ES2278189T3 - Procedimiento para la identificacion de ganglios linfaticos centinela. - Google Patents
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Abstract
Uso de microburbujas para la fabricación de una preparación para ultrasonidos para la identificación de un ganglio linfático centinela en un sujeto, en el que las microburbujas comprenden una cubierta que comprende del 50 al 100% de fosfolípidos cargados negativamente y un gas o precursor gaseoso, teniendo dichas microburbujas un tamaño medio de partícula de 0, 25 - 15 mim de diámetro y una estabilidad a la presión de al menos el 50% a una presión de 120 mm Hg.
Description
Procedimiento para la identificación de ganglios
linfáticos centinela.
La presente invención se refiere a
procedimientos para la identificación de un ganglio linfático
centinela.
El sistema linfático está compuesto por vasos y
conductos que comienzan en los tejidos y están diseñados para
transportar fluido linfático a los ganglios linfáticos locales donde
se filtra el fluido y se procesa y se envía al siguiente ganglio
linfático debajo de la línea hasta que el fluido alcanza el conducto
torácico donde entre en el torrente sanguíneo. El fluido linfático
que entra en los vasos linfáticos transporta con el mismo,
sustancias y materiales del tejido, por ejemplo, antígenos,
partículas y células. Los ganglios linfáticos procesan el fluido
linfático filtrándolo y los macrófagos de su interior retiran el
material particulado y celular transportado por el fluido linfático
mediante fagocitosis.
Cuando existe cáncer en tejidos u órganos, su
matriz libre puede permitir el desalojo de células que consiguen
acceder al sistema linfático, llegando a quedar atrapadas en el
ganglio linfático y crecer. En las fases tempranas del desarrollo
de un cáncer en el ganglio, el cáncer permanece limitado al ganglio.
Sin embargo, con el tiempo, el depósito nodal puede crecer hasta
reemplazar totalmente el ganglio y/o puede propagarse aguas abajo al
siguiente ganglio. Los ganglios linfáticos que drenan el tejido u
órgano de interés (es decir, el tejido canceroso) se llaman
ganglios linfáticos regionales y el primer ganglio que atrapa el
cáncer se llama ganglio linfático centinela.
Los patrones en la propagación de tumores son
complicados, ya que la metástasis no provoca simplemente la
propagación de las células neoplásicas al siguiente ganglio
físicamente más cercano. Estos ganglios probablemente contienen el
ganglio linfático centinela; sin embargo, el ganglio linfático
centinela puede estar en un grupo nodal más distal. Esto puede
suceder debido a que tumores, infecciones, lesiones o tratamiento
previos pueden bloquear los vasos linfáticos que drenan
directamente el tejido u órgano de interés, promoviendo el
desarrollo de vías aberrantes.
En el pasado, en algunas situaciones la práctica
normal ha sido retirar todos los ganglios linfáticos que
potencialmente alberguen células neoplásicas metastatizadas desde un
tumor. Con esta práctica está asociado un elevado índice de
morbilidad. Por tanto, se desarrollaron varios procedimientos para
identificar y biopsiar el ganglio linfático centinela. Si el
ganglio linfático centinela está libre de células neoplásicas,
entonces pueden evitarse biopsias adicionales de ganglios
linfáticos y disecciones (adicionales) de ganglios linfáticos. Se
han identificado los ganglios linfáticos centinela inyectando un
agente marcador en el tejido que tiene el tumor y rastreando el
paso del sistema marcador a través del sistema linfático.
Se han empleado agentes marcadores visibles para
detectar visualmente el ganglio linfático a simple vista (A.E.
Giuliano y col., Ann. Surg. 220, 1994, 391-401).
Dicho procedimiento requiere una disección quirúrgica
significativa. Los ganglios no se pueden distinguir del tejido
adyacente salvo que se tiñan y los colorantes desafortunadamente
tienen una eliminación impredecible y rápida.
El documento
US-A-5.732.704 describe un
procedimiento para detectar ganglios linfáticos centinela usando
compuestos radiofarmacéuticos y la localización de dichos
compuestos con la ayuda de una sonda de detección de radiación.
Aunque dichos compuestos tienen un tránsito más retardado, los
pacientes y el personal médico están expuestos a dosis
potencialmente dañinas de radiación ionizante. Los isótopos
radiactivos también tienen problemas de contaminación
medioambiental y eliminación.
El documento
US-A-5.496.536 describe un
procedimiento de linfografía usando partículas que son de menos de
1 \mum de diámetro y detectando esas partículas con diferentes
modalidades de formación de imágenes. Como se observó en C.
Oussoren y col., Biochim Biophys. Acta 1328, 1997,
261-272, se captan pequeñas partículas en los
capilares linfáticos a un elevado grado; sin embargo, sólo se
retienen pobremente en los ganglios linfáticos. Dichas pequeñas
partículas generalmente son dispersores de ultrasonidos menos
eficaces y por tanto no son muy adecuados para linfografía basada
en ultrasonidos. A causa de su mala retención en los ganglios
linfáticos, no son suficientemente selectivas para detectar
solamente el ganglio linfático centinela, sino que avanzarán hasta
otros ganglios linfáticos.
La observación hecha por Oussoren y col. se
afirmó por las descripciones de los documentos
WO-A-00/45855 y
WO-A-00/38579.
El documento
WO-A-00/38579 describe un
procedimiento para detectar ganglios linfáticos centinela usando un
agente de contraste que es capaz de migrar al ganglio linfático en
una cierta franja de tiempo - preferiblemente en menos de 3 horas -
y detectando dicho agente de contraste con una modalidad de
detección adecuada. Para migrar en esta franja de tiempo, el agente
de contraste debe comprender partículas entre 0,05 y 5 \mum de
diámetro.
El documento
WO-A-00/45855 describe un
procedimiento para identificar el ganglio linfático centinela usando
agentes de contraste particulados que tienen un tamaño medio de
partícula de 1 - 10 \mum y una modalidad de formación de imágenes
para detectar dichos agentes de contraste en el ganglio
linfático.
Como se muestra en el documento
WO-A-00/38579 y
WO-A-00/45855, el tamaño de las
partículas del agente de contraste parece tener un impacto
significativo sobre la funcionalidad de los procedimientos descritos
en dichos documentos. Desafortunadamente, los procedimientos
descritos no funcionan igualmente bien con respecto a los agentes de
contraste y las modalidades de formación de imágenes empleadas.
Aunque tengan aproximadamente el mismo tamaño, los diferentes
agentes de contraste usados para la misma modalidad de formación de
imágenes se comportan significativamente diferentes, por tanto, el
uso de ciertos agentes de contraste en los procedimientos descritos
puede provocar una sensibilidad insuficiente.
