EA023804B1

EA023804B1 - Оксабициклогептаны, их получение и применение

Info

Publication number: EA023804B1
Application number: EA200970737A
Authority: EA
Inventors: Джон С. Ковач; Френсис Джонсон
Original assignee: Ликсте Байотекнолоджи, Инк.
Priority date: 2007-02-06
Filing date: 2008-02-06
Publication date: 2016-07-29
Also published as: US20150045373A1; WO2008097561A8; US20090036309A1; CA2676422A1; CN101662939A; AU2008214299A1; MX2009008347A; EA200970737A1; US20120270736A1; BRPI0806365A2; US9079917B2; BRPI0806365B8; CN103788108A; EP2124550A1; US20170369503A1; WO2008097561A1; AU2008214299B2; US20180370983A1; US8822461B2; EP2124550B1

Abstract

Изобретение предлагает соединения, имеющие структурыгде связь α отсутствует, а определения радикалов указаны в формуле изобретения, которые можно использовать для лечения опухолей. Изобретение также относится к способу получения указанных соединений. Кроме того, изобретение касается фармацевтической композиции, включающей указанные выше соединения, обладающей протеинфосфотазной активностью и предназначенной для лечения рака. Изобретение раскрывает также применение данных соединений в получении лекарственных средств для лечения рака.

Description

(57) Изобретение предлагает соединения, имеющие структуры

где связь а отсутствует, а определения радикалов указаны в формуле изобретения, которые можно использовать для лечения опухолей. Изобретение также относится к способу получения указанных соединений. Кроме того, изобретение касается фармацевтической композиции, включающей указанные выше соединения, обладающей протеинфосфотазной активностью и предназначенной для лечения рака. Изобретение раскрывает также применение данных соединений в получении лекарственных средств для лечения рака.

В данной заявке приводятся ссылки на некоторые публикации. Полное описание данных публикаций можно найти в разделе, непосредственно предшествующем формуле изобретения. Таким образом, раскрытие указанных публикаций во всей полноте включено в данную заявку в качестве ссылки, чтобы более полно отразить существующий уровень техники в области, к которой относится настоящее изобретение.

Уровень техники изобретения

Исследована возможность терапевтического применения ретиноидов, метаболитов витамина А, против ряда опухолей, включающего глиомы (Уип§ е! а1. (1996)). Ядерный рецепторный сорепрессор (ΝСоК) тесно связан с ретиноидным рецептором и высвобождается при связывании лиганда с рецептором (Вакйеп е! а1. (2004)). Путем предотвращения действия протеинфосфатазы-1 и протеинфосфатазы-2А антифосфатазы повышают уровень фосфорилированной формы Ν-СоК и способствуют его последующему перемещению в цитоплазму (Негтапкоп е! а1. (2002)).

Ингибитор фосфатазы кантаридин обладает противоопухолевой активностью по отношению к раковым заболеваниям печени (гепатомам) и верхней части желудочно-кишечного тракта человека, но является токсичным для мочевыводящих путей (\Уапд. 1989).

Публикация, в которой описано, что кантаридин действует как ингибитор протеинфосфатазы, пробудила более широкий интерес к соединениям с химической структурой данного типа (Ы апб Сак1ба, 1992). Ранее было обнаружено, что более простое родственное соединение и продукт его гидролиза (коммерчески доступный как гербицид эндотал (Епбо!Ьа11)) являются гепатотоксичными (Сга/1аш апб Саыба, 1997). Анализы связывания показывают, что действие некоторых гомологов кантаридина направлено на протеинфосфатазу-2А и не направлено на протеинфосфатазу-1 (Нопкапеп е! а1., 1993; Ы е! а1., 1993).

Из известных соединений данного типа только исходное, кантаридин, и его бис(норметильное) производное, норкантаридин, могут иметь применение в качестве противораковых лекарственных средств, и только норкантаридин используется в качестве противоопухолевого средства (Ткаиег е! а1., 1997).

Несмотря на указанные достижения несколько соединений данного типа подвергают скринингу на противоопухолевую или цитотоксическую активность. В настоящее время существует настоятельная потребность в разработке ингибиторов протеинфосфатаз, которые обладают более эффективным, менее токсичным и более специфичным действием, чем известные, указанные выше, вещества.

Сущность изобретения

Соединение, имеющее структуру

где связь α отсутствует;

К! и К₂ вместе обозначают =О;

К₃ обозначает ОН, О^-, ОК9, 8Н, 8^- или §К9, где К₉ обозначает См₂алкил, С₂₄₂алкенил, С₂₄₂алкинил или С_6-1₀арил; К₄ обозначает

где X обозначает ΝΚι₀ или Ν'Κ|₀Κ,₀, где каждый К₁₀ независимо обозначает Ц-С^алкил, С₂-Ц₂алкенил, С₂-С1₂алкинил, С₆-С1₀арил

К₅ и К₆, взятые вместе, обозначают =О; и каждый К₇ и К₈ независимо обозначает Н, или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения. Соединение, имеющее структуру

- 1 023804

где связь α отсутствует;

К₉ присутствует или отсутствует, а в случае присутствия обозначает Н, Ц-С^алкил, Сг-С^алкенил, Сг-С^алкинил или фенил; и

X обозначает ΝΚ_!0, или ΝΗ+К^, где каждый К₁₀ независимо обозначает Ц-С^алкил, Сг-С^алкенил, Сг-С^алкинил, или соль, цвиттерионы или энантиомер данного соединения.

Соединения настоящего изобретения применяются для лечения рака у субъекта путем введения субъекту эффективного количества соединений данного изобретения.

Краткое описание рисунков

Фиг. 1 - логарифмическая кривая, полученная для глиомной клеточной линии И373, обработанной эндоталом (Епб), тиоангидридом эндотала (ЕТ), норкантаридином (пог-Сап) или соединением 100. Увеличивающиеся дозы соответствуют повышенному ингибированию роста. Планки погрешностей указывают величину 8Ό;

фиг. 2 - ингибирование глиомной клеточной линии И373, обработанной эндоталом (Епб), или соединением 100, или каждым соединением в присутствии или в отсутствие полностью транс-ретиноевой кислоты (АТКА) в течение 7 дней. Отдельная обработка эндоталом и соединением 100 приводит к умеренному ингибированию роста. Сочетание Епб или соединения 100 с АТКА приводит к синергетическому уменьшению клеточного роста. Планки погрешностей указывают величину 8Ό;

фиг. 3 - ингибирование роста клеточной линии рака почки, ИМКС, под действием тиоангидрида эндотала (ЕТ), эндотала (Епб), полностью транс-ретиноевой кислоты (АТКА), трихостатина А (Т8А) и норкантаридина (пог-Сап) в течение 7 дней. Планки погрешностей указывают величину 8Ό;

фиг. 4 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием тиоангидрида эндотала (ЕТ), эндотала (Епб), полностью транс-ретиноевой кислоты (АТКА), трихостатина А (Т8А) и норкантаридина (пог-Сап) в течение 7 дней. Отдельная обработка тиоангидридом эндотала приводит к максимальному ингибированию роста. Планки погрешностей указывают величину 8Ό;

фиг. 5 - ингибирование роста клеточной линии рака молочной железы, МСР-7 путем ингибирования ИМКС под действием тиоангидрида эндотала (ЕТ), эндотала (Епб), полностью транс-ретиноевой кислоты (АТКА), трихостатина А (Т8А) и норкантаридина (пог-Сап) в течение 7 дней. Обработка отдельными дозами эндотала, АТКА и Т8А приводит к ингибированию роста. Планки погрешностей указывают величину 8Ό;

фиг. 6 - логарифмическая кривая, полученная для глиомной клеточной линии И373, обработанной 1-(3-экзокарбокси-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-экзокарбонил)-4-этилпиперазином (соединение 105) в течение трех дней. Увеличивающиеся дозы соответствуют повышенному ингибированию роста;

фиг. 7 - логарифмическая кривая, полученная для человеческой клеточной линии ОВМ И373, обработанной 1-(3-экзокарбокси-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-экзокарбонил)-4-этилпиперазином (соединение 105) в течение трех дней. Увеличивающиеся дозы соответствуют повышенному ингибированию роста;

фиг. 8 - ингибирование роста человеческой клеточной линии ОВМ И373, обработанной соединением 105 в течение семи дней. график демонстрирует ингибирование роста при введении в течение семи дней следующих доз - 1, 2, 5, 10, 50 и 100 мкМ соединения 105, 10 мкМ соединения 100 и контрольной дозы;

фиг. 9 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 105 в течение 7 дней;

фиг. 10 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 102 в течение 7 дней;

фиг. 11 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 101 в течение 7 дней;

фиг. 12 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 103 в течение 7 дней;

фиг. 13 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 104 в течение 7 дней;

фиг. 14 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 106 в течение 7 дней;

фиг. 15 - ингибирование роста глиомной клеточной линии И373 под действием соединения 100 в течение 7 дней;

фиг. 16 - ингибирование роста медуллобластомной клеточной линии ΌΛΟΥ под действием соеди- 2 023804 нения 100 в течение 7 дней;

фиг. 17 - влияние соединения 100 на объем ксенотрансплантата опухоли И87 в течение 26 дней; фиг. 18 - влияние соединения 100 и соединение 102 на объем ксенотрансплантата опухоли ΌΛΟΥ в течение 23 дней;

фиг. 19А - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ΜΌΑ-ΜΒ-231 методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения 1С₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19В - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки НТ-29 методом Се11Т11ет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.'₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19С - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки Νί.Ί-Η460 методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения ГС₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Ό - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ΝΟ-Η522 методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения ГС₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Е - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ΝΟ-Η69 методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения ГС₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Р - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ОХР-209 методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.’₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19О - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки НерО2 методом Се11Т11ет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.'₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Н - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ОУСАК-З методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Σ - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ΡΑΝί.’-1 методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.’₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 191 - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки Όυ-145 методом Се11Т11ет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.'₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19К - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки ΕΝΟΆΡ методом Се11ТПет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.’₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Ь - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки НЬ-60 методом Се11ТПег-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.'₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Μ - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки К-562 методом Се11Т11ет-О1о и обработанная кривая с получением значения Κ.'₅₀ (II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов;

фиг. 19Ν - графическое изображение (I) результатов анализа воздействия соединения 100 и соединения 102 на клетки МОЬТ-4 методом Се11ТПег-О1о и обработанная кривая с получением значения ТС₅₀(II). В секции I также показано влияние 10 мкМ доксорубицина, который используют в качестве положительного контроля. Каждая точка соответствует среднему значению ±§Ό по меньшей мере от трех повторов.

