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EP2435405A1 - Substituted piperidines - Google Patents

Substituted piperidines

Info

Publication number
EP2435405A1
EP2435405A1 EP10721123A EP10721123A EP2435405A1 EP 2435405 A1 EP2435405 A1 EP 2435405A1 EP 10721123 A EP10721123 A EP 10721123A EP 10721123 A EP10721123 A EP 10721123A EP 2435405 A1 EP2435405 A1 EP 2435405A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
phenyl
substituted
trifluoromethyl
salts
diseases
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP10721123A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Dirk Heimbach
Susanne Röhrig
Yolanda Cancho Grande
Ulrich Rester
Eckhard Bender
Katja Zimmermann
Dmitry Zubov
Anja BUCHMÜLLER
Georges Von Degenfeld
Christoph Gerdes
Mark Jean Gnoth
Kersten Matthias GERICKE
Mario Jeske
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Intellectual Property GmbH
Original Assignee
Bayer Pharma AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Pharma AG filed Critical Bayer Pharma AG
Publication of EP2435405A1 publication Critical patent/EP2435405A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/08—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/18—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms

Definitions

  • the invention relates to novel substituted piperidines, processes for their preparation, their use for the treatment and / or prophylaxis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases and tumor diseases.
  • Platelets are a major factor in both hemostasis and thromboembolic disorders. Particularly in the arterial system, platelets are of central importance in the complex interaction between blood components and the vessel wall. Undesirable platelet activation can lead to thromboembolic diseases and thrombotic complications with life-threatening conditions by the formation of platelet-rich thrombi.
  • thrombin blood coagulation protease thrombin, which is formed on injured blood vessel walls and, in addition to fibrin formation, activates platelets, endothelial cells and mesenchymal cells (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068 ).
  • thrombin inhibitors inhibit platelet aggregation or the formation of platelet-rich thrombi.
  • arterial thrombosis can be successfully prevented or treated with inhibitors of platelet function as well as thrombin inhibitors (Bhatt DL, Topol EJ, Nat., Rev. Drug Discov., 2003, 2, 15-28).
  • platelet thrombin antagonists are highly likely to reduce the formation of thrombi and the onset of clinical consequences such as myocardial infarction and stroke.
  • Further cellular thrombin effects e.g. vascular endothelial and smooth muscle cells, leukocytes and fibroblasts may be responsible for inflammatory and proliferative disorders.
  • thrombin The cellular effects of thrombin are mediated, at least in part, via a family of G protein-coupled receptors (PARs) whose prototype is the PAR-1 receptor.
  • PAR-I is activated by binding of thrombin and proteolytic cleavage of its extracellular N-terminus. Proteolysis reveals a new N-terminus with the amino acid sequence SFLLRN ..., which acts as an agonist ("tethered ligand") for intramolecular receptor activation and transmission of intracellular signals.
  • Peptides derived from the tethered ligand sequence can be used as agonists of the receptor
  • Other proteases are also capable of activating PAR-I, including, for example, plasmin, factor VIIa, factor Xa, trypsin, activated protein C (aPC), tryptase, cathepsin G, proteinase 3 , Granzyme A, elastase and matrix metalloprotease 1 (MMP-I).
  • blockade of PAR-I should inhibit platelet activation without reducing the coagulation capacity of the blood (anticoagulation).
  • Antibodies and other selective PAR-1 antagonists inhibit thrombin-induced aggregation of platelets in vitro at low to medium thrombin concentrations
  • PAR-4 Another thrombin receptor of potential importance for the pathophysiology of thrombotic processes, PAR-4, has been identified on human and animal platelets. In experimental thromboses on animals with a human-like PAR expression pattern, PAR-1 antagonists reduce the formation of platelet-rich thrombi
  • thrombin mediated by the receptor PAR-I have implications for disease progression during and after coronary artery bypass grafting (CABG) as well as other operations, and in particular extracorporeal circulation (eg, heart-lung machine) operations.
  • CABG coronary artery bypass grafting
  • extracorporeal circulation eg, heart-lung machine
  • bleeding complications may occur due to pre- or intraoperative medication with anticoagulant and / or platelet-inhibiting substances.
  • a medication with clopidogrel must be paused several days before a CABG.
  • disseminated intravascular coagulation or consumption coagulopathy DIC
  • restenosis of the applied venous or arterial bypasses often occurs due to thrombosis, intimal fibrosis, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, heart failure, arrhythmias, transient ischemic attack (TIA) and / or stroke.
  • the receptor PAR-I is also expressed on other cells in humans, including, for example, endothelial cells, vascular smooth muscle cells and tumor cells. Malignant tumors (cancer) have a high incidence and are generally associated with high mortality rates connected. Current therapies achieve full remission in only a fraction of patients and are typically associated with severe side effects. Therefore, there is a high demand for more effective and safer therapies.
  • the PAR-I receptor contributes to the development, growth, invasiveness and metastasis of cancer.
  • PAR-1 expressed on endothelial cells mediates signals that result in vascular growth (“angiogenesis”), a process that is essential for facilitating tumor growth beyond about 1 mm 3.
  • Angiogenesis also contributes to the onset or exacerbation of other diseases, among them for example hematopoietic cancers, the blindness leading to macular degeneration and diabetic retinopathy, inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and colitis.
  • Sepsis (or septicemia) is a common high mortality disease.
  • Initial symptoms of sepsis are typically nonspecific (e.g., fever, reduced general condition), but in the further course, generalized activation of the coagulation system ("disseminated intravascular coagulation” or “consumption coagulopathy” (DIC)) may occur with microthrombosis in various organs and secondary bleeding complications.
  • DIC may also occur independently of sepsis, e.g. in the context of operations or tumors.
  • the therapy of sepsis consists on the one hand in the consequent elimination of the infectious cause, e.g. by operative herdsan ist and antibiosis. On the other hand, it consists in the temporary intensive medical support of the impaired organ systems. ' Therapies of the various stages of this disease are e.g. in the following publication (Dellinger et al., Crit. Care Med. 2004, 32, 858-873). There are no proven effective therapies for DICs.
  • An object of the present invention is therefore to provide novel PAR-I antagonists for the treatment of diseases such.
  • diseases such as cardiovascular diseases and thromboembolic diseases, as well as tumor diseases in humans and animals to provide.
  • WO 2006/012226, WO 2007/130898 and WO 2007/101270 describe structurally similar piperidines as 11- ⁇ -HSD1 inhibitors for the treatment of, inter alia, diabetes, thromboembolic disorders and stroke.
  • the invention relates to compounds of the formula
  • R 1 is phenyl
  • phenyl may be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of monofluoromethyl, difluoromethyl,
  • Trifluoromethyl monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy
  • R 2 is phenyl, naphthyl or 5- to 10-membered heteroaryl
  • phenyl, naphthyl and heteroaryl may be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of halogen, cyano, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl, C r C 4 alkoxy, Ci-C6 alkylamino, phenyl and 5- or 6-membered heteroaryl,
  • phenyl and heteroaryl may be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of halogen, cyano, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl, ci C 4 alkoxy and C 1 -C 6 -alkylamino,
  • R 3 CpC ⁇ alkyl, C r C 6 alkoxy, Ci-Q-alkylamino, C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 7-membered heterocyclyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyloxy, C 3 -C 7 - cycloalkylamino, 4- to 7-membered heterocyclylamino, phenylamino or 5- or 6-membered heteroarylamino,
  • alkyl, C 2 -C 6 -alkoxy and alkylamino may be substituted by a substituent selected from the group consisting of halogen, hydroxy, amino,
  • cycloalkyl, heterocyclyl, phenyl, heteroaryl, cycloalkyloxy, cycloalkylamino, heterocyclylamino, phenylamino and heteroarylamino may be substituted by 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, oxo, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl .
  • alkyl may be substituted with a hydroxy substituent
  • Compounds of the invention are the compounds of formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts; the compounds of the formula (I) mentioned below of the formulas and their salts, solvates and solvates of the salts and the compounds of formula (I), hereinafter referred to as exemplary compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the of formula (I), compounds mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds of the invention may exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers).
  • the invention therefore includes the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, for example salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethane sulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having 1 to 16 carbon atoms, such as, by way of example and by way of preference, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, N-methylpiperidine and choline.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs includes compounds which may themselves be biologically active or inactive, but which are converted during their residence time in the body into compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
  • Alkoxycarbonyl and alkylaminocarbonyl represent a linear or branched alkyl radical having 1 to 6 carbon atoms, by way of example and preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl and n-hexyl.
  • Alkoxy is, by way of example and by way of preference, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tert-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
  • Alkylamino is an alkylamino radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and preferably methylamino, ethylamino, n-propylamino, isopropylamino, tert-butylamino, N, N-dimethylamino, N, N-diethylamino, N-ethyl N-methylamino, N-methyl-Nn-propylamino, N-iso-propyl-Nn-propylamino and N-tert-butyl-N-methylamino.
  • C 1 -C 4 -alkylamino is, for example, a monoalkylamino radical having 1 to 4 carbon atoms. or for a dialkylamino radical each having 1 to 4 carbon atoms per alkyl substituent.
  • Alkoxycarbonyl is exemplified and preferably methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, n-propoxycarbonyl, iso-propoxycarbonyl, n-butoxycarbonyl and tert-butoxycarbonyl.
  • Alkylaminocarbonyl is an alkylaminocarbonyl radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and by way of preference for methylaminocarbonyl, ethylaminocarbonyl, n-propylaminocarbonyl, isopropylaminocarbonyl, tert-butylaminocarbonyl, N, N-dimethylaminocarbonyl, N, N-diethylaminocarbonyl, N-ethyl- N-methylaminocarbonyl, N-methyl-Nn-propylaminocarbonyl, N-isopropyl-Nn-propylaminocarbonyl and N-tert-butyl-N-methylaminocarbonyl.
  • C 1 -C 4 -alkylaminocarbonyl is, for example, a monoalkylaminocarbonyl radical having 1 to 4 carbon atoms or a dialkylamino-carbonyl radical having in each case 1 to 4 carbon atoms per alkyl substituent.
  • Cycloalkyl represents a monocyclic cycloalkyl group having usually 3 to 7, preferably 5 or 6 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
  • Cycloalkyloxy is a monocyclic cycloalkyloxy group having usually 3 to 7, preferably 5 or 6 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkyloxy may be mentioned cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy and cyclohexyloxy.
  • Cycloalkylamino is a monocyclic cycloalkylamino group having usually 3 to 7, preferably 3 or 4 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkylamino may be mentioned cyclopropylamino, cyclobutylamino, cyclopentylamino and cyclohexylamino.
  • Heterocyclyl is a monocyclic or bicyclic heterocyclic radical having 4 to 7 ring atoms and up to 3, preferably up to 2 heteroatoms and / or hetero groups from the series ⁇ , O, S, SO, SO 2 , where a nitrogen atom is also a ⁇ - Oxide can form.
  • the heterocyclyl radicals may be saturated or partially unsaturated.
  • Heterocyclylamino is a monocyclic or bicyclic, heterocyclic Heterocyclylamino radical having 4 to 7 ring atoms and up to 3, preferably up to 2 heteroatoms and / or hetero groups from the series N, O, S, SO, SO 2 , wherein a nitrogen atom also Can form N- oxide.
  • the heterocyclyl radicals may be saturated or partially unsaturated.
  • Heteroaryl is an aromatic, mono- or bicyclic radical having 5 to 10 ring atoms and up to 5 heteroatoms from the series S, O and N, wherein a nitrogen atom can also form an N-oxide.
  • Preferred are heteroaryls having 5 or 6 ring atoms and up to 4 heteroatoms, by way of example and preferably its called thienyl, furyl, pyrrolyl, thiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, triazolyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, pyrazinyl, indolyl, indazolyl , Benzofuranyl, benzothiophenyl, quinolinyl, isoquinolinyl.
  • Heteroarylamino is an aromatic, monocyclic heteroarylamino radical having usually 5 or 6 ring atoms and up to 4 heteroatoms from the series S, O and N, where a nitrogen atom can also form an N-oxide, by way of example and preferably for thienylamino, furylamino , Pyrrolylamino, thiazolylamino, oxazolylamino, isoxazolylamino, oxadiazolylamino, pyrazolylamino, imidazolylamino, pyridylamino, pyrimidylamino, pyridazinylamino, pyrazinylamino.
  • Halogen is fluorine, chlorine, bromine and iodine, preferably fluorine and chlorine.
  • the meandering line to R 2 means that R 2 may be bonded to the double bond in both the cis and trans positions of the piperidine ring.
  • R 1 is phenyl
  • phenyl is substituted by 1 to 3 substituents, independently of one another, selected from the group consisting of trifluoromethyl, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl,
  • R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl
  • phenyl, pyridyl and quinolinyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, CRQ alkyl, C r C 4 alkoxy, phenyl and pyridyl,
  • phenyl and pyridyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, Ci-C 4 alkyl and C r C 4 alkoxy,
  • R 3 is C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 7-membered heterocyclyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyloxy, C 3 -C 7 -cycloalkylamino, 4- to 7-membered Heterocyclylamino, phenylamino or 5- or 6-membered heteroarylamino,
  • cycloalkyl, heterocyclyl, phenyl, heteroaryl, cycloalkyloxy, cycloalkylamino, heterocyclylamino, phenylamino and heteroarylamino may be substituted by 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, oxo, hydroxy, amino, trifluoromethyl, difluoromethoxy, trifluoromethoxy , Hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy,
  • R 1 is phenyl
  • phenyl is substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl and methoxy,
  • R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl
  • phenyl, pyridyl and quinolinyl can be substituted by a substituent selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, phenyl and pyridyl, wherein phenyl and pyridyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl, methoxy and ethoxy,
  • R 3 is morpholin-4-yl, 1,1-dioxothiomorpholin-4-yl, 3-hydroxyazetidinyl-1-yl, 3-hydroxypyrrolidin-1-yl, 4-cyanopiperidin-1-yl or 4-hydroxypiperidin-1-yl stands,
  • R 1 is phenyl
  • phenyl is substituted with a substituent selected from the group consisting of trifluoromethyl and ethyl,
  • R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl
  • phenyl and pyridyl may be substituted by a substituent phenyl
  • phenyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, trifluoromethyl and methoxy,
  • R 3 is morpholin-4-yl
  • R 1 is phenyl, where phenyl is substituted by a substituent in the para position to the point of attachment to the piperidine ring, selected from the group consisting of trifluoromethyl and ethyl.
  • R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl
  • phenyl and pyridyl may be substituted by a substituent phenyl
  • phenyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, trifluoromethyl and methoxy,
  • R 3 is morpholin-4-yl, 1,1-dioxothiomorpholin-4-yl, 3-hydroxyazetidinyl-1-yl, 3-hydroxypyrrolidin-1-yl, 4-cyanopiperidine - 1 -yl or 4-hydroxypiperidin-1-yl.
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I), or their salts, their solvates or the solvates of their salts, where compounds of the formula
  • R 1 and R 3 have the abovementioned meaning
  • R 2 has the meaning given above, and
  • X is a halide, preferably bromide or chloride
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from -1O 0 C to 40 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, preference being given to tetrahydrofuran.
  • ethers such as diethyl ether, dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, preference being given to tetrahydrofuran.
  • Bases are, for example, organometallic compounds such as n-butyllithium, phenyllithium, or sodium or potassium methoxide or potassium tert-butoxide, preferably n-butyllithium or potassium tert-butoxide.
  • the compounds of formula (HI) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of the formula (II) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 and R 3 have the abovementioned meaning
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -40 0 C to 40 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane or 1, 2-dichloroethane, methylene chloride is preferred.
  • Oxidizing agents are, for example, sulfur trioxide-pyridine complex and DMSO, oxalyl chloride and DMSO, Dess-Martin periodinane, tetrapropylammonium perruthenate / N-methylmorphine N-oxide and molecular sieve, preferred is sulfur trioxide-pyridine complex and DMSO or Dess-Martin periodinane.
  • bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine, preference is given to diisopropylethylamine.
  • the compounds of formula (FV) are known or can be prepared by reacting compounds of formula
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from -30 0 C to 80 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane or 1,2-dimethoxyethane, preference being given to tetrahydrofuran.
  • ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane or 1,2-dimethoxyethane, preference being given to tetrahydrofuran.
  • Reducing agents are, for example, lithium aluminum hydride, sodium borohydride in combination with boron trifluoride diethyl etherate, lithium borohydride, borane-THF complex, borane-dimethyl sulfide complex, preference is given to sodium borohydride in combination with boron trifluoride diethyl etherate.
  • the compounds of the formula (V) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 and R 3 have the abovementioned meaning
  • R 6 is methyl or ethyl
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane or 1,2-dichloroethane, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents, such as dimethylformamide, dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine. or mixtures of Solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is a mixture of tetrahydrofiirane and water.
  • halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane or 1,2-dichloroethane
  • ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, lithium hydroxide is preferred.
  • the compounds of the formula (VI) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 and R 6 have the abovementioned meaning
  • R 3 has the abovementioned meaning
  • X 1 is halogen, preferably bromine or chlorine, or hydroxy
  • X 1 is halogen, generally in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -30 0 C to 5O 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, tetrahydrofuran, methylene chloride, pyridine, dioxane or dimethylformamide, preference is given to tetrahydrofuran.
  • bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine; triethylamine or diisopropylethylamine is preferred.
  • reaction is, if X 1 is hydroxy, generally in inert solvents, in the presence of a dehydrating agent, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -30 0 C to 50 0 C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons, such as benzene, nitromethane, dioxane, dimethylformamide or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Particularly preferred is dichloromethane or dimethylformamide.
  • Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. N, N-diethyl, N, N-dipropyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylaminoisopropyl) -N-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), N-cyclohexylcarbodiimide-N'-propyloxymethyl polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1, 2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-l, 2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-di
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate
  • hydrogen carbonate or organic bases
  • organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • the condensation is carried out with HATU or with EDC in the presence of HOBt.
  • the compounds of formula (VIII) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • R 1 and R 6 have the abovementioned meaning
  • the hydrogenation is generally carried out with a reducing agent in inert solvents, optionally with the addition of acid such as mineral acids and carboxylic acids, preferably acetic acid, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent and in a pressure range from atmospheric pressure to 100 bar, preferably 50- 80 bar.
  • acid such as mineral acids and carboxylic acids, preferably acetic acid
  • Reducing agents are, for example, hydrogen with palladium on activated carbon, with rhodium on activated carbon, with ruthenium on activated carbon or mixed catalysts, or hydrogen with palladium on aluminum oxide or with rhodium on aluminum oxide, preference is given to hydrogen with palladium on activated carbon or with rhodium on activated carbon.
  • Inert solvents are, for example, alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or tert-butanol, preferably methanol or ethanol.
  • R 6 has the abovementioned meaning
  • R 1 has the meaning indicated above
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a catalyst, if appropriate in the presence of an additional reagent, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, hydrocarbons, such as benzene, xylene or toluene, or other solvents, such as nitrobenzene, dimethylformamide, dimethylacetamide, dimethylsulfoxide or N-methylpyrrolidone. If desired, a little water is added to these solvents. Preference is given to toluene with water or a mixture of 1,2-dimethoxyethane, dimethylformamide and water.
  • catalysts are conventional palladium catalysts for Suzuki reaction conditions, preferably catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate or bis (diphenylphosphinorrocenyl) palladium (II) chloride.
  • catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate or bis (diphenylphosphinorrocenyl) palladium (II) chloride.
  • Additional reagents are, for example, potassium acetate, cesium, potassium or sodium carbonate, barium hydroxide, potassium tert-butylate, cesium fluoride, potassium fluoride or potassium phosphate, potassium fluoride or sodium carbonate are preferred.
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological and pharmacokinetic activity spectrum.
  • These are selective antagonists of the PAR-I receptor, which act in particular as platelet aggregation inhibitors, as inhibitors of endothelial proliferation and as an inhibitor of tumor growth.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, preferably of thromboembolic diseases and / or thromboembolic complications.
  • thromboembolic disorders include in particular diseases such as heart attack with ST segment elevation (STEMI) and without ST segment elevation (non-STEMI), stable angina pectoris, unstable angina pectoris, reocclusion and restenosis following coronary interventions such as angioplasty, stent or aortocoronary bypass, peripheral arterial occlusive disease, pulmonary embolism, deep venous thrombosis and renal vein thrombosis, transient ischemic attacks, and thrombotic and thromboembolic stroke.
  • diseases such as heart attack with ST segment elevation (STEMI) and without ST segment elevation (non-STEMI)
  • stable angina pectoris such as unstable angina pectoris
  • reocclusion and restenosis following coronary interventions such as angioplasty, stent or aortocoronary bypass, peripheral arterial occlusive disease, pulmonary embolism, deep venous thrombosis and renal vein thrombosis, transient ischemic attacks, and
  • the substances are therefore also useful in the prevention and treatment of cardiogenic thromboembolism, such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia, in patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias, such as atrial fibrillation, and those who undergo cardioversion, further in patients with valvular disease or with intravascular bodies such.
  • cardiogenic thromboembolism such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia
  • Thromboembolic complications also occur in microangiopathic hemolytic anemias, extracorporeal blood circuits such.
  • the compounds according to the invention also have an influence on wound healing, for the prophylaxis and / or treatment of atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the musculoskeletal system, coronary heart diseases, cardiac insufficiency, hypertension, inflammatory diseases, e.g. Asthma, COPD, inflammatory lung disease, glomerulonephritis and inflammatory bowel disease into consideration, as well as for the prophylaxis and / or treatment of Alzheimer's disease, autoimmune diseases, Crohn's disease and ulcerative colitis.
  • atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the musculoskeletal system, coronary heart diseases, cardiac insufficiency, hypertension, inflammatory diseases, e.g. Asthma, COPD, inflammatory lung disease, glomerulonephritis and inflammatory bowel disease into consideration, as well as for the prophylaxis and / or treatment of Alzheimer's disease,
  • the compounds of the present invention can inhibit tumor growth and metastasis, microangiopathies, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic nephropathy and other microvascular diseases and for the prevention and treatment of thromboembolic complications such as venous thromboembolism in tumor patients, particularly those who become larger surgery or chemo- or radiotherapy.
  • Cancer includes, but is not limited to, carcinomas (including breast cancer, hepatocellular carcinoma, liver cancer, colorectal cancer, colon cancer and melanoma), lymphomas (eg, non-Hodgkin's lymphoma and mycosis fungoides), leukemia, sarcoma, mesothelioma, brain cancer (eg, glioma), germinoma (eg testicular cancer and ovarian cancer), choriocarcinomas, kidney cancer, Pancreatic cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, endometrial cancer, cervical cancer, bladder cancer, gastric cancer and multiple myeloma.
  • carcinomas including breast cancer, hepatocellular carcinoma, liver cancer, colorectal cancer, colon cancer and melanoma
  • lymphomas eg, non-Hodgkin's lymphoma and mycosis fungoides
  • leukemia eg, sarcoma
  • mesothelioma eg
  • angiogenesis vascular growth
  • pulmonary diseases eg pulmonary fibrosis, pulmonary hypertension, especially pulmonary arterial hypertension, diseases characterized by pulmonary vascular occlusions
  • arteriosclerosis plaque rupture, diabetic retinopathy and wet macular degeneration.
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment of sepsis.
  • Sepsis or septicemia is a common high mortality disease.
  • Initial symptoms of sepsis are typically nonspecific (eg, fever, reduced general condition), but in the further course, generalized activation of the coagulation system ("disseminated intravascular coagulation", or “consumption coagulopathy”, hereinafter referred to as "DIC") with microthrombosis in different ones may occur Organs and secondary bleeding complications.
  • endothelial damage can result in increased vascular permeability and leakage of fluid and proteins into the extravasal space.
  • ARDS Acute Respiratory Distress Syndrome
  • ARDS Acute Respiratory Distress Syndrome
  • Pathogens can be bacteria (gram-negative and gram-positive), fungi, viruses and / or eukaryotes. Entry portal or primary infection can e.g. Pneumonia, urinary tract infection, peritonitis. The infection may or may not be associated with bacteremia.
  • Sepsis is defined as the presence of an infection and a "systemic inflammatory response syndrome" (hereafter referred to as "SIRS").
  • SIRS occurs in the context of infections, but also other conditions such as injuries, burns, shock, surgery, ischemia, pancreatitis, resuscitation or tumors.
  • ACCP / SCCM Consensus Conference Committee of 1992 those for diagnosis "SIRS” required symptoms for diagnosis and measurement parameters described (including changes in body temperature, increased heart rate, difficulty breathing and altered blood count).
  • DIC and SIRS can occur as a result of sepsis, but also as a result of operations, tumors, burns or other injuries.
  • DIC causes massive activation of the coagulation system on the surface of damaged endothelial cells, foreign body surfaces or injured extravascular tissue.
  • coagulation occurs in small vessels of various organs with hypoxia and subsequent organ dysfunction.
  • coagulation factors e.g., Factor X, prothrombin, fibrinogen
  • platelets are consumed, which lowers the blood's ability to coagulate and cause severe bleeding.
  • the compounds according to the invention can also be used for the prevention of coagulation ex vivo, e.g. for the preservation of blood and plasma products, for the cleaning / pretreatment of catheters and other medical aids and devices, including extracorporeal circuits, for coating artificial surfaces of in vivo or ex vivo applied medical devices and devices or on biological samples containing platelets.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds according to the invention for coating medical instruments and implants, e.g. Catheters, prostheses, stents or artificial heart valves.
  • the compounds according to the invention can be firmly bound to the surface or released over a certain period of time from a carrier coating into the immediate environment for local action.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • compositions containing a erf ⁇ ndungs- proper compound and one or more other active ingredients are pharmaceutical compositions containing a erf ⁇ ndungs- proper compound and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • Calcium channel blockers such as amlodipine besilate (such as Norvasc ®), felodipine, diltiazem, verapamil, nifedipine, nicardipine, nisoldipine, and bepridil;
  • Statins e.g. Atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pitavastatin, pravastatin, rosuvastatin, and simvastatin;
  • Cholesterol absorption inhibitors e.g. Ezetimibe and AZD4121;
  • CETP Cholesteryl Ester Transfer Protein
  • Low molecular weight heparins e.g. Dalteparin Sodium, Ardeparin, Certoparin, Enoxaparin, Parnaparin, Tinzaparin, Reviparin and Nadroparin;
  • Antiarrhythmics e.g. Dofetilide, Ibutilide, Metoprolol, Metoprolol tartrate, Propranolol, Atenolol, Ajmaline, Disopyramide, Prajmaline, Procainamide, Quinidine, Sparteine, Aprindine, Lidocaine, Mexiletine, Tocamide, Encamid, Flecamide, Lorcamide, Moricin, Propafenone, Acebutolol, Pindolol, Amiodarone, Bretylium Tosylate, bunaftin, sotalol, adenosine, atropine and digoxin;
  • Alpha-adrenergic agonists e.g. Doxazosin mesylate, terazosone and prazosin;
  • Beta-adrenergic blockers e.g. Carvedilol, propranolol, timolol, nadolol, atenolol, metoprolol, bisoprolol, nebivolol, betaxolol, acebutolol and bisoprolol;
  • Aldosterone antagonists e.g. Eplerenone and spironolactone
  • Angiotensin-converting enzyme inhibitors eg moexipril, quinapril hydrochloride, ramipril, lisinopril, benazepril hydrochloride, enalapril, captopril, spirapril, perindopril, fosinopril and trandolapril;
  • Angiotensin II receptor blockers eg olmesartan-medoxomil, candesartan, valsartan, telmisartan, irbesartan, losartan and eprosartan;
  • Endothelin antagonists e.g. Tezosentan, bosentan and sitaxsentan sodium;
  • Neutral endopeptidase inhibitors e.g. Candoxatril and ecadotril;
  • Phosphodiesterase inhibitors e.g. Milrinoone, theophylline, vinpocetine, EHNA (erythro-9- (2-hydroxy-3-nonyl) adenine), sildenafil, vardenafil and tadalafil;
  • Fibrinolytics e.g. Reteplase, alteplase and tenecteplase;
  • GP antililar antagonists e.g. Integrillin, abciximab and tirofiban;
  • Direct thrombin inhibitors e.g. AZD0837, argatroban, bivalirudin and dabigatran;
  • Indirect thrombin inhibitors e.g. Odiparcil
  • Direct and indirect factor Xa inhibitors e.g. Fondaparinux sodium, apixaban, razaxaban, rivaroxaban (BAY 59-7939), KFA-1982, DX-9065a, AVE3247, otamixaban (XRP0673), AVE6324, SAR377142, Idraparinux, SSR126517, DB-772d, DT-831J, YM-150 , 813893, LY517717 and DU-1766 .;
  • Direct and indirect factor Xa / IIa inhibitors e.g. Enoxaparin sodium, AVE5026, SSR128428, SSRI 28429 and BIBT-986 (Tanogitran);
  • Lipoprotein-associated phospholipase A2 (“LpPLA2”) modulators
  • Diuretics e.g. Chlorthalidone, ethacrynic acid, furosemide, amiloride, chlorothiazide, hydrochlorothiazide, methylchtothiazide and benzothiazide;
  • Nitrates e.g. Isosorbide-5-mononitrate
  • Thromboxane antagonists e.g. Seratrodast, picotamide and ramatroban;
  • Platelet aggregation inhibitors e.g. Clopidogrel, tiklopidine, cilostazol, aspirin, abciximab, limaprost, eptifibatide and CT-50547;
  • Cyclooxygenase inhibitors e.g. Meloxicam, rofecoxib and celecoxib;
  • B-type Natriuretic Peptides e.g. Nesiritide and Ularitide;
  • NVIFGF modulators eg XRP0038; HTIB / 5-HT2A antagonists, eg SL65.0472;
  • Guanylate cyclase activators e.g. Ataciguat (HMR1766), HMR1069, riociguat and cinaciguat;
  • e-NOS transcriptional enhancers e.g. AVE9488 and AVE3085;
  • Anti-atherogenic substances e.g. AGI-1067:
  • CPU inhibitors e.g. AZD9684;
  • Renin inhibitors e.g. Aliskirin and VNP489;
  • Inhibitors of adenosine diphosphate-induced platelet aggregation e.g. Clopidogrel, tiklopidine, prasugrel, AZD6140, ticagrelor and elinogrel;
  • NHE-I inhibitors e.g. AVE4454 and AVE4890.
  • Antibiotic Therapy Various antibiotics or antifungal drug combinations may be considered, either as a calculated therapy (prior to the presence of the microbial condition) or as a specific therapy; Fluid therapy, e.g. Crystalloids or colloidal liquids; Vasopressors, e.g. Norepinephrine, dopamine or vasopressin; Inotropic therapy, e.g. dobutamine; Corticosteroids, e.g. Hydrocortisone, or fludrocortisone; recombinant human activated protein C, Xigris; Blood products, e.g.
  • Opioids e.g. Fentanyl, hydromorphone, morphine, meperidine or remifentanil.
  • NSAIDs e.g. Ketorolac, ibuprofen or acetaminophen.
  • Neuromuscular blockade e.g.
  • pancuronium pancuronium; Glucose control, e.g. Insulin, glucose; Renal replacement procedure, e.g. continuous veno-venous hemofiltration or intermittent hemodialysis. Dopamine low-dose for renal protection; Anticoagulants, e.g. for thrombosis prophylaxis or in renal replacement procedures, e.g. unfractionated heparins, low molecular weight heparins, heparinoids, hirudin, bivalirudin or argatroban; Bicarbonate treatment; Stress ulcer prophylaxis, e.g. H2 receptor inhibitors, antacids
  • Drugs in proliferative disorders uracil, chlormethine, cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan, chlorambucil, pipobroman, triethylenemelamine, triethylenethiophosphoramine, busulfan, carmustine, lomustine, streptozocin, dacarbazine, methotrexate, 5-fluorouracil, floxuridine, cytarabine, 6-mercaptopurine, 6-thioguanine , Fludarabine phosphate, pentostatines, vinblastine, vincristine, vindesine, bleomycin, dactinomycin, daunorubicin, doxorubicin, Epirubicin, idarubicin, paclitaxel, mithramycin, deoxycoformycin, mitomycin C, L-asparaginase, interferons, etoposide, teniposide 17.alpha.- ethinyl estradi
  • Another object of the present invention is a method for preventing blood coagulation in vitro, especially in blood or biological samples containing platelets, which is characterized in that an anticoagulatory effective amount of the compound of the invention is added.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally.
  • they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • the parenteral administration can be done bypassing a resorption step (eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar) or with involvement of resorption (eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal).
  • a resorption step eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar
  • involvement of resorption eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal.
  • parenteral administration are suitable as application forms, inter alia, injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • the oral application is preferred.
  • Inhalation medicines including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops solutions, sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets films / wafers or capsules
  • suppositories ear or ophthalmic preparations
  • vaginal capsules aqueous suspensions (lotions, shake mixtures)
  • lipophilic suspensions ointments
  • creams transdermal therapeutic systems (such as patches)
  • milk Pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecylsulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • Stabilizers eg, antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes eg, inorganic pigments such as iron oxides
  • flavor and / or odoriferous include, among others.
  • Excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecyl
  • compositions containing at least one compound of the invention preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, as well as their use for the purposes mentioned above.
