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ES2261443T3 - Derivados de hidrazida del acido pirrolidin-2-carboxilico para uso como inhibidores de metaloproteasa. - Google Patents

Derivados de hidrazida del acido pirrolidin-2-carboxilico para uso como inhibidores de metaloproteasa.

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ES2261443T3
ES2261443T3 ES01954031T ES01954031T ES2261443T3 ES 2261443 T3 ES2261443 T3 ES 2261443T3 ES 01954031 T ES01954031 T ES 01954031T ES 01954031 T ES01954031 T ES 01954031T ES 2261443 T3 ES2261443 T3 ES 2261443T3
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ES
Spain
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alkyl
acid
sulfonyl
pyrrolidin
aryl
Prior art date
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ES01954031T
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English (en)
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Johannes Aebi
Henrietta Dehmlow
Eric Argirios Kitas
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
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Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
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Abstract

Compuestos de fórmula general (I) (Ver fórmula) en donde R1 es hidrógeno, alquilcarbonilo o arilcarbonilo; R2 es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloalquilalquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, aminoalquilo, (mono y dialquil)aminoalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, arilalquil(alcoxicarbonil)alquilo, arilcarbonilalquilo, ariloxialquilo, arilalquenilo, aril(alcoxicarbonil)alquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo; R3 es hidrógeno, arilo, alquilo o arilalquilo, aril-sulfonilo, heteroarilsulfonilo; R4 es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfonilo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NR3R4 ó R5-[N-N(R4)]-R3 forman un anillo alifático saturado o sin saturar, de 5 o 6 miembros; R5 es hidrógeno, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heterociclilo, (mono o dialquilamino)-alquilcarbonilo, (mono y dialquil) aminosulfonilo, arilaminocarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo, arilalquilo, arilalcoxicarbonilo, o heteroarilo; R6 es hidrógeno, alquilo, arilo o carboxialquilo; X es -S(O)2-, -S(O)2-NH-, -C(O)-, -C(O)NR6 ó C(O)O el término ¿alquilo¿ solo o en combinación, significa un grupo de alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada conteniendo un máximo de 7 átomos de carbono; el término ¿halógeno¿ se refiere a los grupos flúor, bromo, cloro e yodo; el término ¿alquenilo¿ se refiere a una cadena hidrocarbúrica como se ha definido para alquilo que tiene por lo menos un doble enlace olefínico; el término ¿alquinilo¿ se refiere a una cadena hidrocarbúrica como se ha definido para alquilo que tiene por lo menos un enlace triple olefínico; el término ¿alcoxilo¿, solo o en combinación, significa un grupo de éter alquílico en donde el término ¿alquilo¿ tiene el significado antes indicado; el término ¿halogenalquilo¿ se refiere a un grupo alquilo como se ha definido antes que está sustituido por uno a tres átomos de halógeno; el término ¿alquilcarbonilo¿, solo o en combinación, significa un grupo acilo derivado de un ácido alcancarboxílico, o sea grupo alquil-C(O), en donde el término ¿alquilo¿ tiene el significado antes indicado; el término ¿cicloalquilo¿, solo o en combinación, significa un grupo hidrocarbúrico cíclico saturado con 3-8 átomos de carbono; el término ¿arilo¿ para R2 -solo o en combinación-, se refiere a un radical carbocíclico aromático, o sea un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 o 10 miembros opcionalmente sustituido por uno o mas grupos elegidos independientemente entre halógeno, alcoxicarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo y trifluormetoxilo.

Description

Derivados de hidrazida del ácido pirrolidin-2-carboxílico para uso como inhibidores de metaloproteasa.
La presente invención se refiere a compuestos que son de utilidad como inhibidores de las metaloproteasas, p. ej., las zinc proteasas, en particular las zinc hidrolasas, y las cuales son efectivas en la profilaxis y tratamiento de estados de enfermedad que están asociados con la vasoconstricción de incidentes crecientes. Ejemplos de tales trastornos son la presión arterial alta, trastornos coronarios, insuficiencia cardíaca, isquemia renal y miocárdica, insuficiencia renal, diálisis, isquemia cerebral, infarto cardíaco, migraña, hemorragia subaracnoidea, síndrome de Raynaud y alta presión pulmonar.
Las endotelinas son péptidos que existen en tres isoformas ET-1, ET-2, y ET-3, cada una de ellas codificada mediante un gen diferente. Fueron descubiertas originalmente en el medio condicionado de células endoteliales porcinas en 1988 por Yanagisawa (Yanagisawa M; Kurihara H; Kimura S; Tomobe Y; Kobayashi M; Mitsui Y; Yazaki Y; Goto K; Masaki T: A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells ("Un nuevo y potente péptido vasoconstrictor obtenido mediante células endoteliales vasculares") [ver comentarios] NATURE (1988 Mar 31), 332(6163), 411-5). Los ETs activos son péptidos de 21 aminoácidos con dos puentes disulfuro intramoleculares. Se obtienen a partir de preproteínas de 203 a 212 aminoácidos que son procesados mediante furina como endopeptidasas para obtener la gran-endotelina biológicamente inactiva (big-ET). Las gran-ETs son específicamente procesadas obteniéndose las ETs maduras mediante una escisión hidrolítica entre los aminoácidos 21 y 22 que son Trp^{21}-Val^{22}(gran-ET-1, gran ET-2) y Trp^{21}-Ile^{22} en gran ET-3 respectivamente. Ya en 1988, se postuló que una metaloproteasa específica era la responsable de esta escisión específica. En 1994, se purificó la ECE-1 (enzima-1 que convierte la endotelina) y se clonó del adrenal bovino (Xu D, Emoto N, Giaid A, Slaughter C, Kaw S, de Witt D, Yanagisawa M: "ECE-1: a membrane-bound metalloprotease that catalyzes the proteolytic activation of big endothelin-1" ("ECE-1: una metaloproteasa unida a la membrana, la cual cataliza la activación proteolítica de la gran endotelina-1"). Cell (1994) 78: 473-485).
ECE-1 es una zinc-endopeptidasa tipo II unida a la membrana, con un pH neutro óptimo y un motivo unido al zinc HExxHx(>20)E. Pertenece a la subfamilia M13 y tiene un gran ectodominio de 681 aminoácidos que contiene el sitio activo. Otros miembros de la familia M13 son el NEP24.11 (endopeptidasa neutra), PEX, un fosfato que regula la endopeptidasa neutra, y una proteína del grupo sanguíneo Kell, que ha sido descrita recientemente como una enzima de procesado de la gran-ET-3. Miembros de la familia M13 de origen humano, se caracterizan por un alto peso molecular (>80 kDa) un número de puentes disulfuro conservados y un modelo de glicosilación complejo. La estructura del NEP ha sido recientemente solucionada (Oefner y col., J. Mol. Biol. 2000, 296, 341-349). El dominio catalítico de la ECE y las proteinasas M13 humanas afines, son significativamente más grandes (>650 aminoácidos) que los miembros de las metaloproteasas de matriz (MMPs). A diferencia de la familia de las MMPs, que pertenecen a las metzincinas y presentan un modelo típico HExxHxxGxxH, los miembros de la familia M13 son gluzincinas que contienen un modelo HExxHx(>20)E. Estas dos familias son claramente diferentes en el tamaño de los dominios catalíticos, la estructura y el modelo de coordinación del zinc de los ligandos. Los sitios activos de las dos familias muestran claras diferencias las cuales tienen un claro impacto sobre el tipo de inhibidores y la potencial selectividad.
Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es el de proporcionar compuestos de utilidad para la inhibición selectiva de la ECE-1, especialmente compuestos de fórmula (I)
1
en donde
R^{1} es hidrógeno, alquilcarbonilo o arilcarbonilo;
R^{2} es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloalquil-alquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, amino-alquilo, dialquilaminoalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, arilalquil(alcoxicarbonil) alquilo, arilcarbonilalquilo, ariloxialquilo, arilalquenilo, aril(alcoxicarbonil)alquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo;
R^{3} es hidrógeno, arilo, alquilo o arilalquilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo;
R^{4} es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfonilo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NR^{3}R^{4} ó R^{5}-[N-N(R^{4})]-R^{3} forman un anillo alifático saturado o no saturado, de 5 ó 6 miembros;
R^{5} es hidrógeno, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heterociclilo, (mono o dialquilamino)-alquilcarbonilo, (mono y dialquil) aminosulfonilo, arilaminocarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo, arilalquilo, arilalcoxicarbonilo, o heteroarilo;
R^{6} es hidrógeno, alquilo, arilo o carboxialquilo;
X es -(S(O)_{2}-, -S(O)_{2}-NH-, -C(O)-, -C(O)NR^{6} ó C(O)-O- y ésteres farmacéuticamente aceptables, y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
El término "alquilo" como se usa aquí, solo o en combinación, significa un grupo alquilo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene un máximo de 7, de preferencia un máximo de 4, átomos de carbono, p. ej., metilo, etilo, n-propilo,2-metilpropilo(iso-butilo), 1-metiletilo(iso-propilo), n-butilo, y 1,1-dimetiletil(t-butilo).
El término "carboxilo" se refiere al grupo -C(O)OH.
El término "carbamoilo" se refiere al grupo -C(O)NH_{2}.
El término "carbonilo" se refiere al grupo -C(O)-.
El término "halógeno" se refiere al grupo flúor, bromo, cloro y yodo, de preferencia flúor y/o cloro, con mayor preferencia, flúor.
El término "sulfonilo" se refiere al grupo -S(O_{2})-.
El término "alquenilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo como se ha definido para alquilo, la cual tiene como mínimo un enlace doble olefínico (incluyendo por ejemplo, el vinilo, alilo y butenilo).
El término "alquinilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo como se ha definido para alquilo, la cual tiene como mínimo un enlace triple olefínico (incluyendo por ejemplo el propinilo, butin-(1)-ilo, etc.
El término "alcoxilo", solo o en combinación, significa un grupo éter alquilo en el cual el término "alquilo" tiene el significado dado anteriormente, tal como metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo, isobutoxilo, sec.butoxilo, terc.butoxilo, y similares.
El término "alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo de fórmula -C(O)R_{c}, en donde R_{c} es alcoxilo como se ha definido más arriba.
El término "hidroxilo" se refiere al grupo -OH, el término "ciano" al grupo -CN.
El término "hidroxialquilo" significa un grupo alquilo como se ha definido anteriormente, el cual está substituido con un grupo hidroxilo.
El término "tioalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se ha definido más arriba, el cual está substituido con un grupo -SH.
El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente, el cual está substituido con uno o tres átomos de halógeno, de preferencia flúor, p. ej., trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, etc.
"Carboxialquilo" significa un alquilo inferior como se ha definido más arriba, el cual está substituido con un grupo HOOC-.
El término "alquilcarbonilo", solo o en combinación, significa un grupo acilo derivado de un ácido alcanocarboxílico, es decir, alquil-C(O)-, tal como acetilo, propionilo, butirilo, valerilo, 4-metilvalerilo, etc.
El término "cicloalquilo", solo o en combinación, significa un grupo hidrocarburo cíclico saturado, con 3-8, de preferencia 3-6 átomos de carbono, es decir, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo y similares.
El término "amino" se refiere al grupo -NH_{2}.
El término "arilo" para R^{2}, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 ó 10 miembros, p. ej., fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo está opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1-5, con mayor preferencia 1-3, independientemente seleccionados de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, p. ej., metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, con mayor preferencia flúor, alcoxicarbonilo, alquilo, trifluorometilo y trifluorometoxilo y con mayor preferencia, flúor. Los grupos aromáticos más preferidos son el naftilo o fenilo substituido con uno o más átomos de flúor, p. ej., naftilo, 2,3,4,5,6-pentafluorofenil o bifenilo.
El término "arilo" para R^{3} y R^{6}, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático, de 6 a 10 miembros, p. ej., fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo está opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1-5, con mayor preferencia 1-3, independientemente seleccionado de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, p. ej. metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, hidroxilo, alquilamido, p. ej., acetamido, nitro, alquilsulfonilo, p. ej., metilsulfonilo con mayor preferencia alquilo o alcoxilo.
El término "arilo" para R^{4}, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 ó 10 miembros, p. ej., fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo está opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1 a 3, independientemente seleccionados de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, p. ej., metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, ciclohexilo, hidroxilo, alquilamido, p. ej., acetamido, nitro, alquilsulfonilo, p. ej., metilsulfonilo, con más preferencia flúor, cloro, bromo, alcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, y con mayor preferencia, flúor. Ejemplos para grupos aromáticos son fenilo, 2,4,5-trifluorofenilo, y 2,4-difluorofenilo.
El término "arilo" para R^{5}, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 a 10 miembros, p. ej., fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo está opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1-5, con mayor preferencia 1-3, independientemente seleccionado de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, p. ej., metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, de preferencia alquilo o alcoxilo p. ej., metilo o metoxilo. Ejemplos de estos grupos arilo son 4-metil-fenilo y 4-metoxi-fenilo.
