen manitol) de sal de Na de LTB4.

La figura 7 ilustra que el pH alcalino (solución tampón de fosfato/glicina) mejora la estabilidad de soluciones etanólicas (95/5, etanol/agua y 75/25 etanol/solución tampón , Vol/Vol) de LTB4 (forma ácida y sal de Na).

La figura 8 ilustra que el pH alcalino (solución tampón de fosfato/glicina)

mejora la estabilidad de varios agentes LTB4 en solución.

La figura 9 ilustra también que el pH alcalino (solución tampón de fosfato/glicina) mejora la estabilidad de varios agentes de LTB4 en solución.

La figura 10 ilustra que el LTB4 es estabilizado sobre un amplio intervalo de pH alcalino y que el pH alto debe mantenerse para asegurar la estabilidad.

La figura 11 ilustra la captación efectiva de LTB4 en un modelo de rata por medio de la administración intrayeyunal y la compara con la administración intravenosa y subcutánea.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La estabilidad de soluciones acuosas de LTB4 se sometió a prueba bajo varias condiciones experimentales. Se descubrió que 1) la estabilidad de las soluciones de LTB4 se incrementó dramáticamente a un pH alcalino; y 2) los agentes quelatantes tales como EDTA promueven la estabilidad de las soluciones de LTB4. El efecto positivo del pH alcalino sobre la estabilidad de una solución de LTB4 se observó utilizando ya sea una solución tampón de fosfato o una solución tamón de glicina; el efecto positivo del pH alcalino sobre la estabilidad de una solución de LTB4 se observó en todas las concentraciones del fármaco sometidas a prueba (17.5 g/ml a 17.5 mg/ml) y en todas las temperaturas sometidas a prueba (4ºC y 40ºC).

Cuando se hace referencia a una “vida útil incrementada” en el contexto de la presente invención, se propone para referirse a una extensión de la estabilidad de los agentes de LTB4 en las formulaciones o composiciones de la presente invención en comparación con formulaciones o composiciones de agentes LTB4 que no comprenden un pH como el descrito anteriormente y/o agentes quelatantes como los descritos anteriormente. El período de tiempo de estabilidad de los agentes LTB4 en las formulaciones o composiciones de la presente invención en comparación con formulaciones o composiciones de agentes LTB4 que no comprenden un pH como el descrito anteriormente y/o agentes quelatantes como los descritos anteriormente, dependiendo de la temperatura, contaminación y concentración de los agentes de LTB4, es incrementado preferiblemente por al menos una semana, tal como al menos dos, tres o cuatro semanas, más preferiblemente al menos dos, tres o cuatro meses, especialmente al menos seis, nueve o doce meses, tal como al menos 24 o 48 meses.

Cuando se hace referencia al período de tiempo de estabilidad de los agentes LTB4 en formulaciones o composiciones, se propone para referirse al período de tiempo en donde el nivel de impurezas es menor que 10%, preferiblemente menor que 6%, mucho más preferiblemente menor que 5%, tal como menor que 4%, 3%, 2% o 1%.

El término “impurezas” en el contexto de la presente invención se propone para referirse a los productos de la degradación del agente LTB4 medidos por medio de HPLC de fase inversa y fotometría ultravioleta a 270 nm. De esta manera, mientras más alto sea el nivel de impurezas, más baja será la estabilidad de la formulación de agente LTB4. En la presente descripción, los ejemplos y las figuras, el nivel de impurezas es expresado como el porcentaje del área pico de las impurezas con relación al área pico de LTB4 medida por la fotometría ultravioleta a 270 nm. En los Ejemplos y en las figuras que pertenecen a éstos, el nivel de impurezas se puede expresar como el porcentaje del área total bajo la curva a 270 nm. La definición aplicada será clara a partir del contexto de los ejemplos.

El término “sales de los mismos” se propone para referirse a las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables que se pueden obtener al tratar la forma ácida de un grupo funcional, tal como un ácido carboxílico, con bases apropiadas tales como bases inorgánicas, por ejemplo hidróxidos de metales alcalinos; típicamente hidróxido de sodio o potasio; carbonatos de metales alcalinos; típicamente carbonato o carbonato ácido de sodio o potasio; hidróxidos de metales alcalinotérreos; típicamente hidróxido de calcio o magnesio; carbonatos de metales alcalinotérreos; típicamente carbonato o carbonato ácido de calcio o magnesio; o amoníaco; o bases orgánicas por ejemplo aminas primarias, secundarias o terciarias, alcoholatos de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, por ejemplo metanolato de sodio, etanolato de sodio o etanolato de potasio. Las sales preferidas de la presente invención son sales de adición de base con hidróxido de sodio o potasio.

El término “ésteres de los mismos” se propone para referirse a los ésteres farmacéuticamente aceptables que se pueden obtener al tratar la forma ácida o derivado ácido de un grupo funcional con cualquier agente de esterificación típico que sea conocido para aquella persona experta en el campo. En el contexto de la presente invención, los ésteres de los agentes de LTB4 definidos en este documento son preferiblemente ésteres alquílicos de 1 a 6 átomos de carbono, tales como éster metílico, éster etílico, éster n-propílico, éster i-propílico, éster n-butílico, éster i-butílico, éster s-butílico, éster t-butílico, éster n-pentílico, éster i-pentílico, éster s-pentílico, éster neo-pentílico y éster n-hexílico, o precursores o metabolitos de LTB4 o análogos de LTB4: LTB4, 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-deshidro-LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 20-hidroxiLTB4; ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenoico (“5-HETE”), 14,15

dihidro-5-HETE y 17,18-deshidro-5-HETE.

El término formulación de agente LTB4 también incluye formulaciones de compuestos las cuales podrían contener una mezcla de dos o varios agentes de LTB4

o un agente de LTB4 y uno o varios isómeros igualmente o menos activos del agente LTB4 (isómeros posicionales, geométricos u ópticos).

Infecciones

Las infecciones que pueden ser tratadas con el agente LTB4, de acuerdo con la invención, son infecciones causadas por agentes patógenos microbianos de humanos y/o animales. Además, la prevención o profilaxis de infecciones y la estimulación de una función de neutrófilos con las formulaciones o composiciones de LTB4 de la invención están contempladas por los inventores.

La expresión “agentes patógenos microbianos de humanos y/o animales” se propone que incluya, sin limitación, virus de ADN y ARN en general y Retroviridae, bacterias, hongos y parásitos.

Intervalos de Dosis

La cantidad terapéuticamente efectiva del agente LTB4 a administrarse variará con el agente LTB4 particular que se utilize, el tipo y el modo de administración, el uso concurrente de otros compuestos activos, la edad y el tamaño del hospedante, tipo, gravedad y propagación de la infección, respuesta de los pacientes individuales y similares. En el caso del LTB4, se puede administrar en dosis suficientes para obtener una concentración pico o de régimen permanente efectiva de aproximadamente 0.1 nM a 10 M, preferiblemente de 0.1 nM a 1000 nM, más preferiblemente de aproximadamente 0.25 nM a 2.5 M, tal como de 0.25 nM a 25 nM. Una cantidad de dosis efectiva del agente LTB4 puede ser determinada por el clínico después de una consideración de todos los criterios mencionados anteriormente. En el caso de los agentes de LTB4 diferentes del LTB4 los cuales tienen una actividad biológica diferente, la concentración pico o de régimen permanente efectiva que se requiere puede ser diferente, por ejemplo de hasta 25 M, tal como de hasta 10 M. La cantidad de dosificación del agente que es necesaria para obtener las concentraciones deseadas en la sangre puede ser determinada por medio de estudios farmacocinéticos, como se describe en Marleau y colaboradores, J. Immunol. 150: 206, 1993, y Marleau y colaboradores, Br. J. Pharmacol. 112: 654, 1994.

pH

La expresión “pH alcalino” se propone para incluir un pH alcalino entre 8.2 y 14 el cual es efectivo en la estabilización del agente LTB4 en soluciones acuosas u orgánicas o en una formulación sólida o ultracongelada de la presente invención. Los intervalos de pH alcalino preferidos están entre 8.2 y 14, especialmente entre 8.5 y 12.5, tal como entre 8.5 y 11.5, mucho más preferiblemente entre 9.5 y 11.5, tal como aproximadamente 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3, 11.4 u 11.5. En una realización preferida de la invención, los intervalos de pH alcalino preferidos están entre 8.5 y 9.5, entre 9.0 y 10.0, entre 9.5 y 10.5 o entre 10.0 y 11.5

