[go: up one dir, main page]

ES2342104T3 - Estabilizacion de la troponina cardiaca. - Google Patents

Estabilizacion de la troponina cardiaca. Download PDF

Info

Publication number
ES2342104T3
ES2342104T3 ES06750874T ES06750874T ES2342104T3 ES 2342104 T3 ES2342104 T3 ES 2342104T3 ES 06750874 T ES06750874 T ES 06750874T ES 06750874 T ES06750874 T ES 06750874T ES 2342104 T3 ES2342104 T3 ES 2342104T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
troponin
protein
polyoxyethylene
lauryl sulfate
matrix
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES06750874T
Other languages
English (en)
Inventor
Don M. Laird
Charles E. Young
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Abbott Laboratories
Original Assignee
Abbott Laboratories
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Laboratories filed Critical Abbott Laboratories
Application granted granted Critical
Publication of ES2342104T3 publication Critical patent/ES2342104T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4716—Muscle proteins, e.g. myosin, actin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Un patrón de ensayo para diagnóstico que comprende: una solución acuosa de proteína Troponina-I, y una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.

Description

Estabilización de la troponina cardiaca.
La invención se refiere a una composición estabilizada de proteína troponina cardiaca útil como patrones de control y calibrador en inmunoensayos. En particular, la proteína troponina se estabiliza en una matriz acuosa que contiene al menos un agente tensioactivo aniónico.
\vskip1.000000\baselineskip
Antecedentes de la invención
El complejo de troponina desempeña un papel en la regulación dependiente del calcio de la contracción y relajación del músculo. Existen tres proteínas distintas, o isoformas de troponina, que constituyen el complejo de troponina y que se pueden encontrar tanto en los músculos cardiacos como esqueletales. Dichas proteínas se designan Troponina-I, Troponina-C y Troponina-T. Durante el infarto de miocardio, mueren las células del músculo cardíaco y, en consecuencia, liberan su contenido intracelular, incluyendo las proteínas Troponina en la corriente sanguínea.
El infarto de miocardio es una causa principal de fallecimiento en los países desarrollados. La organización Mundial de la Salud (OMS) desarrolló las directrices para diagnosticar el infarto de miocardio en 1979 (ver Circular, 59:607-609 (1979)). Las directrices de la OMS recomiendan que un diagnóstico de miocardio dependa de la manifestación de dos de tres criterios en concreto. Dichos criterios son: (1) Dolor en el pecho o historia de un episodio cardíaco; (2) Indicación de electrocardiograma del episodio cardíaco; y (3) Niveles elevados de la enzima creatina quinasa.
Millones de personas ingresan en las salas de urgencias todos los años aquejados de dolor en el pecho y no tienen electrocardiogramas sin diagnóstico, lo que dificulta un diagnóstico de episodio cardíaco. La medida de los niveles en circulación de creatina quinasa tienen una especificidad cuestionable en relación con la manifestación de infarto de miocardio ya que la elevación de esta proteína en la sangre podría ser el resultado también de una lesión muscular esqueletal. Se ha demostrado que la Troponina-I y la Troponina-T tienen mayor especificidad debido a la presencia de una forma cardíaco específica de estas proteínas presente únicamente en el corazón. La mayor especificidad de Troponina-I y Troponina-T para el diagnóstico de infarto de miocardio ha llevado al desarrollo de diversos inmunoensayos dirigidos a determinar los niveles de estas proteínas en muestras de sangre de un paciente del que se espera que presente niveles elevados. La bibliografía que demuestra la superior utilidad de troponina se ha traducido en una actualización de la definición de infección miocardial a la fecha de 2000 (que se publicó conjuntamente en el Journal of the American College of Cardiology, 36:959-696 (2000) y en el European Heart Journal, 21:1502-1513- (2000)). Esta definición actualizada hace un mayor hincapié en los biomarcadores para el diagnóstico. Como resultado, los criterios para un infarto de miocardio agudo, en evolución o reciente son la típica elevación y gradual caída (troponina) o una elevación y caída más rápidas (CK-MB) de los marcadores bioquímicos de necrosis miocardial con al menos uno de los siguientes: (a) síndromes isquémicos; (b) desarrollo de ondas Q patológicas en el ECG , (c) cambios en ECG indicativos de isquemia (elevación o depresión del segmento ST); o (d) intervención de la arteria coronaria (v.g., angioplastia coronaria).