El término "ariloxilo" se refiere a un grupo arilo como se ha definido más arriba, unido a una estructura madre mediante un radical oxilo, es decir, aril-O-.
El término "heteroarilo" para R^{4}, solo o en combinación, se refiere a un radical aromático monovalente mono o bicíclico que tiene de 3 a 10, de preferencia de 5 a 6 átomos en el anillo, que contiene uno a tres heteroátomos, de preferencia un heteroátomo, p. ej., independientemente seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. Ejemplos de grupos heteroarilo son tiofenilo, isoxazolilo, tiazolilo, piridinilo, pirrolilo, imidazolilo, tetrazolilo, de preferencia, piridinilo, isoxazolilo y tiazolilo. Opcionalmente, el grupo heteroarilo puede ser mono, di o trisubstituido, independientemente con fenilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, carboxilo, alcoxicarbonilalquilo, de preferencia alquilo.
El término "heteroarilo" para R^{3} ó R^{5}, solo o en combinación, se refiere a un radical aromático monovalente mono o bicíclico que tiene de 5 a 10, de preferencia de 5 a 6 átomos anulares, que contienen de uno a tres heteroátomos, de preferencia un heteroátomo, p. ej., independientemente seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. Ejemplos de grupos heteroarilo son piridinilo, tiofenilo, isoxizolilo, isoquinolilo, quinolilo, indolilo, pirimidina, piridazina, y pirazina, de preferencia tiofenilo, furanilo, pirrolidinilo, indolilo e isoxazolilo. Opcionalmente, el grupo heteroarilo puede ser mono, di o trisubstituido, independientemente con fenilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, carboxilo, oxilo, alcoxicarbonilalquilo, de preferencia alquilo.
El término "heterociclilo", solo o en combinación, se refiere a un radical no aromático monovalente mono o bicíclico que tiene de 5 a 10, de preferencia de 5 a 6 átomos anulares, que contienen uno a tres heteroátomos, de preferencia un heteroátomo, p. ej., independientemente seleccionados entre nitrógeno, oxígeno o azufre. Opcionalmente el anillo heterocíclico puede estar substituido con un grupo independientemente seleccionado entre halógeno, alquilo, alcoxilo, oxocarboxilo, alcoxicarbonilo, etc. y/o sobre un átomo de nitrógeno secundario (es decir, -NH-) con alquilo, arilalcoxicarbonilo, alquilcarbonilo o un átomo de nitrógeno terciario (es decir =N-) con óxido. Ejemplos de grupos heterocíclicos son morfolinilo, pirrolidinilo, piperidilo, etc.
Los términos "forma dimérica" significa un compuesto en donde dos grupos R^{1} de dos compuestos idénticos de fórmula I han sido reemplazados por un enlace simple común, ó en donde R^{1} es glutation-S- ó cisteína-S- ó éster y/o alquilcarbonilo o arilcarbonilo derivados de los mismos, p. ej., acetilcisteína-S- ó benzoilcisteína-S-, de preferencia glutation-S-, cisteína-S-, acetilcisteína-S- ó benzoilcisteína-S-.
El término "sal farmacéuticamente aceptable", se refiere a aquellas sales que conservan la efectividad y propiedades biológicas de las bases libres o ácidos libres, los cuales no son ni biológicamente ni de otra forma, indeseables. Las sales se forman con ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, y ácidos orgánicos tales como el ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxílico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido salicílico, y similares. Además, estas sales, pueden prepararse a partir de la adición de una base inorgánica o una base orgánica al ácido libre. Las sales derivadas de una base inorgánica incluyen, aunque no están limitadas a, las sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio y similares. Las sales derivadas de las bases orgánicas incluyen, aunque no están limitadas a, las sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas substituidas incluyendo las aminas substituidas que se encuentran en la naturaleza, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como la isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, lisina, arginina, N-etilpiperidina, piperidina, resinas de polimina y similares.
"Esteres farmacéuticamente aceptables" significa que los compuestos de fórmula general (I) pueden ser derivatizados en los grupos funcionales para proporcionar derivados que son capaces de la retroconversión a los compuestos originales in vivo. Ejemplos de estos compuestos incluyen los derivados de ésteres fisiológicamente aceptables y metabólicamente lábiles, tales como los ésteres de metoximetilo, ésteres de metiltiometilo, y ésteres de pivaloiloximetilo. Además, cualquier equivalente fisiológicamente aceptable de los compuestos de fórmula general (I), similar a los ésteres metabólicamente lábiles, los cuales son capaces de producir los compuestos originales de fórmula general (I) in vivo, están dentro del ámbito de esta invención.
La WO 98/08815 describe derivados de pirrolidina útiles como inhibidores de metaloproteasa, que difieren de los presentes compuestos en la identidad de la cadena lateral en la posición 2.
Los compuestos de fórmula (I) son de utilidad en la inhibición de la actividad metaloproteasa en mamíferos, particularmente la actividad zinc hidrolasa. Más específicamente, los compuestos de fórmula (I) son de utilidad como medicamentos para el tratamiento y profilaxis de trastornos que está asociados con enfermedades causadas por la actividad de la enzima convertidora de la endotelina (ECE). La inhibición de esta enzima sería de utilidad para el tratamiento de la isquemia miocárdica, fallo congestivo del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma.
Más detalladamente, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I)
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en donde
R^{1} es hidrógeno, alquilcarbonilo o arilcarbonilo;
R^{2} es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloalquil-alquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, amino-alquilo, dialquilaminoalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, arilalquil(alcoxicarbonil)alquilo, arilcarbonilalquilo, ariloxialquilo, arilalquenilo, aril(alcoxicarbonil)alquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo;
R^{3} es hidrógeno, arilo, alquilo o arilalquilo, aril-sulfonilo, heteroarilsulfonilo;
R^{4} es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfonilo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NR^{4}R^{5} ó R^{5}-[N-N(R^{4})]-R^{3} forman un anillo alifático saturado o sin saturar, de 5 ó 6 miembros;
R^{5} es hidrógeno, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heterociclilo, (mono o di-alquilamino)-alquilcarbonilo, (mono y dialquil)aminosulfonilo, arilaminocarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo, arilalquilo, arilalcoxicarbonilo, o heteroarilo;
R^{6} es hidrógeno, alquilo, arilo o carboxialquilo;
X es -(S(O)_{2}-, -S(O)_{2}-NH-, -C(O)-, -C(O)NR^{6} ó C(O)-O-;
y formas diméricas, y/o ésteres farmacéuticamente aceptables, y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, de preferencia ésteres farmacéuticamente aceptables y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y con mayor preferencia sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una versión preferida, la invención se refiere a compuestos en donde R^{1} es hidrógeno.
En otra versión preferida de la presente invención, R^{2} es alquilo, haloalquilo, alquilamino, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, arilo, arilalquilo, ariloxilo, aril-alquilamino, arilalcoxilo, heteroarilo, amino, o (mono y dialquil)amino; de preferencia alquilo, haloalquilo, alquil-amino, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, arilo, arilalquilo o heteroarilo e incluso con mayor preferencia, es arilo o heteroarilo y con mayor preferencia, arilo. El término arilo en la definición para R^{2} significa especialmente naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo, p. ej., R^{2} es naftilo, 2,3,4,5,6-pentafluorofenilo o bifenilo.
De acuerdo con la presente invención, R^{3} es de preferencia hidrógeno o alquilo, con mayor preferencia hidrógeno.
En los compuestos de más arriba, R^{4} es de preferencia hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, cicloalquilalquilo o carboxialquilo, con mayor preferencia hidrógeno, alquilo, arilalquilo, cicloalquilo, arilsulfonilo o carboxialquilo, con mayor preferencia hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, carboxialquilo o aril-alquilo, incluso con mayor preferencia hidrógeno, alquilo o arilalquilo, p. ej., hidrógeno, 2,4,5-trifluorobencilo, 2,4-difluorobencilo, bencilo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, bencilo o HO_{2}C-CH_{2}-, o cicloalquilpropilmetilo.
En una versión preferida de la presente invención R^{5} es hidrógeno, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo (mono y dialquilamino)alquilcarbonilo, (mono y dialquil)-aminosulfonilo, aril-alcoxicarbonilo, arilaminocarbonilo, arilsulfonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilo o heterociclilo, con mayor preferencia, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo, arilalcoxilo, arilaminocarbonilo, arilsulfonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilo o heterociclilo, con mayor preferencia arilsulfonilo, arilalquilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo y con mayor preferencia 4-metil-bencenosulfonilo, bencilo, 4-metoxibencenosulfonilo, (1H-indol-3-il)acetilo, tiofen-2-ilo, ó 3,5-dimetil-isoxyzol-4-sulfonilo.
En los compuestos descritos más arriba, X es de preferencia -SO_{2}-, -C(O)-, y con mayor preferencia -SO_{2}-.
En la versión más preferida de la presente invención, los compuestos pueden ser descritos mediante la fórmula (II)
3
en donde R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y X son como se ha definido más arriba, y los ésteres y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra versión preferida de la presente invención R^{1} es hidrógeno, R^{2} es naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo, R^{3} es hidrógeno o alquilo, R^{4} es hidrógeno, alquilo o arilalquilo, R^{5} es arilsulfonilo, arilalquilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo; y X es -SO_{2}-.
Las versiones preferidas de la presente invención son los compuestos ejemplificados en los ejemplos. Especialmente la presente invención comprende compuestos de acuerdo con la fórmula (I) ó (II) seleccionados entre el grupo formado por:
a) N'-isobutil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
b) N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
c) N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
d) N'-bencil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
e) N'-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
f) N'-bencenosulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
g) N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
h) N'-[(1H-indol-3-il)-acetil]-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
i) N'-tiofen-2-sulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
j) N'-(3,5-dimetil-isoxazol-4-sulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
k) N'-ciclopropilmetil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
l) N'-(4-metil-bencenosulfonil)-N'-(2,4,5-trifluorobencil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
m) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
n) N'-isopropil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-
pirrolidin-2-carboxílico;
o) ácido (2S,4R)-[N'-[4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N-(4-metil-bencenosulfonil)-
hidrazino]-acético;
p) N'-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(bifenil-4-sulfonil)-4-mercapto-pirrolidin-2-carboxílico;
q) N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(2,3,4,5,6-pentafluoro-bencenosulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
r) N'-bencil-N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico y
s) N-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico.
Estos compuestos presentan unos valore IC_{50} en el radioinmunoensayo (E sobre inhibición ECE, ver más adelante) de aproximadamente 50 nM a 1 \muM.
La invención se refiere también a composiciones que contienen un compuesto como se ha definido más arriba y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Otra versión de la presente invención se refiere al uso de compuestos como se ha definido más arriba como ingredientes activos en la elaboración de medicamentos que contienen un compuesto como se ha definido más arriba para la profilaxis y tratamiento de trastornos que son causados por la actividad de la enzima convertidora de la endotelina (ECE), especialmente la isquemia miocárdica, fallo congestivo del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma.
Además, la invención se refiere de compuestos como se han descrito más arriba para el uso en el tratamiento o profilaxis de enfermedades que están asociadas con la isquemia miocárdica, fallo congestivo del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma.
Además, la invención comprende compuestos como se han descrito más arriba para el uso como substancias activas terapéuticas, en particular en el contexto con enfermedades que están asociadas con la actividad de la hidrolasa de zinc tal como la isquemia miocárdica, fallo congestivo del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma.
Los compuestos de la invención pueden utilizarse en el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la isquemia miocárdica, fallo congestivo del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, el cual método comprende la administración de un compuesto como se ha definido más arriba a un ser humano o animal.
Los compuestos como se ha definido más arriba pueden utilizarse para la inhibición de la actividad de la zinc hidrolasa.
La invención se refiere también a un procedimiento para la preparación de un compuesto como se ha definido más arriba, que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (III)
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en donde R^{1}, R^{2} y X son como se ha definido más arriba y A es un grupo protector de HS-, con:
a) HNR^{3}NR^{4}R^{5} para la introducción de una hidrazida: ó
b) HNR^{3}NR^{4}R^{5} con R^{5} como grupo protector, seguido por la conversión o introducción de R^{3} y R^{4};
seguido opcionalmente por la conversión del R^{5} y/o del grupo R^{2}-X en un R^{5} diferente y/o un grupo R^{2}-X y/o la desprotección y/o la liberación del tiol y en donde R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se ha definido más arriba.
La invención se refiere también a los compuestos de más arriba siempre que estén elaborados mediante uno de los procedimientos descritos.
Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse por métodos ya conocidos en la especialidad o como se describen más adelante.
A no ser que se indique otra cosa, los substituyentes R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, y X son como se ha descrito más arriba.
