ES2225837T3

ES2225837T3 - 2,3-diaril-1-benzopiranos para el tratamiento de dermatitis.

Info

Publication number: ES2225837T3
Application number: ES95905361T
Authority: ES
Inventors: Virender M. Labroo; James R. Piggott
Original assignee: Zymogenetics Inc
Current assignee: Zymogenetics Inc
Priority date: 1993-12-30
Filing date: 1994-12-14
Publication date: 2005-03-16
Anticipated expiration: 2014-12-14
Also published as: US5416098A; US5583143A; US5552413A; AU1400895A; WO1995017891A1; DE69434002T2; DE69434002D1; JP3033845B2; EP0737068B1; CA2180177A1; JPH09507845A; EP0737068A1; ATE275953T1

Abstract

SE PRESENTAN METODOS Y COMPOSICIONES FARMACEUTICAS PARA EL TRATAMIENTO DE LA DERMATITIS. LOS 2, 3-DIARIL-1-BENZOPIRANOS Y SUS SALES FARMACOLOGICAMENTE ACEPTABLES SE FORMULAN MEDICAMENTOS, INCLUYENDO MEDICAMENTOS ORALES Y TOPICOS QUE SE ADMINISTRAN A UN PACIENTE QUE SUFRA DE DERMATITIS. LOS METODOS Y LAS COMPOSICIONES SON PARTICULARMENTE UTILES EN EL TRATAMIENTO DE CONDICIONES CARACTERIZADAS POR LA HIPERPROLIFERACION DE QUERATINOCITOS, TALES COMO LA PSORIASIS.

Description

2,3-diaril-1-benzopiranos para el tratamiento de dermatitis.

La dermatitis engloba una serie de afecciones caracterizadas por lesiones cutáneas rojizas que pueden evolucionar hasta placas descamativas, engrosadas. Estas lesiones pueden aparecer a partir de varias causas primarias, incluyendo el contacto con alergenos, la luz ultravioleta o productos químicos, fármacos administrados por vía sistémica o traumatismos localizados (irritación). Se desconocen las causas de determinadas formas de dermatitis.

La dermatitis eccematosa se refiere a un grupo de afecciones caracterizadas, en las fases iniciales, por placas edematosas, supurativas que a menudo contienen ampollas. Estas lesiones tienden a infectarse por bacterias. El líquido se filtra en los espacios intercelulares en la epidermis, dándole un aspecto esponjoso. Con el tiempo, la supuración disminuye y las lesiones se vuelven descamativas a medida que la epidermis se engrosa (hiperplasia epidérmica).

Las formas crónicas de dermatitis resultan particularmente interesantes, incluyendo la psoriasis y las fases crónicas de la dermatitis eccematosa. La psoriasis se caracteriza por placas redondas, gruesas, secas, rojizas cubiertas con escamas plateadas. La psoriasis puede aparecer de forma localizada o generalizada, y en este último caso, puede llegar a resultar potencialmente mortal. Las lesiones psoriásicas muestran una destacada hiperplasia epidérmica e hiperproliferación de queratinocitos. Se cree que la etiología de la psoriasis incluye componentes hereditarios y autoinmunes. Las lesiones crónicas de dermatitis eccematosa son clínica e histológicamente similares a las placas psoriásicas.

La proliferación celular (por ejemplo, la proliferación de queratinocitos) viene regulada, en parte, por los niveles de calcio intracelular. Los cambios en las concentraciones de calcio intracelular influyen en la fosforilación de las proteínas, por tanto influyen en la proliferación y en otros procesos celulares. Una de las moléculas que media el efecto de los niveles de calcio intracelular sobre la fosforilación de las proteínas es la calmodulina, un cofactor proteico para la proteína cinasa C.

