ES2220585T3

ES2220585T3 - Agentes y procedimiento para el tratamiento de enfermedades proliferativas.

Info

Publication number: ES2220585T3
Application number: ES00989233T
Authority: ES
Inventors: Rima Salim Al-Awar; Kyle Andrew Hecker; Jianping Huang; Sajan Joseph; James Edward Ray; Philip Parker Waid
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1999-12-16
Filing date: 2000-12-18
Publication date: 2004-12-16
Anticipated expiration: 2020-12-18
Also published as: DE60010934D1; EP1250334A2; WO2001044235A2; EP1250334B1; DE60010934T2; ATE267194T1; WO2001044235A3; AU2576901A

Abstract

Un compuesto de **Fórmula** en la que: A y B son independientemente O o S; X e Y son ambos hidrógeno o, tomados conjuntamente, forman un enlace; R1 es hidrógeno o alquilo C1-C4; R5 y R5¿ son opcionalmente hasta dos sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo constituido por halo, ciano, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alcoxi C1-C6, ariloxi, benciloxi, alquiltio C1-C6 y ariltio; R6 y R6¿ son opcionalmente hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente de alquilo C1-C4; R7 y R7¿ son opcionalmente sustituyentes seleccionados independientemente entre (alcoxi C1-C6)carbonilo o -(CH2)m- Z; Z es halo, hidroxi, (alquil C1-C6)3SiO-, (difenil)(alquil C1-C6)SiO, carboxi, (alcoxi C1- C4)carbonilo o NR8R9; R8 es hidrógeno, alquilo C1-C6 o alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido; R9 es hidrógeno, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alcanoílo C1-C6, alcanoílo C1-C6 sustituido, terc- butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, un resto aminoácido, un resto aminoácido protegido, -(piridinil)alaninilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo o heteroarilcarbonilo; o R8 y R9 tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo saturado opcionalmente sustituido con uno o dos grupos hidroxi, amino o alquilo C1- C6 y el término ¿heterociclo saturado¿ se emplea para significar un anillo de 4-9 miembros que contiene nitrógeno y opcionalmente otro átomo seleccionado entre oxígeno, nitrógeno o azufre.

Description

Agentes y procedimientos para el tratamiento de enfermedades proliferativas.

El cáncer es un grupo heterogéneo de enfermedades presente en diversas formas y en diversos tejidos pero que tienen en común la característica de una proliferación celular descontrolada. Durante algún tiempo, el cáncer se ha reconocido como una enfermedad de proliferación celular descontrolada. De esta manera, las células que proliferan rápidamente han sido la diana de la quimioterapia para el cáncer. El objetivo es encontrar agentes que sean más eficaces contra las células cancerosas que contra las células normales. Según progresaba la ciencia básica de las células, se demostró que ciertos agentes anticancerígenos eran más eficaces contra las células malignas en ciertas etapas del ciclo celular que contra las células en otras etapas del ciclo celular.

Se han intentado desarrollar regímenes de tratamiento que sacan partido de estas observaciones (SHACKNEY, S. E. y col. Cell Kinetics. IN: Bruce Chabner (ed.), Pharmacologic Principles of Cancer Treatment; W. B. Saunder Company: Filadelfia, págs. 45-76, (1982)). Actualmente se reconoce que la replicación celular se controla mediante la expresión transitoria, secuencial y altamente regulada de una serie de ciclinas que se asocian con quinasas específicas dependientes de ciclina (CDK) (TAULES, M., y col., J. Biol. Chem. 273, 33279-33286 (1998; FISHER, R. P. Current Opinion in Genetics & Develop. 7, 32-38 (1997); ARELLANO, M. y col., Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 559-573 (1997); y RAVITZ, M. J., y col., Adv. Cancer Res. 1997, 165-207 (1997)). Éstas son proteínas-quinasas serina/treonina, que activan diversas enzimas y por lo tanto inician una cascada de fosforilaciones que permiten a la célula progresar a la siguiente etapa de replicación (COLLINS, y col., Proc. Natl. Acad. Sci, Estados Unidos 94, 2776-2778 (1997); JACKS, T. y col., Science 280, 1035-1038 (1998)).

Se ha descubierto que las células cancerosas normalmente tienen componentes mutados o desaparecidos en la cadena de proteínas y enzimas, que controlan la división celular. Por ejemplo, la proteína Rb, normalmente denominada pRb, es un sustrato para las ciclina-CDK y normalmente desaparece o se muta en tumores humanos (KONSTANTINIDIS, A. K. y col., J. Biol. Chem. 273, 26506-26515 (1998); HARRINGTON, E. A., y col., Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 95, 11945-11950 (1998); YAMAMOTO, y col., Oncol. Rep. 5, 447-451 (1997); BARTEK, J., y col., Exp. Cell Res. 237, 1-6 (1997); SELLERS, y col., J. Clin. Oncol. 15, 3301-3312 (1997); HERWIG, S. y col., Eur. J. Biochem. 246, 581-601 (1997)).

Además, de las quinasas, que pueden ayudar a retirar la célula de una fase de división a la siguiente, hay inhibidores de CDK (CKI) que bloquean las acciones de complejos específicos de ciclina-CDK. Los CKI interrumpen la progresión del ciclo celular y provocan la entrada de las células en la fase quiescente G_{0}. Los CKI del grupo INK4, incluyendo p15, p16, p18 y p19, bloquean los complejos ciclina-CDK4 y ciclina-CDK6.

La calmodulina es esencial para la actividad de la quinasa dependiente de ciclina 4 (CDK4) y para la acumulación nuclear de la ciclina D1-CDK4 durante la fase G_{1} (TAULES, M., y col., J. Biol. Chem. 273, 33279-33286 (1998)). Las CDK y ciclinas son importantes en la transición o transiciones (FISHER, R. P. Current Opinion in Genetics & Develop. 7, 32-38 (1997)). Durante el ciclo celular se regulan complejos CDK/ciclina (ARELLANO, M. y col., Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 559-573 (1997)). La quinasa dependiente de ciclina durante la fase G_{1}, y el ciclo celular generalmente se regulan mediante TGF-\beta (RAVITZ, M. J., y col. Adv. Cancer Res. 1997, 165-207 (1997)).

Hasta ahora, la alteración más frecuente en una enfermedad maligna humana reconocida es la sobreexpresión, mutación y/o desregulación de la ciclina D (IMOTO, M., y col., Exp. Cell Res. 236, 173-180 (1997); JUAN, G., y col., Cell Prolif. 29, 259-266 (1996); GONG, J. y col., Cell. Prolif. 28, 337-346 (1995) y col., 1995). El gen de ciclina D1, CCND1, se amplifica en aproximadamente el 20% de los cánceres de mama y la proteína, ciclina D1, se sobreexpresa en aproximadamente el 50% de los cánceres de mama (BARNES, D. M. y col., Breast Cancer Res. Treat. 52, 1-15 (1998); KAMALATI, T., y col., Clin. Exp. Metastasis 16, 415-426 (1998); STEEG, P. S. y col. Breast Cancer Res. Treat. 52-17-28 (1998); LANDBERG, G. y col., APMIS 105, 575-589 (1997); ALLE, y col., Clin. Cancer Res. 4, 847-854 (1998)). Se ha informado de una sobreexpresión de la ciclina D1 en enfermedades proliferativas de mama y en el carcinoma ductal in situ, indicando que este cambio es importante en las primeras etapas de la oncogénesis de mama (ALLE, y coil., Clin. Cancer Res. 4, 847-854 (1998); STEEG, y col., Breast Cancer Res. Treat. 52, 17-28 (1998)).

Un investigador (KAMALATI, T., y col., Clin. Exp. Metastasis 16, 415-416 (1998) y col. (1998) trató las células epiteliales humanas normales de forma que sobreexpresaron la ciclina D1. Estas células transfectadas habían reducido la dependencia del factor de crecimiento, un período de tiempo acortado del ciclo celular, y proporcionando, de esta forma, las células con una ventaja de crecimiento. En 123 muestras de carcinoma colorrectal, los que están teñidos intensamente para la ciclina D1 se correspondían con pacientes con una relación de supervivencia de 5 años del 53,3% mientras que los que fueron negativos o pobremente teñidos tenían relaciones de supervivencia de 5 años del 96,2 y del 78,8% (MEEDA, K., y col., Oncology 55, 145-151 (1998); PALMQVIST, R., y col., Europ. J. Cancer 34, 1575-1581 (1998)).

La amplificación del CCND1 se ha descubierto en un 25% de las lesiones displásicas craneales y cervicales, y en un 22% de los carcinomas craneales y cervicales. Se ha descubierto sobreexpresión de la ciclina D1 en un 53% de los carcinomas craneales y cervicales. Esto indica que en esta enfermedad, como en el cáncer de mama, las alteraciones en la ciclina D1 se producen en las etapas más tempranas de la tumorigénesis (KYOMOTO, R., y col., Int. J. Cancer (Pred. Oncol.) 74, 576-581 (1997); PIGNATARO, L., y col., J. Clin. Oncol. 16, 3069-3077 (1998) y col., 1998). En un estudio de 218 muestras de carcinoma de células escamosas esofágicas, los pacientes con tumores ciclina D1-positivos tenían una supervivencia significativamente peor que los pacientes con tumores ciclina D1-negativos (SARBIA, M. y col., Int. J. Cancer (Pred. Oncol. 84, 86-91 (1999)).

En ocho líneas celulares de carcinoma esofágico humano, 7 (87,5%) y 6 (75%) líneas celulares tuvieron deleciones homocigóticas de los genes p16 y p15 (KITAHARA, K. y col., J. Exp. Therap. Oncol. 1, 7-12 (1996)). Todas las líneas celulares p16-negativas expresan niveles altos de ciclina D1 y CDK4.

El laboratorio Rustgi (MUELLER, A, y col., Cancer Res. 57, 5542-5549 (1997); NAKAGAWA, H, y col., Oncogene 14, 1185-1190 (1997)) desarrolló un ratón transgénico en el que el promotor ED-L2 del virus Epstein-barr se unía al ADNc de la ciclina D1 humana. La proteína transgénica localiza el epitelio escamoso en la lengua y el esófago, dando como resultado un fenotipo displásico asociado con el aumento de la proliferación celular e indicando que la sobreexpresión de la ciclina D1 puede ser un evento de iniciación del tumor. En una serie de 84 muestras de sarcomas de tejido blando, no hubo amplificación del gen CCND1 aunque hubo sobreexpresión de la ciclina D1 en el 29% de los casos. La sobreexpresión de la ciclina D1 se asocia significativamente con la peor supervivencia total (KIM, S. H., y col., Clin. Cancer Res. 4, 2377-2382 (1998); YAO, J., y col., Clin. Cancer Res, 4, 1065-1070 (1998)).

Otro investigador (MARCHETTI, A., y col., Int. J. Cancer 75, 187-192 (1998)) descubrió que las anormalidades de la ciclina D1 y/o Rb en el gen y/o en el nivel de expresión estaban presentes en más del 90% de una serie de muestras con cáncer de pulmón de células no pequeñas, indicando que las alteraciones de la ciclina D1 y/o Rb representan una etapa importante en la tumorigénesis pulmonar. En 49 de 50 carcinomas pancreáticos (98%), la ruta Rb/p16 se anuló exclusivamente a través de la inactivación del gen p16 (SCHUTTE, M., y col., Cancer Res. 57, 3126-3130 (1997)).

El linfoma de células del manto se define como una subentidad de linfomas malignos caracterizados por la translocalización cromosómica t (11;14) (q13;q32) que da lugar a la sobreexpresión de la ciclina D1 y, además, aproximadamente el 50% de estos tumores conlleva la deleción del gen p16 (DREYLING, M. H., y col., Cancer Res. 57, 4608-4614 (1997); TANIGUCHI, T., y col., Jpn. J. Cancer Res. 89, 159-166 (1998)).

En una serie de 17 hepatoblastomas, el 76% mostró sobreexpresión de ciclina D1 y el 88% mostró sobreexpresión de CDK4 (KIM, H., y col., Cancer Lett. 131, 177-183 (1998)). Hubo una correlación entre el alto nivel de expresión de la ciclina D1 y la recurrencia tumoral. Las alteraciones en la ruta ciclina D1/CDK4/pRb también se han asociado con un elevado porcentaje de carcinomas de próstata (HAN, E. K. H., y col., The Prostate 35, 95-101 (1998)), carcinomas de ovario (MASCIULLO, V., y col., Int. J. Cancer Pred. Oncol. 74, 390-395 (1997) y osteosarcomas (WEI, G., y col., Int. J. Cancer 80, 199-204 (1997) y col., 1999).

Se han identificado seis clases distintas de moléculas pequeñas de productos naturales como inhibidores de CDK: el compuesto basado en purina olomucina y análogos, butirolactona, flavopiridol, estaurosporina y UCN-01, suramina y 9-hidroxielipticina (CARLSON y col., Cancer Res. 56, 2973-2978 (1996); DE AZEVEDO, y col., Eur. J. Biochem. 243, 518-526 (1997); BRIDGES, A. J. Exp. Opin. Ther. Patents 5, 1245-1257 (1995); ORR, M. S., y col., REINHOLD, W., y col., J. Biol. Chem. 278, 3803-3807 (1998) y col., 1998; KAKEYA, H., y col., Cancer Res. 58, 704-710 (1998); HARPER, J. W. Cancer Surveys 29, 91-107 (1997); HARRINGTON, E. A., y col., Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 95, 11945-11950 (1998); GARRETT, M. D. y col., Current Opin. Genetics Develop. 9, 104-111 (1999); MGBONYEBI, O. P., y col., Cancer Res. 59, 1903-1910 (1999)). Todas estas moléculas se unen en el sitio de unión ATP de la enzima y son competitivas con ATP.

La olomoucina es un inhibidor de la Cdc2, CDK2, CDK5 y MAP quinasa en concentraciones micromolares y tiene efectos mucho más leves con respecto a CDK4 y CDK6 (GARRET, M. D. Current Opin. Genetics Develop. 9, 104-111 (1999)). Se ha informado de que la olomoucina detiene varias líneas celulares en las fases G_{1}y G_{2} del ciclo celular y bloquea las actividades celulares dependientes de CDK conocidas.

El flavopiridol, una flavona sintética nueva, inhibe fuertemente varias quinasas dependientes de ciclina incluyendo CDK1, CDK2, CDK4 y CDK7 (SEDLACEK, H. H., y col., Int. J. Cancer 65, 1143-1168 (1996); CZECH, J. y col., Int. J. Oncol. 6, 31-36 (1995); BIBLE, K. C. y col., Cancer Res. 56, 4856-4861 (1996); SCHRUMP, D. S., y col., Clin. Cancer Res. 4, 2885-2890 (1998); BRUSSELBACH, S., y col., Int. J. Cancer, 77, 146-152 (1998); JAGER, W., y col., Life Sciences 62, 1861-1873 (1998); SENDEROWICZ, A. M., y col., J. Clin. Oncol. 16, 2986-2999 (1998)). La exposición a flavopiridol puede hacer que las células se detengan en las fases G_{1} y G_{2} del ciclo celular, en concentraciones similares a las requeridas para la inhibición del crecimiento celular (BIBLE, K. C. y col., Cancer Res. 56, 4856-4861 (1996); SCHRUMP, D. S., y col., Clin. Cancer Res. 4, 2885-2890 (1998)). El flavopiridol inhibe las CDK de una manera competitiva con ATP y no competitiva con el sustrato. El flavopiridol también inhibe otras proteínas quinasas tales como proteína quinasa C, la proteína quinasa A y EGFR pero en concentraciones de 10 \muM/l o superiores. El flavopiridol es un agente antitumoral activo en varios modelos de xenoinjerto tumorales humanos incluyendo carcinoma de colon Colo-205, y carcinomas de próstata DU-145 y LNCaP (SEDLACEK, H. H., y col., Int. J. Cancer 65, 1143-1168 (1996); CZECH, J., y col., Int. J. Oncol. 6, 31-36 (1995)). El flavopiridol ha demostrado el ensayo clínico de fase I completada administrado en forma de una infusión intravenosa continua de 72 horas cada 2 semanas (SENDEROWICZ, A. M., y col., J. Clin. Oncol. 16, 2986-2999 (1998), y están en marcha ensayos de fase II.

Ya se ha publicado mucho sobre las propiedades antineoplásicas de ciertos compuestos tales como bisindolilmaleimidas, indolocarbazoles y derivaciones de los mismos. La estaurosporina y UCN-01 son miembros de esta amplia clase molecular (COLEMAN, K. G., y col., Ann. Reps. Med. Chem. 32, 171-179 (1997)). Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.856.517 describe pirroles sustituidos que son útiles como agentes antiproliferativos en el tratamiento del cáncer. La Patente de Estados Unidos Nº 5.292.747 describe pirroles sustituidos útiles en la prevención o control de trastornos oncológicos. La Patente de Estados Unidos Nº 5.721.245 describe indolilpirrolonas útiles en el control de trastornos oncológicos. La Patente de Estados Unidos Nº 5.438.050 (Godecke) describe derivados de indolocarbazol útiles en la prevención y tratamiento del cáncer. La Patente de Estados Unidos Nº 5.705.511 y la Patente de Estados Unidos Nº 5.591.855 describen pirrolocarbazoles condensados para la inhibición del crecimiento asociado con estados hiperproliferativos.

Además de las quinasas, que controlan el ciclo de división celular, hay más de varios centenares de otras quinasas que se encuentran en el cuerpo humano. Estas quinasas realizan diversas funciones tales como el factor de crecimiento y la transducción de señales de citokina, mediadores inflamatorios, vías bioquímicas que controlan la actividad de los factores de transcripción nuclear y rutas apoptóticas. En el tratamiento de enfermedades proliferativas, se desea particularmente usar un inhibidor de quinasa con una actividad relativamente restringida. Generalmente, los agentes anticancerosos se dan en dosis elevadas con el fin de matar tantas células cancerosas como sea posible. Con tales dosificación elevada, los efectos secundarios debidos a la amplia inhibición de la quinasa pueden convertirse en un serio problema. Por consiguiente, para tratar enfermedades proliferativas, se desea usar inhibidores de quinasa que sean relativamente selectivos para las quinasas que controlan la división celular.

