ES2292937T3

ES2292937T3 - Moduladores para el receptor activado por el proliferador de peroxisomas.

Info

Publication number: ES2292937T3
Application number: ES03706045T
Authority: ES
Inventors: Tracey Ann Gibson; Nathan Bryan Mantlo; Richard Craig Thompson
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2002-02-21
Filing date: 2003-02-07
Publication date: 2008-03-16
Anticipated expiration: 2023-02-07
Also published as: ATE375350T1; WO2003072099A1; US20050250831A1; JP2005523292A; EP1490058A1; DE60316780T2; DE60316780D1; AU2003207808A1; EP1490058B1

Abstract

Un método para detectar si una alarma audible generada por un detector de humo se encuentra activa. La alarma audible posee un periodo de alarma que comprende una pluralidad de periodos activos y una pluralidad de periodos inactivos organizados en un modelo temporal predeterminado. Cada uno de los periodos activos consiste en un periodo durante el cual el detector de humo emite un sonido de alarma audible. Cada uno de los periodos inactivos consiste en un periodo durante el cual el detector de humo no emite un sonido audible. Este método comprende: la detección de un valor pico en cada uno de los múltiples periodos de muestra. Cada uno de los periodos de muestra se corresponde con uno de los periodos activos o inactivos previstos en un periodo de alarma único; el método se caracteriza por comprender además: la selección de un valor pico máximo de entre los valores pico; el establecimiento de un umbral de amplitud en función del valor pico máximo; la comparación de cada uno de los valores pico con el umbral de amplitud por lo que respecta a cada uno de los periodos de muestra con el fin de determinar los periodos de muestra que poseen un valor pico que sobrepasa el umbral de amplitud; la determinación de si la alarma audible se encuentra activa, basándose al menos en parte en si el modelo temporal de los periodos de muestra en que el valor pico sobrepasa el umbral de amplitud se corresponde con el modelo temporal predeterminado.

Description

Moduladores para el receptor activado por el proliferador de peroxisomas.

Antecedentes de la invención

Los receptores activados por el proliferador de peroxisomas (PPAR) son miembro de la superfamilia de los receptores de hormonas nucleares, que son factores de transcripción activados por ligandos que regulan la expresión génica. Se han descubierto diversos subtipos de PPAR. Éstos incluyen PPAR\alpha, NUC1, PPAR\gamma y PPAR\delta.

Se ha indicado que los receptores de subtipo PPAR\alpha son activados por ácidos grasos de cadena larga y media. Están implicados en la estimulación de la beta-oxidación de ácidos grasos y con la actividad de fibratos que, según se informa, producen una reducción sustancial de los triglicéridos plasmáticos y una reducción moderada del colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL).

Los receptores PPAR\alpha, PPAR\gamma y PPAR\delta se han implicado en la diabetes mellitus, la enfermedad cardiovascular, la obesidad, el síndrome X y la enfermedad gastrointestinal, tal como la enfermedad del intestino inflamatoria. El síndrome X es la combinación de síntomas que incluyen hiperinsulemina combinada con hipertensión, elevado peso corporal, triglicéridos elevados y LDL elevado.

El documento WO 03/024937, que reivindica una prioridad del 14 de septiembre de 2001 y se publicó el 27 de marzo de 2003, se dirige a derivados del ácido benzimidazolilalcoxiarilalcanoico y su uso como antihiperglucémicos; el documento US 4.314.065 se dirige a derivados de diarilamina como herbicidas; el documento EP 0157225 se dirige a un procedimiento para la preparación de derivados de benzimidazol; el documento EP 1167357 se dirige a derivados de ácido carboxílico alfa-sustituido como agentes terapéuticos para la diabetes mellitus; el documento DE 2641060 se dirige a derivados de \beta-lactama; el documento EP 0015005 se dirige a derivados de fenoxi y su uso como herbicidas; el documento EP 0894795 se dirige a compuestos de benzimidazol y su uso como inhibidores de la interleuquina-1\beta; el documento WO 00/64888 se dirige a derivados de diarilácido como ligandos del receptor PPAR.

El actual tratamiento de agonistas de PPAR para el síndrome X se refiere al uso de tiazolidindionas (TZD) u otros potenciadores de sensibilidad a la insulina (ISE). Las TZD son una clase de agonistas de PPAR\gamma que se ha demostrado que aumentan la sensibilidad a la insulina de células sensibles. El aumento de la sensibilidad a la insulina, en lugar de aumentar la cantidad de insulina en la sangre, reduce la probabilidad de coma hipoglucémico. Sin embargo, TZD e ISE tiene poco efecto, de forma típica, para prevenir la parte cardiovascular del síndrome X, porque su administración no produce como resultado, normalmente, una disminución de los triglicéridos y del colesterol-LDL, al mismo tiempo que aumenta el colesterol-HDL. Además, los efectos secundarios que normalmente se asocian al tratamiento con TZD incluyen una significativa ganancia de peso y, para la troglitazona, una toxicidad hepática. Por tanto, existe la necesidad de nuevos agentes farmacéuticos que puedan tratar o prevenir la enfermedad cardiovascular, en particular aquella asociada con el síndrome X, al mismo tiempo que eviten o minimicen la ganancia de peso y, más preferiblemente, al mismo tiempo que mejoren la sensibilidad a la insulina.

Sumario de la invención

La presente invención se dirige a compuestos representados por la siguiente fórmula estructural I:

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y sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que:

(a) R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, aril(alquilo C_{0-4}), heteroaril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})aril(alquilo C_{0-2}), en los que dichos alquilo C_{1}-C_{8}, aril(alquilo C_{0-4}), heteroaril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})aril(alquilo C_{0-2}) están cada uno opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de R1';

(b) R1', R2', R4', R6', A', Z' y R19' son cada uno el grupo que consiste en alquilo C_{1}-C_{5}, alcoxi C_{1}-C_{5}, haloalquilo C_{1}-C_{5}, haloalcoxi C_{1}-C_{5}, nitro, ciano, CHO, hidroxilo, ácido fenil(alcanoico C_{1}-C_{4}), ariloxi, SO_{2}R16, SR5, benciloxi, alquilcarboxamido y COOH;

(c) R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquilo C_{1}-C_{4}), alquileno C_{1}-C_{8}, aril(alquilo C_{0-4}), heteroaril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})alquilo C_{0-4}, y en los que dichos (alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquilo C_{1}-C_{4}), alquileno C_{1}-C_{8}, aril(alquilo C_{0-4}), heteroaril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})alquilo C_{0-4} están cada uno opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de R2';

(d) R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{5}, y alcoxi C_{1}-C_{5};

(e) R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{5}, alcoxi C_{1}-C_{5}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, y aril(alquilo C_{0}-C_{4}), y en los que dichos alquilo C_{1}-C_{5}, alcoxi C_{1}-C_{5}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, y aril(alquilo C_{0}-C_{4}) están cada uno opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de R4'; y en la que R3 y R4 se combinan opcionalmente para formar un cicloalquilo C_{3}-C_{4};

(f) R5 y R6 se seleccionan cada uno del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, y haloalquilo C_{1}-C_{6};

(g) R6 y R7 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, halógeno, oxi, y alcoxi C_{1}-C_{6}, y en los que dichos alquilo C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, y alcoxi C_{1}-C_{6} están cada uno opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de R6'; y en la que R6 y R7 se combinan opcionalmente para formar un arilo C_{3}-C_{6} que está condensado con el grupo del cual se originan cada uno de R6 y R7;

(h) W se selecciona del grupo que consiste en O, C, N y S;

(i) Z es alquilo C_{3} opcionalmente sustituido con Z';

(j) A se selecciona del grupo que consiste en carboxilo, carboxamida, sulfonamida, acilsulfonamida, tetrazol y (CH_{2})_{n}COOR19, y en los que dichos sulfonamida, acilsulfonamida y tetrazol están cada uno opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de A';

(k) n es 0, 1, 2 ó 3; y

(l) R19 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} y arilmetilo, en los que dichos alquilo y arilmetilo están cada uno opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de R19'.

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y sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que:

(a) R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, un grupo sustituido o no sustituido seleccionado de alquilo C_{1}-C_{8}, aril(alquilo C_{0-4}), heteroaril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})aril(alquilo C_{0-2});

(b) R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, un grupo sustituido o no sustituido seleccionado de (alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquilo C_{1}-C_{4}), alquileno C_{1}-C_{8}, aril(alquilo C_{0-4}), heteroaril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})alquilo C_{0-4};

(c) R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{5} saturado o insaturado, y alcoxi C_{1}-C_{5};

(d) R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, un grupo sustituido o no sustituido seleccionado de alquilo C_{1}-C_{5}, alcoxi C_{1}-C_{5}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, aril(alquilo C_{0}-C_{4}), y fenilo, o R3 y R4 se combinan para formar un cicloalquilo C_{3}-C_{4};

(e) R6 y R7 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, halógeno, oxi, y alcoxi C_{1}-C_{6} sustituidos o no sustituidos; y en la que R6 y R7 se combinan opcionalmente para formar un arilo C_{3}-C_{6} que está condensado con el grupo del cual se originan cada uno de R6 y R7;

(f) W se selecciona del grupo que consiste en O, C, N y S;

(g) Z es alquilo C_{3} lineal opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{5} o alcoxi C_{1}-C_{5};

(h) A es un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste en carboxilo, carboxamida, sulfonamida sustituida o no sustituida, acilsulfonamida sustituida o no sustituida, y tetrazol sustituido o no sustituido, y (CH_{2})_{n}COOR19;

(i) n es 0, 1, 2 ó 3; y

(j) R19 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituido, y arilmetilo opcionalmente sustituido.

En otra característica de esta invención, un compuesto reivindicado en la presente está radiomarcado.

En general, se prefiere más que A sea un grupo carboxilo. En general, se prefiere aún más que R_{3} sea H o CH_{3}. Puede preferirse que ambos R3 y R4 sean cada uno CH_{3}. En otra realización preferida, R3 y R4 son cada uno hidrógeno.

En una realización, la presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de la presente invención, o su sal farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otra realización, la presente invención también se refiere a un procedimiento para fabricar un compuesto representado por la fórmula estructural I.