  • HATU 0 (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, NN ', N'-tetramethyluronium
  • Method IA Phase: Sunfire C18OBD, 5 ⁇ m 150 mm x 19 mm, eluent: water / acetonitrile 40:60; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 ran.
  • Method 2A Phase: Sunfire C18OBD, 5 ⁇ m 150 mm x 19 mm, eluent: water / acetonitrile 45:55; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 3A Phase: Sunfire C18OBD, 5 ⁇ m 150 mm x 19 mm, eluent: water / acetonitrile 47:53; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 4A Phase: Sunfire C18OBD, 5 ⁇ m 150 mm x 19 mm, eluent: water / 0.1% trifluoroacetic acid / acetonitrile 56: 14:30; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method IB Instrument: Micromass Quattro Premier with Waters UPLC Acquity; Column: Thermo Hypersil GOLD 1.9 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 0.1 min 90% A ⁇ 1.5 min 10% A ⁇ 2.2 min 10% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.33 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 2B Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Gemini 3 ⁇ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 2.5 min 30% A ⁇ 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min. 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method 3B Device Type MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Device type HPLC: Agilent 1100 series; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A ⁇ 4.01 min 100% A (flow 2.5 ml) ⁇ 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 4B Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 1.2 min 5% A ⁇ 2.0 min 5% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 210 - 400 nm.
  • Method 5B Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 1.2 min 5% A ⁇ 2.0 min 5% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 210 - 400 nm.
  • Method 6B Device Type MS: Waters ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 2 min 65% A ⁇ 4.5 min 5% A ⁇ 6 min 5% A; Flow: 2 ml / min; Oven: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 7B Instrument: Micromass Quattro Micro MS with HPLC Agilent Series 1100; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A - »3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A ⁇ 4.01 min 100% A ⁇ 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 8B Instrument: Micromass Platform LCZ with HPLC Agilent Series 1100; Column: Thermo HyPURITY Aquastar 3 ⁇ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A -> 0.2 min 100% A ⁇ 2.9 min 30% A ⁇ 3.1 min 10% A ⁇ 5.5 min 10% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.8 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 9B Device Type MS: Waters ZQ; Device Type HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 ⁇ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 3.0 min 10% A ⁇ 4.0 min 10% A ⁇ 4.1 min 100% flow: 2.5 ml / min; Oven: 55 ° C; Flow 2 / ml; UV detection: 210 nm.
  • Method IQB Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Synergi 2.5 ⁇ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 0.1 min 90% A ⁇ 3.0 min 5% A ⁇ 4.0 min 5% A ⁇ 4.01 min 90% A; Flow: 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • the microwave reactor used was a single-mode Emrys Optimizer device
  • the identification of antagonists of the human Protease Activated Receptor 1 (PAR-I) as well as the quantification of the efficacy of the substances described herein is carried out using a recombinant cell line.
  • the cell is originally derived from a human embryonic kidney cell (HEK293, ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA).
  • the test cell line constitutively expresses a modified form of the calcium-sensitive photoprotein aequorin which, upon reconstitution with the co-factor coelenterazine, emits light upon increases in the free calcium concentration in the inner mitochondrial compartment (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T .; Nature 1992, 355, 325-327).
  • the cell stably expresses the endogenous human PAR-I receptor as well as the endogenous purinergic receptor P2Y2.
  • the resulting PAR-I test cell responds to stimulation of the endogenous PAR-I or P2Y2 receptor with intracellular release of calcium ions, which can be quantified by the resulting aequorin luminescence with a suitable luminometer (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 77, 235-237).
  • test sequence The cells are incubated for two days (48 hours) before the test in culture medium (DMEM F 12 supplemented with 10% FCS, 2 mM glutamine, 20 mM HEPES, 1.4 mM pyruvate, 0.1 mg / ml gentamycin, 0.15% sodium).
  • culture medium DMEM F 12 supplemented with 10% FCS, 2 mM glutamine, 20 mM HEPES, 1.4 mM pyruvate, 0.1 mg / ml gentamycin, 0.15% sodium.
  • test substances are pipetted onto the microtiter plate and 5 minutes after transfer of the test substances into the wells of the microtiter plate, the plate is transferred to the luminometer, a PAR-1 agonist concentration corresponding to EC 5O , and immediately the resulting light signal in the luminometer measured.
  • the endogenous purinergic receptor with agonist is activated immediately afterwards (ATP, 10 ⁇ M final concentration) and the resulting light signal is measured.
  • Platelet membranes are incubated with 12 nM [3H] haTRAP and test substance at various concentrations in a buffer (50 mM Tris pH 7.5, 10 mM magnesium chloride, 1 mM EGTA, 0.1% BSA) at room temperature for 80 min. Thereafter, the batch is transferred to a filter plate and washed twice with buffer. After adding scintillation fluid, the radioactivity on the filter is measured in a beta counter.
  • a buffer 50 mM Tris pH 7.5, 10 mM magnesium chloride, 1 mM EGTA, 0.1% BSA
  • thrombin receptor agonist thrombin receptor agonist
  • Concentration leading to maximum aggregation is determined individually for each donor, if appropriate.
  • the maximum increase in light transmission (amplitude of the aggregation curve in%) within 5 minutes after addition of the agonist in the presence and absence of test substance is determined and the inhibition calculated. From the inhibition curves the concentration is calculated, which inhibits the aggregation to 50%.
  • ACD buffer (44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride) is added and centrifuged at 1000 g for 10 minutes.
  • the platelet pellet is resuspended with wash buffer and centrifuged at 1000 g for 10 minutes.
  • the platelets are resuspended in incubation buffer and adjusted to 200,000 Z / ⁇ l.
  • Calcium chloride and magnesium chloride, final concentration per 2 mM (stock solution 2M, 1: 1000 dilution) are added before the start of the experiment.
  • Special feature with ADP-induced aggregation only calcium chloride is added.
  • the following agonists can be used: TRAP6 trifluoroacetate salt, collagen, human ⁇ -thrombin and U-46619. The concentration of the agonist is tested out to each donor.
  • Test Procedure 96-well microtiter plates are used. The test substance is diluted in DMSO and 2 ⁇ l per well. 178 ⁇ l of platelet suspension are added and preincubated for 10 minutes at room temperature. 20 ⁇ l agonist are added and the Measurement in Spectramax, OD 405 nm, started immediately. The kinetics are determined in 11 measurements of 1 minute each. The measurements are shaken for 55 seconds.
  • Preparation of fibrinogen-depleted plasma To obtain platelet-poor plasma, the citrated whole blood is centrifuged off at 140 g for 20 min. The platelet poor plasma is treated in the ratio 1:25 with reptilase (Roche Diagnostic, Germany) and carefully inverted. This is followed by 10 min incubation at 37 ° C in a water bath with direct subsequent incubation on ice for 10 min. The plasma reptilase mixture is centrifuged at 1300 g for 15 min and the supernatant (fibrinogen-depleted plasma) is recovered.
  • reptilase Roche Diagnostic, Germany
  • Thrombocyte Isolation To obtain platelet-rich plasma, citrate whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min. To the PRP is added one quarter volume of ACD buffer (44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride) and centrifuged for 10 minutes at 1300 g. The platelet pellet is resuspended with wash buffer and centrifuged at 1300 g for 10 minutes. The platelets are resuspended in incubation buffer and adjusted to 400,000 Z / ⁇ l and calcium chloride solution added to a final concentration of 5 mM (1/100 dilution).
  • ACD buffer 44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride
  • aliquots 98 ⁇ l fibrinogen-depleted plasma and 80 ⁇ l platelet suspension
  • the aggregation is then triggered by the addition of human alpha-thrombin in an aggregometer and by the turbidimetric Born method (Born, GVR, Cross MJ, The Aggregation of Blood Platelets, J. Physiol 1963, 168, 178-195) at 37 ° C determines.
  • the alpha thrombin concentration which just leads to maximum aggregation, is determined individually for each donor.
  • the increase in the maximum light transmission (amplitude of the aggregation curve in%) within 5 minutes after addition of the agonist in the presence and absence of test substance is determined and calculated the inhibition. From the inhibition curves the concentration is calculated, which inhibits the aggregation to 50%. lf) Stimulation of washed platelets and analysis in flow cytometry
  • washed platelets Human whole blood is collected by venipuncture from volunteer donors and transferred to monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing sodium citrate as anticoagulant (1 part sodium citrate 3.8% + 9 parts whole blood). The monovettes are centrifuged at 900 rpm and 4 ° C for a period of 20 minutes (Heraeus Instruments, Germany, Megafuge 1.0RS). The platelet rich plasma is gently removed and transferred to a 50 ml Falcon tube. The plasma is then mixed with ACD buffer (44 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose). The volume of the ACD buffer is one fourth of the plasma volume.
  • ACD buffer 44 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose
  • washing buffer 113 mM sodium chloride, 4 mM disodium hydrogen phosphate, 24 mM sodium dihydrogen phosphate, 4 mM potassium chloride, 0.2 mM ethylene glycol bis (2-aminoethyl) -NNN'N'-tetraacetic acid, 0.1% glucose. resuspended and then filled with wash buffer to a volume that corresponds to the amount of plasma. The washing process is carried out a second time.
  • incubation buffer 134 mM sodium chloride, 12 mM sodium bicarbonate, 2.9 mM potassium chloride, 0.34 mM sodium dihydrogencarbonate, 5 mM HEPES, 5 mM glucose , 2 mM calcium chloride and 2 mM magnesium chloride
  • 1 ⁇ l of the platelet-identifying antibody and 1 ⁇ l of the activation-state detecting antibody are made up to a volume of 100 ⁇ l with CellWash TM. This antibody solution is then added to the platelet suspension and incubated for 20 minutes at 4 ° C in the dark. Following staining, the batch volume is increased by adding an additional 400 ⁇ l of CellWash TM.
  • a fluorescein-isothiocyanate-conjugated antibody directed against the human glycoprotein (CD41) is used (Immunotech Coulter, France, Cat. No. 0649).
  • Phycoerythrin-conjugated antibody directed against the human glycoprotein P-selectin (Immunotech Coulter, France, Cat No. 1759) can be used to determine the activation state of the platelets.
  • P-selectin (CD62P) is localized in the ⁇ -granules of resting platelets. However, it is translocated to the outer plasma membrane after in vitro or in vivo stimulation.
  • the inhibitory effect of the substances to be tested is calculated on the basis of the reduction of platelet activation, which relates to activation by the agonist.
  • ACD buffer (44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride) is added and centrifuged at 1000 g for 10 minutes.
  • the platelet pellet is resuspended with wash buffer and centrifuged at 1000 g for 10 minutes.
  • a mixture of 40% erythrocytes and 60% washed platelets (200,000 / ⁇ l) is prepared and suspended in HEPES-Tyrode buffer.
  • the measurement of platelet aggregation under flow conditions is carried out by means of the parallel plate flow chamber (B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vase. Biol. 2006, 26, 670-675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46).
  • Reconstituted butoxide is passed over the thrombin-wetted glass slides for 5 minutes at a constant flow rate (e.g., shear rate 300 / second) and observed and recorded by microscope video system.
  • the inhibitory effect of the substances to be tested is determined morphometrically on the basis of the reduction of platelet aggregation.
  • inhibition of platelet activation by flow cytometry e.g. be determined via p-selectin expression (CD62p) (see Method 1.f).
  • Guinea pigs or primates are treated in an active or anaesthetized state orally, intravenously or intraperitoneally with test substances in a suitable formulation.
  • test substances in a suitable formulation.
  • other guinea pigs or primates are treated identically with the appropriate vehicle.
  • blood is obtained from deep anesthetized animals by puncturing the heart or the aorta. The blood is taken up in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing 3.8% anticoagulant sodium citrate (1 part citrate solution + 9 parts blood). To obtain platelet-rich plasma, the citrated whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min.
  • the aggregation is triggered by addition of a thrombin receptor agonist (TRAP6, SFLLRN, 50 ⁇ g / ml, concentration determined in each experiment depending on the animal species) in an aggregometer and analyzed by Born's turbidimetric method (Born, GVR, Cross MJ, The aggregation of Blood platelets;. J. Physiol 1963, 168, 178-195) determined at 37 0 C.
  • a thrombin receptor agonist (TRAP6, SFLLRN, 50 ⁇ g / ml, concentration determined in each experiment depending on the animal species) in an aggregometer and analyzed by Born's turbidimetric method (Born, GVR, Cross MJ, The aggregation of Blood platelets;. J. Physiol 1963, 168, 178-195) determined at 37 0 C.
  • the maximum increase in light transmission (amplitude of the aggregation curve in%) is determined within 5 minutes after addition of the agonist.
  • the inhibitory effect of the administered test substances in the treated animals is calculated by reducing the aggregation, based on the mean of the control animals.
  • Primates are administered orally, intravenously or intraperitoneally in the awake or anesthetized state
  • Test substances in appropriate formulation treated.
  • other animals are treated identically with the appropriate vehicle.
  • blood is obtained from the animals by venipuncture.
  • the blood is used in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) as anticoagulant sodium citrate 3.8%
  • non-anticoagulated blood can be collected with neutral monovettes (Sarstedt). In both cases the blood is used to prevent fibrin clot formation with Pefabloc FG (Pentapharm,
  • Citrate whole blood is recalcified prior to measurement by adding CaCl 2 solution (final concentration Ca + * 5 mM).
  • Non-anticoagulated blood is introduced immediately into the parallel plate flow chamber for measurement.
  • the measurement of platelet activation is carried out in the collagen-coated parallel plate flow chamber morphometrically or by flow cytometry as described in Method 1.h).
  • the compounds according to the invention can be investigated in thrombosis models in suitable animal species in which thrombin-induced platelet aggregation is mediated via the PAR-I receptor.
  • suitable animal species in which thrombin-induced platelet aggregation is mediated via the PAR-I receptor.
  • guinea pigs and especially primates are suitable
  • guinea pigs can be used which are inhibitors of PAR-3 and / or
  • PAR-4 are pretreated (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), or transgenic PAR-3 and / or PAR-4 knockdown guinea pigs. 3.b) Coagulation Disorder and Organ Dysfunction in Disseminated Intravasal Coagulation (DIC)
  • the compounds according to the invention can be investigated in models for DIC and / or sepsis in suitable animal species.
  • Guinea pigs and in particular primates are suitable as animal species, and mice and rats are also suitable when investigating the endothelium-mediated effects (compare: Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. IV-280, Deriano CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang HC, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J.
  • guinea pigs pre-treated with inhibitors of PAR-3 and / or PAR-4 can be used (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), or transgenic PAR-3 and / or PAR-4 -Knockdown guinea pigs.
  • TAT Thrombin-antithrombin complexes
  • Conjugate solution (100 ⁇ l) is added and incubated for 15 min at room temperature, the samples are aspirated and the well washed 3 times with wash buffer (300 ⁇ l / well), then chromogenic susbtrate is added (100 ⁇ l / well) for 30 min incubated in the dark at room temperature, stop solution added (100 ⁇ l / well) and color formation measured at 492 nm (sapphire plate reader).
  • the magnitude of the endotoxin-mediated inflammatory response can be demonstrated by the increase in inflammatory mediators in plasma, e.g. Interleukins (1, 6, 8, and 10), tumor necrosis factor alpha, or monocyte chemoattractant protein-1.
  • IL-12 e.g. Interleukins (1, 6, 8, and 10
  • tumor necrosis factor alpha e.g. tumor necrosis factor alpha
  • monocyte chemoattractant protein-1 e.g. Interleukins (1, 6, 8, and 10
  • ELISAs or the Luminex system can be used for this purpose.
  • the compounds of the invention can be tested in models for cancer, e.g. in the human breast cancer model in immunodeficient mice (see: S. Even-Ram et al., Nature Medicine, 1988, 4, 909-914).
  • the compounds of this invention can be tested in in vitro and in vivo models of angiogenesis (see: Caunt et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2003, 10, 2097-2102, Haralabopoulos et al., Am J Physiol, 1997, C239-C245 Tsopanoglou et al., JBC, 1999, 274, 23969-23976; Zania et al., JPET, 2006, 318, 246-254).
  • the compounds of the invention can be tested in vivo models for their effect on arterial blood pressure and heart rate.
  • rats eg Wistar
  • an electronic data acquisition and storage system (Data Sciences, MN, USA) consisting of a chronically implantable transducer / transmitter unit in conjunction with a fluid-filled catheter , used.
  • the transmitter is implanted into the peritoneal cavity and the sensor catheter is positioned in the descending aorta.
  • the compounds according to the invention can be administered (for example orally or intravenously).
  • the mean arterial blood pressure and heart rate of the untreated and treated animals are measured and ensured to be in the range of approximately 131-142 mmHg and 279-321 beats / minute.
  • PAR-I activating peptide SFLLRN, eg doses between 0.1 and 5 mg / kg
  • Blood pressure and heart rate are measured at different time intervals and with and without PAR-1 activating peptide and with and without one of the compounds of the invention (compare: Cicala C et al., The FASEB Journal, 2001, 15, 1433-5; Stasch JP et al., British Journal of Pharmacology 2002, 135, 344-355).
  • At least 1.5 mg of the test substance are accurately weighed into a Wide Mouth 10 mm Screw V-Vial (Glastechnik Gräfenroda GmbH, Item No. 8004-WM-H / V 15 ⁇ ) with matching screw cap and septum, with DMSO to one Concentration of 50 mg / ml added and shaken for 30 minutes by means of a vortexer.
  • the necessary pipetting steps are carried out in a 1.2 ml 96 well deep well plate (DWP) by means of a liquid handling robot.
  • the solvent used is a mixture of acetonitrile / water 8: 2.
  • Calibration solution 5 (600 ng / ml): 30 ⁇ l of the stock solution are mixed with 270 ⁇ l of solvent mixture and homogenized.
  • Calibration solution 4 (60 ng / ml): Mix and homogenize 30 ⁇ l of the calibration solution 5 with 270 ⁇ l of solvent mixture.
  • Calibration solution 3 (12 ng / ml): 100 ⁇ l of the calibration solution 4 are mixed with 400 ⁇ l of solvent mixture and homogenized.
  • Calibration solution 2 (1.2 ng / ml): Mix and homogenize 30 ⁇ l of calibration solution 3 with 270 ⁇ l of solvent mixture.
  • Calibration solution 1 (0.6 ng / ml): 150 ⁇ l of the calibration solution 2 are mixed with 150 ⁇ l of solvent mixture and homogenized. Preparation of the sample solutions:
  • the necessary pipetting steps are carried out in 1.2 ml 96-well DWP by means of a liquid-handling robot.
  • 10.1 ⁇ l of the stock solution are mixed with 1000 ⁇ l of PBS buffer pH 6.5.
  • PBS buffer pH 6.5: 61.86 g of sodium chloride, 39.54 g of sodium dihydrogen phosphate and 83.35 g of 1 N sodium hydroxide solution are weighed into a 1 liter volumetric flask, made up with water and stirred for about 1 hour. 500 ml of this solution are poured into a 5 liter Place the volumetric flask and make up with water and adjust to pH 6.5 with 1 N sodium hydroxide solution.
  • the necessary pipetting steps are carried out in 1.2 ml 96-well DWP by means of a liquid-handling robot.
  • the sample solutions thus prepared are shaken for 24 hours at 1400 rpm by means of a temperature-controlled shaker at 20 0 C.
  • each 180 ul are removed and transferred to Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes. These solutions are centrifuged for 1 hour at about 223,000 xg. From each sample solution, 100 ⁇ l of the supernatant are removed and diluted 1:10 and 1: 1000 with PBS buffer 6.5.
  • the samples are analyzed by HPLC / MS-MS. Quantification is via a five-point calibration curve of the test compound. The solubility is expressed in mg / l. Analysis sequence: 1) Blank (solvent mixture); 2) Calibration solution 0.6 ng / ml; 3) Calibration solution 1.2 ng / ml; 4) Calibration solution 12 ng / ml; 5) Calibration solution 60 ng / ml; 6) Calibration solution 600 ng / ml; 7) Blank (solvent mixture); 8) Sample solution 1: 1000; 9) Sample solution 1:10.
  • HPLC Agilent 1100, quat. Pump (G1311A), autosampler CTC HTS PAL, degasser (G1322A) and column thermostat (GI 316A); Column: Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 ⁇ ; Temperature: 40 ° C .; Eluent A: water + 0.5 ml formic acid / l; Eluent B: acetonitrile + 0.5 ml formic acid / L; Flow rate: 2.5 ml / min; Stop time 1.5 min; Gradient: 0 min 95% A, 5% B; Ramp: 0-0.5 min 5% A, 95% B; 0.5-0.84 min 5% A, 95% B; Ramp: 0.84-0.85 min 95% A, 5% B; 0.85-1.5 min 95% A, 5% B.
  • MS / MS WATERS Quattro Micro Tandem MS / MS; Z-spray API interface; HPLC-MS input splitter 1:20; Measurement in ESI mode.
  • the substances according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • Example 1 100 mg of the compound of Example 1, 50 mg of lactose (monohydrate), 50 mg of corn starch, 10 mg of polyvinylpyrrolidone (PVP 25) (BASF, Germany) and 2 mg of magnesium stearate.
  • the mixture of the compound of Example 1, lactose and starch is granulated with a 5% solution (m / m) of the PVP in water.
  • This mixture is compressed with a conventional tablet press (for the tablet format see above).
  • a single dose of 100 mg of the compound of the invention corresponds to 10 ml of oral suspension.
  • Example 1 The compound of Example 1 is dissolved together with polyethylene glycol 400 in the water with stirring.
  • the solution is sterile-filtered (pore diameter 0.22 ⁇ m) and filled under aseptic conditions into heat-sterilized infusion bottles. These are closed with infusion stoppers and crimp caps.

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Abstract

The invention relates to novel substituted piperidines, to methods for the production thereof, to the use thereof for the treatment and/or prophylaxis of diseases and to the use thereof for producing medicaments for the treatment and/or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases and tumor diseases.

Description

Substituierte Piperidine Substituted piperidines
Die Erfindung betrifft neue substituierte Piperidine, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen und von Tumorerkrankungen.The invention relates to novel substituted piperidines, processes for their preparation, their use for the treatment and / or prophylaxis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases and tumor diseases.
Thrombozyten (Blutplättchen) sind ein wesentlicher Faktor sowohl in der physiologischen Blutstillung (Hämostase) als auch bei thromboembolischen Erkrankungen. Insbesondere im arteriellen System kommt Thrombozyten eine zentrale Bedeutung in der komplexen Interaktion zwischen Blutkomponenten und Gefäßwand zu. Unerwünschte Thrombozytenaktivierung kann durch Bildung plättchenreicher Thromben zu thromboembolischen Erkrankungen und thrombotischen Komplikationen mit lebensbedrohlichen Zuständen führen.Platelets are a major factor in both hemostasis and thromboembolic disorders. Particularly in the arterial system, platelets are of central importance in the complex interaction between blood components and the vessel wall. Undesirable platelet activation can lead to thromboembolic diseases and thrombotic complications with life-threatening conditions by the formation of platelet-rich thrombi.
Einer der potentesten Plättchenaktivatoren ist die Blutgerinnungsprotease Thrombin, die an verletzten Blutgefäßwänden gebildet wird und neben der Fibrinbildung zur Aktivierung von Thrombozyten, Endothelzellen und mesenchymalen Zellen führt (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068). An Thrombozyten in vitro und in Tiermodellen hemmen Thrombin-Inhibitoren die Plättchenaggregation bzw. die Bildung plättchenreicher Thromben. Beim Menschen können arterielle Thrombosen erfolgreich mit Inhibitoren der Thrombozytenfunktion sowie Thrombin-Inhibitoren verhindert oder behandelt werden (Bhatt DL, Topol EJ, Nat. Rev. Drug Discov. 2003, 2, 15-28). Deshalb besteht eine hohe Wahrscheinlichkeit, dass Antagonisten der Thrombinwirkung auf Blutplättchen die Bildung von Thromben und das Auftreten von klinischen Folgen wie Herzinfarkt und Schlaganfall vermindern. Weitere zelluläre Thrombinwirkungen, z.B. auf Gefäßendothel- und -glattmuskelzellen, Leukozyten und Fibroblasten, sind möglicherweise für entzündliche und proliferative Erkrankungen verantwortlich.One of the most potent platelet activators is the blood coagulation protease thrombin, which is formed on injured blood vessel walls and, in addition to fibrin formation, activates platelets, endothelial cells and mesenchymal cells (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068 ). In platelets in vitro and in animal models thrombin inhibitors inhibit platelet aggregation or the formation of platelet-rich thrombi. In humans, arterial thrombosis can be successfully prevented or treated with inhibitors of platelet function as well as thrombin inhibitors (Bhatt DL, Topol EJ, Nat., Rev. Drug Discov., 2003, 2, 15-28). Therefore, platelet thrombin antagonists are highly likely to reduce the formation of thrombi and the onset of clinical consequences such as myocardial infarction and stroke. Further cellular thrombin effects, e.g. vascular endothelial and smooth muscle cells, leukocytes and fibroblasts may be responsible for inflammatory and proliferative disorders.
Die zellulären Effekte von Thrombin werden zumindest teilweise über eine Familie G-Protein- gekoppelter Rezeptoren (Protease Activated Receptors, PARs) vermittelt, deren Prototyp der PAR- 1 -Rezeptor darstellt. PAR-I wird durch Bindung von Thrombin und proteolytische Spaltung seines extrazellulär liegenden N-Terminus aktiviert. Durch die Proteolyse wird ein neuer N-Terminus mit der Aminosäurensequenz SFLLRN... freigelegt, der als Agonist („Tethered Ligand") zur intramolekularen Rezeptoraktivierung und Übertragung intrazellulärer Signale führt. Von der Tethered- Ligand Sequenz abgeleitete Peptide können als Agonisten des Rezeptors eingesetzt werden und führen auf Thrombozyten zur Aktivierung und Aggregation. Andere Proteasen sind ebenfalls in der Lage, PAR-I zu aktivieren, hierunter z.B. Plasmin, Faktor VIIa, Faktor Xa, Trypsin, aktiviertes Protein C (aPC), Tryptase, Cathepsin G, Proteinase 3, Granzyme A, Elastase und Matrixmetalloprotease 1 (MMP-I). Im Gegensatz zur Inhibition der Proteaseaktivität von Thrombin mit direkten Thrombin-Inhibitoren sollte eine Blockade des PAR-I zur Hemmung der Thrombozytenaktivierung ohne Verminderung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes (Antikoagulation) fuhren.The cellular effects of thrombin are mediated, at least in part, via a family of G protein-coupled receptors (PARs) whose prototype is the PAR-1 receptor. PAR-I is activated by binding of thrombin and proteolytic cleavage of its extracellular N-terminus. Proteolysis reveals a new N-terminus with the amino acid sequence SFLLRN ..., which acts as an agonist ("tethered ligand") for intramolecular receptor activation and transmission of intracellular signals. Peptides derived from the tethered ligand sequence can be used as agonists of the receptor Other proteases are also capable of activating PAR-I, including, for example, plasmin, factor VIIa, factor Xa, trypsin, activated protein C (aPC), tryptase, cathepsin G, proteinase 3 , Granzyme A, elastase and matrix metalloprotease 1 (MMP-I). In contrast to the inhibition of protease activity of thrombin with direct thrombin inhibitors, blockade of PAR-I should inhibit platelet activation without reducing the coagulation capacity of the blood (anticoagulation).
Antikörper und andere selektive PAR-I -Antagonisten hemmen die Thrombin- induzierte Aggregation von Thrombozyten in vitro bei niedrigen bis mittleren ThrombinkonzentrationenAntibodies and other selective PAR-1 antagonists inhibit thrombin-induced aggregation of platelets in vitro at low to medium thrombin concentrations
(Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H, Coughlin SR, J. Clin. Invest. 1999, 103,(Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H, Coughlin SR, J. Clin Invest 1999, 103, 103;
879-887). Ein weiterer Thrombinrezeptor mit möglicher Bedeutung für die Pathophysiologie thrombotischer Prozesse, PAR-4, wurde auf humanen und tierischen Thrombozyten identifiziert. In experimentellen Thrombosen an Tieren mit einem dem Menschen vergleichbaren PAR- Expressionsmuster reduzieren PAR-I -Antagonisten die Bildung plättchenreicher Thromben879-887). Another thrombin receptor of potential importance for the pathophysiology of thrombotic processes, PAR-4, has been identified on human and animal platelets. In experimental thromboses on animals with a human-like PAR expression pattern, PAR-1 antagonists reduce the formation of platelet-rich thrombi
(Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C,(Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C,
Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).
In den letzten Jahren wurde eine Vielzahl von Substanzen auf ihre plättchenfunktionshemmende Wirkung geprüft, in der Praxis haben sich aber nur wenige Plättchenfunktionshemmer bewährt. Es besteht daher ein Bedarf an Pharmazeutika, die spezifisch eine gesteigerte Plättchenreaktion hemmen ohne das Blutungsrisiko erheblich zu erhöhen und damit das Risiko von thrombo- embolischen Komplikationen vermindern.In recent years, a variety of substances have been tested for their platelet function inhibiting effect, but in practice, only a few platelet function inhibitors have been proven. There is therefore a need for pharmaceuticals that specifically inhibit an increased platelet response without significantly increasing the risk of bleeding and thereby reducing the risk of thromboembolic complications.
Effekte von Thrombin, die über den Rezeptor PAR-I vermittelt werden, haben Auswirkungen auf den Krankheitsverlauf während und nach operativer koronarer Bypassanlage (CABG) sowie anderer Operationen und insbesondere Operationen mit extrakorporalem Kreislauf (z. B. Herz- Lungenmaschine). Im Verlauf der Operation kann es aufgrund der prä- oder intraoperativen Medikation mit gerinnungshemmenden und/oder plättchenhemmenden Substanzen zu Blutungskomplikationen kommen. Aus diesem Grunde muss beispielsweise eine Medikation mit Clopidogrel mehrere Tage vor einer CABG pausiert werden. Außerdem kann es wie erwähnt (z.B. aufgrund des ausgedehnten Kontaktes zwischen Blut und künstlichen Oberflächen bei Einsatz einer extrakorporalen Zirkulation oder bei Bluttransfusionen) zur Ausbildung einer disseminierten intravaskulären Gerinnung oder Verbrauchskoagulopathie (DIC) kommen, die sekundär zu Blutungskomplikationen führen kann. Im weiteren Verlauf kommt es häufig zur Restenose der angelegten venösen oder arteriellen Bypässe (bis hin zum Verschluß) aufgrund von Thrombose, Intimafibrose, Arteriosklerose, Angina pectoris, Myokardinfarkt, Herzinsuffizienz, Arrhythmien, transitorische ischämische Attacke (TIA) und/oder Schlaganfall.Effects of thrombin mediated by the receptor PAR-I have implications for disease progression during and after coronary artery bypass grafting (CABG) as well as other operations, and in particular extracorporeal circulation (eg, heart-lung machine) operations. In the course of the operation, bleeding complications may occur due to pre- or intraoperative medication with anticoagulant and / or platelet-inhibiting substances. For this reason, for example, a medication with clopidogrel must be paused several days before a CABG. In addition, as mentioned (e.g., due to extensive contact between blood and artificial surfaces when using extracorporeal circulation or in blood transfusions), disseminated intravascular coagulation or consumption coagulopathy (DIC) may develop, which may secondary to bleeding complications. Subsequently, restenosis of the applied venous or arterial bypasses (including occlusion) often occurs due to thrombosis, intimal fibrosis, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction, heart failure, arrhythmias, transient ischemic attack (TIA) and / or stroke.
Der Rezeptor PAR-I wird im Menschen auch auf anderen Zellen exprimiert, hierunter z.B. Endothelzellen, glatte Gefaßmuskelzellen und Tumorzellen. Bösartige Tumorerkrankungen (Krebs) haben eine hohe Inzidenz und sind im Allgemeinen mit einer hohen Sterblichkeit verbunden. Gegenwärtige Therapien erreichen nur in einem Bruchteil der Patienten eine Vollremission und sind typischerweise mit schweren Nebenwirkungen verbunden. Daher besteht ein hoher Bedarf an effektiveren und sichereren Therapien. Der PAR-I -Rezeptor trägt zur Entstehung, dem Wachstum, der Invasivität und der Metastasierung von Krebs bei. Außerdem vermittelt auf Endothelzellen exprimiertes PAR-I Signale, die in Gefäßwachstum münden („Angiogenese"), ein Vorgang, der zur Ermöglichung von Tumorwachstum über ca. 1 mm3 hinaus unerläßlich ist. Angiogenese trägt auch zur Enstehung oder Verschlimmerung anderer Erkrankungen bei, hierunter z.B. hämatopoetische Krebserkrankungen, die zur Erblindung führende Makuladegeneration und diabetische Retinopathie, entzündliche Erkrankungen wie rheumatoide Arthritis und Colitis.The receptor PAR-I is also expressed on other cells in humans, including, for example, endothelial cells, vascular smooth muscle cells and tumor cells. Malignant tumors (cancer) have a high incidence and are generally associated with high mortality rates connected. Current therapies achieve full remission in only a fraction of patients and are typically associated with severe side effects. Therefore, there is a high demand for more effective and safer therapies. The PAR-I receptor contributes to the development, growth, invasiveness and metastasis of cancer. In addition, PAR-1 expressed on endothelial cells mediates signals that result in vascular growth ("angiogenesis"), a process that is essential for facilitating tumor growth beyond about 1 mm 3. Angiogenesis also contributes to the onset or exacerbation of other diseases, among them for example hematopoietic cancers, the blindness leading to macular degeneration and diabetic retinopathy, inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and colitis.
