EA031399B1

EA031399B1 - Изготовление и использование пероральных фармацевтических композиций на основе митохондриально-адресованных антиоксидантов

Info

Publication number: EA031399B1
Application number: EA201301321A
Authority: EA
Inventors: Максим Владимирович СКУЛАЧЕВ; Владимир Петрович СКУЛАЧЕВ; Андрей Александрович ЗАМЯТИН; Евгений Степанович ЕФРЕМОВ; Вадим Неронович ТАШЛИЦКИЙ; Роман Алексеевич ЗИНОВКИН; Максим Викторович Егоров; Лоуренс Т. Фридхофф; Ольга Юрьевна Плетюшкина; Александр Александрович Андреев-Андриевский; Татьяна Витальевна Зиневич
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Митотех"
Priority date: 2011-06-03
Filing date: 2012-06-04
Publication date: 2018-12-28
Also published as: JP6448366B2; JP6461276B2; BR112013030605A2; US20160038603A1; EP2714024A1; EA201301321A1; CN103764132A; EP2714024B1; WO2012167236A1; US20150025043A1; US9572890B2; CA2837437A1; JP2018035182A; ES2704064T3; JP2014515407A; AU2012261854B2; US9192676B2; CN103764132B; EP2714024A4; CA2837437C

Abstract

Представлены стабильные жидкие и твердые составы окисленных и восстановленных митохондриально-адресованных антиоксидантов (МАА), а также методы их получения и использования.

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной патентной заявке в США, серийный номер 61/492940, озаглавленной Oral Formulations of Mitochondrially-Targeted Antioxidants and Their Medical Use, поданной 3 июня 2011 г. Вышеупомянутая заявка полностью включена в данный документ посредством ссылки.

Область изобретения

Это изобретение относится к области клеточной биологии, фармакологии и медицины, в частности для лечения воспалительных заболеваний, диабета, септического шока, ишемической болезни сердца, а также для заживления ран.

Предшествующий уровень техники

Перспективные терапевтические свойства митохондриально-адресованных антиоксидантов (МАА) были описаны ранее (см., например, US 2008176929; Скулачев и др. (2009), Biochim. Biophys. Acta, 1787:437-61). Проведенные эксперименты, в которых были обнаружены эти свойства, осуществлялись с использованием свежеприготовленных растворов МАА, при разведении исходных спиртовых растворов, температура хранения которых составляла -80°C, незадолго до введения препарата животным. Такой метод приготовления и введения не выглядит реалистичным и не подходит для подготовки фармацевтических препаратов, поскольку делает очень неудобным, если не вовсе невозможным, промышленное производство, транспортировку и использование пациентами. Попытки разработать фармацевтическую композицию (для перорального введения или инъекции) с приемлемой стабильностью показали, что МАА в большинстве видов оральных или инъекционных композиций не являются стабильными. Стабильная фармацевтическая композиция, содержащая МАА, обладающая приемлемой стабильностью, до сих пор не была описана. Соответственно, по-прежнему необходимы улучшенные жидкие фармацевтические композиции с достаточной стабильностью.

Краткое описание изобретения

Изобретение описывает стабилизированные жидкие и твердые фармацевтические композиции, содержащие МАА, подходящие для перорального, назального, внутривенного и инъекционного введения, а также способы получения таких композиций. Изобретение также относится к способам лечения и профилактики заболеваний и состояний, связанных с митохондриями, с использованием таких фармацевтических композиций.

Аспектом изобретения является стабилизированная фармацевтическая композиция, содержащая окисленную и/или восстановленную форму соединения с формулой I ^А1А^В где A является антиоксидантом с формулой II (1>

(П) и/или восстановленной формой, где m является целым числом от 1 до 3;

Y выбран независимо из группы соединений, состоящей из низшей алкильной или низшей алкоксильной группы, или двух соседних групп Y, вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образующие структуру формулы III о

о (01) и/или в восстановленной форме, где

R1 и R2 могут быть одинаковыми или различными и представляют собой, каждый независимо, низший алкильный или низший алкоксильный радикал;

L представляет собой связующую группу, включающую: а) прямую или разветвленную углеводородную цепь, незамещенную или замещенную одной или несколькими двойными или тройными связями, или простой эфирной или сложноэфирной связью, или C-S, или S-S, или пептидной связью; и которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, предпочтительно выбранными из алкильной, алкоксильной, галогеновой групп, кетогрупп, аминогрупп; или б) природную изопреновую цепь;

N представляет собой целое число от 1 до 20;

B представляет собой направляющую группу и включает: а) ион Скулачева Sk (Sk⁺ Z^-), где Sk явля

- 1 031399 ется липофильным катионом или липофильным металлопорфирином, a Z представляет собой фармацевтически приемлемый анион; или б) амфифильный цвиттер-ион, при условии, что в веществе, имеющем формулу I, A не является убихиноном (например, 2-метил-4,5-диметокси-3,6-диоксо-1,4-циклогексадиеном), токоферолом или миметиком супероксиддисмутазы или эбселеном; в то время как L является двухвалентным децильным, пентильным или пропильным радикалом, а B является катионом трифенилфосфония.

Как частный случай осуществления, препарат может быть восстановленным или окисленным. В некоторых вариантах осуществлениях изобретения препарат может быть в жидкой форме, а в других вариантах в твердой форме.

В некоторых осуществлениях изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит соединение, имеющее формулу I, в 10-100% растворе глицерина, в 10-100% растворе гликоля (например, в 1,2пропиленгликоле), или в 1-100% растворе абсолютного этанола. В одном конкретном осуществлении изобретения фармацевтическая композиция содержит соединение формулы I в примерно 50% растворе 1,2-пропиленгликоля.

Изобретение также обеспечивает стабилизированные твердые фармацевтические композиции, содержащие соединение, имеющее формулу I в окисленной или восстановленной форме, при условии, что в веществе, имеющем формулу I, A не является убихиноном (например, 2-метил 1-4,5-диметокси-3,6диоксо-1,4-циклогексадиеном, токоферолом или миметиком супероксиддисмутазы или эбселеном; в то время как L является двухвалентным децильным, пентильным или пропильным радикалом, а B является катионом трифенилфосфония

В одном из осуществлений изобретения фармацевтическая композиция включает от 1 до 200 молярных эквивалентов антиоксидантного агента, который восстанавливает окисленную форму соединения, имеющего формулу I, а также содержит фармацевтически приемлемый носитель.

В некоторых осуществлениях изобретения антиоксидантным агентом является аскорбиновая кислота.

В некоторых осуществлениях изобретения фармацевтически приемлемый носитель представлен сорбитом, глюкозой и/или стеаратом магния.

В некоторых осуществлениях изобретения фармацевтическая композиция содержит SkQ1 или SkQ1H₂. В других вариантах препарат представляет собой SkQR1 или SkQR1H₂. Еще в других осуществлениях соединение представляет собой SkQ3 или SkQ3H₂. А также в некоторых осуществлениях используется соединение SkQRB или SkQRBH₂. Вдобавок, в некоторых осуществлениях соединение представляет собой SkQB1 или SkQB1H₂. Еще в одном осуществлении соединение представляет собой SkQBP1 или SkQBP1H₂.

В других аспектах изобретение относится к способам лечения и профилактики диабета I и II типа, воспаления, септического шока, артрита и ишемической болезни сердца, а также к методам, способствующим заживлению ран. В этих методах терапевтически эффективное количество препарата, содержащего стабилизированное вещество с формулы I в жидкой или твердой форме, вводят пациенту, при условии, что в соединении с формулой I, A не является убихиноном (например, 2-метил 1-4,5-диметокси-3,6диоксо-1,4-циклогексадиеном, токоферолом или миметиком супероксиддисмутазы или эбселеном; в то время как L является двухвалентным децильным, пентильным или пропильным радикалом, а B является катионом трифенилфосфония.

В некоторых осуществлениях изобретения фармацевтическая композиция содержит глицерин, гликоль, и/или этанол. В некоторых осуществлениях изобретения фармацевтическая композиция содержит SkQ1, SkQ1H₂, SkQR1, SkQR1H₂, SkQ3, SkQ3H₂, SkQBP1, SkQBP1H₂, SkQRB или SkQRBH₂

В некоторых осуществлениях изобретения жидкая фармацевтическая композиция вводится перорально или в виде инъекций. В других осуществлениях изобретения твердая фармацевтическая композиция вводится перорально, анально или вагинально. В некоторых вариантах изобретения композиция является твердой и содержит аскорбиновую кислоту. В иных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция также содержит фармацевтически приемлемый носитель.

В некоторых осуществлениях изобретения для лечения диабета I или II типа используют фармацевтическую композицию, содержащую SkQ1 или SkQ1H₂ в 20% глицерине.

В некоторых осуществлениях изобретения для лечения артрита используют фармацевтическую композицию, содержащую SkQ1 или SkQ1H₂ в 20% глицерине. В других вариантах изобретения артрит лечат композицией, содержащей SkQ1 и аскорбиновую кислоту.

