ES2340488T3 - Sales derivadas del acido lipoico y su utilizacion para el tratamiento de las enfermedades. - Google Patents

Abstract

Una sal fisiológicamente aceptable de un compuesto de fórmula: **(Ver fórmula)** donde: x es 0-16 R1 y R2 son independientemente acilo CH3(CH2)n-1C(=O)-; alquilo CnH2n+1; alqueno CmH2m; alquino CmH2m-2; aromático; aroílo; sulfuro de alquilo CH3(CH2)t-S-; éster tiocarbámico CH3(CH2)n-1C=NH-; o semitioacetal CH3CH(OH)-S-; donde n es 1-10; m es 2-10 y t es 0-9 para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades.

Description

Sales derivadas del ácido lipoico y su utilización para el tratamiento de las enfermedades.

Campo de la invención

La presente invención hace referencia a agentes terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer y otras enfermedades asociadas con enzimas metabólicas alteradas. En particular, la invención hace referencia a una clase novedosa de agentes terapéuticos que eligen como objetivo y eliminan selectivamente células tumorales, y a otros ciertos tipos de células implicadas en procesos de enfermedad.

Antecedentes de la invención

Todas las células de mamíferos requieren energía para vivir y crecer. Las células obtienen esta energía metabolizando las moléculas de alimento. La inmensa mayoría de las células normales utilizan una única ruta metabólica para metabolizar su alimento. La primera etapa de esta ruta metabólica es la degradación parcial de moléculas de glucosa a piruvato en un procedimiento conocido como glicolisis o ciclo glicolítico. El piruvato es degradado adicionalmente en la mitocondria mediante un procedimiento conocido como ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) a agua y dióxido de carbono, que después es eliminado. La conexión crítica entre estos dos procesos es un gran complejo enzimático de múltiples subunidades conocido como complejo piruvato deshidrogenasa ("PDH") (referido en adelante como "PDC"). El PDC funciona como un catalizador que canaliza el piruvato desde el ciclo glicolítico al ciclo TCA.

La mayor parte de los cánceres despliegan una profunda perturbación del metabolismo energético. Este cambio en el metabolismo de la energía representa una de las correlaciones más robustas y bien documentadas de la transformación maligna.

Debido a que las células tumorales degradan la glucosa principalmente de manera glicolítica, es decir, sin el ciclo TCA, se deben desechar grandes cantidades de piruvato en diversas rutas alternativas. Una ruta principal utilizada para la eliminación del piruvato en exceso implica la unión de dos moléculas de piruvato para formar el compuesto neutro acetoína. Esta generación de acetoína es catalizada por una forma de PDC específica de los tumores. Aunque el ciclo TCA todavía funciona en las células cancerígenas, el ciclo TCA de las células tumorales es un ciclo variante que depende de la glutamina como fuente de energía primaria. El PDC específico de tumores juega un papel regulador en este ciclo TCA variante. Así, la inhibición o activación de una única enzima, es decir el PDC específico de tumores puede bloquear la generación a gran escala de ATP y reducir el potencial en las células tumorales.

A pesar del extenso trabajo que caracteriza el metabolismo de la célula tumoral, la alteración sistemática del metabolismo de la energía de la célula tumoral ha permanecido sin explorar como diana para la quimioterapia del cáncer. Muchas enfermedades malignas continúan presentando desafíos primordiales para la oncología clínica. Por ejemplo el cáncer de próstata es la segunda causa de muerte más común por cáncer en hombres. Los protocolos de tratamiento actuales cuentan principalmente con manipulaciones hormonales. Sin embargo, a pesar de las elevadas tasas de respuesta inicial, los pacientes a menudo desarrollan tumores refractarios a hormonas, conduciendo a un rápido progreso de la enfermedad con una escasa prognosis. En resumen, los resultados de la quimioterapia citotóxica han sido decepcionantes, indicando una necesidad muy palpable de nuevos enfoques para la prevención y el tratamiento de cánceres avanzados. Otras enfermedades resultantes de una replicación celular anómala, por ejemplo los melanomas metastásicos, los tumores cerebrales de origen glial (v.g. astrocitomas), y el adenocarcinoma de pulmón, también son malignidades muy agresivas con una escasa prognosis. La incidencia del melanoma y del adenocarcinoma de pulmón ha sido significativamente creciente en los últimos años. Los tratamientos quirúrgicos de los tumores cerebrales a menudo fracasan al separar todo el tejido tumoral, produciendo recurrencias. La quimioterapia generalizada está impedida por las barreras sanguíneas. Por lo tanto, existe una urgente necesidad de nuevos enfoques para el tratamiento de malignidades en humanos incluyendo el cáncer de próstata avanzado, el melanoma, los tumores de cerebro, y otras malignidades tales como neuroblastomas, linfomas y gliomas.

El desarrollo de los métodos y las composiciones de la presente invención estuvo guiado por la teoría de que los rasgos metabólicos que distinguen las células tumorales de las normales pueden conducir a dianas para la intervención terapéutica. Por ejemplo, las células tumorales parecen funcionar metabólicamente a través de un PDC específico de tumores. Así, los inhibidores de este complejo enzimático pueden ser utilizados para bloquear el metabolismo de las células tumorales, produciendo de ese modo la muerte selectiva de las células tumorales.

Se ha propuesto una actividad anticancerosa para ciertos compuestos lipoato que contienen paladio, donde el agente específico causante del efecto anticanceroso fue identificado como paladio. En la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.463.093, y 5.679.679. A diferencia de la técnica anterior, la presente invención hace referencia a una nueva clase de compuestos lipoato que no contienen paladio, que todavía poseen sorprendentemente una potente actividad anticancerosa. Se cree que estos compuestos funcionan a través de PDC, y de ese modo proporcionan una contramedida eficaz contra el cáncer y otras células patológicas o patogénicas que muestran igualmente un metabolismo energético alterado.

Así, un objeto general de la invención es proporcionar una nueva clase de agentes terapéuticos que se dirijan a células tumorales y las eliminen eficazmente.

Otro objeto de la invención es proporcionar composiciones farmacéuticas que comprenden derivados de ácido lipoico y un portador farmacéuticamente aceptable capaz de dirigirse específicamente a las células tumorales y eliminarlas.

Asimismo es un objeto de esta invención proporcionar un método de tratamiento profiláctico o terapéutico para una variedad de cánceres utilizando los derivados de ácido lipoico descritos aquí.

Otro objeto de esta invención es proporcionar un tratamiento profiláctico o terapéutico de patologías tales como infecciones bacterianas, fúngicas, vegetales y protozoarias de humanos y otros animales utilizando los derivados de ácido lipoico descritos en la presente memoria.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona una clase de compuestos para tratar diversas patologías en un sujeto. La clase de compuestos comprende derivados de ácido lipoico y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. La invención proporciona un compuesto de fórmula:

\vskip1.000000\baselineskip

1

\vskip1.000000\baselineskip

donde:

x es 0-16

R_{1} y R_{2} son independientemente acilo

CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C(=O)-; alquilo C_{n}H_{2n+1}; alqueno C_{m}H_{2m}; alquino C_{m}H_{2m-2}; aromático; aroílo; sulfuro de alquilo CH_{3}(CH_{2})_{t}-S-; éster tiocarbámico

CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C=NH-; y semitioacetal CH_{3}CH(OH) -S-; donde n es 1-10; m es 2-10 y t es 0-9 para su uso en el tratamiento o la prevención de la enfermedad.

\vskip1.000000\baselineskip

La presente invención también se refiere al uso de un compuesto como se ha definido en la presente memoria antes en la preparación de una composición farmacéutica para tratar o prevenir en un paciente una enfermedad caracterizada por una sensibilidad a los derivados de ácido lipoico. Tales usos pueden consistir en un método de tratamiento de un mamífero, incluyendo un ser humano que padece una afección, cuyo método comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto como se ha definido en la presente memoria antes.

Los compuestos encuentran uso en un método de tratamiento o prevención de una afección neoplásica en un sujeto que comprende administrar una cantidad eficaz de al menos un compuesto como se ha definido en la presente memoria antes. Este método abarca un método en el que el compuesto se administra solo o combinado con otro reactivo. El método de tratamiento combinado proporciona el uso simultáneo, sucesivo o separado en el tratamiento de tales afecciones.

El tratamiento descrito en la presente memoria permite la inhibición de las células tumorales en un paciente. Alternativamente, la composición puede ser utilizada para ponerla en contacto directamente con las células e inhibir o eliminar las células tumorales in vitro.

Por otra parte, otros estados de enfermedad pueden mostrar también sensibilidad a los derivados de ácido lipoico. Por consiguiente, la invención contempla el uso de derivados de ácido lipoico como agentes eficaces frente a enfermedades de origen eubacteriano, arqueal, fúngico, vegetal, algino y protozoico ya que estas enfermedades se presentan en seres humanos y otros animales.

Algunos de los compuestos descritos antes son novedosos per se. Por consiguiente, la presente invención también se refiere a tales compuestos como se reivindica en la reivindicación 10 y a las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto como se ha definido aquí antes o una sal fisiológicamente aceptable del mismo junto con uno o más portadores o excipientes fisiológicamente aceptables.