Se cree que los compuestos de la presente invención son eficaces para tratar y prevenir el síndrome X, la diabetes de tipo II, la hiperglucemia, la hiperlipidemia, la obesidad, la coagulopatía, la hipertensión, la aterosclerosis y otros trastornos relacionados con el síndrome X y las enfermedades cardiovasculares. Además, los compuestos pueden asociarse con menores efectos secundarios clínicos que los compuestos que se emplean en la actualidad para tratar estos trastornos. Además, los compuestos de esta invención pueden ser útiles para disminuir el fibrinógeno, aumentar los niveles de HDL, tratar la enfermedad renal, controlar un peso deseable, tratar enfermedades desmielinizantes, tratar ciertas infecciones víricas, y tratar la enfermedad hepática.

Descripción detallada de la invención

Los términos y expresiones utilizados para describir la presente invención tienen los siguientes significados en la presente.

Tal como se utiliza en la presente, los grupos alquilo incluyen hidrocarburos de cadena lineal o ramificada, que están completamente saturados.

Tal como se utiliza en la presente, los grupos alquenilo son cadenas de hidrocarburos que tienen el número indicado de átomos de carbono (lineales o ramificadas) y que tienen al menos un punto de insaturación, formando un doble enlace en dicho punto de insaturación.

Los grupos cicloalquilo, tal como se utiliza en la presente, incluyen hidrocarburos cíclicos, que están parcial o totalmente saturados. Tal como se utiliza en la presente, los grupos arilo incluyen sistemas de anillos aromáticos carbocíclicos (por ejemplo, fenilo), sistemas de anillos policíclicos condensados (por ejemplo, naftilo y antracenilo), y sistemas de anillos aromáticos condensados con sistemas de anillos no aromáticos carbocíclicos (por ejemplo, 1,2,3,4-tetrahidronaftilo y benzodioxilo).

Un grupo heterocíclico, tal como se utiliza en la presente, es un sistema de anillos que tiene al menos un heteroátomo, tal como nitrógeno, azufre u oxígeno. Los grupos heterocíclicos incluyen benzofuranilo, benzotiazolilo, benzotienilo, isoquinolilo, isoxazolilo, morfolino, oxadiazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolilo, quinolilo, tetrahidropiranilo y tienilo.

Los sustituyentes adecuados cuando al menos uno de dichos R1, R2, R3, R4, R6, R7, A y R19 está sustituido son uno o más, seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo C_{1}-C_{5}, alcoxi C_{1}-C_{5}, haloalquilo C_{1}-C_{5}, haloalcoxi C_{1}-C_{5}, nitro, ciano, CHO, hidroxilo, ácido fenil(alcanoico C_{1}-C_{4}), ariloxi, SO_{2}R7, SR5, benciloxi, alquilcarboxamido y COOH. R5 es un alquilo o un haloalquilo. Cuando R1, R2, R3, R4, R6, R7, A o R19 está sustituido, se prefiere que haya 1-3 sustituciones sobre dicho grupo R1, R2, R3, R4, R6, R7, A y R19.

En una realización preferida de esta invención, Z no está sustituido.

Preferiblemente, para los compuestos de la presente invención representados por la fórmula estructural I, y con sus respectivas composiciones farmacéuticas, W es un oxígeno.

Cuando un compuesto representado por la fórmula estructural I tiene más de un sustituyente quiral, puede existir en formas diastereoisómeras. Las parejas diastereoisómeras pueden separarse mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, cromatografía o cristalización, y los enantiómeros individuales dentro de cada pareja pueden separarse utilizando procedimientos familiares para los expertos en la técnica. La presente invención incluye cada diastereoisómero de los compuestos de fórmula estructural I y sus mezclas.

Ciertos compuestos de fórmula estructural I pueden existir en diferentes formas conformacionales estables que pueden separarse. La asimetría de torsión debida a una rotación restringida alrededor de un enlace sencillo asimétrico, por ejemplo debido a impedimentos estéricos o tensiones del anillo, puede permitir la separación de los diferentes confórmeros. La presente invención incluye cada isómero conformacional de los compuestos de fórmula estructural I y sus mezclas.

Ciertos compuestos de fórmula estructural I pueden existir en forma bipolar, y la presente invención incluye cada forma bipolar de los compuestos de fórmula estructural I y sus mezclas.

Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales de los compuestos de fórmula estructural I que son sustancialmente no tóxicas para mamíferos. Las sales farmacéuticamente aceptables típicas incluyen las sales preparadas haciendo reaccionar los compuestos de la presente invención con un ácido mineral u orgánico, o una base orgánica o inorgánica. Estas sales son conocidas como sales de adición de bases, respectivamente. Debe reconocerse que el contraión particular que forma parte de cualquier sal de esta invención no es de naturaleza crítica, con la condición de que la sal, como un todo, sea farmacéuticamente aceptable, y con la condición de que el contraión no aporte cualidades indeseables a la sal como un todo.

En virtud de su radical ácido, un compuesto de fórmula estructural I forma sales con bases farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos de fórmula estructural I, que están sustituidos con un grupo básico, pueden existir como sales con ácidos farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye dichas sales. Estas sales pueden prepararse mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica.

La expresión "ingrediente activo" significa los compuestos genéricamente descritos por la fórmula estructural I, así como las sales de dichos compuestos.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" significa que el vehículo, diluyente, excipientes y sal deben ser compatibles con los otros ingredientes de la composición, y no ser perjudiciales para el receptor de ésta. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan mediante procedimientos conocidos en la técnica, empleando ingredientes muy conocidos y fácilmente disponibles.

"Prevenir" hace referencia a reducir la probabilidad de que el receptor incurra o desarrolle cualquiera de los trastornos patológicos descritos en la presente. El término "prevenir" se aplica particularmente a un paciente que es susceptible al trastorno patológico concreto.

"Tratar" hace referencia a mediar en una enfermedad o trastorno, y prevenir o mitigar su posterior avance, o mejorar los síntomas asociados con la enfermedad o trastorno.

Una "cantidad farmacéuticamente eficaz" significa la cantidad de un compuesto, o su sal, que produce la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema o mamífero. Esta cantidad puede administrarse de modo profiláctico a un paciente del cual se piensa que es susceptible al desarrollo de una enfermedad o trastorno. Esta cantidad, cuando se administra de modo profiláctico a un paciente, también puede ser eficaz para prevenir o disminuir la gravedad del trastorno mediado. Esta cantidad pretende incluir una cantidad que sea suficiente para modular un receptor PPAR seleccionado, o para prevenir o mediar en una enfermedad o trastorno. Los trastornos prevenidos o tratados mediante la modulación de uno o más receptores PPAR incluyen la diabetes mellitus, la enfermedad cardiovascular, el síndrome X, la obesidad y la enfermedad gastrointestinal.

Un "mamífero" es un animal individual que es miembro de la clase taxonómica Mammalia. La clase Mammalia incluye seres humanos, monos, chimpancés, gorilas, ganado vacuno, ganado porcino, caballos, ovejas, perros, gatos, ratones y ratas.

La administración a un ser humano es lo más preferido. Los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para el tratamiento y/o la profilaxis de la enfermedad cardiovascular, para aumentar los niveles séricos de colesterol HDL, para disminuir los niveles de triglicéridos séricos, y para disminuir los niveles séricos de colesterol LDL. Unos niveles elevados de triglicéridos y LDL, y unos bajos niveles de HDL, son factores de riesgo para el desarrollo de una enfermedad cardíaca, accidentes cerebrovasculares, y trastornos y enfermedades del sistema
circulatorio.

Los compuestos y composiciones de la presente invención también son útiles para tratar y/o prevenir la obesidad.

Además, estos compuestos y composiciones son útiles para el tratamiento y/o la profilaxis de la diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM), sin ganancia de peso o con una ganancia de peso reducida de los pacientes. Además, los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para tratar o prevenir trastornos agudos o transitorios de la sensibilidad a la insulina, tales como los que aparecen a veces después de cirugía, traumatismos, infarto de miocardio y similares. El médico experto en la técnica sabrá cómo identificar a los seres humanos que se beneficien de la administración de los compuestos y composiciones de la presente invención.

La presente invención proporciona además un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de la hiperglucemia en un mamífero humano o no humano, que comprende administrar una cantidad eficaz y no tóxica de un compuesto de fórmula general (I), o su forma tautómera y/o su sal farmacéuticamente aceptable, a un mamífero humano o no humano hiperglucémico que lo necesite.

La invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula I tal como se describió anteriormente, para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno mediado por un receptor PPAR.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula estructural I puede utilizarse para la preparación de un medicamento útil para tratar el síndrome X, la diabetes, para tratar la obesidad, para disminuir los niveles de triglicéridos, para disminuir los niveles séricos de LDL, para aumentar el nivel plasmático de lipoproteínas de alta densidad, y para tratar, prevenir o reducir el riesgo de desarrollar aterosclerosis, y para prevenir o reducir el riesgo de tener un primer o posterior acontecimiento aterosclerótico en mamíferos, en particular en seres humanos. En general, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención reduce, de forma típica, los niveles séricos de triglicéridos de un paciente en aproximadamente 20% o más, y aumenta los niveles séricos de HDL en un paciente. Preferiblemente, los niveles de HDL aumentarán en aproximadamente 30% o más. Además, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto utilizada para prevenir o tratar NIDDM reduce, de forma típica, los niveles séricos de glucosa o, más específicamente, HbA1c, de un paciente en aproximadamente 0,7% o más.

De forma ventajosa, las composiciones que contienen el compuesto de fórmula estructural I o sus sales pueden proporcionarse en una forma de dosificación unitaria, preferiblemente cada dosificación unitaria contiene de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 500 mg para ser administrados, aunque, por supuesto, se entenderá con facilidad que la cantidad del compuesto o compuestos de fórmula estructural I que realmente se vaya a administrar será determinada por un médico, a la luz de todas las circunstancias pertinentes.