La psoriasis se trata mediante la aplicación de corticosteroides, pomadas de alquitrán de carbón, o antralina. Dichos tratamientos sólo resultan eficaces parcialmente y simplemente pueden contener el trastorno, no revertirla. La antralina puede producir irritación y no se ha establecido su seguridad en niños y mujeres embarazadas. Los corticosteroides presentan varios efectos secundarios no deseables, incluyendo edema y desequilibrios minerales. Generalmente, los agentes antiinflamatorios no esteroides no resultan eficaces.

Se ha demostrado que determinados 2,3-diaril-1-benzopiranos sustituidos presentan actividad antiestrogénica con poca o nula estrogenicidad, y se ha propuesto su uso en el tratamiento del cáncer de mama. Véase Kapil et al., patente US nº 5.254.568; Saeed et al., J.Med.Chem. 33:3210-3216, 1990; Sharma et al., J. Med. Chem. 33:3222-3229, 1990; y Sharma et al., J. Med. Chem. 33:3216-3222, 1990. No se ha demostrado anteriormente que estos compuestos dispongan de propiedades antiinflamatorias o que resulten eficaces contra la dermatitis.

Sigue existiendo la necesidad en la técnica de tratamientos para la dermatitis que resulten eficaces y carezcan de efectos secundarios graves. La presente invención considera esta necesidad y proporciona otras ventajas relacionadas.

En un aspecto, la presente invención proporciona el uso de compuestos de la fórmula I:

1

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que cada uno de R1 y R2 consiste individualmente en H, OH, alcoxilo C_{1}-C_{17} de cadena lineal o ramificada, aciloxilo C_{2}-C_{18} de cadena lineal o ramificada o alcoxicarbonilo C_{2}-C_{18} de cadena lineal o ramificada; y R3 es

2

en el que cada uno de R4 y R5 consiste individualmente en un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que comprende de uno a 18 átomos de carbono, o junto con N, R4 y R5 forman un anillo de tres a 10 miembros, y n es un número entero de 1 a 6, en la fabricación de un medicamento para tratar la dermatitis o para inhibir la proliferación de queratinocitos o para inhibir la actividad de la calmodulina.

El compuesto es preferiblemente

3

Preferiblemente, cada uno de R1 y R2 consiste individualmente en H, OH o alcoxilo C_{1}-C_{4}, más preferiblemente R1 es H u OH y/o R2 es H u OH.

Preferiblemente, cada uno de R4 y R5 consiste individualmente en metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o terc-butilo; o junto con N, R4 y R5 forman un anillo de cinco o seis miembros.

Preferiblemente, R3 es

4

Preferiblemente, dicha dermatitis es psoriasis o dermatitis eccematosa, más preferiblemente dicha afección es dermatitis atópica, dermatitis fotoeccematosa, dermatitis irritativa primaria o dermatitis de contacto alérgica.

Preferiblemente, dicha composición está en una forma adecuada para la administración tópica.

Por tanto, la presente invención permite el tratamiento de la dermatitis eccematosa que comprende administrar a un paciente que sufre dermatitis eccematosa una cantidad eficaz de una composición que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también permite el tratamiento de la psoriasis que comprende administrar a un paciente una composición que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se ha descrito anteriormente.

La presente invención también permite la inhibición de la proliferación de queratinocitos en un paciente. En resumen, se administra a un paciente un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable, en una cantidad suficiente para inhibir la proliferación de queratinocitos.

La presente invención también permite la inhibición de la actividad de la calmodulina en un paciente, que comprende administrar al paciente un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable en una cantidad suficiente para inhibir la actividad de calmodulina.

Estos y otros aspectos de la invención resultarán evidentes con referencia a la siguiente descripción detallada y al dibujo adjunto.

La figura ilustra la preparación de determinados compuestos útiles en la presente invención.