Краткое описание фигур

Вышеуказанные и иные объекты настоящего изобретения, их различные признаки, а также само изобретение могут быть лучше поняты из нижеследующего описания, при чтении совместно с прилагаемыми рисунками.

Фиг. 1 представляет собой графическое изображение влияния SkQ1 на уровень глюкозы в крови животных с экспериментальной моделью диабета (аллоксановая модель диабета на мышах);

фиг. 2 - графическое изображение влияния SkQ1 на повреждения печени диабетических мышей линии db/db;

- 2 031399 фиг. 3 а - графическое изображение влияния SkQ1 на эпителизацию диабетических ран;

фиг. 3б - графическое изображение влияния SkQ1 на количество нейтрофилов в диабетических ранах;

фиг. 3в - графическое изображение влияния SkQ1 на плотность сосудов в диабетических ранах;

фиг. 4 - графическое изображение влияния SkQ1 на выживаемость мышей, подвергшихся септическому шоку;

фиг. 5 - графическое изображение, показывающую противовоспалительное действие SkQ1 при коллаген-индуцированном артрите у крыс;

фиг. 6 - графическое изображение, показывающее противовоспалительное действие SkQ1 и SkQR1, следствием которого является защита эндотелиальных клеток от гибели, вызванной провоспалительным цитокином фактором некроза опухоли (ФНО);

фиг. 7а - графическое изображение, показывающее способность SkQ1 ингибировать воспаление in vitro за счет снижения экспрессии провоспалительных цитокинов;

фиг. 7б - графическое изображение, показывающее способность SkQ1 ингибировать воспаление in vivo в мышах за счет снижения уровня экспрессии провоспалительных цитокинов, измеренной для матричной РНК (мРНК) ICAM-1.

Описание изобретения

По всему тексту описания изобретения имеются ссылки на различные документы. Каждый документ, на который ссылаются здесь (включая все патенты, патентные заявки, научные публикации, технические характеристики, инструкции изготовителя и т.д.), выше- или нижеупомянутые, представлены в этом изобретении в полном объеме в качестве ссылки.

Перед ознакомлением с приведенным ниже подробным описанием изобретения следует принять во внимание, что изобретение не ограничивается конкретными способами, методами и реагентами, описанными здесь, поскольку они могут быть изменены. Кроме того, следует понимать, что в настоящем изобретении терминология используется только для описания конкретных вариантов осуществления и не ограничивается рамками настоящего изобретения, которое будет ограничено только прилагаемой формулой изобретения. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют те же самые значения, что используются специалистам в данной области.

Неожиданно было обнаружено, что многие эффективные МАА недостаточно стабильны в обычно используемых жидких и твердых фармацевтических композициях, пригодных для их введения путем инъекции, либо перорально, внутривенно, интраназально, для местного или энтерального введения. Этот факт ограничивает клиническое применение лекарственных средств на основе МАА в качестве активных соединений.

I. Стабилизированные препараты.

Изобретение описывает стабильные жидкие фармацевтические композиции на базе МАА, применяемые в клинической практике. Используемый МАА представляет собой соединение формулы I в окисленной и/или восстановленной форме

где A является антиоксидантом, имеющим формулу II

и/или восстановленной формой, где m является целым числом от 1 до 3;

Y независимо выбран из группы, состоящей из низшего алкильного, низшего алкоксильного радикалов или двух смежных групп Y, вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуя следующую структуру, имеющую формулу III

и/или восстановленной формой, где

R1 и R2 могут быть как идентичны, так и различны, и представлять собой, каждый независимо, низший алкильный или низший алкоксильный радикал;

L представляет собой связующую группу, включающую: а) прямую или разветвленную углеводо

- 3 031399 родную цепь, незамещенную или замещенную одной или несколькими двойными или тройными связями, или простой эфирной или сложноэфирной связью, или C-S, или S-S, или пептидной связью; и которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, предпочтительно выбранными из алкильной, алкоксильной, галогеновой групп, кетогрупп, аминогрупп; или б) природную изопреновую цепь;

N представляет собой целое число от 1 до 20; и

B представляет собой направляющую группу, и включает: а) ион Скулачева Sk (Sk⁺ Z^-), где Sk является липофильным катионом или липофильным металлопорфирином, a Z представляет собой фармацевтически приемлемый анион; или б) амфифильный цвиттер-ион, при условии, что в веществе, имеющем формулу I, A не является убихиноном (например, 2-метил-4,5-диметокси-3,6-диоксо-1,4-циклогексадиеном), токоферолом или миметиком супероксиддисмутазы или эбселеном; в то время как L является двухвалентным децильным, пентильным или пропильным радикалом, а B является катионом трифенилфосфония.

Конкретные используемые МАА включают SkQ1 и SkQR1, но ими не ограничиваются

SkQI и его восстановленная (хинольная) форма SkQ1H₂

SkQR1 о

н

SUQRI и его восстановленная (хинольная) форма SkQR1H₂о-н

и их восстановленные (хинольные) формы SkQ1H₂ и SkQR1H₂ соответственно. Эти МАА были описаны в PCT/RU 2006/000394.

Другие используемые варианты МАА включают, но не ограничиваются SkQ3

SkQ3 а также его восстановленной (хинольной) формой SkQ3H₂

- 4 031399

SkQRB

SkQB1

и его восстановленной (хинольной) формой SkQRBH₂но

и его восстановленной (хинольной) формой, SkQB1H₂

SkQBP1

о

SkQBPJ и его восстановленной (хинольной) формой SkQBP1H₂

	он	н^с·^⁰^	сс	λ
Н₃С^				¹ X ri	\|[^Х°''^СН1
н₃с^х	ОН		А

Эти МАА предназначены для перорального введения в виде жидких растворов и в виде твердых ле

- 5 031399 карственных форм.

Жидкие растворы также могут быть использованы для аэрозольного введения, доставки через инъекции, для внутривенного, интраназального, местного или энтерального введения.

Такие стабильные жидкие фармацевтические композиции включают один или более растворителей или растворимых компонентов, в которые введены МАА. Используемые растворители включают глицерин, этанол, пропиленгликоль и аналогичные соединения. Пример используемой рецептуры стабильной фармацевтической композиции включает, не менее 10% 1,2-пропиленгликоля, не менее 1%, или не менее 10% этанола, не менее 10% глицерина или смеси данных веществ, она также может включать воду, глицерин, этанол и/или 1,2-пропиленгликоль, для доведения объема. Вот варианты стабилизирующих растворов для 1 нМ до 1 мМ SkQ1, SkQ1H₂, SkQR1, SkQR1H₂ SkQ3, SkQ3H₂, SkQRB, SkQRBH₂, SkQB1, SkQB1H₂, SkQBP1 и/или SkQBP1H₂, содержащие от 10 до 50%, от 50 до 100%, от 10 до 20%, от 20 до 30%, от 30 до 40%, от 40 до 50%, от 50 до 60%, от 60 до 70%, от 70 до 80%, от 80 до 90%, от 10 до 100%, 20 до 80% и от 90 до 100% 1,2-пропиленгликоля, глицерина или этанола. Другие используемые концентрации подобных растворителей включают 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 и 95%. Другие фармацевтически приемлемые носители также могут быть компонентами подобных композиций.

Поскольку МАА не стабильны при длительном хранении, были протестированы различные соединения, чтобы определить их способность стабилизировать в сухом виде SkQ1 и SkQR1 как репрезентативных представителей МАА.

Бета-циклодекстрин, гуммиарабик, клетчатка, и хлорид натрия не обеспечивали подходящего уровня стабильности (скорость разложения составила от 0,8 до 8,1%/день).

Жидкие растворители были также протестированы на их способность стабилизировать репрезентативные представители МАА SkQ1 и SkQR1. Были протестированы водные растворы глицерина (от 10 до 100%), 50% лактулозы и 1,2-пропиленгликоля (от 10 до 100%, при 60°C). Некоторые репрезентативные результаты приведены ниже (табл. 1).

Таблица 1

МАА	Концентрация, mkM	Стабилизирующий растворитель	Скорость распада, процентов в день
SkQl	400	50% лактулоза	9,01
SkQl	400	10% 1,2-пропиленгликоль	0,47
SkQl	400	50% 1,2-пропиленгликоль	0,06
SkQl	400	100% 1,2-пропиленгликоль	0,18
SkQl	400	10% глицерин	0,61
SkQl	400	20% глицерин	0,51
SkQl	400	30% глицерин	0,53
SkQl	400	40% глицерин	0,91
SkQl	400	50% глицерин	1,54
SkQl	400	60% глицерин	1,92
SkQl	400	70% глицерин	2,4
SkQl	400	80% глицерин	3,2
SkQl	400	90% глицерин	4,18
SkQRB	200	50% глицерин	0,4
SkQRl	140	50% глицерин	0,7
SkQBPl	400	50% глицерин	0,08
SkQRl	100	10% 1,2-пропиленгликоль	6,19

SkQRl	100	20% 1,2-пропиленгликоль	0,34
SkQRl	100	30% 1,2-пропиленгликоль	0,32
SkQRl	100	40% 1,2-пропиленгликоль	0,06
SkQRl	100	50% 1,2-пропиленгликоль	<0,01
SkQRl	100	60% 1,2-пропиленгликоль	<0,01
SkQRl	100	70% 1,2-пропиленгликоль	0,05
SkQRl	100	80% 1,2-пропиленгликоль	0,23
SkQRl	100	90% 1,2-пропиленгликоль	0,30
SkQRl	100	100% 1,2-пропиленгликоль	0,23

Эти результаты показывают высокую стабильность МАА в фармацевтической композиции для введения в виде раствора в глицерине (от примерно 10% до примерно 100% глицерина) и в примерно 50% растворе 1,2-пропиленгликоля.

