ES2254238T3

ES2254238T3 - Compuestos de tiazol e imidazo(4,5-b)piridina y su uso farmaceutico.

Info

Publication number: ES2254238T3
Application number: ES00969551T
Authority: ES
Inventors: Laszlo Revesz
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1999-10-27
Filing date: 2000-10-25
Publication date: 2006-06-16
Anticipated expiration: 2020-10-25
Also published as: AU7922900A; AR029011A1; US6608072B1; JP2003512467A; CO5251463A1; EP1224185B1; DE60024480T2; DE60024480D1; WO2001030778A1; US6891039B2; ATE311385T1; EP1224185A1; US20040082604A1; PE20011039A1

Abstract

Un compuesto de fórmula II¿ en donde R4¿ es fenilo o cicloalquilo C3-C7 cada uno de los cuales está opcionalmente mono-sustituido por halógeno, alquiloC1-C4, alcoxi C1-C4, hidroxi, trihalometilo o amino opcionalmente mono- o di-alquilo(C1-C4)-sustituido, o por N heterociclilo que contiene de 5 a 7 átomos en el anillo y que opcionalmente contiene otro heteroátomo seleccionado entre O, S o N; R10 es halógeno; R3¿ es H, alquilo C1-C4, fenilo, piridilo, morfolinilo, piperidilo, piperazilo o amino opcionalmente mono- o ddi alquilo(C1, 4)-sustituido, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido, por ejemplo por hasta dos sustituyentes, seleccionados por separado entre alquilo C1-C4, halógeno, hidroxi, alcoxi C1-C4 o amino opcionalmente mono- o ddi alquilo(C1-C4)-sustituido; Z es N o CH y X¿ es -NH-Y¿-, O-o S-en donde Y¿ es -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)- o un enlace directo, y derivados ésteres profármacos del mismo que pueden convertirse por solvolisis o disociación bajo condiciones fisiológicas al compuesto de fórmula II¿ que comprende el grupo hidroxilo libre; y sales de adición de ácido del mismo.

Description

Compuestos de tiazol e imidazo[4,5-b]piridina y su uso farmacéutico.

Esta invención se refiere a compuestos heterocíclicos, en particular a tiazoles e imidazopiridinas, y a su uso para el tratamiento de enfermedades mediadas por TNF\alpha e IL-1 tal como artritis reumatoide, y enfermedades del metabolismo óseo, por ejemplo osteoporosis.

Por tanto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula II'

1

en donde

R_{4}'' es fenilo o cicloalquilo C_{3}-C_{7} cada uno de los cuales está opcionalmente mono-sustituido por halógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxi C_{1}-C_{4}, hidroxi, trihalometilo o amino opcionalmente mono- o di-alquilo(C_{1}-C_{4})-sustituido, o por N-heterociclilo que contiene de 5 a 7 átomos en el anillo y que opcionalmente contiene otro heteroátomo seleccionado entre O, S o N;

R_{10} es halógeno;

R_{3}'' es H, alquilo C_{1}-C_{4}, fenilo, piridilo, morfolinilo, piperidilo, piperazilo o amino opcionalmente mono- o di-alquilo(C_{1-4})-sustituido, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido, por ejemplo por hasta dos sustituyentes, seleccionados por separado entre alquilo C_{1}-C_{4}, halógeno, hidroxi, alcoxi C_{1}-C_{4} o amino opcionalmente mono- o di-alquilo(C_{1}-C_{4})-sustituido;

Z es N o CH y

X'' es -NH-Y''-, -O- o -S-, en donde Y' es -CH_{2}-, -CH_{2}-CH_{2}-, -CH(CH_{3})- o un enlace directo,

y derivados ésteres profármacos del mismo que pueden convertirse por solvolisis o disociación bajo condiciones fisiológicas al compuesto de fórmula II' que comprende el grupo hidroxilo libre; y sales de adición de ácido del mismo.

Tanto anteriormente como en cualquier parte de la presente descripción, los términos halo o halógeno representan I, Br, Cl o F.

Tanto anteriormente como en cualquier parte de la presente descripción, los términos tales como "heteroarilo C_{3-18}, heteroaralquilo C_{4-19} y heterocicloalquilo C_{3-18}" representan sustituyentes heteroarilo, heteroaralquilo o heterocicloalquilo que comprenden al menos 3 átomos en el anillo, al menos uno de los cuales es un heteroátomo, por ejemplo N, O o S, y que en el caso de los grupos heteroaralquilo C_{4-19} están enlazados por vía de una mitad alquileno que comprende al menos un átomo de carbono.

Con preferencia, R_{4}'' está insustituido o monosustituido por halógeno, alquilo C_{1-4} (por ejemplo, metilo), alcoxi C_{1-4} (por ejemplo, metoxi), hidroxi o CF_{3}.

Con preferencia, R_{10} es halógeno, por ejemplo F.

Con preferencia X' es -NH-Y' en donde Y' es -CH(CH_{3})-.

La invención incluye los siguientes compuestos:

4-(4-fluorfenil)-5-(2-[1-(S)-feniletil]amino-4-pirimidinil)-2-(4-metil-piperidin-1-il)tiazol;

4-(4-fluorfenil)-5-(2-[1-(S)-feniletil]amino-4-pirimidinil)-2-(4-NH-piperidin-1-il)tiazol;

4-(4-fluorfenil)2-(4-metilpiperidin-1-il)5-(2-[ciclopropil-metil]amino-4-piridinil)tiazol y

4-(4-fluorfenil)-2-(4-NH-piperidin-1-il)5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol.