La presente invención proporciona compuestos de fórmula I para su uso en la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de la dermatitis (incluyendo la psoriasis), incluyendo las fases crónicas de estas afecciones, que se caracterizan por la hiperproliferación de queratinocitos. La presente invención utiliza 2,3-diaril-1-benzopiranos que se definen por la fórmula general I:

5

en la que cada uno de R1 y R2 consiste individualmente en H, OH, alcoxilo C_{1}-C_{17} de cadena lineal o ramificada, aciloxilo C_{2}-C_{18} de cadena lineal o ramificada o alcoxicarbonilo C_{2}-C_{18} de cadena lineal o ramificada; y R3 es

6

en el que cada uno de R4 y R5 consiste individualmente en un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que comprende de uno a 18 átomos de carbono, o junto con N, R4 y R5 forman un anillo de tres a 10 miembros; y n es un número entero desde 1 hasta 6, preferiblemente de 1 a 3, más preferiblemente 1. Preferiblemente, cada uno de R4 y R5 es individualmente metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o terc-butilo, o junto con N, R4 y R5 forman un anillo de cinco o seis miembros. Más preferiblemente, R3 es

7

En las formas de realización preferidas, los compuestos I tienen la estructura:

8

En otras formas de realización preferidas, R1 y R2 son alcoxilo. En otras formas de realización preferidas, R1 y R2 son individualmente H, OH o alcoxilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilo C_{2}-C_{5} o aciloxilo C_{2}-C_{5}. R3 es preferiblemente un radical 2-piperidinoetoxilo. En otras formas de realización preferidas, R1 y R2 son individualmente H u OH, tal como se usa en la presente memoria, el término "aciloxilo" se refiere a radicales con la estructura

9

en la que R' es alquilo o aminoalquilo de cadena lineal o ramificada.

Compuestos particularmente preferidos para su uso en la presente invención incluyen:

10

es decir, R1 = R2 = H y

R3 es:

11

12

es decir, R1 = OH,

R2 = H y R3 es:

13

14

es decir, R1 = H,

R2 = OH y R3 es:

15

y

16

es decir, R1 = R2 = OH y R3 es:

17

Aunque se prefiere usar los 2,3-diaril-2H-1-benzopiranos descritos anteriormente, también pueden usarse 2,3-diaril-1-benzopiranos sustituidos en la posición 2 para tratar dermatitis y afecciones relacionadas. Las sustituciones preferidas a este respecto incluyen metilo, etilo, propilo y butilo. Además, cada uno de los anillos aromáticos de I puede sustituirse adicionalmente en una o más posiciones con un OH; flúor; CF_{3}; CN; un radical alquilo, alcoxilo o aciloxilo lineal de desde uno hasta dieciocho átomos de carbono, un radical alquilo, alcoxilo o aciloxilo ramificado que comprende de tres a dieciocho átomos de carbono; NO_{2}; NH_{2} o NHCOR'', en el que R'' es un radical alquilo de cadena lineal o ramificado que comprende de uno a dieciocho átomos de carbono. Los expertos en la materia reconocerán que las sustituciones deberían limitarse generalmente en número y/o tamaño de manera que no alteren la función de la molécula debido a grandes cambios en la solubilidad, las interacciones con los receptores, la actividad biológica, etc. Por tanto, las sustituciones se limitan preferiblemente en número y consistirán en grupos de tamaño más pequeño, por ejemplo radicales de alquilo (C_{1}-C_{4}) inferiores.