Кроме того, стабильность SkQ1 и SkQR1 значительно увеличивался при хранении в темных пластиковых или стеклянных флаконах, что указывает на то, что эти соединения являются светочувствительными. Соответственно, одним из путей дальнейшего улучшения или повышения стабильность жидких композиций SkQ во время хранения и транспортировки, является их защита от света.

- 6 031399

Когда соединения SkQ, имеющие формулу I, в соответствии с данным изобретением, находятся в твердой форме, они могут быть стабилизированы с помощью антиоксидантного агента. В качестве такого агента может использоваться аскорбиновая кислота. Используемое количество аскорбиновой кислоты находится в диапазоне от примерно 1 до 200 молярных эквивалентов. Используемый здесь термин молярный эквивалент относится к количеству растворенных частиц, или означает такое количество, которое реагирует с чем-либо, или образует один моль H+ в кислотно-щелочной реакции, или которое реагирует или образует один моль электронов в окислительно-восстановительной реакции. Другие компоненты, используемые в вариантах стабилизированных фармацевтических композиций с МАА, приведены в табл. 2. Такие препараты могут также содержать фармацевтически приемлемые носители, такие как сорбит, глюкоза и стеарат магния, но не ограничиваются именно этими веществами.

Другой подход к стабилизации соединений SkQ в фармацевтических композициях заключается в использовании его восстановленной (хинольной) формы. Например, восстановленная форма SkQ1 является хинолом SkQ1H₂

SkQ1H₂(хинольная форма), где Z^- является фармацевтически приемлемым анионом, таким как бромид, хлорид или аскорбат, но не ограничивается вышеуказанными. В сухой или растворимой фармацевтической композиции SkQ1H₂может быть стабилизирован и защищен от окисления с помощью восстановителя, включающего аскорбат, но не ограничивающегося им.

Еще одним способом, способствующим увеличению стабильности, является помещение МАА, в восстановленной или окисленной форме, в мягкую желатиновую капсулу, которая представляют собой капсулу с жидким наполнением. Использование МАА в гелевых капсулах обеспечивает хорошую биодоступность препарата, так как капсула растворяется в смешивающихся с водой масляных жидких носителях, таких как моно- и диглицериды каприновой/каприловой кислоты (Capmul MCM), Miglyol 8122 (триглицериды со средней длиной цепи). Когда капсула растворяется в организме, она эмульгируется и обеспечивает распространение препарата на большой площади.

Могут быть использованы моно- и диглицериды каприновой/каприловой кислоты (Capmul MCM), Miglyol 8122 (триглицериды со средней длиной цепи). Такие масляные носители становятся частью самоэмульгирующейся системы. Другими примерами стабилизирующих компонентов являются: витамин E/сукцинат полиэтиленгликоля, моноолеат сорбита, Labrasol, и их комбинация. Кроме того, учитывая их окислительного-восстановительный потенциал, в качестве антиоксиданта в данную композицию могут быть включены токоферол, бутилированный гидрокситолуол и/или бутилированный гидроксианизол.

Другим подходом к повышению стабильности МАА в растворе является создание наносуспензии МАА (<1000 нм), стабилизированной, с помощью, например, витамина E/сукцината полиэтиленгликоля. Для получения этой наносуспензии может быть использован метод мокрого помола по Netzsch (http ://www. netzsch-grinding. com).

Кроме того, растворы восстановленного МАА (например, SkQ1H2) в этаноле могут быть смешаны с аскорбиновой кислотой и высушены до получения твердого вещества или порошка, которые остаются стабильными в течение нескольких месяцев.

Стабильные фармацевтические композиции в виде таблеток для орального приема могут быть получены путем экструзии горячего расплава. Этот метод грануляции расплава поддерживает полиморфную стабильность препаратов и значительно улучшает их биодоступность при пероральном приеме. Это может быть достигнуто путем совместной гомогенизации МАА со вспомогательными веществами макроголами (например, полиэтиленгликолем 3350, 6000, поливинилпирролидоном, гидроксипропилцеллюлозой и витамином E-TPSG) через горячий экструдер, и прессования полученного гранулированного порошка в таблетки или инкапсуляции в твердые желатиновые капсулы.

Типичные стабильные жидкие и твердые пероральные фармацевтические композиции SkQ1 приведены ниже (в табл. 2)

- 7 031399

Таблица 2

SkQl (окисленная форма)

Растворы:

SkQl в 20% (масс. %) глицерина, в фосфатном буфере

SkQl в 50% (масс. %) 1,2-пропиленгликоле с пировиноградной кислотой

SkQl в 50% (масс. %) 1,2-пропиленгликоле с молочной кислотой

Твердые композиции:

SkQl с PEG-4000

SkQl с декстраном

SkQl с пара-аминобензойной кислотой (п-АБК)

SkQ 1 с декстраном и п-АБК

SkQl с миоинозитом

SkQl с пировиноградной кислотой и Pearlitol 200

SkQl с пировиноградной кислотой и микрокристаллической целлюлозой

SkQl с пировиноградной кислотой и F-Melt С

SkQl с пировиноградной кислотой и Syloid FP

SkQl с лимонной (винной или молочной кислотой, или глицином) и Pearlitol 200

SkQl с лимонной кислотой (или винной, или молочной кислотой или глицином) и микрокристаллической целлюлозой

SkQl с лимонной кислотой (или винной кислотой, молочной кислотой или глицином) и F-Melt С

SkQl с лимонной кислотой (или винной кислотой, или молочной кислотой или глицином) и Syloid FP

SkQlH? (восстановленная форма)

Растворы:

SkQlFb (0,11 М) с аскорбиновой кислотой (10 экв) в 55% этаноле

SkQlH2 (7,4 мМ) с аскорбиновой кислотой (5 экв) и сорбитом (20 вес. частей) в 30%

1,2 - пропиленгликоле

Твердые композиции:

SkQlFb (1 экв) с аскорбиновой кислотой (> 2 моль-эквивалентов) с PEG-4000

SkQ I Нг (1 экв) с аскорбиновой кислотой (> 2 моль-эквивалентов) с декстраном

SkQ 1 Нг (1 экв) с аскорбиновой кислотой (> 10 моль-эквивалентов) с PEG-4000

SkQlН2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (> 10 моль-эквивалентов) с декстраном

SkQlFh (1 экв) с сорбитом (30 вес частей)

SkQlHi (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и сорбитом (30 вес. частей) SkQ IH2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и глюкозой (10 вес. частей) SkQlH2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и моногидратом лактозы (10 вес.

частей)

SkQlH2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и Pearlitol 200 (30 вес. частей)

SkQlFh (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и микрокристаллической целлюлозой (30 вес. частей)

SkQlH2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и F-Melt С (30 вес. частей)

SkQlН2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и Syloid FP (30 вес частей)

SkQ1H₂ в форме мелкого порошка был получен с выходом почти 100% путем восстановления SkQl с аскорбиновой кислотой или любым другим подходящим восстанавливающим агентом в водноспиртовой смеси с последующим выделением либо экстракцией хлороформом или любым другим подходящим растворителем или осаждением из воды с последующим центрифугированием, или хроматографией на колонке (силикагель) или методом обращено-фазовой ВЭЖХ. Выделенное вещество было охарактеризовано с помощью протонного ЯМР, жидкостной хромотографии/масс-спектрометрии и данных элементного анализа.

Было подтверждено, что образец имеет отличную стабильность в течение 1 месяца при комнатной температуре или нескольких месяцев при 4°C в темноте в инертной атмосфере без доступа влажности

- 8 031399 (табл. 17). Образец также может быть стабилизирован путем растворения в любых дезоксиге визированных безводных и апротонных растворителях. Восстановленная форма SkQ1H₂ быстро окисляется до первоначального SkQ1 при контакте с воздухом, во влажной атмосфере, при растворении в воде или любом протонном растворителе (табл. 18).

Стабильность SkQ1H₂ в твердых композициях строго зависит от степени высушивания фармацевтической композиции, а также степени высушивания наполнителей и других компонентов. Влажность окружающей атмосферы и присутствие воздуха также играют ключевую роль в окислении SkQ1H₂ до SkQ1 с последующим распадом последнего.

II. Лечение.

Эксперименты in vivo и in vitro демонстрируют возможность использования МАА, в том числе SkQ1 и SkQR1, но ими не ограничиваются, для профилактики и лечения диабета и расстройств, связанных с сахарным диабетом (пример 2). Такие эксперименты in vivo и in vitro также показывают, что жидкие растворы МАА, в том числе SkQ1 и SkQR1, но ими не ограничиваются, могут быть использованы для профилактики и лечения воспалительных заболеваний и связанных с ними заболеваний, таких как септический шок и/или воспаление системного характера. Например, рецептуры жидких фармацевтических композиций, основанные на МАА с приемлемой стабильностью, показывают их эффективность на моделях диабета, воспаления, септического шока и похожих заболеваний (примеры 2-7).