La expresión “vehículo reactivo alcalino” se propone para incluir una sustancia (o sustancias) inerte, farmacéuticamente aceptable, la cual crea un “micro-pH” alcalino entre 8.2 y 14, especialmente entre 8.5 y 12.5, tal como entre 8.5 y 11.5, mucho más preferiblemente entre 9.5 y 11.5, tal como aproximadamente 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3, 11.4, o 11.5, alrededor de cada partícula de LTB4, en el caso de la formulación de LTB4 estabilizada que está en forma ultracongelada, cristalina o amorfa sólida, cuando el agua es absorbida en las partículas de la mezcla o cuando el agua se agrega en pequeñas cantidades a la mezcla. En otro aspecto preferido, el “micro-pH” alcalino varía entre 8.0 y 9.0, entre 8.5 y 9.5, entre 9.0 y 10.0 o entre 10.0 y 11.5. Estas sustancias que crean el “micro-pH” se pueden seleccionar entre, pero no están restringida a, sustancias tales como las sales de sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio de ácido fosfórico, ácido carbónico, ácido cítrico u otros ácidos inorgánicos u orgánicos, débiles, adecuados; sustancias utilizadas normalmente en preparaciones antiácido tales como hidróxidos de aluminio, calcio y magnesio; óxido de magnesio o sustancias compuestas, tales como Al2O3.6MgO.CO2.12H2O, (Mg6A12(OH)16CO3.4H2O), MgO.A12O3.2SiO2.nH2O o compuestos similares; sustancias orgánicas amortiguadoras de pH tales como trihidroximetilaminometano u otras sustancias amortiguadoras de pH farmacéuticamente aceptables, similares.

Vehículos Farmacéuticamente Aceptables

La expresión “vehículo farmacéuticamente aceptable” se propone para incluir cualquier vehículo, tal como cualquier vehículo acuoso, que sea adecuado para el uso fisiológico y farmacéutico. Este vehículo se selecciona del grupo que consiste de agua, soluciones salinas amortiguadas, tal como solución amortiguada con fosfato (PBS) o soluciones de cloruro de sodio amortiguadas con agentes tales como Tris, glicina u otros aminoácidos, en particular aminoácidos básicos, una solución acuosa que contiene alcohol, tal como etanol, propilenglicol, propanodiol, glicerol o manitol, así como también soluciones de azúcar, tales como soluciones de glucosa o lactosa o una mezcla de los diversos solventes mencionados. Además, la expresión “vehículo farmacéuticamente aceptable” puede incluir diluyentes o materiales de relleno inertes, tales como sacarosa, sorbitol, azúcar, manitol, celulosa microcristalina, almidones inclusive almidón de papa, carbonato de calcio, cloruro de sodio, lactosa, fosfato de calcio, sulfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegración, por ejemplo derivados de celulosa inclusive celulosa microcristalina, almidones inclusive almidón de papa, croscarmelosa de sodio, alginatos o ácido algínico; agentes de enlace, por ejemplo sacarosa, glucosa, sorbitol, goma acacia, ácido algínico, alginato de sodio, gelatina, almidón, almidón pregelatinizado, celulosa microcristalina, silicato de magnesio-aluminio, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, etilcelulosa, polivinilpirrolidona o polietilenglicol; y agentes de lubricación, inclusive sustancias deslizantes y antiadhesivos, por ejemplo, estearato de magnesio, estearato de zinc, ácido esteárico, sílices, aceites vegetales hidrogenados o talco.

En una realización particular de la invención, la expresión “vehículo farmacéuticamente aceptable” incluye únicamente sustancias no tóxicas. En otra realización preferida de la invención, la expresión “vehículo farmacéuticamente aceptable” no incluye acetonitrilo.

El término “tóxico” se utiliza en este documento por el significado que es bien conocido para la persona experta en el campo, más particularmente, en el contexto de las formulaciones de la presente invención, una sustancia tóxica es una sustancia que en la cantidad presente en las formulaciones de la presente invención puede deteriorar el funcionamiento de, o causar un daño estructural a, una célula u organismo. Por lo tanto, una “sustancia no tóxica” no incluye acetonitrilo.

En otra realización particularmente preferida de la presente invención, la formulación comprende únicamente sustancias no tóxicas.

Una formulación de acuerdo con la presente invención puede comprender menos de 25% de acetonitrilo (vol/vol), preferiblemente menos de 15%, aún más preferiblemente menos de 5%, mucho más preferiblemente menos de 1% (vol/vol).

Se puede emplear cualquier tipo o modo de administración adecuado para proveer a un mamífero, especialmente un humano, con una dosificación efectiva de una formulación de agente LTB4 de la presente invención. Por ejemplo, se puede emplear la administración oral, parenteral, intraduodenal, intrayeyunal y tópica. Las formas de dosificación incluyen tabletas, cápsulas, polvos, soluciones, dispersiones, suspensiones, cremas, ungüentos y aerosoles.

Para la administración parenteral, por ejemplo subcutánea o intravenosa, o tópica, la formulación de la presente invención se convierte en una solución, gel o emulsión, si se desea, utilizando las sustancias farmacéuticas usuales para este propósito, tales como solubilizadores, agentes de espesamiento, emulsionantes, agentes para tonicidad, conservantes u otros auxiliares.

Los vehículos tópicos que son utilizados en farmacia son soluciones acuosas las cuales son, por ejemplo, sistemas tamponadores de pH o mezclas isotónicas o hipertónicas de agua y solventes las cuales son miscibles con agua, tales como por ejemplo alcoholes o alcoholes de arilo, aceites, polialquilenglicoles, etilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, carboximetilcelulosa, polivinilpirrolidona o copolímeros de óxido de etileno e isopropilmiristato de óxido de propileno (pluronic). Los ejemplos de sustancias amortiguadoras adecuadas son hidróxido de sodio y aminoácidos tales como glicina, arginina, histidina y lisina, fosfato de sodio, acetato de sodio o amortiguador de gluconato. La forma de administración tópica también puede contener auxiliares no tóxicos tales como, por ejemplo, polietilenglicoles y compuestos antibacterianos.

Las formulaciones de liberación continua también están contempladas dentro del alcance de la presente invención. Estas formulaciones son de variedad considerable, como será entendido por aquellas personas expertas en el campo. Las sustancias de liberación continua ejemplares incluyen solventes orgánicos o polímeros biocompatibles, biodegradables, inclusive por ejemplo emulsiones, geles, microesferas e hidrogeles. Las formulaciones de liberación continua preferidas para el uso en conjunto con la presente invención son la microcápsula o microesfera y las micelas. Las microcápsulas/esferas son esencialmente partículas pequeñas de compuestos activos incrustados en un polímero adecuado para formar esferas que varían en su diámetro de aproximadamente 40-550 m (preferiblemente menos de 150 m) y se administran fácilmente por medio de la inyección cuando son suspendidas en un vehículo líquido adecuado.

El agente LTB4 puede formularse como una composición farmacéutica estéril para el uso terapéutico la cual es adecuada para cualquier modo de administración tópico o sistémico. El producto puede estar en una forma libre de solventes (por ejemplo una solución ultracongelada que contiene manitol) y lista para reconstituirse para el uso por medio de la adición de un vehículo o diluyente adecuado. Alternativamente, el producto puede estar en la forma de solución la cual puede ser acuosa u orgánica y puede estar lista para administrarse o lista para modificarse por la adición de un diluyente adecuado.

Para la modificación del producto en la forma de solución de acuerdo con la presente invención uno puede emplear un diluyente estéril, el cual puede contener materiales reconocidos generalmente para aproximarse a las condiciones fisiológicas. De esta manera, el diluyente estéril puede contener sales y/o agentes de amortiguamiento para lograr una tonicidad y un pH fisiológicamente aceptables, tales como cloruro de sodio, fosfato y/u otras sustancias las cuales son fisiológicamente aceptables y/o seguras para el uso.

