ES2295198T3

ES2295198T3 - Los efectos sinergicos de hgf y tratamiento antibacteriano.

Info

Publication number: ES2295198T3
Application number: ES01963646T
Authority: ES
Inventors: Fariba Nayeri
Original assignee: Damavand Wound AB
Current assignee: Damavand Wound AB
Priority date: 2000-08-28
Filing date: 2001-08-28
Publication date: 2008-04-16
Anticipated expiration: 2021-08-28
Also published as: EP1867996A1; WO2002017964A1; US20040042968A1; AU2001284576A1; DE60130906D1; US20100160223A1; ATE375168T1; EP1320384A1; EP1320384B1; EP1840575A1; DE60130906T2; US7601365B2

Abstract

El uso de una combinación de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) y al menos un agente antibiótico para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de un mamífero que padece una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, una lesión en el aparato respiratorio producida por quemaduras y/o infecciones o úlceras crónicas infectadas en las piernas en los pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada.

Description

Los efectos sinérgicos de HGF y tratamiento antibacteriano.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones y un procedimiento para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía o úlceras crónicas infectadas en las piernas incluyendo las de los pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, en los que se administra una cantidad terapéuticamente activa de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) y al menos un agente antibiótico al que responden las infecciones en cuestión a un mamífero que padece una lesión de este tipo.

Antecedentes de la invención

El factor de crecimiento de hepatocitos, (HGF), es una proteína expresada en células del linaje mesenquimatoso, tales como fibroblastos y macrófagos del pulmón, células de Kupffer en el hígado y leucocitos. HGF es una citocina, que se secreta en respuesta al daño celular y parece tener importancia para la regeneración de ciertos órganos y para la cicatrización de heridas. Químicamente, HGF es una glucoproteína, que se sintetiza en primer lugar como un precursor inactivo. El precursor se rompe para dar una proteína activa en el órgano dañado a través de un activador particular. HGF se une a heparina, que parece tener importancia para la activación de HGF y la unión a su receptor. El receptor que se une a HGF es c-MET. Puesto que el receptor c-MET sólo está regulado por disminución en órganos dañados, parece que sólo las células en estos órganos dañados responden a las interacciones HGF-receptor. HGF desempeña un papel importante en las interacciones intercelulares entre las células mesenquimatosas y las células del epitelio. Las células mesenquimatosas producen HGF que posteriormente influye en las células epiteliales. Las células diana de HGF son células epiteliales completamente desarrolladas, en las que las células más importantes son los hepatocitos en el hígado, células epiteliales en los túbulos proximales y distales en el riñón y células epiteliales de tipo II en los pulmones. HGF está regulado por TGF [beta] (factor de crecimiento transformante [beta]), que contrarresta los efectos de HGF. HGF muestra tres efectos sobre las células epiteliales: efectos mitogénicos, motogénicos y morfogénicos. HGF actúa tanto de manera paracrina, es decir teniendo un efecto sobre células adyacentes como de manera endocrina, ejerciendo efectos a larga distancia, por ejemplo, HGF se transporta por medio de la sangre desde los pulmones hasta, por ejemplo, el hígado o el riñón.

HGF se forma y está presente en altas concentraciones en el cuerpo como respuesta al daño. Estudios previos muestran una correlación entre altas concentraciones en suero de HGF y un buen pronóstico en la recuperación de la neumonía. Las concentraciones en suero de HGF aumentan en las enfermedades infecciosas agudas. Esto se ha registrado durante el control de las concentraciones en suero de HGF en pacientes que padecen sepsis, neumonía, gastroenteritis infecciosa, erisipela e infecciones de las vías urinarias. Los valores de HGF no aumentan en enfermedades crónicas, incluyendo hepatitis crónica. Esto puede ser un motivo de la formación de fibrosis en tales infecciones.

También se ha investigado previamente el efecto de HGF sobre las células de la piel. Se dobla la síntesis de ADN en fibroblastos de piel humanos tras la adición de más de 1,0 ng/ml de HGF a los medios de cultivo. Se inhibió el efecto usando anticuerpos monoclonales frente a HGF.

La presencia de heridas crónicas en las piernas, especialmente en pacientes ancianos y en pacientes que padecen diabetes, es un gran problema en la atención sanitaria actual. Tales heridas en las piernas tienen varias causas diferentes tales como una circulación inapropiada y, por tanto, es muy difícil que cicatricen. Los pacientes normalmente padecen insuficiencia venosa o insuficiencia venosa y arterial combinada. En la actualidad, no hay tratamientos satisfactorios reales. Los procedimientos disponibles llevan mucho tiempo, son difíciles y costosos. Los procedimientos actuales incluyen la utilización de compresas con solución salina, el uso de tratamientos enzimáticos (usando Varidase para degradar la fibrina), injertos de piel y cirugía de varices. Tales úlceras están casi siempre contaminadas por diferente flora bacteriana. Cuando la infección es predominante, las úlceras se tratan con antibióticos, según los resultados de cultivos apropiados. Mediante tratamiento antibacteriano, a menudo se observa una mejoría general de la úlcera, pero el tratamiento antibacteriano solo rara vez puede cicatrizar las úlceras. Durante el transcurso de la neumonía hay muchos pacientes, especialmente los ancianos, que no se recuperan a pesar del tratamiento antibacteriano satisfactorio. Éste es también el caso en otras lesiones pulmonares graves, tales como lesiones por quemadura, que también se complican por infecciones.