Cuando se utiliza en la presente, el síndrome X incluye el síndrome de resistencia a la insulina prediabético y las complicaciones resultantes de éste, la resistencia a la insulina, la diabetes no dependiente de insulina, la dislipidemia, la hiperglucemia, la obesidad, la coagulopatía, la hipertensión y otras complicaciones asociadas con la diabetes. Los procedimientos y tratamientos mencionados en la presente incluyen los anteriores, e incluyen el tratamiento y/o profilaxis de uno cualquiera o de cualquier combinación de los siguientes: síndrome de resistencia a la insulina prediabético, las complicaciones resultantes de éste, resistencia a la insulina, diabetes no dependiente de insulina o de tipo II, dislipidemia, hiperglucemia, obesidad, y las complicaciones asociadas con la diabetes, incluyendo enfermedad cardiovascular, en especial aterosclerosis.

Las composiciones se formulan y administran de la misma manera general detallada en la presente. Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse de modo eficaz por sí solos o en combinación con uno o más agentes activos adicionales, dependiendo de la terapia diana deseada. Una terapia de combinación incluye la administración de una única composición de dosificación farmacéutica que contiene de un compuesto de fórmula estructural I y uno o más agentes activos adicionales, así como la administración de un compuesto de fórmula estructural I y cada agente activo en su propia formulación de dosificación farmacéutica. Por ejemplo, un compuesto de fórmula estructural I o su sal, y un secretagogo de la insulina, tal como biguanidas, tiazolindionas, sulfonilureas, insulina o inhibidores de la \alpha-glucosidasa, pueden administrarse al paciente juntos en una única composición de dosificación oral, tal como un comprimido o cápsula, o cada agente se administra en formulaciones de dosificación oral separadas. Cuando se emplean formulaciones de dosificación separadas, un compuesto de fórmula estructural I y uno o más agentes activos adicionales pueden administrarse esencialmente al mismo tiempo, es decir, en el mismo momento, o en momentos diferentes escalonados, es decir, de forma secuencial; se entiende que una terapia de combinación incluye todos estos regímenes.

Un ejemplo de prevención o tratamiento de combinación de la aterosclerosis puede ser cuando un compuesto de fórmula estructural I, o sus sales, se administra en combinación con uno o más de los siguientes agentes activos: agentes antihiperlipidémicos; agentes que aumentan el HDL plasmático; agentes antihipercolesterolémicos; fibratos; vitaminas; aspirina; y similares. Como se indicó anteriormente, los compuestos de fórmula estructural I pueden administrarse en combinación con más de un agente activo adicional.

Otro ejemplo de terapia de combinación puede observarse en el tratamiento de la diabetes y los trastornos relacionados, en el que los compuestos de fórmula estructural I, o sus sales, pueden utilizarse de forma eficaz en combinación, por ejemplo, con sulfonilureas, biguanidas, tiazolindionas, inhibidores de la \alpha-glucosidasa, otros secretagogos de la insulina, insulina, así como los agentes activos analizados anteriormente para tratar la aterosclerosis.

Los compuestos de la presente invención, y las sales farmacéuticamente aceptables, tienen valiosas propiedades farmacológicas, y pueden emplearse en composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, o sus sales farmacéuticamente aceptables, en combinación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Los excipientes son sustancias inertes tales como, pero sin limitación, vehículos, diluyentes, cargas, agentes aromatizantes, edulcorantes, lubricantes, solubilizantes, agentes suspensores, agentes humectantes, ligantes, agentes disgregantes, material encapsulante y otros adyuvantes convencionales. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Las composiciones farmacéuticas contienen, de forma típica, de aproximadamente 1% a aproximadamente 99% en peso del ingrediente activo, que es un compuesto de la presente invención.

Preferiblemente, la formulación farmacéutica está en forma de dosificación unitaria. Una "forma de dosificación unitaria" es una unidad físicamente discreta que contiene una dosis unitaria, adecuada para la administración a sujetos humanos u otros mamíferos. Por ejemplo, una forma de dosificación unitaria puede ser una cápsula o comprimido, o una serie de cápsulas o comprimidos. Una "dosis unitaria" es una cantidad predeterminada del compuesto activo de la presente invención, calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. La cantidad de ingrediente activo en una dosis unitaria puede variarse o ajustarse desde aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1000 miligramos o más, según el tratamiento concreto
implicado.

El régimen de dosificación que utiliza los compuestos de la presente invención es seleccionado por los expertos en la técnica médica o veterinaria, a la vista de una diversidad de factores, incluyendo, pero sin limitación, la especie, edad, peso, sexo y trastorno médico del receptor, la gravedad del trastorno que se va a tratar, la vía de administración, el nivel de función metabólica y excretora del receptor, la forma de dosificación empleada, el compuesto concreto y su sal empleados, y similares.

Preferiblemente, los compuestos de la presente invención se administran en una única dosis diaria, o la dosis diaria total puede administrarse en dosis divididas, dos, tres o más veces diarias. Cuando se administra mediante formas transdérmicas, la administración, por supuesto, es continua.

Las vías de administración adecuadas de las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen, por ejemplo, la administración oral, en colirio, rectal, transmucósica, tópica o intestinal; la administración parenteral (en embolada o infusión), incluyendo inyecciones intramusculares, subcutáneas e intramedulares, así como inyecciones intratecales, intraventriculares directas, intravenosas, intraperitoneales, intranasales o intraoculares. Los compuestos de la invención también pueden administrarse en un sistema de administración dirigida de fármacos, tal como, por ejemplo, en un liposoma revestido con anticuerpos específicos de células endoteliales.

Para la administración oral, los compuestos pueden formularse con facilidad combinando los compuestos activos con vehículos farmacéuticamente aceptables muy conocidos en la técnica. Estos vehículos permiten que los compuestos de la invención puedan formularse como comprimidos, píldoras, polvos, sobres, gránulos, grageas, cápsulas, líquidos, elixires, tinturas, geles, emulsiones, jarabes, suspensiones espesas, suspensiones y similares, para la ingestión oral por un paciente que se va a tratar. Las preparaciones farmacéuticas para un uso oral puede obtenerse combinando el compuesto activo con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir sustancias auxiliares adecuadas, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas.

Para la administración oral en forma de un comprimido o cápsula, el ingrediente activo puede combinarse con un vehículo oral, no tóxico y farmacéuticamente aceptable, tal como, pero sin limitación, lactosa, almidón, sacarosa, glucosa, metilcelulosa, carbonato de calcio, fosfato de calcio, sulfato de calcio, carbonato de sodio, manitol, sorbitol y similares, junto con, opcionalmente, agentes disgregantes, tales como, pero sin limitación, polivinilpirrolidona reticulada, maíz, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantano, ácido algínico o su sal, tal como alginato de sodio, y similares; y, opcionalmente, agentes ligantes, por ejemplo, pero sin limitación, gelatina, goma arábiga, azúcares naturales, beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, goma arábiga, tragacanto, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares; y, opcionalmente, agentes lubricantes, por ejemplo, pero sin limitación, estearato de magnesio, estearato de sodio, ácido esteárico, oleato de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, talco y similares. Cuando una forma de dosificación unitaria es una cápsula, puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un vehículo líquido, tal como un aceite graso.

Las formulaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos y cápsulas. Un vehículo sólido puede ser una o más sustancias que también pueden actuar como agentes aromatizantes, lubricantes, solubilizantes, agentes suspensores, ligantes, agentes disgregantes de comprimidos, y material encapsulante.

En los polvos, el vehículo es un sólido finamente dividido que está mezclado con el ingrediente activo finamente dividido. En los comprimidos, el ingrediente activo se mezcla con un vehículo que tenga las propiedades de unión necesarias en proporciones adecuadas, y se compacta en la forma y tamaño deseados.

Pueden estar presentes diversos otros materiales como revestimientos, o para modificar la forma física de la dosificación unitaria. Por ejemplo, los comprimidos pueden revestirse con goma laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elixir puede contener, además del ingrediente activo, sacarosa como agente edulcorante, metil- y propilparabenos como conservantes, un tinte y un aromatizante, tal como aroma de cereza o naranja.

Las formulaciones líquidas estériles incluyen suspensiones, emulsiones, jarabes, y elixires. El ingrediente activo puede disolverse o suspenderse en un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como agua estéril, un disolvente orgánico estéril, o una mezcla de agua estéril y disolvente orgánico estéril.

El ingrediente activo también puede disolverse en un disolvente orgánico adecuado, por ejemplo propilenglicol acuoso. Otras composiciones pueden prepararse dispersando el ingrediente activo finamente dividido en almidón acuoso o una disolución de carboximetilcelulosa de sodio, o en un aceite adecuado.

Los núcleos de grageas se proporcionan con revestimientos adecuados. Para este fin, pueden emplearse disoluciones concentradas de azúcares, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, disoluciones de laca, y disolventes o mezclas de disolventes orgánicos adecuados. Pueden añadirse tintes o pigmentos a los revestimientos de comprimidos o grageas para su identificación, o para caracterizar las diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo.

Las preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse por vía oral incluyen cápsulas duras fabricadas con gelatina, así como cápsulas blandas, selladas, fabricadas con gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras puede contener los ingredientes activos mezclados con una carga, tal como lactosa, ligantes, tales como almidones y/o lubricantes, tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En las cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida, o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizantes.

Todas las formulaciones para la administración oral deben estar en dosificaciones adecuadas para dicha administración. Las composiciones particularmente adecuadas para la administración oral son las formas de dosificación unitarias, tales como comprimidos y cápsulas.

Para la administración parenteral, los compuestos de la presente invención, o sus sales, pueden combinarse con medios acuosos u orgánicos estériles para formar disoluciones o suspensiones inyectables. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, tal como en ampollas o recipientes de dosis múltiples, con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar la forma de suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como agentes suspensores, estabilizantes y/o dispersantes. Las formas farmacéuticas adecuadas para un uso inyectable incluyen disoluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación improvisada de disoluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser lo suficientemente fluida para que pueda inyectarse. Debe ser estable bajo las condiciones de fabricación y conservación, y debe conservarse de cualquier contaminación. El vehículo puede ser un medio disolvente o de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles, tales como disolución de Hanks, disolución de Ringer o tampón de disolución salina fisiológica, etanol, polioles (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, propilenglicol y polietilenglicol líquido), sus mezclas adecuadas, y aceites vegetales. Bajo condiciones normales de conservación y uso, estas preparaciones contienen un conservante para evitar el crecimiento de microorganismos.

