ES2253786T3

ES2253786T3 - Compuestos de ciclopropilindola y su uso como precursores de medicamentos.

Info

Publication number: ES2253786T3
Application number: ES97942316T
Authority: ES
Inventors: William Alexander Denny; Moana Tercel; Graham John Atwell
Original assignee: Auckland Uniservices Ltd
Current assignee: Auckland Uniservices Ltd
Priority date: 1996-09-12
Filing date: 1997-09-12
Publication date: 2006-06-01
Anticipated expiration: 2017-09-12
Also published as: JP4155598B2; WO1998011101A3; CA2265874C; WO1998011101A2; AU721037B2; DE69734722T2; JP2000517292A; EP0938474A2; NZ334344A; ATE310725T1; AU4403997A; DE69734722D1; CA2265874A1; EP0938474B1

Abstract

ESTA INVENCION SE REFIERE A UNOS COMPUESTOS QUE CORRESPONDEN A LA FORMULA GENERAL (I) DONDE X REPRESENTA HALOGENO U OSO 2 R EN EL CUAL R REPRESENTA H O UN ALQUILO INFERIOR NO SUSTITUIDO O SUSTITUIDO POR HIDROXILO O AMINA. Y REPRESENTA A UN GRUPO AMINA O NITROGENADO O SU DERIVADO SUSTITUIDO. W SE SELECCIONA ENTRE LAS ESTRUCTURAS QUE CORRESPONDEN A LAS FORMULAS (LA), (LB), O (LC) DONDE E REPRESENTA - N = O - CH =. G REPRESENTA E, S O NH, MIENTRAS QUE Q REPRESENTA O BIEN TRES ELEMENTOS COMO MAXIMO SELECCIONADOS EN EL GRUPO R, OR, NRR, NO 2 , CONHR, NHCOR O NHCONHR, O BIEN UN GRUPO COMPLEMENTARIO DE LAS FORMULAS (LA), (LB) O (NC). HET REPRESENTA UN HETEROCICLO O UN CARBOCICLO QUE TIENE ENTRE 5 Y 6 ELEMENTOS, MIENTRAS QUE A Y B REPRESENTAN JUNTOS UN BENCENO FUSIONADO O UN ANILLO PIRROLO 2 - CO 2 R. EN UN MODO DE REALIZACION EL GRUPO Y REPRESENTA UN DERIVADO DE AMINA QUE SE SUSTITUYE POR UN GRUPO QUE CONSISTE EN UN SUBSTRATO PARA UNA ENZIMA DE TIPO NITROREDUCTASO O CARBOXIPEPTIDASO Y ELLO DE FORMA QUE UNA DE ESTAS ENZIMAS PUEDA PROVOCAR LA ELIMINACION DE ESTE GRUPO.

Description

Compuestos de ciclopropilindola y su uso como precursores de medicamentos.

La presente invención se refiere a nuevos análogos de aminoácidos de la clase general de los ciclopropilindoles y a sus precursores secos, y concierne particularmente con el uso de estos compuestos como prodrogas para la terapia con enzima-prodroga dirigida por anticuerpos (ADEPT) y la terapia con enzima-prodroga dirigida por genes (GDEPT) para el cáncer.

Antecedentes de la invención

El uso de prodrogas representa un concepto clínicamente muy valioso en la terapia del cáncer, puesto que, particularmente cuando la prodroga debe convertirse en un agente anti-tumoral bajo la influencia de un enzima que puede unirse a un anticuerpo monoclonal que se unirá a un antígeno asociado al tumor, la combinación de tal prodroga con tal conjugado de enzima/anticuerpo monoclonal representa un agente clínico muy potente. Esta estrategia de terapia del cáncer, denominada a menudo como "terapia con enzima/prodroga dirigida por anticuerpo" (ADEPT) se descubre en la patente WO88/07378.

Se ha propuesto una estrategia terapéutica adicional denominada "terapia con enzima/prodroga dirigida por virus" (VDEPT) como un procedimiento para tratar células tumorales en paciente usando prodrogas. Se apunta a las células con un vector viral portador de un gen que codifica un enzima capaz de activar la prodroga. El gen podría estar regulado transcripcionalmente por secuencias promotoras o potenciadoras específicas del tejido. El vector viral entra dentro de las células tumorales y expresa el enzima, con objeto de que una prodroga sea convertida en una droga activa dentro de las células tumorales (Huber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8039 (1991)). Alternativamente, se han usado procedimientos no virales para entregar los genes. Tales procedimientos incluyen la co-precipitación con fosfato cálcico, la microinyección, los liposomas, la captación directa del ADN, y la transferencia de ADN mediada por receptor. Estos procedimientos se revisan en Morgan & French, Annu. Rev. Biochem., 62:191 (1993). El término "GDEPT" (terapia con enzima/prodroga dirigida por genes) se usa para incluir tanto los sistemas virales como los no virales.

Los compuestos de ciclopropilindol son una clase de potentes antibióticos antitumorales, teniendo los productos naturales CC-1065 (V.L. Reynolds et al., J. Antibiot., 39:319-314 (1986)) y las duocarmicinas (D.L. Boger, Pure & Appl. Chem., 66:837-844 (1994)), las IC_{50} en el rango pM inferior. Estos compuestos se unen al surco menor del ADN y alquilan el N-3 de la adenina de manera altamente selectiva para la secuencia (D.L. Boger et al., Tetrahedron, 47:2661-2682 (1991)). Los estudios con compuestos que modelan la subunidad de alquilación han mostrado que los precursores secos de cadena abierta más estables son tan potentes como los compuestos de ciclopropilindol. Además, el cierre del anillo no es esencial para la alquilación del ADN, y hay cierta medición del control electrónico por parte de ambos, el sustituyente en 6 (D.L. Boger et al., J. Am. Chem. Soc., 113:3980-3983 (1991)) y el sustituyente en 1 (D.L. Boger y W. Yun, J. Am. Chem. Soc., 116:5523-5524 (1994)), sobre la velocidad de alquilación.

Se ha preparado un cierto número de análogos sintéticos de productos naturales en los que el oxígeno está protegido como un carbamato que debe ser separado (mediante hidrólisis enzimática no específica) para obtener actividad. Estos compuestos incluyen la carzelesina (L.H. Li et al., Cancer Res., 52:4904-4913 (1992)) y el KW-2189 (E. Kobayashi et al., Cancer Res., 54:2404-2410 (1994)) los cuales muestran actividad anticáncer contra un rango de tumores humanos y están en fase de ensayo clínico. Estos compuestos tienen respectivamente las estructuras A y B:

1

2

En las patentes WO88/04659 y WO91/16324 se descubren análogos adicionales de un tipo similar.

Descubrimiento de la invención

En un aspecto, la presente invención se refiere a la nueva clase de ciclopropilindoles secos representada por la fórmula (I):

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en donde:

X es halógeno u OSO_{2}R, en donde R representa H o un alquilo inferior (de hasta cuatro átomos de carbono) sustituido opcionalmente con grupos hidroxilo o amino, estando opcionalmente sustituidos los grupos amino por uno o dos grupos alquilo C_{1}-4;

Y es NO_{2} o NHR, R es tal como se definió más arriba;

W se selecciona de entre las estructuras con las fórmulas (Ia o Ib):

4

en donde E es -N= o -CH=, G es O o NH, y Q es cualquiera, hasta tres, de R, OR, NRR, NO_{2}, CONHR o NHCOR, en donde R es tal como se definió más arriba (el cual podría ser el mismo o diferente cuando Q es dos o tres), y HET representa un carbociclo o heterociclo de 5 ó 6 miembros que contiene hasta dos átomos de N;

A y B representan conjuntamente un anillo de benceno o 2-CO_{2}R-pirrol fusionado, en donde R es tal como se definió más arriba; o una sal del mismo.

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a la clase de compuestos representados por la fórmula (II):

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en donde A, B, E, G, Q, R, W y X están representados más arriba por las fórmulas generales I, Ia, Ib o Ic, J es OH o R (en donde R es tal como se definió más arriba), y P es un grupo que es un sustrato para un enzima nitroreductasa o carboxipeptidasa, de tal forma que uno de dichos enzimas es capaz de proporcionar la supresión del grupo P.

P es (IIb) o (IIc):

(IIb)-C(O)-O-CH_{2}-Ph

(IIc)-C(O)-NH-C(COOH)-(CH_{2})_{2}-COOH

en donde Ph es un grupo fenilo sustituido en (IIb) con un grupo nitro en la posición 2 ó 4, estando el grupo Ph sustituido además opcionalmente con un grupo R^{1}, el cual podría ser un grupo R, CONHR, NHCOR, NHR, OR o SO_{2}R, en donde R es tal como se definió más arriba; o una sal del mismo.

Se reconoce que ciertos compuestos con las fórmulas generales I y II podrían existir en una de dos formas enantioméricas o diastereoméricas. En tales casos, debe entenderse que las fórmulas generales I y II representan, bien una forma enantiomérica o diastereomérica, bien una mezcla de ambas.

Un grupo halógeno significa un grupo flúor, cloro, bromo o yodo. Se prefiere un grupo cloro. Los compuestos preferidos con las fórmulas (I) y (II) incluyen aquellos en los que X representa Cl. Los compuestos preferidos incluyen aquellos en los que W representa Ia, E representa -CH=, G representa NH, y Q representa tres grupos -OMe. También son preferidos los compuestos en los que P representa la fórmula (IIb). R_{1} de forma deseable representa H o CONHR, en donde R es tal como se definió más arriba. Los compuestos en los que el sustituyente CH_{2}X está en la configuración S son también preferidos.

Los ejemplos de compuestos con la fórmula (I) incluyen aquellos con la fórmula (III):

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en donde X, Y, E, G y Q son tal como se definieron más arriba, y aquellos con la fórmula (IV):

7

en donde X, Y, E, G y Q son tal como se definieron más arriba.

Se prefiere que, cuando P es un grupo (IIb), el grupo nitro esté en la posición 4-(para).

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de compuestos con las fórmulas (I) o (II) como fármacos anticáncer. Los compuestos podrían usarse para la muerte selectiva de células tumorales óxicas o hipóxicas en procedimientos de tratamiento de cánceres, por ejemplo, de leucemias y, particularmente, de cánceres sólidos, incluyendo los tumores de mama, los intestinales y los de pulmón, incluyendo los carcinomas de células pulmonares pequeñas.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere al uso de los compuestos con la fórmula (II), conjuntamente con los enzimas nitroreductasa o carboxipeptidasa (por ejemplo, la nitroreductasa aeróbica NR2 aislada a partir de E. coli) en procedimientos de terapia ADEPT y GDEPT.

La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto con la fórmula (I) o con la fórmula (II), junto con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Descripción de las figuras

Las Figuras 1 a 4 ilustran las rutas de síntesis de los compuestos de la invención, citadas más abajo respectivamente como Esquemas 1 a 4.

La Figura 5 muestra las estructuras generales de los compuestos de la invención, ilustrados adicionalmente en los ejemplos y caracterizados más adelante en la Tabla 1.

En las Figuras 1-4, los pequeños números romanos sobre las figuras se refieren a condiciones de reacción, las cuales se describen con más detalle en la descripción y ejemplos anexos. Sin embargo, de forma esquemática, las condiciones se resumen como sigue:

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Figura/Esquema 1

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(i): NaHCO_{3} (1 equiv), a continuación cloruro de 4-MeObencilo.

(ii): 70% HNO_{3}/AcOH.

(iii): (Tf)_{2}O/NEt_{3}/CH_{2}Cl_{2}.

(iv): CH_{2}(COOMe)_{2}/K_{2}CO_{3}/DMF.

(v): CF_{3}COOH/PhOCH_{3}.

(vi): SOCl_{2}/DMF (1:1)/py/NaN_{3}/CH_{2}Cl_{2}.

(vii): Tolueno/reflujo.

(viii): BH_{3}.DMS/THF/reflujo.

(ix): (BOC)_{2}O/N-metilimidazol.

(x): NaOMe/MeOH/THF/20°C, a continuación CF_{3}COOH.

(xi): DIBAL/THF.

(xii): MsCl/py, a continuación LiCl/DMF.

(xiii): HCl, a continuación EDCI.HCl/ácido 5,6,7-TMI-2-carboxílico.

(xiv): H_{2}/PtO_{2}/THF.

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Figura/Esquema 2

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(i): HS(CH_{2})_{3}SH/BF_{3}.OEt_{2}

(ii): NaHCO_{3}, a continuación cloruro de 4-MeObencilo

(iii): (CF_{3}SO_{2})_{2}O/Et_{3}N

(iv): CH_{2}(CO_{2}Me)_{2}/NaH

(v): CF_{3}CO_{2}H

(vi): (PhO)_{2}PON_{3}/Et_{3}N

(vii): BH_{3}.Me_{2}S

(viii): (BOC)_{2}O/DMAP

(ix): NaOMe

(x): DIBAL

(xi): Hg(ClO_{4})_{2}

(xii): N_{3}CH_{2}COOMe/NaOMe

(xiii): xileno/calor

(xiv): PPh_{3} /CCl_{4}

(xv): PASO xiii del Esquema 1

(xvi): PASO xiv del Esquema 1

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Figura/Esquema 3

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(i): NaHCO_{3}, a continuación cloruro de 4-Me-O-bencilo

(ii): (CF_{3}SO_{2})_{2}O/Et_{3}N

(iii): CH_{2}(CO_{2}Me)_{2}/NaH

(iv): CF_{3}CO_{2}H

(v): (PhO)_{2}PON_{3}/Et_{3}N

(vi): BH_{3}/Me_{2}S

(vii): (BOC)_{2}O/DMAP

(viii): NBS/CCl_{4}

(ix): DMSO

(x): HS(CH_{2})_{3}SH/BF_{3}OEt_{2}.

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Figura/Esquema 4

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(i): BH_{3}/B(OMe)_{3}

(ii): Ac_{2}O/Et_{3}N

(iii): Fe/AcOH

(iv): (BOC)_{2}O

(v): bromuro de alilo/NaH

(vi): K_{2}CO_{3}

(vii): MnO_{2}

(viii): N_{3}CH_{2}CO_{2}Me/NaHMDS

(ix): MsCl/Et_{3}N

(x): xileno

(xi): Bu_{3}SnH/TEMPO

(xii): Zn/AcOH

(xiii): HNO_{3}/MeNO_{2}

(xiv): HCl, a continuación ácido TMI/EDCI

(xv): Dicloro-trifenil-fosforano/piridina

(xvi): H_{2}/PtO_{2}/THF

(xvii): HCO_{2}H/Ac2O/THF, a continuación

(32a): BH_{3}.DMS/reflujo

(32c): NaBH_{3}CN/HCHO

(32d): 4-NO_{2}PhCH_{2}OCOCl

Descripción detallada de la invención A. Síntesis de compuestos con la Fórmula (I)

Los compuestos con la fórmula (I), en donde A y B representan un anillo de benceno fusionado, pueden prepararse mediante el proceso esbozado en el Esquema 1.

En el Esquema 1, el ácido 1-hidroxinaftalen-2-carboxílico (1) está protegido como éster de 4-metoxibencilo (2), y éste se nitra en la posición 4 mediante 70% HNO_{3} en AcOH para rendir (3). A continuación, éste se transforma en el derivado 1-trifluoro-metanosulfonato (4), es cual se trata directamente con anión dimetilmalonato para proporcionar el derivado 1-malonilo (5). La desprotección del grupo éster de 4-metoxibencilo con TFA proporciona el ácido (6), el cual se convierte en la azida inestable del carbonilo (7) mediante tratamiento con el aducto SOCl_{2}/DMF en presencia de azida sódica y piridina. El calentamiento de ésta en tolueno resulta en la ciclación a indolona (8). Esta se reduce con borano/dimetilsulfuro en THF para rendir la indolina (9), la cual se protege en N con di-tert-butil-dicarbonato para proporcionar (10). Este compuesto diéster se descarboximetila con metóxido sódico, y el monoéster (1) resultante se reduce con DIBAL hasta el alcohol (12). Este alcohol se trata con un haluro de alquilsulfonilo (preferiblemente el cloruro de metanosulfonilo, como en el ejemplo del Esquema 1) en piridina. Si se desea un compuesto con la fórmula (I) en el que X sea un halógeno, esta reacción se sigue con un tratamiento del éster de sulfonato resultante con un haluro de litio o potasio. En el ejemplo del Esquema 1, el tratamiento con cloruro de litio en DMF proporciona el cloruro (13). El grupo N-BOC de 13 se retira mediante tratamiento con dioxano saturado con HCl gas, y la amina libre resultante se hace reaccionar inmediatamente con ácidos en presencia de EDCI-HCl para rendir las amidas correspondientes (en el ejemplo del Esquema 1, con ácido 5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico para proporcionar (14a) con la fórmula (I). Otros ácidos correspondientes al grupo W son fácilmente asequibles. Por ejemplo, para ácidos correspondientes a la fórmula (Ia), podría hacerse referencia a las rutas sintéticas descubiertas en WO88/04659 y WO91/16324. Para ácidos correspondientes a la fórmula (Ib), se describen algunos procedimientos sintéticos en la literatura (por ejemplo, Wang, Y., Grupta, R., Huang, L., Luo, W. y Lown, J. W., Anti-Cancer Drug Design, 11:15-34 (1996)). En este ejemplo, la reducción de (14a) mediante hidrogenación en presencia de óxido de platino proporcionó a continuación el compuesto amino deseado (15a). La hidrogenación controlada de los compuestos nitro (Y = NO_{2} en la fórmula I) en DMF proporciona las hidroxilaminas (Y = NHOH en la fórmula I). Podría usarse la química del diazonio para convertir los compuestos amino (Y = NH_{2} en la fórmula I) en azidas (Y = N_{3} en la fórmula I), en derivados de azufre (Y = SR o SSR en la fórmula I), o a compuestos azo simétricos (Y = NNR en la fórmula I). Pueden prepararse compuestos azo asimétricos (Y = NNPhR en la fórmula I) mediante la reacción de las aminas (Y = NH_{2} en la fórmula I) con compuestos nitrosos ONPhR. La aminas (Y = NH_{2} en la fórmula I) pueden alquilarse también mediante procedimientos estándares (incluyendo la aminación reductora) para rendir aminas sustituidas (Y = NHR o NRR en la fórmula I). Cuando Y es una amina terciaria, la oxidación (por ejemplo, con perácidos) puede usarse para proporcionar los correspondientes N-óxidos (Y = NRR(O) en la fórmula I).

Los compuestos con la fórmula (I), en donde A y B representan un anillo de pirrol fusionado (con un sustituyente 2-metoxicarbonilo), pueden prepararse mediante el proceso esbozado en los Esquemas 2 a 4. En el Esquema 2, el 3-carboxi-2-hidroxi-5-nitrobenzaldehído (16) [Bull. Soc. Chim. Fr., 817 (1969)] está protegido como el derivado 1,3-ditiano (17). La protección del ácido como el éster (18), la preparación del trifluoro-metanosulfonato (19), el desplazamiento con anión dimetilmalonato para rendir (20) y la desprotección del éster para rendir el ácido (21) procede esencialmente tal como se describe en el Esquema 1. El ácido 21 se cicla en la indolona (22) mediante la difenil-fosforilazida en presencia de trietilamina, a continuación se reduce a la indolina (23) con borano/dimetilsulfuro y se protege como derivado N-BOC (24). El tratamiento de éste con metóxido sódico causa la descarboximetilación, el monoéster (25) se reduce al alcohol (26) con DIBAL, y el grupo protector 1,3-ditiano se separa con sal de mercurio. El aldehído resultante (27) se condensa con azidoacetato de metilo en presencia de metóxido sódico, y el producto (28) se cicla en xileno hirviendo para proporcionar el alcohol fusionado con pirrol (29). La conversión de éste al cloruro (30) podría conseguirse usando trifenilfosfina/tetracloruro de carbono. La eliminación del grupo protector BOC, y el acoplamiento con un ácido (en el ejemplo del Esquema 2, con ácido 5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico) para obtener (31), y la subsiguiente hidrogenación sobre óxido de platino para rendir anilina (32) sigue los procedimientos en el Esquema 1.

El Esquema 3 presenta una síntesis alternativa de los compuestos con la fórmula (I), en donde A y B representan un anillo de pirrol fusionado (con un sustituyente 2-metoxicarbonil). En el Esquema 3, el ácido 3,2-hidroxi-3-metil-5-nitrobenzoico (33) [Ann., 311:26 (1900)] se protege como éster de 4-metoxibencilo (34). La conversión en trifluoro-metanosulfonato (35), el desplazamiento con malonato para rendir (36) y la desprotección del éster para rendir el ácido (37) procede esencialmente tal como se describe en el Esquema 1. El ácido 37 se cicla en la indolona (38), se reduce a la indolina (23) con borano/dimetilsulfuro, y se protege como el derivado N-BOC (40), tal como se describió en el Esquema 2. La bromación con N-bromo-succinamida proporciona el bromuro (41), el cual podría oxidarse al aldehído (42) y protegerse subsiguientemente para proporcionar una ruta alternativa hacia el 1,3-ditiano (24) del Esquema 2.

El Esquema 4 presenta una síntesis alternativa adicional de compuestos con la fórmula (I), en donde A y B representan un anillo de pirrol fusionado (con un sustituyente 2-metoxicarbonil). En el Esquema 4, el ácido 4,2-yodo-3-nitrobenzoico (43) se reduce con borano-dimetilsulfuro hasta el alcohol 44, se convierte en el acetato 45, a continuación se reduce (polvo de Fe/AcOH) hasta la amina 46 y se protege como el derivado NBOC 47. Éste, secuencialmente se N-alquila con bromuro de alilo para rendir el compuesto 48, el cual se hidroliza al alcohol 49, y éste se oxida con MNO_{2} para rendir el aldehído 50. El tratamiento de 50 con bis(trimetilsilil)amida sódica y azidoacetato de metilo proporciona el azidoalcohol 51, el cual se convierte en el azidocinamato 52 mediante reacción con cloruro de metanosulfonilo y trietilamina. Se caliente una solución de 52 en xileno bajo reflujo para obtener el indol 53. La reacción de 53 con hidruro de tributiltina y TEMPO (2,2,6,6-tetrametil-piperidiniloxi) rinde 54, el cual se reduce con polvo de Zn hasta el pirrolo[3,2-e]indol 55, y la nitración de éste con c.HNO_{3} en CH_{3}NO_{2} proporciona 29. El grupo N-BOC de 29 se retira en dioxano saturado con HCl, y la amina libre resultante se hace reaccionar inmediatamente con ácidos en presencia de EDCI-HCl, tal como se describe en el Esquema 1, para rendir las amidas correspondientes (en el caso ilustrado en el Esquema 4, con ácido 5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico para proporcionar 56). El tratamiento de 56 con dicloro-trifenil-fosforano rinde el cloruro 31, que puede hidrogenarse (THF/PtO_{2}/H_{2}) en la amina 32a.

Aunque los Esquemas 1-4 se ilustran con sustituyentes concretos en cada caso, podrían usarse compuestos sustituidos alternativos para proporcionar otros compuestos con la fórmula (I). Además de los Esquemas 1-4 anteriores, también podría hacerse referencia a las rutas sintéticas descubiertas en WO88/04659 y WO91/16324, especialmente aquéllas en las que Q es otro grupo con la fórmula (Ia). Podrían usarse rutas análogas para preparar compuestos de la presente invención.

B. Síntesis de compuestos con la Fórmula (II)

Los compuestos con la fórmula (II) en donde P es IIb podrían prepararse mediante reacción de los compuestos con la fórmula (I), en donde Y es NH_{2}, NHOH o NHR, con un reactivo derivado de IIb, por ejemplo, un derivado de ácido o cloroformato, preparado respectivamente a partir de los ácidos carboxílicos o alcoholes correspondientes. Estos ácidos carboxílicos y alcoholes podrían prepararse mediante reacciones químicas conocidas, y algunos están disponibles comercialmente.

Los compuestos con la fórmula (II) en donde P es IIc podrían prepararse mediante reacción de compuestos con la fórmula (I), en donde Y es NH_{2} o NHR, con un reactivo derivado del ácido glutámico (por ejemplo, un isocianato o isocianato protegido). Los grupos carboxílicos del ácido glutámico podrían protegerse mediante esterificación con grupos R, en donde R es tal como se definió más arriba pero no es H. Se prefieren los grupos t-butil ester, y podría hacerse referencia, por ejemplo, a WO88/07378 y WO91/03460 para condiciones de reacción apropiadas.