Sepsis (oder Septikämie) ist eine häufige Erkrankung mit hoher Letalität. Anfängliche Symptome der Sepsis sind typischerweise unspezifisch (z.B. Fieber, reduziertes Allgemeinbefinden), im weiteren Verlauf kann es jedoch zur generalisierten Aktivierung des Gerinnungssystems kommen ("Disseminated Intravascular coagulation" oder "Verbrauchskoagulopathie" (DIC)) mit Mikrothrombosierung in verschiedenen Organen und sekundärer Blutungskomplikationen. DIC kann auch unabhängig von einer Sepsis auftreten, z.B. im Rahmen von Operationen oder bei Tumorerkrankungen.Sepsis (or septicemia) is a common high mortality disease. Initial symptoms of sepsis are typically nonspecific (e.g., fever, reduced general condition), but in the further course, generalized activation of the coagulation system ("disseminated intravascular coagulation" or "consumption coagulopathy" (DIC)) may occur with microthrombosis in various organs and secondary bleeding complications. DIC may also occur independently of sepsis, e.g. in the context of operations or tumors.
Die Therapie der Sepsis besteht einerseits in der konsequenten Beseitigung der infektiösen Ursache, z.B. durch operative Herdsanierung und Antibiose. Andererseits besteht sie in der temporären intensivmedizinischen Unterstützung der beeinträchtigten Organsysteme.' Therapien der verschiedenen Stadien dieser Erkrankung sind z.B. in folgender Publikation beschrieben (Dellinger et al., Crit. Care Med. 2004, 32, 858-873). Für die DIC existieren keine erwiesenermaßen effektive Therapien.The therapy of sepsis consists on the one hand in the consequent elimination of the infectious cause, e.g. by operative herdsanierung and antibiosis. On the other hand, it consists in the temporary intensive medical support of the impaired organ systems. ' Therapies of the various stages of this disease are e.g. in the following publication (Dellinger et al., Crit. Care Med. 2004, 32, 858-873). There are no proven effective therapies for DICs.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue PAR-I -Antagonisten zur Behandlung von Erkrankungen, wie z. B. Herz-Kreislauf-Erkrankungen und thromboembolischen Erkrankungen, sowie Tumorerkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen.An object of the present invention is therefore to provide novel PAR-I antagonists for the treatment of diseases such. As cardiovascular diseases and thromboembolic diseases, as well as tumor diseases in humans and animals to provide.
WO 2006/012226, WO 2007/130898 und WO 2007/101270 beschreiben strukturell ähnliche Piperidine als 11-ß HSDl Inhibitoren zur Behandlung von unter anderem Diabetes, thromboembolischen Erkrankungen und Schlaganfall.WO 2006/012226, WO 2007/130898 and WO 2007/101270 describe structurally similar piperidines as 11-β-HSD1 inhibitors for the treatment of, inter alia, diabetes, thromboembolic disorders and stroke.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel The invention relates to compounds of the formula
in welcherin which
R1 fiir Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Monofluormethyl, Difluormethyl,where phenyl may be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of monofluoromethyl, difluoromethyl,
Trifluormethyl, Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy,Trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy,
Monofluormethylsulfanyl, Difluormethylsulfanyl, Trifluormethylsulfanyl, Methylsulfonyl, Ci-C4-Alkyl, Ci-C4-Alkoxy und Ci-C4-Alkoxycarbonyl,Monofluoromethylsulfanyl, difluoromethylsulfanyl, trifluoromethylsulfanyl, methylsulfonyl, C 1 -C 4 -alkyl, C 1 -C 4 -alkoxy and C 1 -C 4 -alkoxycarbonyl,
R2 für Phenyl, Naphtyl oder 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl steht,R 2 is phenyl, naphthyl or 5- to 10-membered heteroaryl,
wobei Phenyl, Naphtyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Ci-C4-Alkyl, CrC4-Alkoxy, Ci-C6-Alkylamino, Phenyl und 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl,where phenyl, naphthyl and heteroaryl may be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of halogen, cyano, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl, C r C 4 alkoxy, Ci-C6 alkylamino, phenyl and 5- or 6-membered heteroaryl,
worin Phenyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Ci-C4-Alkyl, Ci-C4-Alkoxy und Ci-Cβ-Alkylamino,in which phenyl and heteroaryl may be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of halogen, cyano, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl, ci C 4 alkoxy and C 1 -C 6 -alkylamino,
R3 für CpCβ-Alkyl, CrC6-Alkoxy, Ci-Q-Alkylamino, C3-C7-Cycloalkyl, 4- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, C3-C7-Cycloalkyloxy, C3-C7- Cycloalkylamino, 4- bis 7-gliedriges Heterocyclylamino, Phenylamino oder 5- oder 6- gliedriges Heteroarylamino steht,R 3 CpCβ alkyl, C r C 6 alkoxy, Ci-Q-alkylamino, C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 7-membered heterocyclyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyloxy, C 3 -C 7 - cycloalkylamino, 4- to 7-membered heterocyclylamino, phenylamino or 5- or 6-membered heteroarylamino,
wobei Alkyl, C2-C6-Alkoxy und Alkylamino substituiert sein können mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino,where alkyl, C 2 -C 6 -alkoxy and alkylamino may be substituted by a substituent selected from the group consisting of halogen, hydroxy, amino,
Cyano, Ci-C4-Alkoxy, Ci-C4-Alkoxycarbonyl, C3-C7-Cycloalkyl, 4- bis 6-gliedriges Heterocyclyl, Phenyl und 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, undCyano, Ci-C 4 alkoxy, Ci-C 4 alkoxycarbonyl, C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 6-membered heterocyclyl, phenyl and 5- or 6-membered heteroaryl, and
wobei Cycloalkyl, Heterocyclyl, Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyloxy, Cycloalkylamino, Heterocyclylamino, Phenylamino und Heteroarylamino substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Oxo, Hydroxy, Amino, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl,wherein cycloalkyl, heterocyclyl, phenyl, heteroaryl, cycloalkyloxy, cycloalkylamino, heterocyclylamino, phenylamino and heteroarylamino may be substituted by 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, oxo, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl .
Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Monofluormethylsulfanyl, Difluormethylsulfanyl, Trifluormethylsulfanyl, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Ci-C4- Alkyl, Ci-C4-Alkoxy, Ci-C6-Alkylamino, CrC4-Alkoxycarbonyl, Ci-C4- Alkylaminocarbonyl und Cyclopropyl,Monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, Monofluormethylsulfanyl, Difluormethylsulfanyl, trifluoromethylsulphanyl, hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, Ci-C 4 - alkyl, Ci-C 4 alkoxy, Ci-C 6 -alkylamino, C r C 4 alkoxycarbonyl, Ci-C 4 - alkylaminocarbonyl and cyclopropyl,
worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Hydroxy,wherein alkyl may be substituted with a hydroxy substituent,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.and their salts, their solvates, and the solvates of their salts.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze; die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausfuhrungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.Compounds of the invention are the compounds of formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts; the compounds of the formula (I) mentioned below of the formulas and their salts, solvates and solvates of the salts and the compounds of formula (I), hereinafter referred to as exemplary compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the of formula (I), compounds mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.Depending on their structure, the compounds of the invention may exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers). The invention therefore includes the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.If the compounds according to the invention can occur in tautomeric forms, the present invention encompasses all tautomeric forms.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säure- additionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, for example salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethane sulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, N-Methylpiperidin und Cholin.Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having 1 to 16 carbon atoms, such as, by way of example and by way of preference, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, N-methylpiperidine and choline.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" umfasst Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).In addition, the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention. The term "prodrugs" includes compounds which may themselves be biologically active or inactive, but which are converted during their residence time in the body into compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:Unless otherwise specified, in the context of the present invention, the substituents have the following meaning:
Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy. Alkylamino. Alkoxycarbonyl und Alkylaminocarbonyl stehen für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl.Alkyl per se and "alk" and "alkyl" in alkoxy. Alkylamino. Alkoxycarbonyl and alkylaminocarbonyl represent a linear or branched alkyl radical having 1 to 6 carbon atoms, by way of example and preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl and n-hexyl.
Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, iso-Propoxy, n-Butoxy, tert-Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy.Alkoxy is, by way of example and by way of preference, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tert-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n- Propylamino, iso-Propylamino, tert-Butylamino, NN-Dimethylamino, N,N-Diethylamino, N-Ethyl-N- methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-iso-Propyl-N-n-propylamino und N-tert-Butyl-N- methylamino. Ci-C4-Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 4 Koh- lenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.Alkylamino is an alkylamino radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and preferably methylamino, ethylamino, n-propylamino, isopropylamino, tert-butylamino, N, N-dimethylamino, N, N-diethylamino, N-ethyl N-methylamino, N-methyl-Nn-propylamino, N-iso-propyl-Nn-propylamino and N-tert-butyl-N-methylamino. C 1 -C 4 -alkylamino is, for example, a monoalkylamino radical having 1 to 4 carbon atoms. or for a dialkylamino radical each having 1 to 4 carbon atoms per alkyl substituent.
Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n- Propoxycarbonyl, iso-Propoxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl und tert-Butoxycarbonyl.Alkoxycarbonyl is exemplified and preferably methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, n-propoxycarbonyl, iso-propoxycarbonyl, n-butoxycarbonyl and tert-butoxycarbonyl.
Alkylaminocarbonyl steht für einen Alkylaminocarbonylrest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, tert-Butylaminocarbonyl, N,N-Dimethylaminocarbonyl, NN-Diethylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N- Methyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-iso-Propyl-N-n-propylaminocarbonyl und N-tert-Butyl-N- methylaminocarbonyl. Ci-C4-Alkylaminocarbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylamino- carbonylrest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.Alkylaminocarbonyl is an alkylaminocarbonyl radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and by way of preference for methylaminocarbonyl, ethylaminocarbonyl, n-propylaminocarbonyl, isopropylaminocarbonyl, tert-butylaminocarbonyl, N, N-dimethylaminocarbonyl, N, N-diethylaminocarbonyl, N-ethyl- N-methylaminocarbonyl, N-methyl-Nn-propylaminocarbonyl, N-isopropyl-Nn-propylaminocarbonyl and N-tert-butyl-N-methylaminocarbonyl. C 1 -C 4 -alkylaminocarbonyl is, for example, a monoalkylaminocarbonyl radical having 1 to 4 carbon atoms or a dialkylamino-carbonyl radical having in each case 1 to 4 carbon atoms per alkyl substituent.
Cycloalkyl steht für eine monocyclische Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 7, bevorzugt 5 oder 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkyl seien genannt Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl.Cycloalkyl represents a monocyclic cycloalkyl group having usually 3 to 7, preferably 5 or 6 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
Cycloalkyloxy steht für eine monocyclische Cycloalkyloxygruppe mit in der Regel 3 bis 7, bevorzugt 5 oder 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkyloxy seien genannt Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy, Cyclopentyloxy und Cyclohexyloxy.Cycloalkyloxy is a monocyclic cycloalkyloxy group having usually 3 to 7, preferably 5 or 6 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkyloxy may be mentioned cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy and cyclohexyloxy.
Cycloalkylamino steht für eine monocyclische Cycloalkylaminogruppe mit in der Regel 3 bis 7, bevorzugt 3 oder 4 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkylamino seien genannt Cyclopropylamino, Cyclobutylamino, Cyclopentylamino und Cyclohexylamino.Cycloalkylamino is a monocyclic cycloalkylamino group having usually 3 to 7, preferably 3 or 4 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkylamino may be mentioned cyclopropylamino, cyclobutylamino, cyclopentylamino and cyclohexylamino.
Heterocyclyl steht für einen monocyclischen oder bicyclischen, heterocyclischen Rest mit 4 bis 7 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe Ν, O, S, SO, SO2, wobei ein Stickstoffatom auch ein Ν-Oxid bilden kann. Die Heterocyclyl- Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- oder 6-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, Ν und S, beispielhaft und vorzugsweise für Oxetanyl, Azetidinyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothienyl, Pyranyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, l,2,5,6-Tetrahydropyridin-3-yl, l,2,5,6-Tetrahydropyridin-4-yl, Thiopyranyl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Piperazin-1-yl, Piperazin-2-yl, Thiomorpholin-2-yl, Thiomorpholin-3-yl, Thiomorpholin-4-yl, l-Oxidothiomorpholin-4-yl, 1,1- Dioxidothiomorpholin-4-yl. Heterocyclylamino steht für einen monocyclischen oder bicyclischen, heterocyclischen Heterocyclylamino-Rest mit 4 bis 7 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe N, O, S, SO, SO2, wobei ein Stickstoffatom auch ein N- Oxid bilden kann. Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- oder 6-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, beispielhaft und vorzugsweise für Oxetanylamino, Azetidinylamino, Pyrrolidin-2-yl-amino, Pyrrolidin-3-yl-amino, Tetrahydrofuranylamino, Tetrahydrothienylamino, Pyranylamino, Piperidin-2-yl-amino, Piperidin-3-yl-amino, Piperidin-4- yl-amino, 1 ,2,5,6-Tetrahydropyridin-3-yl-amino, 1 ,2,5,6-Tetrahydropyridin-4-yl-amino, Thiopyranylamino, Morpholin-2-yl-amino, Morpholin-3-yl-amino, Piperazin-2-yl-amino, Thiomoφholin-2-yl-amino, Thiomorpholin-3-yl-amino.Heterocyclyl is a monocyclic or bicyclic heterocyclic radical having 4 to 7 ring atoms and up to 3, preferably up to 2 heteroatoms and / or hetero groups from the series Ν, O, S, SO, SO 2 , where a nitrogen atom is also a Ν- Oxide can form. The heterocyclyl radicals may be saturated or partially unsaturated. Preference is given to 5- or 6-membered, monocyclic saturated heterocyclyl radicals having up to two heteroatoms from the series O, Ν and S, by way of example and preferably for oxetanyl, azetidinyl, pyrrolidin-2-yl, pyrrolidin-3-yl, pyrrolinyl, tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothienyl, pyranyl, piperidin-1-yl, piperidin-2-yl, piperidin-3-yl, piperidin-4-yl, l, 2,5,6-tetrahydropyridin-3-yl, l, 2,5,6- Tetrahydropyridin-4-yl, thiopyranyl, morpholin-1-yl, morpholin-2-yl, morpholin-3-yl, piperazin-1-yl, piperazin-2-yl, thiomorpholin-2-yl, thiomorpholin-3-yl, Thiomorpholin-4-yl, 1-oxidothiomorpholin-4-yl, 1,1-dioxothiomorpholin-4-yl. Heterocyclylamino is a monocyclic or bicyclic, heterocyclic Heterocyclylamino radical having 4 to 7 ring atoms and up to 3, preferably up to 2 heteroatoms and / or hetero groups from the series N, O, S, SO, SO 2 , wherein a nitrogen atom also Can form N- oxide. The heterocyclyl radicals may be saturated or partially unsaturated. Preference is given to 5- or 6-membered, monocyclic saturated heterocyclyl radicals having up to two heteroatoms from the series O, N and S, by way of example and preferably for oxetanylamino, azetidinylamino, pyrrolidin-2-yl-amino, pyrrolidin-3-yl-amino, Tetrahydrofuranylamino, tetrahydrothienylamino, pyranylamino, piperidin-2-yl-amino, piperidin-3-yl-amino, piperidin-4-yl-amino, 1, 2,5,6-tetrahydropyridin-3-yl-amino, 1, 2, 5,6-Tetrahydropyridin-4-yl-amino, thiopyranylamino, morpholin-2-yl-amino, morpholin-3-yl-amino, piperazin-2-yl-amino, thiomethyl-2-yl-amino, thiomorpholine-3 yl-amino.
Heteroaryl steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest mit 5 bis 10 Ringatomen und bis zu 5 Heteroatomen aus der Reihe S, O und N, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann. Bevorzugt sind Heteroaryle mit 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 4 Heteroatomen, beispielhaft und vorzugsweise seinen genannt Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Triazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl, Chinolinyl, Isochinolinyl.Heteroaryl is an aromatic, mono- or bicyclic radical having 5 to 10 ring atoms and up to 5 heteroatoms from the series S, O and N, wherein a nitrogen atom can also form an N-oxide. Preferred are heteroaryls having 5 or 6 ring atoms and up to 4 heteroatoms, by way of example and preferably its called thienyl, furyl, pyrrolyl, thiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, pyrazolyl, imidazolyl, triazolyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, pyrazinyl, indolyl, indazolyl , Benzofuranyl, benzothiophenyl, quinolinyl, isoquinolinyl.
Heteroarylamino steht für einen aromatischen, monocyclischen Heteroarylamino-Rest mit in der Regel 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O und N, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann, beispielhaft und vorzugsweise für Thienylamino, Furylamino, Pyrrolylamino, Thiazolylamino, Oxazolylamino, Isoxazolylamino, Oxadiazolylamino, Pyrazolylamino, Imidazolylamino, Pyridylamino, Pyrimidylamino, Pyridazinylamino, Pyrazinylamino.Heteroarylamino is an aromatic, monocyclic heteroarylamino radical having usually 5 or 6 ring atoms and up to 4 heteroatoms from the series S, O and N, where a nitrogen atom can also form an N-oxide, by way of example and preferably for thienylamino, furylamino , Pyrrolylamino, thiazolylamino, oxazolylamino, isoxazolylamino, oxadiazolylamino, pyrazolylamino, imidazolylamino, pyridylamino, pyrimidylamino, pyridazinylamino, pyrazinylamino.
Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod, vorzugsweise für Fluor und Chlor.Halogen is fluorine, chlorine, bromine and iodine, preferably fluorine and chlorine.
In den Verbindungen der Formel (I) bedeutet die geschlängelte Linie zu R2, dass R2 sowohl in eis- als auch in trans-Position zum Piperidinring an die Doppelbindung gebunden sein kann.In the compounds of formula (I), the meandering line to R 2 means that R 2 may be bonded to the double bond in both the cis and trans positions of the piperidine ring.
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcherPreference is given to compounds of the formula (I) in which
R1 für Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert ist mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Ci-C4-Alkyl,where phenyl is substituted by 1 to 3 substituents, independently of one another, selected from the group consisting of trifluoromethyl, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl,
Ci-C4-Alkoxy und Ci-C4-Alkoxycarbonyl, R2 für Phenyl, Pyridyl oder Chinolinyl steht,C 1 -C 4 -alkoxy and C 1 -C 4 -alkoxycarbonyl, R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl,
wobei Phenyl, Pyridyl und Chinolinyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, CrQ-Alkyl, CrC4-Alkoxy, Phenyl und Pyridyl,where phenyl, pyridyl and quinolinyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, CRQ alkyl, C r C 4 alkoxy, phenyl and pyridyl,
worin Phenyl und Pyridyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Ci-C4-Alkyl und CrC4-Alkoxy,wherein phenyl and pyridyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, Ci-C 4 alkyl and C r C 4 alkoxy,
R3 für C3-C7-Cycloalkyl, 4- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, C3-C7-Cycloalkyloxy, C3-C7-Cycloalkylamino, 4- bis 7-gliedriges Heterocyclylamino, Phenylamino oder 5- oder 6-gliedriges Heteroarylamino steht,R 3 is C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 7-membered heterocyclyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyloxy, C 3 -C 7 -cycloalkylamino, 4- to 7-membered Heterocyclylamino, phenylamino or 5- or 6-membered heteroarylamino,
wobei Cycloalkyl, Heterocyclyl, Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyloxy, Cycloalkylamino, Heterocyclylamino, Phenylamino und Heteroarylamino substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Oxo, Hydroxy, Amino, Trifluormethyl, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy,wherein cycloalkyl, heterocyclyl, phenyl, heteroaryl, cycloalkyloxy, cycloalkylamino, heterocyclylamino, phenylamino and heteroarylamino may be substituted by 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, oxo, hydroxy, amino, trifluoromethyl, difluoromethoxy, trifluoromethoxy , Hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy,
Dimethylamino, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Dimethylaminocarbonyl und Cyclopropyl,Dimethylamino, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, dimethylaminocarbonyl and cyclopropyl,
worin Methyl und Ethyl substituiert sein können mit einem Substituenten Hydroxy,wherein methyl and ethyl may be substituted with a hydroxy substituent,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.and their salts, their solvates, and the solvates of their salts.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcherPreference is also given to compounds of the formula (I) in which
R1 für Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert ist mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Methyl, Ethyl und Methoxy,wherein phenyl is substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl and methoxy,
R2 für Phenyl, Pyridyl oder Chinolinyl steht,R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl,
wobei Phenyl, Pyridyl und Chinolinyl substituiert sein können mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Phenyl und Pyridyl, worin Phenyl und Pyridyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Methyl, Ethyl, Methoxy und Ethoxy,where phenyl, pyridyl and quinolinyl can be substituted by a substituent selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, phenyl and pyridyl, wherein phenyl and pyridyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl, methoxy and ethoxy,
R3 für Morpholin-4-yl, l,l-Dioxidothiomorpholin-4-yl, 3-Hydroxyazetidiny-l-yl, 3- Hydroxypyrrolidin- 1 -yl, 4-Cyanopiperidin- 1 -yl oder 4-Hydroxypiperidin- 1 -yl steht,R 3 is morpholin-4-yl, 1,1-dioxothiomorpholin-4-yl, 3-hydroxyazetidinyl-1-yl, 3-hydroxypyrrolidin-1-yl, 4-cyanopiperidin-1-yl or 4-hydroxypiperidin-1-yl stands,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.and their salts, their solvates, and the solvates of their salts.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcherPreference is also given to compounds of the formula (I) in which
R1 für Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert ist mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl und Ethyl,wherein phenyl is substituted with a substituent selected from the group consisting of trifluoromethyl and ethyl,
R2 für Phenyl, Pyridyl oder Chinolinyl steht,R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl,
wobei Phenyl und Pyridyl substituiert sein können mit einem Substituenten Phenyl,where phenyl and pyridyl may be substituted by a substituent phenyl,
worin Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Trifluormethyl und Methoxy,wherein phenyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, trifluoromethyl and methoxy,
undand
wobei Chinolinyl substituiert ist mit einem Substituenten Methoxy,where quinolinyl is substituted by a methoxy substituent,
R3 für Morpholin-4-yl steht,R 3 is morpholin-4-yl,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.and their salts, their solvates, and the solvates of their salts.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher die Substituenten -R1 und -CH=CH-R2 in cis-Position zueinander stehen.Preference is also given to compounds of the formula (I) in which the substituents -R 1 and -CH =CH-R 2 are in the cis position relative to one another.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher das Kohlenstoffatom, an das R1 gebunden ist, eine S-Konfϊguration hat und das Kohlenstoffatom, an das -CH=CH-R2 gebunden ist, ebenfalls eine S-Konfiguration hat.Also preferred are compounds of formula (I) in which the carbon atom to which R 1 is attached has an S-configuration and the carbon atom to which -CH = CH-R 2 is attached also has an S-configuration.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher der Piperidinring und der Substituent -R2 an der Doppelbindung in trans-Position zueinander stehen. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Phenyl steht, wobei Phenyl substituiert ist mit einem Substituenten in para-Position zur Verknüpfungsstelle an den Piperidinring, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Trifluormethoxy und Ethyl.Preference is also given to compounds of the formula (I) in which the piperidine ring and the substituent -R 2 on the double bond are in the trans position relative to one another. Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 1 is phenyl, where phenyl is substituted by a substituent in the para position to the point of attachment to the piperidine ring, selected from the group consisting of trifluoromethyl, trifluoromethoxy and ethyl.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Phenyl steht, wobei Phenyl substituiert ist mit einem Substituenten in para-Position zur Verknüpfungsstelle an den Piperidinring, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl und Ethyl.Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 1 is phenyl, where phenyl is substituted by a substituent in the para position to the point of attachment to the piperidine ring, selected from the group consisting of trifluoromethyl and ethyl.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcherPreference is also given to compounds of the formula (I) in which
R2 für Phenyl, Pyridyl oder Chinolinyl steht,R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl,
wobei Phenyl und Pyridyl substituiert sein können mit einem Substituenten Phenyl,where phenyl and pyridyl may be substituted by a substituent phenyl,
worin Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Trifluormethyl und Methoxy,wherein phenyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, trifluoromethyl and methoxy,
undand
wobei Chinolinyl substituiert ist mit einem Substituenten Methoxy.wherein quinolinyl is substituted with a methoxy substituent.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R2 für 5-[3-(Trifluormethyl)- phenyl]pyridin-2-yl steht.Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 2 is 5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R3 für Morpholin-4-yl, 1,1- Dioxidothiomorpholin-4-yl, 3-Hydroxyazetidiny-l-yl, 3-Hydroxypyrrolidin-l-yl, 4- Cyanopiperidin- 1 -yl oder 4-Hydroxypiperidin- 1 -yl steht.Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 3 is morpholin-4-yl, 1,1-dioxothiomorpholin-4-yl, 3-hydroxyazetidinyl-1-yl, 3-hydroxypyrrolidin-1-yl, 4-cyanopiperidine - 1 -yl or 4-hydroxypiperidin-1-yl.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R3 für Morpholin-4-yl steht.Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 3 is morpholin-4-yl.
Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt.The residue definitions given in detail in the respective combinations or preferred combinations of residues are also replaced by residue definitions of other combinations, regardless of the particular combinations of the residues indicated.
Ganz besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche.Very particular preference is given to combinations of two or more of the abovementioned preferred ranges.
Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei Verbindungen der FormelThe invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I), or their salts, their solvates or the solvates of their salts, where compounds of the formula
in welcherin which
R1 und R3 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,R 1 and R 3 have the abovementioned meaning,
mit Verbindungen der Formelwith compounds of the formula
Y^R2 (IH),Y ^ R 2 (IH),
in welcherin which
R2 die oben angegebene Bedeutung aufweist, undR 2 has the meaning given above, and
Y für -P(=O)(OCH2CH3)2 oder -P+(Phenyl)3X" steht,Y is -P (= O) (OCH 2 CH 3 ) 2 or -P + (phenyl) 3 X " ,
wobeiin which
X für eine Halogenid, bevorzugt Bromid oder Chlorid, steht,X is a halide, preferably bromide or chloride,
umgesetzt werden.be implemented.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -1O0C bis 400C bei Normaldruck.The reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from -1O 0 C to 40 0 C at atmospheric pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethylether, Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2-Dimethoxyethan, bevorzugt ist Tetrahydrofuran.Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, preference being given to tetrahydrofuran.
Basen sind beispielsweise metallorganische Verbindungen wie n-Butyllithium, Phenyllithium, oder Natrium- oder Kaliummethanolat oder Kalium-tert.-butylat, bevorzugt ist n-Butyllithium oder Kalium-tert.-butylat.Bases are, for example, organometallic compounds such as n-butyllithium, phenyllithium, or sodium or potassium methoxide or potassium tert-butoxide, preferably n-butyllithium or potassium tert-butoxide.
Die Verbindungen der Formel (Hl) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der FormelThe compounds of formula (HI) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds. The compounds of the formula (II) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
in welcherin which
R1 und R3 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,R 1 and R 3 have the abovementioned meaning,
mit einem Oxidationsmittel umgesetzt werden.be reacted with an oxidizing agent.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -400C bis 400C bei Normaldruck.The reaction is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -40 0 C to 40 0 C at atmospheric pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, bevorzugt ist Methylenchlorid.Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane or 1, 2-dichloroethane, methylene chloride is preferred.
Oxidationsmittel sind beispielsweise Schwefeltrioxid-Pyridin-Komplex und DMSO, Oxalylchlorid und DMSO, Dess-Martin Periodinan, Tetrapropylammoniumperruthenat/N-Methylmoφholin N- Oxid und Molsieb, bevorzugt ist Schwefeltrioxid-Pyridin-Komplex und DMSO oder Dess-Martin Periodinan.Oxidizing agents are, for example, sulfur trioxide-pyridine complex and DMSO, oxalyl chloride and DMSO, Dess-Martin periodinane, tetrapropylammonium perruthenate / N-methylmorphine N-oxide and molecular sieve, preferred is sulfur trioxide-pyridine complex and DMSO or Dess-Martin periodinane.
Basen sind beispielsweise Triethylamin, Diisopropylethylamin oder N-Methylmorpholin, bevorzugt ist Diisopropylethylamin.Examples of bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine, preference is given to diisopropylethylamine.
Die Verbindungen der Formel (FV) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der FormelThe compounds of formula (FV) are known or can be prepared by reacting compounds of formula
in welcher R1 und R3 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,in which R 1 and R 3 have the abovementioned meaning,
mit einem Reduktionsmittel umgesetzt werden.be reacted with a reducing agent.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -300C bis 800C bei Normaldruck.The reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from -30 0 C to 80 0 C at atmospheric pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethylether, Tetrahydrofuran, Dioxan oder 1,2-Dimethoxyethan, bevorzugt ist Tetrahydrofuran.Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane or 1,2-dimethoxyethane, preference being given to tetrahydrofuran.
Reduktionsmittel sind beispielsweise Lithiumaluminiumhydrid, Natriumborhydrid in Verbindung mit Bortrifluorid-Diethyletherat, Lithiumborhydrid, Boran-THF-Komplex, Boran-Dimethylsulfid- Komplex, bevorzugt ist Natriumborhydrid in Verbindung mit Bortrifluorid-Diethyletherat.Reducing agents are, for example, lithium aluminum hydride, sodium borohydride in combination with boron trifluoride diethyl etherate, lithium borohydride, borane-THF complex, borane-dimethyl sulfide complex, preference is given to sodium borohydride in combination with boron trifluoride diethyl etherate.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der FormelThe compounds of the formula (V) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
in welcherin which
R1 und R3 die oben angegebene Bedeutung aufweisen, undR 1 and R 3 have the abovementioned meaning, and
R6 für Methyl oder Ethyl steht,R 6 is methyl or ethyl,
mit einer Base umgesetzt werden.be reacted with a base.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.The reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent at atmospheric pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1 ,2-Dichlorethan, Ether wie Diethylether, Methyl-tert- butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist ein Gemisch aus Tetrahydrofiiran und Wasser.Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane or 1,2-dichloroethane, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents, such as dimethylformamide, dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine. or mixtures of Solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is a mixture of tetrahydrofiirane and water.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Lithium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, bevorzugt ist Lithiumhydroxid.Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, lithium hydroxide is preferred.
Die Verbindungen der Formel (VI) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der FormelThe compounds of the formula (VI) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
in welcherin which
R1 und R6 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,R 1 and R 6 have the abovementioned meaning,
mit Verbindungen der Formelwith compounds of the formula
in welcherin which
R3 die oben angegebene Bedeutung aufweist, undR 3 has the abovementioned meaning, and
X1 für Halogen, bevorzugt Brom oder Chlor, oder Hydroxy steht,X 1 is halogen, preferably bromine or chlorine, or hydroxy,
umgesetzt werden.be implemented.
Die Umsetzung erfolgt, wenn X1 für Halogen steht, im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -300C bis 5O0C bei Normaldruck.The reaction takes place when X 1 is halogen, generally in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -30 0 C to 5O 0 C at atmospheric pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Methylenchlorid, Pyridin, Dioxan oder Dimethylformamid, bevorzugt ist Tetrahydrofuran. Basen sind beispielsweise Triethylamin, Diisopropylethylamin oder N-Methylmorpholin, bevorzugt ist Triethylamin oder Diisopropylethylamin.Inert solvents are, for example, tetrahydrofuran, methylene chloride, pyridine, dioxane or dimethylformamide, preference is given to tetrahydrofuran. Examples of bases are triethylamine, diisopropylethylamine or N-methylmorpholine; triethylamine or diisopropylethylamine is preferred.
Die Umsetzung erfolgt, wenn X1 für Hydroxy steht, im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -300C bis 500C bei Normaldruck.The reaction is, if X 1 is hydroxy, generally in inert solvents, in the presence of a dehydrating agent, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -30 0 C to 50 0 C at atmospheric pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Trichlormethan, Kohlenwasserstoff wie Benzol, Nitromethan, Dioxan, Dimethylformamid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dichlormethan oder Dimethylformamid.Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons, such as benzene, nitromethane, dioxane, dimethylformamide or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Particularly preferred is dichloromethane or dimethylformamide.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. NN- Diethyl-, NN -Dipropyl-, NN'-Diisopropyl-, NN'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3-Di- methylaminoisopropyl)-N-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (EDC), N-Cyclohexylcarbodiimid-N'- propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimida- zol, oder 1 ,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert- Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxy- carbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat, oder O-(Benzotriazol- 1 -yl)-NNN',N'-tetra-methyluronium- hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3 ,3-tetramethyluroniumtetrafluoro- borat (TPTU) oder 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-NNN'N'-tetramethyl-uroniumhexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenzotriazol (HOBt), oder Benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder N-Hydroxysuccinimid, oder Mischungen aus diesen, mit Basen.Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. N, N-diethyl, N, N-dipropyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylaminoisopropyl) -N-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), N-cyclohexylcarbodiimide-N'-propyloxymethyl polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1, 2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-l, 2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline, or propanephosphonic anhydride, or isobutylchloroformate, or bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) -phosphoryl chloride or benzotriazolyloxy-tri (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, or O- (benzotriazol-1-yl) -NNN ', N'-tetra-methyluronium hexafluorophosphate (HBTU), 2- (2-oxo-1 - (2H) -pyridyl) - 1, 1, 3, 3 tetramethyluronium tetrafluoroborate (TPTU) or O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -NNN'N'-tetramethyl-uronium hexafluorophosphate (HATU), or 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), or benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) -p phosphonium hexafluorophosphate (BOP), or N-hydroxysuccinimide, or mixtures thereof, with bases.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin.Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
Vorzugsweise wird die Kondensation mit HATU oder mit EDC in Gegenwart von HOBt durchgeführt.Preferably, the condensation is carried out with HATU or with EDC in the presence of HOBt.