Los nuevos tiazoles de la invención, en particular los compuestos de fórmula II' y los compuestos específicos indicados anteriormente, son referidos de aquí en adelante como "Agentes de la Invención".

Los Agentes de la Invención de fórmula II''

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en donde R_{3}'', R_{4}'', R_{10} y Z se definen como anteriormente y X'' es -NH-, se pueden preparar por reacción del correspondiente compuesto precursor de fórmula III o III'

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en donde R_{3}'' y R_{10} se definen como anteriormente, con el correspondiente derivado R_{4}''-NH_{2}. Por ejemplo, la reacción se puede efectuar sometiendo a reflujo los reactantes en un disolvente orgánico, por ejemplo dicloroetano, por ejemplo en presencia de dietoxitrifluorborano. A continuación, si se desea, el compuesto de fórmula I'' obtenido se puede convertir a otro compuesto de fórmula I'' o puede tratarse de cualquier otro modo, según se requiera.

El compuesto precursor de fórmula III se puede preparar mediante oxidación controlada del correspondiente 5-(2-metiltio-4-pirimidinil)-4-feniltiazol, por ejemplo empleando un agente oxidante tal como mCPBA (ácido meta-cloroperbenzoico), convenientemente en un disolvente orgánico tal como cloruro de metileno. El correspondiente compuesto 5-(4-pirimidinil/piridinil)-4-feniltiazol se puede preparar poniendo en contacto el correspondiente compuesto precursor de acetofenona de fórmula IV o IV'

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en donde R_{10} se define como anteriormente, con la correspondiente tioamida de fórmula R_{3}'C(S)NH_{2}, normalmente a temperatura elevada. Los compuestos de fórmula IV y IV' se pueden preparar por bromación de la correspondiente acetofenona, por ejemplo 2-(2-metiltio-4-pirimidinil)acetofenona. La acetofenona precursora se puede preparar por reacción de la correspondiente N-metoxi-N-metilbenzamida con la correspondiente pirimidina, por ejemplo 4-metil-2-(metiltio)pirimidina, por ejemplo en un disolvente orgánico que contiene THF con enfriamiento.

De este modo, en otro aspecto, la invención incluye un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula II''

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en donde R_{3}'', R_{4}'', R_{10} y Z se definen como anteriormente y X'' es -NH-, que comprende hacer reaccionar el correspondiente compuesto precursor de fórmula III o III'

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en donde R_{3}'' y R_{10} se definen como anteriormente, con la correspondiente amina R_{4}''-NH_{2} y a continuación, si se desea, se convierte el compuesto de fórmula II'' obtenido en otro compuesto de fórmula II'' o en un éster farmacéuticamente aceptable y disociable del mismo o en una sal de adición de ácido del mismo.

Podrá apreciarse que ciertos Agentes de la Invención pueden contener al menos un átomo de carbono asimétrico; por ejemplo, cuando Y es alquileno sustituido, por ejemplo cuando Y'' es -CH(CH_{3})- para los compuestos de la fórmula II' anterior. Los diastereómeros y enantiómeros resultantes quedan incluidos en la presente invención. Preferentemente, sin embargo, por ejemplo para uso farmacéutico de acuerdo con la invención, los compuestos de fórmula I se proporcionan en una forma epímera pura o sustancialmente pura, por ejemplo como composiciones en donde los compuestos están presentes en una forma que comprende al menos 90%, por ejemplo preferentemente al menos 95% de un solo epímero (es decir, comprendiendo menos de 10%, por ejemplo preferentemente menos de 5% de otras formas epímeras). En los ejemplos ofrecidos más adelante se describen compuestos epímeros preferidos de fórmula I.

Los Agentes de la Invención que comprenden grupos hidroxilo libres también pueden existir en forma de ésteres, por ejemplo ésteres farmacéuticamente aceptables y fisiológicamente disociables, y como tales se incluyen dentro del alcance de la invención. Tales ésteres farmacéuticamente aceptables son preferiblemente derivados de éster de profármaco, siendo convertibles estos mediante solvolisis o disociación bajo condiciones fisiológicas en los correspondientes Agentes de la Invención que comprenden grupos hidroxilo libres. Esteres de profármaco farmacéuticamente aceptables adecuados son los derivados de un ácido carboxílico, un monoéster de ácido carbónico o un ácido carbámico, ventajosamente ésteres derivados de un ácido alcanoico inferior opcionalmente sustituido o un ácido arilcarboxílico.

Los Agentes de la Invención también pueden existir en forma de sales farmacéuticamente aceptables, y como tales se incluyen dentro del alcance de la invención. Sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácidos con ácidos convencionales, por ejemplo, ácidos minerales, por ejemplo ácido clorhídrico, ácido sulfúrico o fosfórico, o ácidos orgánicos, por ejemplo ácidos carboxílicos o sulfónicos alifáticos o aromáticos, por ejemplo ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, fumárico, hidroximaleico, pirúvico, pamoico, metanosulfónico, toluenosulfónico, naftalenosulfónico, sulfanílico o ciclohexilsulfámico; y también aminoácidos, tales como arginina y lisina. Para los compuestos de la invención que tienen grupos ácidos, por ejemplo un grupo carboxi libre, las sales farmacéuticamente aceptables también representan sales metálicas o amónicas, tales como sales de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, por ejemplo sales sódicas, potásicas, magnésicas o cálcicas, así como sales amónicas, que se forman con amoníaco o aminas orgánicas adecuadas.