- 3 023804

Подробное описание изобретения

Соединение, имеющее структуру

где связь α отсутствует;

Κι и К₂ вместе обозначают =0;

К₃ является ОН, О, 0К₉, 8Н, 8, 8К₉, где К₉ обозначает С_1-12алкил, С_2-12алкенил, С_2-12алкинил илиС_6-10арил; Кд обозначает

где X обозначает ЫК₁₀ или Ы⁺К₁₀К₁₀, где каждый К₁₀ независимо обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

К₅ и К₆ вместе обозначают =0; и каждый К₇ и К₈ независимо обозначает Н, или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения. Воплощением данного изобретения является соединение структуры

где связь α отсутствует;

К1 и К2 вместе обозначают =0;

К₃ обозначает ОН, О, 0К₉, 8Н, 8 или ЗК₉, где К₉ обозначает С_1-12алкил, С_2-12алкенил, С_2-12алкинил или С_6-10арил; Кд обозначает

где X обозначает МК₁₀ или Ы⁺К₁₀К₁₀, где каждый К₁₀ независимо обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил,

- 4 023804

С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

К₅ и К₆, взятые вместе, обозначают =0;

и каждый К₇ и К₈ обозначает Н, или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения. Изобретение также предлагает соединения, где К₁ и К₂ вместе обозначают =0;

К₃ обозначает 0^- или 0К₉, где К₉ обозначает Н, метил, этил или фенил;

Кд обозначает

где X обозначает ΝΚ₁₀ или Ν+Κ₁₀Κ₁₀, где каждый К₁₀ независимо обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

Κ5 и Κ6 вместе обозначают =0;

и каждый К₇ и К₈ независимо обозначает Н.

Изобретение также предлагает настоящее соединение, где К₃ обозначает О^-. Изобретение также предлагает настоящее соединение, где Кд обозначает где К₁₀ обозначает или где Кд обозначает

где К₁₀ обозначает

или где Кд обозначает

Изобретение также предлагает соединение, где Кд означает

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 104)

- 5 023804

Изобретение также предлагает настоящую композицию, где Кд обозначает

где X обозначает ΝΚ₁₀ или Ν+Κ₁₀Κ₁₀, где каждый К₁₀ независимо обозначает С^С^алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил,

где К₁₀ обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

Изобретение также предлагает настоящее соединение, где Кд обозначает

Изобретение также предлагает настоящее соединение, где Кд обозначает где К₁₀ обозначает

- 6 023804 где Е₁₀ обозначает

Изобретение также предлагает настоящее соединение, где обозначает

Изобретение также предлагает соединение, имеющее структуру

где связь α отсутствует;

Е₉ обозначает С₁-С₁₀алкил, С₂-С₁₀алкенил или фенил;

X обозначает ΝΕ₁₀, или ΝΗ+Ε₁₀, где каждый Е₁₀ независимо обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения. В одном воплощении изобретение предлагает структуру

где связь α отсутствует;

X обозначает ΝΕ₁₀, или N+К₁₀Е₁₀, где каждый Е₁₀ независимо обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения.

Изобретение также предлагает воплощение, в котором

X обозначает ΝΗ+Ε₁₀, где Е₁₀ обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил,

- 7 023804

Изобретение также предлагает воплощение, в котором К.₁₀ обозначает метил. Изобретение также предлагает воплощение, в котором К.₁₀ обозначает

Изобретение также предлагает воплощение, в котором К.₁₀ обозначает

Изобретение также предлагает воплощение, в котором К.₁₀ обозначает этил. В другом воплощении изобретение предлагает структуру

где К₉ обозначает Сыгалкил, Сг-С^алкенил, Сг-С^алкинил, С₆-С1₀арил,

или соль, цвиттерион или энантиомер данного соединения. В другом воплощении данного изобретения К.₁₀ обозначает циклопропил.

В другом воплощении изобретение предлагает структуру

где X обозначает ΝΗ'Β,₀.

где К.₁₀ обозначает См^лкил, С₂-С1₂алкенил, С₂-С1₂алкинил, С₆-С1₀арил,

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 100)

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 102)

- 8 023804

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 101)

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 103)

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 105)

- 9 023804

где X обозначает ΝΡι₀ или ΝΗ К₁₍где К₉ обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил, а К₁₀ обозначает С_1-12алкил, С₂-С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил

В другом воплощении данного изобретения К₁₀ обозначает циклопропил.

В одном воплощении изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 111)

Настоящее изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 106)

Настоящее изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 108)

Настоящее изобретение предлагает соединение, имеющее структуру (соединение 107)

или его соль, энантиомер или цвиттерион.

Изобретение предлагает фармацевтическую композицию, содержащую соединения данного изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение также предлагает способ получения соединения, включающий взаимодействие соединения, имеющего структуру

- 10 023804

включающий:

а) растворение соединения, имеющего структуру

в бензоле и добавление соединения, имеющего структуру

при комнатной температуре с получением соединения, имеющего структуру

Ь) перекристаллизацию продукта, полученного на стадии а), из диметилформамида, с получением целевого соединения.

В одном воплощении растворитель представляет собой диметилформамид (ДМФ) или этанол.

Соединения настоящего изобретения применимы для лечения пациента, страдающего от опухоли, характеризующейся сверхэкспрессией Ν-СоК, данный способ применения включает введение пациенту одного или нескольких соединений данного изобретения, по отдельности или в сочетании с одним или несколькими лигандами рецептора ретиноидов, или с одним или несколькими лигандами гистондеацетилазы, или и с теми и с другими, в каждом случае в количестве, обеспечивающем эффективное лечение пациента.

В одном воплощении соединение выбрано из соединения 100 и соединения 105.

Согласно изобретению лиганд гистондеацетилазы может представлять собой ингибитор, например ингибитор гистондеацетилазы НОАС-3 (гистондеацетилазы-3). Лиганд гистондеацетилазы также может быть выбран из группы, включающей 2-амино-8-оксо-9,10-эпоксидеканоил, 3-(4-ароил-1Н-пиррол-2-ил)Ν-гидрокси-г-пропенамид, АРНА соединение 8, аписидин, аргинина бутират, масляную кислоту, депсипептид, депудецин, НОЛС-3. м-карбоксикоричной кислоты бис-гидроксамид, ^(2-аминофенил)-4-|да(пиридин-3-илметоксикарбонил)аминометил]бензамид, Μδ 275, оксамфиатин, фенилбутират, пироксамид, скриптаид, сиртинол, бутират натрия, пробковая бис-гидроксамовая кислота, субероиланилид гидроксамовой кислоты, трихостатин А, трапоксин А, трапоксин В и вальпроевую кислоту.

Соединения данного изобретения можно использовать в сочетании с соединениями, которые ингибируют фермент гистондеацетилазу (НОАС). Указанные ферменты НОЛС после трансляции модифицируют гистоны (патентная публикация США № 2004/0197888, Агтоиг с1 а1.). Гистоны представляют собой группу белков, которые в эукариотических клетках ассоциируются с ДНК и образуют компактные структуры, называемые хроматин. Такая компактность позволяет большому количеству ДНК располагаться в ядре эукариотической клетки, однако компактная структура хроматина ограничивает доступ факторов транскрипции к ДНК. Ацетилирование гистонов уменьшает компактность хроматина, позволяя факторам транскрипции связываться с ДНК.

Деацетилирование, катализируемое гистондеацетилазами (НОАС), увеличивает компактность хроматина, уменьшая доступность ДНК для факторов транскрипции. Следовательно, ингибиторы гистондеацетилаз предотвращают уплотнение хроматина, позволяя факторам транскрипции связываться с ДНК, и увеличивают экспрессию генов.

В способах применения данного изобретения отношение процента клеток, содержащих Ν-СоК в цитоплазме, к проценту клеток, содержащих Ν-СоК в ядре, соответствует отношению числа более дифференцированных клеток к числу менее дифференцированных клеток в конкретной ткани.

В способе применения данного изобретения опухоли, характеризующиеся сверхэкспрессией Ν-СоК, могут включать глиобластому полиморфную, рак молочной железы, рак ободочной и прямой кишки, мелкоклеточный рак легкого или рак яичника.

Соединения данного изобретения также могут быть применимы для ингибирования роста опухоли,

- 11 023804 характеризующейся сверхэкспрессией Ν-СоК, у пациента, путем введения пациенту одного или нескольких соединений данного изобретения, по отдельности или в сочетании с одним или несколькими лигандами рецептора ретиноидов, с одним или несколькими лигандами гистондеацетилазы, или и с теми и с другими, в каждом случае в количестве, обеспечивающем эффективное воздействие на Ν-СоК, и, как следствие, дифференциацию клеток опухоли, характеризующейся сверхэкспрессией Ν-СоК, и ингибирование роста опухоли пациента.

В одном воплощении соединение выбрано из соединения 100 и соединения 102.

Согласно изобретению отношение процента клеток, содержащих Ν-СоК в цитоплазме, к проценту клеток, содержащих Ν-СоК в ядре, соответствует отношению числа более дифференцированных клеток к числу менее дифференцированных клеток в конкретной ткани.

Опухоли, характеризующиеся сверхэкспрессией Ν-СоК, могут включать глиобластому полиморфную, рак молочной железы, рак ободочной и прямой кишки, мелкоклеточный рак легкого или рак яичника.

Настоящее изобретение также охватывает способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества соединений данного изобретения.

Данное изобретение также охватывает применение соединения для лечения субъекта, страдающего от такого заболевания, как рак молочной железы, рак ободочной кишки, крупноклеточный рак легкого, аденокарцинома легкого, мелкоклеточный рак легкого, рак желудка, рак печени, аденокарцинома яичника, карцинома поджелудочной железы, карцинома простаты, промиелоцитарный лейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз или острый лимфолейкоз, путем введения субъекту терапевтически эффективного количества соединений данного изобретения, обеспечивающего лечение субъекта.