Basándose en estudios clínicos, los inventores proponen que en casos tales como los mencionados anteriormente, una combinación de tratamiento local con HGF y tratamientos antibacterianos apropiados tiene efectos sinérgicos que son considerablemente superiores a usar cualquiera de los tratamientos solos.

Sumario de la invención

El objeto de esta invención es proporcionar una composición terapéutica para cicatrizar lesiones que están producidas o complicadas por infecciones. La invención se basa en observaciones y estudios clínicos de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) en una composición para el tratamiento local de úlceras en pacientes y también se ha aplicado mediante administración por inhalación para tratar lesiones en el aparato respiratorio en el transcurso de la neumonía. Este objeto de la invención se ha resuelto debido al descubrimiento de que existen efectos sinérgicos entre un HGF y un agente antibiótico adecuado durante el tratamiento de lesiones respiratorias con complicaciones y otras enfermedades infecciosas tales como pielonefritis, endocarditis, meningitis y colitis infecciosa. La invención proporciona un procedimiento para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones, tal como neumonía y úlceras crónicas infectadas en las piernas incluyendo las de pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, en el que se administran una cantidad terapéuticamente activa de HGF y al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión, a un mamífero que padece una lesión de este tipo.

Según otro aspecto de la invención, también se prevé el uso de una combinación de HGF y al menos un agente antibiótico para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de un mamífero que padece una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía o úlceras crónicas infectadas en las piernas incluyendo las de pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada.

Según otro aspecto de la invención, también se prevé el uso de HGF para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de un mamífero que padece una lesión producida o complicada por infecciones, tal como neumonía o úlceras crónicas infectadas en las piernas incluyendo las de pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, en el que dicho mamífero se somete a al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión.

Un aspecto de la invención proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones, tal como neumonía o úlceras crónicas infectadas en las piernas, tales como las de pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, que comprende una cantidad terapéuticamente activa de HGF y al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión.

Otro aspecto de la invención proporciona un kit para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones, tal como neumonía o úlceras crónicas infectadas en las piernas, tales como las que se observan en pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, que comprende una cantidad terapéuticamente activa de HGF y al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión.

La combinación de HGF y el agente antibiótico usado que es pertinente para la infección en cuestión acentúa drásticamente el proceso de cicatrización y acorta el periodo de convalecencia. HGF puede usarse en lesiones agudas, subagudas así como crónicas producidas o complicadas por agentes infecciosos.

Descripción de los dibujos

Figura 1

Niveles del factor de crecimiento de hepatocitos durante el tratamiento de neumonía en pacientes que responden al tratamiento y pacientes con respuesta tardía

Cambios en los niveles de HGF en suero durante el tratamiento (día 1-5: d1, d3, d5) y en la convalecencia (C) en pacientes que responden al tratamiento (fx) y pacientes con respuesta tardía (fy con respecto a fz). G2b y G2a respectivamente: Subgrupos de pacientes con respuesta tardía constituidos por los pacientes que cambiaron su tratamiento a uno apropiado tras el día 5 con respecto a los días 3-5.

Figura 2

La correlación entre la perfusión microcirculatoria y la reducción del área de úlcera tras la aplicación local de HGF

La relación entre el cambio en la perfusión microcirculatoria una semana tras el inicio del tratamiento (> 1 indica aumento) y a reducción del área de úlcera (% de cicatrización) hasta tres meses.

Figura 3

Concentraciones en suero y en líquido cefalorraquídeo de HGF en diferentes grupos de pacientes

Valores medios de grupos (+-EEM) de HGF en LCR (1A) y HGF en suero (1B) expresados como el logaritmo neperiano, ln. (Grupos 1-6: parestesia facial, meningitis por Borrelia, meningitis vírica, encefalitis por herpes, meningitis bacteriana y grupo control).

Figura 4

Concentraciones en suero de HGF durante enfermedades infecciosas

Valores individuales (0) de (1a) el logaritmo natural (ln) de las concentraciones en suero de HGF y (1b) concentraciones de CRP (mg/ml) y valores medios correspondientes (\sqbullet) en diferentes grupos (grupo 1-7; grupo de gastroenteritis, erisipela, pielonefritis, septicemia, neumonía, hepatitis crónica y uno de referencia).

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Figura 5

Úlcera crónica tratada durante una semana en una anciana de 91 años de edad.

Figura 6

Ratones tratados localmente con HGF sobre la piel afeitada durante 10 días. La fotografía se toma 12 días tras iniciarse el tratamiento.

1: Ratón tratado con 0,75 pg/kg/día durante siete días.

2: Ratón tratado con 0,35 \mug/kg/día.

3: Ratón control

Figura 7

Ratones con infección fúngica en sus lomos, uno de los cuales se ha tratado con HGF al mismo tiempo que se aplicó un tratamiento antifúngico local. Obsérvese la diferencia en el crecimiento del pelaje en el sitio del tratamiento con HGF.