En los siguientes ejemplos se describe adicionalmente la síntesis de los Agentes de la Invención.

Ejemplos Ejemplo 1 4-(4-fluorfenil)-2-(piperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-pirimidinil)tiazol a) N-etoxicarbonilpiperidin-4-tiocarboxamida

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Se trata N-etoxicarbonilpiperidin-4-carboxamida (6 g, 30 mmol) en tolueno (300 ml) con reactivo de Lawesson (6,1 g, 15 mmol) a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción se evapora y se purifica por cromatografía sobre SiO_{2} (acetona/ciclohexano 20/80) para proporcionar el compuesto del título, el cual se recristaliza en hexanos (3,6 g, 52,5%).

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,28 (t, 3H); 1,72-1,83 (dq, 2H); 1,95 (d, 2H); 2,68-2,88 (m, 3H); 4,18 (q, 2H); 4,30 (bs, 2H); 6,92 (bs, 1H, NH); 7,51 (bs, 1H, NH)

MS (m/z) CI: 217 (MH+, 50); 171 (100).

b) 4-fluor-2-(2-metiltio-4-pirimidinil)acetofenona

8

Se añade n-BuLi (10 ml de una solución 1,6 M en hexano; 12 mmol) a -78ºC a una solución de diisopropilamina (2,48 ml; 17 mmol) en THF (15 ml) y se agita durante 15 minutos. Se añade gota a gota y se agita durante 30 minutos a -78ºC, 4-metil-2-(metiltio)pirimidina (2 g; 14,5 mmol) disuelta en THF (2 ml). Se disuelve 4-fluor-N-metoxi-N-metilbenzamida (2,66 g; 14,5 mmol) en THF (3 ml) y se añade lentamente a la mezcla de reacción. La mezcla se calienta a temperatura ambiente en el plazo de 45 minutos y se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4} y se evapora hasta sequedad para proporcionar 2,5 g (65%) de cristales amarillos después de la recristalización en terc-butilmetiléter/hexano.

1H-NMR (200 MHz CDCl_{3}): 3,00 (s, 3H); 6,30 (s, 1H; vinyl-H of enol); 7,00 (d, I H); 7,50 (dd, 2H); 8,20 (dd, 2H); 8,7 (d, 2H). Debido a la tautomería ceto-enol dependiente del pH, las señales pueden estar duplicadas.

c) 4-fluor-2-bromo-2-(2-metiltio-4-pirimidinil)acetofenona

9

Se añade bromo (1,22 g; 7,6 mmol) en ácido acético (5,6 ml) a una solución de 4-fluor-2-(2-metiltio-4-pirimidinil)acetofenona (2 g; 7,6 mmol) en ácido acético (40 ml). El precipitado inicialmente espeso queda casi disuelto después de 20 minutos, tras lo cual se filtra y el filtrado se evapora hasta sequedad. El residuo se recibe en una solución saturada de NaHCO_{3} y se extrae tres veces con terc-butilmetiléter. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4} y se evapora hasta sequedad para proporcionar 2,6 g (100%) de un aceite marrón, el cual se utiliza en la siguiente etapa sin purificación.

d) 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(metiltio-4-pirimidinil)tiazol

10

Se calienta Na_{2}SO_{4} (6,9 g, 40 mmol) en DMF (100 ml) a 120ºC durante 10 minutos. Se añade N-etoxicarbonilpiperidin-4-tiocarboxamida (8,6 g, 40 mmol) como un sólido y se continúa el calentamiento durante 5 minutos. Se añade rápidamente, en el plazo de 3 segundos, 2-bromo-2-(2-metiltio-4-piridimidinil)-1-(4-fluorfenil)etanona (6,8 g, 20 mmol) en DMF (20 ml) y se continúa la agitación a 120ºC durante 10 minutos. La mezcla de reacción se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra, se evapora hasta sequedad y se purifica mediante cromatografía sobre SiO_{2} (acetato de etilo/hexanos 5/95 a 10/90) para proporcionar el compuesto del título como cristales amarillos (2,2 g, 24%).

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,31 (t, 3H); 1,78-1,92 (dq, 2H); 2,21 (bd, 2H); 2,58 (s, 3H); 2,91-3,03 (bt, 2H); 3,18-3,28 (m, 1H); 4,20 (q, 2H); 4,25-4,40 (bs, 2H); 6,75 (d, 1H); 7,1 (t, 2H); 7,57 (dd, 2H); 8,31 (d, 1H).

MS (m/z) ESI: 459 (MH+,100).

e) 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(metilsulfonil-4-pirimidinil)tiazol

11

Se trata 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(metiltio-4-pirimidinil)tiazol (4,0 g, 8,7 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml) con mCPBA (70%, 2,1 g, 8,7 mmol) a 0ºC durante 15 minutos. La mezcla de reacción se vierte sobre 2 N Na_{2}CO_{3} y se extrae tres veces con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, tras lo cual se filtro, se evaporó hasta sequedad y se purificó por cromatografía sobre SiO_{2} (acetona/hexanos 20/80 a 50/80) para proporcionar el compuesto del título (2,2 g, 53%) como una espuma blanca.