Настоящее изобретение также охватывает применение соединения настоящего изобретения или фармацевтической композиции, включающей соединение, имеющее структуру

или в комбинации с лигандом ретиноидного рецептора для получения лекарственного средства для лечения рака. В данном описании термин цвиттерион относится к соединению, которое является электрически нейтральным, но несет формальные положительные и отрицательные заряды на разных атомах. Цвиттерионы являются полярными, хорошо растворяются в воде и плохо растворяются в большинстве органических растворителей.

К азиридинам относятся органические соединения, содержащие азиридиновую функциональную группу, представляющую собой трехчленный гетероцикл с одной аминогруппой, и две метиленовые группы. Предшественники азиридинильных промежуточных соединений включают соединения, известные специалистам в данной области, которые могут легко получить азиридинильные промежуточные соединения в подходящих условиях.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, могут находиться в рацемической форме или в виде индивидуальных энантиомеров. Энантиомеры можно разделить с помощью известных методов, таких как, например, описанные в Риге аиб АррНей СкетМгу 69, 1469-1474, (1997) ГОРАС.

В данном описании термин сверхэкспрессия Ν-СоК означает, что уровень экспрессии ядерного рецепторного сорепрессора (Ν-СоК) в клетках анализируемой ткани превышает уровень экспрессии ΝСоК в нормальных здоровых клетках ткани такого же типа в аналогичных условиях. Ядерный рецепторный сорепрессор (Ν-СоК) в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой любую молекулу, которая связывается с лигандсвязывающим доменом ДНК-связанного рецептора тиреоидных гормонов (Т₃К) и рецептора ретиноидной кислоты (КАК) (патент США № 6949624, Ыи е1 а1.). Примеры опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией Ν-СоК, могут включать полиморфную глиобластому, рак молочной железы (Муегк е1 а1.), рак ободочной и прямой кишки (Οίαηηίηί апй СауаШш), мелкоклеточную карциному легкого (Аа1ег8 е1 а1.) или рак яичника (Наугйекку е1 а1.).

Термин растворитель в данном описании относится к таким соединениям, как гексаны, бензол, толуол, диэтиловый эфир, хлороформ, метиленхлорид, этилацетат, 1,4-диоксан, вода, ТГФ, ацетон, ацетонитрил, ДМФ, ДМСО, уксусная кислота, н-бутанол, изопропанол, н-пропанол, этанол, метанол, муравьиная кислота, тетрахлорид углерода, бензолтиол, хлорбензол, циклогексантиол, 1диэтиламиноэтанол, этилендихлорид, этиленгликоль, ксилол, 1,1,2,2-тетрахлорэтан, фенол, уксусная кислота, 1-бутанол, 2-бутанол, 2-бутанон, диглим, диметиловый эфир, диоксан, петролейный эфир, (ΝΜΡ) ^метил-2-пирролидинон, гептан, глицерин, НМРА (гексаметилфосфора триамид), МТВЕ (метил третбутиловый эфир), нитрометан, пиридин, 1-пропанол, 2-пропанол и триэтиламин.

Некоторые воплощения раскрываемых соединений могут содержать основную функциональную группу, такую как амино или алкиламино, и, следовательно, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми кислотами, или они могут содержать кислую функцио- 12 023804 нальную группу и, следовательно, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с основаниями. Таким образом, соединения настоящего изобретения могут существовать в виде солевых форм. В данном описании соль представляет собой соль соединения настоящего изобретения, которое было модифицировано путем получения соли с кислотой или основанием. Соль может быть фармацевтически приемлемой. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, без ограничения, соли основных остатков, таких как амины, с минеральными или органическими кислотами; соли кислых остатков, таких как фенолы, с щелочами или органическими основаниями. Соли могут быть получены с использованием органических или неорганических кислот. Такие соли, полученные с использованием кислот, включают хлориды, бромиды, сульфаты, нитраты, фосфаты, сульфонаты, формиаты, тартраты, малеаты, малаты, цитраты, бензоаты, салицилаты, аскорбаты и т.п. Соли фенолятов могут представлять собой соли щелочно-земельных металлов, натрия, калия или лития. В данном аспекте термин фармацевтически приемлемая соль относится к относительно нетоксичным солям соединений настоящего изобретения, полученным в результате добавления неорганических и органических кислот или оснований. Соли могут быть получены ίη δίΐιι в процессе конечного выделения и очистки соединений данного изобретения или в результате отдельного взаимодействия очищенного соединения данного изобретения в виде свободного основания или свободной кислоты с подходящими органическими или неорганическими кислотами или основаниями, с последующим выделением полученной таким образом соли. Примеры солей включают гидробромид, гидрохлорид, сульфат, бисульфат, фосфат, нитрат, ацетат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептонат, лактобионат, лаурилсульфонат и т.п. Описание возможных солей можно найти, например, в Вегде е! а1. (1977) РЬагтасеийса1 8а14к, ί. РЬагт. §сг 66: 1-19.

В данном описании термин терапевтически эффективное количество относится к количеству, достаточному для лечения субъекта, страдающего от заболевания (такого как опухоли, характеризующиеся сверхэкспрессией Ν-СоК), или для уменьшения симптома или осложнения, связанного с заболеванием.

В данном описании термин гербицидно эффективный относится к количеству, достаточному для подавления роста растения, в частности, посредством ингибирования активности растительной фосфатазы 2А.

В данном описании термин лечение относится к замедлению, остановке развития заболевания или к обратному развитию заболевания, в частности, опухоли, характеризующейся сверхэкспрессией Ν-С'оР.

В данном описании подразумевается, что термин алкил включает как разветвленные, так и линейные насыщенные алифатические углеводородные группы, содержащие определенное число атомов углерода. Так, С₁-С_п, как составная часть термина С₁-С_п-алкил, включает группы, содержащие 1, 2, ..., η-1 или η атомов углерода в линейном или разветвленном порядке, и конкретно включает метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил и т.д. Воплощением может служить Ц-С^алкил. Алкокси обозначает алкильную группу, описанную выше, которая присоединяется через кислородный мостик.

Термин алкенил относится к неароматическому углеводородному радикалу, линейному или разветвленному, который содержит по меньшей мере 1 углерод-углеродную двойную связь, и может содержать максимально возможное число неароматических углерод-углеродных двойных связей. Так, С₂-С_п алкенил включает группы, содержащие 1, 2, ..., п-1 или п атомов углерода. Например, С₂С₆алкенил представляет собой алкенильный радикал, который содержит 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода и по меньшей мере 1 углерод-углеродную двойную связь, и в случае С₆ алкенила может содержать, соответственно, например, до 3 углерод-углеродных двойных связей. Алкенильные группы включают этенил, пропенил, бутенил и циклогексенил. Как указано выше в отношении алкила, линейный, разветвленный или циклический фрагмент алкенильной группы может содержать двойные связи и может быть замещенным, если упоминается замещенная алкенильная группа. Воплощением может служить С2С1₂алкенил.

Термин алкинил относится к углеводородному радикалу, линейному или разветвленному, который содержит по меньшей мере 1 углерод-углеродную тройную связь, и может содержать максимально возможное число неароматических углерод-углеродных тройных связей. Так, С2-Сп алкинил включает группы, содержащие 1, 2, ..., п-1 или п атомов углерода. Например, С₂-С₆алкинил представляет собой алкинильный радикал, который содержит 2 или 3 атома углерода и 1 углерод-углеродную тройную связь, или 4 или 5 атомов углерода и до 2 углерод-углеродных тройных связей, или 6 атомов углерода и до 3 углерод-углеродных тройных связей. Алкинильные группы включают этинил, пропинил и бутинил. Как указано выше в отношении алкила, линейный или разветвленный фрагмент алкинильной группы может содержать тройные связи и может быть замещенным, если упоминается замещенная алкинильная группа. Воплощением может служить С2-Спалкинил.

В данном описании термин арил относится к любому стабильному моноциклическому или бициклицескому углеродному циклу, который содержит до 10 атомов в каждом цикле, где по меньшей мере один цикл является ароматическим. Примеры таких арильных фрагментов включают фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инданил, бифенил, фенантрил, антрил или аценафтил. В случаях бициклических арильных заместителей, где один цикл является неароматическим, следует понимать, что присоединение осуществляется через ароматический цикл. Замещенные арилы, входящие в состав данного изобретения, могут содержать в качестве заместителей, присутствующих в любом подходящем положении, амины,

- 13 023804 замещенные амины, алкиламины, гидроксильные группы и алкилгидроксильные группы, где алкильный фрагмент алкиламинов и алкилгидроксильных групп представляет собой С₂-С_палкил, определенный выше. Замещенные амины могут быть замещены алкильными, алкенильными, алкинильными или арильными группами, определенными выше.

Алкильные, алкенильные, алкинильные и арильные заместители могут быть замещенными или незамещенными, если не указано иначе. Например, (С1-С₆)алкил может быть замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из ОН, оксо, галогена, алкокси, диалкиламино или гетероциклила, такого как морфолинил, пиперидинил и т.д.

В соединениях настоящего изобретения алкильные, алкенильные и алкинильные группы могут быть дополнительно замещены путем замены одного или нескольких атомов водорода отличными от водорода группами, описанными в данном документе, в той степени, в какой это возможно. Такие группы включают, без ограничения, галоген, гидрокси, меркапто, амино, карбокси, циано и карбамоил.

Термин замещенный в данном описании означает, что указанная структура имеет заместитель, который может представлять собой алкильную, алкенильную или арильную группу, определенную выше. Подразумевается, что данный термин включает несколько степеней замещения указанным заместителем. Если раскрывается или заявляется несколько замещающих фрагментов, замещенное соединение может быть независимо замещено одним или несколькими раскрываемыми или заявляемыми замещающими фрагментами, один или несколько раз. Под независимым замещением подразумевается, что заместители (два или более) могут быть одинаковыми или разными.

В данном описании введение средства можно осуществлять с помощью любых способов или систем доставки, хорошо известных специалистам в данной области. Введение можно осуществлять, например, перорально, парентерально, внутрибрюшинно, внутривенно, внутрисуставно, чрескожно, подъязычным способом, внутримышечно, ректально, трансбуккально, интраназально, с использованием липосом, посредством ингаляции, вагинально, внутриглазным способом, посредством местной доставки, подкожно, внутрь жировой ткани, внутрисуставно, интратекально, в желудочек мозга, интравентрикулярно, рнутриопухолевым способом, в церебральную паренхиму или внутрь паренхимы.