C. GDEPT C(i) Sistemas vector

En general, el vector a usarse en las terapias GDEPT podría ser cualquier vector de ADN o ARN apropiado.

Los vectores virales apropiados incluyen aquellos que se basan en un retrovirus. Tales vectores están ampliamente disponibles en la técnica. Huber et al. (ibid) informan sobre el uso de retrovirus anfotróficos para la transformación de células de hepatoma, mama, colon o piel. Culver et al. (Science, 256:1550-1552 (1992)) también describen el uso de vectores retrovirales en GDEPT. Tales vectores, o vectores derivados de ellos, también podrían usarse. También podrían usarse otros retrovirus para preparar vectores apropiados para su uso en la presente invención. Tales retrovirus incluyen el virus del sarcoma de Rous (RSV).

Englehardt et al. (Nature Genetics, 4:27-34 (1993)) describen el uso de vectores basados en adenovirus en el suministro del producto de la conductancia transmembrana de la fibrosis cística (CFTR) dentro de células, y tales vectores basados en adenovirus también podrían usarse. Los vectores que utilizan el promotor y otras secuencias control de adenovirus podrían usarse para suministrar un sistema acorde con la invención a células en el pulmón, y, por tanto, serían útiles para tratar los tumores pulmonares.

Se conocen otros sistemas vector, incluyendo los vectores basados en el virus Molony de la leucemia del ratón (Ram, Z. et al., Cancer Research, 53:83-88 (1993); Dalton & Treisman, Cell, 68:597-612 (1992)). Estos vectores contienen el potenciador del virus de la leucemia del ratón (MLV) clonado cadena arriba respecto un promotor mínimo de \beta-globina. La región 5' no traducida de la \beta-globina, hasta la ATG de inicio, se proporciona para dirigir la traducción eficiente del enzima.

Los promotores apropiados que podrían usarse en los vectores descritos más arriba incluyen los promotores del MLV, CMV, RSV y adenovirus. Los promotores de adenovirus preferidos son los promotores de genes tempranos del adenovirus. También podrían ser apropiados los promotores fuertes de mamíferos. Un ejemplo de un promotor de ese tipo es el promotor EF-1\alpha el cual podría obtenerse mediante referencia a Mizushima y Nagata (Nucl. Acids Res., 18:5322 (1990)). También podrían usarse variantes de tales promotores que retuvieran actividades de transcripción sustancialmente similares.

C(ii) Nitroreductasa

Los compuestos con la fórmula (II) en los que P es un grupo (IIb), y los compuestos con la fórmula (I) en los que Y es un grupo NO_{2}, pueden activarse mediante la reducción del grupo P o Y (tal como se han definido arriba) mediante nitroreductasa.

Preferiblemente, el enzima es un enzima nitroreductasa que no es de mamífero, tal como una nitroreductasa bacteriana. Es particularmente preferida una nitroreductasa de E. coli descubierta en WO93/08288. El enzima podría modificarse mediante técnicas estándares de ADN recombinante, por ejemplo, clonando el enzima, determinando la secuencia de su gen, y alterando la secuencia del gen mediante procedimientos tales como la truncación, la sustitución, la supresión o la inserción de secuencias, por ejemplo, mediante mutagénesis dirigida a un sitio. Podría hacerse referencia a "Molecular Cloning" de Sambrook et al. (1989, Cold Spring Harbor) para la discusión de las técnicas estándares de ADN recombinante. La modificación hecha podría ser cualquiera que todavía deje el enzima con la capacidad de reducir el grupo nitro del grupo protector P en la fórmula II, o los grupos nitro o N-óxido de amina cuando éstos están representados por Y en la fórmula I, pero que altera otras propiedades del enzima, por ejemplo, su velocidad de reacción o su selectividad.

Además, podrían ocurrir pequeños truncamientos en la secuencia N- y/o C-terminal a resultas de las manipulaciones requeridas para producir un vector, en el que se enlaza una secuencia de ácido nucleico que codifica el enzima con las otras diversas secuencias del vector.

C(iii) Carboxipeptidasa

Los compuestos con la fórmula (II) en los que P es un grupo (IIc) pueden activarse mediante la eliminación del grupo P por parte de una carboxipeptidasa.

El enzima es preferiblemente una carboxipeptidasa bacteriana, especialmente la carboxipeptidasa CPG2 o \gamma-glutamilhidrolasa de Pseudomonas EC3,4.22,12 (Levy, C. C. & Goldman, P., J. Biol. Chem. 242; p 2933 (1967).

La carboxipeptidasa G2 (CPG2) se descubre en WO88/07378. Aunque se prefiere la CPG2 nativa, también son posibles las alteraciones de su secuencia, las cuales son sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos (por ejemplo, de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 10 ó 20 residuos en cada caso). En cualquier caso, la alteración será tal que el enzima retiene su capacidad para convertir una prodroga en una droga activa a, sustancialmente, la misma velocidad que el enzima nativo. En este contexto, "sustancialmente la misma velocidad" estará de forma deseable dentro de 1 orden de magnitud, y preferiblemente será desde 50 veces inferior, por ejemplo, aproximadamente 2 veces inferior, hasta 2, 5 ó 10 veces superior.

Además de los cambios específicos, el enzima podría alterarse de otra forma mediante truncación, sustitución, supresión o inserción, con tal que la actividad del enzima permanezca sustancialmente inalterada tal como se ha definido más arriba.

Además, podrían ocurrir pequeños truncamientos en la secuencia N- y/o C-terminal a resultas de las manipulaciones requeridas para producir un vector en el que se enlaza una secuencia de ácido nucleico, que codifica el enzima, a un promotor apropiado.

D. ADEPT

Para las aplicaciones en sistemas ADEPT, un anticuerpo dirigido contra un marcador específico de tumor se une al enzima nitroreductasa o carboxipeptidasa, el cual podría estar modificado tal como se ha descrito más arriba- El anticuerpo podría ser monoclonal o policlonal. Para los propósitos de las presente invención, el término "anticuerpo", a menos que es especifique lo contrario, incluye los fragmentos de anticuerpos completos que retienen su actividad unidora hacia un antígeno diana tumoral. Tales fragmentos incluyen los fragmentos Fv, F(ab') y F(ab')_{2}, así como los anticuerpos de cadena simple. Además, los anticuerpos y fragmentos de los mismos podrían ser anticuerpos humanizados, por ejemplo, tal como se describe en EP-A-239400.

Los anticuerpos podrían producirse mediante técnicas de hibridoma convencionales, o, en el caso de anticuerpos modificados o fragmentos, mediante la tecnología del ADN recombinante, por ejemplo, mediante la expresión, en un huésped vector apropiado, de una construcción de ADN que codifica el anticuerpo o fragmento modificado unido operativamente a un promotor. Las células huéspedes apropiadas incluyen las bacterianas (por ejemplo, E. coli), las de levadura, las de insecto, y las de mamífero. Cuando el anticuerpo se produce mediante tales técnicas recombinantes, el enzima podría producirse uniendo una secuencia de ácido nucleico que codifica el enzima (modificada opcionalmente tal como se ha descrito más arriba) al extremo 3' ó 5' de la secuencia de la construcción que codifica el anticuerpo o fragmento del mismo.

E. Sales

Las sales incluyen las sales de bases fisiológicamente aceptables, por ejemplo, las derivadas de una base apropiada, tal como un metal alcalino (por ejemplo, sodio), las sales de un metal térreo alcalino (por ejemplo, magnesio), las sales de amonio y NR_{4}'' (en donde R'' es C_{1}-4-alquilo). Otras sales incluyen las sales de adición, incluyendo las sales de hidrocloruro y de acetato.

F. Aplicaciones de la invención

Los compuestos de la invención pueden usarse en un procedimiento para el tratamiento del cuerpo humano o animal. Tal tratamiento incluye un procedimiento para tratar el crecimiento de células neoplásicas en un paciente con una enfermedad neoplásica, el cual comprende administrar a un paciente que precisa de tratamiento compuestos con la fórmula (I) de la invención, o compuestos con la fórmula (II) de la invención, como parte de un sistema de terapia ADEPT o GDEPT. Las enfermedades neoplásicas incluyen la leucemia y los tumores sólidos, como los tumores de mama, intestino y pulmones, incluyendo el carcinoma pulmonar de células pequeñas.

Se entenderá que, en lo que concierne al tratamiento de tumores, el tratamiento incluye cualquier disposición tomada por el médico para aliviar el efecto del tumor sobre un paciente. Por tanto, aunque la completa remisión del tumor es un objetivo deseable, el tratamiento efectivo también incluye medidas capaces de conseguir la remisión parcial del tumor, así como ralentizar la velocidad de crecimiento de un tumor, incluyendo las metástasis. Tales medidas pueden ser efectiva para prolongar y/o mejorar la calidad de vida y aliviar los síntomas de la enfermedad.

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F(i) Compuestos con la fórmula (I)

Los compuestos con la fórmula (I) de la presente invención podrían usarse en un procedimiento para el tratamiento de una enfermedad neoplásica en un paciente, procedimiento que comprende administrar a un paciente que precisa de tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto con la fórmula (I). El compuesto podría administrarse en forma de una composición farmacéutica.

Aunque que la dosis exacta del compuesto será competencia del médico, teniendo en consideración la condición y necesidades del paciente, las dosis típicas estarán en el rango de, desde aproximadamente 0,1 hasta 200 mg/kg, preferiblemente aproximadamente desde 10 hasta 100 mg/kg por paciente y día.

F(ii) Terapia ADEPT

En conjugado anticuerpo/enzima para ADEPT puede administrarse simultáneamente, pero a menudo, en la práctica clínica se halla preferible administrar el conjugado anticuerpo/enzima antes de la prodroga, por ejemplo, hasta 72 horas o incluso 1 semana antes, con objeto de proporcionarle al conjugado anticuerpo/enzima una oportunidad para situarse en la región del tumor diana. Actuando de esta manera, cuando se administra la prodroga, la conversión de la prodroga en los agentes citotóxicos estará confinada a las regiones en donde se ubica el conjugado anticuerpo/enzima, es decir, la región del tumor diana, y se minimiza la liberación prematura del compuesto con la fórmula (II).

En ADEPT, el grado de localización del conjugado anticuerpo/enzima (en términos de la proporción de conjugado activo localizado respecto el que está circulando libremente) puede potenciarse usando los sistemas de eliminación y/o inactivación descritos en WO89/10140. Esto implica, habitualmente a continuación de administrar el conjugado y antes de la administración de la prodroga, la administración de un componente (un "segundo componente") que es capaz de unirse a una parte tal de la prodroga que inactiva el enzima y/o acelera la eliminación del conjugado de la sangre. Un componente tal podría incluir un anticuerpo contra el componente enzima del sistema, el cual es capaz de inactivar el enzima.

El segundo componente podría estar unido a una molécula tal como el dextrano, a un liposoma, a albúmina, macroglobulina, o a un eritrocito del grupo sanguíneo 0, de forma que el segundo componente no puede dejar el compartimento vascular. Además, o como una alternativa, el segundo componente podría incluir un número suficiente de residuos galactosa unidos covalentemente, o residuos de otros azúcares tales como la lactosa o manosa, de forma que puede unir el conjugado en el plasma y ser retirado del plasma junto con el conjugado por parte de receptores de la galactosa, u otros azúcares, en el hígado. El segundo componente debería administrarse y diseñarse para un uso tal que no entrara, de forma apreciable, en el espacio extravascular del tumor, en donde podría inactivar el componente localizado antes y durante la administración de la prodroga.

En los sistemas ADEPT, la dosis de la prodroga y del conjugado serán en última instancia competencia del médico, el cual tendrá en consideración factores tales como la edad, peso y condición del paciente. En Bagshawe et al., Antibody, Immunoconjugates, and Radiopharmaceuticals, 4:915-922 (1991) se proporcionan dosis apropiadas de prodroga y conjugado. Una dosis apropiada de conjugado podría ser desde 500 a 200,000 unidades de enzima/m^{2} (por ejemplo, 20,000 unidades de enzima/m^{2}) y una dosis apropiada de prodroga podría ser desde aproximadamente 0,1 hasta 200 mg/kg, preferiblemente desde aproximadamente 10 hasta 100 mg/kg por paciente y día.

Con objeto de asegurar la máxima concentración del conjugado en el sitio de tratamiento deseado, es deseable normalmente espaciar la administración de los dos componentes en al menos 4 horas. El régimen exacto estará influido por varios factores, incluyendo la naturaleza del tumor a tratar, y la naturaleza de la prodroga, pero usualmente habrá una concentración del conjugado adecuada en el sitio de tratamiento deseado en 48 horas.

El sistema ADEPT, cuando se usa con nitroreductasa, preferiblemente también comprende un cofactor apropiado para el enzima. Los cofactores apropiados incluyen ribósido o ribótido de ácido nicotínico o nicotinamida.

El conjugado anticuerpo/enzima podría administrarse mediante cualquier ruta apropiada usada usualmente en la terapia ADEPT. Esto incluye la administración parenteral del anticuerpo de manera y en formulaciones similares a las descritas en la sección G(iv) más adelante.

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F(iii) Terapia GDEPT

Para el uso de vectores en la terapia, los vectores estarán usualmente empaquetados en partículas virales, y las partículas se entregarán en el sitio del tumor, tal como se describe, por ejemplo, en Ram et al. (ibid). Las partículas virales podrían modificarse para incluir un anticuerpo, un fragmento del mismo (incluyendo una cadena sencilla), o un ligando dirigido contra el tumor para potenciar la focalización en el tumor. Alternativamente, los vectores podrían empaquetarse en liposomas. Los liposomas podrían dirigirse hacia un tumor concreto. Esto puede conseguirse uniendo al liposoma un anticuerpo dirigido contra el tumor. También podrían incorporarse partículas virales dentro de los liposomas. Las partículas podrían entregarse al tumor mediante cualesquier medios apropiados a disposición del médico. Preferiblemente, las partículas virales serán capaces de infectar selectivamente las células tumorales. Por "infectar selectivamente" se quiere significar que las partículas virales infectarán principalmente células tumorales, y que la proporción de células no tumorales infectadas es tal, que el daño a células no tumorales, causado por la administración de una prodroga, será aceptablemente bajo, dada la naturaleza de la enfermedad que está siendo tratada. En última instancia, esto será determinado por el médico.

Una ruta de administración apropiada es mediante la inyección de las partículas en una solución estéril. Los virus, por ejemplo, aislados a partir de líneas celulares empaquetadoras, podrían administrarse también mediante perfusión regional o inyección intratumoral directa, o inyección directa en una cavidad corporal (administración intracavitaria), por ejemplo, mediante inyección intraperitoneal.

Por supuesto, el régimen de dosificación exacto para ambos VDEPT tendrá que ser determinado por médicos individuales para pacientes individuales, y éste, a su vez, estará controlado por la naturaleza exacta de la prodroga y del agente citotóxico a liberarse a partir de la prodroga, pero puede proporcionarse cierta guía general. La quimioterapia de este tipo implicará normalmente la administración parenteral de virus modificados, y frecuentemente se halla que la administración mediante la ruta intravenosa es la más práctica.

En los sistemas GDEPT, la cantidad de virus u otro vector suministrado será suficiente para proporcionar una concentración celular de enzima similar a la del sistema ADEPT mencionado más arriba. Típicamente, el vector se administrará al paciente y, a continuación, se monitorizará la captación del vector por parte de células transfectadas o infectadas (en el caso de vectores virales), por ejemplo, mediante la recuperación y análisis de una biopsia del tejido apuntado. Esta podría determinarse mediante ensayos clínicos que implican administrar un rango de dosis de prueba a un paciente y medir el grado de infección o transfección de una célula diana o tumor. La cantidad de prodroga requerida será similar o superior a la de los sistemas ADEPT.

Al usar un sistema GDEPT, la prodroga se administrará usualmente a continuación de administrar el vector que codifica un enzima. Las dosis apropiadas de prodroga oscilan desde aproximadamente 0,1 hasta 200 mg/kg, preferiblemente desde aproximadamente 10 hasta 100 mg/kg por paciente y día.

F(iv) Administración de una droga o prodroga

Aunque es posible administrar solos los compuestos con la fórmula (I) o las prodrogas con la fórmula (II), es preferible presentarlos como formulaciones farmacéuticas. Las formulaciones comprenden los compuestos, junto con uno o más transportadores de los mismos aceptables, y opcionalmente con otros ingredientes terapéuticos. El portador o portadores deben ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y de no ser perjudiciales para los receptores de los mismos, por ejemplo, los liposomas. Los liposomas apropiados incluyen, por ejemplo, aquellos que comprenden el lípido cargado positivamente (N[1-(2,3-dioleiloxi)propil]-N,N,N-trietilamonio (DOTMA), aquellos que comprenden la dioleoil-fosfatidiletanolamina (DOPE), y aquellos que comprenden el 3\beta[N-(n'N'-dimetilaminoetano)-carbamoil]colesterol (DC-Chol).

Las formulaciones apropiadas para la administración parenteral o intramuscular incluyen las soluciones para inyección estéril acuosas y no acuosas, las cuales podrían contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, antibióticos bactericidas, y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre o con el receptor previsto, y las suspensiones acuosas y no acuosas, las cuales podrían incluir agentes de suspensión y agentes espesantes, y los liposomas u otros sistemas de micropartículas, los cuales se diseñan para dirigir el compuesto hacia los componentes de la sangre o uno o más órganos. Las formulaciones podrían presentarse en contenedores de una dosis o múltiples dosis, por ejemplo, en ampollas y viales sellados, y podrían almacenarse en forma liofilizada, requiriendo solamente la adición del líquido portador estéril para inyecciones, por ejemplo agua, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyección podrían prepararse de forma extemporánea a partir de polvos, granulados y tabletas estériles de los tipos descritos previamente.

Debería entenderse que, además de los ingredientes mencionados más arriba de forma concreta, las formulaciones podrían incluir otros agentes convencionales en la técnica que tiene relación con el tipo de formulación en cuestión. De las formulaciones posibles, se prefieren las soluciones acuosas y no acuosas estériles y libres de pirógenos.

Las dosis podrían administrarse secuencialmente, por ejemplo, a intervalos diarios, semanales o mensuales, o en respuesta a una necesidad específica de un paciente. Las rutas de administración preferidas son la administración oral y la inyección, típicamente la inyección parenteral o intramuscular, o la inyección intratumoral.

Por supuesto, el régimen de dosificación exacto tendrá que ser determinado por médicos individuales para pacientes individuales, y éste, a su vez, estará controlado por la naturaleza exacta del compuesto con la fórmula (I), pero puede proporcionarse cierta guía general. Los rangos de dosificación típicos serán generalmente aquellos descritos más arriba, los cuales podrían administrarse en dosis únicas o múltiples. Podrían usarse otras dosis de acuerdo con la condición del paciente y otros factores según el criterio del médico.

La invención se ilustra mediante los ejemplos siguientes, los cuales empiezan en la página siguiente.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos, de A a NN, ilustran la preparación de compuestos representativos de las fórmulas generales I y II, mediante los procedimientos recogidos en los Esquemas 1 a 4. Los compuestos preparados se resumen en la Tabla 1 siguiente, en la cual la columna 2 se refiere a las estructuras detalladas en la Figura 5.

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TABLA 1

8

TABLA 1 (continuación)

10

Ejemplo A Preparación de 1-clorometil-5-nitro-3-[5,6,7-trimetoxiindol-2-il)-carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol

(Este es un compuesto 14 del Esquema 1). Una suspensión de sal sódica en polvo del ácido 1-hidroxinaftalen-2-carboxílico (1) (61,3 g, 0,29 mmol) en DMSO (205 ml) se trató con 4-cloruro de metoxibencilo (98%, 46,7 g, 0,29 mmol), y a continuación se agitó a 70°C durante 1 h. Después de enfriarse, se vertió la mezcla en KHCO_{3} acuoso diluido (3,5 l) y se recogió el precipitado resultante, se lavó con agua y se secó. El sólido se extrajo con éter de petróleo hirviendo (b.p. 60-65°C, 1100 ml), se trató con carbón activo decolorante, y la solución filtrada se enfrió durante un período prolongado a 0°C para proporcionar un crudo de 4-metoxibencil 1-hidroxinaftalen-2-carboxilato (2) (59,4 g, 66%), apropiado para un uso. Se recristalizó una muestra a partir de iPr_{2} O/éter de petróleo, p.f. 92-93°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,91 (s, 1H, OH), 8,31 (d, J=8,2 Hz, 1H, H-3), 7,92 (d, J=8,1 Hz, 1H, H-4), 7,73 (d, J=8,8 Hz, 1H, ArH), 7,71 (t br, J=7,5 Hz, 1H, ArH), 7,61 (t br, J=1,6 Hz, 1H, ArH), 6,99 (d, J=8,6 Hz, 2H, H-3',5'), 5,40 (s, 2H, CH_{2}), 3,34 (s, 3H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{19}H_{16}O_{4}): C, 74,0; H, 5,2. Hallado: C, 73,7; H, 5,2%.

Una solución caliente agitada enérgicamente de 2 (25,4 g, 0,082 mmol) en AcOH (260 ml) se enfrío hasta 25°C y se trató en una porción con una solución de HNO_{3} (70% w/w, 18,6 g, 0,20 mmol) en AcOH (25 ml). La temperatura se elevó hasta 35°C (controlada con enfriamiento externo) y se separó un sólido. Después de agitar durante 10 minutos adicionales a 30°C, se enfrió la mezcla hasta 0°C. Se recogió el precipitado, se lavó con AcOH frío e iPr_{2}O, y se recristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo para rendir 4-metoxibencil 1-hidroxi-4-nitronaftalen-2-carboxilato (3) (17,9 g, 61%) p.f. 163-164°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 12,46 (s br, 1H, OH), 8,60 (s, 1H, H-3), 8,60 (d, J=8,6 Hz, 1H, H-5), 8,47 (d, J=8,3 Hz, 1H, H-8), 7,97 (t br, J=7,8 Hz, 1H, H-6), 7,79 (t br, J=7,7 Hz, 1H, H-7), 7,50 (d, J=8,6 Hz, 2H, H-2',6'), 7,00 (d, J=8,7 Hz, 2H, H-3',5'), 5,32 (s, 2H, CH_{2}), 3,78 (s, 3H, OCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{19}H_{15}NO_{6}: C, 64,6; H, 4,3; N, 4,0. Hallado: C, 64,7; H, 4,0; N, 4,2%.

Una suspensión de 3 (12,90 g, 36,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (180 ml) se trató con Et_{3} N (6,58 ml, 47,5 mmol) y la solución resultante se enfrío hasta 0°C y se trató con anhídrido tríflico (7,82 ml, 43,8 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 30 minutos y a continuación se trató con NEt_{3} adicional (1,00 ml, 7,2 mmol) seguido por anhídrido tríflico (1,19 ml, 6,7 mmol). Después de agitarla durante 2 h adicionales a 20°C, se lavó la mezcla dos veces con agua, a continuación se secó y se concentró bajo presión reducida. El sólido se extrajo con éter de petróleo hirviendo (b.p. 90-95°C, 500 ml) en presencia de carbón activo decolorante, y la solución filtrada se enfrió hasta 55°C y se filtró a través de un filtro de celita para retirar las impurezas insolubles. A continuación de un enfriamiento prolongado, el sólido separado se recogió y lavó con éter de petróleo para rendir 4-metoxibencil-4-nitro-1-trifluoro-metil-sulfoniloxi-naftalen-2-carboxilato crudo (4) (13,09 g, 74%), apropiado para un uso ulterior. Una muestra recristalizada a partir de éter de petróleo tenía un p.f. de 74-75°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,71 (s, 1H, H-3), 8,57 (d, J=8,1 Hz, 1H, H-5), 8,30 (d, J=8,4 Hz, 1H, H-8), 7,92 (t br, J=7,9 Hz, 1H, H-6), 7,84 (t br, J=7,8 Hz, 1H, H-7), 7,44 (d, J=8,7 Hz, 2H, H-2',6'), 6,93 (d, J=8,8 Hz, 2H, H-3',5'), 5,43 (s, 2H, CH_{2}), 3,82 (s, 3H, OCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{20}H_{14}F_{3}NO_{8}S: C, 49,5; H, 2,9; N, 2,91; S, 6,6. Hallado: C, 49,7; H, 2,8; N, 2,9; S, 6,6%.