Los inmunoensayos cuantitativos requieren el uso tanto de patrones de calibración para definir una curva de calibración como patrones de control para analizar la integridad de la curva de calibración. Una característica necesaria de los patrones utilizados es la estabilidad, es decir, demostrar la pérdida mínima de inmunoactividad a lo largo de un período de tiempo definido (fecha de expiración) en las condiciones de almacenamiento apropiadas. Las técnicas de estabilización para Troponina-I han incluido congelación, liofilización y disolución en agentes de reducción fuertes, como guanidina. Dichas técnicas requieren por lo general un tiempo adicional, un equipo especializado y procedimientos de manejo especiales necesarios para descongelar o reconstituir. Adicionalmente, el descongelado o reconstitución de la proteína troponina tiene como resultado normalmente un material inestable con una vida en almacenamiento limitada.
En US 5834210 se describe un método para la preparación de complejos de Troponina cardiaca humana estables que se obtienen a partir de Troponina-I, modificada recombinante, Troponina-C recombinante y Troponina-T recombinante, en presencia de una sal o sales alcalinotérreas y, si se desea, un detergente como dodecil sulfato sódico.
En WO 96/27661 se describen composiciones para estabilizar proteínas y fragmentos de proteínas, como Troponina y fragmentos de Troponina. Las composiciones comprenden una solución acuosa de un tampón, una proteína estabilizante, un agente quelante, un agente de reducción y una sal y pueden comprender dodecil sulfato como detergente.
Debido a la inestabilidad inherente de la proteína troponina, existe la necesidad de contar con un material que sea resistente a las variaciones de la temperatura a las que se somete potencialmente durante el transporte y el almacenamiento. Existe además la necesidad de contar con un método para preparar dicha troponina estabilizada. La invención proporciona una proteína troponina estabilizada y un método para preparar la troponina estabilizada.
Compendio de la invención
En uno de los modos de realización, la invención proporciona un patrón de ensayo de diagnóstico que comprende una solución acuosa de proteína Troponina-1 y una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo el agente tensioactivo aniónico en el patrón de ensayo de diagnóstico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.
En otro modo de realización más, el patrón para ensayo de diagnóstico es estable a temperatura ambiente durante al menos seis (6) meses.
En otro modo de realización más, la matriz en el patrón para ensayo de diagnóstico comprende además gelatina porcina.
En otro modo de realización más, la matriz en el patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cloruro sódico y fosfato sódico.
En otro modo de realización, la matriz del patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un tampón de pH que se añade para mantener el pH dentro del intervalo de aproximadamente 6,8 a aproximadamente 7,2.
En otro modo de realización más, la matriz contiene polioxietilen(1) lauril sulfato sódico en una concentración de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 0,25%.
En otro modo de realización, la invención proporciona un método para estabilizar Troponina en una solución acuosa, comprendiendo dicho método las etapas de:
(a) preparar una solución acuosa de al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo el agente tensioactivo aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico;
(b) añadir proteína Troponina-I a la solución acuosa; y
(c) almacenar la solución a temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
En otro modo de realización más, la invención se refiere a un patrón para ensayo de diagnóstico que comprende una solución acuosa de un complejo de una proteína Troponina-I y una proteína Troponina-C y una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo el agente tensioactivo aniónico del patrón para ensayo de diagnóstico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.
En otro modo de realización, dicho patrón para ensayo de diagnóstico es estable a temperatura ambiente durante al menos seis (6) meses.
En otro modo de realización más, la matriz del patrón para ensayo de diagnóstico comprende además gelatina porcina.
En otro modo de realización más, la matriz del patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cloruro sódico y fosfato sódico.
En otro modo de realización, la matriz del patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un tampón de pH que se añade para mantener el pH dentro del intervalo de aproximadamente 6,8 a aproximadamente 7,2.
En otro modo de realización más de este patrón para ensayo de diagnóstico, la matriz contiene polioxietilen(1) lauril sulfato sódico en una concentración de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 0,25%.
En otro modo de realización, la invención proporciona un método para estabilizar Troponina en una solución acuosa, comprendiendo dicho método las etapas de:
(a) preparar una solución acuosa de al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico;
(b) añadir proteína Troponina-I y proteína Troponina-C, ya sea individualmente o en combinación como un único complejo a la solución acuosa, y
(c) almacenar la solución a temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Breve descripción de los gráficos
La figura 1 es un gráfico en el que se comparan los niveles de actividad de Troponina-I en las formulaciones con y sin polioxietilen (1) lauril sulfato sódico.