Cuando se utiliza como una solución acuosa, la composición farmacéutica contendrá en su mayor parte muchas de las mismas sustancias descritas anteriormente para la reconstitución de un producto libre de solventes. Cuando se utiliza en solución en un solvente orgánico, un pequeño volumen de la solución que contiene el ácido graso (agente de LTB4) será diluido con una solución acuosa que contendrá muchas de las mismas sustancias descritas anteriormente para la reconstitución de un producto libre de solventes. La composición farmacéutica en su mayor parte, contendrá de esta manera muchas de las mismas sustancias descritas anteriormente para la reconstitución de un producto libre de solventes.

El agente LTB4 se puede utilizar en combinación con otros agentes que incluyen, pero no están limitados a, agentes antimicrobianos, agentes carcinostáticos, agentes inmunosupresores, agentes inmunoestimuladores, agentes antiinflamatorios, citocinas, factores de crecimiento (tales como G-CSF, M-CSF y GM-CSF), retinoides y compuestos que pueden reducir la captación, eliminación o metabolismo del agente LTB4 tales como probenecida, dipiridamol o clofibrato.

Donde el agente LTB4 en cuestión debe administrarse a un hospedante como un agente antiinfeccioso, el agente puede administrarse, por ejemplo, por la ruta oral, intraarterial, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intranasal, intramuscular, por medio de inyección, por medio de inhalación o similares.

Formas de dosificación con revestimiento entérico

Se ha mostrado en un modelo de rata (Ejemplo 11) que la administración intraduodenal de los agentes de LTB4 en este documento proporciona un perfil farmacocinético deseable. De esta manera, en una realizaciónpreferida, las formulaciones de la presente invención pueden estar en una forma de dosificación oral con un revestimiento entérico. A partir de lo que se dice acerca de las propiedades de estabilidad de los agentes de LTB4 listados anteriormente, es obvio que es ventajoso que una forma de dosificación oral de los agentes de LTB4 debe ser protegida del contacto con el jugo gástrico, reactivo, ácido a fin de alcanzar el intestino delgado sin degradación.

Las preparaciones con revestimiento entérico son resistentes a la disolución en medios ácidos y se disuelven rápidamente en medios neutros a alcalinos. La forma de dosificación con revestimiento entérico está caracterizada preferiblemente de la siguiente manera. Los núcleos que contienen el agente LTB4 mezclado con compuestos reactivos, alcalinos o una sal del agente LTB4 mezclada opcionalmente con un compuesto reactivo, alcalino son revestidos con dos o más capas, en las cuales la primera(s) capa(s) es soluble en agua o se desintegra rápidamente en agua y consiste(n) de sustancias farmacéuticamente aceptables de otra manera inertes no ácidas. Esta(s) primera(s) capa(s) separa(n) el material de núcleo reactivo alcalino de la capa exterior, la cual es un revestimiento entérico. La forma de dosificación con revestimiento entérico final es tratada de una manera adecuada para reducir el contenido de agua a un nivel muy bajo a fin de obtener una buena estabilidad de la forma de dosificación durante el almacenamiento a largo plazo.

Núcleos

El agente LTB4 se mezcla con constituyentes farmacéuticos, convencionales, preferiblemente solubles en agua, inertes para obtener la concentración preferida del compuesto activo en la mezcla final y con una sustancia (o sustancias) farmacéuticamente aceptable, de otra manera inerte, reactiva, alcalina, la cual crea un “micro-pH” como se definiera anteriormente, cuando el agua es adsorbida a las partículas de la mezcla o cuando el agua se agrega en cantidades pequeñas a la mezcla. Estas sustancias se pueden seleccionar entre sustancias tales como las sales de sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio de ácido fosfórico, ácido carbónico, ácido cítrico u otros ácidos inorgánicos u orgánicos, débiles, adecuados; sustancias utilizadas normalmente en preparaciones antiácido tales como hidróxido de aluminio, calcio y magnesio; óxido de magnesio o sustancias compuestas tales como A12O3.6MgO CO2.12H2O, (Mg6A12(OH)16CO34H2O), MgO.A12O3.2SiO2.nH2O, en donde n no es un número entero y es menor que 2 o compuestos similares; sustancias orgánicas amortiguadoras de pH tales como trishidroximetilaminometano u otras sustancias amortiguadoras de pH, farmacéuticamente aceptables, similares.

La mezcla en polvo entonces se formula en perlas pequeñas es decir pelotillas o tabletas, por medio de procedimientos farmacéuticos convencionales. Las pelotillas o tabletas se utilizan como núcleos para el procesamiento adicional.

Capa de separación

Los núcleos reactivos alcalinos que contienen un agente LTB4 deben ser separados del(los) polímero(s) de revestimiento entérico que contiene(n) grupos carboxilo libres, los cuales causan de otra manera la degradación del agente LTB4 durante el proceso de revestimiento o durante el almacenamiento. La capa de sub-revestimiento (la capa de separación) también sirve como una zona de amortiguamiento de pH en la cual los iones de hidrógeno que se difunden desde el exterior hacia el núcleo alcalino pueden reaccionar con iones de hidroxilo que se difunden desde el núcleo alcalino hacia la superficie de las partículas revestidas. Las propiedades de amortiguamiento de pH de la capa de separación se pueden fortalecer adicionalmente al introducir en la capa sustancias seleccionadas de un grupo de compuestos utilizados usualmente en formulaciones antiácido tales como, por ejemplo, óxido, hidróxido o carbonato de magnesio, hidróxido, carbonato o silicato de aluminio o calcio; compuestos de aluminio compuesto/magnesio tales como, por ejemplo A12O3.6MgO CO2.12H2O, (Mg6A12(OH)16CO3,4H2O), MgO.A12O3.2SiO2.nH2O, en donde n no es un número entero y es menor que 2 o compuestos similares; u otras sustancias amortiguadoras de pH, farmacéuticamente aceptables tales como, por ejemplo, las sales de sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio de ácido fosfórico, cítrico u otros ácidos adecuados, débiles, inorgánicos u orgánicos.

La capa de separación consiste de una o más capas inertes solubles en agua, que contienen opcionalmente sustancias amortiguadoras de pH.

La(s) capa(s) de separación se puede(n) aplicar a los núcleos -pelotillas o tabletas -por medio de procedimientos de revestimiento convencionales en una cacerola de revestimiento adecuada o en un aparato de lecho fluidizado utilizando agua y/o solventes orgánicos convencionales para la solución de revestimiento. El material para la capa de separación se selecciona entre los compuestos o polímeros inertes, solubles en agua, farmacéuticamente aceptables que se utilizan para las aplicaciones de revestimiento de películas tales como, por ejemplo azúcar, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico, hidroxipropilcelulosa,

hidroximetil-celulosa o hidroxipropilmetilcelulosa. El espesor de la capa de separación no es menor que 2 m, para las pelotillas esféricas pequeñas preferiblemente no es menor que 4 m, para tabletas preferiblemente no es menor que 10 m.

En el caso de tabletas, se puede realizar otro método para aplicar el revestimiento por medio de la técnica de revestimiento en seco. Primero una tableta que contiene el compuesto lábil en ácido es comprimida como se describiera anteriormente. Alrededor de esta tableta se comprime otra capa utilizando una máquina para fabricación de tabletas adecuada. La capa de separación exterior consiste de excipientes de tableta solubles en agua o que se desintegran rápidamente en agua farmacéuticamente aceptables. La capa de separación tiene un espesor no menor que 1 mm. Los plastificantes ordinarios, pigmento, talco de dióxido de titanio y otros aditivos también se pueden incluir en la capa de separación.

La capa de revestimiento entérico se aplica a los núcleos sub-revestidos por medio de técnicas de revestimiento convencionales tales como, por ejemplo, revestimiento en cacerola o revestimiento en lecho fluidizado utilizando soluciones de polímeros en agua y/o solventes orgánicos adecuados o por medio del uso de suspensiones de látex de los polímeros. Como polímeros de revestimiento entéricos se pueden utilizar, por ejemplo, ftalato de acetato de celulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de acetato de polivinilo, ácido metacrílico/ésteres metílicos de ácido metacrílico copolimerizados tales como, por ejemplo, los compuestos conocidos bajo el nombre comercial Eudragit L 12,5MR o Eudragit L 100MR (Röhm Pharma) o compuestos similares utilizados para obtener revestimientos entéricos.