Los benzopiranos de la fórmula I pueden prepararse según los métodos descritos en Saeed et al., J.Med.Chem. 33:3210-3216, 1990; Sharma et al., J. Med. Chem. 33:3222-3229, 1990 y la patente US nº 5.254.568 que se incorporan en su totalidad como referencia en la presente memoria. En la figura 1, se ilustra un esquema sintético representativo. La condensación catalizada con base, de desoxibenzoína II con 4-hidroxibenzaldehído da como resultado una mezcla de la dihidro-4H-1-benzopiran-4-ona IV y la 2-fenilchalcona VI. De manera similar, la condensación de desoxibenzoína III con 4-hidroxibenzaldehído da una mezcla de la dihidrobenzopiran-4-ona V y la 2-fenilchalcona VII. La reducción de las fenilchalconas VI y VII con borohidruro de sodio seguido por la ciclodeshidratación térmica de los alcoholes da como resultado los 2H-benzopiranofenoles VIII y IX, respectivamente. Los compuestos VIII y IX entonces se alquilan para producir los éteres X y XI, respectivamente. Los hidroxiderivados de I (es decir, aquellos en los que al menos uno de R1 y R2 es OH) pueden prepararse tal como se describe por Sharma et al. (véase anteriormente) y en la patente US nº 5.254.568 mediante condensación con 4-hidroxibenzaldehído de los hidroxiderivados de desoxibenzoína apropiadamente protegidos con OTHP (O-tetrahidropiranilo). Los derivados fenólicos que presentan un residuo de piperidinoetoxilo en el 2-fenilo se preparan partiendo de éteres de THP (tetrahidropirano) de las desoxibenzoínas apropiadas, con lo que se permite selectividad en la unión de la cadena lateral al grupo OH requerido.

La síntesis de 2,3-diaril-1-benzopiranos sustituidos en una o más posiciones en los anillos aromáticos se lleva a cabo usando técnicas sintéticas convencionales a partir de precursores adecuados, por ejemplo, desoxibenzoínas sustituidas y/o benzaldehídos sustituidos, tales como 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído, 3,4-dihidroxibenzaldehído ó 2,4-dihidroxibenzaldehído.

En la presente invención, los 2,3-diaril-1-benzopiranos pueden prepararse en forma de sales farmacéuticamente aceptables, especialmente, sales de adición de ácidos, incluyendo sales de ácidos orgánicos y ácidos minerales. Ejemplos de sales de este tipo incluyen sales de ácidos orgánicos tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido salicílico y similares. Sales de adición de ácidos inorgánicos adecuadas incluyen sales de los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico y similares. Las sales de adición de ácidos pueden obtenerse como los productos directos de la síntesis del compuesto. Como alternativa, la base libre puede disolverse en un disolvente adecuado que contiene el ácido apropiado y la sal se aísla mediante evaporación del disolvente o separando de otro modo la sal y el disolvente.

Según la presente invención, los 2,3-diaril-1-benzopiranos y sus sales se usan en la medicina humana y veterinaria para el tratamiento de la dermatitis eccematosa y la psoriasis. "Dermatitis eccematosa" incluye dermatitis de contacto alérgica, dermatitis atópica, dermatitis fotoeccematosa y dermatitis irritativa primaria. Los medicamentos de la presente invención pueden usarse para tratar estas afecciones en sus fases agudas o crónicas. Aunque no se pretende estar limitado a una teoría, se cree que el efecto terapéutico de los 2,3-diaril-1-benzopiranos se debe al menos en parte a un efecto antagonista sobre la calmodulina, lo que hace que estos compuestos sean particularmente eficaces en la fase hiperproliferativa crónica de la dermatitis eccematosa y de la psoriasis.

Para su uso en la presente invención, los 2,3-diaril-1-benzopiranos y sus sales farmacéuticamente aceptables se formulan con un portador farmacéuticamente aceptable para proporcionar un medicamento para la administración tópica u oral según los métodos convencionales. Las formulaciones pueden incluir además uno o más diluyentes, sustancias de carga, emulgentes, conservantes, tampones, excipientes, etc. y pueden proporcionarse en formas tales como líquidos, pomadas, ungüentos, geles, emulsiones y similares. Un experto en la materia puede formular los compuestos de una manera apropiada y de acuerdo con las prácticas aceptadas, tales como aquellas descritas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª edición, Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990 (que se incorpora en su totalidad como referencia en la presente memoria). Composiciones de este tipo pueden incluir además una o más sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes, estabilizantes, colorantes, potenciadores de la penetración, etc.

