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EP1370573A2 - Low molecular serine protease inhibitors comprising polyhydroxy-alkyl and polyhydroxy-cycloalkyl radicals - Google Patents

Low molecular serine protease inhibitors comprising polyhydroxy-alkyl and polyhydroxy-cycloalkyl radicals

Info

Publication number
EP1370573A2
EP1370573A2 EP01969785A EP01969785A EP1370573A2 EP 1370573 A2 EP1370573 A2 EP 1370573A2 EP 01969785 A EP01969785 A EP 01969785A EP 01969785 A EP01969785 A EP 01969785A EP 1370573 A2 EP1370573 A2 EP 1370573A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
alkyl
phenyl
pyr
equal
cooh
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
EP01969785A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Dieter Herr
Helmut Mack
Werner Seitz
Wilfried Hornberger
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Abbott GmbH and Co KG
Original Assignee
Abbott GmbH and Co KG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott GmbH and Co KG filed Critical Abbott GmbH and Co KG
Publication of EP1370573A2 publication Critical patent/EP1370573A2/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond

Definitions

  • the present invention relates to new amidines and guanidines, their preparation and their use as competitive inhibitors of trypsin-like serine proteases, particularly thrombin and the complement proteases Cls and Clr.
  • the invention also relates to pharmaceutical compositions which contain the compounds as active constituents, and to the use of the compounds as thrombin inhibitors, anticoagulants, complement inhibitors and as anti-inflammatory agents.
  • Characteristic of the new compounds is the linkage of a serine protease inhibitor - with amidine or guanidine function, with an alkyl radical with two or more hydroxyl functions, this alkyl radical being derived from sugar derivatives. In this case, several sugar building blocks or building blocks derived from sugar can also be linked to one another. This principle of coupling with sugar derivatives leads to orally active compounds.
  • Reducing sugars are sugars that are able to reduce Cu (II) ions in solution to Cu (I) oxide.
  • Reducing sugars include:
  • aldoses whether in open chain or cyclic form
  • triosen or tetraoses such as erythrose, threose or pentoses such as arabinose, xylose, rhamnose, fucose, ribose or hexoses such as glucose, mannose, galactose, 2-deoxy-D-glucose, etc.
  • Hydroxyketoses contain a H0-CH 2 -C0 group. Fructose or ribulose are examples of this.
  • Di-oligo- and polysaccharides which contain a hemiacetal such as lactose, melibiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, altohexaose or cellulose oligomers such as cellobiose, cellotriose or dextranoligomers or pullulanoligomers or inulin oligomers etc.
  • Sugar derivatives and complex oligosaccharides which contain a hemiacetal such as, for example, glucuronic acid, galacturonic acid, 2-deoxy-D-glucose, 2-deoxy-2-fluoro-D-glucose, glucosamine, lM-acetyl-D-glucosamine oligomers of pectin, hyaluronic acid.
  • sugar derivatives are the sugar acids which are reacted with a terminal amine function of the inhibitor via the acyl function.
  • Thrombin belongs to the group of serine proteases and plays a central role as a terminal enzyme in the blood coagulation cascade. Both the intrinsic and the extrinsic coagulation cascade lead to the formation of thrombin from prothrombin over several amplification stages. The thrombin-catalyzed cleavage of fibrinogen to fibrin then initiates blood coagulation and platelet aggregation, which in turn increases thrombin formation by • binding platelet factor 3 and coagulation factor XIII and a whole series of highly active mediators.
  • thromboin formation and action are central events in the development of both white, arterial and red, venous thrombi and therefore potentially effective targets for pharmaceuticals.
  • thrombin inhibitors are able, independently of cofactors, to completely inhibit the effects of free thrombin as well as that bound to platelets. They can prevent thromboembolic events after percutaneous transluminal coronary angioplasty (PTCA) and lysis in the acute phase and serve as anticoagulants in the extracorporeal circulation (cardiopulmonary machine, hemodialysis). They can also be used in general for thrombosis prophylaxis, for example after surgery.
  • PTCA percutaneous transluminal coronary angioplasty
  • lysis in the acute phase and serve as anticoagulants in the extracorporeal circulation (cardiopulmonary machine, hemodialysis). They can also be used in general for thrombosis prophylaxis, for example after surgery.
  • Thrombin inhibitors are suitable for the therapy and prophylaxis of
  • thrombin inhibitors of the D-Phe-Pro-Arg type are known, for which good thrombin inhibition is described in vitro: WO9702284-A, W09429336-A1, W09857932-A1, W09929664-A1, US5939392-A, WO200035869-A1 , WO200042059-A1, DE4421052-A1, DE4443390-A1, DE19506610-A1, W09625426-A1, DE19504504-A1, DE19632772-A1, DE19632773-A1, W09937611-A1, W09937668-A1, WO9523605-A149, A19505705-A149, US9523705-A149 -A1, EP-669317-A1,
  • the activation of the complement system ultimately leads to the lysis of cells via a cascade of approx. 30 proteins. At the same time, molecules are released which, like C5a, can lead to an inflammatory reaction.
  • the complement system serves to ward off foreign bodies such as viruses, fungi, bacteria, cancer cells.
  • the activation in the different ways initially takes place via proteases. By activation, these proteases are in able to activate other molecules of the complement system, which in turn can be inactive proteases. Under physiological conditions, this system - like blood clotting - is under the control of regulatory proteins that counteract excessive activation of the complement system. In these cases, an intervention to inhibit the complement system is not advantageous.
  • the complement system overreacts, contributing to the pathophysiology of diseases.
  • a therapeutic intervention in the complement system by inhibiting or modulating the excessive reaction is desirable.
  • Inhibition of the complement system is possible at different levels in the complement system and by inhibiting different effectors.
  • the literature there are examples of inhibition of the serine proteases at the Cl level with the aid of the Cl esterase inhibitor as well as inhibition at the level of the C3 or C5 convertases with the aid of soluble complement receptor CR1 (sCRl), inhibition at the level of C5 with the help of antibodies, inhibition at the level of C5a with the help of antibodies or antagonists.
  • the tools used to achieve inhibition are proteins in the examples given above.
  • low-molecular substances are described which are used to inhibit the complement system.
  • Some proteases from the various activation routes are particularly suitable for inhibiting the complement system. From the class of thrombin-like serine proteases, these are the complement proteases Clr and Cls in the classic way, factor D and factor B in the alternative way and MASP I and MASP II in the MBL way. The inhibition of these proteases then leads to a restoration of the physiological control of the complement system in the diseases or pathophysiological conditions indicated above.
  • an activation of the complement system can be expected for every inflammatory disease that is associated with the immigration of neutrophil blood cells. It is therefore expected that in all of these diseases an improvement in the pathophysiological status will be achieved by inhibiting parts of the complement system.
  • complement is associated with the following diseases or pathophysiological conditions Reperfusion damage after ischemia; Ischemic conditions occur during, for example, operations with the aid of heart-lung machines; Operations in which blood vessels are generally pinched to avoid major bleeding; Myocardial infarction; thromboembolic stroke; Pulmonary thrombosis, etc .;
  • organ failure such as multiple organ failure or ARDS (adult respiratory distress syndrome);
  • Alzheimer's disease and other inflammatory neurological diseases such as myastenia graevis, multiple sclerosis, cerebral lupus, Guillain-Barre syndrome; meningitis; Encaphi1itiden; Systemic lupus erythematosus (SLE);
  • Rheumatoid arthritis and other inflammatory diseases of the rheumatoid group e.g. Behcet's syndrome; Juvenile Rheumatoid Arthritis;
  • kidney inflammation of different origins such as Glomerulonephritis, lupus nephriti;
  • FUT and FU derivatives are amidinophenol esters and amidinonaphthol esters, respectively, and are described as complement inhibitors (eg Immunology (1983), 49 (4), 685-91).
  • Inhibitors which inhibit Cls and / or Clr but do not inhibit factor D are desirable. The following should preferably not be inhibited: t-PA, plasmin.
  • Thrombin Reagent (Cat. No. '126 594, Boehringer, Mannneim, Germany)
  • test substance solution and 50 ul citrate plasma are incubated for 2 minutes at 37 ° C (CL8, ball type, Bender & Hobein, Kunststoff, FRG). Then 100 ⁇ l thrombin reagent (37 ° C.) is added. The time until the lump of fibrin is formed is determined. The EC ⁇ oo values indicate the concentration at which the thrombin time is doubled.
  • Substrate H-D-Phe-Pip-Arg-pNA2HCl (S-2238, Chromogenix, Mölndahl, Sweden)
  • the chromogenic test can be carried out in microtiter plates. 10 ⁇ l substance solution in DMSO are added to 250 ⁇ l buffer with thrombin (final concentration 0.1 NIH units / ml) and 5 minutes at 20 to
  • Venous blood from the cephalic vein of healthy drug-free test subjects is collected.
  • the blood is mixed 9 to 1 with 0.13 molar trisodium citrate.
  • Platelet-rich plasma PRP
  • PPP Platelet-poor plasma
  • PRP and PPP can be stored for 3 hours at room temperature in closed PE containers. The platelet concentration is measured with a cell counter and should be between 2.5 to 2.8-10 8 / ml.
  • the platelet aggregation is measured turbitrimetrically at 37 ° C. (PAP 4, Biodata Corporation, Horsham, PA, USA). Before thrombin is added, 215.6 ⁇ l of PRP are incubated with 2.2 ⁇ l of test substance for 3 minutes and then stirred at 1000 rpm for 2 minutes. At a final concentration of 0.15 NIH units / ml, 2.2 ⁇ l of thrombin solution lead to the maximum agregation effect at 37 ° C./1000 rpm. The inhibited effect of the test substances is determined by the aggregation rate (slope) of thrombin without
  • Color substrate test for Clr inhibition reagents Clr from human plasma, activated, two-chain form (purity: approx. 95% according to SDS gel). No foreign protease activity detectable.
  • Substrate Cbz-Gly-Arg-S-Bzl product no. : WBAS012, (PolyPeptide, D-38304 Wolfenbüttel, Germany)
  • the test is started by adding 50 ⁇ l of a 1.5 mmolar substrate solution in 30%
  • IC 50 required inhibitor concentration in order to reduce the amidolytic Clr activity to 50%.
  • inhibitor concentration serves as the basis for the calculation.
  • Reagents Cls from human plasma, activated, two-chain form (purity: approx. 95% according to SDS gel). No foreign protease activity detectable.
  • Substrate Cbz-Gly-Arg-S-Bzl
  • Product no . WBAS012, (PolyPeptide, D-38304 Wolfenbüttel, Germany)
  • test buffer which contains Cls with a final concentration of 0.013 U / ml and DTNB with a final concentration of 0.27 mM /. 1 Incubate for 10 minutes at 20 to 25 ° C. The test is started by adding 50 ⁇ l of a 1.5 mmolar substrate solution in 30% DMSO (final concentration 0.375 mmol / 1). After an incubation time of 30 minutes at 20 to 25 ° C., the absorbance of each well at 405 ⁇ m is measured in a two-beam microtiter plate photometer against a blank value (without enzyme).
  • IC 50 inhibitor concentration required in order to reduce the amidolytic Cls activity to 50%.
  • inhibitor concentration serves as the basis for the calculation.
  • VBS stock solution 2.875 g / 1 veronal; 1.875 g / 1 Na veronal;
  • Ca / Mg stock solution 0.15 M Ca ++, 1 M Mg ++ EDTA stock solution:.
  • GVBS ++ buffer Dilute Ca / Mg stock solution 1: 1000 in GVBS buffer
  • GVBS / EDTA buffer Dilute EDTA stock solution 1:10 in GVBS buffer
  • SRBC ⁇ chafserythrocytes
  • SRBC were washed three times with GVBS buffer. The cell number was then set to 5.00E + 08 cells / ml in GVBS / EDTA buffer. Amboceptor was added in a dilution of 1: 600 and the SRBC was sensitized with antibody by incubation for 30 min at 37 ° C. with agitation. The cells were then washed three times with GVBS buffer at 4 ° C., then taken up in GVBS ++ buffer and adjusted to a cell number of 5 ⁇ 10 8 .
  • Lysis approach - Inhibitors were used in various concentrations with human serum or serum of other species in suitable dilution (e.g. 1:80 for human serum; a dilution is suitable at which approximately 80% of the maximum lysis that can be achieved by serum is achieved ) in GVBS ++ for 10 min at 37 ° C ° in a volume of 100 ⁇ l.
  • suitable dilution e.g. 1:80 for human serum; a dilution is suitable at which approximately 80% of the maximum lysis that can be achieved by serum is achieved
  • SRBC sensitized SRBC in GVBS ++ were then added. After incubation for 1 hour at 37 ° C. with agitation, the SRBC were centrifuged off (5 minutes; 2500 rpm 4 ° C.). 130 ul of the cell-free supernatant was transferred to a 96-well plate. The evaluation was carried out by measuring at 540 nm against GVBS ++ buffer.
  • the absorption values at 540 n are used for evaluation.
  • Factor D plays a central role in the alternative way of the complement system. Because of the low plasma concentration of factor D, the enzymatic step of factor B cleavage by factor D represents the rate-determining step in the alternative way of complement activation
  • factor D is a target for the inhibition of the complement system.
  • the commercially available substrate Z-Lys-SBzl * HCl is converted by the enzyme factor D (literature: Kam, CM. Et al., J. Biol. Chem. 262, 3444-3451, 1987).
  • the cleaved substrate is detected by conversion with Ellmann's reagent.
  • the resulting product is detected spectrophotometrically.
  • the response can be followed online. This makes enzyme-kinetic measurements possible.
  • the test is carried out based on clinical tests. By additional activation using e.g. Zymosan or Cobra Venom factor, the test can be modified.
  • EGTA ethylenebis (oxyethylenenitrilo) tetracetic acid
  • Human serum was either purchased from various suppliers (eg Sigma) or obtained from test persons in the BASF Süd outpatient clinic. Guinea pig blood was obtained and diluted 2: 8 in citrate solution. Multiple batches were used with no apparent differences.
  • VBS stock solution 2.875 g / 1 veronal 1.875 g / 1 Na veronal 42.5 g / 1 NaCl
  • VBS stock solution 1 5 with water (Finn Aqua)
  • the erythrocytes from the guinea pig blood were washed several times by centrifugation (5 minutes; 1000 rpm) with GTB until the supernatant was clear. The cell number was set to 2 * 10 9 cells / ml. 2. Procedure: The individual batches were incubated for 30 minutes at 37 ° C. with agitation. The mixture was then stopped with 480 ⁇ l of ice-cold saline (physical saline) and the cells were centrifuged at 5000 rpm for 5 minutes. 200 ⁇ l of the supernatant were measured at 405 nm by transferring them into a microtiter plate and evaluating them in a microtiter plate photometer. Pipetting a (quantities in ⁇ l)
  • the OD values are used for evaluation.
  • test substances are dissolved in isotonic saline immediately before administration to awake Sprague Dawley rats.
  • the application volumes are 1 ml / kg for intravenous bolus injection into the tail vein and 10 ml / kg for oral administration, which is carried out by gavage.
  • blood samples are taken 1 h after oral administration of 21.5 mg-kg -1 or intravenous administration of 1.0 mg-kg -1 of the test substance or the corresponding vehicle (control).
  • the animals are anesthetized by ip application of 25% urethane solution (dose 1 g-kg -1 ip) in physiological saline.
  • the carotid artery is prepared and catheterized.
  • Thrombin time 100 ⁇ l citrate-treated plasma is incubated for 2 min • at 37 ° C. in a coagulometer (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, Kunststoff, FRG). After the addition of 100 ⁇ l of prewarmed (37 ° C.) thrombin reagent (Boehringer Mannheim), the time until 20 to form a fibrin clot was determined.
  • test substances are dissolved in isotonic saline immediately before administration to watchful mongrel dogs.
  • the application volumes are 0.1 ml / kg for intravenous bolus injection and 1 ml / kg for oral administration, which is carried out by gavage. Before and 5, 10, 20, 30, 45, 60, 90,
  • the anti-F Ila activity (ATU / ml) and the concentration of the substance are determined by their anti-F Ha activity in the plasma by means of a chromogenic (S-2238) thrombin assay, calibration curves with r-hirudin and the test substance 5 were used.
  • the plasma concentration of the test substance is the basis for the calculation of the pharmacokinetic parameters: time of the maximum plasma concentration (T max), maximum plasma concentration; Plasma half-life, t 0 .s; Area under the curve (AUC); absorbed part of the test substance (F).
  • Ecarin clotting time 100 ⁇ l of citrated blood are incubated for 2 min at 37 ° C. in a coagulometer
  • PTT activated thromboplastin time
  • Thrombin time 100 ⁇ l citrate-treated plasma is incubated for 2 min at 37 ° C. in a coagulometer (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, Kunststoff, FRG). After the addition of 100 ⁇ l of prewarmed (37 ° C.) thrombin reagent (Boehringer Mannheim), the time until a fibrin clot was formed was determined.
  • the present invention relates to peptidic and peptidomimetic substances, their production and their use as thrombin or complement inhibitors.
  • the invention relates to the use of these new substances for the production of thrombin inhibitors, complement inhibitors, specifically inhibitors of Cls and Clr.
  • the invention relates to the use of chemically stable substances of the general formula I, their tautomers, pharmacologically tolerable salts and prodrugs for the manufacture of medicaments for the treatment and prophylaxis of diseases caused by partial or complete inhibition, in particular selective inhibition, thrombin, or Cls and / or Clr.
  • A stands for H, CH 3 , H- (R A1 ) IA
  • radicals R A1 may be the same or different;
  • R B1 is H, CH 2 OH, C ⁇ _ 4 alkyl
  • R B2 is H, NH 2 , NH-COCH 3 , F, NHCHO
  • R B3 is H, C ⁇ _ 4 -alkyl, CH 2 -0-C ⁇ _ 4 alkyl, COOH, F ', NH-COCH 3 ,
  • CONH 2 R B4 is H, C ⁇ - 4 alkyl, CH 2 -0-C ⁇ _ 4 alkyl, COOH,
  • R D1 is H, C ⁇ _ 4 alkyl
  • R D2 is the same as bond or C 4 alkyl
  • R D4 is the same bond, C ⁇ _ 4 alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO
  • R E1 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (in particular phenyl or naphthyl), heteroaryl (in particular pyridyl, thienyl, imidazolyl, indolyl), C 3 _g-cycloalkyl with a fused-on phenyl ring, the the aforementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 6 alkyl, OH, C 6 alkyl, F, Cl, Br;
  • R E1 furthermore means R E4 0C0-CH 2 - (R E4 is H, C ⁇ _ ⁇ 2 alkyl, C ⁇ _ 3 alkylaryl);
  • R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (especially phenyl or naphthyl), heteroaryl (especially pyridyl, furyl, thienyl, imidazolyl, indolyl), tetrahydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, diphenylmethyl, dicyclohexyl 3 _ 8 -cycloalkyl with a fused-on phenyl ring, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group -C 6 alkyl, OH, 0 -C 6 alkyl, F, Cl, Br, CH (CH 3 ) OH, CH (CF 3 ) 2 ;
  • R E3 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (especially phenyl or naphthyl), heteroaryl (especially pyridyl, thienyl, imidazolyl, indolyl), C 3 _ 8 cycloalkyl with a fused phenyl ring, the the aforementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 6 alkyl, OH, O 6 alkyl, F, Cl, Br;
  • R E1 and R E2 can be accessed via a
  • Bond may be linked to one another, - the groups mentioned under R E2 and R E3 may also be linked to one another via a bond;
  • R E2 also stands for C0R E5 (R E5 is OH, O-Cx-e-alkyl, OC ⁇ _ 3 alkylaryl), CONR E6 R E7 (with R E6 or R E7 being H, C ⁇ - 6 alkyl, Co- 3 -alkylaryl), R E6 R E 7.
  • E can also stand for D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;
  • N- C (C ⁇ - 3 alkyl) 2 , CH (C ⁇ _ 3 alkyl), CHF, CHCl, CF 2 can be replaced;
  • R G2 H, C ⁇ -C 6 alkyl, aryl
  • R G4 H -CC 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (in particular
  • nK 0, 1, 2, 3;
  • Q ⁇ is equal to ' C 2 _6-alkyl, where up to two CH 2 groups can be replaced by 0 or S;
  • R ⁇ l is H, C ⁇ _ 3 alkyl, OH, O-C1-3 alkyl, F, Cl, Br;
  • R K2 is H, C1-3 alkyl, O-Ci-3 alkyl, F, Cl, Br;
  • X ⁇ is 0, S, NH, N-C ⁇ _ 6 alkyl
  • W ⁇ is CH or 'where in the latter
  • nK o, 1, 2;
  • R L1 is H, OH, 0-C 6 alkyl, O- (CH 2 ) o- 3 phenyl,
  • radicals R A1 can be identical or different;
  • R B3 AB can stand for
  • R B is H, CH 2 OH
  • R B2 is H, NH 2 , NH-COCH 3 , F
  • R B3 is H, CH 3 , CH 2 -0 -C 4 alkyl, COOH
  • R B4 is H, -CC 4 alkyl, CH-0 -C 4 -alkyl, COOH,
  • R B 6 are the same C ⁇ - 4 alkyl, phenyl, benzyl B7 B is H, C ⁇ _ 4 alkyl, phenyl, benzyl
  • R D1 is H, C ⁇ _ 4 alkyl
  • R D2 is the same as bond or C ⁇ _ 4 alkyl, R D3 equal
  • R D4 is the same bond, C ⁇ _ alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO
  • R E1 means H, Ci- ⁇ - alkyl, C 3 _ 8 -cycloalkyl, the abovementioned radicals up to three identical or different
  • R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (in particular phenyl or naphthyl), heteroaryl (in particular pyridyl, furyl, thienyl), tetrahydropyranyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, the aforementioned radicals can carry up to three identical or different substituents of the group Cx-g-alkyl, OH, 0-C ⁇ _ 6- alkyl, F, Cl, Br, CH (CF 3 ) 2 ;
  • R E3 means H, Ci-e-alkyl, C 3-8 cycloalkyl
  • R E2 furthermore stands for C0R E5 (R E5 equals OH, 0-C ⁇ _ 6 -alkyl, OC ⁇ _ 3 -alkylaryl), C0NR E6 R E7 (with R E6 or R E7 equals H, C ⁇ _ 6 -alkyl, Co- 3 - Alkylaryl), NR 6R E ; E can also stand for D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;
  • n G 0.1;
  • R ⁇ i is H, C ⁇ - 3 alkyl, OH, OC 1-3 -alkyl, F, Cl, Br;
  • R K2 is H, C 1-3 alkyl, 0-C 1 _ 3 alkyl, F, Cl, Br;
  • R L1 is H, OH, 0 -C 5 alkyl, C0 2 -C 1 _ 6 alkyl.
  • Preferred compounds of the formula are preferred thrombin inhibitors
  • radicals R A1 can be the same or different.
  • R B3 is H, CH 3 , COOH
  • R B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur kB 0.1
  • R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, phenyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, the abovementioned radicals having up to three identical or different substituents from the group C 4 alkyl, OH, 0-CH 3 , F, Cl can wear
  • the ring can be replaced by
  • R 1 is H, CH 3 , OH, 0-CH 3 , F, Cl;
  • X ⁇ is 0, S, NH, N-CH 3 ;
  • R Li is H, OH, C0 -C ⁇ - 6 alkyl.
  • the compounds of the formula are preferred as complement inhibitors
  • A stands for H, H- (R A1 ) iA
  • radicals R A1 can be the same or different.
  • R B3 AB can stand for
  • R B3 is H, CH 3 , COOH
  • R B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
  • R B6 is C 4 alkyl, phenyl, benzyl
  • B B7 is H 4 C 4 alkyl, phenyl, benzyl
  • R D1 equal to H, C ⁇ - 4 alkyl
  • R D2 is the same as bond or C ⁇ _ 4 alkyl
  • R D6 is H, CH 3
  • R D4 is bond, C 1 _ 4 -alkyl, CO, S0, -CH 2 -CO,
  • R E2 means H, C 6 alkyl, C 8 cycloalkyl, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 4 alkyl, OH, 0-CH 3 , F, Cl
  • the ring can be replaced by
  • n 0.1;
  • R ⁇ l is H, CH 3 , OH, 0-CH 3 , F, Cl;
  • X ⁇ is 0, S, NH, N-CH 3 ;
  • R Li is H, OH, C0 2 -C ⁇ - 6 alkyl.
  • the compounds of the formula are particularly preferred as thrombin inhibitors
  • radicals R A1 can be the same or different.
  • R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, phenyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl;
  • the E component preferably has a D configuration
  • the G building block preferably having an L configuration:
  • R L1 is H, OH, C0 2 -C ⁇ _ 6 alkyl.
  • the compounds of the formula are particularly preferred as complement inhibitors
  • A stands for H, H- (R A1 ) iA
  • radicals R A1 can be the same or different.
  • R B3 AB stands for
  • R B3 is H, CH 3 , COOH
  • R B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
  • R B6 is C ⁇ _ 4 alkyl, phenyl, benzyl
  • B B7 is H, C 4 alkyl, phenyl, benzyl
  • R D4 is bond, C ⁇ _ 4 alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO, E stands for
  • R E2 means H, -C 6 alkyl, C ß -s-cycloalkyl, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from group F, Cl
  • R L1 equals H, OH.
  • Preferred A-B modules are:
  • C ⁇ _ x alkyl includes all straight-chain and branched alkyl chains with one to ⁇ carbon atoms.
  • C 3 _ 8 -cycloalkyl stands for carbocyclic saturated radicals with 3 to 8 carbon atoms.
  • aryl stands for carbocyclic aromatics with 6 to 14 carbon atoms, in particular for phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl.
  • heteroaryl stands for five- and six-ring aromatics with at least one heteroato N, 0 or S, in particular for pyridyl, thienyl, furyl, thiazolyl, imidazolyl; two aromatic rings can also be fused, e.g. Indole, N-C ⁇ _ -Alkylindol, benzothiophene, benzothiazole, benzimidazole, quinoline, isoquinoline.
  • C x - y -alkylaryl stands for carbocyclic aromatics which are linked to the skeleton via an alkyl group with X, x + 1, ... y-1 or y C atoms.
  • the compounds of the formula I can be present as such or in the form of their salts with physiologically tolerated acids.
  • acids are: hydrochloric acid, citric acid, tartaric acid, lactic acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, acetic acid, formic acid, maleic acid, fumaric acid, succinic acid, hydroxysuccinic acid, sulfuric acid, glutaric acid, aspartic acid, pyruvic acid, benzoic acid and oxyacid, glucuronic acid, glucuronic acid, glucuronic acid acetylglycine.
  • the new compounds of formula I are competitive inhibitors of thrombin or the complement system, especially C ⁇ s , and further from C ⁇ r .
  • the compounds according to the invention can be administered orally or parenterally (subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, rectally) in the customary manner. It can also be applied with vapors or sprays through the nasopharynx.
  • the dosage depends on the age, condition and weight of the patient and on the type of application.
  • the daily dose of active ingredient per person is between approximately 10 and 2000 mg when administered orally and between approximately 1 and 200 mg when administered parenterally. This dose can be given in 2 to 4 single doses or once a day as a depot form.
  • the compounds can be used in the customary pharmaceutical application forms in solid or liquid form, for example as tablets, film-coated tablets, capsules, powders, granules, dragees, suppositories, solutions, ointments, creams or sprays. These are manufactured in the usual way.
  • the active ingredients can be processed with the usual pharmaceutical auxiliaries such as tablet binders, fillers, preservatives, tablet disintegrants, flow regulators, plasticizers, wetting agents, dispersants, emulsifiers, solvents, retardants, antioxidants and / or propellants (see H. Sucker et al.: Pharmaceuticals Technology, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978).
  • the application forms thus obtained normally contain the active ingredient in an amount of 0.1 to 99% by weight.
  • Prodrugs mean compounds that are in vivo
  • these substances are prodrugs from which the free amidine / guanidine compounds are formed under in vivo conditions. If ester compounds are present in the compounds of the formula I, these compounds can act in vivo as prodrugs from which the corresponding carboxylic acids are formed.
  • Acetyl Acpc 1-aminocyclopentane-1-carboxylic acid
  • Ala Alanine b-Ala: b-Alanine (3-aminopropionic acid) on: Amidino amb: amidinobenzyl
  • Asp Aspartic Acid Aze: Azetidine-2-carboxylic acid
  • Boc tert. butyloxycarbonyl
  • Chg cyclohexylglycine
  • Gly Glycine Glu: Glutamic acid for: Füran guan: Guanidino urine: Hydroxyamidino
  • Ind-2-COOH indoline-2-carboxylic acid iPr: iso-propyl Leu: leucine
  • Me Methyl MPLC: medium pressure liquid chromatography
  • NBS N-bromosuccinimide
  • Ohi-2-COOH octahydroindole-2-carboxylic acid
  • Ohii-1-COOH octahydroisoindole-1-carboxylic acid
  • Ph Phenyl Phe: Phenylal nin
  • Phg phenylglycine
  • TEA trietylamine
  • TFA trifluoroacetic acid
  • Thz-2-COOH 1,3-thiazolidine-2-carboxylic acid
  • Thz-4-COOH 1,3-thiazolidine-4-carboxylic acid thioph: thiophene
  • 3-Tic 3-tetrahydroisoquinoline carboxylic acid TOTU: 0- (cyano-ethoxycarbonylmethylene) -amino-] - N, N, N ', N' -tetramethyluronium tetrafluoroborate Z: Benzy1oxycarbony1
  • the building blocks A-B, D, E, G and K are preferably constructed separately and used in a suitably protected form (see scheme I, use of orthogonal protective groups (P or P *) which are compatible with the synthetic method used).
  • L * is an amide, thioamide or nitile function at this stage of the synthesis, then this is converted into the corresponding amidine or hydroxyamidine function, depending on the end product sought.
  • Amidine syntheses for the benzidine, picolylamidine, thienyl amidine, furylamidine and thiazolylamidine compounds of structure type I starting from the corresponding carboxylic acid amides, nitriles, carboxylic acid thioamides and hydroxyamidines are described in a number of patent applications (see, for example, WO 95/35309 , WO 96/178860, WO 96/24609, WO 96/25426, WO 98/06741, WO 98/09950.
  • Scheme II describes an alternative way of preparing the compounds I by a convergent synthesis.
  • the appropriately protected building blocks P-D-E-OH and H-G-K-L * are coupled together, the resulting intermediate product P-D-E-G-K-L * in
  • Boc, Cbz or F oc are used as N-terminal protective groups
  • C-terminal protective groups are methyl, tert-butyl and benzyl ester.
  • Amidine protecting groups are preferably BOC, Cbz and groups derived therefrom for solid phase synthesis. If the intermediate products contain olefinic double bonds, protective groups which are split off by hydrogenolysis are unsuitable.
  • Boc protective groups are removed hydrogenolytically by means of dioxane / HCl or TFA / DCM, Cbz protective groups or with HF, Fmoc protective groups with piperidine.
  • the saponification of ester functions takes place with LiOH in an alcoholic solvent or in dioxane / water.
  • t-Butyl esters are cleaved with TFA or dioxane / HCl.
  • Reversed phase HPLC separations were carried out with acetonitrile / water and HOAc buffer.
  • the starting compounds can be prepared using the following methods: AB blocks:
  • A-B building blocks are commercially available sugar derivatives.
  • protective groups are introduced at the necessary points.
  • functional groups are converted into reactive or leaving groups (e.g. cabonic acids into active esters, mixed anhydrides, etc.) in order to enable a corresponding chemical link with the 10 other building blocks.
  • the aldehyde or keto function of the sugar derivatives can be used directly for the reductive alkylation with the terminal N atom of the D or E building block.
  • the D building blocks 4-aminocyclohexane carboxylic acid, 4-aminobenzoic acid, 4-aminomethylbenzoic acid, 4-aminomethylphenylacetic acid and 4-aminophenylacetic acid can be purchased for 20.
