ES2270995T3 - Metodo para aumentar la absorcion intestinal de vitamninas liposolubles en mujeres posmenopausicas y en animales inferiores. - Google Patents

Abstract

Uso de una cantidad efectiva de L-carnitina o una sal suya farmacéutica- mente aceptable que aumenta la absorción de vitaminas liposolubles, en la fabricación de una dieta o medicamento para administración oral, conteniendo dicha dieta o medi- camento una vitamina liposoluble, para el tratamiento o deterioro de la función absorti- va intestinal de las vitaminas liposolubles con el envejecimiento en las mujeres posme- nopáusicas.

Description

Método para aumentar la absorción intestinal de vitaminas liposolubles en mujeres posmenopaúsicas y en animales inferiores.

Campo de la invención

Esta invención se refiere al uso de L-carnitina en la fabricación de un medicamento o dieta para aumentar la absorción intestinal, concentración celular, secreción biliar, almacenamiento hepático, y/o concentración en el hígado de una vitamina liposoluble en una mujer posmenopáusica o un animal inferior.

Fundamento de la invención

La L-carnitina juega un papel crucial en el suministro de energía de tejidos modulando la entrada de ácidos grasos de cadena larga en la matriz mitocondrial y su subsiguiente oxidación. En coherencia con ese papel metabólico, la L-carnitina ha demostrado ser efectiva en la reducción de los niveles en suero de colesterol, triglicéridos, y ácidos grasos libres, mientras que aumenta el colesterol de lipoproteína de alta densidad (HDL) que es antiaterogénico. Véase Pola, P y col. "Carnitina en la terapia de pacientes dislipidémicos", Cur. Ther. Res. 27:208-16 (1980); Lacour, B y col., "La carnitina mejora las anomalías lipídicas en pacientes con hemodiálisis", Lancet 12:763-4 (1980); Avogaro, P., "Efecto agudo de la L-carnitina sobre FFA y bethahidroxibutirato en el hombre", Pharmacol. Res. Commun. 13:433-50 (1981)); y Vacha, G.M. y col. "Efectos favorables del tratamiento con L-carnitina sobre la hipertrigliceridemia en pacientes con hemodiálisis: papel decisivo de niveles bajos de colesterol de lipoproteína de alta densidad", Am. J. Clin. Nutr. 38:532-40 (1983). Las pruebas existentes indican que la L-carnitina y sus ésteres aumentan la estabilidad e integridad de las membranas de eritrocitos al participar en la reacilación (reparación) de fosfolípidos de membrana sometidos a deterioro oxidativo. Véase Arduini, A. y col. "Efecto del tratamiento con propionil-L-carnitina sobre el número de recambio de ácidos grasos de fosfolípidos de membrana, en eritrocitos de rata diabética.", Mol. Cell. Biochem. 152:31-7 (1995); Arduini, A y col. "Carnitina palmitoiltransferasa y proteína de unión a acil-CoA": ¿dos actores más en el número de recambio de ácidos grasos de fosfolípidos de membrana de glóbulos rojos humanos?, Biochem. J. 325:811-4 (1997); y Arduini, A y col. "La adición de L-carnitina a glóbulos rojos suspendidos en solución aditiva almacenados a 4ºC reduce la hemolisis in vitro y mejora la viabilidad in vivo". Trandfusion 37:166-74 (1997). Es interesante observar que esa acción de la L-carnitina y sus ésteres se muestra en los eritrocitos exentos de mitocondria. Se ha visto que la suplementación con L-carnitina a ratas viejas invierte el declive relacionado con la edad en la función mitocondrial, lo que puede estar ligado al efecto estabilizador de la membrana de la L-carnitina. Véase Hagen, T.M. y col., "Acetil L-carnitina suministrada a ratas viejas restaura parcialmente la función mitocondrial y la actividad ambulatoria", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9562-6 (1996). Este descubrimiento es de particular significación en que el deterioro oxidativo a ADN mitocondrial aumenta marcadamente con la edad, conduciendo a metabolismo y función celular deteriorados. Véase Hagen, T.M. y col., "El deterioro mitocondrial en los hepatocitos de ratas viejas: disminución del potencial de membrana, aumento de oxidantes y heterogeneidad". Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:3064-9 (1997).

Las mujeres posmenopáusicas constituyen el 15% de la población total en los países industrializados. Se prevé que en 2030 la proporción de mujeres posmenopáusicas aumente hasta el 23% de la población total. Véase Hill, K., "La demografía de la menopausia", Maturitas 23:113-127 (1996). Además, numerosos estudios epidemiológicos han demostrado que la disminución de estrógeno en la menopausia influye en las causas de morbilidad y mortalidad específicas al final de la vida. Desde el punto de vista nutricional, la menopausia es el momento en que la capacidad del cuerpo para absorber, asimilar y metabolizar nutrientes empieza a deteriorarse. En consecuencia, el status corporal de los nutrientes está comprometido en y después de la menopausia, con las manifestaciones de síntomas de deficiencia de nutrientes específicos con el tiempo.