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,31 (t, 3H); 1,78-1,92 (dq, 2H); 2,21 (bd, 2H); 3,00 (s, 3H); 2,90-3,02 (m, 2H); 3,20-3,30 (bt, 1H); 4,18 (q, 2H); 4,25-4,40 (bs, 2H); 7,15 (d, 1H); 7,20 (t, 2H); 7,56 (dd, 2H); 8,63 (d, 1H),

MS (m/z) ESI: 475 (MH+).

f) 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-pirimidinil)tiazol

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Se calientan a 100ºC durante 1 hora, 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(metilsulfinil-4-pirimidinil)tiazol (2,2 g, 4,6 mmol) y 1-(S)-feniletilamina (2,2 ml). La purificación sobre SiO_{2} (acetona/ciclohexano 10/90 a 20/80) proporcionó el compuesto del título como una espuma de color amarillo pálido (2,4 g, 95%).

1H-NMR (400MHz; CDCl_{3}): 1,31 (t, 3H); 1,51 (d, 3H); 1,75-1,88 (bq, 2H); 2,18 (bd (2H); 2,97 (bt, 2H); 3,20 (tt, 1H); 4,20 (q, 2H); 4,30 (bs, 2H); 5,17 (m, 1H); 5,46 (d, 1H, NH); 6,35 (d, I H); 7,12 (t, 2H); 7,30-7,45 (m, 5H); 7,55 (dd, 2H); 8,08 (d, 1H).

MS (m/z) ESI: 523 (MH+, 100).

g) 4-(4-fluorfenil)-2-(piperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-pirimidinil)tiazol

13

Se disolvió 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-pirimidinil)tiazol (2,4 g, 4,5 mmol) en CHCl_{3} (45 ml) y se trató con Me_{3}SiI (1,8 ml, 13,5 mmol) a 60ºC durante 6 horas. La mezcla de reacción se combinó con 6 M HCl en propanol (18,5 ml), se homogeneizó mediante agitación vigorosa, se vertió sobre 2 N NaOH y se extrajo dos veces con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, tras lo cual se filtró, se evaporó hasta sequedad y se purificó por cromatografía sobre SiO_{2} (terc-butilmetiléter/MeOH/NH_{3} conc. 95/4,5/0,5 a 80/18/2) para proporcionar el compuesto del título (1,8 g, 87%) como una espuma blanca.

1H-NMR (400MHz; CDCl_{3}): 1,51 (d, 3H); 1,75-1,88 (bq, 2H); 2,18 (bd (2H); 2,82 (dt, 2H); 3,18 (tt, 1H); 3,25 (d, 2H); 5,17 (m, 1H); 5,45 (d, 1H, NH); 6,32 (d, 1H); 7,12 (t, 2H); 7,30-7,47 (m, 5H); 7,56 (dd, 2H); 8,07 (d, 1H).

MS (m/z) ESI: 460 (MH+, 100).

Ejemplo 2 4-(4-fluorfenil)-2-(1-metilpiperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-pirimidinil)tiazol

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Se disuelve 4-(4-fluorfenil)-2-(piperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-pirimidinil)tiazol (575 mg, 1,25 mmol) en MeOH (12 ml) y se trata con una solución acuosa al 36% de formaldehído (0,2 ml, 2,5 mmol) y NaBH_{4} (95 mg, 2,5 mmol), que se añade como un sólido en tres porciones. Después de 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra, se evapora hasta sequedad y se purifica por cromatografía sobre SiO_{2} (terc-butilmetiléter/MeOH/NH_{3}conc. 95/4,5/0,5 a 90/9/1) para proporcionar el compuesto del título (600 mg, 85%) como una espuma de color amarillo pálido.

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,51 (d, 3H); 1,88-2,01 (m, 2H); 2,08-2,25 (m, 4H); 2,48 (s, 3H); 2,97-3,08 (m, 3H); 5,18 (m, 1H); 5,48 (d, 1H, NH); 6,33 (d, 1H); 7,12 (t, 2H); 7,30-7,47 (m, 5H); 7,56 (dd, 2H); 8,05 (d, 1H).

MS (m/z) ESI: 474 (MH+, 100).

Ejemplo 3 4-(4-fluorfenil)-2-(piperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol a) 4-fluor-2-(2-fluorpiridin-4-il)acetofenona

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Se enfría diisopropilamina (0,93 ml, 6,55 mmol) en THF (6 ml) a -78ºC y se trata con nBuLi (3,8 ml; 6,08 mmol de una solución 1,6 M en hexano). Se añade gota a gota 2-fluor-4-metilpiridina (620 mg; 5,4 mmol) y se agita bajo argón durante 30 minutos. Se añade gota a gota 4-fluor-N-metoxi-N-metilbenzamida (1 g; 5,46 mmol) en THF (0,5 ml) y la mezcla de reacción se deja calentar a temperatura ambiente en el plazo de 10 minutos, tras lo cual se vierte sobre una solución saturada de NaCl y se extrae tres veces con TBME. Las fases orgánicas combinadas se lavan con agua, se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad para proporcionar el compuesto del título como cristales de color amarillo pálido. La purificación por recristalización en TBME caliente proporcionó el compuesto deseado como un sólido blanco (630 mg; 50%).