  • the compounds glycine, (D) or 25 (L) -alanine, (D) or (L) -valin, (D) -phenylalanine, (D) -cyclohexyl-alanine, (D) -cycloheptylglycine, D-diphenylalanine, etc. are either commercially available as free amino acids, as Boc-protected compounds or as corresponding methyl esters.
  • Cycloheptylglycine and cyclopentylglycine were prepared by reacting cycloheptanone or cyclopentanone with ethyl isonitrile acetic ester in accordance with known regulations (H.-J. recupertorius, J. Flossdorf, M.Kula, Chem. Ber. 1985, 108, 3079 or U. Schöllkopf and R. Meyer, Liebigs Ann.CHem. 1977,
  • D-dicyclohexylalanine was prepared by hydrogenation in accordance with T.J. Tucker et al J. Med. Chem. 1997, 40, 3687-3693.
  • amino acids mentioned were provided with a protective group either at the N or at the C-terminal according to generally known processes.
  • Boc-2-aminomethyl-thiazole 4-carboxamide (75.0 g, 0.29 mol) were suspended in 524 ml of methylene chloride and treated at -5 to 0 ° C with triethylamine ( 78.9 g, 0.78 mol) and 79.5 g (0.38 mol) of trifluoroacetic anhydride were added. The mixture was stirred for 1 h, the mixture was allowed to warm to 20 to 25 ° C., 1190 ml of water were added and the phases were separated.
  • This compound was synthesized starting from 5-aminomethyl-3-cyanothiophene by reaction with (Boc) 2 0 to 5-t-butyl-oxycarbonyl-aminomethyl-3-cyanothiophene, conversion of the nitrile function into the corresponding thioamide by addition of hydrogen sulfide, methylation of the thioamide function with methyl iodide, reaction with ammonium acetate to the corresponding amidine and subsequent deprotection with hydrochloric acid in isopropanol to give 5-aminomethyl-3-amidino-thiophene bishydrochloride.
  • the representation of the HGK-CN building block is exemplary for prolyl-4-cyanobenzylamide in WO 95/35309, for 3,4-dehydroprolyl-4-cyanobenzylamide in WO 98/06740 and for 3,4-dehydroprolyl-5- (2-cyano ) -thienylmethylamide described in WO 98/06741.
  • the preparation of 3,4-dehydroprolyl-5- (3-cyano) -thienylmethylamide was carried out analogously by coupling Boc-3,4-dehydro-prolin with 5-aminomethyl-3-cyano-thiophene hydrochloride and subsequent deprotection.
  • HEGKC N0H
  • H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 - 5- (3-am) -thioph was analogous to H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz
  • Example 6 (L) -Glycer- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 COOH This compound was prepared analogously to Example 1 starting from L- (+) -glyceraldehyde , ESI-MS: M + H + : 479
  • This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-melibiosis.
  • This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-glucose.
  • This compound was prepared analogously to Example 7 starting from maltohexaose.
  • This compound was prepared analogously to Example 7 starting from cellobiose.
  • This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-glucose.
  • This compound was prepared analogously to Example 7 starting from maltose.
  • Example 17 Malto- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz
  • the thrombin time was determined according to Example A for the following compounds:

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Abstract

The invention relates to novel amidines and quanidines, the production and use thereof and the use thereof as trypsine-type serine protease competitive inhibitors, especially thrombine and compliment proteases Cls and Clr. The invention also relates to pharmaceutical compositions which contain said compounds as active ingredients, in addition to the use of the compounds as thrombine inhibitors, anticoagulants, compliment inhibitors and anti-inflammatory agents. The novel compositions are characterised by the linkage of a serine protease inhibitor having amidine or quanidine functions with an alkyl radical having two or more hydroxyl functions, whereby said alkyl radical is derived from sugar derivates. Several sugar structural components or components derived from sugar can therefore be linked to each other. Said principle of linking sugar derivates enables oral active compounds to be obtained.

Description

Niedermolekulare Inhibitoren von Serinproteasen mit Polyhydroxy- alkyl- und Polyhydroxycycloalkylresten Small molecular inhibitors of serine proteases with polyhydroxyalkyl and polyhydroxycycloalkyl residues
Beschreibungdescription
Die vorliegende 'Erfindung betrifft neue Amidine und Guanidine, ihre Herstellung und ihre Verwendung als kompetitive Inhibitoren von Trypsin-ähnlichen Serinproteasen, besonders Thrombin und der Komplementproteasen Cls und Clr.The present invention relates to new amidines and guanidines, their preparation and their use as competitive inhibitors of trypsin-like serine proteases, particularly thrombin and the complement proteases Cls and Clr.
Die Erfindung bezieht sich auch auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Verbindungen als aktive Bestandteile enthalten, sowie die Verwendung der Verbindungen als Thrombin- inhibitoren, Antikoagulantien, Komplementinhibitoren und als antiinflammatorische Agenzien. Charakteristisch für die neuen Verbindungen ist die Verknüpfung eines Serinproteaseinhibitors - mit Amidin- oder Guanidinfunktion, mit einem Alkylrest mit zwei oder mehreren Hydroxylfunktionen, wobei sich dieser Alkylrest von Zuckerderivaten ableitet. Dabei können auch mehrere Zucker- bausteine oder von Zuckern abgeleitete Bausteine miteinander verknüpft sein. Dieses Prinzip der Kupplung mit Zuckerderivaten führt zu oral aktiven Verbindungen.The invention also relates to pharmaceutical compositions which contain the compounds as active constituents, and to the use of the compounds as thrombin inhibitors, anticoagulants, complement inhibitors and as anti-inflammatory agents. Characteristic of the new compounds is the linkage of a serine protease inhibitor - with amidine or guanidine function, with an alkyl radical with two or more hydroxyl functions, this alkyl radical being derived from sugar derivatives. In this case, several sugar building blocks or building blocks derived from sugar can also be linked to one another. This principle of coupling with sugar derivatives leads to orally active compounds.
Als bevorzugte Zuckerderivate kommen alle Arten von reduzierenden Zuckern zum Einsatz, die reduktiv mit einer terminalen Amin- funktion des Inhibitors umgesetzt werden.All types of reducing sugars which are reductively reacted with a terminal amine function of the inhibitor are used as preferred sugar derivatives.
Reduzierende Zucker sind Zucker, die in der Lage sind, Cu (II) ionen in Lösung zu Cu (I) oxid zu reduzieren.Reducing sugars are sugars that are able to reduce Cu (II) ions in solution to Cu (I) oxide.
Reduzierende Zucker umfassen:Reducing sugars include:
Alle Aldosen (ob in offenkettiger oder cyclischer Form) (z.B. Triosen oder Tetraosen wie Erythrose, Threose oder Pentosen wie Arabinose, Xylose, Rhamnose, Fucose, Ribose oder Hexosen wie Glucose, Mannose, Galactose, 2-Deoxy-D-Glucose, etc.)All aldoses (whether in open chain or cyclic form) (e.g. triosen or tetraoses such as erythrose, threose or pentoses such as arabinose, xylose, rhamnose, fucose, ribose or hexoses such as glucose, mannose, galactose, 2-deoxy-D-glucose, etc. )
Alle (Hydroxy)Ketosen. Hydroxyketosen enthalten eine H0-CH2-C0- Gruppe. Fructose oder Ribulose sind hierfür Beispiele.All (hydroxy) ketoses. Hydroxyketoses contain a H0-CH 2 -C0 group. Fructose or ribulose are examples of this.
Di- Oligo- und Polysaccharide die ein Hemiacetal enthalten, wie z.B. Lactose, Melibiose, Maltose, Maltotriose, Maltotetraose, altohexaose oder Celluloseoligomere wie Cellobiose, Cellotriose oder Dextranoligomere oder Pullulanoligomere oder Inulinoligomere etc . Zuckerderivate und komplexe Oligosaccharide die ein Hemiacetal enthalten wie z.B. Glucuronsäure, Galacturonsäure, 2-Deoxy- D-Glucose, 2-Deoxy-2-Fluoro-D-Glucose, Glucosamin,lM-Acetyl- D-Glucosamin Oligomere von Pektin, Hyaluronsäure .Di-oligo- and polysaccharides which contain a hemiacetal, such as lactose, melibiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, altohexaose or cellulose oligomers such as cellobiose, cellotriose or dextranoligomers or pullulanoligomers or inulin oligomers etc. Sugar derivatives and complex oligosaccharides which contain a hemiacetal such as, for example, glucuronic acid, galacturonic acid, 2-deoxy-D-glucose, 2-deoxy-2-fluoro-D-glucose, glucosamine, lM-acetyl-D-glucosamine oligomers of pectin, hyaluronic acid.
Als weitere bevorzugte Zuckerderivate sind die Zuckersäuren zu nennen, welche über die Acylfunktion mit einer terminalen Amin- funktion des Inhibitors umgesetzt werden.Further preferred sugar derivatives are the sugar acids which are reacted with a terminal amine function of the inhibitor via the acyl function.
Thrombin gehört zur Gruppe der Serinproteasen und spielt als ter inales Enzym in der Blutgerinnungskaskade eine zentrale Rolle. Sowohl die intrinsische als auch die extrinsische Gerinnungskaskade führen über mehrere Verstärkungsstufen zur Entstehung von Thrombin aus Prothrombin. Die thrombinkatalysierte Spaltung von Fibrinogen zu Fibrin leitet dann die Blutgerinnung und die Aggregation der Thrombozyten ein, die ihrerseits durch • die Bindung von Plättchenfaktor 3 und Gerinnungsfaktor XIII sowie eine ganze Reihe von hochaktiven Mediatoren die Thrombinbildung verstärken.Thrombin belongs to the group of serine proteases and plays a central role as a terminal enzyme in the blood coagulation cascade. Both the intrinsic and the extrinsic coagulation cascade lead to the formation of thrombin from prothrombin over several amplification stages. The thrombin-catalyzed cleavage of fibrinogen to fibrin then initiates blood coagulation and platelet aggregation, which in turn increases thrombin formation by • binding platelet factor 3 and coagulation factor XIII and a whole series of highly active mediators.
Thrombinbildung und -Wirkung sind zentrale Ereignisse bei der Entstehung sowohl von weißen, arteriellen als auch von roten, venösen Thromben und daher potentiell wirksame Angriffspunkte für Pharmaka. Thrombininhibitαren sind im Gegensatz zu Heparin in der Lage, unabhängig von Kofaktoren gleichzeitig die Wirkungen von freiem Thrombin als auch an Thrombozyten gebundenes vollständig zu hemmen. Sie können in der Akutphase thromboembolische Ereignisse nach perkutaner transluminaler koronarer Angioplastie (PTCA) und Lyse verhindern und als Antikoagulantien in der extrakorporalen Zirkulation (Herz-Lungen-Maschine, Hämodialyse) dienen. Sie können auch allgemein zur Thromboseprophylaxe, beispielsweise nach chirurgischen Eingriffen dienen.Thrombin formation and action are central events in the development of both white, arterial and red, venous thrombi and therefore potentially effective targets for pharmaceuticals. In contrast to heparin, thrombin inhibitors are able, independently of cofactors, to completely inhibit the effects of free thrombin as well as that bound to platelets. They can prevent thromboembolic events after percutaneous transluminal coronary angioplasty (PTCA) and lysis in the acute phase and serve as anticoagulants in the extracorporeal circulation (cardiopulmonary machine, hemodialysis). They can also be used in general for thrombosis prophylaxis, for example after surgery.
Inhibitoren des Thrombins eignen sich zur Therapie und Prophylaxe vonThrombin inhibitors are suitable for the therapy and prophylaxis of
- Krankheiten, deren Pathomechanis us direkt oder indirekt auf der proteolytischen Wirkung von Thrombin beruht,- diseases whose pathomechanism is based directly or indirectly on the proteolytic effects of thrombin,
- Krankheiten, deren Pathomechanismus auf der thrombin- abhängigen Aktivierung von Rezeptoren und Signaltrans- duktionen beruht,- diseases whose pathomechanism is based on thrombin-dependent activation of receptors and signal transduction,
- Krankheiten, die mit Stimulation oder Inhibition von Gen- expressionen in Körperzellen einhergehen, Krankheiten, die auf der itogenen Wirkung von Thrombin beruhen,- Diseases associated with stimulation or inhibition of gene expression in body cells, Diseases based on the itogenic effects of thrombin
Krankheiten, die auf einer thrombinabhängigen Kontraktili- täts- und Permeabilitätsveränderung von Epithelzellen beruhen,Diseases based on a thrombin-dependent change in contractility and permeability of epithelial cells,
thrombinabhängigen, thromboembolischen Ereignissen,thrombin-dependent, thromboembolic events,
- disseminierter intravasaler Koagulation (DIC) ,- disseminated intravascular coagulation (DIC),
Reokklusion und zur Verkürzung der Reperfusionszeit bei Ko edikation mit Thrombolytika,Reocclusion and to shorten the reperfusion time when co-administered with thrombolytics,
- früher Reokklusion und später Restenosierung nach PTCA,- early reocclusion and later restenosis after PTCA,
• - von thrombinabhängiger Proliferation von Glattmuskelzellen, • - of thrombin-dependent proliferation of smooth muscle cells,
der Akkumulation aktiven Thrombins im ZNS,the accumulation of active thrombin in the CNS,
- von Tumorwachstum sowie gegen die Adhäsion und Metastasierung von Tumorzellen.- of tumor growth and against the adhesion and metastasis of tumor cells.
Es sind eine Reihe von Thrombininhibitoren vom D-Phe-Pro-Arg Typ bekannt, für die in vitro eine gute Thrombinhemmung beschrieben ist: WO9702284-A, W09429336-A1, W09857932-A1, W09929664-A1, US5939392-A, WO200035869-A1, WO200042059-A1, DE4421052-A1, DE4443390-A1, DE19506610-A1, W09625426-A1, DE19504504-A1, DE19632772-A1, DE19632773-A1, W09937611-A1, W09937668-A1, WO9523609-A1, US5705487-A1, WO9749404-A1, EP-669317-A1,A number of thrombin inhibitors of the D-Phe-Pro-Arg type are known, for which good thrombin inhibition is described in vitro: WO9702284-A, W09429336-A1, W09857932-A1, W09929664-A1, US5939392-A, WO200035869-A1 , WO200042059-A1, DE4421052-A1, DE4443390-A1, DE19506610-A1, W09625426-A1, DE19504504-A1, DE19632772-A1, DE19632773-A1, W09937611-A1, W09937668-A1, WO9523605-A149, A19505705-A149, US9523705-A149 -A1, EP-669317-A1,
WO9705108-A1, EP 0 672 658. Allerdings weisen etliche dieser Verbindungen eine geringe orale Wirkung auf .WO9705108-A1, EP 0 672 658. However, a number of these compounds have a low oral activity.
In WO 9965934 und in Bioorg. Med. Chem. Lett., 9(14), 2013-2018, 1999 sind Benzamidinderivate vom NAPAP Typ beschrieben, die über einen langen Spacer an Pentasaccaride gekoppelt sind und somit ein duales antithrombotisches Wirkprinzip aufweisen. Eis ist allerdings keine orale Wirkung dieser Verbindungen beschrieben.In WO 9965934 and in Bioorg. Med. Chem. Lett., 9 (14), 2013-2018, 1999 describes benzamidine derivatives of the NAPAP type which are coupled to pentasaccarides via a long spacer and thus have a dual antithrombotic active principle. However, ice is not described as having an oral effect on these compounds.
Die Aktivierung des KomplementSystems führt über eine Kaskade von ca. 30 Proteinen letztlich u.a. zur Lyse von Zellen. Gleichzeitig werden Moleküle freigesetzt, die wie z.B. C5a zu einer Entzündungsreaktion führen können. Unter physiologischen Bedingungen dient das Komplementsystem der Abwehr von Fre d- körpern, wie z.B. Viren, Pilzen, Bakterien, Krebszellen. Die Aktivierung auf den verschiedenen Wegen verläuft dabei zunächst über Proteasen. Durch Aktivierung werden diese Proteasen in die Lage versetzt, andere Moleküle des Komplementsystems, die wiederum inaktive Proteasen sein können, zu aktivieren. Unter physiologischen Bedingungen ist dieses System - ähnlich wie die Blutgerinnung - unter der Kontrolle von Regulatorproteinen, die einer überschießenden Aktivierung des Komplementsystems entgegenwirken. In diesen Fällen ist ein Eingriff, um das Komplementsystem zu inhibieren, nicht vorteilhaft.The activation of the complement system ultimately leads to the lysis of cells via a cascade of approx. 30 proteins. At the same time, molecules are released which, like C5a, can lead to an inflammatory reaction. Under physiological conditions, the complement system serves to ward off foreign bodies such as viruses, fungi, bacteria, cancer cells. The activation in the different ways initially takes place via proteases. By activation, these proteases are in able to activate other molecules of the complement system, which in turn can be inactive proteases. Under physiological conditions, this system - like blood clotting - is under the control of regulatory proteins that counteract excessive activation of the complement system. In these cases, an intervention to inhibit the complement system is not advantageous.
In einigen Fällen überreagiert das KomplementSystem jedoch und trägt damit zur Pathophysiologie von Krankheiten bei. In diesen Fällen ist ein therapeutischer Eingriff in das KomplementSystem durch Inhibition bzw. Modulation der überschießenden Reaktion wünschenswert. Inhibition des Komplementsystems ist auf verschiedenen Ebenen im Komplementsystem und durch Inhibition verschiedener Effektoren möglich. In der Literatur finden sich Beispiele für Inhibition der Serinproteasen auf Cl-Ebene mit Hilfe des Cl-Esterase-Inhibitors ebenso wie Inhibition auf der Ebene der C3- bzw. C5-Konvertasen mit Hilfe von löslichem Komplementrezeptor CR1 (sCRl) , Inhibition auf der Ebene von C5 mit Hilfe von Antikörpern, Inhibition auf der Ebene von C5a mit Hilfe von Antikörpern oder Antagonisten. Die verwendeten Werkzeuge zur Erreichung der Inhibition sind in den oben angegebenen Beispielen Proteine. In der vorliegenden Erfindung werden niedermolekulare Substanzen beschrieben, die zur Inhibition des KomplementSystems verwendet werden.In some cases, however, the complement system overreacts, contributing to the pathophysiology of diseases. In these cases, a therapeutic intervention in the complement system by inhibiting or modulating the excessive reaction is desirable. Inhibition of the complement system is possible at different levels in the complement system and by inhibiting different effectors. In the literature there are examples of inhibition of the serine proteases at the Cl level with the aid of the Cl esterase inhibitor as well as inhibition at the level of the C3 or C5 convertases with the aid of soluble complement receptor CR1 (sCRl), inhibition at the level of C5 with the help of antibodies, inhibition at the level of C5a with the help of antibodies or antagonists. The tools used to achieve inhibition are proteins in the examples given above. In the present invention, low-molecular substances are described which are used to inhibit the complement system.
Für die Inhibition des Komplementsystems sind einige Proteasen der verschiedenen Aktivierungswege besonders geeignet. Aus der Klasse der Thrombin-ähnlichen Serinproteasen sind dies die Komplement-Proteasen Clr und Cls im klassischen Weg, Faktor D und Faktor B im alternativen Weg sowie MASP I und MASP II im MBL- Weg. Die Inhibition dieser Proteasen führt dann zu einer Wiederherstellung der physiologischen Kontrolle des Komplementsystems in den oben angegebenen Krankheiten bzw. pathophysiologisehen Zuständen führen.Some proteases from the various activation routes are particularly suitable for inhibiting the complement system. From the class of thrombin-like serine proteases, these are the complement proteases Clr and Cls in the classic way, factor D and factor B in the alternative way and MASP I and MASP II in the MBL way. The inhibition of these proteases then leads to a restoration of the physiological control of the complement system in the diseases or pathophysiological conditions indicated above.
Generell ist bei jeder entzündlichen Erkrankung, die mit Einwanderung von neutrophilen Blutzellen einhergeht, mit einer Aktivierung des Komplementsystems zu rechnen. Es wird daher erwartet, daß bei allen diesen Erkrankungen durch Inhibition von Teilen des Komplementsystems eine Verbesserung des patho- physiologischen Status erreicht wird.In general, an activation of the complement system can be expected for every inflammatory disease that is associated with the immigration of neutrophil blood cells. It is therefore expected that in all of these diseases an improvement in the pathophysiological status will be achieved by inhibiting parts of the complement system.
Die Aktivierung von Komplement ist verbunden mit den folgenden Krankheiten bzw. pathophysiologischen Zuständen Reperfusionsschäden nach Ischämien; Ischämische Zustände treten ein während z.B. Operationen unter Zuhilfenahme von Herz-Lungenmaschinen; Operationen, in denen Blutgefäße generell zur Vermeidung großer Blutungen abgeklemmt werden; Myokardinfarkt ; thromboembolischer Hirnschlag; Lungenthrombosen etc.;The activation of complement is associated with the following diseases or pathophysiological conditions Reperfusion damage after ischemia; Ischemic conditions occur during, for example, operations with the aid of heart-lung machines; Operations in which blood vessels are generally pinched to avoid major bleeding; Myocardial infarction; thromboembolic stroke; Pulmonary thrombosis, etc .;
Hyperakute Organabstoßung; speziell bei Xenotransplanta- tionen;Hyperacute organ rejection; especially for xenotransplantation;
- Organversagen wie z.B. multiples Organversagen oder ARDS (adult respiratory distress syndrome) ;- organ failure such as multiple organ failure or ARDS (adult respiratory distress syndrome);
Krankheiten, die auf Trauma (Schädeltrauma) oder Polytrauma beruhen, wie z.B. Thermotrauma (Verbrennungen) und "thermal injury" ;Diseases based on trauma (head trauma) or polytrauma, such as Thermal trauma and burns;
- Anaphylaktischer Schock; - Sepsis; "vascular leak syndrom" : bei Sepsis und nach Behandlung mit biologischen Agenzien, wie Interleukin 2 bzw. nach Transplantation;- Anaphylactic shock; - sepsis; "vascular leak syndrome": in sepsis and after treatment with biological agents such as interleukin 2 or after transplantation;
- Alzheimer Krankheit sowie andere entzündliche neurologische Krankheiten wie Myastenia graevis, multiple Sklerose, zerebraler Lupus, Guillain-Barre Syndrome; Meningitiden; Encaphi1itiden; Systemischer Lupus erythematosus (SLE) ;- Alzheimer's disease and other inflammatory neurological diseases such as myastenia graevis, multiple sclerosis, cerebral lupus, Guillain-Barre syndrome; meningitis; Encaphi1itiden; Systemic lupus erythematosus (SLE);
- Rheumatoide Arthritis und andere entzündliche Krankheiten des rheumatoiden Krankheitskreises, wie z.B. Behcet's Syndrom; Juvenile rheumatoide Arthritis;Rheumatoid arthritis and other inflammatory diseases of the rheumatoid group, e.g. Behcet's syndrome; Juvenile Rheumatoid Arthritis;
- Nierenentzündungen unterschiedlicher Genese, wie z.B. Glomerulonephritis, Lupus nephriti;- kidney inflammation of different origins, such as Glomerulonephritis, lupus nephriti;
- Pankreatitis ;- pancreatitis;
- Asthma; chronische Bronchitis; - Komplikationen während Dialyse bei Nierenversagen;- asthma; Chronic bronchitis; - complications during dialysis in kidney failure;
- Vasσulitis; Thyroiditis;- vasulitis; thyroiditis;
- Ulcerative Colitis sowie andere entzündliche Erkrankungen des Magen-Darmtraktes;- Ulcerative colitis and other inflammatory diseases of the gastrointestinal tract;
- Autoimmunerkrankungen. - Hemmung des Komplementsystems z.B. mit den hier aufgeführten Cls-Inhibitoren kann die Nebenwirkungen von Medikamenten, die auf Aktivierung des Komplementsystems beruhen', lindern und resultierende Hypersensitivitätsreaktionen herabsetzen.- autoimmune diseases. - inhibition of the complement system such as those mentioned here Cls inhibitors can the side effects of drugs that decrease based on activation of the complement ', and alleviate resulting hypersensitivity reactions.
Dementsprechend ist eine Behandlung der oben erwähnten Krankheiten bzw. pathophysiologischen Zustände mit Komplementinhibitoren wünschenswert, insbesondere die Behandlung mit niedermolekularen Inhibitoren. FUT und FU -Derivate sind Amidinophenolester bzw. Amidino- naphtholester und beschrieben als Komplementinhibitoren (z.B. Immunology (1983), 49(4), 685-91).Accordingly, treatment of the above-mentioned diseases or pathophysiological conditions with complement inhibitors is desirable, in particular treatment with low molecular weight inhibitors. FUT and FU derivatives are amidinophenol esters and amidinonaphthol esters, respectively, and are described as complement inhibitors (eg Immunology (1983), 49 (4), 685-91).
Wünschenswert sind Inhibitoren, die Cls und/oder Clr hemmen, aber nicht Faktor D inhibieren. Bevorzugt soll nicht gehemmt werden: Lyseenzyme Wie z.B. t-PA, Plasmin.Inhibitors which inhibit Cls and / or Clr but do not inhibit factor D are desirable. The following should preferably not be inhibited: t-PA, plasmin.
Besonders bevorzugt sind Substanzen, die Thrombin oder Cιs und Cχr effektiv hemmen.Substances which effectively inhibit thrombin or Cι s and Cχ r are particularly preferred.
Pharmakolgische BeispielePharmacological examples
Beispiel A ThrombinzeitExample A Thrombin Time
Reagenzien: Thrombin Reagenz (Kat. Nr. '126 594, Boehringer, Mannneim, Deutschland)Reagents: Thrombin Reagent (Cat. No. '126 594, Boehringer, Mannneim, Germany)
Präparation von Citrat-Plasma:Preparation of citrate plasma:
9 Teile von venösem humanem Blut der V. cephalica werden mit einem Teil Natriumeitrat Lösung (0,11 mol/1) gemischt. Anschließend abzentrifugiert . Das Plasma kann bei -20°C gelagert werden.9 parts of venous human blood of the V. cephalica are mixed with one part of sodium citrate solution (0.11 mol / 1). Then centrifuged. The plasma can be stored at -20 ° C.
Experimentelles Verfahren:Experimental procedure:
50 μl TestSubstanz Lösung und 50 μl Citrat-Plasma werden für 2 Minuten bei 37°C inkubiert (CL8, ball type, Bender & Hobein, München, FRG) . Anschließend wird 100 μl Thrombin Reagenz (37°C) zugegeben. Die Zeit bis zur Bildung des Fibrinklumpen wird bestimmt. Die ECιoo-Werte geben die Konzentration an, bei der es zu einer Verdoppelung der Thrombin-Zeit kommt .50 ul test substance solution and 50 ul citrate plasma are incubated for 2 minutes at 37 ° C (CL8, ball type, Bender & Hobein, Munich, FRG). Then 100 μl thrombin reagent (37 ° C.) is added. The time until the lump of fibrin is formed is determined. The ECιoo values indicate the concentration at which the thrombin time is doubled.
Beispiel BExample B
Chromogener Test für Thrombin InhibitorenChromogenic test for thrombin inhibitors
Reagenzien: Humanes Plasma Thrombin (Nr. T-8885, Sigma, Deisen- hofen, Deutschland)Reagents: Human Plasma Thrombin (No. T-8885, Sigma, Deisenhofen, Germany)
Substrat: H-D-Phe-Pip-Arg-pNA2HCl (S-2238, Chromo- genix, Mölndahl, Schweden)Substrate: H-D-Phe-Pip-Arg-pNA2HCl (S-2238, Chromogenix, Mölndahl, Sweden)
Puffer: Tris 50 mmol/1, NaCl 154 mmol/1, pH 8.0 Experimentelle Durchführung:Buffer: Tris 50 mmol / 1, NaCl 154 mmol / 1, pH 8.0 Experimental implementation:
Der chromogene Test kann in Mikrotiterplatten durchgeführt werden. 10 μl Substanz Lösung in DMSO werden zu 250 μl Puffer mit Thrombin (finale Konzentration 0.1 NIH-Units/ml) gegeben und 5 Minuten bei 20 bisThe chromogenic test can be carried out in microtiter plates. 10 μl substance solution in DMSO are added to 250 μl buffer with thrombin (final concentration 0.1 NIH units / ml) and 5 minutes at 20 to
28°C inkubiert. Der Test wird durch Zugabe von 50 μl Substrat Lösung in Puffer (finale Konzentration 100 μmol/1) gestartet, bei 28°C inkubiert und nach 5 Minuten durch Zugabe von 50 μl Zitronensäure (35 %) gestoppt. Die Absorption wird bei 405/630 nm gemessen.Incubated at 28 ° C. The test is started by adding 50 μl substrate solution in buffer (final concentration 100 μmol / 1), incubated at 28 ° C. and stopped after 5 minutes by adding 50 μl citric acid (35%). The absorption is measured at 405/630 nm.
Beispiel CExample C
Plättchenaggregation im Plättchen-reichen PlasmaPlatelet aggregation in platelet-rich plasma
Reagenzien: Humanes Plasma Thrombin (Nr. T-8885, Sigma, Deisenhofen, Deutschland) • Reagents: Human Plasma Thrombin (No. T-8885, Sigma, Deisenhofen, Germany) •
Herstellung des citratreichen Plättchen-reichen Plasma:Production of the citrate-rich platelet-rich plasma:
Venöses Blut aus der Vena cephalica von gesunden medikamentenfreien Testpersonen wird gesammelt. Das Blut wird 9 zu 1 mit 0,13 molarem Trinatriumcitrat gemischt.Venous blood from the cephalic vein of healthy drug-free test subjects is collected. The blood is mixed 9 to 1 with 0.13 molar trisodium citrate.
Plättchen-reiches Plasma (PRP) wird durch Zentri- fugation bei 250 x g (10 Minuten bei Raumtemperatur) hergestellt. Plättchen-armes Plasma (PPP) wird durch Zentrifugation für 20 Minuten bei 3600 x g hergestellt. PRP und PPP können für 3 Stunden bei Raumtemperatur in verschlossenen PE-Gefäßen aufgehoben werden. Die Plättchen-Konzentration wird mit einem Zellzähler gemessen und sollte zwischen 2,5 bis 2,8-108/ml liegen.Platelet-rich plasma (PRP) is produced by centrifugation at 250 xg (10 minutes at room temperature). Platelet-poor plasma (PPP) is produced by centrifugation for 20 minutes at 3600 xg. PRP and PPP can be stored for 3 hours at room temperature in closed PE containers. The platelet concentration is measured with a cell counter and should be between 2.5 to 2.8-10 8 / ml.
Experimentelles Verfahren:Experimental procedure:
Die Plättchen-Aggregation wird turbitrimetrisch bei 37°C gemessen (PAP 4, Biodata Corporation, Horsham, PA, USA) . Bevor Thrombin zugegeben wird, werden 215,6 μl PRP für 3 Minuten mit 2,2 μl Testsubstanz inkubiert und anschließend 2 Minuten bei 1000 rpm gerührt . Bei einer finalen Konzentration von 0 , 15 NIH- Units/ml führen 2,2 μl Thrombinlösung zum maximalen Agrregationseffekt bei 37°C/1000 rpm. Der inhibierte Effekt der Testsubstanzen wird bestimmt, indem die Aggregationsrate (Steigung) von Thrombin ohneThe platelet aggregation is measured turbitrimetrically at 37 ° C. (PAP 4, Biodata Corporation, Horsham, PA, USA). Before thrombin is added, 215.6 μl of PRP are incubated with 2.2 μl of test substance for 3 minutes and then stirred at 1000 rpm for 2 minutes. At a final concentration of 0.15 NIH units / ml, 2.2 μl of thrombin solution lead to the maximum agregation effect at 37 ° C./1000 rpm. The inhibited effect of the test substances is determined by the aggregation rate (slope) of thrombin without
Substanz mit der Rate von Thrombin mit Testsubstanz bei verschiedenen Konzentrationen verglichen wird. Beispiel DSubstance is compared at the rate of thrombin with test substance at different concentrations. Example D
Farbsubstrattest für die Clr-Inhibition Reagentien: Clr aus Humanplasma, aktiviert, Zweikettenform (Reinheit: ca. 95 % nach SDS-Gel) . Keine Fremd- proteasenaktivität nachweisbar .Color substrate test for Clr inhibition reagents: Clr from human plasma, activated, two-chain form (purity: approx. 95% according to SDS gel). No foreign protease activity detectable.