Обработка SkQ1 также предотвращает разрушение внутриклеточных контактов и реорганизацию цитоскелета, вызванных ФНО (данные, полученные во время микроскопических исследований VEкадгерина, бета-катенина и F-актина). Таким образом, показано, что SkQ1 демонстрирует эффективность в защите эндотелиальных клеток против цитокин-зависимой дисфункции эндотелиального барьера, и, следовательно, может быть использован для профилактики и лечения многих патологических состояний, включая диабет, атеросклероз, старение и хронические воспалительные заболевания.

Кроме того, SkQ1 уменьшает фосфорилирование и деградацию белка IkBa, вызванного ФНО. NFkB (ядерный фактор каппа-би) как известно, активируется при многих воспалительных заболеваниях, таких как воспалительное заболевание кишечника, артрит, сепсис, гастрит, астма и атеросклероз (Monaco и соавт. (2004) PNAS., 101:5634-9). SkQ1 обладает способностью предотвращать активацию NFkB, чья активность связана с повышенной смертностью, особенно при сердечно-сосудистых заболеваниях (Venuraju и соавт. (2010) J. Am. Coll. Cardiol, 55:2049-61). Кроме того, было показано, что SkQ1 предотвращает транслокацию фактора транскрипции p65 (RelA) из цитоплазмы в ядро, тем самым потенциально снижая вероятность возникновения осложнений.

Теперь будут приведены конкретные примеры, иллюстрирующие изобретение. Следует понимать, что примеры приведены для иллюстрации лишь некоторых вариантов, а вовсе не для ограничения объема изобретения.

Примеры

Пример 1. Стабильные препараты восстановленной формы SkQ1 (SkQ1H₂).

Восстановленную хинольную форму SkQ, SkQ1H₂, получали следующим образом: 10 мл раствора SkQ1H₂ (концентрацией 1 мг/мл) в этаноле тщательно смешивали с 200 мг аскорбиновой кислоты, а затем подвергали вакуумной сушке. Полученный порошок, содержащий 95% аскорбиновой кислоты и 5% SkQ1H₂, обладал приемлемой стабильностью при различных температурах хранения. Например, в эксперименте ускоренного распада содержание SkQ1 было снижено с первоначальных 98,7 до 95,1% после хранения в течение 12 дней при 60°C.

Исходя из этих результатов можно рассчитать, что хранение в течение 1 года при 4°C приведет к потере примерно 3,5% от начальной концентрации активного вещества SkQ1, что является приемлемой стабильностью.

Альтернативный вариант приготовления: сухую смесь SkQ1H₂ и аскорбиновой кислоты получали растворением 10 мг SkQ1H2 в 10 мл раствора аскорбиновой кислоты (20 мг/мл) с последующей вакуумной сушкой.

Смесь SkQ1 и аскорбиновой кислоты можно приготовить еще одним способом: смешать 5 мл раствора SkQ1H₂ в этаноле (2 мг/мл) с 5 мл раствора аскорбиновой кислоты в воде (40 мг/мл) с последующей вакуумной сушкой. Восстановленная форма SkQ1H₂ может быть стабилизирована в растворе аскорбиновой кислоты, что позволяет пропустить стадию сушки, и получить таким образом соответствующий жидкий препарат.

Пример 2. Действие жидких фармацевтических композиций с МАА при диабете.

А. Аллоксановые исследования на животных.

Аллоксан хорошо известен как вещество, обладающее диабетогенным действием, и широко используется для индукции диабета 2-го типа у животных (Viana и др. (2004) ВМС Pharmacol, 8:4-9).

Индукцию аллоксанового диабета проводили следующим образом: две группы лабораторных крыс (20 животных в каждой группе) со свободным доступом к пище и воде получали раствор SkQ1 (в концентрации 250 нМ) на протяжении 10 дней. Ежедневное потребление составляло 60 мл водного раствора (содержащего 15 нмоль SkQ1) на крысу. Средний вес крыс составлял 300 г. Таким образом, крысы потребляли приблизительно 50 нмоль/кг массы тела в день. Две другие группы животных не получали

- 9 031399

SkQ1. Через 10 дней крысам подкожно (в область бедра) вводили аллоксан (100 мг/кг массы тела; группы аллоксан + SkQ1 и аллоксан) в изотоническом солевом растворе 0,9% (w/v) NaCl. Контрольным животным вводили солевой раствор без аллоксана (группы контроль + SkQ1 и контроль). После инъекции крысы продолжали пить воду, содержащую SkQ1 (250 нМ) в течение 14 суток (группа аллоксан + SkQ1) или без SkQ1 (группа аллоксан).

Данные по уровню глюкозы в крови измеряли глюкозооксидазным методом (Saifer соавт. (1958) J. Lab. Clin. Med., 51:445-460) спустя 2 недели после инъекции аллоксана. Результаты представлены на фиг. 1. Все данные представлены как среднее значение +/-среднеквадратическая ошибка (SE).

Уровень глюкозы в крови у животных, получавших SkQ1 после инъекции аллоксана, был примерно в 2 раза ниже по сравнению с животными, не получавшими SkQ1.

Эти результаты показали, что стабилизированные МАА, например SkQ1, полезны для профилактики и лечения сахарного диабета и его осложнений.

В другом эксперименте самцы крыс линии Вистар весом от 200 до 250 г (возраст от 7 до 8 недель) были разделены на 3 группы, от 12 до 15 животных в каждой. Животным ввели аллоксан в дозировке 125 мг/кг массы тела внутрибрюшинно после ночного голодания. Контрольным животным был введен физиологический раствор (0,9% NaCl). Стабилизированная фармацевтическая композиция (1% этанол, 5 мл/кг) и SkQ1H₂ (5 экв аскорбиновой кислоты, 30 вес.ч. сорбита) в дозе 1250 нмоль/кг вводили внутрижелудочно через желудочный зонд один раз в день в течение 2 недель до и 1 недели после введения аллоксана. Образцы крови отбирали из хвостовой вены после голодания в течение ночи. Уровень глюкозы измеряли обычным глюкозооксидазным методом до введения аллоксана, на 1-, 2-, 3- и 7-й дни после введения. Через семь дней после введения аллоксана у подопытных животных был проведен тест на переносимость глюкозы. Крысы получали глюкозу в дозировке 3 г/кг интрагастрально. Уровни глюкозы в крови измеряли до инъекции глюкозы, а также через 15, 30, 60 и 90 мин после введения.

Были получены следующие результаты (табл. 3):

Таблица 3

	Физраствор + наполнитель	Аллоксан + наполнитель	Аллоксан+ композиция SkQlH₂
Максимальная КОНЦ, глюкозы в крови, мМ	6,7	17,6	13,9
Общая конц. глюкозы в крови (площадь под кривой, мМ X мин)	500	1194	947

Б. Исследования на диабетических мышах.

Мыши, несущие мутацию в гене рецептора лептина (C57BLKS-Leprdb/J мыши, или мыши db/db), как известно, подвержены нарушениям метаболизма глюкозы. Эти мыши используются в качестве модели диабета второго типа со многими характеристиками, совпадающими с болезнью у человека, включая гиперфагию, гипергликемию, резистентность к инсулину и прогрессирующее ожирение (Hummel соавт. (1966) Science, 153:1127-1128).

SkQ1 в 20% глицерине, как описано ниже в примере 8 (250 нмоль/кг в день) вводили перорально 10-12 недельным гомозиготным db/db мышам (n=8), растворитель db/db мышам (N=8) и не страдающим диабетом контрольным гетерозиготным db/++ (n= 5) мышам в течение 12 недель. Содержание веществ в печени, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (малоновый диальдегид, MDA) определяли при помощи метода Mihara и соавт. ((1978) Anal. Biochem., 86:271-278).

Как показано на фиг. 2, повышение уровня глюкозы вызывает окислительный стресс, который характеризуется повышением уровня MDA в печени db/db мышей. Повышение уровня MDA отражает стимуляцию перекисного окисления липидов, которое в свою очередь отражает повышение перикисного окисления липидов, которое, в свою очередь, повреждает эндотелиальные клетки, нарушает проницаемость капилляров, повреждает фибробластов, нарушая метаболизм коллагена, тем самым являясь основной причиной развития патологий, связанных с диабетом. Стабилизированный раствор SkQ1 значительно снизил уровень MDA в печени диабетических db/db мышей, что свидетельствует о снижении скорости перекисного окисления липидов и уменьшении повреждений печени.

Пример 3. Влияние стабилизированного МАА на заживление ран.

Заживление ран изучали в двух сериях с использованием 6-месячных гомозиготных C57BLKSLeprdb/J мышей (db/db) и гетерозиготных мышей C57BLKS-Leprdb/J (db/+). Эти мыши используются в качестве модели диабета типа II с нарушением заживления ран (Michaels и др. (2007) Wound Repair and Regeneration, 15:665-670).