Descripción de las figuras

Figura 1: Muestra la eliminación de células específica de las células cancerosas por lipoato de bis-benzoilo (120 \mug/ml o 120 mg/kg) miembro de la clase novedosa de compuestos que son objeto de esta invención. Véase el Ejemplo 7. La columna de la izquierda contiene el tejido de origen canceroso y, entre paréntesis, la denominación de la línea celular específica. Las tres filas superiores muestran tres tipos de células cancerosas distintas - cáncer de pulmón, cáncer de hígado y cáncer embrionario. En contraste, la línea de más abajo muestra una línea de células epiteliales de riñón normales (no cancerosas). La columna central presenta las muestras no tratadas (control), mientras la columna más a la derecha muestra los efectos del tratamiento sobre cada tipo de célula (muestras experimentales). Obsérvese que cada uno de los tres tipos de células cancerosas es eficazmente eliminado, mientras las células normales no resultan detectablemente afectadas. Estas imágenes fueron fotografiadas aproximadamente a las 48 horas de la administración del lipoato de bis-benzoilo. Obsérvese que casi todas las células cancerosas han sido eliminadas en este tiempo. Las pocas células restantes o fragmentos celulares tienen la morfología característica de las células que experimentan muerte celular (apoptosis; véase el Ejemplo 9; véanse también las Figuras 2 y 3). Estas pocas células que quedan en los campos tratados morirán a las pocas horas. En contraste, obsérvese que las células no cancerosas, normales (fila inferior) no resultan detectablemente afectadas por el tratamiento.

Figura 2: Se muestra la eliminación selectiva de células NIH3T3 transformadas con ras en cultivo mediante el lipoato de bis-benzoilo (120 \mug/ml o 120 mg/kg) miembro de la clase novedosa de compuestos que son objeto de esta invención. Véanse los Ejemplos 7 y 8. La columna de la izquierda describe la línea celular NIH3T3 parental no cancerosa (no transformada) y uno de sus derivados (T24) transformado al estado maligno (canceroso) mediante la introducción de una forma activada del oncogen ras. La columna central muestra estos dos tipos de células no tratadas (muestras de control) y la columna más a la derecha las muestra aproximadamente a las 24 horas del tratamiento con lipoato de bis-benzoilo. Primero, las células parentales no cancerosas no resultan afectadas por este tratamiento. Segundo, en contraste, a las 24 horas de tratamiento aproximadamente el 50% de las células cancerosas (transformadas) son eliminadas y las células restantes se redondean y experimentan muerte celular. Véanse las Figuras 1 y 3 para ejemplos de este redondeo celular y muerte característicos. En aproximadamente 48 horas de tratamiento las células cancerosas estarán casi completamente erradicadas (eliminadas) mientras las correspondientes células parentales no cancerosas permanecen inafectadas.

Figura 3: Se muestra el resultado de un análisis TUNEL que demuestra que el bis-benzoilo miembro de la clase novedosa de compuestos que son el objeto de esta invención induce la apoptosis (muerte celular programada) en células cancerosas. En este experimento, se trataron células HeLa (cáncer cervical) durante aproximadamente 24 horas de manera que se experimentara muerte celular pero de tal manera que quedara un número significativo de células vivas. Todas las células cancerosas fueron eliminadas en aproximadamente 48-60 horas en estas condiciones. Véase el Ejemplo 9. Las fotografías más a la izquierda muestran micrografías de las células con luz de contraste de fase. Se indica con una flecha una célula que muestra la apariencia muy redondeada, internamente fragmentada de una célula experimentando apoptosis. Las fotografías centrales muestran estas mismas células teñidas con DAPI y examinadas mediante microscopia de fluorescencia indirecta. Ésta revela el ADN que muestra dónde están los núcleos celulares. Obsérvese también la tinción desigual característica del ADN en esta célula apoptótica (flecha). Las fotografías más a la derecha muestran el resultado del análisis TUNEL de estas mismas células examinadas mediante microscopia de fluorescencia indirecta. Obsérvese el nivel muy bajo de tinción en la mayoría de los núcleos - reflejando el pequeño número de roturas de ADN (véase el Ejemplo 9). En contraste, obsérvese la señal fluorescente muy fuerte de la célula apoptótica (flecha). Esto es un diagnóstico del gran número de roturas de ADN característico de células que experimentan muerte celular programada (apoptosis).

Descripción detallada de las realizaciones preferidas Características estructurales de los Derivados de Ácido Lipoico

Los compuestos de la presente invención abarcan ácido lipoico en el que la porción tiólica de la molécula ha sido derivatizada por medio de grupos orgánicos. Se pueden utilizar especies de ácido lipoico/dihidrolipoico que tienen cadenas carbonadas más cortas o más largas, de hasta 20 carbonos de longitud, preferiblemente entre 4 y 10 carbonos de longitud, para poner en práctica esta invención. Entre las variantes de ácido lipoico de la presente invención se incluyen aquellas en las que el grupo ácido carboxílico no está alterado, y en las que uno o ambos tioles y/o sulfhidrilos están bloqueados por derivatizaciones con el fin de eliminar específicamente las células tumorales, por medio de la interferencia en las funciones PDC específicas de las células tumorales.

La presente invención hace referencia a una clase de composiciones de ácido lipoico de fórmula:

2

Donde: X es 0-16 y R_{1} y R_{2} pueden ser independientemente:

(1)

Un grupo acilo conectado a través de un enlace tioéster. El grupo acilo comprende

CH_{3}(CH_{2})_{n-1}(C=O)-, donde n es 1-10. Entre los ejemplos de los grupos acilo se incluyen pero no están limitados a acetilo y butirilo. Un ejemplo específico de ácido lipoico

derivatizado con acilo es el lipoato de bis-acetilo (Ejemplo 1).

\vskip1.000000\baselineskip

(2)

Un grupo aromático conectado a través de un enlace tioéster. Entre los ejemplos de los grupos aromáticos se incluyen pero no están limitados a benzoilo o derivados de benzoilo. Un ejemplo específico de ácido lipoico derivatizado con benzoilo es el lipoato de bis-benzoilo (Ejemplo 2).

\vskip1.000000\baselineskip

(3)

Un grupo alquilo conectado a través de un enlace tioéter. El grupo alquilo comprende C_{n}H_{2n+1} donde n es 1-10. Tales grupos alquilo pueden estar sustituidos con otros radicales tales como por ejemplo OH, Cl o NH_{2}. Entre los ejemplos de los grupos alquilo se incluyen pero no están limitados a, metilo, etilo, butilo, decanilo y metil lipoato de 6,8-bis-carbamoílo. (Ejemplo 3).

\vskip1.000000\baselineskip

(4)

Un grupo alqueno conectado a través de un enlace tioéter. El alqueno comprende C_{n}H_{2n} donde n es 2-10. Entre los ejemplos de los grupos alqueno se incluyen pero no están limitados a, propileno, 2,3-dimetil-2-buteno, y hepteno.

\vskip1.000000\baselineskip

(5)

Un grupo alquino conectado a través de un enlace tioéter. El alquino comprende C_{n}H_{2n-2} donde n es 2-10. Entre los ejemplos de los grupos alquino se incluyen pero no están limitados a, acetileno, propino y octino.

\vskip1.000000\baselineskip

(6)

Los grupos alquilo, alqueno y alquino pueden ser de cadena abierta o alicíclicos. Los grupos alicíclicos pueden tener adiciones o sustituciones de cualquiera de los carbonos para formar heterociclos. Entre los ejemplos de los grupos alicíclicos se incluyen pero no están limitados a ciclopropano, ciclopenteno y lipoato de 6,8-metilsuccinimida (Ejemplo 4).

\vskip1.000000\baselineskip

(7)

Los grupos alquilo, alqueno y alquino pueden tener adiciones en cualquiera de sus carbonos. Entre los ejemplos de las adiciones se incluyen pero no están limitados a hidroxilos y aminas.

\vskip1.000000\baselineskip

(8)

Un grupo aromático conectado a través de un enlace tioéter. Los grupos aromáticos pueden ser benceno o un derivado de benceno. Entre los ejemplos de los derivados de benceno se incluyen pero no están limitados a tolueno y anilina.

\vskip1.000000\baselineskip

(9)

Sulfuro de alquilo (CH_{3}(CH_{2})_{t}-S-, donde t es 0-9).

\vskip1.000000\baselineskip

(10)

Grupo éster tiocarbámico [CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C=NH- donde n es 1-10] conectado a través de un enlace tioamida; y

\vskip1.000000\baselineskip

(11)

Grupo semitioacetal [CH_{3}CH(OH)-S- donde R se limita a compuestos con sustituyentes con una potente captación de electrones. Entre los ejemplos se incluyen tricloroacetaldehído y ácido pirúvico.

\vskip1.000000\baselineskip

R_{1} y R_{2} también pueden comprender tioésteres que pueden ser oxidados para producir sulfóxidos o sulfonas, por ejemplo, C-S(O)-R y C-S(O)_{2}-R respectivamente. R_{1} y R_{2} pueden comprender adicionalmente disulfuros que pueden ser oxidados a ácidos tiosulfínicos o tiosulfónicos, por ejemplo los tioles C-S(O)-S-R y C-S(O)_{2}-S-R respectivamente, y todos estos compuestos son miembros de esta clase.