1H-NMR (200 MHz; CDCl_{3}): 4,35 (s, 2H); 6,88 (s, 1H); 7,08-7,30 (m, 3H); 7,99-8,15 (dd, 2H); 8,20 (d, 1H).

MS (e/z) ESI: 233 (M+, 5); 123 (100).

b) 4-fluor-2-bromo-(2-fluorpiridin-4-il)acetofenona

16

Se trata 4-fluor-2-(2-fluorpiridin-4-il)acetofenona (0,5 g; 2,1 mmol) disuelta en ácido acético (4 ml) con bromo (0,34 g; 2,1 mmol) en ácido acético (1 ml) a temperatura ambiente durante 2,5 horas con agitación. La solución de color marrón claro se evapora hasta sequedad, se disuelve en éter y se extrae tres veces con éter dietílico. Las fases orgánicas combinadas se lavan con una solución saturada de NaHCO_{3}, se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad para proporcionar el compuesto del título como un aceite de color amarillo pálido (0,67 g; 100%).

1H-NMR (200 MHz; CDCl_{3}): 6,15 (s, 1H); 7,10-7,38 (m, 4H); 8,08 (dd, 2H); 8,23 (d, 1H).

MS (e/z) ESI: 232 (M-Br); 204 (10); 203 (12); 123 (100).

c) 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-fluor-4-piridinil)tiazol

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Se calientan a 60ºC en DMF (4 ml) durante 30 minutos, 2-bromo-2-(2-fluor-4-piridil)-1-(4-fluorfenil)etanona (2,5 g, 8,0 mmol) y N-etoxicarbonil-piperidin-4-tiocarboxamida (2,1 g, 9,6 mmol). La mezcla de reacción se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra, se evapora hasta sequedad y se purifica por cromatografía sobre SiO_{2} (acetato de etilo/ciclohexano 20/80 a 100/0) para proporcionar el compuesto del título como un aceite (2,5 g, 70%).

MS (m/z) ESI: 430 (MH+).

d) 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol

18

Se calientan a 195ºC durante 5 horas, 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-fluor-4-piridinil)tiazol (2,4 g, 5,5 mmol) y 1-(S)-feniletilamina (5,5 ml). La mezcla de reacción se evapora y se purifica por cromatografía sobre SiO_{2} (acetato de etilo/ciclohexano 20/80 a 30/70) para proporcionar el compuesto del título como una espuma blanca (2,0 g, 67,3%).

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,31 (t, 3H); 1,55 (d, 3H); 1,72-1,87 (m, 2H); 2,17 (d, 2H); 2,98 (bt, 2H); 3,15-3,23 (m, 1H); 4,18 (q, 2H); 4,30 (bs, 2H); 4,56 (m, 1H); 5,01 (d, 1H, NH); 6,15 (s, 1H); 6,50 (d, 1H); 6,95 (dd, 2H); 7,22-7,46 (m, 5H); 7,45 (dd, 2H); 8,03 (d, 1H).

MS (m/z) CI: 531 (MH+, 100).

e) 4-(4-fluorfenil)-2-(piperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol

19

Se disuelve 4-(4-fluorfenil)-2-(1-etoxicarbonilpiperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol (2 g, 3,7 mmol) en CHCl_{3} (37 ml) y se trata con Me_{3}SiI (1,5 ml, 11,1 mmol) a 60ºC durante 5 horas. Se añadió una segunda porción de Me_{3}SiI (0,75 ml, 5,55 mmol) y se continuó la agitación durante otras tres horas a 60ºC. La mezcla de reacción se combinó con 6 M HCl en propanol (15 ml) se homogeneizó por agitación vigorosa, se vertió sobre 2 N NaOH y se extrajo dos veces con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró, se evaporó hasta sequedad y se purificó por cromatografía sobre SiO_{2} (terc-butilmetiléter/MeOH/NH_{3}conc. 80/18/2) para proporcionar el compuesto del título (1,2 g, 71%) como una espuma blanca.

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,53 (d, 3H); 1,77 (bs, 3H); 2,17 (bd, 2H); 2,78 (bt, 2H); 3,15 (bt, 1H); 3,35 (bd, 2H); 4,55 (m, 1H); 5,00 (d, 1H, NH); 6,17 (s, 1H); 6,50 (d, 1H); 6,97 (bt, 2H); 7,20-7,37 (m, 5H); 7,45 (bt, 2H); 8,02 (d, 1H).

MS (m/z) CI: 459 (MH+)

Ejemplo 4 4-(4-fluorfenil)-2-(metilpiperidin-4-il)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol

20

Se disuelve 4-(4-fluorfenil)-2-(4-piperidinil)-5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol (500 mg, 1,09 mmol) en MeOH (11 ml) y se trata con una solución acuosa al 36% de formaldehído (0,17 ml, 2,18 mmol) y NaBH_{4} (83 mg, 2,18 mmol), que se añade como un sólido en 3 porciones. Después de 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra, se evapora hasta sequedad y se purifica por cromatografía sobre SiO_{2} (terc-butilmetiléter/MeOH/NH_{3}conc. 95/4,5/0,5) para proporcionar el compuesto del título (550 mg, 86%) como una espuma de color amarillo pálido.