Мышам вводили ежедневно 250 нмоль/кг веса тела фармацевтической формы SkQ1 в сутки в 20% глицерине, как описано в примере 8) в течение периода времени от 10 до 12 недель. Контрольные группы

- 10 031399 db/db и db/+ мышей не получали SkQ1. Полноразмерные кожные раны были нанесены животным под анестезией кетамином (80 мг/кг). Животных содержали в пластиковых клетках при стандартной температуре, освещении и режиме кормления. Через 7 дней после нанесения ран животных умерщвляли путем декапитации. Раны вырезали, фиксировали в 10% формалине в стандартном буфере PBS, обрабатывали стандартными гистологическими методами и заключали в парафин.

Гистологические срезы центральной части раны вырезали и окрашивали гематоксилин-эозином. Срезы иммуногистохимически окрашивали маркерами эндотелиальных клеток (CD31), макрофагов (f4/80) и миофибробластов (гладкомышечный альфа-актин). Для подсчета общего количества клеток, количества нейтрофилов, макрофагов, а также определения плотности сосудов (площадь сосудов/площадь грануляционной ткани*100) на микрофотографиях раневых участков использовали программное обеспечение ImageJ (Национальный институт здоровья (NIH) http:/rsb.info;nih.gov/ij/). Анализировали по 100 мм² площади рассечения для каждого животного. Скорость эпителизации раны оценивали в % как отношение эпителизированной области раны к общей области площади на срезе ткани*100. Для статистического анализа был использован непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего значения (SEM).

Как показано на фиг. 3 а, 3б и 3в, стабилизированная лекарственная форма SkQ1 может ускорять заживление ран у диабетических мышей путем уменьшения инфильтрации нейтрофилов, увеличения васкуляризации и увеличения скорости эпителизации.

Пример 4. Влияние стабилизированного МАА на воспаление и септический шок.

Известно, что септический шок активирует многочисленные воспалительные пути в организме, что приводит к смерти. Липополисахарид (ЛПС) - индуцированный септический шок у мышей является широко признанной моделью в фармакологических и биологических исследованиях (Villa соавт. (2004) Meth. Molec. Med., 98:199-206).

Индукцию септического шока проводили следующим образом: 43 самца мышей BALB/c со свободным доступом к пище и воде были разделены на 4 экспериментальные группы. Группа К получала воду без действующего вещества. Группы SkQ1 50, SkQ1 250 и SkQ1 1250 ежедневно получали парентерально фармацевтическую форму водного раствора SkQ1 концентрацией 50, 250 и 1250 нмоль/кг соответственно. Через 3 недели приема SkQ1 животным внутрибрюшинно вводили 250 мг/кг ЛПС и 700 мг/кг D-галактозамина (D-GalN), индуцирующего септический шок, ведущий к смерти 50% необработанных контрольных животных (доза LD50). Гибель животных от вызванного септического шока наблюдалась через 4 дня после индукции септического шока.

Результаты эксперимента показаны на фиг. 4. Выживание мышей после введения LPS/D-GalN было значительно повышено под влиянием SkQ1. Статистически значимый эффект был показан для дозы SkQ1 50 нмоль/кг (p=0,03).

Эти результаты ясно показывают, что SkQ1 действует в качестве противовоспалительного агента, имеющего терапевтическое применение для лечения септического шока.

В других исследованиях мыши BALB/c со свободным доступом к пище и воде были разделены на 4 экспериментальные группы. Группа К получала воду без действующего вещества. Группы SkQ1 50, SkQ1 250 и SkQ1 1250 ежедневно получали парентерально фармацевтическую форму водного раствора SkQ1 концентрацией 50, 250 и 1250 нмоль/кг соответственно. Через 3 недели приема SkQ1 животным внутрибрюшинно вводили 250 мг/кг ЛПС и 700 мг/кг D-галактозамина (D-GalN), индуцирующего септический шок, ведущий к смерти 50% необработанных контрольных животных (доза LD50). Гибель животных от вызванного септического шока наблюдалась через 4 дня после индукции септического шока.

Пример 5. Влияние стабилизированного МАА на артрит.

Модель коллаген-индуцированного артрита у крыс использовали для исследования терапии ревматоидного артрита (РА) потенциальными антиартритными препаратами (Griffiths и соавт. (2001) Immunol. Rev., 184:172-83).

Тридцати крысам линии Вистар со свободным доступом к воде и пище вводили полный адъювант Фрейнда и 250 мг коллагена II типа, чтобы вызвать коллаген-индуцированный артрит. Начиная с 14 и 24 дня после введения, две группы животных в каждой, ежедневно получали SkQ1 в форме водного раствора, в дозировке 250 нмоль/кг массы тела в день (группы SkQ1 с 14-го дня и SkQ1 с 24-го дня; группа Контроль получали воду без действующего вещества).

Как показано на фиг. 5, введение SkQ1 сократило количество животных с явными признаками воспаления, т.е. животных с увеличенным объемов лап, который был измерен водяным манометром, по сравнению с контрольной группой. Таким образом, SkQ1 обладает противовоспалительными и антиартритными свойствами.

В других исследованиях крысам линии Вистар со свободным доступом к воде и пище вводили полный адъювант Фрейнда и 250 мг коллагена II типа, чтобы вызвать коллаген-индуцированный артрит. Начиная с 14 и 24 дня после введения, две группы животных в каждой, ежедневно получали SkQ1 в форме водного раствора в 20% глицерине, в дозировке 250 нмоль/кг массы тела в день (группы SkQ1 с 14-го дня и SkQ1 с 24-го дня; группа Контроль получали воду без действующего вещества).

- 11 031399

Пример 6. Влияние стабилизированных МАА на воспаление, связанное с ишемической болезнью сердца.

Интенсивная продукция цитокинов, индуцированная воспалением, может привести к гибели эндотелиальных клеток, что наряду с увеличением окислительного стресса и сосудистого воспаления приводит к дисфункции эндотелия и повышает риск возникновения ишемической болезни сердца.

В качестве модели сосудистого эндотелия использовались человеческие эндотелиальные клеток линии EA.hy926 (коллекция ATCC; номер по каталогу CRL-2922). Эта клеточная линия подобна первичной клеточной линии эндотелия HUVEC (Edgell соавт. (1983) PNAS, 80(12):3734-7; Edgell и соавт. (1990) In Vitro Cell Dev. Biol., 26 (12): 1167-72) и широко используется в качестве релевантной модели для исследований воспалительных процессов (Riesbeck соавт. (1998) Clin. Vaccine Immunol., 5:5675- 682).

Соответственно, эндотелиальные клетки человека EA.hy926 человека предварительно инкубировали с 0,2 нМ раствором SkQR1 или 2 нМ раствором SkQ1 раствор в среде DMEM с 10% эмбриональной сывороткой (пример 1) в течение 4 дней. После этого клетки инкубировали в течение ночи в свежей среде DMEM с 0,2% эмбриональной сывороткой. Клетки инкубировали 2 дня с ФНО (от 0,25 нг/мл до 50 нг/мл) и гибель клеток регистрировали с использованием стандартного теста МТТ (Berridge и соавт. (1996) Biochemica, 4:14-9). Данные этого анализа показаны как среднее ± среднеквадратичное отклонение (SE) по меньшей мере для 3 независимых экспериментов.

Как показано на фиг. 6, как SkQ1 и SkQR1 значительно снижали гибель клеток по сравнению с контролем без МАА. Таким образом, показано, что SkQ1 и SkQR1 являются эффективными препаратами для защиты эндотелиальных клеток от воспалительного действия цитокинов и могут быть использованы для профилактики и лечения ишемической болезни сердца, включая атеротромбоз.

Пример 7. Влияние стабилизированного МАА на сосудистую дисфункцию.

А. Исследования in vitro.

Воспалительные цитокины индуцируют экспрессию ICAM-1 (молекулы межклеточной адгезии 1). ICAM-1 является ключевой молекулой, участвующей в процессе межклеточной адгезии и трансмиграции лейкоцитов через эндотелий сосудов при воспалительной реакции. Экспрессия ICAM-1, а также воспалительных цитокинов, включая IL-6 и IL-8, повышается при многих патологических состояниях, включая диабет, атеросклероз, старение и хронические воспалительные заболевания.

Было доказано воздействие SkQ1 на экспрессию мРНК ICAM-1 и секрецию цитокинов (IL-6, IL-8), индуцированную ФНО в эндотелиальных клетках человека EAhy926 (коллекция ATCC; номер по каталогу CRL-2922). ФНО является основным провоспалительным цитокином, стимулирующим экспрессию молекул клеточной адгезии и многих воспалительных цитокинов. Противовоспалительные свойства многих лекарственных препаратов часто опираются на их способность ингибировать экспрессию провоспалительных цитокинов, индуцированных ФНО при помощи эндотелиальных клеток EAhy926 (Edgell др. (1983) Proc. Natl. Acad. Set. USA, 80:3734-7; Lombardi и соавт. (2009) Eur. J. Cell. Biol., 88:731-42; Manea и др. (2010) Cell Tissue Res., 340:71-9).