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Esquema 1
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El paso a) del esquema 1 describe la persilación de los grupos hidroxilo y amino, p. ej., por reacción del compuesto 1 con el hexametildisilazano/140ºC seguido por la reacción con R^{2}SO_{2}Cl en THF o la conversión a todos los otros R^{2}X descritos más tarde ó di-t-butildicarbonato/NaHCO_{3} en dioxano/H_{2}O (protección con BOC). Para la inversión de la configuración (vía mesilato) el alcohol 2 resultante se trata con MeSO_{3}H/Ph_{3}P/DIAD en tolueno (temperatura ambiente a 80ºC) ó (vía bromuro) con LiBr/DIAD/Ph_{3}P en THF (4ºC a temperatura ambiente) ó (vía cloruro) con Ph_{3}P/CCl_{4} en CH_{2}Cl_{2} (3ºC a temperatura ambiente). En caso de retención de la configuración (vía mesilato) el alcohol 2 puede ser
transformado a un compuesto de fórmula 3 por reacción con MeSO_{2}Cl/piridina/DMAP (0ºC a temperatura ambiente).
Para la introducción de un grupo tiol protegido, los compuestos de fórmula 3 se tratan con p. ej., trifenilmetanotiol ó 4-metoxibencilmercaptano y K-Ot-Bu en DMF (para Br: 0ºC a temperatura ambiente; para Cl: 0ºC; para el mesilato: temperatura ambiente a 100ºC). La hidrólisis del éster 4 con LiOH en THF (0ºC a TA) da el ácido 5.
La síntesis de los compuestos finales se muestra en el esquema 2:
La síntesis empieza con una preactivación af del ácido 1a (N-hidroxi-2-piridona, N,N-diciclohexilcarbodiimida, 4-etilmorfolina en CH_{2}Cl_{2} a TA) seguido por la reacción con una alquil-hidrazina (NHR^{3}NHR^{4}) (paso a) o para la hidrazida del ácido carboxílico 2 (R^{3}, R^{4}, R^{5} = H), éster 1b es tratado directamente con hidrazina (NH_{2}NH_{2}.H_{2}O) en EtOH (a TA). La conversión en el tiol libre 3 se hace de la siguiente manera: en el caso de que el PG (grupo de protección) sea el Tr, mediante reacción con p. ej., TFA/Et_{3}SiH, de 0ºC a temperatura ambiente, y en el caso de que el PG sea el PMB, mediante reacción con p. ej., TFA/Et_{3}SiH, de 0 a 80ºC (paso b).
En el caso de la hidrazida del ácido carboxílico 2 (R^{3}, R^{4}, R^{5} = H), R^{4} se introduce mediante una aminación reductora: la formación de imina con un aldehido en EtOH seguida de la reducción con NaBH_{3}CN en THF da el compuesto 4 (paso c). Para la introducción de un nuevo R^{5} en el caso de que R^{4} sea un alquilo (R^{5} = H), la reacción con ClCOR^{5}, ClCO_{2}R^{5} ó ClSO_{2} R^{5} ó ClSO_{2}NR^{5}, iPr_{2}NEt ó base Huenig CH_{2}Cl_{2} en presencia de una cantidad catalítica de DMAP ó poli-DMAP ó R^{5}NCO en THF a temperatura ambiente da el compuesto 4 el cual se desprotege para dar el tiol final 5, como se describe más arriba (paso c y b).
La desprotección selectiva del BOC del compuesto 2 ó 4 (TFA, CH_{2}Cl_{2} a 0ºC), seguida por la reacción con ClCO_{2}R^{2}, NEM ó iPr_{2}NEt, CH_{2}Cl_{2} ó R^{2}NCO en THF a 0ºC a temperatura ambiente (o conversión a todos los otros R^{2}X descritos para R^{5}-introducción más arriba) da el compuesto 7 (paso e). La desprotección del tiol como se describe más arriba da el tiol final 8 (paso b).
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Esquema 2
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El esquema 3 muestra un camino distinto para la síntesis de las hidrazidas.
La preactivación del ácido 1 (N-hidroxi-2-piridona, N,N-diciclohexilcarbodiimida, 4-etilmorfolina en CH_{2}Cl_{2} a TA), seguida por la reacción con un éster bencílico del ácido alquil-hidrazincarboxílico (NHR^{3}NHR^{4}) (paso a), da la hidrazida 2 la cual se convierte con HBr en AcOH a 0ºC para dar el 3 (paso b). También es posible la conversión directa de 1 a 3 con preactivación y reacción con NHR^{3}NHR^{4}R^{5} (paso c). La introducción de un nuevo R^{3} se hace con un R^{3}-haluro/NaH en DMF (de 0ºC a TA; ->4, paso e). La desprotección para dar el tiol 5 se hace de la siguiente manera: en caso de que PG sea Tr, por reacción con p. ej., TFA/Et_{3}SiH de 0ºC a temperatura ambiente, o en caso de que PG sea PMB, por reacción con p. ej., TFA/Et_{3}SiH, de 0 a 80ºC (paso d).
Esquema 3
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El esquema 4 muestra otra vía para la síntesis de las hidrazidas.
Preactivación del ácido 1 (N-hidroxi-2-piridona, N,N-diciclohexilcarbodiimida, 4-etilmorfolina en CH_{2}Cl_{2} a TA), seguida por la reacción con un 2-alquil-hidrazincarboxilato de terc-butilo (NHR^{3}NHBOC) (paso a) da la hidrazida 2 la cual por tratamiento con trietilsilano en TFA de 0 a 80ºC da el tiol 3 (paso b). La alquilación con haluro de alquilo (R^{5}-haluro) y DMF con NaH como base (de 0ºC a TA) da como resultado el compuesto 4 el cual da después de la desprotección Et_{3}SiH/TFA (como se ha descrito en el esquema 1), el tiol 5 (paso c, d).
La desprotección selectiva del BOC (TFA en CH_{2}Cl_{2} -> 6) seguida de la reacción con ClCO_{2}R^{4}, ClSO_{2}R^{4}, iPr_{2}NEt ó NEM en CH_{2}Cl_{2}, en presencia de una cantidad catalítica de DMAP ó poli-DMAP a temperatura ambiente, da los compuestos 7 (R^{4} = R^{5}) y 8, los cuales se separan y desprotegen (Et_{3}SiH/TFA como se describe en el esquema 1) para dar tiol 5 (paso e, f y d). La hidrazida 8 no completamente substituida puede ser después alquilada (R^{5}-haluro y DMF/NaH, 0ºC a TA) y desprotegida (Et_{3}SiH/TFA como se ha descrito en el esquema 1) para dar el tiol 5 
\hbox{(paso g y d).}
Esquema 4
8 
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El esquema 5 muestra la posterior transformación de la hidrazida 1. La acilación con el cloruro de \gamma-bromo-alcanoilo en presencia de iPr_{2}EtN en THF (0ºC a TA) da el compuesto 2 el cual se cicla (NaH en DMF a TA). La separación de los dos isómeros y la desprotección del tiol (Et_{3}SiH/TFA como se describe en el esquema 1), da las hidrazidas 3 y 4.
Esquema 5
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Para la preparación de los compuestos de fórmula 5, puede seguirse la ruta de reacción del esquema 6: la síntesis del material de partida 1 a partir de la hidroxiprolina se describe en el esquema 1. La desprotección con TFA/tri-isopropilo, a reflujo durante 30 minutos da el tiol 2 que está unido a la resina. El R^{2}X final se introduce bien al principio o bien después de las manipulaciones con NR^{3}NR^{4}R^{5} (esquema 9). En el segundo caso, el R^{2}X (=BOC) del ácido de partida 1, se transforma por métodos ya conocidos en la técnica, y descritos por ejemplo en "The practice of Peptide Synthesis" ("Práctica de la síntesis de péptidos"), M. Bodaszky y A. Bodanzky, Editorial Springer, Berlin, 1984, en un grupo protector no ácido lábil (p. ej., R^{2}X = FMOC, paso a: en primer lugar, desprotección selectiva del BOC con 40% de TFA en CH_{2}Cl_{2} a TA, seguido por la reacción con Fmoc-OSu en dioxano/agua y NaHCO_{3} como base).
Esquema 6
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La resina se prepara como sigue (paso b): El engarce ácido 4-(\alpha,\alpha-difenilhidroximetil)benzoico, se activa empleando TPTU, DIEA en DMF y se añade a la resina de benzidrilamina 3. La resina se trata a continuación con tiol 2 en CH_{2}Cl_{2}/TFA para el material de partida 5 cargado de resina.
Esquema 7
11
La síntesis de los compuestos finales sobre la resina 1 se muestra en el esquema 7: la síntesis comienza con una preactivación del ácido 1 (TPTU, base Huenig en DMF a TA) seguido por la reacción con una alquil-hidrazina (NH_{2}NHR^{4}) (paso a) para dar los productos intermediarios 2a, 2b ó 4 (R^{3}, R^{4}, R^{5} = H, paso c). La separación de la resina del tiol libre 3 se hace con TFA/iPr_{3}SiH en CH_{2}Cl_{2} a TA (paso b). En el caso de la hidracida del ácido carboxílico 4, la introducción de un nuevo R^{5} se hace por reacción con ClCOR^{5}, ClCO_{2}R^{5}, ClSO_{2} R^{5} ó ClSO_{2}NR^{5}, en DMF para dar el compuesto 2 el cual está opcionalmente alquilado (alquil haluro/DBU en DMF) para dar la hidrazida disubstituida 6 (paso d y f). La separación de la resina como se ha descrito más arriba da el tiol final 3. En el caso de la reacción de la hidrazida 4 con ClSO_{2}R^{5}, tiene lugar la doble sulfonación para dar el compuesto 2a y 2b (paso d), estos compuestos pueden separarse después de la separación de la resina como el correspondiente tiol 3.
Si R^{2}X es FMOC: desprotección del compuesto 2 (20% de piperidina/DMF, a continuación reacción con ClCO_{2}R^{2}, piridina, DMF ó R^{2}NCO en DMF a TA o conversión a todos los otros R^{2}X, descritos para la introducción del R^{4} más arriba) da el compuesto 5 (paso e). La alquilación (alquil haluro/DBU en DMF) y desprotección de la resina como se ha descrito más arriba, da el tiol final 3 (paso f y b).
La capacidad de los compuestos de fórmula (I) para inhibir la actividad metaloproteasa, particularmente la actividad zinc hidrolasa, puede demostrarse mediante diferentes ensayos in vitro e in vivo ya conocidos por los expertos en la especialidad.
A) Cultivo de células
Se cultivó una línea celular estable endotelial de la vena umbilical humana (ECV304) en "fábricas de células" hasta la confluencia, como se ha descrito en (Schweitzer y col. 1997, Biochem. J. 328: 871-878). Las células confluyentes se separaron con una solución de tripsina/EDTA y se recogieron mediante centrifugación a baja velocidad. La píldora celular se lavó una vez con solución salina tamponada con fosfato de pH 7,0 y se guardó a -80ºC hasta el momento de ser empleada.
B) Solubilización de la ECE a partir de células ECV304
Todos los procedimientos se efectuaron a 0-4ºC si no se especificó otra cosa. La píldora de células con 1 x 10^{9} células, se suspendió en 50 ml de tampón A (Tris 20 mM/HCl, pH 7,5 conteniendo 5 mM de MgCl_{2}, 100 \muM de PMSF, 20 \muM de E64, 20 \muM de leupeptina) y se trató con ultrasonidos, El homogeneizado celular resultante, se centrifugó a 100.000 g_{av} durante 60 minutos. El sobrenadante se retiró y la píldora de membrana resultante se homogeneizó en 50 ml de tampón A y se centrifugó como se ha descrito. El lavado de la fracción de membrana en tampón A se repitió dos veces. La preparación de membrana final se homogeneizó en 50 ml de tampón B (tampón A +0,5% de Tween 20 (v/v) 0,5% de CHAPS (p/v), 0,5% de digitonina (p/v) y se agitó a 4ºC durante 2 horas. A continuación los fragmentos de membrana restantes, fueron sedimentados como se ha descrito. El sobrenadante transparente resultante que contenía la ECE solubilizada se almacenó en alícuotas de 1,0 ml a -120ºC hasta su empleo.
C) Ensayo con ECE
El ensayó midió la producción de ET-1 a partir de la gran ET-1. Para medir los altos números de muestras se ideó un ensayo realizado en placas de 96 pocillos. Se efectuó la reacción de la enzima y la detección radioinmunológica de la ET-1 producida en el mismo pocillo, usando una técnica de recubrimiento específicamente desarrollada y optimizada.