Una solución agitada de 4 (13,20 g, 27,2 mmol) y dimetil malonato (5,39 g, 40,8 mmol) en DMF (85 ml) se enfrió hasta -5°C y se trató con K_{2}CO_{3} en polvo (22,53 g, 163 mmol). Se dejo calentar la muestra hasta 20°C a lo largo de un período de 2 h, y después de agitarla durante 12 h adicionales a 20°C, se vertió lentamente en 0,5N HCl frío y agitado (1750 ml). El sólido resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y la solución se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}), y entonces se evaporó hasta secarla. El residuo se cristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/iPr_{2} O/éter de petróleo para rendir 4-metoxibencil-1-[di(metoxicarbonil)metil]-4-nitronaftalen-2-carboxilato (5) (10,66 g, 84%), apropiado para un uso ulterior. Una muestra recristalizada a partir de MeOH tenía un p.f. de 124-125°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,62 (s, 1H, H-3), 8,45 (d, J=8,6 Hz, 1H, H-5), 8,21 (d, J=8,7 Hz, 1H, H-8), 7,70 (t br, J=7,7 Hz, 1H, H-6), 7,69 (t br, J=7,8 Hz, 1H, H-7), 7,41 (d, J=8,7 Hz, 2H, H-2',6'), 6,94 (d, J=8,7 Hz, 2H, H-3',5'), 6,62 (s, 1H, ArCH), 5,37 (s, 2H, CH_{2}), 3,83 (s, 3H, PhOCH_{3}), 3,69 (s, 6H, 2 \times CO_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{24}H_{21}NO_{9}: C, 61,6; H, 4,7; N, 3,1%.

Se añadió ácido trifluoroacético (36 ml) en una porción a una mezcla de 5 (9,20 g, 19,7 mmol) y anisol (12,16 g, 20 mmol), y la solución resultante se agitó a 20°C durante 10 min y entonces se diluyó con agua fría (800 ml). Se recolectó el precipitado semi-sólido, se disolvió en EtOAc, y se lavó la solución con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}), y a continuación se concentró bajo presión reducida por debajo de 30°C. Se trituró el residuo con iPr_{2}O para proporcionar un producto crudo, el cual se recristalizó a partir de EtOAc/iPr_{2}O/éter de petróleo/AcOH (1 gota) para rendir el ácido 1-[di(metoxicarbonil)-metil]-4-nitronaftalen-2-carboxílico (6) (6,37 g, 93%), p.f. 153-154°C RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 14,1 (s br, 1H, CO_{2} H), 8,62 (s, 1H, H-3), 8,36 (d, J=8,2 Hz, 1H, H-5), 8,30 (d, J=8,7 Hz, 1H, H-8), 7,92 (t br, J=7,6 Hz, 1H, H-6), 7,84 (t br, J=7,7 Hz, 1H, H-7), 6,65 (s, 1H, ArCH), 3,63 (s, 6H, 2 \times CO_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{16}H_{13}NO_{8}: C, 55,3; H, 3,8; N, 4,0. Hallado: C, 55,4; H, 3,8; N, 3,7%.

Una suspensión agitada de 6 (7,00 g, 20,16 mmol) y NaN_{3} en polvo (3,28 g, 50,44 mmol) en CH_{2}' Cl_{2} (100 ml) se trató con piridina (3,99 g, 50,44 mmol), y entonces se enfrió hasta -5°C y se trató de una vez con cloruro de N,N-dimetil(clorosulfonil)metaniminio [aducto de SOCl_{2}/DMF] (4,26 g, 22,18 mmol). Después de agitarla a 20°C. durante 2 h, se lavó la mezcla dos veces con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se filtró a través de una columna de gel de sílice, eluyéndose con CH_{2}Cl_{2} adicional (400 ml). La eliminación del solvente bajo presión reducida por debajo de 30°C. proporcionó la azida del carbonilo cruda (7), la cual se calentó inmediatamente con agitación en tolueno seco (65 ml) bajo reflujo durante 8 min. La mezcla se enfrió hasta 0°C hasta la completa precipitación del producto, el cual se recogió y lavó con tolueno. Éste se agitó como una suspensión en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) durante 10 min a 20°C, se diluyó con iPr_{2}O, y el sólido resultante se recogió para rendir la 1,1-di(metoxicarbonil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol-2-ona (8) (5,60 g, 81%). Una muestra recristalizada a partir de CH_{2}Cl_{2} tenía un p.f. de 218-222°C. RMN-^{1}H [CD_{3})_{2}SO] \delta 11,59 (s, 1H, NH), 8,21 (d, J=8,7 Hz, 1H, H-7), 7,95 (s, 1H, H-9), 7,87 (d, J=8,5 Hz, 1H, H-4), 7,74 (t, J=7,6 Hz, 1H, H-6), 7,65 (t, J=7,7 Hz, 1H, H-5), 3,72 (s, 6H, 2 \times CO_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{16}H_{12}N_{2}O_{7}, 1.5H_{2}O: C, 51,8; H, 4,1; N, 7,5. Hallado: C, 52,1; H, 3,1; N, 7,8%.

Se añadió una solución de BH_{3}.DMS in THF (9,2 ml de 10 M, 92 mmol) a una solución de la indolona 8 (17,60 g, 51 mmol) en THF (150 ml), y la mezcla se agitó bajo reflujo durante 15 h. Después de enfriarla, se añadió MeOH (15 ml) lentamente, seguido por agua (30 ml), y a continuación se concentró la mezcla bajo presión reducida por debajo de 30°C para eliminar el MeOH. El residuo se agitó con agua y el semisólido resultante se recolectó y disolvió en CH_{2}Cl_{2}. La solución se lavó con agua (2 x), se secó (Na_{2}SO_{4}), y entonces se concentró bajo presión reducida para proporcionar un sólido, el cual se filtró a través de gel de sílice La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc) 10:1) proporcionó un producto crudo, el cual se recristalizó a partir de iPr_{2}O y, después de un enfriamiento prolongado, se recolectó para rendir el 1,1-de(metoxicarbonil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (9) (9,62 g, 57%) (contaminado con aproximadamente un 5% de 1-metoxicarbonil-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol). Una muestra recristalizada a partir de iPr_{2}O tenía un p.f. de 141°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,25 (d, J=8,7 Hz, 1H, H-7), 7,82 (d, J=8,6 Hz, 1H, H-4), 7,59 (s, 1H, H-9), 7,51 (t br, J=7,7 Hz, 1H, H-6), 7,42 (t br, J=7,8 Hz, 1H, H-5), 4,36 (d, J=2,3 Hz, 2H, NCH_{3}), 4,23 (brs, 1H, NH), 3,79 (s, 6H, 2 \times CO_{2}CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{16}H_{14}N_{2}O_{6}: C, 58,2; H, 4,3; N, 8,5. Hallado: C, 58,2; H, 4,0; N, 8,6%.

Una mezcla del crudo 9 (9,35 g, 28,3 mmol), di-tert-butil-dicarbonato (8,28 g, 36,8 mmol) y 1-metilimidazolio (3,02 g, 36,8 mmol) en THF (100 ml) se agitó a 45°C. durante 1 h, y a continuación se concentró bajo presión reducida. El sólido resultante se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y 0,1 NAcOH, y la capa orgánica se lavó con agua dos veces, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró bajo presión reducida. El residuo se agitó con CH_{2}Cl_{2} (40 ml), a continuación se enfrió y filtró para eliminar parte de la impureza de 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-metoxicarbonil-5-nitro-3H-benz[o]indol. Se evaporó la solución en CH_{2}Cl_{2} y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo (1:1) proporcionó una cantidad de impureza de indol, y la elución adicional con CH_{2}Cl_{2} rindió un sólido, el cual se trituró con iPr_{2}O/éter de petróleo para obtener 3-(tert-butiloxicarbonil)-1,1-di(metoxicarbonil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[e]indol (10) (9,98 g, 82%). Una muestra recristalizada a partir de iPr_{2}O tenía un p.f. de 151°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,85 (s br, 1 H, H-7), 7,93 (d, J=7,8 Hz, 1 H, H-4), 7,61-7,51 (m, 2 H, H-5,6), 4,69 (s, 2 H, NCH_{2}), 3,80 (s, 6 H, 2 \times CO_{2} CH_{3}), 1,61 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}). Análisis elemental calculado para C_{21}H_{22}N_{2}O_{8}: C, 58,6; H, 5,2; N, 6,5. Hallado: C, 58,7; H, 5,4; N, 6,4%.

Se añadió gota a gota NaOMe (5,61 ml de una solución 0,62 M en MeOH, 3,48 mmol) a una solución agitada de 10 (1,00 g, 2,32 mmol) en THF (20 ml) a 10°C. Transcurridos 15 min a 20°C, se añadió ácido trifluoroacético (0,29 ml, 3,8 mmol) de una vez, causando la disipación del color púrpura intenso de la solución. La reacción se diluyó con NaCl saturado, se extrajo con CH_{2}Cl_{2}, y se lavó el extracto dos veces con agua y se secó (Na_{2}SO_{4}). La solución en CH_{2}Cl_{2} se filtró a través de una columna corta de gel de sílice, eluyéndose con CH_{2}Cl_{2} adicional, y el solvente se evaporó bajo presión reducida por debajo de 30°C para rendir 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-metoxicarbonil-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o] indol crudo (11) (0,85 g, 98%), el cual se usó sin purificación adicional. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,89 (s br, 1 H, H-9), 8,38 (s br, 1 H, H-7), 7,87 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-4), 7,63-7,51 (m, 2 H, H-5,6), 4,61 (dd, J=10,5, 3,9 Hz, 1 H, NCH_{2}CH), 4,50 (s br, 1 H, NCH_{2} CH), 4,32 (t, J=11,1 Hz, 1 H, HCH_{2} CH), 3,72 (s, 3 H, CO_{2}CH_{3}), 1,61 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}).

El éster del crudo 11 (0,85 g, 2,28 mmol) del procedimiento precedente se disolvió en THF (25 ml) y se añadió gota a gota a lo largo de 20 min a una solución agitada de DIBAL (9,1 ml de una solución 1 M en tolueno, 9,1 mmol) en THF (30 ml) bajo N_{2} a 0°C. Se agitó la mezcla durante 30 min adicionales a 0°C, a continuación se vertió en 2 N HCl (40 ml) enfriado en hielo, y se extrajo dos veces con EtOAc. Los extractos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}) y concentraron bajo presión reducida por debajo de 30°C y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (10:1) proporcionó un producto crudo, el cual se cristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/iPr_{2} O/éter de petróleo para rendir 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-hidroximetil-5-nitro,1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (12) (0,48 g, 61%). Una muestra recristalizada a partir de iPr_{2}O/éter de petróleo tenía un p.f. de 176°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta (s br, 1 H, H-9), 8,42 (s br, 1 H, H-7), 7,88 (d, J=7,9 Hz, 1 H, H-4), 7,62-7,51 (m, 2 H, H5,6), 4,30 (m, 1 H, H-2), 4,17 (dd, J=11,4, 9,5 Hz, 1 H, H-2), 4,04-3,93 (m, 2 H, H-3, CHHOH), 383-3,74 (m, 1 H, CHHOH), 1,61 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}). Análisis elemental calculado para C_{18}H_{20}N_{2}O_{5}: C, 62,8; H, 5,9; N, 8,1. Hallado: C, 62,9; H, 6,1; N, 8,0%.

Una solución agitada de 12 (0,42 g, 1,22 mmol) en piridina (1,8 ml) se trató gota a gota a 0°C con cloruro de mesilo (1,13 ml, 1,46 mmol) y a continuación se agitó a 20°C durante 2 h adicionales. La mezcla se diluyó con agua, y el sólido resultante se recolectó, se disolvió en CH_{2}Cl_{2}, y la solución se lavó dos veces con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó bajo presión reducida por debajo de 30°C. Una mezcla del mesilato crudo resultante y LiCl (0,21 g, 5 mmol) en DMF (4 ml) se agitó a 80°C durante 30 min, y a continuación se enfrió y diluyó con agua. El sólido precipitado se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y se filtró a través de una columna de gel de sílice para obtener un producto crudo, el cual se trituró con iPr_{2}O/éter de petróleo, rindiendo 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-clorometil-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (13) (0,34 g, 77%). Una muestra recristalizada a partir de iPr_{2}O/éter de petróleo tenía un p.f. de 168-169°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,88 (s br, 1 H, H-9), 8,42 (s br, 1 H, H-7), 7,80 (d, J=8,1 Hz, 1 H, H-4), 7,67-7,51 (m, 2 H, H-5,6), 4,34 (s br, 1 H, H-2), 4,20 (t, J=10,2 Hz, 1 H, H-2), 4,17-4,08 (m, 1 H, H-3), 3,92 (dd, J=11,2, 2,5 Hz, 1 H, CHHCl), 3,54 (t, J=10,3 Hz, CHHCl), 1,62 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}). Análisis elemental calculado para C_{18}H_{19}ClN_{2}O_{4}: C, 59,6; H, 5,3; N, 7,7; Cl, 9,8. Hallado: C, 59,98; H, 5,2; N, 7,7; Cl, 9,7%.

Una solución de 13 (170 mg, 0,47 mmol) en dioxano saturado con HCl (10 ml) se agitó a 20°C durante 2 h, a continuación se evaporó bajo presión reducida por debajo de 30°C. A continuación se añadieron EDCI-HCl (270 mg, 1,41 mmol), ácido 5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico (118 mg, 0,47 mmol) y DMF (2,5 ml), y se agitó la mezcla a 20°C durante 2 h. La adición de agua precipitó un producto crudo, el cual se recristalizó dos veces a partir de CH_{2}Cl_{2}/iPr_{2} O para rendir 1-clorometil-5-nitro-3-[5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14a) (156 mg, 67%), p.f. 243-245°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,44 (s, 1 H, NH), 9,24 (s, 1 H, H-9), 8,43 (dd, J=7,9, 1,2 Hz, 1 H, H-7), 7,87 (dd, J=7,7, 1,5 Hz, 1 H, H-4), 7,70-7,60 (m, 2 H, H-5,6), 7,03 (d, J=2,5 Hz, 1 H, H-3'), 6,87 (s, 1 H, H-4'), 4,88 (dd, J=10,8, 2,1 Hz, 1 H, H-2), 4,74 (dd, J=10,4, 8,9 Hz, 1 H, H-2), 4,36-4,26 (m, 1 H, H-3), 4,10 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,99 (dd, J=11,4, 3,1 Hz, 1 H, CHHCl), 3,95 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,92 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,58 (dd, J=11,4, 9,9 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{25}H_{22}ClN_{3}O_{6}: C, 60,5; H, 4,5; N, 8,5. Hallado: C, 60,1; H, 4,5; N, 8,4%.

Ejemplo B Preparación de 5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15a) (Esquema 1)

Una solución de 14a (60 mg, 0,12 mmol) en THF (15 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} (15 mg) a 50 psi durante 2 h. El catalizador se eliminó mediante filtración, la solución se concentró hasta un volumen pequeño bajo presión reducida por debajo de 30°C, y entonces se añadió iPr_{2}O. El sólido resultante se purificó mediante precipitación, a partir de una solución de THF, con iPr_{2}O a 20°C para obtener 15a (53 mg, 94%), p.f. 199-204°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,41 (d, J=1,2 Hz, 1 H, NH), 8,07 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,75 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,63 (s br, 1 H, H-4), 7,45 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,28 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 7,03 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-3'), 6,96 (s, 1 H, H-4'), 5,98 (s, 2 H, NH_{2}), 4,67 (dd, J=10,8, 8,9 Hz, 1 H, H-2), 4,41 (dd, J=10,9, 1,4 Hz, 1 H, H-2), 4,12-4,02 (m, 1 H, H-1), 3,96 (dd, J=11,0, 3,1 Hz, 1 H, CHHCl), 3,94 (s, 3 H, 7(-OCH_{3}), 3,82 (s, 3 H, 5(-OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, 6(-OCH_{3}), 3,71 (dd, J=10,9, 8,2 Hz, 1 H, CHHCl). RMN-^{13}C \delta 160,1 (CO), 146,1 (C-5), 142,5 (C-3a), 139,7 (C-6'), 139,0 (C-7'), 131,3 (C-2'), 130,0 (C-9a), 126,7 (C-8), 125,2 (C-7a), 123,3 (C-6), 123,1 (C-3'a), 122,9 (C-9), 122,0 (C-7), 120,3 (C-5a), 111,9 (C-9b), 105,8 (C-3'), 98,5 (C-4), 97,9 (C-4'), 61,0 (7'-OCH_{3}), 60,9 (6'-OCH_{3}), 55,9 (5'-OCH_{3}), 55,0 (C-2), 47,3 (CH_{2} Cl), 41,2 (C-1). Análisis elemental calculado para C_{25}H_{24}ClN_{3}O_{4}: C, 64,4, H, 5,2, N, 9,0, Cl, 7,6. Hallado: C, 64,8; H, 5,3, N, 8,8 Cl, 7,6%.

Ejemplo C Preparación de 1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5-nitroindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14b)

Una solución de 13 (280 mg, 0,77 mmol) en dioxano saturado con HCl (10 ml) se agitó a 10°C durante 2 h, a continuación se evaporó hasta su sequedad bajo presión reducida, a menos de 30°C. Entonces se añadieron ácido 5-nitroindol-2-carboxílico [S.M. Parmerter, J. Amer. Chem. Soc., 80:4621-4625 (1958)] (167 mg, 0,81 mmol), EDCI.HCl (370 mg, 1,93 mmol) y DMA (3 ml), y se agitó la mezcla a 20°C durante 2 h. La adición de KHCO_{3} diluido precipitó un sólido amarillo, el cual se recogió, se lavó bien con agua, y se recristalizó a partir de THF para proporcionar 14b (282 mg, 81%), p.f. >300°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 12,56 (s, 1 H, NH), 9,14 (s, 1 H, H-4), 8,74 (d, J=2,2 Hz, 1 H, H-4'), 8,35 (dd, J=7,0, 2,7 Hz, 1 H, H-6), 8,24 (dd, J=6,8, 2,7 Hz, 1 H, H-9), 8,12 (dd, J=9,1, 2,3 Hz, 1 H, H-6'), 7,80-7,72 (m, 2 H, H-7,8), 7,64 (d, J=9,1 Hz, 1 H, H-7'), 758 (s, 1 H, H-3'), 4,96 (t, J=10,1 Hz, 1 H, H-2), 4,71 (dd, J=10,8, 2,3 Hz, 1 H, H-2), 4,68-4,61 (m, 1 H, H-1), 4,18-4,09 (m, 2 H, CH_{2} Cl). Análisis elemental calculado para C_{22}H_{15}ClN_{4}O_{5}: C, 58,6; H, 3,4; N, 12,4; Cl, 7,9. Hallado: C, 58,6; H, 3,4; N, 12,3; Cl, 7,7%.

Ejemplo D Preparación del 5-amino-3-[(5-aminoindol-2-il)carbonil]-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15b)

Una solución del compuesto dinitro 14b precedente (170 mg, 0,38 mmol) en THF (120 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} a 50 psi durante 2 h. Después de eliminar el catalizador, se concentró la solución hasta un volumen pequeño bajo presión reducida, por debajo de 25°C y se diluyó con iPr_{2}O para proporcionar el 15b (136 mg, 92%), p.f. >300°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,23 (d, J=1,4 Hz, 1 H, NH), 8,07 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 7,75 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,70 (s, 1 H, H-4), 7,45 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-8), 7,27 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 7,21 (d, J=8,6 Hz, 1 H, H-7'), 6,88 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3'), 6,76 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-4'), 6,68 (dd, J=8,6, 2,1 Hz, 1 H, H-6'), 5,96 (s, 2 H, NH_{2} del dihidroindol), 4,70 (dd, J=10,9, 8,9 Hz, 1 H, H-2), 4,64 (br, s, 2 H, NH_{2} del indol), 4,49 (dd, J=11,0, 1,6 Hz, 1 H, H-2), 4,15-4,07 (m, 1 H, H-1), 3,97 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,74 (dd, J=11,0, 8,0 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{22}H_{19}ClN_{4}O: C, 67,5; H, 5,9; N, 12,1; Cl, 7,7. Hallado: C, 67,3; H, 5,6; N, 12,2; Cl, 7,3%.

Ejemplo E Preparación de 3-[[5-(acetilamino)indol-2-il]carbonil]-1-(clorometil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14c)

La desprotección de 13 (300 mg, 0,83 mmol) como en el Ejemplo C, y el tratamiento con ácido 5-acetilamino-indol-2-carboxílico [M. A. Warpehoski et al., J. Chem., 31:590-603 (1988)] (181 mg, 0,83 mmol) y EDCI.HCl (397 mg, 2,07 mmol) en DMA (3 ml) proporcionó 14c (310 mg, 79%), p.f. (THF) 252-253°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,77 (d, J=1,2 Hz, 1 H, indol NH), 9,86 (s, 1 H, NHCO), 9,16 (s, 1 H, H-4), 8,35 (dd, J=7,1, 2,6 Hz, 1 H, H-6), 8,24 (dd, J=6,8, 2,5 Hz, 1 H, H-9), 8,10 (d, J=1,3 Hz, H-4'), 7,79-7,70 (m, 2 H, H-7,8), 7,43 (d, J=8,8 Hz, 1 H, H-7'), 7,35 (dd, J=8,8, 1,8 Hz, 1 H, H-6'), 7,27 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3'), 4,94 (t, J=10,2 Hz, 1 H, H-2), 4,71 (dd, J=11,0, 2,3 Hz, 1 H, H-2), 4,66-4,58 (m, 1 H, H-1), 4,13 (d, J=4,3 Hz, 2 H, CH_{2}Cl), 2,06 (s, 3 H, COCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{24}H_{19}ClN_{4}O_{4}: C, 62,2; H, 4,1; N, 12,1; Cl, 7,7. Hallado: C, 62,3; H, 4,3; N, 12,1; Cl, 7,9%.

Ejemplo F Preparación de 3-[[5-(acetilamino)indol-2-il]carbonil]-5-amino-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15c)

Se hidrogenó una solución de 14c (170 mg, 0,37 mmol) in THF (60 ml) sobre PtO_{2} a 50 psi durante 2 h. Después de eliminar el catalizador, se concentró la solución hasta un volumen pequeño bajo presión reducida, por debajo de 25°C y se diluyó con EtOAc/iPr_{2} O para rendir 15c (141 mg, 89%), p.f. >300°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,61 (d, J=1,4 Hz, 1 H, NH del indol), 9,84 (s, 1 H, NHCO), 8,08 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 8,05 (d, J=1,4 Hz, 1 H, H-4'), 7,76 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,71 (s, 1 H, H-4), 7,46 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-8), 7,42 (d, J=8,9 Hz, 1 H, H-7'), 7,33 (dd, J=8,8, 1,9 Hz, 1 H, H-6'), 7,29 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-7), 7,14 (d, J=1,7 Hz, 1 H, H-3'), 5,98 (s, 2 H, NH_{2}), 4,74 (dd, J=10,8, 9,0 Hz, 1 H, H-2), 4,51 (dd, J=11,0, 1,6 Hz, 1 H, H-2), 4,17-4,08 (m, 1 H, H-1), 3,97 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,77 (dd, J=10,9, 7,8 Hz, 1 H, CHHCl), 2,06 (s, 3 H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{24}H_{21}ClN_{4}O_{2}: C, 66,6; H, 4,9; N, 12,9; Cl, 8,2. Hallado: C, 66,3; H, 5,2; N, 12,7; Cl, 8,0%.

Ejemplo G Preparación de 1-(clorometil)-3-[(5-metoxiindol-2-il)carbonil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14d)

La desprotección de 13 (260 mg, 0,72 mmol) como en el Ejemplo C, y la reacción con el ácido 5-metoxiindol-2-carboxílico (145 mg, 0,76 mmol) y EDCI.HCl (344 mg, 1,80 mmol) en DMA (3 ml) rindió 14d (237 mg, 76%), p.f. (2x EtOAc/iPr_{2} O) 241-243°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,73 (d, J=1,3 Hz, 1 H, NH), 9,16 (s, 1 H, H-4), 8,35 (dd, J=7,2, 2,5 Hz, 1 H, H-6), 8,23 (dd, J=6,9, 2,4 Hz, 1 H, H-9), 7,79-7,70 (m, 2 H, H-7,8), 7,42 (d, J=8,9 Hz, 1 H, H-7'), 7,20 (d, J=1,9 Hz, 1 H, H-3'), 7,17 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-4'), 6,94 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1 H, H-6'), 4,93 (dd, J=10,6, 9,2 Hz, 1 H, H-2), 4,70 (dd, J=10,9, 2,4 Hz, 1 H, H-2), 4,65-4,57 (m, 1 H, H-1), 4,18-4,07 (m, 2 H, CH_{2} Cl), 3,79 (s, 3 H, OCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{23}H_{18}ClN_{3}O_{4}: C, 63,4; H, 4,2; N, 9,6; Cl, 8,1. Hallado: C, 63,1; H, 4,2; N, 9,9; Cl, 8,0%.