Para la administración transmucósica, en la formulación se emplean penetrantes apropiados para la barrera que va a ser permeada. Estos penetrantes son conocidos, en general, en la técnica. Los compuestos activos también pueden administrarse por vía intranasal como, por ejemplo, gotas líquidas o pulverizado.

Para la administración bucal, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos o pastillas para chupar formuladas de modo convencional.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden fabricarse de una manera conocida en sí misma, por ejemplo, mediante procedimientos convencionales de mezclado, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, atrapamiento o liofilización.

Las siguientes formulaciones farmacéuticas 1 y 2 son sólo ilustrativas y no pretenden limitar el alcance de la invención de ninguna manera. El "ingrediente activo" hace referencia a un compuesto según la fórmula estructural I o sus sales.

Formulación 1

Se preparan cápsulas de gelatina dura utilizando los siguientes ingredientes:

3

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Formulación 2

Se prepara un comprimido utilizando los siguientes ingredientes:

4

Los componentes se mezclan y se comprimen para formar comprimidos que pesan cada uno 665 mg.

En otra realización de los compuestos de la presente invención, el compuesto se marca de modo radiactivo, tal como con carbono-14, o se tritia. Dichos compuestos radiomarcados o tritiados son útiles como patrones de referencia para ensayos in vitro para identificar nuevos agonistas del receptor PPAR selectivos.

Los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para modular la secreción de insulina, tratar y/o prevenir la enfermedad cardiovascular, y como herramientas de investigación. Se prefieren ciertos compuestos y trastornos dentro del alcance de esta invención. Los siguientes trastornos, realizaciones de la invención y características del compuesto listadas en forma tabular son características preferidas, y pueden combinarse independientemente para producir una diversidad de compuestos y condiciones de procedimiento preferidas. La siguiente lista de realizaciones de esta invención no pretende limitar el alcance de esta invención de ninguna manera.

Algunas características preferidas de los compuestos de fórmula I son:

(a) R1 se selecciona del grupo que consiste en aril(alquilo C_{0}-C_{4}) y alquilo;

(b) R3 es metilo;

(c) R4 es hidrógeno;

(d) R2 es hidrógeno;

(e) R2 es alquileno C_{1}-C_{6};

(f) R2 se selecciona del grupo que consiste en (alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquil C_{2}-C_{4})-O-(alquilo C_{1}-C_{4}), aril(alquilo C_{0-4}), y (cicloalquil C_{3}-C_{6})alquilo C_{0-4};

(g) R2 es aril(alquilo C_{1-4});

(h) arilo es fenilo;

(i) R6 y R7 son cada uno hidrógeno;

(j) R6 y R7 se combinan para formar un arilo C_{3}-C_{6} que está condensado con el grupo del cual se originan cada uno de R6 y R7;

(k) W es O;

(l) W es C;

(n) z está sustituido con un grupo seleccionado de Z';

(o) A se selecciona del grupo que consiste en carboxilo, acilsulfonamida, tetrazol, y (CH_{2})_{n}COOR19;

(p) A es (CH_{2})_{n}COOR19;

(q) A es carboxilo;

(r) un compuesto de esta invención se utiliza para tratar o prevenir un trastorno que, al menos en parte, está asociado con la modulación de un receptor PPAR;

(s) un compuesto de esta invención se utiliza para tratar o prevenir la aterosclerosis, dislipidemia y/u otra enfermedad cardiovascular en un paciente que lo necesite; y

(t) un compuesto de esta invención se formula para la administración oral.

Síntesis

Los compuestos de la presente invención se han formado como se describe específicamente en los ejemplos. Además, muchos compuestos se preparan como se muestra, de modo más general, en el siguiente esquema. Otros procedimientos de síntesis alternativos también pueden ser eficaces y conocidos por los expertos en la técnica.

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Esquema general

Síntesis de derivados de benzimidazol

6

Ejemplos

Los ejemplos que se proporcionan en la presente son ilustrativos de la invención reivindicada en la presente.

Análisis instrumental

Los espectros de infrarrojo se registran en un espectrómetro Perkin Elmer 781. Los espectros de RMN de ^{1}H se registran en un espectrómetro Varian 400 MHz a temperatura ambiente. Los datos se indican como sigue: desplazamiento químico en ppm con respecto al patrón interno de tetrametilsilano en la escala \delta, multiplicidad (a = ancho, s = singulete, d = doblete, t = triplete, q = cuadruplete, qn = quintete, y m = multiplete), integración, constante de acoplamiento (Hz) y asignación. Los RMN de ^{13}C se registran en un espectrómetro Varian 400 MHz a temperatura ambiente. Los desplazamientos químicos se indican en ppm con respecto al tetrametilsilano en la escala \delta, empleándose la resonancia del disolvente como patrón interno (CDCl_{3} a 77,0 ppm, y DMSO-d_{6} a 39,5 ppm). Los espectros de masas de alta resolución se obtienen en espectrómetros VG ZAB 3F o VG 70 SE. Todos los procedimientos analíticos se realizan utilizando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, a menos que se indique lo contrario.

Compuestos ejemplificados

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Ejemplo 1

7

Etapa A

8

El ácido 4-(4-metoxifenil)butírico (5 g, 0,026 mol) se combina con N-metil-1,2-fenilendiamina (2,68 ml, 0,119 mol) en 50 ml de HCl 5 M. La reacción se somete a reflujo durante la noche. El pH de la disolución se ajusta a pH = 7 utilizando NaOH al 5%. La disolución entonces se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con K_{2}CO_{3} 1 M y salmuera. El disolvente se concentra para producir el producto deseado como un aceite oscuro (5,43 g, 76%).

C_{18}H_{20}N_{2}O (P.M. = 280,16); espectroscopia de masas (FD) = 280,3.

Etapa B

9

Se añade tribromuro de boro (5,39 ml, 0,057 mol) a cloruro de metileno y se enfría hasta 0ºC. El éter metílico de la etapa A (5,43 g, 0,019 mol) se añade gota a gota a lo largo de un periodo de 15 minutos. La reacción se calienta hasta la temperatura ambiente. Se añade una disolución de cloruro de metileno y metanol 1:1 para extinguir la reacción. Después de agitar durante algún tiempo se concentra el disolvente. Tras la adición de acetato de etilo, el producto precipita de la disolución como un sólido morado (3,26 g, 63%). El sólido se recoge mediante filtración y se sigue con la reacción sin mayor purificación.

C_{17}H_{18}N_{2}O (P.M. = 266,14).

Etapa C

10

El fenol de la etapa B (3,24 g, 0,0122 mol) se disuelve en etanol absoluto (20 ml) y se trata con K_{2}CO_{3} (5,00 g, 0,0360 mol), seguido de 2-bromoisobutirato de etilo (8,95 ml, 0,0609 mol). La reacción se agita a 80ºC. Se añade más isobutirato (8,95 ml) y K_{2}CO_{3} (2,5 g) a la reacción. Tras enfriar, la mezcla de reacción se filtra y después se concentra. El residuo resultante se redisuelve en cloruro de metileno y se lava con agua y después con salmuera. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster (2,8 g, 60%).

C_{23}H_{28}N_{2}O_{3} (P.M. = 380,21); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 381,1.

\global\parskip1.000000\baselineskip

Etapa D

11

El éster de la etapa C (1 g, 0,0026 mol) se disuelve en etanol (21 ml) y se añade NaOH 2 N (10 ml). La reacción se somete a reflujo durante una hora. Se añade agua (50 ml) a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6 utilizando HCl 5 M y amoniaco en metanol. El producto deseado precipita de la disolución como un sólido blanco (0,500 g, 54%) y se filtra y después se seca.

C_{21}H_{24}N_{2}O_{3} (P.M. = 352,18); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 353,3.

Ejemplo 2

12

Etapa A

13

El ácido 4-(4-metoxifenil)butírico (2 g, 0,010 mol) se combina con 4,5-dimetil-1,2-fenilendiamina (1,36 ml, 0,010 mol) en 20 ml de HCl 5 M. La reacción se somete a reflujo durante la noche. El pH de la disolución se ajusta a pH = 7. La disolución entonces se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con K_{2}CO_{3} 1 M y salmuera. El disolvente se concentra para producir el producto deseado como un sólido de color granate (1,14 g, 39%).

C_{19}H_{22}N_{2}O (P.M. = 294,17); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 295,3.

Etapa B

14

\vskip1.000000\baselineskip

Se añade tribromuro de boro (1,10 ml, 0,0116 mol) a cloruro de metileno y se enfría hasta 0ºC. El éter metílico de la etapa A (1,14 g, 0,0039 mol) se añade, gota a gota, a lo largo de un periodo de 15 minutos. La reacción se agita durante una hora. Se añade una disolución de cloruro de metileno y metanol 1:1 (14 ml) para extinguir la reacción. Después de agitar durante algún tiempo se concentra el disolvente. El residuo bruto se redisuelve en acetato de etilo y se lava con agua y después con salmuera. La capa orgánica se concentra para producir el fenol deseado (0,290 g, 27%).

C_{18}H_{20}N_{2}O (P.M. = 280,16); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 281,2.

Etapa C

15

\vskip1.000000\baselineskip

El fenol de la etapa B (0,164 g, 0,0059 mol) se disuelve en etanol absoluto (10 ml) y se trata con K_{2}CO_{3} (0,244 g, 0,00177 mol), seguido de 2-bromoisobutirato de etilo (0,430 ml, 0,0029 mol). La reacción se agita a 76ºC durante la noche. Se añade más isobutirato (0,43 ml) para conducir la reacción. Tras enfriar, la mezcla de reacción se filtra y después se concentra. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster como un aceite amarillo (0,118 g, 51%).

C_{24}H_{30}N_{2}O_{3} (P.M. = 394,23); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 395,4.

Etapa D

16

\vskip1.000000\baselineskip

El éster de la etapa C (0,117 g, 0,000297 mol) se disuelve en etanol (2 ml) y se añade NaOH 2 N (1 ml). La reacción se somete a reflujo durante 30 minutos. Se añade agua (5 ml) a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 7 utilizando HCl 1 N. El producto deseado precipita de la disolución como un sólido blanco (0,080 g, 73%) y se filtra y después se seca.