Por consiguiente, existe la necesidad de un
procedimiento fiable para identificar el ganglio linfático
centinela. Además, dicho procedimiento debe ser sensible, seguro y
fácil de realizar.
Se ha descubierto sorprendentemente que un
procedimiento para la identificación de un ganglio linfático
centinela en un sujeto que comprende
a) administrar a dicho sujeto una preparación
que comprende microburbujas que comprenden una cubierta que
comprende del 50-100% de fosfolípidos cargados
negativamente y un gas o precursor gaseoso, teniendo dichas
microburbujas un tamaño medio de partículas de aproximadamente 0,25
- 15 \mum de diámetro y una estabilidad a la presión de al menos
el 50% a una presión de 120 mm Hg,
b) permitir que dichas microburbujas se acumulen
en dicho ganglio linfático centinela y
c) detectar dichas microburbujas en dicho
ganglio linfático centinela usando formación de imágenes por
ultrasonidos
cumple los criterios indicados
anteriormente.
Por tanto, la invención proporciona un
procedimiento para el uso de microburbujas para la fabricación de
una preparación de ultrasonidos para la identificación de un
ganglio linfático centinela en un sujeto, donde las microburbujas
comprenden una cubierta que comprende del 50 al 100% de fosfolípidos
cargados negativamente y un gas o precursor gaseoso, teniendo
dichas microburbujas un tamaño medio de partículas de 0,25 - 15
\mum de diámetro y una estabilidad a la presión de la menos el
50% a una presión de 120 mm Hg.
Las microburbujas de acuerdo con la invención
permanecen intactas después de su inyección. No solamente se captan
fácilmente por el sistema linfático y el ganglio linfático centinela
sino que también se retienen en el ganglio linfático centinela y
permanecen estables, permitiendo de este modo una detección de
ultrasonidos sensible y eficaz.
En el contexto de la presente invención,
"sujeto" significa un sujeto vertebrado como un pájaro o un
mamífero y preferiblemente un ser humano.
Las microburbujas y/o las preparaciones de
acuerdo con la invención deben ser biocompatibles o no
fisiológicamente nocivas o dañinas para las funciones biológicas, y
que no provocarán ningún grado de toxicidad inaceptable, incluyendo
respuestas alergénicas y patologías.
Las microburbujas en el contexto de la invención
comprenden una cubierta y un gas o precursor gaseoso.
El término "cubierta" en el contexto de la
presente invención puede usarse de forma intercambiable con el
término "pared" o "membrana" y significa material que
rodea o define una microburbuja. La cubierta puede ser en forma de
una o más capas, preferiblemente en forma de una única monocapa o
una bicapa (unilamelar), y puede usarse la mono o bicapa para
formar una o más mono o bicapas (oligo o multilamelares). En el caso
de más de una mono o bicapa, las mono o bicapas son preferiblemente
concéntricas. La cubierta está compuesta de o comprende
fosfolípidos, por ejemplo, fosfatidilcolinas, preferiblemente
dilauroil fosfatidilcolina, dimiristoil fosfatidilcolina,
diheptadecanoil fosfatidilcolina, dipalmitoil fosfatidilcolina,
diestearoil fosfatidilcolina, diaraquidoil fosfatidilcolina o
dibehenoil fosfatidilcolina, fosfatidilserinas, preferiblemente
dipalmitoil o diestearoil fosfatidilserina, fosfatidilgliceroles,
preferiblemente dipalmitoil o diestearoil fosfatidilglicerol,
fosfatidiletanolaminas, preferiblemente dipalmitoil o diestearoil
fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositoles, preferiblemente
dipalmitoil o diestearoil fosfatidilinositol, ácido fosfatídico,
preferiblemente ácido dipalmitoil o diestearoil fosfatídico,
cardiolipinas o cualquier mezcla de los compuestos enumerados
anteriormente, opcionalmente en una mezcla con colesterol, sulfato
de colesterol, hemisuccinato de colesterilo, N-palmitoil
homocisteína, ácido palmítico, ácido oleico, ácido esteárico o
ácido araquídico. Como alternativa, la cubierta también puede estar
compuesta de o comprender análogos fluorados de los lípidos
mencionados anteriormente. En otra realización preferida, la
cubierta está compuesta de o comprende los lípidos mencionados
anteriormente que están covalentemente unidos a polímeros
hidrófilos tales como polietilenglicol (PEG), preferiblemente PEG
2000 - 8000, por ejemplo, dipalmitoil o diestearoil
fosfatidiletanolamina-polietilenglicol 5000. La
cubierta está compuesta de o comprende en una cantidad del 50 al
100%, más preferiblemente en una cantidad del 70 al 90% de
fosfolípidos cargados negativamente, más preferiblemente
fosfolípidos cargados negativamente basados en ácidos grasos que
tienen al menos 14 átomos de carbono, por ejemplo, ácido mirístico,
ácido esteárico, ácido oleico o ácido araquídico, por ejemplo,
dipalmitoil fosfatidilglicerol o dipalmitoil
fosfatidiletanolamina-PEG.
El término "precursor gaseoso" en el
contexto de la presente invención indica un material que es un
líquido o un sólido a temperatura y presión ambiente y cambia su
fase de líquido a gas a la temperatura relevante, por ejemplo, la
temperatura corporal del paciente. Cuando se hacer referencia a
"gas" y "precursor gaseoso", se entenderá que las mezclas
de gases y precursores gaseosos están es la definición.
Adecuadamente, las microburbujas de acuerdo con
la invención comprende aire, nitrógeno y compuestos fluorados,
parcialmente fluorados o completamente fluorados (compuestos
perfluorados), así como compuestos puros y mezclas de los mismos.
En una realización preferida, las microburbujas comprenden
compuestos perfluorados, por ejemplo, perfluoropropano,
perfluorobutano, perfluoropentano, perfluorohexano, hexafluoruro de
azufre y similares, opcionalmente en mezcla con nitrógeno.
Las microburbujas de acuerdo con la invención
tienen un tamaño medio de partícula de 0,25 - 15 \mum de diámetro,
preferiblemente 0,5 - 7 \mum, en particular preferiblemente 1 - 5
\mum.