En una forma de realización preferida, las composiciones farmacéuticas se aplican tópicamente a las lesiones cutáneas. Composiciones adecuadas a este respecto incluyen formulaciones basadas en aceite tales como pomadas, emulsiones de agua en aceite y disoluciones del principio activo en un disolvente volátil tal como una mezcla de etanol/éter. Composiciones de este tipo se aplican de una a varias veces al día. Las formulaciones basadas en agua pueden aplicarse como apósitos húmedos.

Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse también por vía oral, preferiblemente como comprimidos o cápsulas. La administración oral se producirá generalmente en intervalos diarios a semanales.

Una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica de este tipo es la cantidad que proporciona una mejoría clínicamente significativa en los síntomas de la afección que se va a tratar. En particular, resulta deseable conseguir una reducción de la hiperplasia epidérmica y/o hiperproliferación de queratinocitos. Generalmente, la determinación de dichas cantidades se realizará empíricamente y se encuentra dentro del nivel habitual de experiencia en la materia. El tratamiento puede ajustarse según las necesidades para obtener los efectos deseados, tal como modificando la concentración de principio activo en la formulación o variando la posología del tratamiento. Por supuesto, la cantidad real administrada dependerá en parte de la afección particular que se va a tratar (incluyendo su extensión y gravedad), la edad, el peso y la afección general del paciente y otros factores evidentes para aquellos expertos en la materia. Por ejemplo, una formulación habitual para la administración tópica contendrá del 0,01 al 10 por ciento en peso de un 2,3-diaril-1-benzopirano en un vehículo adecuado, más preferiblemente del 0,5 al 5 por ciento en peso. La formulación se aplicará a la piel afectada de una a varias veces al día hasta que se consiga la mejoría deseada.

Una orientación general para las pautas de tratamiento se obtiene a partir de los experimentos llevados a cabo en modelos animales del trastorno en cuestión. Por ejemplo, los modelos animales de psoriasis incluyen el análisis de las alteraciones histológicas en la epidermis de la cola de un ratón adulto (Hofbauer et al., Brit. J. Dermatol. 118:85-89, 1988; Bladon et al., Arch. Dermatol. Res. 277:121-125, 1985, incorporados como referencia en la presente memoria). En este modelo, la actividad anti-psoriásica está indicada mediante la inducción de una capa granular y ortoqueratosis en zonas de escama entre las articulaciones de la epidermis de la cola. Normalmente, se aplica una pomada tópica diariamente durante siete días consecutivos, entonces se sacrifica al animal y se examina histológicamente la piel de la cola. Se proporciona un modelo adicional injertando piel humana psoriásica en ratones congénitamente atímicos (desnudos) (Krueger et al., J. Invest. Dermatol. 64:307-312, 1975, incorporado como referencia en la presente memoria). Se ha demostrado que los injertos de este tipo mantienen la histología característica durante hasta once semanas. Como en el modelo de cola de ratón, la composición de prueba se aplica a la piel en intervalos predeterminados durante un periodo de una a varias semanas, momento en el que los animales se sacrifican y los injertos de piel se examinan histológicamente. Un tercer modelo se describe por Fretland et al., (Inflammation 14:727-739, 1990; incorporado como referencia en la presente memoria). En resumen, se induce una inflamación en la epidermis de un cobaya mediante aplicación tópica de un éster de forbol (12-miristato-13-acetato de forbol; PMA), normalmente aproximadamente a 2 g/ml en acetona, en una oreja y excipiente en la oreja contralateral. Los compuestos de prueba se aplican simultáneamente con el PMA o pueden administrarse por vía oral. El análisis histológico se realiza a las 96 horas tras la aplicación de PMA. Este modelo copia muchos síntomas de la psoriasis humana, incluyendo edema, diapédesis e infiltración de las células inflamatorias, niveles altos de LTB_{4} (leucotrieno B4) y proliferación epidérmica.