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula I

1

en la que:

A y B son independientemente O o S;

X e Y son ambos hidrógeno o, tomados conjuntamente, forman un enlace;

R^{1} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{5} y R^{5'} son opcionalmente hasta dos sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo compuesto por halo, ciano, alquilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido, alcoxi C_{1}-C_{6}, ariloxi, benciloxi, alquiltio C_{1}-C_{6} y ariltio;

R^{6} y R^{6'} son opcionalmente hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente de alquilo C_{1}-C_{4};

R^{7} y R^{7'} son opcionalmente sustituyentes seleccionados independientemente entre (alcoxi C_{1}-C_{6})carbonilo o
-(CH_{2})_{m}-Z;

Z es halo, hidroxi, (alquil C_{1}-C_{6})_{3}SiO-, (difenil)(alquil C_{1}-C_{6})SiO, carboxi, (alcoxi C_{1}-C_{4})carbonilo o NR^{8}R^{9};

R^{8} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o alquilo C_{1}-C_{6} sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido;

R^{9} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido, alcanoílo C_{1}-C_{6}, alcanoílo C_{1}-C_{6} sustituido, terc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, un resto aminoácido, un resto aminoácido protegido, \beta-(piridinil)alaninilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo o heteroarilcarbonilo; o

R^{8} y R^{9} tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo saturado opcionalmente sustituido con uno o dos grupos hidroxi, amino o alquilo C_{1}-C_{6};

Q^{1} y Q^{6} son independientemente O, S(O)_{n} o -(CH_{2})_{1-3}-;

Q^{2} y Q^{5} se seleccionan independientemente entre un enlace sencillo carbono-carbono, un doble enlace carbono-carbono, -NR^{10}- o -NR^{10}-CHR^{11}-;

Q^{3} y Q^{4} se seleccionan independientemente entre -(CH_{2})_{1-3}-;

R^{10} es independientemente, cuando está presente, hidrógeno, (alquil C_{1}-C_{6})sulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido, (alquil C_{1}-C_{5})carbonilo, (alquil C_{1}-C_{5})carbonilo sustituido, un resto aminoácido, un resto aminoácido protegido, \beta-(piridinil)alaninilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo o heteroarilcarbonilo;

R^{11} es independientemente, cuando está presente, hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, o alquilo C_{1}-C_{6} sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido; o R^{10} y R^{11} tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos forman un heterociclo saturado de 5 ó 6 miembros;

m es independientemente, cuando está presente, 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;

n es independientemente, cuando está presente, 0, 1 ó 2; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

La invención también proporciona formulaciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula I junto con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Además, la invención se refiere a un procedimiento para la inhibición de CDK4 en un mamífero que comprende administrar al mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I.

La invención también se refiere a un procedimiento para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares en mamíferos que comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I.

La invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento útil para la inhibición de CDK4.

La invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento útil para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

Las siguientes definiciones se exponen para explicar el significado y el alcance de diversos términos usados en este documento. Los términos generales usados en este documento tienen sus significados habituales.

Como se usa en este documento, la expresión "estado hiperproliferativo" se refiere a las células cuyo crecimiento regulado negativamente y/o anormal puede conducir al desarrollo de una afección no deseada, por ejemplo, una afección cancerosa o una afección psoriática.

Como se usa en este documento, la expresión "afección psoriática" se refiere a trastornos que implican hiperproliferación de queratinocitos, infiltración de células inflamatorias y alteración de citoquinas.

Como se usa en este documento, el término "neoplasma" se refiere a un nuevo crecimiento anormal de tejido que crece por la proliferación celular más rápidamente de lo normal, continúa creciendo después de los estímulos que iniciaron la nueva cascada de crecimiento, muestra una carencia parcial o completa de organización estructural y coordinación funcional con el tejido normal y normalmente forma una masa distinta de tejido que puede ser benigna o maligna.

Como se usa en este documento, la expresión "enfermedades proliferativas" se refiere a enfermedades en las que algún tejido de un paciente prolifera a una velocidad superior a la normal. Las enfermedades proliferativas pueden ser cancerosas o no cancerosas. Las enfermedades proliferativas no cancerosas incluyen quistes epidérmicos y dermoideos, lipomas, adenomas, hemangiomas capilares y cutáneos, linfanginomas, lesiones por nevo, teratomas, nefromas, miofibromatosis, tumores osteoplásicos, otras masas displásicas y similares.

Los tipos de enfermedades proliferativas que pueden tratarse usando las composiciones de la presente invención son quistes epidérmicos y dermoideos, lipomas, adenomas, hemangiomas capilares y cutáneos, linfangiomas, lesiones por nevo, teratomas, nefromas, miofibromatosis, tumores osteoplásicos, otras masas displásicas y simila-
res.

Los tipos de cánceres que pueden tratarse con las composiciones de la presente invención incluyen, pero sin limitación, carcinoma de mama, carcinoma de vejiga, cáncer cerebral, carcinoma colorrectal, carcinoma esofágico, carcinoma gástrico, carcinoma de células sexuales por ejemplo cáncer de testículos, carcinoma ginecológico, carcinoma hepatocelular, carcinoma pulmonar de células pequeñas, carcinoma pulmonar de células no pequeñas, linfomas, linfoma de Hodkgin, linfoma de no Hodgkin, melanoma maligno, mieloma múltiple, carcinoma neurológico, carcinoma de ovario, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, carcinoma de células renales, sarcoma de Ewings, osteosarcoma, sarcoma de tejido blando, malignidades pediátricas y similares.

Los términos químicos generales usados en este documento tienen sus significados habituales. Por ejemplo, como se usa en este documento, el término "alquilo", solo o en combinación, se refiere a un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o de cadena ramificada compuesto por átomos de carbono e hidrógeno, ejemplos del cual son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo y similares. El término "alquilo C_{1}-C_{6}" también se refiere a cicloalquilo C_{3}-C_{6}, incluyendo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

El término "alquenilo", solo o en combinación, se refiere a un grupo alquenilo C_{2}-C_{6} de cadena lineal o de cadena ramificada compuesto por átomos de carbono e hidrógeno y que contiene un doble enlace carbono-carbono, ejemplos del cual son etileno, propileno, metiletileno y butileno.

El término "alcoxi", solo o en combinación, se refiere a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente que se une mediante un átomo de oxígeno, tal como, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi y terc-butoxi.

Como se usa en este documento, la expresión "alquilo C_{1}-C_{6} sustituido" representa una cadena alquilo lineal o ramificada sustituida con un carboxilo, (alcoxi C_{1}-C_{6})carbonilo, alcoxi C_{1}-C_{6}, ariloxi, amino, (alquil C_{1}-C_{6})amino, tetrahidrofurilo o hasta un resto hidroxi para cada átomo de carbono en la cadena alquilo.

Como se usa en este documento, el término "arilo" representa un resto fenilo o naftilo opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre halo, alquilo C_{1}-C_{6}, hidroxi, amino o alcoxi C_{1}-C_{6}.

Como se usa en este documento, el término "heteroarilo" significa un resto aromático estable de uno o dos anillos que comprende átomos de carbono y 1-4 heteroátomos seleccionados entre O, S y N. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, triazinilo, ftalimido, indolilo, purinilo, benzotiazolilo y similares. El resto heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre amino, hidroxi, alcoxi C_{1-7}, ariloxi, alquilo C_{1-7}, aminoalquilo, haloalquilo y halógeno.

Como se usa en este documento, la expresión "heterociclo saturado" se toma para ser un anillo de 4-9 miembros que contiene nitrógeno y opcionalmente otro átomo seleccionado entre oxígeno, nitrógeno o azufre.

Como se usa en este documento, el término "halo" o "halógeno" o "haluro" representa flúor, cloro, bromo o yodo. Un haloalquilo es un alquilo sustituido con uno o más átomos halo, preferiblemente de uno a tres átomos halo. Sin embargo, todos los átomos de hidrógeno en el grupo alquilo pueden reemplazarse por halógenos. Como se añaden más halógenos al grupo alquilo, se prefiere el flúor sobre los demás halógenos. Un ejemplo de un haloalquilo es trifluorometilo.

Como se usa en este documento, un "resto aminoácido" se refiere al producto de un aminoácido acoplado al compuesto de Fórmula I a través de un resto de ácido carboxílico, formando un enlace amida o éster, o a través del resto \alpha- o \beta-amino, formando un enlace amida o amina.

Como se usa en este documento, un "resto aminoácido protegido" se refiere a un resto aminoácido en el que los restos amina o ácido carboxílico que no participan en la unión al núcleo del compuesto se protegen mediante grupos de protección adecuados. Tales grupos incluyen terc-butilo, terc-butoxicarbonilo, bencilo y benciloxicarbonilo.

Como se usa en este documento, la expresión "sal farmacéuticamente aceptable" incluye sales de adición de ácidos y bases. Tales sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácidos inorgánicos tales como clorhidrato, sulfato y fosfato, y sales de adición de ácidos orgánicos tales como acetato, maleato, fumarato, tartrato y citrato. Los ejemplos de sales básicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de metales tales como sales de metales alcalinos tales como la sal sódica y la sal potásica, sales de metales alcalinotérreos tales como sal de magnesio y sal de calcio, sal de aluminio y sal de cinc. Son ejemplos de sales de amonio farmacéuticamente aceptables sal de amino y sal de tetrametil amonio. Son ejemplos de sales de adición de aminas farmacéuticamente aceptables sales con morfolina y piperidina. Los ejemplos de sales de adición de aminoácidos farmacéuticamente aceptables incluyen sales con lisina, glicina y fenilalanina. Las sales preferidas incluyen aquéllas con ácido clorhídrico, ácido trifluoroacético y ácido metanosulfónico.

Como se usa en este documento, el término "aminoácido" incluye tanto aminoácidos sintéticos como aminoácidos naturales e incluye las formas D y L de los ácidos así como la forma racémica. Más específicamente, los aminoácidos contienen hasta diez átomos de carbono. Pueden contener un grupo carboxilo adicional y heteroátomos tales como nitrógeno y azufre. Preferiblemente, los aminoácidos son \alpha- y \beta-aminoácidos. El término \alpha-aminoácido se refiere a aminoácidos en los que el grupo amino se une al carbono directamente unido al grupo carboxilo, que es el carbono \alpha. El término \beta-aminoácido se refiere a aminoácidos en los que el grupo amino se une a un átomo de carbono retirado dos veces del grupo carboxilo, que es el carbono \beta. Algunos restos \alpha-aminoácido se muestran en la Tabla I en la que a los restos se les da el nombre de los aminoácidos a partir de los que se derivan.

TABLA I

2

3

Los restos \beta-aminoácido adecuados pueden ser el \beta-aminoderivado de cualquier resto \alpha-aminoácido donde el grupo amino se une al resto a través del carbono \beta en lugar del carbono \alpha relativo al grupo carboxilo, por ejemplo, ácido 3-aminopropiónico, ácido 3-amino-3-fenilpropiónico, ácido 3-aminobutírico y similares:

4

Aunque todos los compuestos de Fórmula I son inhibidores de CDK4 útiles, se prefieren ciertos compuestos. Los siguientes párrafos definen las clases preferidas.

aa) A y B son ambos oxígeno;

ab) X e Y, tomados conjuntamente, forman un enlace;

ac) R^{1} es hidrógeno;

ad) R^{5} es halógeno;

ae) R^{6} es dimetilo geminal;

af) R^{7} es -(CH_{2})_{m}-Z;

ag) R^{7} es hidroximetilo;

ah) R^{5'} es halógeno;

ai) R^{6'} es dimetilo geminal;

aj) R^{7'} es -(CH_{2})_{m}-Z;

ak) R^{7'} es hidroximetilo;

al) m es 0;

am) m es 1, 2 ó 3;

an) m es 1;

ao) Z es (alcoxi C_{1}-C_{4})carbonilo;

ap) Z es metoxicarbonilo;

aq) Z es hidroxi;

ar) Z es NR^{8}R^{9};

as) R^{8} y R^{9} tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos forman un aziridinilo, pirrolidinilo, 3-hidroxipirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, 4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-4-ilo o diazepinilo;

at) Q^{2} es un enlace sencillo carbono-carbono;

au) Q^{2} es -NR^{10}-;

av) Q^{2} es -NR^{10}-CHR^{11}-;

aw) Q^{5} es un enlace sencillo carbono-carbono;

ax) Q^{5} es -NR^{10}-;

ay) Q^{5} es -NR^{10}-CHR^{11}-;

az) Q^{1}, Q^{2} y Q^{3}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo de 6 miembros, un anillo de 7 miembros o un anillo de 8 miembros;

ba) Q^{1}, Q^{2} y Q^{3}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo no sustituido;

bb) Q^{1} es -(CH_{2})-;

bc) Q^{1} es -(CH_{2})_{2}-;

bd) Q^{3} es -(CH_{2})-;

be) Q^{3} es -(CH_{2})_{2}-;

bf) Q^{3} es -(CH_{2})_{3}-;

bg) Q^{4}, Q^{5} y Q^{6}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo de 6 miembros, un anillo de 7 miembros o un anillo de 8 miembros;

bh) Q^{4}, Q^{5} y Q^{6}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo no sustituido;

bi) Q^{6} es -(CH_{2})-;

bj) Q^{6} es -(CH_{2})_{2}-;

bk) Q^{4} es -(CH_{2})-;

bl) Q^{4} es -(CH_{2})_{2}-;

bm) Q^{4} es -(CH_{2})_{3}-;

bn) Q^{2} es un enlace sencillo carbono-carbono y Q^{5} es -NR^{10}- o -NR^{10}-CHR^{11}-;

bo) R^{10} es metanosulfonilo;

bq) R^{10} es heteroarilsulfonilo;

br) R^{10} es alquilo C_{1}-C_{4};

bs) R^{10} es hidrógeno.

Los párrafos anteriores pueden combinarse para definir nuevas clases preferidas adicionales de compuestos.

Los compuestos de Fórmula I son útiles para el tratamiento de trastornos de mamíferos, y el mamífero preferido es un ser humano.

Los especialistas en la técnica apreciarán que la introducción de ciertos sustituyentes creará asimetría en los compuestos de Fórmula I. La presente invención contempla todos los enantiómeros y mezclas de enantiómeros, incluyendo racematos. Se prefiere que los compuestos de la invención que contienen centros quirales sean enantiómeros únicos.

Las variables R^{5}, R^{5'}, R^{6}, R^{6'}, R^{7} y R^{7'} pueden seleccionarse opcionalmente entre grupos específicos. Una realización preferida de la invención son los compuestos donde no se selecciona ningún sustituyente de dichos grupos.

Los carbazoles, compuestos de Fórmula I en la que X e Y tomados conjuntamente forman un enlace, se prefieren por oxidación de la correspondiente maleimida, compuestos de Fórmula I en la que cada uno de X e Y es hidrógeno. Esta etapa oxidativa se ilustra en el Esquema I, donde el anillo denominado "A" corresponde a los anillos anulados de Fórmula I. El especialista apreciará que las transformaciones ilustradas en los siguientes esquemas no limitan los compuestos no sustituidos representados. En los siguientes esquemas se han eliminado sustituyentes para aclararlos, y no pretenden limitar de forma alguna la enseñanza de los esquemas.

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Esquema I

5

Esta transformación puede prepararse mediante varios procedimientos. Por ejemplo, la maleimida de fórmula (ii) en un disolvente apropiado, tal como ácido acético, puede tratarse con una sal de paladio tal como dicloruro de paladio, bis(trifluoroacetato) de paladio, o preferiblemente diacetato de paladio. La reacción se realiza a una temperatura de aproximadamente 60ºC a aproximadamente la temperatura de reflujo, y la mezcla se agita durante 1-24 horas. El carbazol resultante de fórmula (i) se recupera mediante técnicas de aislamiento convencionales y puede purificarse por cromatografía o por recristalización según sea necesario o se desee.

Como alternativa, una mezcla de una maleimida de fórmula (ii) en un disolvente adecuado, tal como benceno, un ácido, tal como ácido para-toluenosulfónico monohidrato, y 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ) se agita a aproximadamente la temperatura de reflujo durante 1-6 horas, después del cual la mezcla se deja enfriar a aproximadamente la temperatura ambiente y se agita durante 1-24 horas más. El carbazol resultante de fórmula (i) se aísla y se purifica mediante técnicas convencionales.

Además, una maleimida de fórmula (ii) y yodo en un disolvente adecuado, tal como dióxido, puede hacerse reaccionar mediante irradiación a través de una lámpara de mercurio de presión media. La mezcla de reacción se irradia durante de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 24 horas. El carbazol resultante de fórmula (i) puede aislarse y purificarse mediante técnicas convencionales.

Las maleimidas requeridas de fórmula (ii) pueden prepararse a partir de un éster de ácido oxoacético apropiadamente sustituido y una acetamida apropiadamente sustituida como se ilustra en el Esquema II, donde el anillo denominado "A" corresponde a los anillos anulados de Fórmula I.

Esquema II

6

Los ésteres de ácido oxoacético de fórmula (iii) se hacen reaccionar con una acetamida de fórmula (iv), en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, en presencia de una base adecuada, preferiblemente terc-butóxido potásico. La reacción de condensación se realiza a 0ºC o a temperatura ambiente, y los reactivos se agitan durante 1-24 horas. La mezcla de reacción se trata con un ácido adecuado, tal como ácido clorhídrico, después de lo cual la mezcla se agita a aproximadamente la temperatura ambiente durante 1-24 horas. La maleimida resultante (ii) puede aislarse mediante técnicas convencionales y puede purificarse por cristalización o cromatografía según sea necesario o se desee.

Las acetamidas de indol anulado requeridas (iv) pueden prepararse a partir de los correspondientes ésteres de ácido oxoacético de indol anulado (iii) por reacción con hidróxido amónico en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano o éter dietílico. La reacción se realiza a aproximadamente 0ºC durante 1-12 horas, después de lo cual la mezcla de reacción se deja calentar a aproximadamente la temperatura ambiente. La cetoamida resultante puede aislarse por técnicas convencionales y puede purificarse por cristalización o cromatografía según sea necesario o se desee. Después, esta cetoamida se reduce por reacción con un catalizador de metales preciosos, tal como paladio, e hipofosfito sódico en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, dioxano o dimetilformamida. La reacción se realiza en una atmósfera de nitrógeno aproximadamente en condiciones de reflujo durante 1-12 horas. La acetamida resultante se aísla mediante técnicas convencionales y puede purificarse por cristalización o cromatografía según sea necesario o se desee.