Las microburbujas de acuerdo con la invención
tienen una estabilidad a la presión de al menos el 50% a una presión
de 120 mm Hg. En el contexto de la invención, la expresión
"estabilidad a la presión de la menos en 50%" significa que la
eficacia de atenuación acústica de las microburbujas después de
exponerse a una presión de 120 mm Hg es al menos el 50% de la
eficacia de atenuación acústica de dichas microburbujas antes de
exponerse a dicha presión. Por tanto, comparando la eficacia de
atenuación acústica de las microburbujas antes y después de la
exposición a la presión, puede obtenerse una medición de la eficacia
de formación de imágenes por ultrasonidos de la microburbuja. La
eficacia de atenuación acústica puede determinarse midiendo la
amortiguación (dB/cm) de una onda de sonido que va a través de una
suspensión diluida de la muestra de microburbujas usando uno o dos
transductores de banda ancha con frecuencias centrales de 3,5 y/o
5,0 MHz. La transmisión se mide por técnica de
pulso-eco; se emiten cortos pulsos de sonido desde
el transductor y atraviesan a través de un compartimiento de células
antes de reflejarse desde la pared posterior del compartimiento y se
reciben de nuevo por el transductor emisor. Los pulsos se
digitalizan por un osciloscopio y se calculan los espectros de
frecuencia por la transformada de Fourier. Para compensar el paso
de transmisión y las características del transductor, los espectros
se normalizan a los espectros del diluyente puro. Se describe una
descripción detallada de la medición de los espectros de atenuación
y una preparación de sistema adecuada para ello en L. Hoff, Acoustic
Characterization of Contrast Agents for Medical Ultrasound Imaging,
Kluver Academic Publishers, 2001, capítulo 4, página
99-109, cuya descripción se incorpora en este
documento como referencia. El análisis es realiza normalmente en el
intervalo de 0ºC a 50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente. En
una primera etapa del análisis, se toma un espectro de referencia
del diluyente. Los diluyentes adecuados están libres de burbujas de
aire y podría usarse cualquier líquido en el que sean estables las
microburbujas, preferiblemente los diluyentes son solución salina
isotónica tipo Isoton II (Coulter Electronics Ltd. Luton, UK), una
solución salina al 0,9% que comprende un tampón fosfato y un
detergente para reducir la tensión superficial. En una siguiente
etapa, la muestra de microburbuja se mezcla con un diluyente y se
mide uno o más espectros de atenuación a presión ambiental. La
concentración de muestra de microburbujas se adapta al tamaño de las
microburbujas. Preferiblemente, el factor de dilución es tal que la
atenuación de la muestra de microburbujas está entre 15 y 20 dB, es
decir, aproximadamente 3 dB/cm. Esto típicamente significa que las
microburbujas están diluidas en un factor de 10^{3} a 10^{4}. En
una siguiente etapa, la presión se eleva a 120 mm Hg y se mide uno o
más espectros de atenuación. Para determinar la estabilidad a la
presión de acuerdo con la invención, se ajusta la eficacia de
atenuación acústica de la muestra de microburbujas antes de la
presión al 100% permitiendo de este modo el cálculo de la eficacia
de atenuación acústica relativa de la muestra de microburbujas
después de la presión.
En una realización preferida, las microburbujas
de acuerdo con la invención tienen una estabilidad a la presión de
al menos el 70%, más preferiblemente de al menos el 85%, mucho más
preferiblemente de al menos el 95%.
En una realización preferida, las microburbujas
de acuerdo con la invención son estables a variaciones de presión
asociadas con la formación de imágenes por ultrasonidos de un índice
mecánico de al menos 0,2. Se describe un procedimiento para
determinar la estabilidad de las microburbujas asociada con las
presiones de formación de imágenes por ultrasonidos en W.T. Shi y
col., Ultrasound in Med. & Biol., Vol. 26, 2000,
1-11.
Adecuadamente, las microburbujas de acuerdo con
la invención son ecogénicas, es decir, son capaces de dispersar o
reflejar ondas de ultrasonidos. Preferiblemente, las microburbujas
están adaptadas para devolver una señal a una frecuencia diferente
de la frecuencia de transmisión del pulso de ultrasonidos. Es decir,
las microburbujas están adaptadas para la formación de imágenes por
ultrasonidos armónicos como se describe en el documento US
5.540.909.
Las microburbujas de acuerdo con la invención
pueden prepararse en un diversidad de modos que son fácilmente
evidentes para los especialistas en la técnica, incluyendo, por
ejemplo, agitación, agitación con vórtice, sonicación, extrusión,
ciclos de congelación y descongelación repetidos, extrusión a
presión a través de poros de tamaño definido o secado por
pulverización. Por ejemplo, para microburbujas que comprenden
lípidos, el medio que contiene lípidos puede someterse a cualquier
técnica apropiada que genere emulsión, por ejemplo, sonicación,
homogeneización a alta presión, mezcla con alta cizalla, en
presencia del gas o precursor gaseoso seleccionado. El gas empleado
en la etapa de emulsionado no tiene que ser igual que en la
microburbuja final. Por tanto, la mayoría de este gas puede
retirarse durante una posterior etapa de liofilización y el gas
residual puede retirarse por evacuación del producto secado, al que
puede aplicarse después una atmósfera o sobrepresión del producto
final gaseoso deseado (véase por ejemplo el documento
WO-A-97/29783).
Otros procedimientos para formar microburbujas
de acuerdo con la invención incluyen la formación de microburbujas
que comprenden proteínas (documentos
EP-A-359 246 y US 4.718.433), la
formación de microburbujas que contienen lípidos (documento US
4.684.479) y la formación de microburbujas liposomales (documentos
US 5.088.499; US 5.123.414 y
WO-A-94/28874).
De acuerdo con el procedimiento de la invención,
las microburbujas se administran en forma de una preparación,
preferiblemente en forma de una preparación líquido. A continuación,
se usa el término "preparación" de forma intercambiable con la
expresión "preparación de microburbujas".
Las preparaciones de acuerdo con la invención
comprenden las microburbujas descritas anteriormente y uno o más
componentes seleccionados entre el grupo constituido por agentes
osmóticos, estabilizantes, tensioactivos, tampones, moduladores de
la viscosidad, emulsionantes, agentes solubilizantes, agentes de
suspensión, agentes humectantes, antioxidantes, agentes que
aumentan la viscosidad, agentes que elevan la isotonicidad, sales,
azúcares y similares. Dichos componentes se añaden para asegurar una
vida y eficacia máximas de las microburbujas. Además, las
consideraciones de esterilidad, isotonicidad y biocompatibilidad
pueden gobernar el uso de dichos componentes.
Los moduladores de la viscosidad adecuados
incluyen, por ejemplo, carbohidratos y sus derivados fosforilados y
sulfonatados; poliéteres, preferiblemente con intervalos de pesos
moleculares entre 400 y 100.000 y di y trihidroxi alcanos y sus
polímeros, preferiblemente con los intervalos de peso molecular
entre 200 y 50.000.
