ES2281458T3

ES2281458T3 - Composiciones de polvo estables en almacenamiento del receptor de interleucina 4.

Info

Publication number: ES2281458T3
Application number: ES01988413T
Authority: ES
Inventors: Jayne E. Hastedt; Kirsten M. Cabot; David Gong; Dennis M. Hester
Original assignee: Nektar Therapeutics
Current assignee: Nektar Therapeutics
Priority date: 2000-12-21
Filing date: 2001-12-21
Publication date: 2007-10-01
Anticipated expiration: 2021-12-21
Also published as: ATE355849T1; EP1351704A2; DE60127175D1; WO2002055101A9; US6896906B2; JP2012153719A; US7172768B2; US7449201B2; US20070122354A1; US20020176846A1; CA2432175A1; US20050129625A1; DE60127175T2; WO2002055101A3; EP1351704B1; US20090035264A1; US7767198B2; WO2002055101A2; CA2432175C; AU2002241723A1

Abstract

Una composición de polvo secado por pulverización que comprende IL-4R y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Description

Composiciones de polvo estables en almacenamiento del receptor de interleucina 4.

La presente invención se refiere generalmente a composiciones de polvo inhalables, secado por pulverización del receptor de interleucina 4 (IL-4R) y a procedimientos para preparar y administrar por vía pulmonar tales composiciones. Los polvos de la invención son particularmente estables con respecto al contenido en monómero y nivel de agregados tanto en la preparación como el almacenamiento, y tienen adicionalmente propiedades como aerosol superiores, incluso en ausencia de excipientes o vehículos estabilizantes. Los polvos de la invención, cuando se administran al pulmón profundo, son útiles para tratar enfermedades alérgicas, tales como asma, atopia, y dermatitis atópica.

La interleucina 4 (IL-4, también conocida como factor estimulante de células B, o BSF-1) es una citocina producida por las células T cooperadoras, mastocitos, y basófilos. La IL-4 ha demostrado tener un amplio espectro de actividades biológicas, incluyendo la coestimulación del crecimiento de células T, mastocitos, granulocitos, megacariocitos, y eritrocitos. Además, la IL-4 estimula la proliferación de varias líneas celulares dependientes de IL-2 e IL-3, induce la expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II sobre células B en estado de reposo, influye en la producción de IgE y potencia la secreción de los isotipos IgE e IgG_{1} mediante células B estimuladas por lipopolisacárido. Se ha identificado que IL-4 desempeña un papel crítico en el desarrollo de enfermedades alérgicas, y se asocia más comúnmente con asma y alergias; o enfermedades caracterizadas por la dificultad para respirar.

La IL-4 se une al receptor de IL-4 (IL-4R), una proteína unida a la membrana endógena sobre la superficie de ciertas células. Tras dicha unión, IL-4R transduce una señal biológica a varias células efectoras inmunitarias, desencadenando así una cascada de acontecimientos que conducen a síntomas clínicos (Renz H et al., 1991, J Immunol, 146(9):3049-55). Se ha llevado a cabo la determinación de la secuencia de nucleótidos y proteína para IL-4R. El IL-4R maduro humano tiene tres estructuras de dominio: un dominio extracelular (de aproximadamente 207 aminoácidos), una región de paso de membrana (de aproximadamente 24 aminoácidos), y un dominio intracitoplásmico (de aproximadamente 569 aminoácidos) (patente europea número EP 585-681 (1994)). También se ha aislado, clonado e investigado de manera extensiva el IL-4R soluble (sIL-4R) (patente europea número EP 367-566 (1997); Mosley et al., 1989, Cell, 59-335, 1989; patente de los EE.UU. número 5.767.065 y Garrone P et al., 1991, Eur J Immunol, 21(6):1365-9). La IL-4 se une preferentemente a sIL-4R en disolución en lugar de a IL-4R de la superficie celular endógeno, impidiendo así la activación celular y bloqueando la respuesta biológica, por ejemplo, la cascada de efectos asociados con la IL-4 y su unión al receptor endógeno (Renz H et al., 1991, citado anteriormente y Renz, H, 1999, Inflamm Res., 48(8): 425-31).

Se ha descrito el IL-4R como un agente inmunosupresor y antiinflamatorio, y la administración de IL-4R puede ser beneficiosa en el tratamiento de estados tales como alergia, rinitis, dermatitis atópica, artritis reumatoide, rechazo de injerto, enfermedad de injerto frente a huésped crónica (GvH) y lupus eritematoso sistémico (SLE) (véase, por ejemplo, la patente de los EE.UU. número 5.856.296; Renz H et al., 1992, J Invest Dermatol, 99(4):403-8; Hackstein H et al., 1999, Tissue Antigens, 54(5): 471-7; Rivas D et al., 1995, J. Autoimmun, 8(4):587-600; y Schorlemmer HU et al., 1995, Inflamm Res, 44 Supl. 2: S 194-6).

Como muchos biopéptidos, el IL-4R tiende a la inestabilidad. Tiende a degradarse y/o agregarse en condiciones extremas (por ejemplo, pH sumamente ácido o básico, altas temperaturas) y es sensible a agentes oxidantes y proteasas endógenas. La inestabilidad química y física inherente de IL-4R hace a esta formulación farmacéutica particularmente problemática. Para mantener la estabilidad y bioactividad de la proteína, las formulaciones de IL-4R actuales se basan principalmente en disolución, y se almacenan antes de la administración como liofilizados (por ejemplo, patentes de los EE.UU. números 5.856.296; 5.767.065 y 6.063.371). Una composición de péptido IL-4R basada en disolución, soluble para la administración mediante inhalación, Nuvance™, se encuentra actualmente en ensayos clínicos para el tratamiento del asma (Borish LC et al., 1999, Am J Resp Crit Care Med, 160(6): 1816-23).

Las formulaciones basadas en disolución de IL-4R tienen desventajas distintas de las asociadas a la inestabilidad en fase de disolución. En primer lugar, las formulaciones basadas en disolución ocupan más espacio y requieren más cuidado que las formulaciones sólidas y, por tanto, son más costosas. Además, en general, deben refrigerarse (mantenerse normalmente en un entorno de 2 a 8ºC), lo que restringe adicionalmente las opciones de transporte y almacenamiento. Además, muchas formulaciones basadas en disolución muestran una pérdida de concentración de proteínas con el tiempo, lo que se debe presumiblemente a la formación de dímeros y otros agregados de proteínas en disolución. Tales formulaciones deben complementarse frecuentemente con aditivos estabilizantes tales como tampones y/o antioxidantes para minimizar la inestabilidad de la disolución. Por tanto, sería deseable proporcionar una composición de IL-4R basada en polvo o sólida, particularmente una que no sólo pueda prepararse y almacenarse de manera estable, sino administrarse además en forma sólida, tal como un polvo seco inhalable. Muchos estudios clínicos y preclínicos con proteínas, péptidos, ADN y pequeñas moléculas inhaladas han demostrado la eficacia tanto en los pulmones como por vía sistémica.

Las formulaciones en polvo representan una alternativa a las formulaciones en disolución, y las proteínas, cuando se desean en forma de polvo, se preparan a menudo como liofilizados (por ejemplo, patente de los EE.UU. número 5.856.296). Desafortunadamente, los polvos liofilizados se forman normalmente como tortas, que requieren etapas de procesamiento de trituración y molienda, y opcionalmente de tamizado adicionales para proporcionar polvos fluyentes. En los últimos años, se ha empleado el secado por pulverización como un enfoque alternativo para preparar varios polvos basados en proteínas terapéuticos, particularmente para la administración en forma de aerosol (por ejemplo, publicaciones de patente internacional números WO 96/32149; WO 95/31479; WO 97/41833, transferidas a Inhale Therapeutic Systems, Inc.). Desafortunadamente, ciertas proteínas, y citocinas en particular, son propensas a la degradación durante el secado por pulverización y pierden su estructura secundaria (Maa, Y.F., et al., J. Pharm. Sciences, 87 (2), 152-159 (1998)). Para una citocina representativa, la hormona del crecimiento humana, Mumenthaler notificó que el secado por pulverización a 90ºC dio como resultado una formación del 4% de de agregados insolubles y una formación del 21% de agregados solubles, una pérdida del 25% de proteína intacta (Pharmaceutical Res., 11, 12-20 (1994)). La inestabilidad de la citocina ilustrativa, hGH, se demostró adicionalmente por Maa, Y.F., et al., ibid., que notificó una formación del 42% de agregados (solubles e insolubles) on la atomización de una disolución de hGH.

Adicionalmente, el sIL-4R tiene varios sitios de inestabilidad posibles que conducen tanto a inestabilidad basada tanto en disolución como en estado sólido. Específicamente, el sIL-4R contiene 7 cisteínas (Cys 11, 21, 31, 51, 61, 63 y 184), garantizando al menos un sulfhidrilo libre, que puede estar disponible para uniones disulfuro intermoleculares. Tales uniones disulfuro intermoleculares conducen a la formación rápida de dímeros, trímeros y otros autoagregados. Por tanto, esta molécula es particularmente propensa a la inestabilidad. Además de los sitios sensibles a la agregación, el péptido IL-4R tiene también sitios sensibles a la degradación. Por ejemplo, los sitios vulnerables más probables al ataque oxidante incluyen cuatro residuos de metionina (Met3, 16, 25 y 67). Adicionalmente, se encuentra una unión Asp-Pro lábil en medio ácido que puede romperse a pH bajo en los residuos de aminoácidos 145-146. Dos sitios de desamidación más probables incluyen Asn-Gly (26-27), y Asn-Gly (56-57), aunque la molécula tiene otros numerosos residuos de desamidación posibles (Asn y Gln).

Por lo tanto, el desafío al que se enfrentaron los inventores no fue sólo proporcionar una formulación de IL-4R de polvo seco mejorada para solventar algunas de las desventajas asociadas con formulaciones de IL-4R basadas en disolución tal como se describieron anteriormente, sino también equilibrar los factores que afectan a la inestabilidad y propiedades como aerosol del IL-4R para llegar a una formulación de polvo seco estable adecuada para la administración pulmonar. Es decir, antes de la presente invención, se desconocía el desarrollo de un polvo seco de IL-4R bioactivo, física y químicamente estable que también tiene las propiedades físicas necesarias para la dispersión en forma de aerosol (por ejemplo, altas dispersibilidades que permanecen estables con el tiempo, tamaño aerodinámico apropiado).

La presente invención se basa en el descubrimiento inesperado de composiciones de polvo de IL-4R secado por pulverización, química y físicamente estables, aunque se conoce que incluso tales moléculas (es decir, citocinas) son particularmente inestables cuando se exponen a tensión de corte, interacciones de pared-líquido, condiciones de alta temperatura y similares del secado por pulverización. Sorprendentemente, el polvo secado por pulverización de la invención muestra tanto un contenido en monómero como un nivel de agregados que esencialmente no cambian con respecto a los de su disolución antes de secarse por pulverización. Además, la invención proporciona composiciones de polvo seco de IL-4R que son estables en almacenamiento con respecto tanto al contenido en monómero como al nivel de agregados, incluso en condiciones extremas de humedad. Es decir, los polvos secados por pulverización descritos en el presente documento muestran estabilidad superior tanto química como física, así como tienen buenas dispersibilidades, (es decir, propiedades como aerosol) que los hacen adecuados para la administración al pulmón.

En un aspecto, la invención proporciona una composición de polvo de IL-4R secado por pulverización que puede almacenarse durante largos periodos de tiempo, 14 días o más, en condiciones extremas de humedad y temperatura sin experimentar alteraciones sustanciales en el funcionamiento del aerosol, carácter químico y/o físico, bioactividad, y similares. Más particularmente, el contenido en IL-4R de las composiciones de polvo de la presente invención esencialmente no cambia en comparación con las suspensiones o disoluciones antes de secarse por pulverización, es decir, experimentan una formación de agregados y/o pérdida de monómeros de proteínas mínimas con el tiempo.

La composición de polvo de IL-4R, que muestra una degradación insignificante durante la preparación y almacenamiento, puede prepararse en ausencia de excipientes o aditivos estabilizantes, o puede incluir adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los excipientes preferidos incluyen sales de zinc, citrato, leucina y combinaciones de los mismos.

La composición de polvo de IL-4R preferiblemente tiene un contenido en monómero que sustancialmente no cambia en comparación con la suspensión o disolución antes de secarse por pulverización. Se presenta el cambio en el contenido en monómero en el presente documento como una disminución en porcentaje (en comparación con la suspensión o disolución antes de secarse por pulverización). La disminución en el contenido en monómero es preferiblemente inferior a aproximadamente el 10%, más preferiblemente inferior al 7%, lo más preferiblemente inferior al 5%.