La figura 2 es un gráfico en el que se presenta la variabilidad lote a lote de polioxietilen (1) lauril sulfato sódico como STANDAPOL® ES-1 sobre la estabilidad de Troponina-I a lo largo del tiempo a una temperatura comprendida entre 2 y 3ºC.
La figura 3 es un gráfico en el que se presenta la variabilidad lote a lote de polioxietilen (1) lauril sulfato sódico como STANDAPOL® ES-1 sobre la estabilidad de Troponina-I a lo largo del tiempo a una temperatura de 31ºC.
La figura 4 es un gráfico en el que se presenta la variabilidad lote a lote de polioxietilen (1) lauril sulfato sódico como STANDAPOL® ES-1 sobre la estabilidad de Troponina-I a lo largo del tiempo a una temperatura de 45ºC.
La figura 5 es un gráfico en el que se representa el % de actividad de Troponina-I que queda para controles Bajo, Medio y Alto calculados a partir de una curva de calibración generada a través del uso de patrones de calibrador que fueron almacenados congelados y recién descongelados.
La figura 6 es un gráfico en el que se representa el % de actividad de Troponina-I que queda para controles Bajo, Medio y Alto calculados a partir de una curva de calibración generada a través del uso de patrones de calibrador que fueron almacenados a 2-8ºC.
La figura 7 es un gráfico en el que se representa el % de actividad de Troponina-I que queda para controles Bajo, Medio y Alto calculados a partir de una curva de calibración generada a través del uso de patrones de calibrador que fueron almacenados a temperatura ambiente (31ºC).
La figura 8 es un gráfico en el que se representa el % de actividad de Troponina-I que queda para controles Bajo, Medio y Alto que fueron almacenados congelados. Se calculó la concentración de los controles a partir de la curva patrón generada utilizando patrones calibradores que fueron almacenados congelados y utilizados inmediatamente después del descongelado.
La figura 9 es un gráfico en el que se representa el % de actividad de Troponina-I que queda para Controles Bajo, Medio y Alto que fueron almacenados a 2-8ºC. Se calculó la concentración de los controles a partir de la curva patrón generada utilizando los patrones de calibrador que fueron congelados y utilizados inmediatamente después de descongelar.
La figura 10 es un gráfico en el que se representa el % de la actividad de Troponina-I que quedaba para Controles Bajo, Medio y Alto que fueron almacenados en el peor de los casos a temperatura ambiente (31ºC). Se calculó la concentración de los controles a partir de una curva patrón generada utilizando los patrones de calibrador que fueron congelados y utilizados inmediatamente después de descongelar.
La figura 11 (A-C) son gráficos en los que se representa la concentración de Troponina-I para el control Medio almacenado continuamente, a 2-8ºC, y en el peor de los casos a temperatura ambiente (31ºC). Se calculó la concentración de los controles a partir de la curva patrón generada utilizando los patrones de calibrador que fueron congelados y utilizados inmediatamente después de descongelar.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a proteína Troponina-I estabilizada en una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico que es útil como patrón de calibración y control en inmunoensayos destinados a determinar los niveles de proteína troponina en muestras de sangre de pacientes de los que se sospecha que tienen niveles elevados de troponina. La presente invención se refiere también a métodos para preparar una proteína troponina estabilizada en una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico.
El al menos un agente tensioactivo aniónico, utilizado en la matriz y los métodos de la presente invención, es polioxietilen(1) lauril sulfato sódico. Las proteínas Troponina, en particular Troponina-I cardíaca (cTnl), son moléculas inestables que pierden rápidamente la inmunoactividad en entornos acuosos. La estabilidad de la inmunoactividad es una característica esencial para un analito que ha de utilizarse para preparar calibradores o controles para un ensayo de diagnóstico. Los autores de la presente invención han observado que polioxietilen(1) lauril sulfato sódico puede impartir estabilidad a las moléculas cTnl. Más específicamente, los autores de la invención han descubierto que la adición de polioxietilen(1) lauril sulfato sódico a cTnl imparte estabilidad térmica y solidez a la formación de soluciones normales acuosas utilizadas en los calibradores y los controles de ensayo para análisis. La solidez se refiere a la fuerza de las propiedades de la troponina. La solidez también puede referirse al modo en el que ha sido construida la troponina.