Substrat: Cbz-Gly-Arg-S-Bzl Produktnr. : WBAS012, (Fa. PolyPeptide, D-38304 Wolfenbüttel, Deutschland)Substrate: Cbz-Gly-Arg-S-Bzl product no. : WBAS012, (PolyPeptide, D-38304 Wolfenbüttel, Germany)
Farbeagenz: DTNB (5, 5 'dinitrobis 2-nitrobenzoic acid) (No. 43760, Fluka, CH-9470 Buchs, Schweiz) Puffer: 150 ittM Tris/HCl pH = 7,50Coloring agent: DTNB (5, 5 'dinitrobis 2-nitrobenzoic acid) (No. 43760, Fluka, CH-9470 Buchs, Switzerland) Buffer: 150 ittM Tris / HCl pH = 7.50
TestdurchDer Farbsubstrattest zur Bestimmung der Cls- führung : Aktivität wird in 96-Well-Mikrotiterplatten durchgeführt .TestbyThe color substrate test to determine the Cls guidance: activity is carried out in 96-well microtiter plates.
10 μl der Inhibitorlösung in 20%igem DMSO (DMSO verdünnt mit 15 mmolar Tris/HCl pH = 7,50) gelangen zu 140 μl Testpuffer, welcher Cls mit einer Endkonzentration von 0,013 U/ml enthält und DTNB mit mit einer Endkonzentration von10 μl of the inhibitor solution in 20% DMSO (DMSO diluted with 15 mmolar Tris / HCl pH = 7.50) arrive at 140 μl test buffer, which contains Cls with a final concentration of 0.013 U / ml and DTNB with a final concentration of
0,27 mM/1. Inkubiert wird 10 Minuten bei 20 bis0.27 mM / 1. Incubate for 10 minutes at 20 to
25°C.25 ° C.
Gestartet wird der Test durch Zugabe von 50 μl einer 1,5 mmolaren Substratlösung in 30%igemThe test is started by adding 50 μl of a 1.5 mmolar substrate solution in 30%
DMSO (Endkonzentration 0,375 mmol/1) .DMSO (final concentration 0.375 mmol / 1).
Nach 30 Minuten Inkubationszeit bei 20 bis 25°C wird die Extinktion jedes Wells bei 405 um in einem Zwei-Strahl-Mikrotiterplattenphotometer gegen einen Leerwert (ohne Enzym) gemessen.After 30 minutes of incubation at 20-25 ° C, the absorbance of each well is measured at 405 µm in a two-beam microtiter plate photometer against a blank (without enzyme).
Meßkriterium: IC50: Benötigte Inhibitorkonzentration, um die amidolytische Clr-Aktivität auf 50 % herabzusetzen.Measurement criterion: IC 50 : required inhibitor concentration in order to reduce the amidolytic Clr activity to 50%.
Statistische Die Abhängigkeit der Extinktion von der Auswertung : Inhibitorkonzentration dient als Berechnungsgrundlage . Statistical The dependence of the absorbance on the evaluation: inhibitor concentration serves as the basis for the calculation.
Beispiel EExample E
Material und Methoden: Farbsubstrattest für die Cls-InhibitionMaterial and methods: Color substrate test for Cls inhibition
Reagentien: Cls aus Humanplasma, aktiviert, Zweikettenform (Reinheit: ca. 95 % nach SDS-Gel). Keine Fremd- proteasenaktivität nachweisbar.Reagents: Cls from human plasma, activated, two-chain form (purity: approx. 95% according to SDS gel). No foreign protease activity detectable.
Substrat: Cbz-Gly-Arg-S-Bzl Produktnr.: WBAS012 , (Fa. PolyPeptide, D-38304 Wolfenbüttel, Deutschland)Substrate: Cbz-Gly-Arg-S-Bzl Product no .: WBAS012, (PolyPeptide, D-38304 Wolfenbüttel, Germany)
Farbeagenz: DTNB (5, 5 'dinitrobis 2-nitrobenzoic acid) (No. 43760, Fluka, CH-9470 Buchs, Schweiz) Puffer: 150 mM Tris/HCl pH = 7,50Coloring agent: DTNB (5, 5 'dinitrobis 2-nitrobenzoic acid) (No. 43760, Fluka, CH-9470 Buchs, Switzerland) Buffer: 150 mM Tris / HCl pH = 7.50
TestdurchDer Farbsubstrattest zur Bestimmung der Cls- führung : Aktivität wird in 96-Well-Mikrotiterplatten durchgeführt .TestbyThe color substrate test to determine the Cls guidance: activity is carried out in 96-well microtiter plates.
10 μl der Inhibitorlösung in 20%igem DMSO (DMSO verdünnt mit 15 mmolar Tris/HCl pH = 7,50) gelangen zu 140 μl Testpuffer, welcher Cls mit einer Endkonzentration von 0,013 U/ml enthält und DTNB mit einer Endkonzentration von 0,27 mM/1. Inkubiert wird 10 Minuten bei 20 bis 25°C. Gestartet wird der Test durch Zugabe von 50 μl einer 1,5 mmolaren Substratlösung in 30%igem DMSO (Endkonzentration 0,375 mmol/1) . Nach 30 Minuten Inkubationszeit bei 20 bis 25°C wird die Extinktion jedes Wells bei 405 um in einem Zwei-Strahl-Mikrotiterplattenphotometer gegen einen Leerwert (ohne Enzym) gemessen.10 μl of the inhibitor solution in 20% DMSO (DMSO diluted with 15 mmolar Tris / HCl pH = 7.50) arrive at 140 μl test buffer, which contains Cls with a final concentration of 0.013 U / ml and DTNB with a final concentration of 0.27 mM /. 1 Incubate for 10 minutes at 20 to 25 ° C. The test is started by adding 50 μl of a 1.5 mmolar substrate solution in 30% DMSO (final concentration 0.375 mmol / 1). After an incubation time of 30 minutes at 20 to 25 ° C., the absorbance of each well at 405 μm is measured in a two-beam microtiter plate photometer against a blank value (without enzyme).
Meßkriterium: IC50 : Benötigte Inhibitorkonzentration, um die amidolytische Cls-Aktivität auf 50 % herabzusetzen.Measurement criterion: IC 50 : inhibitor concentration required in order to reduce the amidolytic Cls activity to 50%.
Statistische Die Abhängigkeit der Extinktion von der Auswertung : Inhibitorkonzentration dient als Berechnungs- grundlage .Statistical The dependence of the absorbance on the evaluation: inhibitor concentration serves as the basis for the calculation.
Beispiel FExample F
Nachweis der Inhibition von Komplement auf dem klassischen Weg durch hämolytischen TestDetection of the inhibition of complement in the classic way by hemolytic test
Für das Messen von potentiellen Komplement-Inhibitoren wird in Anlehnung an diagnostische Tests ein Test zur Messung des klassischen Weges benutzt (Literatur: Complement, A practical Approach; Oxford University Press; 1997; S. 20 ff) . Hierzu wird als Quelle für Komplement Humanserum verwendet. Ein gleichartig aufgebauter Test wird jedoch auch mit verschiedenen Seren anderer Spezies in analoger Weise durchgeführt. Als Indikatorsystem werden Erythrozyten von Schafen verwendet. Die antikörper- abhängige Lyse dieser Zellen und das dadurch ausgetretene Hämoglobin sind ein Maß für die Komplementaktivität.For the measurement of potential complement inhibitors, a test based on diagnostic tests is used to measure the classic route (literature: Complement, A practical Approach; Oxford University Press; 1997; pp. 20 ff). For this purpose, human serum is used as a source of complement. However, a test of the same design is also carried out in an analogous manner with different sera from other species. Sheep erythrocytes are used as an indicator system. The antibody dependent lysis of these cells and the resulting hemoglobin are a measure of complement activity.
Reagenzien, Biochemikalien:Reagents, biochemicals:
Veronal Fa. Merck #2760500Veronal from Merck # 2760500
Na-Veronal Fa. Merck #500538Na-Veronal from Merck # 500538
NaCl Fa. Merck #1.06404NaCl from Merck # 1.06404
MgCl2x6H20 Fa. Baker #0162MgCl 2 x6H 2 0 from Baker # 0162
CaCl2x6H20 Fa. Riedel de Haen #31307CaCl 2 x6H 2 0 from Riedel de Haen # 31307
Gelatine Fa. Merck #1.04078.0500Gelatin from Merck # 1.04078.0500
EDTA Fa. Roth #8043.2EDTA company Roth # 8043.2
Alsevers Lsg. Fa. Gibco #15190-044Alsevers solution from Gibco # 15190-044
Penicillin Fa. Grünenthal #P1507 lOMegaPenicillin from Grünenthal # P1507 lOMega
Ambozeptor Fa. Behring #0RLCAmboceptor from Behring # 0RLC
Stammlösungen: VBS-Stammlösung: 2,875 g/1 Veronal; 1,875 g/1 Na-Veronal;Stock solutions: VBS stock solution: 2.875 g / 1 veronal; 1.875 g / 1 Na veronal;
42,5 g/1 NaCl42.5 g / 1 NaCl
Ca/Mg-Stammlösung : 0,15 M Ca++, 1 M Mg++ EDTA-Stam lösung : . 0,1 M pH 7,5 Puffer: GVBS-Puffer: VBS-Stammlösung 1 : 5 mit Fin Aqua verdünnen;Ca / Mg stock solution: 0.15 M Ca ++, 1 M Mg ++ EDTA stock solution:. 0.1 M pH 7.5 buffer: GVBS buffer: dilute VBS stock solution 1: 5 with Fin Aqua;
1 g/L Gelatine mit etwas Puffer heiß1 g / L hot gelatin with a little buffer
AuflösenDissolve
GVBS++ Puffer: Ca/Mg-Stammlösung 1 : 1000 in GVBS-Puffer verdünnenGVBS ++ buffer: Dilute Ca / Mg stock solution 1: 1000 in GVBS buffer
GVBS/EDTA-Puffer : EDTA-Stammlösung 1:10 in GVBS-Puffer verdünnenGVBS / EDTA buffer: Dilute EDTA stock solution 1:10 in GVBS buffer
Biogene Komponenten:Biogenic components:
Ξchafserythrozyten (SRBC) : Hammelblut wurde 1+1 (v/v) mit Alsevers-Lösung gemischt, durch Glaswolle filtriert und mit 1/10 Volumen EDTA-Stammlösung +1 Spatelspitze Penicillin versetzt. Humanserum: Nach Abzentrifugieren der geronnenen Anteile bei 4°C wurde der Überstand in Aliquots bei -70°C gelagert. Alle Messungen wurden mit einer Charge durchgeführt. Es ergaben sich keine wesentlichen Abweichungen gegenüber Serum anderer Probanden. Vorgehen :Ξchafserythrocytes (SRBC): mutton blood was mixed 1 + 1 (v / v) with Alsevers solution, filtered through glass wool and mixed with 1/10 volume EDTA stock solution +1 spatula tip penicillin. Human serum: After centrifuging the coagulated portions at 4 ° C, the supernatant was stored in aliquots at -70 ° C. All measurements were carried out with one batch. There were no significant deviations from the serum of other subjects. Action :
1. Sensibilisierung der Erythrozyten:1. Sensitization of the erythrocytes:
SRBC wurden dreimal mit GVBS-Puffer gewaschen. Anschließend wurde die Zellzahl auf 5,00E+08 Zellen/ml in GVBS/EDTA-Puffer eingestellt. Ambozeptor wurde in einer Verdünnung von 1:600 zugegeben und durch Inkubation über 30 Min bei 37°C unter Bewegung die SRBC mit Antikörper sensibilisiert . Anschließend wurden die Zellen dreimal mit GVBS-Puffer bei 4°C gewaschen, anschließend in GVBS++ Puffer aufgenommen und auf eine Zellzahl von 5 x 108 eingestellt.SRBC were washed three times with GVBS buffer. The cell number was then set to 5.00E + 08 cells / ml in GVBS / EDTA buffer. Amboceptor was added in a dilution of 1: 600 and the SRBC was sensitized with antibody by incubation for 30 min at 37 ° C. with agitation. The cells were then washed three times with GVBS buffer at 4 ° C., then taken up in GVBS ++ buffer and adjusted to a cell number of 5 × 10 8 .
2. Lyseansatz : - Inhibitoren wurden in verschiedenen Konzentrationen mit Humanserum oder Serum anderer Spezies in passender Verdünnung (z.B. 1:80 für Humanserum; passend ist eine Verdünnung, bei der ca. 80 % der maximalen Lyse, die durch Serum erzielt werden kann, erreicht ist.) in GVBS++ für 10 Min bei 37°C°in einem Volumen von 100 μl vorinkubiert .2. Lysis approach: - Inhibitors were used in various concentrations with human serum or serum of other species in suitable dilution (e.g. 1:80 for human serum; a dilution is suitable at which approximately 80% of the maximum lysis that can be achieved by serum is achieved ) in GVBS ++ for 10 min at 37 ° C ° in a volume of 100 μl.
Anschließend wurden 50 μl sensibilisierte SRBC in GVBS++ zugegeben. Nach Inkubation von 1 Stunde bei 37°C unter Bewegung wurden die SRBC abzentrifugiert (5 Minuten; 2500 Up 4°C) . 130 μl des zellfreien Überstandes wurden in eine 96-well-Platte überführt. Die Auswertung erfolgte durch Messung bei 540 nm gegen GVBS++-Puffer .50 μl of sensitized SRBC in GVBS ++ were then added. After incubation for 1 hour at 37 ° C. with agitation, the SRBC were centrifuged off (5 minutes; 2500 rpm 4 ° C.). 130 ul of the cell-free supernatant was transferred to a 96-well plate. The evaluation was carried out by measuring at 540 nm against GVBS ++ buffer.
Zur Auswertung werden die Absorptionswerte bei 540 n benutzt.The absorption values at 540 n are used for evaluation.
( 1 ) Background; Zellen ohne Serum ( 3 ) 100 % Lyse; Zellen mit Serum ( x ) gemessene Werte mit Testsubstanzen(1) background; Cells without serum (3) 100% lysis; Cells with serum (x) measured values with test substances
Berechnung: ( X ) - ( 1 ) x 100 % Lyse =Calculation: (X) - (1) x 100% lysis =
( 3 ) - ( 1 )(3) - (1)
Beispiel GExample G
Test von Inhibitoren auf Inhibition der Protease Faktor DTest of inhibitors for inhibition of protease factor D
Faktor D übt im alternativen Weg des KomplementSystems eine zentrale Funktion aus . Aufgrund der geringen Plasmakonzentration von Faktor D stellt der enzymatische Schritt der Spaltung von Faktor B durch Faktor D den geschwindigkeitsbestimmenden Schritt in dem alternativen Weg der Komplementaktivierung dar. AufFactor D plays a central role in the alternative way of the complement system. Because of the low plasma concentration of factor D, the enzymatic step of factor B cleavage by factor D represents the rate-determining step in the alternative way of complement activation
Grund der limitierenden Rolle, die dieses Enzym im alternativen Weg spielt, ist Faktor D ein Target für die Inhibition des Komplementsystems .Because of the limiting role that this enzyme has in the alternative Plays away, factor D is a target for the inhibition of the complement system.
Das käufliche Substrat Z-Lys-SBzl*HCl wird von dem Enzym Faktor D umgesetzt (Literatur: Kam, CM. et al . , J. Biol. Chem. 262. 3444-3451, 1987) . Die Detektion des gespaltenen Substrates erfolgt durch Umsatz mit Ellmann' s Reagenz. Das entstandene Produkt wird spektrophotometrisch detektiert. Die Reaktion kann online verfolgt werden. Hierdurch sind enzymkinetische Messungen möglich.The commercially available substrate Z-Lys-SBzl * HCl is converted by the enzyme factor D (literature: Kam, CM. Et al., J. Biol. Chem. 262, 3444-3451, 1987). The cleaved substrate is detected by conversion with Ellmann's reagent. The resulting product is detected spectrophotometrically. The response can be followed online. This makes enzyme-kinetic measurements possible.
Material :Material:
Chemika1ien:Chemika1ien:
Faktor D Calbiochem 341273 Ellmann 's Reagent SIGMA D 8130 Z-Lys-SBzl*HCl (=Substrat) Bachern M 1300 50 mg/ml (MeOH)Factor D Calbiochem 341273 Ellmann's Reagent SIGMA D 8130 Z-Lys-SBzl * HCl (= substrate) Bachern M 1300 50 mg / ml (MeOH)
NaCl Riedel-De-Häen 13423NaCl Riedel-De-Haen 13423
Triton-X-100 Aldrich 23,472-9Triton-X-100 Aldrich 23,472-9
Tris (hydroxymethyl ) -aminomethan MERCKTris (hydroxymethyl) aminomethane MERCK
Dirnethylformamid (DMF)Dirnethylformamide (DMF)
Puffer: 50 mM Tris 150 mM NaCl 0,01 % Triton - X - 100 pH 7, 6Buffer: 50 mM Tris 150 mM NaCl 0.01% Triton - X - 100 pH 7, 6
Stocklösungen: Substrat 20 mM (8,46 mg/ml = 16,92 μl (50 mg/ml) + 83,1 μl H0)Stock solutions: substrate 20 mM (8.46 mg / ml = 16.92 μl (50 mg / ml) + 83.1 μl H0)
Ellmann' s Reagent 10 mM (3,963 mg/ml) in DMF Faktor D 0 , 1 mg/mlEllmann's Reagent 10 mM (3.963 mg / ml) in DMF factor D 0.1 mg / ml
Proben (Inhibitoren) 10~2 M in DMSOSamples (inhibitors) 10 ~ 2 M in DMSO
Durchführung : Ansätze: Leerwert : 140 μl Puffer + 4,5 μl SubstratExecution: Approaches: Blank value: 140 μl buffer + 4.5 μl substrate
(0,6 mM) + 4,5 μl Ellmann' s (0,3 mM)(0.6 mM) + 4.5 μl Ellmann's (0.3 mM)
Positiv-Kontrolle : 140 μl Puffer + 4,5 μl SubstratPositive control: 140 μl buffer + 4.5 μl substrate
(0,6 mM) + 4,5 μl Ellmann's (0,3 mM)(0.6 mM) + 4.5 μl Ellmann's (0.3 mM)
+ 5 μl Faktor D+ 5 μl factor D.
Proben-Messung : 140 μl Puffer + 4,5 μl Substrat (0,6 mM)Sample measurement: 140 μl buffer + 4.5 μl substrate (0.6 mM)
+ 4,5 μl Ellmann' s (0,3 mM)+ 4.5 μl Ellmann's (0.3 mM)
+ 1,5 μl Proben (10"4 M) + 5 μl Faktor D Die Ansätze werden in Mikrotiterplatten zusammenpipettiert . Nach dem Mischen von Puffer, Substrat und Ellmann's (evtl. Inhibitor) wird die Enzymreaktion durch Zugabe von jeweils 5 μl Faktor D gestartet . Inkubation findet bei Raumtemperatur für 60 min. statt.+ 1.5 ul samples (10 " 4 M) + 5 ul factor D The batches are pipetted together in microtiter plates. After mixing the buffer, substrate and Ellmann's (possibly inhibitor), the enzyme reaction is started by adding 5 μl of factor D in each case. Incubation takes place at room temperature for 60 min. instead of.
Messung:Measurement:
Messen bei 405 nm für 1 Stunde in 3 Minuten AbstandMeasure at 405 nm for 1 hour at 3 minutes intervals
Auswertung:Evaluation:
Das Ergebnis wird graphisch aufgetragen. Die Änderung der Absorption pro Minute (Delta OD pro Minute; Steigung) ist für den Vergleich von Inhibitoren relevant, da sich hieraus Ki-Werte von Inhibitoren ermitteln lassen. Als wirksamer Inhibitor wurde in diesem Test der Serin- protease-Inhibitor FUT-175; Futhan; Fa. Torii; Japan mitgeführt.The result is plotted graphically. The change in the absorption per minute (delta OD per minute; slope) is relevant for the comparison of inhibitors, since Ki values of inhibitors can be determined from this. The serine protease inhibitor FUT-175; Futhan; Torii; Japan carried.
Beispiel HExample H
Nachweis der Inhibition Von Komplement auf dem alternativen Weg durch hämolytischen Test (Literatur: Complement, A practical Approach; Oxford University Presss; 1997, S. 20 ff.)Detection of the inhibition of complement on the alternative route by hemolytic test (literature: Complement, A practical Approach; Oxford University Presss; 1997, p. 20 ff.)
Der Test wird in Anlehnung an klinische Tests durchgeführt . Durch zusätzliche Aktivierung mittels z.B. Zymosan oder Cobra Venom Faktor kann der Test modifiziert werden.The test is carried out based on clinical tests. By additional activation using e.g. Zymosan or Cobra Venom factor, the test can be modified.
Material :Material:
EGTA (Ethylenebis (oxyethylenenitrilo) -tetracetic acidEGTA (ethylenebis (oxyethylenenitrilo) tetracetic acid
Boehringer Mannheim 1093053Boehringer Mannheim 1093053
MgCl2 * 6 H20 MERCK 5833.0250MgCl 2 * 6 H 2 0 MERCK 5833.0250
NaCl MERCK 1.06404.1000NaCl MERCK 1.06404.1000
D - Glucose CerestarD - Glucose Cerestar
Veronal MERCK 2760500Veronal MERCK 2760500
Na-Veronal MERCK 500538Na-Veronal MERCK 500538
VBS - Stammlösung ( 5x ) Gelatine Veronal PufferVBS stock solution (5x) gelatin veronal buffer
PD Dr. Kirschfink; UniversitätPD Dr. Cherry Finch; university
Heidelberg, Inst. F. Immunologie;Heidelberg, Inst. F. Immunology;
Gelatine MERCK 1.04078.0500Gelatin MERCK 1.04078.0500
Tris (hydroxymethyl) aminomethanMERCK 1.08382.0100Tris (hydroxymethyl) aminomethane MERCK 1.08382.0100
CaCl2 MERCK Art. 2382CaCl 2 MERCK Art. 2382
Humanserum wurde entweder bei verschiedenen Lieferanten (z.B. Sigma) gekauft oder in der Ambulanz der BASF Süd von Probanden gewonnen. Meerschweinchenblut wurde gewonnen und 2:8 in Citratlösung verdünnt. Es wurden mehrere Chargen ohne offensichtliche Unterschiede verwendet.Human serum was either purchased from various suppliers (eg Sigma) or obtained from test persons in the BASF Süd outpatient clinic. Guinea pig blood was obtained and diluted 2: 8 in citrate solution. Multiple batches were used with no apparent differences.
Stammlösungen:Stock solutions:
VBS-Stammlösung : 2,875 g/1 Veronal 1,875 g/1 Na-Veronal 42,5 g/1 NaClVBS stock solution: 2.875 g / 1 veronal 1.875 g / 1 Na veronal 42.5 g / 1 NaCl
GVBS: VBS Stammlösung 1:5 mit Wasser (Finn Aqua) verdünnenDilute GVBS: VBS stock solution 1: 5 with water (Finn Aqua)
+ 0,1 % Gelatine erhitzen bis Gelatine gelöst und abkühlen+ Heat 0.1% gelatin until gelatin is dissolved and cool
100 mM EGTA: 38,04 mg EGTA in 500 ml Finn Aqua und mit 10 M NaOH langsam auf pH 7 , 5 bis gelöst, dann auf 1 1 auffüllen100 mM EGTA: 38.04 mg EGTA in 500 ml Finn Aqua and slowly dissolved to pH 7.5 with 10 M NaOH, then make up to 1 liter
Mg - EGTA 5 ml 100 mM EGTAMg - EGTA 5 ml 100 mM EGTA
3,5- ml 100 mM MgCl2 3.5 ml 100 mM MgCl 2
10,4 ml GVBS10.4 ml GVBS
31,1 ml 5 % Glucoselösung31.1 ml of 5% glucose solution
Saline: 0,9 % NaCl in Wasser (Finn Aqua)Saline: 0.9% NaCl in water (Finn Aqua)
GTB: 0,15 mM CaCl2 GTB: 0.15 mM CaCl 2
141 mM NaCl141 mM NaCl
0,5 mM MgCl2* 6 H200.5 mM MgCl 2 * 6 H 2 0
10 mM Tris10 mM Tris
0,1 % Gelatine pH 7,2 - 7,30.1% gelatin pH 7.2 - 7.3
Vorgehen: 1. Zellpräparation:Procedure: 1. Cell preparation:
Die Erythrozyten aus dem Meerschweinchenblut wurden mehrfach durch Zentrifugieren (5 Minuten; 1000 Upm) mit GTB gewaschen, bis der Überstand klar war. Die Zellzahl wurde auf 2 * 10 9 Zellen/ml eingestellt. 2. Durchführung: Die einzelnen Ansätze wurden 30 Minuten bei 37°C unter Bewegung inkubiert. Anschließend wurde mit je 480 μl eiskalter Saline (physikalischer Kochsalzlösung) abgestoppt und die Zellen 5 Minuten mit 5000 Upm abzentrifugiert . 200 μl des Überstandes wurden bei 405 nm gemessen durch Überführen in eine Mikrotiterplatte und Auswertung in einem Mikrotiterplattenphoto eter . Pipettiersche a (Mengenangaben in μl)The erythrocytes from the guinea pig blood were washed several times by centrifugation (5 minutes; 1000 rpm) with GTB until the supernatant was clear. The cell number was set to 2 * 10 9 cells / ml. 2. Procedure: The individual batches were incubated for 30 minutes at 37 ° C. with agitation. The mixture was then stopped with 480 μl of ice-cold saline (physical saline) and the cells were centrifuged at 5000 rpm for 5 minutes. 200 μl of the supernatant were measured at 405 nm by transferring them into a microtiter plate and evaluating them in a microtiter plate photometer. Pipetting a (quantities in μl)
Auswertung :Evaluation:
Zur Auswertung werden die OD Werte benutzt.The OD values are used for evaluation.
( 1 ) Background; Zellen ohne Serum ( 3 ) 100 % Lyse + Faktor D; Zellen mit Serum ( x ) gemessene Werte mit Testsubstanzen(1) background; Cells without serum (3) 100% lysis + factor D; Cells with serum (x) measured values with test substances
Berechnung: ( X ) - ( 1 ) x 100 % Lyse =Calculation: (X) - (1) x 100% lysis =
( 3 ) - ( 1 )(3) - (1)
Beispiel I :Example I:
Pharmakokinetik und Gerinnungsparameter in RattenPharmacokinetics and coagulation parameters in rats
Die Testsubstanzen werden unmittelbar vor der Verabreichung an wache Sprague Dawley Ratten in isotonischer Salzlösung gelöst. Die Applikationsvolumina betragen 1 ml/kg für die intravenöse Bolus-Injektion in die Schwanzvene und 10 ml/kg für die orale Verabreichung, die per Schlundsonde erfolgt. Blutabnahmen erfolgen wenn nicht anders erwähnt 1 h nach oraler Applikation von 21,5 mg-kg-1 oder intravenöser Applikation von 1,0 mg-kg-1 der Testsubstanz oder des entsprechenden Vehikels (Kontrolle) . Fünf Minuten vor Blutabnahme werden die Tiere durch i.p. Applikation von 25 %iger Urethanlösung (Dosis 1 g-kg-1 i.p.) in physiologischer Kochsalzlösung narkotisiert. Die A. carotis wird präpariert und katheterisiert Blutproben (2 ml) in Citrat- Röhrchen (1,5 Teile Citrat plus 8,5 Teile Blut) genommen. Direkt nach der Probennahme wird die Ecarinzeit (ECT = ecarin clotting time) im Vollblut bestimmt. Nach der Präparation des Plasmas durch Zentrifugation werden die Plasma-Thrombinzeit und die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT = activated partial thromboplastin time) mit Hilfe eines Koagulometers bestimmt. Gerinnungs-Parameter:The test substances are dissolved in isotonic saline immediately before administration to awake Sprague Dawley rats. The application volumes are 1 ml / kg for intravenous bolus injection into the tail vein and 10 ml / kg for oral administration, which is carried out by gavage. Unless otherwise stated, blood samples are taken 1 h after oral administration of 21.5 mg-kg -1 or intravenous administration of 1.0 mg-kg -1 of the test substance or the corresponding vehicle (control). Five minutes before taking the blood, the animals are anesthetized by ip application of 25% urethane solution (dose 1 g-kg -1 ip) in physiological saline. The carotid artery is prepared and catheterized. Blood samples (2 ml) are taken in citrate tubes (1.5 parts of citrate plus 8.5 parts of blood). Immediately after sampling, the ecarin clotting time (ECT) in whole blood is determined. After the plasma has been prepared by centrifugation, the plasma thrombin time and the activated partial thromboplastin time (APTT = activated partial thromboplastin time) are determined using a coagulometer. Coagulation parameters:
Ecarinzeit (ECT = ecarin clotting time) : 100 μl Citratblut werden für 2 min bei 37°C in einem Koagulometer inkubiert (CL 8, Kugel- 5 Typ, Bender & Hobein, München, BRD) . Nach der Zugabe von 100 μl vorgewärmtem (37°C) Ecarin-Reagenz (Pentapharm) wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibrin-Clots bestimmt.Ecarin time (ECT = ecarin clotting time): 100 μl of citrate blood are incubated for 2 min at 37 ° C. in a coagulometer (CL 8, Kugel-5 type, Bender & Hobein, Munich, FRG). After the addition of 100 μl of prewarmed (37 ° C.) ecarin reagent (Pentapharm), the time until a fibrin clot is formed is determined.
Aktivierte Thromboplastinzeit (APTT = activated thromboplastin 10 time) : 50 μl Citratplasma und 50 μl des PTT-Reagenzes (Pathrombin, Behring) werden gemischt und für 2 min bei 37°C in einem Koagulometer inkubiert (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, München, BRD). Nach der Zugabe von 50 μl vorgewärmtem (37°C) Calciu chlorid wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibrin-Clots bestimmt . 15Activated thromboplastin time (APTT = activated thromboplastin 10 time): 50 μl citrate plasma and 50 μl of the PTT reagent (pathrombin, Behring) are mixed and incubated for 2 min at 37 ° C. in a coagulometer (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, Munich, FRG). After adding 50 μl of preheated (37 ° C) calcium chloride, the time until a fibrin clot is formed is determined. 15
Thrombinzeit (TT) : 100 μl citratbehandeltes Plasma wird für 2 min • bei 37°C in einem Koagulometer inkubiert (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, München, BRD) . Nach der Zugabe von 100 μl vorgewärmtem (37°C) Thrombin-Reagenz (Boehringer Mannheim) wurde die Zeit bis 20 zur Bildung eines Fibrin-Clots bestimmt.Thrombin time (TT): 100 μl citrate-treated plasma is incubated for 2 min • at 37 ° C. in a coagulometer (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, Munich, FRG). After the addition of 100 μl of prewarmed (37 ° C.) thrombin reagent (Boehringer Mannheim), the time until 20 to form a fibrin clot was determined.