El revestimiento entérico también se puede aplicar utilizando dispersiones poliméricas basadas en agua, por ejemplo AquatericMR (FMC Corporation), Eudragit L 100-55MR (Röhm Pharma), Coating CE 5142MR (BASF). La capa de revestimiento entérico puede contener opcionalmente un plastificante farmacéuticamente aceptable tal como, por ejemplo, cetanol, triacetina, ésteres de ácido cítrico tales como, por ejemplo aquellos conocidos bajo el nombre comercial CitroflexMR (Pfizer), ésteres de ácido ftálico, succinato de dibutilo o plastificantes similares.

La cantidad de plastificante es optimizada usualmente para cada polímero(s) de revestimiento entérico y usualmente está en el intervalo de 1-20% del(los) polímero(s) de revestimiento entérico. Los dispersantes tales como talco, colorantes y pigmentos también se pueden incluir en la capa de revestimiento entérico.

De esta manera, la preparación con revestimiento entérico de acuerdo con la invención consiste de núcleos que contienen el agente LTB4 mezclado con un compuesto reactivo alcalino o núcleos que contienen una sal alcalina del compuesto lábil en ácido mezclado con un compuesto reactivo alcalino. Los núcleos son revestidos con un revestimiento soluble en agua o que se desintegra rápidamente en agua, que contiene opcionalmente una sustancia amortiguadora de pH, el cual separa los núcleos alcalinos del revestimiento entérico. La forma de dosificación sub-revestida es revestida finalmente con un revestimiento entérico que vuelve a la forma de dosificación insoluble en medios ácidos, pero que se desintegra/disuelve rápidamente en medios neutros a alcalinos tales como, por ejemplo los líquidos presentes en la parte próxima del intestino delgado, el sitio donde se desea la disolución.

Agente quelatante

La expresión “agente quelatante” se propone para incluir agentes quelatantes de metal conocidos generalmente en el campo. Los ligandos quelatantes para iones metálicos son generalmente moléculas polifuncionales las cuales tienen una multiplicidad de ligandos de carga negativa y/o ricos en electrones los cuales pueden secuestrar iones metálicos con afinidades variantes. Los grupos funcionales ricos en electrones adecuados incluyen grupos de ácido carboxílico, grupos hidroxi y grupos amino. El ordenamiento de estos grupos en ácidos aminopolicarboxílicos, ácidos hidroxipolicarboxílicos, ácidos hidroxiaminocarboxílicos y similares da por resultado porciones las cuales se comportan como excelentes ligandos quelatantes. Éstos incluyen ácidos aminopolicarboxílicos tales como, por ejemplo, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido dietilentriamina-pentaacético (DTPA), ácido nitrilotriacético (NTA), ácido N-2-acetamido-2-iminodiacético (ADA), bis(aminoetil)glicoléter, ácido N,N,N’,N’-tetraacético (EGTA), ácido transdiaminociclohexano-tetraacético (DCTA), ácido glutámico y ácido aspártico; y ácidos hidroxiaminocarboxílicos, tales como por ejemplo, ácido N-hidroxietiliminodiacético (HIMDA), N,N-bis-hidroxietilglicina (bicina) y N-(trishidroximetilmetil)glicina (tricina); y glicinas N-sustituidas tales como glicilglicina. Otros ligandos quelatantes candidatos incluyen ácido 2-(2-amino-2-oxoctil)aminoetano-sulfónico (BES). Todos los anteriores también incluyen las sales de carboxilo u otras funcionalidades ácidas.

Los ejemplos de estas sales incluyen sales formadas con sodio, potasio y otros iones metálicos enlazados débilmente; el carácter de la sal y el número de cargas a neutralizarse dependerá del número de grupos carboxilo presentes y el pH al cual se suministra el ligando quelatante de estabilización.

Como se entiende en el estado de la técnica, los agentes quelatantes tienen intensidades variantes con las cuales se enlazan los iones objetivo particulares. En general, los iones metálicos pesados se enlazan más fuertemente que sus contrapartes de peso molecular más bajo cargadas similarmente. Por ejemplo, Cu+2 es quelatado uniformemente más fuertemente que Ca+2 , explicando la habilidad, en algunos casos, para utilizar sales de calcio de los ligandos quelatantes suministrados. A fin de evaluar la intensidad relativa, la constante de estabilidad con respecto al ión de cobre en el pH de la formulación se utiliza en este documento como un estándar arbitrario para comparación de los ligandos quelatantes. Estas constantes de estabilidad son, por supuesto, dependientes del pH. Son fácilmente disponibles en la bibliografía y se pueden encontrar por ejemplo en Perrin, D. D., y colaboradores, “Buffers for pH and Metal Ion Control” Chapman & Hall, Londres, N.Y., (1974), y en particular, en International Union of Pure & Applied Chemistry: “Stability Constants”, suppl 1 (1971) Alden press, Oxford. Utilizando los valores para la estabilidad de los complejos de Cu+2 encontrados en estas referencias como una medida de la intensidad del ligando quelatante, uno puede establecer clasificaciones de intensidad de ligandos quelatantes. Se utilizan los valores “log beta”, éstos son los logaritmos negativos de la constante de disociación para el complejo. Cuanto más alto sea el valor de log-beta, por lo tanto, más fuerte será la asociación entre el ión de cobre y la porción quelatante. Por supuesto, el pH al cual se hace la determinación es significativo, puesto que los diversos grupos de ácido carboxílico contenidos en el ligando quelatante se unen más fuertemente al ión secuestrado cuando son cargados negativamente.

Son particularmente útiles en la invención los ligandos quelatantes con valores log-beta para un ión de cobre (determinados en el pH de la formulación propuesta) de aproximadamente 7 o más; son más preferidos aquellos con valores de 10 o más; y son mucho más preferidos aquellos con valores log-beta en el pH de uso de 15 o más. De esta manera, por ejemplo, se prefiere tricina, bicina, ADA y HIMDA, ya que son moderadamente fuertes; son aún más preferidos el NTA, DTPA y EDTA. Entre los ligandos quelatantes mucho más preferidos para el uso en la invención están el EDTA y el DTPA.

Una gran variedad de agentes quelatantes son conocidos en el estado de la técnica, y un candidato a quelatante puede evaluarse fácilmente por medio de la determinación de su valor log-beta con respecto a un ión de cobre en el pH de uso propuesto y, con la condición de que tenga propiedades farmacéuticamente aceptables las cuales permitan su uso en composiciones a administrarse a los pacientes, se puede evaluar convenientemente para el uso en el método de la invención y en las composiciones de la invención.

Las solubilidades en agua también deben considerarse, aunque los diversos ligandos quelatantes pueden estar presentes en diferentes cantidades, dependiendo del carácter del resto de la formulación.

Mientras que el agente quelatante está presente en cantidades estabilizadoras, el porcentaje en peso total del agente quelatante puede ser de aproximadamente 0.001% a aproximadamente 1.0% (peso/peso) de la formulación total. Preferiblemente, el porcentaje en peso total del agente quelatante está presente en cantidades de aproximadamente 0.01% a aproximadamente 0.1% (peso/peso). Estos valores se refieren al producto reconstituido final para indicaciones farmacéuticas. Si la formulación es liofilizada, el porcentaje de agente quelatante en la torta seca puede ser tan alto como aproximadamente 10 a aproximadamente 40%. Por lo tanto, en forma seca el agente quelatante puede estar presente en cantidades de aproximadamente 0.01% a aproximadamente 40% en peso total, preferiblemente de aproximadamente 1.0% a aproximadamente 30%. Como reconocería una persona experta en el campo, el porcentaje del agente quelatante en la formulación varía dependiendo del agente de carga particular utilizado para formular el compuesto activo. Evidentemente, mientras más altos sean los niveles de los iones metálicos problemáticos que están presentes en el agente de carga o de otra manera en la composición, más altos serán los niveles requeridos de ligando quelatante. Es una cuestión simple, utilizando las técnicas descritas posteriormente, determinar concentraciones óptimas del agente quelatante.