300000 клеток высевали на 60 мм² чашки для культивирования и после прикрепления обрабатывали раствором SkQ1 (0,2 нМ в среде DMEM с 10% эмбриональной сыворотки) в течение 4 дней, а затем стимулировали ФНО (0,05 нг/мл в течение 4 ч для анализа ICAM-1 или 5 нг/мл в течение 15 ч для анализа на цитокины соответственно). Экспрессию ICAM-1 мРНК определяли методом ПЦР в реальном времени (Okada и др. (2005) Invest. Ophtalmol. Vis. Sci., 46:4512-8). Секрецию IL-6 и IL-8 оценивали по ELISA (Toma и соавт. (2009) Biochem. Biophys. Res. Commun., 390:877-82; Volanti и др. (2002) Photochem. Photobiol., 75:36-45.) Данные представлены как среднее ± среднеквадратичное отклонение по меньшей мере для 3 отдельных экспериментов.

Результаты, показанные на фиг. 7а, подтверждают эффективность SkQ1 в качестве сосудистого противовоспалительного вещества, которое предотвращает чрезмерную экспрессию воспалительных цитокинов и ICAM-1. Таким образом, МАА являются полезными для профилактики и лечения сосудистых патологий, включая атеросклероз.

Б. Исследования in vivo.

Как описано выше в примере 7A, экспрессия ICAM-1 повышается при многих патологических сосудистых состояниях. Эффективность SkQ1 в снижении экспрессии ICAM-1 in vivo была протестирована на мышах. 30 гибридных самцов мышей C57Black/CBA были разделены на три экспериментальные группы (10 животных в каждой группе) в начале эксперимента. Группа молодые мыши включала мышей в возрасте 6 месяцев. Группы старые мыши и старые мыши + SkQ1 включали мышей в возрасте 24 месяцев. Группа старые мыши + SkQ1 имела свободный доступ к питьевой воде, содержащей 100 нМ SkQ1 на 1 кг массы тела в течение 7 месяцев. После этого периода животные были декапитированы. РНК из аорт животных выделяли с использованием набора DNeasy Blood and Tissue (Qiagen), обратную транскрипцию и количественный ПЦР в реальном времени использовали для измерения уровня мРНК ICAM-1. Для процедуры нормализации данных использовалось среднее арифметическое уровня экспрессии конститутивных генов GAPDH и RPL32. Данные приведены как среднее ± SEM (стандартная ошибка среднего значения).

Как показано на фиг. 7б, SkQ1 значительно снижает уровень ICAM-1 мРНК у старых мышей, под

- 12 031399 вергавшихся действию препарата, по сравнению с контрольной группой, и приближает его к уровню экспрессии ICAM-1 у молодых мышей.

Результаты показывают, что SkQ1 предотвращает возрастное увеличение экспрессии ICAM-1 в эндотелии сосудов. Таким образом, SkQ1 может быть использовано для профилактики возрастных сосудистых патологий, включая атеросклероз.

В других исследованиях гибридные самцы мышей C57Black/CBA делились на 3 экспериментальные группы: молодые, старые и старые + SkQ1, как описано выше. Третья группа получала SkQ1 250 нмоль/кг веса тела в день в течение 7 месяцев. Группа старые являлась контрольной и получала 20% глицерин без действующего вещества. После этого периода животные были декапитированы. РНК из аорт животных выделяли с использованием набора DNeasy Blood and Tissue (Qiagen), обратную транскрипцию и количественный ПЦР в реальном времени использовали для измерения уровня мРНК ICAM-

1. Для процедуры нормализации данных использовалось среднее арифметическое уровня экспрессии конститутивных генов GAPDH и RPL32. Данные приведены как среднее ± SEM (стандартная ошибка среднего значения).

Пример 8. Подготовка и стабильность окисленных фармацевтических композиций SkQ1.

1. SkQ1 в 20% (мас.%) глицерина и фосфатном буфере.

Глицерин (20 г) разводили фосфатным буфером (80 г, 0,01М KH₂PO₄, pH 4,77). Образец SkQ1 (20 мг) помещали в сосуд темного стекла и разбавляли в пропиленгликоле (0,2 мл) и разбавляли аликвотой (19,8 мл) вышеуказанного растворителя до 1 мМ.

Стабильность SkQ1 в приготовленном растворе была исследована при хранении при комнатной температуре и при 60°C (табл. 4).

Таблица 4

Время, дни	SkQl, %/продукты распада, % (хранение при комнатной температуре)	SkQl, %/продукты деградации, % (хранение при 60°С)
0	99,34/0	99,34 / 0
11	99,71 / 0	-
13	99,76 / 0	-
14	99,68/0	-
17	99,62 / 0	-
19	99,63 / 0,07	95,30/4,7
21	99,52/0,20	-
24	99,57/0,08	-
61	99,49/0,51	-

2. SkQ1 в 50% (мас.%) 1,2-пропиленгликоля с пировиноградной кислотой (10, экв. по отношению к SkQ1).

SkQ1 (50 мг) и пировиноградную кислоту (71 мг, 10 экв) помещали в темную стеклянную пробирку и растворяли в 50% смеси пропиленгликоля с водой (100 мл), таким образом получая 0,081 мМ раствор SkQ1.

Стабильность SkQ1 в приготовленном растворе была исследована при хранении при 60°C (табл. 5).

3. SkQ1 в 50% (мас.%) 1,2-пропиленгликоля с молочной кислотой (10, экв отн. SkQ1).

SkQ1 (50 мг) и L (+) молочную кислоту (73 мг, 10 экв) помещали в темную стеклянную пробирку и растворяли в 50% смеси пропиленгликоля с водой (100 мл), таким образом получая 0,081 мМ раствор SkQ1.

Стабильность SkQ1 в приготовленном растворе была исследована при хранении при 60°C (табл. 5). Таблица 5

Время, дни	SkQl, % с пировиноградной кислотой	SkQl, % с молочной кислотой
0	>99,9	>99,9
72	93,2	96,6

4. SkQ1 с PEG-4000.

Раствор 8 мг SkQ1 в 0,5 мл этанола смешивали с 200 мг PEG-4000 и растворитель выпаривали досуха.

Стабильность SkQ1 в полученной композиции была исследована при хранении при 4°C в темноте (табл. 6).

Таблица 6

Время, дни	SkQl,%	Продукты распада, %
18	>99,9	<0,01
19	99,83	0,17
20	99,80	0,20

5. SkQ1 с декстраном.

- 13 031399

Раствор 10 мг SkQ1 в 0,75 мл этанола добавляли к раствору 100 мг декстрана в 1 мл воды. Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

Стабильность SkQ1 в полученной композиции была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 7).

Таблица 7

Время, дни	SkQl,%	Продукты распада, %
0	96,71	3,29
6	20,66	79,34
15	24,14	75,86
25	18,93	81,07

6. SkQ1 с пара-аминобензойной кислотой (п-АБК).

Раствор 8 мг SkQ1 в 0,5 мл этанола добавляли к раствору 200 мг п-аминобензойной кислоты (пАБК) в 1,5 мл этанола. Растворитель выпаривали досуха.

Стабильность SkQ1 в полученной композиции была исследована при хранении при комнатной температуре в темноте (табл. 8).

Таблица 8

Время, дни	SkQl,%	Продукты распада, %
0	100	0
30	58,42	41,58

7. SkQ1 с декстраном и п-АБК.

Раствор 10 мг SkQ1 в 0,75 мл этанола добавляли к раствору п-АБК (2 мг в 0,5 мл этанола) и декстрана (100 мг в 1 мл воды). Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

Стабильность SkQ1 в полученной композиции была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 9).

Таблица 9

Время, дни	SkQl, %	Продукты распада, %
0	97,13	2,87
6	39,22	60,78
15	7,07	92,93

8. SkQ1 (1 экв) с миоинозитом (30 мас.ч. по отношению к SkQ1).

мг миоинозита добавляли к раствору 5 мг SkQ1 в 5 мл этанола. Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

Стабильность SkQ1 в полученной композиции была исследована при хранении при комнатной температуре в темноте (табл. 10).

Таблица 10

Время, дни	SkQl,%	Продукты распада, %
0	95,88	4,12
5	96,86	3,14
6	95,99	4,01
15	92,26	7,74

9. SkQ1 (1 экв) с пировиноградной кислотой (10 экв) и Pearlitol 200 (30 мас.ч. по отношению к SkQ1).

375 мг Pearlitol 200 добавляли к раствору 12,5 мг SkQ1 и 17,8 мг (10 экв) пировиноградной кислоты в 0,75 мл этанола. Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

Стабильность SkQ1 в полученной композиции была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 11).