D) Placas de recubrimiento
Placas Fluoronunc Maxisorp White (código 437796) de 96 pocillos, se irradiaron con 1 julio durante 30 minutos en un UV Stratalinker 2400 (Stratagene). Las placas de 96 pocillos se llenaron a continuación con 300 \mul de solución de proteína A (2 \mug/ml en Na_{2}CO_{3} 0,1 M pH 9,5) por pocillo y se incubaron durante 48 horas a 4ºC. Las placas recubiertas pueden guardarse hasta 3 semanas, antes de ser utilizadas.
Antes de ser utilizadas, se vació la solución de proteína A y las placas se bloquearon durante 2 horas a 4ºC con 0,5% de BSA en Na_{2}CO_{3} 0,1 M pH 9,5.
Las placas se lavaron con agua bidestilada con lo cual quedaron listas para realizar el ensayo ECE.
E) Ensayo de selección
Los compuestos del ensayo se disuelven y diluyen en DMSO. Se colocaron 10 \mul de DMSO en los pocillos, seguido de 125 \mul de tampón de ensayo (50 mM de Tris/HCl, pH 7,0, 1 \muM de Thiorphan, 0,1% de NaN_{3}, 0,1% de BSA) que contenía 200 ng de la gran ET-1. La reacción de la enzima comenzó por la adición de 50 \mul de ECE solubilizada (diluida en tampón de ensayo 1:30 a 1:60 veces (v/v)). La reacción de la enzima se efectuó durante 30 minutos a 37ºC. La reacción enzimática se interrumpió mediante la adición de 10 \mul de ETDA 150 mM, pH 7,0.
Radioinmunoensayo
El ET-1 RIA se efectuó principalmente como se ha descrito anteriormente (Löffler, B.-M. y Maire, J.-P. 1994, Endothelium I: 273-286). A las placas que contenían la mezcla de reacción enzimática parada con EDTA, se añadieron 25 \mul de tampón de ensayo que contenía 20000 cpm (3-(^{125}I)Tyr)-endotelina-1 y 25 \mul de antisuero AS-3 específico de la ET (dilución en el tampón de ensayo 1:1000). Las placas se incubaron con agitación, a 4ºC durante la noche. A continuación, la fase líquida se aspiró con un lavador de placas y las placas se lavaron una vez con agua bidestilada. A las placas lavadas se añadieron 200 \mul de un preparado para centelleo (Microscint 40 LSC-Cocktail, de Packard, código 6013641), y las placas se contaron durante 2 minutos por pocillo en un Topcount.
Se prepararon las curvas estándar en placas con ET-1 sintético, con concentraciones finales de 0 a 3000 pg de ET-1 por pocillo. En todos los controles de placas para una actividad máxima de ECE (en presencia de 10 \mul de DEMO) y para la producción de fondo de ET-1, se realizó la inmunoreactividad (en presencia de 10 mM de EDTA ó 100 \muM de fosforamidón). Los ensayos fueron efectuados por triplicado.
F) Ensayo cinético
El formato del ensayo descrito podría ser empleado para determinar las características cinéticas de la preparación empleada de ECE así como también de diferentes inhibidores de la ECE (es decir Km, Ki), mediante la variación de la concentración del substrato usado en el ensayo.
G) Ensayo de la ECE basado en las células
La ECE-1c humana fue estable expresada en células MDCK como se describe (Schweizer y col., 1997, Biochem. J. 328: 871-878). Las células fueron cultivadas en placas de 24 pocillos hasta la confluencia, en el medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% (v/v) de suero fetal bovino (FBS), 0,8 mg/ml de geneticina, 100 u.i./ml de penicilina y 100 \mug/ml de estreptomicina en una atmósfera de aire/CO_{2} (19:1) humidificado. Antes del ensayo de la ECE, el medio se substituyó por 0,5 ml de DMEM-HBSS 1:1, 10 mM de HEPES pH 7,0 suplementado con 0,1% (p/v) de BSA. Los inhibidores se añadieron en DMSO a una concentración final de 1%. La reacción de la enzima se puso en marcha mediante la adición de 0,42 \muM de gran ET-1 humana y se realizó durante 1,5 horas a 37ºC en una incubadora. Al final de la incubación, el medio de incubación se retiró rápidamente y se analizaron alícuotas mediante radioinmunoensayo para la ET-1 producida, como se ha descrito más arriba.
El ensayo de selección de la ECE se validó mediante la medición de las constantes características del inhibidor del fosforamidón (IC_{50} 0,8 \pm 0,2 \muM) y CGS 314447 (IC_{50} 20 \pm 4 nM) [De Lombaert, Stephane; Stamford, Lisa B.; Blanchard, Louis; Tan, Jenny; Hoyer, Denton; Diefenbacher, Clive G.; Wei, Dongchu; Wallace, Eli M.; Moskal, Michael A.; y col., Potentes inhibidores duales no peptídicos de la enzima convertidora de la endotelina y la endopeptidasa neutra 24.11. Bioorg. Med. Chem. Lett. (1997), 7(8), 1059-1064]. Los dos inhibidores se midieron con los valores IC_{50} no significativamente diferentes de los descritos en la literatura pero medidos con diferentes protocolos de ensayo. En el ensayo basado en las células, el fosforamidón mostró un IC_{50} de 4 \muM. Este ensayo dio una información adicional acerca de la potencia inhibidora de los inhibidores bajo condiciones mucho más fisiológicas, como p. ej., el ECE se incrustó en un ambiente normal de la membrana del plasma. Es importante citar que el ensayo de selección se efectuó en presencia de 1 \muM de Tiorphan para bloquear cualquier potencial degradación de la gran ET-1 debida a la acción del NEP24.11. Ninguna actividad NEP estuvo presente en las células transfectadas MDCK-ECE-1c en los experimentos preliminares cuando la producción de ET-1 se midió en presencia o ausencia de tiorphan. En los experimentos subsiguientes no se añadió thiorphan al medio de incubación.
De acuerdo con los métodos de más arriba, los compuestos de la presente invención muestran valores IC_{50} en el radioinmunoensayo (E sobre inhibición ECE) desde aproximadamente 50 nM hasta aproximadamente 1000 \muM. Los compuestos preferidos muestran valores de 50 nM a 1 \muM.
Como se ha mencionado anteriormente, los medicamentos que contienen un compuesto de fórmula I son también objeto de la presente invención, así como también un procedimiento para la elaboración de dichos medicamentos, el cual procedimiento comprende la utilización de uno o más compuestos de fórmula I, y si se desea, de uno o más distintas substancias terapéuticamente valiosa, en una forma de administración galénica.
Las composiciones farmacéuticas pueden ser administradas oralmente, por ejemplo en forma de comprimidos, comprimidos lacados, grageas, cápsulas de gelatina dura o blanda, soluciones, emulsiones o suspensiones. La administración puede también efectuarse por vía rectal por ejemplo empleando supositorios; por vía local o percutánea, por ejemplo empleando ungüentos, cremas, geles o soluciones; o parentalmente, por ejemplo, usando soluciones inyectables.
Para la preparación de comprimidos, comprimidos lacados, grageas o cápsulas de gelatina dura, los compuestos de la presente invención pueden mezclarse con excipientes farmacéuticamente inertes, inorgánicos u orgánicos. Ejemplos de excipientes adecuados para comprimidos, grageas o cápsulas de gelatina dura, incluyen la lactosa, almidón de maíz o derivados de los mismos, talco, ácido esteárico o sales de los mismos.
Excipientes adecuados para emplear con cápsulas de gelatina blanda incluyen por ejemplo los aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semi-sólidos o líquidos, etc.; de acuerdo con la naturaleza de los ingredientes activos puede llegar el caso, sin embargo, de que no sea necesaria la utilización de ningún excipiente en absoluto para las cápsulas de gelatina blanda.
Para la preparación de soluciones y jarabes, los excipientes que pueden emplearse incluyen por ejemplo, el agua, polioles, sacarosa, azúcar invertido y glucosa.
Para las soluciones inyectables, los excipientes que pueden utilizarse, incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicerina y aceites vegetales.
Para los supositorios y aplicación local o percutánea, los excipientes que pueden emplearse incluyen por ejemplo aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas y polioles semisólidos o líquidos.
Las composiciones farmacéuticas pueden contener también, agentes conservantes antioxidantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, odorantes, sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de recubrimiento o antioxidantes. Pueden también contener otros agentes terapéuticos valiosos.
Las dosificaciones en las cuales se administran los compuestos de fórmula I en cantidades efectivas, dependen de la naturaleza del ingrediente activo específico, la edad y necesidades del paciente y el modo de aplicación. En general, entran en consideración, dosificaciones de 0,1-100 mg/kg de peso corporal por día, aunque el límite superior indicado puede sobrepasarse cuando se demuestra que está indicado.
Los ejemplos específicos siguientes, se exponen como guía para ayudar en la puesta en práctica de la invención, y no pretenden ser una limitación del ámbito de la invención.
Ejemplos Observaciones generales
Todas las reacciones se efectuaron en atmósfera de argón.
Abreviaturas EtOH etanol, THF tetrahidrofurano, Et_{2}O dietiléter, MeOH metanol, CH_{2}Cl_{2}, EDCI hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida, HOBT 1-hidroxibenzotriazol, DBU 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno(1,5-5), LAH hidruro de aluminio y litio, LDA diisopropilamida de litio, DEAD azodicarboxilato de dietilo, DIAD azodicarboxilato de diisopropilo, DMAP 4-dimetilaminopiridina, DMAP-poli-4-(N-bencil-N-metilamino)piridina, (poliestireno basado 2% de DVC, aprox. 1,6 mmoles "DMAP"/g de resina) soportado por polímero, NEM N-etilmorfolina, NMM N-metilmorfolina, TBAF fluoruro de tetrabutilamonio, DIEA dietilamina, DMF dimetilformamida, TFA ácido trifluoroacético, TPTU tetra-fluoroborato de 2-(2-piridon-1-il)-1,1,3,3-tetrametil uronio, base Huenigs iPr_{2}NEt ó N-etildiisopropilamina, FMOC-OSu éster 9-fluorenilmetil-oxicarbonil-N-hidroxisuccinimido.
Ejemplo 1 Materiales de partida (Ésteres-esquema 1)
40 g (220 mmoles) de hidrocloruro del éster metílico de la L-hidroxiprolina (dos veces suspendido en tolueno y evaporado a presión reducida para eliminar el agua), se suspendieron en 600 ml de hexametildisilazano y se calentaron a reflujo durante 2 horas. La solución se evaporó a presión reducida y se disolvió en 100 ml de THF. Se añadieron lentamente 49,9 g (220 mmoles) de cloruro de 2-naftalen-sulfonilo en 200 ml de THF, y se agitaron lentamente durante 16 horas a TA. Se añadieron 150 ml de H_{2}O y después de 1 hora los disolventes se evaporaron. El residuo se repartió en agua/acetato de etilo (3x), las fases orgánicas se lavaron con NaCl 10% y se secaron con Na_{2}SO_{4} para dar 60,4
g (82%) del éster metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, EM: 335 (M^{+}).
Esquema 1
12
Análogamente:
El hidrocloruro del éster bencílico de la L-hidroxi-prolina, y el cloruro de 1-naftalensulfonilo, dieron el éster bencílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, EM: 411 (MH^{+});
El hidrocloruro del éster bencílico de la L-hidroxi-prolina, y el cloruro de metansulfonilo, dieron el éster bencílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, p.f. 132-133ºC, EM: 300 (MH^{+});
El hidrocloruro del éster metílico de la L-hidroxi-prolina, y el cloruro de metansulfonilo, dieron después de la extracción con CH_{2}Cl_{2}, el éster metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-metansulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, p. f. 115,5-117ºC, EM: 164 (M-COOMe).
Vía mesilato: Una solución bifásica de 13,9 ml (215 mmoles) de ácido metansulfónico, 29,8 ml (215 mmoles) de trietilamina y 58,7 g (224 mmoles) de trifenilfosfina en 150 ml de tolueno, se añadieron a una suspensión de 60 g (179 mmoles) del éster metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 300 ml de tolueno el cual se agitó mecánicamente. Después de añadir 44,9 ml (233 mmoles) de azodicarboxilato de diisopropilo (¡exotérmico!), se calentó la solución durante 2,5 horas a 80ºC. Se añadieron 300 ml de agua a TA y se extrajeron con acetato de etilo (3 x 300 ml). La fase orgánica se lavó con KHSO_{4} acuoso al 10% (2 x 100 ml), NaCl 10% (2 x 150 ml), se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó para dar 180 g de producto crudo. La cromatografía flash (acetato de etilo/hexano 1:1) dio 63,7 g (86%) del éster metílico del ácido (4S,2S)-4-metansulfoniloxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico.