C_{22}H_{26}N_{2}O_{3} (P.M. = 366,19); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 367,1.

Ejemplo 3

17

Etapa A

18

\vskip1.000000\baselineskip

El ácido 4-(4-metoxifenil)butírico (3,60 g, 0,0186 mol) se combina con 2,3-diaminonaftaleno (3 g, 0,0189 mol) en 40 ml de HCl 5 M. La reacción se somete a reflujo durante la noche. El pH de la disolución se ajusta a pH = 7 utilizando NaHCO_{3} al 5%. La disolución entonces se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con K_{2}CO_{3} 1 M y salmuera. El disolvente se concentra para producir el producto deseado como un sólido marrón (3,42 g, 58%).

C_{21}H_{20}N_{2}O (P.M. = 316,16); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 317,3.

Etapa B

19

\vskip1.000000\baselineskip

Se añade tribromuro de boro (3,00 ml, 0,032 mol) a cloruro de metileno (60 ml) y se enfría hasta 0ºC. El éter metílico de la etapa A (3,42 g, 0,011 mol) se añade lentamente. La reacción se calienta hasta la temperatura ambiente. Se añade una disolución de cloruro de metileno y metanol 1:1 (42 ml) para extinguir la reacción. Después de agitar durante algún tiempo se concentra el disolvente. El material resultante se redisuelve en acetato de etilo y se lava con agua. La capa orgánica se concentra para producir el producto (2,59 g, 78%).

C_{20}H_{18}N_{2}O (P.M. = 302,14); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 303,0.

Etapa C

20

\vskip1.000000\baselineskip

El fenol de la etapa B (1,50 g, 0,0050 mol) se disuelve en etanol absoluto (10 ml) y se trata con K_{2}CO_{3} (2,07 g, 0,0150 mol), seguido de 2-bromoisobutirato de etilo (7,33 ml, 0,050 mol). La reacción se agita a 75ºC. Tras enfriar, la mezcla de reacción se filtra y después se concentra. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster (1,09 g, 52%).

C_{26}H_{28}N_{2}O_{3} (P.M. = 416,21); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 417,1.

Etapa D

21

\vskip1.000000\baselineskip

El éster de la etapa C (0,700 g, 0,00168 mol) se disuelve en etanol (14 ml) y se añade NaOH 2 N (7 ml). La reacción se somete a reflujo durante una hora. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6. El producto deseado precipita de la disolución como un sólido de color tostado (0,52 g, 80%) y se filtra y después se seca.

C_{24}H_{24}N_{2}O_{3} (P.M. = 388,18); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 389,2.

Ejemplo 4

22

Etapa A

23

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,144 g, 0,00035 mol) se disuelve en DMF (5 ml) y se trata con CsCO_{3} (0,282 g, 0,00087 mol), seguido de 1-yodopropano (0,057 g, 0,00180 mol). La reacción se agita durante 45 minutos a 67ºC. Se añade éter a la reacción, que entonces se extrae con agua y salmuera. Una purificación mediante una cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 3:1) produce el éster (0,025 g, 16%).

C_{29}H_{34}N_{2}O_{3} (P.M. = 458,26); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 459,4.

Etapa B

24

El éster de la etapa A (0,025 g, 0,0000545 mol) se disuelve en etanol (4 ml) y se añade NaOH 2 N (2 ml). La reacción se somete a reflujo durante 30 minutos. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6 utilizando HCl 1 N. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado (0,0148 g, 65%).

C_{27}H_{30}N_{2}O_{3} (P.M. = 430,23); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 431,2.

Ejemplo 5

25

Etapa A

26

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,144 g, 0,00035 mol) se disuelve en DMF (5 ml) y se trata con CsCO_{3} (0,282 g, 0,00087 mol), seguido de bromuro de bencilo (0,066 ml, 0,00055 mol). La reacción se agita durante una hora a 67ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua y después con salmuera. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 4:1) produce el éster (0,078 g, 44%).

C_{33}H_{34}N_{2}O_{3} (P.M. = 506,26); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 507,0.

Etapa B

27

El éster de la etapa A (0,078 g, 0,00015 mol) se disuelve en etanol y se añade NaOH 2 N. La reacción se somete a reflujo durante 30 minutos. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6. El ácido deseado precipita de la disolución. El material se filtra y se seca (0,064 g, 86%).

C_{33}H_{30}N_{2}O_{3} (P.M. = 478,23); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 479,3.

Ejemplo 6

28

Etapa A

29

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,243 g, 0,00058 mol) se disuelve en DMF (10 ml) y se trata con CsCO_{3} (0,475 g, 0,00146 mol), seguido de bromuro de 3-metoxibencilo (0,129 ml, 0,00093 mol). La reacción se agita durante una hora a 65ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua y después con salmuera. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 4:1) produce el éster (0,256 g, 83%).

C_{34}H_{36}N_{2}O_{4} (P.M. = 536,27); espectroscopía de masas (FD) = 536,4.

Etapa B

30

El éster de la etapa A (0,078 g, 0,00015 mol) se disuelve en etanol (6 ml) y se añade NaOH 2 N (3 ml). La reacción se somete a reflujo durante dos horas y media. Se añade agua (30 ml) a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6 utilizando HCl 1 N. El ácido deseado precipita de la disolución como cristales amarillos. El material se filtra y se seca (0,131 g, 65%).

C_{32}H_{32}N_{2}O_{4} (P.M. = 508,24); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 509,4.

Ejemplo 7

31

Etapa A

32

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,122 g, 0,00029 mol) se disuelve en DMF y se trata con CsCO_{3} (0,238 g, 0,00073 mol), seguido de bromometilciclohexano (0,040 ml, 0,00029 mol). La reacción se agita durante la noche a 65ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua y después con salmuera. El producto se sigue sometiendo a reacción sin mayor purificación (0,131 g, 88%).

C_{33}H_{40}N_{2}O_{3} (P.M. = 512,30); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 513,1.

Etapa B

33

El éster de la etapa A (0,131 g, 0,00035 mol) se disuelve en etanol (6 ml) y se añade NaOH 2 N (3 ml). La reacción se somete a reflujo. Se añade agua (35 ml) a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6 utilizando HCl 1 N. El ácido deseado precipita de la disolución. Una purificación del material mediante cromatografía de resolución rápida (metanol al 100%) produce el producto deseado.

C_{31}H_{36}N_{2}O_{3} (P.M. = 484,27); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 485,2.

Ejemplo 8

34

\newpage

Etapa A

35

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,117 g, 0,00028 mol) se disuelve en DMF y se trata con CsCO_{3} (0,228 g, 0,00070 mol), seguido de 1-yodohexnao (0,058 ml, 0,00028 mol). La reacción se agita durante 4 horas. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua y después con salmuera. El producto se sigue sometiendo a reacción sin mayor purificación (0,140 g, 100%).

C_{32}H_{40}N_{2}O_{3} (P.M. = 500,30); espectroscopía de masas (FD) = 500,5.

Etapa B

36

El éster de la etapa A (0,140 g, 0,00028 mol) se disuelve en etanol y se añade NaOH 2 N. La reacción se somete a reflujo. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6. El ácido deseado precipita de la disolución. El material se filtra y se seca (0,047 g, 36%).

C_{30}H_{36}N_{2}O_{3} (P.M. = 472,27); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 473,2.

Ejemplo 9

37

Etapa A

38

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,500 g, 0,0012 mol) se disuelve en DMF (7 ml) y se trata con CsCO_{3} (0,975 g, 0,0030 mol), seguido de 1-bromometilnaftaleno (0,398 ml, 0,0018 mol). La reacción se agita durante la noche a 67ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua. Una purificación mediante una cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 3:1, hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster alquilado (0,341 g, 51%).

C_{37}H_{36}N_{2}O_{3} (P.M. = 556,27); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 557,3.

Etapa B

39

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El éster de la etapa A (0,341 g, 0,00066 mol) se disuelve en etanol y se añade NaOH 2 N. La reacción se somete a reflujo durante tres horas. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 7 utilizando HCl 1 N. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado (0,040 g, 10%).

C_{35}H_{32}N_{2}O_{3} (P.M. = 528,24); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 529,2.

Ejemplo 10

40

Etapa A

41

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El éster del ejemplo 3, etapa C (0,300 g, 0,00072 mol) se disuelve en DMF y se trata con CsCO_{3} (0,585 g, 0,00180 mol), seguido de bromuro de 4-metilbencilo (0,200 g, 0,00108 mol). La reacción se agita durante la noche a 67ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster (0,261 g, 70%).

C_{34}H_{36}N_{2}O_{3} (P.M. = 520,27).

Etapa B

42

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El ester de la etapa A (0,250 g, 0,00048 mol) se disuelve en etanol y se añade NaOH 2 N. La reacción se somete a reflujo durante dos horas. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 6 utilizando HCl 1 N. El producto deseado precipita de la disolución. El precipitado se filtra y se seca (0,217 g, 92%).

C_{32}H_{32}N_{2}O_{3} (P.M. = 492,62); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 493,2.

Ejemplo 11

43

Etapa A

44

\vskip1.000000\baselineskip

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,500 g, 0,0012 mol) se disuelve en DMF (7 ml) y se trata con CsCO_{3} (0,975 g, 0,0030 mol), seguido de 1-bromo-3-fenilpropano (0,274 ml, 0,0018 mol). La reacción se agita durante la noche a 67ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 3:1, hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster alquilado (0,520 g, 81%).

C_{35}H_{38}N_{2}O_{3} (P.M. = 534,29); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 535,3.

Etapa B

45

\vskip1.000000\baselineskip

El éster de la etapa A (0,440 g, 0,00082 mol) se disuelve en etanol (12 ml) y se añade NaOH 2 N (6 ml). La reacción se somete a reflujo durante dos horas. Se añade agua a la mezcla y el pH se ajusta a pH = 7 utilizando HCl 1 N. El producto deseado precipita de la disolución. El producto se filtra y el producto se seca (0,137 g, 33%).