10. SkQ1 (1 экв) с пировиноградной кислотой (10 экв) и микрокристаллической целлюлозой (30 мас.ч. относительно SkQ1).

375 мг микрокристаллической целлюлозы добавляли к раствору 12,5 мг SkQ1 и 17,8 мг (10 экв) пировиноградной кислоты в 0,75 мл этанола. Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

11. SkQ1 (1 экв) с пировиноградной кислотой (10 экв) и F-Melt С (30 мас.ч. по отношению к SkQ1).

375 мг F-Melt C добавляли к раствору 12,5 мг SkQ1 и 17,8 мг (10 экв) пировиноградной кислоты в 0,75 мл этанола. Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

12. SkQ1 (1 экв) с пировиноградной кислоты (10 экв) и Syloid FP (30 мас.ч. относительно SkQ1).

- 14 031399

375 мг Syloid FP добавляли к раствору 12,5 мг SkQ1 и 17,8 мг (10 экв) пировиноградной кислоты в 0,75 мл этанола. Смесь энергично перемешивали и растворитель выпаривали досуха.

Таблица 11

Время, ДНИ	SkQl, % / SkQlH₂, % / продукты распада, %
(Образец 9)	(Образец 10)	(Образец 11)	(Образец 12)
0	>99,9/0,05/0,05	> 99,9/<0,05/<0,05	>99,9/0,05/0,05	> 99,9/0,05/0,05
14	60,3/11,3/28,4	50,2/25,8/24,0	38,2/47,7/14,1	57,9/1,4/40,7

Следующие композиции, содержащие SkQ1, также могут быть приготовлены, как описано выше в примере 8.

SkQ1 (1 экв) с лимонной (или винной, или молочной кислотой, или глицином, 10 экв) и Pearlitol 200 (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1 (1 экв) с лимонной (или винной, или молочной кислотой, или глицином, 10 экв) и микрокристаллической целлюлозой (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1 (1 экв) с лимонной (или винной, или молочной кислотой, или глицином, 10 экв) и F-Melt C (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1 (1 экв) с лимонной (или винной, или молочной кислотой, или глицином, 10 экв) и Syloid FP (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

Пример 9. Приготовление и стабильность восстановленных композиций SkQ1H₂.

13. SkQ1H₂ (1 экв) приготовляли in situ путем восстановления SkQ1 аскорбиновой кислотой (2 моль-эквивалента) и PEG-4000 (10 мас.ч. по отношению SkQ1H₂).

Раствор 10 мг SkQ1 в 0,6 мл этанола добавляли к раствору 5,7 мг (2 эквивалента) аскорбиновой кислоты в 0,1 мл воды. Смесь перемешивали до полного восстановления SkQ1H₂ (около 1 ч). Затем добавляли 100 мг PEG-4000. Смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и выпаривали растворитель досуха.

Стабильность SkQ1H₂ в полученной композиции была исследована при хранении при 4°C в темноте (табл. 12).

14. SkQ1H₂ (1 экв, приготовленный in situ путем восстановления SkQ1 аскорбиновой кислотой (2моль-экв) и декстраном).

Раствор 10 мг SkQ1 в 0,6 мл этанола добавляли к раствору 5,7 мг (2 эквивалента) аскорбиновой кислоты в 0,1 мл воды. Смесь перемешивали до полного восстановления SkQ1H₂ (около 1 ч). Затем добавляли раствор 100 мг декстрана в 1 мл воды. Смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и растворитель выпаривали досуха.

Таблица 12

Время, ДНИ	(Образец 13)	(Образец 14)
SkQl, %	SkQlH₂%	Продукты распада, %	SkQl,%	SkQlH₂ %	Продукты распада, %
0	14,65	85,35	<0,05	3,61	96,39	<0,05
1	7,72	92,28	2,80	97,20
4	59,12	40,88	98,57	1,43
6	57,53	42,47	99,55	0,45
7	54,16	45,84	99,26	0,74
10	54,22	45,78	98,93	1,07

15. SkQ1H₂ (1 экв. приготовленный in situ путем восстановления SkQ1 аскорбиновой кислотой (10 моль-экв) и декстраном (10 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

Раствор 10 мг SkQ1 в 0,6 мл этанола добавляли к раствору 28,5 мг (10 экв) аскорбиновой кислоты в 0,25 мл воды. Смесь перемешивали до полного восстановления SkQ1H₂ (примерно 30 мин). Затем добавляли раствор 100 мг декстрана в 1 мл воды. Смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и выпаривали растворитель досуха.

Стабильность SkQ1H₂ в полученной композиции была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 13).

16. SkQ1H₂ (1 экв) приготовленный in situ путем восстановления SkQ1 аскорбиновой кислотой (10 моль-экв) с декстраном и п-АБК (10 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

Раствор 10 мг SkQ1 в 0,6 мл этанола добавляли к раствору 28,5 мг (10 экв) аскорбиновой кислоты в

- 15 031399

0,25 мл воды. Смесь перемешивали до полного восстановления SkQ1H₂ (примерно 30 мин). Затем добавляли раствор 100 мг декстрана в 1 мл воды и раствор 2 мг п-АБК в 0,5 мл этанола. Смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и выпаривали растворитель досуха.

Таблица 13

Время, Дни	(Образец 15)	(Образец 16)
SkQl,%	SkQlH₂%	Продукты распада, %	SkQl,%	SkQlH₂, %	Продукты распада, %
0	2,35	92,59	5,06	0,74	98,65	0,61
6	4,26	91,66	4,08	2,72	97,16	0,12
15	5,11	94,27	0,62	8,49	91,12	0,39
25	5,71	88,69	5,6	11,07	86,62	2,31

17. Порошкообразная форма SkQ1H₂.

Раствор 2 г SkQ1 в 40 мл этанола добавляли к раствору 5,7 г аскорбиновой кислоты в 60 мл воды. Смесь перемешивали до полного восстановления SkQ1H₂ (примерно 30 мин). Полнота восстановления может быть установлена по обесцвечиванию раствора. Затем растворитель выпаривали и остаток распределяли между водой (50 мл) и CHCl₂ (150 мл). Органическую часть промывали водой (2x25 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали.

Выход SkQ1H₂ составил 2 г (выход около 100%) в виде светлого порошка. Результаты исследования стабильности показаны ниже (табл. 14 и табл. 15).

Таблица 14

Время, ДНИ	Хранение при комнатной температуре	Хранение при 60°С
SkQlH₂, %	SkQl, %	Продукты распада, %	SkQlH₂, %	SkQl, %	Продукты распада, %
0	98,99	1,01	<0,1	99,2	0,75	0,05
3	99,34	0,66	<0,1	-	-	-
5	99,37	0,63	<0,1	99,45	0,55	0

7	99,14	0,71	<0,1	100	0	0
И	99,12	0,83	<0,1	99,76	0,19	0,05
17	99,49	0,28	<0,3	98,61	1,24	0,15
28	99,45	0,50	<0,1	88,7	11,04	0,26

Таблица 15

Время, часы	55% этанол в воде	СН₂С1₂
SkQlH₂ %	SkQl, %	Продукты распада, %	SkQlH₂, %	SkQl, %	Продукты распада, %
0	97,79	2,21	0	97,79	2,21	0
0.5	90,79	9,21	0	95,99	4,01	0
1.48	85,24	14,76	0	94,32	5,68	0
2,8	67,43	32,57	0	93,58	6,42	0
3.44	52,17	47,83	0	94,43	5,57	0
4.37	43,43	56,57	0	92,82	7,18	0
23.23	16,55	82,39	1,06	89,61	9,30	0,97
143.45 (~6 дней)	9,63	77,23	13,14	82,11	16,53	1,36

18. SkQ1H₂ (1 экв) с сорбитом (30 мас.ч. относительно SkQ1H₂).

Раствор 20 мг SkQ1H₂ в 1,3 мл этанола добавляли к раствору 600 мг сорбита в 1,3 мл воды. Растворитель выпаривали досуха. Остаток дополнительно высушивали с оксидом фосфора V (P₂O₅) при пониженном давлении.

Стабильность SkQ1H₂ в полученной композиции была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 16).

- 16 031399

Таблица 16

Время, дни (при 60°С)	SkQlH₂, %	SkQl,%	Продукты распада, %
0	99,01	0,61	0,38
4	90,8	8,7	0,5
7	90,2	9,4	0,4
И	88,8	10,7	0,5
15	89,1	10,4	0,5
28	42,9	5,3	51,8

19. SkQ1H₂ (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв.) и сорбитом (30 мас.ч. относительно SkQ1H₂). Способ 1.

Раствор 20 мг SkQ1H₂ в 1,3 мл этанола добавляли к раствору 28,4 мг (5 экв) аскорбиновой кислоты и 600 мг сорбита в 1,3 мл воды. Растворитель выпаривали досуха. Остаток дополнительно высушивали P₂O₅ при пониженном давлении.

Способ 2.

мг SkQ1H₂ и 28,4 мг (5 экв) аскорбиновой кислоты медленно добавляли к сорбиту (600 мг), расплавленному в стеклянной посуде (температура бани 110°C) при энергичном перемешивании и продолжали перемешивание в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и энергично растирали, чтобы получить микрокристаллический порошок.

Стабильность SkQ1H₂ в композициях, полученных обоими способами, была исследована при хранении при 60 и 4°C в темноте (табл. 17).

Таблица 17

SkQH₂, %	SkQl, %	Продукты распада, (Всего, %/количество примесей с содержанием > 0,5%)
20 суток при 60°С	1 год при 4°С
97,753	1,209	1/0	0,3/0

Следующие препараты SkQ1H₂ в аскорбиновой кислоте также получают, как в примере 19, см. выше.