La composición de polvo de IL-4R preferiblemente muestra una formación de agregados mínima en comparación con la de la suspensión o disolución antes de secarse por pulverización. Se presenta el nivel de formación de agregados como un aumento en porcentaje (en comparación con la suspensión o disolución antes de secarse por pulverización). El aumento en la formación de agregados es preferiblemente inferior a aproximadamente el 10%, más preferiblemente inferior al 7%, lo más preferiblemente inferior al 5%.

Adicionalmente, las composiciones de polvo de IL-4R de la invención comprenden partículas eficaces para penetrar dentro de los alveolos de los pulmones, es decir, que tienen en una realización particular, un diámetro mediano de masa (MMD) inferior a aproximadamente 10 \mum, preferiblemente inferior a aproximadamente 7,5 \mum, y lo más preferiblemente inferior a 5 \mum de diámetro. En una realización particularmente preferida, el polvo se compone de partículas que tienen un MMD de desde aproximadamente 1,0 hasta 3,5 \mum.

Realizaciones adicionales de composiciones de polvo de IL-4R según la invención incluyen partículas de IL-4R secadas por pulverización que tienen un diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD) inferior a aproximadamente 10 micrómetros, preferiblemente inferior a aproximadamente 5,0 micrómetros, y más preferiblemente inferior a aproximadamente 3,5 micrómetros. En una realización especialmente preferida, el MMAD oscila desde 1,5 hasta 3,5 micrómetros.

También está englobada por la invención una formulación de polvo de IL-4R en forma de aerosol, y un polvo de IL-4R en una forma farmacéutica unitaria.

En otro aspecto, la invención se refiere a un procedimiento para administrar una composición de polvo de IL-4R tal como se describe en el presente documento a los pulmones de un paciente que necesite el mismo. En el procedimiento, se administra una composición tal como se describió anteriormente mediante inhalación en forma de aerosol.

La invención también engloba, en otro aspecto más, un procedimiento para preparar una composición de polvo seco de IL-4R dispersable que tiene las características descritas anteriormente.

En una realización, se prepara la composición de polvo de IL-4R respirable combinando el/los agente(s) de IL-4R activo(s) en un disolvente adecuado para formar una mezcla o disolución y secando por pulverización la mezcla o disolución para obtener partículas sustancialmente amorfas, diferenciadas, preferiblemente en la forma de un polvo seco. El IL-4R permanece esencialmente intacto tras el secado por pulverización, dando como resultado partículas de polvo en las que el grado de degradación de proteínas (caracterizado por la disminución en el contenido en monómero y la formación de agregados) es insignificante.

Puede añadirse adicionalmente un excipiente farmacéutico opcional al disolvente para formar una disolución homogénea o mezcla heterogénea, de tal manera que el secado por pulverización de la disolución o mezcla produce partículas que comprenden, en combinación con IL-4R, excipiente, tampón, y cualquier otro componente que está presente en la disolución o mezcla. Alternativamente, el excipiente farmacéutico puede disolverse por separado y secarse por pulverización para dar partículas de polvo separadas pero que pueden coadministrarse.

Estos y otros objetos y características de la invención se volverán más evidentes cuando se lea la siguiente descripción detallada junto con las figuras y dibujos adjuntos.

Figura 1: Esta figura representa una gráfica del efecto de la temperatura sobre el contenido en monómero de polvos secados por pulverización, formulaciones 1(A) - 1(D) del ejemplo 1 (datos de estabilidad de 2 semanas).

Figura 2: Esta figura representa una gráfica del efecto de la humedad relativa sobre el contenido en monómero de polvo secado por pulverización, formulaciones 1(A) - 1(D) del ejemplo 1 (datos de estabilidad de temperatura de 2 semanas).

Figura 3: Esta figura representa una gráfica del efecto de la temperatura sobre el contenido en monómero de polvos secados por pulverización, formulaciones 1(A) - 1(D) del ejemplo 1 (datos de estabilidad de temperatura de 2 semanas).

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A. Definiciones

Los siguientes términos tal como se usan en el presente documento tienen el significado indicado.

En el contexto de la presente invención, "IL-4R" y "sIL-4R" se refieren al dominio extracelular de la proteína unida a la célula que actúa como receptor para la citocina, interleucina 4. Tal como se trata a continuación, el IL-4R tal como se usa en el presente documento, no se limita a una única secuencia peptídica, sino que quiere decir que engloba cualquier proteína conocida que tenga actividad de IL-4R, incluyendo IL-4R derivado de forma natural o sintética así como los agonistas y análogos del mismo, hasta el punto que retienen la actividad terapéutica asociada con el péptido nativo.

Tal como se usa en el presente documento, el término "agonista" se refiere a compuestos que imitan el efecto del compuesto nativo. Un agonista puede ser un compuesto peptídico o no peptídico.

Tal como se usa en el presente documento, el término "análogo" se refiere a aquellos compuestos en los que uno o más aminoácidos se han sustituido, delecionado (es decir, fragmentos), añadido o modificado de otro modo de la secuencia humana nativa (de tipo natural), y que muestran al menos aproximadamente una bioactividad del 10, 20, 30, o 40%, y preferiblemente de al menos aproximadamente el 50%, 60%, o 70%, y lo más preferiblemente de al menos el 80%, 90%, 95%, 100% o superior al 100% de la del péptido endógeno nativo (no sintético). La especificidad por el receptor es de manera opcional sustancialmente similar a la del péptido endógeno nativo (de tipo natural). Normalmente, la afinidad por el receptor será al menos el 30%, 40%, o 50% de la del péptido endógeno nativo (de tipo natural); más preferiblemente al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% o superior al 100%.

Las composiciones de la presente invención se considera que son "respirables" si son adecuadas para el tratamiento mediante inhalación (es decir, que pueden inspirarse por la boca o nariz y llevarse al interior de de los pulmones) y/o la administración pulmonar (es decir, administración local a los tejidos del pulmón profundo y absorción a través de las células epiteliales del mismo hacia la circulación sanguínea). Las composiciones de la presente invención son adecuadas preferiblemente para la absorción sistémica rápida a través de los pulmones; es decir, alcanzando un máximo en la sangre en menos de 60 minutos.

Tal como se usa en el presente documento, "pulmón profundo" se refiere a las regiones alveolares del pulmón (por contraposición a las regiones bronquiales). Una composición adecuada para "tratamiento mediante inhalación", es una que, cuando está en forma de aerosol, puede (i) dispersarse fácilmente mediante un dispositivo de administración mediante inhalación oral o intranasal, y (ii) inspirarse a través de la boca o la nariz por un sujeto mamífero de manera que se absorbe al menos una parte de las partículas a través de las membranas mucosas de las fosas nasales o el pulmón. Una composición adecuada para la "administración pulmonar" comprende partículas de las cuales al menos una parte, cuando se administran mediante inhalación en forma de aerosol, alcanza los tejidos del pulmón, incluyendo el pulmón profundo.

Las composiciones "respirables por vía oral" son aquellas composiciones respirables que están particularmente adaptadas para la inhalación oral. De la misma manera, las composiciones "respirables por vía nasal" son aquellas composiciones respirables que están particularmente adaptadas para la inhalación nasal, es decir, la administración intranasal dentro de las vías respiratorias altas.

"Polvo seco" se refiere a una composición respirable que contiene partículas sólidas finamente dispersadas que fluyen de manera relativamente libre y que pueden (i) estar fácilmente dispersadas en un dispositivo de inhalación e (iii) inhalarse por un sujeto de tal manera que una parte de las partículas alcanza los pulmones para permitir la penetración en los alveolos. El polvo seco puede ser cristalino, un vidrio amorfo o una mezcla de ambas formas. Un polvo seco contiene normalmente una humedad inferior a aproximadamente el 10%, una humedad preferiblemente inferior a aproximadamente el 5%, y contiene más preferiblemente una humedad inferior a aproximadamente el
3%.

La "dosis emitida" o "ED" ("emitted dose") proporciona una indicación de la administración de una formulación de fármaco desde un dispositivo inhalador adecuado después de un disparo o acontecimiento de dispersión. Más específicamente, para formulaciones de polvo seco, la ED es una medida del porcentaje de polvo que se extrae de un envase de dosis unitaria y que sale de la boquilla de un dispositivo inhalador. Se define la ED como la razón de la dosis administrada mediante un dispositivo inhalador con respecto a la dosis nominal (es decir, la masa de polvo por dosis unitaria colocada dentro de un dispositivo inhalador adecuado antes de disparar). La ED es un parámetro determinado experimentalmente, y se determina normalmente usando un sistema de dispositivo in vitro que imita la dosificación del paciente. Para determinar un valor de ED, una dosis nominal de polvo seco, normalmente en dosis de dosis unitaria, se coloca dentro de un inhalador de polvo seco adecuado (tal como el que se describe en la patente de los EE.UU. número 5.785.049, transmitida a Inhale Therapeutic Systems) que se acciona a continuación, dispersando el polvo. La nube de aerosol resultante se extrae a continuación mediante vacío del dispositivo, donde se captura sobre un filtro tarado unido a la boquilla del dispositivo. La cantidad de polvo que alcanza el filtro constituye la dosis emitida. Por ejemplo, para una forma farmacéutica que contiene 5 mg de polvo seco situada dentro de un dispositivo para inhalación, si la dispersión del polvo da como resultado la recuperación de 4 mg de polvo en un filtro tarado tal como se describió anteriormente, entonces la dosis emitida para la composición de polvo seco es: 4 mg (dosis administrada)/5 mg (dosis nominal) x 100 = 80%. Para polvos no homogéneos, los valores de ED proporcionan una indicación de la administración de fármaco desde un dispositivo inhalador tras el disparo en lugar de polvo seco, y se basan en la cantidad de fármaco en lugar de en el peso de polvo total. De forma similar, para las formas farmacéuticas de nebulizador e IDM, la ED corresponde al porcentaje de fármaco que se extrae de una forma farmacéutica unitaria y que sale de la boquilla de un dispositivo inhalador.

Un polvo "dispersable" es uno que tiene un valor de ED de al menos aproximadamente el 30%, preferiblemente de al menos aproximadamente el 40%, más preferiblemente de al menos aproximadamente el 50%, e incluso más preferiblemente de al menos aproximadamente el 55%.

"Diámetro mediano de masa" o "MMD" es una medida del tamaño medio de partícula, puesto que los polvos de la invención son en general polidispersos (es decir, están constituidos por un intervalo de tamaños de partícula). Los valores de MMD notificados en el presente documento se determinan mediante sedimentación centrífuga, aunque puede usarse cualquier número de técnicas comúnmente empleadas para medir el tamaño medio de partícula (por ejemplo, microscopía electrónica, dispersión de la luz, difracción láser).

"Diámetro aerodinámico mediano de masa" o "MMAD" es una medida del tamaño aerodinámico de una partícula dispersa. Se usa el diámetro aerodinámico para describir un polvo en forma de aerosol en cuanto a su comportamiento de sedimentación, y es el diámetro de una esfera de densidad unitaria que tiene la misma velocidad de sedimentación, en aire, que la partícula. El diámetro aerodinámico engloba la forma de partícula, densidad y tamaño físico de una partícula. Tal como se usa en el presente documento, MMAD se refiere al punto medio o mediana de la distribución de tamaño de partícula aerodinámica de un polvo en forma de aerosol determinada mediante impacto en cascada, a menos que se indique lo contrario.

"Fracción de partículas finas" (FPF_{< 3,3 \ \mu m}) se define como la dosis de polvo que está por debajo de 3,3 micrómetros determinada mediante impacto en cascada. Este parámetro corresponde a la masa total bajo la fase 3 de un impactador Andersen cuando se opera a un caudal de 28,3 L/min.

"Excipiente farmacéuticamente aceptable" y "vehículo farmacéuticamente aceptable" son sinónimos y se refieren a los excipientes que pueden incluirse en las formulaciones de la invención y llevarse a los pulmones junto con las partículas que no tienen efectos toxicológicos adversos significativos para el sujeto, y particularmente para los pulmones del sujeto.

"Cantidad farmacológicamente eficaz" o "cantidad fisiológicamente eficaz" es la cantidad de IL-4R presente en una composición de la invención, tal como se describe en el presente documento, que se necesita para proporcionar un nivel deseado de IL-4R en el torrente sanguíneo de tejido de un sujeto que va a tratarse y proporcionar así una respuesta fisiológica anticipada cuando se administra tal composición mediante inhalación para la deposición en y la absorción desde el pulmón. La cantidad precisa dependerá de numerosos factores, por ejemplo, el IL-4R particular usado (por ejemplo, natural o sintético, de longitud completa o fragmento o análogo), el dispositivo de administración empleado, las características físicas del polvo, el uso pretendido por el paciente (por ejemplo, el número de dosis administradas al día), y las consideraciones del paciente (por ejemplo, edad, talla, peso, salud, etc.), y puede determinarse mediante un experto en la técnica, basándose en la información proporcionada en el presente documento.