Beispiel J:Example J
Pharmakokinetik und Gerinnungsparameter in HundenPharmacokinetics and coagulation parameters in dogs
25 Die Testsubstanzen werden unmittelbar vor der Verabreichung an wache Mischlingshunde in isotonischer Salzlösung gelöst. Die Applikationsvolumina betragen 0,1 ml/kg für die intravenöse Bolus-Injektion und 1 ml/kg für die orale Verabreichung, die per Schlundsonde erfolgt. Vor sowie 5, 10, 20, 30, 45, 60, 90,25 The test substances are dissolved in isotonic saline immediately before administration to watchful mongrel dogs. The application volumes are 0.1 ml / kg for intravenous bolus injection and 1 ml / kg for oral administration, which is carried out by gavage. Before and 5, 10, 20, 30, 45, 60, 90,
30 120, 180, 240, 300 und 360 min (bei Bedarf nach 420, 480 min und 24 h) nach intravenöser Applikation von 1,0 mg/kg bzw. vor sowie 10, 20, 30, 60, 120, 180, 240, 300, 360, 480 min und 24 h nach oraler Gabe von-, 4,64 mg/kg werden Proben venösen Blutes (2 ml) in Citrat-Röhrchen genommen. Direkt nach der Probennahme wird die30 120, 180, 240, 300 and 360 min (if necessary after 420, 480 min and 24 h) after intravenous administration of 1.0 mg / kg or before and 10, 20, 30, 60, 120, 180, 240 , 300, 360, 480 min and 24 h after oral administration of 4.64 mg / kg, samples of venous blood (2 ml) are taken in citrate tubes. Immediately after sampling, the
35 Ecarinzeit (ECT = ecarin clotting time) im Ganzblut bestimmt. Nach der Präparation des Plasmas durch Zentrifugation werden die Plasma-Thrombinzeit und die aktivierte partielle Throit-boplastin- zeit (APTT = activated thromboplastin time) mit Hilfe eines Koagulometer bestimmt.35 Ecarin clotting time (ECT) determined in whole blood. After the plasma has been prepared by centrifugation, the plasma thrombin time and the activated partial throitoplastin time (APTT = activated thromboplastin time) are determined using a coagulometer.
4040
Zusätzlich werden die anti-F Ila-Aktivität (ATU/ml) und die Konzentration der Substanz durch ihre anti-F Ha- Aktivität im Plasma mittels chromogenem (S-2238) Thrombin-Assay bestimmt, wobei Eichkurven mit r-Hirudin und der Testsubstanz eingesetzt 5 wurden. Die Plasmakonzentration der Testsubstanz ist Grundlage zur Berechnung der pharmakokinetischen Parameter: Zeit der maximalen Plasmakonzentration (T max) , maximale Plasmakonzentration; Plasma-Halbwertzeit, t0.s; Fläche unter der Kurve (AUC) ; resorbierter Teil der Testsubstanz (F) .In addition, the anti-F Ila activity (ATU / ml) and the concentration of the substance are determined by their anti-F Ha activity in the plasma by means of a chromogenic (S-2238) thrombin assay, calibration curves with r-hirudin and the test substance 5 were used. The plasma concentration of the test substance is the basis for the calculation of the pharmacokinetic parameters: time of the maximum plasma concentration (T max), maximum plasma concentration; Plasma half-life, t 0 .s; Area under the curve (AUC); absorbed part of the test substance (F).
Gerinnungs-Parameter:Coagulation parameters:
Ecarinzeit (ECT = ecarin clotting time) : 100 μl citratbehandeltes Blut werden für 2 min bei 37°C in einem Koagulometer inkubiertEcarin clotting time: 100 μl of citrated blood are incubated for 2 min at 37 ° C. in a coagulometer
(CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, München, BRD) . Nach der Zugabe von 100 μl vorgewärmtem (37°C) Ecarin-Reagenz (Pentapharm) wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibrin-Clots bestimmt.(CL 8, ball type, Bender & Hobein, Munich, FRG). After the addition of 100 μl of prewarmed (37 ° C.) ecarin reagent (Pentapharm), the time until a fibrin clot is formed is determined.
Aktivierte Thromboplastinzeit (APTT = activated thromboplastin time) : 50 μl citratbehandeltes Plasma und 50 μl des PTT-Reagenzes (Pathrombin, Behring) werden gemischt und für 2 min bei 37°C in einem Koagulometer inkubiert (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, München, BRD) . Nach der Zugabe von 50 μl vorgewärmtem (37°C) Calciumchlorid wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibrin-Clots bestimmt.Activated thromboplastin time (APTT = activated thromboplastin time): 50 μl citrate-treated plasma and 50 μl of the PTT reagent (pathrombin, Behring) are mixed and incubated for 2 min at 37 ° C in a coagulometer (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, Munich, FRG). After adding 50 μl of preheated (37 ° C) calcium chloride, the time until a fibrin clot is formed is determined.
Thrombinzeit (TT) : 100 μl citratbehandeltes Plasma wird für 2 min bei 37°C in einem Koagulometer inkubiert (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, München, BRD) . Nach der Zugabe von 100 μl vorgewärmtem (37°C) Thrombin-Reagenz (Boehringer Mannheim) wurde die Zeit bis zur Bildung eines Fibrin-Clots bestimmt.Thrombin time (TT): 100 μl citrate-treated plasma is incubated for 2 min at 37 ° C. in a coagulometer (CL 8, Kugel-Typ, Bender & Hobein, Munich, FRG). After the addition of 100 μl of prewarmed (37 ° C.) thrombin reagent (Boehringer Mannheim), the time until a fibrin clot was formed was determined.
Die vorliegende Erfindung betrifft peptidische und peptidomi- metische Substanzen, deren Herstellung und deren Verwendung als Thrombin- oder Komplementinhibitoren. Insbesondere handelt es sich um Substanzen mit einem Amidinrest als endständiger Gruppe einerseits und um einen Polyhydroxyalkyl- oder Polyhydroxcyclo- alkylrest - welcher aus mehreren Einheiten bestehen kann - als zweiter endständiger Gruppierung andererseits.The present invention relates to peptidic and peptidomimetic substances, their production and their use as thrombin or complement inhibitors. In particular, there are substances with an amidine residue as the terminal group on the one hand and a polyhydroxyalkyl or polyhydroxycycloalkyl residue - which can consist of several units - as the second terminal group on the other hand.
Die Erfindung betrifft die Verwendung dieser neuen Substanzen zur Herstellung von Thrombininhibitoren, Komplementinhibitoren, spezifisch von Inhibitoren von Cls und Clr.The invention relates to the use of these new substances for the production of thrombin inhibitors, complement inhibitors, specifically inhibitors of Cls and Clr.
Insbesondere betrifft die Erfindung die Verwendung von chemisch stabilen Substanzen der allgemeinen Formel I, deren Tautomeren, pharmakologisch verträglichen Salzen und Prodrugs zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und Prophylaxe von Krankheiten, die durch teilweise oder vollständige Inhibition, insbesondere selektive Inhibition,von Thrombin oder von Cls und/oder Clr gelindert oder geheilt werden.In particular, the invention relates to the use of chemically stable substances of the general formula I, their tautomers, pharmacologically tolerable salts and prodrugs for the manufacture of medicaments for the treatment and prophylaxis of diseases caused by partial or complete inhibition, in particular selective inhibition, thrombin, or Cls and / or Clr.
Formel I hat die allgemeine StrukturFormula I has the general structure
A-B-D-E-G-K-L (I) .A-B-D-E-G-K-L (I).
A steht für H, CH3 , H-(RA1)IAA stands for H, CH 3 , H- (R A1 ) IA
mit RA1 gleich 0 CH2 RA4with R A1 equal to 0 CH 2 RA4
RA3 RA3 R A3 R A3
(H0-CH)jA (HO-CH)jA (H0-CH) yes (HO-CH) yes
/ oder .0-/ or .0-
HC- HC (CH-RA2)IAHC-HC (CH-R A2 ) IA
- (CH)kA (CH)χA (CH)mA (CH)nA- (CH) k A (CH) χA (CH) m A (CH) n A
I I I ^ CH ^ I OH RA2 OH j OHI I I ^ CH ^ I OH RA2 OH j OH
.0.0
mit RA2 H, NH2, NH-C0CH3, F, NHCHOwith R A2 H, NH 2 , NH-COCH 3 , F, NHCHO
RA3 H, CH2OH RM H, CH3, CO0H iA = 1 - 20R A3 H, CH 2 OH R M H, CH 3 , CO0H iA = 1 - 20
JA = 0, 1, 2 kA = 2, 3YES = 0, 1, 2 kA = 2, 3
IA = 0, 1 mA = 0, 1, 2 i-A = 0, 1, 2IA = 0, 1 m A = 0, 1, 2 iA = 0, 1, 2
wobei bei A größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können; where A greater than 1, the radicals R A1 may be the same or different;
steht fürstands for
(HO-CH)nB (HO-CH) n B
oder für einen Neuraminsäurerest oder N-Acetylneuraminsäure- rest, welche über die Carboxylfunktion gebunden sind, or for a neuraminic acid residue or N-acetylneuraminic acid residue, which are bonded via the carboxyl function,
RB1 gleich H, CH2OH, Cι_4-AlkylR B1 is H, CH 2 OH, Cι_ 4 alkyl
R B2 gleich H, NH2, NH-COCH3 , F, NHCHO R B2 is H, NH 2 , NH-COCH 3 , F, NHCHO
RB3 gleich H, Cι_4-Alkyl, CH2-0-Cι_4-Alkyl, COOH, F', NH-COCH3,R B3 is H, Cι_ 4 -alkyl, CH 2 -0-Cι_ 4 alkyl, COOH, F ', NH-COCH 3 ,
CONH2 R B4 gleich H, Cι-4-Alkyl, CH2-0-Cι_4-Alkyl, COOH,CONH 2 R B4 is H, Cι- 4 alkyl, CH 2 -0-Cι_ 4 alkyl, COOH,
CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetal- bildung auftreten kann RB5 gleich H, Cι_4-Alkyl, CH2-0-Cι_4-Alkyl, COOH kB = 0, 1 1B = 0, 1, 2, 3 (XB ≠ 0, für A = RB1 = RB3 = H, mB = B = 0, und D eine Bindung) mB = 0, 1, 2, 3, 4 nB = 0, 1, 2, 3 B6 gleich Cι_4-alkyl, Phenyl, Benzyl BB7 gleich H, Cι_4-alkyl, Phenyl, BenzylCHO, in which case intramolecular acetal formation can occur R B5 is H, C 4 alkyl, CH 2 0 4 alkyl, COOH k B = 0, 1 1 B = 0, 1, 2, 3 ( X B ≠ 0, for A = R B1 = R B3 = H, m B = B = 0, and D is a bond) m B = 0, 1, 2, 3, 4 n B = 0, 1, 2, 3 B6 is Cι_ 4 alkyl, phenyl, benzyl B B7 is H, Cι_ 4 alkyl, phenyl, benzyl
D steht für eine Bindung oder für N RD2 RD3 RD4D stands for a bond or for NR D2 R D3 RD4
RD1 R D1
mit RD1 gleich H, Cι_4-Alkylwith R D1 is H, Cι_ 4 alkyl
RD2 gleich Bindung oder Cι-4-AlkylR D2 is the same as bond or C 4 alkyl
RD3 gleichR D3 equal
mit ID = 1, 2, 3, 4, 5, 6 und RD5 gleich H, Cι_4-Alkyl, Cl RD6 gleich H, CH3 with ID = 1, 2, 3, 4, 5, 6 and R D5 is H, Cι_ 4 alkyl, Cl R D6 is H, CH 3
wobei an die unter RD3 genannten Ringsysteme ein weiterer aromatischer oder aliphatischer Ring ankondensiert sein kanna further aromatic or aliphatic ring may be fused onto the ring systems mentioned under R D3
RD4 gleich Bindung, Cι_4-Alkyl, CO, S02, -CH2-COR D4 is the same bond, Cι_ 4 alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO
E steht fürE stands for
mit With
kE = 0 , 1 , 2 ;k E = 0, 1, 2;
1= = 0 , 1 , 2 ; mE = 0 , 1 , 2 , 3 ; nE = 0 , 1 , 2 ;1 = = 0, 1, 2; m E = 0, 1, 2, 3; n E = 0, 1, 2;
PE = 0 , 1 , 2 ;P E = 0, 1, 2;
RE1 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl (ins- besondere Phenyl oder Naphthyl), Heteroaryl (insbesondere Pyridyl, Thienyl, Imidazolyl, Indolyl) , C3_g-Cycloalkyl mit ankondensiertem Phenylring, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι-6-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl, F, Cl, Br tragen können;R E1 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (in particular phenyl or naphthyl), heteroaryl (in particular pyridyl, thienyl, imidazolyl, indolyl), C 3 _g-cycloalkyl with a fused-on phenyl ring, the the aforementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 6 alkyl, OH, C 6 alkyl, F, Cl, Br;
RE1 bedeutet weiterhin RE40C0-CH2- (RE4 gleich H, Cι_ι2-Alkyl, Cι_3-Alkylaryl);R E1 furthermore means R E4 0C0-CH 2 - (R E4 is H, Cι_ι 2 alkyl, Cι_ 3 alkylaryl);
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl (insbesondere Phenyl oder Naphthyl) , Heteroaryl (insbesondere Pyridyl, Furyl, Thienyl, Imidazolyl, Indolyl), Tetra- hydropyranyl , Tetrahydrothiopyranyl , Diphenylmethyl, Dicyclohexylmethyl, C3_8-Cycloalkyl mit ankondensiertem Phenylring, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_6-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl, F, Cl, Br, tragen können, CH(CH3)OH, CH(CF3)2;R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (especially phenyl or naphthyl), heteroaryl (especially pyridyl, furyl, thienyl, imidazolyl, indolyl), tetrahydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, diphenylmethyl, dicyclohexyl 3 _ 8 -cycloalkyl with a fused-on phenyl ring, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group -C 6 alkyl, OH, 0 -C 6 alkyl, F, Cl, Br, CH (CH 3 ) OH, CH (CF 3 ) 2 ;
RE3 bedeutet H, Cι-6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl (insbesondere Phenyl oder Naphthyl) , Heteroaryl (insbesondere Pyridyl, Thienyl, Imidazolyl, Indolyl), C3_8-Cycloalkyl mit ankondensiertem Phenylring, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_6-Alkyl, OH, O-Cι-6-Alkyl, F, Cl, Br tragen können;R E3 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (especially phenyl or naphthyl), heteroaryl (especially pyridyl, thienyl, imidazolyl, indolyl), C 3 _ 8 cycloalkyl with a fused phenyl ring, the the aforementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 6 alkyl, OH, O 6 alkyl, F, Cl, Br;
die unter RE1 und RE2 genannten Gruppen können über einethe groups mentioned under R E1 and R E2 can be accessed via a
Bindung miteinander verknüpft sein,- auch die unter RE2 und RE3 genannten Gruppen können über eine Bindung miteinander verbunden sein;Bond may be linked to one another, - the groups mentioned under R E2 and R E3 may also be linked to one another via a bond;
RE2 steht weiterhin für C0RE5 (RE5 gleich OH, O-Cx-e-Alkyl, OCι_3-Alkylaryl) , CONRE6RE7 (mit RE6 bzw. RE7 gleich H, Cι-6-Alkyl, Co-3-Alkylaryl) , RE6RE7. E kann auch stehen für D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;R E2 also stands for C0R E5 (R E5 is OH, O-Cx-e-alkyl, OCι_ 3 alkylaryl), CONR E6 R E7 (with R E6 or R E7 being H, Cι- 6 alkyl, Co- 3 -alkylaryl), R E6 R E 7. E can also stand for D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;
G bedeutetG means
'(CH2)ιG. mit 1G = 2, 3, 4 und 5, wobei eine CH2-Gruppe des Rings durch 0, S, NH, NCι_3-Alkyl, CHOH, CHOCι_3-Alkyl,'(CH 2 ) ιG. with 1 G = 2, 3, 4 and 5, where a CH 2 group of the ring through 0, S, NH, NCι_ 3 alkyl, CHOH, CHOCι_ 3 alkyl,
00
N- C(Cι-3-Alkyl) 2 , CH (Cι_3-Alkyl ) , CHF, CHCl, CF2 ersetzt sein kann;N- C (Cι- 3 alkyl) 2 , CH (Cι_ 3 alkyl), CHF, CHCl, CF 2 can be replaced;
//
mit With
m^ = 0, 1, 2; nü = 0, 1, 2; = 1, 2, 3, 4;m ^ = 0, 1, 2; n ü = 0, 1, 2; = 1, 2, 3, 4;
RG1 H, Cι-C6-Alkyl, Aryl;R G1 H, -CC 6 alkyl, aryl;
RG2 H, Cχ-C6-Alkyl, Aryl;R G2 H, Cχ-C 6 alkyl, aryl;
RG1 und RG2 können zusammen auch eine -CH=CH-CH=CH-Kette '■ bilden;R G1 and R G2 may together a -CH = CH-CH = CH-chain '■ form;
weiterhin steht G fürG also stands for
RG4 R G4
mitWith
0, 1, 2; 0, 1, 2; RG3 H, C1-C6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl;0, 1, 2; 0, 1, 2; R G3 H, C 1 -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl;
RG4 H, Cι-C6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl (insbesondereR G4 H, -CC 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (in particular
Phenyl, Naphthyl) ;Phenyl, naphthyl);
K bedeutetK means
NH-(CH2)nκ-Qκ mitNH- (CH 2 ) n κ-Q κ with
nK = 0, 1, 2, 3;nK = 0, 1, 2, 3;
Qκ gleich' C2_6-Alkyl, wobei bis zu zwei CH2-Gruppen durch 0 oder S ersetzt sein können;Q κ is equal to ' C 2 _6-alkyl, where up to two CH 2 groups can be replaced by 0 or S;
Qκ gleichQ κ equal
mitWith
Rκl gleich H, Cι_3-Alkyl, OH, O-C1-3 -Alkyl, F, Cl, Br;R κl is H, Cι_ 3 alkyl, OH, O-C1-3 alkyl, F, Cl, Br;
RK2 gleich H, C1-3 -Alkyl, O-Ci-3 -Alkyl, F, Cl, Br; R K2 is H, C1-3 alkyl, O-Ci-3 alkyl, F, Cl, Br;
Xκ gleich 0, S, NH, N-Cι_6-Alkyl; I IX κ is 0, S, NH, N-Cι_ 6 alkyl; II
YK gleich =CH-, =C-C1_6-Alkyl, =N-, =C-C1;Y K is = CH-, = CC 1 _ 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I I Zκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-C1;IIZ κ equal to = CH-, = C-C 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I II I
Uκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-0-Cι_3-Alkyl;U κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N, = C 0 -C 3 alkyl;
I II I
Vκ gleich =CH-, =C-C1-6-Alkyl, =N- , =C-0-Cι_3-Alkyl;V κ is = CH-, = CC 1-6 alkyl, = N-, = C-0-Cι_ 3 alkyl;
Wκ gleich CH oder ' wobei im letzterenW κ is CH or 'where in the latter
Fall L keine Guanidingruppe sein darf;Case L must not be a guanidine group;
nK = o , 1 , 2 ;nK = o, 1, 2;
Pκ = o , 1 , 2 ; qκ = 1 , 2 ;P κ = o, 1, 2; q κ = 1, 2;
mitWith
RL1 gleich H, OH, 0-Cι-6-Alkyl, O- (CH2) o-3-Phenyl,R L1 is H, OH, 0-C 6 alkyl, O- (CH 2 ) o- 3 phenyl,
CO-Cx-g-Alkyl, C02-Cι_6-Alkyl, C02-C1.3-Alkylaryl , CO-Cx-g-alkyl, C0 2 -Cι_ 6 alkyl, C0 2 -C 1 . 3 -alkylaryl,
Bevorzugt sind dabei folgende VerbindungenThe following compounds are preferred
A-B-D-E-G-K-L (I)A-B-D-E-G-K-L (I)
A steht für H, H-(RA1)IAA stands for H, H- (R A1 ) IA
mit RA1 gleichequal to R A1
mit RA4 H, CH3, COOH iA = 1 - 6 with R A4 H, CH 3 , COOH iA = 1 - 6
= 0, 1, 2 A = 2, 3 inA = 0, 1, 2 nA = 0, 1, 2 wobei bei IA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können;= 0, 1, 2 A = 2, 3 inA = 0, 1, 2 nA = 0, 1, 2 where, if IA is greater than 1, the radicals R A1 can be identical or different;
B steht fürB stands for
(RB2_CH)kB 0 — CH O — CH HO CH( R B2_ CH ) k B 0 - CH O - CH HO CH
(HO-CH)ιB (H0-CH)mB c=o c==c(HO-CH) ιB (H0-CH) m B c = oc == c
RB4 0 — CH (HO-CH)mB 0— CH2 R B4 0 - CH (HO-CH) m B 0 - CH 2
(HO-CH)mB RB5(HO-CH) m B R B5
RB3 A-B kann stehen für R B3 AB can stand for
RB gleich H, CH2OHR B is H, CH 2 OH
RB2 gleich H, NH2, NH-COCH3, F R B2 is H, NH 2 , NH-COCH 3 , F
R B3 gleich H, CH3, CH2-0-Cι_4-Alkyl, COOH R B3 is H, CH 3 , CH 2 -0 -C 4 alkyl, COOH
RB4 gleich H, Cι-4-Alkyl, CH-0-Cι_4-Alkyl, COOH,R B4 is H, -CC 4 alkyl, CH-0 -C 4 -alkyl, COOH,
CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetal- bildung auftreten kann RB5 gleich H, CH3 , CH2-0-Cι_4-Alkyl, COOH B = 0, 1CHO, where intramolecular acetal formation can occur in the latter case R B5 is H, CH 3 , CH 2 -0 -CC 4 -alkyl, COOH B = 0.1
IB = 0, 1, 2, 3 (IB ≠ 0, für A = RB1 = RB3 H, kB = 0, und D eine Bindung) mB = 0, 1, 2, 3 nB = 0, 1, 2, 3IB = 0, 1, 2, 3 (IB ≠ 0, for A = R B1 = R B3 H, k B = 0, and D is a bond) m B = 0, 1, 2, 3 nB = 0, 1, 2, 3
R B6 gleich Cι-4-alkyl, Phenyl, Benzyl BB7 gleich H, Cι_4-alkyl, Phenyl, Benzyl R B 6 are the same Cι- 4 alkyl, phenyl, benzyl B7 B is H, Cι_ 4 alkyl, phenyl, benzyl
D steht für eine Bindung oder für N RD2 RD3 RD4 D stands for a bond or for NR D2 R D3 R D4
RD1 R D1
mit RD1 gleich H, Cι_4-Alkylwith R D1 is H, Cι_ 4 alkyl
RD2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkyl , RD3 gleich R D2 is the same as bond or Cι_ 4 alkyl, R D3 equal
R D4 gleich Bindung, Cι_ -Alkyl, CO, S02, -CH2-CO R D4 is the same bond, Cι_ alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO
steht fürstands for
(CH2)kE (CH 2 ) k E
RE1 mit R E1 with
k = 0, 1, 2;k = 0, 1, 2;
mE = 0, 1, 2, 3;m E = 0, 1, 2, 3;
RE1 bedeutet H, Ci-ß-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, wobei die vor- genannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedeneR E1 means H, Ci- β- alkyl, C 3 _ 8 -cycloalkyl, the abovementioned radicals up to three identical or different
Substituenten der Gruppe Cι_6-Alkyl, OH, O-Cι-6-Alkyl tragen können;Can carry substituents of the group Cι_ 6 alkyl, OH, O-Cι- 6 alkyl;
RE2 bedeutet H, Cι-6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl (ins- besondere Phenyl oder Naphthyl) , Heteroaryl (insbesondere Pyridyl, Furyl, Thienyl), Tetrahydropyranyl , Diphenyl- methyl, Dicyclohexylmethyl , wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cx-g-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl , F, Cl, Br, tragen können, CH(CF3)2;R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (in particular phenyl or naphthyl), heteroaryl (in particular pyridyl, furyl, thienyl), tetrahydropyranyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, the aforementioned radicals can carry up to three identical or different substituents of the group Cx-g-alkyl, OH, 0-Cι_ 6- alkyl, F, Cl, Br, CH (CF 3 ) 2 ;
RE3 bedeutet H, Ci-e-Alkyl , C3-8-Cycloalkyl ;R E3 means H, Ci-e-alkyl, C 3-8 cycloalkyl;
RE2 steht weiterhin für C0RE5 (RE5 gleich OH, 0-Cι_6-Alkyl , OCι_3-Alkylaryl ) , C0NRE6RE7 (mit RE6 bzw. RE7 gleich H, Cι_6-Alkyl , Co-3-Alkylaryl ) , NR 6RE ; E kann auch stehen für D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;R E2 furthermore stands for C0R E5 (R E5 equals OH, 0-Cι_ 6 -alkyl, OCι_ 3 -alkylaryl), C0NR E6 R E7 (with R E6 or R E7 equals H, Cι_ 6 -alkyl, Co- 3 - Alkylaryl), NR 6R E ; E can also stand for D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;
G bedeutetG means
•(CH2)lG. mit 1G = 2, 3 und 4, wobei eine CH -Gruppe des Rings durch 0, S, NH, NCι-3-Alkyl, CHOH, CHOCι_3-Alkyl • (CH 2 ) l G. with 1 G = 2, 3 and 4, where a CH group of the ring through 0, S, NH, NCι- 3 alkyl, CHOH, CHOCι_ 3 alkyl
N" ersetzt sein kann;N "can be replaced;
//
mit With
mG = 0, 1, 2; nG = 0, 1;m G = 0, 1, 2; n G = 0.1;
K bedeutetK means
NH-(CH2)nK-Qκ mitNH- (CH 2 ) n KQ κ with
nr 1, 2;n r 1, 2;
Qκ gleichQ κ equal
XK KXK K
ZK—xκ ;z γκ zκ γκ γκ-ZK— x κ; z γ κ z κ γ κ γ κ-
mitWith
Rκi gleich H, Cι-3-Alkyl, OH, O-C1-3-Alkyl, F, Cl, Br; R κ i is H, Cι- 3 alkyl, OH, OC 1-3 -alkyl, F, Cl, Br;
R K2 gleich H, C1-3-Alkyl, 0-C1_3-Alkyl, F, Cl, Br; R K2 is H, C 1-3 alkyl, 0-C 1 _ 3 alkyl, F, Cl, Br;
Xκ gleich O, S, NH, N-Cι-6-Alkyl; I I y gleich =CH-, =C-C1_6-Alkyl, =N-, =C-C1;X κ is O, S, NH, N -CC-6-alkyl; II y equals = CH-, = CC 1 _ 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I !I!
Zκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-C1;Z κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I II I
Uκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-0-Cι_3-Alkyl;U κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N, = C 0 -C 3 alkyl;
mitWith
RL1 gleich H, OH, 0-Cι_5-Alkyl, C02-C1_6-Alkyl . R L1 is H, OH, 0 -C 5 alkyl, C0 2 -C 1 _ 6 alkyl.
Als Thrombininhibitoren bevorzugt sind die Verbindungen der FormelPreferred compounds of the formula are preferred thrombin inhibitors
A-B-D-E-G-K-L (I)A-B-D-E-G-K-L (I)
A steht für H, H-(RA1)IAA stands for H, H- (R A1 ) IA
mit RA1 gleichequal to R A1
mit RA4 H, COOH iA = 1 - 6 with R A4 H, COOH iA = 1 - 6
JA = 0, 1 kA = 2, 3 nA = 1, 2J A = 0.1 k A = 2.3 nA = 1.2
wobei bei IA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können.where IA greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different.
B steht fürB stands for
0 — CH (H0-CH)mB0 - CH (H0-CH) m B
(HO-CH)mB RB4 I(HO-CH) m B R B4 I
11
RB3 R B3
RB3 gleich H, CH3 , COOHR B3 is H, CH 3 , COOH
RB4 gleich H, CH3, COOH, CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kann kB 0, 1R B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur kB 0.1
IB 1, 2, 3 mB = 0, 1, 2, 3 nB 1, 2, 3IB 1, 2, 3 m B = 0, 1, 2, 3 nB 1, 2, 3
D steht für eine B:D stands for a B:
E steht fürE stands for
RE2 R E2
• •
H mitH with
mE = 0, 1;m E = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Phenyl, Diphenyl- methyl, Dicyclohexylmethyl, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_4-Alkyl, OH, 0-CH3, F, Cl tragen könnenR E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, phenyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, the abovementioned radicals having up to three identical or different substituents from the group C 4 alkyl, OH, 0-CH 3 , F, Cl can wear
bedeutetmeans
des Rings durch ersetzt sein kann;the ring can be replaced by;
mitWith
nü = 0, 1; K bedeutetn ü = 0.1; K means
NH-CH2-QK mitNH-CH 2 -Q K with
Qκ gleichQ κ equal
RKlRKL
XK xκXK x κ
ZK XKZK XK
;z γκ zκ γκ γκ-; z γ κ z κ γ κ γ κ-
mitWith
R l gleich H, CH3, OH, 0-CH3, F, Cl;R 1 is H, CH 3 , OH, 0-CH 3 , F, Cl;
Xκ gleich 0, S, NH, N-CH3 ;X κ is 0, S, NH, N-CH 3 ;
Yκ gleich =CH-, =C-CH3, =N-Y κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-
Zκ gleich =CH-, =C-CH3, =N-Z κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-
RLi gleich H, OH, C0 -Cι-6-Alkyl . Als Komplementinhibitoren bevorzugt sind die Verbindungen der FormelR Li is H, OH, C0 -Cι- 6 alkyl. The compounds of the formula are preferred as complement inhibitors
A-B-D-E-G-K-L (I!A-B-D-E-G-K-L (I!
A steht für H, H-(RA1)iAA stands for H, H- (R A1 ) iA
mit RA1 gleichequal to R A1
mit RA4 H, COOH iA = 1 - 6 A - 0, 1 k = 2, 3 nA = 1, 2 with R A4 H, COOH i A = 1 - 6 A - 0, 1 k = 2, 3 n A = 1, 2
wobei bei JA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können.in the case of YES greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different.
B steht fürB stands for
0 — CH (H0-CH)mB0 - CH (H0-CH) m B
(H0-CH)mB RB4(H0-CH) m B R B4
RB3 A-B kann stehen für R B3 AB can stand for
RB3 gleich H, CH3, COOH R B3 is H, CH 3 , COOH
RB4 gleich H, CH3 , COOH, CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kannR B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
B = o, 1B = 0.1
IB = 1, 2, 3 mB = o, 1, 2, 3 nB = 1, 2, 3IB = 1, 2, 3 mB = o, 1, 2, 3 nB = 1, 2, 3
RB6 gleich Cι-4-alkyl, Phenyl, Benzyl BB7 gleich H, Cι-4-alkyl, Phenyl, Benzyl R B6 is C 4 alkyl, phenyl, benzyl B B7 is H 4 C 4 alkyl, phenyl, benzyl
steht für N RD2 RD3 RD4 stands for NR D2 R D3 R D4
RD1 R D1
mit RD1 gleich H, Cχ-4-Alkylwith R D1 equal to H, Cχ- 4 alkyl
RD2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkyl, R D2 is the same as bond or Cι_ 4 alkyl,
RD3 gleich R D3 equal
RD6 gleich H, CH3 R D6 is H, CH 3
RD4 gleich Bindung, C1_4-Alkyl, CO, S0 , -CH2-CO,R D4 is bond, C 1 _ 4 -alkyl, CO, S0, -CH 2 -CO,
E steht für R2 E stands for R 2
mit With
mE = 0, 1;m E = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι-6-Alkyl, C _8-Cycloalkyl , wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_4-Alkyl, OH, 0-CH3 , F, Cl tragen könnenR E2 means H, C 6 alkyl, C 8 cycloalkyl, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 4 alkyl, OH, 0-CH 3 , F, Cl
bedeutetmeans
des Rings durch ersetzt sein kann;the ring can be replaced by;
n = 0, 1;n = 0.1;
bedeutetmeans
NH-CH2-QK mit Qκ gleich //'W NH-CH 2 -Q K with Q κ is equal to // ' W
XK zκ — xκ XXK z κ - x κ X
;zκ γκ zκ YK YK-; zκ γ κ z κ YK YK-
mitWith
Rκl gleich H, CH3 , OH, 0-CH3, F, Cl;R κl is H, CH 3 , OH, 0-CH 3 , F, Cl;
Xκ gleich 0, S, NH, N-CH3 ;X κ is 0, S, NH, N-CH 3 ;
Yκ gleich =CH-, =C-CH3, =N-Y κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-
Zκ gleich =CH- , =C-CH3, =N-Z κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-
mitWith
RLi gleich H, OH, C02-Cι-6-Alkyl . R Li is H, OH, C0 2 -Cι- 6 alkyl.