Polioxietilen (1) lauril sulfato sódico proporciona estabilidad a Troponina-I dando lugar a que sea sólida a temperaturas elevadas, amplios intervalos de concentraciones iónicas y pH. Los agentes tensioactivos aniónicos, como polioxietilen (1) lauril sulfato sódico, están disponibles en el comercio. Por ejemplo, polioxietilen(1) lauril sulfato sódico está disponible como STANDAPOL® ES-1 de Cognis Corporation, Hoboken, NJ.
Polioxietilen (1) lauril sulfato sódico se puede utilizar como un componente diluyente para soluciones que contienen troponina y no requieren ningún procesado adicional. La matriz que contiene el al menos un agente tensioactivo aniónico y proteínas troponina no suponen ningún requisito de manejo especial para el usuario y el usuario puede guardar la matriz a temperaturas comprendidas entre 2 y 8ºC o a temperatura ambiente, hasta 31ºC durante períodos de al menos (6) seis meses, un (1) año o más.
Se cree que polioxietilen (1) lauril sulfato sódico es fácilmente soluble en condiciones acuosas y puede añadirse y mezclarse hasta disolverse. Los intervalos de concentración del al menos un agente tensioactivo aniónico en la matriz están comprendidos entre 0,1% y 0,25%, a un pH en el intervalo comprendido entre 6,8 y 7,2, preferiblemente 7,0.
Polioxietilen(1) lauril sulfato sódico estabiliza la inmunoactividad de cTnl y los complejos de Troponina-I/Tropo-
nina-C recombinantes que se forman como una única molécula de proteína. El complejo recombinante puede utilizarse en la formulación de calibradores y controles para los ensayos que se llevan a cabo por ejemplo con ensayos de Troponina-I AxSYM, ADV y ARCHITECT. La presente invención contempla asimismo que la matriz que contiene polioxietilen (1) lauril sulfato sódico también puede utilizarse para estabilizar la inmunoactividad de complejos de Troponina-I/Troponina-C recombinantes o nativos que se forman al añadir Troponina-I y Troponina-C en combinación para formar un complejo.
Los ejemplos que se exponen a continuación sirven para ilustrar la invención pero, naturalmente, no deberán interpretarse en ningún modo como limitativos de su alcance. Todas las referencias, incluyendo las publicaciones, solicitudes de patente y patentes, citadas en el presente documento se incorporan en él como referencia igual que si cada una de las referencias se indicaran individualmente y específicamente como incorporadas como referencia y se expusieran en su totalidad aquí.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1 Comparación de la estabilización de Troponina-I a 37ºC y entre -28ºC con y sin STANDAPOL® ES-1
Se diluyó Troponina-I (código 67911, Lote 63821P101, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) en matrices de gelatina porcina al 0,1% (código 35745, lote 74281P1, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) a pH 4,0 y gelatina porcina al 0,1% (Código 35745, lote 74281P100) que contenía STANDAPOL® ES-1 (Lote 1 2L019 de Cognis Corporation, Hoboken, NJ) a pH 6,8 a una concentración final comprendida entre 40 y 50 ng/ml (Unidades AxSYM son ng/ml). Se añadió la gelatina porcina como fuente de proteína con el fin de reducir al mínimo la pérdida de troponina durante la fabricación.
Se almacenó cada una de las formulaciones tanto a 2-8ºC como a 37ºC del siguiente modo:
Muestra A - Troponina-I en gelatina porcina a 2-8ºC
Muestra B - Tropoina-I en gelatina porcina a 37ºC
Muestra C - Troponina-I en gelatina porcina a 2-8ºC con STANDAPOL® ES-1 al 0,1%
Muestra D - Troponina-I en gelatina porcina a 37ºC con STANDAPOL® ES-1 al 0,1%
\vskip1.000000\baselineskip
Se midió la concentración de Troponina-I en cada una de las muestras utilizando una curva normal generada el día 0 utilizando calibración normal de Troponina-I AxSYM (Nº 3C29-01, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) en un sistema de instrumento AxSYM (Química Clínica, 45, Nº 12, 1999). A lo largo de los siguientes diez días, se midió la concentración de Troponina-I y se comparó con la concentración observada el día 0. Se calculó el porcentaje de actividad que quedaba cada día dividiendo la concentración medida para cada muestra en los diferentes puntos en el tiempo según la concentración medida el día 0. En la tabla 1 se indican los resultados que están representados en la figura 1.