Un "agente tensioactivo" es un excipiente que tiene actividad superficial (medida, por ejemplo, mediante tensiometría superficial), caracterizado por su capacidad para reducir la tensión superficial del líquido en el que se disuelve y provoca que los fármacos asociados con él, se extiendan rápidamente por superficies mucosas. La tensión superficial, que se asocia con la interfase entre un líquido y otra fase, es esa propiedad de un líquido en virtud de la cual las moléculas superficiales muestran una atracción hacia el interior. El término también incluye detergentes, emulsionantes, agentes de penetración y humectantes.

Por "péptido soluble en agua" quiere decirse un péptido que tiene una solubilidad en agua de al menos 0,5 mg/ml, y más preferiblemente de al menos 1 mg/ml.

"Aminoácido" se refiere a cualquier compuesto que contiene tanto un grupo amino como un grupo ácido carboxílico, e incluye sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Aunque el grupo amino aparece más comúnmente en la posición adyacente a la función carboxilo, el grupo amino también puede estar situado en cualquier ubicación dentro de la molécula. El aminoácido también puede contener grupos funcionales adicionales, tales como amino, tio, carboxilo, carboxamida, imidazol, etc. Los aminoácidos pueden ser sintéticos o producirse de forma natural y pueden usarse en sus formas o bien racémicas u ópticamente activas (D-, o L-), por ejemplo, como un único enantiómero ópticamente activo o como cualquier combinación o razón de enantiómeros.

Un "agente dispersante" se refiere a un componente de las composiciones de polvo de IL-4R respirables descritas en el presente documento que son eficaces, cuando están presentes en desde el 0,01 hasta el 99 por ciento en peso de la composición, preferiblemente desde el 0,01 hasta el 70 por ciento en peso, para aumentar la dispersibilidad de las composiciones de polvo de IL-4R respirables (determinado mediante la determinación de la dosis emitida) en al menos el 10% en comparación con la dispersibilidad de la composición de IL-4R respirable sin agente disper-
sante.

La "Biodisponibilidad pulmonar en el pulmón" o "biodisponibilidad relativa" es el porcentaje de dosis administrada de IL-4R que se ha depositado en los pulmones, y que se absorbe y está disponible en la circulación sistémica de un mamífero con respecto al porcentaje que se absorbe en la sangre desde un sitio de inyección subcutáneo o intramuscular. Sistemas modelo representativos para determinar las biodisponibilidades en el pulmón incluyen la rata, el conejo, y el mono. Las biodisponibilidades pulmonares en el pulmón pueden basarse en la administración intratraqueal directa o mediante la inhalación de un polvo de IL-4R respirable tal como se describe en el presente documento.

"Densidad aparente" se refiere a la densidad de un polvo antes de la compactación (es decir, la densidad de un polvo no comprimido), y se mide normalmente mediante un método de la USP bien conocido.

"Esencialmente inalterado" tal como se usa en referencia al contenido en monómeros o nivel de agregados de una composición de polvo de IL-4R de la invención, se refiere a una composición que muestra un cambio no superior a aproximadamente el 2% tanto en el contenido en monómero como en el nivel de agregados en comparación con la correspondiente suspensión o disolución antes de secarse por pulverización.

Un "aumento mínimo" cuando se usa en referencia al nivel de agregados de IL-4R en un polvo de IL-4R secado por pulverización se refiere a un aumento en el nivel de agregados no superior a aproximadamente el 10% en comparación con el nivel de agregados en la correspondiente suspensión o disolución antes de secarse por pulverización.

Un "cambio mínimo" cuando se usa en referencia al contenido en monómero de IL-4R en un polvo de IL-4R secado por pulverización se refiere a un cambio (es decir, disminución) en el contenido en monómero no superior a aproximadamente el 10% en comparación con el nivel de monómero de IL-4R en la correspondiente suspensión o disolución antes de secarse por pulverización.

"Condición húmeda" se refiere a un entorno que tiene una humedad relativa superior al 30% de humedad relativa (HR). Un entorno particularmente húmedo es uno que tiene una humedad relativa superior a aproximadamente el 60% de HR, oscilando las humedades altas desde aproximadamente el 70% hasta el 75% de HR o superior.

B. Componentes de la composición de polvo de IL-4R respirable

La presente invención proporciona composiciones de polvo respirables sumamente dispersables que contienen IL-4R para administración pulmonar de las mismas. Las composiciones de polvo descritas en el presente documento solventan muchos de los problemas encontrados a menudo hasta la fecha en la administración de agentes peptídicos por vías sistémicas, particularmente los problemas asociados con las formulaciones de IL-4R basadas en disolución. Ejemplos de tales problemas incluyen un tiempo de respuesta prolongado (por ejemplo, el tiempo entre la administración y la aparición de la respuesta fisiológica), baja absorción sistémica y concentraciones relativamente bajas en tejidos y secreciones, la incapacidad para mantener niveles séricos aceptables, y la inestabilidad de los péptidos, y citocinas en particular, en disolución.

Las composiciones de la presente invención son particularmente eficaces para el tratamiento de enfermedades y estados alérgicos, tales como asma y dermatitis atópica. Además las composiciones que contienen polvo de IL-4R secado por pulverización descritas en el presente documento son sorprendentemente estables (es decir, muestran mínima degradación química y física tras la preparación y almacenamiento, incluso en condiciones extremas de temperatura y humedad). Es decir, los polvos proporcionados en el presente documento son sorprendentemente resistentes, incluso en ausencia de excipientes que potencian la dispersibilidad o estabilizantes. Los polvos de IL-4R de la invención (i) se dispersan fácilmente mediante dispositivos de administración en aerosol (es decir, demuestran buen funcionamiento como aerosol), (ii) muestran sorprendentemente buena estabilidad física y química durante la fabricación y procesamiento del polvo, y en almacenamiento, y (iii) pueden prepararse de forma reproducible (ejemplos 1-5).

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables según la presente invención contienen IL-4R, y, opcional pero no necesariamente, un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los componentes de las composiciones de polvo de IL-4R respirables de la invención se describirán ahora.

El IL-4R para su uso en la invención se caracteriza generalmente como a continuación: Se expresa el receptor de interleucina 4 maduro endógeno como una glucoproteína de membrana de 140 kDa que se une a IL-4 con alta afinidad (Idzerda RL et al., 1990 J. Exp. Med., 171 (3), 861-873; Jacobs, CA et al. 1991, Blood, 77(11):2396-2403). El dominio extracelular del IL-4R humano, clonado y producido en células CHO en medios que contienen suero es una proteína sumamente glucosilada (unida en N) y sialilada que tiene un peso molecular no glucosilado de 23,9 kDa y que contiene 209 residuos de aminoácido. El IL-4R de dominio extracelular se ubica entre los residuos 24 y 234 del receptor de interleucina 4 maduro. Los datos de espectrometría de masas muestran que el peso molecular de la proteína es aproximadamente de 37 kDa, sugiriendo una glucosilación de al menos el 35%. Mediante análisis de SDS-PAGE, se eluye la proteína como una banda de 54 kDa. El pI de IL-4R es de 3,36 a 5,18 determinado mediante isoelectroenfoque. La temperatura de transición de despliegue determinada mediante DSC es de 57,8ºC y el proceso de despliegue es sumamente reversible.

El IL-4R para su uso en las composiciones descritas en el presente documento puede adquirirse de una fuente comercial, o puede producirse de forma recombinante, por ejemplo, usando un procedimiento descrito en la patente de los EE.UU. número 5.767.065 y por Armitage et al. en Adv Exp Med Biol 1991;292:121-30. El IL-4R puede ser neutro (es decir, sin carga) o puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, una sal de adición de ácido tal como acetato, maleato, tartrato, metanosulfonato, bencenosulfonato, toluenosulfonato, etc. o una sal de ácido inorgánico tal como clorhidrato, bromhidrato, sulfato, fosfato, etc. También pueden emplearse sales catiónicas tales como sales de sodio, potasio, calcio, magnesio o sales de amonio.

La cantidad de IL-4R contenido en las composiciones de polvo respirables será la cantidad necesaria para administrar por vía pulmonar una cantidad terapéuticamente eficaz (es decir, la cantidad requerida para ejercer el efecto terapéutico) de LI-4R por dosis unitaria durante el transcurso de un régimen de dosificación diario. En la práctica, esta variará dependiendo del IL-4R particular (por ejemplo, natural frente a sintético, de longitud completa frente a un fragmento y su correspondiente bioactividad), la población de pacientes, y los requisitos de dosificación. Debido a la naturaleza sumamente dispersable de los polvos respirables de la invención, se minimizan las pérdidas en el dispositivo de inhalación, lo que significa que se administra realmente más cantidad de la dosis de polvo al paciente. Esto, a su vez, está correlacionado con una dosificación requerida inferior para alcanzar el objetivo terapéutico deseado.

En general, la cantidad total de IL-4R contenida en las composiciones de polvo respirables oscilarán desde el 1 hasta el 100% del peso total de la composición de polvo respirable, preferiblemente desde el 5 hasta el 98%, más preferiblemente desde el 10 hasta el 95%, incluso más preferiblemente desde aproximadamente el 45% al 95% en peso hasta aproximadamente el 50% a aproximadamente el 90%. Una composición de polvo seco preferida contendrá desde aproximadamente el 40% hasta el 80% de IL-4R (% en peso de la composición), e incluso más preferiblemente contendrá desde aproximadamente el 0,2% hasta el 99% de IL-4R en peso.

La cantidad eficaz de IL-4R requerida variará de un paciente a otro y de un régimen terapéutico a otro. La cantidad y frecuencia de la administración dependerán, por supuesto, de factores tales como la naturaleza y gravedad de la indicación que se esté tratando, la respuesta deseada, la población de pacientes, el estado del paciente, etcétera.

La dosificación apropiada generalmente aceptada para inducir un efecto biológico para sIL-4R administrado por vía parenteral oscila desde aproximadamente 1 ng/kg/día hasta aproximadamente 10 mg/kg/día, más preferiblemente desde aproximadamente 5 \mug/kg/día hasta aproximadamente 2 mg/kg/día. Tales formulaciones parenterales de IL-4R se tratan en las patentes de los EE.UU números 5.856.296 y 6.063.371, tratadas anteriormente. Sin embargo, puesto que la administración pulmonar es frecuentemente más eficaz que la administración parenteral, las dosificaciones requeridas pueden variar, y de hecho, pueden ser ligeramente inferiores a las usadas en formulaciones parenterales. La dosificación de IL-4R, particularmente para el tratamiento de enfermedades alérgicas tales como asma, es normalmente semanal. La dosificación semanal de un polvo de IL-4R mediante inhalación puede oscilar desde aproximadamente 0,1 hasta 10 mg, más preferiblemente entre 0,5 - 5 mg, incluso más preferiblemente entre 1 y 2 mg. Las dosificaciones precisas dependerán de diversos factores tales como la concentración de IL-4R en el polvo secado por pulverización. Normalmente se alcanzan las dosificaciones deseadas en de 1 a 10 aspiraciones o de 2 a 6 aspiraciones, más preferiblemente 1-4 aspiraciones, dependiendo de la forma farmacéutica unitaria precisa empleada.

La eficacia de la administración de IL-4R sistémica a través del procedimiento descrito en el presente documento, es decir, el porcentaje de dosis administrada que alcanza el torrente sanguíneo (es decir, biodisponibilidad pulmonar en el pulmón) de una forma farmacéutica inhalada sólida será normalmente de al menos aproximadamente el 1%, más preferiblemente de al menos aproximadamente el 2%, normalmente de al menos aproximadamente el 3-5%. En una realización más preferida, la eficacia de la administración sistémica en el torrente sanguíneo desde el pulmón es de al menos aproximadamente el 15% al 30%.

C. Excipientes y aditivos

Las composiciones de polvo respirables de la presente invención pueden formularse "puras", es decir, sin aditivos ni excipientes farmacéuticos. Este hallazgo fue particularmente sorprendente en vista de la tendencia de las citocinas tales como IL-4R tanto a la degradación como a la agregación. En una realización específica de la invención, la composición respirable es una formulación de polvo seco "pura". En otra realización, la formulación de polvo seco no tiene excipientes ni aditivos particulares, tales como potenciadores de la penetración.