Ejemplo H Preparación de 5-amino-1-(clorometil)-3-[(5-metoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15d)

Se hidrogenó una solución de 14d (140 mg, 0,32 mmol) en THF (10 ml) sobre PtO_{2} a 50 psi durante 2 h. Después de eliminar el catalizador, se concentró la solución hasta un volumen pequeño por debajo de 25°C y se diluyó con iPr_{2} O para rendir 15d (124 mg, 95%), p.f. 250-255°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,56 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 8,08 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 7,76 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,70 (s, 1 H, H-4), 7,46 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,40 (d, J=8,8 Hz, 1 H, H-7'), 7,28 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-7), 7,16 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-4'), 7,08 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3'), 6,91 (dd, J=8,8, 2,5 Hz, 1 H, H-6'), 5,98 (s, 2 H, NH_{2}), 4,73 (dd, J=10,8, 8,9 Hz, 1 H, H-2), 4,51 (dd, J=10,9, 1,7 Hz, 1 H, H-2), 4,17-4,08 (m, 1 H, H-1), 3,98 (dd, J=11,0, 3,1 Hz, 1 H, CHHCl), 3,78 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,75 (dd, J=11,0, 8,1 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{23}H_{20}ClN_{3}O_{2}: C, 68,1; H, 5,0; N, 10,4; Cl, 8,7. Hallado: C, 67,9; H, 5,3; N, 10,2; Cl, 8,5%.

Ejemplo I Preparación de 1-(clorometil)-3-[[5-[2-(dimetilamino)etoxi]indol-2-il]carbonil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14e)

Una solución agitada de 4-[2-(dimetilamino)etoxi]anilina [R. Paul et al., J. Chem., 36:2716-2725(1993)] (3,61 g, 20 mmol) en agua (34 ml) y HCl concentrado (10 ml) se diazotizó a 0°C con una solución de NaNO_{2} (1,52 g, 22 mmol) en agua (4 ml). La solución fría se añadió de una vez a una mezcla, enfriada con hielo y agitada enérgicamente, de etil-2-metil-acetoacetato (3,03 g, 21 mmol), NaOAc anhidro (17 g), EtOH (25 ml), y hielo recién añadido (20 g). Después de agitarla a 20°C durante 1 h, se enfrió la muestra hasta 0°C, se basificó mediante la adición lenta de Na_{2}CO_{3} sólido, y se extrajo inmediatamente con CH_{2}Cl_{2} (\times 2). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se evaporaron. El sólido se extrajo con éter de petróleo caliente (b.p. 60-65°C) en presencia de carbón activo decolorante, y la solución clarificada se evaporó. El aceite restante (4,55 g) se disolvió en EtOH absoluto (6 ml) y se añadió EtOH saturado con HCl (10 ml). Después de calentarla al reflujo durante 25 min, se concentró la solución, y el residuo se repartió entre Na_{2}CO_{3} diluido y CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se lavó con agua y solución de NaCl, se secó y evaporó. El residuo se trituró con iPr_{2}O/hexanos y el sólido resultante se recristalizó a partir de iPr_{2}O/hexanos para obtener etil-5-[2-(dimetilamino)etoxi]indol-2-carboxilato (1,32 g, rendimiento global del 24%) como agujas, p.f. 110°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,72 (s, 1 H, NH), 7,34 (d, J=9,0 Hz, 1 H, H-7), 712 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-4), 7,03 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-3), 6,91 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1 H, H-6), 4,32 (q, J=7,1 Hz, 2 H, CH_{2} CH_{3}), 4,03 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2}), 2,63 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2} CH_{2}), 2,22 (s, 6 H, N(CH_{3})2), 1,33 (t, J=7,1 Hz, 3 H, CH_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{15}H_{20} N_{2}O_{3}: C, 65,2; H, 7,3; N, 10,1. Hallado: C, 64,9; H, 7,0; N, 10,2%.

Una mezcla del éster anterior (0,75 g, 2,7 mmol), Cs_{2}CO_{3} (3,0 g), MeOH (6 ml), y agua (3 mL) se calentó con reflujo durante 2 h, a continuación se evaporó hasta su sequedad. El residuo se disolvió en agua (5 ml) y la solución filtrada se ajustó a pH 6,5 con HCl, y se enfrió hasta 0°C durante 24 h. Se recolectó el sólido cristalino resultante, se lavó con agua enfriada con hielo y Me_{2}CO, y se trató con HCl/dioxano/EtOAc seco. El sólido resultante se recristalizó a partir de MeOH/EtOAc/trazas de HCl para rendir el hidrocloruro del ácido 5-[2-(dimetilamino)etoxi]indol-2-carboxílico (0,69 g, 89%) como escamas incoloras, p.f. 239-240°C RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 12,88 (s br, 1 H, CO_{2} H), 11,69 (s, 1 H, indol NH), 10,56 (s br, 1 H, NH+), 7,37 (d, J=9,1 Hz, 1 H, H-7), 7,20 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-4), 7,01 (d, J=1,7 Hz, 1 H, H-3), 6,98 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1 H, H-6), 4,34 (t, J=5,1 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,50 (t, J=5,1 Hz, 2 H, OCH_{2} CH_{2}), 2,85 (s, 6 H, N(CH_{3})2). Análisis elemental calculado para C_{13}H_{16}N_{2}O_{3}.HCl: C, 54,8; H, 6,0; N, 9,8; Cl, 12,5. Hallado: C, 54,8; H, 5,9; N, 9,9; Cl, 12,3%.

La desprotección de 13 (260 mg, 0,72 mmol) como en el Ejemplo C, la reacción del producto con el anterior hidrocloruro del ácido 5-[2-(dimetilamino)etoxi]indol-2-carboxílico (210 mg, 0,74 mmol), EDCI.HCl (345 mg, 1,80 mmol) y DMA (3 ml) proporcionó material crudo que se purificó mediante precipitación, a partir de una solución de CH_{2}Cl_{2} a 20°C, con iPr_{2}O (2\times) para rendir 14e (237 mg, 67%), p.f. 224-227°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,72 (d, J=1,5 Hz, 1 H, NH), 9,16 (s, 1 H, H-4), 8,35 (dd, J=7,2, 2,5 Hz, 1 H, H-6), 8,23 (dd, J=6,9, 2,5 Hz, 1 H, H-9), 7,79-7,71 (m, 1 H, H-7,8), 7,41 (d, J=8,9 Hz, 1 H, H-7'), 7,21-7,16 (m, 2 H, H-3',4', 6,94 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1 H, H-6'), 4,93 (dd, J=10,6, 9,8 Hz, 1 H, H-2), 4,70 (dd, 10,9, 2,4 Hz, 1 H, H-2), 4,65-4,58 (m, 1 H, H-1), 4,18-4,09 (m, 2 H, CH_{2} Cl), 4,07 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2}), 2,66 (t, J=5,8 Hz, OCH_{2} CH_{2}), 2,24 (s, 6 H, N(CH_{3})2). Análisis elemental calculado para C_{26}H_{25}ClN_{4}O_{4}: C, 63,4; H, 5,1; N, 11,4; Cl, 7,2. Hallado: C, 63,5; H, 5,1; N, 11,3; Cl, 7,2%.

Ejemplo J Preparación del 5-amino-1-(clorometil)-3-[[5-[2-(dimetilamino)etoxi]indol-2-il]carbonyl]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15e)

Se hidrogenó una solución de 14e (125 mg, 0,25 mmol) en THF (10 ml) sobre PtO_{2} a 50 psi durante 2 h. Después de eliminar el catalizador, se concentró la solución hasta un volumen pequeño bajo presión reducida, por debajo de 25°C y se diluyó con iPr_{2}O para obtener 15e (115 mg, 98%): p.f. >250°C.; RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,56 (d, J=1,4 Hz, 1 H, NH), 8,08 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,76 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,70 (s, 1 H, H-4), 7,46 (t, J=7,4 Hz, 1 H, H-8), 7,39 (d, J=8,9 Hz, 1 H, H-7'), 7,28 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 7,17 (d, J=2,2 Hz, 1 H, H-4'), 7,07 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3'), 6,91 (dd, J=8,9, 2,4 Hz, 1 H, H-6'), 5,98 (s, 2 H, NH_{2}), 4,73 (dd, J=10,6, 9,1 Hz, 1 H, H-2), 4,51 (dd, J=10,9, 1,4 Hz, 1 H, H-2), 4,16-4,08 (m, 1 H, H-1), 4,06 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,98 (dd, J=10,9, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,75 (dd, J=10,9, 8,1 Hz, 1 H, CHHCl), 2,65 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2} CH_{2}), 2,24 (s, 6 H, N(CH_{3})2). Análisis elemental calculado para C_{26}H_{27}ClN_{4}O_{2}: C, 67,5; H, 5,9; N, 12,1; Cl, 7,7. Hallado: C, 67,3; H, 5,6; N, 12,2; Cl, 7,8%.

Ejemplo K Preparación del 1-(clorometil)-3-[[6-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14f)

Una mezcla de vanillina (10,00 g, 65,7 mmol), K_{2}CO_{3} (45,4 g, 329 mmol), 1,2-dicloroetano (104 ml, 1,31 mol), y DMF (300 ml) se agitó a 65-70°C durante 16 h. Se evaporó el dicloroetano y la papilla resultante se vertió sobre hielo. El aceite que se separó se extrajo con Et_{2} O (\times 4) y EtOAc (\times 3). Los extractos combinados se lavaron con agua (\times 3), se secaron (Na_{2}SO_{4}/MgSO_{4}), y se evaporaron para obtener un aceite claro que se solidificó a partir de su trituración con hexanos. La cristalización a partir de Et_{2}O proporcionó 4-(2-cloroetoxi)-3-metoxibenzaldehído (12,04 g, 85%) como agujas blancas, p.f. 60-61°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,87 (s, 1 H, CHO), 7,46 (dd, J=8,0, 2,0 Hz, 1 H, H-6), 7,43 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-5), 6,99 (d, J=8,0 Hz, 1 H, H-2), 4,36 (t, J=6,1 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,94 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,89 (t, J=6,1 Hz, 2 H, CH_{2}Cl); RMN-^{13}C \delta 190,8 (CHO), 153,9 (C-4), 150,0 (C-3), 130,8 (C-1), 126,3 (C-6), 112,3 (C-2), 109,8 (C-5), 68,9 (OCH_{2}), 56,0 (OCH_{3}), 41,2 (CH_{2}Cl). Análisis elemental calculado para C_{10}H_{11}ClO_{3}: C, 56,0; H, 5,2; N, 16,5. Hallado: C, 56,3; H, 5,1; N, 16,7%.

Se añadió una solución del aldehído anterior (4,50 g, 20,97 mmol) y de azidoacetato de metilo (8,20 g, 71,3 mmol) en MeOH (18 ml) a una solución enfriada (hielo/sal) de metóxido sódico (a partir de 7,45 g de sodio, 62,9 mmol) en MeOH (36 ml) durante 1 h. Se dejó reposar la papilla blanca a 5°C durante 1,5 h, a continuación a -15°C durante 18 h. Se añadió agua enfriada con hielo (200 ml) y el precipitado se eliminó mediante filtración, se lavó con agua, y se disolvió en CH_{2}Cl_{2}. La solución en CH_{2}Cl_{2} se lavó con agua, se secó (MgSO_{4}), y se evaporó para rendir metil(azido-4-(2-cloroetoxi)-3-metoxicinamato como agujas inestables de color blancuzco (5,08 g, 78%), p.f. 115-116°C (dec), que se usaron sin purificación adicional RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,52 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-2), 7,33 (dd, J=8,6, 2,0 Hz, 1 H, H-6), 6,89 (d, J=8,6 Hz, 1 H, H-5), 6,87 (s, 1 H, H-\beta), 4,31 (t, J=6,2 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,91, 3,90 (2 \times s, 3 H cada uno, OCH_{3}), 3,85 (t, J=6,2 Hz, 2 H, CH_{2}Cl); RMN-^{13}C \delta 164,1 (CO_{2}), 149,2, 148,7 (C-3,4), 127,3 (C-1), 125,6, 124,7 (C-6,\beta), 123,7 (C-\alpha), 113,9, 113,3 (C-2,5), 69,0 (OCH_{2}), 56,1 (OCH_{3}), 52,8 (CO_{2}CH_{3}), 41,4 (CH_{2}Cl).

Una solución templada (40°C) del anterior azidocinamato (5,08 g, 16,3 mmol) en xilenos (140 ml) se añadió a xilenos hirviendo (60 ml) durante 1 h. Después de 15 min adicionales con reflujo, se eliminó la mayoría del xileno mediante destilación. El precipitado que se formó en el residuo enfriado se aisló mediante filtración, se lavó con CHCl_{3} y hexanos, y se cristalizó a partir de MeOH para rendir metil-6-(2-cloroetoxi)-5-metoxiindol-2-carboxilato (2,423 g, 52%) como agujas blancas plumosas, p.f. 164-166°C (sublima a 110°C.). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,65 (s br, 1 H, NH), 7,13 (s, 1 H, H-4), 7,03 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-3), 6,91 (s, 1 H, H-7), 4,24 (t, J=5,2 H, 2 H, OCH_{2}), 3,98 (t, J=5,2 H, 2 H, CH_{2} Cl), 3,84 3,78 (2\times s, 3 H cada uno, OCH_{3}); RMN-^{13}C \delta 161,5 (CO_{2}), 147,8, 145,8, 132,4, 125,5, 120,3 (C-2, 3a, 5, 6, 7a), 107,8 (C-3), 103,0 (C-4), 96,3 (C-7), 68,9 (OCH_{2}), 55,7 (OCH_{3}), 51,4 (CO_{2}CH_{3}), 42,9 (CH_{2}Cl). Análisis elemental calculado para C_{13}H_{14}ClNO_{4}: C, 55,0; H, 5,0; N, 4,9; Cl, 12,5. Hallado: C, 54,9; H, 5,2; N, 4,9; Cl, 12,4%. La purificación de los licores madre evaporados mediante cromatografía "flash" (CH_{2}Cl_{2}) y mediante cristalización a partir de 1,2-dicloroetano y, a continuación, MeOH, proporcionó producto adicional (0,42 g, 9%).

Una mezcla del éster anterior (1,00 g, 3,52 mmol), Cs_{2}CO_{3} (1,723 g, 5,29 mmol), EtOH al 95% (10 ml), y agua (10 ml) se calentó con reflujo durante 6 h Se añadió agua (15 ml) y se evaporó el EtOH. La solución se filtró a través de celita y se acidificó con HCl 2 M. El precipitado que se formó se recogió mediante filtración, se lavó con agua, y se secó para proporcionar el ácido 6-(2-cloroetoxi)-5-metoxiindol-2-carboxílico (0,95 g, 100%) como un polvo blanco, el cual cristalizó a partir de MeOH como agujas blancas, p.f. 187-189°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 12,63 (s br, 1 H, CO_{2} h), 11,47 (s, 1 H, NH), 7,12 (s, 1 H, H-4), 6,97 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-3), 6,91 (s, 1 H, H-7), 4,23 (t, J=5,2 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,97 (t, J=5,2 Hz, 2 H, CH_{2}Cl), 3,78 (s, 3 H, OCH_{3}); RMN-^{13}C 162,5 (CO_{2}), 147,5, 145,6, 132,1, 126,9, 120,4 (C-2,3a,5,6,7a), 107,4 (C-3), 103,1 (C-4), 96,5 (C-7), 68,9 (OCH_{2}), 55,7 (OCH_{3}), 43,0 (CH_{2}Cl). Análisis elemental calculado para C_{12} H_{12} ClNO_{4} : C, 53,4; H, 4,5; N, 5,2. Hallado: C, 53,2; H, 4,4; N, 5,2%.

Una mezcla del ácido anterior (1,20 g, 4,45 mmol), Me_{2}NH acuoso al 25% (16 ml, 89 mmol), Na_{2}CO_{3} (1,18 g, 11,1 mmol), y agua (80 ml) se calentó hasta 100°C durante 1,25 h, a continuación se evaporó. El residuo se disolvió en Na_{2}CO_{3} 0,4 M acuoso (30 ml), se extrajo con Et_{2}O (\times 2), se acidificó hasta pH 1 con HCl 2 M, y se evaporó. El residuo se extrajo con CH_{3}CN caliente (\times 8) y los extractos se concentraron. El precipitado que se formó se eliminó mediante filtración y se lavó con CH_{3}CN y Et_{2}O para rendir el hidrocloruro del ácido 6-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-carboxílico (1,06 g, 76%) como un sólido pardo higroscópico, p.f. 204-205°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 12,7 (s br, 1 H, CO_{2} H), 11,57 (d, J=1,9 Hz, 1 H, indol NH), 10,7 (s br, 1 H, NH+), 7,16 (s, 1 H, H-4), 6,98 (d, J=1,9 Hz, 1 H, H-3), 6,96 (s, 1 H, H-7), 4,38 (t, J=4,9 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,53 (t, J=4,9 Hz, 2 H, NCH_{2}), 2,88 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}); RMN-^{13}C \delta 162,5 (CO_{2}), 147,0, 145,6, 132,0, 127,1, 120,7 (C-2, 3a, 5, 6, 7a), 107,4 (C-3), 102,9 (C-4), 97,1 (C-7), 64,0 (OCH_{2}), 55,7 (OCH_{3}), 55,3 (NCH_{2}), 42,9 (N(CH_{3})2).

La desprotección de 13 (260 mg, 0,72 mmol) como en el Ejemplo C, y la reacción del producto con el hidrocloruro del ácido 6-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-carboxílico (230 mg, 0,73 mmol), EDCI.HCl (345 mg, 1,80 mmol) y DMA (3 ml) a 20°C durante 3 h proporcionó un sólido. Este se agitó con KHCO_{3} diluido y el sólido gelatinoso resultante se recogió y cromatografió sobre alumina-90. La elución con EtOAc/MeOH (10:1) proporcionó el producto crudo, el cual se recristalizó a partir de EtOAc/i-Pr_{2}O, seguido por CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo, para rendir el 14f (180 mg, 48%), p.f. 224-234°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,54 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 9,17 (s, 1 H, H-4), 8,34 (dd, J=7,5, 2,2 Hz, 1 H, H-6), 8,22 (dd, J=7,1, 1,8 Hz, 1 H, H-9), 7,79-7,69 (m, 2 H, H-7,8), 7,17 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-3'), 7,16 (s, 1 H, H-4' ó 7'), 6,99 (s, 1 H, H-4' or 7'), 4,91 (t, J=10,2 Hz, 1 H, H-2), 4,68 (dd, J=10,9, 2,4 Hz, 1 H, H-2), 4,65-4,57 (m, 1 H, H-1), 4,17-4,09 (m, 2 H, CH_{2}Cl), 4,06 (t, J=6,0 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,79 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,69 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2}CH_{2}), 2,26 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}). Análisis elemental calculado para C_{27}H_{27}ClN_{4}O_{5}: C, 62,0; H, 5,2; N, 10,7. Hallado: C, 61,8; H, 5,2; N, 10,4%.

Ejemplo L Preparación del 5-amino-1-(clorometil)-3-[[6-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15f)

Una solución de 14f (130 mg, 0,25 mmol) en THF (20 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} (30 mg) a 55 psi durante 2 h. El catalizador se eliminó y la solución se concentró bajo presión reducida por debajo de 30°C El residuo se disolvió en una pequeño volumen de CH_{2}Cl_{2}, la solución se diluyó con éter de petróleo para precipitar las impurezas, las cuales se eliminaron mediante filtración, y entonces la adición de más éter de petróleo precipitó el 15f (87 mg, 71%), p.f. 130-133°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,38 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 8,07 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,75 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,72 (s, 1 H, H-4), 7,45 (t, J=7,4 Hz, 1 H, H-8), 7,27 (t, J=7,7 hz, 1 H, H-7), 7,15 (s, 1 H, H-3'), 7,05 (s, 1 H, H-4' or 7'), 6,99 (s, 1 H, H-4' or 7'), 5,96, 5,94 (2 \times s, 2 H, NH_{2}), 4,71 (dd, J=10,6, 9,1 Hz, 1 H, H-2), 4,50 (dd, J=10,9 Hz, 1,6 Hz, 1 H, H-2), 4,16-4,08 (m, 1 H, H-1), 4,05 (t, J=6,0 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,98 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,79 (s, 1 H, OCH_{3}), 3,74 (dd, J=10,9, 8,2 Hz, 1 H, CHHCl), 2,68 (t, J=5,9 Hz, 2 H, OCH_{2} CH_{2}), 2,25 (s, 6 H, N(CH_{3})2). Análisis elemental calculado para C_{27}H_{29}ClN_{4}O_{3}.0,5H_{2}O: C, 64,6; H, 6,0; N, 11,2; Cl, 7,1. Hallado: C, 64,4; H, 5,9; N, 11,2; Cl, 6,6%.

Ejemplo M Preparación del 1-(clorometil)-3-[[7-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonyl]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14g)

Una mezcla de 5-metoxi-3-metil-2-nitrofenol [J. Atkinson et al., J. Org. Chem., 56:1788-1800 (1991)] (5,00 g, 27,3 mmol), hidrocloruro de cloruro de 2-(dimetilamino)etilo (4,33 g, 30 mmol), K_{2}CO_{3} (15,1 g, 109 mmol), NaI (0,41 g, 2,7 mmol), y butanona (50 ml) se calentó con reflujo durante 1 h y entonces se enfrió hasta temperatura ambiente Se añadió una mezcla de hidrocloruro de cloruro de 2-dimetilaminoetilo (4,33 g, 30 mmol), K2CO_{3} (7,6 g, 54,6 mmol), y butanona (15 ml), que se había agitado durante 5 min, y la mezcla se calentó con reflujo durante 1,5 h. Se concentró la mezcla y la papilla restante se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (\times 4). Los extractos combinados se lavaron con Na_{2}CO_{3} acuoso 2 N (\times 10) y se extrajeron con HCl acuoso 2 N (\times 5). Los extractos combinados se lavaron con EtOAc, se basificaron con Na_{2}CO_{3}, y se extrajeron con EtOAc (\times 4). Estos extractos se secaron (MgSO_{4}) y evaporaron para rendir la 2-(5-metoxi-3-metil-2-nitrofeniloxi)-N,N-dimetiletanamino (4,38 g, 63%) como un aceite amarillo; RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 6,38 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-6'), 6,32 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-4', 4,12 (t, J=5,8 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,81 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,73 (t, J=5,8 Hz, 2 H, NCH_{2}), 2,31 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}), 2,28 (s, 3 H, 3(-CH_{3}); RMN-^{13}C \delta 161,0 (C-5'), 151,8 (C-1'), 136,1 (C-2'), 132,7 (C-3'), 106,7 (C-4'), 97,9 (C-6'), 68,1 (OCH_{2}), 57,4 (NCH_{2}), 55,5 (OCH_{3}), 45,8 (N(CH_{3})_{2}), 17,7 (3'-CH_{3}). Calculado para C_{12}H_{18}N2O_{4}, M+254,1267. Hallado, 254,1276. El material de partida (1,178 g, 24%) se recuperó a partir de los lavados básicos mediante la acidificación y extracción.