Можно использовать описанные ниже системы доставки, в которых применяется ряд традиционных фармацевтических носителей, однако они являются только примерами многочисленных систем, пригодных для введения композиций в соответствии с данным изобретением.

Инъецируемые системы доставки лекарственных средств включают растворы, суспензии, гели, микросферы и полимерные системы для инъекций, они могут содержать такие наполнители, как средства, изменяющие растворимость (например, этанол, пропиленгликоль и сахароза), и полимеры (например, поликапролактоны и РЬОА).

Имплантируемые системы включают стержни и диски, они могут содержать такие наполнители, как РЬОА и поликапролактон.

Пероральные системы доставки включают таблетки и капсулы. Они могут содержать такие наполнители, как связующие средства (например, гидроксипропилметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, другие производные целлюлозы и крахмал), разбавители (например, лактоза и другие сахара, крахмал, дикальция фосфат и производные целлюлозы), дезинтегрирующие средства (например, полимеры на основе крахмала и производные целлюлозы) и смазывающие средства (например, стеараты и тальк).

Системы доставки через слизистую оболочку включают пластыри, таблетки, свечи, пессарии, гели и кремы, они могут содержать такие наполнители, как солюбилизаторы и усиливающие средства (например, пропиленгликоль, соли желчных кислот и аминокислоты), а также другие среды (например, полиэтиленгликоль, эфиры и производные жирных кислот, и гидрофильные полимеры, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза и гиалуроновая кислота).

Системы доставки через кожу включают, например, водные и неводные гели, кремы, гетерогенные эмульсии, микроэмульсии, липосомы, мази, водные и неводные растворы, лосьоны, аэрозоли, углеводородные основы и порошки, они могут содержать такие наполнители, как солюбилизаторы, средства, усиливающие проницаемость (например, жирные кислоты, эфиры жирных кислот, жирные спирты и аминокислоты), и гидрофильные полимеры (например, поликарбофил и поливинилпирролидон). В одном воплощении фармацевтически приемлемый носитель представляет собой липосому или средство, усиливающее проницаемость через кожу.

Растворы, суспензии и порошки для преобразуемых систем доставки включают такие среды как суспендирующие средства (например, камеди, ксантаны, производные целлюлозы и сахара), увлажнители (например, сорбит), солюбилизаторы (например, этанол, вода, РЕО и пропиленгликоль), поверхностно-активные вещества (например, лаурилсульфат натрия, §рап8, Т\\ееп5 и цетилпиридин), консерванты и антиоксиданты (например, парабены, витамины Е и С и аскорбиновая кислота), средства, предотвращающие спекание, глазировочные средства и хелатирующие средства (например, ΕΌΤΑ).

Следует понимать, что рядовой специалист в данной области может выбрать заместители и характер замещения соединений настоящего изобретения так, чтобы получить химически стабильные соединения, которые можно легко синтезировать с помощью известных в данной области способов, а также с помощью описанных ниже способов, из легкодоступных исходных веществ. Если заместитель, в свою очередь, заме- 14 023804 щен несколькими группами, следует понимать, что эти несколько групп могут находиться на одном атоме углерода, или на разных атомах углерода, при условии, что образуется стабильная структура.

Обсуждение.

Авторы обнаружили, что белком, экспрессирующимся в клетках полиморфной глиобластомы (ОВМ) на более высоком уровне, чем в нормальных клетках мозга, является ядерный рецепторный сорепрессор (Ν-СоК), регулятор пула нормальных невральных стволовых клеток. Экспрессию Ν-СоК в клетках ОВМ анализируют методами иммуногистохимии и вестерн-блоттинга.

Ν-СоК экспрессируется в ядрах невральных стволовых клеток (Ν§Ο) (Негтапкоп е! а1. (2002)). После фосфатидилинозитол-3-ОН-киназа/АкП-киназазависимого фосфорилирования Ν-СоК перемещается в цитоплазму, что приводит к дифференциации №С в астроциты. Следовательно, удерживание Ν-СоК в ядре необходимо для поддержания №С в недифференцированном состоянии (Негтапкоп е! а1.). Аналогично СП 133+ N§0 обнаруженным в развивающемся мозге, в клетках ОВМ идентифицированы стволовые клетки опухоли мозга (ВТ§С), несущие СЭ133 (ИсПба е( а1, (2000); аиб §шдИ е( а1. (2003)). ВТ§С способны к пролиферации, самообновлению и пролиферации. ВТ§С, но не СЭ133-дифференцированные опухолевые клетки, приводят к развитию опухолей после трансплантации ксенотрансплантата (§шдИ е! а1. (2004)).

Терапевтическое действие ретиноидов, метаболитов витамина А, анализируют на ряде опухолей, в том числе на глиомах (Уипд е! а1. (1996)). Ν-СоК тесно связан с рецептором ретиноидов и высвобождается при связывании лиганда с рецептором (ВакИеп е! а1. (2004)). Авторы настоящего изобретения предполагают, что влияние ретиноидов на злокачественные глиомы может заключаться в индукции дифференциации путем связывания ретиноидов с ретиноидным рецептором с последующей диссоциацией комплекса Ν-СоК/рецептор ретиноидов и перемещением Ν-СоК в цитоплазму. Этот механизм позволяет объяснить наблюдаемое ранее увеличение экспрессии ОТАР в глиомной клеточной линии (И343 МО-А), обработанной ретиноидами (Кибка е! а1. (1988)). Чтобы подтвердить указанное предположение, авторы воздействуют на два разных участка пути Ν-СоК, по отдельности или одновременно, путем обработки клеточной линии ОВМ И343 МО-А с помощью 50 мкМ ретиноевой кислоты (КА) и/или 10 нМ окадаевой кислоты (ОА), ингибитора протеинфосфатазы-1 и протеинфосфатазы-2А. Путем предотвращения действия протеинфосфатазы-1 и протеинфосфатазы-2А окадаевая кислота повышает уровень фосфорилированной формы Ν-СоК и стимулирует его последующее перемещение в цитоплазму (Негтапкоп е! а1. (2002)).

Клеточную линию И343 МО-А получают из банка тканей центра исследования опухолей мозга Калифорнийского университета Сан-Франциско (ИС§Р) (Итуегкйу о! СаИТогша, §ап Ргапшксо, НеаИИ §с1епсек Аек! Ъиббтд, §ап Ргапшксо, СаИТогша 94143-0520). Клеточные линии И343 и И87 также можно получить от ЕРО-ОтЪН, КоЪег(-Кокк1е-§(г.10, 13092 ВегИп-ВисИ, Оегтапу.

Некоторые молекулы, которые обладают активностью против РР2А, действуют синергетически с ретиноидными кислотами, ингибируя рост клеток опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией ΝСоК, т уйго. Наиболее эффективную группу ингибиторов фосфатазы, действующих синергетически с ретиноидными кислотами, которые были идентифицированы как аналоги старого терапевтического средства, милабриса, получают из измельченных телец шпанской мушки, где основным активным средством является кантаридин, известный эффективный ингибитор РР2А (Аапд, 1989; Репд е! а1., 2002).

Кантаридин обладает противоопухолевой активностью в отношении рака печени (гепатомы) и верхнего желудочно-кишечного тракта человека, однако является токсичным для мочевыводящих путей (Аапд, 1989). Норкантаридин, деметилированный кантаридин, сохраняет противоопухолевую активность кантаридина против гепатом и рака желудка и пищевода, однако его токсичное действие на мочевыводящие пути является низким или отсутствует. Норкантаридин также стимулирует продукцию белых кровяных клеток у пациентов и мышей, механизм данного явления не ясен, однако он оказывает фармакологическое действие как противораковое средство, вызывая потенциальное улучшение (Аапд е! а1., 1986; Аапд, 1989).

Опубликование сообщения, что кантаридин действует как ингибитор протеинфосфатаз, пробудило более широкий интерес к соединениям с химической структурой данного типа (Ы апб Сааба, 1992). Ранее было обнаружено, что более простое соединение данного класса и продукт его гидролиза (коммерчески доступный как гербицид эндотал) обладают гепатотоксическим действием (Ога/1апо апб Сааба, 1997). Первичными мишенями в печени являются протеинфосфатазы РР2А и РР1, причем значения ЕЭ₅₀всех соединений находятся на микромолярном уровне. Анализы связывания показали, что действие некоторых гомологов кантаридина направлено непосредственно на РР2А и опосредованно на РР1 (Нопкапеп е! а1., 1993; Ы е! а1., 1993). Данные соединения воздействуют на фосфатазу РР1В только на миллимолярном уровне, а на фермент РР2С совсем не оказывают влияния.

Ранее были синтезированы некоторые аналоги кантаридина, которые анализировали на антифосфатазную активность и способность ингибировать рост раковых клеток в культуре (§акоТТ апб МсС1икку, 2004; Наг! е!, а1., 2004). Некоторые из тестированных ранее модифицированных молекул норкантаридина ингибируют рост некоторых клеточных линий опухолей человека. Активность аналогов норкантаридина по отношению к клеткам опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией Ν-СоК, или активность нор- 15 023804 кантаридинов в сочетании с другими потенциальными противоопухолевыми средствами не анализировали. В других исследованиях анализировали активность 16 модифицированных норкантаридинов по отношению к клеточным линиям опухолей человека, включающим опухоли яичников, почек, ободочной и прямой кишки и легких, а также к линии мышиных лейкемических клеток. Ни одно производное не было таким же активным, как кантаридин или норкантаридин, и ни одно не анализировали на активность в сочетании с другим противоопухолевым средством (МсС1и8кеу с1 а1., публикация патентной заявки США № 2006/0030616, 2006).

Ранее синтезировали разные серии аналогов кантаридина и анализировали их пестицидную активность и противоопухолевую активность по отношению к раковым клеточным линиям. Были разработаны сорок три аналога эндотала и кантаридина, которые анализировали на гербицидную активность и способность вызывать летальный исход у мышей (Ма15и/а\\а е1 а1., 1987). Показано, что тиоангидрид эндотала является более эффективным гербицидом, чем эндотал, однако он обладает токсичным действием на печень мышей (Ма1ы.1/а\уа е1 а1., 1987; Ка\уатига е1 а1., 1990).