Alternativamente, las composiciones de la invención pueden contener IL-4R combinado con uno o más excipientes o aditivos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la administración pulmonar y respiratoria. Tales excipientes, si están presentes, están presentes generalmente en la composición de polvo en cantidades que oscilan desde aproximadamente el 0,01% hasta aproximadamente el 99% en peso, preferiblemente desde aproximadamente el 0,1% hasta aproximadamente el 95%, más preferiblemente desde aproximadamente el 0,5% hasta aproximadamente el 80%, incluso más preferiblemente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 50-60%. Se describen ejemplos de composiciones de IL-4R respirables que contienen excipientes en el ejemplo 1. De forma interesante, en las composiciones a modo de ejemplo descritas en los ejemplos, la presencia o ausencia de uno o más excipientes sustancialmente no tuvo impacto en la estabilidad química o física de los polvos secados por pulverización de la invención, ni durante la preparación ni durante el almacenamiento.

Sin embargo, excipientes preferidos servirán, en parte para mejorar una o más de las siguientes: las propiedades como aerosol de la composición, su estabilidad química, su estabilidad física, y/o estabilidad en almacenamiento. Los excipientes preferidos también funcionan para proporcionar una administración más eficaz y reproducible de IL-4R mediante inhalador de polvo seco, y mejorar adicionalmente las características de manejo de la composición de polvo de IL-4R (por ejemplo, fluidez y consistencia) para facilitar la fabricación y llenado del polvo.

En particular, los materiales de excipiente pueden a menudo funcionar para mejorar la estabilidad física y química de la composición de polvo de IL-4R respirable o agentes activos contenidos en la misma. Por ejemplo, el excipiente puede minimizar el contenido en humedad residual y dificultar la absorción de humedad y/o potenciar el tamaño de partícula, grado de agregación, propiedades superficiales (es decir, rugosidad), facilidad de inhalación, y dirigir las partículas resultantes al pulmón. El/los excipiente(s) pueden también servir simplemente como agentes de carga para reducir la concentración de agente activo en la composición de polvo seco.

Excipientes y aditivos farmacéuticos útiles en la presente composición incluyen, pero no se limitan a, proteínas (es decir, moléculas grandes compuestas por una o más cadenas de aminoácidos en un orden específico), oligopéptidos (es decir, cadenas cortas de aminoácidos conectados mediante enlaces peptídicos), péptidos (es decir, un tipo de moléculas que se hidrolizan en aminoácidos), aminoácidos, lípidos (es decir, compuestos grasos, céreos o aceitosos normalmente insolubles en agua pero solubles en disolventes orgánicos, que contienen carbono, hidrógeno y, en menor grado, oxígeno), polímeros (es decir, moléculas grandes formadas por la combinación de muchas moléculas más pequeñas parecidas), e hidratos de carbono (por ejemplo, azúcares, incluyendo monosacáridos, di, tri, tetra, y oligosacáridos; azúcares derivatizados tales como alditoles, ácidos aldónicos, azúcares esterificados y similares; y polisacáridos o polímeros de azúcares), que pueden estar presentes solos o en combinación. Excipientes adecuados incluyen aquellos proporcionados en la publicación internacional número WO 96/32096 transferida a Inhale Therapeutic Systems,
Inc.

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Los excipientes preferidos incluyen alcoholes de azúcar, lípidos, DPPC, DSPC, calcio/magnesio, y excipientes hidrófobos, tales como aminoácidos hidrófobos y azúcares hidrófobos. Los excipientes particularmente preferidos incluyen sales de zinc, leucina, citrato, y azúcares tales como rafinosa. Para formulaciones de partículas, los excipientes preferidos son aquellos que tienen temperaturas de transición vítreas (Tg), superiores a aproximadamente 35ºC, preferiblemente superiores a 45ºC, más preferiblemente superiores a aproximadamente 55ºC.

Excipientes de polipéptidos y proteínas a modo de ejemplo incluyen albúmina sérica tal como albúmina sérica humana (ASH), albúmina humana recombinante (AHr), gelatina, caseína, hemoglobina, y similares. Particularmente preferidos son los polipéptidos que potencian la dispersibilidad, por ejemplo, ASH, tal como se describe en la publicación internacional número WO 96/32096, transferida a Inhale Therapeutic Systems, Inc.

Componentes de polipéptidos/aminoácidos representativos, que pueden funcionar también en una capacidad de tamponamiento, incluyen alanina, glicina, arginina, betaína, ácido glutámico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartamo, tirosina, triptófano y similares. Se prefieren aminoácidos y péptidos que funcionan como agentes dispersantes. Los aminoácidos que están en esta categoría incluyen aminoácidos hidrófobos tales como leucina (leu), valina (val), isoleucina (isoleu), triptófano (try), alanina (ala), metionina (met), fenialanina (phe), tirosina (tyr), histidina (his) y prolina (pro). Un aminoácido particularmente preferido es el aminoácido leucina. Cuando se usa la leucina en las formulaciones descritas en el presente documento incluye D-leucina, L-leucina y leucina racémica. Los péptidos que potencian la dispersibilidad para su uso en la invención incluyen dímeros, trímeros, tetrámeros y pentámeros compuestos por componentes de aminoácidos hidrófobos, tales como los descritos anteriormente. Los ejemplos incluyen di-leucina, di-valina, di-isoleucina, di-triptófano, di-alanina, y similares, tripleucina, tripvalina, tripisoleucina, triptriptófano, etc.; di y tripéptidos mixtos, tales como leu-val, isoleu-leu, try-ala, leu-try, etc., y leu-val-leu, val-isoleu-try, ala-leu-val y similares y homo-tetrámeros o pentámeros tales como tetra-alanina y penta-alanina. Excipientes de oligopéptidos particularmente preferidos son dímeros y trímeros compuestos por dos o más residuos de leucina, tal como se describe en la solicitud de patente internacional PCTIUSOO/09785 de Inhale Therapeutic Systems Inc. titulada "Dry Powder Compositions Having Improved Dispersibity". De estos son particularmente preferidos dileucina y trileucina.

Otra característica preferida de un excipiente para su uso en la invención es la actividad superficial. Se prefieren particularmente los excipientes tensioactivos, que pueden también funcionar como agentes dispersantes, tales como aminoácidos hidrófobos (por ejemplo, leu, val, isoleu, phe, etc.), di y tripéptidos, poliaminoácidos (por ejemplo, ácido poliglutámico) y proteínas (por ejemplo, ASH, AHr, hemoglobina, gelatina) puesto que debido a su naturaleza tensioactiva, estos excipientes tienden a concentrarse sobre la superficie de las partículas de la composición de IL-4R respirable, haciendo a las partículas resultantes de naturaleza sumamente dispersable. Otros agentes tensioactivos a modo de ejemplo que pueden incluirse en las composiciones de IL-4R respirables descritas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a polisorbatos, lecitina, ácido oleico, cloruro de benzalconio y ésteres de sorbitano.

Excipientes de hidratos de carbono adecuados para su uso en la invención incluyen, por ejemplo, monosacáridos tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, d-manosa, sorbosa, y similares; disacáridos, tales como rafinosa, melecitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones y similares; y alditoles, tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, sorbitol (glucitol), mioinositol y similares.

Las composiciones de IL-4R respirables pueden también incluir un tampón o un agente de ajuste del pH; normalmente, el tampón es una sal preparada a partir de un ácido o base orgánicos. Tampones representativos incluyen sales de ácidos orgánicos tales como sales de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucónico, ácido carbónico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético, o ácido ftálico, Tris, clorhidrato de trometamina, o tampón fosfato.

Adicionalmente, la composición de IL-4R respirable de la invención puede incluir excipientes/aditivos poliméricos tales como polivinilpirrolidonas, celulosas derivatizadas tales como hidroxipropilmetilcelulosa, ficoles (un azúcar polimérico), hidroxietilalmidón, dextratos (por ejemplo, ciclodextrinas, tales como 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina y sulfobutileter-\beta-ciclodextrina), polietilenglicoles, agentes aromatizantes de pectina, sales (por ejemplo, cloruro de sodio), agentes antimicrobianos, edulcorantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, tensioactivos (por ejemplo, polisorbatos tales como "TWEEN 20" y "TWEEN 80"), lecitina, ácido oleico, cloruro de benzalconio, ésteres de sorbitano, lípidos (por ejemplo, fosfolípidos, ácidos grasos), esteroides (por ejemplo, colesterol) y agentes quelantes (por ejemplo, EDTA). Para composiciones que contienen un componente polimérico, el polímero está presente normalmente hasta un grado limitado en la composición, es decir, a niveles inferiores a aproximadamente el 10% en peso. Composiciones preferidas de la invención son aquellas en las que el IL-4R es preferiblemente polímero encapsulado o no liposomal, o no recubierto (es decir, sin una capa de recubrimiento diferenciada). Composiciones de IL-4R preferidas tales las puestas como ejemplo en el presente documento son formulaciones de acción inmediata, es decir, diseñadas para aplicaciones de liberación inmediata en lugar de sostenida.

Se enumeran otros excipientes y/o aditivos farmacéuticos adecuados para su uso en las composiciones de IL-4R respirables según la invención en "Remington: the Science & Practice of Pharmacy", 19ª ed., Williams & Williams, (1995, en el "Physician's Desk Reference", 52ª ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), y en "The Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3ª Edición, A. H. Kibbe, ed., American Pharmaceutical Association, Pharmaceutical Press, 2000.

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Según la invención, la composición de polvo de IL-4R respirable puede ser un polvo seco, siendo el polvo seco cristalino, un vidrio amorfo, o una mezcla de ambas formas. Para formulaciones que contienen un agente tensioactivo, el material tensioactivo (en forma o bien cristalina o bien amorfa), estará normalmente presente sobre la superficie de las partículas en una concentración más alta que en el polvo a granel.

D. Preparando las composiciones de IL-4R respirables

Se preparan las composiciones de polvo de IL-4R respirables, tales como formulaciones de polvo seco preferiblemente mediante secado por pulverización. Se lleva a cabo el secado por pulverización, por ejemplo, tal como se describe de forma general en el "Spray-drying Handbook", 5ª ed., K. masters, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1991), en Platz, R., et al., publicación de patente internacional números WO 97/41833 (1997) y WO 96/32149 (1996).

Para preparar una disolución de IL-4R para secado por pulverización, el IL-4R (y cualquier otro excipiente) se disuelve generalmente en agua, que contiene opcionalmente un tampón aceptable fisiológicamente. El intervalo de pH de la disolución está generalmente entre aproximadamente 3 y 10, prefiriéndose pH más cercanos al neutro, puesto que tales pH pueden ayudar a mantener la compatibilidad fisiológica del polvo tras la disolución de polvo dentro del pulmón. La formulación acuosa puede contener opcionalmente disolventes miscibles en agua adicionales, tales como acetona, alcoholes y similares. Alcoholes representativos son alcoholes inferiores tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, y similares. Las disoluciones contendrán generalmente IL-4R disuelto en una concentración de desde el 0,01% (peso/volumen) hasta aproximadamente el 20% (peso/volumen), preferiblemente desde el 0,1% hasta el 10% (peso/volumen), más preferiblemente del 1% al 3% (peso/volumen). Alternativamente, los componentes de la formulación de IL-4R pueden secarse por pulverización usando un sistema de disolvente o codisolvente orgánico, empleando uno o más disolventes tales como acetona, alcoholes (por ejemplo, metanol y etanol), éteres, aldehídos, hidrocarburos, cetonas y disolventes apróticos polares.

A continuación, las disoluciones que contienen IL-4R se secan por pulverización usando un secador por pulverización convencional, tal como aquellos disponibles de proveedores comerciales tales como Niro A/S (Dinamarca), Buchi (Suiza) y similares, dando como resultado una composición de IL-4R dispersable, respirable, preferiblemente en la forma de un polvo seco respirable. Las condiciones óptimas para secar por pulverización las disoluciones de agente activo variarán dependiendo de los componentes de la formulación, y se generalmente determinan experimentalmente. El gas usado para secar por pulverización el material es aire normalmente, aunque también son adecuados gases inertes tales como nitrógeno o argón. Además, la temperatura tanto de la entrada como la salida del gas usado para secar el material pulverizado es tal que no provoca descomposición del IL-4R en el material pulverizado. Se determinan normalmente tales temperaturas experimentalmente, aunque generalmente, la temperatura de entrada oscilará desde aproximadamente 50ºC hasta aproximadamente 200ºC mientras que la temperatura de salida oscilará desde aproximadamente 30ºC hasta aproximadamente 150ºC.

La preparación de las composiciones de polvo de IL-4R seco, respirables bajo una variedad de parámetros de procedimiento de secado por pulverización se describe en los ejemplos 1 y 2. Sorprendentemente, las fuerzas de corte producidas por la atomización de la disolución durante el secado por pulverización no dan como resultado la hidrólisis o agregación de IL-4R. Tal como se describe en el presente documento, pueden prepararse polvos secos sumamente dispersables que tienen buena estabilidad física y química y buenas propiedades aerodinámicas de forma reproducible y en una variedad de condiciones de procedimiento.