Los ésteres de ácido oxoacético de indol anulado (iii) pueden prepararse haciendo reaccionar un indol anulado sustituido apropiadamente con cloruro de oxalilo en un disolvente apropiado, tal como diclorometano o éter dietílico. La adición se realiza a una temperatura de aproximadamente 0ºC, y la mezcla se agita durante 30-120 minutos. Después, la mezcla se enfría a aproximadamente -78ºC y después se le añade una fuente de alcóxido, tal como metóxido sódico, en un disolvente apropiado, tal como metanol. el éster del ácido oxoacético resultante puede aislarse mediante técnicas convencionales y puede purificarse por cristalización o cromatografía según sea necesario o se desee.

Los indoles anulados requeridos se preparan mediante varios procedimientos dependiendo de la estructura específica del sistema de anillo. Las metodologías sintéticas que conducen a diversos indoles anulados se ilustran en los siguientes esquemas y se analizan en los siguientes párrafos. Las preparaciones y los ejemplos también ilustran estas vías básicas así como modificaciones de estas vías para preparar ciertos variantes sustituidos requeridos.

4,5-Dihidropirrolo[3,2,1-hi]indoles

7

Una N-aminoindolina (Wijngaarden, y col., J. Med. Chem., 36, 3693 (1993)) se trata con piruvato de etilo en un disolvente adecuado, tal como etanol, a temperatura de reflujo. Después de aproximadamente una hora, la imina de esta reacción se disuelve en un disolvente adecuado, tal como ácido acético, y se trata con un ácido de Lewis apropiado, tal como eterato de trifluoruro de boro, a temperatura de reflujo durante aproximadamente una hora. El ácido etil-pirroloindol-2-carboxílico resultante se aísla en condiciones convencionales. El éster se hidroliza, proporcionando el correspondiente ácido carboxílico en condiciones convencionales, y después se descarboxila en presencia de óxido de cobre (II) en quinolina, proporcionando compuestos de fórmula (viii).

5,6-Dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolinas

8

Una 1,2,3,4-tetrahidroquinolina apropiadamente sustituida se hace reaccionar con bromopiruvato de etilo en un disolvente apropiado, tal como dimetilformamida o tetrahidrofurano. La mezcla de reacción se agita durante 1-30 horas. El producto de esta reacción se aísla mediante técnicas convencionales y después se hace reaccionar con un haluro de magnesio apropiado, típicamente cloruro de magnesio, y con un alcohol apropiado en un disolvente apropiado, tal como tetrahidrofurano o dimetilformamida. El especialista en la técnica apreciará que la adición debe realizarse lenta y cuidadosamente, después de lo cual la mezcla de reacción resultante se agita durante 1-12 horas a aproximadamente la temperatura de reflujo. El éster del ácido carboxílico resultante se aísla mediante técnicas convencionales. Después, este éster se hidroliza y se descarboxila en condiciones convencionales, proporcionando compuestos de fórmula
(ix).

3,4-Dihidro-5-tia-2a-aza-acenaftaleno y 3,4-dihidro-5-oxo-2a-aza-acenaftaleno

9

Los compuestos de fórmula (x) se preparan comenzando con 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]tiazina o 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina mediante las mismas técnicas descritas para los compuestos de fórmula (ix). El correspondiente sulfóxido y sulfonas puede prepararse en cualquier punto conveniente de la síntesis por oxidación con un reactivo apropiado, tal como ácido meta-cloroperbenzoico.

4,5,6,7-Tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol

10

Una 1-tetralona sustituida apropiadamente se hace reaccionar con clorhidrato de hidroxilamina en condiciones convencionales, proporcionando la oxima correspondiente. Esta oxima se calienta en un ácido fuerte, tal como ácido polifosfórico, durante aproximadamente 10 minutos. La mezcla de reacción se trata con hielo y agua para precipitar la correspondiente 1,3,4,5-tetrahidro-benz[b]azepin-2-ona. Esta lactama se reduce en condiciones convencionales, proporcionando la correspondiente 2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[b]azepina. La reacción de esta amina con bromopiruvato de etilo, seguido del tratamiento con cloruro de magnesio, hidrólisis del éster y descarboxilación como se ha descrito anteriormente para los compuestos de fórmula (ix), proporciona los compuestos de fórmula (xi).

5,6-Dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indoles

11

Un indol-7-carboxaldehído sustituido apropiadamente en un disolvente apropiado, tal como 1,2-dicloroetano, se hace reaccionar con un éster metílico del aminoácido sustituido apropiadamente y con ácido acético. Esta reacción se realiza en una atmósfera de nitrógeno a aproximadamente la temperatura ambiente en presencia de un agente de reducción suave, tal como cianoborohidruro sódico o triacetoxiborohidruro sódico. La mezcla de reacción se agita durante aproximadamente 24 horas y el aminoéster resultante se aísla mediante técnicas convencionales. El resto éster se reduce al correspondiente alcohol por tratamiento con un agente de reducción adecuado, típicamente hidruro de litio y aluminio, en un disolvente apropiado, típicamente tetrahidrofurano o éter dietílico. Ahora, el resto de amina secundaria se hace reaccionar con un reactivo apropiado para introducir un grupo protector de amino apropiado "Pg", tal como un grupo formilo, un grupo acetilo, o preferiblemente un resto terc-butoxicarbonilo. Las técnicas para la introducción de estos grupos son bien conocidas para los especialistas en la técnica. Una solución de este compuesto en un disolvente apropiado, tal como diclorometano o éter dietílico, se hace reaccionar con un reactivo apropiado para activar el resto hidroxi, proporcionando un grupo saliente ("Lg"). El especialista en la técnica apreciará que los grupos salientes apropiados incluyen haluros, iones de oxonio, percloratos de alquilo, ésteres de aminoalcanosulfonato, alquilfluorosulfonatos, nonaflatos, tresilatos, triflatos y ésteres sulfónicos, preferiblemente el mesilato o el tosilato. Las técnicas para la introducción de estos grupos son bien conocidas parar los especialistas en la técnica. (Véase por ejemplo: March, "Advanced Organic Chemistry", John Wiley y Sons, Nueva York, N. Y., 1992, págs 352-362). Después, el compuesto activado se disuelve en un disolvente apropiado, tal como tetrahidrofurano o éter dietílico, y se hace reaccionar con una base fuerte, tal como hidruro potásico o hidruro sódico. La reacción se realiza en una atmósfera de nitrógeno a aproximadamente 0ºC y se agita durante 30-120ºC. El compuesto de fórmula (xii) se aísla y se purifica mediante técnicas convencionales. El especialista apreciará que los grupos protectores de nitrógeno pueden retirarse en cualquier punto conveniente de la síntesis de los compuestos de la presente invención. En la técnica se conocen bien procedimientos de retirada de un grupo protector de amino (por ejemplo, véase: T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley y Sons, Nueva York, N. Y., 1991, Capítulo 7).

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(Esquema pasa a página siguiente)

5,6-Dihidro-6H-[1,4]homodiazepino-[6,7,1-hi]indoles

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12

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Un indol-7-carboxaldehído sustituido apropiadamente en un disolvente apropiado, tal como tetrahidrofurano o tolueno, se hace reaccionar con un reactivo de metilenación apropiado a aproximadamente la temperatura ambiente. Los reactivos de metilenación adecuados incluyen reactivo de Tebbe (\mu-cloro-\mu-metilen[bis(ciclopentadienil)titanio]dimetilaluminio) y reactivos de Wittig apropiados, tales como bromuro de metiltrifenilfosfonio, en presencia de una base adecuada, tal como terc-butóxido potásico. La mezcla de reacción se agita durante 1-6 horas, después de lo cual el vinilindol resultante se aísla mediante técnicas convencionales. Después, este compuesto se hidrobora y se oxida en condiciones convencionales, proporcionando el hidroxietilindol correspondiente. Después, este alcohol se activa como se ha descrito previamente y se hace reaccionar con etanolamina o con un éster de aminoácido apropiado. Cuando se emplea aminoetanol, el alcohol resultante se activa y el compuesto se cicla como se ha descrito previamente. Cuando se emplea un éster de aminoácido, el éster resultante primero se reduce, después se activa y el compuesto se cicla como se ha descrito previamente, proporcionando compuestos de fórmula (xiii). El especialista en la técnica apreciará que los grupos protectores de nitrógeno pueden retirarse en cualquier punto conveniente de la síntesis de los compuestos de la presente invención.

Pirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooctano

13

Un 7-vinilindol sustituido apropiadamente se alquila con un bromoalqueno apropiado en condiciones convencionales y el dieno resultante se hace reaccionar con dicloruro de bis(triciclohexilfosfin)bencilidin-rutenio (IV) (catalizador de Grubb) a temperatura ambiente en un disolvente adecuado, tal como diclorometano. Después de aproximadamente 24 horas, el alqueno ciclado se aísla mediante técnicas convencionales. Después, el doble enlace puede reducirse en condiciones de hidrogenación convencionales, proporcionando los compuestos de fórmula (xiv).

[1,5]Diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indoles

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14

Un indol-7-carboxaldehído sustituido apropiadamente se aminó reductivamente con alilamina en presencia de un ácido adecuado, tal como ácido acético, y de un agente de reducción adecuado, tal como cianoborohidruro sódico o triacetoxiborohidruro sódico en un disolvente apropiado, tal como 1,2-dicloroetano. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante aproximadamente 24 horas y la amina resultante se aísla y se purifica mediante técnicas convencionales. Después, la amina se protege como se ha descrito anteriormente y el nitrógeno de indol se alquila con bromuro de alilo en condiciones convencionales. Después, el dieno se cicla como se ha descrito previamente, proporcionando el alqueno cíclico. Después, el doble enlace puede reducirse en condiciones de hidrogenación convencionales, proporcionando los compuestos de fórmula (xv).

El especialista en la técnica apreciará que los compuestos de la invención donde las variables A y B son independientemente S pueden prepararse tratando el compuesto final o un material de partida de carbonilo apropiado con [2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano-2,4-disulfuro] (Reactivo de Lawerson) o con pentasulfuro de fósforo.

Muchos de los compuestos de la presente invención no son sólo inhibidores de CDK4, sino que también son intermedios útiles para la preparación de otros compuestos de la presente invención. Por ejemplo, las aminas secundarias pueden acilarse, alquilarse o acoplarse con ácidos carboxílicos simples o con aminoácidos en condiciones convencionales. Además, los restos éster pueden reducirse en los alcoholes correspondientes. Después, estos alcoholes pueden activarse y desplazarse mediante varios nucleófilos, proporcionando otros compuestos de la invención. El especialista también apreciará que no todos los sustituyentes en los compuestos de Fórmula I tolerarán ciertas condiciones de reacción empleadas para sintetizar los compuestos. Estos restos pueden introducirse en un punto conveniente de la síntesis, o pueden protegerse y después pueden desprotegerse según sea necesario o se desee. Además, el especialista apreciará que en muchas circunstancias, el orden en el que se introducen los restos no es de vital importancia. Las siguientes preparaciones y ejemplos ilustrarán además la preparación de los compuestos de la presente invención.

Preparación I

5,6-Dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina Éster etílico del ácido 3-(3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il)-2-oxopropiónico

A una solución de 1,2,3,4-tetrahidroquinolina (75,5 ml, 0,59 mol) en tetrahidrofurano (300 ml) se le añadió gota a gota piruvato de bromoetilo (40 ml, 0,29 mol) durante 30 minutos. Después de 24 horas de agitación, la mezcla de reacción se filtró, la torta del filtro se aclaró bien con tetrahidrofurano (100 ml) y el filtrado se concentró a presión reducida a sequedad, dando 79,7 g del compuesto deseado en forma de un aceite rojo.

Éster etílico del ácido 5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-carboxílico

Se añadió cloruro de magnesio (27,7 g, 0,29 mol) a 2-metoxietanol (400 ml) y la mezcla se calentó a reflujo. Una solución de éster etílico del ácido 3-(3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il)-2-oxopropiónico (0,29 mol) en 2-metoxietanol (100 ml) y tetrahidrofurano (40 ml) se añadió lentamente a una mezcla de MgCl_{2} durante 1 hora. Después de que se completase la adición, la mezcla se agitó durante 5 horas a reflujo y después se concentró al vacío. La mezcla bruta concentrada se trató con ácido clorhídrico 2 N (500 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 400 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 20%/hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 31,6 g (48%) del compuesto deseado en forma de un sólido naranja.

EM (IS, m/z) C_{14}H_{15}NO_{2} (M^{+}+1) = 230.

Ácido 5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-carboxílico

A una solución de éster etílico del ácido 5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-carboxílico (31 g, 0,14 mol) en etanol (200 ml) y agua (70 ml) se le añadió hidróxido sódico acuoso 5 N (60 ml, 0,3 mol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura de reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 20-24ºC, se diluyó con agua (2 l) y se lavó con diclorometano (2 x 200 ml) y éter dietílico (1 x 200 ml). La fase acuosa se filtró a través de Celite y le filtrado se acidificó con HCl conc. (25 ml), precipitando el producto. El sólido se filtró, se lavó con agua (200 ml) y se secó al vacío, dando 23,2 g (85%) del compuesto deseado en forma de un sólido amarillo claro.

EM (IS, m/z) C_{12}H_{11}NO_{2} (M^{+}+1) = 202.

Descarboxilación

A una solución de ácido 5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-carboxílico (3,7 g, 18,4 mmol) en 20 ml de quinolina se le añadió cromita de cobre (1,5 g, 4,8 mmol). La mezcla resultante se agitó a 185ºC durante 4 horas y después se enfrió a 20-24ºC, se diluyó con diclorometano (100 ml) y se filtró a través de Celite. Después, el filtrado se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 2 N (2 x 50 ml) e hidróxido sódico acuoso 2 N (25 ml). La fase orgánica restante se concentró al vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 5%/Hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 1,67 g (58%) del compuesto deseado en forma de un sólido castaño claro.

^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 7,31-7,29 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,28-7,27 (d, 1H, J = 2,93 Hz), 6,9-6,86 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 6,82-6,8 (dd, 1H, J = 6,8, 1,0 Hz), 6,33-6,32 (d, 1H, J = 2,93 Hz), 4,15-4,12 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 2,92-2,89 (t, 2H, J = 6,1 Hz), 2,15-2,08 (m, 2H).

Preparación II

Éster metílico del ácido (5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

A una solución de 5,6-Dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina (1,67 g, 10,6 mmol) en 150 ml de éter dietílico acuoso a 0ºC se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (1,05 ml, 12,08 mmol) y la solución resultante se agitó a 0ºC durante 40 minutos. Después, la mezcla se enfrió a -78ºC y se le añadió lentamente metóxido sódico (42 ml, 21 mmol, 0,5 M en metanol). Después de que se completase la adición, el baño de hielo seco se retiró y la reacción se calentó a 20-24ºC durante 2 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con agua (100 ml) y las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado (50 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 ml), se filtró a través de un lecho de 5,08 cm de gel de sílice grueso y se concentró al vacío, dando 2,16 g (84%) del compuesto deseado en forma de un sólido amarillo.

EM (EI, m/z) C_{14}H_{13}NO_{3} (M^{+}-59) = 184.

Preparación III

Éster metílico del ácido (8-fluoro-6,6-dimetil-4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 8-fluoro-6,6-dimetil-4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (EN): m/e = 290 (M+1)

EA: Calculado para: C_{16}H_{16}FNO_{3}: Teórico: C, 66,43; H, 5,58; N, 4,84. Encontrado: C, 66,29; H, 5,50; N, 4,90.

Preparación IV

S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(terc-butoxi)metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol Éster metílico del ácido S-3-(terc-butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]amino)-propiónico

A una solución de indol-7-carboxaldehído (0,500 g, 3,44 mmol) en 1,2-dicloroetano (30 ml) en una atmósfera de nitrógeno se le añadieron clorhidrato del éster metílico de S-(O-terc-butil)serina (1,09 g, 5,16 mmol), ácido acético (0,206 g, 0,197 ml, 3,44 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (1,46 g, 6,88 mmol). La mezcla resultante se agitó a 20-24ºC durante 24 horas. Después, la mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de bicarbonato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se extrajo con diclorometano y se lavó con cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (3:7). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, dando 0,96 g (92%) del producto deseado en forma de un aceite.

EM (EN, m/z) (M + 1) = 305,0

S-3-(terc-Butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]amino)propan-1-ol

A una solución de éster metílico del ácido S-3-(terc-butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]amino)propiónico (0,960 g, 3,15 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) a -78ºC se le añadió gota a gota hidruro de litio y aluminio (1 M en tolueno, 6,31 ml). La solución de reacción resultante se calentó a 0ºC, se agitó durante 1 hora y después se calentó a 20-24ºC y se agitó durante 1 hora. Se enfrió a 0ºC y después se inactivó mediante la adición secuencial de metanol seguido de agua. La suspensión se filtró, se lavó con metanol y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con metanol:acetato de etilo (1:9). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 0,51 g (59%) del compuesto deseado.

EM (EN, m/z) (M-1) = 275,1, (M+1) = 277,1.

S-3-(terc-Butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]-N-(terc-butoxicarbonil]amino)propan-1-ol

Una suspensión de S-3-(terc-butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]amino)propan-1-ol (0,510 g, 1,85 mmol) y dicarbonato de di(terc-butilo) (0,480 g, 2,21 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (1:1). Las fracciones que contenían el producto se combinaron, proporcionando 0,58 g (84%) del producto deseado en forma de un aceite.

EM (EN, m/z) (M+1) = 377,1, (M-1) = 375,1.

S-3-(terc-Butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]-N-(terc-butoxicarbonil]amino)-1-(metanosulfoniloxi)propano

A una solución de S-3-(terc-butoxi)-2-(N-[(1H-indol-7-il)metil]-N-[terc-butoxicarbonil]amino)propan-1-ol (0,522 g, 1,39 mmol) en diclorometano (15 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió trietilamina (0,94 ml, 0,680 g, 6,70 mmol) seguido de la adición gota a gota de una solución de cloruro de metanosulfonilo (0,159 g, 1,39 mmol) en diclorometano (5 ml). La solución resultante se agitó a 0ºC durante 1 hora. Se añadió agua enfriada con hielo y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto bruto se usó sin purificación adicional.