Esta bien documentado que las mujeres menopáusicas son sustancialmente más susceptibles a enfermedades cardiocoronarias, degeneración macular relacionada con la edad, osteoporosis, cáncer y enfermedad de Alzheimer. Véase Hill, K., "La demografía de la menopausia". Maturitas 23:113-127 (1995). Aunque esto está parcialmente asociado con el proceso del envejecimiento y el deterioro de las funciones del cuerpo y los sistemas inmunes, la evidencia epidemiológica sugiere que existe una asociación significativa entre los riesgos (o incidencia) de ciertas enfermedades crónicas y las inadecuaciones o deficiencias de nutrientes específicos en las mujeres posmenopáusicas. La evidencia actual sugiere fuertemente que el estado corporal comprometido de vitaminas liposolubles, como las vitaminas A, D y E, es un factor clave que influye o contribuye a la aparición o desarrollo de las enfermedades. Por ejemplo, el riesgo de enfermedades cardiocoronarias aumenta enormemente en las mujeres posmenopáusicas y ovariectomizadas, en comparación con las mujeres en los años fértiles. El suplemento de vitamina E reduce significativamente el riesgo de enfermedad vascocoronaria retardando la oxidación de lipoproteínas del suero e inhibiendo la proliferación de células de músculo blando vasculares. Véase Chan, A.C., "Vitamina E y ateroesclerosis", J. Nutr. 128:1593-6 (1998); Motoyana, T. y col., "La administración de Vitamina E mejora el deterioro de la vasodilatación dependiente del endotelio en pacientes con angina espásmica coronaria", J. Am. Col. Cardiol. 32:1672-9 (1998). También se ha establecido que la deficiencia de vitamina D es prevalerte en mujeres posmenopáusicas con riego aumentado de pérdida de hueso y osteoporosis. Véase WHO Scientific Group, "Investigación sobre la menopausia en los años 1990". WHO Technical report, Serie 866, 1996. WHO, Ginebra, Suiza. También hay estudios que demuestran que la incidencia de la degeneración macular relacionada con la edad en las mujeres posmenopáusicas está inversamente correlacionada con la ingesta de provitamina A (carotenoides) y vitamina E. Véase Seddon, J.M. y col., "Carotenoides, vitamina A, C y E en la dieta, y degeneración macular relacionada con la edad avanzada. Grupo de estudio de control de casos de enfermedades".- JAMA 272:1413-20, (1994); West y col., "¿Son los antioxidantes o suplementos protectores frente a la degeneración macular relacionada con la edad?". Arch. Opthalmol. 112:222-7 (1994); Van der Hagen, A.M. y col. "Radicales libres y suplementación de antioxidantes: una revisión de sus papeles en la degeneración macular relacionada con la edad".; J. Am. Optom. Assoc. 64:871-8 (1993); y Goberg, J. y col., "Factores asociados con la degeneración macular relacionada con la edad. Un análisis de datos de la primera encuesta de examen de nutrición y salud nacional" Am. J. Epidemia 128:700-10 (1988). Además, pruebas recientes sugieren que la tensión oxidativa puede desempeñar un papel importante en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer y que el suplemento de vitamina puede disminuir el riesgo de la enfermedad. Véase Sinclair, A.J. y col., "Status antioxidante de plasma alterado en sujetos con enfermedad de Alzheimer y demencia vascular". Int. J. Geriatr. Psichiatry 13:840-5 (1998); Morris, M.C. y col., "Uso de suplemento de vitamina E y C y riesgo de incidencia de enfermedad de Alzheimer", Alzheimer Dis. Assoc. Disord. 12:121-6 (1998); Subramanian, R y col., "La vitamina E antioxidante de radicales libres protege las membranas sinaptosomales corticales de la toxicidad de betap-éptidos amiloides (25-35) pero no de la toxicidad hidroxinonenal: pertinente para la hipótesis de radicales libres de la enfermedad de Alzheimer" Neurochem. Res. 23:1403-10
(1998).

También se ha establecido que el cáncer constituye el 47% de las muertes relacionadas con la enfermedad en perros seguido de las enfermedades del corazón (12%) y las enfermedades de riñón (7%). En los gatos, la más alta categoría de enfermedades lo constituye el cáncer (32%), enfermedades de riñón/urinarias, y enfermedades del corazón (9%). Véase Morris Animal Foundation Animal Health Survey 1997. Se piensa que estas enfermedades en animales están asociadas con niveles inadecuados de ciertas vitaminas, especialmente vitaminas antioxidantes como vitamina E y vitamina C, así como vitamina A.

Por consiguiente, es necesario mejorar el status nutricional de las vitaminas liposolubles en mujeres posmenopáusicas, particularmente considerando la disminución de la eficacia de la absorción de nutrientes y el deterioro de la función absorbtiva intestinal con el envejecimiento en general. También es necesario mejorar el status nutricional de las vitaminas liposolubles en animales inferiores, particularmente, considerando el deterioro de la función absortiva intestinal con el envejecimiento en general.