En algunos casos, puede desearse proporcionar la formulación de polvo seco de IL-4R respirable en una forma que tiene características mejoradas de manejo / procesamiento, por ejemplo, reducida electricidad estática, mejor fluidez, baja formación de aglomerados y similares, mediante la preparación de composiciones compuestas por agregados de partículas finas, es decir, agregados o aglomerados del IL-4R respirable descrito anteriormente. Las partículas de polvo seco, en las que se vuelven a romper los agregados fácilmente hasta los componentes de polvo fino para la administración pulmonar, se describen, por ejemplo, en Johnson, K., et al., patente de los EE.UU. número 5.654.007, 1997. Alternativamente, los polvos de IL-4R respirables pueden prepararse mediante la aglomeración de los componentes de polvo, tamizando los materiales para obtener los aglomerados, dando forma de esfera para proporcionar un aglomerado más esférico, y ajustando el tamaño para obtener un producto de tamaño uniforme, tal como se describe, por ejemplo, en Ahlneck, C., et al. publicación PCT internacional número WO 95/09616 (1995).

Se mantienen los polvos secos de IL-4R respirables preferiblemente en condiciones secas (es decir, humedad relativamente baja) durante la fabricación, procesamiento y almacenamiento. Independientemente del procedimiento de secado empleado, el procedimiento dará como resultado preferiblemente composiciones respirables sumamente dispersables compuestas por partículas de IL-4R sustancialmente amorfas.

E. Características del las composiciones de polvo de IL-4R respirables

Se prefieren ciertas características físicas de las composiciones de polvo de IL-4R secadas por pulverización para maximizar la eficacia de la administración en forma de aerosol de tales composiciones al pulmón.

Se componen las composiciones de polvo de IL-4R respirables de partículas eficaces para penetrar dentro de los pulmones. El paso de las partículas dentro de la fisiología del pulmón es un aspecto importante de la presente invención. Con este fin, las partículas de la invención tienen un diámetro mediano de masa (MMD) inferior a aproximadamente 10 \mum, preferiblemente inferior a 7,5 \mum y más preferiblemente inferior a 5 \mum, y normalmente están en el intervalo de 0,1 \mum hasta 5 \mum de diámetro. Las composiciones preferidas se componen de partículas que tienen un MMD de desde aproximadamente 0,5 \mum hasta 3,5 \mum. Se describen ejemplos de composiciones de polvo de IL-4R respirable de diversas concentraciones de agente(s) activo(s) y/o excipiente en el ejemplo 1. Las composiciones de polvo de IL-4R respirables pueden contener también partículas de vehículo no respirables tales como lactosa, en la que las partículas no respirables son normalmente superiores a aproximadamente 40 micrómetros de tamaño. En una realización preferida, el polvo seco es de contenido no liposomal o no lipídico.

Se caracterizan adicionalmente las composiciones de polvo de IL-4R respirables de la invención mediante una distribución de tamaño de partícula en aerosol inferior a aproximadamente 10 \mum de diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD), preferiblemente inferior a 5,0 \mum, y más preferiblemente inferior a 3,5 \mum. Los diámetros aerodinámicos medianos de masa de los polvos oscilarán de forma característica desde aproximadamente 0,5-10 \mum, preferiblemente desde aproximadamente 0,5-5,0 \mum de MMAD, más preferiblemente desde aproximadamente 1,0-4,0 \mum de MMAD, e incluso más preferiblemente desde 1,5 hasta 3,5 \mum.

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables, particularmente las composiciones de polvo seco respirables, tienen generalmente un contenido en humedad inferior a aproximadamente el 10% en peso, normalmente inferior a aproximadamente el 5% en peso, y preferiblemente inferior a aproximadamente el 3% en peso. Tales sólidos que contienen baja humedad tienden a mostrar una gran estabilidad en el envasado y almacenamiento.

Los polvos secos tienen preferiblemente una densidad aparente que oscila desde aproximadamente 0,1-10 g/cm^{3}, preferiblemente desde aproximadamente 0,25-4 g/cm^{3}, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5-2 g/cm^{3}, y lo más preferiblemente desde aproximadamente 0,7-1,4 g/cm^{3}.

La dosis emitida (ED) de estos polvos es superior al 30% y normalmente superior al 40%. Más preferiblemente, la ED de los polvos de la invención es superior al 50%, y es a menudo superior al 55%.

Una medida adicional para caracterizar el funcionamiento global como aerosol de un polvo seco es la dosis de partículas finas (DPF) o la fracción de partículas finas (FPF), que describe el porcentaje en masa de polvo que tiene un diámetro aerodinámico inferior a 3,3 micrómetros. Los polvos secos que tienen un valor de FPF superior al 40%, más preferiblemente superior al 50%, incluso más preferiblemente superior al 60% son particularmente muy adecuados para la administración pulmonar. Los polvos que contienen al menos el cincuenta por ciento de partículas en aerosol con tamaños entre 0,5 y 3,5 \mum son extremadamente eficaces cuando se administran en forma de aerosol, en alcanzar las regiones del pulmón, incluyendo los alveolos.

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables secadas por pulverización de la presente invención se caracterizan adicionalmente como que tienen el contenido en monómero esencialmente inalterado en comparación con el de su suspensión o disolución antes de secarse por pulverización. En otras palabras, el procedimiento de secado por pulverización no induce la formación de dímeros u otros agregados, afectando así al monómero en porcentaje en la composición. Eso decir, el cambio en el contenido en monómero entre el polvo secado por pulverización y la suspensión o disolución antes de secarse por pulverización está "esencialmente inalterado", por ejemplo, el porcentaje de contenido en monómero del polvo secado por pulverización en comparación al de la suspensión o disolución antes de secarse por pulverización es preferiblemente no superior a aproximadamente el 15%, más preferiblemente no superior a aproximadamente el 10%, más preferiblemente no superior a aproximadamente el 7%, incluso más preferiblemente de aproximadamente el 5% o inferior, tal como se pone como ejemplo mediante los polvos de IL-4R representativos descritos en los ejemplos.

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables secadas por pulverización de la presente invención son "estables en almacenamiento", es decir, caracterizadas por una formación de agregados insolubles mínima y/o una disminución mínima del contenido en monómero, cuando se almacenan durante periodos prolongados a temperaturas ("estables frente a la temperatura") y humedades extremas ("estables frente a la humedad"). Por ejemplo, las composiciones de polvo de IL-4R respirables secadas por pulverización de la presente invención experimentan una formación de agregados mínima y una disminución mínima del contenido en monómero tras el almacenamiento durante un periodo de tiempo (por ejemplo, dos semanas o más) a una temperatura que oscila desde aproximadamente 2ºC hasta aproximadamente 50ºC, preferiblemente de aproximadamente 25ºC, y/o una humedad relativa que oscila desde el 0% hasta aproximadamente el 75%, preferiblemente de aproximadamente el 33% de HR. Específicamente, las composiciones de polvo de IL-4R respirables secadas por pulverización almacenadas de la presente invención forman preferiblemente menos de aproximadamente el 15% de agregados insolubles (en comparación con las suspensiones o disoluciones antes de secarse por pulverización), más preferiblemente menos de aproximadamente el 10% de agregados insolubles, más preferiblemente menos de aproximadamente el 7% de agregados insolubles, incluso más preferiblemente aproximadamente el 5% o menos de agregados insolubles. Alternativamente, las composiciones de polvo de IL-4R respirables secadas por pulverización almacenadas de la presente invención experimentan preferiblemente una disminución en el contenido en monómeros que no es superior a aproximadamente el 20%, preferiblemente no superior a aproximadamente el 10%, más preferiblemente no superior al 7%, incluso más preferiblemente de aproximadamente el 5% o inferior.

Es importante observar las distinciones entre formulaciones basadas en polvo respirables y las formulaciones nebulizadas. A pesar del hecho de que las formulaciones nebulizadas pueden considerarse por algunos como que son "inhalables", porque se aspiran a través de la boca y hacia los pulmones, no son "respirables" tal como se define en el presente documento. Por ejemplo, las formulaciones nebulizadas normalmente no pueden alcanzar los tejidos del pulmón profundo y absorberse a través de las células epiteliales del mismo hacia la circulación sanguínea. Además, las formulaciones nebulizadas se basan en disolución, es decir, se administran en disolución en lugar de en forma sólida.

Se proporcionan composiciones de polvo de IL-4R respirables representativas para la administración pulmonar en los ejemplos 1-5.

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F. Administración pulmonar de las composiciones de polvo de IL-4R respirables

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables, particularmente las composiciones de polvo seco descritas en el presente documento, se administran preferiblemente usando un inhalador de polvo seco (IPS) adecuado, un dispositivo inhalador que utiliza el aliento inhalado por el paciente como un vehículo para transportar el polvo seco previamente dispersado (por medios activos o pasivos) a los pulmones. Los preferidos son los dispositivos de inhalación de polvo seco de Inhale Therapeutic Systems tal como se describen en Patton, J.S., et al., patente de los EE.UU. número 5.458.135 (1995); Smith, A., et al., patente de los EE.UU. número 5.740.794, (1998); Smith A., et al., patente de los EE.UU. número 5.785.049 (1998), y en la solicitud de patente internacional PCT 00/18084.

Cuando se administra usando un dispositivo de este tipo, la composición de polvo de IL-4R respirable está contenida en un recipiente que tiene una tapa que puede perforarse u otra superficie de acceso, preferiblemente un envase tipo blister o cartucho, en el que el recipiente puede contener una única unidad de dosificación o múltiples unidades de dosificación. Se llenan convenientemente grandes números de cavidades con dosis medidas de medicamento en polvo seco tal como se describe en Parks, D.J. et al., publicación de patente internacional WO 97/41031 (1997).

También son adecuados para administrar las formulaciones de polvo de IL-4R respirables descritas en el presente documento inhaladores de polvo seco del tipo descrito por ejemplo, en Cocozza, S., patente de los EE.UU. número 3.906.950 (1974), y Cocozza, S., patente de los EE.UU. 4.013.075, (1977), en los que una dosis medida previamente de polvo seco para la administración a un sujeto está contenida dentro de una cápsula de gelatina dura.

Otros dispositivos de dispersión de polvo seco para la administración pulmonar de los polvos secos incluyen aquellos descritos, por ejemplo, por Newell, R.E. et al., patente europea número EP 129985, (1988); por Hodson, P.D. et al., patente europea número EP 472598, (1996); por Cocozza, S., et al., patente europea número EP 467172, (1994), y por Lloyd, L.J. et al., patente de EE.UU número 5.522.385, (1996). También son adecuados para la administración de las composiciones de polvo de IL-4R de la invención dispositivos de inhalación tales como "TURBUHALER" de Astra-Draco. Se describe este tipo de dispositivo en detalle por Virtanen, R., patente de los EE.UU. número 4.668.218); por Wetterlin, K. et al., patente de los EE.UU. número 4.667.668, (1987); y por Wetterlin K., et al., patente de los EE.UU. número 4.805.811, (1989). También son adecuados los dispositivos que emplean el uso de un pistón para proporcionar aire para o bien arrastrar el medicamento en polvo, elevando el medicamento desde un tamiz transportador pasando aire a través del tamiz, o bien mezclando aire con el medicamento de polvo en una cámara de mezclado con la posterior introducción del polvo en el paciente a través de la boquilla del dispositivo, tal como se describe por Mulhauser, P., et al., patente de los EE.UU. número 5.388.572, (1997).

Las composiciones de polvo de IL-4R inhalables pueden administrarse también usando un inhalador de dosis medida (IDM), presurizado que contiene una disolución o suspensión de fármaco en un propelente líquido farmacéuticamente inerte, por ejemplo, un clorofluorocarbono o fluorocarbono, tal como se describe por Laube, et al., patente de los EE.UU. 5.320.094, (1994), y por Rubsamen, R.M. et al., patente de los EE.UU. 5.672.581 (1994). Antes de su uso, las composiciones de polvo de IL-4R respirables se almacenan generalmente en un recipiente en condiciones ambientales, y se almacenan preferiblemente a temperaturas a o por inferiores a aproximadamente 25ºC, y humedades relativas (HR) que oscilan desde aproximadamente el 30% hasta el 60%. Pueden conseguirse condiciones de humedad relativa más preferidas, por ejemplo, inferior a aproximadamente el 30% mediante la incorporación de un agente desecante en el envasado secundario de la forma farmacéutica. Los polvos secos respirables de la invención se caracterizan no sólo por tener un buen funcionamiento como aerosol, sino también por una buena estabilidad.

Cuando están en forma de aerosol para administración directa al pulmón, las composiciones de polvo de IL-4R descritas en el presente documento mostrarán buenas biodisponibilidades en el pulmón.