TABLA 1 Resultados de estabilización para las muestras A-D
1 
\newpage
La adición de STANDAPOL® ES-1 al 0,1% a la matriz que contiene gelatina porcina en un 0,1% y el ajuste del pH de 4 a 6,8 tiene un efecto significativo en la estabilidad térmica de Troponina-I tal como se observa tras el almacenamiento de las muestras a 37ºC durante diez días. Se observaron estabilidades similares para las muestras almacenadas a 2-8ºC con y sin STANDAPOL® ES-1.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Comparación de la variabilidad lote a lote de STANDAPOL® ES-1
Se utilizaron tres lotes del vendedor STANDAPOL® ES-1 para la preparación de matrices de analito. Todas las matrices se basaron en una formulación: gelatina porcina al 0,025% (Código 35745, lote 74281P100, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), 0,175% del STANDAPOL® ES-1 seleccionado, NaPO_{4} 2,5 mM (un tampón para mantener el pH de la solución) y 0,1% de ProClin 300 (ingrediente activo primario - metil cloroisotiazolona) a pH 7,0. ProClin 300 es un agente antimicrobiano utilizado para impedir el crecimiento bacteriano.
Los tres lotes del vendedor de SATANDAPOL® ES-1 fueron
Lote 1- código 88965, lote 39267X102 (Abbott Laboratories)
Lote 1- código 88965, lote 74497P100 (Abbott Laboratories)
Lote 1- código 88965, lote 74498P101 (Abbott Laboratories)
\vskip1.000000\baselineskip
Se compararon las tres matrices (fabricadas en Abbott Laboratories Instalaciones R&D) con una preparación fabricada en Bulk Solutions (Departamento 864, Abbott Laboratories). Se añadió a esta preparación el lote 1 a una concentración de 0,175%. Se utilizó cada una de las matrices para diluir Troponina-I cardiaca a una concentración comprendida entre 15 ng/ml-20 ng/ml. Se almacenaron las muestras en tres condiciones de temperatura diferentes: 2-8ºC, temperatura ambiente y 45ºC. Se midió la concentración de Troponina-I de cada patrón (a través del ensayo de troponina-I AxSYM) los días 0, 1, 2 y 7. Se determinó el porcentaje de la actividad de Troponina-I que quedaba. En las tablas 2-7 se indican los resultados, que se representan en las figuras 2-4.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 2 Estabilidad de Troponina-I a 2-8ºC: Variabilidad lote a lote de STANDAPOL ES-1
2
TABLA 3 Actividad de Troponina-1 que queda (%) tras el almacenamiento a 2-8ºC
3
Después de 7 días en almacenamiento a 2-8ºC, el porcentaje de actividad de Troponina-I que quedaba varió según el lote de STANDAPOL® ES-1 utilizado entre 96% y 105%.
TABLA 4 Estabilidad de Troponina-I a temperatura ambiente: variabilidad de lote a lote de STANDAPOL® ES-1
4
TABLA 5 Actividad de Troponina-I que queda (%) tras el almacenamiento a temperatura ambiente
5
Después de 7 días en almacenamiento a temperatura ambiente, el porcentaje de actividad de Troponina-I que quedaba varió según el lote de STANDAPOL® ES-1 utilizado entre 99% y 103%.
TABLA 6 Estabilidad de Troponina-I a 45ºC: variabilidad de lote a lote de STANDAPOL® ES-1
6 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 7 Actividad de Troponina-I que queda (%) tras el almacenamiento a 45ºC
7
Después de 7 días de almacenamiento a 45ºC, el porcentaje de actividad de Troponina-I que quedaba varió según el lote de STANDAPOL® ES-1 utilizado entre 93% y 101%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Estudio de estabilidad de calibrador y control
Los calibradores son formulaciones patrón que contienen concentraciones conocidas de Troponina-I y que se utilizan para definir la curva de calibración utilizada en el ensayo. Los controles son formulaciones patrón que contienen también concentraciones conocidas de Troponina-I y que se utilizaron para comprobar la integridad de la curva de calibración a lo largo del intervalo dinámico del ensayo.
Se prepararon calibradores patrón utilizando la formulación matriz que contenía STANDAPOL® ES-1:
0,025% de gelatina porcina (código 35745, lote 74281P103 (Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI))
0,175% de STANDAPOL® ES-1 (código 88965, lote 39267X102 (Cognis Corporation, Hoboken, N.J.))