64,2 g (167 mmoles) de trifenilmetantiol se añadieron lentamente a TA a una solución de 17,9 g (160 mmoles) de terc-butilato de potasio en 300 ml de DMF y se agitaron mecánicamente durante 30 minutos. A continuación, se añadieron 63 g (152 mmoles) del éster metílico del ácido (4S,2S)-4-metansulfoniloxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 300 ml de DMF a 20ºC mediante enfriamiento al final con un baño de hielo. La reacción se calentó durante 1,3 horas a 100ºC, se enfrió, se evaporó a 400 ml y se extrajo con 250 ml de NH_{4}Cl acuoso saturado/acetato de etilo (3 x 300). Las fases orgánicas se lavaron con NaCl acuoso 10%, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. La cromatografía flash (CH_{2}Cl_{2}/MeOH 99:1) dio 58,6 g (65%, isómero (2S,4R)/(2R,4R) aproximadamente 4:1, ^{1}H-RMN) y 9,2 g (10%, isómero (2S,4R)/(2R,4R) aproximadamente 1:1, ^{1}H-RMN) del éster metílico del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, EM: 594 (MH^{+}).
Análogamente:
El éster metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-metan-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico dio después de 3,75 horas a 80ºC el éster metílico del ácido (4S,2S)-4-metansulfoniloxi-1-(metilsulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, el cual se calentó durante 45 minutos a 100ºC con el trifenilmetan-tiolato para dar el éster metílico del ácido (2S,4R)-1-metansulfonil-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico isómero (2S,4R)/(2R,4R) aproximadamente 9:1, ^{1}H-RMN), EM: 482 (MH^{+}).
El éster bencílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-metansulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico dio después de 5 horas a 80ºC, el éster bencílico del ácido (2S,4S)-1-metansulfonil-4-metansulfoniloxi-pirrolidin-2-carboxílico, el cual se calentó durante 30 minutos con el 4-metoxibenciltiol/terc-butilato de potasio para dar el éster bencílico del ácido (2S,4S)-1-metansulfonil-4-metansulfoniloxi-pirrolidin-2-carboxílico, p.f. 91-92ºC, EM: 453 (M+NH4^{+}).
Vía bromuro: A una solución de 76,5 g (291,6 mmoles, 6 equiv) de trifenilfosfina en 650 ml de THF, se añadieron 44,6 ml (286,8 mmoles, 5,9 equiv) de DEAD en 70 ml de THF a una temperatura entre 1,5-4,5ºC durante un tiempo de 0,5 horas. La solución se agitó durante 0,5 horas antes de añadir 42,2 g (486,1 mmoles, 10 equiv) de LiBr, y la mezcla de reacción se enfrió de nuevo a 4ºC durante la adición de 20 g (48,6 mmoles) de éster bencílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico en 75 ml de THF. Después de agitar a TA durante 3 horas, se añadió agua, y la suspensión se concentró y redisolvió en 700 ml de acetato de etilo y agua. Las capas se separaron, la capa inorgánica se extrajo con 100 ml de acetato de etilo (3x), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con MgSO_{4} y se evaporaron. Se separó el óxido de trifenilfosfina por cristalización con acetato de etilo/hexano y las aguas madres se purificaron mediante cromatografía de columna sobre silica gel con hexano: acetato de etilo 3:1 obteniéndose 13,4 g (62%) del éster bencílico del ácido (2S,4S)-4-bromo-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido incoloro, p.f. 97-98ºC, EM: 473 (MH^{+}).
3,58 g (30,1 mmoles, 1,1 equiv.) de terc-butilato de potasio en 150 ml de DMF, se trataron con 4,4 ml (31,5 mmoles, 1,15 equiv.) de 4-metoxibencil mercaptano a 0ºC. La solución se agitó a TA durante 1 hora antes de añadir 12,99 g (27,4 mmoles) del éster bencílico del ácido (2S,4S)-4-bromo-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico en 100 ml de DMF. La reacción se agitó a TA durante la noche, la DMF se separó al vacío, y el residuo se redisolvió en acetato de etilo y KHSO_{4} acuoso 1M. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con sal muera, se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó. El aceite crudo se purificó mediante cromatografía flash sobre silica gel con hexano/acetato de etilo (3:1-2:1) como eluyente, obteniéndose 7,23 g (48%) del éster bencílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(nafta-
lene-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color amarillo claro, p.f. 90-91ºC, EM: 547 (M^{+}).
Análogamente:
El éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-pirrolidin-1,2-dicarboxílico, con 4-meto-xibenciltiol/terc-butilato de potasio, dieron el éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1,2-dicarboxílico. EM: 382 (MH^{+}).
El éster metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, con 4-metoxi-benciltiol/terc-butilato de potasio, dieron el éster metílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un aceite incoloro, EM: 472 (MH^{+}).
Vía cloruro: Éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4R)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico: la síntesis del intermediario de la presente invención es ya conocida en la técnica y está descrita por ejemplo en la Solicitud de Patente Internacional WO 9820001 y la Publicación de la Solicitud de la Patente Europea nº EP-A-696593).
Una solución de 374 g (1,48 moles) del éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-pirrolidin-1,2-dicarboxílico, en 1,61 de CH_{2}Cl_{2}, se trató con 680 g (2,6 moles) de trifenilfosfina, se enfrió a 3-5ºC y se trató en 10 minutos con 1,24 l (12,8 moles) de CCl_{4}, después de 2 horas a esta temperatura se interrumpió el enfriamiento, la temperatura de la reacción aumentó durante 2 horas a 35ºC. Se enfrió a 20ºC y se agitó durante otros 45 minutos. Después de la adición de 4 litros de n-heptano, la reacción se evaporó a 2,9 litros, se enfrió a 0ºC, se filtró, el residuo se trató dos veces de la misma manera, la tercera vez disolviendo el residuo de nuevo en 2 litros de CH_{2}Cl_{2}. Los disolventes se evaporaron y se filtraron a través de silica gel con hexano/terc-butil-metiléter 9:1 como eluyente. La evaporación de los disolventes dio 347 g (89%) del éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4S)-4-cloro-pirrolidin-1,2-dicarboxílico, EM: 246 (MH^{+}).
Una solución de 76 g (0,68 moles) de terc-butilato de potasio en 1,5 litros de DMF se enfrió (-3ºC) y se trató lentamente (1,5 horas) con 202 g (0,73 moles) de trifenilmetanotiol en 0,8 litros de DMF (máximo a 1ºC). Después de 2,5 horas a 0ºC, se añadió una solución de 161 g (0,61 moles) del éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4S)-4-cloro-pirrolidin-1,2-dicarboxílico en 0,35 litros de DMF. La reacción se agitó durante la noche a 2ºC, se evaporó, se disolvió en 1,5 litros de acetato de etilo, se vertió en 2,7 litros de solución saturada de NH_{4}Cl y se extrajo con acetato de etilo (2x). La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó. La HPLC sobre silica gel con hexano/acetato de etilo (95:5 a 7:3) dio 268 g (87%) del éster 1-terc-butílico y éster 2-metílico del ácido (2S,4R)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-1,2-dicarboxílico, EM: 504 (MH^{+}).
Ejemplo 2 Hidrólisis (esquema 1)
A una solución de 14,8 g (31,6 mmoles) del éster metílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(nafta-
len-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 950 ml de THF, se añadieron 950 ml de LiOH 0,1M (95 mmoles) a 0ºC. La solución se agitó a TA durante 2 horas, se diluyó con agua de hielo, se acidificó mediante la adición de KHSO_{4} 1M (pH 2), y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se evaporaron. El producto se cristalizó con acetato de etilo/hexano, obteniéndose 13,15 g (90%) del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido incoloro, EM: 456 (MH^{+}).
Análogamente se prepararon los siguientes compuestos:
Ácido (2S,4R)-1-metansulfonil-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una espuma de color pardo claro, EM: 466 (M-H^{-});
Éster 1-terc-butílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1,2-dicarboxílico, EM: 366 (M-H^{-}).
Se prepararon otros compuestos adicionales, de acuerdo con las siguientes referencias:
2-(isobutil)hidrazincarboxilato de terc-butilo (Faessler, Alexander; Bold, Guido; Capraro, Hans-Georg; Cozens, Robert; Mestan, Juergen; Poncioni, Bernard; Roesel, Johannes; Tintelnot-Blomley, Marina; Lang, Marc. Análogos a péptidos aza como potentes inhibidores de la proteasa del virus humano de la inmunodeficiencia tipo 1, con biodisponibilidad oral. J. Med. Chem. (1996), 39 (16), 3203-3216).
2-(metil)hidrazincarboxilato de terc-butilo (Lenman, Morag M.; Lewis, Arwel; Gani, David. Síntesis de 1,2,5-triazepin-1,5-dionas fusionadas y algunos derivados substituidos en N2 y N3: potenciales miméticos conformacionales para las cis-peptidil prolinamidas. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 (1997), edición 16, 2297-2311).
Éster bencílico del ácido N-metil-hidrazincarboxílico (Lenman, Morag M.; Lewis, Arwel; Gani, David. Síntesis de 1,2,5-triazepin-1,5-dionas fusionadas y algunos derivados substituidos en N2 y N3: potenciales miméticos conformacionales para las cis-peptidil prolinamidas. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 (1997), edición 16, 2297-2311).
Ejemplo 3 Síntesis de hidracidas
Ejemplo 3a
Secuencia A (esquema 2)
Paso 1
A una solución de 4,4 g (9,6 mmoles) de ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 200 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 1,2 g (10,8 mmoles, 1,1 equiv.) de N-hidroxi-2-piridona, seguido de 2,2 g (10,7 mmoles, 1,1 equiv.) de N,N-di-ciclohexilcarbodiimida en 25 ml de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC durante un período de 30 minutos. La suspensión se agitó durante 4 horas más a dicha temperatura antes de añadir 4,2 ml (33,0 mmoles, 3,4 equiv.) de NEM y 1,9 g (mmoles, 1,05 equiv.) de sulfato de isobutilhidrazina. La mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. La suspensión se trató con 0,55 ml (9,6 mmoles, 1,0 equiv.) de ácido acético glacial en 10 ml de agua y se agitó durante 1,5 horas, se diluyó con NaHCO_{3} acuoso diluido (5%) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución 1M de KHSO_{4}, agua y sal muera, se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó. La trituración con hexano dio un rendimiento de 5,02 g (cuantitativo) de N'-isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, la cual se sometió directamente a la siguiente reacción.
13 
\newpage
Paso 2
Se trataron 222 mg (0,42 mmoles) de N'-isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(nafta-
len-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 10 ml de TFA, con 0,68 ml(4,2 mmoles, 10 equiv.) de tri-etilsilano a 80ºC durante 90 minutos. El disolvente se evaporó al vacío y el producto crudo se purificó mediante cromatografía flash, obteniéndose 148 mg (86%) de la N'-isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color amarillo claro, EM: 408 (MH^{+}).
Análogamente se prepararon los siguientes compuestos:
A partir del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, y
b) bencilhidrazina, seguido de la desprotección: N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 442 (MH^{+});
c) p-toluensulfonilhidrazina seguido de la desprotección: N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,
4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 506 (MH^{+});
d) metilhidrazina seguido de la desprotección: N'-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 366 (MH^{+});
A partir del ácido (2S,4R)-1-metanosulfonil-4-tritil-sulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, y p-toluensulfonilhidrazina seguido de la desprotección: N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 394 (MH^{+}).
Ejemplo 3b
Secuencia B (paso 1 de la secuencia A seguido del paso 3,4-esquema 2)
Paso 3
4,3 g (3,15 mmoles) de N'-isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 450 ml de CH_{2}Cl_{2}, se trataron con 5,6 ml (32,6 mmoles, 4 equiv.) de N-etildi-isopropilamina, 3,1 g (16,3 mmoles, 2 equiv.) de cloruro de p-toluen sulfonilo, y 100 mg (0,8 mmoles, 0,1 equiv.) de DMAP a 0ºC y se agitó a TA durante la noche. Se añadieron 2,05 g (16,1 mmoles, 2 equiv.) de MeNHCH_{2}CO_{2}K, y la solución se agitó a TA durante 1 hora, se añadió solución 1 M de KHSO_{4}, y las fases se separaron. La capa orgánica se extrajo con NaHCO_{3} saturado, y las capas inorgánicas se lavaron con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se evaporaron. La purificación del residuo crudo mediante cromatografía flash con hexano:acetato de etilo 2:1 como eluyente proporcionó 2,68 g (48%) de N'-isobutil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, el cual se sometió directamente a la siguiente reacción.
Paso 4
A 2,68 g (3,9 mmoles, 1 equiv.) de la N'-iso-butil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 100 ml de TFA, se añadieron 6,2 ml (39 mmoles, 10 equiv.) de trietilsilano, y la mezcla se calentó a 80ºC durante 1,5 horas, se concentró al vacío y se redisolvió en tolueno y se evaporó. La trituración con hexano proporcionó el producto crudo que seguidamente se purificó mediante cromatografía flash con hexano:acetato de etilo 1:1 obteniéndose 1,65 g (74%) de la N'-isobutil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 562 (MH^{+}).