Composiciones de Derivados de Ácido Lipoico para Uso Terapéutico

Para las aplicaciones terapéuticas, se aplican directamente a un paciente composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de los derivados de ácido lipoico descritos antes junto con un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, grageas, supositorios, polvos reconstituibles, o preparaciones líquidas tales como soluciones o suspensiones orales o parenterales estériles. No obstante, para la consistencia de la administración se prefiere que la composición del derivado de ácido lipoico se encuentre en forma de una dosis unitaria. Para la administración oral, los comprimidos y las cápsulas pueden contener excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes, lubricantes para comprimidos, o agentes humectantes farmacéuticamente aceptables tales como laurilsulfato de sodio.

Las composiciones orales pueden ser preparadas mediante métodos convencionales de mezclado, rellenado, formación de comprimidos o similares. Se pueden utilizar operaciones de mezclado repetidas para distribuir el derivado de ácido lipoico completamente en cualquiera de las composiciones empleando cargas. Tales operaciones son, por supuesto, convencionales en la técnica. Véase por ejemplo Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^{a} Edición, 1985, Gennaro ed., Mack Pub. Co., PA. USA. Los comprimidos pueden ser recubiertos según los métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal, en particular con recubrimientos entéricos. Las preparaciones líquidas orales pueden estar, por ejemplo, en forma de emulsiones, jarabes, o elixires, o pueden presentarse como un producto liofilizado para su reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes suspensores, agentes emulsionantes, vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), y si se desea, agentes aromatizantes o colorantes convencionales.

Para la administración parenteral, se preparan formas de dosificación unitarias fluidas utilizando el derivado de ácido lipoico y un vehículo estéril, y, dependiendo de la concentración utilizada, puede ser o bien suspendido o bien disuelto en el vehículo. Al preparar soluciones, se puede disolver el derivado de ácido lipoico en agua para inyectables y filtrar en condiciones estériles antes de cargar en un vial o ampolla adecuados y sellar. Asimismo, se pueden disolver en el vehículo coadyuvantes tales como anestésicos locales, un conservante, y agentes tamponadores. Para aumentar la estabilidad, se puede liofilizar la composición después de cargar en el vial y eliminar el agua a vacío. Las suspensiones parenterales se preparan sustancialmente de la misma manera, excepto que el derivado de ácido lipoico se suspende en el vehículo estéril. Se puede incluir un tensioactivo o un agente humectante en la composición para facilitar la distribución uniforme del derivado de ácido lipoico.

En los métodos para prevenir o inhibir el cáncer, el derivado de ácido lipoico, o una composición farmacéutica que comprende el derivado de ácido lipoico, puede ser administrado a través de numerosas rutas incluyendo intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica, intraperitoneal, intratorácica, intrapleural, intrauterina, tópica, o intratumoral.

Los expertos en la técnica reconocerán que el modo de administrar del derivado de ácido lipoico depende del tipo de cáncer, o del síntoma a tratar. Por ejemplo, un modo preferido de administrar el ácido lipoico para el tratamiento de la leucemia implicaría la administración intravenosa, mientras los métodos preferidos para tratar el cáncer de piel implicaría, por ejemplo, la administración tópica o intradérmica.

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener de 0,1% a 99% en peso, preferiblemente de 10% a 25% en peso del derivado de ácido lipoico, dependiendo del método de administración.

Métodos para Utilizar los Derivados de Ácido Lipoico

Los derivados de ácido lipoico de la invención pueden ser utilizados en un método para prevenir o inhibir las enfermedades que implican una actividad de PDC celular alterada o distinta. Tales enfermedades se caracterizan por una sensibilidad a las composiciones de lipoato de la presente invención. Una de las ventajas más importantes de los derivados de ácido lipoico de los autores de la presente invención como agentes quimioterapéuticos es su especificidad. Las células con un metabolismo energético apropiadamente alterado o degenerado, es decir una actividad de PDC alterada, son particularmente elegidas como diana y eliminadas, mientras los tejidos sanos circundantes quedan sin dañar por el reactivo de ácido lipoico. El artesano experto puede identificar fácilmente las enfermedades que tienen alterada la actividad de PDC. Alternativamente el artesano experto puede rastrear fácilmente su enfermedad de interés por su sensibilidad a la presente clase de compuestos.

En una método preferido de tratamiento, las presentes composiciones de ácido lipoico se utilizan para la prevención y el tratamiento de cánceres tales como melanoma primario o metastásico, timoma, linfoma, sarcoma, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemias, cáncer de útero, cáncer cervical, cáncer de vejiga, cáncer de riñón, cáncer de colon, y adenocarcinomas tales como cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer pancreático. Una amplia variedad de tipos de tumores, incluyendo los carcinomas cervicales y los cánceres de mama, son sensibles a esta nueva clase de compuestos. Los resultados celulares que muestran la eliminación celular específica del cáncer pueden ser observados, por ejemplo en la Tabla 1, más abajo.

La dosificación preferida del derivado de ácido lipoico, o la composición farmacéutica del mismo, se seleccionan basándose en otros criterios, incluyendo la composición concreta empleada y la edad, el peso, y el estado del individuo. Importantemente, la cantidad de derivado de ácido lipoico utilizada debe ser suficiente para inhibir o eliminar las células tumorales a la vez que deja sustancialmente indemnes las células normales. En general, es deseable proporcionar al paciente una dosificación de derivado de ácido lipoico de la menos aproximadamente 10 \muM, preferiblemente al menos aproximadamente 100 \muM, más preferiblemente al menos aproximadamente 400 \muM, si bien se contempla un intervalo de aproximadamente 10 \muM a aproximadamente 1 mM, por supuesto, se puede administrar una dosis mayor o menor, guiado por los datos in vivo mostrados en los Ejemplos descritos en la presente memoria. Como se ha establecido antes, una variedad de factores clínicos influirán en los intervalos de dosificación preferidos.

Otra realización de la invención hace referencia a un método de tratamiento de una enfermedad sensible a los derivados lipoato que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto lipoato y un segundo reactivo para tratar dicha enfermedad. Este segundo reactivo es preferiblemente un inhibidor del metabolismo de la energía mitocondrial y/o uno que induce la apoptosis. Entre tales reactivos se incluyen los reactivos inhibidores del metabolismo. Muchos de tales reactivos son conocidos en la técnica. Un reactivo particularmente preferido es el dicloroacetato. Este segundo reactivo puede ser administrado sucesivamente, simultáneamente o por separado, con el fin de ampliar la respuesta del paciente a dicho método de tratamiento.

Adaptando los tratamientos descritos aquí, los derivados de ácido lipoico también pueden ser utilizados en métodos para tratar enfermedades distintas del cáncer, en las cuales las células causantes de la enfermedad manifiestan patrones metabólicos alterados. Por ejemplo, los patógenos eucarióticos de los seres humanos y otros animales son generalmente mucho más difíciles de tratar que los patógenos bacterianos debido a que las células eucarióticas son mucho más similares a las células animales que las células bacterianas. Entre tales patógenos eucarióticos se incluyen protozoos tales como los que causan la malaria así como los patógenos fúngicos y alginos. Debido a la notable carencia de toxicidad de los derivados de ácido lipoico de la invención para las células humanas y animales normales y debido a que es probable que muchos patógenos eucarióticos pasen a través de las fases del ciclo celular en las cuales su PDC se vuelve sensible a los miembros de la clase novedosa de derivados lipoato descritos aquí, algunos miembros de la clase novedosa de derivados lipoato descritos en la presente memoria eliminan los PDC bacterianos y por tanto representan una clase fundamentalmente nueva de agentes antibacterianos. Como las bacterias resistentes a los antibióticos tradicionales se están convirtiendo en un problema clínico crecientemente grave, estos compuestos demostrarán tener importancia terapéutica en este contexto.

En otras aplicaciones, los derivados de ácido lipoico de la presente invención se utilizan como agentes de diagnóstico in vitro. Como se ha establecido antes, dependiendo de la célula tumoral específica o del tipo de célula en cuestión, los diferentes derivados de ácido lipoico pueden ser más o menos eficaces al inhibir distintas clases de tumores. Así, por ejemplo, en los casos en los que pueden resultar difíciles la diagnosis o la selección de una estrategia quimioterapéutica apropiada, el análisis de un cultivo de células tumorales in vitro con derivados de ácido lipoico conocidos por dirigirse a tipos de células tumorales específicos proporciona un enfoque alternativo para identificar los tipos de tumores y los tratamientos eficaces.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1

Con el fin de confirmar la existencia de una nueva gran clase de agentes anticancerosos que consta de derivados de ácido lipoico bloqueados y/o inutilizados, se han sintetizado y se han sometido a ensayo numerosos derivados de ácido lipoico nuevos. En este y en los cinco Ejemplos siguientes (1-5), se describen la síntesis, la estructura y la purificación de seis compuestos. Estos compuestos son sometidos a ensayo después en los posteriores Ejemplos (6-13).

Preparación de ácido 6,8-bisacetilmercaptooctanoico (ácido bis-acetil lipoico)

Se preparó ácido 6,8-bisacetilmercaptooctanoico (referido en adelante como ácido bis-acetil lipoico) a partir de ácido lipoico asequible comercialmente utilizando un procedimiento de tres etapas. Estas etapas fueron las siguientes: se redujo primero el ácido lipoico a ácido 6,8-bismercaptooctanoico que después fue acetilado para producir anhídrido 6,8-bisacetil-mercaptooctanoicoacético. Este anhídrido 6,8-bisacetil-mercaptooctanoicoacético fue hidrolizado después selectivamente para producir el ácido 6,8-bisacetilmercaptooctanoico.

Estas etapas se completaron después en detalle como sigue.