EM (EN, m/z) (M-1) = 453,1

Cierre del anillo

A una solución de S-3-(terc-butoxi)-2(N-[(1H-indol-7-il)metil]-N-[terc-butoxicarbonil]amino)-1-(metanosulfoni-
loxi)propano en dimetilformamida a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió hidruro sódico (0,083 g, 2,09 mmol, suspensión al 60% en aceite). La mezcla se agitó durante 1 hora y después se repartió entre acetato de etilo y cloruro amónico acuoso saturado. La fase orgánica se separó, se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (1:1). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 0,34 g (68%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco.

EM (EN, m/z) (M + 1) = 359,1

Preparación V

Éster metílico del ácido (S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(terc-butoxi)metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

A una solución de S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(terc-butoxi)metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol
(0,330 g, 0,920 mmol) en diclorometano (10 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (0,46 ml, 0,920 mmol, 1 M en diclorometano). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1 hora y después se enfrió a -78ºC. Se añadió metóxido sódico (0,40 ml, 1,84 mmol, 4,63 M en metanol) y la mezcla de reacción resultante se calentó a temperatura ambiente. Después, la mezcla se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y después se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (1:1). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 0,35 g (85%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco.

EM (EN, m/z) (M + 1) 445,1.

Preparación VI

6-(terc-butoxicarbonil)-5-metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol

Comenzando con indol-7-carboxaldehído y clorhidrato del éster metílico de DL-alanina (0,72 g, 5,16 mmol), el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

EM (EN, m/z) (M + 1) = 287,0.

Preparación VII

Éster metílico del ácido 6-(terc-butoxicarbonil)-5-metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con 6-(terc-butoxicarbonil)-5-metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (EN, m/z) (M + 1) = 373,0

Preparación VIII

S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-terc-butoxifenil)metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol

Comenzando con indol-7-carboxaldehído y clorhidrato del éster metílico de S-(O-terc-butil)tirosina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

EM (EN, m/z) 435,1 (M+1)

Preparación IX

Éster metílico del ácido (6-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-terc-butoxifenil)metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con S-6-(terc-butoxifenil)-5-(4-terc-butoxifenil)metil-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (EN, m/z) 521,1 (M+1).

Preparación X

4,5,6,7-Tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol Oxima de 3,4-dihidro-2H-naftalen-1-ona

A una solución de \alpha-tetralona (100,0 g, 0,68 mol) en 300 ml de metanol se le añadió clorhidrato de hidroxilamina (71,0 g, 1,03 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura de reflujo durante 2 horas. La mezcla se dejó enfriar a 20-24ºC y se concentró a presión reducida. La mezcla resultante se diluyó con 1 l de agua y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se cristalizó en isopropanol, proporcionando 70,0 g (63%) del compuesto deseado en forma de un sólido blanquecino.

EM (AIF, m/z) C_{10}H_{11}NO (M^{+}+1) = 162,4.

1,3,4,5-Tetrahidrobenzo[b]azepin-2-ona

Un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 l equipado con un agitador mecánico se cargó con ácido polifosfórico neto (100 g) y el ácido se calentó a 125ºC mientras se agitaba en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió cuidadosamente oxima de 3,4-dihidro-2H-naftalen-1-ona (15,0 g, 93 mmol) para controlar la exotermia, manteniendo la temperatura por debajo de 175ºC. Después de 10 minutos de calentamiento, la mezcla se enfrió a 20-24ºC y la reacción se interrumpió con hielo y agua, generando un precipitado. La suspensión acuosa se filtró y el precipitado se lavó con agua hasta que el filtrado se volvió neutro. El filtrado sólido se secó al vacío, proporcionando 12,8 g (85%) del compuesto deseado en forma de un sólido blanquecino.

EM (EN, m/z) C_{10}H_{11}NO (M^{+}+1) = 161,9

2,3,4,5-Tetrahidro-1H-benzo[b]azepina

A una solución de 1,3,4,5-tetrahidrobenzo[b]azepin-2-ona (12,9 g, 80,0 mmol) en 720 ml de tetrahidrofurano se le añadieron 80 ml de hidruro de litio y aluminio (solución 1 M en tetrahidrofurano). La mezcla de reacción se agitó a temperatura de reflujo durante 3 horas y se enfrió a 0ºC. La reacción se interrumpió mediante la adición secuencial de 3 ml de agua, 3 ml de hidróxido sódico al 15% y 9 ml de agua. La mezcla se filtró a través de Celite y la torta de filtro se aclaró con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida, proporcionando 10,0 g (85%) del compuesto deseado en forma de un sólido naranja.

EM (AIF, m/z) C_{10}H_{13}N (M^{+}+1) = 148,2.

Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(2,3,4,5-tetrahidro-benzo[b]azepin-1-il)-propiónico

A una suspensión a 0ºC de hidruro sódico al 60% (3,0 g, 0,12 mol) en 300 ml de dimetilformamida se le añadió en pequeñas porciones 2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[b]azepina. Después de que se completase la adición de la amina, el baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a 20-24ºC durante 40 minutos. Después, se añadió bromopiruvato de etilo (22,6 ml, 0,16 mol) y la mezcla resultante se agitó a 20-24ºC durante 6 horas. Se añadieron 5 ml más de bromopiruvato de etilo y la mezcla se agitó durante 1 hora. La reacción se interrumpió mediante la adición de 50 ml de agua seguido de dilución con 1,5 l de diclorometano. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con agua (2 x 500 ml) y con cloruro sódico acuoso saturado (500 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida a 60ºC. El aceite pardo residual se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y se lavó 3 veces con agua (100 ml) y una vez con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 5-10%/hexanos, proporcionando 7,0 g (40%) del compuesto deseado en forma de un sólido blanquecino.

EM (DILL, m/z) C_{15}H_{19}NO_{3} (M^{+}) = 261,13.

Éster etílico del ácido 4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol-1-carboxílico

Se añadió cloruro de magnesio (2,55 g, 26,8 mmol) a 30 ml de 2-metoxietanol y la mezcla se calentó a reflujo. Una solución de éster etílico del ácido 2-oxo-3-(2,3,4,5-tetrahidro-benzo[b]azepin-1-il)-propiónico (7,0 g, 26,8 mmol) en 2-metoxietanol (20 ml) se añadió lentamente a una mezcla de MgCl_{2} durante 1 hora. La mezcla resultante se agitó durante 6 horas a temperatura de reflujo, se enfrió a 20-24ºC y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con 400 ml de diclorometano y se lavó con ácido clorhídrico 2 N (100 ml), seguido de bicarbonato sódico acuoso saturado (100 ml) y finalmente cloruro sódico acuoso saturado (100 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. Este residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 20%/Hexano. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 3,1 g (48%) del compuesto deseado en forma de un aceite ama-
rillo.

EM (AIF, m/z) C_{15}H_{17}NO_{2} (M^{+}+1) = 244,4.

Ácido 4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol-1-carboxílico

A una solución de éster etílico del ácido 4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol-1-carboxílico (2,0 g, 8,22 mmol) en etanol (13 ml) y agua (9 ml) se le añadieron hidróxido sódico en polvo (0,71 g, 17,8 mmol) y la mezcla resultante se agitó a reflujo durante 4 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (100 ml) y se lavó con diclorometano (2 x 50 ml). Las fases se separaron, la fase acuosa se filtró a través de Celite y el filtrado se acidificó con ácido clorhídrico concentrado. La suspensión se filtró y el sólido recuperado se lavó con agua y se secó a presión reducida, proporcionando 1,59 g (90%) del compuesto deseado en forma de un sólido
blanco.

EM (AIF, m/z) C_{13}H_{13}NO_{2} (M^{+}+1) = 216,3

Descarboxilación

A una solución de ácido 4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol-1-carboxílico (1,4 g, 6,5 mmol) en 7,5 ml de quinolina se le añadió cromita de cobre (0,55 g, 1,77 mmol). La mezcla resultante se agitó a 185ºC durante 4 horas y después se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con diclorometano y se filtró a través de Celite. El filtrado se lavó con ácido clorhídrico 2 N (2 x 25 ml) seguido de hidróxido sódico 2 N (25 ml). La fase orgánica se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 5%/Hexano, proporcionando 0,85 g (76%) del compuesto del título en forma de un sólido naranja.

EM (EI, m/z) C_{12}H_{13}N (M^{+}) = 171,4

Preparación XI

Éster metílico del ácido (4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con 4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (AIF, m/z) C_{15}H_{15}NO_{3} (M^{+}+1) = 258,2

Preparación XII

S-6-(terc-butoxicarbonil)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol

Comenzando con indol-7-carboxaldehído y etanol-amina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

EM (IS, m/z) C_{16}H_{20}N_{2}O_{2} (M^{+}+1) = 273

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Preparación XIII

Éster metílico del ácido (6-(terc-butoxicarbonil)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con S-6-(terc-butoxicarbonil)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (IS, m/z) C_{16}H_{20}N_{2}O_{2} (M^{+}+1) = 273

Preparación XIV

8,9-Deshidropirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooctano 7-Vinil-1H-indol

A 7-bromo-1H-indol (6,0 g, 30,6 mmol) en 150 ml de dimetilformamida se le añadieron tributil(vinil)estaño (9,8 ml, 33,7 mmol), trifenilfosfina (0,4 g, 1,53 mmol), cloruro de difenilpaladio (II) (1,07 g, 1,53 mmol) y cloruro de litio (4,0 g, 94,4 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió a 20-24ºC y se vertió en 150 ml de agua y 150 ml de acetato de etilo. La fase acuosa se lavó con más acetato de etilo (3 x 100 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 5-10% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 3,5 g (80%) del compuesto deseado en forma de un aceite transparente.

EM (AIF, m/z) C_{10}H_{9}N (M^{+}+1) = 144,2

1-(Pent-4-en-1-il)-7-vinil-1H-indol

A una solución a 0ºC de 7-vinilindol (5,0 g, 34,9 mmol) en 140 ml de dimetilformamida se le añadió hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite mineral) (3,5 g, 87,3 mmol). El baño de hielo se retiró y la solución se calentó a 20-24ºC y se agitó durante 30 minutos más. Se añadió gota a gota 5-bromo-1-penteno (20 ml, 175 mmol) y la agitación se continuó durante 3 horas. La solución se vertió en 150 ml de agua y 150 ml de acetato de etilo. La fase acuosa se lavó con más acetato de etilo (3 x 100 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 5-10% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 5,39 g (73%) del compuesto deseado en forma de un aceite transparente.

EM (EN, m/z) C_{15}H_{17}N (M^{+}+1) = 212

Cierre del Anillo

A una solución de 1-(Pent-4-en-1-il)-7-vinil-1H-indol (4,4 g, 20,8 mmol) en diclorometano anhidro (3,0 l) se le añadieron 1,4 g de dicloruro de bis(triciclohexilfosfina)bencilidin-rutenio (IV) (catalizador de Grubb). La solución resultante se agitó a 20-24ºC durante 24 horas. A la reacción se le añadió 1,0 g más de catalizador de Grubb y la solución se agitó durante 4 horas. Después, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 2-5% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 3,0 g (79%) del compuesto del título en forma de un aceite pardo.

^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 7,41-7,39 (dd, 1H, J = 7,81, 0,98 Hz), 7,22-7,21 (d, 1H, J = 3,42 Hz), 6,94-6,9 (d, 1H, J = 7,57 Hz), 6,81-6,8 (d, 1H, J = 2,93 Hz), 6,79 (s, 1H), 6,36-6,35 (d, 1H, J = 2,93 Hz), 5,69-5,62 (m, 1H), 4,45-4,3 (s a, 2H), 2,19-2,14 (m, 2H), 1,75-1,55 (s a, 2H).

Preparación XV

Éster metílico del ácido (8,9-deshidropirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooct-1-il)oxoacético

Comenzando con 8,9-deshidropirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooctano, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,44 (s, 1H), 8,13-8,11 (dd, 1H, J = 7,81, 0,98 Hz), 7,26-7,22 (t, 1H, J = 7,81 Hz), 7,06-7,04 (d, 1H, J = 7,33 Hz), 6,86-6,84 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,84-5,74 (m, 1H), 4,6-4,4 (s a, 4H), 3,87 (s, 3H), 2,25-2,0 (s a, 2H).

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Preparación XVI

Pirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooctano

Una solución de 8,9-deshidropirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooctano (0,66 g, 3,6 mmol) en etanol (130 ml) se hidrogenó en presencia de óxido de platino (100 mg) a presión de globo durante tres horas. La mezcla se filtró a través de Celite usando diclorometano y el filtrado se concentró a presión reducida, proporcionando 0,65 g (97%) del compuesto del título en forma de un aceite amarillo claro.

EM (EN, m/z) C_{13}H_{15}N (M^{+}+1) = 186

Preparación XVII

Éster metílico del ácido (pirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooct-1-il)oxoacético

Comenzando con pirrolo[3,2,1-il]benzo[b]azaciclooctano, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,38 (s, 1H), 8,05-8,03 (d, 1H, J = 7,81), 7,18-7,15 (t, 1H, J = 7,57 Hz), 7,03-7,01 (d, 1H, J = 6,84 Hz), 4,65-4,62 (t, 2H, J = 6,1 Hz), 3,86 (s, 3H), 3,3-3,15 (s a, 2H), 1,94-1,91 (t, 2H, J = 6,1 Hz), 1,82-1,79 (t, 2H, J = 5,86 Hz), 1,3-1,15 (s a, 2H).

Preparación XVIII

8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol N-Alil-N-[(1H-Indol-7-il)metano]amina

A una solución de indol-7-carboxaldehído 1 (4,00 g, 27,6 mmol) en 1,2-dicloroetano (120 ml) a 20-24ºC se le añadieron alilamina (2,50 ml, 33,1 mmol), ácido acético (3,4 ml) y triacetoxiborohidruro sódico (5,85 g, 27,6 mmol). La mezcla resultante se agitó a 20-24ºC durante 5 horas. Se añadieron 1,5 g más (7,1 mmol) de triacetoxiborohidruro sódico y la mezcla resultante se agitó durante una noche. La mezcla se diluyó con diclorometano (300 ml), se lavó cuidadosamente con bicarbonato sódico acuoso (100 ml) y las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con agua (100 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (100 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 10-30% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 4,21 g (82%) del compuesto deseado en forma de un aceite amarillo claro.

N-[terc-butoxicarbonil]-N-alil-N-[(1H-indol-7-il)metil]amina

A una solución a 0ºC de N-alil-N-[(1H-indol-7-il)metil]amina (4,21 g, 22,6 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) se le añadió una solución a 0ºC de dicarbonato de di-terc-butilo (4,93 g, 22,6 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (20 ml). La solución resultante se agitó durante dos horas y se dejó calentar a 20-24ºC. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (500 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con agua (2 x 150 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (100 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando 6,5 g (100%) del compuesto deseado en forma de un aceite amarillo claro.

^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,08-10,65 (m, 1H), 7,5-7,4 (m, 1H), 7,38-7,3 (s a, 1H), 6,97-6,94 (t, 1H, J = 7,32 Hz), 6,92-6,8 (s a, 1H), 6,45-6,4 (m, 1H), 5,8-5,65 (m, 1H), 5,1-5,0 (m, 2H), 4,59 (s, 2H), 3,85-3,68 (m, 2H), 1,5-1,2 (m, 9H).

EM (EN, m/z) C_{17}H_{22}N_{2}O_{2}(M^{+}+1) = 287,2

N-[terc-butiloxicarbonil]-N-alil-N-[(1-alil-1H-indol-7-il)metil]amina

A una solución a 0ºC de N-[terc-butoxicarbonil]-N-alil-N-[(1H-indol-7-il)metil]amina (6,6 g, 23 mmol) en dimetilformamida anhidra se le añadió lentamente hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite mineral, 1,75 g, 43,7 mmol). La mezcla se calentó a 20-24ºC y se agitó durante 30 minutos, seguido de la adición de bromuro de alilo (4,0 ml, 46 mmol). Después, la reacción se agitó a 20-24ºC durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (450 ml), se lavó con agua (2 x 100 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (150 ml) y la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 6,8 g (91%) del compuesto deseado en forma de un aceite pardo claro.

EM (EN, m/z) C_{20}H_{26}N_{2}O_{2} (M^{+}+Na) = 349,2

Cierre del Anillo

Comenzando con N-[terc-butoxicarbonil]-N-alil-N-[(1-alil-1H-indol-7-il)metil]amino, el cierre del anillo se realizó esencialmente como se ha descrito en la Preparación XIV.

EM (EN, m/z) C_{18}H_{22}N_{2}O_{2} (M^{+}+Na) = 321,2

Reducción

Partiendo con el alqueno preparado en el párrafo anterior, el doble enlace se redujo, proporcionando el compuesto del título esencialmente como se ha descrito en la Preparación XVI.

EM (EN, m/z) C_{18}H_{25}N_{2}O_{2}(M^{+}) = 301,2

Preparación XIX

Éster metílico del ácido (8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con 8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (IS, m/z) C_{21}H_{26}N_{2}O_{5} (M^{+}+1) = 387.

Preparación XX

8-fluoro-6,6-dimetil-4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina

Comenzando con 6-fluoro-4,4-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (Bioorg. Med. Chem. Lett. 1335-1340 (1999)), el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

EM (EN): m/e = 204,2 (M+1)

Preparación XXI

Clorhidrato de N-[metil]-11-(aminometil)-2-fluoroindolo[2,3-a]pirrolo[3,4-c]carbazol-5,7-diona

Comenzando con éster metílico del ácido (N-[terc-butoxicarbonil]-N-[metil]-7-aminometilindol-3-il)oxoacético y (6-fluoroindol-3-il)acetamida, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación XX.