Позже было обнаружено, что тиоангидрид эндотала обладает активностью против РР2А и РР1 ίη νίνο (Ετάοάί е1 а1., 1995). Эндотал и тиоангидрид эндотала подобно кантаридину ингибируют активность РР2А и, в некоторой степени, активность РР1 (Ετάοάί е1 а1., 1995). В печени основной мишенью является РР1. В фибробластах только тиоангидрид эндотала вызывает заметные морфологические изменения, а кантаридин и эндотал не вызывают (Ετάοάί е1 а1., 1995). Полагают, что увеличение активности тиоангидрида эндотала ίη νίνο связано с его повышенной липофильностью, приводящей к увеличению диффузии через клеточную мембрану (Е88ег8 е1 а1., 2001). В более поздней публикации описан синтез моно- и дифтораналогов эндотала, а также соответствующих ангидридов, однако данная синтетическая работа не сопровождается фармакологическими анализами (Е88ег8 е1 а1., 2001).

Из известных соединений данного типа только кантаридин и его бис(норметильное) производное, норкантаридин, применяются в качестве противораковых лекарственных средств, и только норкантаридин применяется в качестве противоопухолевого средства (Ткаиег е1 а1., 1997).

Авторы данного изобретения полагают, что при разработке новых лекарственных средств в данной области необходимо уделять внимание ингибиторам, обладающим более высокой специфичностью, особенно по отношению к ферментам, которые активно участвуют в процессах размножения раковых клеток. Высокая специфичность позволяет избежать воздействия на мишени, необходимые для функционирования нормальных клеток. С точки зрения физических характеристик новое лекарственное средство должно обладать хорошей мембранной проницаемостью (т.е. значение 1ο§ Р должно находиться в интервале от 2 до 4 единиц).

Описанные в данном документе соединения являются антагонистами фосфатазы 2А и фосфатазы 1. Авторы настоящего изобретения утверждают, что по меньшей мере соединения 100, 105 и 102 эффективно ингибируют рост клеток опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией Ν-СоК Соединения 100 и 105 имеют преимущества по сравнению с другими гомологами кантаридина, поскольку они существуют в виде цвиттерионов и, как следствие, растворимы в воде и стабильны при кислых значениях рН, т.е. обладают свойствами, желательными для пероральных лекарственных средств. Соединение 102 является жирорастворимым и, следовательно, обладает более высокой способностью преодолевать гематоэнцефалитический барьер, чем соединения 100 и 105. Данное свойство имеет большое значение при лечении таких опухолей, как полиморфная глиобластома.

На фиг. 1 показано, что соединение 100, норкантаридин (ηοτ-Сап), эндотал (Εηά) и тиоангидрид эндотала (ЕТ) способны ингибировать рост СВМ ίη νίνο в дозозависимой манере.

Из графиков зависимости роста клеточной линии И373 полиморфной глиобластомы СВМ (которую можно получить от подразделения Национального института неврологических заболеваний и молекулярного патогенеза инсульта, строение 10, офис 5 Ό37, Национальные институты здоровья, 900 ΚοαΚνΠΚ Р1ке, ВеШекка. Магу-кик, 20892) от воздействия разных доз лекарственного средства в течение 7 дней, определяют концентрацию каждого соединения, которая вызывает 50% ингибирование пролиферации клеток опухоли мозга (1С₅₀). Как показано на фиг. 1, значения 1С₅₀, выраженные в микромолях (мкМ), составляют 2,5, 3,0, 12,0 и 15,0 для тиоангидрида эндотала, соединения 100, норканткаридина и эндотала соответственно. Молярные соотношения демонстрируют, что соединение 100 является эффективным ингибитором СВМ ίη νίίτο.

В сочетании с антифосфатазами ретиноиды синергетически ингибируют пролиферацию клеток полиморфной глиобластомы. Считается, что синергизм (взаимное усиление) ингибирующей активности двух лекарственных средств имеет место, если процент выживания в присутствии двух лекарственных средств выше, чем сумма процентов выживания при воздействии двух лекарственных средств, используемых по отдельности в таких же дозах, что и в сочетании.

Дополнительно анализируют ингибирующую активность соединения 100 в сочетании с ретиноидами, а также индивидуально. Как показано на фиг. 2, сочетание соединения 100 с полностью трансретиноевой кислотой (АТКА) оказывает синергетическое действие на рост клеток, уменьшая его.

Ожидаемый процент выживания клеток И373 после воздействия сочетания АТКА и Εηά составляет 50% (77% после воздействия АТКА х 65% после воздействия Εηά = 50%), тогда как наблюдаемый про- 16 023804 цент выживания составляет 32%. Ожидаемый процент выживания в присутствии сочетания АТКА и соединения 100 составляет 60% (77% после воздействия АТКА х 78% после воздействия соединения 100 = 60%), тогда как наблюдаемый процент выживания составляет 53%.

Чтобы определить, являются ли ингибирующие свойства ингибиторов РР2А, ретиноевой кислоты и трихостатина А специфичными для определенного типа опухолей, авторы анализируют их ингибирующее действие по отношению к линии ОВМ И373, линии рака молочной железы, МСР-7 (полученной от АТСС) и клеточной линии рака почки, ИМКС (ИМКС получены Όγ. Ζΐηιαηβ. ΝΙΝΌδ, ΝΙΗ в рамках программы поддержки интрамуральных исследований, §А1С, Национального института рака, Научноисследовательского центра Фредерика по изучению рака).

Клеточная линия рака почки, ИМКС (фиг. 3) является менее чувствительной, чем линия опухоли мозга, И373 (фиг. 4), тогда как линия рака молочной железы, МСР-7 (фиг. 5) является такой же чувствительной, как и И373, к полностью транс-ретиноевой кислоте, тиоангидриду эндотала, норкантаридину, эндоталу и трихостатину А. Существует некоторая специфичность данных лекарственных средств к клеткам ОВМ. Активность лекарственных средств, направленная против клеток МСР-7, свидетельствует о том, что режимы, разработанные для лечения опухолей мозга, также можно использовать для лечения рака молочной железы и других опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией Ν-СоК.

Авторы настоящего изобретения продемонстрировали, что соединение 100 оказывает такое же ингибирующее действие при лечении рака молочной железы и других опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией Ν-СоК, вследствие структурного подобия соединения 100 эндоталу, при лечении полиморфной глиобластомы данные соединения также оказывают похожее действие.

Эндотал также известен как активный дефолиант и эффективный контактный гербицид, часто используемый в сельском хозяйстве. Он также считается эффективным предуборочным десикантом и селективным довсходовым гербицидом (Сгайз, 1953).

Эндотал, норкантаридины и кантаридин, все, являются хорошо известными ингибиторами протеинфосфатаз млекопитающих, а также эффективными гербицидами (Ма15и/а\\а с1 а1., 1987). Экстенсивные исследования механизма, посредством которого осуществляется высокая гербицидная активность эндотала и других гомологов, не проводились, несмотря на что, что эндотал широко используется в сельском хозяйстве разных стран. Следует отметить, что эндотал растворим в воде, а кантаридин и норкантаридин - нет.

Полагают, что активность эндотала как контактного гербицида и дефолианта связана с известной раздражающей токсичностью исходного соединения, норкантаридина. Однако более поздние исследования позволяют предположить, что гербицидная активность эндотала в первую очередь может зависеть от активности, направленной против растительных протеинфосфатаз (РР2А). Ы с1 а1. (1993) показали, что кантаридин и эндотал ингибируют РР2А и РР1 листьев шпината, кроме того, в интактных листьях шпината они ингибируют активацию нитратредуктазы под действием света, опосредуемую РР2А. διηίΐΐι с1 а1. (1994) продемонстрировали, что не имеющие структурного сходства ингибиторы протеинфосфатаз окадаевая кислота и каликулин-А в наномолярных концентрациях эффективно ингибируют рост некоторых растений. Активность окадаевой кислоты и каликулина-А убедительно доказывает, что активность эндотала как гербицида обусловлена его антифосфатазной активностью.

Вазкш апй ХУПюп (1997) показали, что ингибиторы серинтреонинпротеинфосфатаз, в том числе кантаридин, ингибируют формирование растительных микротрубочек. ЛуауФп с1 а1. (2000) показали, что эндотал ингибирует активность РР2А, вызывая изменение клеточного деления у культивируемых клеток люцерны. Они отмечают, что эндотал способен проникать в клетку.

Подобно эндоталу соединения 100 и 105 являются водорастворимыми. Однако в отличие от эндотала, который представляет собой двухосновную кислоту, соединения 100 и 105 могут находиться в виде цвиттерионов. Тот факт, что соединения, раскрываемые в данном описании, такие как соединение 100, ингибируют рост раковых клеток млекопитающих более эффективно, чем эндотал, можно объяснить тем, что цвиттерионы лучше проникают через клеточную мембрану, чем двухосновные кислоты. Соединения 100 и 105 являются более активными гербицидами в молярном отношении, поскольку они лучше проникают через клеточную мембрану. Кроме того, соединения 100 и 105 в виде цвиттерионов являются менее токсичными для лиц, поставляющих и применяющих гербицид, а также для лиц, случайно подвергающихся воздействию данного средства. Соединения 100 и 105 не имеют кислых свойств эндотала.

Таким образом, описываемые в данном документе соединения, в том числе соединения 100 и 105, представляют собой эффективные, коммерчески доступные и безопасные как для человека, так и для окружающей среды, гербициды.

Экспериментальная часть

Материалы и способы.

Получение ангидрида эндотала.

- 17 023804

Как показано на схеме 1, авторы получают ангидрид эндотала путем добавления уксусного ангидрида (0,5 мл) (4) к суспензии эндотала (186 мг) (3) в бензоле (3 мл), после чего смесь перемешивают до растворения твердого вещества (2 ч). Раствор нагревают в вакууме, чтобы удалить бензол и затем остаток нагревают при 80°С в течение 30 мин. После добавления петролейного эфира (5 мл) происходит спонтанная кристаллизация целевого ангидрида. Продукт удаляют фильтрацией, промывая небольшим количеством петролейного эфира, и получают чистый продукт (85 мг), который сразу используют на двух следующих стадиях получения.