Descripción detallada de la invención

Esta invención se refiere a un procedimiento de efecto terapéutico potenciado del tratamiento antibacteriano de enfermedades infecciosas con complicaciones mediante la administración simultánea de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos). Los inventores han descubierto tal efecto sinérgico mediante estudios clínicos que usan HGF en el tratamiento de úlceras crónicas en las piernas y en el tratamiento de neumonía. Así, puede usarse HGF para potenciar los efectos terapéuticos de antibióticos en otras enfermedades infecciosas, tales como pielonefritis, endocarditis y meningitis, que van seguidas en cierta medida por lesiones en órganos a pesar del tratamiento antibacteriano satisfactorio.

El procedimiento según la invención usa una cantidad terapéuticamente activa de HGF y puede usarse en infecciones bacterianas tales como tuberculosis y en infecciones fúngicas, así como en infecciones víricas como tratamiento complementario. El procedimiento puede usarse para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, o úlceras crónicas infectadas en las piernas incluyendo las de pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada. Se administran una cantidad terapéuticamente activa de HGF y al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión, a un mamífero que padece una lesión de este tipo. El mamífero en cuestión puede ser un ser humano pero también puede ser un animal doméstico tal como un caballo, una vaca o una oveja o una mascota tal como un gato.

El agente antibiótico puede ser un agente antibacteriano o un fungicida. HGF y el agente antibiótico pueden estar en la misma composición farmacéutica o en diferentes composiciones farmacéuticas y HGF puede administrarse antes, durante o después del tratamiento con antiinfecciosos.

Dicha(s) composición/composiciones que comprende(n) HGF puede(n) administrarse tópicamente, por vía intravenosa, por vía intramuscular, por vía subcutánea, mediante inhalación, por vía intratecal o administración rectal.
Dicha(s) composición/composiciones puede(n) comprender HGF de mamífero nativo, pero también pueden comprender HGF recombinante, así como un polipéptido que muestra una actividad de HGF. La(s) composición/composiciones también puede(n) comprender células transfectadas que expresan HGF. HGF puede administrarse adicionalmente en combinación con heparina o heparina de bajo peso molecular tal como fragmina.

La presente invención proporciona además la combinación y el uso de una combinación de HGF y al menos un agente antibiótico para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un mamífero que padece una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, y/o úlceras crónicas infectadas en las piernas incluyendo las de pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada. El propio agente antibiótico y la dosis de dicho agente antibiótico se eligen de modo que se provoque una respuesta frente a la infección en cuestión. HGF y el agente antibiótico pueden estar en la(s) misma(s) composición/composiciones farmacéutica(s)
o en diferente(s) composición/composiciones farmacéutica(s) y puede(n) estar comprendida(s) en un formato de kit. HGF puede administrarse antes, durante o después del tratamiento con antiinfecciosos. Para una administración local, una dosis adecuada de HGF será de aproximadamente 0,5-20 ng/cm^{2} de la superficie que va a tratarse. Usando tratamiento local con HGF, se observó una cicatrización completa o parcial en 8/11 pacientes con úlceras crónicas en las piernas que no se habían podido curar durante hasta catorce años (ejemplo 2, tabla 1). Se usó una composición de HGF en el tratamiento de úlceras crónicas en las piernas, que no habían respondido previamente a otras intervenciones terapéuticas, a pesar de haberse realizado varios intentos durante un periodo prolongado. En todos los casos, se descubrió una flora bacteriana mediante pruebas de cultivo antes del tratamiento. Se observaron los mejores resultados en las úlceras aparentemente infectadas, que se trataron simultáneamente con antibióticos representativos. El tratamiento de los pacientes con antibióticos apropiados (en estos casos por vía oral) al mismo tiempo que el tratamiento con HGF (localmente) dio como resultado una rápida mejoría y, en última instancia, la curación completa de las úlceras en al menos 4 casos. La nueva piel tenía una buena calidad y los pacientes no tuvieron una reaparición de las úlceras hasta un año de control de seguimiento. El tratamiento local con HGF pareció tener un efecto positivo sobre úlceras vecinas no tratadas localmente, lo que indica efectos sistémicos. No se observaron signos de alergia ni cáncer durante un año de observación de seguimiento. Por tanto, el/los tratamiento(s) antibacteriano(s) representativo(s) y HGF demostraron efectos sinérgicos en el tratamiento de úlceras crónicas en las piernas. Se examinó la perfusión microcirculatoria, que se esperaría que refleje cualquier efecto angiogénico del tratamiento con HGF, usando un procedimiento Doppler con láser. Los resultados mostraron una correlación positiva significativa con la reducción del área de úlcera.

En un paciente con insuficiencia venosa que se había recuperado considerablemente tras una semana de administración de HGF, se observó una superinfección por bacterias resistentes. Este paciente no pudo tratarse con antibióticos representativos apropiados debido a una alergia a la penicilina y la úlcera aumentó drásticamente de tamaño a pesar de los intentos de tratamiento con HGF. Los controles de la microcirculación con láser Doppler confirmaron el aumento de los niveles en las úlceras tratadas satisfactoriamente pero no en las úlceras que no mejoraron tras la administración de HGF, o en el caso de recurrencia tras un fracaso del tratamiento antibacteriano (tabla 1, figura 2).