Sumario de la invención

Los solicitantes han descubierto que la L-carnitina aumenta la absorción (linfática) intestinal de las vitaminas liposolubles, como las vitaminas A, D y E, en mujeres posmenopáusicas. Como consecuencia, la L-carnitina aumenta el mecanismo de defensa antioxidante y disminuye el riesgo de ciertas enfermedades degenerativas, como las enfermedades cardiocoronarias, la degeneración macular relacionada con la edad, la osteoporosis, el cáncer, y el Alzheimer, en mujeres posmenopáusicas.

De acuerdo con esto, la invención se refiere al uso de una cantidad efectiva de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable que aumenta la absorción de vitaminas liposolubles, en la fabricación de una dieta o medicamento para administración oral, conteniendo dicha dieta o medicamento una vitamina liposoluble, para el tratamiento o deterioro de la función absortiva intestinal de las vitaminas liposolubles con el envejecimiento en las mujeres posmenopáusicas.

Esta invención proporciona un medio para realizar un método de reducción del riesgo o para prevención de una o más enfermedades en una mujer posmenopáusica seleccionada, de enfermedades cardiocoronarias, degeneración macular relacionada con la edad, osteoporosis, cáncer y Alzheimer. El método comprende la administración oral a una mujer posmenopáusica necesitada de ello, de una vitamina liposoluble y una cantidad efectiva de L-carnitina que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble.

La invención además se refiere al uso de una cantidad efectiva de L-carnitina que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble, o una sal suya farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de una dieta o medicamento para administración oral, conteniendo dicha dieta o medicamento una vitamina liposoluble, para el tratamiento del deterioro de la función absortiva intestinal de la vitamina liposoluble con el envejecimiento en un animal.

La invención proporciona un medio para realizar un método para aumentar la absorción intestinal de una vitamina liposoluble en un animal. El método comprende la administración oral al animal que lo necesita, de una vitamina liposoluble y una cantidad efectiva de L-carnitina que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble.

La invención también proporciona un medio para realizar un método de reducción del riesgo o prevención de una o más enfermedades en animales seleccionados de enfermedades del corazón, incluyendo enfermedades cardiocoronarias; enfermedades del riñón; enfermedades urinarias y cáncer. El método comprende la administración oral a un animal que lo necesita, de una vitamina liposoluble y una cantidad efectiva de L-carnitina que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una ilustración de la secreción biliar de \alpha-tocoferol (\alphaTP) a intervalos de 1 hora durante 8 horas. El grupo de control está representado como -CN (es decir sin carnitina). El grupo que contiene carnitina está representado como +CN. Todos los valores están expresados como \pmdesviación estándar media (SD). Se ensayaron 5 ratas por momento de tiempo (es decir n=5).

La Figura 2 es una ilustración de la secreción biliar acumulativa de \alpha-tocoferol (\alphaTP) a intervalos de 1 hora durante 8 horas. El grupo de control está representado como -CN (es decir sin carnitina). El grupo que contiene carnitina está representado como +CN. Todos los valores están expresados como \pm SD media. Se ensayaron 5 ratas por momento de tiempo (es decir n=5). Los asteriscos* denotan diferencias significativas en p < 0,05.

La Figura 3 es una ilustración de la absorción linfática de \alpha-tocoferol (\alphaTP) a intervalos de 1 hora durante 8 horas. El grupo de control está representado como SN. El grupo que contiene carnitina está representado como CK. Todos los valores están expresados como \pm SD media. Se ensayaron 5 ratas por momento de tiempo (es decir n=5). Los asteriscos* denotan diferencias significativas en p < 0,05.

La Figura 4 es una ilustración de la absorción linfática acumulativa de \alpha-tocoferol (\alphaTP) a intervalos de 1 hora durante 8 horas. El grupo de control está representado como SN. El grupo que contiene carnitina está representado como CK. Todos los valores están expresados como \pm SD media. Se ensayaron 5 ratas por punto tiempo (es decir n=5). Los asteriscos* denotan diferencias significativas en p < 0,05.

Descripción detallada de la invención

Esta invención proporciona un medio para realizar un método para aumentar la absorción intestinal, concentración celular, secreción biliar, almacenamiento hepático, y la concentración en el hígado de una vitamina liposoluble en una mujer posmenopáusica. El método comprende la administración oral a una mujer posmenopáusica que lo necesita, de una vitamina liposoluble y una cantidad efectiva de L-carnitina que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble.

Análogamente, la absorción intestinal, concentración celular, secreción biliar, almacenamiento hepático, y la concentración en el hígado de una vitamina liposoluble puede aumentarse en un animal inferior, como un gato o un perro, por administración oral a un animal inferior que lo necesita, de una vitamina liposoluble y una cantidad efectiva de L-carnitina que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble.