La presente invención será entendida más fácilmente por referencia a los siguientes ejemplos.

EJEMPLO 1

Materiales y métodos

El LTB4 (forma ácida) se obtuvo de Cascade Biochem (U.K.) en solución en etanol/agua, 95/5. El nivel de pureza de este material de partida fue de aproximadamente 98.5% (0.3%) evaluado por medio de la CLAR de fase inversa. La solución etanólica de LTB4 se neutralizó con un equivalente de hidróxido de sodio para obtener la sal sódica (Na) de LTB4. La solución etanólica de la sal de Na de LTB4 se evaporó a sequedad bajo presión reducida utilizando un evaporador giratorio y un baño de agua (30°C), hasta que se obtuvo un residuo oleoso. El residuo se disolvió nuevamente en solución salina amortiguada con fosfato de Dulbeccos (DPBS) a pH

7.4 que contenía o no el ácido etilendiaminotetraacético al 0.01% (EDTA) para obtener una concentración final de 5 mg de LTB4/ml. Las soluciones se suministraron en frasquitos de vidrio de borosilicato tipo I de 2 ml los cuales luego se sellaron bajo argón utilizando tapones de caucho revestidos con Teflon y tapas de aluminio. Las muestras se almacenaron en la oscuridad a 255°C hasta el análisis en los puntos de tiempo indicados. El análisis de las soluciones de LTB4 se llevó a cabo por medio de la técnica de HPLC de fase inversa utilizando una columna C18, partículas de 5 , 4.7X250 mm (Nucleosil) y una elusión de gradiente de metanol/acetonitrilo; la detección del LTB4 y las impurezas se realizó en línea utilizando un espectrofotómetro HPLC ultravioleta a 270 nm.

Resultados

Como se muestra en la Figura 1, las soluciones acuosas de sal de Na de LTB4 a 5 mg/ml que no contenían EDTA ya mostraron un nivel incrementado de impurezas después de 7 días de almacenamiento a 25°C y el nivel de impurezas alcanzó 23.3% del área pico de LTB4 después de 14 días de almacenamiento. En contraste, las soluciones de sal de Na de LTB4 a 5 mg/ml que contenían EDTA al 0.01% no mostraron un incremento en la degradación hasta 14 días de almacenamiento y tuvieron niveles de impurezas de 2.9% y 8.6% después de 60 y 90 días de almacenamiento a 25°C, respectivamente. Estos datos demuestran claramente que el EDTA disminuye dramáticamente la velocidad de la degradación de soluciones acuosas de la sal de Na de LTB4.

EJEMPLO 2

Materiales y métodos

Una solución de LTB4 (forma ácida) a la concentración de 12 mg/ml en etanol/agua, 95/5 (de Cascade Biochem, U.K.), se neutralizó con un equivalente de hidróxido de sodio para generar la sal de Na. Este material de partida utilizado en los experimentos descritos en los Ejemplos 2 hasta 7 tuvo un nivel de pureza de 96.8% (±0.3%) evaluado por medio de la técnica de HPLC de fase inversa. La solución etanólica de la sal de Na de LTB4 se evaporó (véase el Ejemplo 1) hasta que se obtuvo un residuo oleoso. El residuo entonces se disolvió nuevamente en una solución de cloruro de sodio amortiguada con fosfato (solución salina) (fosfato de sodio 30 mM, pH 7.5) que contenía EDTA al 0.01% a fin de obtener una solución isotónica de la sal de Na LTB4 a 25 mg/ml. La solución de la sal de Na de LTB4 a 0.1 mg/ml se obtuvo por medio de la dilución de la solución de 25 mg/ml con una solución salina amortiguada con fosfato de sodio 30 mM isotónica, pH 7.5 que contenía EDTA al 0.01%. Las alícuotas de las soluciones se suministraron en frasquitos de vidrio tipo I de 2 ml como se describe en el Ejemplo 1 y se almacenaron bajo el aire, en la oscuridad, a 40±5°C. El LTB4 y las impurezas se analizaron en los tiempos indicados por medio de la técnica de HPLC de fase inversa utilizado la detección ultravioleta a 270nm.

Resultados

La Figura 2 muestra los resultados de un estudio de degradación forzada (40°C) de soluciones isotónicas, acuosas a pH 7.5 de la sal de Na de LTB4 a concentraciones de 0.1 y 25 mg/ml. Los datos demuestran claramente que la solución de 25 mg/ml de la sal de Na de LTB4 es mucho menos estable que la solución de la sal de Na de LTB4 a 0.1 mg/ml, indicando una relación inversa entre la estabilidad y la concentración en soluciones de la sal de Na de LTB4. La estabilidad de una solución de la sal de Na de LTB4 a 0.01 mg/ml fue similar a aquella de la solución a 0.1 mg/ml (datos no mostrados).

EJEMPLO 3

Materiales y métodos

Las soluciones isotónicas acuosas de la sal de Na de LTB4 a la concentración de 1.75 mg/ml en solución salina amortiguada con fosfato/glicina (amortiguador de fosfato de sodio 3 mM y glicina 10 mM, pH 7.5, 8.5, 9.5 y 10.5) que contenía EDTA al 0.01% se obtuvieron por medio de la dilución de una solución de 25 mg/ml de la sal de Na de LTB4 (véase el Ejemplo 2) con la solución salina amortiguada con fosfato/glicina apropiada que contenía EDTA al 0.01%. Las soluciones se suministraron en frasquitos de 2 ml para almacenamiento bajo el aire, en la oscuridad a 4±4°C y 20±5°C durante 9 meses antes del análisis mediante la técnica de HPLC de fase inversa del LTB4 y las impurezas como se describiera en el Ejemplo 1.

Resultados La Figura 3 muestra claramente que el incremento del pH de soluciones isotónicas, acuosas de la sal de Na de LTB4 incrementa sorprendentemente la estabilidad del LTB4 como se observa por los niveles reducidos de impurezas detectados por el análisis de CLAR de las muestras. Este efecto estabilizante del pH alcalino sobre las soluciones de la sal de Na de LTB4 se observó tanto a 4ºC como a 20ºC, indicando que el efecto estabilizante del pH alcalino no es dependiente de la temperatura. En los estudios de degradación forzada (almacenamiento a 40°C) el incremento del pH de las soluciones de la sal de Na de LTB4 también dio por resultado un mejoramiento dramático en la estabilidad de las soluciones de la sal de Na de LTB4 (datos no mostrados).

EJEMPLO 4

Materiales y métodos

Las soluciones isotónicas acuosas de la sal de Na de LTB4 a la concentración de 17.5 g/ml se obtuvieron por medio de la dilución en solución salina amortiguada con fosfato (amortiguador de fosfato de sodio 3 mM, pH 7.5, 8.5, 9.5 y 10.5) que contenía EDTA al 0.01% de una solución de la sal de Na de LTB4 a 25 mg/ml (Ejemplo 2). Las soluciones de la sal de Na de LTB4 a 17.5 g/ml de los 4 diferentes pH se suministraron en frasquitos de 2 ml para el almacenamiento bajo el aire, en la oscuridad a 4±4°C o 20±5°C durante 15 meses antes del análisis mediante la técnica de HPLC de fase inversa del LTB4 y las impurezas, como se describe en el Ejemplo 1.

Resultados

La Figura 4 muestra claramente que el incremento del pH de las soluciones isotónicas, acuosas de la sal de Na de LTB4 a 17.5 g/ml incrementa sorprendentemente la estabilidad del LTB4 como se observa por el nivel reducido de impurezas detectado por el análisis mediante la técnica de HPLC de las muestras. Este efecto estabilizante del pH alcalino sobre las soluciones de la sal de Na de LTB4 a

17.5 g/ml fue mucho más evidente a 20ºC puesto que a 4ºC las mismas soluciones mostraron muy poca degradación del LTB4 después de 15 meses de almacenamiento. Estos datos, junto con los datos mostrados en la Figura 3 demuestran que el efecto estabilizante del pH alcalino se observa claramente con las soluciones de la sal de Na de LTB4 a 1.75 mg/ml así como también 17.5 g/ml y por lo tanto ese efecto estabilizante del pH alcalino ocurre sobre un amplio intervalo de concentraciones de LTB4.