EM (m/z): 421,1 (M^{+}+1)

Preparación XXII

S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-[N-[terc-butoxicarbonil]-N-[metil]-4-aminobut-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7, 1-hi]indol

Comenzando con indol-7-carboxaldehído y éster metílico de lisina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

EM (m/z): 458,0 (M^{+}+1)

Preparación XXIII

Éster metílico del ácido (S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(N-[terc-butoxicarbonil]-N-[metil]-4-aminobut-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-[N-[terc-butoxicarbonil]-N-[metil]-4-aminobut-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (m/z): 544,0 (M^{+}+1)

\newpage

Preparación XXIV

Éster terc-butílico del ácido S-4-amino-5-hidroxi-pentanoico Éster terc-butílico del ácido S-4-benciloxicarbonilamino-5-hidroxi-pentanoico

A una solución del éster \gamma-terc-butílico del ácido N-[benciloxicarbonil]-L-glutámico (3,37 g, 10,0 mmol) en 1,2-dimetoxietano (10 ml) a -15ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadieron N-metil-morfolina (1,11 ml, 10 mmol) y cloroformiato de isobutilo (1,36 ml, 10 mmol). La suspensión resultante se filtró inmediatamente y se lavó con 1,2-dimetoxietano. Al filtrado se le añadió una solución de borohidruro sódico (0,57 g, 15,0 mmol) en agua (5 ml) y después se le añadió agua (250 ml). La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró, dando 3,08 g (95%) del compuesto deseado en forma de un aceite.

EM (EN, m/z) (M+1) = 324,0, (M-1) = 321,9.

N-desprotección

Una solución de éster terc-butílico del ácido S-4-(benciloxicarbonil)amino-5-hidroxi-pentanoico (5,13 g, 15,9 mmol) en metanol (50 ml) se añadió a una suspensión de Pd/C (1,69 g, 10%) en metanol (50 ml) y la mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 6 h. El catalizador se retiró cuidadosamente por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida, proporcionando 2,95 g (98%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco.

EM (EN, m/z) (M + 1) = 189,9

Preparación XXV

S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(2-(terc-butoxicarbonil)et-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol

Comenzando con 7-carboxaldehído y éster terc-butílico del ácido S-4-amino-5-hidroxipentanoico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

EM (EN, m/z), (M+1) = 401,0

Preparación XXVI

Éster metílico del ácido (S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(2-(terc-butoxicarbonil)et-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con S-6-(terc-butoxicarbonil)-5-(2-(terc-butoxicarbonil)et-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,
1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (EN, m/z) (M + 1) = 487,0

Preparación XXVII

Éster terc-butílico del ácido N-[benciloxicarbonil]-N-[(indol-7-il)metil]-5-hidroxipentanoico

A una solución de éster terc-butílico del ácido 5-hidroxi-5-[(1H-indol-7-ilmetil)-amino]pentanoico (3,60 g, 11,3 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) se le añadieron trietilamina (4,72 ml, 33,9 mmol) y N-[benciloxicarbonil]succinimida (2,54 g, 10,2 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. Después de 2 horas de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexanos (1:1). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 3,96 g (86%) del compuesto del título en forma de un aceite.

EM (EN, m/z) 451,0 (M - 1)

Preparación XXVIII

S-6-(benciloxicarbonil)-5(2-(terc-butoxicarbonil)et-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol

Comenzando con éster terc-butílico del ácido N-[benciloxicarbonil]-N-[(indol-7-il)metil]-5-hidroxipentanoico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43 (m, 1H), 7,23 (m, 3H), 7,05-6,90 (m, 5H), 6,40 (m, 1H), 5,10-4,60 (m, 4H), 4,40-4,10 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,46 (s, 9H).

Preparación XXIX

Éster metílico del ácido (S-6-(benciloxicarbonil)-5-(2-(terc-butoxicarbonil)et-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6, 7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con S-6-(benciloxicarbonil)-5(2-(terc-butoxicarbonil)et-1-il)-5,6-dihidro-6H-[1,4]diazepino[6,7,
1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación V.

EM (EN, m/) 520,9 (M + 1).

Preparación XXX

3,4-Dihidro-5-tia-2a-aza-acenaftaleno 3,4-Dihidro-2H-benzo[1,4]tiazina.

Una solución de (2H)-1,4-benzotiazin-3(4H)-ona (20,0 g, 121,1 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) se añadió a una suspensión agitada de hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano anhidro (80 ml) en una atmósfera de nitrógeno a 0ºC. La mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas y después se vertió en una mezcla de acetato de etilo (300 ml) y hielo (500 g). La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica combinada se secó y se concentró a presión reducida, produciendo 17,68 g (96,5%) del compuesto deseado que se usó sin purificación adicional.

IS-EM, m/e 151,9 (M+1)

Formación del anillo/descarboxilación

Comenzando con 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]tiazina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

IS-EM, m/e 175,9 (M+1).

Preparación XXXI

Éster metílico del ácido (3,4-dihidro-5-tia-2a-aza-acetanftilen-1-il)oxoacético

Comenzando con 3,4-dihidro-5-tia-2a-aza-acenaftaleno, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

IS-EM, m/e 261,9 (M+1)

Preparación XXXII

1,2,3,4-tetrahidro-2,2-dimetilquinolina N-[3,3-dimetilpropin-3-il]anilina

Una mezcla de anilina (21,8 g, 234 mmol) y trietilamina (26,6 g, 263,3 mmol) en 100 ml de éter, 25 ml de agua, 0,2 g de cloruro de cobre (I) y 0,2 g de cobre bronce se preparó en una atmósfera de nitrógeno en un matraz de tres bocas equipado con un agitador mecánico. Se añadió lentamente con agitación 3-cloro-3-metil-1-butina (20 g, 195 mmol) en éter (25 ml) mientras se mantenía una temperatura interna de 10-20ºC. Después de agitar durante 2 horas más a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en una mezcla de 200 ml de éter y 100 ml de agua. La fase etérea se lavó con agua fría, se secó durante 15 minutos sobre carbonato potásico anhidro, se filtró y se secó de nuevo con perlas de hidróxido potásico durante una noche. La solución se filtró y se concentró a presión reducida.

1,2-Dihidro-2,2-dimetilquinolina

Una mezcla de N-[3,3-dimetilpropin-3-il]anilina y cloruro de cobre (3,9 g) en tolueno (140 mg) se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 4 1/2 horas. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano:hexano (1:1), proporcionando el compuesto deseado.

Reducción

Se hidrogenó 1,2-dihidro-2,2-dimetilquinolina (13,69 g, 86,0 mmol) sobre paladio al 5% sobre carbono (12,5 g) en acetato de etilo (500 ml) a temperatura ambiente y a 413,685 kPa (60 psi), dando 12,8 g (rendimiento del 92,4%) del compuesto del título.

IS-EM, m/e 162,0 (M+1)

Preparación XXXIII

6-(4-Fluorofenil)indol

Una solución desgasificada de 6-bromoindol (1,0 g, 5,1 mmol), ácido 4-fluorobencenoborónico (0,928 g, 6,63 mmol), fosfato potásico (2,7 g, 153 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,294 g, 0,255 mmol) en dimetilacetamida (50 ml) se calentó a 120ºC durante 14 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua. La suspensión se filtró, el sólido se lavó con agua y después se disolvió en acetato de etilo (100 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (1:4), dando 0,411 g (38,2%) del compuesto del título en forma de un sólido cristalino blanco.

IS-EM, m/e 209,9 (m-1)

Preparación XXXIV

Éster metílico del ácido (6-(4-fluorofenil)-1H-indol-3-il]oxoacético

Comenzando con 6-(4-fluorofenil)indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

IS-EM, m/e 295,9 (m-1).

Preparación XXXV

Éster metílico del ácido (6-(piridin-3-il)indol-3-il)oxoacético

Comenzando con 6-bromoindol y ácido piridin-3-borónico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en las Preparaciones XXXIII y XXXIV.

IS-EM, m/e 278,9 (m-1).

Preparación XXXVI

4,5-Dihidro-pirrolo[3,2,1-hi]indol y pirrolo[3,2,1-hi]indol Ácido pirrolo[3,2,1-hi]indol-2-carboxílico, 4,5-dihidro-, éster etílico

A una solución de N-amino-indolina (Wijngaarden, Ineke van, y col., J. Med. Chem., 36, 3693 (1993)) (1,0 g, 7,45 mmol) en 15 ml de etanol absoluto se le añadió piruvato de etilo (0,88 ml, 7,88 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante una hora. Después de enfriar, los disolventes se retiraron a presión reducida, dando 1,61 g (93%) del producto bruto en forma de un sólido castaño. La imina bruta (0,5 g, 2,15 mmol) se disolvió en 5 ml de -ácido acético glacial y se trató con eterato de trifluoruro de boro (0,28 ml, 2,21 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 45 minutos, se enfrió y se vertió en 25 ml de agua enfriada con hielo. A la extracción con acetato de etilo (2 x 25 ml) le siguió el lavado de las fases orgánicas combinadas con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 20 ml), agua (1 x 20 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (1 x 10 ml). Después de secar sobre sulfato sódico, los extractos de acetato de etilo se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano y se filtró a través de un lecho de gel de sílice ultrarrápido, lavando con 15 ml de metanol al 2% en diclorometano. La concentración a presión reducida dio el producto con un rendimiento del 19% en forma de un sólido amarillo.

EM (EI, m/z) C_{13}H_{13}N_{1}O_{2} (M^{+}) = 215.

Ácido 4,5-dihidro-pirrolo[3,2,1-hi]indol-2-carboxílico

A una solución del éster (2,2 g, 10,2 mmol) en 50 ml de etanol se le añadieron 50 ml de hidróxido sódico acuoso 1 N y la mezcla se calentó a reflujo durante 40 minutos. Después de enfriar en un baño de hielo, la reacción se interrumpió con 50 ml de ácido clorhídrico 1 N y se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida, dando el producto (1,78 g, 94%) en forma de un sólido amarillo. EM (EI, m/z) C_{11}H_{9}N_{1}O_{2} (M^{+}, M^{+}-CO_{2}H) = 187, 142.

Descarboxilación

Una solución del ácido carboxílico (1,5 g, 8,0 mmol) y óxido de cobre (II) (2,5 g, 31,4 mmol) en 40 ml de quinolina se calentó a 200ºC durante 90 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (300 ml), se filtró a través de Celite y se lavó con ácido clorhídrico 2,0 M (3 x 50 ml), agua (1 x 50 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (1 x 50 ml). La fase orgánica se filtró a través de una capa de gel de sílice ultrarrápido y se evaporó a 1,5 g de un aceite oscuro. La cromatografía (acetato de etilo al 1-3% en hexanos) dio 4,5-dihidro-pirrolo[3,2,1-hi]indol (0,364 g) con un rendimiento del 33% en forma de un sólido castaño.

EM (IS, m/z) C_{10}H_{9}N_{1}(M^{+}+1) = 144.

También se aislaron 0,245 g de pirrolo[3,2,1-hi]indol en forma de un sólido blanco.

EM (EI, m/z) C_{10}H_{7}N_{1} (M^{+}, M^{+}+1) = 141, 142.

Preparación XXXVII

Éster metílico del ácido (4,5-dihidropirrolo[3,2,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con 4,5-dihidropirrolo[3,2,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS, m/z) C_{13}H_{11}N_{1}O_{3} (M^{+}+1, M^{+}+2) = 230, 231.

Preparación XXVIII

(5,6-Dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acetamida (5,6-Dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacetamida

A una solución de éster metílico del ácido (5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético (0,50 g, 2,06 mmol) en 10 ml de tetrahidrofurano a 0ºC se le añadió hidróxido amónico concentrado (2 ml). El baño se retiró y la mezcla se agitó durante 3 horas. Después de diluir con 20 ml de agua, la suspensión se filtró, se lavó con 10 ml de agua seguido de 10 ml de éter dietílico y se secó a presión reducida, proporcionando 0,403 g (86%) del compuesto deseado en forma de un sólido amarillo claro.

EM (IS, m/z) C_{13}H_{12}N_{2}O_{2} (M^{+}+1) = 229

Reducción

A una solución de (5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acetamida (0,30 g, 1,31 mmol) en dioxano (6 ml) y agua (2 ml) se le añadió paladio al 10% sobre carbono (0,060 g), seguido de la adición cuidadosa de NaH_{2}PO_{2}\cdotH_{2}O (0,60 g, 5,67 mmol) y la reacción se llevó a temperatura de reflujo en una atmósfera de nitrógeno. Después de 3 horas, se añadieron 0,60 g de NaH_{2}PO_{2}\cdotH_{2}O y la reacción se calentó a reflujo durante otras 6 horas. La mezcla se enfrió, se filtró a través de una capa de Celite y se lavó bien con acetato de etilo (100 ml). La solución se concentró a presión reducida y el residuo se trituró con agua (20 ml). La suspensión resultante se filtró y el sólido recuperado se secó a presión reducida, proporcionando 0,27 g (96%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco.

EM (IS, m/z) C_{13}H_{14}N_{2}O_{1} (M^{+}+1) = 215

Preparación XXXIX

2-(6,6-Dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acetamida Ácido (6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acético

A una solución de ácido acético glacial (80 ml) y ácido clorhídrico concentrado (9 ml) se le añadieron 3,4-dihidro-4,4-dimetil-1-(2H)-quinolinamina (9,5 g, 53,9 mmol) y ácido 2-cetoglutárico (9,7 g, 65,1 mmol) y la suspensión se calentó a reflujo durante 3 horas. Después de enfriar, los disolventes se retiraron a presión reducida y el residuo se disolvió en 500 ml de acetato de etilo. La solución de acetato de etilo se lavó con agua (3 x 150 ml) y con cloruro sódico acuoso saturado (1 x 50 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con metanol al 1-4% en diclorometano. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 4,45 g (34%) del compuesto deseado en forma de una espuma castaña. Se extrajo una fracción impura con hidróxido sódico 1 N (2 x 50 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con éter dietílico (20 ml) y se hicieron ácidas con ácido clorhídrico concentrado (8 ml). Esta mezcla acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml), seguido de secado (Na_{2}SO_{4}), proporcionando 2,55 g más (19%) del producto deseado.

EM (IS, m/z) C_{15}H_{17}N_{1}O_{2} (M^{+}+1) = 244

Formación de Amida

A una solución de ácido (6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acético (5,7 g, 23,4 mmol) en 100 ml de tetrahidrofurano seco a 0ºC se le añadieron N-metilmorfolina (2,9 ml, 26,1 mmol) y 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina (CDMT, 4,5 g, 24,9 mmol) y la mezcla de reacción se dejó volver a temperatura ambiente durante una noche. Después de enfriar a 0ºC, se añadieron 4,5 g más de CDMT y la agitación se continuó a temperatura ambiente durante 2 horas más. La solución de éster activado se enfrió a -30ºC y se condensaron directamente en el matraz 25 ml de amoniaco. Después de agitar a -30ºC durante 1 hora, la reacción se dejó volver a la temperatura ambiente. La suspensión resultante se filtró y el sólido recuperado se aclaró con 250 ml de tetrahidrofurano. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se repartió entre acetato de etilo (500 ml) y agua (100 ml). La fase orgánica se lavó con hidróxido sódico 0,1 N (1 x 100 ml), agua (1 x 100 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (1 x 50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se filtró a través de una capa de 1 pulgada (2,54 cm) de gel de sílice ultrarrápido. El filtrado se concentró a presión reducida y el sólido resultante se suspendió con 50 ml de éter dietílico, se filtró y se secó a presión reducida, proporcionando 3,3 g (58%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino.

EM (IS, m/z) C_{15}H_{18}N_{2}O_{1} (M^{+}+1) = 243.

Preparación XL

2-(8-Fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acetamida

Comenzando con éster metílico del ácido 2-(8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación XXXVII.

EM (IS, m/z) C_{15}H_{17}FN_{2}O (M^{+}+1) = 261

Preparación XLI

Éster metílico del ácido (5-fenoxi-1H-indol-3-il)oxoacético

Comenzando con 5-fenoxiindol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS, m/z) C_{17}H_{13}NO_{4} (M^{+} - 1) = 294

Preparación XLII

(5,6-Difluoro-1H-indol-3-il)acetamida

Comenzando con 5,6-difluoroindol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en las Preparaciones II y XXXVII.

EM (IS, m/z) C_{10}H_{8}F_{2}N_{2}O (M^{+} + 1) = 211

Preparación XLIII

Éster metílico del ácido (5-benciloxi-1H-indol-3-il)oxoacético

Comenzando con 5-benciloxiindol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS, m/z) C_{18}H_{15}NO_{4} (M^{+} + 1) = 310.

Preparación XLIV

Éster metílico del ácido (7-(2-(triisopropilsililoxi)et-1-il)-1H-indol-3-il)oxoacético

A una solución de 7-(2-hidroxietil)indol (2,86 g, 17,7 mmol) en 25 ml de dimetilformamida seca se le añadieron imidazol (2,54 g, 37,3 mmol) seguido de cloruro de triisopropilsililo (4,35 ml, 19,7 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 3 horas. Después de diluir con hexanos (500 ml), la fase orgánica se lavó con agua (2 x 50 ml) y con cloruro sódico acuoso saturado (1 x 50 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La mezcla se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando 7-(2-(triisopropilsililoxi)et-1-il)indol. Este indol se hizo reaccionar esencialmente como se ha descrito en la Preparación II, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido amarillo.

EM (IS, m/z) C_{22}H_{33}NO_{4}Si (M^{+}+1) = 404

Preparación XLV

6-(terc-butoxicarbonil)-5,6-dihidro-6H-[1,4]homodiazepino-[6,7,1-hi]indol 7-Vinilindol

A una solución de bromuro de metil-trifenilfosfonio (5,05 g, 14,1 mmol) en tetrahidrofurano (80 ml) se le añadió terc-butóxido potásico (1 M en tetrahidrofurano, 14,1 ml, 14,1 mmol) y la reacción se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Luego, se añadió una solución preparada de 7-formilindol (1,00 g, 6,89 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) y la reacción se agitó durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (250 ml) y se lavó con una mezcla 8:1 de agua y ácido clorhídrico 1 N (2 x 100 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (100 ml) y se secó sobre sulfato sódico. La solución se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite pardo.