Die Verbindungen der Formel (VIII) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.The compounds of formula (VIII) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
Die Verbindungen der Formel (VII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel The compounds of formula (VII) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
in welcherin which
R1 und R6 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,R 1 and R 6 have the abovementioned meaning,
hydriert werden.be hydrogenated.
Die Hydrierung erfolgt im Allgemeinen mit einem Reduktionsmittel in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls unter Zusatz von Säure wie Mineralsäuren und Carbonsäuren, bevorzugt Essigsäure, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel und in einem Druckbereich von Normaldruck bis 100 bar, bevorzugt bei 50-80 bar.The hydrogenation is generally carried out with a reducing agent in inert solvents, optionally with the addition of acid such as mineral acids and carboxylic acids, preferably acetic acid, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent and in a pressure range from atmospheric pressure to 100 bar, preferably 50- 80 bar.
Reduktionsmittel sind beispielsweise Wasserstoff mit Palladium auf Aktivkohle, mit Rhodium auf Aktivkohle, mit Ruthenium auf Aktivkohle oder daraus gemischte Katalysatorn, oder Wasserstoff mit Palladium auf Aluminiumoxid oder mit Rhodium auf Aluminiumoxid, bevorzugt ist Wasserstoff mit Palladium auf Aktivkohle oder mit Rhodium auf Aktivkohle.Reducing agents are, for example, hydrogen with palladium on activated carbon, with rhodium on activated carbon, with ruthenium on activated carbon or mixed catalysts, or hydrogen with palladium on aluminum oxide or with rhodium on aluminum oxide, preference is given to hydrogen with palladium on activated carbon or with rhodium on activated carbon.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, iso- Propanol, n-Butanol oder tert-Butanol, bevorzugt ist Methanol oder Ethanol.Inert solvents are, for example, alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or tert-butanol, preferably methanol or ethanol.
Die Verbindungen der Formel (IX) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der FormelThe compounds of formula (IX) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
in welcherin which
R6 die oben angegebene Bedeutung aufweist,R 6 has the abovementioned meaning,
mit Verbindungen der Formelwith compounds of the formula
<XIλ in welcher <XIλ in which
R1 die oben angegebene Bedeutung aufweist,R 1 has the meaning indicated above,
umgesetzt werden.be implemented.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Katalysators, gegebenenfalls in Gegenwart eines Zusatzreagenzes, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.The reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a catalyst, if appropriate in the presence of an additional reagent, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at normal pressure.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2- Dimethoxyethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol oder Toluol, oder andere Lösungsmittel wie Nitrobenzol, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid oder N- Methylpyrrolidon, gegebenenfalls wird diesen Lösungsmitteln etwas Wasser zugesetzt. Bevorzugt ist Toluol mit Wasser oder eine Mischung aus 1,2-Dimethoxyethan, Dimethylformamid und Wasser.Inert solvents are, for example, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, hydrocarbons, such as benzene, xylene or toluene, or other solvents, such as nitrobenzene, dimethylformamide, dimethylacetamide, dimethylsulfoxide or N-methylpyrrolidone. If desired, a little water is added to these solvents. Preference is given to toluene with water or a mixture of 1,2-dimethoxyethane, dimethylformamide and water.
Katalysatoren sind beispielsweise für Suzuki-Reaktionsbedingungen übliche Palladium- Katalysatoren, bevorzugt sind Katalysatoren wie z.B. Dichlorbis(triphenylphosphin)-palladium, Tetrakistriphenylphosphinpalladium(O), Palladium(II)acetat oder Bis-(diphenylphosphan- ferrocenyl)-palladium-(II)-chlorid.For example, catalysts are conventional palladium catalysts for Suzuki reaction conditions, preferably catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate or bis (diphenylphosphinorrocenyl) palladium (II) chloride.
Zusatzreagenzien sind beispielsweise Kaliumacetat, Cäsium-, Kalium- oder Νatriumcarbonat, Bariumhydroxid, Kalium-tert-butylat, Cäsiumfluorid, Kaliumfluorid oder Kaliumphosphat, bevorzugt sind Kaliumfluorid oder Νatriumcarbonat.Additional reagents are, for example, potassium acetate, cesium, potassium or sodium carbonate, barium hydroxide, potassium tert-butylate, cesium fluoride, potassium fluoride or potassium phosphate, potassium fluoride or sodium carbonate are preferred.
Die Verbindungen der Formeln (X) und (XI) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.The compounds of the formulas (X) and (XI) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
In den Verbindungen der oben genannten Verfahren sind freie Aminogruppen gegebenenfalls während der Umsetzung durch dem Fachmann bekannte Schutzgruppen geschützt, bevorzugt ist eine tert-Butoxycarbonyl-Schutzgruppe. Diese Schutzgruppen werden nach der Umsetzung durch dem Fachmann bekannte Reaktionen abgespalten, bevorzugt ist die Umsetzung mit Trifluoressigsäure oder konzentierter Salzsäure.In the compounds of the abovementioned processes, free amino groups are optionally protected during the reaction by protective groups known to the person skilled in the art, preference is given to a tert-butoxycarbonyl protective group. These protective groups are cleaved after the reaction by the skilled worker known reactions, preferably the reaction with trifluoroacetic acid or concentrated hydrochloric acid.
Die Herstellung der Verbindungen der Formel (I) kann durch folgendes Syntheseschema verdeutlicht werden. Schema:The preparation of the compounds of the formula (I) can be illustrated by the following synthesis scheme. scheme:
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharma- kologisches und pharmakokinetisches Wirkspektrum. Es handelt sich dabei um selektive Antagonisten des PAR-I -Rezeptors, die insbesondere als Thrombozytenaggregationshemmer, als Hemmer der Endothelproliferation und als Hemmer des Tumorwachstums wirken.The compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological and pharmacokinetic activity spectrum. These are selective antagonists of the PAR-I receptor, which act in particular as platelet aggregation inhibitors, as inhibitors of endothelial proliferation and as an inhibitor of tumor growth.
Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.They are therefore suitable for use as medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases in humans and animals.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembo- lischen Erkrankungen und/oder thromboembolischen Komplikationen.Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, preferably of thromboembolic diseases and / or thromboembolic complications.
Zu den „thromboembolischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen insbesondere Erkrankungen wie Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhöhung (STEMI) und ohne ST- Segment-Erhöhung (non-STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoris, Reokklusio- nen und Restenosen nach Koronarinterventionen wie Angioplastie, Stentimplantation oder aortokoronarem Bypass, periphere arterielle Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, tiefe venöse Thrombosen und Nierenvenenthrombosen, transitorische ischämische Attacken sowie thrombotischer und thromboembolischer Hirnschlag.For the purposes of the present invention, "thromboembolic disorders" include in particular diseases such as heart attack with ST segment elevation (STEMI) and without ST segment elevation (non-STEMI), stable angina pectoris, unstable angina pectoris, reocclusion and restenosis following coronary interventions such as angioplasty, stent or aortocoronary bypass, peripheral arterial occlusive disease, pulmonary embolism, deep venous thrombosis and renal vein thrombosis, transient ischemic attacks, and thrombotic and thromboembolic stroke.
Die Substanzen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thrombo- embolien, wie beispielsweise Hirn-Ischämien, Schlaganfall (Stroke) und systemischen Thromboembolien und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und solchen, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit intravasalen Körpern, wie z. B. künstlichen Herzklappen, Kathetern, intraaortale Ballongegenpulsation und Schrittmachersonden.The substances are therefore also useful in the prevention and treatment of cardiogenic thromboembolism, such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia, in patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias, such as atrial fibrillation, and those who undergo cardioversion, further in patients with valvular disease or with intravascular bodies such. Artificial heart valves, catheters, intra-aortic balloon counterpulsation and pacemaker probes.
Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie z. B. Hämodialyse, Hämofϊltration, ventricular assist devices und Kunstherz, sowie Herzklappenprothesen.Thromboembolic complications also occur in microangiopathic hemolytic anemias, extracorporeal blood circuits such. B. hemodialysis, hemofϊltration, ventricular assist devices and artificial heart, and heart valve prostheses.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Beeinflussung der Wundheilung, für die Prophylaxe und/oder Behandlung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen wie rheumatische Erkrankungen des Bewegungsapparats, koronaren Herzkrankheiten, von Herzinsuffizienz, von Bluthochdruck, von entzündlichen Erkrankungen, wie z.B. Asthma, COPD, entzündlichen Lungenerkrankungen, Glomerulonephritis und entzündlichen Darmerkrankungen in Betracht, darüber hinaus ebenso für die Prophylaxe und/oder Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung, Autoimmunerkrankungen, Morbus Crohn und Kolitis Ulzerosa.In addition, the compounds according to the invention also have an influence on wound healing, for the prophylaxis and / or treatment of atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the musculoskeletal system, coronary heart diseases, cardiac insufficiency, hypertension, inflammatory diseases, e.g. Asthma, COPD, inflammatory lung disease, glomerulonephritis and inflammatory bowel disease into consideration, as well as for the prophylaxis and / or treatment of Alzheimer's disease, autoimmune diseases, Crohn's disease and ulcerative colitis.
Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, bei Mikroangiopathien, altersbedingter Makuladegeneration, diabetischer Retinopathie, diabetischer Nephropathie und anderen mikrovaskulären Erkrankungen sowie zur Prävention und Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden.In addition, the compounds of the present invention can inhibit tumor growth and metastasis, microangiopathies, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic nephropathy and other microvascular diseases and for the prevention and treatment of thromboembolic complications such as venous thromboembolism in tumor patients, particularly those who become larger surgery or chemo- or radiotherapy.
Weiterhin eignen sich die erfϊndungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von Krebs. Krebserkrankungen schließen unter anderem ein: Karzinome (hierunter Brustkrebs, hepatozelluläre karzinome, Lunkenkrebs, kolorektaler Krebs, Kolonkrebs und Melanome), Lympohome (z.B. Non- Hodgkin-Lymphome und Mykosis fungoides), Leukämien, Sarkome, Mesotheliome, Hirnkrebs (z.B. Gliome), Germinome (z.B. Hodenkrebs und Ovarialkrebs), Choriokarzinome, Nierenkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Schilddrüsenkrebs, Kopf- und Halskrebs, Endometrieum-Krebs, Zervix-Krebs, Blasenkrebs, Magenkrebs und multiples Myelom.Furthermore, the compounds according to the invention are suitable for the treatment of cancer. Cancer includes, but is not limited to, carcinomas (including breast cancer, hepatocellular carcinoma, liver cancer, colorectal cancer, colon cancer and melanoma), lymphomas (eg, non-Hodgkin's lymphoma and mycosis fungoides), leukemia, sarcoma, mesothelioma, brain cancer (eg, glioma), germinoma (eg testicular cancer and ovarian cancer), choriocarcinomas, kidney cancer, Pancreatic cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, endometrial cancer, cervical cancer, bladder cancer, gastric cancer and multiple myeloma.
Außerdem vermittelt auf Endothelzellen exprimiertes PAR-I Signale, die in Gefäßwachstum münden („Angiogenese"), ein Vorgang, der zur Ermöglichung von Tumorwachstum über ca. 1 mm3 hinaus unerläßlich ist. Induktion der Angiogenese ist auch bei anderen Erkrankungen relevant, hierunter Erkrankungen des rheumatischen Formenkreises (z.B. rheumatoide Arthritis), bei Lungenerkrankungen (z.B. Lungenfibrose, pulmonale Hypertonie, insbesondere pulmonalarterielle Hypertonie, Erkrankungen, die durch Lungengefäßverschlüsse charakterisiert sind), Arteriosklerose, Plaqueruptur, diabetische Retinopathie und feuchte Makuladegeneration.In addition, PAR-I expressed on endothelial cells mediate signals that result in vascular growth ("angiogenesis"), a process that is essential for facilitating tumor growth beyond about 1 mm 3. Induction of angiogenesis is also relevant in other diseases, including diseases of the rheumatic type (eg rheumatoid arthritis), pulmonary diseases (eg pulmonary fibrosis, pulmonary hypertension, especially pulmonary arterial hypertension, diseases characterized by pulmonary vascular occlusions), arteriosclerosis, plaque rupture, diabetic retinopathy and wet macular degeneration.
Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von Sepsis geeignet. Sepsis (oder Septikämie) ist eine häufige Erkrankung mit hoher Letalität. Anfängliche Symptome der Sepsis sind typischerweise unspezifisch (z.B. Fieber, reduziertes Allgemeinbefinden), im weiteren Verlauf kann es jedoch zur generalisierten Aktivierung des Gerinnungssystems kommen ("Disseminated Intravascular coagulation", oder "Verbrauchskoagulopathie", nachfolgend als "DIC" bezeichnet) mit Mikrothrombosierung in verschiedenen Organen und sekundärer Blutungskomplikationen. Außerdem kann es zur endothelialen Schädigung mit Erhöhung der Gefäßpermeabilität und Austritt von Flüssigkeit und Proteinen in den Extravasalraum kommen. Im weiteren Verlauf kann es zur Dysfunktion oder dem Versagen eines Organs (z.B. Nierenversagen, Leberversagen, Atemversagen, zentralnervöse Defizite und Herz-/Kreislaufversagen) bis hin zum Multiorganversagen kommen. Hiervon kann prinzipiell jedes Organ betroffen sein, am häufigsten tritt Organdysfunktion und -Versagen bei der Lunge, der Niere, dem Herz-Kreislaufsystem, dem Gerinnungssystem, dem zentralnervösen System, endokrinen Drüsen und der Leber auf. Eine Sepsis kann mit einem „Acute Respiratory Distress Syndrome" (nachfolgend als ARDS bezeichnet) einhergehen. Ein ARDS kann auch unabhängig von einer Sepsis auftreten. "Septischer Schock" bezeichnet das Auftreten einer behandlungspflichtigen Blutdruckerniedrigung, die eine weitere Organschädigung begünstigt und mit einer Verschlechterung der Prognose einhergeht.In addition, the compounds according to the invention are suitable for the treatment of sepsis. Sepsis (or septicemia) is a common high mortality disease. Initial symptoms of sepsis are typically nonspecific (eg, fever, reduced general condition), but in the further course, generalized activation of the coagulation system ("disseminated intravascular coagulation", or "consumption coagulopathy", hereinafter referred to as "DIC") with microthrombosis in different ones may occur Organs and secondary bleeding complications. In addition, endothelial damage can result in increased vascular permeability and leakage of fluid and proteins into the extravasal space. Subsequently, dysfunction or failure of an organ (e.g., renal failure, liver failure, respiratory failure, CNS deficits, and cardiovascular failure) can result in multiple organ failure. Of these, in principle, any organ can be affected, most often occurs organdy function and failures in the lungs, the kidney, the cardiovascular system, the coagulation system, the central nervous system, endocrine glands and the liver. Sepsis may be associated with Acute Respiratory Distress Syndrome (hereinafter referred to as ARDS) and ARDS may be independent of sepsis. "Septic shock" refers to the occurrence of a blood pressure reduction that requires further treatment and further deterioration of the organ Prognosis.
Krankheitserreger können Bakterien (gram-negativ und gram-positiv), Pilze, Viren und/oder Eukaryonten sein. Eintrittspforte bzw. Primärinfektion können z.B. Pneumonie, Harnwegsinfekt, Peritonitis sein. Die Infektion kann, muß aber nicht zwingend, mit einer Bakteriämie einhergehen.Pathogens can be bacteria (gram-negative and gram-positive), fungi, viruses and / or eukaryotes. Entry portal or primary infection can e.g. Pneumonia, urinary tract infection, peritonitis. The infection may or may not be associated with bacteremia.
Sepsis wird definiert als das Vorliegen einer Infektion und eines "systemic inflammatory response Syndrome" (nachfolgend mit "SIRS" bezeichnet). SIRS tritt im Rahmen von Infekten, aber auch von anderen Zuständen wie Verletzungen, Verbrennungen, Schock, Operationen, Ischämie, Pankreatitis, Reanimation oder Tumoren auf. Nach der Definition des ACCP/SCCM Consensus Conference Committee von 1992 (Crit. Care Med. 1992, 20, 864-874) werden die zur Diagnose "SIRS" erforderlichen Symptome zur Diagnose und Meßparameter beschrieben (u.a. veränderte Körpertemperatur, erhöhte Herzfrequenz, Atemschwierigkeiten und verändertes Blutbild). In der späteren (2001) SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International Sepsis Definitions Conference wurden die Kriterien im Wesentlichen beibehalten, in Details jedoch verfeinert (Levy et al., Crit. Care Med. 2003, 31, 1250-1256).Sepsis is defined as the presence of an infection and a "systemic inflammatory response syndrome" (hereafter referred to as "SIRS"). SIRS occurs in the context of infections, but also other conditions such as injuries, burns, shock, surgery, ischemia, pancreatitis, resuscitation or tumors. According to the definition of the ACCP / SCCM Consensus Conference Committee of 1992 (Crit. Care Med., 1992, 20, 864-874) those for diagnosis "SIRS" required symptoms for diagnosis and measurement parameters described (including changes in body temperature, increased heart rate, difficulty breathing and altered blood count). At the later (2001) SCCM / ESICM / ACCP / ATS / SIS International Sepsis Definition Conference, the criteria were essentially retained but refined in details (Levy et al., Crit. Care Med. 2003, 31, 1250-1256).
DIC und SIRS können im Rahmen einer Sepsis, aber auch infolge von Operationen, Tumorerkrankungen, Verbrennungen oder anderen Verletzungen auftreten. Bei der DIC kommt es an der Oberfläche von geschädigten Endothelzellen, Fremdkörperoberflächen oder verletztem extravaskulärem Gewebe zur massiven Aktivierung des Gerinnungssystems. Als Folge kommt es zur Gerinnung in kleinen Gefäßen verschiedener Organe mit Hypoxie und anschließender Organdysfunktion. Sekundär kommt es zum Verbrauch von Gerinnungsfaktoren (z.B. Faktor X, Prothrombin, Fibrinogen) und Plättchen, wodurch die Gerinnungsfähigkeit des Blutes herabgesetzt wird und schwere Blutungen auftreten können.DIC and SIRS can occur as a result of sepsis, but also as a result of operations, tumors, burns or other injuries. DIC causes massive activation of the coagulation system on the surface of damaged endothelial cells, foreign body surfaces or injured extravascular tissue. As a result, coagulation occurs in small vessels of various organs with hypoxia and subsequent organ dysfunction. Secondarily, coagulation factors (e.g., Factor X, prothrombin, fibrinogen) and platelets are consumed, which lowers the blood's ability to coagulate and cause severe bleeding.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur Verhinderung von Koagu- lation ex vivo eingesetzt werden, z.B. zur Konservierung von Blut- und Plasmaprodukten, zur Reinigung/Vorbehandlung von Kathetern und anderen medizinischen Hilfsmitteln und Geräten, einschließlich extrakorporaler Kreisläufe, zur Beschichtung künstlicher Oberflächen von in vivo oder ex vivo eingesetzten medizinischen Hilfsmitteln und Geräten oder bei biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten.In addition, the compounds according to the invention can also be used for the prevention of coagulation ex vivo, e.g. for the preservation of blood and plasma products, for the cleaning / pretreatment of catheters and other medical aids and devices, including extracorporeal circuits, for coating artificial surfaces of in vivo or ex vivo applied medical devices and devices or on biological samples containing platelets.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Beschichtung von medizinischen Instrumenten und Implantaten, z.B. Kathetern, Prothesen, Stents oder künstlichen Herzklappen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können dabei fest an die Oberfläche gebunden sein oder über einen bestimmten Zeitraum aus einer Trägerbeschichtung in die unmittelbare Umgebung zur lokalen Wirkung freigesetzt werden.Another object of the present invention is the use of the compounds according to the invention for coating medical instruments and implants, e.g. Catheters, prostheses, stents or artificial heart valves. The compounds according to the invention can be firmly bound to the surface or released over a certain period of time from a carrier coating into the immediate environment for local action.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases. Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfϊndungs- gemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing a erfϊndungs- proper compound and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases. As suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
Kalziumkanalblocker, z.B. Amlodipin Besilat (z.B. Norvasc®), Felodipin, Diltiazem, Verapamil, Nifedipin, Nicardipin, Nisoldipin und Bepridil;Calcium channel blockers such as amlodipine besilate (such as Norvasc ®), felodipine, diltiazem, verapamil, nifedipine, nicardipine, nisoldipine, and bepridil;
Iomerizin;Iomerizin;
Statine, z.B. Atorvastatin, Fluvastatin, Lovastatin, Pitavastatin, Pravastatin, Rosuvastatin, und Simvastatin;Statins, e.g. Atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pitavastatin, pravastatin, rosuvastatin, and simvastatin;
Cholesterinabsorption-Inhibitoren, z.B. Ezetimibe und AZD4121;Cholesterol absorption inhibitors, e.g. Ezetimibe and AZD4121;
Cholesteryl Ester Transfer Protein ("CETP") Inhibitoren, z.B. Torcetrapib;Cholesteryl Ester Transfer Protein ("CETP") Inhibitors, e.g. torcetrapib;
Niedrigmolekualre Heparine, z.B. Dalteparin Natrium, Ardeparin, Certoparin, Enoxaparin, Parnaparin, Tinzaparin, Reviparin und Nadroparin;Low molecular weight heparins, e.g. Dalteparin Sodium, Ardeparin, Certoparin, Enoxaparin, Parnaparin, Tinzaparin, Reviparin and Nadroparin;
Weitere Antikoagulanzien, z.B. Warfarin, Marcumar, Fondaparinux;Other anticoagulants, e.g. Warfarin, marcumar, fondaparinux;
Antiarrhythmika, z.B. Dofetilid, Ibutilid, Metoprolol, Metoprololtartrat, Propranolol, Atenolol, Ajmalin, Disopyramid, Prajmalin, Procainamid, Quinidin, Spartein, Aprindine, Lidocain, Mexiletin, Tocamid, Encamid, Flecamid, Lorcamid, Moricizin, Propafenon, Acebutolol, Pindolol, Amiodaron, Bretylium-Tosylat, Bunaftin, Sotalol, Adenosin, Atropin und Digoxin;Antiarrhythmics, e.g. Dofetilide, Ibutilide, Metoprolol, Metoprolol tartrate, Propranolol, Atenolol, Ajmaline, Disopyramide, Prajmaline, Procainamide, Quinidine, Sparteine, Aprindine, Lidocaine, Mexiletine, Tocamide, Encamid, Flecamide, Lorcamide, Moricin, Propafenone, Acebutolol, Pindolol, Amiodarone, Bretylium Tosylate, bunaftin, sotalol, adenosine, atropine and digoxin;
Alpha-adrenerge Agonisten, z.B. Doxazosin-Mesylat, Terazoson und Prazosin;Alpha-adrenergic agonists, e.g. Doxazosin mesylate, terazosone and prazosin;
Beta-adrenerge Blocker, z.B. Carvedilol, Propranolol, Timolol, Nadolol, Atenolol, Metoprolol, Bisoprolol, Nebivolol, Betaxolol, Acebutolol und Bisoprolol;Beta-adrenergic blockers, e.g. Carvedilol, propranolol, timolol, nadolol, atenolol, metoprolol, bisoprolol, nebivolol, betaxolol, acebutolol and bisoprolol;
Aldosteron-Antagonisten, z.B. Eplerenon und Spironolacton;Aldosterone antagonists, e.g. Eplerenone and spironolactone;
Angiotensin-converting-enzyme Inhbitoren ("ACE-Inhibitoren"), z.B. Moexipril, Quinapril- Hydrochlorid, Ramipril, Lisinopril, Benazepril-Hydrochlorid, Enalapril, Captopril, Spirapril, Perindopril, Fosinopril und Trandolapril,; Angiotensin II Receptorblockers ("ARBs"), z.B. Olmesartan-Medoxomil, Candesartan, Valsartan, Telmisartan, Irbesartan, Losartan und Eprosartan,;Angiotensin-converting enzyme inhibitors ("ACE inhibitors"), eg moexipril, quinapril hydrochloride, ramipril, lisinopril, benazepril hydrochloride, enalapril, captopril, spirapril, perindopril, fosinopril and trandolapril; Angiotensin II receptor blockers ("ARBs"), eg olmesartan-medoxomil, candesartan, valsartan, telmisartan, irbesartan, losartan and eprosartan;
Endothelinantagonisten, z.B. Tezosentan, Bosentan und Sitaxsentan-Natrium;Endothelin antagonists, e.g. Tezosentan, bosentan and sitaxsentan sodium;
Neutral Endopeptidaseinhibitoren, z.B. Candoxatril und Ecadotril;Neutral endopeptidase inhibitors, e.g. Candoxatril and ecadotril;
Phosphodiesteraseinhibitoren, z.B. Milrinoon, Theophyllin, Vinpocetin, EHNA (erythro-9-(2- hydroxy-3-nonyl)adenine), Sildenafil, Vardenafil und Tadalafil;Phosphodiesterase inhibitors, e.g. Milrinoone, theophylline, vinpocetine, EHNA (erythro-9- (2-hydroxy-3-nonyl) adenine), sildenafil, vardenafil and tadalafil;
Fibrinolytika, z.B. Reteplase, Alteplase und Tenecteplase;Fibrinolytics, e.g. Reteplase, alteplase and tenecteplase;
GP üb/lila- Antagonisten, z.B. Integrillin, Abciximab und Tirofiban;GP antililar antagonists, e.g. Integrillin, abciximab and tirofiban;
Direkte Thrombininhibitoren, z.B. AZD0837, Argatroban, Bivalirudin und Dabigatran;Direct thrombin inhibitors, e.g. AZD0837, argatroban, bivalirudin and dabigatran;
Indirekte Thrombininhibitoren, z.B. Odiparcil;Indirect thrombin inhibitors, e.g. Odiparcil;
Direkte und indirekte Faktor Xa Inhibitoren, z.B. Fondaparinux-Natrium, Apixaban, Razaxaban, Rivaroxaban (BAY 59-7939), KFA-1982, DX-9065a, AVE3247, Otamixaban (XRP0673), AVE6324, SAR377142, Idraparinux, SSR126517, DB-772d, DT-831J, YM-150, 813893, LY517717 und DU-1766.;Direct and indirect factor Xa inhibitors, e.g. Fondaparinux sodium, apixaban, razaxaban, rivaroxaban (BAY 59-7939), KFA-1982, DX-9065a, AVE3247, otamixaban (XRP0673), AVE6324, SAR377142, Idraparinux, SSR126517, DB-772d, DT-831J, YM-150 , 813893, LY517717 and DU-1766 .;
Direkte und indirekte Faktor Xa/IIa Inhibitoren, z.B. Enoxaparin-Natrium, AVE5026, SSR128428, SSRl 28429 und BIBT-986 (Tanogitran);Direct and indirect factor Xa / IIa inhibitors, e.g. Enoxaparin sodium, AVE5026, SSR128428, SSRI 28429 and BIBT-986 (Tanogitran);
Lipoprotein-assoziierte Phospholipase A2 ("LpPLA2") Modulatoren;Lipoprotein-associated phospholipase A2 ("LpPLA2") modulators;
Diuretika, z.B. Chlorthalidon, Ethacrynsäure, Furosemid, Amilorid, Chlorothiazid, Hydrochlorothiazid, Methylchtothiazid und Benzthiazid;Diuretics, e.g. Chlorthalidone, ethacrynic acid, furosemide, amiloride, chlorothiazide, hydrochlorothiazide, methylchtothiazide and benzothiazide;
Nitrate, z.B. Isosorbide-5-Mononitrat;Nitrates, e.g. Isosorbide-5-mononitrate;
Thromboxan-Antagonisten, z.B. Seratrodast, Picotamid und Ramatroban;Thromboxane antagonists, e.g. Seratrodast, picotamide and ramatroban;
Plättchenaggregations-Inhibitoren, z.B. Clopidogrel, Tiklopidin, Cilostazol, Aspirin, Abciximab, Limaprost, Eptifibatide und CT-50547;Platelet aggregation inhibitors, e.g. Clopidogrel, tiklopidine, cilostazol, aspirin, abciximab, limaprost, eptifibatide and CT-50547;
Cyklooxygenase-Inhibitoren, z.B. Meloxicam, Rofecoxib und Celecoxib;Cyclooxygenase inhibitors, e.g. Meloxicam, rofecoxib and celecoxib;
B-Typ Natriuretic Peptide, z.B. Nesiritid und Ularitide;B-type Natriuretic Peptides, e.g. Nesiritide and Ularitide;
NVIFGF-Modulatoren, z.B. XRP0038; HTlB/5-HT2A-Antagonisten, z.B. SL65.0472;NVIFGF modulators, eg XRP0038; HTIB / 5-HT2A antagonists, eg SL65.0472;
Guanylatcyclase-Aktivatoren, z.B. Ataciguat (HMRl 766), HMRl 069, Riociguat und Cinaciguat;Guanylate cyclase activators, e.g. Ataciguat (HMR1766), HMR1069, riociguat and cinaciguat;
e-NOS Transkriptions-Enhancers, z.B. AVE9488 and AVE3085;e-NOS transcriptional enhancers, e.g. AVE9488 and AVE3085;
Anti-atherogene Substanzen, z.B. AGI- 1067:Anti-atherogenic substances, e.g. AGI-1067:
CPU-Inhibitoren, z.B. AZD9684;CPU inhibitors, e.g. AZD9684;
Renininhibitoren, z.B. Aliskirin und VNP489;Renin inhibitors, e.g. Aliskirin and VNP489;
Inhibitoren der Adenosindiphosphat-induzierten Plättchenaggregation, z.B. Clopidogrel, Tiklopidin, Prasugrel, AZD6140, Ticagrelor und Elinogrel;Inhibitors of adenosine diphosphate-induced platelet aggregation, e.g. Clopidogrel, tiklopidine, prasugrel, AZD6140, ticagrelor and elinogrel;
NHE-I Inhibitoren, z.B. AVE4454 und AVE4890.NHE-I inhibitors, e.g. AVE4454 and AVE4890.