Los agentes emulsionantes y/o solubilizantes
adecuados incluyen, por ejemplo, goma arábiga, colesterol,
monoestearato de glicerilo, alcoholes de lanolina, lecitina, mono y
diglicéridos, etanolamina, ácido dietanolamina oleico, alcohol
oleílico, poloxámero, por ejemplo, poloxámero 188, poloxámero 184, y
poloxámero 181, estearato de polioxietileno 50, aceite de ricino
polioxilo 35, polioxil 10 oleil éter, polioxil 20 cetoestearil éter,
estearato de polioxilo 40, polisorbato 50, polisorbato 40,
polisorbato 60, polisorbato 80, diacetato de propilenglicol,
monoestearato de propilenglicol, lauril sulfato sódico, estearato
sódico, mono-laurato de sorbitán,
mono-oleato de sorbitán, monopalmitato de sorbitán,
monoestearato de sorbitán, ácido esteárico, trolamina, cera
emulsionante.
Los agentes de suspensión y/o que aumentan la
viscosidad adecuados incluyen, por ejemplo, goma arábiga, agar,
ácido algínico, mono-estearato de aluminio,
bentonita, magma, carbómero 934 P, celulosa, metilcelulosa,
carboximetilcelulosa, hidroxietil celulosa, hidroxipropil
metilcelulosa, carragenina, dextrano, gelatina, goma guar, coma de
algarrobilla, veegum, silicato de magnesio y aluminio, dióxido de
silicio, zeolitas, pectina, óxido de polietileno, povidona,
alginato de propilenglicol, alginato sódico, tragacanto, goma
xantana, alfa-d-gluconato, glicerol
y
manitol.
manitol.
Los agentes de suspensión adecuados son, por
ejemplo, polietilenglicol (PEG), polivinilpirrolidona (PVP),
poli(alcohol vinílico) (PVA), polipropilenglicol (PPG),
polisorbato y similares.
Los agentes que aumentan la isotonicidad
adecuados que estabilizan y añaden tonicidad son, por ejemplo,
sorbitol, manitol, trehalosa, sacarosa, propilenglicol y
glicerol.
Las preparaciones de acuerdo con la invención
pueden comprender adicionalmente colorante o agentes biológicamente
activos, preferiblemente seleccionados entre el grupos constituido
por analgésicos, antibióticos, inhibidores o antagonistas de
leucotrienos, antihistaminas, anti-inflamatorios,
antineoplásicos, anticolinérgicos, anestésicos, enzimas,
esteroides, material genético, vectores virales, agentes
anti-sentido, proteínas y péptidos.
En una realización preferida, las preparaciones
comprenden adicionalmente compuestos que promueven la captación de
los macrófagos, por ejemplo, mananos, por ejemplo zimosan, oligo y
polisacáridos que contienen manosa, partes Fc (fragmento
cristalizable) de moléculas de inmunoglobulina, componentes del
complemento, por ejemplo C3b o C3bi, ligandos de receptores
scavenger, ligandos de receptores tipo toll, ligandos de LRP
(proteínas de tipo receptor de LDL), glicopéptidos o
lipopolisacáridos bacterianos por ejemplo bleomicina o
endotoxina.
Las preparaciones son preferiblemente
formulaciones inyectables estériles como suspensiones o emulsiones
que comprenden vehículos adecuados incluyendo soluciones acuosas o
no acuosas no tóxicas parenteralmente aceptables y los componentes
y/o compuestos descritos anteriormente. Los vehículos preferidos son
agua o solución salina.
Las preparaciones pueden formularse de acuerdo
con procedimientos conocidos. En una realización preferida, las
preparaciones se fabrican inmediatamente antes de su uso. Por tanto,
puede mezclarse un producto de microburbujas seco con un vehículo
adecuado y uno o más de los compuestos y componentes mencionados
anteriormente. En otra realización preferida, las preparaciones se
fabrican inmediatamente antes de su uso y las microburbujas se
generan in situ durante la fabricación de la preparación, por
ejemplo, añadiendo un vehículo adecuado a un vial que contiene el
gas deseado y los componentes que comprenden la cubierta de las
microburbujas y agitando esta mezcla. Las preparaciones de acuerdo
con la invención preferiblemente se esterilizan antes de la
administración y/o se fabrican a partir de materiales de partida
estériles. La esterilización de las preparaciones puede conseguirse
por filtración a través de un filtro que retiene las bacterias,
incorporando agentes esterilizantes, por irrigación.
La administración de acuerdo con la etapa a) del
procedimiento de la invención puede realizarse de diversos modos
que no son intravasculares. Se prefieren procedimientos de
administración parenteral e incluyen las siguientes vías.
Intramuscular, percutánea, directamente en un vaso linfático,
intersticial, intraperitoneal, intratecal, subcutánea,
intrasinovial, transepitelial (incluyendo transdérmica), dérmica,
intradérmica, subdérmica, en un tumor o proceso patológico en sí
mismo, y similares. Preferiblemente, la preparación se administra
por vía intersticial, preferiblemente por inyección intersticial
incluyendo inyección subcutánea e intradérmica. En el caso de
pacientes con cáncer, la preparación preferiblemente se inyecta en
la proximidad al cáncer (peritumoral). La preparación también puede
inyectarse por una combinación de dos o más modos parentales, por
ejemplo intramuscular, subcutáneo, y en el proceso patológico,
asegurando su aumento en el ganglio linfático centinela.
La preparación normalmente se administrará en un
sitio y por un medio que se mueva y capte en la circulación
linfática. Esto variará con el sistema del que se quieren formar
imágenes. Pueden ser preferibles múltiples sitios de inyección para
permitir un drenaje apropiado a los ganglios linfáticos regionales
en investigación. En algunos casos, se desea la inyección alrededor
de la circunferencia de un tumor o sitio de biopsia. En otros
casos, se prefiere la inyección en una vaina o fosa. La inyección a
las redes de los dedos de las manos o de los pies es un modo común
usado para estudiar los vasos linfáticos periféricos. La preparación
puede administrarse al sujeto de forma
pre-operatoria y/o intra-operatoria
para localizar el ganglio linfático centinela. El procedimiento de
acuerdo con la invención permite la identificación inmediata y a
tiempo real del ganglio linfático centinela después de la
administración de la preparación en una región de interés ya que la
administración no requiere un tiempo significativo para alcanzar el
ganglio linfático centinela. Además, puede emplearse metodología
adicional para modificar o alterar el transporte de la preparación
al ganglio linfático centinela, incluyendo el masajeado del sitio
de inyección o estimulación del flujo. Preferiblemente, se masajeará
el sitio de inyección de la preparación.