2,5 mM NaPO_{4}
0,1% ProClin 300 (Suppleco) a pH 7,0 y
Troponina-I (Código Abbott 67911, lote 78480P200, comprado a Scripps Laboratories, CA.) en las siguientes concentraciones de Troponina-I: 0, 2,5, 5,0, 15, 30 y 50 ng/ml, designadas A-F, respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
De manera similar, se prepararon los tres patrones de control en las siguientes concentraciones de Troponina-I:
Control Bajo: 3,0 ng/ml
Control Medio: 10 ng/ml
Control Alto: 35 ng/ml
\vskip1.000000\baselineskip
Se almacenó en congelación un juego completo de calibradores y controles patrón a 2-8ºC y a 31ºC. Se seleccionó la temperatura 31ºC como el peor caso de condiciones de temperatura ambiente. Se utilizaron controles recién descongelados para evaluar la estabilidad de los calibradores almacenados en varias condiciones de temperatura los días 0, 1, 3, 7 y 14. En las tablas 8-10 se muestran los resultados que están representados en las figuras 5-7. En contraposición, se utilizaron los calibradores recién descongelados para evaluar la estabilidad de los controles que se habían almacenado en las mismas condiciones de temperatura los días 0, 1, 3, 7 y 14. En las tablas 11-13 se indican los resultados que quedan representados en las figuras 8-10. Adicionalmente, la estabilidad del control Medio en las distintas condiciones de almacenamiento fue seguida de 184 días, tal como se muestra en la tabla 14 y la figura 11.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 8 Estabilidad de calibrador almacenado en congelación. Actividad de control de Troponina-I (%) que queda
8 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 9 Estabilidad de calibrador almacenado a 2-8ºC. Actividad de Troponina-I que queda
9 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 10 Estabilidad de calibrador almacenado a 31ºC. Actividad de Troponina-I que queda
10
TABLA 11 Estabilidad de control: Actividad de Troponina-I que queda para controles bajo, medio y alto almacenados en congelación
11
TABLA 12 Estabilidad de control: Actividad de Troponina-I (%) que queda para controles bajo, medio y alto almacenados a 2-8ºC
12
TABLA 13 Estabilidad de control: Actividad de Troponina-I que queda para controles bajo, medio y alto almacenados a 31ºC
13
TABLA 14 Estabilidad de control: Actividad de Troponina-I que queda para el control medio almacenado en congelación, 2-8ºC, y 31ºC
14
Se valoró la estabilidad del calibrador almacenado en distintas condiciones de temperatura a lo largo de 14 días utilizando controles recién descongelados. La actividad de Troponina-I que quedaba al cabo de 14 días osciló entre 97ºC y 106%. Los calibradores almacenados a 2-8ºC y 31ºC demostraron una actividad de Troponina-I similar que quedaba comprendida entre 95 y 102%, y entre 97% y 102% respectivamente al cabo de 14 días.
La estabilidad del control almacenado en condiciones de congelación, 2-8ºC y 31ºC, presentó una retención de la actividad comparable. Los controles congelados retuvieron entre 97 y 106% de la actividad al cabo de 14 días. Los controles almacenados a 2-8ºC y 31ºC produjeron actividades de Troponina-I comprendidas entre 101 y 109% al cabo de 14 días en comparación con la actividad medida el día 0. El control medio almacenado en condiciones de congelación, 2-8ºC y 31ºC retuvo un 97, 102 y 93% de la actividad, respectivamente al cabo de 184 días.
Se observó que polioxietilen (1) lauril sulfato sódico no causaba ningún efecto remanente de una muestra a otra en el sistema de instrumento AxSYM.
El uso de los términos "un" y "uno" y "el" y determinantes similares en el contexto de la descripción de la invención (sobre todo en el contexto de las reivindicaciones adjuntas'') debe interpretarse como el de determinantes que cubren tanto el singular como el plural, a no ser que se indique de otra forma en el presente documento o se contradiga claramente por el contexto. La cita de los intervalos de valores en el presente documento se indica simplemente como método de abreviatura para referirse individualmente a cada uno de los valores por separado que entran dentro de dicho intervalo, a no ser que se indique de otro modo en el presente documento, y cada uno de los valores por separado se incorporan en la presente memoria descriptiva como si se citara expresamente aquí. Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier modo adecuado a no ser que se indique aquí de otra forma o se contradiga claramente por el contexto. El uso de cualquiera y de todos los ejemplos, o expresiones que indican un ejemplo (v.g., "como por ejemplo") que aparecen en el presente documento, tienen como único fin ilustrar mejor la invención y no implican ninguna limitación en el alcance de la invención a no ser que se reivindique de otra forma. Ninguna de las expresiones de la memoria descriptiva deberá interpretarse como indicativa de un elemento no reivindicado como esencial para la práctica de la presente invención.