Una suspensión de potasio (0,308 g, 7,87 mmol) en xilenos (6 ml) se calentó hasta 100°C y se agitó rápidamente a medida que se dejaba enfriar. Se retiraron los xilenos y se lavó el potasio con Et_{2}O (\times 3) y se cubrió con Et_{2}O (10 ml). La mezcla se trató con EtOH absoluto (1,30 ml, 22,2 mmol) y se agitó con reflujo hasta que el potasio se hubo disuelto (3 h). La mezcla enfriada se trató con dietiloxalato (1,07 ml, 7,87 mmol), a continuación con una solución del anterior nitrotolueno (2,00 g, 7,87 mmol) en Et_{2}O seco (5 ml). Transcurridas 115 h, el precipitado rojo oscuro se eliminó mediante filtración y se lavó con Et_{2}O. El sólido rojo (1,189 g) se disolvió en EtOH absoluto (45 ml), se acidificó con AcOH (0,78 ml), y se hidrogenó sobre Pd/C (10%, 0,44 g) a 1 atm H2 durante 8 h. La mezcla se filtró a través de celita, se concentró, se diluyó con Na_{2}CO_{3} acuoso 0,2 M (100 ml), y se extrajo con EtOAc (\times 4). Los extractos combinados se lavaron con agua (\times 2), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se evaporaron y se purificaron mediante cromatografía "flash" (2% Et_{3}N/EtOAc) para proporcionar etil-7-[2-(dimetilamino)-etoxi]-5-metoxiindol-2-carboxilato como un aceite claro (0,44 g, 18%). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 10,93 (s br, 1 H, NH), 7,09 (d, J=2,1 Hz, 1 H, H-3), 6,67 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-4), 6,43 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-6), 4,38 (q, J=7,0 Hz, 2 H, OCH_{2}CH_{3}), 4,16 (t, J=6,5 Hz, 2 H, OCH_{2}CH_{2}N), 3,88 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,79 (t, J=7,0 Hz, 2 H, NCH_{2}), 2,37 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}), 1,40 (t, J=6,5 Hz, 3 H, OCH_{2}CH_{3}); RMN-^{13}C \delta 161,9 (CO_{2}), 155,0, 146,0, 128,1, 127,7, 124,9 (C-2, 3a, 5, 7, 7a), 108,1 (C-3), 99,1 (C-4), 94,6 (C-6), 65,9 (OCH_{2}CH_{2} N), 60,6 (OCH_{2}CH_{3}), 58,3 (NCH_{2}), 55,6 (OCH_{3}), 45,1 (N(CH_{3})_{2}), 14,4 (OCH_{2}CH_{3}). Calculado para C16H_{22} N2O_{4}, M+306,1580. Hallado, 306,1577. El material de partida (0,77 g, 39%) se recuperó a partir de los lavados con éter mediante extracción en ácido, basificación, y extracción con Et_{2}O.

Una mezcla del anterior éster (0,410 g, 1,34 mmol), EtOH al 95% (21 ml), y NaOH acuoso 1,0 M (2,7 ml, 2,7 mmol) se agitó con reflujo durante 1,5 h. Se evaporó el EtOH, se añadió HCl acuoso 2 M (5 ml), y se evaporó la solución. Se extrajo el residuo con CH_{3}CN caliente (\times 3), y los extractos se concentraron con Et_{2}O diluido. El precipitado que se formó se recolectó mediante filtración y se lavó con Et_{2}O para rendir el hidrocloruro del ácido 7-[2-(dimetilamino)etoxi)-5-metoxiindol-2-carboxílico (0,372 g, 88%) como un polvo blanco, p.f. 175-178°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 12,85 (s br, 1 H, CO_{2}H), 11,52 (s, 1 H, indol NH), 10,48 (s br, 1 H, NH+), 7,00 (d, J=2,1 Hz, 1 H, H-3), 6,72 (d, J=2,1 Hz, 1 H, H-4), 6,49 (d, J=2,1 Hz, 1 H, H-6), 4,41 (t, J=4,8 Hz, 2 H, OCH_{2}), 3,76 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,58 (t, J=4,8 Ha, 2 H, NCH_{2}), 2,88 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}); RMN-^{13}C \delta 162,5 (CO_{2}H), 154,4 (C-5), 144,9 (C-7), 128,5, 127,6, 123,5 (C-2,3a, 7a), 107,7 (C-3), 97,6 (C-4), 94,4 (C-6), 61,3 (OCH_{2}), 55,3 (OCH_{3}), 54,8 (NCH_{2}), 42,0
(N(CH_{3})_{2}).

La desprotección de 13 (160 mg, 0,44 mmol) como en el Ejemplo C de más arriba, y la reacción del producto con EDCI.HCl (211 mg, 1,10 mmol), el hidrocloruro del ácido 7-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-carboxílico (145 mg, 0,46 mmol), y DMA (2 ml) a 20°C durante 3 h, seguida por la adición de KHCO_{3} diluido, precipitó un sólido. Éste se recristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/i-Pr_{2}O seguido por CH_{2}Cl_{2}/EtOAc para rendir el 14g (193 mg, 84%), p.f. 230-240°C RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,64 (s, 1 H, NH), 9,11 (s, 1 H, H-4), 8,36 (dd, J=7,1, 2,7 Hz, 1 H, H-6), 8,23 (dd, J=6,7, 2,6 Hz, 1 H, H-9), 7,79-7,71 (m, 2 H, H-7,8), 7,14 (s, 1 H, H-3), 6,75 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-4' or 6'), 6,50 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-4' ó 6'), 4,89 (dd, J=10,6, 9,6 Hz, 1 H, H-2), 4,65-4,55 (m, 2 H, H-1,2), 4,19 (t, J=5,7 Hz, 2 H, OCH_{2}), 4,16-4,05 (m, 2 H, CH_{2} Cl), 3,78 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,74 (t, J=5,7 Hz, 2 H, OCH_{2}CH_{2}), 2,28 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}). Análisis elemental calculado para C_{27}H_{27}ClN_{4}O_{5}: C, 62,0; H, 5,2; N, 10,7; Cl, 6,8. Hallado: C, 61,9; H, 5,1; N, 10,9; Cl, 6,8%.

Ejemplo N Preparación del 5-amino-1-(clorometil)-3-[[7-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15g)

Una solución de 14g (120 mg, 0,23 mmol) en THF (45 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} (30 mg) a 55 psi durante 1,5 h. Después de eliminar el catalizador, se concentró la solución hasta un volumen pequeño bajo presión reducida y por debajo de 30°C, y a continuación se diluyó con éter de petróleo para rendir el 15g (140 mg, 92%), p.f. 109-111 (C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,41 (s, 1 H, NH), 8,07 (d, J=8,8 Hz, 1 H, H-6), 7,75 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,64 (s, 1 H, H-4), 7,45 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-8), 7,28 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-7), 7,00 (d, J=1,2 Hz, 1 H, H-3'), 6,73 (d, J=1,9 Hz, 1 H, H-4' or 6'), 6,48 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-4'or 6'), 5,98, 5,96 (2 \times s, 2 H, NH_{2}), 4,66 (dd, J=10,7, 9,0 Hz, 1 H, H-2), 4,41 (dd, J=11,0, 1,4 Hz, 1 H, H-2), 4,19 (t, J=5,7 Hz, 2 H, OCH_{2}), 4,12-4,04 (m, 1 H, H-1), 3,96 (dd, J=10,9, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,77 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,72 (dd, J=11,0, 8,2 Hz, 1 H, CHHCl), 2,73 (t, J=5,7 Hz, 2 H, OCH_{2} CH_{2}), 2,28 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}). Análisis elemental calculado para C_{27}H_{29}ClN_{4}O_{3}.1,5H_{2}O: C, 62,4; H, 6,2; N, 10,8; Cl, 6,8. Hallado: C, 62,8; H, 6,3; N, 10,7; Cl, 6,8%.

Ejemplo Q Preparación del 3-[(E)-4-(butirilamino)-1-metil-2-pirrolacriloil]-1-(clorometil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14i)

Una mezcla de 1-metil-4-nitro-2-pirrolcarboxaldehído [P. Fournari., Bull. Soc. Chim. Fr., 488-491 (1963)] (0,24 g, 1,56 mmol), metil- trifenil-fosforilidene-acetato (0,57 g, 1,71 mmol), y benceno (25 ml) se calentó con reflujo durante 24 h. La solución aún caliente se purificó mediante directamente mediante cromatografía "flash" seca (0-5% Et_{2}O/CH_{2}Cl_{2}) para rendir metil(E)-1-metil-4-nitro-2-pirrolacrilato como un sólido amarillo brillante (0,33 g, 100%), p.f. 146-147°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,55 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-5), 7,47 (d, J=15,8 Hz, 1 H, H-\beta), 7,07 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3), 6,27 (d, J=15,8 Hz, 1 H, H-\alpha), 3,77, 3,75 (2 \times s, 3 H cada uno, CO_{2} CH_{3}, NCH_{3}); RMN-^{13}C \delta 166,9 (CO_{2}), 136,6, 129,7 (C-2,4), 130,3, 125,4 (C-3, 5), 117,8, 106,0 (CH=CH), 51,8 (CO_{2}CH_{3}), 35,3 (NCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{9}H_{10}N_{2}O_{4}: C, 51,4; H, 4,8; N, 13,3. Hallado: C, 51,4; H, 4,7; N, 13,3%.

Alternativamente, una mezcla de 1-metil-4-nitro-2-pirrolcarboxaldehído (0,20 g, 1,30 mmol), ácido malónico (0,68 g, 6,5 mmol), piperidina (2 gotas), y piridina (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y a 100°C durante 4 h, a continuación se añadió H_{2}SO_{4} acuoso al 30% (10 ml). El precipitado que se formó se eliminó mediante filtración y se lavó con agua para rendir el ácido (E)-1-metil-4-nitro-2-pirrolacrílico como agujas amarillas finas (0,23 g, 92%). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 12,35 (s br, 1 H, CO_{2}H), 8,13 (d, J=1,9 Hz, 1 H, H-5), 7,44 (d, J=15,9 Hz, 1 H, H-\beta), 7,41 (d, J=1,9 Hz, 1 H, H-3), 6,46 (d, J=15,9 Hz, 1 H, H-\alpha), 3,79 (s, 3 H, NCH_{3}); RMN-^{13}C \delta 167,4 (CO_{2}H), 135,3, 129,9 (C-2,4), 130,6, 127,0, 118,6, 105,8 (C-3,5,\alpha, \beta), 34,8 (NCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{8}H_{8}N_{2}O_{4}: C, 49,9; H, 4,1; N, 14,3. Hallado: C, 49,0; H, 4,0; N, 14,1%.

Una mezcla del ácido anterior (0,10 g, 0,51 mmol), NaHCO_{3} (0,10 g, 0,61 mmol). MeOH (6 ml), y agua (2 ml) con reflujo se trató con dimetil sulfato (0,12 ml), se calentó con reflujo durante 1 h, se diluyó con agua, y se extrajo con EtOAc (\times 3). Los extractos combinados se lavaron con agua (\times 2), se secaron (Mg_{2}SO_{4}), se evaporaron, y se purificaron mediante cromatografía "flash" seca (0-5% Et_{2}O/CH_{2}Cl_{2}) para rendir el metil-(E)-1-metil-4-nitro-2-pirrolacrilato (63 mg, 59%).

Una solución de este nitroéster (50 mg, 0,24 mmol) en MeOH acuoso (1:12,5, 5,4 ml) con reflujo se trató con polvo de hierro (70 mg, 1,25 mmol) y anhídrido butírico (0,40 ml, 2,45 mmol). Transcurridos 30 min se añadió anhídrido butírico adicional (0,10 ml, 0,61 mmol), y 45 min después de la adición del hierro se dejó enfriar la mezcla. Los sólidos se eliminaron mediante filtración y lavado con MeOH y agua. Los filtrados combinados se diluyeron con agua y se extrajeron con EtOAc (\times 3). Los extractos combinados se lavaron secuencialmente con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado, y agua, a continuación se secaron (MgSO_{4}), se evaporaron y se purificaron mediante cromatografía "flash" seca (0-50% EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar metil-(E)-4-butirilamino-1-metil-2-pirrolacrilato (45 mg. 75%) como escamas de color crema, p.f. 109-110°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,0-7,4 (s br, 1 H, NH), 7,51 (d, J=15,6 Hz, 1 H, H-\beta), 7,31 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-5), 6,39 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3), 6,03 (d, J=15,6 Hz, 1 H, H-\alpha), 3,72, 3,62 (2 \times s, 3 H cada uno, CO_{2}CH_{3}, NCH_{3}), 2,27 (t, J=7,4 Hz, 2 H, CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 1,71 (sexteto, J=7,4 Hz, 2 H, CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 0,96 (t, J=7,4 Hz, 3 H, CH_{2}CH_{2}CH_{3}); RMN-^{13}C \delta 170,3, 168,1 (NHCO, CO_{2}), 131,9, 118,5, 112,5, 102,0 (C-3, 5, \alpha, \beta), 126,7, 123,5 (C-2,4), 51,5 (CO_{2}CH_{3}), 38,8 (NCH_{3}), 34,2 (CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 19,1 (CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 13,7 (CH_{2} CH_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C13H_{18}N2O_{3}: C, 62,4; H, 7,3; N, 11,1. Hallado: C, 62,1; H, 7,6; N, 11,0%.

Una mezcla del anterior éster (0,167 g, 0,667 mmol) y NaOH acuoso 0,2 M (5,7 ml, 1,13 mmol) en MeOH se calentó con reflujo durante 50 min. La mezcla se enfrió en hielo, se acidificó con HCl acuoso 2 M, y se vertió sobre hielo. El precipitado que se formó se recuperó mediante filtración y se lavó con agua para rendir el ácido (E)-4-butirilamino-1-metil-2-pirrolacrílico como agujas amarillas (0,133 g, 85%) p.f. 74-76°C (dec.) y 165-166°C. (con formación de gas). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 12,02 (s br, 1 H, CO_{2} H), 9,76 (s br, 1 H, CONH), 7,44 (d, J=15,6 Hz, 1 H, H-\beta), 7,27 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-5), 6,53 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-3), 6,02 (d, J=15,6 Hz, 1 H, H-\alpha), 3,66 (s, 3 H, NCH_{3}), 2,19 (t, J=7,3 Hz, 2 H, CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 1,57 (sexteto, J=7,3 Hz, 2 H, CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 0,88 (t, J=7,3 Hz, 3 H, CH_{2}CH_{2}CH_{3}); RMN-^{13}C \delta 169,2, 168,0 (NHCO, CO_{2}), 131,9, 117,8, 113,6, 101,9 (C-3,5,\alpha,\beta), 125,8, 124,2 (C-2, 4), 37,5 (CH_{2}CH_{2}CH_{3}), 33,6 (NCH_{3}), 18,7 (CH_{2} CH_{2} CH_{3}), 13,6 (CH_{2}CH_{2}CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{12}H_{16}N_{2}O_{4}: C, 61,0; H, 6,8; N, 11,9. Hallado: C, 61,2; H, 6,6; N, 11,9%.

La desprotección de 13 (300 mg, 0,83 mmol) como en el Ejemplo C anterior, y la reacción con el ácido (E)-4-butirilamino-1-metil-2-pirrolacrílico (197 mg, 0,83 mmol) y EDCI.HCl (397 mg, 2,07 mmol) y DMA (3 ml) rindió un producto que se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (1:1), seguida por la cristalización a partir de CH_{2}Cl_{2}/iPr_{2}O rindió el 14i (246 mg, 62%), p.f. 216°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 9,79 (S, 1 H, NH), 9,22 (s, 1 H, H-4), 8,32 (d, J=8,7 Hz, 1 H, H-6), 8,17 (d, J=8,1 Hz, 1 H, H-9), 7,76-7,65 (m, 2 H, H-7,8), 7,64 (d, J=14,9 Hz, 1 H, COCH=CH), 7,25 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-5'), 6,81 (d, J=1,6 Hz, 1 H, H-3'), 6,71 (d, J=15,0 Hz, 1 H, COCH=CH), 4,65-4,50 (m, 3 H, H-1,2), 4,08 (d, J=3,6 Hz, 2 H, CH_{2}Cl), 3,71 (s, 3 H, NCH_{3}), 2,22 (t, J=7,3 Hz, 2 H, COCH_{2}), 1,60 (sexteto, J=7,4 Hz, 2 H, CH_{2}CH_{3}), 0,90 (t, J=7,4 Hz, 3 H, CH_{2}CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{25}H_{25}ClN_{4}O_{4}: C, 62,4;H, 5,2; N, 11,7. Hallado: C, 62,6; H, 5,2; N, 11,5%.

Ejemplo R Preparación del 5-amino-1-[(E)-4-butirilamino-1-metil-2-pirrolacriloil]-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15i)

Una solución de 14i (100 mg, 0,21 mmol) en EtOAc (10 ml) se hidrogenó sobre níquel de Raney lavado con EtOAc (aproximadamente 100 mg) a 40 psi durante 3 h. La solución filtrada se evaporó hasta la sequedad por debajo de 30°C, y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice para rendir un aceite amarillo, el cual se cristalizó a partir de EtOAc/iPr_{2}O/éter de petróleo para rendir el 15i (9 mg, 10%); p.f. 245-250°C (dec.). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 9,76 (s, 1 H, NH), 8,04 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 7,79 (v br s, 1 H, H-4), 7,71 (d, J=8,1 Hz, 1 H, H-9), 7,55 (d, J=15,0 Hz, 1 H, COCH=CH), 7,43 (t, J=9,3 Hz, 1 H, H-8), 7,28-7,20 (m, 2 H, H-7,5'), 6,75-6,65 (m, 2 H, COCH=CH, H-3'), 5,94 (s br, 2 H, NH_{2}), 4,47-4,34 (m, 1 H, H-2), 4,33 (dd, J=10,9, 2,1 Hz, 1 H, H-2), 4,13-4,04 (m, 1 H, H-1), 3,95 (dd, J=10,9, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,73 (dd, J=11,0, 8,3 Hz, 1 H, CHHCl), 3,69 (s, 3 H, NCH_{3}), 2,21 (t, J=7,3 Hz, 2 H, COCH_{2}), 1,59 (sexteto, J=7,3 Hz, 2 H, CH_{2}CH_{3}), 0,90 (t, J=7,4 Hz, 3 H, CH_{2}CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{25}H_{27}ClN_{4}O_{2}: C, 66,6; H, 6,0; N, 12,4. Hallado: C, 66,6, H, 6,0; N, 12,2%.

Ejemplo U Preparación del 3-[(E)-3-(acetilamino)cinamoil]-1-(clorometil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14k)

La desprotección del 13 (250 mg, 0,69 mmol) como en el Ejemplo C anterior, y la reacción del producto con EDCI.HCl (332 mg, 1,73 mmol), ácido (E)-3-(acetilamino)cinámico (148 mg, 0,72 mmol) y DMA (3 ml) a 20°C durante 3 h, seguida por la adición de KHCO_{3} diluido, originó un precipitado. Este se recuperó, se disolvió en EtOAc templado (180 ml), y se filtró a través de una columna de gel de sílice. La concentración del solvente, seguida por la adición de i-Pr_{2}O, precipitó el producto crudo, el cual se recristalizó a partir de EtOAc/i-Pr_{2}O para rendir 14k (232 mg, 75%), p.f. 214-216°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 10,07 (s, 1 H, NH), 9,22 (s, 1 H, H-4), 8,33 (dd, J=7,8, 1,9 Hz, 1 H, H-6), 8,19 (dd, J=7,3, 1,6 Hz, 1 H, H-9), 7,88 (s, 1 H, H-2'), 7,78-7,63 (m, 3 H, H-7,8,4'), 7,68 (d, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,55 (d, J=7,8 Hz, 1 H, H-6'), 7,39 (t, J=7,9 Hz, 1 H, H-5'), 7,14 (d, J=15,4 Hz, 1 H, PhCH=CH), 4,72-4,55 (m, 3 H, H-1,2), 4,12-4,05 (m, 2 H, CH_{2} Cl), 2,08 (s, 3 H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{24}H_{20}ClN_{3}O_{4}: C, 64,1; H, 4,5; N, 9,2; Cl, 7,9. Hallado: C, 64,3; H, 4,4; N, 9,3; Cl, 7,8%.

Ejemplo V Preparación del 3-[(E)-3-(acetilamino)cinamoil]-5-amino-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15k)

Una solución de 13 (200 mg, 0,55 mmol) en THF (15 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} a 55 psi durante 1,5 h. Se retiró el catalizador, se evaporó el solvente, y el sólido resultante se trituró con éter de petróleo para obtener el 5-amino-3-(tert-butiloxicarbonil)-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (166 mg, 90%), p.f. >200°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 8,01 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 7,64 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,45-7,25 (br s subyacente, 1 H, H-4), 7,40 (t, J=7,4 Hz, 1 H, H-8), 7,20 (t, J=7,4 Hz, 1 H, H-7), 7,91 (s, 2 H, NH_{2}), 4,11-3,87 (m, 4 H, H-1,2, CHHCl), 3,66 (dd, J=10,5, 8,3 Hz, 1 H, CHHCl), 1,53 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}).

Se trató una solución de 9-fluorenilmetil-cloroformato (97%, 270 mg, 1,01 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (20 ml) con 1-metilimidazol (90 mg, 1,10 mmol), seguido por la amina anterior (270 mg, 0,84 mmol). La mezcla se agitó a 20°C durante 1,5 h, a continuación se trató con 1-metilimidazol adicional (18 mg, 0,22 mmol) y 9-fluorenilmetil-cloroformato (54 mg, 0,20 mmol). La mezcla se agitó durante 3 h adicionales y a continuación se concentró bajo presión reducida, y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo (9:1) proporcionó un sólido, el cual se recristalizó a partir de iPr_{2}O/éter de petróleo para rendir 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-(clorometil)-5-(9-fluorenil-metiloxi-carbonilamino)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (417 mg, 89%), p.f. 103-106°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 9,73 (s, 1 H, NHCO_{2}), 8,21 (s br, 1 H, H-4), 7,98 (d, J=8,5 Hz, 1 H, ArH), 7,95-7,85 (m, 3 H, ArH), 7,76 (s br, 2 H, ArH), 7,54 (t, J=7,5 Hz, 1 H, ArH), 7,48-7,27 (m, 5 H, ArH), 4,46 (d, J=7,0 Hz, 2 H, H alifático), 4,32 (t, J=6,8 Hz, 1 H, H alifático), 4,26-4,11 (m, 2 H, H alifático), 4,11-3,97 (m, 2 H, CHHCl, H alifático), 3,88 (dd, J=10,7, 6,9 Hz, 1 H, CHHCl), 1,52 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}).

Una solución del anterior compuesto 5-NHFMOC (94 mg, 0,17 mmol) en dioxano saturado con HCl (6 ml) se agitó a 20°C durante 2 h, a continuación se evaporó hasta su sequedad bajo presión reducida, a menos de 30°C. A continuación se añadieron EDCI.HCl (81 mg, 0,42 mmol), ácido (E)-3-(acetilamino)cinámico (37 mg, 0,18 mmol) y DMA (2 ml) y se agitó la mezcla a 20°C durante 4 h. La adición de KHCO_{3} diluido precipitó un sólido amarillo, que se recogió, secó y disolvió en EtOAc. La adición de éter de petróleo precipitó las impurezas, que se retiraron mediante filtración. A continuación se concentró la solución hasta un volumen pequeño, y se diluyó con iPr_{2} O para rendir 3-[(E)-3-(acetilamino)cinamoil]-1-(clorometil)-5-(9-fluorenil-metiloxi-carbonilamino)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (47 mg, 43%), p.f. 208-209°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 10,06 (s, 1 H, NHCO), 9,75 (s, 1 H, NHCO_{2}), 8,65 (s, 1 H, H-4), 7,01-7,87 (m, 4 H, ArH), 7,85 (s, 1 H, H-2'), 7,77 (s br, 2 H, ArH), 7,69-7,30 (m, 9 H, ArH), 7,62 (d, J=15,5 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,14 (d, J=15,4 Hz, 1 H, PhCH=CH), 4,65-4,27 (m, 6 H, H alifático), 4,06 (dd, J=11,1, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,96 (dd, J=11,0, 7,2 Hz, 1 H, CHHCl), 2,07 (s, 3 H, CH_{3}).