Etapa 1: Ácido 6,8-Bismercaptoctanoico: Se suspendió ácido a-lipoico (5,15 g, 25,0 mmoles) en 125 ml de agua y se añadió bicarbonato de sodio (2,10 g, 25,0 mmoles). La mezcla fue sometida a sonicación para generar la sal de sodio. La solución de color amarillo pálido resultante se enfrió en un baño de hielo y se añadió borohidruro de sodio (1,90 g, 50,0 mmoles) con agitación en pequeñas porciones a lo largo de 20 minutos. La solución se agitó a la temperatura de refrigeración con hielo otros 30 minutos, y después a la temperatura ambiente durante 30 minutos. La solución turbia se enfrió en un baño de hielo, y el pH se llevó a aproximadamente 1 mediante la adición lenta de ácido clorhídrico 2M. Se produjo una evolución vigorosa de hidrógeno a medida que el exceso de borohidruro de sodio se descomponía y se separaba un líquido oleoso. Las siguientes operaciones se realizaron en nitrógeno tanto cuanto fuera posible. La mezcla se extrajo con 3 x 50 ml de cloroformo. Los extractos de cloroformo combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida a la temperatura ambiente. El aceite restante se secó adicionalmente a vacío para separar los últimos vestigios de disolvente. El ácido 6,8-bismarcaptooctanoico fue aislado en forma de un aceite incoloro que pesaba 5,2 g (rendimiento 100%). El producto fue almacenado a -20ºC en nitrógeno.

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (CDCl_{3}): 2,89 (multiplete, 1H, S-C-H), 2,67 (multiplete, 2H, S-CH2), 2,34 (t, J=7,1 Hz, 2H, CH2C(O)), 1,4-1,92 (multipletes, 8H, (CH2)2), 1,33 (t, J=8,0 Hz, 1H, S-H), 1,30 (t, J=7,6 Hz, 1H, S-H).

RMN C^{13} (CDCl_{3}): 180, 0, 42, 7, 39, 2, 38, 6, 33, 8, 26,4, 24,2, 22,2.

Etapa 2: Anhídrido 6,8-bisacetilmercaptooctanoico-acético: Se disolvió ácido 6,8-mercaptooctanoico (5,20 g, 25 mmoles) en 125 ml de cloruro de metileno seco en nitrógeno y se añadió trietilamina (8,10 g, 80,0 mmoles, 11,25 ml). La solución se enfrió en un baño de hielo y se añadió cloruro de acetilo (6,30 g, 80,0 mmoles) disuelto en 25 ml de cloruro de metileno con agitación a lo largo de 15 minutos. Durante la adición precipitó cloruro de trietilamonio. La solución permaneció incolora. Se continuó agitando a la temperatura ambiente durante 90 minutos. El volumen se llevó a 300 ml con más cloruro de metileno (todo el sólido disuelto) y la solución se transfirió a un embudo separador. Éste se extrajo rápidamente con 300 ml de ácido cítrico al 10% (el pH de la fase acuosa se verificó tras la extracción para asegurarse de que era ácido). Se extrajo una segunda vez con 200 ml de solución de ácido cítrico, y después se lavó con 200 ml de salmuera semisaturada. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y el cloruro de metileno se evaporó. Quedó un aceite casi incoloro que pesó 8,0 g.

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (CDCl_{3}): 3,49 (multiplete, 1H), 2,7-3,0 (multiplete, 2H), 2,36 (t, 2H, CH2C(O)), 2,27 (s, 3H, CH3), 2,26 (s, 3H, CH3), 2,15 (s, 3H, CH3), 1,3-1,9 (multiplete, 8H).

RMN C^{13} (CDCl_{3}): 195, 4, 195, 2, 168, 9, 166, 3, 43, 2, 34, 8, 34, 5, 34, 2, 30, 6, 30, 4, 26, 3, 25, 7, 23, 7, 22, 0.

IR (tableta de KBr): 1821, 1749, 1691 cm^{-1}.

Etapa 3: Ácido 6,8-bisacetilmercaptooctanoico: El anhídrido de la etapa 2 (8,0 g) se mezcló con 30 ml de agua y 30 ml de 2-propanol y se agitó a 40 durante 4,25 horas. Al cabo de aproximadamente 2 horas había una solución clara. El disolvente se evaporó a vacío (2 mm) a 25. El aceite restante se evaporó con 10 ml de agua para separar cualquier 2-propanol y ácido acético residuales. Se aisló un aceite casi incoloro que pesó 6,8 g.

Purificación: Un ejemplo de purificación es el siguiente. El material de la etapa 3 se mezcló con 5 ml de acetato de etilo-hexano-ácido acético (100:100:1, v/v) añadido para hacerlo más fluido. La solución se aplicó a una columna de 25 x 6,5 cm de Gel de Sílice 60 (aproximadamente 300 g de sílice instantánea) empaquetada en acetato de etilo-hexano-ácido acético (100:100:1, v/v). La columna se hizo eluir con este disolvente. Se recogieron fracciones de 75 ml a aproximadamente 5 ml/min. Se recogió una mezcla aproximadamente 1:1 del producto y una impureza que eluyó ligeramente más rápido en la fracción 13 (0,86 g). Las fracciones 14 (1,92 g) y 15 (1,61 g) contenían el producto con mucha menos impureza. El material puro fue recogido en las fracciones 16-20 (2, 36 g) en forma de un aceite incoloro. Las fracciones 14 y 15 fueron sometidas a cromatografía de nuevo (por separado) en una columna de 25 x 4,5 cm (150 g de Gel de sílice). Se aislaron 1,72 g y 1,55 g de producto bruto respectivamente. El rendimiento global de producto puro fue de 5, 63 g (rendimiento del 77% basándose en el ácido 6,8-bismercaptooctanoico).

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (CDCl_{3}): 3,50 (multiplete, 1H), 2,7-3,0 (multiplete, 2H), 2,27 (t, 2H, CH_{2}C(O)), 2,27 (s, 3H, CH3), 2,26 (s, 3H, CH3), 1,1-1,8 (multiplete, 8H).

RMN C^{13} (CDCl_{3}): 195,67, 195,50, 179,59, 43,34, 34,60, 34,30, 33,71, 30,68, 30,48, 26,40, 26,01, 24,20.

IR (líquido neto): 2935, 1736, 1691, 1423, 1355, 1134, 1118, 953, 744, 630.

TLC R_{f} = 0,40 (acetato de etilo-hexano-ácido acético, 100:100:1, v/v).

Pureza: El análisis indica que el producto final de esta síntesis (ácido bis-acetil lipoico) tiene una pureza de más del 98%. Por otra parte, se produjeron cinco lotes independientes en el transcurso de estos estudios y las propiedades biológicas (resumidas en el Ejemplo 8) de todos los lotes fueron indistinguibles en todos los detalles sometidos a ensayo. La estructura de este compuesto se ilustra más abajo.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2 Preparación de ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico (ácido bisbenzoil lipoico)

En una visión de conjunto, se preparó ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico mediante un procedimiento de tres etapas a partir de un ácido \alpha-lipoico asequible comercialmente. El ácido lipoico fue reducido primero a ácido 6,8-bismercaptooctanoico con borohidruro de sodio en agua en condiciones ligeramente alcalinas. El producto fue benzoilado con tres equivalentes de cloruro de benzoilo en presencia de trietilamina para captar el HCl subproducto para producir anhídrido 6,8-bisbenzoil-mercaptooctanoicobenzoico. El anhídrido fue hidrolizado selectivamente con dioxano/agua para producir ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico sin la hidrólisis no deseada de los grupos éster del benzoiltio. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna sobre Gel de Sílice. El ácido purificado se disolvió en metanol y se convirtió en la sal de sodio mediante la adición lenta de una solución acuosa que contenía un equivalente en moles de bicarbonato de sodio.

Con detalle estas etapas se llevaron a cabo ilustradas por el siguiente ejemplo:

Etapa 1: Se preparó ácido 6,8-bisbenzoil-mercaptooctanoico exactamente como se describe en el Ejemplo 1.

Etapa 2: Anhídrido 6,8-bisbenzoil-mercaptooctanoico-benzoico. Se disolvió ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico (2,03 g, 10 mmoles) en 50 ml de cloruro de metileno seco en nitrógeno y se añadió trietilamina (3,24 g, 32 mmoles, 4,50 ml). Se añadió gota a gota cloruro de benzoilo (4,50 g, 32 mmoles) disuelto en 20 ml de cloruro de metileno con agitación a lo largo de 20 minutos. Cuando se hubo añadido aproximadamente la mitad del cloruro de benzoilo, precipitó cloruro de trietilamonio. La propia solución permaneció incolora. La agitación continuó a 25-27º durante 9 horas. El volumen se llevó a 100 ml con más cloruro de metileno (todo el sólido disuelto) y la solución se transfirió a un embudo separador. Esto se extrajo rápidamente con 2 x 50 ml de ácido cítrico al 10% (el pH de la fase acuosa se verificó después de la extracción para asegurarse de que era ácido), y después se lavó con 50 ml de salmuera saturada. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y el cloruro de metileno se evaporó. Quedó un aceite casi incoloro que pesó aproximadamente 5,48 g.