Als Thrombininhibitoren besonders bevorzugt sind die Verbindungen der FormelThe compounds of the formula are particularly preferred as thrombin inhibitors
A-B-D-E-G-K-L ( i ;A-B-D-E-G-K-L (i;
steht für H, H-(RA )iA stands for H, H- (R A ) iA
mit RAi gleichequal to R Ai
mit iA = 1 - . with iA = 1 -.
JA = 0, 1 nA = 1, 2J A = 0, 1 n A = 1, 2
wobei bei IA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können.where IA greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different.
B steht fürB stands for
CH2-CH 2 -
O— CHO- CH
(H0-CH)mB(H0-CH) m B
HH
IB 1, 2, 3 1, 2 D steht für eine BindungIB 1, 2, 3 1, 2 D stands for a bond
E steht fürE stands for
RE2 R E2
mit With
c = 0, 1; c = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Phenyl, Diphenyl- methyl, Dicyclohexylmethyl;R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, phenyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl;
wobei der E Baustein vorzugsweise D-Konfiguration aufweist;wherein the E component preferably has a D configuration;
G bedeutetG means
wobei der G Bautein vorzugsweise L-Konfiguration aufweist: the G building block preferably having an L configuration:
K bedeutetK means
NH-CH2-QK mitNH-CH 2 -QK with
Qκ gleichQ κ equal
mitWith
RL1 gleich H, OH, C02-Cι_6-Alkyl . R L1 is H, OH, C0 2 -Cι_ 6 alkyl.
Als Komplementinhibitoren besonders bevorzugt sind die Verbindungen der FormelThe compounds of the formula are particularly preferred as complement inhibitors
A-B-D-E-G-K-L (I)A-B-D-E-G-K-L (I)
A steht für H, H-(RA1)iAA stands for H, H- (R A1 ) iA
mit RAl gleichequal to R Al
mit RA4 H, COOH iA = 1 - 6 with R A4 H, COOH iA = 1 - 6
3A = 0, 1 kA = 2, 3 nA = 1, 23 A = 0, 1 kA = 2, 3 n A = 1, 2
wobei bei iA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können.where, in general, greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different.
B steht fürB stands for
0 — CH (HO-CH)mB0 - CH (HO-CH) m B
(H0-CH)mB RB4(H0-CH) m B R B4
RB3 A-B steht für R B3 AB stands for
RB3 gleich H, CH3 , COOHR B3 is H, CH 3 , COOH
RB4 gleich H, CH3 , COOH, CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kannR B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
B = o , 1B = 0.1
IB = 1 , 2 , 3 mB = o , 1 , 2 , nB = 1 , 2 , 3IB = 1, 2, 3 mB = o, 1, 2, nB = 1, 2, 3
RB6 gleich Cι_4-alkyl, Phenyl, BenzylR B6 is Cι_ 4 alkyl, phenyl, benzyl
BB7 gleich H, Cι_4-alkyl, Phenyl, BenzylB B7 is H, C 4 alkyl, phenyl, benzyl
D steht für N RD RD3 RD4-D stands for N RD R D3 R D4 -
RD1 R D1
mit RD1 gleich H D2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkyl,with R D1 equal to H D2 equal to bond or Cι_ 4 alkyl,
RD3 gleich R D3 equal
R D4 gleich Bindung, Cι_4-Alkyl, CO, S02, -CH2-CO, E steht für R D4 is bond, Cι_ 4 alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO, E stands for
RE2 R E2
m* = 0, 1;m * = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, Cß-s-Cycloalkyl, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe F, Cl tragen könnenR E2 means H, -C 6 alkyl, C ß -s-cycloalkyl, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from group F, Cl
bedeutetmeans
//
mitWith
= 0;= 0;
K bedeutetK means
Qκ gleich mitQ κ equal With
Xκ gleich S;X κ is S;
Yκ gleich =CH-, =N- ;Y κ equals = CH-, = N-;
Zκ gleich =CH-, =N-;Z κ equal to = CH-, = N-;
mitWith
RL1 gleich H, OH. R L1 equals H, OH.
Bevorzugte A-B-Bausteine sind:Preferred A-B modules are:
Der Begriff Cι_x-Alkyl umfaßt alle geradkettigen und verzweigten Alkylketten mit einem bis χ-Kohlenstoffatomen. The term Cι_ x alkyl includes all straight-chain and branched alkyl chains with one to χ carbon atoms.
Der Begriff C3_8-Cycloalkyl steht für carbocyclische gesättigte Reste mit 3- bis 8 Kohlenstoffato en.The term C 3 _ 8 -cycloalkyl stands for carbocyclic saturated radicals with 3 to 8 carbon atoms.
Der Begriff Aryl steht für carbocyclische Aromaten mit 6 bis 14 C-Atomen, insbesondere für Phenyl, 1-Naphthyl, 2-Naphthyl .The term aryl stands for carbocyclic aromatics with 6 to 14 carbon atoms, in particular for phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl.
Der Begriff Heteroaryl steht für Fünf- und Sechsring-Aromaten mit mindestens einem Heteroato N, 0 oder S, insbesondere für Pyridyl, Thienyl, Furyl, Thiazolyl, Imidazolyl; dabei können auch zwei aromatische Ringe kondensiert sein, wie z.B. Indol , N-Cι_ -Alkylindol, Benzothiophen, Benzothiazol, Benzimidazol, Chinolin, Isochinolin.The term heteroaryl stands for five- and six-ring aromatics with at least one heteroato N, 0 or S, in particular for pyridyl, thienyl, furyl, thiazolyl, imidazolyl; two aromatic rings can also be fused, e.g. Indole, N-Cι_ -Alkylindol, benzothiophene, benzothiazole, benzimidazole, quinoline, isoquinoline.
Der Begriff Cx--y-Alkylaryl steht für carbocyclische Aromaten, die über eine Alkylgruppe mit X, x+1, ...y-1 oder y C-Atomen mit dem Gerüst verknüpft sind.The term C x - y -alkylaryl stands for carbocyclic aromatics which are linked to the skeleton via an alkyl group with X, x + 1, ... y-1 or y C atoms.
Die Verbindungen der Formel I können als solche oder in Form ihrer Salze mit physiologisch verträglichen Säuren vorliegen. Beispiele für solche Säuren sind: Salzsäure, Zitronensäure, Wein- säure, Milchsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Essigsäure, Ameisensäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Hydroxy- bernsteinsäure, Schwefelsäure, Glutarsäure, Asparaginsäure, Brenztraubensäure, Benzoesäure, Glucuronsäure, Oxalsäure, Ascorbinsäure und Acetylglycin.The compounds of the formula I can be present as such or in the form of their salts with physiologically tolerated acids. Examples of such acids are: hydrochloric acid, citric acid, tartaric acid, lactic acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, acetic acid, formic acid, maleic acid, fumaric acid, succinic acid, hydroxysuccinic acid, sulfuric acid, glutaric acid, aspartic acid, pyruvic acid, benzoic acid and oxyacid, glucuronic acid, glucuronic acid, glucuronic acid acetylglycine.
Die neuen Verbindungen der Formel I sind kompetitive Inhibitoren des Thrombins oder des Komplementsystems, besonders von Cιs, sowie weiter von Cιr.The new compounds of formula I are competitive inhibitors of thrombin or the complement system, especially Cι s , and further from Cι r .
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in üblicher Weise oral oder parenteral (subkutan, intravenös, intramuskulär, intraperitoneal, rektal) verabfolgt werden. Die Applikation kann auch mit Dämpfen oder Sprays durch den Nasen-Rachenraum erfolgen.The compounds according to the invention can be administered orally or parenterally (subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, rectally) in the customary manner. It can also be applied with vapors or sprays through the nasopharynx.
Die Dosierung hängt vom Alter, Zustand und Gewicht des Patienten sowie von der Applikationsart ab. In der Regel beträgt die tägliche Wirkstoffdosis pro Person zwischen etwa 10 und 2000 mg bei oraler Gabe und zwischen etwa 1 und 200 mg bei parenteraler Gabe. Diese Dosis kann in 2 bis 4 Einzeldosen oder einmalig am Tag als Depotform gegeben werden. Die Verbindungen können in den gebräuchlichen galenischen Applikationsformen fest oder flüssig angewendet werden, z.B. als Tabletten, Filmtabletten, Kapseln, Pulver, Granulate, Dragees, Suppositorien, Lösungen, Salben, Cremes oder Sprays. Diese werden in üblicher Weise hergestellt. Die Wirkstoffe können dabei mit den üblichen galenischen Hilfsmitteln wie Tablettenbindern, Füllstoffen, Konservierungsmitteln, Tablettensprengmitteln, Fließreguliermitteln, Weichmachern, Netzmitteln, Dispergiermitteln, Emulgatoren, Lösungsmitteln, Retardierungsmitteln, Antioxidantien und/oder Treibgasen verarbeitet werden (vgl- H. Sucker et al . : Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978) . Die so erhaltenen Applikationsformen enthalten den Wirkstoff normalerweise in einer Menge von 0,1 bis 99 Gew.-%.The dosage depends on the age, condition and weight of the patient and on the type of application. As a rule, the daily dose of active ingredient per person is between approximately 10 and 2000 mg when administered orally and between approximately 1 and 200 mg when administered parenterally. This dose can be given in 2 to 4 single doses or once a day as a depot form. The compounds can be used in the customary pharmaceutical application forms in solid or liquid form, for example as tablets, film-coated tablets, capsules, powders, granules, dragees, suppositories, solutions, ointments, creams or sprays. These are manufactured in the usual way. The active ingredients can be processed with the usual pharmaceutical auxiliaries such as tablet binders, fillers, preservatives, tablet disintegrants, flow regulators, plasticizers, wetting agents, dispersants, emulsifiers, solvents, retardants, antioxidants and / or propellants (see H. Sucker et al.: Pharmaceuticals Technology, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978). The application forms thus obtained normally contain the active ingredient in an amount of 0.1 to 99% by weight.
Unter Prodrugs werden Verbindungen verstanden, die in vivoProdrugs mean compounds that are in vivo
(z.B. first pass Metabolisums) in die pharmakologisch aktiven Verbindungen der allgemeinen Formel I umgesetzt werden.(e.g. first pass metabolisums) are converted into the pharmacologically active compounds of the general formula I.
Ist bei den Verbindungen der Formel I RL1 ungleich Wasserstoff, so handelt es sich bei diesen Substanzen um Prodrugs, aus denen unter in vivo Bedingungen die freien Amidin-/Guanidinverbindungen entstehen. Sind in den Verbindungen der Formel I Esterfunktionen enthalten, so können diese Verbindungen in vivo als Prodrugs wirken, aus welchen die entsprechenden Carbonsäuren entstehen. If the compounds of the formula IR L1 are not hydrogen, these substances are prodrugs from which the free amidine / guanidine compounds are formed under in vivo conditions. If ester compounds are present in the compounds of the formula I, these compounds can act in vivo as prodrugs from which the corresponding carboxylic acids are formed.
Außer den in den Beispielen genannten Substanzen sind folgende Verbindungen ganz besonders bevorzugt und können gemäß den genannten Herstellungsvorschriften hergestellt werden:In addition to the substances mentioned in the examples, the following compounds are very particularly preferred and can be prepared in accordance with the production instructions mentioned:
164. D- Cellobio -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz 164. D-Cellobio -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
165. D- Xylo -D-Cha-Py.-NH-CH2-2-(4-am)--hiaz165. D-xylo -D-Cha-Py.-NH-CH2-2- (4-am) - hiaz
166. L- Xylo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz166. L-xylo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
167. Cellopentao -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz167. Cellopentao -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
168. D-Fructo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz168. D-Fructo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
169. Maltotrio -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz169. Maltotrio -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
170. Maltotetrao -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz170. Maltotetrao -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
171. Glucohepto -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz171. Glucohepto -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
172. L-Allo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz172. L-Allo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
173. D-Allo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz173. D-Allo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
174. D-Gluco -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz174. D-Gluco -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
175. L-Gluco -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz175. L-Gluco -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
176. D- anno -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz176. D-anno -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
177. L- Manno -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz177. L-Manno -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
178. L-Galacto -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz178. L-Galacto -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
179. Dextro -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz179. Dextro -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
180. L-Lyxo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz180. L-Lyxo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
181. D-Lyxo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz181. D-Lyxo -D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
182. D-Lacto-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz182. D-Lacto-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
183. D-Talo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz183. D-Talo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
184. L-Talo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz184. L-Talo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
185. Beta-Malto-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz185. Beta-Malto-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
186. L-Fuco-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz186. L-Fuco-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
187. L-Gulo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz187. L-Gulo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
188. D-Gulo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz188. D-Gulo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
189. L-ldo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz189. L-Ido-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
190. D-ldo-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz190. D-Ido-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
191. D-Cellotrio-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz191. D-Cellotrio-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
192. D-Galacturonic-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz192. D-Galacturonic-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
193. D-Glucuronic-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz193. D-Glucuronic-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
194. D-Cellotetrao-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz194. D-Cellotetrao-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
195. Maltohexao-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz195. Maltohexao-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
196. Maltopentao-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz196. Maltopentao-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
197. Xylobio-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz197. Xylobio-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
198. D-Lacto-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz198. D-Lacto-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
199. Gentobio-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz199. Gentobio-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
200. D-Rhamno-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz200. D-Rhamno-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
201. L-Altro-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz201. L-Altro-D-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
202. D-Galactc-D-Cha-Py.-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz202. D-Galactc-D-Cha-Py.-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz
203. D-Galacturo-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph203. D-galacturo-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
204. D-Galacturo-D-Val-Pyr-Nr.-CH2-5-(3-am)-thioph204. D-Galacturo-D-Val-Pyr No.-CH 2 -5- (3-am) -thioph
205. D-Glucohepto-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph205. D-Glucohepto-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
206. L-Allo-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph206. L-Allo-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
207. D-Allo-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph207. D-Allo-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
208. D-Gluco-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph208. D-Gluco-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
209. D-Galacto-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph209. D-galacto-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
210. L-Gluco-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph210. L-Gluco-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
211. L-Manno-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph211. L-Manno-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
212. D-Manno-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph212. D-Manno-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
213. D-Cellotrio-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph213. D-Cellotrio-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
214. D-Cellobio-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph214. D-Cellobio-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
215. D-Glucuronic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph215. D-Glucuronic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
216. Arabinic AC-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph216. Arabinic AC-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
217. L-lduronic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph217. L-Induronic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
218. Gluconic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph218. Gluconic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
219. Heptagluconic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph 220. Lactobionic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph219. Heptagluconic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph 220. Lactobionic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
221. D-Xylonic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph221. D-Xylonic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
222. Arabic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph222. Arabic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
223. Phenyl-beta-D-Glucuronic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph223. Phenyl-beta-D-glucuronic-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
224. Methyl-beta-D-Glucuronic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph224. Methyl-beta-D-glucuronic-D-val-pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
225. D-quinic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph225. D-quinic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
226. Phenyl-alpha-iduronic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph226. Phenyl-alpha-iduronic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
227. digalacturonic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph227. digalacturonic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
228. trigalacturonic-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph228. trigalacturonic-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
229. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph229. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
230. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-D-Val-Pyr- NH-CH2-5-(3-am)-thioph230. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
231. D-Galacturo-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph231. D-Galacturo-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
232. D-Glucohepto-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph232. D-Glucohepto-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
233. L-Allo-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph233. L-Allo-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
234. D-Allo-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph234. D-Allo-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
235. D-Gluco-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph235. D-Gluco-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
236. D-Galacto-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph236. D-Galacto-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
237. L-Gluco-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph237. L-Gluco-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
238. L-Manno-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph238. L-Manno-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
239. D-Manno-N H-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-N H-CH2-5-(3-am)-thioph239. D-Manno-N H-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-N H-CH 2 -5- (3-am) -thioph
240. D-Cellotrio-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph240. D-Cellotrio-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
241. D-Cellobio-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph241. D-Cellobio-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
242. D-Glucuronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph242. D-Glucuronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
243. Arabinic AC-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thiopl.243. Arabinic AC-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thiopl.
244. L-lduronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph244. L-Induronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
245. Gluconic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph245. Gluconic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
246. Heptag I ucon ic-N H-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-N H-CH2-5-(3-am )-thioph246. Heptag I ucon ic -N H -cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-N H-CH2-5- (3-am) -thioph
247. Lactobionic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph247. Lactobionic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
248. D-Xylonic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph248. D-xylonic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
249. Arabic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph249. Arabic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
250. Phenyl-beta-D-Glucuronic-NH-cyclohexyi-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)- thioph250. Phenyl-beta-D-glucuronic-NH-cyclohexyi-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) - thioph
251. Methyl-beta-D-Glucuronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH- CH2-5-(3-am)-thioph251. Methyl-beta-D-glucuronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
252. D-quinic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph252. D-quinic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
253. Phenyl-alpha-iduronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph253. Phenyl-alpha-iduronic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
254. digalacturonic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph254. digalacturonic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
255. trigalacturonic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph255. trigalacturonic-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
256. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-cyclohexyl-CO-D- Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph256. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-cyclohexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
257. 3-acetamidc— 4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-cyclo- hexyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph257. 3-acetamidec-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-cyclohexyl-CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) - thioph
258. D-Galacturo-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph258. D-Galacturo-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
259. D-Glucohepto-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-amHhioph259. D-Glucohepto-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-amHhioph
260. L-Allo-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph260. L-Allo-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
261. D-Allo-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph261. D-Allo-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
262. D-Gluco-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph262. D-Gluco-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
263. D-Galacto-NH-Cr.2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-amHh'QPn 263. D-Galacto-NH-Cr. 2- p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-amHh ' Q P n
264. L-Gluco-NH-CH2-r -phenyl-CO--D--Val-Pyr-NH--CH2-5--(-^am)-thioprι264. L-Gluco-NH-CH2-r -phenyl-CO - D - Val-Pyr-NH - CH2-5 - (- ^ am) -thioprι
265. L-Manno-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph265. L-Manno-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
266. D-Manno-NH-CHg-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH^δ-lS-amHhioph266. D-Manno-NH-CHg-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH ^ δ-IS-amHhioph
267. D-Cellotrio-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph267. D-Cellotrio-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
268. D-Cellobio-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph268. D-Cellobio-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
269. D-Glucuronic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph 270. Arabinic AC-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-arτι)-thioph269. D-Glucuronic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph 270. Arabinic AC-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-arτι) -thioph
271. L-lduronic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph271. L-Induronic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
272. Gluconic-NH-CH -p-phenyl-CO--D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph272. Gluconic-NH-CH-p-phenyl-CO - D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
273. Heptagluconic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph273. Heptagluconic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
274. Lactobionic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph274. Lactobionic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
275. D-Xylonic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph275. D-xylonic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
276. Arabic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph276. Arabic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
277. Phenyl-beta-D-Glucuronio-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph277. Phenyl-beta-D-glucuronio-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
278. Methyl-beta-D-Glucuronic-NH-CH^p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH^δ- (3-am)-thioph278. Methyl-beta-D-glucuronic-NH-CH ^ p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH ^ δ- (3-am) -thioph
279. D-quinic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph279. D-quinic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
280. Phenyl-alpha-iduronic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph280. Phenyl-alpha-iduronic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
281. digalacturonic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph281. digalacturonic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
282. trigalacturonic-NH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph282. trigalacturonic-NH-CH 2 -p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
283. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CONH-CH2-p-phenyl-CO- D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph283. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CONH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
284. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CONH-CH2-p- phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2--5-(3-am)-thioph284. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CONH-CH2-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 --5- (3-am) -thioph
285. D-Galacturo-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph285. D-Galacturo-NH-CH 2 -p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
286. D-Glucohepto-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-ann)-thioph286. D-Glucohepto-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-ann) -thioph
287. L-Allo-NH-CH2~p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph287. L-Allo-NH-CH 2 ~ p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
288. D-Allo-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph288. D-Allo-NH-CH2-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
289. D-Glucc-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph289. D-Glucc-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
290. D-Galacto-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph290. D-galacto-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
291 . L-Gluco-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D~-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph291. L-Gluco-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D ~ -Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
292. L-Manno-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph292. L-Manno-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
293. D-Manno-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph293. D-Manno-NH-CH2-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
294. D-Cellotrio-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph294. D-Cellotrio-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
295. D-CelloB!o-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph295. D-CelloB! O-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
296. D-Glucuronic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph296. D-Glucuronic-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
297. Arabin ic AC-N H-CH2-p~ph-}nyl-CH2-CO-D-Vai-Pyr-N H-CH2-5-(3-am)-thιo h297. Arabin ic AC-N H-CH 2 -p ~ ph-} nyl-CH2-CO-D-Vai-Pyr-N H-CH 2 -5- (3-am) -thιo h
298. L-lduronic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph298. L-Induronic-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
299. Gluconic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3--am)-thioph299. Gluconic-NH-CH2-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3 - am) -thioph
300. Heptagluconic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-Cr.2-5-(3-am)-thioph300. Heptagluconic-NH-CH2-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-Cr.2-5- (3-am) -thioph
301 . Lactobionic-NH-CH2-P-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH--CH2-5-(3-am)-thioph301. Lactobionic-NH-CH2-P-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH - CH 2 -5- (3-am) -thioph
302. D-Xylonic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph302. D-xylonic-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-val-pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
303. Arabic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph303. Arabic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
304. Phenyl-beta-D-Glucuronic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph304. Phenyl-beta-D-glucuronic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
305. Methyl-beta-D-Glucuronic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph305. Methyl-beta-D-glucuronic-NH-CH 2 -p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
306. D-quinic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)rthioph306. D-quinic-NH-CH2-p-phenyl-CH 2 -CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) rthioph
307. Phenyl-alpha-iduronic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph307. Phenyl-alpha-iduronic-NH-CH2-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
308. digalacturonic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph308. digalacturonic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
309. trigalacturonic-NH-CH2-p-phenyl-CH2-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH -5-(3-am)-thioph309. trigalacturonic-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CQ-D-Val-Pyr-NH-CH -5- (3-am) -thioph
310. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-CH2-p-phenyl- CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph310. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3rd -am) -thioph
311. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-CH2-p- phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5~(3-am)-thioph311. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-CH 2 -p-phenyl-CH 2 -CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5 ~ (3-am) -thioph
312. D-Galacturo-NH-p-phenyl-CH2-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph312. D-Galacturo-NH-p-phenyl-CH 2 -CQ-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
313. D-Glucohepto-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph313. D-Glucohepto-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
314. L-Allo-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph314. L-Allo-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
315. D-AII&-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph 316. D-Glucch-NH-p-phenyl-CH2--CO--D-Val--Pyr-NH-CH2-5--(3-am)-thioph315. D-AII & -NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph 316. D-Glucch-NH-p-phenyl-CH 2 --CO - D-Val - Pyr-NH-CH2-5 - (3-am) -thioph
317. D-Galacto-NH-p-pheπyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph317. D-galacto-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
318. L-Glucc-NH-p-phenyl-CH^CO-D-Val-Pyr-NH-CH^S- S-amHhioph318. L-Glucc-NH-p-phenyl-CH ^ CO-D-Val-Pyr-NH-CH ^ S-S-amHhioph
319. L-Manno-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph319. L-Manno-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
320. D-Manno-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph320. D-Manno-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
321. D-Cellotrio-NH-p-phenyl-CH2-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thJoph321. D-Cellotrio-NH-p-phenyl-CH 2 -CQ-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thJoph
322. D-Cellobio-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph322. D-Cellobio-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
323. D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph323. D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
324. Arabinic AC-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-th'oph324. Arabinic AC-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -th'oph
325. L-lduronic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph325. L-Induronic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
326. Gluconic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph326. Gluconic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
327. Heptagluconic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph327. Heptagluconic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
328. Lactobionic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph328. Lactobionic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
329. D-Xylonic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph329. D-xylonic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
330. Arabic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph330. Arabic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
331. Phenyl-beta-D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am)-thioph331. Phenyl-beta-D-glucuronic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
332. Methyl-beta-D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CH^CO-D-Val-Pyr- NH-CH2-5-(3-am)-thioph332. Methyl-beta-D-glucuronic-NH-p-phenyl-CH ^ CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
333. D-quinic-NH-p-phenyl-CH -CO-D-Val-Pyr-NH-CH -5-(3-am)-thioph333. D-quinic-NH-p-phenyl-CH -CO-D-Val-Pyr-NH-CH -5- (3-am) -thioph
334. Phenyl-alpha-iduronic-NH-p-phenyl-CH^CO-D-Val-Pyr-NH-CH^δ- (3-am)-thioph334. Phenyl-alpha-iduronic-NH-p-phenyl-CH ^ CO-D-Val-Pyr-NH-CH ^ δ- (3-am) -thioph
335. digalacturonic -NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph335. digalacturonic -NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
336. trigalacturonic-NH-p-phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph336. trigalacturonic-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
337. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-p-phenyl-CH2-CO- D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph337. 3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-p-phenyl-CH 2 -CO- D-val-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
338. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-p- phenyl-CH2-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph338. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-p-phenyl-CH 2 -CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3- am) -thioph
339. D-Galacturo-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph339. D-Galacturo-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
340. D-Glucohepto-NH-p-phenyl-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph340. D-Glucohepto-NH-p-phenyl-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
341. L-Allo-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph341. L-Allo-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
342. D-Allo-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph342. D-Allo-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
343. D-Glucc-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph343. D-Glucc-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
344. D-Galacto-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH^δ-tS-amHh'oph344. D-Galacto-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH ^ δ-tS-amHh'oph
345. L-Gluco-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph345. L-Gluco-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
346. L-Manno-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph346. L-Manno-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
347. D-Manno-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph347. D-Manno-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
348. D-Cellotrio-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph348. D-Cellotrio-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
349. D-Cellobio-NH-p-phenyl-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph349. D-Cellobio-NH-p-phenyl-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
350. D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph350. D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CQ-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
351. Arabinic AC-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph351. Arabinic AC-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
352. L-lduronic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph352. L-Induronic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph
353. Gluconic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph353. Gluconic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
354. Heptag I ucon ic-N H-p-phenyl-CO-D-Val-Py r-N H-CH2-5-(3-am)-th ioph354. Heptag I ucon ic-N Hp-phenyl-CO-D-Val-Py rN H-CH 2 -5- (3-am) -th ioph
355. Lactobionic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph355. Lactobionic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
356. D-Xylonic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph356. D-xylonic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
357. Arabic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph357. Arabic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
358. Phenyl-beta-D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph358. Phenyl-beta-D-glucuronic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
359. Methyl-beta-D-Glucuronic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph359. Methyl-beta-D-glucuronic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
360. D-quinic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph360. D-quinic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
361. Phenyl-alpha-iduroni-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph361. Phenyl-alpha-iduroni-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
362. digalacturonic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph362. digalacturonic-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph
363. 314,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-p-phenyl-CO-D- Val-Pyr-NI+-CH2-5-(3-am)-thloph363. 3 1 4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NI + -CH 2 -5- (3-am) -thloph
364. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl(2)-CO-NH-p- phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph Abkürzungsl iste:364. 3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydropyranyl (2) -CO-NH-p-phenyl-CO-D-Val-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) - thioph Abbreviations:
Abu: 2-AminobuttersäureAbu: 2-aminobutyric acid
AIBN: AzobisisobutyronitrilAIBN: Azobisisobutyronitrile
Ac: Acetyl Acpc : 1-Aminocyclopentan-l-carbonsäureAc: Acetyl Acpc: 1-aminocyclopentane-1-carboxylic acid
Achc: 1-Aminocyclohexan-l-carbonsäureAchc: 1-aminocyclohexane-1-carboxylic acid
Aib: 2-AminoisobuttersäureAib: 2-aminoisobutyric acid
Ala: Alanin b-Ala: b-Alanin (3-Aminopropionsäure) am: Amidino amb: amidinobenzylAla: Alanine b-Ala: b-Alanine (3-aminopropionic acid) on: Amidino amb: amidinobenzyl
4-amb: 4-anιidinobenzyl (p-amidinobenzyl)4-amb: 4-anidinobenzyl (p-amidinobenzyl)
Arg: ArgininArg: arginine
Asp: Asparaginsäure Aze: Azetidin-2-carbonsäureAsp: Aspartic Acid Aze: Azetidine-2-carboxylic acid
Bn: BenzylBn: benzyl
Boc: tert . ButyloxycarbonylBoc: tert. butyloxycarbonyl
Bu: ButylBu: butyl
Cbz: Benzyloxycarbonyl Cha: CyclohexylalaninCbz: benzyloxycarbonyl Cha: cyclohexylalanine
Chea: CycloheptylalaninChea: cycloheptylalanine
Cheg: Cyc1ohepty1glycinCheg: Cyc1ohepty1glycine
Chg: CyclohexylglycinChg: cyclohexylglycine
Cpa: Cyclopentylalanin Cpg: Cyclopentylglycin d: DublettCpa: cyclopentylalanine Cpg: cyclopentylglycine d: doublet
Dab: 2 , 4-diaminobuttersäureDab: 2,4-diaminobutyric acid
Dap: 2 , 3-diaminopropionsäureDap: 2,3-diaminopropionic acid
DC: Dünnschichtchromatographie DCC: Dicyc1ohexy1carbodiimidTLC: thin layer chromatography DCC: dicyclohexyl carbodiimide
Dcha: Dicyc1ohexy1aminDcha: Dicyc1ohexy1amin
DCM: DichlormethanDCM: dichloromethane
Dhi-1-COOH: 2 , 3-Dihydro-lH-isoindol-l-carbonsäureDhi-1-COOH: 2,3-dihydro-lH-isoindole-l-carboxylic acid
DMF: Dirnethylforma id DIPEA: Diisopropy1ethy1aminDMF: Dirnethylforma id DIPEA: Diisopropy1ethy1amin
EDC: N'- (3-Dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimidEDC: N'- (3-dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide
Et: EthylEt: ethyl
Eq:' ÄquivalenteEq: ' equivalents
Gly: Glycin Glu: Glutaminsäure für: Füran guan: Guanidino harn: HydroxyamidinoGly: Glycine Glu: Glutamic acid for: Füran guan: Guanidino urine: Hydroxyamidino
HCha Homocyclohexylalanin, 2-Amino-4-cyclohexylbuttersäure His: HistidinHCha homocyclohexylalanine, 2-amino-4-cyclohexylbutyric acid His: histidine
HOBT: HydroxybenzotriazolHOBT: hydroxybenzotriazole
HOSucc : Hydroxysuccinimid HPLC: HochleistungsflüssigkeitschromatographieHOSucc: hydroxysuccinimide HPLC: high performance liquid chromatography
Hyp: HydroxyprolinHyp: hydroxyproline
Ind-2-COOH: Indolin-2-carbonsäure iPr: iso-Propyl Leu: LeucinInd-2-COOH: indoline-2-carboxylic acid iPr: iso-propyl Leu: leucine
Lsg: LösungSolution: Solution
Lys : Lysin m: MultiplettLys: lysine m: multiplet
Me: Methyl MPLC: MitteldruckflüssigkeitschromatographieMe: Methyl MPLC: medium pressure liquid chromatography
MTBE: Methyl-tert . -butyl-etherMTBE: methyl tert. butyl ether
NBS: N-BromsuccinimidNBS: N-bromosuccinimide
Nva: NorvalinNva: norvaline
Ohi-2-COOH: Octahydroindol-2-carbonsäure Ohii-1-COOH: Octahydroisoindol-1-carbonsäureOhi-2-COOH: octahydroindole-2-carboxylic acid Ohii-1-COOH: octahydroisoindole-1-carboxylic acid
Orn: OrnithinOrn: ornithine
Oxaz : Oxazol p-amb: p-amidinobenzylOxaz: oxazole p-amb: p-amidinobenzyl
Ph: Phenyl Phe: Phenylal ninPh: Phenyl Phe: Phenylal nin
Phg: PhenylglycinPhg: phenylglycine
Pic: Pipecolinsäure pico: picolylPic: Pipecolic acid pico: picolyl
PPA: Propylphosphonsäureanhydrid Pro: ProlinPPA: propylphosphonic anhydride Pro: proline
Py: PyridinPy: pyridine
Pyr : 3 , 4-Dehydroprolin : QuartettPyr: 3, 4-dehydroproline: quartet
RT: Raumtemperatur RP-18 Reversed Phase C-18 s : SingulettRT: room temperature RP-18 reversed phase C-18 s: singlet
Sar: Sarkosin (N-Methylglycin) sb: Singulett breit t: Triplett t: tertiär tBu: tertiär-Butyl tert : tertiärSar: sarcosine (N-methylglycine) sb: singlet broad t: triplet t: tertiary tBu: tertiary butyl tert: tertiary
TBAB: TetrabutylammoniumbromidTBAB: tetrabutylammonium bromide
TEA: Trietylamin TFA: TrifluoressigsäureTEA: trietylamine TFA: trifluoroacetic acid
TFFA: Trifluoressigsäureanhydrid thiaz : ThiazolTFFA: trifluoroacetic anhydride thiaz: thiazole
Thz-2-COOH: 1, 3-Thiazolidin-2-carbonsäureThz-2-COOH: 1,3-thiazolidine-2-carboxylic acid
Thz-4-COOH: 1, 3-Thiazolidin-4-carbonsäure thioph: ThiophenThz-4-COOH: 1,3-thiazolidine-4-carboxylic acid thioph: thiophene
1-Tic: 1-Tetrahydroisochinolincarbonsäure1-Tic: 1-tetrahydroisoquinoline carboxylic acid
3-Tic: 3-Tetrahydroisochinolincarbonsäure TOTU : 0- (Cyan-ethoxycarbonylmethylen) -amino-] - N,N,N' ,N' -tetramethyluroniumtetrafluoroborat Z : Benzy1oxycarbony13-Tic: 3-tetrahydroisoquinoline carboxylic acid TOTU: 0- (cyano-ethoxycarbonylmethylene) -amino-] - N, N, N ', N' -tetramethyluronium tetrafluoroborate Z: Benzy1oxycarbony1
5 Experimenteller Teil5 Experimental part
Die Verbindungen der Formel I lassen sich entsprechend Schemata I und II darstellen.The compounds of the formula I can be prepared in accordance with schemes I and II.