Análogamente, se prepararon los compuestos siguientes (pasos 1,3,4):
A partir de ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico
b) y metilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de p-toluensulfonilo y desprotección: N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 520 (MH^{+});
c) y sulfato de isobutilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de 4-t-butil-fenilsulfonilo y desprotección: N'-(4-terc-butil-bencenosulfonil)-N'-isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 604 (MH^{+});
d) y metilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N'-metansulfonil-N'-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 444 (MH^{+});
e) y sulfato de isobutilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N'-isobutil-N'-metansulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 486 (MH^{+});
f) y bencilhidracina, seguido por la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N'-bencil-N'-metan-sulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(nafta-len-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 520 (MH^{+});
g) y bencilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de p-toluensulfonilo y desprotección: N'-bencil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 596 (MH^{+}).
A partir del ácido (2S,4R)-1-metansulfonil-4-tritil-sulfanil-pirrolidin-2-carboxílico
a2) y bencilhidrazina, seguido de la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N'-bencil-N'-metan-sulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 408 (MH^{+});
b2) y sulfato de isobutilhidrazina, seguido de la re-acción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N'-isobutil-N'-metansulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido incoloro, EM: 450 (MH^{+});
c2) y sulfato de isobutilhidrazina, seguido de la re-acción con cloruro de p-toluensulfonilo y desprotección: N'-isobutil-N'-(4-metil-bencenosulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido incoloro, EM: 374 (MH^{+});
d2) y sulfato de isobutilhidrazina, seguido de la re-acción con cloruro de 4-terc-butil-bencenosulfonilo y desprotección: N'-(4-terc-butil-bencenosulfonil)-N'-isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 492 (MH^{+}).
Ejemplo 3c
Secuencia C (esquema 2)
Análogamente a la secuencia A,B (pasos 1,3), a partir del éster 1-terc-butílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1,2-dicarboxílico, y la metilhidrazina, seguido de tratamiento con cloruro de p-toluensulfónico, se obtuvo el éster 1-terc-butílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1-carboxílico, el cual se sometió directamente a la reacción siguiente.
Paso 5
2,37 g (4,3 mmoles) del éster 1-terc-butílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1-carboxílico, en 10 ml de CH_{2}Cl_{2}, se trataron con 4 ml de TFA a 0ºC y se guardaron en el congelador durante la noche. El disolvente se evaporó, el material crudo se disolvió y evaporó con tolueno (2x) y hexano (3x) obteniéndose la (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidina como sal de TFA, como producto crudo, el cual se sometió a la siguiente reacción sin previa purificación.
Paso 6
A 250 mg (0,44 mmoles, 1,0 equiv.) de (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidina-TFA en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadieron 360 \mul (2,1 mmoles, 4,8 equiv.) de N-etildiisopropilamina y 70 \mul (0,56 mmoles, 1,2 equiv.) de cloroformiato de etilo a 0ºC. La solución se agitó a TA durante la noche, se añadió KHSO_{4} 1N, las fases se separaron y la fase inorgánica se extrajo con CH_{2}Cl_{2}, la fase orgánica se lavó con KHSO_{4} 1N y sal muera, se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó.
Paso 7
El material crudo se redisolvió en 10 ml de TFA y se añadieron 700 \mul (4,4 mmoles, 10 equiv.) de tri-etilsilano a TA y la solución se agitó a 80ºC durante 70 minutos. La evaporación y cromatografía flash con hexano:acetato de etilo 1:1 seguida por la liofilización, proporcionó 149,2 mg (75%) del éster fenílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 450 (MH^{+}).
De forma similar (paso 6,7) se prepararon los siguientes compuestos:
a partir de (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidina-TFA, con cloroformiato de n-butilo,
cloroformiato de i-propilo, cloruro de sulfatillos, cloruro de ciclopropilsulfamoilo, cloruro de bencilsulfamoilo:
Éster butílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de una goma incolora, EM: 430 (MH^{+});
Éster isopropílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 416 (MH^{+});
Butilamida del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 463 (M-H)^{-};
Ciclopropilamida del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 447 (M-H)^{-};
Bencilamida del ácido (2S,4R)-2-[N'-metil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 497 (M-H)^{-}.
A partir del éster 1-terc-butílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1-carboxílico, se trató con cloroformiato de i-propilo, cloroformiato de n-butilo, cloroformiato de bencilo, cloroformiato de fenilo, cloruro de quinolin-8-sulfonilo, cloruro de tiofen-2-sulfonilo, cloruro de bencilsulfamoilo, cloruro de butil-sulfamoilo o cloruro de ciclopropilsulfamoilo de acuerdo con los protocolos (pasos 5-7) para dar los siguientes compuestos:
Éster isopropílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 458 (MH^{+});
Éster butílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 472 (MH^{+});
Éster bencílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 506 (MH^{+});
Éster fenílico del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 492 (MH^{+});
N'-isobutil-N'-(4-metil-bencil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(quinolin-8-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 563 (MH^{+});
N'-isobutil-N'-(4-metil-bencil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(tiofen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 518 (MH^{+});
Bencilamida del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, p.f. 67ºC, EM: 539 (M-H)^{-};
Butilamida del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 467 (M-H)^{-};
Ciclopropilamida del ácido (2S,4R)-2-[N'-isobutil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazinocarbonil]-4-mercapto-pirrolidin-1-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 489 (M-H)^{-}.
Ejemplo 3d
Secuencia D - Formación directa del éster (esquema 3)
Análogamente a Ruye Xing y Robert P. Hanzlik, J. Med. Chem. 1998, 41, 1344-1351, se efectuaron las siguientes reacciones:
Paso 8
A una solución de 5 g (10,6 mmoles, 1 equiv.) del éster metílico del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 20 ml de metanol, se añadieron 6,45 ml (110 mmoles, 10 equiv.) de hidrato de hidrazina y la solución se agitó a TA durante 3 días. El disolvente se evaporó, seguido por la disolución y evaporación con EtOH, éter y hexano. El sólido de color amarillo claro se secó al vacío dando la hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, p.f. 130ºC, MS: 472 (MH^{+}).
\newpage
Paso 9
150 mg (0,3 mmoles, 1,0 equiv.) de hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico en 5 ml de TFA y 0,65 ml de triisopropilsilano, se agitaron durante 3 días a TA. El disolvente se evaporó y el residuo se redisolvió en solución saturada de NaHCO_{3} : acetato de etilo, las fases se separaron y la fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y sal muera. La cromatografía de columna proporcionó 68 mg (61%) de hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 352 (MH^{+}).
Esquema 3
14
Ejemplo 3e
Secuencia E - intermediarios (esquema 3)
Análogamente a la secuencia D paso 8, se preparó el siguiente compuesto a partir del éster metílico del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, y la hidrazina hidrato:
Hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blancuzco, p.f. 172ºC, EM: 594 (MH^{+}).
Paso 10
A una suspensión de 3,0 g (5,05 mmoles) de hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tri-tilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en etanol, se añadieron 0,56 ml (5,6 mmoles, 1,1 equiv.) de benzaldehido a TA, y la mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante 3 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía flash sobre silica gel con acetato de etilo. hexano 1:1 como eluyente, obteniéndose 2,75 g (80%) de benciliden-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco, EM: 682 (MH^{+}).
Paso 11
A 2,48 g (3,64 mmoles) de benciliden-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritil-sulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, se añadieron 228,6 mg (3,64 mmoles, 1,0 equiv.) de NaBH_{3}CN en 12,4 ml de THF, seguido de 691,8 mg (3,64 mmoles, 1,0 equiv.) de ácido toluen-4-sulfónico en 8,7 ml de THF. La solución se agitó a TA durante 2 horas, se añadieron mmoles adicionales, 0,3 equiv.) de NaBH_{3}CN, y la reacción se agitó durante la noche a TA. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con sal muera, solución saturada de NaHCO_{3} y sal muera, se secó con Na_{2}SO_{4} y el disolvente se evaporó.
El residuo se disolvió en 11 ml de NaOH 1M, y 15 ml de THF y se agitó durante 1 hora, se diluyó con acetato de etilo y se añadieron 9 ml de KHSO_{4} 1M, seguido de solución al 5% de NaHCO_{3}. La solución ligeramente básica se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua y sal muera, se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó obteniéndose 2,45 g (98%) de N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 684 (MH^{+}) (análogamente a J Med Chem 1966,39,16,3213).
Análogamente, se preparó el siguiente compuesto a partir de la hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, y el 2,5-difluoro-benzaldehido:
N'-(2,5-difluoro-bencil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco.
Ejemplo 3e
Secuencia E - productos finales (esquema 3)
Paso 12
A 200 mg (0,3 mmoles) de N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en 3 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 60 \mul (0,35 mmoles, 1,2 equiv.) de N,N-diisopropiletilamina, 72,5 mg 0,35 mmoles, 1,2 equiv.) de cloruro de 4-metoxiben-censulfonilo, y 22,5 mg (0,12 equiv.) de poli-DMAP a 0ºC. La suspensión se sacudió a TA durante 3 días, se añadieron adicionalmente 25 \mul (0,15 mmoles, 0,5 equiv.) de N,N-di-isopropiletilamina, 31 mg (0,15 mmoles, 0,5 equiv.) de cloruro de 4-metoxibencensulfonilo y 22,5 mg (0,12 equiv.) de poli-DMAP, y la reacción se continuó durante un día. Después de la filtración y lavado de la resina con CH_{2}Cl_{2}, se concentró la fase orgánica y el material crudo se purificó mediante cromatografía flash obteniéndose 152 mg (61%) de la N'-bencil-N'-(4-metoxibencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, la cual se sometió directamente a la siguiente reacción.
Paso 13
A 148 mg (0,17 mmoles) de N'-bencil-N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en 3,0 ml de TFA, se añadieron 276 \mul (1,73 mmoles, 10 equiv.) de trietilsilano a 0ºC. La mezcla se agitó a TA durante 30 minutos, el disolvente se evaporó y el residuo se redisolvió en acetato de etilo, solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, las capas se separaron y la capa inorgánica se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash con un gradiente de acetato de etilo:hexano (1:1,5 a 1:1) obteniéndose 76 mg (72%) de la N'-bencil-N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco, EM: 612 (MH^{+}).
Análogamente, se prepararon los siguientes compuestos a partir de la N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico
y el cloruro de p-toluoilo, cloruro de acetilo, cloruro de p-anisoilo, seguido de la desprotección:
(b) N-bencil-N'-[4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-metil-benzoico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 560 (MH^{+}).
(c) N-acetil-N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 64ºC, EM: 484 (MH^{+}).
(d) N-bencil-N'-[4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-metoxi-benzoico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 576 (MH^{+}).
A partir de la N'-(2,5-difluoro-bencil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, y
cloruro de 2,4-difluorobenzoilo, cloruro de 2-tiofeno-carbonilo, cloruro de metanosulfonilo, cloruro de metoxibencenosulfonilo, cloruro de 2-tiofenosulfonilo, cloruro de bencenosulfanilo, cloruro de 4-fluorobencenosulfonilo:
(e) N-(2,5-difluoro-bencil)-N'-[4-mercapto-1-(nafta-len-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-hidrazida del ácido
(2S,4R)-2,4-difluoro-benzoico, en forma de una espuma de color blanco. EM: 618 (MH^{+}).
(f) N-(2,5-difluoro-bencil)-N'-[4-mercapto-1-(nafta-len-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-hidrazida del ácido
(2S,4R)-tiofen-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 588 (MH^{+}).
(g) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-metansulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 556 (MH^{+}).
(h) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 648 (MH^{+}).
(i) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-(tiofen-2-sulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 624 (MH^{+}).
(j) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-bencenosulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 618 (MH^{+}).
(k) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-(4-fluoro-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 636 (MH^{+}).
Ejemplo 3f
Síntesis de acuerdo con el esquema 4
Análogamente a la secuencia A-paso 1, a partir del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, y el éster bencílico del ácido N-metil-hidrazincarboxílico, se preparó el intermediario.
Éster bencílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxiben-cilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N-metil-hidrazincarboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blancuzco, EM: 620 (MH^{+}).
Paso 14
2,45 g (1,52 mmoles) del éster bencílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N-metil-hidrazincarboxílico, se disolvieron en 9 ml de ácido acético y se añadieron 9 ml de HBr (33% en ácido acético) a 0ºC agitados durante 4 horas a 0ºC. La solución se concentró y el residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, las capas se separaron y la capa inorgánica se extrajo con CH_{2}Cl_{2} y las fases orgánicas combinadas se lavaron con sal muera y se secaron con Na_{2}SO_{4}. El producto crudo se purificó mediante cromatografía flash con acetato de etilo:hexano 1: 1 obteniéndose 380 mg (44%) de la N-bencil-N-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 83,2ºC, EM: 576 (MH^{+}).