Etapa 3: Ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico: El anhídrido bruto (5,48 g) se disolvió en 20 ml de dioxano y se añadieron 20 ml de agua. Esto hizo que el material se engrasara. La mezcla se agitó a 40-45º durante 21 horas. El disolvente se evaporó a vacío (2 mm) a 30º. El aceite restante se recogió en 80 ml de cloroformo y se extrajo con 25 ml de ácido cítrico acuoso al 5%. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y el disolvente se evaporó. Se aisló un aceite de color débilmente amarillo que pesó 5,7 g. Los espectros de RMN mostraron que sólo aproximadamente un tercio del anhídrido había sido hidrolizado. Por lo tanto, el material bruto se redisolvió en 20 ml de dioxano y se añadieron 10 ml de agua. La mezcla se agitó a 45º durante 32 horas más. El disolvente se evaporó a vacío. Después de este tratamiento, la hidrólisis del anhídrido fue completa.

Purificación: El producto se mezcló con 2 ml de acetato de etilo y se aplicó a una columna de 25 x 4,5 cm de Gel de Sílice 60 (150 g de sílice instantánea) empaquetada en hexano-acetato de etilo-ácido acético (100:50:1, V/V). La columna se hizo eluir con este disolvente. Se recogieron fracciones de 40 ml a aproximadamente 5 ml/minuto. El material que eluyó más rápido se recogió en las fracciones 10-12 (1,33 g de un sólido de color blanco - - probablemente ácido benzoico). Una pequeña cantidad de este material que eluyó más rápido junto con el producto fue recogida en las fracciones 13-15 (0,66 g). El producto bruto fue recogido en las fracciones 16-21 (1,95 g de un aceite incoloro).

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (CDCl_{3}): 8,0 (multiplete, 4H, ArH), 7,38-7,60 (multiplete, 6H, ArH), 3,89 (multiplete, 1H, CH-S), 3,0-3,3 (multiplete, 2H, CH_{2}S), 2,34 (t, J=7,1 Hz, 2H, CH_{2}C(O)), 1,1-2,2 (multiplete, 8H, -CH_{2}-).

RMN C^{13} (CDCl_{3}): 191, 71, 191, 46, 179, 72, 136, 98, 136,92, 133,29, 128,51, 127,25, 127,14, 43,60, 34,98, 34, 59, 33, 76, 26, 43, 26, 19, 24, 29.

TLC R_{f} = 0,30 (hexano-acetato de etilo-ácido acético, 100:50:1, v/v).

IR (líquido neto): 2937, 1710, 1704, 1662, 1667, 1655, 1448, 1207, 1175, 911, 773, 757, 733, 648, 688 cm^{-1}.

Sal de sodio: La sal de sodio de este derivado es más soluble y más fácil de elaborar. Por lo tanto se prefiere producir generalmente el material en forma de sal como se ilustra mediante el siguiente ejemplo. Se disolvió el ácido (1,95 g, 4,7 mmoles) en 10 ml de metanol, y se añadió una solución de bicarbonato de sodio (0,39 g, 4,7 mmoles) en 10 ml de agua en pequeñas porciones agitando vigorosamente a lo largo de aproximadamente 10 minutos. Al principio el material se engrasó pero una vez completada la adición hubo una solución homogénea incolora. La solución se dejó a la temperatura ambiente otros 10 minutos, después el disolvente se separó a vacío (2 mm) a 20 dejando un sólido gomoso. El sólido se disolvió en 10 ml de metanol y el disolvente se separó por evaporación instantánea a vacío. Esto se repitió una segunda vez. Se produjo un sólido de color blanco espumoso. Este se secó a vacío a P2O5 a la temperatura ambiente durante la noche. Se aislaron 1,60 g de la sal.

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (D_{2}O): 7,8-7,9 (multiplete, 4H, ArH), 7,0-7,4 (multiplete, 6H, ArH), 3,57 (multiplete, 1H, CH-S), 2,9-3,1 (multiplete, 2H, CH_{2}S), 2,06 (t, 2H, CH_{2}C(O)), 1,0-2,1 (multiplete, 8H, -CH_{2}-).

RMN C^{13} (D_{2}O): 193, 49, 193, 11, 183, 39, 137, 10, 137,00, 134,21, 129,21, 127,70, 127,58, 44,69, 38,15, 34, 97, 27, 23, 27, 00, 26, 46.

Pureza: El análisis indicó que las preparaciones de lipoato de bis-benzoilo tenían una pureza de más de 98%. Por otra parte, cada una de las tres preparaciones independientes de este agente mostró propiedades biológicas indistinguibles (véase el Ejemplo 6).

La estructura de este compuesto se ilustra más abajo.

\newpage

Ejemplo 3 Preparación de Ácido 6,8-biscarbamoilmetilmercapto-octanoico. Ácido 6,8-biscarbamoilmetilmercapto-octanoico

Se añadió yodoacetamida (1,11 g, 6,0 mmoles) a una solución de ácido 6, 8-bismercaptooctanoico (0,62 g, 3,0 mmoles) en 30 ml de metanol-agua (9:1, v/v) desgasificada a 0. La solución se agitó en nitrógeno bajo una luz suavizada y se añadió hidróxido de sodio acuoso 1,0 M (9,0 ml, 9,0 mmoles) a lo largo de 3 minutos. La solución transparente se agitó a 0 durante 10 minutos y después a la temperatura ambiente durante 4 horas. El grueso del metanol se evaporó a presión reducida y el volumen se llevó a 25 ml con agua desgasificada. El pH se ajustó a 1 con ácido clorhídrico 2 M. El agua se evaporó a vacío a 25, y el aceite de color amarillo claro restante se sacudió con 2 x 20 ml de acetato de etilo. El material insoluble de acetato de etilo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice utilizando cloroformo-metanol-ácido acético (120:60:1, v/v) como eluyente proporcionando 1,0 g (100%) del ácido 6,8-biscarbamoilmetil-mercaptooctanoico en forma de un sólido de color amarillo pardusco.

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (D_{2}O): 3,44 (s, 2H, -CH_{2}C(O)NH_{2}), 3,43 (s, 2H, -CH_{2}C(O)NH_{2}), 3,00 (m, 1H, -CHS), 2,88 (t, J=7,4 Hz, 2H, CH_{2}S), 2,51 (t, J=7,1 Hz, 2H, -CH_{2}COOH), 1,95 (m, 2H, -CH_{2}-), 1,5-1,8 (m, 6H, -CH_{2}-).

RMN C^{13} (D_{2}O): 180,07, 175,51, 175,24, 46,00, 35,65, 35,09, 34,11, 34,09, 34,03, 30,29, 26,29, 25,13.

TLC R_{f} = 0,35; Gel de Sílice G: cloroformo, metanol, ácido acético, 60:30:1, (v/v).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 4 Preparación de ácido 6,8-bis-[S-(N-metilsuccinimido)]-mercaptooctanoico

Ácido 6,8-Bis-[S-(N-metilsuccinimido)]mercaptooctanoico: Se mezcló ácido 6,8-bismercaptooctanoico (0,62 g, 3,0 mmoles) con bicarbonato de sodio (0,25 g, 3,0 mmoles) disuelto en 25 ml de agua desgasificada y se agitó en nitrógeno a la temperatura ambiente hasta que se produjo una solución transparente. Se añadió N-metilmaleimida (0,67 g, 6,0 mmoles) y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente en nitrógeno durante 3 horas. La solución se filtró para separar un vestigio de material insoluble, después se lavó con 20 ml de cloroformo. El pH de la fase acuosa se ajustó a 1,5 con ácido clorhídrico 2 M y la mezcla se extrajo con 3 x 15 ml de cloroformo. Los extractos de cloroformo se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y el disolvente se evaporó dejando un jarabe incoloro que pesó 1,30 g. La TLC [Gel de Sílice, (cloroformo, metanol, 10:1 (v/v)] mostró numerosas manchas de solapamiento con un Rf = 0,27 como se esperaba para la mezcla de diastereoisómeros posible.

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (CDCl_{3}): 3,72 (m, 2H), 2,7-3,3 (m, 5H), 2,93 (s, 6H, CH3), 2,25-2,55 (m, 4H), 2,0-1,35 (m, 8H).

RMN C^{13} (CDCl_{3}): 178,73, 176,81, 176,77, 176,65, 176,62, 176,54, 176,50, 174,75, 174,69, 45,22, 44,78, 44,57, 39,11, 38,96, 38,90, 38,77, 38,59, 38,51, 38,00, 37,68, 36,35, 36,30, 36,24, 35,87, 35,85, 35,78, 34,49, 34,34, 33,96, 33,79, 33,67, 33,52, 29,08, 28,70, 28,66, 28,45, 25,92, 25,86, 25,58, 25,45, 25,02, 24,98, 24,21, 24,14.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5 Preparación de 6,8-dihidroxioctanoato de sodio

6,8-Dihidroxioctanoato de sodio: Se disolvió 6,8-dihidroxioctanoato de metilo (0,15 g, 0,80 mmoles; conteniendo aproximadamente un 10% del isómero 6,7) en 3 ml de metanol y se añadió hidróxido de sodio en metanol 1,00 M (0,80 ml, 0,80 mmoles). La solución se agitó a reflujo durante 3 horas. El disolvente se evaporó a vacío rindiendo 0,15 g de 6,8-dihidroxioctanoato de sodio en forma de un polvo de color blanco. El rendimiento fue cuantitativo.