EM (IS, m/z) C_{10}H_{9}N (M^{+}+1) = 144

Hidroboración/oxidación

A una solución a 0ºC de 7-vinilindol 1 (0,95 g, 6,6 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (60 ml) se le añadió complejo de borano-tetrahidrofurano 1 M en tetrahidrofurano (9,95 ml, 9,95 mmol) y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Después, se añadieron hidróxido sódico 1 N (25 ml) y peróxido de hidrógeno al 30% (35 ml) y la mezcla se agitó a temperatura de reflujo durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (100 ml), se lavó con agua (50 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (2 x 50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 50% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 0,60 g (56%) del compuesto del título en forma de un aceite amarillo.

EM (IS, m/z) C_{10}H_{11}NO (M^{+}+1) = 162.

Activación del alcohol

Una solución de 7-(2-hidroxiet-1-il)indol (0,54 g, 3,34 mmol) y trietilamina (2,3 ml, 16,7 mmol) en diclorometano (45 ml) se agitó a 0ºC. A esto se le añadió gota a gota una solución preparada de cloruro de metanosulfonilo (0,29 ml, 3,68 mmol) en diclorometano (5 ml) durante 30 minutos y la reacción se agitó durante 2 horas más a temperatura ambiente. Después de que se completase, la reacción se diluyó con diclorometano (50 ml), se lavó con agua (30 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (2 x 30 ml) y se secó sobre sulfato sódico. Después, el agente secante se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida.

Desplazamiento nucleófilo

A una solución de 7-(2-(metanosulfoniloxi)et-1-il)indol (0,79 g, 3,3 mmol) en etanol (50 ml) se le añadió etanolamina (5 ml, 82 mmol) y la reacción se agitó a temperatura de reflujo durante una noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo (150 ml), se lavó con agua (3 x 50 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (2 x 50 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando 0,57 g (85%) de 7-(2-(N-[2-hidroxiet-1-il]amino)et-1-il)indol en forma de un sólido pardo claro.

EM (IS, m/z) C_{12}H_{16}N_{2}O (M^{+}+1) = 205

Formación del anillo

Comenzando con 7-(2-(N-[2-hidroxiet-1-il]amino)et-1-il)indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación IV.

EM (IS, m/z) C_{17}H_{22}N_{2}O_{2} (M^{+}+1)

Preparación XLVI

Éster metílico del ácido (6-(terc-butoxicarbonil)-5,6-dihidro-6H-[1,4]homodiazepino-[6,7,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con 6-(terc-butoxicarbonil)-5,6-dihidro-6H-[1,4]homodiazepino[6,7,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS, m/z) C_{20}H_{24}N_{2}O_{5} (M^{+}+1) = 373

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Preparación XLVII

6-((Triisopropilsililoxi)metil)indol Éster metílico del ácido indolo-6-carboxílico

A una solución de ácido indolo-6-carboxílico (39,5 g, 245 mmol) en metanol (200 ml) y diclorometano (750 ml) se le añadió gota a gota (trimetilsilil)diazometano 2 M en hexanos (160 ml, 320 mmol) durante 1 hora. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Al día siguiente, la reacción se concentró hasta un aceite bruto pardo espeso que se diluyó con acetato de etilo (500 ml) y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (2 x 200 ml) y se secó sobre sulfato sódico. Después, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida, formando una suspensión. La suspensión se filtró, proporcionando 43 mg del compuesto deseado en forma de un sólido blanquecino.

6-(Hidroximetil)indol

A una solución de éster metílico del ácido indolo-6-carboxílico (20,0 g, 114 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (1,6 l) en agitación en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente se le añadió cuidadosamente hidruro de litio y aluminio (8,7 g, 230 mmol) mientras se purgaba con nitrógeno. Después de esta adición, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y después se enfrió a 0ºC. Esta mezcla se trató secuencialmente con agua (9 ml), hidróxido sódico al 15% (9 ml) y más agua (25 ml). La suspensión resultante se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 30%-60% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 16,0 g (95%) del compuesto deseado en forma de un sólido blanquecino.

IS-EM, m/e 146,0 (m-1).

Sililación

A una solución de 6-(hidroximetil)indol (16,0 g, 110 mmol) en diclorometano (800 ml) en agitación a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió trietilamina (22,5 ml, 160 mmol). Luego, se añadió lentamente una solución preparada de trifluorometanosulfonato de triisopropilsililo (30,5 ml, 115 mmol) en diclorometano (200 ml) usando un embudo de adición. La reacción se agitó a 0ºC durante 3 horas. Después, la reacción se diluyó con diclorometano (200 ml), se lavó con agua (2 x 200 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (2 x 200 ml) y se secó sobre sulfato sódico. La solución se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando el compuesto del título.

IS-EM, m/e 302 (m-1).

Preparación XLVIII

Éster metílico del ácido (6-((triisopropilsililoxi)metil)indol-3-il)oxoacético

Comenzando con 6-((triisopropilsililoxi)metil)indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

IS-EM, m/e 388 (m-1)

Preparación XLIX

9-Cloro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina 5-Cloro-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

Una mezcla de 5-cloroquinilina (10,0 g) y óxido de platino (50 mg) en ácido acético se agitó en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico y se filtró a través de Celite. Los volátiles se retiraron a presión reducida y el residuo se repartió entre bicarbonato sódico acuoso saturado y acetato de etilo (3 x 300 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó sobre gel de sílice y las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 7,0 g (69%) del compuesto deseado.

EM (EI m/z) C_{9}H_{10}ClN (M+1)

Formación del anillo/descarboxilación

Comenzando con 5-cloro-1,2,3,4-tetrahidroquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

EM (EI m/z) C_{11}H_{10}ClN (M+) 192,1

Análisis para C_{11}H_{10}ClN:

Calculado:	C, 68,93;	H, 5,25;	N, 7,30;
Encontrado:	C, 69,18;	H, 5,25;	N, 6,97.

Preparación L

Éster metílico del ácido (9-cloro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 9-cloro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS m/z) C_{14}H_{12}ClNO_{3} (M+1) 278

Análisis para C_{14}H_{12}ClNO_{3}:

Calculado:	C, 60,55;	H, 4,36;	N, 5,04;
Encontrado:	C, 60,62;	H, 4,46;	N, 5,00.

Preparación LI

8-Cloro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina

Comenzando con 6-cloroquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación XLVIII.

EM (IS, m/z) C_{11}H_{10}ClN (M+) 191,9

Preparación LII

Éster metílico del ácido (8-cloro-5,6-dihidro-4H-pirrolo-[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 8-cloro-5,6-dihidro-4H-pirrolo-[3,2,1-il]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS, m/z) C_{14}H_{12}ClNO_{3} (M+1) 277,8

Análisis para C_{14}H_{12}ClNO_{3}:

Calculado:	C, 60,55;	H, 4,36;	N, 5,04;
Encontrado:	C, 60,70;	H, 4,35;	N, 4,83.

Preparación LIII

5-Fluoro-1,2,3,4-tetrahidroquinolina 5-Fluoroquinolina

A una suspensión de 5-aminoquinolina (50 mg, 347 mmol) en HBF_{4} al 48% (200 ml) a 0ºC se le añadió en porciones nitrito sódico. Esto se agitó durante 1 hora y después se vertió en 1:1 de acetato de etilo/éter dietílico (500 ml). La suspensión resultante se filtró y el sólido se secó. Este sólido (82,5 g, 338 mmol) se añadió en porciones a xileno a temperatura de reflujo (1 l), se agitó durante 2 horas y después se dejó enfriar. El xileno se retiró por decantación y el residuo se disolvió en ácido clorhídrico 1 N (600 ml). Después de la neutralización con carbonato sódico, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 x 500 ml). Los extractos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y los volátiles se retiraron a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con éter dietílico al 10-20% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 28,1 g (55%) del compuesto deseado.

EM (EI, m/z) C_{9}H_{6}FN (M+1) 148,0

Reducción

Una mezcla de 5-flurooquinolina (28,1 g) y paladio al 5% sobre carbono (5,6 g) en metanol se agitó durante una noche a 40ºC a 413,685 kPa (60 psi) de hidrógeno. La mezcla se filtró a través de celite y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 5-10% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 22,5 g (78%) del compuesto del título.

EM (EI, m/z) C_{9}H_{10}FN (M+1) 152,0

Preparación LIV

7-Fluoro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina

Comenzando con 5-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

EM (EI, m/z) C_{11}H_{10}FN (M+1) 176,1

Análisis para C_{11}H_{10}FN:

Calculado:	C, 75,40;	H, 5,75;	N, 7,99;
Encontrado:	C, 75,04;	H, 5,64;	N, 7,95.

Preparación LV

Éster metílico del ácido (7-fluoro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 7-fluoro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (EI, m/z) C_{14}H_{12}FNO_{3}: (M+1) 262,1

Análisis para C_{14}H_{12}FNO_{3}:

Calculado:	C, 64,36;	H, 4,63;	N, 5,36;
Encontrado:	C, 64,07;	H, 4,56;	N, 5,06.

Preparación LVI

6-Fluoro-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

Comenzando con 6-aminoquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación LIII.

EM (EI, m/z) C_{9}H_{10}FN (M+1) 152,0.

Preparación LVII

8-Fluoro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina

Comenzando con 6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

EM (EI, m/z) C_{11}H_{10}FN (M^{+}) 175,1

Análisis para C_{11}H_{10}FN:

Calculado:	C, 75,40;	H, 5,75;	N, 7,99;
Encontrado:	C, 75,95;	H, 5,84;	N, 8,20.

Preparación LVIII

Éster metílico del ácido (8-fluoro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 8-fluoro-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (EI, m/z) C_{14}H_{12}FNO_{3} (M+1) 262,1

Análisis para C_{14}H_{12}FNO_{3}:

Calculado:	C, 64,36;	H, 4,63;	N, 5,36;
Encontrado:	C, 64,01;	H, 4,60;	N, 5,05.

Preparación LIX

N-[terc-butoxicarbonil]-2-(1H-indol-6-il)etilamina Indolo-6-carboxaldehído

A una solución de 6-cianoindol (15,0 g) e hipofosfito sódico (90 g) en agua (326 ml), ácido acético (326 ml) y piridina (652 mg) se le añadió un catalizador Níquel Raney y la mezcla se agitó a 45ºC durante 45 minutos. La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml). Los extractos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se cristalizó en una mezcla de diclorometano y hexanos, proporcionando 13,6 g (89%) del compuesto del título.

EM (EI, m/z) C_{9}H_{7}NO (M+1) 145,9

6-(2-Nitrovinil)-1H-indol

Una mezcla de indolo-6-carboxaldehído (2,8 g), nitrometano (30 ml) y acetato amónico (0,560 g) se agitó a 100ºC durante 30 minutos. El exceso de nitrometano se retiró a presión reducida y el residuo se lavó con agua, se disolvió en acetato de etilo (500 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 50 ml. Después, esta solución se diluyó con éter de petróleo y la suspensión resultante se filtró y se secó, proporcionando 3,3 g (91%) del compuesto del título.

EM (EI, m/z) C_{10}H_{8}N_{2}O_{2} (M-1) 186,9

2-(1H-Indol-6-il)etilamina

A una solución de 6-(2-Nitrovinil)-1H-indol (1,0 g) en tetrahidrofurano (100 ml) se le añadió en porciones hidruro de litio y aluminio (0,95 g) y la mezcla resultante se agitó a temperatura de reflujo durante 1 hora. La mezcla de reacción se trató secuencialmente con agua (0,95 g), hidróxido sódico al 15% (0,95 ml) y agua (2,85 ml). La suspensión resultante se filtró y el filtrado se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (100 ml) y cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 0,525 g (62%) del compuesto
deseado.

EM (EI, m/z) C_{10}H_{12}N_{2} (M+1) 160,9

Protección de nitrógeno

A una solución de 2-(1H-Indol-6-il)etilamina (0,50 g) en acetonitrilo (25 ml) se le añadieron dimetilaminopiridina seguido de dicarbonato de di-terc-butilo (45 mg). Después de agitar a temperatura ambiente durante 24 horas, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (500 ml), se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (200 ml), agua (2 x 200 ml) y cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 20-40% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 0,42 g (52%) del compuesto del título.

EM (EI, m/z) C_{15}H_{20}N_{2}O_{2} (M-1) 258,9

Preparación LX

Éster metílico del ácido (6-(N-[terc-butoxicarbonil]-2-aminoetil)-1H-indol-3-il)-oxoacético

Comenzando con N-[terc-butoxicarbonil]-2-(1H-indol-6-il)etilamina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (EI, m/z) C_{18}H_{22}N_{2}O_{5} (M-1) 345,1

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Preparación LXI

5-(Hidroximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina Éster metílico del ácido 4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina-5-carboxílico y éster metílico del ácido 6H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico

A una solución de 7-formilindol (30 g, 0,206 mol) en dimetilformamida (930 ml) se le añadió carbonato de cesio (148,2 g, 0,454 mol) y la mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió 3-bromopropionato de metilo (51,6 g, 0,308 mol) y la mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante 24 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se filtró a través de una capa de Celite. El filtrado se lavó con agua y cloruro sódico acuoso saturado y las fases acuosas se extrajeron de nuevo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se pasó a través de un lecho corto de sílice y se concentró a presión reducida. La recristalización del producto bruto en cloroformo y hexanos dio el éster metílico del ácido 4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico (17 g, rendimiento del 38,7%). La cromatografía del agua madre dio más éster metílico del ácido 4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico (1,27 g, rendimiento del 2,9%) y éster metílico del ácido 6H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico (0,51 g, rendimiento del 1,2%).

Éster metílico del ácido 4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina-5-carboxílico, ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 3,82 (s, 3H), 5,27 (d, J = 1,47 Hz, 2H), 6,45 (d, J = 2,83 Hz, 1H), 6,89\sim6,93 (m, 2H), 7,05 (d, J = 2,93 Hz, 1H), 7,45 (dd, J_{1} = 2,45 Hz, J_{2} = 6,36 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 1,95 Hz, 1H); EM (EN, m/z) C_{13}H_{11}NO_{2} 121,2 (M^{+}+1).

Éster metílico del ácido 6H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico, ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 400 MHz) \delta 3,73 (s, 3H), 3,94 (d, J = 1,0 Hz, 2H), 6,38 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 2,94 Hz, 1H), 7,02 (t, J = 7,58 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 7,82 Hz, 1H), 7,73 (t, J = 1,46 Hz, 1H).

Éster metílico del ácido 5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico

El éster metílico del ácido 4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico (10,9 g, 51,1 mmol) y paladio sobre carbono (5%, 1,1 g) se pusieron en tetrahidrofurano (300 ml) y la mezcla se agitó a 413,685 kPa (60 psi) de hidrógeno a temperatura ambiente durante 8 horas. Se añadió más paladio sobre carbono (5%, 0,6 g) y la mezcla se agitó a 413,685 kPa (60 psi) de hidrógeno durante 15 horas más. La filtración y la concentración del filtrado dieron el compuesto deseado.

Reducción

A una solución de éster metílico del ácido 5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-5-carboxílico (8,78 g, 40,8 mmol) en tetrahidrofurano (420 ml) a 0ºC se le añadió gota a gota una solución de hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano (1,0 Mm, 100 ml, 100 mmol) y la mezcla se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la reacción se interrumpió cuidadosamente con agua. La mezcla se pasó a través de un lecho corto de Celite y la concentración del filtrado dio el compuesto deseado.

EM (electronebulización, m/z) C_{12}H_{13}NO: 188,1 (M^{+}+1), 186,1 (M^{+}-1).

Preparación LXII

Éster metílico del ácido (5-(terc-butildimetilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético y éster metílico del ácido (5-hidroximetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il]oxoacético

A una solución de 5-(hidroximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina (47 mmol) en diclorometano (143 ml) a 0ºC se le añadieron cloruro de terc-butildimetilsililo (7,63 g, 49,4 mmol) seguido de trietilamina (7,92 ml, 56,4 mmol) y dimetilaminopiridina (0 ,58 g, 4,7 mmol). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. La reacción se interrumpió con agua, se extrajo con diclorometano y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio. La fase orgánica se concentró a presión reducida, proporcionando 5-(terc-butildimetilsililoxi-metil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina. Este material se trató esencialmente como se ha descrito en la Preparación II, proporcionando los compuestos del título.

Éster metílico del ácido (5-(terc-butildimetilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético: ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,00 (s, 6H), 0,85 (s, 9H), 2,45\sim2,40 (m, 1H), 2,83\sim2,76 (m, 1H), 3,00\sim2,90 (m, 1H), 3,58\sim3,53 (m, 1H), 3,74 (dd, J_{1} = 4,9 Hz, J_{2} = 10,27 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 4,01\sim3,95 (m, 1H), 4,30\sim4,27 (m, 1H), 7,01 (dd, J_{1} = 1,0 Hz, J_{2} = 7,33 Hz, 1H), 7,22\sim7,18 (m, 1H), 8,09 (d, J = 8,31 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H).

Éster metílico del ácido (5-hidroximetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il]oxoacético: EM (EN, m/z) C_{15}H_{15}NO_{4}: 274,1 (M^{+}+1)

Preparación LXIII

4-Hidroximetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina 2-Hidroximetil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

Se añadió en porciones borohidruro sódico (21,7 g, 0,57 mol) a una solución de quinolina-2-carboxaldehído (30 g, 0,191 mol) en etanol (300 ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y se inactivó con agua. Los volátiles se retiraron a presión reducida y el residuo se disolvió en acetato de etilo, se lavó con agua y con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando el compuesto deseado y 2-(hidroximetil)quinolina. Una solución de la 2-(hidroximetil)quinolina recuperada en etanol (250 ml) y tetrahidrofurano (250 ml) se hidrogenó a 413,685 kPa (60 psi) en presencia de platino al 5% sobre carbono a 40ºC durante 48 horas. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida, proporcionando el compuesto del título.

^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,64\sim1,74 (m, 1H), 1,85\sim1,91 (m, 1H), 1,4\sim2,3 (a, 2H), 2,68\sim2,75 (m, 1H), 2,78\sim2,85 (m, 1H), 3,40\sim3,46 (m, 1H), 3,51\sim3,56 (m, 1H), 3,73 (dd, J_{1}= 3,91 Hz, J_{2} = 10,26 Hz, 1H), 6,51 (dd, J_{1} = 1,0 Hz, J_{2} = 7,83 Hz, 1H), 6,61 (dt, J_{1} = 1,0 Hz, J_{2} = 7,33 Hz, 1H), 6,93\sim6,98 (m, 2H).