C_{33}H_{34}N_{2}O_{3} (P.M. = 506,26); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 507,3.

Ejemplo 12

46

\newpage

Etapa A

47

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,500 g, 0,00120 mol) se disuelve en DMF (7 ml) y se trata con CsCO_{3} (0,975 g, 0,0030 mol), seguido de 1-bromo-2-metilpropano (0,196 ml, 0,0018 mol). La reacción se agita durante la noche a 67ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster deseado (0,355 g, 63%).

C_{30}H_{36}N_{2}O_{3} (P.M. = 472,27); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 473,3.

Etapa B

48

El éster de la etapa A (0,300 g, 0,00065 mol) se disuelve en metanol (7 ml) y se trata con una disolución acuosa de LiOH (0,18 M, 7 ml). La reacción se agita durante la noche. Se añade agua a la mezcla de reacción y la disolución se extrae con éter. La capa acuosa se acidifica hasta pH = 4 y después se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado (0,110 g, 38%).

C_{29}H_{32}N_{2}O_{3} (P.M. = 444,24); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 445,2.

Ejemplo 13

49

Etapa A

50

El éster del ejemplo 3, etapa C (0,500 g, 0,00120 mol) se disuelve en DMF y se trata con CsCO_{3} (1,27 g, 0,0039 mol), seguido de 1-bromo-2-(2-metoxietoxi)etano (0,212 ml, 0,00156 mol). La reacción se agita durante la noche a 65ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 2:1) produce el éster deseado (0,723 g, 93%).

C_{31}H_{38}N_{2}O_{5} (P.M. = 518,28).

Etapa B

51

El ester de la etapa A (0,600 g, 0,00116 mol) se disuelve en metanol (7 ml) y se trata con una disolución acuosa de LiOH (0,33 M, 7 ml). La reacción se agita durante la noche. Se añade agua a la mezcla de reacción y la disolución se extrae con éter. La capa acuosa se acidifica hasta pH = 4, y después se extrae con cloruro de metileno. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado (0,405 g, 71%).

C_{29}H_{34}N_{2}O_{5} (P.M. = 490,25); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 491,1.

Ejemplo 14

52

Etapa A

53

Una disolución en THF de ácido 4-(4-metoxifenil)butírico (10 g, 0,0515 mol) se enfría hasta -5ºC y se trata con trietilamina (6,95 ml, 0,0499 mol), seguido de cloroformiato de isobutilo (6,50 ml, 0,0497 mol). Se añade fenilendiamina (5,95 g, 0,055 mol) y la reacción se agita durante cuatro horas. El disolvente se concentra y el residuo resultante se disuelve en acetato de etilo y se extrae con agua y bicarbonato de sodio al 5%, y después con salmuera. Tras la concentración de la capa orgánica, el material se disuelve en ácido acético (100 ml) y se somete a reflujo durante dos horas. El disolvente se concentra. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el producto deseado (5,87 g, 45%).

C_{17}H_{18}N_{2}O (P.M. = 266,14); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 267,2.

Etapa B

54

Se añade tribromuro de boro (1,80 ml, 0,0194 mol) a cloruro de metileno y se enfría hasta 0ºC. Se añade el éter metílico de la etapa A (1,72 g, 0,0065 mol). La reacción se agita durante una hora. Una disolución de cloruro de metileno y metanol 1:1 (14 ml) se añade para extinguir la reacción. Después de agitar durante algún tiempo, el disolvente se concentra. El residuo bruto se redisuelve en acetato de etilo y se lava con agua. El material deseado permanece en la capa acuosa. El pH se ajusta a pH = 7, tras lo cual el producto precipita de la disolución y se filtra (0,731 g, 44%).

C_{18}H_{20}N_{2}O (P.M. = 2); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 253,1.

Etapa C

55

El fenol (5,5 g, 0,0210 mol) descrito en la etapa B se disuelve en etanol absoluto (50 ml) y se trata con K_{2}CO_{3} (8,69 g, 0,0630 mol), seguido de 2-bromoisobutirato de etilo (22,0 ml, 0,153 mol). La reacción se agita a 77ºC. Tras enfriar, el disolvente se concentra. El residuo resultante se redisuelve en cloruro de metileno y se lava con agua y después con salmuera. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 4:1, hexanos:acetato de etilo 3:1, hexanos:acetato de etilo 1:1) produce el éster (3,62 g, 47%).

C_{22}H_{26}N_{2}O_{3} (P.M. = 366,19); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 367,2.

Etapa D

56

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El éster de la etapa B (0,300 g, 0,00082 mol) se disuelve en metanol (3 ml) y se trata con una disolución acuosa de LiOH (0,55 M, 3 ml). La reacción se agita durante la noche. Se añade agua a la mezcla de reacción y la disolución se extrae con éter. La capa acuosa se acifica hasta pH = 4, y después se extrae con cloruro de metileno. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado.

C_{26}H_{26}N_{2}O_{3} (P.M. = 414,19); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 415,2.

Ejemplo 15

57

Etapa A

58

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El éster del ejemplo 14, etapa C (3,13 g, 0,00860) se disuelve en cloruro de metileno. A la disolución se le añade N-bromosuccinimida (1,52 g, 0,00860 mol) y gel de sílice (3,00 g). La reacción se agita durante la noche. El gel de sílice se filtra y se lava con metanol. El filtrado se concentra y el material resultante se disuelve en cloruro de metileno y se extrae con agua. Se obtiene el producto deseado y se sigue sometiendo a reacción sin mayor purificación (3,5 g, 90%).

C_{22}H_{25}N_{2}O_{3}Br (P.M. = 444,10).

Etapa B

59

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El sustrato de la etapa A (0,500 g, 0,0011 mol) se combina con ácido fenilborónico (0,134 g, 0,0011 mol) y carbonato de potasio (0,151 g, 0,0011 mol) en una disolución de dioxano y agua (4:1). La disolución se desoxigena. Se añade tetrakis(trifenilfosfino)paladio(0) y la mezcla se agita a 90ºC. Tras la concentración del disolvente, el residuo se redisuelve en cloruro de metileno y se lava con agua y salmuera. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 2:1) produce el producto deseado.

C_{28}H_{30}N_{2}O_{3} (P.M. = 442,23); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 443,0.

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Etapa C

60

El éster de la etapa B (0,193 g, 0,00040 mol) se disuelve en metanol (2 ml) y se trata con una disolución acuosa de LiOH (0,44 M, 2 ml). La reacción se agita durante la noche. Se añade agua a la mezcla de reacción y la disolución se extrae con éter. La capa acuosa se acidifica hasta pH = 4 y después se extrae con cloruro de metileno. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado como un sólido blanco.

Ejemplo 16

61

Etapa A

62

El éster del ejemplo 15, etapa B (0,372 g, 0,00084 mol) se disuelve en DMF y se trata con CsCO_{3} (0,683 g, 0,00210), seguido de 1-yodohexnao (0,186 ml, 0,00126 mol). La reacción se agita a 67ºC. Se añade éter a la reacción y la capa se lava con agua y después con salmuera. Una purificación mediante cromatografía de resolución rápida (hexanos:acetato de etilo 2:1) produce el producto deseado (0,172 g, 50%).

C_{34}H_{42}N_{2}O_{3} (P.M. = 526,32); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 527,3.

Etapa C

63

El éster de la etapa B (0,160 g, 0,00030 mol) se disuelve en metanol (2 ml) y se trata con una disolución acuosa de LiOH (0,3 M, 2 ml). La reacción se agita durante la noche. Se añade agua a la mezcla de reacción y la disolución se extrae con éter. La capa acuosa se acidifica hasta pH = 4, y después se extrae con cloruro de metileno. La capa orgánica se concentra para producir el ácido deseado como un sólido blanco.

C_{32}H_{38}N_{2}O_{3} (P.M. = 498,29); espectroscopía de masas (MH^{+}) = 499,3.

Ensayos biológicos Estudios de unión y cotransfección

Se determina la potencia in vitro de los compuestos para modular receptores PPAR\alpha mediante los procedimientos detallados a continuación. La unión dependiente de ADN (unión ABCD) se realiza utilizando tecnología SPA con receptores PPAR. Se emplean agonistas de PPAR\alpha marcados con tritio como radioligandos para generar curvas de desplazamiento y valores IC_{50} con compuestos de la invención. Los ensayos de cotransfección se realizan en células CV-1. El plásmido indicador contiene un PPRE de acilCoA oxidasa (AOX) y un promotor TK cadena arriba del ADNc del indicador de luciferasa. Los PPAR apropiados se expresan constitutivamente utilizando plásmidos que contienen el promotor de CMV. Para PPAR\alpha, un problema es la interferencia por PPAR\gamma endógeno en células CV-1. Para eliminar esta interferencia se emplea un sistema quimérico GAL4 en el que el dominio de unión al ADN del PPAR transfectado se sustituye por el de GAL4, y el elemento de respuesta de GAL4 se utiliza en lugar de PPRE de AOX. La eficacia de cotransfección se determina con relación a las moléculas patrón de agonista de PPAR\alpha. Las eficacias se determinan mediante un ajuste por ordenador en una curva de concentración-respuesta o, en algunos casos, en una única concentración alta de agonista (10 \muM).

Estos estudios se realizan para evaluar la capacidad de los compuestos de la invención para unirse y/o activar diversos factores de transcripción nucleares, en particular huPPAR\alpha ("hu" indica "humano"). Estos estudios proporcionan datos in vitro acerca de la eficacia y selectividad de los compuestos de la invención. Además, los datos de unión y cotransfección para los compuestos de la invención se comparan con los correspondientes datos de compuestos comercializados que actúan sobre huPPAR\alpha.

Los valores de la eficacia de unión y cotransfección para los compuestos de la invención que son especialmente útiles para modular un receptor PPAR son \leq 10 nm y \geq 50%, respectivamente.

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Evaluación de la reducción de triglicéridos y aumento de colesterol HDL en ratones transgénicos HuapoAI

Los compuestos de la presente invención se estudian para determinar los efectos sobre los niveles de HDL y triglicéridos en ratones con apoAI humana. Para cada compuesto ensayado, se aclimatan ratones macho de 7 a 8 semanas de edad, transgénicos para apoAI humana (C57BL/6-tgn(apoaI) Irub, Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) en jaulas individuales durante dos semanas con pienso convencional (Purina 5001) y agua sin limitación.