0 Die Bausteine A-B, D, E, G und K werden vorzugsweise separat aufgebaut und in geeignet geschützter Form eingesetzt (siehe Schema I, Verwendung jeweils orthogonaler, mit der angewandten Synthesemethode kompatibler Schutzgruppen (P oder P*).0 The building blocks A-B, D, E, G and K are preferably constructed separately and used in a suitably protected form (see scheme I, use of orthogonal protective groups (P or P *) which are compatible with the synthetic method used).
5 Schema I5 Scheme I
0 (P = Schutzgruppe, (P) = Schutzgruppe oder H) 0 (P = protecting group, (P) = protecting group or H)
Schema I beschreibt den linearen Aufbau des Moleküls I durch Schutzgruppenabspaltung von P-K-L* (L* gleich C0NH2, CSNH2, CN, C(=NH)NH-COOR*; R* gleich Schutzgruppe oder polymerer Träger 5 mit Spacer (Festphasensynthese) ) , Kupplung des Amins H-K-L* mit der N-geschützten Aminosäure P-G-OH zu P-G-K-L* , Abspaltung der N-terminalen Schutzgruppe zu H-G-K-L*, Kupplung mit der N-geschützten Aminosäure P-E-OH zu P-E-G-K-L*, erneute Abspaltung der N-terminalen Schutzgruppe zu H-E-G-K-L* und gegebenenfalls erneute Kupplung mit dem N-geschützten Baustein P-D-U (ü=Abgangs- gruppe)zu P-D-E-G-K-L* , falls das Endprodukt einen D Baustein aufweist.Scheme I describes the linear structure of molecule I by deprotection of PKL * (L * equals C0NH 2 , CSNH 2 , CN, C (= NH) NH-COOR *; R * equals protective group or polymeric support 5 with spacer (solid phase synthesis)) , Coupling of the amine HKL * with the N-protected amino acid PG-OH to PGKL *, cleavage of the N-terminal protective group to HGKL *, coupling with the N-protected amino acid PE-OH to PEGKL *, renewed cleavage of the N-terminal protective group to HEGKL * and, if necessary, renewed coupling with the N-protected building block PDU (ü = leaving group) to PDEGKL *, if the end product has a D building block ,
Ist L* auf dieser Synthesestufe eine Amid-, Thioamid- oder Nitil- funktion, so wird diese -je nach angestrebtem Endprodukt- in die entsprechende Amidin- oder Hydroxyamidinfunktion überführt . Amidinsynthesen für die Benza idin-, Picolylamidin-, Thienyl- amidin-, Furylamidin- und Thiazolylamidin-Verbindungen des Strukturtyps I ausgehend von den entsprechenden Carbonsäure- amiden, Nitrilen, Carbonsäurethioamiden und Hydroxyamidinen sind in einer Reihe von Patentanmeldungen beschrieben (s. z.B. WO 95/35309, WO 96/178860, WO 96/24609, WO 96/25426, WO 98/06741, WO 98/09950.If L * is an amide, thioamide or nitile function at this stage of the synthesis, then this is converted into the corresponding amidine or hydroxyamidine function, depending on the end product sought. Amidine syntheses for the benzidine, picolylamidine, thienyl amidine, furylamidine and thiazolylamidine compounds of structure type I starting from the corresponding carboxylic acid amides, nitriles, carboxylic acid thioamides and hydroxyamidines are described in a number of patent applications (see, for example, WO 95/35309 , WO 96/178860, WO 96/24609, WO 96/25426, WO 98/06741, WO 98/09950.
Nach Abspaltung der Schutzgruppe P zu H- (D) -E-G-K-L* (L* gleich C(=NH)NH, C(=NOH)NH oder (=NH)NH-COOR* ; R* gleich Schutzgruppe oder polymerer Träger mit Spacer (Festphasensynthese) erfolgt die Kupplung mit dem gegebenenfalls geschützten (P)-A-B-U Baustein (U = Abgangsgruppe) oder eine reduktive Alkylierung mit (P)-A-B -U (U = Aldehyd, Keton) zu (P) -A-B- (D) -E-G-K-L* .After splitting off the protecting group P to H- (D) -EGKL * (L * equals C (= NH) NH, C (= NOH) NH or (= NH) NH-COOR *; R * equals protective group or polymeric carrier with spacer (Solid phase synthesis), the coupling takes place with the optionally protected (P) -ABU building block (U = leaving group) or a reductive alkylation with (P) -AB -U (U = aldehyde, ketone) to (P) -AB- (D) -EGKL *.
Anschließend werden eventuell noch vorhandene Schutzgruppen abgespalten. Ist L* gleich C (=NH)NH-Spacer-polymerer Träger, so werden diese Verbindungen im letzten Schritt vom polymeren Träger abgespalten und somit die Wirksubstanz freigesetzt.Protective groups that may still be present are then split off. If L * is C (= NH) NH-spacer polymeric carrier, these compounds are split off from the polymeric carrier in the last step and the active substance is thus released.
Schema IIScheme II
D KD K
Schema II beschreibt einen alternativen Weg zur Darstellung der Verbindungen I durch eine konvergente Synthese. Die entsprechend geschützten Bausteine P-D-E-OH und H-G-K-L* werden miteinander gekuppelt, das entstandene Zwischenprodukt P-D-E-G-K-L* inScheme II describes an alternative way of preparing the compounds I by a convergent synthesis. The appropriately protected building blocks P-D-E-OH and H-G-K-L * are coupled together, the resulting intermediate product P-D-E-G-K-L * in
P-D-E-G-K-L* (L* gleich C(=NH)NH, C(=N0H)NH oder (=NH)NH-COOR* ; R* gleich Schutzgruppe oder polymerer Träger mit Spacer (Fest- phasensynthese) überführt, die N-terminale Schutzgruppe abgespalten und das entstandene Produkt H-D-E-G-K-L* gemäß Schema I zum Endprodukt umgesetzt.PDEGKL * (L * = C (= NH) NH, C (= NOH) NH or (= NH) NH-COOR *; R * = protective group or polymeric carrier with spacer (solid phase synthesis) transferred, the N-terminal protective group split off and the resulting product HDEGKL * converted into the end product according to Scheme I.
Als N-terminale Schutzgruppen werden Boc , Cbz oder F oc eingesetzt, C-terminale Schutzgruppen sind Methyl, tert.-Butyl und Benzylester. Amidinschutzgruppen sind vorzugsweise BOC, Cbz und davon abgeleitete Gruppen für die Festphasensynthese. Enthalten die Zwischenprodukte olefinische Doppelbindungen so sind Schutz- gruppen, die hydrogenolytisch abgespalten werden, ungeeignet.Boc, Cbz or F oc are used as N-terminal protective groups, C-terminal protective groups are methyl, tert-butyl and benzyl ester. Amidine protecting groups are preferably BOC, Cbz and groups derived therefrom for solid phase synthesis. If the intermediate products contain olefinic double bonds, protective groups which are split off by hydrogenolysis are unsuitable.
Die erforderlichen Kupplungsreaktionen sowie die üblichen Reaktionen der Schutzgruppeneinführung und -abspaltung werden nach Standardbedingungen der Peptidchemie durchgeführt (siehe M. Bodanszky, A. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis", 2. Auflage, Springer Verlag Heidelberg, 1994).The required coupling reactions and the usual reactions of the introduction and deprotection of protective groups are carried out according to standard conditions of peptide chemistry (see M. Bodanszky, A. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis", 2nd edition, Springer Verlag Heidelberg, 1994).
Boc-Schutzgruppen werden mittels Dioxan/HCl oder TFA/DCM, Cbz- Schutzgruppen hydrogenolytisch oder mit HF, Fmoc- Schutzgruppen mit Piperidin abgespalten. Die Verseifung von Esterfunktionen erfolgt mit LiOH in einem alkoholischen Lösungsmittel oder -in Dioxan/Wasser. t-Butylester werden mit TFA oder Dioxan/HCl gespalten.Boc protective groups are removed hydrogenolytically by means of dioxane / HCl or TFA / DCM, Cbz protective groups or with HF, Fmoc protective groups with piperidine. The saponification of ester functions takes place with LiOH in an alcoholic solvent or in dioxane / water. t-Butyl esters are cleaved with TFA or dioxane / HCl.
Die Reaktionen wurden mittels DC kontrolliert, wobei üblicherweise folgende Laufmittel benutzt wurden:The reactions were monitored by TLC, the following solvents usually being used:
A. DCM/MeOH 95:5A. DCM / MeOH 95: 5
B. DCM/MeOH 9:1 C. DCM/MeOH 8:2B. DCM / MeOH 9: 1 C. DCM / MeOH 8: 2
D. DCM/MeOH/50%ig HOAc 40:10:5D. DCM / MeOH / 50% HOAc 40: 10: 5
E. DCM/MeOH/50%ig HOAc 35:15:5E. DCM / MeOH / 50% HOAc 35: 15: 5
Sofern säulenchromatographische Trennungen erwähnt werden, waren dies Trennungen über Kieselgel, für die die oben genannten Lauf- mittel verwendet wurden.If column chromatographic separations are mentioned, these were separations over silica gel, for which the above-mentioned solvents were used.
Reversed phase HPLC Trennungen wurden mit Acetonitril/Wasser und HOAc Puffer durchgeführt .Reversed phase HPLC separations were carried out with acetonitrile / water and HOAc buffer.
Die Ausgangsverbindungen lassen sich nach folgenden Methoden herstellen: A-B Bausteine:The starting compounds can be prepared using the following methods: AB blocks:
Die als A-B Bausteine eingesetzten Verbindungen sind größtenteils kommerziell erhältliche Zuckerderivate. Soweit diese 5 Verbindungen mehrere funktioneile Gruppen aufweisen werden an den notwendigen Stellen Schutzgruppen eingeführt. Gegebenenfalls werden funktionelle Gruppen in Reaktiv- oder Abgangsgruppen umgewandelt (z.B. Cabonsäuren in Aktivester, gemischte Anhydride, etc . ) , um eine entsprechende chemische Verknüpfung mit den 10 anderen Bausteinen zu ermöglichen. Die Aldehyd- oder Ketofunktion der Zuckerderivate kann direkt für die reduktive Alkylierung mit dem endständigen N- Atom des D bzw. E Bausteines eingesetzt werden.Most of the compounds used as A-B building blocks are commercially available sugar derivatives. Insofar as these 5 compounds have several functional groups, protective groups are introduced at the necessary points. If necessary, functional groups are converted into reactive or leaving groups (e.g. cabonic acids into active esters, mixed anhydrides, etc.) in order to enable a corresponding chemical link with the 10 other building blocks. The aldehyde or keto function of the sugar derivatives can be used directly for the reductive alkylation with the terminal N atom of the D or E building block.
15 Die Synthese der D-Bausteine wird wie folgt durchgeführt:15 The synthesis of the D building blocks is carried out as follows:
Die eingesetzten D-Bausteine 4-Aminocyclohexancarbonsäure, 4-Aminobenzoesäure, 4-Aminomethyl-benzoesäure, 4-Aminomethyl- phenylessigsäure und 4-Amino-phenylessigsäure sind käuflich zu 20 erwerben.The D building blocks 4-aminocyclohexane carboxylic acid, 4-aminobenzoic acid, 4-aminomethylbenzoic acid, 4-aminomethylphenylacetic acid and 4-aminophenylacetic acid can be purchased for 20.
Die Synthese der E-Bausteine wurde wie folgt durchgeführt:The synthesis of the E building blocks was carried out as follows:
Die als E-Bausteine eingesetzten Verbindungen Glycin, (D) bzw 25 (L) -Alanin, (D) bzw (L)-Valin, (D) -Phenylalanin, (D) -Cyclohexyl- alanin, (D) -Cycloheptylglycin, D-Diphenylalanin, etc. sind entweder als freie Aminosäuren, als Boc-geschützte Verbindungen oder als entsprechende Methylester käuflich zu erwerben.The compounds glycine, (D) or 25 (L) -alanine, (D) or (L) -valin, (D) -phenylalanine, (D) -cyclohexyl-alanine, (D) -cycloheptylglycine, D-diphenylalanine, etc. are either commercially available as free amino acids, as Boc-protected compounds or as corresponding methyl esters.
30 Die Darstellung von Cycloheptylglycin und Cyclopentylglycin erfolgte durch Umsetzung von Cycloheptanon bzw. Cyclopentanon mit Isonitrilessigsäureethylester entsprechend bekannter Vorschriften (H.-J. Prätorius, J. Flossdorf, M.Kula, Chem. Ber. 1985, 108, 3079 oder U. Schöllkopf und R. Meyer, Liebigs Ann.CHem. 1977,30 Cycloheptylglycine and cyclopentylglycine were prepared by reacting cycloheptanone or cyclopentanone with ethyl isonitrile acetic ester in accordance with known regulations (H.-J. Prätorius, J. Flossdorf, M.Kula, Chem. Ber. 1985, 108, 3079 or U. Schöllkopf and R. Meyer, Liebigs Ann.CHem. 1977,
35 1174) . Die Darstellung von D-Dicyclohexylalanin erfolgte durch Hydrierung entsprechend T.J. Tucker et al J. Med. Chem. 1997, 40, 3687-3693.35 1174). D-dicyclohexylalanine was prepared by hydrogenation in accordance with T.J. Tucker et al J. Med. Chem. 1997, 40, 3687-3693.
Die genannten Aminosäuren wurden nach allgemein bekannten 40 Verfahren je nach Bedarf entweder N oder C-terminal mit einer Schutzgruppe versehen.The amino acids mentioned were provided with a protective group either at the N or at the C-terminal according to generally known processes.
Die Synthese der G-Bausteine wurde wie folgt durchgeführt :The synthesis of the G building blocks was carried out as follows:
45 Die als G-Bausteine eingesetzten Verbindungen (L)-Prölin,45 The compounds (L) -Prölin used as G-building blocks,
(L) -Pipecolinsäure, (L) -4, 4-Difluorprolin, (L) -3-Methylprolin, (L)-5-Methylprolin, (L) -3, 4-Dehydroprolin, (L) -Octahydroindol- 2-carbonsäure, (L) -Thiazolidin-4-carbonsäure und (L) -Azetidin- carbonsäure sind entweder als freie Aminosäuren, als Boc-ge- schützte Verbindungen oder als entsprechende Methylester käuflich zu erwerben(L) -pipecolic acid, (L) -4, 4-difluoroproline, (L) -3-methylproline, (L) -5-methylproline, (L) -3, 4-dehydroproline, (L) -octahydroindole- 2-carboxylic acid, (L) -thiazolidine-4-carboxylic acid and (L) -azetidine-carboxylic acid can be purchased either as free amino acids, as Boc-protected compounds or as corresponding methyl esters
(-) -Thiazolidin-2-carbonsäuremethylester wurde nach R.L. Johnson, E.E. Smissman, J. Med.CHem. 21, 165 (1978) dargestellt.(-) -Thiazolidin-2-carboxylic acid methyl ester was prepared according to R.L. Johnson, E.E. Smissman, J. Med.CHem. 21, 165 (1978).
Die Synthese der K-Bausteine wurde wie folgt durchgeführt:The synthesis of the K building blocks was carried out as follows:
0 p-Cyanobenzylamin 0 p-cyanobenzylamine
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 95/35309 beschrieben, durchgeführt.The representation of this module was carried out as described in WO 95/35309.
3- (6-Cyano) -picolylamin " Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 96/25426 bzw. WO 96/24609 beschrieben, durchgeführt.3- (6-Cyano) -picolylamine "The representation of this building block was carried out as described in WO 96/25426 or WO 96/24609.
5-Aminomethyl-2-cyanothiophen5-aminomethyl-2-cyanothiophene
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 95/23609 beschrieben, durchgeführt.The representation of this module was carried out as described in WO 95/23609.
5-Aminomethyl-3-cyanothiophen5-aminomethyl-3-cyanothiophene
Die Darstellung dieses Bausteins erfolgte ausgehend von 2-Formyl-4-cyano-thiophen analog zu 2-Formyl-5-cyano-thiophenThe representation of this building block was based on 2-formyl-4-cyano-thiophene analogous to 2-formyl-5-cyano-thiophene
25 (WO 95/23609) .25 (WO 95/23609).
2-Aminomethyl~thiazol-4-thiocarboxamid2-aminomethyl ~ thiazol-4-thiocarboxamide
Die Darstellung erfolgte entsprechend G. Videnov, D. Kaier, C. Kempter und G. Jung Angew. Chemie (1996) 108, 1604, wobei die " dort beschriebene N-Boc-geschützte Verbindung mit etherischer Salzsäure in Methylenchlorid entschützt wurde.The presentation was made according to G. Videnov, D. Kaier, C. Kempter and G. Jung Angew. Chemie (1996) 108, 1604, the "N-Boc-protected compound described there being deprotected with ethereal hydrochloric acid in methylene chloride.
5-Aminomethy1-2-cyanofüran5-Aminomethy1-2-cyanofüran
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 96/17860 " beschrieben, durchgeführt.The representation of this module was carried out as described in WO 96/17860 ".
5-Aminomethyl-3-cyanofuran5-Aminomethyl-3-cyanofuran
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 96/17860 beschrieben, durchgeführt.The representation of this module was carried out as described in WO 96/17860.
4040
5-Aminomethyl-3-methylthiophen-2-carbonitril5-aminomethyl-3-methylthiophene-2-carbonitrile
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 99/37668 beschrieben, durchgeführt. 5 5-Aminomethyl-3-chlorthiophen-2-carbonitrilThe representation of this module was carried out as described in WO 99/37668. 5 5-aminomethyl-3-chloro-thiophene-2-carbonitrile
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 99/37668 beschrieben, durchgeführt.The representation of this module was carried out as described in WO 99/37668.
5-Aminomethyl-4-methylthiophen-3-thiocarboxamid5-aminomethyl-4-methylthiophene-3-thiocarboxamide
Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 99/37668 beschrieben, durchgeführt.The representation of this module was carried out as described in WO 99/37668.
5-Aminomethyl-4-chlorthiophen-3-thiocarboxamid Die Darstellung dieses Bausteins wurde wie in WO 99/37668 beschrieben, durchgeführt.5-aminomethyl-4-chlorothiophene-3-thiocarboxamide The preparation of this building block was carried out as described in WO 99/37668.
2-Aminomethyl-4-cyanothiazol :2-aminomethyl-4-cyanothiazole:
a) Boc-2-aminomethyl-thiazol 4-carboxamida) Boc-2-aminomethyl-thiazole 4-carboxamide
Zu einer Lösung von Boc-Glycinthioamid (370 g, 1,94 Mol) in 3,9 Liter Ethanol wurde bei 10°C Brombrenztraubensäureethyl- ester (386 g, 1,98 Mol) zugetropft und dann für 5 h bei 20 bis 25°C gerührt. Anschließend gab man 299 ml einer 25%igen wäßrigen Ammoniaklösung hinzu.To a solution of Boc-glycinthioamide (370 g, 1.94 mol) in 3.9 liters of ethanol was added dropwise ethyl bromofruvate (386 g, 1.98 mol) at 10 ° C. and then for 5 h at 20 to 25 ° C stirred. Then 299 ml of a 25% aqueous ammonia solution were added.
Von 940 ml dieses Gemisches (entspricht 19,9 % des Gesamtvolumens) wurden 380 ml Ethanol abdestilliert, weitere 908 ml einer 25%igen wäßrigen Ammoniaklösung hinzugefügt und 110 h bei 20 bis 25°C gerührt. Man kühlte auf 0DC, filtrierte den Feststoff ab, wusch zweimal mit Wasser und trocknete ihn. Man erhielt 60,1 g des BOC-geschützten Thiazolcarbonsäureamids mit einer HPLC-Reinheit von 97,9 Fl.-%, das entsprach einer Ausbeute über diese zwei Stufen von 60,5 %.380 ml of ethanol were distilled off from 940 ml of this mixture (corresponds to 19.9% of the total volume), a further 908 ml of a 25% strength aqueous ammonia solution were added and the mixture was stirred at 20 to 25 ° C. for 110 h. The mixture was cooled to 0 D C, the solid was filtered off, washed twice with water and dried. 60.1 g of the BOC-protected thiazolecarboxamide with an HPLC purity of 97.9 area% were obtained, which corresponded to a yield of 60.5% over these two stages.
iH- MR (DMS0-d6, in ppm) : 8,16 (s, 1H, Ar-H) , 7,86 (t, breit, 1H,NH), 7,71 und 7,59 (2x s, breit, je 1H,NH2), 4,42 (d, 2H,CH2), 1,41 (s, 9H, tert. Butyl) i H-MR (DMS0-d6, in ppm): 8.16 (s, 1H, Ar-H), 7.86 (t, broad, 1H, NH), 7.71 and 7.59 (2x s, broad, each 1H, NH2), 4.42 (d, 2H, CH2), 1.41 (s, 9H, tert.butyl)
b) 2-Aminomethyl-4-cyano-thiazol hydrochlorid Boc-2-aminomethyl-thiazol 4-carboxamid (75,0 g, 0,29 Mol) wurden in 524 ml Methylenchlorid suspendiert und bei -5 bis 0°C mit Triethylamin (78,9 g, 0,78 Mol) und 79,5 g (0,38 Mol) Trifluoressigsäureanhydrid versetzt. Man rührte 1 h nach, ließ die Mischung auf 20 bis 25°C erwärmen, gab 1190 ml Was- ser hinzu und trennte die Phasen. Zur organischen Phase gab man 160 ml 5 bis 6 N isopropanolische Salzsäure, erwärmte für 3 h zum Sieden, ließ bei 20 bis 25°C über Nacht nachrühren, kühlte für 2,5 h auf -5 bis 0°C ab und filtrierte den Feststoff. Dieser wurde mit Methylenchlorid gewaschen und ge- trocknet. Man erhielt 48,1 g 2-Aminomethyl-4-cyano-thiazol mit einer HPLC-Reinheit von 99,4 Fl.-%, das entspricht einer Ausbeute über diese zwei Stufen von 94,3 %. iH- MR (DMSO-d6, in ppm) : 8,98 (s, breit, 2H,NH2), 8,95 (s, 1H, Ar-H) , 4,50 (s, 2H,CH2)b) 2-aminomethyl-4-cyano-thiazole hydrochloride Boc-2-aminomethyl-thiazole 4-carboxamide (75.0 g, 0.29 mol) were suspended in 524 ml of methylene chloride and treated at -5 to 0 ° C with triethylamine ( 78.9 g, 0.78 mol) and 79.5 g (0.38 mol) of trifluoroacetic anhydride were added. The mixture was stirred for 1 h, the mixture was allowed to warm to 20 to 25 ° C., 1190 ml of water were added and the phases were separated. 160 ml of 5 to 6 N isopropanolic hydrochloric acid were added to the organic phase, the mixture was heated to boiling for 3 h, allowed to stir at 20 to 25 ° C. overnight, cooled to -5 to 0 ° C. for 2.5 h and the solid was filtered off , This was washed with methylene chloride and dried. 48.1 g of 2-aminomethyl-4-cyano-thiazole were obtained with an HPLC purity of 99.4 area%, which corresponds to a yield of 94.3% over these two stages. i H-MR (DMSO-d6, in ppm): 8.98 (s, broad, 2H, NH2), 8.95 (s, 1H, Ar-H), 4.50 (s, 2H, CH2)
5-Aminomethyl-3-amidino-thiophen-Bishydrochlorid5-Aminomethyl-3-amidino-thiophen-bishydrochloride
Die Synthese dieser Verbindung erfolgte ausgehend von 5-Amino- methyl-3-cyanothiophen durch Umsetzung mit (Boc)20 zu 5-t-Butyl- oxycarbonyl-aminomethyl-3-cyanothiophen, Umwandlung der Nitril- funktion in das entsprechende Thioamid durch Addition von Schwefelwasserstoff, Methylierung der Thioamidfunktion mit Methyliodid, Umsetzung mit Ammoniumacetat zum entsprechenden Amidin und anschließende Schutzgruppenabspaltung mit Salzsäure in Isopropanol zum 5-Aminomethyl-3-amidino-thiophen-Bishydro- chlorid.This compound was synthesized starting from 5-aminomethyl-3-cyanothiophene by reaction with (Boc) 2 0 to 5-t-butyl-oxycarbonyl-aminomethyl-3-cyanothiophene, conversion of the nitrile function into the corresponding thioamide by addition of hydrogen sulfide, methylation of the thioamide function with methyl iodide, reaction with ammonium acetate to the corresponding amidine and subsequent deprotection with hydrochloric acid in isopropanol to give 5-aminomethyl-3-amidino-thiophene bishydrochloride.
Bausteine für die Festphasensynthese :Building blocks for solid phase synthesis:
3-Amidino-5- [iV-l- (4 , 4-Dimethyl-2 , 6-dioxocyclohexyliden) ethyl] -minomethylthiophen-hydrochlorid3-Amidino-5- [IV-1-- (4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohexylidene) ethyl] -minomethylthiophene hydrochloride
3-Amidino-5-aminomethylthiophenbishydrochlorid (1,3 g, 5,7 -mmol) wurde in DMF (15 ml) vorgelegt und mit N,N- Diisopropylethylamin (0,884 g, 6,84 mmol) versetzt. Nach 5 min Rühren bei Raumtemperatur wurden 2-Acetyldimedon (1,25 g, 6,84 mmol) und Ortho- ameisensäuretrimethylester (3,02 g, 28,49 mmol) zugegeben. Nach 2,5 h Rühren bei Raumtemperatur wurde das DMF im Hochvakuum entfernt und der Rückstand mit DCM (5 ml) und Petrolether (20 ml) ausgerührt. Das Lösungsmittel wurde vom leicht gelblichen Produkt abdekantiert und der Feststoff im Vakuum bei 40°C getrocknet. Ausbeute: 1,84 g (5,2 mmol, 91 ). iH-NMR (400 MHz, [D6]DMSO, 25°C, TMS) : δ= 0,97 (s, 6H) ; 2,30 (s, 4H) ; 2,60 (s, 4H) ; 4,96 (d, J = 7 Hz, 2H) ; 7,63 (s, 1H) ; 8,60 (s, 1H) ; 9,07 (sbr, 2H) ; 9,37 (sbr, 1H) .3-Amidino-5-aminomethylthiophene bis hydrochloride (1.3 g, 5.7 mmol) was placed in DMF (15 ml) and N, N-diisopropylethylamine (0.884 g, 6.84 mmol) was added. After stirring for 5 min at room temperature, 2-acetyldimedone (1.25 g, 6.84 mmol) and trimethyl orthoformate (3.02 g, 28.49 mmol) were added. After stirring for 2.5 h at room temperature, the DMF was removed under high vacuum and the residue was stirred with DCM (5 ml) and petroleum ether (20 ml). The solvent was decanted from the slightly yellowish product and the solid was dried in vacuo at 40 ° C. Yield: 1.84 g (5.2 mmol, 91). i H-NMR (400 MHz, [D 6 ] DMSO, 25 ° C, TMS): δ = 0.97 (s, 6H); 2.30 (s, 4H); 2.60 (s, 4H); 4.96 (d, J = 7 Hz, 2H); 7.63 (s, 1H); 8.60 (s, 1H); 9.07 (sbr, 2H); 9.37 (sbr, 1H).
Bausteinsynthesen:Block synthesis:
H-G-K-CN:H-G-K-CN:
Die Darstellung des H-G-K-CN Bausteins ist exemplarisch für Prolyl-4-cyanobenzylamid in WO 95/35309, für 3, 4-Dehydroprolyl- 4-cyanobenzylamid in WO 98/06740 und für 3 , 4-Dehydroprolyl-5- (2 -cyano) -thienylmethylamid in WO 98/06741 beschrieben. Analog erfolgte die Darstellung von 3 , 4-Dehydroprolyl-5- (3-cyano) -thienylmethylamid durch Kupplung von Boc-3 , 4-Dehydro- prolin mit 5-Aminomethyl-3-cyano-thiophen hydrochlorid und anschließender Schutzgruppenabspaltung. Die Darstellung von 3 , 4-Dehydroprolyl-[2- (4-cyano) -thiazol- methyl]amid hydrochlorid erfolgte durch Kupplung von Boc-3, 4-Dehydroprolin mit 2-Aminomethyl-4-cyano-thiazol hydrochlorid und anschließender Schutzgruppenabspaltung.The representation of the HGK-CN building block is exemplary for prolyl-4-cyanobenzylamide in WO 95/35309, for 3,4-dehydroprolyl-4-cyanobenzylamide in WO 98/06740 and for 3,4-dehydroprolyl-5- (2-cyano ) -thienylmethylamide described in WO 98/06741. The preparation of 3,4-dehydroprolyl-5- (3-cyano) -thienylmethylamide was carried out analogously by coupling Boc-3,4-dehydro-prolin with 5-aminomethyl-3-cyano-thiophene hydrochloride and subsequent deprotection. The preparation of 3,4-dehydroprolyl- [2- (4-cyano) -thiazole-methyl] amide hydrochloride was carried out by coupling Boc-3,4-dehydroproline with 2-aminomethyl-4-cyano-thiazole hydrochloride and subsequent deprotection.