El procedimiento de la invención tiene
aplicabilidad para localizar el ganglio centinela asociado con tumor
de mama. Pueden obtenerse imágenes de ganglios axilares,
infraclaviculares y supraclaviculares inyectando la preparación en
y alrededor del tumor y por debajo de la piel adyacente al tumor.
Puede hacerse una inyección unilateral en el sitio subcostal
ipsilateral al tumor, seguido por la formación de imágenes del
ganglio linfático bilateral. Inyectando la preparación en la
cercanía del tumor, el médico ahora sabrá que el conducto linfático
implicado y que conduce al ganglio centinela se dirigirá hacia la
cadena axilar, mamaria interna, o supraclavicular donde se realiza
la detección de ultrasonidos en momentos apropiados después de cada
inyección.
Otro enfoque es inyectar la preparación
alrededor del tejido de la aureola de las mamas de forma bilateral,
y después detectar las cadenas axilares, mamarias internas, o
supraclaviculares. Además de la inyección periareolar puede usarse
la administración interdigital de la preparación para la
visualización de los vasos linfáticos axilares (véase, DeLand y
col., (1980), Cancer Res. 40:2997-3001). La
administración interdigital y periareolar combinada de la
preparación puede proporcionar una exactitud mejorada para demostrar
la captación aumentada en los ganglios axilares afectados. La
inyección intratumoral del agente de contraste puede realizarse
también en pacientes con cáncer de mama o melanoma.
Las preparaciones se administrarán en una
cantidad eficaz, es decir, en una cantidad que permitan una
detección suficiente. Se prevé que se administran de 0,1 a 30 ml de
las preparaciones en forma líquida, preferiblemente de 0,1 a 3 ml,
en particular preferiblemente de 0,5 a 1,5 ml. El volumen
particularmente preferido para administración corresponde a un
volumen de gas de microburbuja administrado de 5 a 15 \mul. En una
realización preferida, se realizan múltiples inyecciones
(típicamente 4), cada una con una cantidad de la preparación, por
ejemplo se administran de 0,1 a 3 ml a un sujeto por sitio de
inyección. Las variaciones pueden deberse a la cantidad de
inyecciones y el sitio de inyección. También se contemplan otras
cantidades de las preparaciones, tales como de 0,005 ml/kg a
aproximadamente 1,0 ml/kg, de acuerdo con el procedimiento de la
invención. Los volúmenes de las preparaciones en forma líquida
normalmente variarán dependiendo de, por ejemplo, el sitio de
administración, la concentración de la preparación, la cantidad de
inyecciones, la composición de la preparación y/o el tipo de
microburbujas presentes en la misma y las propiedades peculiares
para cada sujeto individual.
En la etapa b) de acuerdo con el procedimiento
de la invención, se permite que las burbujas se acumulen en el
ganglio linfático centinela.
Después de la administración, las microburbujas
no requieren un tiempo significativo para alcanzar el ganglio
linfático centinela y acumulares en el mismo. Por tanto, es posible
la identificación inmediata y a tiempo real del ganglio linfático
centinela después de la administración de la preparación de acuerdo
con la invención. Generalmente, las microburbujas de acuerdo con la
invención son capaces de acumulares en el ganglio linfático
centinela en menos de 60 minutos. En una realización preferida, las
microburbujas de acuerdo con la invención se acumulan en el ganglio
linfático centinela en menos de 15 minutos y en particular
preferiblemente en menos de 5 minutos.
Después de la administración, las microburbujas
de acuerdo con la invención tienen una semivida de al menos 5
minutos, preferiblemente de al menos 15 minutos y en particular
preferiblemente de al menos 60 minutos.
Como el tiempo de acumulación de las
microburbujas en los ganglios linfáticos centinela es relativamente
corto, las microburbujas de acuerdo con la invención permiten una
formación de imágenes poco después de la administración, mejorando
la logística y prolongando el tiempo de detección.
En la etapa c) de acuerdo con el procedimiento
de la invención, las microburbujas se detectan en el ganglio
linfático centinela usando formación de imágenes por ultrasonidos e
identificando de este modo el ganglio linfático centinela.
Con respecto a los ultrasonidos, las técnicas de
formación de imágenes por ultrasonidos contempladas para su uso en
la presente invención son bien conocidas en la técnica, y se
describen, por ejemplo, en McGahan y Goldberg, Diagnostic
Ultrasound: A Logical Approach (Lippincott-Raven
Publishers 1998), y en Frederick y Kremkau, Diagnostic Ultrasound:
Principles and Instruments (W B Saunders Co. 1998). Los modos
específicos de formación de imágenes por ultrasonidos útiles con la
invención descrita incluyen formación de imágenes por armónicos o
no lineal, formación de imágenes en escala de grises (Modo B),
Doppler (incluyendo onda pulsada, de potencia, flujo, color,
amplitud, espectral y armónico), tridimensional, abierta, y
similares. Con respecto a la formación de imágenes no lineal, se
apreciará que la presente invención es compatible con la formación
de imágenes por armónicos de banda ancha y la formación de imágenes
por armónicos por inversión de pulso.
Si se desea usar formación de imágenes por
armónicos y la máquina de formación de imágenes por ultrasonidos se
ajusta para formar imágenes a una frecuencia particular, el tipo de
onda saliente suministrada al transductor sónico puede ser una
fracción numérica de la frecuencia de formación de imágenes (por
ejemplo, 1/2, 2/3, 1/3, y similares) o un número completo o
fraccionario múltiplo de la frecuencia de formación de imágenes (por
ejemplo, 2 {fracción (3/2)}, 3, 4, y similares). Con cualquier
combinación particular de la preparación de microburbujas y
frecuencia de excitación, serán dominantes ciertos armónicos. El
segundo armónico es un ejemplo común. Se prefieren los armónicos
más fuertes por razones obvias, aunque pueden seleccionarse otros
armónicos o frecuencias por razones tales como preparación de
múltiples imágenes o eliminación del fondo. Además, pueden
detectarse simultáneamente varias frecuencias, incluyendo
frecuencias armónicas y no armónicas o algunas combinaciones de las
mismas, para proporcionar la imagen deseada. Es decir, en
realizaciones preferidas, puede usarse cualquier frecuencia
diferente a la frecuencia cuestión para proporcionar los datos
deseados. Por supuesto, los especialistas en la técnica apreciarán
que pueden determinarse armónicos dominantes por simple ensayo
empírico de la preparación del agente de contraste.