1H-NMR (400 MHz; CDCl_{3}): 1,53 (d, 3H); 1,83-1,98 (m, 2H); 2,07-2,20 (m, 4H); 2,35 (s, 3H); 2,98 (bd, 3H); 4,55 (m, 1H); 4,98 (d, 1H, NH); 6,15 (s, 1H); 6,50 (d, 1H); 6,98 (t, 2H); 7,22-7,35 (m, 5H); 7,45 (dd, 2H); 8,02 (d, 1H).

MS (m/z) ESI: 473 (MH+).

Los Agentes de la Invención, como se han definido anteriormente, en particular como los ejemplificados, en forma libre o de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, exhiben actividad farmacológica y son útiles como productos farmacéuticos, por ejemplo para terapia, en el tratamiento de enfermedades y estados como los indicados previamente aquí.

En particular, los Agentes de la Invención poseen actividad inhibidora de p38 MAP quinasa (Proteína Quinasa Activada por Mitógeno). Así, los Agentes de la Invención actúan para inhibir la producción de citoquinas inflamatorias, tales como TNF-\alpha e IL-1, y también para bloquear potencialmente los efectos de estas citoquinas sobre sus células diana. Estas y otras actividades farmacológicas de los Agentes de la Invención pueden demostrarse en métodos de prueba estándar, por ejemplo como los descritos a continuación:

Ensayo de p38 MAP quinasa

El sustrato (GST-ATF-2; una proteína de fusión que comprende los aminoácidos 1-109 de ATF-2 y la proteína GST obtenida mediante expresión en E. coli) se reviste sobre los pocillos de placas de microvaloración (50 \mul/pocillo; 1 \mug/ml en PBS/azida Na al 0,02%) durante la noche a 4ºC. Al día siguiente, las placas de microvaloración se lavan cuatro veces con PBS/Tween 20 al 0,5%/azida Na al 0,02% y se bloquean con PBS/BSA al 2%/azida Na al 0,02% durante 1 hora a 37ºC. Las placas se lavan de nuevo cuatro veces con PBS/Tween 20 al 0,5%/azida Na al 0,02%. La reacción en cascada de la quinasa se inicia a continuación añadiendo los siguientes reactantes en partes alícuotas de 10 \mul hasta un volumen de reacción final de 50 \mul.

1.: Agentes de la Invención valorados de 10 a 0,001 \muM en disoluciones de 10 veces o disolvente (DMSO) o H_{2}O.

2.: Tampón de quinasa (5 veces); pH 7,4; Hepes 125 mM (Reserva a 1M; Gibco Nº 15630-056), \beta-glicerofosfato 125 mM (Sigma Nº G-6251):MgCl_{2} 125 mM (Merck Nº 5833); ortovanadato sódico 0,5 mM (Sigma Nº 5-6508), DTT 10 mM (Boehringer Mannheim Nº 708992). El tampón de quinasa (5 veces) debe prepararse reciente el día del ensayo a partir de soluciones de reserva de 5 veces mantenidas a temperatura ambiente. El DTT se mantiene a -20ºC y se añade como el último reaccionante.

3.: His-p38 MAP quinasa (10 ng/pocillo; Novartis - una proteína de fusión que comprende p38 MAP quinasa murina de longitud completa y una marca de His, obtenida mediante expresión en E. coli).

4.: ATP frío (concentración final 120 \muM; Sigma Nº A-9187).

5.: Agua.

Después de 1 hora a 37ºC, la reacción de quinasa se termina lavando las placas cuatro veces según se describe previamente. Se detecta a continuación GST-ATF-2 fosforilado añadiendo:

1.: El anticuerpo (PhosphoPlus ATF-2 (Thr71) (50 \mul/pocillo; dilución final 1/1000 en PBS/BSA al 2%/azida Na al 0,02%; New England Biolabs Nº 9221L) durante 90 minutos a temperatura ambiente.

2.: Anti-(IgG de conejo) de cabra marcada con biotina (50 \mul/pocillo; dilución final 1/3000 en PBS/BSA al 2%/azida Na al 0,02%; Sigma Nº B-9642) durante 90 minutos a temperatura ambiente.

3.: Estreptavidina-fosfatasa alcalina (50 \mul/pocillo; dilución 1/5000 en PBS/BSA al 2%/azida Na al 0,02%; Jackson Immunoresearch Nº 016-050-084) durante 30 minutos a temperatura ambiente.

4.: Sustrato (100 \mul/pocillo; tabletas de sustrato de fosfatasa Sigma Nº 104; 5 mg/tableta; Nº 104-105; 1 mg/m en tampón de sustrato, dietanolamina (97 ml/l; Merck Nº 803116) + MgCl_{2}.6H_{2}O (100 mg/l; Merck Nº 5833) + azida Na (0,2 g/l) + HCl 1M hasta pH 9,8) 30 minutos a temperatura ambiente.

Después de la etapa 1, 2 y 3, las placas de microvaloración se lavan 4 veces con PBS/Tween 20 al 0,5%/azida Na al 0,02%. Después de la etapa 4, las placas se leen en un lector de microplacas Bio-Rad en un modo de longitud de onda doble (filtro de medida 405 nm y filtro de referencia 490 nm). El valor del fondo (sin ATP) se substrae y se calcula los valores de IC_{50} usando el programa de ordenador Origin (función logística de 4 parámetros).