La actividad de la calmodulina se ensaya convenientemente midiendo la actividad de las enzimas dependientes de calmodulina. Véase, por ejemplo, Blumenthal et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 156:860-865, 1988, que se incorpora como referencia en la presente memoria. Las enzimas dependientes de calmodulina incluyen fosforilasa cinasa, proteín cinasa dependiente de calmodulina y proteín fosfatasa dependiente de calmodulina (calcineurina) cerebrales multifuncionales. La actividad fosforilasa cinasa se determina midiendo las velocidades de incorporación de ^{32}P en la fosforilasa b usando un ensayo con papel de filtro (Roskoski, Methods Enzymol. 99:3-6, 1983, incorporado como referencia en la presente memoria). Se combinan una mezcla de reacción que contiene acetato de magnesio 50 mM, CaCl_{2} 200 \muM, fosforilasa b 5 mg/ml, fosforilasa cinasa músculo-esquelética 0,9 \mug/ml, calmodulina y el compuesto de prueba. La mezcla se incuba a 30ºC durante cinco minutos y la reacción se inicia mediante la adición de [\gamma^{32}P]-ATP. La actividad fosfatasa se ensaya determinando las velocidades de liberación de ^{32}Pi desde un fosfopéptido sintético que corresponde a los residuos 81-99 de la subunidad reguladora de la proteín cinasa dependiente de AMPc cardiaca bovina. La mezcla de reacción contiene MOPS (ácido 4-morfolinpropanosulfónico) 50 mM, pH 7,0, 2-mercaptoetanol 15 mM, acetato de magnesio 2 mM, MnCl_{2} 2 mM, fosfatasa cerebral bovina dependiente de calmodulina 0,3 \mug/ml, calmodulina y el compuesto de prueba. La mezcla se incuba a 30ºC durante cinco minutos y la reacción se inicia
mediante la adición de péptido marcado con ^{32}P. La actividad proteín cinasa puede ensayarse determinando la velocidad de incorporación de ^{32}P en la cadena ligera de miosina muscular de molleja de pollo usando un método con papel de filtro (Roskoski, véase anteriormente) en una mezcla de reacción de Tris 50 mM, pH 7,6, ditiotreitol 0,6 mM, albúmina de suero bovino (BSA) 0,6 mg/ml, NaCl 80 mM, CaCl_{2} 0,5 mM, cinasa 1,0 \mug/ml, calmodulina y compuesto de prueba. La reacción se inicia mediante la adición de Mg-[\gamma^{32}P]-ATP y cadena ligera de miosina (concentración final de 40 \muM) a 25ºC. Las concentraciones de calmodulina oscilan normalmente entre 1 nM y 1 \muM.

Se cree que la calmodulina desempeña una función patogénica en el daño tisular producido por las quemaduras y la congelación (Beitner et al., Gen. Pharmac. 20:641-646, 1989), así como en la dermatitis y otras afecciones que implican hiperproliferación de queratinocitos. Los métodos de la presente invención pueden aplicarse al tratamiento de estas y otras afecciones en las que se desea un antagonismo de la actividad de la calmodulina.

Los siguientes ejemplos se ofrecen a título de ilustración, sin limitación.

Ejemplo 1

Se añade disolvente colodion a 2-[4-(2-piperidinoetoxi)fenil]-3-fenil-2H-1-benzopirano puro para proporcionar una concentración final de 100 mg por 10 ml de disolvente. El disolvente consiste en una mezcla de tres partes en volumen de dietil éter con respecto a una parte en volumen de etanol. La disolución resultante se divide en alícuotas en frascos cuentagotas estériles. Para su uso, la formulación se aplica directamente en la piel afectada usando un cuentagotas en una cantidad suficiente para cubrir la zona afectada.

Ejemplo 2

Se calienta parafina BP blanca blanda hasta 60ºC, punto en el que se funde. Se añade 2-[4-(2-piperidinoetoxi)fenil]-3-fenil-2H-1-benzopirano directamente a una concentración de 10 mg por gramo de parafina y la mezcla se agita vigorosamente. Después de enfriar, la formulación se envasa en recipientes estériles. Para su uso, la formulación se aplica frotando directamente sobre la piel afectada.