Para detectar la energía de ultrasonidos
re-radiada generada por las preparaciones de
microburbujas, puede usarse un sistema de exploración por
ultrasonidos convencional modificado o sistemas de formación de
imágenes no lineal disponibles en el mercado. Estos sistemas son
capaces de detectar o seleccionar una o más o todas las nuevas
frecuencias, o armónicos, radiados por la preparación de
microburbujas para la producción de la imagen de ultrasonidos, en
otras palabras, detecta una frecuencia diferente de la frecuencia
emitida. El equipo adecuado para la formación de imágenes por
ultrasonidos armónicos se describe en el documento
WO-A-91/15999. Sin embargo, muchos
dispositivos de formación de imágenes por ultrasonidos
convencionales utilizan transductores capaces de funcionar en una
anchura de banda aplica, y el tipo de onda de salida enviada al
transductor es controlado por un software. Por esta razón, la
reprogramación para emitir un tipo de onda diferente del
seleccionado pertenece al nivel del especialista en al técnica.
Aunque se prefiere particularmente la formación
de imágenes por ultrasonidos no lineal tal como la formación de
imágenes por ultrasonidos armónicos, formación de imágenes por
ultrasonidos armónicos secundarios o preferiblemente inversión de
pulso para su uso en los procedimientos descritos, también son
compatibles otros tipos de formación de imágenes convencionales por
ultrasonidos tales como modo B (formación de imágenes en escala de
grises), modo F (formación de flujo de color o Doppler) y modo D
(Doppler espectral) y están en el ámbito de la presente
invención.
En la formación de imágenes de modo B, el
sistema de ultrasonidos típicamente transmite una serie de ondas, a
lo largo de las líneas de exploración, conducidas para explorar un
campo de visión deseado. El sistema de ultrasonidos típicamente
conduce "ondas de recepción" de un modo que corresponde con las
ondas de transmisión. Los datos que regresan de cada onda de
recepción se comunica a un subsistema de presentación de imágenes
que reconstruye una imagen bidimensional en escala de grises a
partir de los datos en modo B y los presenta en una consola. Dicha
serie de pulsos que desciende una única línea puede ser idéntica o
puede ser de frecuencia igual o desigual o tener un desplazamiento
de fase de casi 180 grados (pulso invertido) para promover la
distinción del agente de contraste de los tejidos adyacentes.
La formación de imágenes en modo F se consigue
de una forma similar a la formación de imágenes en modo B, porque
el sistema de ultrasonidos lanza y recibe una serie de ondas para
explorar un campo de visión. Sin embargo, como la formación de
imágenes en modo F requiere el cálculo de la velocidad de las
dianas, cada línea se lanza y recibe varias veces. Como con la
formación de imágenes en modo B, los datos que regresan de cada
lanzamiento de cada línea se usan para reconstruir una imagen en una
consola.
La formación de imágenes en modo F a menudo se
usa simultáneamente con la formación de imágenes en modo B. Por
ejemplo, la imagen en escala de grises reconstruida a partir de la
exploración en modo B puede superponerse con una imagen en modo F
reconstruida a partir de la exploración en modo F del mismo campo de
visión o de uno menos incluido en el campo de visión. La
información del modo F puede presentarse usando colores, indicando
diferentes colores diferentes velocidades o turbulencia de flujo
positivas o negativas en la parte de la imagen de modo B en la que
se superpone el punto de imagen. Como la formación de imágenes en
modo F está pretendida para proporcionar solamente una nueva
percepción cualitativa en el movimiento de la diana en el cuerpo de
un paciente, el procesamiento del sistema de ultrasonidos de las
señales de modo F no necesitan tener una alta resolución espacial o
de velocidad en la amplitud o en la resolución de los puntos de
imagen. Sin embargo, como un valor importante de la formación de
imágenes en modo F es detectar los flujos relativos a estructuras
anatómicas en el cuerpo, es habitualmente importante que la imagen
en modo F se registre apropiadamente con la imagen en modo B en
pantalla. Como esta técnica depende de la correlación de la señal
obtenida de un pulso frente al pulso posterior, y como las
microburbujas puede destruirse por el primer pulso, se genera una
señal F que no está relacionada con el movimiento. Esta pérdida de
correlación puede mostrarse en una diversidad de formatos de
presentación pero típicamente se presenta en
color.
color.
En la adquisición de modo D (Doppler espectral),
el sistema de ultrasonidos lanza una onda y procesa la señal de
regreso para una diana única. La información del Doppler espectral
puede obtenerse transmitiendo y recibiendo energía ultrasónica de
onda continua (CW) u onda pulsada (PW). En la adquisición de Doppler
CW, por ejemplo, Doppler de Potencia (angiografía Doppler), el
receptor de ultrasonidos recibe continuamente ecos de todos los
objetos en el área de sensibilidad del receptor en el cuerpo, y no
puede aislar la información recibida de ningún intervalo de rango
específico. El Doppler CW es muy útil cuando el área de sensibilidad
del instrumento puede ajustarse, por reemplazo físico de la sonda o
formación de ondas, o ambos, para incluir solamente la diana
deseada. En la adquisición de Doppler PW, el instrumento de
ultrasonidos recibe ecos de pulsos individuales, cuyo ritmo implica
un intervalo de rango en el cuerpo del objeto que produce el eco. Un
médico típicamente selecciona un intervalo de rango en el se espera
que se localice la diana.
En la adquisición de modo D, es deseable tener
la capacidad de producir mediciones cuantitativas detalladas sobre
un intervalo muy grande de niveles de señal (rango dinámico). La
información de modo D se procesa por el sistema de ultrasonidos
para presentar el espectro de velocidad de la diana, representarlo
frente al tiempo, o proporcionar una salida de audio que lleva
información similar. La adquisición de Doppler espectral se describe
en L. Hatle, y B. Angelsen, "Doppler Ultrasound in Cardiology"
1a ed. 1982) y (2a ed. 1984).
Además de la adquisición de modo B, F y D,
también existe un cuarto modo, conocido como modo M, pero éste es
simplemente una modalidad de presentación diferente de datos
adquiridos de un modo similar a la adquisición en modo B o F. Los
requisitos para la adquisición en modo M no son significativamente
diferentes de los de la adquisición en modo B o F. Como
alternativa, o además, también se contemplan los ultrasonidos
tridimensionales, donde las exploraciones 3-D
requieren sondas y un software especiales para acumular y
representar las imágenes. Se apreciará que la energía de
ultrasonidos emitida - si es suficientemente alta - puede alterar
las microburbujas presentes en los vasos linfáticos. Los
procedimientos de formación de imágenes basados en Doppler como se
ha descrito anteriormente pueden detectar esto como una señal
"pseudo Doppler" que permite la detección sensible y
específica de las microburbujas que están inmovilizadas o se mueven
muy lentamente (véase por ejemplo, el documento US 5.425.366).