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G. Utilidad

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables de la invención, cuando se administran por vía pulmonar, son particularmente eficaces en el tratamiento de enfermedades y trastornos alérgicos, tales como asma, atopia, dermatitis atópica y otros estados asociados con altos niveles séricos de IgE e IgG_{1}.

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables pueden usarse también para tratar o prevenir enfermedades alérgicas, víricas, parasitarias y bacterianas y enfermedades infecciosas por hongos, particularmente cuando se administra en combinación con \gamma-interferón (véase la patente europea número EP 585.681 (1994)).

Las composiciones de polvo de la invención, cuando se inhalan, penetran en las vías respiratorias de los pulmones, entran en el sistema circulatorio y consiguen una administración sistémica eficaz. Además, las dosis de polvo de IL-4R administradas por vía pulmonar son normalmente muy inferiores a aquellas administradas por vía oral debido a la pérdida asociada con la digestión y degradación para las formas farmacéuticas orales.

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables de la presente invención encuentran utilidad como terapias para el asma alternativas o complementarias a las actuales.

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables de la presente invención encuentran utilidad particular en la regulación fisiológica de los niveles séricos de IL-4 e inmunoglobulinas asociadas con la misma (por ejemplo, IgE, e IgG_{1}).

Las composiciones de polvo de IL-4R respirables encuentran utilidad adicional como potenciadores de la actividad biológica de la citocina IL-4, permitiendo así la reducción en la dosificación de citocina requerida y la minimización de los efectos secundarios negativos asociados con la misma (véase la patente de los EE.UU. número 6.063.371).

Los siguientes ejemplos ilustran, pero de ninguna manera tienen la intención de limitar el alcance de la presente invención.

Ejemplos Materiales y métodos

Se usan los siguientes materiales en los ejemplos de a continuación

Materiales

L-Leucina (Aldrich, St. Louis, MO)

Ácido clorhídrico (J.T. Baker, Phillipsburg, N.J.)

Disolución volumétrica 0,1 N de hidróxido de sodio (J.T. Baker, Phillipsburg, N.J.)

Etanol al 100% (graduación 200) (USP/NF, Spectrum Chemical Mfg. Corp., New Brunswick, N.J.)

Metanol (calidad BPLC, EM Industries, Gibbstown, N.J.)

IL-4R recombinante humana (rhuIL-4R) (Immunex Corporation, Seattle, WA)

Ratas Sprague Dawley macho (Simonsen laboratories, Gilroy, CA).

Análisis de polvo

Disoluciones de IL-4R: Se prepararon las siguientes disoluciones de IL-4R. La disolución A contenía 22,6 mg/ml de IL-4R libre de suero en NaH_{2}PO_{4} 5 mM tamponada a un pH de 7,0. La disolución B contenía 6,1 mg/ml de IL-4R libre de suero en agua destilada. Se expresan las concentraciones de la disolución como masa de péptido por unidad de volumen. Los valores notificados en el presente documento son de datos de análisis de aminoácidos; los valores de pruebas de UV fueron ligeramente superiores (25,6 y 7,8 mg/ml, respectivamente).

Tamaño de partícula: Se midió la distribución del tamaño de partícula de los polvos de IL-4R a modo de ejemplo mediante sedimentación centrífuga líquida en un analizador del tamaño de partícula Horiba CAPA -700 tras la dispersión de los polvos en SediSperse A-11 (Micrometrics, Norcross, GA).

Contenido en humedad: El contenido en humedad de los polvos se midió mediante la técnica valorimétrica de Karl Fisher usando un medidor de humedad Mitsubishi CA-06 o mediante análisis termogravimétrico.

MMAD: Se determinó la distribución del tamaño de partícula en aerosol usando un impactador en cascada (Graseby Andersen, Smyrna, GA) a un caudal de 28 L/min, ignorando la pérdida de polvo en el colector de entrada.

Dosis emitida: Se determinaron las dosis emitidas tal como se describe en la sección de "Definiciones" usando un inhalador de polvo seco de Inhale tal como se describe en la patente de los EE.UU. número 5.740.794 y un filtro de vidrio Gelman, de 47 mm de diámetro.

Microscopía electrónica de barrido (SEM): Se determinó la morfología de las partículas usando un XL 30 ESEM fabricado por Philips Electron Optics (Eindhoven, Países Bajos).

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Análisis térmicos: Se llevaron a cabo experimentos de análisis térmico usando un calorímetro diferencial de barrido modulado (mDSC - Model 2920) analizador dieléctrico (DEA 2970) y un analizador termogravimétrico (TGA Modelo 2950 fabricado por TA Instruments (New Castle, DE). Se llevó a cabo microscopía en platina caliente usando un microscopio óptico Nikon Optiphot-2-pol (Nikon Inc., Torrance, CA), una cámara Hamatsu y controlador C2400 (Hamatsu Photonics, Herrsching, Alemania), un procesador central Mettler-Toledo FP90 (Mettler-Toledo, Columbus, OH) y un accesorio de platina caliente (Mettler, Toledo, OH).

Caracterización química: Se desarrollaron experimentos de SE-HPLC en un sistema Waters HPLC Alliance modelo 2690 (Alliance HPLC Systems, Millford, MA) que ejecuta un software Millenium V (Waters). Se obtuvieron las columnas de cromatografía de Phenomenex (Torrance, CA). Se realizaron los experimentos de UV en un espectrofotómetro de doble haz, Hitachi U-3000 (Hitachi Instruments Inc., San Jose, CA). Se realizaron experimentos de SDS-PAGW en una unidad de electroforesis Novex Xcell (Novex, San Diego, CA).

Ejemplo 1 Preparación de polvos secos de IL-4R

Se prepararon polvos secados por pulverización estables en almacenamiento de la proteína receptora de interleucina, IL-4R, que tienen propiedades como aerosol superiores y caracterizados adicionalmente por sus estabilidades químicas y físicas superiores. Se prepararon los polvos tanto en presencia como en ausencia de excipientes; los excipientes empleados eran de una variedad de clases químicas representativas (por ejemplo, sales de ácidos orgánicos, aminoácidos, cationes metálicos). Los polvos de IL-4R son estables tras el almacenamiento a largo plazo y son resistentes a condiciones extremas de temperatura y humedad.

Se prepararon polvos de IL-4R representativos según los siguientes protocolos.

Ejemplo 1 (A)

Formulación pura de IL-4R

Se formularon composiciones de polvo seco de IL-4R en agua desionizada sin excipientes añadidos para secado por pulverización. Se prepararon lotes de 600-700 mg de formulación pura de IL-4R secando por pulverización un volumen apropiado de disolución A. La concentración final de tampón fosfato en la disolución antes de secarse por pulverización era de 1,9 mM.

Ejemplo 1 (B)

Formulación de IL-4R que contiene cloruro de zinc

Se formularon composiciones de polvo seco de IL-4R en agua desionizada con cloruro de zinc para secarse por pulverización. Se prepararon lotes de 600-700 mg de formulaciones de ZnCl_{2}: IL-4R 5,4:1 dispensando 19,53 mL de disolución A de IL-4R y 0,456 mL de una disolución de 19,37 mg/mL de ZnCl_{2} en un matraz volumétrico de 50 mL y ajustando el volumen final hasta 50 mL mediante adición de agua desionizada. La concentración final de tampón fosfato fue de 1,9 mM.

Ejemplo 1 (C)

Formulación de IL-4R que contiene citrato

Se formularon composiciones de polvo seco de IL-4R en agua desionizada que contenían una sal de citrato para secarse por pulverización. Se prepararon lotes de 600-700 mg de formulaciones de citrato : IL-4R combinando aproximadamente 12 mL de disolución A y 200 mg de citrato en disolución a pH 7,5 y ajustando hasta un volumen final de 50 mL mediante adición de agua desionizada. La concentración final de tampón fosfato fue de 1,2 mM.

Ejemplo 1 (D)

Formulación de IL-4R que contiene leucina

Se formularon composiciones de polvo seco de IL-4R en agua desionizada que contenían leucina para secarse por pulverización. Se prepararon lotes de 600-700 mg de formulaciones de leucina: IL-4R combinando aproximadamente 12 mL de disolución A y 200 mg de leucina y ajustando hasta un volumen final de 50 mL mediante adición de agua desionizada. La concentración final de tampón fosfato fue de 1,2 mM y el pH fue de 7,5.

Se resumen las cantidades relativas de componentes (p/p) en las formulaciones 1(A)-1(D) en la tabla 1 siguiente.

TABLA 1

1

Formulaciones de polvo adicionales contempladas incluyen formulaciones de IL-4R, tanto puras como que contienen excipientes, preparadas usando una disolución de IL-4R tamponada con citrato o basada en agua (sin tampón). Los polvos de IL-4R preferidos según la invención comprenden, además de IL-4R, uno o más de los siguientes excipientes: trileucina, rafinosa, manitol, sacarosa, F-68, cationes metálicos divalentes tales como magnesio, calcio, y similares, glucofosfato, sales de zinc, trehalosa, glicina e histidina. Las formulaciones específicas pueden comprender desde el 10-40% en peso de trileucina, o el 1% en peso de F-68, o el 10% en peso de citrato, o de 3:1 hasta 10:1 en peso de catión metálico divalente: IL-4R, o el 10-30% en peso de sacarosa, o el 5-50% en peso de trehalosa, o cualquier combinación de los anteriores. Formulaciones de IL-4R ilustrativas adicionales incluyen aquellas que contienen tanto citrato como leucina (por ejemplo, una formulación con una razón de citrato : leucina : IL-4R de 15:15:70) o rafinosa (por ejemplo, formulaciones que comprenden el 5%-50% de rafinosa).

Se secaron por pulverización las formulaciones de IL-4R anteriores usando un minisecador por pulverización Buchi a escala de laboratorio (Buchi Labortechnik, Ag., Meierseggstrasse, Suiza) equipado con un ciclón modificado, una boquilla atomizadora y un vaso de recogida de polvo. Se operó el secador por pulverización Buchi con aire seco limpio. El caudal de fluido dentro del Buchi fue de 5 mL/min. Se ajustó la temperatura de entrada para conseguir el tamaño de partícula y la morfología objetivo (desde 80ºC hasta 150ºC). La temperatura de salida osciló desde aproximadamente 30ºC hasta 100ºC. Los rendimientos fueron superiores al 75% oscilando desde el 78-91% para los lotes de formulación de IL-4R 1(A) - 1(D). Se transfirieron los polvos de IL-4R (3 \pm 0,15 mg) dentro de una cámara sellada con guantes con una humedad relativa inferior al 5% y se colocaron dentro de formas farmacéuticas unitarias (envases tipo blister, BP) adecuados para su uso en un dispositivo inhalador de polvo seco tal como se describe en la patente de los EE.UU. número 5.740.794. La evaluación y caracterización de los sólidos resultantes se describe a continuación.

Ejemplo 2 Estabilidad de las formulaciones de polvo de IL-4R

El fin de los estudios de los ejemplos 2-5 fue evaluar el funcionamiento como aerosol, la estabilidad física y química de las formulaciones de polvo seco de IL-4R representativas descritas en el ejemplo 1. Se realizaron pruebas como aerosol, térmicas, físicas y químicas con los polvos tal como se prepararon inicialmente. También se llevaron a cabo análisis térmicos y físicos y químicos tras 2 semanas de almacenamiento a cuatro temperaturas distintas (2-8ºC, 25ºC, 40ºC y 50ºC) y 3 humedades relativas a 25ºC (0, 33, y 75%). Se expone el protocolo de estabilidad a continuación:

Se llenaron los polvos en envases tipo blister de PVC/lámina metálica y se sometieron a ensayo para determinar la dosis emitida, distribuciones del tamaño de partícula y análisis térmico sólo en los puntos de tiempo iniciales. Se realizó la caracterización química y análisis SEM de polvos de fármaco en aerosol a granel (es decir, no contenido en envases tipo blister) en los puntos de tiempo iniciales y a las 2 semanas. Se manejaron todos los polvos en cámaras selladas con guantes de humedad controlada con una humedad relativa inferior al 5%.

Se pesó el polvo a granel en viales de vidrio de borosilicato en una cámara sellada con guantes. Para las muestras de estabilidad de humedad relativa (HR) del 0%, se taparon los viales, se colocaron dentro de una bolsa envuelta de una lámina metálica que contiene desecante y se sellaron térmicamente antes de almacenarse en cámaras de temperatura. Para las muestras de estabilidad de humedad controlada, se dejaron los viales abiertos y se almacenaron en desecadores a 25ºC. Se extrajeron las muestras y se analizaron mediante UV, SDS-PAGE, SE-HPLC y SEM tras 2 semanas.