Si bien se han identificado de forma expresa en el presente documento algunas de las ventajas potenciales y objetos, debe entenderse que es posible que algunos de los modos de realización de la invención no proporcionen todas o algunas de las ventajas y objetos identificados expresamente.
Los modos de realización preferibles de la presente invención quedan descritos en el presente documento, incluyendo el mejor modo conocido por los autores de la invención para llevar a cabo la presente invención. Naturalmente, para las personas especializadas en la técnica serán evidentes variaciones de estos modos de realización preferibles tras la lectura de anterior descripción. Los autores de la invención esperan que los técnicos especializados empleen dichas variaciones según lo apropiado y los autores de la invención pretenden que la invención se ponga en práctica de otras formas distintas a las descritas específicamente aquí. Por consiguiente, la presente invención incluye todas las modificaciones y equivalentes de la materia en cuestión citada en las reivindicaciones adjuntas según lo permitido por la ley aplicable. Asimismo, queda abarcada en la presente invención cualquier combinación de los elementos descritos en todas las variaciones posibles a no ser que se indique de otra forma o lo contradiga claramente el contexto.

Claims (9)

1. Un patrón de ensayo para diagnóstico que comprende:
una solución acuosa de proteína Troponina-I, y
una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un patrón de ensayo para diagnóstico con arreglo a la reivindicación 1 que comprende:
una solución acuosa que contiene un complejo de proteína Troponina-I y Troponina-C; y
una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen (1) lauril sulfato sódico.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Un patrón de ensayo para diagnóstico según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 siendo dicho patrón estable a temperatura ambiente durante al menos seis meses.
4. El patrón de ensayo para diagnóstico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, comprendiendo dicha matriz además gelatina porcina.
5. El patrón de ensayo para diagnóstico según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 comprendiendo además la matriz un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cloruro sódico y fosfato sódico.
6. El patrón de ensayo para diagnóstico según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, comprendiendo dicha matriz además un tampón de pH que se añade para retener el pH dentro del intervalo de 6,8 a 7,2.
7. El patrón de ensayo para diagnóstico según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, encontrándose el polioxietilen (1) lauril sulfato sódico en una concentración comprendida entre 0,1 y 0,25%.
8. Un método para estabilizar Troponina en una solución acusa, comprendiendo dicho método las etapas de:
Preparar una solución acuosa de al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen (1) lauril sulfato sódico;
Añadir proteína Troponina-I; y
Almacenar la solución a temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
9. Un método para estabilizar Troponina en una solución acuosa según la reivindicación 8, comprendiendo dicho método las etapas de:
Preparar una solución acuosa de al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen (1) lauril sulfato sódico;
Añadir una proteína Troponina-I y proteína Troponina-C, ya sea por separado o en combinación como un solo complejo, y
Almacenar la solución a temperatura ambiente.
ES06750874T 2005-04-28 2006-04-20 Estabilizacion de la troponina cardiaca. Active ES2342104T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US67554205P 2005-04-28 2005-04-28
US675542P 2005-04-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2342104T3 true ES2342104T3 (es) 2010-07-01

Family

ID=37027832

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES06750874T Active ES2342104T3 (es) 2005-04-28 2006-04-20 Estabilizacion de la troponina cardiaca.