Получение 4-метилпиперазинмоноамида эндотала (ЕМРМ) (соединение 100)

Ангидрид эндотала (85 мг) (5), полученный по описанному выше способу, растворяют в бензоле (2 мл) и одной порцией добавляют Ν-метилпиперазин (60 мг) (6) при комнатной температуре. Почти сразу появляется белое кристаллическое вещество. Смесь оставляют при комнатной температуре в течение ночи, затем продукт удаляют фильтрацией, промывая небольшим количеством бензола, и сушат (145 мг). Масс-спектр отрицательных ионов содержит исходный ион с т/ζ 267 (теор. 267), подтверждающий, что молекулярная масса составляет 268 единиц массы. Продукт перекристаллизовывают из горячего ДМФ, получая 95 мг чистого моноамида, соединение 100 (1), т.пл. 226-227°С, с некоторым разложением, начинающимся при 224°С. Спектр ¹Н ЯМР натриевой соли соединения 100 подтверждает структуру. Натриевая соль. ¹Н ЯМР (ϋ₂0): (ϋ₂0): 1,41-1,70 (м, 4Н), 2,18 (с, 3Н), 2,21-2,55 (м, 4Н), 2,92 (д, 1Н), 3,17 (д, 1Н), 3,22-3,40 (м, 2Н), 3,45 (м, 2Н), 4,60 (кв, 1Н), 4,78 (кв, 1Н). Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 100, выраженные в отношении массы к заряду ионов, включают пики 141, 167, 254, 199 и 185 т/ζ, соответствующие отрицательно заряженным фрагментам (табл. 1).

Получение 4-этилпиперазинмоноамида эндотала (ЕЕРМ) (соединение 105).

Ангидрид эндотала (1,68 г; 10 ммоль) и Ν-этилпиперазин (3,42 г; 30 ммоль) добавляют к 10 мл толуола и нагревают с обратным холодильником в течение 18 ч. Затем растворитель упаривают при пониженном давлении и остаток кристаллизуют из метил-трет-бутилового эфира с получением неочищенного продукта (1,8 г). После перекристаллизации из того же растворителя получают всего 1,2 г (выход 42,5%) в двух порциях, т.пл. 215-218°С (с разложением). Спектр ¹Н ЯМР натриевой соли в ϋ20 и МС-спектр отрицательных ионов подтверждают структуру и молекулярную массу (т/ζ 282,2 ат§) соответственно. Натриевая соль. ¹Н ЯМР (ϋ20): 0,95 (т, 3Н), 1,42-1,65 (м, 4Н), 2,20-2,42 (м, 4Н), 2,43-2,55 (м, 2Н), 2,93 (д, 1Н), 3,08 (д, 1Н), 3,20-3,33 (м, 2Н), 3,42-3,58 (м, 2Н), 4,45 (кв, 1Н), 4,75 (кв, 1Н). МС-спектр содержит пик с т/ζ 563,3 атз, указывающий на присутствие ассоциированного димера, который может образовываться в случае цвиттериона. Кроме того, присутствует следовое количество эндотала (МС т/ζ 185 атз), однако в спектре ЯМР это не проявляется. Масс-спектр отрицательных ионов содержит исходный ион с 282,2 т/ζ (теор. 282,2), подтверждающий, что молекулярная масса составляет 282,2 единиц массы.

Получение 4-(3-карбокси-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-карбонил)пиперазин-1-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира (соединение 102)

Толуол

- О о вос

СО₂Н г~\

1^ Ν—ВОС

Ангидрид эндотала (1) (500 мг, 3 ммоль) и ^В0С-пиперазин (2) (1,86 г, 10 ммоль) добавляют к сухому толуолу (8 мл) и нагревают при 100-110°С в течение 8 ч. Растворитель удаляют на роторном испарителе и к остатку добавляют смесь 10% водного раствора лимонной кислоты (20 мл) и этилацетат (20 мл). Отделенное твердое вещество (соединение 102) (3) фильтруют, промывают гексаном и сушат в вакууме. Выход 500 мг (47%). Т.пл. 206-208°С. Масс-спектр и результаты ’Н ЯМР подтверждают структуру соединения 102. Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 102, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики 141,1, 185 и 354 т/ζ. ’Н ЯМР (ДМСО-б₆): 1,42 (с, 9Н), 1,451,72 (м, 4Н), 3,02-3,15 (д, 1Н), 3,20-3,55 (м, 9Н), 4,65-4,70 (м, 2Н).

- 18 023804

Получение 3-{1-[2-(4-Метоксифенил)этил]пиперидин-4-илкарбамоил}-7-оксабицикло[2.2.1]-гептан2-карбоновой кислоты (соединение 104)

О ,

Ангидрид эндотала (1) (500 мг, 3 ммоль) и амин (4) (2,34 г, 10 ммоль) добавляют к сухому толуолу (8 мл) и нагревают при 100°С в течение 20 ч. Затем растворитель упаривают при пониженном давлении, остаток помещают в воду и раствор подкисляют разбавленной НС1 с получением значения рН от 5,5 до 6. Твердое вещество фильтруют и перекристаллизовывают из метанола, получая чистое соединение (5) (соединение 104). Выход 450 мг (36%). Т.пл. 140-142°С. Масс-спектр и результаты ¹Н ЯМР подтверждают структуру соединения 104. Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 104, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики при 385. ¹Н ЯМР: (СОС1₃): 1,48-1,65 (м, 4Н), 1,78-1,95 (м, 2Н), 1,98-2,15 (т, 2Н), 2,40-2,60 (м, 4Н), 2,68-2,78 (м, 2Н), 2,80 (с, 2Н), 3,02-3,15 (д, 2Н), 3,78 (с, 3Н), 3,82-3,98 (м, 1Н), 4,82-4,88 (м, 2Н), 6,78-6,82 (д, 2Н), 7,09-7,12 (д, 2Н).

Получение 3 -(4-бензилпиперазин-1 -карбонил)-7 -оксабицикло [2.2.1] гептан-2-карбоновой кислоты (соединение 103).

Данное соединение получают в 3 стадии, начиная с ангидрида эндотала (1), как показано ниже на схеме 1а.

Стадия 1. Получение монометилового эфира 7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2,3-дикарбоновой кислоты.

Ангидрид эндотала (1) (4 г, 24 ммоль) нагревают с обратным холодильником в сухом метаноле (20 мл) в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, твердое вещество (6) отделяют, фильтруют и кристаллизуют из метанола. Выход 4,6 г (96%). Т.пл. 114-146°С.

Стадия 2. Получение метилового эфира 3-(4-бензилпиперазин-1-карбонил)-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (8).

К смеси кислого производного (6) (2,6 г, 13 ммоль) в метиленхлориде (40 мл) добавляют ЕЭС-НО (2,75 г, 15 ммоль) и затем Н0В1 (150 мг). Смесь перемешивают 10 мин при комнатной температуре, после чего добавляют Ν-бензилпиперазин (7) (1,76 г) и затем ΌΙΡΕΑ (3,5 мл, 20 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем к реакционной смеси добавляют воду, метиленхлоридный слой отделяют, промывают один раз водным раствором Ν;·ιΗί'.Ό₃. сушат над Ν;·ιδ0.·|. фильтруют и концентрируют. Неочищенный остаток очищают колоночной хроматографией, используя 1-2% метанол в метиленхлориде в качестве элюента, и получают чистое целевое вещество (8). Выход 2,7 г (58%).

Стадия 3. Получение 3-(4-бензилпиперазин-1-карбонил)-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (соединение 103).

К раствору сложного эфира (8) (2,50 г, 7 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляют водный раствор Να0Η (360 мг растворяют в 5 мл воды) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем растворитель упаривают досуха, добавляют воду (20 мл) и доводят рН раствора до 5, используя 6н. НС1. Затем раствор упаривают досуха и добавляют метиленхлорид (30 мл). Остаток твердого №С1 удаляют фильтрацией, после чего фильтрат концентрируют. Полученное твердое вещество перетирают с изопропиловым эфиром и получают чистую кислоту (9) (соединение 103). Выход 1,8 г (75%). Т.пл. > 190°С (разл.). Масс-спектр и результаты ’Н ЯМР подтверждают структуру соединения 103. ’Н ЯМР (СБС1₃): 1,45-1,84 (м, 4Н), 2,45-2,68 (м, 2Н), 2,75-2,95 (м, 2Н), 3,12-3,35 (м, 2Н), 3,38-3,55 (м, 2Н), 3,603,80 (м, 2Н), 3,95-4,20 (м, 2Н), 4,75-4,85 (м, 2Н), 7,40 (с, 5Н). Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 103, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики 177,2 т/ζ, 345 т/ζ и 711 т/ζ.

- 19 023804

Получение 3-(пиперазин-1-карбонил)-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (соединение 101)

Ν-Бензилзащищенную кислоту (9) (500 мг, 1,45 ммоль) в метаноле гидратируют, используя водород из баллона над катализатором Рб/С (5%, 50 мг) при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют, чтобы удалить катализатор, и концентрируют досуха. Неочищенный остаток кристаллизуют из 2-пропанола, получая амин (10) (соединение 101) в виде чистого белого твердого вещества. Выход 215 мг (58%). Т.пл. >240°С (разл.). Масс-спектр и результаты ¹Н ЯМР подтверждают структуру соединения 101. ¹Н ЯМР: (СПС1₃-СП₃ОП): 1,42-1,78 (м, 4Н), 2,92-3,15 (м, 8Н), 3,52-3,82 (м, 2Н), 4,58 (кв, 1Н), 4,78 (кв, 1Н). Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 101, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики 177,2, 255,2, 277,2 и 318,2 т/ζ.

Получение соли 3-(пиперазин-1-карбонил)-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-карботионовой кислоты и Ν-метилпиперазина (соединение 108)

Тиоангидрид эндотала (11) (552 мг, 3 ммоль) и Ν-метилпиперазин (12) (1 г, 10 ммоль) добавляют к сухому толуолу (10 мл) и нагревают с обратным холодильником в течение 2,5 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, после чего твердое вещество отделяют, фильтруют и кристаллизуют из смеси метиленхлорид/этилацетат, получая чистое целевое соединение (13) (соединение 108). Выход 585 мг (51%), т.пл. >180°С (разл.). Масс-спектр и результаты ¹Н ЯМР подтверждают структуру соединения 108. ¹Н ЯМР (СИС1₃): 1,52-1,56 (м, 2Н), 1,82-1,85 (м, 2Н), 2,27 (с, 3Н), 2,28-2,42 (м, 11Н), 3,01 (с, 3Н), 3,28-3,36 (м, 2Н), 3, 42-3,49(м, 4Н), 3,60-3,78 (м, 2Н), 4,89-4,91 (м, 2Н). Результаты массспектрометрического анализа соединения 108, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики 217 т/ζ, 251 т/ζ и 351 т/ζ.