Después de la aclimatación, se pesan los ratones y el pienso y se asignan a grupos de ensayo (n = 5) con aleatorización por el peso corporal. Los ratones se dosifican a diario mediante sonda oral durante 8 días, utilizando una aguja de alimentación curvada de calibre 29 de 2,54-1,27 cm (Popper & Sons). El vehículo para los controles, los compuestos de ensayo y el control positivo (fenofibrato 100 mg/kg) es carboximetilcelulosa al 1% (p/v) con Tween 80 al 0,25% (p/v). Todos los ratones reciben a diario, entre 6 y 8 a.m., un volumen de dosificación de 0,2 ml. Antes de terminar, los animales y el pienso se pesan, y se calcula el cambio en el peso corporal y el consumo de alimento. Tres horas después de la última dosis, los ratones reciben eutanasia con CO_{2} y se retira sangre (0,5-1,0 ml) mediante punción cardíaca. Después del sacrificio se retiran el hígado, el corazón y las almohadillas de grasa del epidídimo y se pesan. Se deja coagular la sangre y se separa el suero de la sangre mediante centrifugación.

Se mide el colesterol y los triglicéridos colorimétricamente utilizando reactivos preparados del mercado (por ejemplo, disponibles en Sigma nº 339-1000, y Roche nº 450061, para los triglicéridos y el colesterol, respectivamente). Los procedimientos se modifican a partir de los trabajos publicados (McGowan M.W. et al., Clin. Chem., 29:538-542, 1983; Allain C.C. et al., Clin. Chem., 20:470-475, 1974). Los patrones disponibles en el mercado para triglicéridos y colesterol total, respectivamente, un control de calidad comercial de plasma, y las muestras se midieron por duplicado utilizando 200 \mul de reactivo. Otra parte alícuota de muestra, añadida a un pocillo que contiene 200 \mul de agua, proporciona un blanco para cada espécimen. Las placas se incuban a temperatura ambiente en un agitador de placas y se lee la absorbancia a 500 nm y 540 nm para el colesterol total y los triglicéridos, respectivamente. Los valores para el control positivo siempre se encontraban dentro del intervalo esperado, y el coeficiente de variación para las muestras es menor que 10%. Todas las muestras de un experimento se ensayan al mismo tiempo para minimizar la variabilidad interensayo.

Se separan las lipoproteínas séricas y se cuantifica el colesterol mediante cromatografía líquida de proteína rápida (FPLC) acoplada a un sistema de detección en línea. Las muestras se aplican a una columna de exclusión molecular Superose 6 HR (Amersham Pharmacia Biotech) y se eluyen con disolución salina tamponada con fosfato-EDTA a 0,5 ml/min. El reactivo de colesterol (Roche Diagnostics Chol/HP 704036) a 0,16 ml/min se mezcla con el efluyente de la columna a través de una conexión en T, y la mezcla se hace pasar a través de un reactor de tubo tejido de 15 m x 0,5 mm D.I. sumergido en un baño de agua a 37ºC. El producto coloreado producido en presencia de colesterol se controla en la corriente de flujo a 505 nm, y el voltaje análogo del monitor de control se convierte en una señal digital para la recogida y análisis. El cambio en el voltaje que corresponde al cambio en la concentración de colesterol se representa gráficamente frente al tiempo, y se calcula el área bajo la curva que corresponde a la elución de lipoproteínas de densidad muy baja (VLDL), lipoproteínas de densidad baja (LDL) y lipoproteínas de densidad alta (HDL) utilizando un programa informático Turbochrome de Perkin Elmer.

Los niveles séricos de triglicéridos en ratones dosificados con un compuesto de la invención se comparan con ratones que reciben el vehículo, para identificar compuestos que puedan ser particularmente útiles para disminuir los triglicéridos. En general, una disminución en los triglicéridos mayor o igual a 30% o más, comparado con el control después de una dosis de 30 mg/kg sugiere un compuesto que puede ser especialmente útil para disminuir los niveles de triglicéridos.

El porcentaje de aumento de los niveles séricos de cHDL en ratones que reciben un compuesto de la invención se compara con ratones que reciben vehículo, para identificar compuestos de la invención que puedan ser particularmente útiles para elevar los niveles de HDL. En general, un aumento mayor o igual a 25% del nivel de cHDL después de una dosis de 30 mg/kg sugiere un compuesto que puede ser especialmente útil para aumentar los niveles de cHDL.

Puede resultar particularmente deseable seleccionar compuestos de esta invención que disminuyan los niveles de triglicéridos y también aumenten los niveles de cHDL. Sin embargo, los compuestos que disminuyen los niveles de triglicéridos o aumentan los niveles de cHDL también pueden ser deseables.

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Evaluación de los niveles de glucosa en ratones db/db

Se estudian los efectos sobre la glucosa plasmática asociados a la administración de diversos niveles de dosis de diferentes compuestos de la presente invención y el agonista de PPAR\gamma rosiglitazona (BRL49653) o el agonista de PPAR\alpha fenofibrato, y el control, en ratones macho db/db.

Ratones diabéticos (db/db) macho de cinco semanas de edad (por ejemplo, C57BIKs/j-m +/+ Lepr(db), Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) o sus hermanos de camada magros se alojan a 6 individuos por jaula, con alimento y agua disponibles siempre. Después de un periodo de aclimatación de 2 semanas, los animales se identifican individualmente mediante marcas en las orejas, se pesan y se sangran a través de la vena de la cola para la determinación de los niveles de glucosa iniciales. Se recoge sangre (100 \mul) de animales que no están en ayunas envolviendo a cada ratón en una toalla, cortando la punta de la cola con un escalpelo, y ordeñando sangre de la cola hacia un tubo capilar heparinizado. La muestra se vierte en un microdepósito heparinizado con un separador de gel y se conserva en hielo. Se obtiene el plasma después de una centrifugación a 4ºC y se mide la glucosa inmediatamente. El resto del plasma se congela hasta que finaliza el experimento, cuando la glucosa y los triglicéridos se ensayan en todas las muestras. Los animales se agrupan basándose en los niveles iniciales de glucosa y el peso corporal. Comenzando a la mañana siguiente, los ratones se dosifican a diario mediante sonda oral durante 7 días. Los tratamientos fueron con los compuestos de ensayo (30 mg/kg), un agente de control positivo (30 mg/kg) o vehículo (carboximetilcelulosa al 1% (p/v)/Tween 80 al 0,25% (p/v); 0,3 ml/ratón). En el día 7, los ratones se pesan y se sangran (vena de la cola) 3 horas después de la dosificación. Veinticuatro horas después de la 7ª dosis (es decir, el día 8) se vuelve a sangrar a los animales (vena de la cola). Las muestras obtenidas de los animales conscientes en los días 0, 7 y 8 se ensayan para la glucosa. Después del sangrado de 24 horas, los animales se pesan y se dosifican por última vez. Tres horas después de la dosificación el día 8, los animales se anestesian mediante inhalación de isoflurano y se obtiene sangre mediante punción cardíaca (0,5-0,7 ml). Se traslada sangre completa a tubos separadores de suero, se enfría en hielo y se permite la coagulación. Se obtiene suero después de una centrifugación a 4ºC y se congela hasta el análisis de los niveles del compuesto. Después del sacrificio
mediante dislocación cervical, se retiran y se pesan el hígado, el corazón, y las almohadillas de grasa del epidídimo.

La glucosa se mide colorimétricamente utilizando reactivos adquiridos en el mercado. Según los fabricantes, los procedimientos se modifican a partir de los trabajos publicados (McGowan, M.W., Artiss, J.D., Strandbergh, D.R. y Zak, B., Clin. Chem., 20:470-475 (1974), y Keston, A., Specific colorimetric enzymatic analytical reagents for glucose, resumen de la documentación de 129th Meeting ACS, 31C (1956)); y depende de la liberación de un mol de peróxido de hidrógeno por cada mol de analito, acoplado con una reacción coloreada descrita en primer lugar por Trinder (Trinder, P., Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor, Ann. Clin. Biochem., 6:24 (1969)). La absorbancia del tinte producido se relaciona linealmente con el analito en la muestra. Los ensayos se modifican aún más en el laboratorio de los inventores para su utilización en un formato de 96 pocillos. El patrón disponible en el mercado para la glucosa, el control de calidad del plasma disponible en el mercado, y las muestras (2 ó 5 \mul/pocillo) se miden por duplicado utilizando 200 \mul de reactivo. Otra parte alícuota de muestra, pipeteada en un tercer pocillo y diluida en 200 \mul de agua, proporciona un blanco para cada espécimen. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 18 minutos para determinar la glucosa en un agitador de placas (DPC Micormix 5), y la absorbancia se lee a 500 nm en un lector de placas. Las absorbancias de las muestras se comparan con una curva patrón (100-800 para la glucosa). Los valores para la muestra de control de calidad siempre se encontraban dentro del intervalo esperado, y el coeficiente de variación para las muestras es menor que 10%. Todas las muestras de un experimento se ensayan al mismo tiempo para minimizar la variabilidad interensayo.

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Evaluación de los efectos de los compuestos de la presente invención sobre el peso corporal, la masa grasa, los niveles de glucosa e insulina en ratones A^{y} Ratones hembra A^{y}

Ratones hembra A^{y} se alojan individualmente, se mantienen bajo condiciones estandarizadas (22ºC, 12 h de ciclo de luz:oscuridad) y se les proporciona libre acceso a alimento y agua durante el estudio. Con veinte semanas de edad, los ratones se asignan aleatoriamente a grupos de control con vehículo y grupos tratados basándose en el peso corporal y el contenido en grasa corporal, según se evalúa mediante barrido DEXA (N = 6). Los ratones entonces se dosifican mediante sonda oral con el vehículo o un compuesto de esta invención (50 mg/kg) una hora antes del inicio del ciclo de luz (por ejemplo, aproximadamente a las 7 a.m.) durante 18 días. Los pesos corporales se miden a diario a lo largo del estudio. En el día 14, los ratones se mantienen en cámaras metabólicas individuales para la evaluación mediante la calorimetría indirecta del gasto de energía y utilización de combustible. En el día 18, los ratones de nuevo se someten a barrido DEXA para las medidas después del tratamiento de la composición corporal.