El análisis produjo los siguientes resultados: RMN H^{1} (D_{2}O): 3,74 (m, 1H, -CHOH-), 3,70 (t, J=6,6 Hz, 2H, -CH_{2}OH), 2,19 (t, J=7, 2 Hz, 2H, -CH_{2}COOH), 1,2-1,9 (m, 8H, -CH_{2}-).

RMN C^{13} (D_{2}O): 184, 47, 69, 25, 59, 42, 39, 01, 38, 21, 36, 77, 26, 47, 25, 32.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 6

Los Ejemplos 7-10 describen los resultados de los sistemas de células cultivadas que demuestran las propiedades y la eficacia de los compuestos derivados de ácido lipoico que son el objeto de esta invención. En la Tabla 1 de más abajo se resumen todos los resultados encontrados en los Ejemplos 7-10 de una forma abreviada y tabular.

En una visión de conjunto, todos los Ejemplos en los que se utilizaban derivados de ácido lipoico sobre las células en cultivo de tejidos mostraron que los derivados de ácido lipoico tenían la capacidad de eliminar las células tumorales, mientras dejaban las células no cancerosas, normales, con contacto inhibido indemnes en los intervalos de dosificación apropiados.

Segundo, cada tipo de célula cancerosa sometido a ensayo fue eliminado por uno o más miembros de la familia de derivados de ácido lipoico bloqueados. Esto indicó que estos agentes tienen una amplia gama de aplicaciones clínicas potenciales, incluyendo muchos o la mayor parte de los cánceres humanos.

Tercero, los diferentes compuestos derivados de ácido lipoico tenían características químicas algo diferentes incluyendo, por ejemplo, solubilidad en entornos polares y no polares, con los correspondientes efectos sobre cómo cruzaban eficazmente los diferentes derivados la membrana celular y entraban en la célula. Por otra parte, los derivados de ácido lipoico tenían diferentes tasas de utilización por las enzimas celulares que normalmente rige el propio ácido lipoico. Dadas estas propiedades, se observó que los diferentes derivados de ácido lipoico tenían potencias anticancerosas algo diferentes. Algunos derivados tenían potencias muy elevadas, mientras otros tenían potencias más bajas, pero todavía potencialmente útiles.

Cuarto, debido a que los diferentes tipos de células tumorales tenían diferentes propiedades fisiológicas, estas propiedades podían ejercer efectos indirectos tanto sobre la absorción y la incorporación de derivados de ácido lipoico, como sobre los efectos tóxicos de esta incorporación. Así, se descubrió que los diferentes tipos de células cancerosas mostraban niveles significativamente diferentes de sensibilidad. La sensibilidad de las diferentes células cancerosas oscilaba entre los tipos de células cancerosas relativamente sensibles que eran eliminadas por todos los tipos de derivados de ácido lipoico sometidos a ensayo, a los tipos de células cancerosas relativamente resistentes que sólo eran eliminadas eficazmente por compuestos derivados de ácido lipoico más potentes.

A pesar de estas diferencias de potencia, es importante observar que los derivados de ácido lipoico comparten propiedades comunes descritas en los Ejemplos de más abajo.

3

\newpage

Tabla 1: Se resumen las respuestas de las células en cultivo a la eliminación por miembros ejemplares de la familia de los derivados lipoato bloqueados que son el objeto de esta invención así como un compuesto de control (ácido dihidroxioctanoico). A la derecha se indica la línea celular específica seguido del tejido de origen de la línea celular. A lo largo del encabezamiento se enumeran los compuestos específicos sometidos a ensayo. Cada derivado lipoato bloqueado fue utilizado de dos a cuatro veces por encima de la concentración de eliminación umbral. [Estas concentraciones oscilan de 0,15 mM (60 \mug/ml o 60 mg/kg) a 2,5 mM (800 \mug/ml u 800 mg/kg) (ver el Ejemplo 9)]. Se sometió a ensayo el ácido dihidroxioctanoico hasta concentraciones 5 mM (3200 \mug/ml o 3200 mg/kg) sin un efecto detectable. "+" indica que las células eran eliminadas por el tratamiento, mientras "-" indica que no. "+/-" indica una escasa respuesta marginal observada sólo en unos pocos casos especiales con fibroblastos transformados experimentalmente mediante la introducción del oncogen ras (Ejemplo 8).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 7

Este Ejemplo proporciona la evidencia de que los derivados de ácido lipoico de esta invención eliminan las células cancerosas con una elevada especificidad. Más específicamente, se describe el uso de los derivados de ácido lipoico en sistemas celulares cultivados. Los resultados muestran que los derivados lipoato eliminaban las células cancerosas (transformadas) eficazmente en condiciones en las que las células normales no cancerosas (no transformadas) no resultaban aparentemente afectadas. Los datos resumidos en la Tabla 1 del Ejemplo 6 fueron generados utilizando el siguiente procedimiento:

Primero, se cultivó en placa cada uno de los tipos celulares que iban a ser sometidos a ensayo a bajas densidades en los pocillos de una placa de cultivo de tejidos de 6 X 24 pocillos normalizada. (Se sembraron múltiples pocillos para cada tipo celular).

Segundo, se dejó que las células crecieran a densidades moderadas. Las células transformadas están en contacto y las células no transformadas tienen el contacto inhibido en estas condiciones.

Tercero, los derivados lipoato que se iban a someter a ensayo fueron añadidos a pocillos individuales. En estos experimentos se añadió cada compuesto dos a cuatro veces por encima de la concentración de eliminación umbral para las células cancerosas. (Ejemplo 9).

Cuarto, las células fueron controladas a lo largo de los días siguientes.

\vskip1.000000\baselineskip

Para todos los derivados lipoato bloqueados sometidos a ensayo, se encontró que cada tipo de célula cancerosa sensible era eliminada eficazmente, mientras que cada uno de los cuatro tipos de células no cancerosas, normales sometidos a ensayo no resultaba afectado.

La Figura 1 muestra los resultados de los experimentos en los que se utilizan derivados de ácido lipoico para eliminar selectivamente numerosos tipos de células tumorales.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 8

En este ejemplo, se presenta el sistema de cultivo celular bien desarrollado, NIH 3T3 para someter a ensayo los derivados de ácido lipoico de esta invención. Las células NIH 3T3 son células no cancerosas, relativamente normales. Sin embargo, si un alelo activado del oncogen ras es introducido en estas células se vuelven muy malignas (cancerosas) como se evalúa mediante diversos análisis (Referencia).

Utilizando el procedimiento descrito en el Ejemplo 7, se comparó la sensibilidad a los derivados de ácido lipoico de las células NIH3T3 parentales y del derivado de estas células T24 transformadas con ras. Se encontró que los derivados lipoato bloqueados más potentes (ver la Tabla 1, Ejemplo 6) eliminaban las células transformadas muy eficazmente, a la vez que dejaban sin afectar las células parentales no transformadas. Los resultados se muestran en la Figura 2.

Así, estos resultados proporcionan una evidencia adicional de que los derivados lipoato bloqueados eliminan las células cancerosas con una elevada especificidad.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 9

Este ejemplo revisa algunas de las propiedades compartidas por los derivados de ácido lipoico de la invención.

Primero, cada compuesto eliminaron células cancerosas en cultivo a intervalos de concentración específicos, relativamente estrechos, o por encima de ellos, pero no por debajo. Las concentraciones umbral dadas más abajo representan el centro aproximado de este intervalo que se extiende groseramente de dos a tres veces. Este perfil de eliminación indicó que estos compuestos saturaban uno o más procedimientos celulares o dianas para producir la eliminación. Por debajo de estos intervalos de saturación, las células sensibles sobrevivieron y crecieron. Podían ser separadas y re-cultivadas en placa para crecer, aparentemente, de manera indefinida, en estas condiciones. En contraste, por encima de estos intervalos de concentración específicos del agente de ácido lipoico, el crecimiento celular se detuvo y siguó la muerte celular. Este fue un perfil de dosis/respuesta muy inusual. Las concentraciones de eliminación umbral (intervalos) variaron entre los compuestos individuales. Entre los ejemplos de estas concentraciones de eliminación umbral estaban las siguientes: lipoato de bis-benzoilo (Ejemplo 2) 60 mg/litro (60 mg/kg); lipoato de bis-acetilo (Ejemplo 1) 600 mg/litro (600 mg/kg).

Segundo, cada derivado de ácido lipoico sometido a ensayo produjo cambios morfológicos específicos en las células diana sensibles a lo largo de todo el período entre las 12-24 horas iniciales del tratamiento. Entre estos cambios se incluyeron cierto redondeo, así como la frecuente formación de pares de células unidas por estructuras similares a puentes reminiscentes de una citocinesis detenida. Estos cambios estaban seguidos por último de muerte celular si continuaba el tratamiento. No obstante, estos cambios morfológicos revertieron, y las células se recuperaron, si el derivado lipoato se separaba durante esta exposición inicial. Como con el perfil dosis/respuesta del párrafo anterior, esta inducción reversible del cambio morfológico seguida del paso a la muerte celular es altamente idiosincrásico. El descubrimiento de que este comportamiento era mostrado por todos los miembros sometidos a ensayo de los compuestos que son objeto de esta invención fue, de nuevo, una muy fuerte evidencia de que estos compuestos son, en efecto, una clase funcionalmente coherente.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 10

Este ejemplo proporciona la evidencia de que los derivados de ácido lipoico que son el objeto de esta invención eliminan las células cancerosas induciendo la apoptosis (muerte celular programada). Importantemente, todos los miembros sometidos a ensayo tenían esta propiedad. Esto representó una fuerte prueba adicional (ver también los Ejemplos 6, 7 y 9) de que estos compuestos funcionaban de la misma manera. En efecto, estos compuestos aparentemente inducían a las células cancerosas a "cometer un suicidio". Adicionalmente, la inducción de la apoptosis, en lugar de la necrosis, es una propiedad beneficiosa para el uso clínico de estos compuestos. En condiciones apoptóticas, el "suicidio" de las células cancerosas es menos destructivo que la necrosis de las células normales circundantes.