La angiogénesis es un efecto conocido del tratamiento con HGF y esto podría ser la causa del aumento de la microcirculación en las úlceras tratadas satisfactoriamente. Sin embargo, se cree que el crecimiento excesivo de bacterias puede propagarse a los canales vasculares y producir necrosis en la herida. La erradicación de las bacterias mediante un tratamiento antibacteriano eficaz también da como resultado un aumento de la microcirculación. Los efectos sinérgicos de HGF y los antibióticos aceleran considerablemente la eficacia terapéutica del tratamiento. Esto también se demostró en un paciente con una gran úlcera en evolución en la pierna con necrosis en la piel circundante (véase el ejemplo 7).

Los pacientes con neumonía tienen altos niveles de HGF en suero. En los pacientes con niveles de HGF en suero bajos tras una única dosis, se observó un desenlace desfavorable, no proporcional a la elección del tratamiento antibacteriano (Scand J Infect Dis; 30: 405-9, 1998). Los inventores han hecho un seguimiento de los niveles de HGF en suero en los pacientes con neumonía, mientras se tratan en planta, antes y después del tratamiento y han mostrado que los niveles de HGF en suero siguieron de manera sensible los efectos antibacterianos del tratamiento iniciado. Los niveles en suero de HGF disminuyeron tras el tratamiento eficaz (figura 1).

Según el nivel y la velocidad de los cambios, fue posible estimar la eficacia del tratamiento antibacteriano elegido, que coincidió con el estado clínico del paciente. La erradicación de las bacterias mediante los antibióticos podría haber eliminado las respuestas inflamatorias en el cuerpo, lo que podría haber estado seguido por rápidos cambios en la producción y liberación sistémicas de HGF. En los pacientes que no se trataron con los antibióticos representativos, apropiados, el HGF en suero aumentó hasta el punto en el que se inició un tratamiento apropiado.

Estos estudios condujeron a la comprensión de los efectos mutuos del tratamiento antibacteriano y los niveles de HGF durante enfermedades infecciosas tales como neumonía.

Se observó que tenía lugar una producción local de HGF al mismo tiempo que la liberación sistémica de HGF durante enfermedades infecciosas. Se observó una producción local de HGF en líquido cefalorraquídeo (LCR) durante una meningitis bacteriana (J Infect Dis 2000: 181: 2092-4) (figura 3).

Los inventores también han mostrado que los niveles de HGF en suero aumentan en otras enfermedades infecciosas tales como gastroenteritis, erisipela, septicemia, colitis infecciosa y pielonefritis (figura 4). También podría existir un efecto sinérgico en el tratamiento de otras enfermedades infecciosas graves con HGF y antibióticos.

Un ejemplo in vivo del efecto sinérgico de HGF y un agente antibiótico es un paciente anciano que padece neumonía y posterior insuficiencia respiratoria. Se le administró una dosis única de HGF durante un ciclo de tratamiento con un agente antibiótico que condujo a una rápida recuperación según lo descrito en el ejemplo 8.

Los inventores han mostrado, mediante estudios clínicos y casos clínicos, la estrecha relación entre la erradicación bacteriana y los efectos regeneradores de HGF en la cicatrización de lesiones producidas o complicadas por infecciones.

Los pulmones son una de las fuentes principales de HGF. Se ha encontrado ARNm de HGF en macrófagos alveolares, lo que indica una producción local en las vías respiratorias. Enfriando el aire exhalado, se forma un condensado que contiene moléculas procedentes de los bronquios y los alvéolos. Se realizó un estudio sobre si podría encontrarse HGF en el condensado de aire exhalado (EBC) y para investigar su concentración y el transcurso temporal en neumonía, (véase el ejemplo 9). Los resultados mostraron que las concentraciones de HGF fueron significativamente superiores tanto suero como en EBC en pacientes con neumonía aguda. Los altos niveles de HGF en suero que se observaron en la fase aguda de la neumonía disminuyeron significativamente en el plazo de 48 horas tras el tratamiento con antibióticos eficaz. Se usó la medición de los niveles de HGF en suero antes y en el plazo de 48 horas de tratamiento para evaluar los resultados del tratamiento de manera más fiable que usando el control de la CRP (proteína C reactiva). Están en marcha otros estudios, pero los resultados actuales muestran una disminución significativa en el HGF en suero en el plazo de 24 horas desde el inicio de la administración de antibióticos apropiada en la neumonía. Los procedimientos convencionales tales como la temperatura, saturación de O_{2}, CRP y otros marcadores no pueden predecir el éxito
del tratamiento/resultados del tratamiento en el plazo de 24 horas desde la administración inicial del tratamiento.