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20070082410A1 (es)
EP (1) EP1877432B1 (es)
JP (1) JP2008539434A (es)
AT (1) ATE463509T1 (es)
CA (1) CA2606333A1 (es)
DE (1) DE602006013443D1 (es)
ES (1) ES2342104T3 (es)
WO (1) WO2006116005A2 (es)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3514539B1 (en) * 2016-09-13 2024-11-20 Fujirebio Inc. Cardiac troponin assay method and assay reagent
JP7750608B2 (ja) * 2020-07-10 2025-10-07 積水メディカル株式会社 Ｔａｒｃを含有する組成物、及びｔａｒｃの保存安定性向上方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2130280C (en) * 1993-08-24 1999-08-31 Lilian Lee Method for purification of cardiac troponin i
US6165981A (en) * 1995-03-07 2000-12-26 Dade Behring Inc. Stabilizing solutions for proteins and peptides
FR2734267B1 (fr) * 1995-05-16 1997-08-01 Pasteur Sanofi Diagnostics Composition stabilisee de troponine pour immunoessais et procede de preparation d'une telle composition stabilisee
DE19524572A1 (de) * 1995-07-06 1997-01-09 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung eines synthetischen Kalibrators für den Einsatz in Immunoassays, bestehend aus den Analyten oder Teilsequenzen davon, die an inerten Trägermoleküle konjugiert sind
US5834210A (en) * 1997-05-23 1998-11-10 Spectral Diagnostics, Inc. Stable troponin subunits and complexes
JP2002511932A (ja) * 1997-06-13 2002-04-16 メディカル、アナリシス、システムズ、インコーポレイテッド（エムエイエス） 心臓マーカーの安定化組成物
KR100508695B1 (ko) * 2001-02-13 2005-08-17 한국과학기술연구원 인슐린의 경구투여용 제형과 그의 제조방법
US6538104B2 (en) * 2001-04-27 2003-03-25 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes
US20040022792A1 (en) * 2002-06-17 2004-02-05 Ralph Klinke Method of stabilizing proteins at low pH
US20050136542A1 (en) * 2003-12-19 2005-06-23 Beckman Coulter, Inc. Stabilized liquid reference solutions

Also Published As

Publication number Publication date
CA2606333A1 (en) 2006-11-02
DE602006013443D1 (de) 2010-05-20
WO2006116005A2 (en) 2006-11-02
JP2008539434A (ja) 2008-11-13
WO2006116005A3 (en) 2007-02-15
EP1877432A2 (en) 2008-01-16
US20070082410A1 (en) 2007-04-12
EP1877432B1 (en) 2010-04-07
ATE463509T1 (de) 2010-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3740644B2 (ja) タンパクおよびペプチドのための安定化溶液
Habib et al. Tumour necrosis factor and inducible nitric oxide synthase in dilated cardiomyopathy
Avner et al. Myocardial infarction in mice alters sarcomeric function via post-translational protein modification
Hirzel et al. Relationship between myosin isoenzyme composition, hemodynamics, and myocardial structure in various forms of human cardiac hypertrophy.
Thalmann et al. II Quantitative Study of Selected Enzymes Involved in Energy Metabolism of the Cochlear Duct
ES2455229T3 (es) Método para diagnosticar la presencia y/o la gravedad de una patología hepática en un sujeto y/o para controlar la eficacia del tratamiento de dicha patología
De Pasquale et al. Prolonged alveolocapillary barrier damage after acute cardiogenic pulmonary edema
Checchia et al. Circulating cardiac troponin I levels in Kawasaki disease
JP5816376B2 (ja) 分析アッセイのためのカスタマイズされた品質対照
Chimenti et al. Myofilament degradation and dysfunction of human cardiomyocytes in Fabry disease
CN102507916A (zh) 缺血修饰白蛋白液体稳定试剂盒
Suzuki et al. Early detection of cardiac damage with heart fatty acid-binding protein after cardiac operations
ES2660969T5 (es) Método basado en euglobulina para determinar la actividad biológica de defibrotida
Hasegawa et al. Evaluation of heart fatty acid–binding protein as a rapid indicator for assessment of myocardial damage in pediatric cardiac surgery
Askiti et al. Troponin I levels in a hemolytic uremic syndrome patient with severe cardiac failure
ES2342104T3 (es) Estabilizacion de la troponina cardiaca.
BRPI0613170B1 (pt) meios de armazenamento para células
JPH06189760A (ja) クレアチンキナーゼおよびクレアチンキナーゼイソ酵素の酵素活性および免疫反応性を安定させるための組成物
Benitez‐Amaro et al. Identification of new biophysical markers for pathological ventricular remodelling in tachycardia‐induced dilated cardiomyopathy
US20010006683A1 (en) Stabilized composition of troponin for immunoassays and method of preparation of such a stabilized composition
Kittleson et al. Efficacy of digoxin administration in dogs with idiopathic congestive cardiomyopathy
Lazzeri et al. Acid–base imbalance in uncomplicated ST-elevation myocardial infarction: the clinical role of tissue acidosis
Larsson et al. Regulation of human muscle contraction at the cellular and molecular levels
ES2322548T3 (es) Metodo para el pronostico de supervivencia acumulada de los pacientes.
ES2259599T3 (es) Utilizacion de un anticuerpo especifico de los fibroblastos papilares como marcador de calidad de una piel.