SkQ1H₂ (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) со стеаратом магния (10 мас.% по отношению к SkQ1H₂) и глюкозы (10 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1H₂ (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) со стеаратом магния (10 мас.% по отношению к SkQ1H₂) и моногидратом лактозы (10 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1H₂ (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и Pearlitol 200 (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1H2 (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и микрокристаллической целлюлозой (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H2).

SkQ1H₂ (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и F-Melt С (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂).

SkQ1H₂ (1 экв) с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и Syloid FP (30 мас.ч. по отношению к SkQ1H₂). 20-22 и 26-30. SkQ1H2 с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и глюкозой.

Способ 3.

Раствор 20 мг SkQ1H2 в 1,3 мл этанола добавляли к 2 мг стеарата магния и раствору аскорбиновой кислоты (в количествах, указанных в табл. 18) и 600 мг глюкозы в 1,3 мл воды. Растворитель выпаривали досуха. Остаток дополнительно высушивали с P2O5 при пониженном давлении.

Способ 4.

мг SkQ1H₂, 2 мг стеарата магния, аскорбиновой кислоты (в количествах, указанных в табл. 18) и 600 мг безводной глюкозы смешивали и энергично растирали.

Стабильность SkQ1H₂ в композициях, полученных способами 3 и 4, была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 18).

23-25. SkQ1H₂ с аскорбиновой кислотой (0-5 экв) и моногидратом лактозы.

Композиции были приготовлены, как описано выше в способе 3 или 4, с использованием моногидрата лактозы вместо глюкозы.

Стабильность композиций SkQ1H2, полученных обоими методами, была исследована при хранении при 60°C в темноте (табл. 18).

- 17 031399

Таблица 18

Образец №	Состав (стабилизаторы и наполнители, количества указаны по отношению к SkQlH.)	Способ приготовления	Продукты распада, всего, % / количество примесей с содержанием > 0,5%
Аскорб. кислота, эк.	Глюкоза	L (+) Лактоза X Н₂О	Магния стеарат	20 дней при 60°С	1 год при 4°С
22	1	-10 вес. частей	-	10 масс %	4	> 30/7	-6/2
23	3	-10 вес. частей	-	10 масс %	4	> 12/9	<3/1
24	0.3	~10 вес. частей	-	10 масс %	4	> 9/7	<3/1
25	1	-	-10 вес. частей	10 масс %	4	> 12/7	4,6 / 1
26	3	-	-10 вес. частей	10 масс %	4	> 9/6	<3/2
27	0.3	-	-10 вес. частей	10 масс %	4	> 10/5	3,9/2
28	1	— 10 вес. частей	-	10 масс %	3	-6/3	2,8 / 0

29	2	-10 вес. частей	-	10 масс %	3	4,4 / 1	2,6 / 0
30	3	-10 вес. частей	-	10 масс %	3	4,2 / 0	2/0
31	5	-10 вес. частей	-	10 масс %	3	3,6 / 0	1,6 / 0
32	0.3	-10 вес. частей	-	10 масс %	з	3,5 / 3 (7 дн при 60°С)	-

31. SkQ1H₂ с аскорбиновой кислотой в 55% этаноле.

Раствор чистого SkQ1H₂ (1 г в 5 мл этанола) добавляли к раствору аскорбиновой кислоты (2,85 г (10 экв) в 10 мл воды).

Стабильность SkQ1H₂ в приготовленном растворе была исследована при хранении при комнатной температуре в темноте (табл. 19).

Таблица 19

Время, ч	SkQlH₂,%
0	99,73
1.5	99,07
68(~3 дня)	99,05
118(-5 дней)	99,69
165 (~ 7 дней)	99,74

SkQl,%	Продукты распада, %
0,27	<0,01
0,93	<0,01
0,59	<0,4
0,31	<0,01
0,26	<0,01

32. SkQ1H₂ с аскорбиновой кислотой и сорбитом в 30% 1,2-пропиленгликоля Раствор чистого SkQ1H₂ (50 мг в 1 мл 1,2-пропиленгликоля) добавляли к раствору аскорбиновой кислоты (67,4 мг (5 экв)) и сорбита (1,5 г) в 10 мл воды.

Стабильность SkQ1H₂ в приготовленном растворе исследовали при хранении при температуре 60°C в темноте (табл. 20).

- 18 031399

Таблица 20

Время, дни	SkQl,%	SkQlH₂, %	Продукты распада, %
0	0,18	99,82	0,00
3	1,03	98,67	0,30
14	28,34	69,51	2,15
27	51,9	3,2	44,9

Эквиваленты.

Специалистам в данной области техники будут понятны, или специалисты будут способны определить, используя только рутинные эксперименты, многочисленные эквиваленты конкретных вариантов осуществления, описанных в данном документе. Такие эквиваленты входят в формулу изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Стабильная антиоксидантная фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) где A представляет собой структуру формулы или восстановленную (хинольную) форму, где m является целым числом от 1 до 3;

Y является метилом;

L представляет собой связующую группу, включающую: а) прямую или разветвленную углеводородную цепь, незамещенную или замещенную одной или несколькими двойными или тройными связями, или простой эфирной или сложноэфирной связью, или C-S, или S-S, или пептидной связью; и которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, предпочтительно выбранными из алкильной, алкоксильной, галогеновой групп, кетогрупп, аминогрупп; или б) природную изопреновую цепь;

n представляет собой целое число от 1 до 20;

B представляет собой направляющую группу и включает: а) ион Скулачева Sk (Sk⁺ Z^-), где Sk является липофильным катионом или липофильным металлопорфирином, a Z представляет собой фармацевтически приемлемый анион, находящийся в смеси жидкого органического растворителя с водой, при условии, что процентное содержание растворителя (объемное по отношению к воде) составляет от 10 до 100% и растворитель выбран из группы, состоящей из гликоля и глицерина в концентрации от 10 до 100%, при условии, что A не является убихиноном, токоферолом, или миметиком супероксиддисмутазы, или эбселеном, когда L является двухвалентным децильным, пентильным или пропильным радикалом, а B является катионом трифенилфосфония.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I находится в восстановленной форме.
3. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I находится в окисленной форме.
4. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I представляет собой SkQ1 или SkQ1H₂ (восстановленная хинольная форма)
5. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I представляет собой

- 19 031399

SkQRl (окисленная хинонная форма) или SkQR1H₂ (восстановленная хинольная форма)
6. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I представляет собой SkQ3 (окисленная хинонная форма) или SkQ3H₂ (восстановленная хинольная форма)
7. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I представляет собой SkQRB (окисленная хинонная форма) или SkQRBH₂ (восстановленная хинольная форма)
8. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I представляет собой SkQB1 (окисленная хинонная форма)

- 20 031399 или SkQB1H₂ (восстановленная хинольная форма)
9. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение формулы I представляет собой SkQBP1 (окисленная хинонная форма) или SkQBP1H₂ (восстановленная хинольная форма)

ОН
10. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой растворителем является пропиленгликоль в концентрации 50%.
11. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой растворителем является глицерин.
12. Фармацевтическая композиция по п.1, где растворителем является этанол.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение общей формулы где A является антиоксидантом формулы

0>

или его восстановленной (хинольной) формой, где m является целым числом от 1 до 3;

Y является метилом;

L представляет собой связующую группу, включающую: а) прямую или разветвленную углеводородную цепь, незамещенную или замещенную одной или несколькими двойными или тройными связями, или простой эфирной или сложноэфирной связью, или C-S, или S-S, или пептидной связью; и которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, предпочтительно выбранными из алкильной, алкоксильной, галогеновой групп, кетогрупп, аминогрупп; или б) природную изопреновую цепь;

n представляет собой целое число от 1 до 20;

B представляет собой направляющую группу и включает: а) ион Скулачева Sk (Sk⁺ Z^-), где Sk является липофильным катионом или липофильным металлопорфирином, a Z представляет собой фармацевтически приемлемый анион; в окисленной или восстановленной форме; от 1 до 200 мол.экв. антиоксидантного агента, способного восстанавливать окисленную форму этого соединения; фармацевтически

- 21 031399 приемлемый носитель.
14. Фармацевтическая композиция по п.13, в которой антиоксидантным агентом является аскорбиновая кислота.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, в которой фармацевтически приемлемым носителем является сорбит, глюкоза и/или стеарат магния.
16. Способ лечения диабета I или II типа, включающий пероральное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по пп.1-15.
17. Способ по п.16, в котором диабет типа II лечат составом, содержащим SkQ1H₂, аскорбиновую кислоту и сорбит.
18. Способ лечения кожных ран, включающий пероральное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по пп.1-15.
19. Способ по п.16, где композиция содержит SkQ1 в 20% глицерине.
20. Способ лечения воспалительных заболеваний, включающий пероральное введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по пп.1-15.
21. Способ по п.20, где воспалительным заболеванием является артрит.
22. Способ по п.21, где композиция содержит SkQ1 в 20% глицерине.