Los resultados de la dosificación oral del compuesto durante 18 días en el fpeso corporal, masa grasa y masa magra se evalúan, y sugieren cuáles son los compuestos de esta invención que pueden se especialmente útiles para mantener un peso deseable y/o para estimular la proporción de masa magra a grasa deseada.

Las medidas de la calorimetría indirecta que revelan una significativa reducción en el cociente respiratorio (CR) en animales tratados durante el ciclo de oscuridad (0,864 \pm 0,013 (control) frente a 0,803 \pm 0,007 (tratados); p < 0,001) son indicativas de una mayor utilización de grasa durante el ciclo activo de los animales (oscuridad), y pueden utilizarse para seleccionar los compuestos de esta invención especialmente deseados. Además, los animales tratados que muestran unas tasas significativamente mayores de gasto de energía frente a los animales control sugieren que estos compuestos de esta invención pueden ser especialmente deseados.

Ratones macho KK/A^{y}

Ratones macho KK/A^{y} se alojan individualmente, se mantienen bajo condiciones estandarizadas (22ºC, 12 h de ciclo de luz:oscuridad) y se les proporciona libre acceso a alimento y agua durante el estudio. Con 22 semanas de edad, los ratones se asignan aleatoriamente a grupos de control con vehículo y grupos tratados basándose en los niveles de glucosa plasmática. Los ratones entonces se dosifican mediante sonda oral con el vehículo o con un compuesto de esta invención (30 mg/kg) una hora después del inicio del ciclo de luz (7 a.m.) durante 14 días. El día 14 se evalúan los niveles de glucosa, triglicéridos e insulina plasmáticos.

Los resultados de las dosificación oral del compuesto durante 14 días en la glucosa, triglicéridos e insulina plasmáticos se evalúan, para identificar compuestos de esta invención que puedan ser especialmente deseados.

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Procedimiento para elucidar el efecto de disminución de colesterol LDL, colesterol total y triglicéridos

A hámsters sirios macho (Harlan Sprague Dawley) que pesan 80-120 g se les alimenta con una dieta rica en colesterol y con mucha grasa durante dos a tres semanas antes de comenzar el experimento. Pueden acceder sin limitación al alimento y al agua a lo largo del experimento. Bajo estas condiciones, los hámsters se hacen hipercolesterolémicos, mostrando unos niveles de colesterol plasmático entre 180-280 mg/dl (los hámsters alimentados con pienso normal tienen un nivel de colesterol total plasmático entre 100-150 mg/dl). Los hámsters con alta cantidad de colesterol plasmático (180 mg/dl y más) se aleatorizan en grupos de tratamiento basados en su nivel de colesterol total utilizando el programa informático GroupOptimizeV211.xls.

Un compuesto de esta invención se disuelve en vehículo acuoso (que contiene CMC con Tween 80), de forma que cada hámster recibe una vez diaria aproximadamente 1 ml de la disolución mediante sonda oral en dosis de 3 y 30 mg/kg de peso corporal. Se administra fenofibrato (Sigma Chemical, preparado como una suspensión en el mismo vehículo) como un control conocido de alfa-agonista a una dosis de 200 mg/kg, y el control de blanco es sólo vehículo. La dosificación se realiza a diario por la mañana temprano durante 14 días.

Cuantificación de los lípidos plasmáticos: en el último día del ensayo, los hámsters se sangran (400 ul) del seno suborbital mientras estaban bajo anestesia de isoflurano 2 h después de la dosificación. Se recogen muestras de sangre en tubos de microcentrífuga heparinizados enfriados en un baño de hielo. Se separan las muestras de plasma de las células sanguíneas mediante una breve centrifugación. Se determina el colesterol total y los triglicéridos mediante ensayos enzimáticos realizados de forma automática en el equipo Monarch (Instrumentation Laboratory), siguiendo el procedimiento del fabricante. Las lipoproteínas plasmáticas (VLDL, LDL y HDL) se resuelven inyectando 25 ul de las muestras de plasma reunidas en un sistema FPLC eluyendo con disolución salina tamponada con fosfato a 0,5 ml/min a través de una columna Superose 6 HR 10/30 (Pharmacia) mantenida a temperatura ambiente. La detección y caracterización de los lípidos plasmáticos aislados se logra mediante una incubación poscolumna del efluyente con reactivo de colesterol/HP (por ejemplo, Roche Lab System; infusionado a 0,12 ml/min) en un serpentín de reacción tejido mantenido a 37ºC. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol y se mide fotométricamente a 505 nm.

Se estudia el efecto de la administración de un compuesto de esta invención durante 14 días para determinar la reducción en porcentaje del nivel de LDL con referencia al grupo con vehículo. Los compuestos especialmente deseados son drásticamente más potentes que el fenofibrato en la eficacia de disminución del LDL. Los compuestos de esta invención que disminuyen el LDL en 30% o más, comparado con el vehículo, pueden ser especialmente deseados.

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También se estudian los efectos de disminución del colesterol total y los triglicéridos de un compuesto de esta invención. Los datos para la reducción en los niveles de colesterol total y triglicéridos después de un tratamiento con un compuesto de esta invención durante 14 días se comparan con el vehículo para sugerir compuestos que puedan ser particularmente deseados. El control conocido fenofibrato no mostró una eficacia significativa bajo las mismas condiciones experimentales.

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Procedimiento para elucidar el efecto de disminución del fibrinógeno de los moduladores de PPAR Modelo de la rata obesa Zucker

La fase vital del estudio sobre el efecto de disminución del fibrinógeno de los compuestos de esta invención es parte de los procedimientos de fase vital para los estudios antidiabéticos de los mismos compuestos. En el último día del periodo de tratamiento (14º), con los animales bajo anestesia quirúrgica, se recogen 3 ml de sangre mediante punción cardíaca hacia una jeringa que contiene tampón citrato. La muestra sanguínea se enfría y se centrifuga a 4ºC para aislar el plasma, que se conserva a -70ºC antes del ensayo del fibrinógeno.

Cuantificación del fribrinógeno plasmático de ratas

Los niveles de fibrinógeno plasmático de ratas se cuantifican utilizando un sistema de ensayo comercial que consiste en un instrumento de coagulación, siguiendo el protocolo del fabricante. En esencia, se forman muestras de 100 ul de plasma de cada espécimen y se prepara una dilución 1/20 con tampón. El plasma diluido se incuba a 37ºC durante 240 segundos. Entonces se añaden 50 microlitros de reactivo de coagulación de disolución de trombina (proporcionado por el fabricante del instrumento en una concentración patrón). El instrumento controla el tiempo de coagulación, una función de la concentración de fibrinógeno cuantificada con referencia a muestras patrón. Los compuestos que disminuyen el nivel de fibrinógeno en mayor cantidad que el vehículo pueden ser especialmente deseados.

Los efectos de disminución del colesterol y triglicéridos de los compuestos de esta invención también se estudian en ratas Zucker.

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Procedimiento para elucidar los efectos antiganancia de peso corporal y antiapetito de los compuestos de esta invención Estudio de 14 días en modelos de rata obesa Zucker^{1} o rata ZDF^{2}

Ratas macho obesas Zucker, no diabéticas (Charles River Laboratories, Wilmington, MA), o ratas macho ZDF (Genetic Models, Inc., Indianápolis, IN) de edad y peso comparables se aclimatan durante una semana antes del tratamiento. Las ratas se alimentan con pienso normal y se les proporciona agua sin limitación a lo largo del experimento.

Los compuestos de esta invención se disuelven en un vehículo acuoso, de forma que cada rata recibe una vez diaria aproximadamente 1 ml de la disolución mediante sonda oral a dosis de 0,1, 0,3, 1 y 3 mg/kg de peso corporal. El fenofibrato (Sigma Chemical, preparado como una suspensión en el mismo vehículo), un alfa-agonista conocido, administrado a dosis de 300 mg/kg, así como el vehículo, son controles. La dosificación se realiza a diario por la mañana temprano durante 14 días. A lo largo del experimento, se controlan el peso corporal y el consumo de alimentos.

Durante este ensayo, se identifican compuestos de esta invención para determinar cuáles pueden asociarse con una significativa reducción de peso.

Equivalentes

Aunque esta invención se ha mostrado y descrito, en particular, haciendo referencia a sus realizaciones preferidas, los expertos en la técnica entenderán que pueden realizarse diversos cambios en su forma y detalles sin apartarse del alcance de la invención abarcada por las reivindicaciones adjuntas.

Claims

1. Un compuesto de fórmula I:

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64

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y sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que:

(h) W se selecciona del grupo que consiste en O, C, N y S;

(i) Z es alquilo C_{3} opcionalmente sustituido con Z';

(k) n es 0, 1, 2 ó 3; y

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que W es O.

3. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que A es COOH.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que Z no está sustituido.

5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3 ó 4, en el que R6 y R7 son cada uno alquilo C_{1}-C_{2}.

6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3 ó 4, en el que R6 y R7 se combinan para formar un anillo aromático cíclico de 6 miembros condensado.

7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3 ó 4, en el que R1 es fenilo.

8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6 ó 7, en el que R2 es alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado.

9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6 ó 7, en el que R2 es (alquil C_{1}-C_{3})fenilo o (alquil C_{1}-C_{3})naftilo.

10. Un compuesto de la reivindicación 9, en el que el fenilo o naftilo está sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo C_{1}-C_{3}, halógeno, y alcoxi C_{1}-C_{3}.

11. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

12. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno modulado por un receptor activado por el proliferador de peroxisomas.

13. El uso según la reivindicación 12, en el que el receptor activado por el proliferador de peroxisomas es modulado selectivamente por PPAR\alpha.

14. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la diabetes mellitus en un mamífero.

15. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del síndrome X en un mamífero.

16. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la enfermedad cardiovascular en un mamífero.

17. El uso según la reivindicación 16, en el que la enfermedad cardiovascular es la aterosclerosis.