Antibiotische Therapie: Verschiedene Antibiotika oder antifungale Medikamenten-Kombinationen kommen in Frage, entweder als kalkulierte Therapie (vor Vorliegen des mikrobiellen Befundes) oder als spezifische Therapie; Flüssigkeitstherapie, z.B. Kristalloide oder kolloidale Flüssigkeiten; Vasopressoren, z.B. Norepinephrine, Dopamine oder Vasopressin; Inotrope Therapie, z.B. Dobutamin; Kortikosteroide, z.B. Hydrokortison, oder Fludrokortison; rekombinantes humanes aktivierte Protein C, Xigris; Blutprodukte, z.B. Erythrozytenkonzentrate, Thrombozyten- konzentrate, Erythropietin oder Fresh Frozen Plasma; Maschinelle Beatmung bei sepsisinduziertem Acute Lung Injury (ALI) bzw. Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS), z.B. Permissive Hyperkapnie, niedrigere Tidalvolumina; Sedierung: z.B. Diazepam, Lorazepam, Midazolam oder Propofol. Opioide: z.B. Fentanyl, Hydromorphon, Morphin, Meperidin oder Remifentanil. NSAIDs: z.B. Ketorolac, Ibuprofen oder Acetaminophen. Neuromuskuläre Blockade: z.B. Pancuronium; Glukose-Kontrolle, z.B. Insulin, Glukose; Nierenersatzverfahren, z.B. kontinuierliche veno-venöse-Hämofiltration oder intermittierende Hämodialyse. Dopamin niedrig-dosiert zur renalen Protektion; Antikoagulantien, z.B. zur Thromboseprophylaxe oder bei Nierenersatzverfahren, z.B. unfraktionierte Heparine, low molecular weight Heparine, Heparinoide, Hirudin, Bivalirudin oder Argatroban; Bikarbonat-Therapie; Streßulkusprophylaxe, z.B. H2-Rezeptorinhibitoren, AntazidaAntibiotic Therapy: Various antibiotics or antifungal drug combinations may be considered, either as a calculated therapy (prior to the presence of the microbial condition) or as a specific therapy; Fluid therapy, e.g. Crystalloids or colloidal liquids; Vasopressors, e.g. Norepinephrine, dopamine or vasopressin; Inotropic therapy, e.g. dobutamine; Corticosteroids, e.g. Hydrocortisone, or fludrocortisone; recombinant human activated protein C, Xigris; Blood products, e.g. Red blood cell concentrates, platelet concentrates, erythropietin or fresh frozen plasma; Mechanical ventilation in sepsis-induced Acute Lung Injury (ALI) or Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS), e.g. Permissive hypercapnia, lower tidal volumes; Sedation: e.g. Diazepam, Lorazepam, Midazolam or Propofol. Opioids: e.g. Fentanyl, hydromorphone, morphine, meperidine or remifentanil. NSAIDs: e.g. Ketorolac, ibuprofen or acetaminophen. Neuromuscular blockade: e.g. pancuronium; Glucose control, e.g. Insulin, glucose; Renal replacement procedure, e.g. continuous veno-venous hemofiltration or intermittent hemodialysis. Dopamine low-dose for renal protection; Anticoagulants, e.g. for thrombosis prophylaxis or in renal replacement procedures, e.g. unfractionated heparins, low molecular weight heparins, heparinoids, hirudin, bivalirudin or argatroban; Bicarbonate treatment; Stress ulcer prophylaxis, e.g. H2 receptor inhibitors, antacids
Medikamente bei proliferativen Erkrankungen: Urazil, Chlormethin, Cyklophosphamid, Ifosfamid, Melphalan, Chlorambucil, Pipobroman, Triethylenemelamin, Triethylenethiophosphoramin, Busulfan, Carmustine, Lomustine, Streptozocin, Dacarbazine, Methotrexate, 5- Fluorouracil, Floxuridine, Cytarabine, 6-Mercaptopurine, 6-Thioguanine, Fludarabine phosphate, Pentostatine, Vinblastine, Vincristine, Vindesine, Bleomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Paclitaxel, Mithramycin, Deoxycoformycin, Mitomycin-C, L- Asparaginase, Interferons, Etoposide, Teniposide 17.alpha.- Ethinylestradiol, Diethylstilbestrol, Testosterone, Prednisone, Fluoxymesterone, Dromostanolone propionate, Testolactone, Megestrolacetate, Tamoxifen, Methylprednisolone, Methyltestosterone, Prednisolone, Triamcinolone, Chlorotrianisene, Hydroxyprogesterone, Aminoglutethimide, Estranrustine, Medroxyprogesteroneacetate, Leuprolide, Flutamide, Toremifene, Goserelin, Cisplatin, Carboplatin, Hydroxyurea, Amsacrine, Procarbazine, Mitotane, Mitoxantrone, Levamisole, Navelbene, Anastrazole, Letrazole, Capecitabine, Reloxafine, Droloxafine, Hexamethylmelamine, Oxaliplatin (Eloxatin®), Iressa (gefmitib, Zdl839), XELODA® (capecitabine), Tarceva® (erlotinib), Azacitidine (5-Azacytidine; 5-AzaC), Temozolomide (Temodar®), Gemcitabine (e.g., GEMZAR® (gemcitabine HCl)), Vasostatin oder eine Kombination zweier oder mehrerer der oben genannten.Drugs in proliferative disorders: uracil, chlormethine, cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan, chlorambucil, pipobroman, triethylenemelamine, triethylenethiophosphoramine, busulfan, carmustine, lomustine, streptozocin, dacarbazine, methotrexate, 5-fluorouracil, floxuridine, cytarabine, 6-mercaptopurine, 6-thioguanine , Fludarabine phosphate, pentostatines, vinblastine, vincristine, vindesine, bleomycin, dactinomycin, daunorubicin, doxorubicin, Epirubicin, idarubicin, paclitaxel, mithramycin, deoxycoformycin, mitomycin C, L-asparaginase, interferons, etoposide, teniposide 17.alpha.- ethinyl estradiol, diethylstilbestrol, testosterone, prednisone, fluoxymesterone, dromostanolone propionate, testolactone, megestrol acetate, tamoxifen, methylprednisolone, methyltestosterone , Prednisolone, Triamcinolone, Chlorotrianisene, Hydroxyprogesterone, Aminoglutethimide, Estranrustine, Medroxyprogesterone acetate, Leuprolide, Flutamide, Toremifene, Goserelin, Cisplatin, Carboplatin, Hydroxyurea, Amsacrine, Procarbazine, Mitotane, Mitoxantrone, Levamisole, Navelbene, Anastrazole, Letrazole, Capecitabine, Reloxafine, Droloxafine , Hexamethylmelamine, oxaliplatin (Eloxatin ®), Iressa (gefmitib, Zdl839), XELODA ® (capecitabine), Tarceva ® (erlotinib), Azacitidine (5-azacytidine; 5-AzaC), Temozolomide (Temodar ®) (gemcitabine eg, GEMZAR ® (gemcitabine HCl)), vasostatin or a combination of two or more of the above.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, insbesondere bei Blutkonserven oder biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung zugegeben wird.Another object of the present invention is a method for preventing blood coagulation in vitro, especially in blood or biological samples containing platelets, which is characterized in that an anticoagulatory effective amount of the compound of the invention is added.
Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otisch oder als Implantat bzw. Stent.The compounds according to the invention can act systemically and / or locally. For this purpose, they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otic or as an implant or stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.For these administration routes, the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfϊndungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.For the oral administration are according to the prior art functioning rapidly and / or modified compounds of the invention donating application forms containing the compounds of the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such as. Tablets (uncoated or coated tablets, for example with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings which control the release of the compound of the invention), orally disintegrating tablets or films / wafers, films / lyophilisates, capsules (for example hard or soft gelatin capsules) in the oral cavity ), Dragees, granules, pellets, powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszu- bereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.The parenteral administration can be done bypassing a resorption step (eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar) or with involvement of resorption (eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal). For the Parenteral administration are suitable as application forms, inter alia, injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
Bevorzugt ist die orale Applikation.The oral application is preferred.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.For the other routes of administration are suitable, for example Inhalation medicines (including powder inhalers, nebulizers), nasal drops, solutions, sprays; lingual, sublingual or buccal tablets, films / wafers or capsules, suppositories, ear or ophthalmic preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shake mixtures), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as patches), milk, Pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.The compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients. These adjuvants include, among others. Excipients (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (for example liquid polyethylene glycols), emulsifiers and dispersants or wetting agents (for example sodium dodecylsulfate, polyoxysorbitanoleate), binders (for example polyvinylpyrrolidone), synthetic and natural polymers (for example albumin), Stabilizers (eg, antioxidants such as ascorbic acid), dyes (eg, inorganic pigments such as iron oxides) and flavor and / or odoriferous.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing at least one compound of the invention, preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, as well as their use for the purposes mentioned above.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 100 mg je 24 Stunden.In general, it has been found to be beneficial to administer amounts of about 5 to 250 mg per 24 hours when administered parenterally to achieve effective results. When administered orally, the amount is about 5 to 100 mg per 24 hours.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.Nevertheless, it may be necessary to deviate from the stated amounts, depending on body weight, route of administration, individual behavior towards the active ingredient, type of preparation and time or interval at which the application is carried out.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise "10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz. The percentages in the following tests and examples are by weight unless otherwise indicated; Parts are parts by weight. Solvent ratios, dilution ratios and concentration data of liquid / liquid solutions are based on volume. The term "w / v" means "weight / volume". Thus, for example, "10% w / v" means: 100 ml of solution or suspension contains 10 g of substance.
A) BeispieleA) Examples
Abkürzungen:Abbreviations:
ca. circaabout circa
CDI Carbonyldiimidazol d Tag(e), Dublett (bei NMR)CDI carbonyldiimidazole d day (s), doublet (by NMR)
DC Dünnschicht-ChromatographieTLC thin layer chromatography
DCI direkte chemische Ionisation (bei MS) dd Doppeltes Dublett (bei NMR)DCI direct chemical ionization (in MS) dd double doublet (in NMR)
DMAP 4-DimethylaminopyridinDMAP 4-dimethylaminopyridine
DMF NN-DimethylformamidDMF N, N-dimethylformamide
DMSO DimethylsulfoxidDMSO dimethyl sulfoxide
DPPA DiphenylphosphorazidatDPPA diphenylphosphorazidate
DSC Disuccinimidylcarbonat d. Th. der Theorie (bei Ausbeute) eq. Äquivalent(e)DSC disuccinimidyl carbonate d. Th. Of theory (in yield) eq. Equivalent (s)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) h Stunde(n)ESI electrospray ionization (in MS) h hour (s)
HATU 0(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,NN',N'-tetramethyluroniumHATU 0 (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, NN ', N'-tetramethyluronium
Hexafluorphosphathexafluorophosphate
HPLC Hochdruck-, HochleistungsflüssigchromatographieHPLC high pressure, high performance liquid chromatography
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte MassenspektroskopieLC-MS liquid chromatography-coupled mass spectrometry
LDA Lithiumdiisopropylamid m Multiple« (bei NMR) min Minute(n)LDA lithium diisopropylamide m multiple (at NMR) min. Minute (s)
MS MassenspektroskopieMS mass spectroscopy
NMR KernresonanzspektroskopieNMR nuclear magnetic resonance spectroscopy
PYBOP Benzotriazol-l-yloxy-tris(pyrrolidino)phosphonium-PYBOP benzotriazol-1-yloxy-tris (pyrrolidino) phosphonium
Hexafluorophosphat q Quartett (bei NMR)Hexafluorophosphate q quartet (by NMR)
RP reverse phase (bei HPLC)RP reverse phase (on HPLC)
RT RaumtemperaturRT room temperature
R. Retentionszeit (bei HPLC)R. Retention time (by HPLC)
S Singulett (bei NMR) t Triplett (bei NMR)S singlet (in NMR) t triplet (in NMR)
THF Tetrahydrofuran Präparative Diastereomerentrennung:THF tetrahydrofuran Preparative diastereomer separation:
Methode IA: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, Eluent: Wasser/Acetonitril 40:60; Fluss: 25 ml/min, T: 400C; UV-Detektion: 210 ran.Method IA: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, eluent: water / acetonitrile 40:60; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 ran.
Methode 2A: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, Eluent: Wasser/Acetonitril 45:55; Fluss: 25 ml/min, T: 400C; UV-Detektion: 210 nm.Method 2A: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, eluent: water / acetonitrile 45:55; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
Methode 3A: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, Eluent: Wasser/Acetonitril 47:53; Fluss: 25 ml/min, T: 400C; UV-Detektion: 210 nm.Method 3A: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, eluent: water / acetonitrile 47:53; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
Methode 4A: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, Eluent: Wasser/0.1% Trifluressigsäure/Acetonitril 56: 14:30; Fluss: 25 ml/min, T: 400C; UV-Detektion: 210 nm.Method 4A: Phase: Sunfire C18OBD, 5 μm 150 mm x 19 mm, eluent: water / 0.1% trifluoroacetic acid / acetonitrile 56: 14:30; Flow: 25 ml / min, T: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
LC-MS-Methoden:LC-MS methods:
Methode IB: Instrument: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 1.5 min 10% A → 2.2 min 10% A; Ofen: 500C; Fluss: 0.33 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.Method IB: Instrument: Micromass Quattro Premier with Waters UPLC Acquity; Column: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 1.5 min 10% A → 2.2 min 10% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.33 ml / min; UV detection: 210 nm.
Methode 2B: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini 3 μ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.Method 2B: Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Gemini 3 μ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min. 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
Methode 3B: Gerätetyp MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule : Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A → 4.01 min 100% A (Flow 2.5 ml) → 5.00 min 100% A; Ofen: 500C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.Method 3B: Device Type MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Device type HPLC: Agilent 1100 series; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A → 4.01 min 100% A (flow 2.5 ml) → 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
Methode 4B: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A; Ofen: 500C; Fluss: 0.40 ml/min; UV-Detektion: 210 - 400 nm. Methode 5B: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A; Ofen: 500C; Fluss: 0.40 ml/min; UV-Detektion: 210 - 400 nm.Method 4B: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 210 - 400 nm. Method 5B: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 210 - 400 nm.
Methode 6B: Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A → 2 min 65%A → 4.5 min 5%A → 6 min 5%A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 400C; UV-Detektion: 210 nm.Method 6B: Device Type MS: Waters ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A → 2 min 65% A → 4.5 min 5% A → 6 min 5% A; Flow: 2 ml / min; Oven: 40 ° C; UV detection: 210 nm.
Methode 7B: Instrument: Micromass Quattro Micro MS mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A -» 3.0 min 10%A → 4.0 min 10%A → 4.01 min 100%A → 5.00 min 100%A; Ofen: 500C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.Method 7B: Instrument: Micromass Quattro Micro MS with HPLC Agilent Series 1100; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A - »3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A → 4.01 min 100% A → 5.00 min 100% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 2 ml / min; UV detection: 210 nm.
Methode 8B: Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo HyPURITY Aquastar 3μ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A — > 0.2 min 100% A → 2.9 min 30% A → 3.1 min 10% A → 5.5 min 10% A; Ofen: 500C; Fluss: 0.8 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.Method 8B: Instrument: Micromass Platform LCZ with HPLC Agilent Series 1100; Column: Thermo HyPURITY Aquastar 3μ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A -> 0.2 min 100% A → 2.9 min 30% A → 3.1 min 10% A → 5.5 min 10% A; Oven: 50 ° C .; Flow: 0.8 ml / min; UV detection: 210 nm.
Methode 9B: Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A → 4.1 min 100% Fluss: 2.5 ml/min; Ofen: 55°C; Fluss 2/ml; UV- Detektion: 210 nm.Method 9B: Device Type MS: Waters ZQ; Device Type HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Column: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A → 4.1 min 100% flow: 2.5 ml / min; Oven: 55 ° C; Flow 2 / ml; UV detection: 210 nm.
Methode IQB: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.01 min 90% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.Method IQB: Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.01 min 90% A; Flow: 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
Präparative Enantiomerentrennung:Preparative enantiomer separation:
Methode IC: Phase: Daicel Chiralpak AS-H, 5 μm 250 mm x 20 mm, Eluent: iso-Hexan/Ethanol 50:50; Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm. Analvtische Enantiomerentrennung:Method IC: Phase: Daicel Chiralpak AS-H, 5 μm 250 mm x 20 mm, eluent: iso-hexane / ethanol 50:50; Flow: 15 ml / min, temperature: 30 ° C; UV detection: 220 nm. Analetic separation of enantiomers:
Methode ID: Phase: Daicel Chiralpak AS-H, 5 μm 250 mm x 4.6 mm; Eluent: iso-Hexan/Ethanol 30:70 + 0.2% Trifluoressigsäure + 1% Wasser; Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 400C; UV-Detektion:Method ID: Phase: Daicel Chiralpak AS-H, 5 μm 250 mm x 4.6 mm; Eluent: iso-hexane / ethanol 30:70 + 0.2% trifluoroacetic acid + 1% water; Flow: 1 ml / min; Temperature: 40 ° C .; UV detection:
220 nm.220 nm.
Als Mikrowellenreaktor wurde ein "single mode" Gerät vom Typ Emrys Optimizer verwendet The microwave reactor used was a single-mode Emrys Optimizer device
Ausgangsverbindungenstarting compounds
Allgemeine Methode IA: Suzuki-KupplungGeneral Method IA: Suzuki coupling
Eine Mischung des entsprechenden Brompyridins in Toluol (1.8 ml/mmol) wird unter Argon beiA mixture of the corresponding bromopyridine in toluene (1.8 ml / mmol) is added under argon
RT mit Tetrakis-(triphenylphosphin)-palladium (0.02 eq.), mit einer Lösung der entsprechenden Arylboronsäure (1.2 eq.) in Ethanol (0.5 ml/mmol) und mit einer Lösung aus KaliumfluoridRT with tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0.02 eq.), With a solution of the corresponding arylboronic acid (1.2 eq.) In ethanol (0.5 ml / mmol) and with a solution of potassium fluoride
(2.0 eq.) in Wasser (0.2 ml/mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird mehrere Stunden bis zur weitgehend vollständigen Umsetzung unter Rückfluß gerührt. Nach Zugabe von(2.0 eq.) In water (0.2 ml / mmol). The reaction mixture is stirred for several hours until substantially complete reaction under reflux. After adding
Essigsäureethylester und Phasentrennung wird die organische Phase einmal mit Wasser und einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird mittels Flash-ChromatographieEthyl acetate and phase separation, the organic phase is washed once with water and once with saturated aqueous sodium chloride solution, dried (magnesium sulfate), filtered and concentrated in vacuo. The crude product is purified by flash chromatography
(Kieselgel-60, Eluent: Dichlormethan-Methanol-Gemische) aufgereinigt.(Silica gel 60, eluent: dichloromethane-methanol mixtures).
Allgemeine Methode 2A: Hydrierung des PyridinsGeneral Method 2A: Hydrogenation of Pyridine
Eine Lösung des Pyridins in Ethanol (9 ml/mmol) wird unter Argon mit Palladium auf Aktivkohle (angefeuchtet mit ca. 50% Wasser, 0.3 g/mmol) versetzt und bei 600C über Nacht in einer 50 bar Wasserstoff- Atmosphäre hydriert. Anschließend wird der Katalysator über eine Filterschicht abfiltriert und mehrmals mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum eingeengt.A solution of pyridine in ethanol (9 ml / mmol) is added under argon with palladium on activated carbon (moistened with about 50% water, 0.3 g / mmol) and hydrogenated at 60 0 C overnight in a 50 bar hydrogen atmosphere. Subsequently, the catalyst is filtered off through a filter layer and washed several times with ethanol. The combined filtrates are concentrated in vacuo.
Allgemeine Methode 3A: Umsetzung mit CarbamoylchloridenGeneral Method 3A: Reaction with carbamoyl chlorides
Eine Lösung des Piperidins in Dichlormethan (2.5 ml/mmol) wird unter Argon bei 00C tropfenweise mit NN-Diisopropylethylamin (1.2 eq.) und dem entsprechenden Carbamoylchlorid (1.2 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser und Phasentrennung wird die organische Phase dreimal mit Wasser und einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt.A solution of the piperidine in dichloromethane (2.5 ml / mmol) is added dropwise under argon at 0 0 C with NN-diisopropylethylamine (1.2 eq.) And the corresponding carbamoyl chloride (1.2 eq.). The reaction mixture is stirred at RT. After addition of water and phase separation, the organic phase is washed three times with water and once with saturated aqueous sodium chloride solution, dried (sodium sulfate), filtered and concentrated in vacuo.
Allgemeine Methode 4A: Methylesterverseifung/EpimerisierungGeneral Method 4A: Methylester Saponification / Epimerization
Zu einer Lösung des entsprechenden Methylesters (1.0 eq.) in Methanol (35-40 ml/mmol) wird bei RT Kalium-tert.-butylat (10 eq.) gegeben. Die Mischung wird über Nacht bei 600C gerührt. Bei unvollständiger Umsetzung wird Wasser (1.0 eq.) zugesetzt und bis zum vollständigen Umsatz bei 600C gerührt. Zur Aufarbeitung wird im Vakuum das Methanol entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt und mit wässriger 1 N Salzsäure-Lösung sauer (pH 1) gestellt. Die Mischung wird mit Essigsäureethylester extrahiert, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt.To a solution of the corresponding methyl ester (1.0 eq.) In methanol (35-40 ml / mmol) at RT is added potassium tert-butoxide (10 eq.). The mixture is stirred overnight at 60 0 C. If the reaction is incomplete, water (1.0 eq.) Is added and the mixture is stirred at 60 ° C. until complete conversion. For workup, the methanol is removed in vacuo, the residue is mixed with water and acidified with aqueous 1 N hydrochloric acid solution (pH 1). The mixture will extracted with ethyl acetate, the organic phase dried with magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo.
Beispiel IAExample IA
5-(4-Ethylphenyl)pyridin-3-carbonsäureethylester5- (4-ethylphenyl) pyridine-3-carboxylate
Nach der Allgemeinen Methode IA wurden 29 g (126 mmol) 5-Bromnicotinsäureethylester und 23 g (152 mmol, 1.2 eq.) 4-Ethylphenylboronsäure umgesetzt. Ausbeute: 32 g (82% d. Th.)According to General Method IA, 29 g (126 mmol) of ethyl 5-bromonicotinate and 23 g (152 mmol, 1.2 eq.) Of 4-ethylphenylboronic acid were reacted. Yield: 32 g (82% of theory)
LC-MS (Methode 6B): R, = 3.80 min; MS (ESIpos): m/z = 256 [M+H]+.LC-MS (Method 6B): R, = 3.80 min; MS (ESIpos): m / z = 256 [M + H] + .
Beispiel 2AExample 2A
5-(4-Ethylphenyl)piperidin-3-carbonsäureethylester [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]Ethyl 5- (4-ethylphenyl) piperidine-3-carboxylate [racemic cis / trans isomer mixture]
Nach der Allgemeinen Methode 2A wurden 24 g (71 mmol) 5-(4-Ethylphenyl)pyridin-3- carbonsäureethylester hydriert. Ausbeute: 15 g (81% d. Th.)According to General Method 2A, 24 g (71 mmol) of ethyl 5- (4-ethylphenyl) pyridine-3-carboxylate were hydrogenated. Yield: 15 g (81% of theory)
LC-MS (Methode 7B): R4 = 1.78 min und 1.91 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 262 [M+H]+.LC-MS (Method 7B): R 4 = 1.78 min and 1.91 min (cis / trans isomers); MS (ESIpos): m / z = 262 [M + H] + .
Beispiel 3AExample 3A
5-(4-Ethylphenyl)-l-(moφholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carbonsäureethylester [racemisches eis-/ trans-Isomerengemisch] Ethyl 5- (4-ethylphenyl) -1- (4-chloro-4-ylcarbonyl) piperidine-3-carboxylate [racemic cis / trans isomer mixture]
Nach der Allgemeinen Methode 3A wurden 10.0 g (36.0 mmol) 5-(4-Ethylphenyl)piperidin-3- carbonsäureethylester mit 7.0 g (46.8 mmol, 1.3 eq.) Morpholin-4-carbonylchlorid umgesetzt. Ausbeute: 12.0 g (89% d. Th.)According to General Method 3A, 10.0 g (36.0 mmol) of ethyl 5- (4-ethylphenyl) piperidine-3-carboxylate were reacted with 7.0 g (46.8 mmol, 1.3 eq.) Of morpholine-4-carbonyl chloride. Yield: 12.0 g (89% of theory)
LC-MS (Methode 2B): R, = 2.38 min und 2.48 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 375 [M+H]+.LC-MS (Method 2B): R, = 2.38 min and 2.48 min (cis / trans isomers); MS (ESIpos): m / z = 375 [M + H] + .
Beispiel 4AExample 4A
5-(4-Ethylphenyl)- 1 -(morpholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-Isomer]5- (4-Ethylphenyl) -1- (morpholin-4-ylcarbonyl) piperidine-3-carboxylic acid [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 4A wurden 3.4 g (11.7 mmol) 5-(4-Ethylphenyl)-l-(morpholin-4- ylcarbonyl)piperidin-3-carbonsäureethylester (Beispiel 3A) verseift. Die Reaktion führte selektiv zum cis-Isomer. Ausbeute: 3.2 g (89% d. Th.)According to General Method 4A, 3.4 g (11.7 mmol) of ethyl 5- (4-ethylphenyl) -1- (morpholin-4-ylcarbonyl) piperidine-3-carboxylate (Example 3A) were saponified. The reaction selectively led to the cis isomer. Yield: 3.2 g (89% of theory)
LC-MS (Methode 2B): R, = 2.06 min; MS (ESIpos): m/z = 347 [M+H]+.LC-MS (Method 2B): R, = 2.06 min; MS (ESIpos): m / z = 347 [M + H] + .
Beispiel 5AExample 5A
[3-(4-Ethylphenyl)-5-(hydroxymethyl)piperidin-l-yl](moφholin-4-yl)methanon [racemisches cis- Isomer] [3- (4-Ethylphenyl) -5- (hydroxymethyl) piperidin-1-yl] (4-methyl-4-yl) methanone [racemic cis isomer]
Unter Argon wurden 218 mg (5.77 mmol) Natriumborhydrid in 28 ml Tetrahydrofuran vorgelegt und bei 00C tropfenweise mit einer Lösung von 1.00 g (2.89 mmol) 5-(4-Ethylphenyl)-l- (morpholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis-Isomer] in 14.0 ml Tetrahydrofuran versetzt. Anschließend wurde 0.98 ml (7.74 mmol) Bortrifluorid-Diethylether- Komplex zugesetzt und über Nacht gerührt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von IN wässriger Hydrogenchlorid-Lösung beendet, mit Wasser versetzt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 917 mg (95% d. Th.)Under argon, 218 mg (5.77 mmol) of sodium borohydride introduced in 28 ml of tetrahydrofuran and, at 0 0 C was treated dropwise with a solution of 1.00 g (2.89 mmol) of 5- (4-ethylphenyl) -l- (morpholin-4-ylcarbonyl) piperidine 3-carboxylic acid [racemic cis isomer] in 14.0 ml of tetrahydrofuran. Subsequently, 0.98 ml (7.74 mmol) of boron trifluoride-diethyl ether complex was added and stirred overnight. The reaction was quenched by the addition of 1N aqueous hydrogen chloride solution, water added and extracted with dichloromethane. The organic phase was dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. Yield: 917 mg (95% of theory)
LC-MS (Methode 3B): R, = 1.95 min; MS (ESIpos): m/z = 333 [M+H]+.LC-MS (Method 3B): R, = 1.95 min; MS (ESIpos): m / z = 333 [M + H] + .
Beispiel 6AExample 6A
5-(4-Ethylphenyl)-l-(moφholin-4-ylcarbonyl)piperidin-3-carbaldehyd [racemisches cis/trans- Isomerengemisch]5- (4-Ethylphenyl) -1- (4-fluoro-4-ylcarbonyl) piperidine-3-carbaldehyde [racemic cis / trans isomer mixture]
105 mg (0.316 mmol) des Alkohols aus Beispiel 5A in 1.5 ml Dichlormethan wurden bei RT mit 161 mg (0.379 mmol) Dess-Martin Periodinan versetzt und anschließend 1 h gerührt. Die Reaktionslösung wurde mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung extrahiert, die wässrige Phase nochmals mit Dichlormethan gewaschen und die vereinigten organischen Phasen über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Verbindung wurde ohne weitere Reinigung in der Folgestufe eingesetzt. Ausbeute: ca. 80.0 mg (77% d. Th.)105 mg (0.316 mmol) of the alcohol from Example 5A in 1.5 ml of dichloromethane were admixed at RT with 161 mg (0.379 mmol) of Dess-Martin Periodinan and then stirred for 1 h. The reaction solution was extracted with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, the aqueous phase was washed again with dichloromethane and the combined organic phases dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The compound was used without further purification in the next step. Yield: about 80.0 mg (77% of theory)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.85 und 2.21 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 331 [M+H]+.LC-MS (Method 2B): R, = 1.85 and 2.21 min (cis / trans isomers); MS (ESIpos): m / z = 331 [M + H] + .
Beispiel 7AExample 7A
5 -[4-(Trifluormethy l)pheny 1] pyr id in-3 -carbonsäuremethy lester5 - [4- (trifluoromethyl) phenyl] pyrid in 3-carboxylic acid methyl ester
Nach der Allgemeinen Methode IA wurden 28 g (132 mmol) 5-Bromnicotinsäuremethylester und 30 g (158 mmol, 1.2 eq.) 4-Trifluormethylphenylboronsäure umgesetzt. Ausbeute: 32 g (85% d. Th.)According to General Method IA, 28 g (132 mmol) of 5-bromonicotinic acid methyl ester and 30 g (158 mmol, 1.2 eq.) Of 4-trifluoromethylphenylboronic acid were reacted. Yield: 32 g (85% of theory)
LC-MS (Methode 8B): R, = 2.27 min; MS (ESIpos): m/z = 282 [M+H]+.LC-MS (Method 8B): R, = 2.27 min; MS (ESIpos): m / z = 282 [M + H] + .
Beispiel 8AExample 8A
5-[4-(Trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester [racemisches cis-/trans- Isomerengemisch]Methyl 5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidine-3-carboxylate [racemic cis / trans isomer mixture]
Nach der Allgemeinen Methode 2A wurden 32 g (112 mmol) 5-[4-(Trifluormethyl)phenyl]- pyridin-3-carbonsäuremethylester hydriert. Ausbeute: 26 g (82% d. Th.)According to General Method 2A, 32 g (112 mmol) of methyl 5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -pyridine-3-carboxylate were hydrogenated. Yield: 26 g (82% of theory)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.35 und 1.41 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 288 [M+H]+. Beispiel 9ALC-MS (Method 2B): R, = 1.35 and 1.41 min (cis / trans isomers); MS (ESIpos): m / z = 288 [M + H] + . Example 9A
l-(Moφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäuremethylester [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch]methyl (4-chloromethyl-4-ylcarbonyl) -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidine-3-carboxylate [racemic cis / trans isomer mixture]
Nach der Allgemeinen Methode 3A wurden 9.25 g (32.2 mmol) 5-[4-(Trifluormethyl)phenyl]- piperidin-3-carbonsäuremethylester mit 9.63 g (64.7 mmol) Morpholin-4-carbonylchlorid umgesetzt. Man erhielt so 16.3 g Rohprodukt in 76%-iger Reinheit (LC-MS), welches ohne weitere Reinigungsoperationen umgesetzt wurde.According to General Method 3A, 9.25 g (32.2 mmol) of 5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -piperidine-3-carboxylic acid methyl ester were reacted with 9.63 g (64.7 mmol) of morpholine-4-carbonyl chloride. This gave 16.3 g of crude product in 76% purity (LC-MS), which was reacted without further purification operations.
LC-MS (Methode 9B): R, = 1.19 und 1.22 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 401 [M+H]+.LC-MS (Method 9B): R, = 1.19 and 1.22 min (cis / trans isomers); MS (ESIpos): m / z = 401 [M + H] + .
Beispiel IQAExample IQA
l-(Moφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-3-carbonsäure [racemisches cis- Isomer]1- (Moholoquin-4-ylcarbonyl) -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidine-3-carboxylic acid [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 4A wurden 22.19 g (39.90 mmol) der Verbindung aus Beispiel 10A und 44.78 g (399.0 mmol) Kalium-/er/.-butylat umgesetzt. Die Reaktion führte selektiv zum cis-Isomer. Ausbeute: 18.29 g (100% d. Th.)According to General Method 4A, 22.19 g (39.90 mmol) of the compound from Example 10A and 44.78 g (399.0 mmol) of potassium / tert-butylate were reacted. The reaction selectively led to cis isomer. Yield: 18.29 g (100% of theory)
LC-MS (Methode 7B): R, = 1.95 min; MS (ESIpos): m/z = 387 [M+H]+.LC-MS (method 7B): R, = 1.95 min; MS (ESIpos): m / z = 387 [M + H] + .
Beispiel IIAExample IIA
{3-(Hydroxymethyl)-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(moφholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]{3- (Hydroxymethyl) -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl} (4-methyl-4-yl) methanone [racemic cis isomer]
Unter Argon wurden 1.33 g (35.1 mmol) Natriumborhydrid in 150 ml Tetrahydrofuran vorgelegt und bei 00C tropfenweise mit einer Lösung von 7.00 g (17.6 mmol) {3-(Hydroxymethyl)-5-[4- (trifluormethyl)phenyl] piperidin-l-yl}(morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] in 4.0 ml Tetrahydrofuran versetzt. Anschließend wurden 6.0 ml (47.4 mmol) Bortrifluorid-Diethylether- Komplex zugesetzt und über Nacht gerührt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von IN wässriger Hydrogenchlorid-Lösung beendet, mit Wasser versetzt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 6.49 g (99% d. Th.)Under argon 1:33 g (35.1 mmol) of sodium borohydride introduced into 150 ml of tetrahydrofuran and, at 0 0 C was treated dropwise with a solution of 7:00 g (17.6 mmol) {3- (hydroxymethyl) -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidine l-yl} (morpholin-4-yl) methanone [racemic cis isomer] in 4.0 ml of tetrahydrofuran. Subsequently, 6.0 ml (47.4 mmol) of boron trifluoride-diethyl ether complex were added and the mixture was stirred overnight. The reaction was quenched by the addition of 1N aqueous hydrogen chloride solution, water added and extracted with dichloromethane. The organic phase was dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. Yield: 6.49 g (99% of theory)
LC-MS (Methode IB): R, = 1.06 min; MS (ESIpos): m/z = 373 [M+H]+.LC-MS (Method IB): R, = 1.06 min; MS (ESIpos): m / z = 373 [M + H] + .