H-E-G-K-C (=NOH)NH2 :HEGKC (= NOH) NH 2 :
Die Darstellung des H-E-G-K-C (=N0H)NH2 Bausteins ist exemplarisch für H-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-ham)-thiaz beschriebenThe representation of the HEGKC (= N0H) NH 2 building block is described as an example for H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz
a) (Boc) - (D) -cyclohexylalanyl-3 , 4-dehydroprolyl-[2- (4-cyano) - thiazolyl]methylamida) (Boc) - (D) -cyclohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl- [2- (4-cyano) thiazolyl] methylamide
(Boc)-(D)-Cha-0H (21,3 g, 271,4 mmol und H-Pyr-NH-CH2-2- (4-CN)-thiaz-hydrochlorid (21,3 g, 270,7 mmol) wurden in(Boc) - (D) -Cha-0H (21.3 g, 271.4 mmol and H-pyr-NH-CH 2 -2- (4-CN) thiazohydrochloride (21.3 g, 270, 7 mmol) were in
Dichlormethan (750 mL) suspendiert und mit Ethyldiisopropyl- amin (50,84 g, 67,3 ml, 393,4 mmol) versetzt, wobei eine klare, leicht rötliche Lösung entstand. Das Reaktionsgemisch wurde auf ca 10°C abgekühlt und tropfenweise mit einer 50%igen Lösung von Propanphosphonsäureanhydrid in Essig- säureethylester (78,6 mL, 102,3 mmol) versetzt. Nach Rühren über Nacht bei RT wurde im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Wasser aufgenommen, 30 min zur Hydrolyse von überschüssigem Propanphosphonsäureanhydrid gerührt, anschließend die saure Lösung 3x mit Essigester und lx mit Dichlormethan extrahiert, die organischen Phasen mit Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum einrotiert. Beide Rückstände wurden vereinigt, in Dichlormethan gelöst und mit n-Pentan gefällt. Nach Wiederholen dieser Prozedur wurden 33,4g (Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH - 2-(4-CN)-thiaz (Ausbeute 87%) als weißer Feststoff erhalten.Dichloromethane (750 mL) was suspended and ethyldiisopropylamine (50.84 g, 67.3 ml, 393.4 mmol) was added to give a clear, slightly reddish solution. The reaction mixture was cooled to about 10 ° C. and a 50% solution of propanephosphonic anhydride in ethyl acetate (78.6 ml, 102.3 mmol) was added dropwise. After stirring overnight at RT, the mixture was concentrated in vacuo, the residue was taken up in water, stirred for 30 minutes for the hydrolysis of excess propanephosphonic anhydride, then the acidic solution was extracted 3 × with ethyl acetate and 1 × with dichloromethane, the organic phases were washed with water, dried and in vacuo concentrated by rotary evaporation. Both residues were combined, dissolved in dichloromethane and precipitated with n-pentane. After repeating this procedure, 33.4 g of (Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH - 2- (4-CN) -thiaz (yield 87%) was obtained as a white solid.
b) (Boc) - (D) -cyclohexylalanyl-3 , 4-dehydroprolyl- [2- (4-hydrox- amidino) -thiazolyl] methylamidb) (Boc) - (D) -cyclohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl- [2- (4-hydroxamidino) thiazolyl] methylamide
(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-CN)-thiaz (26,3 g, 53,9 mmol) wurden in Methanol (390 ml) gelöst, mit Hydroxylamin-hydro- chlorid (9,37 g, 134,8 mmol) versetzt und zu dieser Suspension langsam unter Kühlung (Wasserbad) Diisopropyl- ethyla in (69,7 g, 91,7 ml, 539,4 mmol) getropft. Nach 3 h Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionslösung im Vakuum einrotiert, in Essigester / Wasser aufgenommen, die wäßrige Phase mit 2N-Salzsäure auf pH 3 eingestellt, 3x mit Essigester und lx mit Dichlormethan extrahiert . Die organischen Phasne wurde mehrfach mit Wasser gewaschen, über Magnesium- sulfat getrocknet und im Vakuum einrotiert. Beide Rückstände wurden vereint und mit n-Pentan ausgerührt, wobei 26,8 g (Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-ham)-thiaz (Ausbeute 95 %) als weißer Feststoff erhalten wurden.(Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-CN) -thiaz (26.3 g, 53.9 mmol) were dissolved in methanol (390 ml) with hydroxylamine hydro - Added chloride (9.37 g, 134.8 mmol) and slowly added dropwise to this suspension with cooling (water bath) diisopropylethyl in (69.7 g, 91.7 ml, 539.4 mmol). After 3 hours of stirring at room temperature, the reaction solution was evaporated in vacuo, taken up in ethyl acetate / water, the aqueous phase was adjusted to pH 3 with 2N hydrochloric acid, extracted 3 times with ethyl acetate and once with dichloromethane. The organic phase was washed several times with water, dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo. Both residues were combined and stirred with n-pentane, 26.8 g (Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz (yield 95%) were obtained as a white solid.
c) (D)-cyclohexylalanyl-3, 4-dehydroprolyl- [2-(4-hydroxamidino) - thiazolyl]methylamidc) (D) -cyclohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl- [2- (4-hydroxamidino) thiazolyl] methylamide
(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-ham)-thiaz (5,0 g, 9,6 mmol) wurden in einem Gemisch aus Isopropanol (50 ml) und Dichlormethan (50 ml) gelöst, mit HC1 in.Dioxan (4M Lösung, 24 ml, 96 mmol) versetzt und 3h bei Raumtemperatur gerührt. Da noch Ausgangsmaterial vorhanden war wurde nochmals HC1 in Dioxan (4M Lösung, 12 ml, 48 mmol) zugesetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum einrotiert, mehrfach mit Ether und Dichlormethan codestilliert um anhaftende Salzsäure zu entfernen. Der(Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz (5.0 g, 9.6 mmol) were added in a mixture of isopropanol (50 ml) and dichloromethane ( 50 ml), HC1 in dioxane (4M solution, 24 ml, 96 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for 3 h. Since starting material was still present, HC1 in dioxane (4M solution, 12 ml, 48 mmol) was again added and the mixture was stirred overnight at room temperature. The reaction mixture was evaporated in vacuo, codistilled several times with ether and dichloromethane in order to remove adhering hydrochloric acid. The
Rückstand wurde in wenig Methanol gelöst und mit viel Ether ausgefällt. Es wurden 4,3 g H- (D) -ςha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) - thiaz Hydrochlorid (Ausbeute 98 %) erhalten.The residue was dissolved in a little methanol and precipitated with a lot of ether. 4.3 g of H- (D) -ςha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz hydrochloride (yield 98%) were obtained.
H-E-G-K-C (=NH)NH :H-E-G-K-C (= NH) NH:
Die Darstellung des H-E-G-K-C (=NH)NH Bausteins ist exemplarisch für H-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am) -thiaz beschrieben.The representation of the HEGKC (= NH) NH building block is described as an example for H- (D) -Cha-pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz.
a) (Boc) - (D) -cyclohexylalanyl-3 , 4-dehydroprolyl- [2- (4-amidino) - thiazolyl] methylamida) (Boc) - (D) -cyclohexylalanyl-3,4-dehydroprolyl- [2- (4-amidino) thiazolyl] methylamide
(Boc )-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-CN) -thiaz (27,0 g, 55,4 mmol) und N-Acetyl-L-cystein (9,9 g, 60,9 mmol) wurden in Methanol (270 ml) gelöst, unter Rückfluß erhitzt und dabei 8h Ammoniak eingeleitet. Da die Reaktion nach DC Kontrolle noch unvoll- standig war wurde nochmals N-Acetyl-L-cystein (2,0 g, 12,0 mmol) zugesetzt und weitere 8h unter Rückfluß und Einleiten von Ammoniak erhitzt. Anschließend wurde die Reaktionsmischung im Vakuum eingeengt, der Rückstand nacheinander in Ether und in Dichlormethan/Ether 9/1 ausgerührt. Das erhaltene Rohprodukt (Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) - thiaz, welches noch N-Acetyl-L-cystein enthielt, wurde ohne weitere Reinigung in die nächste Stufe einegesetzt.(Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-CN) -thiaz (27.0 g, 55.4 mmol) and N-acetyl-L-cysteine (9.9 g , 60.9 mmol) were dissolved in methanol (270 ml), heated under reflux, and ammonia was passed in for 8 hours. Since the reaction was still incomplete after TLC control, N-acetyl-L-cysteine (2.0 g, 12.0 mmol) was added again and the mixture was heated under reflux and with the introduction of ammonia for a further 8 hours. The reaction mixture was then concentrated in vacuo, the residue was stirred successively in ether and in dichloromethane / ether 9/1. The crude product obtained (Boc) - (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) - thiaz, which still contained N-acetyl-L-cysteine, was used in the next step without further purification ,
b) (D) -cyclohexylalanyl-3 , -dehydroprolyl- [2- (4-amidino) -thiazolyl]methylamidb) (D) -cyclohexylalanyl-3, -dehydroprolyl- [2- (4-amidino) thiazolyl] methylamide
(Boc )-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-( 4-am) -thiaz (Rohprodukt s. oben) wurden in einem Gemisch aus Methanol (20 ml) und 'Dichlormethan (400 ml) gelöst, mit HCl in Dioxan (4M Lösung, 205 ml, 822 mmol)versetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Da noch Ausgangsmaterial vorhanden war wurde nochmals HC1 in Dioxan zugesetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum einrotiert, mehrfach mit Ether und Dichlormethan codestilliert um anhaftende Salz- 5 säure zu entfernen. Der Rückstand wurde in Wasser aufgenommen, 20x mit Dichlormethan zur Entfernung von N-Acetyl-L- cystein extrahiert und anschließend die wässrige Phase lyophilisiert . Das Lyophilisat wurde aus Ether ausgerührt, wobei 31,8 g H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz Dihydro- 10 chlorid (Ausbeute über 2 Stufen: 81 %) erhalten wurden.(Boc) - (. Crude, see above) (D) Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz were (ml 20) in a mixture of methanol and 'dichloromethane (400 ml) , HCl in dioxane (4M solution, 205 ml, 822 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature overnight. Since starting material was still present, HC1 in dioxane was added again and the mixture was stirred at room temperature overnight. The reaction mixture was evaporated in vacuo, codistilled several times with ether and dichloromethane in order to remove adhering hydrochloric acid. The residue was taken up in water, extracted 20 × with dichloromethane to remove N-acetyl-L-cysteine and then the aqueous phase was lyophilized. The lyophilisate was extracted from ether, giving 31.8 g of H- (D) -Cha-pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz dihydro-10 chloride (yield over 2 steps: 81%) were.
Die Darstellung des H-E-G-K-C (=NH)NH2 Bausteins H- (D) -Chg-Aze-NH- 4-amb ist in WO 94/29336 Bsp 55 beschrieben. H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2- 5- (3-am) -thioph wurde analog H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiazThe representation of the HEGKC (= NH) NH 2 building block H- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb is described in WO 94/29336 Ex 55. H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 - 5- (3-am) -thioph was analogous to H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz
15 hergestellt, wobei die Amidinbildung ausgehend von der entsprechenden Nitrilvorstufe BOC- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-CN) -thioph analog WO 9806741 Beispiel 1 über die Zwischenstufen B0C-(D)-Chg- Pyr-NH-CH2-5-(3-CSNH2) -thioph und BOC- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-C(=NH)S-CH3) -thioph erfolgte.15 prepared, the amidine formation starting from the corresponding nitrile precursor BOC- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-CN) -thioph analogously to WO 9806741 Example 1 via the intermediates B0C- (D) -Chg - Pyr-NH-CH 2 -5- (3-CSNH 2 ) -thioph and BOC- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-C (= NH) S-CH 3 ) - thioph was done.
2020
Beispiel 1: (D) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3CO0HExample 1: (D) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 CO0H
H-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2-( 4-am) -thiaz Dihydrochlorid (2,0 g, 25 4,19 mmol) wurde in Methanol (30 ml) gelöst, mit D(-) -Arabinose (0,63 g, 4,19 mmol) und Molsieb (4 Ä) versetzt, lh bei Raumtemperatur gerührt und anschließend portionsweise Natriu cyano- borhydrid zugegeben, wobei eine leichte Gasentwicklung auftrat. Nach Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wurde das Molsieb 30 abgesaugt, das Filtrat im Vakuum eingeengt und der Rückstand in Aceton ausgerührt . Das abgesaugte Rohprodukt wurde mittels MPLC (RP 18-Säule, Acetonitril/Wasser/Essigsäure) gereinigt und anschließend lyophilisiert, wobei 840mg (D) -Arabino- (D) -Cha-Pyr- NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3C00H als weißer Feststoff (Ausbeute 35 34 %) erhalten wurden. ESI-MS: M+H+: 539H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz dihydrochloride (2.0 g, 25 4.19 mmol) was dissolved in methanol (30 ml), with D (- ) -Arabinose (0.63 g, 4.19 mmol) and molecular sieve (4 Å) were added, the mixture was stirred at room temperature for 1 hour and then sodium cyanoborohydride was added in portions, with a slight evolution of gas. After stirring overnight at room temperature, the molecular sieve 30 was suction filtered, the filtrate was concentrated in vacuo and the residue was stirred in acetone. The extracted crude product was purified by means of MPLC (RP 18 column, acetonitrile / water / acetic acid) and then lyophilized, 840mg of (D) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am ) -thiaz xCH 3 C00H as a white solid (yield 35 34%) were obtained. ESI-MS: M + H +: 539
Beispiel 2 :Example 2:
(L) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3COOH 40 Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von L- (+) -Arabinose dargestellt. ESI-MS: M+H+: 539(L) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 COOH 40 This compound was prepared analogously to Example 1 starting from L- (+) arabinose. ESI-MS: M + H + : 539
45 Beispiel 3 :45 Example 3:
(D) -Erythro- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3COOH Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von D- (+) -Erythrose dargestellt. ESI-MS: M+H+ : 509(D) -Erythro- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 COOH This compound was prepared analogously to Example 1 starting from D- (+) -rythrose. ESI-MS: M + H + : 509
Beispiel 4:Example 4:
(L) -Erythro- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3COOH Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von L- (+) -Erythrose dargestellt. ESI-MS: M+H+: 509(L) -Erythro- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 COOH This compound was prepared analogously to Example 1 starting from L- (+) -rythrose. ESI-MS: M + H + : 509
Beispiel 5 :Example 5:
(D) -Glycer- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3COOH Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von D- ( + ) -Glycerinaldehyd dargestellt . ESI-MS: M+H+: 479(D) -Glycer- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 COOH This compound was prepared analogously to Example 1 starting from D- (+) -glyceraldehyde. ESI-MS: M + H + : 479
Beispiel 6 : (L) -Glycer- (D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz xCH3COOH Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von L- ( + ) -Glycerinaldehyd dargestellt . ESI-MS: M+H+: 479Example 6: (L) -Glycer- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz xCH 3 COOH This compound was prepared analogously to Example 1 starting from L- (+) -glyceraldehyde , ESI-MS: M + H + : 479
Beispiel 7:Example 7:
(L) -Rhamno- (D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz x HCl(L) -Rhamno- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von L Rhamnose dargestellt. L-Rhamnose (0,82 g, 5 mMol) wurde in Wasser (20 ml) bei Raumtemperatur gelöst und H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH -2- (4-am) -thiaz Dihydrochlorid (2,4 g, 5 mMol) eingerührt. Die klare Lösung wurde nach 20 min viskos. Es erfolgte eine portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyanoborhydrid über 4 h, wobei ein weißer Niederschlag ausfiel, welcher sich durch Zugabe von Ethanol (2 ml) auflöste. Mit 5 ml 1 M HCl wurde auf pH 3 eingestellt und 3 mal mit je 300 ml Aceton gefällt. Abzentrifugieren des Feststoffes, Auflösen in Wasser (100ml) und Lyophilisieren ergab 2,6 g (L) -Rhamno- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz x HCl als weißes Pulver. Beispiel 8 :This compound was prepared analogously to Example 1 starting from L Rhamnose. L-rhamnose (0.82 g, 5 mmol) was dissolved in water (20 ml) at room temperature and H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH -2- (4-am) -thiaz dihydrochloride (2, 4 g, 5 mmol) stirred. The clear solution became viscous after 20 min. An equimolar amount of sodium cyanoborohydride was added in portions over a period of 4 h, during which a white precipitate precipitated out, which was dissolved by adding ethanol (2 ml). The pH was adjusted to 3 with 5 ml of 1 M HCl and precipitated 3 times with 300 ml of acetone each. Centrifuging the solid, dissolving in water (100 ml) and lyophilizing gave 2.6 g of (L) -Rhamno- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-am) -thiaz x HCl as a white powder , Example 8:
(D)-Melibio-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz x HCl(D) -Melibio- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von D-Melibiose dargestellt.This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-melibiosis.
D-Melibiose (1,8 g, 5 mMol) wurde in Wasser (20 ml) bei RT gelöst und H-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz Dihydrochlorid (2,4 g, 5 mMol) eingerührt. Die klare, hellgelbe Lösung wurde nach 20 min viskos . Portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natrium- cyanoborhydrid über 4 h. Es fiel ein weißer Niederschlag aus,D-Melibiose (1.8 g, 5 mmol) was dissolved in water (20 ml) at RT and H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz dihydrochloride (2, 4 g, 5 mmol) stirred. The clear, light yellow solution became viscous after 20 min. Adding an equimolar amount of sodium cyanoborohydride in portions over 4 h. A white precipitate fell out
2 ml Ethanol zugefügt, danach klare Lösung. Mit 5 ml 1 M HCl auf ph 5 eingestellt und 3 mal mit je 300 ml Aceton gefällt. Abzentrifugieren, danach Sediment in 100 ml Wasser aufgenommen und die Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 3,2 g (D) -Melibio- (D) - Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am) -thiaz x HCl.2 ml of ethanol added, then clear solution. Adjusted to pH 5 with 5 ml of 1 M HCl and precipitated 3 times with 300 ml of acetone each. Centrifuge, then sediment is taken up in 100 ml of water and the solution is lyophilized. Yield: 3.2 g (D) -Melibio- (D) - Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-am) -thiaz x HCl.
Beispiel 9 : (D)-Gluco-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5-(3-am) -thioph x HClExample 9: (D) -Gluco- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von D-Glucose dargestellt .This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-glucose.
D-Glucose (1,0 g, 5,6 mMol) wurde in 20 ml Wasser bei Raumtemperatur gelöst und H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph Dihydrochlorid (3,0 g, 6,5 mMol) eingerührt. Die klare Lösung wurde nach 10 min viskos . Es erfolgte eine portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyanoborhydrid über 4 h, wobei ein weißer Niederschlag ausfiel. Nach Abkühlen im Eisbad mit 3 x 5 ml H20 ausgeschüttelt, Sediment in 20 ml H20 aufgenommen und mit ca. 5 ml 0,1 M NaOH auf pH 5 , 0 eingestellt. 1. Fällung mit 300 ml Aceton. 2. Fällung: Sediment in 30 ml H20 aufgenommen, mitD-glucose (1.0 g, 5.6 mmol) was dissolved in 20 ml water at room temperature and H- (D) -Chg-pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph dihydrochloride (3, 0 g, 6.5 mmol) stirred. The clear solution became viscous after 10 min. An equimolar amount of sodium cyanoborohydride was added a little at a time over 4 hours, a white precipitate being formed. After cooling in an ice bath, shaken with 3 × 5 ml of H20, sediment taken up in 20 ml of H20 and adjusted to pH 5.0 with about 5 ml of 0.1 M NaOH. 1. Precipitation with 300 ml acetone. 2nd precipitation: sediment taken up in 30 ml H20, with
300 ml Aceton versetzt, Sediment in H20 gelöst und mit 2 ml IM HCl neutralisiert,; Lösung lyophilisiert. Ausbeute : 1,52 g300 ml acetone added, sediment dissolved in H20 and neutralized with 2 ml IM HCl; Solution lyophilized. Yield: 1.52 g
(D)-Gluco-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph x HCl als weißes Pulver .(D) -Gluco- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph x HCl as a white powder.
Beispiel 10 :Example 10:
Maltohexao-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph x HClMaltohexao- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von Malto- hexaose dargestellt.This compound was prepared analogously to Example 7 starting from maltohexaose.
Maltohexaose (2 g, 2 mMol) wurde in Wasser (20 ml) bei RT gelöst und H-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5-( 3-am) -thioph Dihydrochlorid (0,92 g, 2 mMol) eingerührt. Die klare Lösung wurde nach 10 min viskos; Portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyanobor- hydrid über 4 h; Nach Abkühlen im Eisbad mit dem 8 fachen Volumen an Ethanol ausgefällt. Sediment mit 300 ml Ethanol nochmals aus- gefällt, Sediment in Wasser gelöst; Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 2,6 g Maltohexao-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5-( 3-am) -thioph x HCl.Maltohexaose (2 g, 2 mmol) was dissolved in water (20 ml) at RT and H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph dihydrochloride (0.92 g, 2 mmol) stirred in. The clear solution became viscous after 10 min; Adding an equimolar amount of sodium cyanoborohydride in portions over 4 h; After cooling in an ice bath with 8 times the volume of ethanol precipitated. Sediment again with 300 ml ethanol precipitated, sediment dissolved in water; Solution lyophilized. Yield: 2.6 g of maltohexao- (D) -Chg-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph x HCl.
Beispiel 11: (D) -Cellobio- (D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5-( 3-am) -thioph x HClExample 11: (D) -Cellobio- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von Cellobiose dargestellt.This compound was prepared analogously to Example 7 starting from cellobiose.
Cellobiose (2 g, 6 mMol) wurde in Wasser (20 ml) bei 50°C ein- gerührt und H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph Dihydrochlorid (2,8 g, 6 mMol) dazugegeben. Die trübe Lösung wurde unter portionsweiser Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyano- borhydrid über 4 h viskos. Ca. 1 h bei 50°C nachgerührt. Zugabe von ca. 10 ml 1 M HCl bis pH 3. Danach 2 mal mit 300 ml Aceton gefällt. Nach Abkühlen im Eisbad Sediment in 60 ml Wasser aufgenommen und mit 600 ml Aceton nochmals ausgefällt, Sediment in Wasser gelöst; Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 4,4 g (D) -Cellobio- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph x HCl.Cellobiose (2 g, 6 mmol) was stirred into water (20 ml) at 50 ° C and H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph dihydrochloride (2nd , 8 g, 6 mmol) was added. The cloudy solution became viscous over a period of 4 h with the addition of an equimolar amount of sodium cyanoborohydride in portions. Approximately Stirred at 50 ° C for 1 h. Add approx. 10 ml 1 M HCl to pH 3. Then precipitate twice with 300 ml acetone. After cooling in an ice bath, the sediment is taken up in 60 ml of water and precipitated again with 600 ml of acetone, the sediment is dissolved in water; Solution lyophilized. Yield: 4.4 g (D) -Cellobio- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph x HCl.
Beispiel 12:Example 12:
(D) -Glucuronic- (D) -Chg-Pyr-NH-CH-5- (3-am) -thioph(D) -Glucuronic- (D) -Chg-Pyr-NH-CH-5- (3-am) -thioph
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von D-Glucuronsäure-Na Salz dargestellt. D-Glucuronsäure-Na x H20 (1,4 g, 6 mMol) wurde in Wasser (20 ml) bei RT gelöst und H- (D) -Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph Dihydrochlorid (2,8 g, 6 mMol) bei RT eingerührt. Die klare Lösung wurde nach 10 min leicht gelb. Portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge von 330 mg Natriumcyanoborhydrid über 4 h; Es entstand ein fester, kompakter Niederschlag. Zugabe von 4 ml 0,1 M NaOH, Überstand abdekantiert und Niederschlag in Aceton aufgerührt. Sediment in 40 ml H20 aufgenommen und 3 ml IM HCl bis ca. pH 4 zugeben. Verbindung ging in Lösung. Fällung mit 400 ml Aceton. Danach Sediment in Wasser gelöst; Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 3,1 g (D) -Glucuronic- (D)-Chg-Pyr-NH-CH2-5- (3-am) -thioph.This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-glucuronic acid Na salt. D-glucuronic acid Na x H 2 0 (1.4 g, 6 mmol) was dissolved in water (20 ml) at RT and H- (D) -Chg-pyr-NH-CH 2 -5- (3-am ) -thioph dihydrochloride (2.8 g, 6 mmol) stirred at RT. The clear solution turned slightly yellow after 10 min. Adding an equimolar amount of 330 mg of sodium cyanoborohydride in portions over 4 h; A solid, compact precipitate was formed. Add 4 ml 0.1 M NaOH, decant the supernatant and stir precipitate in acetone. Sediment taken up in 40 ml H20 and add 3 ml IM HCl to approx. PH 4. Connection went into solution. Precipitation with 400 ml acetone. Then sediment dissolved in water; Solution lyophilized. Yield: 3.1 g (D) -Glucuronic- (D) -Chg-Pyr-NH-CH 2 -5- (3-am) -thioph.
Beispiel 13 : (D)-Gluco-(D)-Chg-Aze-NH-4-amb x HClExample 13: (D) -Gluco- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von D-Glucose dargestellt.This compound was prepared analogously to Example 7 starting from D-glucose.
D-Glucose (2,5 g, 14 mMol) wurde in Wasser (40 ml) bei RT gelöst und H-(D)-Chg-Aze-NH-4-amb (WO 94/29336 Bsp 55; 6,8 g; 15,4 mMol) eingerührt. Danach portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyanoborhydrid über 4 h, anschließend über Nacht gerührt. Es entstand eine schmierige, viskose Emulsion. Zugabe von 50 ml Wasser, danach Zugabe von Ethanol bis Lösung klar wurde. Mit ca. 15 ml 0,1 M HCl auf pH 4,0 eingestellt. 1. Fällung mit 600 ml Aceton. 2. Fällung: Sediment in 50 ml Wasser aufgenommen mit 600 ml Aceton versetzt; Sediment erneut in Wasser gelöst; Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 7,8 g (D) -Gluco- (D) -Chg-Aze- NH-4-amb x HCl.D-glucose (2.5 g, 14 mmol) was dissolved in water (40 ml) at RT and H- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb (WO 94/29336 Ex 55; 6.8 g ; 15.4 mmol) stirred. Then portionwise addition of an equimolar amount of sodium cyanoborohydride over 4 h, then stirred overnight. A greasy, viscous emulsion was created. Add 50 ml of water, then add ethanol until the solution became clear. Adjusted to pH 4.0 with approx. 15 ml 0.1 M HCl. 1. Precipitation with 600 ml acetone. 2nd precipitation: sediment taken up in 50 ml of water mixed with 600 ml of acetone; Sediment redissolved in water; Solution lyophilized. Yield: 7.8 g of (D) -gluco- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb x HCl.
Beispiel 14:Example 14:
Malto- (D)-Chg-Aze-NH-4-amb x HClMalto- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb x HCl
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 7 ausgehend von Maltose dargestellt.This compound was prepared analogously to Example 7 starting from maltose.
Maltose x H0 (5 g, 14 mMol) wurde in 40 ml Wasser bei RT gelöst und H-(D)-Chg-Aze-NH-4-amb (6,8 g; 15,4 mMol) eingerührt. Danach portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyanobor- hydrid über 4 h, zunächst klare, viskose Lösung die langsam in eine schmierige, viskose Emulsion überging. Zugabe von 50 ml Wasser und ca. 15 ml 0,1 M HCl bis pH 4,0. 1. Fällung mit 600 ml Aceton. 2. Fällung: Sediment in 50 ml Wasser aufgenommen und mit 600 ml Aceton versetzt; Sediment erneut in Wasser gelöst und die Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 10,1 g Malto- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb x HCl.Maltose x H0 (5 g, 14 mmol) was dissolved in 40 ml water at RT and H- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb (6.8 g; 15.4 mmol) was stirred in. Then portionwise addition of an equimolar amount of sodium cyanoborohydride over 4 h, first clear, viscous solution which slowly changed into a greasy, viscous emulsion. Add 50 ml water and approx. 15 ml 0.1 M HCl to pH 4.0. 1. Precipitation with 600 ml acetone. 2nd precipitation: sediment taken up in 50 ml of water and mixed with 600 ml of acetone; Sediment redissolved in water and the solution lyophilized. Yield: 10.1 g of malto- (D) -Chg-Aze-NH-4-amb x HCl.
Beispiel 15:Example 15:
(L) -Erythro- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz xCH3COOH(L) -Erythro- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz xCH 3 COOH
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend vonThis compound was started analogously to Example 1
L-( + ) -Erythrose und H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz dargestellt .L- (+) -Erythrose and H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz shown.
ESI-MS: M+H+: 525ESI-MS: M + H +: 525
Beispiel 16:Example 16:
(L) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz xCH3COOH(L) -Arabino- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz xCH 3 COOH
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von L-( + ) -Arabinose und H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz dargestellt. ESI-MS: M+H+: 555This compound was prepared analogously to Example 1 starting from L- (+) arabinose and H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz. ESI-MS: M + H + : 555
Beispiel 17: Malto- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiazExample 17: Malto- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz
Diese Verbindung wurde analog Beispiel 1 ausgehend von Maltose und H-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz dargestellt. Maltose x H20 (2,2 g, 6 mMol) wurde in 40 ml Wasser und 60 ml Ethanol bei RT gelöst und H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz (2,8 g, 6,6 mMol) eingerührt. Danach portionsweise Zugabe einer äquimolaren Menge an Natriumcyanoborhydrid über 8 h, stark viskose, klare, bräunliche Lösung. 1. Fällung mit 500 ml Aceton. Sediment in 50 ml Wasser gelöst und mit 0,1 M HCl auf ph 7 , 5 eingestellt, danach mit 500 ml Aceton gefällt. Sediment in 100 ml Wasser gelöst und Lösung lyophilisiert. Ausbeute: 3,6 g Malto- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz .This compound was prepared analogously to Example 1 starting from maltose and H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH2-2- (4-ham) -thiaz. Maltose x H 2 0 (2.2 g, 6 mmol) was dissolved in 40 ml of water and 60 ml of ethanol at RT and H- (D) -Cha-Pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) - thiaz (2.8 g, 6.6 mmol) stirred in. Then portionwise addition of an equimolar amount of sodium cyanoborohydride over 8 h, strong viscous, clear, brownish solution. 1. Precipitation with 500 ml acetone. Sediment dissolved in 50 ml water and adjusted to pH 7.5 with 0.1 M HCl, then precipitated with 500 ml acetone. Sediment dissolved in 100 ml of water and solution lyophilized. Yield: 3.6 g of malto- (D) -Cha-pyr-NH-CH 2 -2- (4-ham) -thiaz.