TABLA 2

3

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TABLA 3

4

Ejemplo 3 Funcionamiento como aerosol de las formulaciones de polvo de IL-4R

Se realizaron pruebas como aerosol usando un inhalador de polvo seco tal como se describe en la patente de los EE.UU. número 5.740.794, transferida a Inhale Therapeutic Systems Inc. Se almacenaron todos los envases tipo blister llenos en una caja seca antes de su uso para las pruebas como aerosol.

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Ejemplo 3(A)

Dosis emitida

Se midió la dosis emitida recogiendo el aerosol sobre un filtro de fibra de vidrio colocado en un soporte sobre la boquilla de la cámara del dispositivo. Para medir el porcentaje de dosis emitida (%ED), se dispersó un envase tipo blister como un aerosol usando un inhalador de polvo seco tal como se describió anteriormente. Se recogió la muestra de polvo sobre un filtro de fibra de vidrio pesado previamente (Gelman, 47 mm de diámetro). Se recogió la nube de aerosol sobre el filtro de la cámara retirándolo a un caudal de aire de 30 \pm 0,5 L/min durante 2,5-3,5 segundos. Un temporizador automático controló la duración de la extracción. El patrón de muestra estimula una inspiración honda lenta del paciente.

Se calculó el %ED dividiendo la masa del polvo recogido sobre el filtro entre la masa de polvo en el envase tipo blister (masa real). Se notifican los resultados en la tabla 4. Cada resultado notificado fue el promedio y la desviación estándar de 10 mediciones.

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Ejemplo 3(B)

Diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD) y desviación estándar geométrica (DEG)

Se obtuvieron el diámetro aerodinámico mediano de masa y la distribución del tamaño de partícula usando un impactador en cascada de Andersen de 8 fases (tamaños de corte de 9,0, 5,8, 4,7, 3,3, 2,1, 1,1, 0,7, y 0,4 \mum). Se obtuvo cada medición de Andersen dispersando 10 envases tipo blister de peso lleno de 3 mg en un inhalador de polvo seco mientras se hace vacío a 28,3 \pm 0,5 L/min durante 2,5 segundos. Un temporizador automático controló la duración de la extracción. A partir de estos datos se calculó un diámetro aerodinámico mediano de masa. Los resultados se exponen en la tabla 4.

Se calcularon las desviaciones estándar geométricas (DEG) gráficamente a partir de los datos de MMAD de Andersen. Se representó gráficamente el diámetro de corte de la placa como una función del subtamaño en porcentaje acumulativo en una escala de probabilidad. Se tomó la DEG como el diámetro al 85% dividido entre el diámetro al 50%. Los valores obtenidos se enumeran en la tabla 4.

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Ejemplo 3(C)

Fracción de partículas finas (FPF)

Se obtuvo la FPF_{%<3,3 \ \mu m} usando las fases de impacto en cascada de Andersen F y 3 en una configuración de pila corta. Se obtuvo cada medición de FPF dispersando dos envases tipo blister de peso lleno de 3 mg en un inhalador de polvo seco mientras se hace vacío a 28,3 L/min durante 2,5 segundos. Los resultados se exponen en la tabla 4.

TABLA 4

5

El funcionamiento como aerosol de las formulaciones de polvo de IL-4R fue bastante bueno, teniendo todas valores de ED de esencialmente el 60% o superior y valores de MMAD de 4 \mum o inferior, con al menos el 34% de partículas teniendo MMAD inferiores a 3,3 \mum.

Los valores de DEG fueron todos inferiores a 2 \mum, excepto para la formulación de leucina. Se creyó que esto era un artefacto debido a la distribución del tamaño de partícula bimodal observada generada por el CI (impacto en cascada) de Andersen.

Ejemplo 4 Caracterización en estado sólido de formulaciones de polvo de IL-4R

Ejemplo 4(A)

Microscopía electrónica de barrido

Se utilizó la microscopía electrónica de barrido para obtener información morfológica inicial sobre los polvos secados por pulverización y para evaluar los cambios en la morfología en el almacenamiento en condiciones variables de temperatura y humedad.

Se tomaron imágenes con un Philips XL30 ESEM operado en modo de alto vacío usando un detector Everhart-Thornley para capturar electrones secundarios para la composición de la imagen. Las tensiones de aceleración fueron de 3 a 10 kV usando una fuente de LaB_{6}. Las distancias de trabajo oscilaron desde 30 hasta 10 \mum.

Todos los polvos a excepción del polvo de leucina: IL-4R, la formulación 1(D), no mostraron un cambio apreciable en la morfología tras un almacenamiento de 2 semanas en las condiciones de temperatura y HR descritas en el protocolo de estabilidad del ejemplo 2 (tabla 2). Algunos de los polvos de leucina: IL:4R mostraron cambios morfológicos a valores de HR del 33 al 75% así como a temperaturas de 40 a 50ºC, caracterizados por crecimientos como cintas que pueden deberse a la cristalización de leucina amorfa.

Cuando se examinaron visualmente mediante SEM, las partículas podían mostrar una morfología como pasas arrugadas. Las partículas rugosas (es decir, partículas muy arrugadas que eran sustancialmente más ásperas que suaves) son las más preferidas.

Se determinaron los efectos de la temperatura y humedad relativa para formulaciones de IL-4R representativas. De los polvos de IL-4R ilustrativos preparados, el polvo secado por pulverización con leucina pareció ser el menos estable morfológicamente, basándose en los cambios en la morfología dirigidos por la temperatura y HR. No se observaron cambios en la morfología significativos en ninguno de los otros polvos cuando se expusieron a condiciones de almacenamiento idénticas.

Ejemplo 4(B)

Análisis térmico

Calorimetría diferencial de barrido (DSC): Se generaron los perfiles de DSC calentando una muestra bandeja cerrada herméticamente en un DSC de TA Instruments. Los pesos de las muestras fueron del orden de 3.5 - 4.5 mg. La velocidad de calentamiento de la DSC fue de 10ºC/min con helio como el gas de purga. La temperatura se aumentó inicialmente en rampa hasta 70ºC, se enfrió a 10ºC/min hasta -30ºC, se volvió a calentar a 10ºC/min hasta 220ºC con el fin de eliminar la historia térmica en vez de usar un modo de modulación. Todos los polvos mostraron una gran endoterma a aproximadamente 198ºC. La formulación de IL-4R que contiene zinc, la formulación 1(B), mostró una endoterma adicional a aproximadamente 180ºC. La formulación de IL-4R que contiene citrato, la formulación 1(C), mostró una endoterma adicional a aproximadamente 172ºC. La formulación de IL-4R que contiene citrato, la formulación 1(D), mostró una endoterma adicional a aproximadamente 186ºC. No se observó transición vítrea (Tg) para los polvos usando esta técnica.

Por tanto, los polvos secados por pulverización de la invención muestran temperaturas de transición vítrea que son muy superiores a la temperatura ambiente, una característica preferida de las formulaciones en polvo seco, particularmente para el almacenamiento a largo plazo. Por tanto, en otro aspecto, los polvos de IL-4R representativos de la invención se caracterizan por Tg que son superiores a 100ºC. Debido a las altas Tg de los polvos de la invención, estos polvos de IL-4R pueden almacenarse de manera estable a temperaturas superiores a la ambiente o 25ºC, pueden almacenarse de manera estable a 30ºC, 35ºC, 40ºC, 45ºC, 50ºC, 55ºC, 60ºC, 65ºC o más (hasta aproximadamente 100ºC o incluso más) durante periodos prolongados de tiempo (por ejemplo, una semana, dos semanas, un mes, dos meses, de tres a seis meses, nueve meses, hasta un año o más prolongado), mientras mantienen sus características ventajosas como aerosol (mostrando una disminución esencialmente mínima en la dosis emitida, no superior a aproximadamente el 15%, preferiblemente no superior a aproximadamente el 10%, e incluso más preferiblemente no superior a aproximadamente el 5%, y esencialmente sin cambio en MMAD, tal como se caracteriza por un aumento en MMAD no superior a aproximadamente 1 micrómetro, y preferiblemente no superior a aproximadamente 0,75 micrómetros, e incluso más preferiblemente no superior a aproximadamente 0,5 micrómetros, con el almacenamiento).

Espectrometría de relajación dieléctrica (DRS): Puesto que la temperatura de transición vítrea (Tg) de las formulaciones secadas por pulverización de IL-4R no pudo determinarse mediante DSC, se realizó DRS. Se llevaron a cabo dos experimentos de DRS con la formulación de IL-4R que contiene zinc, la formulación 1(B), para identificar mejor la temperatura de transición vítrea de una formulación representativa. El primer experimento llevado a cabo fue un análisis de DRS convencional (analizador dieléctrico de TA Instruments (DEA 2970)), operado a 2ºC/min desde 30ºC hasta 150ºC y enfriado de nuevo hasta 30ºC, barriendo a través de las frecuencias de 1, 10, 100, 10^{3}, y 10^{4}, y 10^{5} Hz. El segundo experimento llevado a cabo fue un experimento de ablandamiento muy similar a un analizador termomecánico (TMA) operado a 2ºC/min desde 30ºC hasta 250ºC y barriendo a través de las frecuencias de 1, 10, 100, 10^{3}, y 10^{4} y 10^{5} Hz. Ambos experimentos se ejecutaron con el polvo de Zn:IL-4R como tal (formulación 1(B)) y tras secado durante la noche a 100ºC (formulaciones 1(B)-(D).

A partir de estos estudios, se concluyó que no hay transición vítrea por debajo de la temperatura de descomposición para la muestra secada y no hay transición vítrea por debajo de 150ºC para la muestra sin secar. Esto indica que los cambios en la línea base por debajo de 100ºC observados mediante DSC no se debieron a un episodio de transición vítrea. Por tanto, la Tg de esta formulación es superior a la temperatura de descomposición de la proteína.

Análisis termomecánico (TMA): Se realizaron los experimentos de TMA monitorizando el espesor de la muestra durante un experimento de DRS. Se usó la misma configuración de electrodos que en el primer experimento, excepto en que se retiró la junta. Se fijó la fuerza del pistón en 20 N y se registraron manualmente el espesor de la muestra y la temperatura cada dos minutos desde 30ºC hasta 250ºC. El inicio del ablandamiento es a 224ºC tanto para la formulación 1(B) y la formulación 1(B)-D. El ablandamiento observado en los experimentos de TMA se debe a la degradación y a la posibilidad de que se produzca simultáneamente una transición vítrea. Puesto que no existe otra aparición de ablandamiento a temperaturas inferiores, los picos a 1 Hz de las pruebas de DRS convencionales se deben a otro mecanismo tal como el inicio de movimientos de cadena lateral o conducción iónica y no se deben a una transición vítrea (Seyler, R.J., 1994, "Assignment of the Glass Transition", ASTM, 108-113). Si se produce la transición vítrea simultáneamente con la descomposición, entonces en la muestra con el pico de factor de pérdida a 1 Hz inferior puede tener también la transición vítrea desplazada a una temperatura inferior. Puesto que la prueba de DEA convencional sólo se ejecutó a 150ºC, es evidente que no hay transición vítrea por debajo de 150ºC. La evaluación de las representaciones gráficas de la permitividad frente a la temperatura confirmó los perfiles con forma de s esperados para este tipo de análisis.

Análisis termogravimétrico (TGA): se determinó el contenido en disolvente residual en el polvo tras secado por pulverización mediante TGA usando un TGA de TA Instruments. Se envasaron aproximadamente 3 mg de polvo en una bandeja de aluminio cerrada herméticamente en una cámara sellada con guantes a una humedad relativa inferior al 3%. Se puso a cero el TGA sin la bandeja y se registró el peso del polvo en la sección de comentarios. Justo antes del análisis, se perforó la bandeja con una aguja y se cargó dentro del equipo. La velocidad de barrido fue de 10ºC/min desde 25-175ºC. Los resultados se muestran en la tabla 5.

TABLA 5

6

Microscopía de platina caliente (HSM): Se llevó a cabo la microscopía de platina caliente desde temperatura ambiente hasta 220ºC usando un microscopio óptico Nikon Optiphot-2-pol, una cámara Hamatsu y un controlador C2400, un procesador central Mettler Toledo FP90 y un accesorio de platina caliente FP8902H. Se observó poco a ningún cambio en el aspecto visual del polvo con las preparaciones secas. Las formulaciones pura (NM1392-04) y con zinc (NM1392-05) demostraron algunas partículas "que aparecen" o que saltan de partículas a aproximadamente 80ºC. Para todas las formulaciones evaluadas en aceite de inmersión a alta temperatura, se observó que se formaron canales a aproximadamente 90ºC, y a 110ºC se observó desprendimiento de gas. se supone que este desprendimiento de gas se debe a la pérdida de agua desde el polvo. El tiempo prolongado para este desprendimiento de gas concuerda con los perfiles de pendiente descendente observados mediante DSC.