Tiene lugar un aumento de la producción de HGF tanto sistémica como localmente en el sitio de las infecciones. Se ha mostrado que tiene lugar la producción intratecal de HGF en fluidos corporales en los casos de meningitis aguda. Las altas concentraciones de HGF reflejan los intentos del cuerpo para llevar a cabo la reparación de daños/cicatrización de úlceras y las bajas concentraciones de HGF en las infecciones, tales como neumonía, (a pesar del aumento de CRP), pueden correlacionarse con un mal pronóstico. Se ha hecho un seguimiento de los valores de HGF en suero en la neumonía durante el transcurso del tratamiento y se ha observado que puede usarse HGF como marcador para la eficacia del tratamiento de la neumonía.

La invención se describe adicionalmente en los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplo 1 HGF como un marcador predictivo para el desenlace terapéutico en la neumonía

En un estudio prospectivo, se midieron los valores en suero de HGF en pacientes con neumonía en el plazo de 24 horas (n = 70), después de 3 (n = 70) y 5 días (n = 47) y finalmente después de 4-6 semanas (n = 46). Se realizó un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). Se usó un kit para ELISA disponible comercialmente (Quantikine HGF Immunoassay, R&D systems Inc., Minneapolis, EE.UU.). Los pacientes se clasificaron en pacientes que responden al tratamiento y pacientes con respuesta tardía en términos clínicos y sin conocimiento de los valores de HGF.

Se encontró que los niveles de HGF en suero inicialmente fueron altos en todos los pacientes. Los pacientes que responden al tratamiento mostraron niveles de HGF sucesivamente inferiores durante el tratamiento en planta con valores normales en el periodo de convalecencia (p < 0,0001). En los pacientes con respuesta tardía, los niveles permanecieron inalterados o aumentaron y no disminuyeron (ANOVA; n = 70; p < 0,0005) hasta que se inició el tratamiento apropiado. Los niveles HGF siguieron de manera sensible la elección del agente antibacteriano.

La medición de HGF podría proporcionar información importante sobre el estado regenerador, que a su vez, corresponde al desenlace clínico en la neumonía.

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Ejemplo 2 El factor de crecimiento de hepatocitos acelera la cicatrización en úlceras crónicas en las piernas

Se preparó un gel que contenía HGF y heparina tal como sigue:

Preparación 1

Disolución en PBS estéril que contiene polisorbato 80

Cloruro de potasio: 0,20 g

Fosfato de monopotasio: 0,20 g

Dihidrogenofosfato de disodio: 1,40 g

Cloruro de sodio: 8,00 g

Polisorbato 80: 50 mg

Agua: hasta 1000 ml

La preparación 1 puede prepararse por anticipado y dispensarse en botellas para inyección de 100 ml.

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Preparación 2

Gel de PBS estéril

Hipromelosa: 20,0 g

Preparación 1: hasta 1000 ml

La preparación 1 y la 2 pueden prepararse por anticipado y dispensarse en botellas para inyección de 100 ml. Las siguientes preparaciones 3 a 5 se preparan justo antes de la utilización de las mismas.

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Preparación 3

Fluido diluyente

Albúmina (200 mg/ml, Pharmacia & Upjohn): 25,0 ml

Heparina (25.000 IE/ml, Lövens): 0,8 ml

Preparación 1: hasta 1000 ml

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Preparación 4

Disolución de HGF

Factor de crecimiento de hepatocitos: 10 \mug

Preparación 3: hasta 100 ml (proporcionando 100 ng de HGF por ml).

Con el fin de preparar las preparaciones de HGF, se proporcionó HGF recombinante humano (HGFrh) comercialmente de R&D systems Inc., Minneapolis, EE.UU.

Se saturó un filtro Millex Durapore(R) (Millipore) prensando 20 ml de la preparación 3 a través del filtro. La preparación 4 se filtra de manera estéril a través del filtro saturado. Se dispensa el filtrado en botellas para inyección de 10 ml y se congela.

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Preparación 5

Gel de HGF

Se miden 90 ml de la preparación 2 en un recipiente estéril para pomadas. Tiene lugar la adición de 10 ml de preparación 4 recién descongelada al gel, proporcionando una concentración de (10 ng de HGF/ml). Se mezcla y se dispensa preferiblemente a una jeringa para inyección de 10 ml que se sella usando una tapa de una clase conocida.

Se aplicó localmente HGF en forma de gel una vez al día durante siete días a 15 de 19 úlceras crónicas en las piernas en once pacientes ancianos en un estudio piloto. Todos los pacientes se habían tratado previamente con procedimientos convencionales y sus úlceras en las piernas habían estado en un estado bastante estable entre uno y catorce años. Se notificó diariamente cualquier signo de alergia, molestia o dolor.

Se midió la microcirculación en las úlceras usando LDPI. El sistema LDPI (PIMLO, Lisca Development AB, Suecia) utiliza el principio de Doppler impactando libremente una luz láser coherente sobre el tejido y procesando la luz retrodispersada, ensanchada por efecto Doppler para estimar la perfusión del tejido sin tocar la piel. La estimación de la perfusión es proporcional al producto de la velocidad media y la concentración de las células sanguíneas en movimiento. La estimación no proporciona una medición de perfusión absoluta sino más bien un valor relativo.