Für folgende Verbindungen wurde die Thrombin-Zeit gemäß Beispiel A bestimmt :The thrombin time was determined according to Example A for the following compounds:

Claims

Patentansprücheclaims
1. Verbindungen der allgemeinen Formel (I)1. Compounds of the general formula (I)
A-B-D-E-G-K-L (I) .A-B-D-E-G-K-L (I).
wobeiin which
mit RA1 gleichequal to R A1
(CH)kA (CH)IA (CH)mA (CH)nA (CH) k A (CH) IA (CH) m A (CH) n A
CH ICH I
OH RA2 0H I 0H OH RA2 0H I 0H
,0, 0
mit RA2 H, NH2, NH-COCH3 , F, NHCHOwith R A 2 H, NH 2 , NH-COCH 3 , F, NHCHO
RA3 H, CH2OHR A3 H, CH 2 OH
RA4 H, CH3, COOH iA = 1 - 20R A4 H, CH 3 , COOH iA = 1-20
JA = 0, 1, 2 kA = 2, 3 ,YES = 0, 1, 2 k A = 2, 3,
IA = 0, 1 mA = 0, 1, 2 nA = 0, 1, 2IA = 0, 1 m A = 0, 1, 2 n A = 0, 1, 2
wobei bei ±A größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können; B fürwhere ± A is greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different; B for
(RB2-(R B2 -
(HO-(HO
0 — 0 -
(HO-CH)mB RB5(HO-CH) m B R B5
RB3RB3
A-B fürA-B for
oder für einen Neuraminsäurerest oder N-Acetylneuraminsäure- rest, welche über die Carboxylfunktion gebunden sind, or for a neuraminic acid residue or N-acetylneuraminic acid residue, which are bonded via the carboxyl function,
R BI gleich H, CH20H, Cι_4-Alkyl R B I is H, CH 2 0H, Cι_ 4 alkyl
RB2 gleich H, NH2, NH-COCH3 , F, NHCHOR B2 is H, NH 2 , NH-COCH 3 , F, NHCHO
RB3 gleich H, Cι_4-Alkyl, CH2-0-C1_4-Alkyl, COOH, F, NH-COCH3, CONH2 R B3 is H, Cι_ 4 alkyl, CH 2 -0-C 1 _ 4 alkyl, COOH, F, NH-COCH 3 , CONH 2
RB4 gleich H, Cι_4-Alkyl, CH2-0-Cι-4-Alkyl, COOH,R B4 is H, -CC 4 alkyl, CH 2 -0-C 4 alkyl, COOH,
CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kannCHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
RB5 gleich H, Cι_4-Alkyl, C^-O-Cχ-4-Alkyl, COOH B = 0, 1R B5 is H, Cι_ 4 alkyl, C ^ -O-Cχ- 4 alkyl, COOH B = 0.1
IB = 0, 1, 2, 3 dB ≠ 0, für A = Rßl = RB3 = H, --£ = kB = 0, und D eine Bindung) mB = 0, 1, 2, 3, 4 nB = 0, 1, 2, 3 RB6 gleich Cχ-4-alkyl, phenyl, benzyl BB7 gleich H, Cι-4-alkyl, phenyl, benzylIB = 0, 1, 2, 3 dB ≠ 0, for A = R ß l = RB3 = H, - £ = k B = 0, and D is a bond) m B = 0, 1, 2, 3, 4 n B = 0, 1, 2, 3 R B6 is Cχ- 4 alkyl, phenyl, benzyl B B7 is H, C C- 4 alkyl, phenyl, benzyl
D für eine Bindung oder für N RD2 RD3 RD4 D for a bond or for NR D2 R D3 R D4
RD1 R D1
mit RD1 gleich H, Cι_ -Alkyl D2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkylwith R D1 is H, Cι_alkyl D2 is bond or Cι_ 4 alkyl
RD3 gleich R D3 equal
mit ID = 1, 2, 3, 4, 5, 6 und RD5 gleich H, Cι_ -Alkyl, Cl RD6 gleich H, CH3 with ID = 1, 2, 3, 4, 5, 6 and R D5 is H, Cι_ alkyl, Cl R D6 is H, CH 3
wobei an die unter RD3 genannten Ringsysteme ein weiterer aromatischer oder aliphatischer Ring ankondensiert sein kanna further aromatic or aliphatic ring may be fused onto the ring systems mentioned under R D3
R D4 gleich Bindung, Cι-4-Alkyl, CO, S02, -CH2-C0 R D4 is the same bond, -CC 4 alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -C0
E fürE for
RE2 R E2
mit With
kE = 0 , 1 , 2 ;k E = 0, 1, 2;
1= = 0 , 1 , 2 ; mE = o , 1 , 2 , 3 ; nE = 0 , 1 , 2 ;1 = = 0, 1, 2; m E = o, 1, 2, 3; n E = 0, 1, 2;
PE = 0 , 1 , 2 ;P E = 0, 1, 2;
RE1 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl, Heteroaryl, C3_8-Cycloalkyl mit ankondensiertem Phenylring, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι--g-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl, F, Cl, Br tragen können; REl bedeutet weiterhin RE4OCO-CH2- (RE4 gleich H, Cι_ι2-Alkyl, Cι_3-Alkylaryl) ;R E1 means H, Cι_ 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl, heteroaryl, C 3 _ 8 cycloalkyl with a fused phenyl ring, the abovementioned radicals having up to three identical or different substituents from the group Cι - g-alkyl , OH, 0 -C 6 alkyl, F, Cl, Br can wear; R El also means R E4 OCO-CH 2 - (R E4 is H, Cι_ι 2 alkyl, Cι_ 3 alkylaryl);
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl, Heteroaryl, Indolyl) , Tetrahydropyranyl, Tetrahydrothiopyranyl , Diphenylmethyl , Dicyclohexylmethyl, C_8-Cycloalkyl mit ankondensiertem Phenylring, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_6-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl , F, Cl, Br, tragen können, CH(CH3)OH, CH(CF3)2;R E2 means H, Cι_ 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl, heteroaryl, indolyl), tetrahydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, C_ 8 cycloalkyl with fused-on phenyl ring, the same or different residues up to three Substituents of the group -C 6 alkyl, OH, 0 -C 6 alkyl, F, Cl, Br, can carry, CH (CH 3 ) OH, CH (CF 3 ) 2 ;
RE3 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl, Heteroaryl, C3_8-Cycloalkyl mit ankondensiertem Phenylring, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Ci-ß-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl, F, Cl, Br tragen können;R E3 means H, Cι_ 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl, heteroaryl, C 3 _ 8 cycloalkyl having a fused phenyl ring, where the aforementioned radicals up to three identical or different substituents from the group Ci ß alkyl, OH, 0 -C 6 alkyl, F, Cl, Br can wear;
die unter RE1 und RE2 genannten Gruppen können über einethe groups mentioned under R E1 and R E2 can be accessed via a
Bindung miteinander verknüpft sein; auch die unter RE2 und RE3 genannten Gruppen können über eine Bindung miteinander verbunden sein;Bond linked; the groups mentioned under R E2 and R E3 can also be bonded to one another;
RE2 steht weiterhin für C0RE5 (RE5 gleich OH, 0-Ci_6-Alkyl, OCι_3-Alkylaryl) , CONRE6RE7 (mit RE6 bzw. RE7 gleich H, Ci-e-Alkyl, C0_3-Alkylaryl) , NRE6RE7;R E2 furthermore represents C0r E5 (R E5 is OH, 0-CI_ 6 alkyl, OCι_ 3 -alkylaryl), CONR R E6 E7 (R E6 or E7 R is H, Ci-e-alkyl, C 0 _ 3 -alkylaryl), NR E6 R E7 ;
kann auch für D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg; G fürcan also be used for D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg; G for
rch 0, lkyl, , CHCl,rch 0, lkyl,, CHCl,
mit With
mG = 0, 1, 2; nG = 0, 1, 2; p = 1, 2, 3, 4;m G = 0, 1, 2; n G = 0, 1, 2; p = 1, 2, 3, 4;
RG1 H, Cι-C6-Alkyl, Aryl;R G1 H, -CC 6 alkyl, aryl;
RG2 H, Ci-Ce-Alkyl, Aryl;R G2 H, Ci-Ce alkyl, aryl;
RG1 und RG2 können zusammen auch eine -CH=CH-CH=CH-Kette bilden;R G1 and R G2 together can also form a -CH = CH-CH = CH chain;
weiterhin G fürcontinue G for
RG4 R G4
mitWith
0, 1, 2; rG 0, 1, 2; RG3 H, Cι-C6-Alkyl, C3-8-Cycloalkyl, Aryl; RG4 H, Cι-C6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl (insbesondere Phenyl, Naphthyl) ;0, 1, 2; r G 0, 1, 2; R G3 H, -CC 6 alkyl, C 3 - 8 cycloalkyl, aryl; R G4 H, -CC 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl (especially phenyl, naphthyl);
K fürK for
NH-(CH2)nκ-QK mit NH- (CH 2 ) n κ-QK with
nκ = 0, 1, 2, 3;n κ = 0, 1, 2, 3;
Qκ gleich C2_6-Alkyl, wobei bis zu zwei CH2-Gruppen durch 0 oder S ersetzt sein können;Q κ is C 2 _6-alkyl, where up to two CH 2 groups can be replaced by 0 or S;
Qκ gleichQ κ equal
mitWith
RKl gleich H, Cι_3 -Alkyl, OH, 0-Cι_3 -Alkyl, F, Cl, Br;RKl is H, Cι_ 3 alkyl, OH, 0-Cι_ 3 alkyl, F, Cl, Br;
R 2 gleich H, Cι_3 -Alkyl, O-C1-3 -Alkyl, F, Cl, Br;R 2 is H, Cι_3-alkyl, O-C1-3-alkyl, F, Cl, Br;
X gleich 0, S, NH, N-Cι_6-Alkyl; I IX is 0, S, NH, N -CC 6 alkyl; II
Yκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-C1;Y κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I II I
Zκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-C1;Z κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I II I
Uκ gleich =CH- , =C-C1_6-Alkyl, =N- , =C-0-Cι-3-Alkyl;U κ is equal to = CH-, = CC 1 _ 6 -alkyl, = N-, = C-0-Cι- 3 alkyl;
I II I
Vκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-0-Cι_3-Alkyl;V κ equals = CH-, = C-Cι_ 6 alkyl, = N-, = C-0-Cι_ 3 alkyl;
Wκ gleich CH oder N ' wobei im letzterenW κ is CH or N ', in the latter
Fall L keine Guanidingruppe sein darf;Case L must not be a guanidine group;
n* = 0, 1, 2; = 0, 1, 2; = 1, 2;n * = 0, 1, 2; = 0, 1, 2; = 1, 2;
fürFor
mitWith
R I gleich H, OH, 0-Cι_6-Alkyl, 0- (CH2) 0-3-Phenyl, CO-Ci-e-Alkyl, C02-Cι_6-Alkyl, C02-C1_3-Alkylaryl, R I is H, OH, 0 -C 6 alkyl, 0- (CH 2 ) 0 -3 phenyl, CO-Ci-e-alkyl, C0 2 -C 6 alkyl, C 2 -C 1 _ 3 - alkylaryl,
steht, sowie deren Tautomere, Stereoisomere, Salze mit pharma- kologisch verträglichen Säuren oder Basen, sowie deren Prodrugs. stands, and their tautomers, stereoisomers, salts with pharmacologically acceptable acids or bases, and their prodrugs.
Verbindungen der allgemeinen Formel (I)Compounds of the general formula (I)
A-B-D-E-G-K-L (I!A-B-D-E-G-K-L (I!
wobeiin which
A für H, H-(RA1)iAA for H, H- (R A1 ) iA
mit RA1 gleichequal to R A1
mit RA4 H, CH3, COOH iA = 1 ■ - 6with R A4 H, CH 3 , COOH i A = 1 ■ - 6
JA = o , 1 , 2 kA = 2 , 3 nA = o , 1 , 2 wobei bei iA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können;J A = o, 1, 2 k A = 2, 3 nA = o, 1, 2 where, in general, greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different;
fürFor
(RB2-CH)kB O— CH 0— CH HOCH(R B2 -CH) k BO-CH 0-CH HIGH
■■
RB3 A-B für R B3 AB for
RB1 gleich H, CH2OH RB2 gleich H, NH2, NH-COCH3, F RB3 gleich H, CH3, CH2-0-Cι-4-Alkyl, COOH RB4 gleich H, Cι_4-Alkyl, CH2-0-Cι_4-Alkyl, COOH, CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kann R B1 is H, CH 2 OH R B2 is H, NH 2 , NH-COCH 3 , F R B3 is H, CH 3 , CH 2 -0-Cι- 4 -alkyl, COOH R B4 is H, Cι_ 4 - Alkyl, CH 2 -0 -C 4 -alkyl, COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
RB5 gleich H, CH3 , CH2-0-Cι-4-Alkyl, COOH kB = 0, 1RB5 is H, CH 3 , CH 2 -0-C 4 alkyl, COOH kB = 0.1
IB = 0, 1, 2, 3 (2B ≠ 0, für A = RB1 = RB3 = H, mB = B = 0, und D eine Bindung) mB 0, 1, 2, 3 nB 0, 1. 2, 3IB = 0, 1, 2, 3 ( 2 B ≠ 0, for A = R B1 = R B3 = H, m B = B = 0, and D is a bond) mB 0, 1, 2, 3 nB 0, 1 . 2, 3
R B6 gleich Cχ_4~alkyl, phenyl, benzyl BB7 gleich H, Cι_4-alkyl, phenyl, benzyl R B6 is Cχ_ 4 ~ alkyl, phenyl, benzyl B B7 is H, Cι_ 4 alkyl, phenyl, benzyl
für eine Bindung oder für N RD2 RD3 RD4-for a binding or for NR D2 R D3 RD4-
RD1 R D1
mit R°l gleich H , Cχ-4-Alkylwith R ° l being H, Cχ- 4 alkyl
RD2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkyl , RD3 gleich R D2 is the same as bond or Cι_ 4 alkyl, R D3 equal
ι 1 N . j Nι 1 N. j N
X - X r- Ar-X - X r- Ar-
RD4 gleich Bindung, Cι_ -Alkyl, CO, S02, -CH2-COR D4 is the same bond, Cι_-alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO
fürFor
(CH2)kE (CH 2 ) k E
RE1 mit R E1 with
kE = 0, 1, 2;k E = 0, 1, 2;
mE = 0, 1, 2, 3;m E = 0, 1, 2, 3;
RE1 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, wobei die vor- genannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedeneR E1 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, the abovementioned radicals up to three identical or different
Substituenten der Gruppe Cι-6-Alkyl, OH, 0-Cι_6-Alkyl tragen können;Can carry substituents of the group -C 6 alkyl, OH, 0 -C 6 alkyl;
RE2 bedeutet H, Cι-6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Aryl, Heteroaryl, Tetrahydropyranyl , Diphenylmethyl , Dicyclohexylmethyl, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_6-Alkyl, OH, O-Cι-6-Alkyl, F, Cl, Br, tragen können, CH(CF3)2;R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, aryl, heteroaryl, tetrahydropyranyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, the abovementioned radicals having up to three identical or different substituents from the group C 6 alkyl, OH, O - Cι- 6 alkyl, F, Cl, Br, can wear, CH (CF 3 ) 2 ;
R3 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl;R 3 is H, C 6 alkyl, C 3 8 cycloalkyl;
RE2 steht weiterhin für CORE5 (RE5 gleich OH, O-Cι-6-Alkyl, OCι_3-Alkylaryl) , C0NRE6RE7 (mit RE6 bzw. RE7 gleich H, Cι-6-Alkyl, Co-3-Alkylaryl) , NRE6RE7; E kann auch für D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;R E2 also stands for COR E5 (R E5 is OH, O-Cι- 6 alkyl, OCι_ 3 alkylaryl), C0NR E6 R E7 (with R E 6 or R E7 is H, Cι- 6 alkyl, Co - 3 -alkylaryl), NRE6 R E7 ; E can also be used for D-Asp, D-Glu, D-Lys, D-Orn, D-His, D-Dab, D-Dap, D-Arg;
fürFor
' des Rings durch 0, OH, CHOCι_3 -Alkyl 'of the ring through 0, OH, CHOCι_ 3 alkyl
//
mit With
m^ 0, 1, 2; 0, 1;m ^ 0, 1, 2; 0.1;
K fürK for
NH-(CH2)nκ-Qκ mitNH- (CH 2 ) n κ-Q κ with
n- K - 1, 2;n - K - 1, 2;
Qκ gleich RKlQ κ is equal to RKl
XK Xκ zκ — xκXK X κ z κ - x κ
;z γκ zκ γκ-; z γ κ z κ γ κ-
mitWith
RKl gleich H, C1-3 -Alkyl, OH, O-Cχ-5-Alkyl, F, Cl, Br;R K l is H, C1-3 alkyl, OH, O-Cχ-5-alkyl, F, Cl, Br;
R K2 gleich H, Cι-3-Alkyl, 0-Cι-3-Alkyl, F, Cl, Br; R K 2 is H, -C 3 alkyl, 0 -C 3 alkyl, F, Cl, Br;
Xκ gleich O, S, NH, N-Cι_6-Alkyl; I I y gleich =CH-, ^C-Cx-.g-Alkyl, =N- , =C-C1;X κ is O, S, NH, N-Cι_ 6 alkyl; II y equals = CH-, ^ C-Cx-.g-alkyl, = N-, = C-C1;
I ] Zκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N-, =C-C1;I] Z κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N-, = C-C1;
I II I
Uκ gleich =CH-, =C-Cι_6-Alkyl, =N- , =C-0-Cι_3-Alkyl;U κ is equal to = CH-, = C -C 6 alkyl, = N, = C 0 -C 3 alkyl;
I II I
L fürL for
mitWith
RLX gleich H, OH, 0-Cι-6-Alkyl, C02-Cι-.6-Alkyl,R LX is H, OH, 0-Cι- 6 alkyl, C0 2 -Cι-. 6 alkyl,
steht, sowie deren Tautomere, Stereoisomere, Salze mit phar a- kologisch verträglichen Säuren oder Basen, sowie deren Prodrugs. stands, as well as their tautomers, stereoisomers, salts with pharmacologically compatible acids or bases, and their prodrugs.
Verbindungen der allgemeinen Formel (I)Compounds of the general formula (I)
A-B-D-E-G-K-L (I)A-B-D-E-G-K-L (I)
wobeiin which
für H, H-(RA )iA for H, H- (R A ) iA
mit RAi gleichequal to R Ai
it RA4 H, COOH iA = 1 - 6 it R A4 H, COOH i A = 1 - 6
JA = 0, 1 kA = 2, 3 nA = 1, 2J A = 0, 1 k A = 2, 3 n A = 1, 2
wobei bei iA größer 1 die Reste RAi gleich oder verschieden sein können.where in general greater than 1, the radicals R Ai can be the same or different.
B fürB for
( (
(HO-CH)χB •O— CH(HO-CH) χB • O— CH
O— CH (HO-CH)mBO- CH (HO-CH) m B
(HO-CH)mB RB4(HO-CH) m B R B4
RB3 RB3 gleich H, CH3 , COOH R B3 R B3 is H, CH 3 , COOH
RB4 gleich H, CH3, COOH, CHO, wobei im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kannR B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in the latter case intramolecular acetal formation can occur
kB = 0 , 1kB = 0.1
IB = 1 , 2 , 3IB = 1, 2, 3
ItlB = 0 , 1 , 2 , 3 nB = 1 , 2 , 3Itl B = 0, 1, 2, 3 nB = 1, 2, 3
D für eine BindungD for a bond
E fürE for
RE2 R E2
N N
H mitH with
mE = 0, 1;m E = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Phenyl, Diphenyl- methyl, Dicyclohexylmethyl, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_4-Alkyl, OH, 0-CH3 , F, Cl tragen könnenR E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, phenyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl, the abovementioned radicals having up to three identical or different substituents from the group C 4 alkyl, OH, 0-CH 3 , F, Cl can wear
fürFor
des Rings durch ersetzt sein kann;the ring can be replaced by;
mit With
nG = 0, 1;n G = 0.1;
K fürK for
NH-CH2-QK mitNH-CH 2 -Q K with
Qκ gleichQ κ equal
RKlRKL
X ZK XK XX ZK XK X
;zκ γκ z Y γκ-; z κ γ κ z Y γ κ-
mitWith
Rl gleich H, CH3 , OH, 0-CH3, F, Cl;R 1 is H, CH 3 , OH, 0-CH 3 , F, Cl;
Xκ gleich O, S, NH, N-CH3 ;X κ is O, S, NH, N-CH 3 ;
I Yκ gleich =CH-, =C-CH3, =N-;IY κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-;
I Zκ gleich =CH- , =C-CH3 , =N-;IZ κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-;
fürFor
mitWith
R l gleich H, OH, C02-C1_6-Alkyl,R l is H, OH, C0 2 -C 1 _ 6 alkyl,
steht, sowie deren Tautomere, Stereoisomere, Salze mit pharma- kologisch verträglichen Säuren oder Basen, sowie deren Prodrugs. stands, and their tautomers, stereoisomers, salts with pharmacologically acceptable acids or bases, and their prodrugs.
4. Verbindungen der allgemeinen Formel (I)4. Compounds of the general formula (I)
A-B-D-E-G-K-L (I]A-B-D-E-G-K-L (I]
wobeiin which
für H, H-(RAi)iAfor H, H- (R Ai ) iA
mit RAX gleichsame with R AX
00
mit RA4 H, COOH iA = 1 - 6with R A4 H, COOH iA = 1 - 6
JA = 0, 1 kA = 2, 3 nA = 1, 2J A = 0, 1 k A = 2, 3 n A = 1, 2
wobei bei iA größer 1 die Reste RAX gleich oder verschieden sein können.where, in general, greater than 1, the radicals R AX can be the same or different.
B fürB for
O— CH (HO-CH)mBO- CH (HO-CH) m B
(H0-CH)mB RB4(H0-CH) m B R B4
RB3 A-B für R B3 AB for
RB3 gleich H, CH3 , COOHR B3 is H, CH 3 , COOH
RB4 gleich H, CH3 , COOH, CHO, wobei" im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kannRB4 is H, CH 3 , COOH, CHO, where " intramolecular acetal formation can occur in the latter case
B = o, 1B = 0.1
IB = 1, 2, 3 m,B ' = o, 1, 2, 3 B = 1, 2, 3IB = 1, 2, 3 m, B '= o, 1, 2, 3 B = 1, 2, 3
RB6 gleich Cι_4-alkyl, phenyl, benzylR B6 is Cι_ 4 alkyl, phenyl, benzyl
BB7 gleich H, Cι-4-alkyl, phenyl, benzylB B7 is H, -C 4 alkyl, phenyl, benzyl
D fürD for
N RD2 RD3 RD4 NR D2 R D3 R D4
RD1 R D1
mit RD1 gleich H, Cι_ -Alkylwith R D1 is H, Cι-alkyl
RD2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkyl,R D2 is the same as bond or Cι_ 4 alkyl,
RD3 gleich R D3 equal
RD6 RD6 R D6 R D6
RD6 RD6 gleich H, CH3 R D6 R D6 is H, CH 3
RD4 gleich Bindung, C1-4- lkyl, CO, S02, -CH2-CO,R D4 equal bond, C 1 - 4 - lkyl, CO, S0 2, -CH 2 -CO,
E fürE for
RE2 R E2
mit With
mE = 0, 1;m E = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι-6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe Cι_4-Alkyl, OH, 0-CH3, F, Cl tragen könnenR E2 means H, -C 6 -alkyl, C 3 _ 8 -cycloalkyl, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from the group C 4 -alkyl, OH, 0-CH 3 , F, Cl
für == 22,, 33 uunndd 44,, eine CH -Gruppe des Rings durch NH, NCι_3-Alkyl ersetzt sein kann; for == 22 ,, 33 and 44 ,, a CH group of the ring can be replaced by NH, NCι_ 3 alkyl;
//
mitWith
n^ = 0, 1;n ^ = 0.1;
K fürK for
NH-CH2-QK mit RlNH-CH 2 -Q K with rl
Qκ gleich -ό- Q κ equal to - ό -
mit With
Rl gleich H, CH3 , OH, 0-CH3 , F, Cl;R 1 is H, CH 3 , OH, 0-CH 3 , F, Cl;
Xκ gleich 0, S, NH, N-CH3 ;X κ is 0, S, NH, N-CH 3 ;
Yκ gleich =CH-, =C-CH3, =N-;Y κ equals = CH-, = C-CH 3 , = N-;
I Zκ gleich =CH-, =C-CH3, =N-;IZ κ equal to = CH-, = C-CH 3 , = N-;
L fürL for
mitWith
RL gleich H, OH, C02-Cι_6-Alkyl,R L is H, OH, C0 2 -Cι_ 6 alkyl,
steht, sowie deren Tautomere, Stereoisomere, Salze mit pharma- kologisch verträglichen Säuren oder Basen, sowie deren Prodrugs. stands, and their tautomers, stereoisomers, salts with pharmacologically acceptable acids or bases, and their prodrugs.
Verbindungen der allgemeinen Formel (I)Compounds of the general formula (I)
A-B-D-E-G-K-L (I)A-B-D-E-G-K-L (I)
wobeiin which
A für H, H-(RAi) AA for H, H- (R Ai ) A
mit RA1 gleichequal to R A1
mit iA = 1 - 6 dA = o , 1 nA = 1 , 2 with i A = 1 - 6 d A = o, 1 n A = 1, 2
wobei bei iA größer 1 die Reste RAi gleich oder verschieden sein können.where, in general, greater than 1, the radicals R Ai can be the same or different.
B fürB for
CH2 CH 2
(HO-CH)IB(HO-CH) IB
0— CH0— CH
(H0-CH)mB(H0-CH) m B
HH
IB 1, 2, 3 mB 1. 2 D für eine BindungIB 1, 2, 3 m B 1. 2 D for a bond
E fürE for
RE2 R E2
mit With
m£ = 0, 1;m £ = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_8-Cycloalkyl, Phenyl, Diphenyl- methyl, Dicyclohexylmethyl;R E2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _ 8 cycloalkyl, phenyl, diphenylmethyl, dicyclohexylmethyl;
wobei der E Baustein vorzugsweise D-Konfiguration aufweist;wherein the E component preferably has a D configuration;
G fürG for
wobei der G Bautein vorzugsweise L-Konfiguration aufweist : K für the G building block preferably having an L configuration: K for
NH-CH2-QK mitNH-CH 2 -Q K with
fürFor
mitWith
RLi gleich H , OH , C02-Cι_6- Alkyl ,RL i is H, OH, C0 2 -Cι_ 6 - alkyl,
steht, sowie deren Tautomere, Stereoisomere, Salze mit pharma- kologisch verträglichen Säuren oder Basen, sowie deren Prodrugs. stands, and their tautomers, stereoisomers, salts with pharmacologically acceptable acids or bases, and their prodrugs.
6. Verbindungen der allgemeinen Formel (I)6. Compounds of the general formula (I)
A-B-D-E-G-K-L (I)A-B-D-E-G-K-L (I)
wobeiin which
für H, H-(RA )iAfor H, H- (R A ) iA
mit RAi gleichequal to R Ai
mit RA4 H, COOH i = 1 - 6 with R A4 H, COOH i = 1 - 6
3Ά = 0, 1 kA = 2, 3 n = 1, 23 Ά = 0, 1 k A = 2, 3 n = 1, 2
wobei bei iA größer 1 die Reste RA1 gleich oder verschieden sein können.where, in general, greater than 1, the radicals R A1 can be the same or different.
B fürB for
0— CH (HO-CH)mB0 - CH (HO-CH) m B
(H0-CH)mB RB4(H0-CH) m B R B4
RB3 A-B für R B3 AB for
RB3 gleich H, CH3 , COOH B4 gleich H, CH3, COOH, CHO, wobei' im letzteren Fall intramolekulare Acetalbildung auftreten kannR B3 is H, CH 3 , COOH B4 is H, CH 3 , COOH, CHO, in which case intramolecular acetal formation can occur in the latter case
kB = o, 1kB = 0.1
IB = 1 , 2 , 3 mB = o , 1 , 2 , 3 nB = 1. 2 , 3IB = 1, 2, 3 m B = o, 1, 2, 3 nB = 1. 2, 3
RB6 gleich Cι-4-alkyl, phenyl, benzylR B6 is C 4 alkyl, phenyl, benzyl
BB7 gleich H, Cι_4-alkyl, phenyl, benzylB B7 is H, Cι_4-alkyl, phenyl, benzyl
für N RD RD3 RD4 -for N RD RD3 R D4 -
RD1 R D1
mit RDi gleich Hwith R Di equal to H
R D2 gleich Bindung oder Cι_4-Alkyl, R D2 is the same as bond or Cι_ 4 alkyl,
RD3 gleich R D3 equal
RD4 gleich Bindung, Cι_4-Alkyl, CO, S02, -CH2-CO, E fürR D4 is the same as bond, Cι_ 4 alkyl, CO, S0 2 , -CH 2 -CO, E for
RE2 R E2
mit With
mE = 0, 1;m E = 0.1;
RE2 bedeutet H, Cι_6-Alkyl, C3_s-Cycloalkyl, wobei die vorgenannten Reste bis zu drei gleiche oder verschiedene Substituenten der Gruppe F, Cl tragen könnenRE2 means H, -C 6 alkyl, C 3 _s-cycloalkyl, where the abovementioned radicals can carry up to three identical or different substituents from group F, Cl
fürFor
mitWith
n^ = 0;n ^ = 0;
K fürK for
NH-CH2-QK mitNH-CH 2 -Q K with
QK gleich mitQK the same With
Xκ gleich S;X κ is S;
Yκ • gleich =CH-, =N-;Y κ • equal to = CH-, = N-;
Zκ gleich =CH- , =N- ;Z κ equal to = CH-, = N-;
L fürL for
mitWith
RLX gleich H, OH,R LX is H, OH,
steht, sowie deren Tautomere, Stereoisomere, Salze mit pharma- kologisch verträglichen Säuren oder Basen, sowie deren Prodrugs.stands, and their tautomers, stereoisomers, salts with pharmacologically acceptable acids or bases, and their prodrugs.
7. Arzneimittel, enthaltend mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6.7. Medicament containing at least one compound according to one of claims 1 to 6.
8. Verwendung von einer oder mehreren Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung oder Prophylaxe von Erkrankungen, die durch Inhibierung von einer oder mehreren Serinproteasen gelindert werden kann.8. Use of one or more compounds according to one of claims 1 to 6 for the manufacture of medicaments for the treatment or prophylaxis of diseases which can be alleviated by inhibiting one or more serine proteases.
9. Verwendung nach Anspruch 8, wobei für Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder 5 die Serinprotease Thrombin ist .9. Use according to claim 8, wherein for compounds according to one of claims 1 to 3 or 5, the serine protease is thrombin.
10. Verwendung nach Anspruch 8, wobei für Verbindungen nach einem der Ansprüche 1, 2, 4 oder 6 die Serinprotease Cls oder Clr ist. 10. Use according to claim 8, wherein for compounds according to one of claims 1, 2, 4 or 6, the serine protease is Cls or Clr.
EP01969785A 2000-10-06 2001-09-27 Low molecular serine protease inhibitors comprising polyhydroxy-alkyl and polyhydroxy-cycloalkyl radicals Ceased EP1370573A2 (en)

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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10259382A1 (en) * 2002-12-18 2004-07-01 Abbott Gmbh & Co. Kg 3-Substituted 3,4-dihydro-thieno [2,3-d] pyrimidin-4-one derivatives, their preparation and use
CN113348000A (en) * 2018-09-17 2021-09-03 德克萨斯大学体系董事会 Compositions and methods for treating bone injury

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4115468A1 (en) * 1991-05-11 1992-11-12 Behringwerke Ag AMIDINOPHENYLALANINE DERIVATIVES, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF, THE USE THESE AND THE MEANS THEREOF CONTAINING ANTICOAGULANTS
DE4206858A1 (en) * 1992-03-05 1993-09-09 Behringwerke Ag GLYCOPEPTIDE DERIVATIVES, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND PHARMACEUTICAL AGENTS CONTAINING THESE COMPOUNDS
SE9301916D0 (en) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra NEW PEPTIDES DERIVATIVES
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
DE4421052A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag New thrombin inhibitors, their production and use
DE4443390A1 (en) * 1994-12-06 1996-06-13 Basf Ag New dipeptidic p-amidinobenzylamides with N-terminal sulfonyl or aminosulfonyl residues
HUP9800634A3 (en) * 1995-02-10 2000-04-28 Abbott Gmbh & Co Kg P-amidino-benzylamide derivatives as thrombin inhibitors, intermediates and use thereof
KR100388185B1 (en) * 1995-02-17 2003-11-28 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 New dipeptide amidines as thrombin inhibitors
AU725483B2 (en) * 1995-07-26 2000-10-12 Mitsubishi Chemical Corporation Penicillaminamide derivatives
DE19632772A1 (en) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag New benzamidines
DE19632773A1 (en) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag New thrombin inhibitors
ATE405580T1 (en) * 1998-06-17 2008-09-15 Organon Nv ANTITHRBOTIC COMPOUNDS
KR20000047461A (en) * 1998-12-29 2000-07-25 성재갑 Thrombin inhibitors

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
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