Una solución del compuesto anterior (31 mg, 0,048 mmol) en DMF seco (0,4 ml) se trató a 20°C con piperidina (0,04 ml). Transcurridos 20 min se vertió la mezcla en agua y se recogió el precipitado sólido, se secó y disolvió en EtOAc. La solución se filtró a través de una columna corta de gel de sílice, y los eluatos se concentraron hasta un volumen pequeño y se diluyeron con iPr_{2}O. El sólido resultante se recristalizó a partir de EtOAc/iPr_{2} O/éter de petróleo para obtener el 15k (17 mg, 84%), p.f. >250°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 10,06 (s, 1 H, NH), 8,06 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,86 (s, 1 H, H-2'), 7,83 (s br, 1 H, H-4), 7,72 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,65 (d, J=8,0 Hz, 1 H, H-4'), 7,59 (d, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,50 (d, J=7,6 Hz, 1 H, H-6'), 7,44 (d, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,38 (t, J=7,9 Hz, 1 H, H-5'), 7,26 (d, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 7,11 (dd, J=15,4 Hz, 1 H, PhCH=CH), 5,97 (s, 2 H, NH_{2}), 4,54-4,42 (m, 1 H, H-1), 4,39 (d, J=9,5 Hz, 1 H, NH_{2}), 4,18-0,07 (m, 1 H, H-1), 3,96 (dd, J=10,9, 2,9 Hz, 1 H, CHHCl), 2,75 (dd, J=10,9, 8,3 Hz, 1 H, CHHCl), 2,07 (s, 3 H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{24}H_{22}ClN_{3}O_{2}: C, 68,6; H, 5,3; N, 10,0; Cl, 8,4. Hallado: C, 68,4; H, 5,4; N, 10,0; Cl, 8,1%.

Ejemplo W Preparación del 1-(clorometil)-3-[(E)-3-metoxicinnamoil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14l)

La desprotección del 13 (250 mg, 0,69 mmol) como en el Ejemplo C de más arriba, y la reacción del producto con EDCI.HCl (331 mg, 1,73 mmol), ácido (E)-3-metoxicinámico (129 mg, 0,72 mmol) y DMA (3 ml) a 20°C durante 3 h, seguida por la adición de KHCO_{3} diluido, rindió un sólido. Éste se recristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/i-Pr_{2}O seguido por CH_{2}Cl_{2}/EtOAc para rendir el 14l (215 mg, 74%), p.f. 200°C RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 9,22 (s, 1 H, H-4), 8,33 (dd, J=7,9, 1,8 Hz, 1 H, H-6), 8,19 (dd, J=7,5, 1,7 Hz, 1 H, H-9), 7,78-7,68 (m, 2 H, H-7,8), 7,72 (d, J=15,4 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,45-7,34 (m, 2 H, H-5',6'), 7,39 (s, 1 H, H-2'), 7,26 (d, J=15,4 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,02 (dt, J=7,2, 2,2 Hz), 1 H, H-4'), 4,71-4,56 (m, 3 H, H-1,2), 4,11-4,05 (m, 2 H, CH_{2} Cl), 3,84 (s, 3 H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{23}H_{19}ClN2O_{4}: C, 65,3; H, 4,5; N, 6,6; Cl, 8,4. Hallado: C, 65,0; H, 4,6; N, 6,6; Cl, 8,5%.

Ejemplo X Preparación del 5-amino-1-(clorometil)-3-[(E)-3-metoxicinnamoil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15l)

A una solución en caliente de 14l (110 mg, 0,26 mmol) en THF (10 ml) se le añadieron de forma secuencial MeOH (5 ml), H_{2}O (2 ml), AcOH (0,2 ml) y polvo de Fe (0,5 ml). La mezcla se calentó con reflujo durante 1 h, a continuación se basificó con CaO (1 g), se filtró, concentró hasta un volumen pequeño bajo presión reducida por debajo de 30°C y se diluyó con agua. El precipitado resultante se cromatografió sobre gel de sílice, eluyéndose con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (9:1) para rendir un sólido, el cual se recristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo para rendir 15l (55 mg, 54%), p.f. >200°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 8,06 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,83 (bs, 1 H, H-4), 7,72 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,63 (d, J=15,4 Hz, 1 H, PhC=CH), 7,44 (t, J=7,4 Hz, 1 H, H-8), 7,40-7,34 (m, 3 H, PhH), 7,26 (t, parcialmente tapado, J=7,9 Hz, 1 , H-7), 7,22 (d, J=15,4 Hz, 1 h, PhCH=CH), 7,04-6,97 (m, 1 H, PhH), 5,95 (s br, 2 H, NH_{2}), 4,53-4,38 (m, 2 H, H-2), 4,19-4,08 (m, 1 H, H-1), 3,95 (dd, J=11,0, 2,9 Hz, 1 H, CHHCl), 3,83 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,76 (dd, J=10,9, 8,1 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{23}H_{21}ClN_{2}O_{2}: C, 70,3; H, 5,4; N, 7,1; Cl, 9,0. Hallado: C, 70,4; H, 5,6; N, 6,9; Cl, 9,1%.

Ejemplo Y Preparación del 3-[(E)-4-(acetilamino)cinamoil]-5-amino-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15m)

La desprotección del 13 (302 mg, 0,83 mmol) como en el Ejemplo C de más arriba, y la evaporación de la reacción hasta su sequedad bajo presión reducida rindió un sólido que se disolvió en piridina (5 ml). La solución agitada se trató gota a gota, a 0°C, con trifluoroacético anhídrido (0,14 ml, 0,99 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min adicionales a 20°C, a continuación se vertió en agua, y el precipitado sólido se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y se filtró a través de una columna de gel de sílice. Se retiró el solvente bajo presión reducida, y el residuo se recristalizó a partir de EtOAc/éter de petróleo para obtener 1-(clorometil)-5-nitro-3-trifluoroacetil-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (241 mg, 81%), p.f. 182°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,10 (s, 1 H, H-4), 8,49-8,43 (m, 1 H, H-6), 7,93-7,87 (m, 1 H, H-9), 7,76-7,68 (m, 2 H, H-7,8), 4,70 (dt, J=11,4, 1,4 Hz, 1 H, H-2), 4,51 (dd, J=11,5, 8,6 Hz, 1 H, H-2), 4,35-4,28 (m, 1 H, H-1), 3,97 (dd, J=11,7, 3,4 Hz, 1 H, CHHCl), 3,64 (dd, J=11,7, 8,8 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{15}H_{10}ClF_{3}N_{2}O_{3}: C, 50,2; H, 2,8; N, 7,8; Cl, 9,9. Hallado: C, 50,1; H, 2,8; N, 7,8; Cl, 9,9%.

Una solución del compuesto nitro anterior (175 mg, 0,49 mmol) en benceno (30 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} (45 mg) a 50 psi durante 1 h. La eliminación del catalizador y del solvente proporcionó un sólido, el cual se recristalizó a partir de i-Pr_{2}O/éter de petróleo para obtener 5-amino-1-(clorometil)-3-trifluoroacetil-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (143 mg, 89%), p.f. 177°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 8,11 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 7,80 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,60 (s, 1 H, H-4), 7,50 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-8), 7,35 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 6,14 (s, 2 H, NH_{2}), 4,45 (dd, J=11,0, 8,7 Hz, 1 H, H-2), 4,33 (d, J 11,2 Hz, 1 H, H-2), 4,24-4,16 (m, 1 H, H-1), 4,03 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,84 (dd, J=11,0, 7,1 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{15}H_{12}ClF_{3}N_{2}O: C, 54,8; H, 3,7; N, 8,5; Cl, 10,8. Hallado: C, 55,1; H, 3,4; N, 8,6; Cl, 10,7%.

Una solución del compuesto 5-amino anterior (200 mg, 0,61 mmol) y di-tert-butil-dicarbonato (266 mg, 1,22 mmol) en dioxano (20 ml) se agitó a 65°C bajo N_{2} con ausencia de luz durante 4 h. Se añadió di-tert-butil-dicarbonato adicional (200 mg, 0,92 mmol) y se agitó la mezcla durante 8 h adicionales a 70°C y a continuación se agitó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyéndose con éter de petróleo/CH_{2}Cl_{2} (1:3), para proporcionar un sólido, el cual se recristalizó a partir de i-Pr_{2}O/éter de petróleo para rendir 5-(tert)butil-oxicarbonilamino)-1-(clorometil)-3-trifluoroacetil-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (192 mg, 74%), p.f. 185°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 9,41 (s, 1 H, HN), 8,48 (s, 1 H, H-4), 8,10 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 8,01 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,61 (t, J=7,1 Hz, 1 H, H-8), 7,52 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 4,56 (dd, J=11,1, 9,7 Hz, 1 H, H-2), 4,47-4,37 (m, 2 H, H-1,2), 4,12 (dd, J=11,1, 2,8 Hz, 1 H, CHHCl), 4,01 (dd, J=11,2, 5,8 Hz, 1 H, CHHCl), 1,50 (s, 9 H, C(CH_{3})3). Análisis elemental calculado para C_{20}H_{20}ClF_{3}N_{2}O_{3}: C, 56,0; H, 4,7; N, 6,5; Cl, 8,3. Hallado: C, 56,3; H, 4,6; N, 6,6; Cl, 8,0%.

Una solución agitada del trifluoroacetato anterior (180 mg, 0,42 mmol) en N-metilpirrolidona (4,5 ml) se trató, gota a gota, a 20°C con una solución de Cs_{2}CO_{3} (1,2 g) en agua (2,7 ml). La mezcla se agitó durante 45 minutos adicionales a 20°C a continuación se diluyó con agua (35 ml) y se extrajo con benceno (2 \times 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron son agua (2 \times), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron bajo presión reducida por debajo de 30°C. El residuo se trató secuencialmente con EDCI.HCl (201 mg, 1,05 mmol), ácido (E)-4-(acetilamino)cinámico (86 mg, 0,42 mmol), DMA (2 ml) y DMA.HCl (52 mg, 0,42 mmol). La mezcla se agitó durante 30 minutos adicionales a 20°C, se diluyó con solución de KHCO_{3}. Se recuperó el precipitado sólido, se lavó con agua, se secó y disolvió en EtOAc templado. Esta solución se filtró a través de una columna corta de gel de sílice, a continuación se concentró hasta un volumen pequeño, y se diluyó con i-Pr_{2}O/éter de petróleo para rendir 3-[(E)-4-(acetilamino)cinamoil]-5-(tert-butil-oxicarbonilamino)-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (97 mg, 44%), p.f. 200°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 10,15 (s br, 1 H, NHCO), 9,28 (s br, 1 H, NHCO_{2}), 8,64 (s br, 1 H, H-4), 8,02 (d, J=8,1 Hz, 1 H, H-6), 7,92 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,76 (d, J=8,6 Hz, 2 H, H-3',5'), 7,67 (d, J=9,1 Hz, 2 H, H-2',6'), 7,64 (d, J=15,6 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,55 (t, J=7,3 Hz, 1 H, H-8), 7,43 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-7), 7,13 (d br, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 4,60-4,45 (m, 2 H, H-2), 4,35 (s br, 1 H, H-1), 4,02 (dd, J=11,1, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,92 (dd, J=11,1, 7,2 Hz, 1 H, CHHCl), 2,08 (s, 3 H, OCH_{3}), 1,51 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}).

Una suspensión del compuesto precedente (83 mg, 0,16 mmol) en dioxano (8 ml) se saturó con HCl gas y se dejó a 20°C durante 10 min. La mezcla se eluyó con EtOAc/éter de petróleo y el producto se recuperó y repartió entre KHCO_{3} diluido y EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se filtró a través de una columna corta de gel de sílice. La solución se concentró hasta un volumen pequeño bajo presión reducida, por debajo de 30°C y a continuación se diluyó con éter de petróleo para rendir el 15m (54 mg, 81%), p.f. >250°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 10,14 (s, 1 H, NH), 8,05 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,83 (s br, 1 H, H-4), 7,74 (d, J=8,8 Hz, 2 H, H-3',5'), 7,72 (d, J=9,1 Hz, 1 H, H-9), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 2 H, H-2',6'), 7,60 (d, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,44 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-8), 7,26 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,10 (d, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 5,97 (s br, 2 H, NH_{2}), 4,50-4,35 (m, 2 H, H-2), 4,12 (s br, 1 H, H-1), 3,95 (dd, J=10,9, 2,6 Hz), 1 H, CHHCl), 3,74 (dd, J=10,6, 8,5 Hz, 1 H, CHHCl), 2,07 (s, 3 H, OCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{24}H_{22}ClN_{3}O_{2}: C, 68,6; H, 5,3; N, 10,1; Cl, 8,5. Hallado: C, 68,5; H, 5,4; N, 9,9; Cl, 8,2%.

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Ejemplo Z Preparación del 5-amino-1-(clorometil)-3-[(E)-4-metoxicinamoil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15n)

Una solución agitada del anterior 5-(tert-butil-oxicarbonilamino)-1-(clorometil)-3-trifluoroacetil-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (100 mg, 0,23 mmol) en N-metilpirrolidona (2,5 ml) se trató, gota a gota, a 20°C con una solución de Cs_{2}CO_{3} (650 mg) en agua (1,5 ml). La mezcla se agitó durante 45 minutos adicionales a 20°C, a continuación se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con benceno (2 \times 15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron son agua (2 \times), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron bajo presión reducida por debajo de 30°C. El residuo se disolvió en piridina (2 ml), se enfrió a -5°C. y se trató con cloruro de (E)-4-metoxicinamoilo (46 mg, 0,23 mmol) seguido por DMAP (15 mg). La mezcla se agitó durante 30 minutos adicionales a 20°C, a continuación se diluyó con solución de KHCO_{3}. Se recuperó el precipitado sólido, se lavó con agua, se secó y se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc rindió el producto crudo, el cual se recristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo para obtener 5-(tert-butil-oxicarbonilamino)-1-(clorometil)-3-[(E)-4-metoxicinnamoil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (55 mg, 48%), p.f. 185-185,5°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 9,28 (s br, 1 H, NH), 8,64 (s br, 1 H, H-4), 8,01 (d, J=8,1 Hz, 1 H, H-6), 7,92 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,78 (d, J=8,6 Hz, 2 H, H-2',6'), 7,66 (d, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,54 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,42 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 7,10 (d, J=15,2 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,01 (d, J=8,7 Hz, 2 H, H-3',5'), 4,60-4,44 (m, 2 H, H-2), 4,41-4,28 (m, 1 H, H-1), 4,02 (dd, J=11,1, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,92 (dd, J=11,1, 7,2 Hz, 1 H, CHHCl), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 1,51 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}).

Una suspensión fría del compuesto precedente (46 mg, 0,09 mmol) en dioxano (5 ml) se saturó con HCl gas y se dejó a 20°C durante 10 min. La mezcla se eluyó con EtOAc/éter de petróleo y el producto se recuperó y repartió entre KHCO_{3} diluido y EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}), se concentró bajo presión reducida por debajo de 30°C, y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (2:1) proporcionó un sólido, el cual se recristalizó a partir de CH_{2}Cl_{2}/éter de petróleo para proporcionar el 15n (26 mg, 71%), p.f. 114-116°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 8,05 (d, J=8,4 Hz, 1 H, H-6), 7,82 (s br, 1 H, H-4), 7,76 (d, J=8,7 Hz, 2 H, H-2',6'), 7,71 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,62 (d, J=15,3 Hz, 1 H, PhCH=CH), 7,44 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-8), 7,01 (d, J=8,7 Hz, 2 H, H-3',5'), 5,96 (s br, 2 H, NH_{2}), 4,49-4,36 (m, 2 H, H-2), 4,17-4,06 (m, 1 H, H-1), 3,94 (dd, J=11,0, 2,9 Hz, 1 H, CHHCl), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,74 (dd, J=10,9, 8,3 Hz, 1 H, CHHCl). Análisis elemental calculado para C_{23}H_{21}ClN_{2}O_{2}: C, 70,3; H, 5,4; N, 7,1; Cl, 9,0. Hallado: C, 70,6; H, 5,5; N, 6,9; Cl; 8,7%.

Ejemplo AA Preparación del 1-[(metanosulfoniloxi)metil]-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14o)

Una solución agitada del 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-(hidroximetil)-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (12) (450 mg, 1,31 mmol) en piridina (1,3 ml) se trató, gota a gota, a -5°C con cloruro de metanosulfonilo (0,121 ml, 1,57 mmol) y a continuación se agitó a 20°C durante 2 h. La mezcla se diluyó con agua, y luego se enfrió, y el sólido resultante se recuperó, se lavó con agua y se secó- Este producto se disolvió en CH_{2}Cl_{2}, y la solución se filtró a través de una columna corta de gel de sílice, eluyéndose con CH_{2}Cl_{2} adicional. El producto resultante se trituró con iPr_{2}O/éter de petróleo para obtener 3-(tert-butiloxicarbonil)-1-[(metanosulfoniloxi)metil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (494 mg, 89%), p.f. 147°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 8,75 (s br, 1 H, H-4), 8,32 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 8,12 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,77-7,63 (m, 2 H, H-7, 8), 4,54 (dd, J=10,0, 3,7 Hz, 1 H, H-2), 4,43 (dd, J=10,0, 6,4 Hz, 1 H, H-2), 4,42-4,33 (m, 1 H, H-1), 4,25 (t, J=10,3 Hz, 1 H, CHHO), 4,14 (dd, J=11,4, 2,5 Hz, 1 H, CHHO), 3,11 (s, 3 H, SO_{2} CH_{3}), 1,56 (s, 9 H, C(CH_{3})_{3}). Análisis elemental calculado para C_{19}H_{22}N_{2}O_{7}S: C, 54,0; H, 5,3; N, 6,6; S, 7,6. Hallado: C, 54,3; H, 5,4; N, 6,9; S, 7,4%.

Una solución del compuesto precedente (265 mg, 0,63 mmol) en dioxano saturado con HCl (12 ml) se agitó a 20°C durante 2 h, a continuación se evaporó hasta su sequedad bajo presión reducida, a menos de 30°C. Se añadieron ácido 5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico (165 mg, 0,66 mmol), EDCI.HCl (301 mg, 1,57 mmol) y DMA (2,5 ml) y se agitó la mezcla a 20°C durante 2,5 h. La adición de KHCO_{3} diluido precipitó un sólido, el cual se recuperó, se lavó a conciencia con agua, y se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (4:1) proporcionó un producto crudo, el cual se recristalizó a partir de EtOAc/éter de petróleo para obtener el 140 (264 mg, 76%), p.f. 213,5-214,4°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,61 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 9,11 (s, 1 H, H-4), 8,36 (d, J=8,7 Hz, 1 H, H-6), 8,21 (d, J=7,6 Hz, 1 H, H-9), 7,82-7,71 (m, 2 H, H-7,8), 7,17 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-3'), 6,98 (s, 1 H, H-4'), 4,88 (t, J=9,8 Hz, 1 H, H-2), 4,66-4,46 (m, 4 H, H-1,2, CH_{2} O), 3,94 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,83 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,81 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,06 (s, 3 H, SO_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{26}H_{25}N_{3}O_{9}S: C, 56,2; H, 4,5; N, 7,6. Hallado: C, 56,2; H, 4,5; N, 7,7%.

Ejemplo BB Preparación del 5-amino-1-[(metanosulfoniloxi)metil]-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15o)

Una solución de 14o (162 mg, 0,29 mmol) en THF (15 ml) se hidrogenó sobre PtO_{2} a 55 psi durante 2 h. Después de eliminar el catalizador, se concentró la solución hasta un volumen pequeño bajo presión reducida, por debajo de 25°C y se diluyó con iPr_{2} O para rendir un producto crudo. Este se purificó mediante precipitación, a partir de una solución de EtOAc, con éter de petróleo a 20°C para rendir el 5-amino-1-[(metanosulfoniloxi)metil]-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15o) (116 mg, 76%) como un sólido inestable, p.f. >260°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2} SO] \delta 11,41 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 8,08 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,76 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,67 (s, 1 H, H-4), 7,49 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,30 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-7), 7,04 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-3'), 6,96 (s, 1 H, H-4'), 6,15 (v br s, 2 H, NH_{2}), 4,66 (dd, J=10,9, 8,5 Hz, 1 H, H-2), 4,47 (dd, J=9,9, 3,4 Hz, 1 H, H-2), 4,41 (d, J=10,9 Hz, 1 , CHHO), 4,17 (t, J=9,2 Hz, 1 H, CHHO), 4,13-4,04 (m, 1 H, H-1), 3,94 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,07 (s, 3 H, SO_{2} CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{26}H_{27}N_{3}O_{7}S: C, 59,4; H, 5,2; N, 8,0. Hallado: C, 59,3; H, 5,4; N, 8,1%.

Ejemplo CC Preparación del (R)- and (S)-1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14aR and 14aS)

El (R,S)-3-(tert-butiloxicarbonil)-1[(metanosulfoniloxi)metil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol [para su preparación consultar el Ejemplo AA] se resolvió mediante HPLC con una columna semi-preparativa Diacel Chiralcel OD (10 (m, 2 \times 25 cm), cargando muestras de 15 mg en acetonitrilo/iPrOH/hexano (25:37,5:37,5) y corriendo en iPrOH/hexano (50:50) a una velocidad de flujo de 6,75 ml/min. Esto proporcionó una separación a nivel de linea base de los enantiómeros (valor de \alpha de aproximadamente 1,45), teniendo el enantiómero R ([\alpha]D -60°; c 0,31, THF) un RT de 30 min y el enantiómero S ([\alpha]D +61°; c 0,31, THF) un RT de 42 min. Las configuraciones absolutas de los enantiómeros se determinaron mediante rayos X de una estructura de cristal de enantiómero R. La conversión de estos enantiómeros como más arriba, proporcionó el (R)-1-(clorometil)-3[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3 H-benz[o]indol (14aR): ([\alpha]D -55°; c 0,23, THF); y el (S)-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14aS): ([\alpha]D +54°; c 0,23, THF).

Ejemplo DD Preparación del (R)- and (S)-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15aR and 15aS)

La reducción del 14aR y 14aS como más arriba, proporcionó, respectivamente, el (R)-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15aR): ([\alpha]D-10°; c 0,20, THF); y el (S)-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15aS): ([\alpha]D +10°; c 0,20, THF).

Ejemplo EE Preparación del 1-(clorometil)-5-metilamino-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15p)

Se añadió acético-fórmico anhídrido [60 ml de una solución preparada a partir de ácido fórmico (1,25 ml, 33 mmol) y anhídrido acético (2,5 ml, 27 mmol)] a una solución del 15a (206 mg, 0,44 mmol) en THF (20 ml) a 0°C bajo N_{2}. Después de agitarla durante 30 min a 0°C, se añadió acético-fórmico anhídrido adicional (60 \mul) a la mezcla heterogénea, y se continuó la agitación durante 2,5 h a 0°C. A continuación se evaporó la mezcla hasta la sequedad bajo presión muy reducida. El residuo se suspendió en THF (35 ml), se trató con BH_{3}.DMS (0,15 ml, 1,5 mmol), a continuación se agito con reflujo durante 45 min. Se enfrió la reacción, se añadió MeOH (2 ml) seguido por HCl 2 N (10 ml), y se agitó la mezcla a 20°C durante 15 min. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida, y el residuo se agitó con KHCO_{3} acuoso, y se extrajo con EtOAc (2 \times). Los extractos combinados se lavaron con agua, se secaron, y concentraron bajo presión reducida. La cromatografía del residuo sobre gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (5:1), seguida por la precipitación desde una solución de EtOAc con iPr_{2}O a 20°C, proporcionó el 15p (89 mg, 42%), p.f. 122-125°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,45 (d, J=1,4 Hz, 1 H, NH del indol), 8,09 (d, J=8,5 Hz, 1 H, H-6), 7,78 (d, J=8,1 Hz, 1 H, H-9), 7,48 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,32 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-7), ca. 7,3 (s subyacente, 1 H, H-4), 7,04 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3'), 6,97 (s, 1 H, H-4'), 6,53 (q, J=4,6 Hz, 1 H, NHCH_{3}), 4,67 (t, J=9,9 Hz, 1 H, H-2), 4,46 (dd, J=11,0, 1,5 Hz, 1 H, H-2), 4,17-4,07 (m, 1 H, H-1), 3,98 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1 H, CHHCl), 3,92 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,77 (dd, J=11,0, 8,2 Hz, 1 H, CHHCl), 2,80 (s br, 3 H, NHCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{26}H_{26}ClN_{3}O_{4}: C, 65,1; H, 5,5; N, 8,8; Cl, 7,4. Hallado: C, 65,3; H, 5,6; N, 8,5; Cl, 7,1%.