Ejemplo 5 Caracterización química de formulaciones en polvo de IL-4R

Pueden usarse varias técnicas para analizar las muestras del ejemplo 1 para determinar el grado de agregación y degradación. Se determinaron los agregados insolubles mediante detección visible y espectrofotometría UV. Se analizaron cuantitativamente los agregados solubles mediante cromatografía de exclusión por tamaños y cualitativamente mediante SDS-PAGE.

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Ejemplo 5(A)

Cromatografía líquida de alta presión de exclusión por tamaños (SE-HPLC)

Se midieron cuantitativamente los agregados solubles mediante SE-HPLC. Se almacenaron las muestras a 5ºC hasta la inyección. Se extrajeron los cromatogramas y se procesaron a 220 nm.

Se comparó el contenido en monómero en porcentaje de las disoluciones formuladas antes del secado por pulverización con los correspondientes polvos reconstituidos de fármaco en aerosol. No hubo cambios significativos en el contenido en monómero en porcentaje entre las disoluciones formuladas y los polvos reconstituidos de fármaco en aerosol. Los resultados se exponen en la tabla 6 a continuación.

Basándose en los resultados obtenidos de los datos de temperatura de estabilidad del polvo a las dos semanas, a medida que aumentó la temperatura de almacenamiento, disminuyó la cantidad de contenido en monómero comparado con los datos de tiempo iniciales. El mayor cambio en el monómero en porcentaje desde el inicial fue a 50ºC con un intervalo del 2,1%, en la formulación pura, al 1,9% tanto en las formulaciones con zinc como con citrato. En el estudio de humedad de estabilidad del polvo a las 2 semanas, las formulaciones con citrato mostraron la mayor disminución de justo un 1,8% en el monómero desde el inicial en la HR extrema del 75%. Esto se debe probablemente a la cristalización del citrato. Por tanto, las composiciones de IL- de la invención no muestran esencialmente degradación térmica con el secado por pulverización (tal como se evidencia por el contenido en monómero de las composiciones ilustrativas), y muestran una disminución mínima en el monómero con el almacenamiento, en una variedad de condiciones ilustrativas de temperatura y humedad. A diferencia de otras proteínas, que con el secado por pulverización son a menudo propensas a la agregación significativa (Maa, Y.F., et al., J. of Pharmaceutical Sciences, Vol. 87 (2), págs. 152-159 (1997)), se ha encontrado que IL-4R era sorprendentemente resistente e impermeable para tales condiciones, y forma polvos secados por pulverización en los que la proteína muestra una degradación insignificante incluso en ausencia de los excipientes protectores/estabilizantes empleados comúnmente.

Se evaluaron como controles dos muestras líquidas de 1 mg/mL almacenadas a 25 y 50ºC durante 2 semanas. La muestra líquida almacenada a 25ºC tenía un contenido en dímero del 0,7% expresado como porcentaje de monómero, pero tenía más del 17% de especies de bajo peso molecular. A 50ºC, el líquido tenía contenido en dímero del 2,3% expresado como un porcentaje de monómero y un 2,1% de especies de bajo peso molecular. Se prepararon y volvieron a someter a prueba muestras y se confirmaron los resultados originales. La disminución en porcentaje del contenido en monómero de la formulación líquida de IL-4R a 50ºC durante 2 semanas es aproximadamente el 40% del inicial (véanse la tabla 6 y las figuras 1, 2, y 3), mientras que las formulaciones en polvo permanecieron esencialmente inalteradas. Por tanto, las formulaciones en disolución de IL-4R son significativamente más inestables (es decir, propensas a la degradación) que las correspondientes formulaciones en polvo almacenadas esencialmente en las mismas condiciones durante un periodo de tiempo dado. De manera interesante, las condiciones extremas de temperatura y cizallamiento experimentadas por la molécula de IL-4R en disolución durante el secado por pulverización no produjeron una disminución significativa en el contenido en monómero ni promovieron una degradación química extensa de la molécula tal como se observa para las muestras líquidas situadas en almacenamiento. Los datos anteriores señalan a la sorprendente ventaja de las formulaciones en polvo de IL-4R con respecto a las correspondientes formulaciones líquidas con el almacenamiento, basada en los datos de estabilidad química y física.

Ejemplo 5(B)

Espectroscopia ultravioleta (UV)

Se usaron análisis de espectrofotometría UV para evaluar la turbidez (es decir, la agregación/precipitación) en muestras reconstituidas. Se realizaron las mediciones en un espectrofotómetro de doble haz, Hitachi U-3000. Se fijaron los parámetros del instrumento a una velocidad de barrido de 300 nm/min; anchura de rendija de 1,0 nm; y un barrido que osciló desde 450 nm hasta 200 nm. Se inspeccionaron visualmente las muestras para determinar la materia particulada. Se determinaron cuantitativamente los agregados insolubles midiendo la turbidez de la disolución con UV. Se realizó una regresión lineal para corregir la dispersión a partir de los valores de absorbancia a 350, 375 y 400 nm. Se extrapoló la absorbancia a \lambda_{max} corregida para la dispersión de la luz a partir de la ecuación para la recta de regresión. El agregado insoluble en tanto por ciento es el porcentaje de absorbancia corregida para la dispersión de la luz, dividida entre la absorbancia \lambda_{max} no corregida tal como se muestra en la ec. 1 a continuación.

% de agregados insolubles en tanto por ciento = \frac{Abs\lambda_{max}(\text{corregida para la dispersión de la luz})}{Abs\lambda_{max}(\text{no corregida para la dispersión de la luz})} \hskip1,1cm(Ec. 1)

Las muestras o bien se reconstituyeron o bien se diluyeron hasta una concentración de 0,1 mg de péptido de
IL-4R/mL con agua antes del análisis.

Excepto para una muestra, todas las muestras en disolución, antes y después del secado por pulverización, no tuvieron signos visibles de materia particulada o tuvieron menos de un 5% de agregados insolubles calculados. La formulación pura secada por pulverización, la formulación 1(A), era visiblemente transparente en las condiciones iniciales pero tenía un 7% de agregados insolubles, cuando se calculó mediante la ec. 1. Puesto que el punto de tiempo de estabilidad a las 2 semanas para esta muestra contenía solamente un 3% de agregados insolubles, se concluyó que el valor inicial era un error. Ninguna de las muestras mostró signos visibles de materiales particulados o agregados insolubles detectables tras la exposición durante 2 semanas a las condiciones especificadas de temperatura y humedad. Se calculó menos de un 3,5% de agregados insolubles usando la ec. 1 para todos los lotes. La tabla 6 incluye los datos reunidos solamente mediante SE-HPLC y no contiene información sobre agregados.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 6

7

8

Ejemplo 5(C)

Electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE)

Se midieron cuantitativamente los agregados solubles y la degradación mediante SDS PAGE usando un kit de tinción Novex Silver Xpresss. Se corrieron geles de tris-glicina al 4-20% preparados previamente de Novex en una minicelda de electroforesis Novex Xcell II. Las muestras o bien se reconstituyeron o bien se diluyeron hasta una concentración de 0,1 mg de péptido de IL-4R/mL con agua. Se prepararon disoluciones en condiciones reductoras y no reductoras y se aplicaron con una carga de 1-5 \mug de proteína por carril. Las cargas de proteína de 5 mg se ejecutaron para probar y potenciar la detección de bandas no observables en la carga de proteína de 1 \mug. Se trataron las muestras reducidas con 2-mercaptoetanol y se calentaron a 100ºC durante 3 minutos. Se corrieron los geles a 125 V, 25 mA/gel hasta que el frente del gel alcanzó la parte inferior (aproximadamente 1,5 h). Además de la disolución antes del secado por pulverización, los polvos iniciales y las muestras de estabilidad, se analizó una disolución de 1 mg de péptido de IL-4R/mL como un control. Se corrieron geles reductores y no reductores para la formulación líquida en el inicio, 2 semanas, 25ºC y 2 semanas, 40ºC.

No hubo cambios en los perfiles del gel entre las disoluciones formuladas antes del secado por pulverización y los polvos reconstituidos de fármaco en aerosol. Las bandas de monómero de todas las muestras y controles de IL-4R en los geles avanzaron a un peso molecular superior (aproximadamente 50 kDa) que los valores notificados y parecieron ser más anchas y difusas. Esto se atribuye de manera más probable a que la proteína es una glucosilada y a que afecta a la migración de IL-4R a través del gel. Había otra banda diferenciada que avanzaba hasta aproximadamente 97 kDa, ésta se atribuyó al dímero que es presumiblemente la forma dimérica de la proteína. Fueron visibles varias bandas de peso moléculas inferior en el gel con carga de 5 \mug que no se han identificado.

Como con los iniciales, no hubo cambios visibles en los perfiles de gel de estabilidad del polvo en aerosol a granel a las 2 semanas en ninguna temperatura de los estudios de humedad en comparación con la disolución control. La muestra de IL-4R pura incubada a 25ºC, HR del 75% durante dos 2 semanas no se detectó en el gel original, probablemente debido a un error de dilución. Con el análisis repetido, la muestra fue equivalente a las otras muestras de estabilidad. Los geles de las muestras en disolución de IL-4R mostraron un alto grado de degradación y agregación comparado con los polvos secados por pulverización.

En resumen, basándose en los resultados obtenidos del estudio de estabilidad, se observó que IL-4R era químicamente estable en los cuatro lotes de formulaciones en polvo a granel (formulaciones 1(A)-1(D)) durante hasta dos semanas a 2-8ºC, 25ºC, 40ºC y 50ºC, además de 25ºC con HR del 0%, 33% y 75% para polvos almacenados sin protección. No se observó agregación insoluble mediante UV para ninguno de los lotes. El contenido en monómero disminuyó en menos del 2% para todas las formulaciones en estas condiciones, mostrando la formulación con citrato la mayor reducción en el contenido en monómero en almacenamiento.

Claims

1. Una composición de polvo secado por pulverización que comprende IL-4R y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

2. Composición según la reivindicación 1, en forma de aerosol.

3. Composición según la reivindicación 1, en la que el excipiente se selecciona del grupo constituido por hidratos de carbono, aminoácidos, oligopéptidos, péptidos y proteínas.

4. Composición según la reivindicación 3, en la que dicho hidrato de carbono es un azúcar o un alcohol de azúcar.

5. Composiciones según la reivindicación 3, en las que dicho aminoácido es un aminoácido hidrófobo.

6. Composición según la reivindicación 1, en la que dicho excipiente se selecciona del grupo constituido por sales de citrato, leucina, rafinosa, sales de zinc, y combinaciones de los mismos.

7. Composición según la reivindicación 1, en la que dicho excipiente es un tampón.

8. Composición según la reivindicación 1, en la que dicho excipiente es un catión metálico divalente.

9. Composición según la reivindicación 1, caracterizada por una dosis emitida de al menos el 30%.

10. Composición según la reivindicación 9, caracterizada por una dosis emitida de al menos el 45%.

11. Composición según la reivindicación 10, caracterizada por una dosis emitida de al menos el 60%.

12. Composición según la reivindicación 1, que comprende partículas que tienen un diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD) inferior a aproximadamente 10 micrómetros.

13. Composición según la reivindicación 1, que comprende partículas que tienen un diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD) inferior a aproximadamente 5 micrómetros.

14. Composición según la reivindicación 1, que comprende partículas que tienen un diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD) inferior a aproximadamente 3,5 micrómetros.

15. Composición según la reivindicación 1, que comprende partículas que tienen un diámetro aerodinámico mediano de masa (MMAD) de entre aproximadamente 0,1 micrómetros y 3 micrómetros.

16. Composición según la reivindicación 1, que tiene un contenido en humedad residual inferior a aproximadamente el 10% en peso.

17. Composición según la reivindicación 16, en la que el contenido en humedad residual es inferior a aproximadamente el 5% en peso.

18. Composición según la reivindicación 1, en la que dicha composición tiene una densidad aparente que oscila desde aproximadamente 0,1-10 g/cm^{3}.

19. Composición según la reivindicación 1, en una forma de dosificación unitaria.

20. Un procedimiento para la puesta en aerosol de una composición de polvo seco de IL-4R, comprendiendo dicho procedimiento:

(a): proporcionar una composición de IL-4R de la reivindicación 1, y

(b): dispersar dicha composición dentro de una corriente de gas para formar un polvo seco en forma de aerosol adecuado para la inhalación.

21. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que dicha dispersión se consigue mediante un inhalador de polvo seco.

22. Un procedimiento para preparar una composición de polvo de IL-4R seco, comprendiendo dicho procedimiento:

(a): preparar una mezcla o una disolución de IL-4R en un disolvente, y

(b): secar por pulverización la mezcla o disolución para obtener el polvo de IL-4R según la reivindicación 1.