EJEMPLO 5

Materiales y métodos

Las soluciones isotónicas, acuosas de la sal de Na de LTB4 a la concentración de 35 y 350 g/ml en solución salina amortiguada con fosfato (amortiguador de fosfato de sodio 3 mM, pH 9.5) que contenían EDTA al 0.01% y varias concentraciones de glicina (desde 0.01 mM hasta 10 mM) se obtuvieron por medio de la dilución de una solución de 25 mg/ml de la sal de Na de LTB4 (Ejemplo 2). Las soluciones de la sal de Na de LTB4a 35 y 350 g/ml a las 4 diferentes concentraciones de glicina se suministraron en frasquitos de 2 ml para el almacenamiento bajo el aire en la oscuridad a 405ºC durante 5 meses antes del análisis mediante la técnica de HPLC de fase inversa del LTB4 y las impurezas como se describe en el Ejemplo 1.

Resultados

En este experimento, una solución de la sal de Na de LTB4 a 35 g/ml, pH 7.5, que contenía glicina 10 mM y almacenada durante 5 meses a 40ºC mostró un nivel de impurezas de 20% (datos no mostrados). La Figura 5 muestra que la misma solución de la sal de Na de LTB4 a 35 g/ml, pero a pH 9.5 fue más estable como se indica por el nivel más bajo medido de impurezas (6.5%) y demuestra claramente que la concentración de la solución tamponadora de glicina que varía de 0.01 mM a 10 mM tuvo poco impacto sobre la estabilidad de las soluciones de la sal de Na de LTB4. Una observación muy similar se hizo con las soluciones de la sal de Na de LTB4 a 350 g/ml, pH 9.5, almacenadas durante 5 meses a 40ºC, en las mismas 4 concentraciones diferentes de glicina.

EJEMPLO 6

Materiales y métodos

Las soluciones isotónicas acuosas de la sal de Na de LTB4 a la concentración de 35 g/ml en solución salina amortiguada con fosfato (amortiguador de fosfato de sodio 3 mM, pH 7.5 o 9.5) que contenía EDTA al 0.01% se obtuvieron como se describiera en el Ejemplo 5. Se agregó manitol a todas las soluciones a la concentración final de 4% a fin de generar un residuo sólido (pan de manitol) que contenía la sal de Na de LTB4 y todos los componentes del excipiente con el secado por ultracongelación. La albúmina de suero humano libre de ácidos grasos (deslipidada) (HSA, Sigma Chemicals, St-Louis, MO) se agregó a algunas de las soluciones a la concentración final de 1 mg/ml antes del ajuste final del pH (a 7.5 o 9.5). Las soluciones se suministraron en frasquitos de 2 ml, se congelaron a -20°C y se secaron por ultracongelación. Los frasquitos que contenían las soluciones secadas por ultracongelación (panes de manitol) entonces se sellaron como se describe en el Ejemplo 1 (pero bajo el aire en lugar de argón) y se almacenaron en la oscuridad a 405°C. Después de 1.5 a 4.5 meses, los frasquitos se abrieron y los panes de manitol (que contenían LTB4) se disolvieron utilizando 1 ml de agua para generar las soluciones originales de la sal de Na de LTB4 a 35 g/ml. El LTB4 y las impurezas entonces se analizaron por medio de la técnica de HPLC de fase inversa como se describe en el Ejemplo 1.

Resultados

La figura 6 muestra que una solución de la sal de Na de LTB4 secada por ultracongelación (ultracongelada) a 35 g/ml, pH 7.5, disuelta nuevamente de inmediato en agua después del secado por ultracongelación (tiempo 0) muestra un nivel de impurezas de 2.9% y que las muestras idénticas secadas por ultracongelación almacenadas durante 1.5 y 4.5 meses a 40°C muestran niveles de impurezas de 22.7% y 51.3%, respectivamente. La figura 6 también muestra que la adición de HSA a una solución de la sal de Na de LTB4 (pH 7.5) antes del secado por ultracongelación da por resultado una disminución casi de 50% en el nivel de impurezas después de 1.5 meses de almacenamiento. La figura 6 también muestra claramente que la elevación del pH de 7.5 a 9.5 en las soluciones de LTB4 antes del secado por ultracongelación da por resultado una disminución sorprendente en el nivel de impurezas observado tanto después de 1.5 meses de almacenamiento (en presencia de HSA) como después de 4.5 meses de almacenamiento. Estos datos demuestran claramente que el pH alcalino también mejora la estabilidad de la sal de Na de LTB4 en forma sólida, es decir, después del secado por ultracongelación en presencia de manitol y en presencia

o ausencia de HSA.

EJEMPLO 7

Métodos y materiales

La solución etanólica de LTB4 (forma ácida) (EtOH/agua, 95/5) obtenida del fabricante (Cascade Biochem, UK) se diluyó con EtOH/agua, 95/5 para generar soluciones etanólicas de LTB4 (forma ácida) a 9 y 0.9 mg/ml. Las soluciones etanólicas de la sal sódica de LTB4 a 9 y 0.9 mg/ml se obtuvieron al agregar 1.05 equivalentes de hidróxido de sodio. Las soluciones de la sal sódica de LTB4 a la concentración de 9 y

0.9 mg/ml en EtOH/glicina 10 mM 75/25 en agua a pH 10.5 (hidróxido de sodio) se obtuvieron al mezclar 3 volúmenes de soluciones de la sal sódica de LTB4 a 12 y 1.2 mg/ml en EtOH/agua, 95/5 con 1 volumen de amortiguador de glicina 40 mM a pH

10.5. Las soluciones se suministraron en frasquitos de 2 ml para el almacenamiento bajo el aire en la oscuridad a -80°C y 405°C durante 17 meses antes del análisis de CLAR de fase inversa del LTB4 y las impurezas como se describe en el Ejemplo 1. Resultados

Los resultados de este estudio de degradación forzada de las soluciones etanólicas de LTB4 (forma ácida) o la sal de Na de LTB4 a 2 diferentes concentraciones se muestran en la figura 7. Después de 17 meses de almacenamiento a 40°C, la solución etanólica (EtOH/agua, 95/5) de LTB4 (forma ácida) a 9.0 mg/ml mostró una degradación completa (LTB4 no detectable) con un nivel de impurezas de 100% de AUC (área bajo la curva a 270 nm). La figura 7 muestra claramente que cuando el LTB4 se transformó a su sal sódica por la adición de 1.05 equivalentes de hidróxido de sodio, la estabilidad de la solución etanólica, resultante de la sal de Na de LTB4 bajo condiciones idénticas se mejora drásticamente con un nivel de impurezas de solo 5.4%. Similarmente, el estudio de degradación forzada de la solución de la sal sódica de LTB4 en EtOH/glicina 10 mM 75/25 a pH 10.5, demostró que bajo un pH alcalino la sal sódica de LTB4 es sorprendentemente más estable (nivel de impurezas de 3.8%) que el LTB4 en su forma ácida en EtOH/agua, 95/5. Se pueden sacar las mismas conclusiones para las soluciones de LTB4 (forma ácida) y la sal sódica de LTB4 a una concentración 10 veces más baja (0.9 mg/ml), con una estabilidad incrementada de la sal sódica de LTB4 en EtOH/agua 95/5 o EtOH/glicina 10 mM 75/25 a pH 10.5 (niveles de impurezas de 4.9 y 4.3% de AUC, respectivamente), sobre la forma ácida de LTB4 en EtOH/agua 95/5 (nivel de impurezas de 62% de AUC). Los niveles de impurezas medidos en las 3 mismas formulaciones etanólicas de LTB4 a 9 y

0.9 mg/ml almacenadas a -80°C durante 17 meses variaron de 2.8 a 3.7% de AUC (datos no mostrados). La tabla 1 posterior exhibe los valores de pH medidos en las formulaciones etanólicas de LTB4 almacenadas durante 17 meses a -80°C y 40°C. Los datos demuestran claramente que la estabilidad mejorada corresponde al pH más alto de las formulaciones. Finalmente, la figura 7 también muestra que, en analogía a las observaciones hechas con las soluciones acuosas de sal de Na de LTB4, la solución más concentrada (9 mg/ml) de LTB4 en EtOH/agua 95/5 es menos estable que la solución más diluida (0.9 mg/ml) de LTB4 en las mismas condiciones experimentales.