Ejemplo 3

Se obtuvo 2-[4-(2-piperidinoetoxi)fenil]-3-fenil-2H-1-benzopirano (designado como CDRI 85/287) a partir del Central Drug Research Institute, Lucknow, India. Se ensayó este compuesto para determinar la inhibición de la activación dependiente de la concentración de la isozima de 58 kD de la nucleótido fosfodiesterasa cíclica por calmodulina, esencialmente tal como se describe por Johnson et al., Anal. Biochem. 162:291-295, 1987. En resumen, la actividad enzimática de la isozima de 58 kD de la nucleótido fosfodiesterasa cíclica se midió mediante monitorización de la disminución de la fluorescencia de un derivado de 2'-metilantraniloílo de GMP cíclica (Hiratsuka, J. Biol. Chem. 257:13354-13358, 1982; obtenido de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR). Los ensayos se realizaron en MOPS (ácido 3-[N-morfolino]propanosulfónico) 10 mM, pH 6,8, KCl 90 mM, MgCl_{2} 5 mM, EGTA 1 mM, CaCl_{2} 1 mM (calcio libre aproximadamente 50 \muM), GMPc (derivado de 2'-metilantraniloílo) 10 \muM, nucleótido fosfodiesterasa cíclica 9 nM y cantidades de calmodulina que saturan según determina la curva patrón utilizando calmodulina 0 - 55 nM. La excitación se produjo a 280 nm y los cambios de fluorescencia se monitorizaron a 450 nm usando un espectrofotómetro de luminescencia Aminco-Bowman (Urbana, IL) Serie 2 a 25ºC y un ancho de banda de 4 nm.

Las disoluciones madre de CDRI 85/287, trifluoperazina, tamoxifeno y calmidazolio (10 mM en DMSO) se diluyeron con portador (DMSO) hasta alcanzar concentraciones finales de 1, 3 y 7 mM. Los compuestos de prueba o el portador solo se diluyeron 1:1000 en la mezcla de ensayo. El portador no produjo ningún efecto sobre la actividad enzimática.

Los resultados mostraron que CDRI 85/287 es un potente inhibidor de la calmodulina, con el 50% de inhibición a una concentración aproximadamente de 2,5 \muM e inhibición total que se produce entre 7 y 10 \muM.

Aunque la invención anterior se ha descrito con algún detalle a título de ilustración y ejemplo con fines de claridad de comprensión, resultará evidente que determinados cambios y modificaciones pueden ponerse en práctica dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims

1. Uso de un compuesto de fórmula

18

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

cada uno de R1 y R2 consiste individualmente en H, OH, alcoxilo C_{1}-C_{17} de cadena lineal o ramificada, aciloxilo C_{2}-C_{18} de cadena lineal o ramificada o alcoxicarbonilo C_{2}-C_{18} de cadena lineal o ramificada; y

R3 es

19

en el que cada uno de R4 y R5 consiste individualmente en un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que comprende de uno a 18 átomos de carbono, o junto con N, R4 y R5 forman un anillo que comprende de tres a 10 miembros, siendo n un número entero de 1 a 6, en la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de la dermatitis o para inhibir la proliferación de queratinocitos o para inhibir la actividad de la calmodulina.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es

20

3. Uso según la reivindicación 1 ó la reivindicación 2, en el que cada uno de R1 y R2 consiste individualmente en H, OH o alcoxilo C_{1}-C_{4}.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R1 consiste en H u OH y/o R2 consiste en H u OH.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que cada uno de R4 y R5 consiste individualmente en metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o terc-butilo; o junto con N, R4 y R5 forman un anillo de cinco o seis miembros.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R3 es

21

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha dermatitis consiste en psoriasis o dermatitis eccematosa.

8. Uso según la reivindicación 7, en el que dicha afección es dermatitis atópica, dermatitis fotoeccematosa, dermatitis irritativa primaria o dermatitis de contacto alérgica.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicha composición se encuentra en una forma adecuada para la administración tópica.