L-carnitinas convenientes incluyen, pero no se limitan a, L-carnitina, acil L-carnitina, acetil L-carnitina, propionil L-carnitina, butanil L-carnitina, valeril L-carnitina e isovaleril L-carnitina; sus sales farmacéuticamente aceptables; y una combinación de cualquiera de las precedentes. Sales de L-carnitina farmacéuticamente aceptables convenientes incluyen, pero no se limitan a, sales de acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, bromuro, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, cloruro, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glucosa fosfato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yoduro, 2-hidrxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, orotato, oxalato, palmitato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato, tricloroacetato, trifluoroacetato, y undecanoato, y sales de adición ácidas de L-carnitina. Preferiblemente, la L-carnitina tiene baja higroscopicidad. Las sales de L-carnitina preferidas incluyen pero no están limitadas a, L-carnitina L-tartrato, L-carnitina fumarato, L-carnitina adipato y L-carnitina magnesio citrato.

Para las mujeres posmenopáusicas, una cantidad efectiva que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble es una cantidad de L-carnitina que aumenta la absorción intestinal de la vitamina liposoluble en una mujer posmenopáusica. A una mujer posmenopáusica se administra por día típicamente de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 2 g de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable y preferiblemente de aproximadamente 250 a aproximadamente 750 mg de L-carnitina; o una sal suya farmacéuticamente aceptable por día. Más preferiblemente, a una mujer posmenopáusica se administra por día de aproximadamente 400 a aproximadamente 600 mg de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable. Generalmente, a una mujer posmenopáusica se administra por día típicamente de aproximadamente 50 a aproximadamente 800 mg y preferiblemente de 100 a aproximadamente 400 mg de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable por 1000 kcal de dieta. El término "dieta" usado aquí en referencia a la mujer menopáusica se define como la cantidad de alimento (en calorías) consumido por una mujer por día.

Para una animal inferior, una cantidad efectiva que aumenta la absorción de la vitamina liposoluble es una cantidad de L-carnitina que aumenta la absorción intestinal de la vitamina liposoluble en un animal. La cantidad de L-carnitina administrada al animal inferior puede variar dependiendo de la edad o estado de enfermedad del animal. Generalmente, se administra a un animal inferior desde aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal, preferiblemente desde aproximadamente 5 a aproximadamente 5 a aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal, y más preferiblemente desde aproximadamente 5 a aproximadamente 25 mg/kg de peso corporal, de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable. Generalmente se administra a un animal inferior desde aproximadamente 25 a aproximadamente 5000 mg/Kg de dieta, preferiblemente desde aproximadamente 50 a aproximadamente 1000 mg/kg de dieta y más preferiblemente desde aproximadamente 75 a aproximadamente 500 mg/kg de dieta de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable. El término "dieta" usado aquí para no humanos (o animales inferiores) se define como la cantidad de alimento (por peso) consumido por el animal por día.

Las vitaminas liposolubles incluyen peor no se limitan a, vitamina A, vitamina E (y en particular \alpha-tocoferol); sus precursores, como acetato de vitamina E; ésteres que tienen 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono, como palmitato de vitamina A y acetato de vitamina E; y cualquier combinación de las precedentes. Según una realización de la invención, la vitamina liposoluble es la vitamina E. El término "vitamina E" como se usa aquí incluye \alpha-, \beta-, \delta-, y \gamma-tocoferoles y sus correspondientes acilésteres. La cantidad de una vitamina liposoluble particular administrada diariamente a una mujer posmenopáusica puede ser la recomendada por la U.S. RDA publicada por la National Academy of Sciences. Típicamente, se administra diariamente a una mujer posmenopáusica desde aproximadamente 8 a aproximadamente 800 mg de vitamina E. Preferiblemente se administra diariamente a una mujer posmenopáusica desde aproximadamente 8 a aproximadamente 400 mg de Vitamina E.

La cantidad de una vitamina liposoluble particular administrada diariamente a un animal inferior puede ser la recomendada por las distintas organizaciones animales. La cantidad de vitamina liposoluble administrada puede variar dependiendo de la edad o estado de enfermedad del animal y dependiendo de la vitamina suplementada. Generalmente se administra a un animal inferior desde aproximadamente 30 a aproximadamente 5.000 unidades internacionales (IU)/kg de dieta y preferiblemente desde aproximadamente 100 a aproximadamente 1.000 IU/kg de dieta de vitamina E. Generalmente se administra a un animal inferior desde aproximadamente 5.000 a aproximadamente 1.000.000 IU/kg de dieta y preferiblemente desde aproximadamente 10.000 a aproximadamente 500.000 IU/kg de dieta de vitamina A. Generalmente se administra a un animal inferior desde aproximadamente a aproximadamente 10.000 IU/kg de dieta y preferiblemente desde aproximadamente 500 a aproximadamente 3.000 IU/kg de dieta de vitamina D.

El animal inferior puede ser una mascota doméstica, como un perro o un gato. Preferiblemente, el animal es un animal castrado o neutro y en particular un perro o gato castrado o neutro.