Se determinó la perfusión de microcirculación en úlceras en comparación con la piel contigua intacta al comienzo, después de una semana y después de tres meses (en 7 pacientes) y también se documentaron el tamaño y las características de la úlcera.

Se observó la cicatrización completa (reducción del área del 100%) en 5/15 úlceras en tres pacientes, una cicatrización excelente (84-99%) en cuatro úlceras en otros cuatro pacientes y una cicatrización favorable (58-59%) en dos úlceras. Se observó una mejoría mínima (25-30%) o recurrencia en las cuatro úlceras restantes (tres pacientes). En las cuatro úlceras no tratadas contiguas (dos pacientes), tres cicatrizaron completamente y una fue excelente. A diferencia de los pacientes con una cicatrización desfavorable (pacientes que no responden al tratamiento) el proceso de cicatrización en los pacientes que responden al tratamiento comenzó durante el tratamiento y continuó posteriormente. Hubo una correlación estadísticamente significativa (r = 0,94, p < 0,002) entre la microcirculación potenciada y una reducción del área de úlcera en las úlceras tratadas. Simultáneamente, el tratamiento antibacteriano en las úlceras con signos de infección mejoró considerablemente los resultados del tratamiento. Así, en el tratamiento local con HGF, se observó la cicatrización completa o parcial en 8/11 pacientes con úlceras crónicas en las piernas que no se habían podido curar durante hasta catorce años. La perfusión microcirculatoria, que podría reflejar el efecto angiogénico de HGF, se correlacionó positivamente con una reducción del área de úlcera. El tratamiento local con HGF parece tener un efecto positivo sobre úlceras vecinas, no tratadas localmente, lo que indica efectos sistémicos. No se observaron signos de alergia ni cáncer durante una observación de tres meses. HGF y el tratamiento antibacteriano representativo tienen efectos sinérgicos en el tratamiento de úlceras crónicas en las piernas.

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Datos de los pacientes, clasificación de las úlceras de las piernas y resultado del tratamiento local con HGF durante siete días. Tipo de úlcera: iv e ia = insuficiencia venosa y arterial, respectivamente, diab. = úlcera diabética y vasc. = vasculitis. T/NT (nº) es el número de úlceras tratadas localmente (T) y no tratadas (NT) en cada paciente. Se muestran los datos de las úlceras tratadas en la sección central y los datos de las úlceras no tratadas en la sección derecha. Loc es localización (ME y MI son el maléolo externo e interno, respectivamente, dx y sin son pierna derecha e izquierda, respectivamente). El área (cm^{2}) es el área de úlcera total (todas las úlceras tratadas en un paciente) y circ. es el cambio relativo en la microcirculación local, expresado como la proporción de la perfusión sanguínea en la piel antes del tratamiento y una semana después (NR = no realizado). % cicatr. es una reducción del área de úlcera hasta tres meses (todas las úlceras tratadas en un paciente). *suma de la reducción de área total dividida entre la suma del área total. **los pacientes que recibieron antibióticos representativos en el tratamiento. ***fracaso del tratamiento debido a bacterias resistentes \blacklozenge este paciente tenía dos úlceras con diferentes porcentajes de cicatrización.

Ejemplo 3 Aumento de los niveles de HGF en suero en pacientes con enfermedades infecciosas agudas

En un estudio prospectivo, se midieron los niveles de HGF en suero de pacientes con diferentes enfermedades infecciosas y de ancianos y adultos sanos. Se usó un procedimiento de ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). Se identificaron seis grupos clínicos (n = 10 en cada grupo): gastroenteritis, infección cutánea y de tejidos blandos, infección de las vías urinarias, septicemia, neumonía y hepatitis C crónica. Setenta y cinco personas sanas sirvieron como grupo control. Se encontraron niveles superiores de HGF en los sueros de pacientes con enfermedades infecciosas agudas (grupos 1-5) en comparación con la población sana así como en comparación con los pacientes con hepatitis C crónica (p < 0,0001). CRP y HGF estaban sumamente correlacionados (r = 0,65). Se concluyó que HGF aumenta en el suero de pacientes con enfermedades infecciosas agudas pero posiblemente no en infecciones crónicas.

Ejemplo 4 Los efectos de HGF recombinante humano (HGFrh) sobre la piel lampiña normal en ratones