En la técnica se conocen técnicas adicionales
contempladas para su uso en la presente invención, y se describen,
por ejemplo, en Gamsu y col., Diagnostic Imaging Review (W. B.
Saunders Co 1998).
Puede aplicarse energía ultrasónica a al menos
una parte del sujeto para formar imágenes del tejido diana. Después
puede obtenerse una imagen visible de una región interna del sujeto,
de modo que puede determinarse la identificación del ganglio
linfático centinela.
Otro aspecto de la invención es un procedimiento
para la identificación de un ganglio linfático centinela en un
sujeto al que se ha preadministrado microburbujas que comprenden una
cubierta y un gas o precursor gaseoso, teniendo dichas
microburbujas un tamaño medio de partícula de aproximadamente 0,25 -
15 \mum de diámetro y una estabilidad a la presión de al menos el
50% a una presión de 120 mm Hg que comprende detectar dichas
microburbujas acumuladas en dicho ganglio linfático centinela de
dicho sujeto usando ultrasonidos.
El procedimiento de acuerdo con la invención no
es útil solamente para identificar el ganglio linfático centinela,
sino también para determinar si dicho ganglio linfático centinela
muestra defectos o irregularidades en la estructura linfática. Por
tanto, la presente invención también proporciona la discriminación
entre ganglios linfáticos centinelas benignos y malignos en un
sujeto que comprende
a) administrar a dicho sujeto una preparación
que comprende microburbujas que comprenden una cubierta que
comprende el 50-100% de fosfolípidos cargados
negativamente y un gas o precursor gaseoso, teniendo dichas
microburbujas un tamaño medio de partícula de aproximadamente 0,25 -
15 \mum de diámetro y una estabilidad a la presión de al menos el
50% a una presión de 120 mm Hg,
b) permitir que dichas microburbujas se acumulen
en dicho ganglio linfático centinela,
c) detectar dichas microburbujas en dicho
ganglio linfático centinela usando ultrasonidos y
d) caracterizar dicho ganglio linfático
centinela como benigno o maligno de acuerdo con el patrón de
potenciación de contraste en el ganglio linfático.
Mattrey y col. observaron que durante la
formación de imágenes por ultrasonidos del ganglio linfático
centinela, el cáncer en el ganglio linfático no se llenaba con
material de agente de contraste dejando de este modo un defecto de
llenado. Sin embargo, se ha indicado que se necesita trabajo
adicional para la confirmación (R. Mattrey y col., Academic
Radiology 9, 2002, S231-S235). Ahora se ha
descubierto que es posible clasificar los ganglios linfáticos
centinela después de que se hayan identificado de acuerdo con el
procedimiento de la invención a causa de sus diferentes patrones de
potenciación de contraste: los ganglios linfáticos centinela
benignos aparecen uniformemente ecogénicos mientras que los ganglios
linfáticos centinela malignos muestran un patrón de potenciación
heterogénico con áreas de ecogenicidad aumentada y áreas que no
potencian. Este descubrimiento representa un avance clínico
principal ya que el procedimiento de acuerdo con la invención no
sólo permite la detección no invasiva y segura de ganglios
linfáticos centinela, sino también de su infiltración
metastásica.
El procedimiento mencionado anteriormente
proporciona buenos resultados por evaluación visual de imágenes de
ultrasonidos adquiridas. La discriminación entre ganglios linfáticos
benignos y malignos puede mejorarse adicionalmente por la
aplicación de procedimientos de procesamiento de imágenes para
potenciar la diferencia en el patrón de potenciación de contraste
entre ganglios normales e infiltrados.
La invención se describirá ahora con mayor
detalle por referencia a los siguientes ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se ensayaron diversas microburbujas que
contienen agentes de contraste de ultrasonidos para la estabilidad
a la presión:
Albunex^{TM}, microburbujas que contienen aire
en una cubierta de albúmina desnaturalizada de suero humano, que
pueden prepararse como se describe en el documento
EP-A-359 246.
Sonovue^{TM}, microburbujas que contienen
SF_{6} encapsulado en una membrana fosfolipídica.
Sonazoid^{TM}, microburbujas que contienen
perfluorobutano encapsulado en una membrana de tensioactivo.
\vskip1.000000\baselineskip
La concentración de microburbujas y la
distribución de tamaño de todas las muestras se determinaron por
recuento Coulter con un Coulter Multisizer Mark II (Coulter
Electronics Ltd., Luto, Inglaterra) equipado con una apertura de 50
\mum con un intervalo de medida nominal de 1 a 30 \mum. El
análisis se realizó con 64 canales de tamaño espaciado
logarítmicamente. Se diluyó una muestra de 20 \mul en 200 ml de
Isoton II (Coulter Electronics) a temperatura ambiente y se agitó
durante 4 minutos antes del análisis. Como respuesta analítica, se
usaron la concentración del volumen de burbujas con un porcentaje
del volumen de la suspensión y el diámetro medio del volumen de
las
microburbujas.
microburbujas.
\vskip1.000000\baselineskip
| Concentración del volumen de | Diámetro medio del volumen | |
| microburbujas como un porcentaje | de las microburbujas | |
| del volumen de la suspensión [%] | [mm] | |
| Albunex^{TM} | 0,7 | 10 |
| Sonovue^{TM} | 0,6 | 7 |
| Sonazoid^{TM} | 1,0 | 3 |
\vskip1.000000\baselineskip
El espectro de atenuación acústica de todas las
muestras se midió como se describe por L. Hoff, Acoustic
Characterization of Contrast Agents for Medical Ultrasound Imaging,
Kluwer Academic Publishers, 2001, capítulo 4. Se midió la
atenuación acústica de una onda de sonido que va a través de una
suspensión diluida de las muestras usando un transductor de banda
ancha con una frecuencia central de 3,5 MHz. Se repartió
homogéneamente un volumen demuestra adecuado en 55 ml de Isoton II
a temperatura ambiente antes del análisis. Se midió la transmisión
por una técnica de ecos pulsados; se emitieron cortos pulsos de
sonido desde el transductor y atravesaron el compartimiento de la
célula de medición antes de reflejarse desde la pared posterior del
compartimiento y las recibió de nuevo el transductor emisor. Los
pulsos se digitalizan por un osciloscopio y se calculan los
espectros de frecuencia por la transformada de Fourier. Para
compensar el paso de transmisión y las características del
transductor, los espectros se normalizan a los espectros de Isoton
II puro. Los resultados se normalizaron a una dilución 1:1000. Se
midió la atenuación acústica [dB/cm] a presión atmosférica a 3,5 MHz
y la lectura de medición obtenida se ajustó al 100% de eficacia de
atenuación acústica. Después de la aplicación de una presión de 120
mm Hg durante 30 segundos, se midió de nuevo la atenuación y se
calculó la eficacia de atenuación acústica después de presión. La
estabilidad a la presión se presentó como eficacia de atenuación
después de presión en porcentaje de eficacia de atenuación antes
de
presión.
presión.