La desprotección de acuerdo con el esquema 2 (paso 4) dio:
N-bencil-N-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 69ºC, EM: 456 (MH^{+}).
Paso 16
180 mg (0,31 mmoles) de la N-bencil-N-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 7,5 ml de DMF, se trataron con 16,5 mg (0,34 mmoles, 1,1 equiv.) de NaH y 21 \mul (0,34 mmoles, 1,1 equiv.) de yoduro de metilo a 0ºC y, la solución se agitó durante 3 horas a TA. La solución se diluyó con agua y CH_{2}Cl_{2}. Las fases se separaron y la capa inorgánica se extrajo con CH_{2}Cl_{2}, las capas orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se evaporaron. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash con un gradiente de acetato de etilo:hexano 2:1 a acetato de etilo, obteniéndose 110 mg (60%) de la N'-bencil-N,N-dimetil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, la cual se desprotegió empleando el protocolo descrito.
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema 4
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para el esquema 2 (paso 4) para dar la N'-bencil-N,N-dimetil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 133,2ºC, EM: 470 (MH^{+}).
Ejemplo 3g
Síntesis de acuerdo con el esquema 5
Análogamente a la secuencia A-paso 1, a partir del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, y el 2-(metil)hidrazin-carboxilato de terc-butilo, se preparó el intermediario éster terc-butílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxi-bencil-sulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N'-metil-hidrazincarboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 586 (MH^{+}).
Paso 19
A 200 mg (0,34 mmoles) del éster terc-butílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N-metil-hidrazincarboxílico, en 10 ml de TFA se añadieron 0,54 ml (3,4 mmoles, 10 equiv.) de trietilsilano a TA y la solución se agitó a 80ºC durante 1 hora. El disolvente se evaporó al vacío y el material crudo se purificó mediante cromatografía flash con acetato de etilo:hexano obteniéndose 61,6 mg (40%) de la N-metil-N'-trifluoroacetil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 461 (MH^{+}).
Paso 20,21
De acuerdo con el procedimiento (esquema 4, paso 16) se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N'-metil-hidrazincarboxílico, y bromuro de bencilo, el éster terc-butílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N'-metil-N-bencil-hidrazincarboxílico, el cual se desprotegió directamente del BOC y PMB, de acuerdo con el esquema (paso 4) para dar la N-bencil-N-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un aceite incoloro, MS: 456 (MH^{+}).
Paso 22
Se trataron 2 g (3,4 mmoles) del éster terc-butílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N'-metil-hidrazincarboxílico, en 9 ml de CH_{2}Cl_{2}, con 3,4 ml de TFA durante 2 horas. La solución se concentró, se redisolvió en tolueno y se evaporó. El residuo se disolvió en acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado, las capas se separaron y la capa inorgánica se extrajo con acetato de etilo, las capas orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron obteniéndose 1,67 g (cuantitativo) de la N-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 486 (MH^{+}).
Paso 23
A 1,67 g (3,4 mmoles) de N-metil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, se añadieron 0,78 g (4,08 mmoles, 1,2 equiv.) de cloruro de toluensulfonilo, 0,7 ml (4,08 mmoles, 1,2 equiv.) de N-etil-diisopropilamina, y 106 mg (0,17 mmoles, 0,05 equiv.) de resina DMAP, seguido de 324 mg (1,7 mmoles, 0,5 equiv.) adicionales de cloruro de toluensulfonilo después de 3 días. La reacción se filtró, se añadió HCl 1M y la fase inorgánica se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía flash empleando acetato de etilo:hexano 1:2 obteniéndose 350 mg (13%) de la N-metil-N'N'-bis-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido blanco, EM: 794 (MH^{+}) y 630 mg (29%) de la N-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 640 (MH^{+}).
Estos compuestos fueron desprotegidos de acuerdo con el esquema 2 (paso 4), dando:
N-metil-N'N'-bis-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, p.f. 110ºC, EM: 674 (MH^{+}).
N-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, p.f. 103,5ºC, EM: 520 (MH^{+}).
Paso 25,26
De acuerdo con el procedimiento (esquema 4, paso 16), se preparó a partir de la N-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, y bromuro de bencilo, la N-metil-N'-bencil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, la cual fue directamente desprotegida de acuerdo con el esquema 2 (paso 4) para dar la N-metil-N'-bencil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 82,5ºC, EM: 610 (MH^{+}).
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Esquema 5
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16 
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Ejemplo 3h
Síntesis de compuestos cíclicos (esquema 6)
Paso 27
A 150 mg (0,25 mmoles) de hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, en 65 ml de THF, se añadieron 52 \mul (0,3 mmoles, 1,2 equiv) de iPr_{2}EtN y 29 \mul (0,25 mmoles) de cloruro de 4-bromobutiril a 0ºC. La solución se agitó a TA durante 2 horas, la solución se concentró y redisolvió en acetato de etilo/H_{2}O. La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo y, la fase orgánica se lavó con sal muera y se secó con Na_{2}SO_{4}. La cromatografía de columna con acetato de etilo:hexano 1:1 proporcionó 170 mg (92%) de N'-(4-bromo-butiril)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(naftalen-2-sulfonil)-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, la cual se disolvió en 120 ml de DMF y se trató con 17 mg (0,38 mmoles, 55% en aceite mineral) de NaH y la solución se agitó durante 2 horas, se concentró y se disolvió en acetato de etilo/H_{2}O. La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con sal muera y se secó con Na_{2}SO_{4}. El producto crudo se purificó mediante cromatografía de columna obteniéndose 75 mg (45%) de la (2-oxo-pirrolidin-1-il)-amida del ácido (2S,4R)-4-tritilsulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco y 40 mg (25%) de (2S,4R)-1-[4-tritil-sulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-tetrahidro-piridazin-3-ona, en forma de una espuma de color blanco. Los dos compuestos fueron tratados separadamente en TFA (2 ml/mmol de trisulfanilo) con 10 equivalentes de tri-etilsilano a 0ºC a TA, hasta que no pudo detectarse la presencia de ningún educto más, obteniéndose la (2-oxo-pirrolidin-1-il)-amida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 420 (MH^{+}) y la (2S,4R)-1-[4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-tetrahidro-piridazin-3-ona, en forma de una espuma de color blanco, EM: 420 (MH^{+}), respectivamente.
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Esquema 6
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Ejemplo 4 Síntesis en fase sólida de derivados de hidrazida Síntesis del bloque de construcción (esquema 7)
El éster 1-terc-butílico del ácido (2S,4R)-4-(4-meto-xi-bencilsulfanil)-pirrolidin-1,2-dicarboxílico (19,48 g, 53 mmoles), se trató con TFA (80 ml) en CH_{2}Cl_{2} (120 ml) durante 15 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el aceite de color rojo oscuro resultante se trituró en éter dietílico/n-hexano (1:4 v/v, 860 ml). La sal precipitada se recogió y se secó a presión reducida (18,9 g) y se empleó directamente en el próximo paso.
La sal de TFA (18,9 g, 53 mmoles) del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil)-pirrolidin-2-carboxílico, en 1,4-dioxano/H_{2}O (300 ml) conteniendo NaHCO_{3} (17,8 g, 212 mmoles), se trató con Fmoc-OSu (19,7 g, 58,3 mmoles) y se agitó magnéticamente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (400 ml) y se lavó con éter dietílico (2x). Se añadieron acetato de etilo (400 ml) y HCl (25%, 50 ml). La fase orgánica se extrajo y se lavó con H_{2}O, NaCl saturada y se secó con MgSO_{4}. La filtración y concentración a presión reducida proporcionaron una espuma
(22,5 g).
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Esquema 7
18
La espuma de más arriba (20,7 g 42,3 mmoles) se disolvió en TFA (350 ml) y se añadió triisopropilsilano (43,5 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 0,5 horas y se concentró a presión reducida. Se añadieron dietil éter (100 ml) y n-hexanos (300 ml) obteniéndose un precipitado. El sobrenadante se decantó y el precipitado se secó a presión reducida y alto vacío obteniéndose una espuma de color blanco, de ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(fluorenilmetoxicarbonil)-pirrolidin-2-carboxílico (9,6 g, EM: 370 MH^{+}).
Derivatización de la resina (esquema 8)
El engarce 4-(\alpha,\alpha-difenilhidroximetil)benzoico (18,3 g, 60 mmoles) se activó empleando TPTU (17,8 g, 60 mmoles), DIEA (30,8 ml, 180 mmoles) en DMF (absoluto, 250 ml) durante 3 minutos. La mezcla se añadió a un matraz que contenía resina de bencidrilamina (NH_{2} de carga, 0,9 mmoles/g, 44,4 g) y el matraz se sacudió durante 1 hora. La resina se recogió sobre un filtro y se lavó (3x alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter, y se secó: 54,65 g, 0,65 mmoles/g (carga referida sobre el aumento de masa).
A la resina lavada con CH_{2}Cl_{2} de más arriba (46,9 g, 30 mmoles), se añadió una mezcla de ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico (12,2 g, 36 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (absoluto, 550 ml), TFA (80 ml). La mezcla de color rojo se agitó durante 1,5 horas y a continuación, se filtró la resina, se lavó (3x, alternando CH_{2}Cl_{2}/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó: 42 g, 0,65 mmoles/g (carga basada sobre el aumento de peso).
A la resina de más arriba, lavada con CH_{2}Cl_{2} (33,5 g, 22 mmoles), se añadió una mezcla de ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(fluorenilmetoxicarbonil)-pirrolidin-2-carboxílico (9,7 g, 26 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (absoluto, 450 ml), TFA (67 ml). La mezcla de color rojo se agitó durante 1,5 horas y a continuación se filtró la resina, se lavó (3x, alternando CH_{2}Cl_{2}/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó: 42 g, 0,59 mmoles/g (carga basada sobre el aumento de peso).
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Esquema 8
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Ejemplo 5 Química paralela sobre fase sólida (esquema 9) Procedimiento típico: pasos 1,2
Resina derivatizada con ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico (0,4 g, 0,26 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto, 5 ml), TPTU (0,18 g, 0,61 mmoles), DIEA (0,21 ml, 1,21 mmoles) durante 10 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de reacción se cargó con hidrazida de benciloxicarbonilo (0,13 g, 0,77 mmoles) en DMF (absoluto, 3 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 horas y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x alternando DMF/iso-propanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
La resina (440 mg) se trató con TFA 40%/CH_{2}Cl_{2} (10 ml), triisopropilsilano (0,5 ml) durante 10 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó con ácido acético (10 ml) obteniéndose 41 mg del éster bencílico del ácido (2S,4R)-N'-[4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-hidrazincarboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 508,3 (MNa^{+}).
Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indican en la tabla 1.
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Procedimiento típico: pasos 3,2
La resina derivatizada con el ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico (0,5 g, 0,33 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto 5 ml), TPTU (0,19 g, 0,65 mmoles), DIEA (0,22 ml, 1,3 mmoles), durante 10 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con hidrazida de 4-metoxibencenosulfonilo (0,20 g, 1,00 mmoles) en DMF (absoluto, 5 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
La resina (540 g) se trató con TFA 40%/CH_{2}Cl_{2}, triisopropilsilano (0,5 ml) durante 15 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaron con ácido acético (10 ml) obteniéndose la N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 520,1 (MH^{-}).
Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1.
Procedimiento típico pasos 3,6,2
La resina derivatizada con el ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico (4,3 g, 2,75 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto 30 ml), TPTU (1,63 g, 5,50 mmoles), DIEA (1,41 ml, 8,25 mmoles), durante 15 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con toluen-4-sulfonhidrazida (1,54 g, 8,25 mmoles) en DMF (absoluto, 30 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
Un paso de alquilación típico, p. ej.
A la resina (0,8 g, 0,45 mmoles), se añadió DMF (absoluto, 10 ml), diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,08 ml, 0,54 mmoles), bromuro de 2,5-difluorobencilo (0,11 g, 0,54 mmoles), y la mezcla se agitó durante 16 horas y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
La resina (0,16 g) se trató con TFA 40%/CH_{2}Cl_{2} (10 ml), triisopropilsilano (0,5 ml) durante 15 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaron con ácido acético, obteniéndose la N'-(2,5-difluorobencil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 632,0 (MH^{+}).
Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1. Se obtuvieron también los productos disubstituidos.