Se afeitó el lomo de dieciocho ratones negros (de 14-16 semanas de edad y 21-29 g de peso), produciendo dos calvas de 1*1 cm en el lado derecho y en el izquierdo. Entonces se dividieron en 3 grupos. Grupo 1 (n = 6, hembras), grupo 2 (n = 6 machos) y grupo 3 (n = 6, 3 machos y 3 hembras). Se trató localmente el grupo 1 en el lado derecho mediante 0,70 [mu]g/kg (12-18 ng/cm^{2} de piel lampiña) del factor de crecimiento de hepatocitos recombinante humano (HGFrh) diariamente durante 10 días. Con el fin de preparar preparaciones de HGF, se proporcionó HGF recombinante humano (HGFrh) comercialmente de R&D systems Inc., Minneapolis, EE.UU. El grupo 2 (n = 6 machos) recibió 0,35 [mu]g/kg/día (5-10 ng/cm^{2} de piel lampiña) en el lado derecho durante 10 días. El grupo 3, no tratado, sirvió como grupo control. Ninguno de los animales tratados mostró ningún signo de intolerancia o enfermedad con o después del ciclo de tratamiento. Aunque no se observaron de forma obvia algunas diferencias significativas en el crecimiento del pelo con el tratamiento, se observó sorprendentemente que los animales del grupo 1 sí que mostraron un crecimiento de pelo en ambos lados completo en 5 animales 2 días después de terminarse el tratamiento (día 12). El mismo proceso en el grupo 2 y el grupo 3 requirió un tiempo mucho más largo (día 20 y día 21, respectivamente). Obviamente, aunque los animales en el grupo 2 mostraron un aumento del crecimiento de pelo en el lado derecho entre el día 15 y el día 18 de tratamiento, no hubo diferencias significativas entre este grupo y el grupo 3 según el tiempo que les llevó mostrar un crecimiento de pelo en ambos lados completo.

Se concluye que el tratamiento local de la piel lampiña, normal en ratones en las dosis no inferiores a 0,7 [mu]g/kg acelera el crecimiento de pelo y este tratamiento local se tolera por los animales sin problemas (véase la figura 6).

Ejemplo 5 Efectos morfogénicos después de tratamiento con HGF

Se afeitaron dos ratones (23-25 g) con úlceras e infecciones fúngicas espontáneas en sus lomos y se trataron localmente con violeta de genciana una vez. Uno de ellos se trató simultáneamente con factor de crecimiento de hepatocitos (HGFrh), 10 ng por vía subcutánea. El crecimiento de pelo fue bueno como en otros lugares del cuerpo, en el ratón que recibió HGF y tratamiento fungicida. En el otro ratón, el crecimiento de pelo fue desigual e irregular aunque se completó el crecimiento de pelo al mismo tiempo que en el otro ratón. Este ejemplo confirma los efectos morfogénicos de HGF en la recuperación tras lesiones infecciosas tratadas (véase la figura 7).

Ejemplo 6 Efectos de dependencia con la dosis de HGF

Se eliminó mediante rascado la monocapa confluente de CCL-53.1, formando largas heridas. Finalmente desapareció el área no cubierta por células, y se completó la restitución (en medio control con un 15% de suero equino y un 2,5 % de FBS) a las 72 h. La adición de HGF junto con la adición de un agente antibiótico (estreptomicina y penicilina) al medio de cultivo mejoró la restitución del área dañada más rápidamente que en el medio control (10 veces a las 24 h) así como a un medio que incluía HGF sin agentes antibióticos añadidos. El efecto muestra una dependencia con la dosis y puede detectarse usando HGF en una concentración de >=5 ng/ml.

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Ejemplo 7 Los efectos sinérgicos de HGF y los antibióticos en un paciente que tiene úlceras en las piernas

Una combinación de HGF y antibióticos acelera considerablemente la eficacia terapéutica del tratamiento. Esto se mostró en un paciente con una gran úlcera en evolución en la pierna con necrosis en la piel circundante. Los cultivos procedentes de la úlcera produjeron el crecimiento de Staphylococcus aureus y se trató el paciente con flucloxacilina durante 10 días antes del tratamiento con HGF. Se interrumpió el tratamiento con antibióticos y se tomaron nuevos cultivos que confirmaron los resultados previos. Entonces se trató el paciente con una combinación de HGF en forma de gel y antibióticos. La necrosis desapareció al día siguiente tras el tratamiento y la úlcera cicatrizó completamente en el plazo de 2 semanas, (véase la figura 5).

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Ejemplo 8 Los efectos sinérgicos de HGF y los antibióticos en un paciente que padece neumonía

Un paciente anciano con neumonía producida por Streptococcus pneumonia se había tratado previamente con antibióticos durante 10 días y a pesar de disminuir su temperatura y los niveles de proteína C reactiva (CRP) necesitaba oxígeno adicional debido a la insuficiencia respiratoria. Se trató una vez con disolución de HGF que se inhaló mediante un aparato. Se recuperó considerablemente al día siguiente y abandonó el hospital al tercer día.

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Una composición adecuada para la inhalación de HGF

HGF recombinante: 100 ng,

cloruro de sodio: 0,9%

heparina: 250 E hasta 1 ml.

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Ejemplo 9 Niveles de HGF en neumonía

El factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) es una proteína que se produce después de lesiones y se detecta en cantidades aumentadas en el suero durante enfermedades inflamatorias agudas. El pulmón es una de las fuentes principales de HGF. Se ha encontrado ARNm de HGF en macrófagos alveolares, lo que indica una producción local en las vías respiratorias.

Enfriando el aire exhalado, se forma un condensado que contiene moléculas procedentes de los bronquios y los alvéolos. Se quería estudiar si podría encontrarse HGF en el condensado de aire exhalado (EBC) e investigar su concentración y el transcurso temporal en la neumonía.