Los Agentes de la Invención tienen típicamente IC_{50}s para inhibición de p38 MAP quinasa en el intervalo de alrededor de 100 nM a 5 nM o menos cuando se prueban en el ensayo anterior.

Ensayo para la inhibición de la liberación de TNF-\alpha a partir de hPBMCs

Se preparan células mononucleares de sangre periférica humana (hPBMCs) a partir de la sangre periférica de voluntarios sanos usando la separación por densidad Ficoll-hypaque de acuerdo con el método de Hansell y otros, J. Imm. Methods (1991) 145: 105 y se usaron a una concentración de 10^{5} células/pocillo en RPMI 1640 más FCS al 10%. Las células se incuban con diluciones en serie de los compuestos de prueba durante 30 minutos a 37ºC antes de la adición de IFNg (100 U/ml) y LPS (5 mg/ml) y subsiguientemente se incuban adicionalmente durante 3 horas. La incubación se termina mediante centrifugación a 1400 rpm durante 10 minutos. Se mide el TNF-\alpha del sobrenadante usando un ELISA comercial (Innotest hTNFa, disponible de Innogenetics N.V., Zwijnaarde, Bélgica). Los Agentes de la Invención se prueban a concentraciones de 0 a 10 mM. Los agentes ejemplificados de la invención típicamente suprimen la liberación de TNF en este ensayo con una IC_{50} de alrededor de ? nM a ? nM o menos cuando se prueban en este ensayo.

Ensayo para la Inhibición de la Producción de TNF-\alpha en Ratones Estimulados con LPS

La inyección de lipopolisacárido (LPS) induce una liberación rápida del factor de necrosis tumoral soluble (TNF-\alpha) en la periferia. Este modelo ha de usarse para analizar bloqueadores prospectivos de la liberación de TNF in vivo.

Se inyecta LPS (20 mg/kg) i.v. en ratones OF1 (hembras, 8 semanas de edad). Una (1) hora más tarde se extrae sangre de los animales y se analizan los niveles de TNF en el plasma mediante un método de ELISA usando un anticuerpo para TNF-\alpha. Usando 20 mg/kg de LPS, se inducen habitualmente niveles de hasta 15 ng de TNF-\alpha/ml. Los compuestos que han de evaluarse se administran oralmente o s.c. de 1 a 4 horas antes de la inyección de LPS. La inhibición de la liberación de TNF inducida por LPS se toma como la lectura de salida.

Los Agentes de la Invención inhiben típicamente la producción de TNF hasta la extensión de hasta aproximadamente 50% o más en el ensayo previo cuando se administran en 10 mg/kg p.o.

Según se indica en los ensayos previos, los Agentes de la Invención son potentes inhibidores de la liberación de TNF-\alpha. De acuerdo con esto, los Nuevos Compuestos tienen utilidad farmacéutica como sigue:

Los Agentes de la Invención son útiles para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades o estados patológicos mediados por citoquinas tales como TNF\alpha e IL-1, por ejemplo estados inflamatorios, enfermedades autoinmunes, infecciones graves y rechazo de trasplantes de órganos o tejidos, por ejemplo para el tratamiento de receptores de trasplantes de corazón, pulmón, corazón-pulmón combinados, hígado, riñón, páncreas, piel o córnea, y para la prevención de la enfermedad del injerto contra el huésped, tal como después de trasplantes de médula ósea.

Los Agentes de la Invención son particularmente útiles para el tratamiento, la prevención o la mejoría de una enfermedad autoinmune y de estados inflamatorios, en particular estados inflamatorios con una etiología que incluye un componente autoinmune tales como artritis (por ejemplo artritis reumatoide, artritis crónica progrediente y artritis deformante) y enfermedades reumáticas. Enfermedades autoinmunes específicas para las que pueden emplearse los agentes de la invención incluyen enfermedades hematológicas autoinmunes (incluyendo, por ejemplo, anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia de glóbulos rojos pura y trombocitopenia idiopática), lupus eritematoso sistémico, policondritis, esclerodoma, granulomatosis de Wegener, dermatomiositis, hepatitis activa crónica, miastenia grave, psoriasis, síndrome de Steven-Johnson, esprúe idiopático, enfermedad inflamatoria autoinmune del intestino (incluyendo, por ejemplo, coliltis ulcerativa y enfermedad de Crohn), oftalmopatía endocrina, enfermedad de Graves, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes mellitus tipo I), uveitis (anterior y posterior), queratoconjuntivitis seca y queratoconjuntivitis vernal, fibrosis pulmonar intersticial, artritis psoriática y glomerulonefritis (con y sin síndrome nefrótico, incluyendo, por ejemplo, síndrome nefrótico idiopático o nefropatía de cambio mínimo).

Los Agentes de la Invención también son útiles para el tratamiento, la prevención o la mejoría de asma, bronquitis, pneumoconiosis, enfisema pulmonar y otras enfermedades obstructivas o inflamatorias de las vías respiratorias.