Preferiblemente la L-carnitina y la vitamina liposoluble se administran simultáneamente y más preferiblemente en la misma forma de dosis unitaria a la mujer posmenopáusica o al animal inferior. La L-carnitina y la vitamina liposoluble se administran preferiblemente durante o después de una comida.

También puede administrarse estrógeno a una mujer posmenopáusica con la L-carnitina y la vitamina liposoluble para además mejorar el sistema antioxidante de la mujer posmenopáusica. La cantidad de estrógeno puede determinarse por métodos conocidos en la técnica de la terapia de sustitución de estrógeno. Generalmente, desde aproximadamente 300 a aproximadamente 600 \mug de estrógeno se administran con la L-carnitina y la vitamina liposoluble a una mujer posmenopáusica.

Por lo tanto la L-carnitina en combinación con las vitaminas liposolubles aumenta el mecanismo de defensa antioxidante, la L-carnitina y una vitamina liposoluble pueden administrarse para reducir el riesgo o prevenir ciertas enfermedades degenerativas, como enfermedad cardiocoronaria, degeneración macular asociada con la edad, osteoporosis, cáncer, y Alzheimer en mujeres posmenopáusicas. El método de esta invención puede usarse como tratamiento prolongado, es decir durante meses, años, o el resto de la vida de las personas, para reducir el riesgo de adquirir las enfermedades antes mencionadas.

De igual modo, la L-carnitina puede administrarse a los animales inferiores para reducir el riesgo o prevenir ciertas enfermedades degenerativas, incluyendo la enfermedad cardiocoronaria; enfermedades de riñón; enfermedades urinarias; y cáncer. El método de esta invención puede usarse como tratamiento prolongado, es decir durante meses, años, o el resto de la vida del animal inferior, para reducir el riesgo de adquirir las enfermedades antes mencionadas.

La L-carnitina, la vitamina liposoluble y opcionalmente, el estrógeno pueden formularse en forma de dosis unitaria oral para las mujeres posmenopáusicas, que incluyen, pero no se limitan a, cápsulas, comprimidos, y partículas, como polvos y sobres, por métodos conocidos en la técnica. La forma de dosis unitaria para mujeres posmenopáusicas puede ser en forma líquida o sólida, pero es preferible en forma sólida. La forma de dosis unitaria puede además comprender aditivos que incluyen, pero no se limitan a, ajustador de pH, un conservante, un saborizante, un agente enmascarante del sabor, una fragancia, un humectante, un diluyente, un desintegrante, o cualquier combinación de los precedentes.

También para los animales inferiores, la L-carnitina y la vitamina liposoluble pueden formularse en forma de dosis unitaria oral, que incluye pero no se limita a, alimentos, como bolitas para animales; cápsulas; comprimidos; y partículas, como polvos y sobres, por métodos conocidos en la técnica. La L-carnitina y la vitamina liposoluble pueden administrarse a los animales a través de los alimentos, el agua, bolitas para animales, comprimidos o cápsulas. La forma de dosis unitaria para animales inferiores puede ser líquida o sólida. La forma de dosis unitaria comprende además cualquiera de los aditivos antes mencionados.

Descripción de las realizaciones preferidas

Los ejemplos siguientes ilustran la invención sin limitación. Todas las partes y porcentajes se dan por peso a menos que se indique otra cosa.

Ejemplo 1 La carnitina en la dieta aumenta los niveles en el hígado y la secreción biliar de \alpha-tocoferol en ratas ovariectomizadas

Este estudio se realizó para determinar si la carnitina en la dieta afecta a la concentración en el hígado y la secreción biliar de \alpha-tocoferol en ratas ovariectomizadas.

Materiales y métodos

Treinta y dos ratas hembra Sprague-Dawley de 10 semanas de edad con peso de 214 \pm 6 g (Harlan Sprague-Dawley, Indianápolis, IN) se colocaron individualmente en jaulas de plástico con fondo de alambre de acero inoxidable en una habitación sin ventanas a una temperatura controlada de aproximadamente 23ºC y sometida a un ciclo de luz-oscuridad con un período de luz desde 3:30 pm a 3:30 am y el período de oscuridad desde 3:30 am a 3:30 pm. Las ratas se aclimataron durante 1 semana con libre acceso al agua desionizada y alimentadas ad libitum con una dieta adecuada con cinc AIN-93G (Reeves y col., J Nutr 1993; 123:1939-1951) formulada por Dyets, Inc. (Bethlehem, PA, USA) con 7% de aceite de soja como fuente de grasa. Se añadió carbonato de cinc para proporcionar los niveles deseados de cinc. Al final de la primera semana, con un peso medio corporal de 230 \pm 12 g, las ratas se sometieron a supresión de ovarios bajo anestesia con halotano después de 16 horas de ayuno. Se tomaron muestras iniciales de sangre (semana 0) de 5 ratas seleccionadas al azar.