Se recogió suero y EBC emparejados de 10 pacientes con neumonía, 10 pacientes con otras enfermedades infecciosas y 10 personas sanas. Las concentraciones de HGF fueron significativamente superiores tanto en suero como en EBC en pacientes con neumonía aguda que en los dos grupos control. Se observó una disminución significativa en la concentración en suero ya tras 4-7 días, mientras que los niveles elevados de HGF de EBC persistieron incluso después de 4-6 semanas. Puede interpretarse que estos resultados refuerzan el concepto de una producción local de HGF y un largo proceso de reparación y cicatrización tras neumonía.

Tiene lugar un aumento de la producción de HGF tanto sistémica como localmente en las infecciones. Se ha mostrado que tiene lugar la producción intratecal de HGF en fluidos en la meningitis aguda. Las altas concentraciones de HGF reflejan los intentos del cuerpo para llevar a cabo la cicatrización de úlceras y las bajas concentraciones de HGF en las infecciones, tales como neumonía, (a pesar del aumento de CRP, proteína C reactiva), pueden relacionarse con un mal pronóstico. Se ha hecho un seguimiento de los valores de HGF en suero en la neumonía durante el transcurso del tratamiento y se ha observado que puede usarse HGF como marcador para la eficacia del tratamiento de la neumonía.

La invención no se limita a las realizaciones mencionadas anteriormente sino que se interpretará dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims

1. El uso de una combinación de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) y al menos un agente antibiótico para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de un mamífero que padece una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, una lesión en el aparato respiratorio producida por quemaduras y/o infecciones o úlceras crónicas infectadas en las piernas en los pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada.

2. El uso de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) para la preparación de una composición farmacéutica destinada para la administración a un mamífero tratado con antibióticos que padece una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, una lesión en el aparato respiratorio producida por quemaduras y/o infecciones o úlceras crónicas infectadas en las piernas en los pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada.

3. Uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que el mamífero es un ser humano.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el agente antibiótico es un agente antibacteriano.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el agente antibiótico es un fungicida.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que dicha composición puede administrarse tópicamente, por vía intravenosa, por vía intramuscular, por vía subcutánea, mediante inhalación, por vía intratecal o por vía
rectal.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que dicha composición comprende HGF recombinante.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicha composición comprende un polipéptido que muestra una actividad de HGF.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-8 en el que dicha composición comprende células transfectadas que expresan HGF.

10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que dicha composición comprende heparina.

11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que dicha composición comprende heparina de bajo peso molecular tal como fragmina.

12. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, una lesión en el aparato respiratorio producida por quemaduras y/o infecciones o úlceras crónicas infectadas en las piernas en los pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, que comprende una cantidad terapéuticamente activa de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) y al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión.

13. Un kit para el tratamiento de una lesión producida o complicada por infecciones tales como neumonía, una lesión en el aparato respiratorio producida por quemaduras y/o infecciones o úlceras crónicas infectadas en las piernas en los pacientes que padecen diabetes, insuficiencia venosa o venosa/arterial combinada, que comprende al menos un agente antibiótico al que responde la infección en cuestión y una composición que comprende una cantidad terapéuticamente activa de HGF (factor de crecimiento de hepatocitos).

14. Composición farmacéutica según la reivindicación 12, en la que el agente antibiótico es un agente antibacteriano,

15. Composición farmacéutica según la reivindicación 12, en la que el agente antibiótico es un fungicida.

16. Composición farmacéutica según la reivindicación 12, 14 ó 15, en la que la composición puede administrarse tópicamente, por vía intravenosa, por vía intramuscular, por vía subcutánea, mediante inhalación, por vía intratecal o por vía rectal.

17. Composición farmacéutica según la reivindicación 12 ó 14-16, en la que dicha composición comprende HGF recombinante.

18. Composición farmacéutica según la reivindicación 12 ó 14-17, en la que dicha composición comprende un polipéptido que muestra actividad de HGF.

19. Composición farmacéutica según la reivindicación 12 ó 14-18, en la que dicha composición comprende células transfectadas que expresan HGF.

20. Composición farmacéutica según la reivindicación 12 ó 14-19, en la que dicha composición comprende heparina.

21. Composición farmacéutica según la reivindicación 12 ó 14-20, en la que dicha composición comprende heparina de bajo peso molecular tal como fragmina.

22. Kit según la reivindicación 13, en el que el agente antibiótico es un agente antibacteriano.

23. Kit según la reivindicación 13, en el que el agente antibiótico es un fungicida.

24. Kit según la reivindicación 13, 22 ó 23, en el que dicha composición puede administrarse tópicamente, por vía intravenosa, por vía intramuscular, por vía subcutánea, mediante inhalación, por vía intratecal o por vía rectal.

25. Kit según la reivindicación 13 ó 22-24, en el que dicha composición comprende HGF recombinante.

26. Kit según la reivindicación 13 ó 22-25, en el que dicha composición comprende un polipéptido que muestra actividad de HGF.

27. Kit según la reivindicación 13 ó 22-26, en el que dicha composición comprende células transfectadas que expresan HGF.

28. Kit según la reivindicación 13 ó 22-27, en el que dicha composición comprende heparina.

29. Kit según la reivindicación 13 ó 22-28, en el que dicha composición comprende heparina de bajo peso molecular tal como fragmina.