Beispiel 12AExample 12A
l-(Moφholin-4-ylcarbonyl)-5-[4-(trifluormethyl)cyclohexa-l,5-dien-l-yl]piperidin-3-carbaldehyd [racemisches cis-/trans-Isomerengemisch] 1- (4-Methylphenyl) -5- [4- (trifluoromethyl) cyclohexa-1,1-dien-1-yl] -piperidine-3-carbaldehyde [racemic cis / trans isomer mixture]
Unter Argon wurde eine Lösung von 3.00 g (8.06 mmol) des Alkohols aus Beispiel 12A in 180 ml Dichlormethan mit 5.72 ml (80.6 mmol) Dimethylsulfoxid und 7.02 ml (40.3 mmol) N^V- Diisopropylethylamin versetzt. Anschließend wurden bei -200C 5.13 g (32.2 mmol) Schwefeltrioxid-Pyridin-Komplex zugegeben und über Nacht gerührt wobei langsam auf RT erwärmt wurde. Aufgrund unvollständigen Umsatzes wurde erneut auf -200C gekühlt und 2.56 g (16.1 mmol) Schwefeltrioxid-Pyridin-Komplex, 2.86 ml (40.3 mmol) Dimethylsulfoxid und 3.51 ml (20.1 mmol) N.N'-Diisopropylethylamin zugegeben. Es wurde langsam auf RT erwärmt und anschließend die Reaktionslösung mit Dichlormethan verdünnt, mit Wasser gewaschen, und die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach Filtration und Einengen im Vakuum wurde das Rohprodukt mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 1.54 g (45% d. Th.)A solution of 3.00 g (8.06 mmol) of the alcohol from Example 12A in 180 ml of dichloromethane with 5.72 ml (80.6 mmol) of dimethyl sulfoxide and 7.02 ml (40.3 mmol) of N, N-diisopropylethylamine was added under argon. 5.13 g (32.2 mmol) of sulfur trioxide-pyridine complex were then added at -20 0 C and stirred overnight was being slowly warmed to RT. Due to incomplete conversion was cooled again to -20 0 C and 2.56 g (16.1 mmol) of sulfur trioxide-pyridine complex, 2.86 ml (40.3 mmol) of dimethyl sulfoxide and 3.51 ml (20.1 mmol) of N.N'-diisopropylethylamine was added. It was slowly warmed to RT and then the reaction solution diluted with dichloromethane, washed with water, and the organic phase dried over magnesium sulfate. After filtration and concentration in vacuo, the crude product was purified by preparative HPLC. Yield: 1.54 g (45% of theory)
LC-MS (Methode 5B): R, = 0.86 und 1.00 min (cis-/trans-Isomere); MS (ESIpos): m/z = 371 [M+H]+.LC-MS (Method 5B): R, = 0.86 and 1.00 min (cis / trans isomers); MS (ESIpos): m / z = 371 [M + H] + .
Beispiel 13AExample 13A
Diethyl-[(5-phenylpyridin-2-yl)methyl]phosphonatDiethyl - phosphonate [(5-phenyl-pyridin-2-yl) methyl]
200 mg (0.649 mmol) Diethyl-[(5-brompyridin-2-yl)rnethyl]phosphonat [M. V. Chelliah et al., J. Med. Chem. 2007, 21, 5147-5160] in 16.5 ml 1 ,2-Dimethoxyethan wurden mit 37.5 mg (0.032 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium versetzt. Anschließend wurden 119 mg (0.974 mmol) Phenylboronsäure sowie 166 mg (1.98 mmol) Natriumhydrogencarbonat in 7.5 ml Wasser zugegeben. Nach 2 h Rühren unter Rückfluss wurde die Reaktionslösung im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 100 mg (50% d. Th.)200 mg (0.649 mmol) of diethyl [(5-bromopyridin-2-yl) methyl] phosphonate [MV Chelliah et al., J. Med. Chem. 2007, 21, 5147-5160] in 16.5 ml of 1,2-dimethoxyethane were treated with 37.5 mg (0.032 mmol) tetrakis (triphenylphosphine) palladium. Thereafter, 119 mg (0.974 mmol) of phenylboronic acid and 166 mg (1.98 mmol) of sodium bicarbonate in 7.5 ml of water were added. After 2 h of stirring under reflux, the reaction solution was concentrated in vacuo, the residue taken up in ethyl acetate and washed with saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase was dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by preparative HPLC. Yield: 100 mg (50% of theory)
LC-MS (Methode 2B): R, = 1.87 min; MS (ESIpos): m/z = 306 [M+H]+.LC-MS (Method 2B): R, = 1.87 min; MS (ESIpos): m / z = 306 [M + H] + .
Beispiel 14AExample 14A
Diethyl- { [5-(2-methoxyphenyl)pyridin-2-yl]methyl} phosphonatDiethyl {[5- (2-methoxyphenyl) pyridin-2-yl] methyl} phosphonate
200 mg (0.649 mmol) Diethyl-[(5-brompyridin-2-yl)methyl]phosphonat [M. V. Chelliah et al., J. Med. Chem. 2007, 21, 5147-5160] in 16.5 ml 1 ,2-Dimethoxyethan wurden mit 37.5 mg (0.032 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium versetzt. Anschließend wurden 148 mg (0.974 mmol) 2-Methoxyphenylboronsäure sowie 166 mg (1.98 mmol) Natriumhydrogencarbonat in 7.5 ml Wasser zugegeben. Nach 2 h Rühren unter Rückfluss wurde die Reaktionslösung im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 174 mg (72% d. Th.)200 mg (0.649 mmol) diethyl [(5-bromopyridin-2-yl) methyl] phosphonate [M. Chelliah et al., J. Med. Chem. 2007, 21, 5147-5160] in 16.5 ml of 1,2-dimethoxyethane were treated with 37.5 mg (0.032 mmol) of tetrakis (triphenylphosphine) palladium. Then 148 mg (0.974 mmol) of 2-methoxyphenylboronic acid and 166 mg (1.98 mmol) of sodium bicarbonate in 7.5 ml of water were added. After 2 h of stirring under reflux, the reaction solution was concentrated in vacuo, the residue taken up in ethyl acetate and washed with saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase was dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by preparative HPLC. Yield: 174 mg (72% of theory)
LC-MS (Methode IB): R. = 1.04 min; MS (ESIpos): m/z = 336 [M+H]+.LC-MS (method IB): R. = 1.04 min; MS (ESIpos): m / z = 336 [M + H] + .
Beispiel 15AExample 15A
Diethyl-{[5-(3-chlorphenyl)pyridin-2-yl]methyl}phosphonat Diethyl - {[5- (3-chlorophenyl) pyridin-2-yl] methyl} phosphonate
200 mg (0.649 mmol) Diethyl-[(5-brompyridin-2-yl)methyl]phosphonat [M. V. Chelliah et al., J.200 mg (0.649 mmol) diethyl [(5-bromopyridin-2-yl) methyl] phosphonate [M. V. Chelliah et al., J.
Med. Chem. 2007, 21, 5147-5160] in 16.5 ml 1,2-Dimethoxyethan wurden mit 37.5 mg (0.032 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium versetzt. Anschließend wurden 152 mg (0.974 mmol) 2-Chlorphenylboronsäure sowie 166 mg (1.98 mmol) Natriumhydrogencarbonat in 7.5 ml Wasser zugegeben. Nach 2 h Rühren unter Rückfluss wurde die Reaktionslösung im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und imMed. Chem. 2007, 21, 5147-5160] in 16.5 ml of 1,2-dimethoxyethane were mixed with 37.5 mg (0.032 mmol) of tetrakis (triphenylphosphine) palladium. Subsequently, 152 mg (0.974 mmol) of 2-chlorophenylboronic acid and 166 mg (1.98 mmol) of sodium bicarbonate in 7.5 ml of water were added. After 2 h of stirring under reflux, the reaction solution was concentrated in vacuo, the residue taken up in ethyl acetate and washed with saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase was dried over magnesium sulfate, filtered and im
Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels präparativer HPLC gereinigt. Ausbeute: 166 mg (75% d. Th.)Vacuum concentrated. The crude product was purified by preparative HPLC. Yield: 166 mg (75% of theory)
LC-MS (Methode 10B): R, = 1.77 min; MS (ESIpos): m/z = 340 [M+H]+. LC-MS (Method 10B): R, = 1.77 min; MS (ESIpos): m / z = 340 [M + H] + .
AusfiihrungsbeispieleAusfiihrungsbeispiele
Allgemeine Methode 1: Horner-Wadsworth-Emmons ReaktionGeneral Method 1: Horner-Wadsworth-Emmons reaction
Eine Lösung aus dem entsprechenden Phosphonat (1.2 eq.) in Tetrahydrofuran (5-10 ml/mmol) wird unter Argon bei 00C tropfenweise mit «-Butyllithium (1.1 eq., 2.5 M in «-Hexan) versetzt. Nach 10 min wird der Aldehyd (1.0 eq.) in Tetrahydrofuran (5-10 ml/mmol) zugegeben und anschließend über Nacht gerührt, wobei die Reaktionslösung langsam auf RT erwärmt wird. DieA solution of the corresponding phosphonate (1.2 eq.) In tetrahydrofuran (5-10 ml / mmol) is treated under argon at 0 0 C dropwise with "-Butyllithium (1.1 eq., 2.5 M in" -hexane). After 10 minutes, the aldehyde (1.0 eq.) In tetrahydrofuran (5-10 ml / mmol) is added and then stirred overnight while the reaction solution is slowly warmed to RT. The
Reaktion wird durch langsame Zugabe von gesättigter, wässriger Ammoniumchlorid-Lösung beendet, mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat oder Dichlormethan extrahiert. Die organischeReaction is terminated by slow addition of saturated aqueous ammonium chloride solution, diluted with water and extracted with ethyl acetate or dichloromethane. The organic
Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird mittels präparativer HPLC gereinigt.Phase is dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The crude product is purified by preparative HPLC.
Beispiel 1example 1
{3-(4-Ethylphenyl)-5-[(£)-2-{5-[3-(trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl}vinyl]piperidin-l-yl}- (morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]{3- (4-Ethylphenyl) -5 - [(ε) -2- {5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} vinyl] piperidin-1-yl} - (morpholin-4-yl ) methanone [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 108 mg (0.291 mmol) Diethyl-({5-[3- (trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl}methyl)phosphonat [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] und 80.0 mg (ca. 0.242 mmol) der Verbindung aus Beispiel 6A umgesetzt. Ausbeute: 58 mg (44% d. Th.)According to General Method 1, 108 mg (0.291 mmol) of diethyl ({5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} methyl) phosphonate [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] and 80.0 mg (about 0.242 mmol) of the compound of Example 6A. Yield: 58 mg (44% of theory)
LC-MS (Methode 2B): R, = 3.10 min; MS (ESIpos): m/z = 550 [M+H]+;LC-MS (Method 2B): R, = 3.10 min; MS (ESIpos): m / z = 550 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.92 (s, 1 H), 8.16 (dd, 3 H), 8.07 (br s, 2 H), 7.83-7.68 (m, 2 H), 7.54 (d, 1 H), 7.27-7.20 (m, 2 H), 7.20-7.14 (m, 2 H), 6.83 (dd, 1 H), 6.72 - 6.62 (m, 1 H), 3.78 (d, 1 H), 3.64 (d, 1 H), 3.58 (br s, 4 H), 3.17 (br s, 4 H), 2.86-2.69 (m, 3 H), 2.62-2.54 (m, 3 H), 2.03 (br s, 1 H), 1.76-1.62 (m, 1 H), 1.17 (t, 3 H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.92 (s, 1H), 8.16 (dd, 3H), 8.07 (br s, 2H), 7.83-7.68 (m, 2H) , 7.54 (d, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 2H), 6.83 (dd, 1H), 6.72-6.62 (m, 1H), 3.78 (d, 1H), 3.64 (d, 1H), 3.58 (br s, 4H), 3.17 (br s, 4H), 2.86-2.69 (m, 3H), 2.62-2.54 (m, 3 H), 2.03 (brs, 1H), 1.76-1.62 (m, 1H), 1.17 (t, 3H).
Beispiel 2Example 2
Moφholin-4-yl{3-[4-(trifluormethyl)phenyl]-5-[(£)-2-{5-[3-(trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl} vinyl]piperidin-l-yl}methanon [racemisches cis-Isomer]Moφholin-4-yl {3- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -5 - [(ε) -2- {5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} vinyl] piperidin-1-yl } methanone [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 148 mg (0.389 mmol) Diethyl-({5-[3- (trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl}methyl)phosphonat [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] und 120 mg (0.324 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels Diastereomerentrennung nach Methode IA gereinigt. Ausbeute: 109 mg (57% d. Th.)According to General Method 1, 148 mg (0.389 mmol) of diethyl ({5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} methyl) phosphonate [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] and 120 mg (0.324 mmol) of the compound of Example 12A. The crude product was purified by diastereomer separation according to method IA. Yield: 109 mg (57% of theory)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.37 min; MS (ESIpos): m/z = 590 [M+H]+;LC-MS (Method 5B): R, = 1.37 min; MS (ESIpos): m / z = 590 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.92 (d, 1 H), 8.16 (dd, 1 H), 8.07 (br s, 2 H), 7.81-7.66 (m, 4 H), 7.63-7.48 (m, 3 H), 6.92-6.77 (m, 1 H), 6.74-6.62 (m, 1 H), 3.78 (d, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (d, 4 H), 3.19 (br s, 4 H), 3.07-2.84 (m, 2 H), 2.83-2.71 (m, 1 H), 2.61 (d, 3 H), 2.11 (br s, 1 H), 1.75 (q, I H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.92 (d, 1 H), 8.16 (dd, 1 H), 8.07 (br s, 2 H), 7.81-7.66 (m, 4 H) , 7.63-7.48 (m, 3H), 6.92-6.77 (m, 1H), 6.74-6.62 (m, 1H), 3.78 (d, 1H), 3.68 (d, 1H), 3.58 (i.e. , 4H), 3.19 (br s, 4H), 3.07-2.84 (m, 2H), 2.83-2.71 (m, 1H), 2.61 (d, 3H), 2.11 (br s, 1H) , 1.75 (q, IH).
Beispiel 3Example 3
Moφholin-4-yl{3-[4-(trifluormethyl)phenyl]-5-[(£)-2-{5-[3-(trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl} vinyl]piperidin-l-yl}methanon [racemisches trans-Isomer] Moφholin-4-yl {3- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -5 - [(ε) -2- {5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} vinyl] piperidin-1-yl } methanone [racemic trans isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 148 mg (0.389 mmol) Diethyl-({5-[3- (trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl}methyl)phosphonat [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] und 120 mg (0.324 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels Diastereomerentrennung nach Methode IA gereinigt. Ausbeute: 20.7 mg (10% d. Th.)According to General Method 1, 148 mg (0.389 mmol) of diethyl ({5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} methyl) phosphonate [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] and 120 mg (0.324 mmol) of the compound of Example 12A. The crude product was purified by diastereomer separation according to method IA. Yield: 20.7 mg (10% of theory)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.35 min; MS (ESIpos): m/z = 590 [M+H]+;LC-MS (Method 5B): R, = 1.35 min; MS (ESIpos): m / z = 590 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.93 (d, 1 H), 8.19 (dd, 1 H), 8.08 (br s, 2 H), 7.81-7.67 (m, 4 H), 7.61-7.54 (m, 3 H), 7.02 (dd, 1 H), 6.70 (d, 1 H), 3.71-3.38 (m, 6 H), 3.33 (dd, 1 H), 3.27-3.12 (m, 4 H), 3.11-3.01 (m, 2 H), 2.80 (br s, 1 H), 2.23-2.09 (m, 1 H), 2.09-1.98 (m, 1 H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.93 (d, 1 H), 8.19 (dd, 1 H), 8.08 (br s, 2 H), 7.81-7.67 (m, 4 H) , 7.61-7.54 (m, 3H), 7.02 (dd, 1H), 6.70 (d, 1H), 3.71-3.38 (m, 6H), 3.33 (dd, 1H), 3.27-3.12 (m , 4H), 3.11-3.01 (m, 2H), 2.80 (br s, 1H), 2.23-2.09 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 1H).
Beispiel 4Example 4
Moφholin-4-yl(3-{(Z)-2-[3'-(trifluormethyl)biphenyl-4-yl]vinyl}-5-[4-(trifluormethyl)phenyl] piperidin-l-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] Moφholin-4-yl (3 - {(Z) -2- [3 '- (trifluoromethyl) biphenyl-4-yl] vinyl} -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl) methanone [racemic cis-isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 148 mg (0.389 mmol) Diethyl-({5-[3- (trifluormethyl)phenyl]pyridin-2-yl}methyl)phosphonat [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] und 120 mg (0.324 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels Diastereomerentrennung nach Methode IA gereinigt. Ausbeute: 7.0 mg (4% d. Th.)According to General Method 1, 148 mg (0.389 mmol) of diethyl ({5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} methyl) phosphonate [M. C. Clasby et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 129-138] and 120 mg (0.324 mmol) of the compound of Example 12A. The crude product was purified by diastereomer separation according to method IA. Yield: 7.0 mg (4% of theory)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.43 min; MS (ESIpos): m/z = 590 [M+H]+;LC-MS (Method 5B): R, = 1.43 min; MS (ESIpos): m / z = 590 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.98 (d, 1 H), 8.20 (dd, 1 H), 8.10 (br s, 2 H), 7.82-7.72 (m, 2 H), 7.69 (d, 2 H), 7.59-7.48 (m, 3 H), 6.57 (d, 1 H), 5.73 (dd, 1 H), 3.83 (d, 1 H), 3.75-3.65 (m, 2 H), 3.51 (t, 5 H), 3.20 (d, 4 H), 3.00-2.89 (m, 1 H), 2.89-2.80 (m, 1 H), 2.79-2.71 (m, 1 H), 2.05 (d, I H), 1.66 (q, I H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.98 (d, 1 H), 8.20 (dd, 1 H), 8.10 (br s, 2 H), 7.82-7.72 (m, 2 H) , 7.69 (d, 2H), 7.59-7.48 (m, 3H), 6.57 (d, 1H), 5.73 (dd, 1H), 3.83 (d, 1H), 3.75-3.65 (m, 2 H), 3.51 (t, 5H), 3.20 (d, 4H), 3.00-2.89 (m, 1H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.79-2.71 (m, 1H), 2.05 (d, IH), 1.66 (q, IH).
Beispiel 5Example 5
Moφholin-4-yl{3-[4-(trifluormethyl)phenyl]-5-[(^T)-2-{5-[3-(trifluormethyl)phenyl]pyridin-2- yl } vinyl]piperidin- 1 -yl} methanon [enantiomerenreines cis-Isomer] Moφholin-4-yl {3- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -5 - [(^ T) -2- {5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} vinyl] piperidine-1 - yl} methanone [enantiomerically pure cis isomer]
Enantiomerentrennung von 70.0 mg der Verbindung aus Beispiel 2 nach Methode IC ergab 22.0 mg des Beispiels 5 (Enantiomer 1) und 22.0 mg des Beispiels 6 (Enantiomer T).Enantiomer separation of 70.0 mg of the compound from Example 2 according to Method IC gave 22.0 mg of Example 5 (Enantiomer 1) and 22.0 mg of Example 6 (Enantiomer T).
HPLC (Methode ID): R, = 4.19 min, >99.0% ee;HPLC (Method ID): R, = 4.19 min,> 99.0% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.92 (d, 1 H), 8.16 (dd, 1 H), 8.07 (br s, 2 H), 7.84-7.65 (m, 4 H), 7.63-7.44 (m, 3 H), 6.97-6.76 (m, 1 H), 6.74-6.62 (m, 1 H), 3.78 (d, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (br s, 4 H), 3.19 (br s, 4 H), 3.04-2.94 (m, 1 H), 2.94-2.85 (m, 1 H), 2.83-2.73 (m, 1 H), 2.60 (br s, I H), 2.09 (d, I H), 1.75 (q, I H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.92 (d, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.07 (br s, 2H), 7.84-7.65 (m, 4H) , 7.63-7.44 (m, 3H), 6.97-6.76 (m, 1H), 6.74-6.62 (m, 1H), 3.78 (d, 1H), 3.68 (d, 1H), 3.58 (br s, 4H), 3.19 (br s, 4H), 3.04-2.94 (m, 1H), 2.94-2.85 (m, 1H), 2.83-2.73 (m, 1H), 2.60 (br s, IH), 2.09 (d, IH), 1.75 (q, IH).
Beispiel 6Example 6
Morpholin-4-yl{3-[4-(trifluormethyl)phenyl]-5-[(£T)-2-{5-[3-(trifluormethyl)phenyl]pyridin-2- yl}vinyl]piperidin-l-yl}methanon [enantiomerenreines cis-Isomer]Morpholin-4-yl {3- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -5 - [(£ T) -2- {5- [3- (trifluoromethyl) phenyl] pyridin-2-yl} vinyl] piperidine-1 yl} methanone [enantiomerically pure cis isomer]
Enantiomerentrennung von 70.0 mg der Verbindung aus Beispiel 2 nach Methode IC ergab 22.0 mg des Beispiels 5 (Enantiomer 1) und 22.0 mg des Beispiels 6 (Enantiomer 2). Enantiomer separation of 70.0 mg of the compound from Example 2 according to Method IC gave 22.0 mg of Example 5 (Enantiomer 1) and 22.0 mg of Example 6 (Enantiomer 2).
HPLC (Methode ID): R1 = 5.28 min, >92.5% ee;HPLC (Method ID): R 1 = 5.28 min,> 92.5% ee;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.92 (d, 1 H), 8.16 (dd, 1 H), 8.07 (br s, 2 H), 7.83-7.66 (m, 4 H), 7.63-7.48 (m, 3 H), 6.91-6.78 (m, 1 H), 6.74-6.63 (m, 1 H), 3.78 (d, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (br s, 4 H), 3.19 (br s, 4 H), 2.97 (d, 1 H), 2.94-2.85 (m, 1 H), 2.83-2.73 (m, 1 H), 2.60 (d, 1 H), 2.09 (d, I H), 1.75 (q, I H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.92 (d, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.07 (br s, 2H), 7.83-7.66 (m, 4H) , 7.63-7.48 (m, 3H), 6.91-6.78 (m, 1H), 6.74-6.63 (m, 1H), 3.78 (d, 1H), 3.68 (d, 1H), 3.58 (br s, 4H), 3.19 (br s, 4H), 2.97 (d, 1H), 2.94-2.85 (m, 1H), 2.83-2.73 (m, 1H), 2.60 (d, 1H) , 2.09 (d, IH), 1.75 (q, IH).
Beispiel 7Example 7
(3-{(£)-2-[5-(2-Methoxyphenyl)pyridin-2-yl]vinyl}-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l- yl)(morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer](3 - {(ε) -2- [5- (2-Methoxyphenyl) pyridin-2-yl] vinyl} -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl) (morpholin-4-yl) methanone [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 163 mg (0.437 mmol) des Phosphonats aus Beispiel 14A und 135 mg (0.364 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels Diastereomerentrennung nach Methode 2A gereinigt. Ausbeute: 96.0 mg (47% d. Th.)According to General Method 1, 163 mg (0.437 mmol) of the phosphonate from Example 14A and 135 mg (0.364 mmol) of the compound from Example 12A were reacted. The crude product was purified by diastereomer separation according to method 2A. Yield: 96.0 mg (47% of theory)
LC-MS (Methode 4B): R, = 1.26 min; MS (ESIpos): m/z = 552 [M+H]+;LC-MS (Method 4B): R, = 1.26 min; MS (ESIpos): m / z = 552 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.62 (d, 1 H), 7.86 (dd, 1 H), 7.71 (d, 2 H), 7.58 (d, 2 H), 7.45 (d, 1 H), 7.42-7.33 (m, 2 H), 7.15 (d, 1 H), 7.06 (t, 1 H), 6.82-6.74 (m, 1 H), 6.67-6.61 (m, 1 H), 3.79 (s, 3 H), 3.75 (br s, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (t, 4 H), 3.23-3.14 (m, 4 H), 3.03-2.94 (m, 1 H), 2.94-2.85 (m, 1 H), 2.82-2.72 (m, 1 H), 2.65-2.57 (m, 1 H), 2.18-2.08 (m, 1 H), 2.12-2.07 (m, 1 H), 1.73 (q, I H). Beispiel 8 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.62 (d, 1H), 7.86 (dd, 1H), 7.71 (d, 2H), 7.58 (d, 2H), 7.45 ( d, 1H), 7.42-7.33 (m, 2H), 7.15 (d, 1H), 7.06 (t, 1H), 6.82-6.74 (m, 1H), 6.67-6.61 (m, 1H ), 3.79 (s, 3 H), 3.75 (br s, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (t, 4 H), 3.23-3.14 (m, 4 H), 3.03-2.94 (m , 1H), 2.94-2.85 (m, 1H), 2.82-2.72 (m, 1H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.18-2.08 (m, 1H), 2.12-2.07 (m , 1 H), 1.73 (q, IH). Example 8
Moφholin-4-yl{3-[(j?)-2-(5-phenylpyridin-2-yl)vinyl]-5-[4-(trifluoπnethyl)phenyl]piperidin-l- yl}methanon [racemisches cis-Isomer]Moφholin-4-yl {3 - [(j?) - 2- (5-phenylpyridin-2-yl) vinyl] -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl} methanone [racemic cis isomer ]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 100 mg (0.321 mmol) des Phosphonats aus Beispiel 13 A und 99 mg (0.267 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Produkt wurde durch Ausrühren des Rohprodukts in Acetonitril erhalten. Ausbeute: 82.0 mg (58% d. Th.)According to General Method 1, 100 mg (0.321 mmol) of the phosphonate from Example 13A and 99 mg (0.267 mmol) of the compound from Example 12A were reacted. The product was obtained by stirring the crude product in acetonitrile. Yield: 82.0 mg (58% of theory)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.27 min; MS (ESIpos): m/z = 522 [M+H]+;LC-MS (Method 5B): R, = 1.27 min; MS (ESIpos): m / z = 522 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.84 (d, 1 H), 8.04 (dd, 1 H), 7.72 (dd, 4 H), 7.58 (d, 2 H), 7.53-7.46 (m, 3 H), 7.46-7.37 (m, 1 H), 6.85-6.76 (m, 1 H), 6.70-6.60 (m, 1 H), 3.78 (d, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (br s, 4 H), 3.19 (br s, 4 H), 3.02-2.85 (m, 1 H), 2.82-2.71 (m, 1 H), 2.09 (d, 1 H), 1.74 (q, I H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.84 (d, 1H), 8.04 (dd, 1H), 7.72 (dd, 4H), 7.58 (d, 2H), 7.53- 7.46 (m, 3H), 7.46-7.37 (m, 1H), 6.85-6.76 (m, 1H), 6.70-6.60 (m, 1H), 3.78 (d, 1H), 3.68 (d, 1 H), 3.58 (br s, 4 H), 3.19 (br s, 4 H), 3.02-2.85 (m, 1 H), 2.82-2.71 (m, 1 H), 2.09 (d, 1 H), 1.74 (q, IH).
Beispiel 9Example 9
(3-{(£)-2-[5-(3-Chloφhenyl)pyridin-2-yl]vinyl}-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l- yl)(morpholin-4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer] (3 - {(ε) -2- [5- (3-chlorophenyl) pyridin-2-yl] vinyl} -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl) (morpholin-4-yl) methanone [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 165 mg (0.486 mmol) des Phosphonats aus Beispiel 15A und 150 mg (0.405 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Ausbeute: 82.0 mg (58% d. Th.)According to General Method 1, 165 mg (0.486 mmol) of the phosphonate from Example 15A and 150 mg (0.405 mmol) of the compound from Example 12A were reacted. Yield: 82.0 mg (58% of theory)
LC-MS (Methode 5B): R, = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 556 [M+H]+;LC-MS (Method 5B): R, = 1.34 min; MS (ESIpos): m / z = 556 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.87 (d, 1 H), 8.09 (dd, 1 H), 7.83 (s, 1 H), 7.75-7.64 (m, 3 H), 7.58 (d, 2 H), 7.55-7.44 (m, 3 H), 6.87-6.78 (m, 1 H), 6.73-6.61 (m, 1 H), 3.77 (d, 1 H), 3.68 (d, 1 H), 3.57 (d, 4 H), 3.19 (br s, 4 H), 3.04-2.94 (m, 1 H), 2.94-2.84 (m, 1 H), 2.83-2.72 (m, 1 H), 2.60 (d, 1 H), 2.08 (d, 1 H), 1.74 (q, 1 H). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.87 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.75-7.64 (m, 3H), 7.58 (d, 2H), 7.55-7.44 (m, 3H), 6.87-6.78 (m, 1H), 6.73-6.61 (m, 1H), 3.77 (d, 1H), 3.68 (d, 1H), 3.57 (d, 4H), 3.19 (br s, 4H), 3.04-2.94 (m, 1H), 2.94-2.84 (m, 1H), 2.83-2.72 (m, 1H) , 2.60 (d, 1H), 2.08 (d, 1H), 1.74 (q, 1H).
Beispiel 10Example 10
{3-[(J£)-2-(6-Methoxychinolin-2-yl)vinyl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}(morpholin- 4-yl)methanon [racemisches cis-Isomer]{3 - [( J ) -2- (6-Methoxyquinolin-2-yl) vinyl] -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl} (morpholin-4-yl) methanone [racemic cis -Isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 100 mg (0.324 mmol) Diethyl-[(6-methoxychinolin-2- yl)methyl]phosphonat [M. C. Clasby et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 1544-1448] und 100 mg (0.270 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Produkt wurde durch Ausrühren des Rohprodukts in Acetonitril erhalten. Ausbeute: 79.0 mg (58% d. Th.) According to General Method 1, 100 mg (0.324 mmol) of diethyl [(6-methoxyquinolin-2-yl) methyl] phosphonate [MC Clasby et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 1544-1448] and 100 mg (0.270 mmol) of the compound from Example 12A. The product was obtained by stirring the crude product in acetonitrile. Yield: 79.0 mg (58% of theory)
LC-MS (Methode IB): R, = 1.24 min; MS (ESIpos): m/z = 526 [M+H]+;LC-MS (Method IB): R, = 1.24 min; MS (ESIpos): m / z = 526 [M + H] + ;
1H-NMR (500 MHz, CHCl3-;/): δ = 7.99 (d, 1 H), 7.93 (d, 1 H), 7.60 (d, 2 H), 7.46 (d, 1 H), 7.41- 7.31 (m, 3 H), 7.05 (d, 1 H), 6.83-6.73 (m, 1 H), 6.73-6.64 (m, 1 H), 3.97-3.86 (m, 5 H), 3.70 (t, 4 H), 3.32 (d, 4 H), 3.01 (t, 1 H), 2.79 (td, 2 H), 2.73-2.61 (m, 1 H), 2.26 (d, 1 H), 1.73 (q, 1 H). 1 H-NMR (500 MHz, CHCl 3 -; /): δ = 7.99 (d, 1 H), 7.93 (d, 1 H), 7.60 (d, 2 H), 7:46 (d, 1 H), 7:41 - 7.31 (m, 3H), 7.05 (d, 1H), 6.83-6.73 (m, 1H), 6.73-6.64 (m, 1H), 3.97-3.86 (m, 5H), 3.70 (t , 4H), 3.32 (d, 4H), 3.01 (t, 1H), 2.79 (td, 2H), 2.73-2.61 (m, 1H), 2.26 (d, 1H), 1.73 (q , 1 H).