Después de 1 semana de recuperación postoperatoria, las ratas se dividieron en los siguientes dos grupos experimentales, controlando el peso corporal: un grupo de ratas se alimentó con dieta adecuada en cinc AIN-93G que contenía aceite de soja despojado de \alpha-tocoferol; 150 ppm Sipernat™ 50, que es sílice hidratada disponible en Degusta Corporation, Ridgfiekd, NJ; y suplementada con 150 mg/kg de L-carnitina. Un grupo control se alimentó con la misma dieta, excepto que los 150 mg/kg de L-carnitina se sustituyeron con 150 ppm de \alpha-D-glucosa. La ingesta normal de alimento de ambos grupos fue aproximadamente 15 g/día/rata. Las muestras de sangre se tomaron al principio de 1, 3, 5, 8 semanas de 5 ratas seleccionadas al azar en cada grupo.

Al final de la semana 8, se realizó la canulación del conducto biliar en las ratas de ambos grupos que tenían un peso corporal medio de aproximadamente 340 \pm 15 g. La canulación del conducto biliar común se realizó después de 16 horas de privación de alimento como se ha descrito previamente (Noh y col., J Nutr Biochem 1999; 110-117). Después de realizar una incisión por la línea media del abdomen, el conducto biliar común se canuló con tubo PE-10 (Clay Adams, Sparks, MD) bajo anestesia de halotano (2% de halotano en 2,01 oxigeno/min). Un catéter de alimentación de silicona (Silastic medical grade tubing, Dow Corning, Midland, MI) se insertó en la región del fundus gástrico. El catéter de infusión se exteriorizaba a lo largo de la cánula biliar a través del flanco derecho. Las ratas canuladas se situaron en jaulas de descanso individuales y se dejaron recuperar durante al menos 20 horas en una cámara de recuperación caliente mantenida a aproximadamente 30ºC. Inmediatamente después de la cirugía se administró solución salina tamponada con glucosa-fosfato (PBS) (en mmoles/l: 277 glucosa, 6,75 Na_{2}HPO_{4}, 16,5 NaH_{2}PO_{4}, 115 NaCl y 5KCl; pH 6,7) continuamente a través de la cánula duodenal a 3,0 ml/hora por medio de una bomba con jeringa (Harvard Apparatus, Model 935, South Natick, MA).

Después de recuperación postoperativa, a las ratas se les administró una infusión de lípidos que contenía 565 \mumoles de trioleina (95%, Sigma Chemical, St Louis, MO), y 396 \mumoles de sodio ácido taurocólico en 24 ml de PBS. La bilis se recogió cada hora durante 8 horas en tubos de centrífuga cónicos pesados previamente que contenían 30 \mug de n-propil galato en matraces rellenos con hielo. Después de recogida de la bilis, se mataron las ratas por dislocación cervical, y se sometieron a disección los hígados. Las muestras se almacenaron a aproximadamente -70ºC hasta su análisis.

Los lípidos se extrajeron por el método de Folch's (Folch y col, J Biol Chem 1857;226:497-509). El contenido de \alpha-tocoferol se determinó como se describe en Zaspel y col (Anal Biochem 1983; 130:146-150). Después, 150 \mul de bilis y cierta cantidad de acetato de \alpha-tocoferol (como patrón interno) se pipetearon en un tubo de ensayo. Después de extracción con acetona, secado con sulfato sódico y centrifugación a 1000xg, la fase superior se filtró a través de un filtro de jeringa PTFE (0,45 \mum, Altech Associates, Inc, Deefield, IL), se secaron bajo gas N_{2} y se resolubilizaron en un volumen definido de cloroformo-metanol (1:3, v/v). Los extractos se separaron en un sistema HPLC Beckman con software System Gold (Beckman Instruments, Inc., Fullerton, CA) equipado con una columna de fase invertida (Alltima C 18, 5 \mum, 4,6 x 150 mm, Altech Associates, Inc., Deerfield, IL). EL metanol desgasificado se utilizó como fase móvil a 2 ml/min. Los tiempos de retención típicos fueron 4,1 minutos para \alpha-tocoferol y 5,3 minutos para acetato de \alpha-tocoferol. La detección se controló a 292 nm (Module 166 UV-detector, Beckman Instruments). El intervalo de curva estándar de \alpha-tocoferol fue de 47,6 a 190,5 ng.

Se realizaron análisis estadísticos utilizando Excel 97 (Microsoft Inc, 1997) y PC SAS (SAS Institute, 1996). Se utilizaron el ensayo de Student y un ANOVA de una dirección para comparar la media de los grupos. Se consideraron diferencias significativas a P < 0,05.