Formación del anillo/descarboxilación

Comenzando con 2-hidroximetil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

EM (EN, m/z) 188,1 (M^{+}+1), 186,1 (M^{+}-1)

Preparación LXIV

Éster metílico del ácido (4-hidroximetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético y éster metílico del ácido (4-(terc-butildimetilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il]oxoacético

Comenzando con 4-hidroximetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina, los compuestos del título se prepararon esencialmente como se ha descrito en la Preparación LXI.

Éster metílico del ácido (4-hidroximetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético: ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,47 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,81 Hz, 1H), 7,18 (t, J = 7,33 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 6,84 Hz, 1H), 4,43\sim4,40 (m, 1H), 3,98\sim3,88 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,00\sim2,93 (m, 2H), 2,38 (a, 1H), 2,24\sim2,18 (m, 2H).

Éster metílico del ácido (4-(terc-butildimetilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il]oxoacético: ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,49 (s, 1H), 8,18 (d, J = 7,33 Hz, 1H), 7,27 (t, J = 7,58 Hz, 1H), 7,07 (dd, J_{1} = 1,0 Hz, J_{2} = 7,33 Hz, 1H), 4,44\sim4,41 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,92\sim3,82 (m, 2H), 3,01\sim2,98 (m, 2H), 2,26\sim2,23 (m, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).

Preparación LXV

6-(terc-butildifenilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-I,j]quinolina 4-(Hidroximetil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

Comenzando con quinolina-4-carboxaldehído, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación LXII.

^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,85\sim2,00 (m, 2H), 2,82\sim2,90 (m, 1H), 3,15\sim3,26 (m, 2H), 3,66\sim3,75 (m, 2H), 6,43 (d, J = 7,33 Hz, 1H), 6,55 (dt, J_{1} = 1,50 Hz, J_{2} = 7,33 Hz, 1H), 6,92 (dt, J_{1} = 1,50 Hz, H_{2} = 7,82 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 7,33 Hz, 1H).

4-(terc-Butildifenilsililoximetil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

A una solución de 4-(hidroximetil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (16,07 g, 0,098 mol) en diclorometano (100 ml) a 0ºC se le añadieron secuencialmente trietilamina (16,3 ml, 0,12 mol), cloruro de terc-butildifenilsililo (28,4 g, 0,103 mol) y 4-(dimetilamino)piridina (0,6 g, 4,9 mmol). Después de 30 minutos, la solución se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (200 ml), se lavó con agua (50 ml) y con una solución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml). Las fases orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 22,1 g (56%) del compuesto deseado.

Formación del anillo/descarboxilación

Comenzando con 4-(terc-butildifenilsililoxi)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación I.

EM (EN, m/z) 426,1 (M^{+}+1)

Preparación LXVI

Éster metílico del ácido 6-(terc-butildifenilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-I,j]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 6-(terc-butildifenilsililoximetil)-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-I,j]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (EN, m/z) 512,2 (M^{+}+1)

Preparación LXVII

6-(Hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol

Comenzando con indolo-7-carboxaldehído y 4-bromobutirato de metilo, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación LXI.

^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,78\sim1,82 (m, 1H), 2,10\sim2,30 (m, 2H), 2,90\sim3,00 (m, 1H), 3,10\sim3,20 (m, 1H), 3,57\sim3,60 (m, 2H), 3,94\sim4,05 (m, 1H), 4,30\sim4,40 (m, 1H), 6,36 (d, J = 3,43 Hz, 1H), 6,87\sim6,93 (m, 3H), 7,38\sim7,40 (m, 1H)

Preparación LXVIII

Éster metílico del ácido (6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidroazepino[3,2,1-hi]indol-1-il)oxoacético

Comenzando con 6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidro-azepino[3,2,1-hi]indol, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (EN, m/z) C_{16}H_{17}NO_{4} 288,1 (M^{+}+1), 286,2 (M^{+}-1)

Preparación LXIX

5,5-Dimetil-4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina

Comenzando con 3,3-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (J. Chem. Soc. (Perkin I) 1635-1640 (1987)), el compuesto del título se preparó como se ha descrito en la Preparación I.

Preparación LXX

Éster metílico del ácido (5,5-dimetil-4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxoacético

Comenzando con 5,5-dimetil-4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolina, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en la Preparación II.

EM (IS): m/e 272 (M+1)

Ejemplo 1 3-(8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol-1-il)-4-(4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin- 1-il)pirrolo-2,5-diona

A una solución a 0ºC de éster terc-butílico del ácido 3-metoxioxalil-1,10-diaza-triciclo[6.6.1.04,15]pentadeca-2,4,6,8(15)-tetraeno-10-carboxílico (0,30 g, 0,78 mmol) y 2-(5,6-Dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acetamida (0,16 g, 0,74 mmol) en tetrahidrofurano (4 ml) en una atmósfera de nitrógeno se le añadió t-butóxido potásico 1 M en tetrahidrofurano (2,22 ml, 2,22 mmol). La reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de que se consumiera el éster terc-butílico del ácido 3-metoxioxalil-1,10-diaza-triciclo[6.6.1.04,15]pentadeca-2,4,6,8(15)-tetraeno-10-carboxílico, se añadió lentamente HCl 1 N (2,25 ml) durante 5 horas y la reacción se agitó durante una noche. Al día siguiente, se añadió de nuevo lentamente HCl 1 N (0,45 ml) durante 5 horas mientras se controlaba la desprotección de la amina por cromatografía de capa fina. Después de observar este producto secundario desprotegido, la reacción se diluyó en acetato de etilo (50 ml), se lavó con agua (2 x 25 ml) y después con salmuera (2 x 25 ml)y se secó sobre sulfato sódico. Después de la filtración y de la concentración al vacío, el producto bruto se purificó sobre una columna ultrarrápida (acetato de etilo al 40%:hexanos), dando el compuesto del título (0,050 g) con un rendimiento del 12% en forma de un sólido rojo.

EM (IS, m/z) C_{33}H_{34}N_{4}O_{4} (M^{+}+1) = 451.

Ejemplo 2 Clorhidrato de 3-([1,5]diazeperhidrononino[8,9,1-hi]indol-1-il)-4-(4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)pi- rrolo-2,5-diona

Se trató 3-(8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol-1-il)-4-(4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)pirrolo-2,5-diona (0,030 g, 0,06 mmol) con HCl 4 N en dioxano (5 ml) durante 2 horas. Después, el disolvente se evaporó, dando el compuesto del título (0,020 g) con un rendimiento del 77% en forma de un sólido naranja.

EM (IS, m/z) C_{25}H_{20}N_{4}O_{2}\cdotHCl (M^{+}+1) = 409.

Ejemplo 3

15

A una solución de 3-(8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol-1-il)-4-(4,6-dihidro-4H-pirro- lo[3,2,1-il]quinolin-1-il)pirrolo-2,5-diona (0,045 g, 0,082 mmol) en ácido acético (2,5 ml) se le añadió acetato de paladio (0,021 g, 0,09 mmol). La reacción se agitó a 60ºC durante 24 horas. Después, se añadió más acetato de paladio (0,010 g, 0,045 mmol) y la mezcla se agitó durante 24 horas más a 60ºC. Al tercer día, se añadió una porción final de acetato de paladio (0,010 g, 0,045 mmol) y la reacción se agitó a 60ºC durante 5 horas. Después de que se completase la reacción, se diluyó con metanol (50 ml) y el sólido bruto se filtró. Después, este sólido se purificó sobre una columna gruesa de sílice (tetrahidrofurano al 60%:tolueno), dando 17 mg del carbazol sólido amarillo Boc-protegido que después se trató con HCl (4 N en dioxano, 0,5 ml, 2 mmol) y diclorometano (0,5 ml). La suspensión se agitó durante 3 horas y se concentró a presión reducida y el sólido resultante se suspendió en diclorometano y se filtró, dando el compuesto deseado (0,012 g) con un rendimiento del 30% en forma de un sólido amarillo.

EM (IS, m/z) C_{28}H_{24}N_{4}O_{2}\cdotHCl (M^{+}+1-HCl) = 449.

Ejemplo 4 Éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico

Comenzando con 2-(5,6-dihidro-2H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)acetamida y éster terc-butílico del ácido 7-metoxi-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1.

Ejemplo 5

16

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 3.

EM (IS, m/z) C_{26}H_{20}N_{4}O_{2}\cdotHCl (M^{+}+1-HCl) = 421.

Ejemplo 6 Éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-carbamoilmetil-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico y éster metílico del ácido (5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)oxo-acético, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1.

IS-EM, m/e 549,3 (m-1).

Ejemplo 7 3-(5,5-Dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7- il)-pirrolo-2,5-diona

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico, el compuesto del título desprotegido se preparó esencialmente como en el Ejemplo 2.

IS-EM, m/e 451,5 (M+1).

Ejemplo 8

17

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como en el Ejemplo 3.

IS-MS, m/e 449,3 (M+1).

Ejemplo 9 Éster terc-butílico del ácido 7-[4-(8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrolo-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-carbamoilmetil-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico y éster metílico del ácido (8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-oxo-acético, el compuesto del título se preparó esencialmente como en el Ejemplo 1.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta 1,29 (9H, s), 1,37 (6H, s), 1,93 (2H, t, J = 4,2 Hz), 3,85 (2H, a), 4,19 (2H, a), 4,44 (2H, a), 4,78 (1H, s), 4,81 (1H, s), 6,05-6,12 (1H, m), 6,6 (1H, t, J = 7,2 Hz), 6,75 (1H, t, J = 8,4 Hz), 6,81 (1H, d, J = 10,0 Hz), 6,85-6,89 (1H, s), 7,66 (1H, s), 7,87 (1H, d, J = 14,4 Hz), 10,93 (1H, s).

Ejemplo 10 3-(8-Fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi] indol-7-il)-pirrolo-2,5-diona

Comenzando con Éster terc-butílico del ácido 7-[4-(8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrolo-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 2.

IS-EM, m/e 567,3 (m-1).

Ejemplo 11

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18

\vskip1.000000\baselineskip

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrolo-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 3.

IS-MS, m/e 467,2 (M+1).

Ejemplo 12 Éster terc-butílico del ácido 7-[4-(6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepin[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-metoxioxalil-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-1-carboxílico y 2-(6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-acetamida, el compuesto del título se preparó esencialmente como en el Ejemplo 1.

IS-EM, m/e 549,4 (m-1).

Ejemplo 13 3-(6,6-Dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7- il)-pirrolo-2,5-diona

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepin[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como en el Ejemplo 2.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta 1,29 (6H, s), 1,94 (2H, t, J = 3,2 Hz), 3,63-3,70 (2H, m), 4,22 (2H, t, J = 3,2 Hz), 4,56 (2H, a), 4,64 (2H, s), 6,39 (1H, d, J = 8,0 Hz), 6,67 (1H, t, J = 7,2 Hz), 6,76 (1H, t, J = 7,2 Hz), 6,95 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,04 (1H, d, J = 7,2 Hz), 7,67 (1H, s), 7,86 (1H, s), 9,71 (2H, a), 10,95 (1H, s).

Ejemplo 14

19

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepin[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como en el Ejemplo 3.

IS-EM, m/e 449,3 (M+1).

Ejemplo 15 Éster terc-butílico del ácido 7-[4-(4,4-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-carbamoilmetil-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico y éster metílico del ácido (4,4-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-oxo-acético, el compuesto del título se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1.

IS-EM, m/e 549 (m-1).

Ejemplo 16 3-(4,4-Dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7- il)-pirrolo-2,5-diona

Comenzando con éster terc-butílico del ácido 7-[4-(4,4-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolo-2-carboxílico, el compuesto del título se preparó esencialmente como en el Ejemplo 2.

IS-EM, m/e 541,5 (M+1).

La capacidad de los compuestos de Fórmula I para inhibir la actividad de CDK4 se demuestra mediante los siguientes ensayos.

Ensayo de la actividad quinasa de la ciclina D1-cdk4 con el péptido ING como sustrato

La actividad de quinasa de la ciclina D1-cdk4 de un compuesto se ensayó preparando una reacción de 100 \mul en las siguientes concentraciones: Hepes 35 mM a pH 7,0, MgCl_{2} 10 mM, ATP 300 \muM, péptido ING 200 \muM, 1,0 uCi de \gamma-^{33}P-ATP, 4,34 \mug de la enzima ciclina D-cdk4, DMSO al 4% y diversas concentraciones de inhibidor. La reacción se incubó a temperatura ambiente (aproximadamente 23,33ºC (74ºF)) durante 60 minutos y después se terminó mediante la adición de 100 \mul de ácido fosfórico al 10%. Después, la reacción se filtró a través de una Placa Millipore Multiscreen-PH - Número de Catálogo MAPH NOB 10, y la placa se lavó 2 veces con 320 \mul cada vez de ácido fosfórico al 0,5%, seguido de la adición de 100 \mul de fluido de escintilación y cuantificación sobre un contador de escintilación Packard Insruments, Top Count. Los ejemplos representativos de los resultados de estos experimentos se resumen en la siguiente tabla.

TABLA II

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20

21

Ensayo de la actividad quinasa de la ciclina D1-cdk4 con la proteína Rb21 como sustrato

La actividad quinasa de la ciclina D1-cdk4 de un compuesto se ensayó preparando una reacción de 100 \mul en las siguientes concentraciones: Hepes 20 mM a pH 7,0, MgCl_{2} 10 mM, ATP 30 \muM, 5 \mug de proteína Rb21 (Santa Cruz Biotech, Nº de catálogo sc-4112), 1,0 uCi de \gamma-^{33}P-ATP, 1,09 \mug de la enzima ciclina D-cdk4, DMSO al 4% y diversas concentraciones de inhibidor. La reacción se incubó a temperatura ambiente (aproximadamente a 23,33ºC (74ºF)) durante 60 minutos y después se terminó mediante la adición de 100 \mul de ácido tricloroacético al 25%. Después, la reacción se filtró a través de una Placa Millipore Multiscreen-FC - Número de catálogo MAFC NOB 10, y la placa se lavó 2 veces con 320 \mul cada vez de ácido tricloroacético al 10%, seguido de la adición de 100 \mul de fluido de escintilación y cuantificación sobre un contador de escintilación Packard Instruments, Top Count. Los ejemplos representativos de los resultados de estos experimentos se resumen en la siguiente tabla.

TABLA III

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22

La capacidad de los inhibidores de CDK4 para tratar trastornos proliferativos se ilustra mediante los siguientes ensayos.

Ensayo de la inhibición del crecimiento celular

El ensayo MMT se usó para medir la actividad inhibidora del crecimiento (Schultz, R. M., y col., Oncology Res. 5, 223-228, 1993). La CI50 se determinó como la concentración de fármaco requerida para inhibir el crecimiento celular en un 50% durante 72 horas de exposición al fármaco. Básicamente, se añadieron células 1000 HCT-116 o NCI H460 por pocillo a placas de fondo plano de 96 pocillos en 100 \mul de medio RPMI 1640 que contenía suero bovino fetal dializado al 10%. Las placas se incubaron durante 24 h antes de la adición de los compuestos de ensayo. Se preparó una solución madre (10 mM) en DMSO y se diluyó en serie en el medio. Las diluciones de compuesto se añadieron por triplicado a pocillos y las placas se incubaron durante 72 horas. El compuesto del Ejemplo 5 se ensayó en este ensayo y se descubrió que inhibía el crecimiento celular.

Análisis del ciclo celular usando citometría de flujo

Se sembraron las líneas celulares HCT-116 y NCI H460 en matraces de 75 cm^{2} a 5 x 10^{5} células/25 ml de medio RPMI 1640 que contenía suero bovino fetal dializado al 10%. Se incubaron durante 24 horas. Después, el compuesto se añadió a 1 x CI50 y a 3 x CI50 (determinado a partir de la sección anterior "estudios de inhibición del crecimiento") y se incubaron durante 24 horas más. Posteriormente, las células se recogieron y se siguió el protocolo para la tinción (Robinson, J. P. y Darzynkiewicz, Z. Current Protocols in Cytometry. 1997). El análisis del histograma de ADN se realizó usando ModFit LT (Verity House). El compuesto del Ejemplo 5 se ensayó en este ensayo y se descubrió que detenía las células en la fase G1 del ciclo celular.