Ejemplo FF Preparación del 1-(clorometil)-5-dimetilamino-3-[(5,6,7-trimetoxi-indol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15q)

Una mezcla del 15a (181 mg, 0,39 mmol) y formaldehído (0,30 ml of ca. 40% w/v, 4 mmol) en THF (5 ml) se trató con NaB_{3}CN sólido (63 mg, 1,0 mmol), seguido por HCl 2 N (0,7 ml). La mezcla se agitó a 20°C durante 2 h, a continuación se diluyó con agua y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x). Los extractos combinados se lavaron con agua, se secaron, y se concentraron bajo presión reducida, y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (4:1) proporcionó una goma, la cual se trituró con EtOAc/iPr_{2}O, y el producto crudo resultante se purificó mediante precipitación desde una solución de CH_{2}Cl_{2} con iPr_{2}O a 20°C para obtener el 15q (130 mg, 68%), p.f. 174-175°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,48 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 8,14 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-6), ca. 8,0 (s ancho subyacente, 1 H, H-4), 7,92 (d, J=8,2 Hz, 1 H, H-9), 7,54 (t, J=7,5 Hz, 1 H, H-8), 7,44 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-7), 7,07 (d, J=1,8 Hz, 1 H, H-3'), 6,98 (s, 1 H, H-4'), 4,73 (t, J=9,9 Hz, 1 H, H-2), 4,51 (dd, J=11,1, 1,8 Hz, 1 H, H-2), 4,30-4,20 (m, 1 H, H-1), 4,05 (dd, J=11,1, 3,1 Hz, 1 H, CHHCl), 3,93 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,88 (dd, J=11,1, 7,6 Hz, 1 H, CHHCl), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,50 (s, 6 H, N(CH_{3})_{2}). Análisis elemental calculado para C_{27}H_{28}ClN_{3}O_{4}: C, 65,7; H, 5,8; N, 8,5; Cl, 7,2. Hallado: C, 65,7; H, 6,0; N, 8,6; Cl, 7,1%.

Ejemplo GG Preparación del 1-(clorometil)-5-[(4-nitrobenzilcarbonil)amino]-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15r)

Una solución del 15a (430 mg, 0,92 mmol) en THF (50 ml) se trató porción a porción, a -5°C, con el sólido 4-nitrobencil-cloroformato (298 mg, 1,38 mmol). La mezcla se agitó a 10°C durante 30 min y a continuación a 20°C durante 2 h, antes de diluirla con iPr_{2}O/éter de petróleo. El precipitado se recuperó y extrajo con CH_{2}Cl_{2} a 20°C y la solución filtrada se evaporó para rendir un residuo, el cual se cromatografió sobre gel de sílice. La elución con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (9:1) proporcionó un eluato, el cual se concentró bajo presión reducida hasta que apareció un sólido. La adición de iPr_{2}O completó la precipitación del producto crudo, el cual se recristalizó a continuación desde CH_{2}Cl_{2}/iPr_{2}O para rendir el 15r (290 mg, 49%), p.f. 191-192°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,48 (d, J=1,7 Hz, 1 H, NH del indol), 9,91 (s, 1 H, NHCO_{2}), 8,57 (s br, 1 H, H-4), 8,39 (d, J=8,7 Hz, 2 H, H-3'',5''), 8,09 (d, J=8,5 Hz, 1 H-6), 7,99 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-9), 7,73 (d, J=8,5 Hz, 2 H, H-2'',6''), 7,58 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-8), 7,48 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7), 7,10 (d, J=2,2 Hz, 1 H, H-3'), 6,98 (s, 1 H, H-4'), 5,36 (s, 2 H, COH_{2}CH_{2}), 4,80 (dd, J=10,8, 9,4 Hz, 1 H, H-2), 4,53 (dd, J=11,1, 1,9 Hz, 1 H, H-2), 4,39-4,31 (m, 1 H, H-1), 4,07 (dd, J=11,1, 3,1 Hz, 1 H, CHHCl), 3,97-3,91 (m, 1 H, CHHCl), 3,94 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{33}H_{29}ClN_{4}O_{8}: C, 61,4%; H, 4,5; N, 8,7; Cl, 9,5. Hallado: C, 61,1; H, 4,4; N, 8,6; Cl, 5,5%.

Ejemplo II Preparación del 2-(S)-[N-[1-(S,R)-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol-5-il]ureilen]pentanodioato (15t)

Una solución de di-t-butil(S)-2-isocianato-pentanodioato (0,19 g, 0,66 mmol) [preparada según el procedimiento de J.S. Nowick et al., J. Org. Chem., 57:7364-7366 (1992)], 15a (154 mg, 0,33 mmol), y diacetato de dibutiltina (1 gota) en 1,2-dicloroetano (20 ml) se agitó a 20°C. Se añadió más isocianato (4 \times 0,19 g) después de 2, 5, 7, y 9 días. Transcurridos 12 días se añadió etanolamina (0,21 g, 3,4 mmol), y después de 30 min adicionales se evaporó el solvente. El residuo se purificó mediante cromatografía (30% EtOAc-éter de petróleo, a continuación 20% EtOAc-CHCl_{3}) para proporcionar el di-t-butil-2-(S)-[N-[1-(S,R)-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol-5-il]ureilen]pentanodioato como una película parda clara (155 mg, 62%). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,46 (s, 1 H, NH), 8,91 (s, 1 H, NH or H-4), 8,73 (s, 1 H, NH or H-4), 8,10 (d, J=8,6 Hz, 1 H, H-6 or 9), 7,94 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-6 or 9), 7,57 (t, J=7,4 Hz, 1 H, H-7 or 8), 7,48 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7 or 8), 7,08 (d, J=2,1 Hz, 1 H, H-3'), 6,97 (s, 1 H, H-4'), 6,93 (dd, J=7,6, 1,2 Hz, 1 H, NH), 4,77 (t, J=10 Hz, 1 H, H-2), 4,50 (dd, J=11,0, 1,7 Hz, 1 H, H-2), 4,31-4,25 (m, 1 H, H-1), 4,24-4,17 (m, 1 H, NCHCO_{2} tBu), 4,04 (dd, J=11,2, 3,2 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 3,94 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,87 (dd, J=11,0, 7,3 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,41-2,23 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}CO_{2}tBu), 2,04-1,94 (m, 1 H, CH_{2}CH_{2}CO_{2}tBu), 1,88-1,79 (m, 1 H, CH_{2}CH_{2}CO_{2}tBu), 1,45, 1,43 (2 x s, 9 H, CO_{2} tBu), 1,41, 1,40 (2 (s, 9 H, CO_{2}tBu). MS (FAB, ^{35}Cl) m/z 750 (M^{+}, 25%), 639 (20%), 234 (100%). HRMS calculada para C_{39}H_{47}ClN_{4}O_{9}, 750,3031. Hallada, 750,3038.

El di-t-butiléster anterior (149 mg, 0,20 mmol) se agitó en dioxano saturado con HCl (8 ml) a 20°C durante 4 h, monitorizándose la reacción mediante HPLC. El solvente se evaporó y el residuo se separó mediante HPLC (tampón CH_{3}CN-formato). La fracción que contenía el diácido se evaporó y el residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron para rendir 15t como una espuma amarilla (58 mg, 46%). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 12,4 (v br s, 2 H, CO_{2} H), 11,47 (s, 1 H, NH), 8,95 (d, J=2,8 Hz, 1 H, NH), 8,76 (s, 1 H, H-4), 8,11 (d, J=8,6 Hz, 1 H, H-6 or 9), 7,94 (d, J=8,3 Hz, 1 H, H-6 or 9), 7,58 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-7 or 8), 7,48 (t, J=7,6 Hz, 1 H, H-7 or 8), 7,09 (d, J=2,1 Hz, 1 H, H-3'), 7,00-6,95 (m, 2 H, H-4' and NH), 4,77 (t, J=10,0 Hz, 1 H, H-2), 4,50 (dd, J=11,0, 1,7 Hz, 1 H, H-2), 4,31-4,24 (m, 2 H, H-1 y NCHCO_{2}H), 4,04 (dd, J=11,0, 3,0 Hz, 1 H, CH_{2}Cl), 3,94 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,87 (dd, J=11,1, 7,2 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 3,82 (s, 3 H, OCH_{3}), 3,80 (s, 3 H, OCH_{3}), 2,43-2,27 (m, 2 H, CH_{2} CH_{2} CO_{2} H), 2,10-2,01 (m, 1 H, CH_{2}CH_{2}CO_{2}H), 1,91-1,81 (m, 1 H, CH_{2}CH_{2}CO_{2}H). HRMS (FAB, ^{35}Cl) calculada para C_{31}H_{31}ClN_{3}O_{9}: 639,1858. Hallada: 639,1852.

Ejemplo JJ Preparación del metil-1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (31) (Esquema 4)

Se añadió borano-dimetilsulfuro (34 ml, 0,34 mmol) a una solución de ácido 2-yodo-3-nitrobenzoico (43) [P.J. Culhane, Org. Synth. Coll. Vol 1, 125-127 (1967)] (82,3 g, 0,28 mol) y trimetilborato (64 ml, 0,56 mol) en THF seco (400 ml) bajo nitrógeno, y la mezcla se agitó con reflujo durante 90 min. Se enfrió la solución, se añadieron MeOH y a continuación H_{2}O, y se evaporó la mezcla. Se añadió NaCl acuoso al residuo y se extrajo la mezcla con EtOAc (\times 3). Los extractos se lavaron con NaCl aq, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se evaporaron para obtener el alcohol 2-yodo-3-nitrobencilo crudo (44) como un sólido amarillo-naranja, apropiado para su uso en el paso siguiente. Se filtró una muestra a través de una columna corta de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}, y se recristalizó a partir de PhH como agujas amarillas pálidas, p.f. 91-91,5°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,72 (dd, J=7,7, 1,1 Hz, 1 H, H-4 or 6), 7,59 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H, H-4 or 6), 7,50 (t, J=7,8 Hz, 1 H, H-5), 4,78 (s, 2 H, CH_{2}), 2,14 (s br, 1 H, OH). Análisis elemental calculado para C_{7}H_{6}INO_{3}: C, 30,1; H, 2,2; N, 5,0. Hallado: C, 30,4; H, 2,1; N, 4,9%.

Se añadió anhídrido acético (37 ml, 0,39 mol) a una solución de 44, trietilamina (59 ml, 0,42 mol) y DMAP (0,25 g, 2 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (400 ml) a 0°C. Se retiró el baño de hielo, y la solución amarilla se agitó durante 10 min, a continuación se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con HCl aq (2 N, \times 2), NaHCO_{3} aq (\times 2), se secó (Na_{2}SO_{4}), y evaporó. El aceite naranja resultante se cristalizó desde MeOH-H_{2}O para obtener 2-yodo-3-nitrobencil-acetato (45) como un sólido amarillo pálido (7,58 g, 84% para dos pasos), p.f. 65-65°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,60 (dd, J=7,9, 1,7 Hz, 1 H, H-4 or 6), 7,57 (dd, J=7,9, 1,7 Hz, 1 H, H-4 or 6), 7,48 (t, J=7,8 Hz, 1 H, H-5), 5,22 (s, 2 H, CH_{2}), 2,18 (s, 3 H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{9}H_{8}INO_{4}: C, 33,7; H, 2,5; N, 4,4. Hallado: C, 33,9; H, 2,4; N, 4,3%.

Una solución del 45 (8,00 g, 24,9 mmol) en EtOH (100 ml) y H_{2}O (100 ml) con reflujo, se trató con AcOH (20 ml). Se lavó polvo de Fe (5,57 g, 97 mmol) con HCl (2 N), a continuación con H_{2}O, y se añadió a la solución caliente. La mezcla se agitó enérgicamente con reflujo durante 15 min adicionales, a continuación se enfrió hasta 20°C. Se añadió NH_{3} concentrado (40 ml) y la mezcla se filtró a través de celita, eluyéndose con EtOAc. El EtOH se evaporó, y el residuo se diluyó con NaCl aq y se extrajo con EtOAc (\times 2). Los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron, y el sólido resultante se recristalizó a partir de MeOH para rendir 3-amino-2-yodobencil-acetato (46) como un polvo de color crema (3,72 g, 51%), p.f. 80-81°C. El licor madre se evaporó, y el residuo se purificó mediante cromatografía (30% EtOAc-éter de petróleo) para obtener más producto (2,93 g, 40%). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,12 (t, J=7,7 Hz, 1 H, H-5), 6,76 (dd, J=7,2, 1,3 Hz, 1 H, H-4 or 6), 6,72 (dd, J=7,9, 1,4 Hz, 1 H, H-4 or 6), 5,11 (s, 2 H, CH_{2}), 4,24 (s br, 2 H, NH_{2}), 2,14 (s, 3 H, CH_{3}). Análisis elemental calculado para C_{9}H_{10}INO_{2}: C, 37,1; H, 3,5; N, 4,8. Hallado: C, 37,4; H, 3,4; N, 4,8%.

Una solución del 46 (26,9 g, 92 mmol) y di-t-butildicarbonato (40,3 g, 184 mmol) en dioxano (200 ml) se agitó con reflujo durante 2 días. La solución se evaporó, y el residuo se separó mediante cromatografía (10-20% EtOAc-éter de petróleo) para rendir el material de partida recuperado (13,2 g, 49%) y 3-(t-butiloxicarbonil)amino-2-yodobencilacetato (47) como una aceite amarillo pálido (17,5 g, 48%). Se cristalizó una muestra a partir de como un sólido blanco, p.f. 62-63°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,00 (dd, J=8,2, 1,0 Hz, 1 H, H-4 or 6), 7,31 (t, J =7,9 Hz, 1 H, H-5), 7,08 (dd, J=7,7, 1,4 Hz, 1 H, H-4 ó 6), 6,99 (s br, 1 H, NH), 5,14 (s 2 H, CH_{2}), 2,15 (s, 3 H, COCH_{3}), 1,53 (s, 9 H, t-Bu). Análisis elemental calculado para C_{14} H_{18} INO_{4} : C, 43,0; H, 4,6; N, 3,6. Hallado: C, 43,3; H, 4,7; N, 3,8%.

Se lavó hidruro sódico (4,48 g de una dispersión al 60% en aceite, 113 mmol) con éter de petróleo (\times 3) y se suspendió en DMF (80 ml) bajo nitrógeno a 0°C. Se añadió una solución del 47 (29,2 g, 75 mmol) y bromuro de alilo (19,4 ml, 225 mmol) en DMF (100 ml) de una sola vez. Transcurridos 5 min, se dejo calentar la muestra hasta 20°C y se agitó durante 1 h adicional. Se añadió H_{2}O y se evaporó el DMF. El residuo se diluyó con H_{2}O, se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (\times 3), y los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron. Esto proporcionó el 3-[N-(t-butiloxicarbonil)-N-(2-propenil)]amino-2-yodobencil-acetato crudo (48) como un aceite incoloro, apropiado para su uso en el paso siguiente. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,36-7,24 (m, 2 H), 7,19 (d br, J=7,1 Hz, aproximadamente 0,4 H, H-4 o 6, rotámero minoritario), 7,08 (d br, J=7,1 Hz, ca. 0,6 H, H-4 o 6, rotámero mayoritario), 6,00-5,90 (m, 1 H, CH=CH_{2}), 5,18 (s, 2 H, CH_{2}OAc), 5,24-5,05 (m, 2 H, CH=CH_{2}), 4,59-4,43 (m, 1 H, CH_{2}CH=CH_{2}), 3,75-3,58 (m, 1 H, CH_{2}CH=CH_{2}), 2,16 (s, 3 H, COCH_{3}), 1,53 (s, ca. 3 H, t-Bu rotámero minoritario), 1,34 (s, ca. 6 H, t-Bu rotámero mayoritario); MS (CI, NH_{3}) m/z 449 (10%, M+NH_{4}), 432 (3%, M+H), 393 (100%, M-C_{4}H_{8} +NH_{4}), 376 (30%, M-C_{4}H_{8} +H); HRMS calculada para C_{17}H_{23}INO_{4}: 432,0672. Hallada: 432,0665.

El 48 crudo se disolvió en MeOH (400 ml) y se añadió una solución de K2CO_{3} (12,4 g, 90 mmol) en H_{2}O (80 ml). La mezcla se agitó a 20°C durante 15 min y se evaporó el MeOH. El residuo acuoso se extrajo con EtOAc (\times 2), y los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron para rendir el alcohol 3-[N-(t-butiloxicarbonil)-N-(2-propenil)]amino-2-yodobencilo crudo (49) como un aceite amarillo pálido, apropiado para su uso en el paso siguiente. Una muestra cristalizó a partir de éter de petróleo como prismas blancos, p.f. 91,5-92,5°C. RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,39-7,29 (m, 2 H), 7,16 (d br, J=6,3 Hz, ca. 0,4 H, H-4 o 6 rotámero minoritario), 7,06 (d br, J=7,2 Hz, ca. 0,6 H, H-4 o 6 rotámero mayoritario), 6,00-5,89 (m, 1 H, CH=CH_{2}), 5,14-5,03 (m, 2 H, CH=CH_{2}), 4,74-4,68 (m, 2 H, CH_{2} OH), 4,57-4,42 (m, 1 H, CH_{2} CH=CH_{2}), 3,74-3,59 (m, 1 H, CH_{2} CH=CH_{2}), 2,12 (s br, 1 H, OH), 1,53 (s, aproximadamente 3 H, t-Bu rotámero minoritario), 1,34 (s, ca. 6 H, t-Bu rotámero mayoritario). Análisis elemental calculado para C_{15}H_{20}INO_{3}: C, 46,3; H, 5,2; N, 3,6. Hallado: C, 46,5; H, 5,4; N, 3,6%.

El 49 crudo se disolvió en EtOAc (300 ml), se añadió MNO_{2} (40 g, 0,46 mol), y se agitó la mezcla con reflujo durante 20 h. La mezcla se filtró a través de celita, eluyéndose con EtOAc, se añadió más MNO_{2} (40 g, 0,46 mol), y se agitó la mezcla con reflujo durante 6 h adicionales. La filtración y oxidación se repitieron una vez más con MNO_{2} nuevo (40 g, 0,46 mol), y después de 6 h adicionales con reflujo, la TLC (25% EtOAc-éter de petróleo) indicó que la oxidación era completa. La mezcla se filtró a través de celita, eluyéndose con EtOAc, y el filtrado se evaporó para proporcionar 3-[N-(t-butiloxicarbonil)-N-(2-propenil)]amino-2-yodobenzaldehído (50) como un aceite amarillo pálido (25,3 g, 88% para tres pasos). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 10,17 (s, 1 H, CHO), 7,80-7,75 (m, 1 H), 7,49-7,34 (m, 2 H), 6,01-5,89 (m, 1 H, CH=CH_{2}), 5,18-5,03 (m, 2 H, CH=CH_{2}), 4,62-4,46 (m, 1 H, CH_{2} CH=CH_{2}), 3,77-3,64 (m, 1 H, CH_{2} CH=CH_{2}), 1,55 (s, aproximadamente 4 h, t-Bu rotámero minoritario), 1,34 (s, ca. 5 H, t-Bu rotámero mayoritario); MS (CI, NH_{3}) m/z 405 (4%, M+NH_{4}), 388 (4%, M+H), 349 (100%, M-C_{4}H_{8} +NH_{4}), 332 (40%, M-C_{4}H_{8} +H); HRMS calculada para C_{15}H_{19}INO_{3}: 388,0410. Hallada: 388,0399.

Se añadió bis(trimetilsilil)amida sódica (38,4 ml de una solución 2 M en THF, 77 mmol) gota a gota a lo largo de 45 min a una solución del 50 (7,43 g, 19,2 mmol) y azidoacetato de metilo (11,0 g, 96 mmol) en THF (80 ml) bajo nitrógeno a -78°C. La solución marrón se agitó a esta temperatura durante 1 h, a continuación se vertió H_{2}O (300 ml) conteniendo HCl aq (2N, 43 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (\times 2) y los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron. La cromatografía (10-20% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó el material de partida recuperado (0,83 g, 11%) y el azidoalcohol crudo (51) como una espuma amarilla pálida (6,18 g, 64%). El 51 crudo (6,34 g, 12,6 mmol) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) a 0°C y se añadieron trietilamina (4,40 ml, 32 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (1,2 ml, 15 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 30 min, a continuación se diluyó con H_{2}O y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}
(\times 2). Los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron, y el residuo se purificó mediante cromatografía (8% EtOAc-éter de petróleo) para obtener el azidocinamato crudo (52) como un aceite amarillo pálido (5,11 g, 84%).

Se añadió una solución del 52 crudo (5,11 g, 10,6 mmol) en xileno (80 ml), a lo largo de 40 min, a xileno (70 ml) con reflujo, bajo nitrógeno. La solución se agitó con reflujo durante 10 min adicionales, a continuación se evaporó. La cromatografía (20% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó el metil-5-[N-(t-butiloxicarbonil)-N-(2-propenil)]amino-4-yodoindol-2-carboxilato (53) como un sólido de color crema (4,09 g, 85%, 46% global a partir de benzaldehído), p.f. 178-179°C. (MeOH). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,32 (s br, 1 H, NH), 7,35-7,04 (m, 3 H), 6,03-5,92 (m, 1 H, CH=CH_{2}), 5,13-5,02 (m, 2 H, CH=CH_{2}), 4,58-4,46 (m, 1 H, CH_{2} CH=CH_{2}), 3,97 (s, 3 H, CO_{2} Me), 3,90 (dd, J=14,6, 5,9 Hz, ca. 0,7 H, CH_{2}CH=CH_{2} rotámero mayoritario), 3,75 (dd, J=15,5, 6,5 Hz, aproximadamente 0,3 H, CH_{2}CH=CH_{2} rotámero minoritario), 1,56 (s, ca. 3 H, t-Bu rotámero minoritario), 1,33 (s, ca. 6 H, t-Bu rotámero mayoritario). Análisis elemental calculado para C_{18}H_{21}IN_{2}O_{4}: C, 47,4; H, 4,6; N, 6,1. Hallado: C, 47,3; H, 4,8; N, 6,3%.

Una solución de hidruro de tributiltina (13,8 ml, 51 mmol) en tolueno (150 ml) se añadió gota a gota a lo largo de 3 h a una solución del 53 (5,86 g, 12,8 mmol) y Tempo (2,2,6,6-tetrametil-piperidiniloxi, 10,0 g, 64 mmol) en tolueno (400 ml) bajo nitrógeno a 70-80°C, tiempo durante el cual el color rojo del Tempo se convirtió en amarillo pálido. El análisis mediante TLC (30% EtOAc-éter de petróleo) mostró algo de material de partida sin reaccionar. Se añadió más Tempo (3,0 g, 19 mmol) de una sola vez, seguido por una solución de hidruro de tributiltina (3,5 ml, 13 mmol) en tolueno (80 ml) añadida gota a gota a lo largo de 2 h. La mezcla se enfrió y evaporó. La cromatografía (CHCl_{3}, a continuación 5-20% EtOAc-éter de petróleo) proporcionó un sólido rosado (aproximadamente 10 g) el cual se recristalizó a partir de MeOH para rendir metil-3-(t-butiloxicarbonil)-1-[(2,2,6,6-tetrametil-piperidino)oxi]metil-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (54) como un sólido blanco (3,65 g, 59%), p.f. 191,5-193°C. El licor madre se evaporó y purificó mediante cromatografía (5-20% EtOAc-éter de petróleo) seguida por recristalización (MeOH) para rendir una segunda cosecha (1,12 g, 18%). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,84 (s, 1 H, NH), 8,05 (br, s, ca. 0,7 H, H-4 rotámero mayoritario), 7,63 (br, s, ca.). 3 H, H-4 rotámero minoritario), 7,26 (d, J=8,8 Hz, 1 H, H-5), 7,13 (s, 1 H, H-8), 4,20-4,05 (m, 3 H), 3,94 (s, 3 H, CO_{2} Me), 3,91-3,74 (m, 2 H), 1,58 (s br, 9 H, t-Bu), 1,48-1,27 (m, 6 H, CH_{2} CH_{2} CH_{2}), 1,21 (s, 3 H, CH_{3}), 1,11 (s, 3 H, CH_{3}), 1,08 (s, 3 H, CH_{3}), 1,06 (s, 3 H, CH_{3}); RMN-^{13}C (no se observó un pico) \delta 162,2, 152,7, 137,2, 134,0, 127,9, 124,4, 114,5, 110,9, 106,3, 80,1, 78,4, 59,9, 52,2, 52,0, 39,7, 33,1, 28,5, 20,2, 17,1. Análisis elemental calculado para C_{27}H_{39}N_{3}O_{5}: C, 66,8; H, 8,1; N. 8,7. Hallado: C, 66,8; H, 8,2;
N, 8,7%.