\newpage
| Estabilidad a la presión a 120 mm Hg [%] | |
| Albunex^{TM} | 0 |
| Sonovue^{TM} | 79 \pm 2 |
| Sonazoid^{TM} | 98 \pm 1 |
Se usaron cerdos Sinclair anestesiados con
tumores de melanoma para investigar la detección y caracterización
de ganglios linfáticos centinela usando Sonazoid^{TM}.
Se administró 1 ml de Sonazoid^{TM} por vía
intradérmica alrededor del tumor primario. Después de 5 minutos de
masaje suave del sitio de inyección, se realizó una exploración por
ultrasonidos con un explorador Siemens Elegera. El ganglio
linfático centinela mostró una fuerte potenciación del contraste
sobre la formación de imágenes en escala de grises por inversión de
pulso y se evaluó posteriormente con formación de imágenes flujo de
color de elevada potencia que dio un patrón de potenciación en
mosaico característico de la ruptura de microburbujas. La
identificación del ganglio centinela se aceleró adicionalmente por
potenciación de contraste del canal linfático desde el sitio de
inyección hasta el ganglio centinela. La localización del ganglio
linfático se marcó sobre la piel. La localización del ganglio
centinela se confirmó con inyecciones peritumorales de marcador
radiocoloidal y colorante azul de acuerdo con la práctica clínica
actual. La potenciación del contraste del ganglio linfático
centinela estuvo presente durante hasta 3 horas.
El procedimiento descrito en el Ejemplo 2a se
aplicó en 6 cerdos Sinclair con melanoma. Se evaluaron 17 tumores
primarios con 31 melanomas usando ultrasonidos, linfocentellografía
y colorante azul (la norma de oro). La exactitud de identificación
correcta de ganglios centinela fue del 90% por ultrasonidos y del
81% por linfocentellografía.
Se administró 1 ml de Sonazoid^{TM} por vía
intradérmica alrededor de cada tumor primario en un cerdo Sinclair
con 3 tumores de melanoma. Después de 5 minutos de masaje suave del
sitio de inyección, se realizó exploración por ultrasonidos con un
explorador Siemens Elegera y se identificaron los ganglios centinela
como se ha descrito en el Ejemplo 2a. Uno de los ganglios
linfáticos mostró un patrón de potenciación de contraste homogéneo,
mientras que los otros dos mostraron un patrón de potenciación
heterogéneo, a manchas. El primer ganglio se caracterizó como
normal, mientras que los otros dos se caracterizaron como malignos
en base a la formación de imágenes por ultrasonidos. El examen
histopatológico microscópico de los ganglios linfáticos confirmó la
ausencia de tumor en el primer ganglio y la presencia de tumor en
los otros dos ganglios. La evaluación patológica produjo un
pseudomapa de color de las muestras de patología que se
correlacionaban bien con los patrones de potenciación de contraste
observados por ultrasonidos con potenciación de contraste del tejido
linfático normal y ausencia de potenciación en tejido tumoral.
El procedimiento descrito en el ejemplo 2b se
aplicó en 6 cerdos Sinclair con melanoma. En total se investigaron
31 ganglios linfáticos. La exactitud de la detección correcta de la
presencia o ausencia de tumores de melanoma metastásicos en los
ganglios linfáticos fue del 86%.
No hubo diferencia estadísticamente
significativa entre los ultrasonidos potenciados por el contraste y
la patología.
Se inyectó de forma interdigital 1 ml de
Albunex^{TM} como se ha descrito en el Ejemplo 1 en la pata
trasera de un perro anestesiado. Se masajeó suavemente el sitio de
inyección durante 5 minutos. Se formaron imágenes del ganglio
linfático de drenaje (hueco poplíteo) con un Explorador ATL HDI 5000
equipado con un transductor L12-5 que funciona en
modo de inversión de pulso. No se observó potenciación de contraste
al formar las imágenes 5 y 15 minutos después de la inyección,
respectivamente.
Se inyectó de forma interdigital 1 ml de
Sonazoid^{TM} como se ha descrito en el Ejemplo 1, 20 minutos
después de la inyección de Albunex^{TM}, en la misma para trasera
siguiendo procedimientos de formación de imágenes idénticos como se
ha descrito en el Ejemplo 3a. Se observó una fuerte potenciación de
contraste en la formación de imágenes 5 minutos después de la
inyección y la potenciación se mantuvo en la formación de imágenes
15 minutos después de la inyección. El pico de potenciación de
contraste fue más de 7 dB.
Claims (6)
1. Uso de microburbujas para la
fabricación de una preparación para ultrasonidos para la
identificación de un ganglio linfático centinela en un sujeto, en
el que las microburbujas comprenden una cubierta que comprende del
50 al 100% de fosfolípidos cargados negativamente y un gas o
precursor gaseoso, teniendo dichas microburbujas un tamaño medio de
partícula de 0,25 - 15 \mum de diámetro y una estabilidad a la
presión de al menos el 50% a una presión de 120 mm Hg.
2. Uso de microburbujas para la
fabricación de la preparación para ultrasonidos de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que la preparación se administra de forma
intersticial, preferiblemente percutánea, a un sujeto.
3. Uso de microburbujas para la
fabricación de la preparación para ultrasonidos de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 en el que las
microburbujas son estables a variaciones de presión con formación
de imágenes por ultrasonidos de un índice mecánico de al menos
0,2.
4. Uso de microburbujas para la
fabricación de la preparación para ultrasonidos de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que la preparación
comprende adicionalmente un compuesto estimulador de
macrófagos.
5. Uso de microburbujas para la
fabricación de la preparación para ultrasonidos de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la
identificación comprende
a) administrar a dicho sujeto la
preparación,
b) permitir que dichas microburbujas se acumulen
en dicho ganglio linfático centinela y
c) detectar dichas microburbujas en dicho
ganglio linfático centinela usando ultrasonidos.
6. Uso de microburbujas para la
fabricación de la preparación para ultrasonidos de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que la
identificación de dicho ganglio linfático centinela comprende el
uso de formación de imágenes por ultrasonidos armónicos, formación
de imágenes por ultrasonidos armónicos secundarios, formación de
imágenes por inversión de pulso, en modo B, en modo F, en modo D o
ultrasonidos tridimensionales.
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