Tabla 1: pH1 Aparente en formulaciones etanólicas de LTB4

Formulación

-80ºC +40ºC

9 mg/ml, forma ácida en EtOH/agua 95/5

7.082 5.27

9 mg/ml, sal sódica en EtOH/agua 95/5

10.15 9.68

9 mg/ml, sal sódica en EtOH/amortiguador3 75/25

12.54 10.07

0.9 mg/ml, forma ácida en EtOH/agua 95/5

7.25 5.26

0.9 mg/ml, sal sódica en EtOH/agua 95/5

9.80 9.77

9 mg/ml, sal sódica en EtOH/amortiguador3 75/25

10.77 10.17

1 el pH se midió utilizando un electrodo de combinación de pH miniatura de microdimensiones Fisher Scientific Accumet, a temperatura ambiente. 2 el pH se midió después de 17 meses de almacenamiento a las temperaturas indicadas. 3 glicina 10 mM/NaOH, pH 10.5

5

EJEMPLO 8

Materiales y métodos El LTB4 y los análogos se combinaron como soluciones etanólicas, en forma

10 ácida. El LTB4 fue de Cascade Biochem (UK), el LTB5 se obtuvo de Biomol (Plymouth Meeting, PA, EUA) y todos los otros compuestos (LTB3, trifluoro-LTB4, 20-hidroxi-LTB4 y 5-HETE) se obtuvieron de Cayman Chemicals (Ann Arbor, MI, EUA). Las soluciones etanólicas de la sal sódica de los diversos agentes de LTB4 (LTB4 y análogos) se obtuvieron al agregar 1 equivalente de hidróxido de sodio. Las soluciones etanólicas

15 de la sal sódica de los agentes de LTB4 se evaporaron a sequedad bajo una corriente de nitrógeno y se disolvieron nuevamente a la concentración de  35 g/ml en solución salina amortiguada con fosfato (30 mM) que contenía glicina 10 mM, EDTA al 0.01%, ajustada a pH 7.5 o pH 9.5 con hidróxido de sodio. Las alícuotas de las soluciones se tomaron para el análisis inmediato (t0) y las soluciones restantes de la sal de Na del

20 agente LTB4 a 35 g/ml se suministraron en frasquitos de 2 ml para el almacenamiento bajo el aire en la oscuridad a 405°C durante seis meses antes del análisis de CLAR

de fase inversa de los agentes de LTB4 y las impurezas como se describe en el ejemplo 1.

Resultados

En este experimento, las diversas soluciones de la sal sódica de agentes LTB4 a 35 g/ml mostraron un nivel de impurezas inicial (t0) que variaba de 2 a 15%, como se muestra en la figura 8 (barras vacías). La figura 8 muestra que los niveles de impurezas en todas las soluciones de agentes LTB4 almacenadas durante seis meses a 40°C a pH 7.5 incrementaron significativamente (barras grises). La figura 8 también muestra que las soluciones de los mismos agentes de LTB4 almacenadas durante seis meses a 40°C, pero al pH más alto de 9.5 son significativamente más estables como se demuestra por los niveles de impurezas más bajos de todas las soluciones (barras negras).

EJEMPLO 9

Materiales y métodos

El LTB4 y los análogos se obtuvieron como soluciones etanólicas en forma ácida. El Enantio-LTB4 fue de Cascade Biochem (UK) y todos los otros compuestos (6trans-LTB4, 12-epi-LTB4 y 6-trans-12-epi-LTB4) se obtuvieron de Cayman Chemicals (Ann Arbor, MI, EUA). Las soluciones etanólicas de la sal sódica de los diversos agentes LTB4 (LTB4 y análogos) se obtuvieron al agregar 1 equivalente de hidróxido de sodio. Las soluciones etanólicas de la sal sódica de los agentes de LTB4 se evaporaron a sequedad bajo una corriente de nitrógeno y se disolvieron nuevamente a la concentración de 35 g/ml en solución salina amortiguada con fosfato (30 mM) que contenía glicina 10 mM, EDTA al 0.01% ajustada a pH 7.5 o pH 9.5 con hidróxido de sodio. Las alícuotas de las soluciones se tomaron para el análisis inmediato (t0) y las soluciones restantes de la sal de Na de agentes LTB4 a 35 g/ml se suministraron en frasquitos de 2 ml para el almacenamiento bajo el aire en la oscuridad a 40±5°C durante seis meses antes del análisis mediante la técnica de HPLC de fase inversa de los agentes LTB4 y las impurezas como se describe en el ejemplo 1.

Resultados

En este experimento, las diversas soluciones de la sal sódica de agentes LTB4 a 35 g/ml mostraron un nivel de impurezas inicial (t0) de 2 a 5%, como se muestra en la figura 9 (barras vacías). La figura 9 muestra que los niveles de impurezas en todas las soluciones de agentes LTB4 almacenadas durante seis meses a 40°C a pH 7.5 incrementaron significativamente (barras grises). La figura 9 también muestra que las soluciones de los mismos agentes de LTB4 almacenadas durante seis meses a 40°C, pero al pH más alto de 9.5 son significativamente más estables como se demuestra por los niveles de impurezas más bajos de todas las soluciones (barras negras).

EJEMPLO 10

Materiales y métodos

Una solución etanólica de LTB4 (forma ácida) obtenida de Cascade Biochem (UK) se neutralizó por la adición de 1 equivalente de hidróxido de sodio para generar la sal sódica de LTB4. Las alícuotas de la solución etanólica de la sal sódica de LTB4 se suministraron en frasquitos de 2 ml (para obtener 2 mg de LTB4 por frasquito) y el solvente se evaporó a sequedad bajo una corriente de nitrógeno. Los residuos en los frasquitos se disolvieron con cloruro de sodio al 0.9% (NaCl) (frasquito 1), NaCl al 0.9% en NaOH 0.1 mN (frasquito 2), NaCl al 0.9% en NaOH 1 mN (frasquito 3), NaCl al 0.9% en NaOH 10 mN (frasquito 4), NaCl al 0.3% en NaOH 0.1 N (frasquito 5) y en NaOH 1 N (frasquito 6). Las alícuotas de las soluciones se tomaron para el análisis inmediato (t0) y las soluciones restantes de la sal sódica de LTB4 a 2 mg/ml se almacenaron bajo el aire en la oscuridad a 405°C durante cinco semanas, antes del análisis mediante la técnica de HPLC de fase inversa del LTB4 y las impurezas como se describe en el ejemplo 1.

Resultados

Los resultados de este estudio de degradación forzada de soluciones acuosas de la sal sódica de LTB4 a concentraciones crecientes de hidróxido de sodio (pH creciente) se muestran en la figura 10. Los datos obtenidos demuestran que la sal sódica de LTB4 se degradó completamente con niveles de impurezas al 100% (LTB4 no detectables) en los frasquitos #1 y #2 en los cuales el pH había caído a valores inferiores al pH 5 después de cinco semanas de almacenamiento a 40°C. En contraste, en los frasquitos 3 a 6, en los cuales el pH final (después de cinco semanas) fue 8.02, 9.83, 12.50 y 13.03, respectivamente, los niveles de impurezas se midieron a 5.34, 3.46, 4.38 y 5.77 (% de AUC a 270 nm), respectivamente. Los niveles de impurezas iniciales (en t0) variaron de 2.65 a 3.35%. Estos datos demuestran claramente que las soluciones de la sal sódica de LTB4 son estabilizadas sorprendentemente en un pH alcalino, sobre un intervalo muy amplio de pH y en ausencia de un amortiguador y un agente quelatante.

EJEMPLO 11

En este ejemplo, se investigó la farmacocinética del LTB4 en ratas después de la administración por tres rutas distintas, intravenosa (i.v.), intra-yeyunal (i.j.) y subcutánea (s.c.).