Se añadió polvo de zinc (7,39 g, 113 mmol) a una solución del 54 (6,86 g, 14,1 mmol) en THF (150 ml), HOAc (150 ml), y H_{2}O (50 ml). La mezcla se agitó con reflujo durante 40 min, se enfrió, y se filtró a través de celita, eluyéndose con EtOAc. Se evaporó el filtrado y el residuo se diluyó con H_{2}O y se extrajo con EtOAc (\times 2). Los extractos se lavaron con H_{2}O, NaHCO_{3} aq, y se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron. La recristalización desde MeOH rindió el metil-3-(t-butiloxicarbonil)-1-hidroximetil-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (55) como un sólido blanco (3,86 g, 79%), p.f. 189,5-191°C El licor madre se purificó mediante cromatografía (40% EtOAc-éter de petróleo) para rendir más alcohol (0,74 g, 15%). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,88 (s, 1 H, NH), 7,87 (v br s, 1 H, H-4), 7,29 (d, J=8,9 Hz, 1 H, H-5), 7,11 (d, J=1,4 Hz, 1 H , H-8), 4,95 (t, J=5,2 Hz, 1 H, OH), 4,03 (t, J=10,5 Hz, 1 H), 3,92-3,86 (m, 1 H), 3,87 (s, 3 H, CO_{2} Me), 3,82-3,75 (m, 1 H), 3,67 (s br, 1 H), 3,55-3,48 (m, 1 H), 1,51 (s, 9 H, t-Bu); RMN-^{13}C \delta 161,6, 151,8, 136,2, 134,6, 127,8, 123,7, 122,6, 113,3, 113,3, 111,3, 105,5, 79,3, 63,1, 51,7, 51,2, 42,2, 28,1. Análisis elemental calculado para C18H_{22}N2O_{5}: C, 62,4; H, 6,4; N, 8,1. Hallado: C, 62,3; H, 6,6;
N, 8,3%.

Una solución templada del 55 (447 mg, 1,29 mmol) en CH_{3}NO_{2} (50 ml) se enfrió en un baño de hielo. Cuando el material de partida empezó a precipitar (temperatura interna de aproximadamente 5°C.) se añadió c.HNO_{3} (0,16 ml, 2,6 mmol) gota a gota, obteniéndose una mezcla naranja-roja. La suspensión se agitó a 0°C durante 40 min, a continuación se vertió en H_{2}O fría y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (\times 3). Los extractos se lavaron con NaHCO_{3} aq, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y evaporaron. El residuo se recristalizó desde MeOH para rendir metil-3-(t-butiloxicarbonil)-1-hidroximetil-5-nitro-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (29) como un polvo naranja (229 mg, 45%), p.f. 200°C. El licor madre se purificó mediante cromatografía (40% EtOAc-éter de petróleo) para rendir más 29 (70 mg, 14%). RMN-^{1}H
[(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,22 (d, J=1,5 Hz, 1 H, NH), 8,72 (br, s, ca. 0,8 H, H-4 rotámero mayoritario), 8,42 (s br, aproximadamente 0,2 H, H-4 rotámero minoritario), 7,47 (d, J=2,0 Hz, 1 H, H-8), 5,02 (t, J=5,2 Hz, 1 H, OH), 4,14 (t, J=10,5 Hz, 1 H), 3,95 (dd, J=11,2, 4,7 Hz, 1 H), 3,92 (s, 3 H, CO_{2} Me), 3,89-3,80 (m, 1 H), 3,73 (t, J=5,2 Hz, 2 H), 1,54 (s, 9 H, t-Bu). Análisis elemental calculado para C_{18}H_{21}N_{3}O_{7}: C, 55,2; H, 5,4; N, 10,7. Hallado: C, 55,4; H, 5,4; N, 10,7%.

Una solución del 29 (1,52 g, 3,87 mmol) en dioxano saturado con HCl (120 ml) se agitó durante 100 min (hasta que la TLC indicó una reacción completa) y se evaporó la suspensión. Se añadieron EDCI.HCl (1,48 g, 7,74 mmol) y ácido 5,6,7-trimetoxiindol-2-carboxílico (0,97 g, 3,87 mmol) en DMA (12 ml), y la mezcla se agitó a 20°C durante 16 h. Se añadió NaHCO_{3} aq diluido (100 ml), y el sólido precipitado se eliminó mediante filtración, se lavó con H_{2}O, y se secó. La trituración con MeOH caliente rindió metil-1-hidroximetil-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (56) como un polvo naranja (1,45 g, 71%), p.f. 239-240,5°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,46 (d, J=32 1,6 Hz, 1 H, NH), 11,30 (s, 1 H, NH), 9,19 (s, 1 H, H-4), 7,54 (s, 1 H, H-8), 7,09 (s, 1 H, H-3'), 6,95 (s, 1 H, H-4'), 5,11 (t, J=5,3 Hz, 1 H, OH), 4,71 (t, J=10,1 Hz, 1 H, H-2), 4,47 (dd, J=10,6, 4,1 Hz, 1 H, H-2), 4,02-3,95 (m, 1 H), 3,94 (s, 3 H, OMe), 3,93 (s, 3 H, OMe), 3,82 (s, 3 H, OMe), 3,80 (s, 3 H, OMe), 3,81-3,75 (m, 2 H). Análisis elemental calculado para C_{25}H_{24}N_{4}O_{9},1/2H_{2}O: C, 56,3; H, 4,7; N, 10,5. Hallado: C, 56,4; H, 4,4; N, 10,3%.

Se añadió dicloro-trifenilfosforano (1,65 g, 5,1 mmol) a una solución del 56 (1,34 g, 2,55 mmol) en piridina (75 ml) y la solución se agitó a 20°C. Transcurridos 10 min se añadió más dicloro-trifenilfosforano (2,06 g, 6,4 mmol), y después de 10 minutos adicionales se vertió en H_{2}O y se agitó la mezcla durante 5 min. El precipitado se eliminó extrajo filtración, se lavó con H_{2}O, y se redisolvió en CH_{2}Cl_{2} (400 ml). Esta solución se filtró a través de celita, eluyéndose con CH_{2}Cl_{2}, y el filtrado se secó (Na_{2}SO_{4}) y evaporó. El sólido naranja resultante se recristalizó desde CH_{2}Cl_{2} proporcionando metil-1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (31) como un polvo naranja (0,88 g, 64%), p.f. 246-247,5°C. El licor madre se evaporó sobre sílice y se purificó mediante cromatografía (50% EtOAc-éter de petróleo) para obtener 31 adicional (0,50 g, 36%). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 10,39 (s, 1 H, NH), 9,42 (s, 1 H, NH), 9,39(s, 1 H, H-4), 7,31 (d, J=2,2 Hz, 1 H, H-8), 6,97 (d, J=2,4 Hz, 1 H, H-3'), 6,86 (s, 1 H, H-4'), 4,80 (t, J=10,0 Hz, 1 H, H-2), 4,69 (dd, J=10,8, 4,4 Hz, 1 H, H-2), 4,32-42,3 (m, 1 H, H-1), 4,09 (s, 3 H, OMe), 4,05 (dd, J=11,4, 3,9 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 4,02 (s, 3 H, OMe), 3,95 (s, 3 H, OMe), 3,91 (s, 3 H, OMe), 3,77 (dd, J=11,4, 8,8 Hz, 1 H, CH_{2} Cl); RMN-^{13}C [(CD_{3})_{2}SO] \delta 160,5, 160,0, 149,2, 140,0, 139,0, 137,5, 133,6, 132,1, 131,3, 130,2, 127,7, 126,1, 125,5, 123,2, 111,3, 107,5, 106,4, 97,9, 61,1, 60,9, 55,9, 54,1, 52,3, 47,0, 42,0. Análisis elemental calculado para C_{25}H_{23}ClN_{4}O_{8}: C, 55,3; H, 4,3; N, 10,3. Hallado: C, 55,4; H, 4,1; N, 10,3%.

Ejemplo KK Preparación del metil-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (32a)

Una solución del 31 (559 mg, 1,0 mmol) en THF (100 ml) con PtO_{2} (0,10 g, 0,44 mmol) se hidrogenó a 50 psi durante 30 min. El catalizador se eliminó mediante filtración, el filtrado se evaporó, y el residuo se trituró con EtOAc para rendir el 32a como un sólido amarillo-naranja (404 mg, 76%), p.f. 190-196°C. El licor madre se evaporó para obtener más 32a (111 mg, 21%). RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,62 (d, J=1,7 Hz, 1 H, NH), 11,30 (d, J=1,6 Hz, 1 H, NH), 7,51 (s br, 1 H), 7,21 (s, 1 H), 6,95 (s, 2 H), 5,63 (s br, 2 H, NH_{2}), 4,62 (dd, J=10,7, 9,4 Hz, 1 H, H-2), 4,29 (dd, J=11,0, 4,0 Hz, 1 H, H-2), 4,05 (dd, J=10,8, 3,6 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 4,01-3,94 (m, 1 H, H-1), 3,93 (s, 3 H, OMe), 3,89 (s, 3 H, OMe), 3,83 (dd, J=10,8, 7,6 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 3,81 (s, 3 H, OMe), 3,79 (s, 3 H, OMe). Análisis elemental calculado para C_{25}H_{25}ClN_{4}O_{6},0.5EtOAc: 58,2; H, 5,2; N, 10,1. Hallado: C, 58,2; H, 5,3; N, 10,1%.

Ejemplo LL Preparación del metil-1-(clorometil)-5-metilamino-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (32b)

Se añadió anhídrido acético-fórmico [40 \mul de una solución preparada a partir de ácido fórmico (1,22 ml, 32 mmol) y anhídrido acético (2,45 ml, 26 mmol)] a una solución del 32a (94 mg, 0,18 mmol) en THF (10 ml), bajo nitrógeno, a 0°C. La solución se agitó durante 2 h, a continuación se evaporó. El residuo se redisolvió en THF (8 ml) bajo nitrógeno, se añadió borano-dimetilsulfuro (45 \mul, 0,45 mmol), y la solución amarilla se agitó con reflujo durante 30 min. Se enfrió la mezcla, se añadieron MeOH y H_{2}O, y se evaporó la mezcla. El residuo se diluyó con H_{2}O y se extrajo con EtOAc (\times 2). Los extractos se lavaron con H_{2}O, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron. La cromatografía (50-60% EtOAc-éter de petróleo) seguida por la recristalización desde PhH rindió el 32b como un sólido amarillo (11 mg, 11%), p.f. 201-205°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,61 (s, 1 H, NH), 11,34 (s, 1 H, NH), 7,42 (v br s, 1 H, H-4), 7,23 (s, 1 H), 6,96 (s, 2 H), 6,06 (s, 1H, NH), 4,64 (t, J=9,6 Hz, 1 H, H-2), 4,33 (dd, J=11,0, 3,6 Hz, 1 H, H-2), 4,06 (dd, J=10,5, 3,4 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 4,05-3,96 (m, 1 H, H-1), 3,91 (s, 3 H, OMe), 3,88 (s, 3 H, OMe), 3,88-3,83 (m, 1 H, CH_{2} Cl), 3,81 (s, 3 H, OMe), 3,78 (s, 3 H, OMe), 2,81 (s, 3 H, NMe). Análisis elemental calculado para C_{26}H_{27}ClN_{4}O_{6}.H_{2}O: C, 57,3; H, 5,4; N, 10,3. Hallado: C, 57,2; H, 5,4; n, 10,4%.

Ejemplo MM Preparación del metil-1-(clorometil)-5-dimetilamino-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (32c)

Se añadió cianoborohidruro sódico (40 mg, 0,6 mmol) y a continuación HCl aq (2N, 0,4 ml) a una solución del 32a (111 mg, 0,22 mmol) y formaldehído (0,17 ml de una solución aq al 40% w/v, 2,3 mmol) en THF (15 ml), y la solución naranja pálida se agitó a 20°C durante 100 min. Se evaporó el THF y el residuo se diluyó con H_{2}O y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (\times 2). Los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron. La cromatografía (1% MeOH-CHCl_{3}) seguida por la recristalización desde PhH-éter de petróleo rindió el 32c como un polvo de color crema (33 mg, 28%), p.f. 200-202°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11,64 (s, 1 H, NH), 11,38 (s, 1 H, NH), 7,92 (v br s, 1 H, H-4), 7,34 (s, 1 H), 6,99 (s, 1 H), 6,97 (s, 1 H), 4,67 (t, J=9,6 Hz, 1 H, H-2), 4,37 (dd, J=11,0, 3,5 Hz, 1 H, H-2), 4,16-4,08 (m, 2 H), 3,96 (dd, J=11,8, 8,2 Hz, 1 H), 3,92 (s, 3 H, OMe), 3,87 (s, 3 H, OMe), 3,82 (s, 3 H, OMe), 3,79 (s, 3 H, OMe), 2,78 (s, 6 H, NMe_{2}). Análisis elemental calculado para C_{27}H_{29}ClN_{4}O_{6}: C, 59,9; H, 5,4; N, 10,4. Hallado: C, 60,3; H, 5,6;
N, 10,3%.

Ejemplo NN Preparación del metil-1-(clorometil)-5-[(4-nitrobenciloxicarbonil)-amino]-3-[(5,6,7-trimetoxi indol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (32d)

Se añadió 4-nitrobencil-cloroformato (43 mg, 0.20 mmol) a una solución del 32a (92 mg, 0.18 mmol) en piridina (2 mL) y la mezcla se agitó a 20°C. Transcurridos 30 min se añadió más 4-nitrobencil-cloroformato (43 mg, 0.20 mmol), y después de 5 min adicionales se evaporó la piridina. El residuo se diluyó con HCl aq (1N) y se extrajo con EtOAc (\times 2), y los extractos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y evaporaron. El sólido resultante se disolvió en THF caliente y la solución se evaporó sobre sílice. La cromatografía (60% EtOAc-éter de petróleo) y la trituración con THF rindió el 32d como un sólido de color crema (22 mg, 18%), p.f. 257-258°C. RMN-^{1}H [(CD_{3})_{2}SO] \delta 11.86 (s, 1 H, NH), 11.37 (s, 1 H, NH), 9.82 (s, 1 H, NH), 8.89 (s, 1 H, H-4), 8.29 (d, J=8.6 Hz, 2 H, H-4'',5''), 7.75 (d, J=8.6 Hz, 2 H, H-2'',6''), 7.38 (s, 1 H, H-8), 7.01 (s, 1 H, H-3'), 6.96 (s, 1 H, H-4'), 5.37 (s, 2 H, CH_{2} Ar), 4.71 (t, J=10.2 Hz, 1 H, H-2), 4.38 (dd, J=11.0, 4.2 Hz, 1 H, H-2), 4.19-4.12 (m, 1 H, H-1), 4.11 (dd, J=10.9, 3.3 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 4.01 (dd, J=10.8, 6.6 Hz, 1 H, CH_{2} Cl), 3.93 (s, 3 H, OMe), 3.91 (s, 3 H, OMe), 3.82 (s, 3 H, OMe), 3.79 (s, 3 H, OMe). Análisis elemental calculado para C_{33}H_{30}ClN_{5}O_{10}: C, 57.3; H, 4.4; N, 10.1. Hallado: C, 57.4; H, 4.4; N, 10.1%.

La página siguiente proporciona ejemplos de la actividad biológica de los compuestos de la invención.

Actividad biológica

Los compuestos de la invención se ensayaron para determinar su citotoxicidad respecto cuatro líneas celulares diferentes, todas las cuales están ampliamente disponibles en la técnica. AA8 es una línea celular de roedor del tipo salvaje. UV4 es una línea celular de AA8 mutante, defectuosa en la reparación de cortes, e hipersensible a muchos agentes alquilantes. EMT6 es una línea de roedor ampliamente usada. SKOV es una línea celular ovárica humana.

Los ensayos con cultivos celulares se realizaron en placas de microvaloración de 96 pocillos. Los compuestos de la invención se añadieron al medio de cultivo, usando diluciones de dos veces en serie para proporcionar cultivos duplicados a cinco concentraciones diferentes de cada una de los ocho fármacos (más ocho controles) por placa. Los fármacos se disolvieron en agua o DMSO inmediatamente antes de añadirlos al cultivo celular. Transcurridas 4 horas, los fármacos se eliminaron lavando los cultivos tres veces con medio nuevo, y las placas se incubaron durante tres días adicionales. A continuación se determinó la densidad celular mediante tinción con azul de metileno tal como se ha descrito previamente (Finlay, G. J., et al., Anal. Biochem., 139:272-277 (1984)) y se calculó la IC_{50} como la concentración de fármaco que proporcionaba una inhibición del 50% del crecimiento respecto los controles.

Las actividades de los compuestos de la invención se muestran en la Tabla 2.

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TABLA 2

Nº	forma	AA8	UV4	EMT6	SKOV3
		IC_{50} (nM)	IC_{50} (nM)	IC_{50} (nM)	IC_{50} (nM)
15a	A	0,45	0,28	0,27	1,0
15aR	A	13,6	2,6	7,0	7,8
15aS	A	0,2	0,1	0,1	0,5
15b	A	2,4	1,0	0,8	3,0
15c	A	12,5	7,6	5,2	18
15d	A	1,2	0,8	0,9	1,8
15e	A	3,5	1,4	0,9	6,4

TABLA 2 (continuación)

Nº	forma	AA8	UV4	EMT6	SKOV3
		IC_{50} (nM)	IC_{50} (nM)	IC_{50} (nM)	IC_{50} (nM)
15i	C	31	16	5,9	22
15l	E	0,3	0,4	0,2	0,6
15o	F	660	665	233	1330
15p	A	0,1	0,1	0,1	0,3
15q	A	5,6	3,7	3,8	16
32a	G	17	1,7	5,6	14
32b	G	2,4	0,7	0,8	1,9
32c	G	12	3,3	5,2	12

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Los compuestos de la invención se analizaron adicionalmente frente a líneas celulares humanas (Nr+ en la Tabla 3) transfectadas con un gen que codifica el enzima nitroreductasa (NR) bacteriana para ensayar la activación de compuestos de la invención con la NR. Como control se usaron células control no transfectadas (NR- en la Tabla 3). Las células usadas eran la línea WIDR NR- de colon humano (tipo salvaje) y su contrapartida NR+ transfectada WC14,10; y la línea SKOV3 NR- (tipo salvaje) ovárica humana junto con su contrapartida NR+ (transfectada) SC3,2. Los resultados se muestran en la Tabla 3, la cual también indica las proporciones de IC_{50}. Estos son valores intraexperimentales, y podrían diferir ligeramente de los calculados a partir de los valores de NR- y NR+ proporcionados.

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TABLA 3

no.	forma	Líneas de colon humanas	Líneas ováricas humanas
		NR-	NR+	proporción	NR-	NR+	proporción
14a	A	1,3	0,38	3,4	1,6	0,14	12
14aR	A	>20	>20	ND	>20	0,3	>60
14aS	A	0,35	0,09	4,2	0,4	0,04	9,5
14b	A	0,39	0,21	1,8	0,40	0,39	1,0
14c	A	1,6	0,36	4,4	4,3	0,25	17
14d	A	0,74	0,29	2,6	0,58	0,15	3,9
14e	A	0,37	0,13	2,8	1,0	0,09	11
14i	C	2,2	0,6	3,7	4,3	0,39	11
14l	E	0,14	0,08	1,8	0,13	0,04	3,3
14o	F	0,41	0,06	6,8	0,41	0,05	8,2
15r	A	0,39	0,012	33	0,062	0,0054	11,5
31	G	0,4	0,01	33	0,06	0,005	12
32d	G	0,49	0,26	2,3	1,1	0,27	5,5

Los resultados de las Tablas 2 y 3 muestran que: (a) los compuestos novedosos con la Fórmula 1 en los que Y=NH_{2} tienen una citotoxicidad sustancial en un rango de líneas celulares tumorales de animal y humanas, y (b) que muchos de los compuestos con la Fórmula 1 en los que Y=NO_{2} o está remplazado por un 4-nitrobencill-carbamato [Fórmula II, P=IIb] tiene una citotoxicidad selectiva sustancial hacia las líneas celulares humanas que incorporan el gen de la nitroreductasa de E. coli y expresan el enzima correspondiente.

Claims

1. Compuesto con la Fórmula (I):

11

en donde:

X es halógeno o OSO_{2}R, en donde R representa H o un alquilo inferior (con, desde uno hasta cuatro átomos de carbono) opcionalmente sustituido con grupos hidroxilo o amino, estando los grupos amino opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos alquilo C_{1}-4;

Y es NO_{2} o NHR, en donde R es tal como se ha definido más arriba;

W se selecciona de entre las estructuras con formulas (Ia o Ib):

12

2. Compuesto con la Fórmula (II):

13

en donde A, B, E, G, Q, R, W y X están representados más arriba por las fórmulas generales I, Ia o Ib, tal como se definieron en la reivindicación 1, J es OH ó R (en donde R es tal como se definió en la reivindicación 1), y P se selecciona de entre grupos con las Fórmulas (IIb) o (IIc):

(IIb)-C(O)-O-CH_{2}-Ph

(IIc)-C(O)-NH-C(COOH)-(CH_{2})_{2}-COOH

en donde Ph es un grupo fenilo, sustituido en el grupo de (IIb) con un grupo nitro en la posición 2 ó 4, estando el grupo Ph opcionalmente sustituido de forma adicional con un grupo R^{1} el cual podría ser un grupo R, CONHR, NHCOR, NHR, OR o SO_{2}R, en donde R es tal como se definió en la reivindicación 1; o una sal del mismo.

3. Compuesto acorde con la reivindicación 2, en el cual R^{1} representa H o un grupo CONHR.

4. Compuesto acorde con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el cual X representa Cl.

5. Compuesto acorde con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el cual W representa un grupo con la Fórmula Ia, E representa -CH=, G representa NH, y Q representa tres grupos OMe.

6. Compuesto con la Fórmula (III):

14

en donde X, Y, E, G y Q se definen en la reivindicación 1; o una sal del mismo.

7. Compuesto con la Fórmula (IV):

15

8. Compuesto seleccionado de entre el grupo consistente en:

1-clorometil-5-nitro-3-[5,6,7-trimetoxiindol-2-il)-carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14a);

1-(clorometil)-3-[[7-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol
(14g);

1-(clorometil)-3-[[6-[2-(dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonil]-5-nitro-1,2-dihidro-3h-benz[o]indol
(14f);

1-(clorometil)-3-[(E)-3-metoxicinamoil]-5-nitro-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14l);

(R)-1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14aR);

(S)-1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (14aS); y

metil-1-(clorometil)-5-nitro-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (31);

o una sal del mismo.

9. Compuesto seleccionado de entre el grupo consistente en:

5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15a);

1-(clorometil)-5-metilamino-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15p);

5-amino-1-(clorometil)-3-[[6-[2-dimetilamino)etoxi]-5-metoxiindol-2-il]carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol
(15f);

5-amino-1-[(E)-4-butirilamino-1-metil-2-pirrolacriloil]-1-(clorometil)-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15i);

5-amino-1-(clorometil)-3-[(E)-3-metoxicinamoil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15l);

(R)-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15aR);

(S)-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15aS);

metil-5-amino-1-(clorometil)-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carbo-
xilato (32a);

metil-1-(clorometil)-5-metilamino-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-
carboxilato (32g); y

metil-1-(clorometil)-5-dimetilamino-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pirrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (32c);

o una sal del mismo.

10. Compuesto seleccionado de entre el grupo consistente en:

metil-1-(clorometil)-5-[(4-nitrobenzilcarbonil)amino]-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-pi-
rrolo[3,2-e]indol-7-carboxilato (32d); y

1-(clorometil)-5-[(4-nitrobenzilcarbonil)amino]-3-[(5,6,7-trimetoxiindol-2-il)carbonil]-1,2-dihidro-3H-benz[o]indol (15r);

o una sal del mismo.

11. Sistema de dos componentes para el tratamiento de enfermedades neoplásicas, el cual comprende:

(i): un vector que codifica y es capaz de expresar un enzima nitroreductasa en una célula tumoral; y

(ii): un compuesto acorde con la reivindicación 2, 8 ó 10.

12. Sistema de dos componentes para el tratamiento de enfermedades neoplásicas, el cual comprende:

(i): un anticuerpo dirigido contra un tumor, unido a un enzima nitroreductasa; y

(ii): un compuesto acorde con la reivindicación 2.

13. Composición que comprende un compuesto acorde con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, junto con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

14. Compuesto acorde con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, un sistema acorde con las reivindicaciones 11 ó 12, o una composición acorde con la reivindicación 13, para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o animal.