Procedimiento típico: pasos 4,5,2
La resina derivatizada con el ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico (1,0 g, 0,65 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto 10 ml), TPTU (0,39 g, 1,3 mmoles), DIEA (0,45 ml, 2,6 mmoles), durante 10 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con hidrato de hidrazina (25%, 0,42 ml, 3,25 mmoles) en DMF (absoluto, 8 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
A esta resina (0,22 g, 0,14 mmoles), se añadió DMF (absoluto, 3 ml), DIEA (0,10 ml, 0,60 mmoles), cloruro de 4-fluorobencenosulfonilo (0,11 g, 0,56 mmoles), y la mezcla se agitó durante 3,5 horas y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
La resina (0,25 g) se trató con TFA 40%/CH_{2}Cl_{2} (10 ml), triisopropilsilano (0,5 ml) durante 15 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaron con ácido acético (10 ml), obteniéndose la N'-(4-fluoro-bencenosulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 510,2 (MH^{-}).
Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1.
Procedimiento típico: pasos 3,7,2
La resina derivatizada con el ácido (2S,4R)-4-sulfanil-1-(fluorenilmetoxicarbonil)-pirrolidin-2-carboxílico (20,1 g, 11,9 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto 150 ml), TPTU (7,1 g, 23,8 mmoles), DIEA (6,1 ml, 35,7 mmoles), durante 10 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con toluen-4-sulfonhidrazida (6,65 g, 35,7 mmoles) en DMF (absoluto, 100 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), DMF.
La retirada del grupo Fmoc se efectuó con piperidina 20%/DMF (2 x 5 minutos).
Siguieron las reacciones de substitución de la pirrolidina, p. ej.,
A esta resina (0,60 g, 0,30 mmoles), se añadió DMF (absoluto, 6 ml), piridina (0,12 ml, 1,50 mmoles), cloruro de 8-quinolinsulfonilo (0,08 g, 0,36 mmoles), y la mezcla se agitó durante 16 horas y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH_{2}Cl_{2}, éter y se secó.
La resina (0,25 g) se trató con TFA 40%/CH_{2}Cl_{2} (10 ml), triisopropilsilano (0,5 ml) durante 15 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaron con ácido acético (10 ml), obteniéndose la N'-(4-fluoro-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 505,3 (MH^{-}).
Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1.
100
101
102
103
104
21
22
23
26
25
24
Ejemplo A
Pueden elaborarse de una manera convencional, comprimidos conteniendo los siguientes ingredientes:
Ingredientes Por comprimido
Compuesto de fórmula I 10,0-100,0 mg
Lactosa 125,0 mg
Almidón de maíz 75,0 mg
Talco 4,0 mg
Estearato de magnesio 1,0 mg
Ejemplo B
Pueden elaborarse de una manera convencional, cápsulas conteniendo los siguientes ingredientes:
Ingredientes Por cápsula
Compuesto de fórmula I 25,0 mg
Lactosa 150,0 mg
Almidón de maíz 20,0 mg
Talco 5,0 mg
Ejemplo C
Las soluciones para inyección pueden tener la siguiente composición:
Compuesto de fórmula I 3,0 mg
Gelatina 150,0 mg
Fenol 4,7 mg
Agua para soluciones para inyección hasta 1,0 ml
Ejemplo D
500 mg de compuesto de fórmula I se suspenden en 3,5 ml de Myglyol 812 y 0,08 g de alcohol bencílico. Esta suspensión se introduce en un recipiente provisto de una válvula de dosificación. 5,0 g de freón 12 se introducen a presión en el recipiente a través de la válvula. El freón se disuelve en la mezcla de Myglyol-alcohol bencílico con agitación. Este recipiente de pulverización contiene aproximadamente unas 100 descargas simples que pueden aplicarse individualmente.

Claims (29)

1. Compuestos de fórmula general (I)
27
en donde
R^{1} es hidrógeno, alquilcarbonilo o arilcarbonilo;
R^{2} es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloalquilalquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, aminoalquilo, (mono y dialquil)aminoalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, arilalquil(alcoxicarbonil)alquilo, arilcarbonilalquilo, ariloxialquilo, aril-alquenilo, aril(alcoxicarbonil)alquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo;
R^{3} es hidrógeno, arilo, alquilo o arilalquilo, aril-sulfonilo, heteroarilsulfonilo;
R^{4} es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfonilo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NR^{3}R^{4} ó R^{5}-[N-N(R^{4})]-R^{3} forman un anillo alifático saturado o sin saturar, de 5 o 6 miembros;
R^{5} es hidrógeno, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heterociclilo, (mono o dialquilamino)-alquilcarbonilo, (mono y dialquil) aminosulfonilo, arilaminocarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo, arilalquilo, arilalcoxicarbonilo, o heteroarilo;
R^{6} es hidrógeno, alquilo, arilo o carboxialquilo;
X es -S(O)_{2}-, -S(O)_{2}-NH-, -C(O)-, -C(O)NR^{6} ó C(O)-O-;
el término "alquilo" solo o en combinación, significa un grupo de alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada conteniendo un máximo de 7 átomos de carbono;
el término "halógeno" se refiere a los grupos flúor, bromo, cloro e yodo;
el término "alquenilo" se refiere a una cadena hidrocarbúrica como se ha definido para alquilo que tiene por lo menos un doble enlace olefínico;
el término "alquinilo" se refiere a una cadena hidrocarbúrica como se ha definido para alquilo que tiene por lo menos un enlace triple olefínico;
el término "alcoxilo", solo o en combinación, significa un grupo de éter alquílico en donde el término "alquilo" tiene el significado antes indicado;
el término "halogenalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se ha definido antes que está sustituido por uno a tres átomos de halógeno;
el término "alquilcarbonilo", solo o en combinación, significa un grupo acilo derivado de un ácido alcancarboxílico, o sea grupo alquil-C(O), en donde el término "alquilo" tiene el significado antes indicado;
el término "cicloalquilo", solo o en combinación, significa un grupo hidrocarbúrico cíclico saturado con 3-8 átomos de carbono;
el término "arilo" para R2- solo o en combinación-, se refiere a un radical carbocíclico aromático, o sea un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 o 10 miembros opcionalmente sustituido por uno o mas grupos elegidos independientemente entre halógeno, alcoxicarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo y trifluormetoxilo;
el término "arilo" para R3 y R6 -solo o en combinación- se refiere a un radical carbocíclico aromático, o sea un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 o 10 miembros opcionalmente sustituido por uno o mas grupos elegidos independientemente entre halógeno, alcoxicarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, hidroxilo, alquilamido, nitro y alquilsulfonilo;
el término "arilo" para R4 -solo o en combinación-, se refiere a un radical carbocíclico aromático, o sea un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 o 10 miembros opcionalmente sustituido por uno o mas grupos elegidos independientemente entre halógeno, alcoxicarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, ciclohexilo, hidroxilo, alquilamido, nitro y alquilsulfonilo;
el término "arilo" para R5 -solo o en combinación-, se refiere a un radical carbocíclico aromático, o sea un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 o 10 miembros opcionalmente sustituido por uno o mas grupos elegidos independientemente entre halógeno, alcoxicarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, y trifluormetoxilo;
el término "arilo" en "arilcarbonilo" para R1 es un grupo arilo como se ha definido antes;
el término "heteroarilo" -solo o en combinación- se refiere a un radical mono- o bicíclico monovalente aromático que tiene 5 a 10 átomos de anillo, conteniendo uno a tres heteroatómos opcionalmente mono-, di- o tri-sustituido, independientemente, con fenilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, carboxilo o alcoxicarbonilalquilo;
el término "heterociclilo" -solo o en combinación- se refiere a un radical mono- o bicíclico monovalente no aromático que tiene 5 a 10 átomos de anillo, conteniendo uno a tres heteroátomos, opcionalmente sustituido por un grupo elegido, independientemente, entre halógeno, alquilo, alcoxilo, oxocarboxilo, alcoxicarbonilo y/o sobre un átomo de nitrógeno secundario (o sea, -NH-) por alquilo, arilalcoxicarbonilo, alquilcarbonilo o sobre un átomo de nitrógeno terciario (o sea =N-) por óxido;
y ésteres farmacéuticamente aceptables, y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
2. Compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R^{1} es hidrógeno.
3. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde R^{2} es alquilo, haloalquilo, alquilamino, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, arilo, arilalquilo, ariloxilo, arilalquilamino, arilalcoxilo, heteroarilo, amino, o (mono y dialquil)amino.
4. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde R^{2} es alquilo, haloalquilo, alquilamino, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, arilo, arilalquilo o heteroarilo.
5. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde R^{2} es arilo o heteroarilo.
6. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde R^{2} es arilo.
7. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde R^{2} es naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo.
8. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde R^{2} es naftilo, 2,3,4,5,6-pentafluorobenceno o bifenilo.
9. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde R^{3} es hidrógeno o alquilo.
10. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde R^{3} es hidrógeno.
11. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde R^{4} es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, ciclo-alquilalquilo o carboxialquilo.
12. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde R^{4} es hidrógeno, alquilo, arilalquilo, cicloalquilo, arilsulfonilo o carboxialquilo.
13. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde R^{4} es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, carboxialquilo o arilalquilo.
14. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde R^{4} es hidrógeno, alquilo o arilalquilo.
15. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en donde R^{4} es hidrógeno, 2,4,5-trifluorobencilo, 2,4-difluorobencilo, bencilo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, bencilo ó HO_{2}C-CH_{2}-, ó ciclo-alquilpropilmetilo.
16. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde R^{5} es hidrógeno, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo (mono y dialquilamino)alquilcarbonilo, (mono y dialquil)aminosulfonilo, arilalcoxicarbonilo, aril-aminocarbonilo, arilsulfonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilo o heterociclilo;
17. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en donde R^{5} es arilo, arilalquilo, arilcarbonilo, arilalcoxilo, arilaminocarbonilo, arilsulfonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilo o heterociclilo.
18. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-17, en donde R^{5} es arilsulfonilo, aril-alquilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo.
19. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en donde R^{5} es 4-metil-bencenosulfonilo, bencilo, 4-metoxibencenosulfonilo, (1H-indol-3-il) acetilo, tiofen-2-ilo, ó 3,5-dimetil-isoxyzol-4-sulfonilo.
20. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-19, en donde X es -SO_{2}-, -C(O)-.
21. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-20, en donde X es -SO_{2}-.
22. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-21, que tienen la siguiente fórmula
28
23. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-22, en donde
R^{1} es hidrógeno;
R^{2} es naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo;
R^{3} es hidrógeno o alquilo;
R^{4} es hidrógeno, alquilo o arilalquilo;
R^{5} es arilsulfonilo, arilalquilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo; y
X es -SO_{2}-.
24. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-23, seleccionados del grupo formado por
a) N'-isobutil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
b) N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
c) N'-bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
d) N'-bencil-N'-(4-metil-fenilsulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
\newpage
e) N'-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
f) N'-bencenosulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
g) N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
h) N'-[(1H-indol-3-il)-acetil]-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
i) N'-tiofen-2-sulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
j) N'-(3,5-dimetil-isoxazol-4-sulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
k) N'-ciclopropilmetil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
l) N'-(4-metil-bencenosulfonil)-N'-(2,4,5-trifluoro-bencil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
m) N'-(2,5-difluoro-bencil)-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
n) N'-isopropil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-
pirrolidin-2-carboxílico;
o) ácido (2S,4R)-[N'-[4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carbonil]-N-(4-metil-bencenosulfonil)-
hidrazino]-acético;
p) N'-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-1-(bifenil-4-sulfonil)-4-mercapto-pirrolidin-2-carboxílico;
q) N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(2,3,4,5,6-pentafluoro-bencenosulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico;
r) N'-bencil-N'-(4-metoxi-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico; y
s) N-metil-N'-(4-metil-bencenosulfonil)-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1-(naftalen-2-sulfonil)-pirrolidin-2-carboxílico.
25. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-24 y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
26. El empleo de compuestos de las reivindicaciones 1-24 como ingredientes activos en la elaboración de medicamentos para la profilaxis y tratamiento de trastornos que están causados por la actividad de la enzima convertidora de la endotelina (ECE), especialmente la isquemia miocárdica, fallo congestivo de corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma.
27. Compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, para su empleo como substancias terapéuticamente activas, en particular en el contexto con enfermedades que están asociadas con la actividad zinc hidrolasa, tales como la isquemia miocárdica, fallo congestivo de corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, arteriosclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma.
\newpage
28. Un procedimiento para la elaboración de un compuesto como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1-24, que comprende la reacción de un compuesto de fórmula III
29
en donde R^{1}, R^{2} y X son como se ha definido más arriba y A es un grupo protector HS-
a) con HNR^{3}NR^{4}R^{5} para la introducción de una hidrazida: ó
b) HNR^{3}NR^{4}R^{5} con R^{5} como grupo protector, seguido por la conversión o introducción de R^{3} y R^{4};
seguido opcionalmente por la conversión del R^{5} y/o del grupo R^{2}-X en un R^{5} diferente y/o un grupo R^{2}-X y/o la desprotección y/o la liberación del tiol y en donde R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1-21.
29. Un compuesto de las reivindicaciones 1-24 preparado de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 28.
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