Beispiel 11Example 11
Mθφholin-4-yl{3-[(£)-2-phenylvinyl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [racemisches cis-Isomer]Mθφholin-4-yl {3 - [(ε) -2-phenylvinyl] -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl} methanone [racemic cis isomer]
Nach der Allgemeinen Methode 1 wurden 111 mg (0.486 mmol) Phenylmethanphosphorsäure- diethylester und 150 mg (0.405 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels Diastereomerentrennung nach Methode 3 A gereinigt. Ausbeute: 76.8 mg (39% d. Th.)According to General Method 1, 111 mg (0.486 mmol) of diethyl phenylmethylphosphorate and 150 mg (0.405 mmol) of the compound from Example 12A were reacted. The crude product was purified by diastereomer separation according to Method 3 A. Yield: 76.8 mg (39% of theory)
LC-MS (Methode 4B): R, = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 445 [M+H]+;LC-MS (Method 4B): R, = 1.34 min; MS (ESIpos): m / z = 445 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 7.70 (d, 2 H), 7.57 (d, 2 H), 7.42 (d, 2 H), 7.32 (t, 2 H), 7.25- 7.15 (m, 1 H), 6.52 (d, 1 H), 6.28 (dd, 1 H), 3.82-3.62 (m, 2 H), 3.61-3.42 (m, 6 H), 3.18 (d, 4 H), 3.05-2.82 (m, 2 H), 2.72 (t, 1 H), 2.05 (d, 1 H), 1.69 (q, 3 H). Beispiel 12 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 7.70 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 7.42 (d, 2H), 7.32 (t, 2H), 7.25- 7.15 (m, 1H), 6.52 (d, 1H), 6.28 (dd, 1H), 3.82-3.62 (m, 2H), 3.61-3.42 (m, 6H), 3.18 (d, 4H ), 3.05-2.82 (m, 2H), 2.72 (t, 1H), 2.05 (d, 1H), 1.69 (q, 3 H). Example 12
Moφholin-4-yl{3-[(£)-2-(pyridin-4-yl)vinyl]-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]piperidin-l-yl}methanon [racemisches cis-Isomer]Moφholin-4-yl {3 - [(ε) -2- (pyridin-4-yl) vinyl] -5- [4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidin-1-yl} methanone [racemic cis isomer]
Unter Argon wurde eine Lösung von 134 mg (0.343 mmol) Triphenyl(pyridin-4- ylmethyl)phosphoniumchlorid [P. Carsky, S. Huenig, I. Stemmler, D. Scheutzow, Liebigs Ann. Chem. 1980, 2, 291-304] in 2.0 ml Tetrahydrofuran bei 00C langsam mit 35.3 mg (0.315 mmol) Kalium-ter/.-butylat versetzt. Nach 10 min wurden 106 mg (0.286 mmol) Aldehyd aus Beispiel 12A in 3.0 ml Tetrahydrofuran zugegeben und anschließend über Nacht gerührt, wobei die Reaktionslösung langsam auf RT erwärmt wurde. Die Reaktion wurde durch langsame Zugabe von gesättigter, wässriger Ammoniumchlorid-Lösung beendet, mit Wasser verdünnt und Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Diastereomerentrennung nach Methode 4A gereinigt. Ausbeute: 51.8 mg (41% d. Th.)Under argon, a solution of 134 mg (0.343 mmol) of triphenyl (pyridin-4-ylmethyl) phosphonium chloride [P. Carsky, S. Huenig, I. Stemmler, D. Scheutzow, Liebigs Ann. Chem. 1980, 2, 291-304] in 2.0 ml of tetrahydrofuran at 0 0 C was slowly added with 35.3 mg (0.315 mmol) of potassium-ter /.- butoxide. After 10 minutes, 106 mg (0.286 mmol) of aldehyde from Example 12A in 3.0 ml of tetrahydrofuran were added and then the mixture was stirred overnight, during which the reaction solution was slowly warmed to RT. The reaction was quenched by the slow addition of saturated aqueous ammonium chloride solution, diluted with water and extracted with dichloromethane. The organic phase was dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The crude product was purified by diastereomer separation according to Method 4A. Yield: 51.8 mg (41% of theory)
LC-MS (Methode 4B): R, = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 446 [M+H]+;LC-MS (Method 4B): R, = 0.86 min; MS (ESIpos): m / z = 446 [M + H] + ;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): δ = 8.76 (d, 2 H), 7.94 (d, 2 H), 7.71 (d, 2 H), 7.57 (d, 2 H), 7.02 (dd, 1 H), 6.77 (d, 1 H), 3.81 (d, 1 H), 3.67 (d, 1 H), 3.57 (d, 4 H), 3.19 (d, 4 H), 3.05-2.87 (m, 2 H), 2.60-2.81 (m, 2 H), 2.10 (d, 1 H), 1.73 (q, 1 H), 1.87-1.61 (m, 1 H). B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-J 6 ): δ = 8.76 (d, 2H), 7.94 (d, 2H), 7.71 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 7.02 ( dd, 1H), 6.77 (d, 1H), 3.81 (d, 1H), 3.67 (d, 1H), 3.57 (d, 4H), 3.19 (d, 4H), 3.05-2.87 ( m, 2H), 2.60-2.81 (m, 2H), 2.10 (d, 1H), 1.73 (q, 1H), 1.87-1.61 (m, 1H). B) Assessment of physiological efficacy
Abkürzungen:Abbreviations:
BSA Rinderserum-AlbuminBSA bovine serum albumin
DMEM Dulbecco's Modified Eagle MediumDMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
EGTA Ethylenglykol-glykol-bis-(2-aminoäthyl)-NNN',N'-tetra-essigsäureEGTA Ethylene glycol glycol bis (2-aminoethyl) -NNN ', N'-tetra-acetic acid
FCS Fetal CaIf SerumFCS Fetal CaIf Serum
HEPES 4-(2-Hydroxyethyl)- 1 -piperazinethansulfonsäureHEPES 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinethanesulfonic acid
[3H]haTRAP tritiated high affinity thrombin receptor activating peptide[3H] haTRAP tritiated high affinity thrombin receptor activating peptide
PRP Plättchenreiches PlasmaPRP Platelet-rich plasma
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden:The suitability of the compounds according to the invention for the treatment of thromboembolic disorders can be demonstrated in the following assay systems:
1.) In vitro Assays1.) In vitro assays
l.a) Zellulärer, funktioneller in vitro-Testl.a) Cellular, functional in vitro test
Die Identifizierung von Antagonisten des humanen Protease Aktivierten Rezeptors 1 (PAR-I) sowie die Quantifizierung der Wirksamkeit der hier beschriebenen Substanzen erfolgt mit Hilfe einer rekombinanten Zelllinie. Die Zelle leitet sich ursprünglich von einer embryonalen Νierenzelle des Menschen (HEK293; ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA) ab. Die Testzelllinie exprimiert konstitutiv eine modifizierte Form des calcium- sensitiven Photoproteins Aequorin, das nach Rekonstitution mit dem Co-Faktor Coelenterazin bei Erhöhungen der freien Calcium-Konzentration im inneren mitochondrialen Kompartiment Licht emittiert (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T.; Nature 1992, 355, 325-327). Zusätzlich exprimiert die Zelle stabil den endogenen humanen PAR-I -Rezeptor sowie den endogenen purinergen Rezeptor P2Y2. Die resultierende PAR-I -Testzelle reagiert auf Stimulation des endogenen PAR-I oder P2Y2 -Rezeptors mit einer intrazellulären Freisetzung von Calcium-Ionen, die durch die resultierende Aequorin-Lumineszens mit einem geeigneten Luminometer quantifiziert werden kann (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 77, 235-237).The identification of antagonists of the human Protease Activated Receptor 1 (PAR-I) as well as the quantification of the efficacy of the substances described herein is carried out using a recombinant cell line. The cell is originally derived from a human embryonic kidney cell (HEK293, ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA). The test cell line constitutively expresses a modified form of the calcium-sensitive photoprotein aequorin which, upon reconstitution with the co-factor coelenterazine, emits light upon increases in the free calcium concentration in the inner mitochondrial compartment (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T .; Nature 1992, 355, 325-327). In addition, the cell stably expresses the endogenous human PAR-I receptor as well as the endogenous purinergic receptor P2Y2. The resulting PAR-I test cell responds to stimulation of the endogenous PAR-I or P2Y2 receptor with intracellular release of calcium ions, which can be quantified by the resulting aequorin luminescence with a suitable luminometer (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 77, 235-237).
Für die Prüfung der Substanz-Spezifität wird deren Wirkung nach Aktivierung des endogenen PAR-I -Rezeptors mit der Wirkung nach Aktivierung des endogenen purinergen P2Y2-Rezeptors verglichen, der den gleichen intrazellulären Signalweg nutzt. Testablauf: Die Zellen werden zwei Tage (48 Std.) vor dem Test in Kulturmedium (DMEM F 12, ergänzt mit 10% FCS, 2 mM Glutamine, 20 mM HEPES, 1.4 mM Pyruvat, 0.1 mg/ml Gentamycin, 0.15% Na-Bicarbonat; BioWhittaker CatJ BE04-687Q; B-4800 Verviers, Belgien) in 384-Loch- Mikrotiterplatten ausplattiert und in einem Zellinkubator (96% Luftfeuchtigkeit, 5% v/v CO2, 370C) gehalten. Am Testtag wird das Kulturmedium durch eine Tyrodelösung (in mM: 140 Natriumchlorid, 5 Kaliumchlorid, 1 Magnesiumchlorid, 2 Calciumchlorid, 20 Glucose, 20 HEPES), das zusätzlich den Co-Faktor Coelenterazin (25 μM) und Glutathion (4 mM) enthält, ausgetauscht und die Mikrotiterplatte anschließend für weitere 3-4 Stunden inkubiert. Dann werden die Testsubstanzen auf die Mikrotiterplatte pipettiert und 5 Minuten nach Übertragung der Testsubstanzen in die Wells der Mikrotiterplatte wird die Platte in das Luminometer transferiert, eine PAR-1-Agonist-Konzentration, die EC5O entspricht, zugeschossen und sofort das resultierende Lichtsignal im Luminometer gemessen. Zur Unterscheidung einer Antagonist- Substanzwirkung von einer toxischen Wirkung wird unmittelbar anschließend der endogene purinerge Rezeptor mit Agonist aktiviert (ATP, 10 μM Endkonzentration) und das resultierende Lichtsignal gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle A gezeigt:For the substance specificity test, its effect after activation of the endogenous PAR-I receptor is compared with the effect after activation of the endogenous P2Y2 purinergic receptor, which uses the same intracellular signaling pathway. Test sequence: The cells are incubated for two days (48 hours) before the test in culture medium (DMEM F 12 supplemented with 10% FCS, 2 mM glutamine, 20 mM HEPES, 1.4 mM pyruvate, 0.1 mg / ml gentamycin, 0.15% sodium). Bicarbonate, BioWhittaker CatJ BE04-687Q, B-4800 Verviers, Belgium) in 384-well microtiter plates and maintained in a cell incubator (96% humidity, 5% v / v CO 2 , 37 0 C). On the day of the test, the culture medium is treated with a Tyrodel solution (in mM: 140 sodium chloride, 5 potassium chloride, 1 magnesium chloride, 2 calcium chloride, 20 glucose, 20 HEPES) which additionally contains co-factor coelenterazine (25 μM) and glutathione (4 mM), and then incubate the microtiter plate for a further 3-4 hours. Then the test substances are pipetted onto the microtiter plate and 5 minutes after transfer of the test substances into the wells of the microtiter plate, the plate is transferred to the luminometer, a PAR-1 agonist concentration corresponding to EC 5O , and immediately the resulting light signal in the luminometer measured. To distinguish an antagonist substance effect from a toxic effect, the endogenous purinergic receptor with agonist is activated immediately afterwards (ATP, 10 μM final concentration) and the resulting light signal is measured. The results are shown in Table A:
Tabelle A:Table A:
l.b) PAR-I Rezeptor Bindungsassayl.b) PAR-I receptor binding assay
Thrombozytenmembranen werden mit 12 nM [3H]haTRAP und Testsubstanz in verschiedenen Konzentrationen in einem Puffer (50 mM Tris pH 7.5, 10 mM Magnesiumchlorid, 1 mM EGTA, 0.1% BSA) bei Raumtemperatur für 80 min inkubiert. Danach wird der Ansatz auf eine Filterplatte übertragen und zweimal mit Puffer gewaschen. Nach Zugabe von Scintillationsflüssigkeit wird die Radioaktivität auf dem Filter in einem beta-Counter vermessen.Platelet membranes are incubated with 12 nM [3H] haTRAP and test substance at various concentrations in a buffer (50 mM Tris pH 7.5, 10 mM magnesium chloride, 1 mM EGTA, 0.1% BSA) at room temperature for 80 min. Thereafter, the batch is transferred to a filter plate and washed twice with buffer. After adding scintillation fluid, the radioactivity on the filter is measured in a beta counter.
l.c) Thrombozytenaggregation in Plasmal.c) platelet aggregation in plasma
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natrium Citrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert.To determine platelet aggregation, blood from healthy volunteers of both sexes, who had not received any platelet aggregation-influencing medication within the last ten days, is used. The blood is used in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing as anticoagulant sodium citrate 3.8% (1 part citrate + 9 parts blood) included. To obtain platelet-rich plasma, the citrated whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min.
Für die Aggregationsmessungen werden Aliquots des plättchenreichen Plasmas mit aufsteigenden Konzentrationen an Prüfsubstanz 10 min bei 37°C inkubiert. Anschließend wird die Aggregation durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (TRAP6, SFLLRN) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross MJ. , TheFor the aggregation measurements, aliquots of the platelet-rich plasma are incubated with ascending concentrations of test substance at 37 ° C. for 10 min. Subsequently, the aggregation is triggered by addition of a thrombin receptor agonist (TRAP6, SFLLRN) in an aggregometer and determined by Born's turbidimetric method (Born, G.V.R., Cross MJ., The
Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt. Die SFLLRN-Aggregation of blood platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) at 37 ° C. The SFLLRN
Konzentration, die zur maximalen Aggregation führt, wird gegebenenfalls jeweils für jeden Spender individuell ermittelt.Concentration leading to maximum aggregation is determined individually for each donor, if appropriate.
Zur Berechnung der inhibitorischen Wirkung wird die maximale Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) innerhalb 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten in Gegenwart und Abwesenheit von Prüfsubstanz ermittelt und die Inhibition berechnet. Aus den Inhibitionskurven wird die Konzentration berechnet, die die Aggregation zu 50% hemmt.To calculate the inhibitory effect, the maximum increase in light transmission (amplitude of the aggregation curve in%) within 5 minutes after addition of the agonist in the presence and absence of test substance is determined and the inhibition calculated. From the inhibition curves the concentration is calculated, which inhibits the aggregation to 50%.
l.d) Thrombozytenaggregation in Pufferl.d) platelet aggregation in buffer
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert. Zu dem PRP wird ein Viertel des Volumens ACD-Puffer (44.8 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Citronensäure, 74.1 mM Glucose und 4 mM Kaliumchlorid) zugegeben und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Das Thrombozyten-Pellet wird mit Wasch- Puffer resuspendiert und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Die Thrombozyten werden in Inkubations-Puffer resuspendiert und auf 200000 Z/μl eingestellt. Vor Versuchsbeginn wird Calciumchlorid und Magnesiumchlorid, Endkonzentration je 2mM (Stammlösung 2M, 1 :1000 Verdünnung) zugegeben. Besonderheit: bei ADP-induzierter Aggregation wird nur Calciumchlorid zugegeben. Folgende Agonisten können eingesetzt werden: TRAP6-Trifluoracetat- Salz, Kollagen, Humanes α-Thrombin und U-46619. Die Konzentration des Agonisten wird zu jedem Spender ausgetestet.To determine platelet aggregation, blood from healthy volunteers of both sexes, who had not received any platelet aggregation-influencing medication within the last ten days, is used. The blood is taken in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing 3.8% anticoagulant sodium citrate (1 part citrate + 9 parts blood). To obtain platelet-rich plasma, the citrated whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min. To the PRP, one quarter of the volume of ACD buffer (44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride) is added and centrifuged at 1000 g for 10 minutes. The platelet pellet is resuspended with wash buffer and centrifuged at 1000 g for 10 minutes. The platelets are resuspended in incubation buffer and adjusted to 200,000 Z / μl. Calcium chloride and magnesium chloride, final concentration per 2 mM (stock solution 2M, 1: 1000 dilution) are added before the start of the experiment. Special feature: with ADP-induced aggregation only calcium chloride is added. The following agonists can be used: TRAP6 trifluoroacetate salt, collagen, human α-thrombin and U-46619. The concentration of the agonist is tested out to each donor.
Testdurchführung: Es werden 96er-Loch Mikrotiterplatten verwendet. Die Prüfsubstanz wird in DMSO verdünnt und 2 μl je Loch vorgelegt. 178 μl Thrombozyten-Suspension werden zugegeben und 10 Minuten bei Raumtemperatur vorinkubiert. 20 μl Agonist werden zugegeben und die Messung im Spectramax, OD 405 nm, sofort gestartet. Die Kinetik wird in 11 Messungen von je 1 Minute bestimmt. Zwischen den Messungen wird 55 Sekunden geschüttelt.Test Procedure: 96-well microtiter plates are used. The test substance is diluted in DMSO and 2 μl per well. 178 μl of platelet suspension are added and preincubated for 10 minutes at room temperature. 20 μl agonist are added and the Measurement in Spectramax, OD 405 nm, started immediately. The kinetics are determined in 11 measurements of 1 minute each. The measurements are shaken for 55 seconds.
l.e) Thrombozytenaggregation in fibrinogendepletiertem Plasmal.e) platelet aggregation in fibrinogen-depleted plasma
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumcitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen.To determine platelet aggregation, blood from healthy volunteers of both sexes, who had not received any platelet aggregation-influencing medication within the last ten days, is used. The blood is taken up in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing 3.8% anticoagulant sodium citrate (1 part citrate + 9 parts blood).
Herstellung von fibrinogendepletiertem Plasma: Zur Gewinnung von plättchenarmem Plasma wird das Citrat- Vollblut bei 140g für 20 min abzentrifugiert. Das plättchenarme Plasma wird im Verhältnis 1 :25 mit Reptilase (Roche Diagnostic, Deutschland) versetzt und vorsichtig invertiert. Es folgen 10 min Inkubation bei 37°C im Wasserbad mit direkt folgender Inkubation auf Eis für 10 min. Das Plasma-Reptilase Gemisch wird bei 1300g für 15 min zentrifugiert und der Überstand (fibrinogendepletiertes Plasma) wird gewonnen.Preparation of fibrinogen-depleted plasma: To obtain platelet-poor plasma, the citrated whole blood is centrifuged off at 140 g for 20 min. The platelet poor plasma is treated in the ratio 1:25 with reptilase (Roche Diagnostic, Germany) and carefully inverted. This is followed by 10 min incubation at 37 ° C in a water bath with direct subsequent incubation on ice for 10 min. The plasma reptilase mixture is centrifuged at 1300 g for 15 min and the supernatant (fibrinogen-depleted plasma) is recovered.
Thrombozvten-Isolierung: Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert. Zu dem PRP wird ein Viertel des Volumens ACD-Puffer (44.8 mM Natriumcitrat, 20.9 mM Citronensäure, 74.1 mM Glucose und 4 mM Kaliumchlorid) zugegeben und 10 Minuten bei 1300g zentrifugiert. Das Thrombozyten-Pellet wird mit Wasch- Puffer resuspendiert und 10 Minuten bei 1300g zentrifugiert. Die Thrombozyten werden in Inkubations-Puffer resuspendiert und auf 400000 Z/μl eingestellt und Calciumchloridlösung mit einer Endkonzentration von 5 mM (l/200Verdünnung) zugegeben.Thrombocyte Isolation: To obtain platelet-rich plasma, citrate whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min. To the PRP is added one quarter volume of ACD buffer (44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride) and centrifuged for 10 minutes at 1300 g. The platelet pellet is resuspended with wash buffer and centrifuged at 1300 g for 10 minutes. The platelets are resuspended in incubation buffer and adjusted to 400,000 Z / μl and calcium chloride solution added to a final concentration of 5 mM (1/100 dilution).
Für die Aggregationsmessungen werden Aliquots (98 μl fibrinogendepletiertes Plasma und 80 μl Thrombozytensuspension) mit aufsteigenden Konzentrationen an Prüfsubstanz 10 min bei RT inkubiert. Anschließend wird die Aggregation durch Zugabe von humanem alpha Thrombin in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt. Die alpha Thrombin Konzentration, die gerade eben zur maximalen Aggregation führt, wird jeweils für jeden Spender individuell ermittelt.For aggregation measurements, aliquots (98 μl fibrinogen-depleted plasma and 80 μl platelet suspension) are incubated with increasing concentrations of test substance at RT for 10 min. The aggregation is then triggered by the addition of human alpha-thrombin in an aggregometer and by the turbidimetric Born method (Born, GVR, Cross MJ, The Aggregation of Blood Platelets, J. Physiol 1963, 168, 178-195) at 37 ° C determines. The alpha thrombin concentration, which just leads to maximum aggregation, is determined individually for each donor.
Zur Berechnung der inhibitorischen Wirkung wird die Zunahme der maximalen Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) innerhalb 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten in Gegenwart und Abwesenheit von Prüfsubstanz ermittelt und die Inhibition berechnet. Aus den Inhibitionskurven wird die Konzentration berechnet, die die Aggregation zu 50% hemmt. l.f) Stimulation gewaschener Thrombozyten und Analyse in der DurchflusszytometrieTo calculate the inhibitory effect, the increase in the maximum light transmission (amplitude of the aggregation curve in%) within 5 minutes after addition of the agonist in the presence and absence of test substance is determined and calculated the inhibition. From the inhibition curves the concentration is calculated, which inhibits the aggregation to 50%. lf) Stimulation of washed platelets and analysis in flow cytometry
Isolierung gewaschener Thrombozyten: Humanes Vollblut wird mittels Venenpunktion von freiwilligen Spendern gewonnen und in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) überführt, die als Antikoagulans Natriumeitrat enthalten (1 Teil Natriumeitrat 3.8% + 9 Teile Vollblut). Die Monovetten werden bei 900 Umdrehungen pro Minute und 4°C über einen Zeitraum von 20 Minuten zentrifugiert (Heraeus Instruments, Deutschland; Megafuge 1.0RS). Das plättchenreiche Plasma wird vorsichtig abgenommen und in ein 50 ml-Falconröhrchen überführt. Nun wird das Plasma mit ACD-Puffer (44 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Zitronensäure, 74.1 mM Glucose) versetzt. Das Volumen des ACD-Puffers entspricht einem Viertel des Plasmavolumens. Durch zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C werden die Thrombozyten sedimentiert. Danach wird der Überstand vorsichtig abdekantiert und verworfen. Die präzipitierten Thrombozyten werden zunächst vorsichtig mit einem Milliliter Waschpuffer (113 mM Natriumchlorid, 4 mM Dinatriumhydrogenphosphat, 24 mM Natriumdihydrogenphosphat, 4 mM Kaliumchlorid, 0.2 mM Ethylenglycol-bis-(2-aminoethyl)-NNN'N'-tetraessigsäure, 0.1% Glucose) resuspendiert und dann mit Waschpuffer auf ein Volumen aufgefüllt, das dem der Plasmamenge entspricht. Der Waschvorgang wird ein zweites Mal durchgeführt. Nachdem die Thrombozyten durch eine erneute zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C präzipitiert worden sind, werden sie vorsichtig in einem Milliliter Inkubationspuffer (134 mM Natriumchlorid, 12 mM Natriumhydrogencarbonat, 2.9 mM Kaliumchlorid, 0.34 mM Natriumdihydrogencarbonat, 5 mM HEPES, 5 mM Glucose, 2 mM Calciumchlorid und 2 mM Magnesiumchlorid) resuspendiert und mit Inkubationspuffer auf eine Konzentration von 300.000 Thrombozyten pro μl eingestellt.Isolation of washed platelets: Human whole blood is collected by venipuncture from volunteer donors and transferred to monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing sodium citrate as anticoagulant (1 part sodium citrate 3.8% + 9 parts whole blood). The monovettes are centrifuged at 900 rpm and 4 ° C for a period of 20 minutes (Heraeus Instruments, Germany, Megafuge 1.0RS). The platelet rich plasma is gently removed and transferred to a 50 ml Falcon tube. The plasma is then mixed with ACD buffer (44 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose). The volume of the ACD buffer is one fourth of the plasma volume. By centrifugation for ten minutes at 2500 revolutions and 4 ° C, the platelets are sedimented. Thereafter, the supernatant is carefully decanted and discarded. The precipitated platelets are first carefully mixed with one milliliter of washing buffer (113 mM sodium chloride, 4 mM disodium hydrogen phosphate, 24 mM sodium dihydrogen phosphate, 4 mM potassium chloride, 0.2 mM ethylene glycol bis (2-aminoethyl) -NNN'N'-tetraacetic acid, 0.1% glucose). resuspended and then filled with wash buffer to a volume that corresponds to the amount of plasma. The washing process is carried out a second time. After the platelets have been precipitated by a further ten minute centrifugation at 2500 rpm and 4 ° C, they are cautiously placed in one milliliter of incubation buffer (134 mM sodium chloride, 12 mM sodium bicarbonate, 2.9 mM potassium chloride, 0.34 mM sodium dihydrogencarbonate, 5 mM HEPES, 5 mM glucose , 2 mM calcium chloride and 2 mM magnesium chloride) and adjusted with incubation buffer to a concentration of 300,000 platelets per μl.
Färbung und Stimulierung der humanen Thrombozyten mit humanem α-Thrombin in Gegenwart oder Abwesenheit eines PAR-I -Antagonisten: Die Thrombozytensuspension wird mit der zu prüfenden Substanz bzw. des entsprechenden Lösungsmittels für 10 Minuten bei 37°C vorinkubiert (Eppendorf, Deutschland; Thermomixer Comfort). Durch Zugabe des Agonisten (0.5 μM bzw. 1 μM α-Thrombin; Kordia, Niederlande, 3281 NIH Units/mg; oder 30μg/ml Thrombin reeeptor activating peptide (TRAP6); Bachern, Schweiz) bei 37° und unter Schütteln von 500 Umdrehungen pro Minute wird die Thrombozytenaktivierung ausgelöst. Zu den Zeitpunkten 0, 1, 2.5, 5, 10 und 15 Minuten wird jeweils ein Aliquot von 50μl entnommen und in einen Milliliter einfach-konzentrierte CellFix™-Lösung (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) überführt. Zur Fixierung der Zellen werden sie 30 Minuten bei 4°C in der Dunkelheit inkubiert. Durch eine zehnminütige Zentrifugation bei 600 g und 4°C werden die Thrombozyten präzipitiert. Der Überstand wird verworfen und die Thrombozyten werden in 400 μl CellWash™ (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) resuspendiert. Ein Aliquot von 100 μl wird in ein neues FACS-Röhrchen überführt. 1 μl des thrombozyten-identifizierenden Antikörpers und 1 μl des aktivierungszustands-detektierenden Antikörpers werden mit CellWash™ auf ein Volumen von 100 μl aufgefüllt. Diese Antikörperlösung wird dann zur Thrombozytensuspension gegeben und 20 Minuten bei 4°C in der Dunkelheit inkubiert. Im Anschluss an die Färbung wird das Ansatz- volumen durch Zugabe von weiteren 400 μl CellWash™ erhöht.Staining and stimulation of human platelets with human α-thrombin in the presence or absence of a PAR-1 antagonist: The platelet suspension is preincubated with the substance to be tested or the corresponding solvent for 10 minutes at 37 ° C. (Eppendorf, Germany, Thermomixer Comfort ). By adding the agonist (0.5 μM or 1 μM α-thrombin, Kordia, Netherlands, 3281 NIH units / mg or 30 μg / ml thrombin reeeptor activating peptide (TRAP6), Bachern, Switzerland) at 37 ° and shaking 500 revolutions Thrombocyte activation is triggered per minute. An aliquot of 50 μl is withdrawn at 0, 1, 2.5, 5, 10 and 15 minutes each time and transferred to one milliliter of single-concentrated CellFix ™ solution (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA). To fix the cells they are incubated for 30 minutes at 4 ° C in the dark. Ten minutes of centrifugation at 600 g and 4 ° C precipitate the platelets. The supernatant is discarded and the platelets are resuspended in 400 μl CellWash ™ (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA). An aliquot of 100 μl is placed in transferred new FACS tube. 1 μl of the platelet-identifying antibody and 1 μl of the activation-state detecting antibody are made up to a volume of 100 μl with CellWash ™. This antibody solution is then added to the platelet suspension and incubated for 20 minutes at 4 ° C in the dark. Following staining, the batch volume is increased by adding an additional 400 μl of CellWash ™.
Zur Identifizierung der Thrombozyten wird ein fluorescein-isothiocyanat-konjugierter Antikörper eingesetzt, der gegen das humane Glykoprotein üb (CD41) gerichtet ist (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 0649). Mit Hilfe des phycoerythrin-konjugierten Antikörpers, der gegen das humane Glykoprotein P-Selektin (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 1759) gerichtet ist, lässt sich der Aktivierungszustand der Thrombozyten bestimmen. P-Selektin (CD62P) ist in den α- Granula ruhender Thrombozyten lokalisiert. Es wird jedoch nach in-vitro- bzw. in-vivo- Stimulierung zur äußeren Plasmamembran translokalisiert.To identify the platelets, a fluorescein-isothiocyanate-conjugated antibody directed against the human glycoprotein (CD41) is used (Immunotech Coulter, France, Cat. No. 0649). Phycoerythrin-conjugated antibody directed against the human glycoprotein P-selectin (Immunotech Coulter, France, Cat No. 1759) can be used to determine the activation state of the platelets. P-selectin (CD62P) is localized in the α-granules of resting platelets. However, it is translocated to the outer plasma membrane after in vitro or in vivo stimulation.
Durchflusszytometrie und Auswertung der Daten: Die Proben werden im Gerät FACSCalibur™ Flow Cytometry System der Firma Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA, vermessen und mit Hilfe der Software CellQuest, Version 3.3 (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) ausgewertet und graphisch dargestellt. Das Maß der Thrombozytenaktivierung wird durch den Prozentsatz der CD62P-positiven Thrombozyten (CD41 -positive Ereignisse) bestimmt. Es werden von jeder Probe 10.000 CD41 -positive Ereignisse gezählt.Flow Cytometry and Data Interpretation: Samples are measured in the FACSCalibur ™ Flow Cytometry System from Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA, and evaluated and graphed using CellQuest, Version 3.3 (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) software. The level of platelet activation is determined by the percentage of CD62P-positive platelets (CD41-positive events). There are 10,000 CD41 positive events from each sample.
Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird anhand der Reduktion der Thrombozytenaktivierung berechnet, die sich auf die Aktivierung durch den Agonisten bezieht.The inhibitory effect of the substances to be tested is calculated on the basis of the reduction of platelet activation, which relates to activation by the agonist.
l.g) Thrombozytenaggregationsmessung mit der Parallelplattenflußkammerl.g) Platelet aggregation measurement with the parallel plate flow chamber
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat- Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert. Zu dem PRP wird ein Viertel des Volumens ACD-Puffer (44.8 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Citronensäure, 74.1 mM Glucose und 4 mM Kaliumchlorid) zugegeben und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Das Thrombozyten-Pellet wird mit Wasch- Puffer resuspendiert und 10 Minuten bei 1000g zentrifugiert. Für die Perfusionsstudie wird eine Mischung von 40% Erythrozyten und 60% gewaschene Thrombozyten (200.000/μl) hergestellt und in HEPES-Tyrode Puffer suspendiert. Die Messung der Thrombozytenaggregation unter Flußbedingungen wird mittels der Parallelplattenflußkammer durchgeführt (B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vase. Biol. 2006, 26, 670- 675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46). Glasobjektträger werden mit 100 μl humaner α- Thrombinlösung (gelöst in Tris-Puffer) über Nacht bei 4°C benetzt (α-Thrombin in verschiedenen Konzentrationen, z.B. 10 bis 50 μg/ml) und abschließend mittels 2% BSA abgeblockt.To determine platelet aggregation, blood from healthy volunteers of both sexes, who had not received any platelet aggregation-influencing medication within the last ten days, is used. The blood is taken in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing 3.8% anticoagulant sodium citrate (1 part citrate + 9 parts blood). To obtain platelet-rich plasma, the citrated whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min. To the PRP, one quarter of the volume of ACD buffer (44.8 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose and 4 mM potassium chloride) is added and centrifuged at 1000 g for 10 minutes. The platelet pellet is resuspended with wash buffer and centrifuged at 1000 g for 10 minutes. For the perfusion study, a mixture of 40% erythrocytes and 60% washed platelets (200,000 / μl) is prepared and suspended in HEPES-Tyrode buffer. The measurement of platelet aggregation under flow conditions is carried out by means of the parallel plate flow chamber (B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vase. Biol. 2006, 26, 670-675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46). Glass slides are wetted with 100 ul of human α-thrombin solution (dissolved in Tris buffer) overnight at 4 ° C (α-thrombin in various concentrations, eg 10 to 50 ug / ml) and finally blocked by 2% BSA.
Rekonstituiertes But wird über die Thrombin-benetzten Glasobjektträger über 5 Minuten mit konstanter Flußrate geleitet (z.B. Scherrate 300/Sekunde) und mittels Mikroskop- Videosystem beobachtet und aufgezeichnet. Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird morphometrisch anhand der Reduktion der Plättchenaggregatsbildung ermittelt. Alternativ kann die Inhibierung der Plättchenaktivierung durch Durchflußzytometrie, z.B. über p-Selektin- Expression (CD62p), bestimmt werden (siehe Methode 1.f).Reconstituted butoxide is passed over the thrombin-wetted glass slides for 5 minutes at a constant flow rate (e.g., shear rate 300 / second) and observed and recorded by microscope video system. The inhibitory effect of the substances to be tested is determined morphometrically on the basis of the reduction of platelet aggregation. Alternatively, inhibition of platelet activation by flow cytometry, e.g. be determined via p-selectin expression (CD62p) (see Method 1.f).
2.) Ex vivo Assay2.) Ex vivo assay
2.a) Thrombozytenaggregation (Primaten, Meerschweinchen)2.a) platelet aggregation (primates, guinea pigs)
Meerschweinchen oder Primaten werden in wachem oder narkotisiertem Zustand oral, intravenös oder intraperitoneal mit Prüfsubstanzen in geeigneter Formulierung behandelt. Als Kontrolle werden andere Meerschweinchen oder Primaten in identischer Weise mit dem entsprechenden Vehikel behandelt. Nach je nach Applikationsart unterschiedlich langer Zeit wird aus den tief narkotisierten Tieren Blut durch Punktion des Herzens oder der Aorta gewonnen. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8% (1 Teil Citratlösung + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat- Vollblut bei 140g für 20 min zentrifugiert.Guinea pigs or primates are treated in an active or anaesthetized state orally, intravenously or intraperitoneally with test substances in a suitable formulation. As a control, other guinea pigs or primates are treated identically with the appropriate vehicle. Depending on the mode of administration of varying length, blood is obtained from deep anesthetized animals by puncturing the heart or the aorta. The blood is taken up in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing 3.8% anticoagulant sodium citrate (1 part citrate solution + 9 parts blood). To obtain platelet-rich plasma, the citrated whole blood is centrifuged at 140 g for 20 min.
Die Aggregation wird durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (TRAP6, SFLLRN, 50 μg/ml; Konzentration wird in jedem Experiment je nach Tierart ermittelt) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 370C bestimmt.The aggregation is triggered by addition of a thrombin receptor agonist (TRAP6, SFLLRN, 50 μg / ml, concentration determined in each experiment depending on the animal species) in an aggregometer and analyzed by Born's turbidimetric method (Born, GVR, Cross MJ, The aggregation of Blood platelets;. J. Physiol 1963, 168, 178-195) determined at 37 0 C.