Con el fin de comprender el experimento descrito en este Ejemplo es necesario revisar los detalles concernientes al análisis especifico utilizado en los experimentos. El ADN nuclear de estas células está normalmente presente en moléculas muy largas que constituyen cromosomas. Estas moléculas poliméricas muy largas tienen extremos libres sólo muy raramente. En contraste, tras la inducción de la apoptosis la célula comienza a destruirse a sí misma y, en el proceso, introduce un número extremadamente grande de roturas en su ADN en el proceso de reducirlo a sus pequeños constituyentes monoméricos. La enzima apropiada - transferasa terminal - añadirá nucleótidos a los extremos libres de las moléculas de ADN. Por otra parte, esta enzima utilizará monómeros (nucleótidos) para esta reacción de adición que tienen grupos muy fluorescentes añadidos a ellos. Así, si se exponen los núcleos de las células normales - con pocos extremos de ADN libres - a la transferasa terminal y a los monómeros fluorescentes, se añade a estos núcleos muy poca fluorescencia. En contraste, cuando estos componentes se añaden a los núcleos de las células que experimentan apoptosis y se añaden números muy elevados de monómeros fluorescentes - a los muchísimos extremos de ADN que están presentes - dan como resultado una introducción masiva de fluorescencia. El análisis convencional basado en estas propiedades es referido mediante el acrónimo TUNEL.

Lo siguiente es un ejemplo de los experimentos que demuestran que los derivados lipoato que son los objetos de esta invención inducen apoptosis. Se cultivaron en placa células cancerosas HeLa en numerosos pocillos de una placa para el cultivo de tejidos. Algunos pocillos (experimentales) fueron tratados con el derivado lipoato de bis-benzoilo (Ejemplo 2) a una concentración de aproximadamente dos veces superior a la concentración de eliminación umbral (Ejemplo 9) mientras los otros pocillos (controles) se dejaron sin tratar. Al cabo de aproximadamente 20 horas las células tratadas (experimentales) habían comenzado a experimentar muerte. Las células experimentales y de control fueron fijadas, permeabilizadas y expuestas después a transferasa terminal y monómeros fluorescentes (nucleótidos). Este análisis demuestra que el subgrupo de células cancerosas que mueren activamente en el momento del análisis muestran la señal fluorescente TUNEL esperada de las células que experimentaban apoptosis. Esto indica que todos los miembros sometidos a ensayo de los compuestos de ácido lipoico que son objeto de esta invención inducen la apoptosis en las células cancerosas.

Los resultados del experimento anterior se muestran en la Figura 3.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 11

Esta sección revisa la toxicología en ratón de los derivados de ácido lipoico de esta invención. Una cuestión clave en la evaluación de la utilidad clínica práctica de los agentes anti-cancerosos novedosos es su toxicidad para los seres humanos y animales en los cuales van a ser utilizados. Para ser muy útiles, tales agentes deben ser relativamente inocuos para el anfitrión humano o animal en las condiciones en las cuales eliminan o inhiben eficazmente las células cancerosas. Los miembros de la familia de los derivados lipoato bloqueados muestran esta propiedad esencial, deseable como se indica mediante las siguientes observaciones.

\newpage

Durante muchos años se ha reconocido que incluso las moléculas biogénicas, que aparecen normalmente son tóxicas si se administran a dosis suficientemente elevadas. El ácido lipoico no es aparentemente una excepción. A dosis suficientes acabarían con un ratón. Los autores de la presente invención harán referencia a esta eliminación en lo sucesivo como toxicidad no específica. Los miembros sometidos a ensayo de la clase novedosa de compuestos de los autores de la presente invención tienen toxicidades no específicas inferiores a la del ácido lipoico normal. Por otra parte, los miembros de esta clase con la mayor potencia sometidos a ensayo frente a tumores en cultivo celular tienen las toxicidades no específicas más bajas.

Como resultado, los miembros más potentes de esta clase de compuestos pueden ser inyectados a los animales a dosis muchas veces superiores a las que se espera que sean suficientes para eliminar células tumorales en sistemas de células cultivadas, sin una toxicidad perceptible para el animal.

Colectivamente, estos resultados indican que los miembros de esta clase de agentes pueden ser administrados a ratones y seres humanos a dosis que exceden bastante de las requeridas para el tratamiento de tumores, sin efectos secundarios significativos.

Los detalles relevantes de estos estudios son los siguientes:

Primero, el propio ácido lipoico (mezcla racémica D,L) tiene una LD-50 de aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal en ratones. (Todos los estudios descritos en esta sección se llevaron a cabo mediante inyección intraperitoneal (IP) en ratones C57/BL).

Segundo, se encontró que la toxicidad no específica en el derivado de ácido bis-acil lipoico producía una DL-50 de aproximadamente 500 mg/kg con una dosis máxima bien tolerada de aproximadamente 200 mg/kg. Obsérvese, asimismo, que ésta es una toxicidad no específica significativamente menor que la del lipoato normal. [Obsérvese que la toxicidad no específica de éste y todos los demás compuestos sometidos a ensayo era aguda - la muerte del animal se produce en minutos tras la inyección IP. Esto, por lo tanto, parece no estar relacionado con la muerte celular que se produce a lo largo de un período de días en las células cancerosas tratadas en cultivo con los derivados lipoato bloqueados (Véanse, Ejemplos 6-10).

Tercero, el derivado de ácido bis-bencil lipoico tenía una DL-50 de aproximadamente 1.000 mg/kg de peso corporal con una dosis máxima bien tolerada de aproximadamente 500 mg/kg. Esta era una toxicidad significativamente más baja que la del lipoato de bis-acetilo (anterior) y mucho más baja que la del lipoato normal.

Cuarto, basándose en estos resultados se realizaron los siguientes cálculos: La masa animal total era de aproximadamente un 70% de agua. Esta estaba distribuida como sigue. Aproximadamente 50% de la masa de un adulto era agua intracelular, aproximadamente 15% de la masa total era fluido extracelular diferente de la sangre (referido generalmente como "fluido intersticial") y aproximadamente 5% de la masa total era sangre. Esto condujo a la siguiente secuencia proyectada. Aproximadamente 500 mg/kg de este derivado de bis-benzoilo fueron inyectados en la cavidad peritoneal de un ratón. Esta sustancia fue recogida muy rápidamente en la sangre. La dosis eficaz del derivado de bis-benzoilo en el cultivo celular fue de 60 \mug/ml o 60 mg/kg (véanse, Ejemplos 6 y 9). Se esperaba que esta inyección IP se equilibrara rápidamente con la sangre, produciendo concentraciones que se aproximaron transitoriamente a 10.000 mg/kg o aproximadamente 167 veces la concentración eficaz de este agente en sangre. Adicionalmente se esperaba que ésta se equilibrara con el fluido intersticial produciendo concentraciones que se aproximaron a 2.500 mg/kg o aproximadamente 42 veces la concentración eficaz en este fluido. Después esta se equilibró con los fluidos corporales totales para producir concentraciones que se aproximaron a 715 mg/kg o aproximadamente 12 veces la dosis eficaz en los fluidos corporales totales.

\vskip1.000000\baselineskip

En resumen, estos resultados tienen dos implicaciones clave. Primero, indican que se podrían alcanzar fácilmente concentraciones eficaces de los miembros más potentes de esta clase de agentes - incluyendo lipoato de bis-benzoilo - que se esperaba que fueran suficientes para eliminar las células cancerosas del animal mientras por otra parte dejaban el resto del animal aparentemente sin afectar. Esta combinación de baja toxicidad no específica y elevada toxicidad específica para las células tumorales fue sorprendente e indicó que esta clase de agentes tenía un elevado potencial clínico. Segundo, las propiedades relativas de los miembros de bis-acetilo y bis-benzoilo de la familia de derivados de ácido lipoico ilustraron este punto. Ambos derivados tenían una actividad anti-cancerosa específica que el lipoato normal no tenía, a la vez que tenían simultáneamente niveles inferiores de toxicidad no específica. Adicionalmente, se observó una relación similar entre los derivados lipoato bloqueados como sigue. El lipoato de bis-benzoilo tenía simultáneamente una toxicidad no específica inferior y una potencia anticancerosa muy superior a la del derivado de bis-acetilo. Este, y similares resultados demostraron claramente que la actividad anticancerosa y la toxicidad no específica varían independientemente.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 12

Los descubrimientos descritos antes indican que se pueden eliminar células cancerosas sin dañar al ser humano o al animal en tratamiento utilizando los miembros de la clase novedosa de compuestos que son los objetos de esta invención (véanse, especialmente, Ejemplos 6 y 11). En este ejemplo, los resultados de estudios en ratones apoyan esta expectativa. Los resultados relevantes son los siguientes.