Se utilizaron tres grupos de tres ratas hembra Sprague-Dawley (que pesaban  250 g); los animales se mantuvieron en ayuno durante 18 horas, se anestesiaron con quetamina/xilazina y sus venas yugulares se canularon para permitir la toma de muestras de sangre repetida. El LTB4 se administró a la dosis de 50 p/kg al volumen de dosis de 4 ml/kg por todas las rutas. Las muestras de sangre (05 ml/muestra) se tomaron en 0, 0.5, 1, 2, 5, 15, 30 y 60 minutos después de la inyección de LTB4. Se detuvo inmediatamente la coagulación de las muestras de sangre con EDTA y se transfirieron a un baño de agua helada hasta la centrifugación para el aislamiento del plasma. Las muestras de plasma se almacenaron a -80°C hasta que se sometieron a ensayo por el contenido de LTB4 utilizando un ensayo ELISA comercial (Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, EUA). La administración i.v. (bolos de 15 segundos) del LTB4 se realizó a través de la vena de la cola; para la administración i.j., el LTB4 se inyectó directamente en el yeyuno después de la apertura de la cavidad abdominal; la administración s.c. se realizó en la región dorsal.

La figura 11A muestra la farmacocinética del LTB4 después de la administración

i.j. a la dosis de 50 g/kg en ratas. Los datos muestran que la concentración plásmica de LTB4 incrementa rápidamente en la rata después de la inyección i.j., alcanzando un nivel máximo 5 minutos después de la administración i.j.; los datos también muestran que los niveles en el plasma de LTB4 regresan a los niveles de línea de referencia 30 minutos después de la administración i.j. Estos datos muestran claramente que el LTB4 es transferido eficientemente del yeyuno a la circulación periférica. La figura 11B proporciona una comparación del área bajo la curva (AUC) (para la concentración en el plasma de LTB4) para las tres diferentes rutas de administración. En este caso, el parámetro farmacocinético AUC indica la exposición sistémica al fármaco. Como se esperaba, el LTB4 administrado directamente a la circulación (inyección i.v.) dio por resultado el AUC más alta. Sin embargo, estos datos también muestran claramente que el AUC para la inyección i.j. de LTB4 es tan alta como 35% de aquella del LTB4 i.v.,

demostrando que con la administración i.j., la captación de LTB4 en la circulación es eficiente. Estos datos sugieren aún más que la administración oral del LTB4 utilizando una formulación apropiada para el suministro en el intestino delgado representa una ruta eficiente para la administración sistémica del fármaco. El AUC para la administración s.c. del LTB4 se muestra para propósitos de comparación. Se sabe en el campo que la administración subcutánea es una forma eficiente para administrar el LTB4 en modelos de rata.

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   Una formulación farmacéutica de agente LTB4 estabilizado, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente LTB4, una sal del mismo, un éster del mismo o un éter del mismo en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable en un pH alcalino entre 8.2 y 14 que es efectivo para estabilizar el agente LTB4, incrementando así la vida útil de la formulación o un vehículo reactivo alcalino, farmacéuticamente aceptable; en donde el agente LTB4 es uno o más de los ácidos grasos poliinsaturados seleccionados del grupo que consiste en LTB4, 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-deshidro-LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4, ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenoico (“5-HETE”), 14,15-dihidro-5HETE, 17,18-deshidro-5-HETE y en donde un vehículo reactivo alcalino es una sustancia (o sustancias) inerte farmacéuticamente aceptable , la cual crea un micro-pH alcalino entre 8.2 y 14 alrededor de cada partícula de LTB4, en el caso de la formulación de LTB4 estabilizado que está en forma ultracongelada, cristalina o amorfa sólida, cuando el agua es absorbida en las partículas de la mezcla o cuando el agua se agrega en pequeñas cantidades a la mezcla.

2. 2.

   Una composición que comprende un agente LTB4 según la reivindicación 1 una sal del mismo, un éster del mismo o un éter del mismo en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable a un pH alcalino entre 8.2 y 14 o un vehículo reactivo alcalino, farmacéuticamente aceptable; en donde el agente LTB4 es uno o más de los ácidos grasos poliinsaturados de LTB4 seleccionados del grupo que consiste en 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-deshidro-LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 20hidroxi-LTB4, ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenoico (“5-HETE”), 14,15dihidro-5-HETE, 17,18-deshidro-5-HETE y en donde un vehículo reactivo alcalino es una sustancia (o sustancias) inerte farmacéuticamente aceptable, la cual crea un micro-pH alcalino entre 8.2 y 14 alrededor de cada partícula de LTB4, en el caso de la formulación de LTB4 estabilizado que está en forma ultracongelada, cristalina o amorfa sólida, cuando el agua es absorbida en las partículas de la mezcla o cuando el agua se agrega en pequeñas cantidades a la mezcla.

3. 3.

   La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizada porque la composición o formulación estabilizada comprende únicamente sustancias no tóxicas.

4. 4. La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el pH alcalino varía entre 8.5 y 11.5.

5. 5.

   La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque el pH alcalino varía entre 9.5 y 11.5.

6. 6.

   La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque la formulación está en una forma líquida o en una forma ultracongelada o en una forma cristalina o en una forma amorfa sólida.

7. 7.

   La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el vehículo es un vehículo acuoso.

8. 8. La composición o formulación estabilizada s egún la reivindicación 7, caracterizada porque el vehículo acuoso se selecciona del grupo que consiste en agua, soluciones de hidróxido de metal alcalino, tal como solución de hidróxido de sodio, soluciones salinas amortiguadas, tales como Solución Salina Tampón con Fosfato (PBS), solución acuosa que contiene alcohol, soluciones de azúcar o una mezcla de las mismas.

9. 9.

   La composición o formulación estabilizada según la reivindicación 8, caracterizada porque el alcohol de la solución acuosa que contiene alcohol se selecciona del grupo que consiste en etanol, propilenglicol, alcohol bencílico, propanodiol, glicerol y manitol.

10. 10.

    La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el vehículo es un vehículo seleccionado del grupo que consiste en solventes orgánicos y una mezcla de los mismos y agua.

11. 11.

    La composición o formulación estabilizada según la reivindicación 10, caracterizada porque la mezcla comprende agua y al menos 50% (vol/vol), preferiblemente al menos 60% de alcohol (vol/vol).

12. 12.

    La composición o formulación estabilizada según la reivindicación 11, caracterizada porque el alcohol se selecciona del grupo que consiste en etanol, propilenglicol, alcohol bencílico, propanodiol, glicerol y manitol.

13. 13.

    La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el vehículo es un sólido particulado revestido con una matriz alcalina o constituido de una matriz alcalina.

14. 14.

    La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque el agente LTB4 es leucotrieno B4 [ácido

    5S,12R-dihidroxi-6,8,10,14(Z,E,E,Z)-eicosatetraenoico] (“LTB4”).

15. 15.

    La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque el agente LTB4 se selecciona del grupo que consiste en : LTB4, 14,15-dihidro-LTB4 (“LTB3”), 17,18-deshidro-LTB4 (“LTB5”), 19

    5 hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4;éster metílico de LTB4 y éster etílico de LTB4; ácido 5(S)hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenoico (“5-HETE”), 14,15-dihidro-5-HETE y 17,18-deshidro-5-HETE.
16. 16. La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las

    reivindicaciones 1 a 15, caracterizada porque el agente LTB4 está presente en la 10 formulación en cantidades de aproximadamente 0.1 g/ml a 25 mg/ml.
17. 17. La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizada porque el agente LTB4 está presente en la formulación en cantidades de aproximadamente 1 g/ml a 1 mg/ml.
18. 18. La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las

    15 reivindicaciones 1 a 17, caracterizada porque comprende menos de 25% de acetonitrilo (vol/vol).
19. 19. La composición o formulación estabilizada según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizada porque además comprende un revestimiento entérico como una capa exterior.

    20 20. La composición o formulación estabilizada según la reivindicación 19, caracterizada porque además comprende una capa de separación entre un núcleo que contiene un agente LTB4 y un vehículo reactivo alcalino y la capa exterior.