Inhibición del ensayo de fosforilación de Rb

Se adquirió la línea celular de carcinoma de colon humano HCT116 de American Tissue Culture Collection (Rockville, MD) y se mantuvo como monocapa en RPMI-1640 con L-Glutamina y HEPES 25 mM suplementado con suero bovino fetal al 10% en un incubador a 37ºC con una atmósfera de CO_{2} al 10%. La detección del micoplasma en las células cultivadas se realizó usando un sistema de rápida detección de micoplasma (TaKaRa Shuzo Co. Ltd., Shiga, Japón) cada 2-3 meses y se descubrió que las células eran consistentemente negativas a lo largo de estos experimentos. El ensayo de fosforilación de Rb se realizó poniendo en placas 4 x 10^{5} células/pocillo en placas de 6 pocillos. Después de 24 horas, las células HCT116 con crecimiento exponencial se trataron con compuestos a 1 x, 2 x y 3 x CI_{50} (como se determinó mediante el ensayo MMT) o DMSO en medio completo durante 24 horas. Al final del período de incubación, el medio se retiró y las células se lavaron dos veces con PBS enfriado que contenía ortovanadato sódico 1 mM (Na_{3}VO_{4}). Se prepararon lisados de proteínas celulares añadiendo tampón de lisis de 50 \mul/pocillo preparado recientemente (HEPES 50 mM a pH 7,5, Triton X-100 al 1%, EDTA 5 mM, NaCl 50 mM, pirofosfato sódico 10 mM, fluoruro sódico 50 mM, Na3VO4 1 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM, 10 \mug/ml de Aprotinina, 10 \mug/ml de leupeptina y 10 \mug/ml de pepstatina). Los lisados celulares se recogieron y se incubaron en hielo durante 30 min con frecuente formación breve de vértices. Los restos celulares se retiraron por centrifugación a 14000 x g durante 10 min a 4ºC. La concentración proteica se determinó mediante el ensayo de proteínas Bio-Rad DC (Bio-Rad, Hercules, CA). Para analizar los extractos, se disolvieron cantidades iguales de proteína (30 \mug) en tampón de muestra 1 x Laemmli, se biotinilaron durante 5 min y resuelto por electroforesis sobre geles de poliacrilamida al 10% que contenían SDS. Las proteínas se transfirieron a membrana Immobilon-P (Millipore, Bedford, MA). Las membranas se incubaron con leche deshidratada y desnatada al 5% en TBS-T (Tris-Cl 10 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM y Tween-20 al 0,1%) durante 1 h a temperatura ambiente para bloquear los sitios no específicos. La inmunotransferencia se realizó incubando membranas con anticuerpos alfa-fosfo-Ser-780 pRb (1 \mug/ml, New England Biolab, Beverly, MA) y alfa-actina (0,2 \mug/ml) en TBS-T que contenía leche deshidratada y desnatada al 5% durante una noche a 4ºC. Las membranas se lavaron tres veces (15 min cada vez) en TBS-T y posteriormente se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente con anticuerpo anti-conejo (1:2000) y anti-ratón (1:1000) conjugado con peroxidasa de rábano picante (Amersham) en TBS-T. Las membranas se lavaron tres veces (15 min cada una) con TBS-T y se incubaron durante 5 min en reactivos quimioluminiscentes SuperSignal West Pico (Pierce, Rockford IL). Las proteínas se detectaron capturando la imagen de la membrana usando Quantity One Software sobre un Fluor-S multi-Imager (Bio-Rad, Hercules, CA) en un intervalo lineal. Las bandas específicas se cuantificaron usando Quantity One Software. Después de corregir con respecto a la carga variable usando actina como control, los niveles de la proteína pRb fosforilada Ser-780 en las muestras tratadas con fármaco se compararon con las de la células tratadas con vehículo (DMSO). Los resultados se expresan como un porcentaje de inhibición de la fosforilación de pRb Ser-780 en células tratadas con fármaco contra células tratadas con DMSO de control. El compuesto del Ejemplo 5 se ensayó en este ensayo y se descubrió que inhibía la fosforilación de Rb (proteína retinoblastoma).

Los compuestos de esta invención están biodisponibles a través de varias vías de administración, incluyendo, pero sin limitación, oral, bucal, intravenosa, subcutánea, intranasal, intraocular, transdérmica, rectal y por inhalación. Como los compuestos de esta invención son potentes inhibidores de CDK4, se requieren dosis extremadamente bajas para mantener los niveles terapéuticos.

Aunque sea posible administrar un compuesto empleado en los procedimientos de esta invención directamente sin ninguna formulación, normalmente, los compuestos se administran en forma de composiciones farmacéuticas que comprenden un excipiente farmacéuticamente aceptable y al menos un ingrediente activo. Estas composiciones pueden administrarse mediante diversas vías incluyendo oral, bucal, rectal, intranasal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Muchos de los compuestos empleados en los procedimientos de esta invención son eficaces como composiciones inyectables y orales. Tales composiciones se preparan de una manera bien conocida en la técnica farmacéutica y comprenden al menos un compuesto activo. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, (16ª ed. 1980).

En la fabricación de las composiciones empleadas en la presente invención, el ingrediente activo normalmente se mezcla con un excipiente, se diluye con un excipiente o se encierra en un vehículo que puede estar en forma de una cápsula, sello, papel u otro recipiente. Cuando el excipiente sirve como diluyente, éste puede ser un material sólido, semi-sólido o líquido, que actúa como un vehículo, soporte o medio para el ingrediente activo. De esta manera, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, grageas, sellos, obleas, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (en forma de sólido o en un medio líquido), pomadas que contienen por ejemplo hasta un 10% en peso del compuesto activo, cápsulas de gelatina duras y blandas, supositorios, soluciones inyectables estériles y polvos envasados estériles.

En la preparación de la formulación, puede ser necesario triturar el compuesto activo para proporcionar el tamaño de partícula apropiado antes de combinarse con el resto de ingredientes. Si el compuesto activo es sustancialmente insoluble, normalmente se tritura hasta un tamaño de partícula inferior a una malla 200. Si el compuesto activo es sustancialmente soluble en agua, el tamaño de partícula normalmente se ajusta mediante trituración para proporcionar una distribución uniforme en la formulación, por ejemplo de aproximadamente una malla 40.

Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato cálcico, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe y metilcelulosa. Las formulaciones también pueden incluir: agentes de lubricación tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsionantes y de suspensión; agentes conservantes tales como metil- y propihidroxibenzoatos; agentes edulcorantes; y agentes aromatizantes. Las composiciones de la invención pueden formularse de forma que proporcionen una liberación rápida sostenida o retrasada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos conocidos en la técnica.

Preferiblemente, las composiciones se formulan en una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosificación aproximadamente de 0,001 a aproximadamente 100 mg, más normalmente de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 30 mg, del ingrediente activo. La expresión "forma de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, junto con un excipiente farmacéutico adecuado.

Generalmente, los compuestos activos son eficaces en un gran intervalo de dosificación. Como ejemplos, las dosis al día normalmente están dentro del intervalo de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. En el tratamiento de seres humanos adultos, se prefiere especialmente el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 15 mg/kg/día, en dosis únicas o divididas. Sin embargo, se entenderá que será el médico quién determine la cantidad del compuesto realmente administrado, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto o compuestos reales administrados, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, y la gravedad de los síntomas del paciente, y por lo tanto los intervalos de dosificación anteriores no pretenden limitar de forma alguna el alcance de la invención.

En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite más bajo del intervalo mencionado anteriormente pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis aún mayores sin provocar efectos secundarios perjudiciales, con la condición de que tales dosis superiores primero se dividan en varias dosis más pequeñas para administración a lo largo del día.

Ejemplo de Formulación 1

Se preparan cápsulas de gelatina duras que contienen los siguientes ingredientes:

Ingrediente	Cantidad
	(mg/cápsula)
Compuesto del Ejemplo 2	30,0
Almidón	\hskip-3mm 305,0
Estearato de magnesio	\hskip1mm 5,0

Los ingredientes anteriores se mezclan y se rellenan en cápsulas de gelatina duras en cantidades de 340 mg.

\newpage

Ejemplo de Formulación 2

Se prepara una fórmula de comprimido usando los siguientes ingredientes:

Ingrediente	Cantidad
	(mg/comprimido)
Compuesto del Ejemplo 3	25,0
Celulosa, microcristalina	200,0
Dióxido de silicio coloidal	10,0
Ácido esteárico	5,0

Los componentes se mezclan y se comprimen para formar comprimidos, que pesan cada uno 240 mg.

Ejemplo de Formulación 3

Se prepara una formulación de inhalación en polvo seco que contiene los siguientes ingredientes:

Ingrediente	Peso (%)
Compuesto del Ejemplo 4	5
Lactosa	95

La mezcla activa se mezcla con la lactosa y la mezcla se añade a un aplicador de inhalación de polvo seco.

Ejemplo de Formulación 4

Los comprimidos, que contienen cada uno 30 mg de ingrediente activo, se preparan como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
	(mg/comprimido)
Compuesto del Ejemplo 5	30,0 mg
Almidón	45,0 mg
Celulosa microcristalina	35,0 mg
Polivinilpirrolidona (en forma de una solución al 10% en agua)	\hskip1mm 4,0 mg
Carboximetil almidón sódico	\hskip1mm 4,5 mg
Estearato de magnesio	\hskip1mm 0,5 mg
Talco	\hskip1mm 1,0 mg
Total	\hskip-3mm \overline{120,0 \; mg}

El ingrediente activo, el almidón y la celulosa se pasan a través de un tamiz U.S. de malla Nº 20 y se mezclan minuciosamente. La solución de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes, que después se pasan a través de un tamiz U.S. de malla 16. Los gránulos producidos de esta manera se secan a 50-60ºC y se pasan a través de un tamiz U.S. de malla 16. Después, el carboximetil almidón sódico, estearato de magnesio y talco, pasados previamente a través de un tamiz U.S. de malla Nº 30, se añaden a los gránulos que, después de mezclarse, se comprimen en una máquina de comprimidos, produciendo comprimidos que pesan 120 mg.

Ejemplo de Formulación 5

Las cápsulas, que contienen cada una 40 mg de medicamento, se fabrican como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
	(mg/cápsula)
Compuesto del Ejemplo 6	40,0 mg
Almidón	\hskip-3mm 109,0 mg
Estearato de magnesio	\hskip1mm 1,0 mg
Total	\hskip-3mm \overline{150,0 \; mg}

El ingrediente activo, la celulosa, el almidón y el estearato de magnesio se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. de malla Nº 20 y se rellenan en cápsulas de gelatina duras en cantidades de 150 mg.

Ejemplo de Formulación 6

Los supositorios, que contienen cada uno 25 mg de ingrediente activo, se fabrican como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
Compuesto del Ejemplo 7	25 mg
Glicéricos de ácidos grasos saturados	2.000 mg

El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz U.S. de malla Nº 60 y se suspende en glicéridos de ácidos grasos fundidos previamente usando el mínimo calor necesario. Después, la mezcla se vierte en un molde de supositorios de capacidad nominal de 2,0 g y se deja enfriar.

Ejemplo de Formulación 7

Las suspensiones, que contienen cada una 50 mg de medicamento por 5,0 ml de dosis, se fabrican como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
Compuesto del Ejemplo 8	50,0 mg
Goma xantana	4,0 mg
Carboximetilcelulosa sódica (11%)
Celulosa microcristalina (89%)	50,0 mg
Sacarosa	1,75 g
Benzoato sódico	10,0 mg
Aroma y Color	c.v.
Agua purificada hasta	5,0 ml

El medicamento, la sacarosa y la goma xantana se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. de malla Nº 10 y después se mezclan con la solución fabricada previamente de celulosa microcristalina y carboximetil celulosa sódica en agua. El benzoato sódico, el aroma y el color se diluyen con un poco de agua y se añaden con agitación. Después, se añade suficiente agua para producir el volumen requerido.

Ejemplo de Formulación 8

Las cápsulas, que contienen cada una 15 mg de medicamento, se fabrican como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
	(mg/cápsula)
Compuesto del Ejemplo 9	\hskip1mm 15,0 mg
Almidón	407,0 mg
Estearato de magnesio	\hskip3mm 3,0 mg
Total	\overline{425,0 \; mg}

El ingrediente activo, la celulosa, el almidón y el estearato de magnesio se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. de malla Nº 20 y se rellenan en cápsulas de gelatina duras en cantidades de 425 mg.

Ejemplo de Formulación 9

Una formulación intravenosa puede prepararse como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
Compuesto del Ejemplo 10	250,0 mg
Solución salina isotónica	1000 ml

\newpage

Ejemplo de Formulación 10

Una formulación tópica puede prepararse como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
Compuesto del Ejemplo 11	1-10 g
Cera emulsionante	30 g
Parafina líquida	20 g
Parafina blanda blanca	hasta 100 g

La parafina blanda blanca se calienta hasta que se funde. La parafina líquida y la cera emulsionante se incorporan y se agitan hasta que se disuelven. Se añade el ingrediente activo y la agitación se continúa hasta que se dispersa. Después, la mezcla se enfría hasta que solidifica.

Ejemplo de Formulación 11

Los comprimidos sublinguales o bucales, que contienen cada uno 10 mg de ingrediente activo, pueden prepararse como se indica a continuación:

Ingrediente	Cantidad
	por comprimido
Compuesto del Ejemplo 12	\hskip1mm 10,0 mg
Glicerol	210,5 mg
Agua	143,0 mg
Citrato Sódico	\hskip2mm 4,5 mg
Alcohol polivinílico	\hskip1mm 26,5 mg
Polivinilpirrolidona	\hskip1mm 15,5 mg
Total	\overline{410,0 \; mg}

El glicerol, el agua, el citrato sódico, el alcohol polivinílico y la polivinilpirrolidona se mezclan mediante agitación continua y manteniendo la temperatura a aproximadamente 90ºC. Cuando los polímeros se han solubilizado, la solución se enfría a aproximadamente 50-55ºC y el medicamento se mezcla lentamente. La mezcla homogénea se vierte en formas hechas de un material inerte para producir una matriz de difusión que contiene el fármaco con un grosor de aproximadamente 2-4 mm. Después, esta matriz de difusión se corta para formar comprimidos individuales que tienen el tamaño apropiado.

Otra formulación preferida empleada en los procedimientos de la presente invención usa dispositivos de liberación transdérmica ("parches"). Tales parches transdérmicos pueden usarse para proporcionar una infusión continua o discontinua de los compuestos de la presente invención en cantidades controladas. En la técnica se conocen bien la construcción y el uso de parches transdérmicos para la liberación de agentes. Véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos 5.023.252, concedida el 11 de junio de 1991 e incorporada en este documento por referencia. Tales parches pueden construirse para la liberación continua, pulsátil o bajo demanda de los agentes farmacéuticos.

Frecuentemente, se deseará o será necesario introducir la composición farmacéutica en el cerebro, ya sea directa o indirectamente. Las técnicas directas normalmente implican el emplazamiento de un catéter de liberación del fármaco en el sistema ventricular del huésped para derivar la barrera hematoencefálica. Uno de esos sistemas de liberación implantables, usado para el transporte de factores biológicos a las regiones anatómicas específicas del cuerpo, se describe en la Patente de Estados Unidos 5.011.472, concedida el 30 de abril de 1991, que se incluye en este documento por referencia.

Las técnicas indirectas, que se prefieren generalmente, normalmente implican formular las composiciones para proporcionar la latencia del fármaco mediante la conversión de fármacos hidrófilos en fármacos o profármacos solubles en lípidos. La latencia generalmente se consigue bloqueando los grupos hidroxi, carbonilo, sulfato y amina primaria presentes en el fármaco para hacer que el fármaco sea más soluble en lípidos y permita el transporte a través de la barrera hematoencefálica. Como alternativa, la liberación de fármacos hidrófilos puede mejorarse por infusión intra-arterial de soluciones hipertónicas que pueden abrir de forma transitoria la barrera hematoencefálica.

El tipo de formulación empleada para la administración de los compuestos empleados en los procedimientos de la presente invención puede dictarse por los compuestos particulares empleados, el tipo de perfil farmacocinético deseado de la vía de administración y el compuesto o compuestos y el estado del paciente.

Claims

1. Un compuesto de Fórmula I

28

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en la que:

A y B son independientemente O o S;

X e Y son ambos hidrógeno o, tomados conjuntamente, forman un enlace;

R^{1} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{5} y R^{5'} son opcionalmente hasta dos sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo constituido por halo, ciano, alquilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido, alcoxi C_{1}-C_{6}, ariloxi, benciloxi, alquiltio C_{1}-C_{6} y ariltio;

Q^{1} y Q^{6} son independientemente O, S(O)_{n} o -(CH_{2})_{1-3}-;

Q^{3} y Q^{4} se seleccionan independientemente entre -(CH_{2})_{1-3}-;

m es independientemente, cuando está presente, 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;

n es independientemente, cuando está presente, 0, 1 ó 2; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en la que

el término "alquilo C_{1}-C_{6} sustituido" representa una cadena alquilo lineal o ramificada sustituida con un carboxilo, (alcoxi C_{1}-C_{6})carbonilo, alcoxi C_{1}-C_{6}, ariloxi, amino, (alquil C_{1}-C_{6})amino, tetrahidrofurilo o hasta un resto hidroxi para cada átomo de carbono en la cadena alquilo;

el término "arilo" representa un resto fenilo o naftilo opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre halo, alquilo C_{1}-C_{6}, hidroxi, amino o alcoxi C_{1}-C_{6};

el término "heteroarilo" significa un resto aromático estable de uno o dos anillos que comprende átomos de carbono y 1-4 heteroátomos seleccionados entre O, S y N, estando dicho resto opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre amino, hidroxi, alcoxi C_{1-7}, ariloxi, alquilo C_{1-7}, aminoalquilo, haloalquilo y halógeno; y

el término "heterociclo saturado" se emplea para significar un anillo de 4-9 miembros que contiene nitrógeno y opcionalmente otro átomo seleccionado entre oxígeno, nitrógeno o azufre.

2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que X e Y, tomados conjuntamente, forman un enlace.

3. Un compuesto de la reivindicación 1 ó 2, en el que A y B son ambos oxígeno.

4. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que R^{1} es hidrógeno.

5. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que Q^{2} es un enlace sencillo carbono-carbono.

6. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Q^{5} es -NR^{10}-.

7. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Q^{5} es -NR^{10}-CHR^{11}-.

8. Un compuesto de la reivindicación 6 ó 7, en el que R^{10} es hidrógeno.

9. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que Q^{1}, Q^{2} y Q^{3}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo de 6 miembros, un anillo de 7 miembros o un anillo de 8 miembros.

10. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que Q^{1}, Q^{2} y Q^{3}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo no sustituido.

11. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que Q^{4},Q^{5} y Q^{6}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo de 6 miembros, un anillo de 7 miembros o un anillo de 8 miembros.

12. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que Q^{4}, Q^{5} y Q^{6}, tomados conjuntamente con los átomos a los que están unidos, forman un anillo no sustituido.

13. Un compuesto de la reivindicación 1 seleccionado entre:

3-(8-(terc-butoxicarbonil)-[1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol-1-il)-4-(4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quino-
lin-1-il)pirrol-2,5-diona;

3-([1,5]diazaperhidroonino[8,9,1-hi]indol-1-il)-4-(4,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)pirrol-2,5-diona;

23

éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico;

24

éster terc-butílico del ácido 7-[4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2-carboxílico;

3-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7-
il)-pirrol-2,5-diona;

25

éster terc-butílico del ácido 7-[4-(8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-
2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2carboxílico;

3-(8-fluoro-6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]
indol-7-il)-pirrol-2,5-diona;

26

éster terc-butílico del ácido 7-[4-(6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2carboxílico;

3-(6,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7-
il)-pirrol-2,5-diona;

27

éster terc-butílico del ácido 7-[4-(4,4-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-3,4-dihidro-1H-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-2carboxílico; y

3-(4,4-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-il]quinolin-1-il)-4-(1,2,3,4-tetrahidro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7-
il)-pirrol-2,5-diona;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

14. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en combinación con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal farmacéuticamente aceptable en la preparación de un medicamento para la inhibición de CDK4.

16. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.