Se introdujo la cepa de melanoma B-16 subcutáneamente o intraperitonealmente en individuos de la cepa de ratones singeneicos C57/BL (7). Cuando se dejaban sin tratar tales ratones desarrollaban tumores masivos en el área inmediata de la inyección así como metástasis secundarias en todo el animal - incluyendo el hígado y los pulmones. Estos desarrollos malignos dieron como resultado la muerte temprana de los animales. Por otra parte, los desarrollos malignos resultantes están constituidos por melanocitos malignos oscuramente pigmentados - haciendo su evaluación conveniente y altamente fiable. Los autores de la presente invención se referirán a esto en lo sucesivo como "sistema B-16".

Utilizando el sistema B-16 los autores de la presente invención han utilizado los miembros lipoato de bis-benzoilo y de bis-acetilo para demostrar que los miembros de la clase novedosa de compuestos que son objeto de esta invención tienen la eficacia anticancerosa esperada basándose en los descubrimientos descritos en los Ejemplos precedentes. Los resultados relevantes son los siguientes.

Primero, se inyectaron IP células B-16 a un grupo de ratones. El grupo al que se había inyectado se dividió al azar en dos subgrupos iguales. A un subgrupo (experimental) se le inyectaron IP dos veces al día 100 mg/kg del miembro de la clase de compuestos lipoato de bis-benzoilo en 200 \mul de etanol al 10% [Véanse los Ejemplos 2, 6 y 9 para las descripciones del lipoato de bis-benzoilo]. Al segundo subgrupo (control) se le inyectaron 200 \mul de etanol al 10% solo.

Al cabo de 16 días, se examinaron los animales - incluyendo la disección cuando fuera apropiado. Los animales de control tenían numerosas masas de tumores IP masivos. En contraste, los correspondientes animales experimentales tenían un número y una masa sustancialmente reducidos - tanto como una masa menor del 30-50% que la muestra de control.

Segundo, se inyectaron en un lugar subcutáneo células B-16 en un grupo de animales. Al cabo de 6-8 días, se observaron tumores grandes, esféricos, fácilmente palpables (aproximadamente 3-5 mm de diámetro) en el lugar de la inyección de células inicial. En este momento, en un grupo de animales (experimentales) se inició una serie de inyecciones dos veces al día del derivado lipoato de bis-acetilo (100 mg/kg en 100 \mul de solución salina isotónica) y en un segundo grupo (controles) las correspondientes inyecciones de disolvente salino solo. [Véanse los Ejemplos 1, 6 y 9 para los detalles del derivado lipoato de bis-acetilo]. En los animales experimentales - pero no en los controles - los autores de la presente invención observaron comúnmente un ablandamiento palpable y una licuefacción aparentemente parcial de la masa tumoral seguido de una estabilización o una reducción del tamaño. Esto indica que el derivado bis-acetilado está produciendo una muerte celular significativa en estos tumores en estas circunstancias.

Tercero, en numerosos animales se produjeron tumores subcutáneos como en el párrafo anterior. Una vez que los tumores hubieron crecido hasta ser visibles, de tamaño palpable, estos animales recibieron una dosis dos veces al día IP (sistémica) de 50 mg/kg de lipoato de bis-benzoilo así como una inyección directa dos veces al día con una segunda dosis del mismo volumen directamente en la masa tumoral. Estos animales mostraron aparentemente una respuesta especialmente robusta, incluyendo un caso en el cual la masa tumoral disminuía espectacularmente y desaparecía en gran parte o totalmente en el transcurso del tratamiento.

En resumen, estos resultados indican claramente que los derivados lipoato de bis-benzoilo y de bis-acetilo tienen la eficacia y la especificidad anticancerosa esperadas en el animal intacto. Basándose en estos resultados, los expertos en la técnica podrían ajustar las dosis y los regímenes de dosificación para producir el control parcial o completo y/o la eliminación de estos tumores en estos animales.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 13

Un probable mecanismo de acción de los derivados lipoato bloqueados que son el objeto de esta invención es que inhiben el PDC específicamente en las células cancerosas dando como resultado la pérdida de polarización de la membrana mitocondrial y la consiguiente inducción de la apoptosis en las células cancerosas. Se espera que los derivados lipoato bloqueados puedan interaccionar sinérgicamente con otros agentes que inhiben el metabolismo energético mitocondrial y/o inducen la apoptosis de alguna otra manera.

Esto fue sometido a ensayo en este Ejemplo con dicloroacetato (abreviado en lo sucesivo como DCA) (8). Este compuesto es un análogo de piruvato. Como tal, se espera que uno de sus efectos sea la inhibición competitiva del PDC. Se encontró que este compuesto interacciona sinérgicamente con los derivados lipoato bloqueados como cabría esperar. Una observación experimental relevante es la siguiente.

Se cultivaron en placa células HeLa a densidades moderadas y se dejó que se anclaran y crecieran durante aproximadamente 24 horas en una serie de pocillos de placas de cultivo de múltiples pocillos. A los pocillos individuales del primer subgrupo (control) se les añadieron lipoato de bis-acetilo o lipoato de bis-benzoilo - cada uno a una dosis aproximadamente el doble que la dosis de eliminación umbral (Ejemplo 9). A un subgrupo equivalente (experimental) de pocillos se les añadieron estos mismos compuestos a la misma dosis junto con la adición simultánea de DCA a una concentración final 5 mM. Los autores de la presente invención encontraron que las células del subgrupo experimental fueron eliminadas aproximadamente dos veces más rápido que en el subgrupo de control.

Este era un efecto sorprendente. A las 24 horas del tratamiento el grupo experimental estuvo casi completamente eliminado, mientras no se observó un nivel similar de eliminación casi completa hasta aproximadamente las 48 horas en el subgrupo de control.

Basándose en las observaciones experimentales de esta clase, es probable que estos derivados lipoato de esta invención interaccionen sinérgicamente con otros inhibidores metabólicos y/u otros agentes quimioterapéuticos para eliminar las células cancerosas más eficazmente. De hecho, una aplicación clínica eficaz de los compuestos novedosos que son objeto de esta invención puede ser junto con otros agentes.

Referencias

(1) Baggetto, L.G. 1992. Deviant energetic metabolism of glycolytic cancer cells. Biochemie 74:959-974.

(2) Garrett, R.H. and Grisham, C.M. 1995. Biochemistry. New York: Saunders College Publishing.

(3) Dvorak, H.F. 1986. Tumors: wounds that do not heal. Similarities between tumor stroma generation and wound healing. New England Journal of Medicine 315: 1650-1659.

(4) Whalen, G.F. 1990. Solid tumors and wounds: transformed cells misunderstood as injured tissue? Lancet 136:1489-1492.

(5) Patel, M.S. and Roche, T.E. 1990. Molecular biology and biochemistry of pyruvate dehidrogenase complexes. FASEB Journal 4:3224-3233.

(6) Johnson, L.V. y col. 1980. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 77:990-994.

(7) Fidler, I.J., Gersten, D.M. and Budman, M.B. 1976. Characterization in vivo and in vitro of tumor cells selected for resistance to syngeneic lymphocyte-mediated toxicity. Cancer Res. 36:3160-3165.

(8) Stacpoole, P.W., Henderson, G.N., Yan, Z., Cornett, R. and James, M.O. 1998. Pharmacokinetics, metabolism and toxicology of dichloroacetate. Drug Metabolism Reviews. 30:499-539.

(9) Hill, S.A., Wilson, S., Chamber, A.F. 1988. Clonal heterogeneity, experimental metastasic ability, y p21 expression en H-ras-transformed NIH 3T3 cells. J. Nat'l Cancer Inst. 80:484-90.

Claims (15)

1. Una sal fisiológicamente aceptable de un compuesto de fórmula:

4

donde:

x es 0-16

R_{1} y R_{2} son independientemente acilo CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C(=O)-; alquilo C_{n}H_{2n+1}; alqueno C_{m}H_{2m}; alquino C_{m}H_{2m-2}; aromático; aroílo; sulfuro de alquilo CH_{3}(CH_{2})_{t}-S-; éster tiocarbámico CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C=NH-; o semitioacetal CH_{3}CH(OH)-S-; donde n es 1-10; m es 2-10 y t es 0-9 para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades.

2. El compuesto de la reivindicación 1, donde R_{1} y R_{2} son grupos acetilo.

3. El compuesto de la reivindicación 1, donde el grupo aromático es benceno o un derivado de benceno.

4. El compuesto de la reivindicación 1, donde R_{1} y R_{2} son grupos benzoilo.

5. El compuesto de la reivindicación 4, donde x es 4.

6. El compuesto de la reivindicación 1, donde el grupo alqueno se selecciona del grupo formado por propileno, 2,3-dimetil-2-buteno y hepteno.

7. El compuesto de la reivindicación 1, donde el alquino se selecciona del grupo formado por acetileno, propino y octino.

8. El compuesto de la reivindicación 1, donde el grupo alquilo es ciclopropano.

9. El compuesto de la reivindicación 1, donde el grupo alqueno es ciclopenteno.

10. Un compuesto según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9.

11. El uso de una cantidad terapéutica de compuesto de ácido lipoico según se refiere en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o la prevención en un paciente de una enfermedad caracterizada por una sensibilidad a derivados de ácido lipoico.

12. El uso de la reivindicación 11, donde dicha enfermedad comprende una enfermedad neoplásica.

13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según se ha referido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y un portador farmacéuticamente aceptable.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13, que comprende adicionalmente un segundo reactivo.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 14, donde el segundo reactivo es dicloroacetato.