Получение метилового эфира 3-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-7-оксабицикло[2.2.1]-2-карбоновой кислоты (соединение 107)

К суспензии производного кислоты (14) (536 мг, 2 ммоль) в метиленхлориде добавляют тионилхлорид (0,5 мл) и затем 2 капли ДМФ. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Она представляет собой суспензию соли хлористоводородной кислоты и хлорангидрида. Добавляют сухой метанол (10 мл), перемешивают 30 мин и упаривают досуха с помощью роторного испарителя. К остатку добавляют воду (20 мл) и экстрагируют этилацетатом (20 мл). рН водного слоя доводят до 4,5 с помощью водного раствора NаНСО₃ (10%) и упаривают досуха. Остаток подвергают азеотропной перегонке с ацетонитрилом. Затем его снова растворяют в ацетонитриле, после чего выделившийся №С1 удаляют фильтрацией. Фильтрат упаривают досуха и перетирают с этилацетатом, получая липкое твердое вещество, которое сушат в вакуумной печи, получая целевое соединение в виде бесцветного твердого вещества (15) (соединение 107). Выход 140 мг (25%, т.пл. 105-107°С). Результаты ¹Н ЯМР согласуются с предполагаемым спектром соединения 107. ¹Н ЯМР Ш₂О): 1,49-1,53 (м, 2Н), 1,60-1,64 (м, 2Н), 2,8 (с, 3Н), 2,96-3,36 (м, 10Н), 3,52 (с, 3Н), 4,84-4,86 (м, 2Н). Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 107, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики при 123, 183, 251 и 283 т/ζ.

Получение 1-Ш-(3-экзокарбокси-7-оксабицикло[2.2.1]гептан-2-экзокарбонил)амино-2-Шда диметил)аминоэтана (соединение 106).

Ангидрид эндотала (1,68 г; 10 ммоль) и асимметричный Ν,Ν-диметилэтилендиамин (2,64 г; 30 ммоль) добавляют к толуолу (10 мл) и нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч. Растворитель затем удаляют упариванием при пониженном давлении и остаток перетирают с небольшим количеством диизопропилового эфира, чтобы вызвать кристаллизацию. Затем продукт перекристаллизовывают дважды из гексана путем охлаждения до -20°С. Чистый продукт (1,9 г; выход 74%) плавят при 48-50°С. Спектр ¹Н ЯМР хорошо согласуется с цвиттерионной структурой, в которой после обработки И2О происходит замена двух протонов. Масс-спектр также подтверждает структуру соединения 106. ¹Н ЯМР (СИС13): 1,62-1,75 (м, 2Н), 1,85-1,95 (м, 2Н), 2,2 (с, 6Н), 2,45 (т, 2Н), 2,92 (с, 2Н), 3,60 (т, 2Н), 4,85-4,95 (м, 2Н). Результаты масс-спектрометрического анализа соединения 106, выраженные в отношении массы к заряду иона, включают пики при 239,2, 257 и 513 т/ζ.

Масс-спектрометрия.

В табл. 1 показаны отношения массы к зарядам ионов и соответствующие им структуры. Образец

- 20 023804 соединения 100 ионизируют в масс-спектрометре. Ионы с разными массами разделяют и измеряют их относительное количество.

Таблица 1. Отношения массы к зарядам ионов

Отношение массы к заряду (т/ζ)	Теоретические структуры ионов
141	С1Т
167	О
254	-со_г
	Г 2 Т /	\ +
	о	/\ / н
199	О₂С.
		ч +
	. о	I X \/ ζ
185	.со/
	0	—н

В табл. 2 показаны отношения массы к зарядам ионов и соответствующие им структуры. Образец соединения 105 ионизируют в масс-спектрометре. Ионы с разными массами разделяют и измеряют их относительное количество.

Таблица 2. Отношения массы к зарядам ионов

Отношение массы к заряду (т/ζ)	Теоретические	структуры ионов
141		—^3?
	ί	У
167		ί О
249	А .. Эг υ Ιί о	\\|-
199	'йгС.
	ч о	\ι--
185	.лСО/
	V о	N-Н

Пример 1. Влияние соединения 100 и родственных аналогов на клетки ОВМ.

Чтобы выявить новые терапевтические мишени для лечения полиморфной глиобластомы (ОВМ),

- 21 023804 аналоги кантаридина анализируют на способность ингибировать рост клеток полиморфной глиобластомы. В анализах конкретно используют клеточную линию СВМ И373.

Для анализа используют такие гомологи кантаридина, как норкантаридин (пог-Сап), который представляет собой бис(норметил)кантаридин; эндотал (Епб), который представляет собой дикарбоновое кислое производное норкантаридина; тиоангидрид эндотала (ЕТ); и соединения 100 и 105, полученные по описанным выше способам.

На первый день клетки помещают в чашки с тройными повторами в отсутствие лекарственного средства или в присутствии разных количеств каждого лекарственного средства, растворенного в среде (соединение 100, соединение 105 и эндотал) или в диметилсульфоксиде (тиоангидрид эндотала и норкантаридин). Через 7 дней в культурах, инкубированных с конкретными дозами лекарственного средства, а также в контрольных препаратах считают общее число клеток с тройными повторами и определяют среднее число клеток и стандартное отклонение.

Значение ингибирования роста клеток СВМ выражают в виде отношения числа клеток в экспериментальных чашках к числу клеток в контрольных чашках, содержащих только среду для лекарственного средства и культуральную среду. Средний процент контрольных клеток наносят на диаграмму с учетом одного стандартного отклонения, рассчитанного при измерениях с тройными повторами.

Результаты.

Каждый из аналогов норкантаридина ингибирует рост СВМ ίη νίνο в дозозависимой манере, как показано на фиг. 1.

Из графиков зависимости роста клеточной линии И373 СВМ от воздействия разных доз лекарственного средства в течение 7 дней определяют концентрацию каждого соединения, которая вызывает 50% ингибирование пролиферации клеток опухоли мозга (1С₅₀). Как показано на фиг. 1, значения 1С₅₀, выраженные в микромолях (мкМ), составляют 2,5, 3,0, 12,0 и 15,0 для тиоангидрида эндотала, соединения 100, норкантаридина и эндотала соответственно.

Кроме того, логарифмические кривые, полученные для глиомной клеточной линии И373, обработанной разными дозами соединения 105 в течение трех (фиг. 6) и семи дней (фиг. 7), показывают, что более высокие дозы вызывают более сильное ингибирование роста. Далее, на фиг. 8 приведена кривая доза-ответ для соединение 105, воздействующего на рост клеток СВМ человека в течение семи дней в разных концентрациях. Следует отметить, что соединение 100 используется только в концентрации 10 мкМ и что в данной концентрации два соединения оказывают одинаковое ингибирующее действие.

Пример 2. Влияние соединения 100 в сочетании с ретиноевой кислотой.

Чтобы определить влияние сочетаний антиметаболитов фосфатаз РР2А и ретиноидов, воздействующих на ядерные комплексы, авторы используют водорастворимые производные кантаридина, которые, как было показано, обладают активностью против человеческих СВМ ίη νίίτο, эндотал и соединение 100.

Чтобы анализировать действие соединения 100 в сочетании с ретиноевыми кислотами, соединение 100 объединяют с полностью транс-ретиноевой кислотой. На первый день клетки помещают в чашки с тройными повторами в отсутствие лекарственного средства или в присутствии разных количеств каждого лекарственного средства, растворенного в среде (соединение 100 и эндотал). Через 7 дней в культурах, инкубированных с конкретными дозами лекарственного средства, а также в контрольных препаратах считают общее число клеток с тройными повторами и определяют среднее число клеток и стандартное отклонение.

Результаты.

На фиг. 2 показано, что соединение 100 и эндотал, каждый в сочетании с АТКА, синергетически ингибируют пролиферацию клеточной линии И373 СВМ. Считается, что синергизм (взаимное усиление) ингибирующей активности сочетания двух лекарственных средств имеет место, если процент выживания в присутствии двух лекарственных средств ниже, чем сумма процентов выживания при воздействии двух лекарственных средств, используемых по отдельности в таких же дозах, что и в сочетании. Количественные значения синергетического действия соединения 100 и эндотала (епб) в сочетании с АТКА приведены ниже в табл. 3.

- 22 023804

Таблица 3. Ингибирование клеток И373 под действием эндотала и соединения 100+/-АТКА

Ожидаемый процент выживания клеток И373 после воздействия сочетания АТКА и соединения 1 составляет 60% (77% после воздействия АТКА х 78% после воздействия соединения 100 = 60%), тогда как наблюдаемый процент выживания составляет 53%. Ожидаемый процент выживания в присутствии сочетания АТКА и Епб составляет 50% (77% после воздействия АТКА х 65% после воздействия Епб = 50%), тогда как наблюдаемый процент выживания составляет 32%.

Соединение 100 в сочетании с трихостатином А или в сочетании с 13-цис-ретиноевой кислотой синергетически ингибирует рост клеточной линии И373 ОВМ, как показано ниже в табл. 4.

Таблица 4. Ингибирование роста клеточной линии И373 ОВМ под действием соединения 100+/-13-цис-ретиноевой кислоты (С18-КА) и соединения 1+/-трихостатина А (Т8А)

	Процент от контроля
	Наблюдаемый	Ожидаемый при суммировании воздействия
Όιξ-ΚΑ 50 мкМ	93,3+/-2,2
ТЗА 0,033 мкМ (0,01 мкг/мл>	71,6+/-0,4
Соединение 100-1 мкМ	97,9+/-1,0
Соединение 100 - 5 мкМ	52,5+/-2,9
С1Б-КА 50 мкМ + Соединение 100 1 мкМ	79,3+/-3,2	91,3
Οιξ-ΚΑ 50 мкМ + Соединение 100 5 мкМ	31,6+/-2,0	49,0
ТЗА 0,033 мкМ + Соединение 100 1 мкМ	65,7+/-2,0	70,1
ТЗА 0,033 мкМ + Соединение 100 5 мкМ	13,9+/-1,0	37,6

Два лекарственных средства действуют синергетически, ингибируя рост клеток И373. Процент выживания клеток после воздействия сочетания двух лекарственных средств меньше, чем ожидаемый процент выживания клеток после воздействия каждого из двух лекарственных средств в дозе, используемой в сочетании.