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Resultados

No se observó diferencia en el flujo de bilis (7,9 \pm 1,4 ml/8 horas en el grupo de carnitina vs. 8,9 \pm 1,8 ml/8 horas en el grupo control). Sin embargo, la secreción biliar de \alpha-tocoferol durante 8 horas fue significativamente (P < 0,05) más alta en el grupo de carnitina (53 \pm 9,3 nmoles que en el grupo control (41,3 \pm 7,3 nmoles). Las Figuras 1 y 2 ilustran gráficamente la tasa de rendimiento y el rendimiento acumulativo de \alpha-tocoferol, respectivamente. La concentración en el hígado de \alpha-tocoferol fue también significativamente elevada en el grupo de carnitina (129,6 \pm 195 nmol/g) en comparación con el grupo control (100,7 \pm 20,2 nmol/g). De igual modo, la concentración de \alpha-tocoferol por 100 mg de lípido total fue significativamente más alta en las ratas alimentadas con una dieta suplementada con carnitina. La relación de \alpha-tocoferol/fosfolípido en el hígado fue significativamente (P=0,001) más alta en el grupo de carnitina (4,8 \pm 062 nmol/\mug) que en el grupo control (3,3 \pm 0,4 nmol/\mug). Estos hallazgos proporcionan evidencia de que la carnitina en la dieta mejora el status de \alpha-tocoferol en el hígado en ratas ovariectomizadas.

Ejemplo 2

La carnitina en la dieta aumenta la absorción linfática de \alpha-tocoferol en ratas ovariectomizadas

Este estudio se realizó para determinar si la carnitina en la dieta aumenta la absorción linfática de \alpha-tocoferol en ratas ovariectomizadas.

Materiales y Métodos

Treinta y dos ratas hembra Sprague-Dawley de 10 semanas de edad con peso de 208 \pm 8 g (Harlan Sprague-Dawley, Indianápolis, IN) se alojaron y alimentaron como se describe en el Ejemplo 1. Al final de la segunda semana, con un peso promedio de 240 \pm 9 g, a las ratas se les quitaron los ovarios bajo anestesia con halotano después de 16 horas de ayuno. Muestras de sangre inicial (semana 0) se tomaron de 6 ratas seleccionadas al azar.

Inmediatamente después de la cirugía, las ratas se dividieron en los siguientes dos grupos experimentales como se describió en el Ejemplo 1, es decir, un grupo se alimentó con dieta suplementada con carnitina y el otro fue el grupo control. La ingesta normal de alimento para ambos grupos fue aproximadamente 15-16 g/día/rata.

Al final de la quinta semana, se realizó la canulación del conducto linfático sobre cada grupo que tenía un peso promedio de 340 \pm 15 g. Se realizó la canulación del conducto linfático mesentérico después de 16 horas de privación de alimento, como se ha descrito previamente (Noh y col., supra). En resumen, después de una incisión abdominal por la línea media, el conducto linfático mesentérico se canuló con un tubo de polietileno (SV 31 tubing, Dural Plastics, Auburn, Australia) fijado con una gota de pegamento de cianoacrilato (Krazy Blue, Columbus, OH) bajo anestesia con halotano (2% de halotano en 2,01 oxígeno/min.) Se insertó un catéter de alimentación de silicona (Silastic medical grade tubing, Dow Corning, Midland, MI) en la región del fundus gástrico. El catéter de infusión se exteriorizaba a lo largo de la cánula linfática a través del flanco derecho. Las ratas canuladas se colocaron en jaulas de descanso individuales y se dejaron recuperar durante al menos 20 horas en una cámara de recuperación caliente mantenida a aproximadamente 30ºC. Inmediatamente después de la cirugía se administró solución salina tamponada con glucosa -fosfato (PBS) (en mmoles/l: 277 glucosa, 6,75 Na_{2}HPO_{4}, 16,5 NaH_{2}PO_{4}, 115 NaCl y 5KCl; pH 6,7) continuamente a través de la cánula duodenal a 3,0 ml/hora por medio de una bomba con jeringa (Harvard Apparatus, Model 935, South Natick, MA).

Después de recuperación postoperativa, a las ratas se les administró una infusión de lípidos que contenía 1 \muCi de [carboxil-^{14}C]-trioleina (actividad específica 112,0 mCi/moles, DuPontNEN, Boston, MA), 565 \mumoles de trioleina (95%, Sigma Chemical, St Louis, MO), 3,56 \mumoles de \alpha-tocoferol (all-rac-\alpha-tocoferol, 97% Aldrich Chemicals, Milwaukee, WI) y 396 \mumoles de sodio ácido taurocólico en 24 ml de PBS. La linfa se recogió cada hora durante 8 horas en tubos de centrífuga cónicos pesados previamente que contenían 30 \mug de n-propilgalato y 4 mg de Na_{2}EDTA en matraces rellenos con hielo. Después de recogida de la linfa, se mataron las ratas por dislocación cervical, y se sometieron a disección los hígados. Las muestras se almacenaron a aproximadamente -70ºC hasta su análisis.

A partir de los lípidos extraídos (Folch y col., supra), los fosfolípidos totales del tejido se emidieron colorimétricamente por el método de Reja y col. (J Lipid Res 1973; 14:695-697). El colesterol total del tejido se determinó según describe Rudel y col. (J Lipid Res 1973;21:364-366). El \alpha-tocoferol se determinó según Zaspel y col., (supra) y en el Ejemplo 1 más arriba. Los análisis estadísticos se llevaron a cabo como se ha descrito en el Ejemplo 1.