Zur Aggregationsmessung wird die maximale Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) innerhalb 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten ermittelt. Die inhibitorische Wirkung der verabreichten Prüfsubstanzen in den behandelten Tieren wird durch die Reduktion der Aggregation, bezogen auf den Mittelwert der Kontrolltiere, berechnet. 2.b) Thrombozytenaggregation und -aktivierungsmessung in der Parallelplatten- flusskammer (Primaten)For aggregation measurement, the maximum increase in light transmission (amplitude of the aggregation curve in%) is determined within 5 minutes after addition of the agonist. The inhibitory effect of the administered test substances in the treated animals is calculated by reducing the aggregation, based on the mean of the control animals. 2.b) Platelet aggregation and activation measurement in the parallel plate flow chamber (primates)
Primaten werden in wachem oder narkotisiertem Zustand oral, intravenös oder intraperitoneal mitPrimates are administered orally, intravenously or intraperitoneally in the awake or anesthetized state
Prüfsubstanzen in geeigneter Formulierung behandelt. Als Kontrolle werden andere Tiere in iden- tischer Weise mit dem entsprechenden Vehikel behandelt. Nach je nach Applikationsart unterschiedlich langer Zeit wird aus den Tieren Blut durch Venenpunktion gewonnen. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natriumeitrat 3.8%Test substances in appropriate formulation treated. As a control, other animals are treated identically with the appropriate vehicle. Depending on the type of application of different lengths of time blood is obtained from the animals by venipuncture. The blood is used in monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) as anticoagulant sodium citrate 3.8%
(1 Teil Citratlösung + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Alternativ kann nicht- antikoaguliertes Blut mit Neutralmonovetten (Sarstedt) entnommen werden. In beiden Fällen wird das Blut zur Verhinderung der Fibringerinnselbildung mit Pefabloc FG (Pentapharm,(1 part citrate solution + 9 parts blood) included. Alternatively, non-anticoagulated blood can be collected with neutral monovettes (Sarstedt). In both cases the blood is used to prevent fibrin clot formation with Pefabloc FG (Pentapharm,
Endkonzentration 3 mM) versetzt.Final concentration 3 mM).
Citratvollblut wird vor der Messung durch Zugabe von CaCl2-Lösung (Endkonzentration Ca+* 5 mM) rekalzifiert. Nicht-antikoaguliertes Blut wird unmittelbar zur Messung in die Parallelplattenflusskammer eingeleitet. Die Messung der Thrombozytenaktivierung wird in der Kollagen-beschichteten Parallelplattenflußkammer morphometrisch oder durchflusszytometrisch wie in Methode 1.h) beschrieben durchgeführt.Citrate whole blood is recalcified prior to measurement by adding CaCl 2 solution (final concentration Ca + * 5 mM). Non-anticoagulated blood is introduced immediately into the parallel plate flow chamber for measurement. The measurement of platelet activation is carried out in the collagen-coated parallel plate flow chamber morphometrically or by flow cytometry as described in Method 1.h).
3.) In vivo Assavs3.) In vivo Assavs
3.a) Thrombosemodelle3.a) thrombosis models
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Thrombosemodellen in geeigneten Tierspezies, in denen die Thrombin-induzierte Plättchenaggregation über den PAR-I -Rezeptor vermittelt wird, untersucht werden. Als Tierspezies eignen sich Meerschweinchen und insbesondere PrimatenThe compounds according to the invention can be investigated in thrombosis models in suitable animal species in which thrombin-induced platelet aggregation is mediated via the PAR-I receptor. As animal species guinea pigs and especially primates are suitable
(vergleiche: Lindahl, A.K., Scarborough, R.M., Naughton, M.A., Harker, L.A., Hanson, S.R.,(See: Lindahl, A.K., Scarborough, R.M., Naughton, M.A., Harker, L.A., Hanson, S.R.,
Thromb Haemost 1993, 69, 1196; Cook JJ, Sitko GR, Bednar B, Condra C, Meilott MJ, Feng D-M,Thromb Haemost 1993, 69, 1196; Cook JJ, Sitko GR, Bednar B, Condra C, Meilott MJ, Feng D-M,
Nu« RF, Shager JA, Gould RJ, Connolly TM, Circulation 1995, 91, 2961-2971; Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003,Nu RF, Shager JA, Gould RJ, Connolly ™, Circulation 1995, 91, 2961-2971; Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003,
108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman108 Suppl. 17, IV-280; Deriano CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman
M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).
Alternativ können Meerschweinchen verwendet werden, die mit Inhibitoren von PAR-3 und/oderAlternatively, guinea pigs can be used which are inhibitors of PAR-3 and / or
PAR-4 vorbehandelt werden (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), oder transgene PAR-3- und/oder PAR-4-Knockdown-Meerschweinchen. 3.b) Gerinnungsstörung und Organdysfunktion bei Disseminierter Intravasaler Gerinnung (DIC)PAR-4 are pretreated (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), or transgenic PAR-3 and / or PAR-4 knockdown guinea pigs. 3.b) Coagulation Disorder and Organ Dysfunction in Disseminated Intravasal Coagulation (DIC)
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Modellen für DIC und/oder Sepsis in geeigneten Tierspezies untersucht werden. Als Tierspezies eignen sich Meerschweinchen und insbesondere Primaten, bei Untersuchung der endothelvermittelten Effekte auch Mäuse und Ratten (vergleiche: Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861; Kaneider NC et al., Nat Immunol, 2007, 8, 1303-12; Camerer E et al., Blood, 2006, 707, 3912-21; Riewald M et al., J Biol Chem, 2005, 280, 19808-14.). Alternativ können Meerschweinchen verwendet werden, die mit Inhibitoren von PAR-3 und/oder PAR-4 vorbehandelt werden (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), oder transgene PAR-3- und/oder PAR-4-Knockdown-Meerschweinchen.The compounds according to the invention can be investigated in models for DIC and / or sepsis in suitable animal species. Guinea pigs and in particular primates are suitable as animal species, and mice and rats are also suitable when investigating the endothelium-mediated effects (compare: Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. IV-280, Deriano CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang HC, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol Exp Ther 2003, 304, 855-861 Kaneider NC et al., Nat Immunol, 2007, 8, 1303-12; Camerer E et al., Blood, 2006, 707, 3912-21; Riewald M et al., J Biol Chem, 2005, 280, 19808- 14). Alternatively, guinea pigs pre-treated with inhibitors of PAR-3 and / or PAR-4 can be used (Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254), or transgenic PAR-3 and / or PAR-4 -Knockdown guinea pigs.
3.b.l) Thrombin-Antithrombin-Komplexe3.b.l) thrombin-antithrombin complexes
Thrombin-Antithrombin-Komplexe (nachfolgend als „TAT" bezeichnet) sind ein Maß für das durch Gerinnungsaktivierung endogen gebildete Thrombin. TAT werden mittels eines ELISA- Assays bestimmt (Enzygnost TAT micro, Dade-Behring). Aus Citratblut wird durch Zentrifugation Plasma gewonnen. Zu 50 μl Plasma wird 50 μl TAT-Probenpuffer gegeben, kurz geschüttelt und 15 min bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proben werden abgesaugt, und das Well 3-malig mit Waschpuffer gewaschen (300 μl/Well). Die Platte wird zwischen den Waschgängen abgeklopft. Es wird Konjugatlösung (100 μl) hinzugegeben und 15 min bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proben werden abgesaugt, und das Well 3-malig mit Waschpuffer gewaschen (300 μl/Well). Anschließend wird chromogenes Susbtrat hinzugegeben (100 μl/Well), 30 min im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubiert, Stopplösung hinzugegeben (100 μl/ Well), und die Farbbildung bei 492 nm gemessen (Saphire Plate reader).Thrombin-antithrombin complexes (hereinafter referred to as "TAT") are a measure of endogenous thrombin generation by clot activation TATs are determined by an ELISA assay (Enzygnost TAT micro, Dade-Behring) Plasma is recovered from citrated blood by centrifugation. Add 50 μl of TAT Sample Buffer to 50 μl of plasma, shake briefly and incubate for 15 minutes at room temperature, aspirate the samples, and wash the well 3 times with Wash Buffer (300 μl / well) The plate is tapped between washings. Conjugate solution (100 μl) is added and incubated for 15 min at room temperature, the samples are aspirated and the well washed 3 times with wash buffer (300 μl / well), then chromogenic susbtrate is added (100 μl / well) for 30 min incubated in the dark at room temperature, stop solution added (100 μl / well) and color formation measured at 492 nm (sapphire plate reader).
3.b.2) Parameter für Organdysfunktion3.b.2) Parameters for organ dysfunction
Es werden verschiedene Parameter bestimmt, aufgrund derer Rückschlüsse auf die Funktionseinschränkung verschiedener innerer Organe durch die LPS-Gabe gezogen werden können, und der therapeutische Effekt von Prüfsubstanzen abgeschätzt werden kann. Citratblut oder ggf. Lithium-Heparin-Blut wird zentrifugiert, und die Parameter aus dem Plasma bestimmt. Folgende Parameter werden typischerweise erhoben: Kreatinin, Harnstoff, Aspartat- Aminotransferase (AST), Alanin-Aminotransferase (ALT), Gesamt-Bilirubin, Laktatdehydrogenase (LDH), Gesamt-Protein, Gesamt-Albumin und Fibrinogen. Die Werte geben Aufschluss auf die Funktion der Niere, der Leber, des Kreislaufes und der Gefäße.Various parameters are determined by which conclusions can be drawn about the functional impairment of various internal organs by the LPS administration, and the therapeutic effect of test substances can be estimated. Citrated blood or, if appropriate, lithium heparin blood is centrifuged and the parameters determined from the plasma. The following parameters are typically collected: creatinine, urea, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), total bilirubin, Lactate dehydrogenase (LDH), total protein, total albumin and fibrinogen. The values provide information on the function of the kidney, the liver, the circulation and the vessels.
3.b.3) Parameter für Entzündung3.b.3) parameters for inflammation
Das Ausmaß der durch Endotoxin ausgelösten Entzündungsreaktion lässt sich aus dem Anstieg von Entzündungsmediatoren im Plasma nachweisen, z.B. Interleukine (1, 6, 8 und 10), Tumornekrosefaktor alpha oder Monocyte Chemoattractant Protein- 1. Hierzu können ELISAs oder das Luminex-System verwendet werden.The magnitude of the endotoxin-mediated inflammatory response can be demonstrated by the increase in inflammatory mediators in plasma, e.g. Interleukins (1, 6, 8, and 10), tumor necrosis factor alpha, or monocyte chemoattractant protein-1. ELISAs or the Luminex system can be used for this purpose.
3.c) Antitumor Wirksamkeit3.c) antitumor efficacy
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Modellen für Krebs getestet werden, z.B. im humanen Brustkrebs-Modell in immundefizienten Mäusen (vergleiche: S. Even-Ram et. al., Nature Medicine, 1988, 4, 909-914).The compounds of the invention can be tested in models for cancer, e.g. in the human breast cancer model in immunodeficient mice (see: S. Even-Ram et al., Nature Medicine, 1988, 4, 909-914).
3.d) Antiangiogenetische Wirksamkeit3.d) antiangiogenic activity
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in in vitro und in vivo Modellen für Angiogenese getestet werden (vergleiche: Caunt et al., Journal ofThrombosis and Haemostasis, 2003, 10, 2097- 2102; Haralabopoulos et al., Am J Physiol, 1997, C239-C245; Tsopanoglou et al., JBC, 1999, 274, 23969-23976; Zania et al., JPET, 2006, 318, 246-254).The compounds of this invention can be tested in in vitro and in vivo models of angiogenesis (see: Caunt et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2003, 10, 2097-2102, Haralabopoulos et al., Am J Physiol, 1997, C239-C245 Tsopanoglou et al., JBC, 1999, 274, 23969-23976; Zania et al., JPET, 2006, 318, 246-254).
3.e) Blutdruck- und Herzfrequenz-modulierende Wirkung3.e) Blood pressure and heart rate modulating effect
Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen können in in vivo Modellen hinsichtlich Ihrer Wirkung auf den arteriellen Blutdruck und die Herzfrequenz untersucht werden. Hierzu werden Ratten (z.B. Wistar) mit implantierbaren Radiotelemetrieeinheiten instrumentiert, und es wird ein elektronisches Datenaquisitions- und Speicherungs-System (Data Sciences, MN, USA), bestehend aus einem chronisch implantierbaren Transducer/Transmitter-Einheit in Verbindung mit einem Flüssigkeits-gefüllten Katheter, verwendet. Der Transmitter wird in die Peritonealhöhle implantiert und der Sensor-Katheter in der deszendierenden Aorta positioniert. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können appliziert werden (z.B. oral oder intravenös). Vor Behandlung wird der mittlere arterielle Blutdruck und die Herzfrequenz der unbehandelten und behandelten Tiere gemessen und sichergestellt, dass diese im Bereich von ca. 131-142 mmHg und 279-321 Schläge/Minute liegen. PAR-I -aktivierendes Peptid (SFLLRN; z.B. Dosen zwischen 0.1 und 5 mg/kg) wird intravenös verabreicht. Der Blutdruck und die Herzfrequenz werden in verschiedenen Zeitintervallen und Zeiträumen mit und ohne PAR- 1 -aktivierendem Peptid sowie mit und ohne einer der erfindungsgemäßen Verbindungen gemessen (vergleiche: Cicala C et al., The FASEB Journal, 2001, 15, 1433-5; Stasch JP et al., British Journal of Pharmacology 2002, 135, 344-355).The compounds of the invention can be tested in vivo models for their effect on arterial blood pressure and heart rate. For this purpose, rats (eg Wistar) are instrumented with implantable radiotelemetry units, and there is an electronic data acquisition and storage system (Data Sciences, MN, USA) consisting of a chronically implantable transducer / transmitter unit in conjunction with a fluid-filled catheter , used. The transmitter is implanted into the peritoneal cavity and the sensor catheter is positioned in the descending aorta. The compounds according to the invention can be administered (for example orally or intravenously). Before treatment, the mean arterial blood pressure and heart rate of the untreated and treated animals are measured and ensured to be in the range of approximately 131-142 mmHg and 279-321 beats / minute. PAR-I activating peptide (SFLLRN, eg doses between 0.1 and 5 mg / kg) is administered intravenously. Blood pressure and heart rate are measured at different time intervals and with and without PAR-1 activating peptide and with and without one of the compounds of the invention (compare: Cicala C et al., The FASEB Journal, 2001, 15, 1433-5; Stasch JP et al., British Journal of Pharmacology 2002, 135, 344-355).
4.) Bestimmung der Löslichkeit4.) Determination of solubility
Herstellung der Ausgangslösung (Urlösung):Preparation of the starting solution (original solution):
Mindestens 1.5 mg der Testsubstanz werden in ein Wide Mouth 10 mm Screw V-Vial (Fa. Glastechnik Gräfenroda GmbH, Art.-Nr. 8004-WM-H/V 15 μ) mit passender Schraubkappe und Septum genau eingewogen, mit DMSO zu einer Konzentration von 50 mg/ml versetzt und 30 Minuten mittels eines Vortexers geschüttelt.At least 1.5 mg of the test substance are accurately weighed into a Wide Mouth 10 mm Screw V-Vial (Glastechnik Gräfenroda GmbH, Item No. 8004-WM-H / V 15 μ) with matching screw cap and septum, with DMSO to one Concentration of 50 mg / ml added and shaken for 30 minutes by means of a vortexer.
Herstellung der Kalibrierlösungen:Preparation of the calibration solutions:
Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er Deep Well Plate (DWP) mittels eines Liquid-Handling-Roboters. Als Lösemittel wird ein Gemisch aus Acetonitril/Wasser 8:2 verwendet.The necessary pipetting steps are carried out in a 1.2 ml 96 well deep well plate (DWP) by means of a liquid handling robot. The solvent used is a mixture of acetonitrile / water 8: 2.
Herstellung der Ausgangslösung für Kalibrierlösungen (Stammlösung): 10 μl der Urlösung werden mit 833 μl des Lösemittelgemisch versetzt (Konzentration = 600 μg/ml) und homogenisiert. Es werden von jeder Testsubstanz 1 : 100 Verdünnungen in separaten DWP's hergestellt und wiederum homogenisiert.Preparation of the starting solution for calibration solutions (stock solution): 10 μl of the original solution are mixed with 833 μl of the solvent mixture (concentration = 600 μg / ml) and homogenized. 1: 100 dilutions of each test substance are prepared in separate DWPs and again homogenized.
Kalibrierlösung 5 (600 ng/ml): 30 μl der Stammlösung werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.Calibration solution 5 (600 ng / ml): 30 μl of the stock solution are mixed with 270 μl of solvent mixture and homogenized.
Kalibrierlösung 4 (60 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 5 werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.Calibration solution 4 (60 ng / ml): Mix and homogenize 30 μl of the calibration solution 5 with 270 μl of solvent mixture.
Kalibrierlösung 3 (12 ng/ml): 100 μl der Kalibrierlösung 4 werden mit 400 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.Calibration solution 3 (12 ng / ml): 100 μl of the calibration solution 4 are mixed with 400 μl of solvent mixture and homogenized.
Kalibrierlösung 2 (1.2 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 3 werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.Calibration solution 2 (1.2 ng / ml): Mix and homogenize 30 μl of calibration solution 3 with 270 μl of solvent mixture.
Kalibrierlösung 1 (0.6 ng/ml): 150 μl der Kalibrierlösung 2 werden mit 150 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert. Herstellung der Probenlösungen:Calibration solution 1 (0.6 ng / ml): 150 μl of the calibration solution 2 are mixed with 150 μl of solvent mixture and homogenized. Preparation of the sample solutions:
Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP mittels eines Liquid-Handling- Roboters. 10.1 μl der Stammlösung werden mit 1000 μl PBS-Puffer pH 6.5 versetzt. (PBS-Puffer pH 6.5: 61.86 g Natriumchlorid, 39.54 g Natriumdihydrogenphosphat und 83.35 g 1 N Natronlauge werden in einen 1 Liter-Messkolben eingewogen, mit Wasser aufgefüllt und ca. 1 Stunde gerührt. Von dieser Lösung werden 500 ml in einen 5 Liter-Messkolben gegeben und mit Wasser aufgefüllt. Es wird mit 1 N Natronlauge auf pH 6.5 einstellen.)The necessary pipetting steps are carried out in 1.2 ml 96-well DWP by means of a liquid-handling robot. 10.1 μl of the stock solution are mixed with 1000 μl of PBS buffer pH 6.5. (PBS buffer pH 6.5: 61.86 g of sodium chloride, 39.54 g of sodium dihydrogen phosphate and 83.35 g of 1 N sodium hydroxide solution are weighed into a 1 liter volumetric flask, made up with water and stirred for about 1 hour. 500 ml of this solution are poured into a 5 liter Place the volumetric flask and make up with water and adjust to pH 6.5 with 1 N sodium hydroxide solution.)
Durchführung:Execution:
Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP mittels eines Liquid-Handling- Roboters. Die so hergestellten Probenlösungen werden 24 Stunden bei 1400 rpm mittels eines temperierbaren Schüttlers bei 200C geschüttelt. Von diesen Lösungen werden jeweils 180 μl abgenommen und in Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes überführt. Diese Lösungen werden 1 Stunde mit ca. 223.000 x g zentrifugiert. Von jeder Probenlösung werden 100 μl des Überstandes abgenommen und 1 : 10 und 1 : 1000 mit PBS-Puffer 6.5 verdünnt.The necessary pipetting steps are carried out in 1.2 ml 96-well DWP by means of a liquid-handling robot. The sample solutions thus prepared are shaken for 24 hours at 1400 rpm by means of a temperature-controlled shaker at 20 0 C. Of these solutions, each 180 ul are removed and transferred to Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes. These solutions are centrifuged for 1 hour at about 223,000 xg. From each sample solution, 100 μl of the supernatant are removed and diluted 1:10 and 1: 1000 with PBS buffer 6.5.
Analytik:analytics:
Die Proben werden mittels HPLC/MS-MS analysiert. Quantifiziert wird über eine Fünf-Punkt- Kalibrationskurve der Testverbindung. Die Löslichkeit wird in mg/1 ausgedrückt. Analysensequenz: 1) Blank (Lösemittelgemisch); 2) Kalibrierlösung 0.6 ng/ml; 3) Kalibrierlösung 1.2 ng/ml; 4) Kalibrierlösung 12 ng/ml; 5) Kalibrierlösung 60 ng/ml; 6) Kalibrierlösung 600 ng/ml; 7) Blank (Lösemittelgemisch); 8) Probenlösung 1 : 1000; 9) Probenlösung 1:10.The samples are analyzed by HPLC / MS-MS. Quantification is via a five-point calibration curve of the test compound. The solubility is expressed in mg / l. Analysis sequence: 1) Blank (solvent mixture); 2) Calibration solution 0.6 ng / ml; 3) Calibration solution 1.2 ng / ml; 4) Calibration solution 12 ng / ml; 5) Calibration solution 60 ng / ml; 6) Calibration solution 600 ng / ml; 7) Blank (solvent mixture); 8) Sample solution 1: 1000; 9) Sample solution 1:10.
HPLC/MS-MSMethode:HPLC / MS-MS method:
HPLC: Agilent 1100, quat. Pumpe (G1311A), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) und Säulenthermostat (Gl 316A); Säule: Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 μ; Temperatur: 400C; Eluent A: Wasser + 0.5 ml Ameisensäure/l; Eluent B: Acetonitril + 0.5 ml Ameisensäure/l; Flussrate: 2.5 ml/min; Stoptime 1.5 min; Gradient: 0 min 95% A, 5% B; Rampe: 0-0.5 min 5% A, 95% B; 0.5-0.84 min 5% A, 95% B; Rampe: 0.84-0.85 min 95% A, 5% B; 0.85-1.5 min 95% A, 5% B.HPLC: Agilent 1100, quat. Pump (G1311A), autosampler CTC HTS PAL, degasser (G1322A) and column thermostat (GI 316A); Column: Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 μ; Temperature: 40 ° C .; Eluent A: water + 0.5 ml formic acid / l; Eluent B: acetonitrile + 0.5 ml formic acid / L; Flow rate: 2.5 ml / min; Stop time 1.5 min; Gradient: 0 min 95% A, 5% B; Ramp: 0-0.5 min 5% A, 95% B; 0.5-0.84 min 5% A, 95% B; Ramp: 0.84-0.85 min 95% A, 5% B; 0.85-1.5 min 95% A, 5% B.
MS/MS: WATERS Quattro Micro Tandem MS/MS; Z-Spray API-Interface; HPLC-MS- Eingangssplitter 1 :20; Messung im ESI-Mode. C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische ZusammensetzungenMS / MS: WATERS Quattro Micro Tandem MS / MS; Z-spray API interface; HPLC-MS input splitter 1:20; Measurement in ESI mode. C) Exemplary embodiments of pharmaceutical compositions
Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:The substances according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows:
Tablette:Tablet:
Zusammensetzung:Composition:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.100 mg of the compound of Example 1, 50 mg of lactose (monohydrate), 50 mg of corn starch, 10 mg of polyvinylpyrrolidone (PVP 25) (BASF, Germany) and 2 mg of magnesium stearate.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.Tablet weight 212 mg. Diameter 8 mm, radius of curvature 12 mm.
Herstellung:production:
Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).The mixture of the compound of Example 1, lactose and starch is granulated with a 5% solution (m / m) of the PVP in water. The granules, after drying with the magnesium stearate for 5 min. mixed. This mixture is compressed with a conventional tablet press (for the tablet format see above).
Orale Suspension:Oral suspension:
Zusammensetzung:Composition:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser.1000 mg of the compound of Example 1, 1000 mg of ethanol (96%), 400 mg of rhodigel (xanthan gum) (FMC, USA) and 99 g of water.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.A single dose of 100 mg of the compound of the invention corresponds to 10 ml of oral suspension.
Herstellung:production:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6h gerührt. Intravenös applizierbare Lösung:The rhodigel is suspended in ethanol, the compound of Example 1 is added to the suspension. While stirring, the addition of water. Until the swelling of the Rhodigels is complete, it is stirred for about 6 hours. Intravenous solution:
Zusammensetzung:Composition:
1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Injektionszwecke.1 mg of the compound of Example 1, 15 g of polyethylene glycol 400 and 250 g of water for injection.
Herstellung:production:
Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0.22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen. The compound of Example 1 is dissolved together with polyethylene glycol 400 in the water with stirring. The solution is sterile-filtered (pore diameter 0.22 μm) and filled under aseptic conditions into heat-sterilized infusion bottles. These are closed with infusion stoppers and crimp caps.

Claims

Patentansprüche claims
1. Verbindung der Formel1. Compound of the formula
in welcherin which
R1 für Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Monofluormethylsulfanyl, Difluormethylsulfanyl,wherein phenyl may be substituted by 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, monofluoromethylsulfanyl, difluoromethylsulfanyl,
Trifluormethylsulfanyl, Methylsulfonyl, Ci-C4-Alkyl, C]-C4-Alkoxy und Ci-C4- Alkoxycarbonyl,Trifluoromethylsulphanyl, methylsulphonyl, Ci-C 4 alkyl, C] -C 4 alkoxy and Ci-C 4 - alkoxycarbonyl,
R2 für Phenyl, Naphtyl oder 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl steht,R 2 is phenyl, naphthyl or 5- to 10-membered heteroaryl,
wobei Phenyl, Naphtyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Q -C4- Alkyl, CrC4-Alkoxy, Ci-C6-Alkylamino, Phenyl und 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl,where phenyl, naphthyl and heteroaryl can be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of halogen, cyano, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, C 1 -C 4 -alkyl, C r C 4 alkoxy, Ci-C6 alkylamino, phenyl and 5- or 6-membered heteroaryl,
worin Phenyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Monofluormethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Ci-C4-Alkyl, CrC4-Alkoxy und Q-Ce-Alkylamino,wherein phenyl and heteroaryl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, monofluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, Ci-C 4 alkyl, C r C 4 alkoxy and Q-Ce-alkylamino,
R3 für Ci-C6-Alkyl, CrC6-Alkoxy, CrC6-Alkylamino, C3-C7-Cycloalkyl, 4- bis 7- gliedriges Heterocyclyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, C3-C7- Cycloalkyloxy, C3-C7-Cycloalkylamino, 4- bis 7-gliedriges Heterocyclylamino, Phenylamino oder 5- oder 6-gliedriges Heteroarylamino steht, wobei Alkyl, C2-C6-Alkoxy und Alkylamino substituiert sein können mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, CrC4-Alkoxy, CrC4-Alkoxycarbonyl, C3-C7-Cycloalkyl, 4- bis 6- gliedriges Heterocyclyl, Phenyl und 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl,R 3 is Ci-C 6 alkyl, C r C 6 alkoxy, C r C 6 alkylamino, C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 7-membered heterocyclyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, C 3 -C 7 -cycloalkyloxy, C 3 -C 7 -cycloalkylamino, 4- to 7-membered heterocyclylamino, phenylamino or 5- or 6-membered heteroarylamino, wherein alkyl, C 2 -C 6 alkoxy and alkylamino may be substituted with one substituent selected from the group consisting of halogen, hydroxy, amino, cyano, C r C 4 alkoxy, C r C 4 alkoxycarbonyl, C 3 -C 7 -cycloalkyl, 4- to 6-membered heterocyclyl, phenyl and 5- or 6-membered heteroaryl,
undand
wobei Cycloalkyl, Heterocyclyl, Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyloxy, Cycloalkylamino, Heterocyclylamino, Phenylamino und Heteroarylamino substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Oxo, Hydroxy, Amino, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Monofluormethoxy,wherein cycloalkyl, heterocyclyl, phenyl, heteroaryl, cycloalkyloxy, cycloalkylamino, heterocyclylamino, phenylamino and heteroarylamino may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, oxo, hydroxy, amino, monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl , Monofluoromethoxy,
Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Monofluormethylsulfanyl,Difluoromethoxy, trifluoromethoxy, monofluoromethylsulfanyl,
Difluormethylsulfanyl, Trifluormethylsulfanyl, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C,-C4-Alkyl, Ci-C4-Alkoxy, CrC6-Alkylamino, CrC4-Alkoxycarbonyl, CrC4- Alkylaminocarbonyl und Cyclopropyl,Difluormethylsulfanyl, trifluoromethylsulphanyl, hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, C, -C 4 alkyl, Ci-C 4 alkoxy, C r C 6 alkylamino, C r C 4 alkoxycarbonyl, C r C 4 - alkylaminocarbonyl and cyclopropyl,
worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Hydroxy,wherein alkyl may be substituted with a hydroxy substituent,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.or one of its salts, its solvates or the solvates of its salts.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass2. A compound according to claim 1, characterized in that
R1 für Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert ist mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Trifluormethoxy,wherein phenyl is substituted by 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of trifluoromethyl, trifluoromethoxy,
Methyl, Ethyl und Methoxy,Methyl, ethyl and methoxy,
R2 für Phenyl, Pyridyl oder Chinolinyl steht,R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl,
wobei Phenyl, Pyridyl und Chinolinyl substituiert sein können mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Phenyl undwherein phenyl, pyridyl and quinolinyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, phenyl and
Pyridyl,pyridyl,
worin Phenyl und Pyridyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Methyl, Ethyl, Methoxy und Ethoxy, R3 für Morpholin-4-yl, l,l-Dioxidothiomoφholin-4-yl, 3-Hydroxyazetidiny-l-yl, 3- Hydroxypyrrolidin-1-yl, 4-Cyanopiperidin-l-yl oder 4-Hydroxypiperidin-l-yl steht,wherein phenyl and pyridyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, methyl, ethyl, methoxy and ethoxy, R 3 is morpholin-4-yl, 1,1-dioxothiomethyl-4-yl, 3-hydroxyazetidinyl-1-yl, 3-hydroxypyrrolidin-1-yl, 4-cyanopiperidin-1-yl or 4-hydroxypiperidin-1-yl stands,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.or one of its salts, its solvates or the solvates of its salts.
3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass3. A compound according to claim 1 or 2, characterized in that
R1 für Phenyl steht,R 1 is phenyl,
wobei Phenyl substituiert ist mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl und Ethyl,wherein phenyl is substituted with a substituent selected from the group consisting of trifluoromethyl and ethyl,
R2 für Phenyl, Pyridyl oder Chinolinyl steht,R 2 is phenyl, pyridyl or quinolinyl,
wobei Phenyl und Pyridyl substituiert sein können mit einem Substituentenwherein phenyl and pyridyl may be substituted with a substituent
Phenyl,phenyl,
worin Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Trifluormethyl und Methoxy,wherein phenyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of halogen, trifluoromethyl and methoxy,
undand
wobei Chinolinyl substituiert ist mit einem Substituenten Methoxy,where quinolinyl is substituted by a methoxy substituent,
R3 für Morpholin-4-yl steht,R 3 is morpholin-4-yl,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.or one of its salts, its solvates or the solvates of its salts.
4. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Substituenten -R1 und -CH=CH-R2 in cis-Position zueinander stehen.4. A compound according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the substituents -R 1 and -CH = CH-R 2 are in cis position to each other.
5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel5. A process for the preparation of a compound of formula (I) or one of its salts, its solvates or the solvates of their salts according to claim 1, characterized in that a compound of formula
(H), in welcher(H), in which
R1 und R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen,R 1 and R 3 have the meaning given in claim 1,
mit einer Verbindung der Formelwith a compound of the formula
Y^^R2 (πi),Y ^^ R 2 (πi),
in welcherin which
R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweist, undR 2 has the meaning given in claim 1, and
Y für -P(=O)(OCH2CH3)2 oder -P+(Phenyl)3X~ steht,Y is -P (= O) (OCH 2 CH 3 ) 2 or -P + (phenyl) 3 X ~ ,
wobeiin which
X für eine Halogenid, bevorzugt Bromid oder Chlorid, steht,X is a halide, preferably bromide or chloride,
umgesetzt wird.is implemented.
6. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.6. A compound according to any one of claims 1 to 4 for the treatment and / or prophylaxis of diseases.
7. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.7. Use of a compound according to any one of claims 1 to 4 for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases.
8. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, thromboembolischen Erkrankungen und/oder von Tumorerkrankungen.8. Use of a compound according to any one of claims 1 to 4 for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of cardiovascular diseases, thromboembolic diseases and / or tumor diseases.
9. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro.9. Use of a compound according to any one of claims 1 to 4 for the prevention of blood coagulation in vitro.
10. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.10. A medicament comprising a compound according to any one of claims 1 to 4 in combination with an inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipient.
1 1. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff.1 1. A medicament containing a compound according to any one of claims 1 to 4 in combination with another active ingredient.
12. Arzneimittel nach Anspruch 10 oder 11 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz- Kreislauf-Erkrankungen, thromboembolischen Erkrankungen und/oder von Tumorerkrankungen. 12. Medicament according to claim 10 or 11 for the treatment and / or prophylaxis of cardiovascular diseases, thromboembolic diseases and / or of tumor diseases.
13. Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen bei Menschen und Tieren unter Verwendung einer antikoagulatorisch wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, eines Arzneimittels nach einem der Ansprüche 10 bis 12 oder eines nach Anspruch 7 oder 8 erhaltenen Arzneimittels.13. A method for the treatment and / or prophylaxis of thromboembolic diseases in humans and animals using an anticoagulatory effective amount of at least one compound according to any one of claims 1 to 4, a drug according to any one of claims 10 to 12 or one obtained according to claim 7 or 8 drug.
14. Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, dadurch gekennzeichnet, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zugegeben wird. 14. A method for preventing blood coagulation in vitro, characterized in that an anticoagulatory effective amount of a compound according to any one of claims 1 to 4 is added.
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