Los Agentes de la Invención son útiles para tratar reacciones inflamatorias indeseables agudas e hiperagudas que están mediadas por TNF, especialmente por TNFa, por ejemplo, infecciones agudas, por ejemplo choque séptico (por ejemplo, choque endotóxico y síndrome de fatiga respiratoria del adulto), meningitis, neumonía y quemaduras severas; y para el tratamiento de la caquexia o el síndrome de agotamiento asociado con la liberación mórbida de TNF, consecuencia de una infección, cáncer o una disfunción orgánica, especialmente caquexia relacionada con el SIDA, por ejemplo asociada con o consecuencia de infección por HIV.

Los Agentes de la Invención son también útiles para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, tales como enfermedad de Alzheimer, encefalitis aguda, daño cerebral, esclerosis múltiple incluyendo demielación y pérdida de oligiodendrocitos en esclerosis múltiple y enfermedades inflamatorias del sistema nervioso, tales como enfermedad neuroinflamatoria y embolia.

Los Agentes de la Invención son particularmente útiles para tratar enfermedades del metabolismo óseo, incluyendo osteoartritis, osteoporosis y otras artritis inflamatorias.

Para las indicaciones anteriores, la dosificación apropiada, por supuesto, variará dependiendo, por ejemplo, del Agente de la Invención particular empleado, el sujeto que ha de tratarse, el modo de administración y la naturaleza y la gravedad del estado que se trata. Sin embargo, en general, se obtienen resultados satisfactorios en animales con dosificaciones diarias de alrededor de 1 a 10 mg/kg/día por vía oral. En mamíferos superiores, por ejemplo seres humanos, una dosificación diaria indicada está en el intervalo de alrededor de 50 a 750 mg de un Agente de la Invención administrados oralmente una vez o, más adecuadamente, en dosis divididas de dos a cuatro veces/día.

Los Agentes de la Invención pueden administrarse mediante cualquier ruta convencional, por ejemplo oralmente, por ejemplo en la forma de soluciones para bebida, tabletas o cápsulas o parenteralmente, por ejemplo en la forma de soluciones o suspensiones inyectables. Normalmente, para la administración sistémica, se prefieren dosificaciones orales, aunque para algunas indicaciones los Agentes de la Invención también pueden administrarse tópicamente y dérmicamente, por ejemplo en la forma de una crema o un gel dérmicos o una preparación similar o, con el propósito de la aplicación al ojo, en la forma de una crema ocular, una preparación de gel o gotas oculares; o pueden administrarse mediante inhalación, por ejemplo para tratar el asma. Formas de dosificación unitaria adecuadas para la administración oral comprenden, por ejemplo, de 25 a 250 mg del Agente de la Invención por unidad de dosificación.

De acuerdo con lo precedente, la presente invención también proporciona en una serie de modalidades:

B. Un Agente de la Invención para su uso como un producto farmacéutico, por ejemplo para su uso como un agente inmunosupresor o antiinflamatorio o para su uso en la prevención, la mejoría o el tratamiento de cualquier enfermedad o estado como los descritos previamente, por ejemplo, una enfermedad o un estado autoinmune o inflamatorio.

C. Una composición farmacéutica que comprende un Agente de la Invención en asociación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, para su uso como un agente inmunosupresor o antiinflamatorio o para su uso en la prevención, la mejoría o el tratamiento de cualquier enfermedad o estado como los descritos previamente, por ejemplo una enfermedad o un estado autoinmune o inflamatorio.

D. Uso de un Agente de la Invención en la preparación de un medicamento para su uso como un agente inmunosupresor antiinflamatorio o para su uso en la prevención, la mejoría o el tratamiento de cualquier enfermedad o estado como los descritos anteriormente, por ejemplo una enfermedad o un estado autoinmune o inflamatorio.

Claims

1. Un compuesto de fórmula II'

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21

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en donde

R_{10} es halógeno;

Z es N o CH y

2. Un compuesto según la reivindicación 1 seleccionado entre:

4-(4-fluorfenil)-2-(4-NH-piperidin-1-il)5-(2-(1-(S)-feniletil)amino-4-piridinil)tiazol;

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3. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula II''

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en donde R_{3}'', R_{4}'', R_{10} y Z se definen como en la reivindicación 1 y X'' es -NH-, que comprende hacer reaccionar el correspondiente compuesto precursor de fórmula III o III'

23

con la correspondiente amina R_{4}''-NH_{2}, en donde R_{3}'' y R_{10} se definen como en la reivindicación 1 y a continuación, si se desea, el compuesto de fórmula II'' así obtenido se convierte en otro compuesto de fórmula II'' o en un éster farmacéuticamente aceptable y disociable del mismo o una sal de adición de ácido del mismo.

4. Un compuesto según la reivindicación 1 o 2 para su uso como un producto farmacéutico.

5. Un compuesto según la reivindicación 4 para su uso en la preparación, mejora o tratamiento de una enfermedad o estado autoinmune o inflamatorio.

6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 en asociación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Una composición según la reivindicación 6 para su uso como un agente inmunosupresor o anti-inflamatorio o para su uso en la prevención, mejora o tratamiento de una enfermedad o estado autoinmune o inflamatorio.

8. Uso de un compuesto según la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para su uso como un agente inmunosupresor o anti-inflamatorio o para su uso en la prevención, mejora o tratamiento de una enfermedad o estado autoinmune o inflamatorio.