Resultados

No se observó diferencia en el flujo de linfa (22,6 \pm 4,2 ml/8 horas en el grupo de carnitina vs 24,5 \pm 2,5 ml/8 horas en el grupo control). La absorción linfática de \alpha-tocoferol durante 8 horas fue significativamente (P < 0,05) más alta en el grupo con carnitina (899 \pm 200 ml/8 horas) que en el grupo control (587 \pm 92 ml/8 horas). Las Figuras 3 y 4 ilustran gráficamente la tasa de absorción cada hora y la absorción acumulativa de \alpha-tocoferol respectivamente. La absorción de ^{14}C-trioleina estaba ligeramente aumentada (P < 0,05) en el grupo con carnitina (53,5 \pm 4,0% de dosis) en comparación con las ratas control (47,6 \pm 5,0% de dosis). Se observaron significativas diferencias en las relaciones de \alpha-tocoferol/fosfolípido en la linfa (82,7 \pm 17,1 nmoles/\mumoles en el grupo con carnitina vs 60,8 \pm 6,0 nmoles/\mumoles en el grupo control). Estos resultados presentan la primera evidencia de que la carnitina en la dieta aumenta la absorción linfática del \alpha-tocoferol.

Muchas variaciones de esta invención se sugerirán por sí mismas a los expertos en la técnica a la luz de la descripción detallada más arriba. Esas variaciones obvias están dentro del ámbito total objetivo de las reivindicaciones anejas.

Claims (23)

1. Uso de una cantidad efectiva de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable que aumenta la absorción de vitaminas liposolubles, en la fabricación de una dieta o medicamento para administración oral, conteniendo dicha dieta o medicamento una vitamina liposoluble, para el tratamiento o deterioro de la función absortiva intestinal de las vitaminas liposolubles con el envejecimiento en las mujeres posmenopáusicas.

2. El uso de la reivindicación 1, en que la vitamina liposoluble se selecciona del grupo que comprende vitamina A, vitamina D, vitamina E y cualquier combinación de las precedentes.

3. El uso de la reivindicación 3, en que la vitamina liposoluble es la vitamina E.

4. El uso de la reivindicación 1, en que se administran oralmente por día de 10 mg a 2 g de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable y de 8 a 800 mg de vitamina E.

5. El uso de la reivindicación 4, en que la L-carnitina es L-carnitina L-tartrato, L-carnitina ácido fumarato, L-carnitina adipato, o L-carnitina magnesio citrato.

6. El uso de la reivindicación 4, en que se administran de 250 a 750 mg de L-carnitina por día.

7. El uso de la reivindicación 4, en que se administran de 8 a 400 mg de vitamina E por día.

8. El uso de la reivindicación 4, en que se utiliza además estrógeno en combinación con L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable y la vitamina E.

9. El uso según la reivindicación 1, en que se aumenta la secreción biliar de esa vitamina liposoluble en una mujer posmenopáusica.

10. El uso según la reivindicación 1, en que se aumenta la concentración en el hígado de una vitamina liposoluble en una mujer posmenopáusica.

11. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para tratar enfermedades cardiocoronarias, degeneración macular relacionada con la edad, osteoporosis, cáncer, enfermedades urinarias y Alzheimer.

12. Uso de una cantidad efectiva de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable que aumenta la absorción de vitaminas liposolubles, en la fabricación de una dieta o medicamento para administración oral, conteniendo dicha dieta o medicamento una vitamina liposoluble, para el tratamiento o deterioro de la función absortiva intestinal de las vitaminas liposolubles con el envejecimiento en un animal.

13. El uso de la reivindicación 12, que comprende la administración oral de 1 a 100 mg de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable por kilogramo de peso corporal por día.

14. El uso de la reivindicación 12, que comprende la administración oral de 25 a 5000 mg de L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable por kilogramo de dieta por día.

15. El uso de la reivindicación 12, que comprende la administración oral de 30 a 5000 IU de vitamina E por kilogramo de dieta por día.

16. El uso de la reivindicación 12, que comprende la administración oral de 5000 1.000.000 IU de vitamina A por kilogramo de dieta por día.

17. El uso de la reivindicación 12, que comprende la administración oral de 250 a 10.000 IU de vitamina A por kilogramo de dieta por día.

18. El uso de la reivindicación 12, en que la vitamina liposoluble y la L-carnitina o una sal suya farmacéuticamente aceptable se administran en forma de dosis unitaria.

19. El uso de la reivindicación 18, en que la forma de dosis unitaria es una cápsula, comprimido, polvo o sobre.

20. El uso de la reivindicación 12, en que el animal es una mascota doméstica.

21. El uso de la reivindicación 20, en que el animal es un perro o un gato.

22. El uso de la reivindicación 20, en que el animal está castrado o neutralizado.

23. El uso de la reivindicación 12 para tratar enfermedades del corazón, enfermedades del riñón, enfermedades urinarias y cáncer.