Пример 3. Определение опухолевой специфичности.

Чтобы определить, являются ли ингибирующие свойства аналогов соединения 100, ретиноевой кислоты и трихостатина А специфичными для определенного типа опухолей, авторы анализируют их ингибирующее действие по отношению к линии ОВМ И373, линии рака молочной железы, МСР-7 (полученной от АТСС) и клеточной линии рака почки, ИМКС (ИМКС получены Όγ. 2Ьиап§, ΝΙΝΌ8, ΝΙΗ в рамках программы поддержки интрамуральных исследований, 8А1С, Национального института рака, Научно-исследовательского центра Фредерика по изучению рака).

Результаты.

Клеточная линия рака почки, ИМКС (фиг. 3) является менее чувствительной, чем линия опухоли мозга, И373 (фиг. 4), тогда как линия рака молочной железы, МСР-7 (фиг. 5), является такой же чувствительной, как и И373, к полностью транс-ретиноевой кислоте, тиоангидриду эндотала, норкантаридину, эндоталу и трихостатину А. Существует некоторая специфичность данных лекарственных средств к клеткам ОВМ. Активность лекарственных средств, направленная против клеток МСР-7, свидетельствует о том, что режимы, разработанные для лечения опухолей мозга, также можно использовать для лечения рака молочной железы и других опухолей, характеризующихся сверхэкспрессией Ν-СоК.

Пример 4.

Помимо ингибирующей активности соединения 100 при низких микромолярных концентрациях соединение 105, как и соединение 100, также представляет собой цвиттерион и обладает высокой активностью, как показано на фиг. 9. Жирорастворимое соединение 102 также эффективно ингибирует глиомную клеточную линию И373 (фиг. 10). Другие производные норкантаридина, соединения 101, 103, 104 и 106 обладают более низкой активностью (фиг. 11-14).

- 23 023804

Во всех экспериментах с культивированием клетки оставляют расти в отсутствие лекарственного средства или в присутствии разных концентраций лекарственного средства, или в присутствии среды, используемой для растворения лекарственного средства, ΡΒδ в случае соединения 100 и ДМСО в случае соединения 102. Клетки считают с тройными повторами на день 3 и день 7, а ингибирование роста выражают в виде отношения числа клеток, присутствующих в экспериментальной лунке, к числу клеток в контрольной лунке.

Наблюдается дозозависимое ингибирование клеточной линии И373 ΟΒΜ под действием соединения 100 (фиг. 15) и дозозависимое ингибирование клеточной линии медуллобластомы ΌΑΘΥ (фиг. 16).

В экспериментах ίη У1уо имплантированные подкожно опухолевые клетки оставляют расти в течение 7 дней до развития опухоли размером 5-7 мм. На день 7 начинают вводить лекарственное средство ежедневно в течение 20 дней. Каждые 2-5 дней измеряют максимальные перпендикулярные диаметры опухолевых масс. На 21-й день после начала лечения животных умерщвляют, выделяют подкожные ткани и измеряют их.

Показано, что соединение 100 подавляет рост клеточной линии И87 ΟΒΜ, выращиваемой подкожно у мышей δΟίΌ (фиг. 17). Также показано, что и соединение 100, и соединение 102 ингибируют пролиферацию клеток ΌΑΘΥ, имплантированных подкожно мышам δί'ΊΌ (фиг. 18).

Пример 5. Активность лекарственных средств против клеточных линий рака человека, отличных от глиобластомных и медуллобластомных клеточных линий.

Материалы и методы.

Клеточные линии ΜΌΑ-ΜΒ-231, НТ-29, ^1-Н460, ^1-Н522, ^1-Н69, ОХР-209, НерО2, ОУАК-3, РАЫС-1, Όυ-145, ΡΝίΑΡ, НЬ-60, К-562 и ΜΟΤΤ-4 получают либо от Американской коллекции типовых культур (АТСС; Μαηα88α8, УА), либо от Национального института рака (Ж.Т Ргебепск, ΜΌ). Среду ΡΡΜΙ-1640, дипептид Ь-глутамина (НуО δΟ-200) и 4ΕΡΕδ получают от Нус1опе (Ьодап, υΤ).

Фетальную бычью сыворотку (ΡΒδ) получают от δίβΐηα-ΛΙύπΟι (δί. Ьош8, МО). ДМСО получают от Р18кег СНеписаН (Рап Ьатеп, Ν1). Реагент для люминесцентного анализа жизнеспособности клеток Се11ТПег-О1о получают от Рготеда СогрогаИоп (Уа^ои да1). Всю пластиковую посуду для культивирования тканей получают от Согшпд 1псогрога1еб (Лете Υо^к, ΝΥ). Соединение 100 и соединение 102 получают от Ых1е Β^оΐесЬηо1о§у Но1йшд8, 1пс. (Еа81 δеΐаикеΐ, ΝΥ).

Все клеточные линии культивируют обычным способом в среде ΡΡΜΙ-1640, содержащей 2 мМ дипептид Ь-глутамина, 10 мМ НΕΡΕδ и 10% ΡΒδ, которую меняют два раза в неделю.

Клетки каждой из прилипающих клеточных линий Μ^Α-ΜΒ-231, НТ-29, ΝΟΉ460, КС1-Н522, ОХР-209, НерО2, ОУАК-3, ΡΑNС-1, Όυ-145 и Ε-ΝίΆΡ высевают в два 96-луночных планшета с плотностью 2500 клеток на лунку в общем объеме 50 мкл и инкубируют в течение ночи в инкубаторе для культивирования клеток при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО₂. Клетки каждой из суспензионных клеточных линий ΝΟΉ69, НЬ-60, К-562 и ΜΟΕΤ-4 высевают в два 96-луночных планшета с плотностью 10000 клеток на лунку в общем объеме 50 мкл и инкубируют в течение ночи в инкубаторе при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО₂.

мМ исходный раствор водорастворимого лекарственного средства соединение 100 готовят в стерильной воде, а 20 мМ исходные растворы соединения 102 готовят в ДМСО. После этого получают исходные растворы в среде КΡΜI-1640, в которых концентрация лекарственного средства составляет 2х требуемой конечной концентрации. 50 мкл 2х исходных растворов добавляют в соответствующие лунки, которые содержат 50 мкл клеток и среды, с получением конечных концентраций, указанных в приложении. Соединение 100 с максимальной концентрацией перед применением стерилизуют фильтрацией. 50 мкл среды добавляют в лунки, содержащие среду и контрольные клетки, и 50 мкл ложного 2х исходного раствора в ДМСО добавляют в контрольные лунки, содержащие среду. Во время добавления лекарственных средств к клеткам, один из планшетов каждой клеточной линии используют для проведения анализа Се11Ткег-О1о, как описано ниже, чтобы получить значения дня 0 для каждой клеточной линии. После инкубации в течение 72 ч анализ Се11ТНег-О1о проводят на другом планшете.

Анализ Се11Тпег-О1о.

Анализ проводят в соответствии с инструкциями производителя. Коротко говоря, планшеты удаляют из инкубатора и оставляют на лабораторном столе при комнатной температуре на 30 минут. Планшеты не ставят друг на друга. После инкубации в течение 30 мин при комнатной температуре в каждую лунку планшета добавляют 100 мкл реагента Се11ТПег-О1о и перемешивают 2 мин, после чего инкубируют при комнатной температуре еще 10 мин. Затем измеряют люминесценцию, используя счетчик сцинцилляций и люминесценции Ρе^к^ηΕ1те^ Μ^с^оЬеΐа (ТгЛих).

Результаты и обсуждение.

Данные исследования проводят по способам, описанным в разделе материалы и методы, используя исходные данные и настройки планшета, указанные в приложении. Значения 1С₅₀, полученные для каждого лекарственного средства и каждой клеточной линии, приведены в табл. 5. Графическое изображение влияния соединений на все клеточные линии, наряду с соответствующим подбором кривых, иллюстрируется на фиг. 19Λ-Ν.

- 24 023804

Большинство тестируемых клеточных линий чувствительны ко всем лекарственным средствам в низком мкМ диапазоне (табл. 5). И соединение 100, и соединение 102 обладают значительной активностью (примерно равной во всех линиях активности положительного соединения сравнения, используемого в клинике противоракового лекарственного средства доксорубицина). Лекарственные средства активны против клеточных линий: рака молочной железы; рака ободочной кишки; трех основных типов рака легких, крупноклеточного, аденокарциномы и мелкоклеточного; рака желудка; рака печени (гепатомы); аденокарциномы яичника; карциномы поджелудочной железы, двух типов карциномы простаты; и трех типов лейкоза, промиелоцитарного, хронического миелоцитарного и острого лимфоцитарного (табл. 5).

Таблица 5. Концентрация соединений 100 и 102, которая вызывает 50% ингибирование пролиферации (1С₅₀), определенная с помощью подбора кривых, полученных для четырнадцати клеточных линий рака человека (фиг. 19А-Ы)

Клеточная линия	1С50 мкМ
Тип рака	Соединение-100	Соединение-102
МОА-МВ-231 Рак молочной железы	9,5	6, 6
НТ-29 Рак толстой кишки	5,3	3( б
ИС1-Н460 Рак легкого: крупноклеточный	24,3 ,	17, 5
ЦС1-Н522 Аденокарцинома легкого	3,4	2,2
ЦС1-Н69 Рак легкого мелкоклеточный	23, 9	24, 6
СХГ-209 Рак желудка	Г, 9	5,3
НерС2 Рак печени	31,6	22,1
ОУСАЕ-З Аденокарцинома яичника	2,9	5,1
РАЫС-1 Рак поджелудочной железы	25,1	20,7
Ои-145 Рак простаты	16,4	13,0
ЬЫСАР Рак простаты	1,5	0,48
НЬ-бО Лейкоз промиелоцитарный	7,7	6,5
К-562 Лейкоз хронический миелоцитарный	10,7	13, 7
МОЪТ-4 Лейкоз острый лимфоцитарный	5,7	5,6

Пример 6. Противогрибковая активность.

Увеличение числа пациентов с ослабленным иммунитетом вследствие трансплантации, инфекции ВИЧ/СПИД и ракового заболевания, в первую очередь лейкоза, приводит к увеличению тяжелых грибковых инфекций. У таких пациентов после инфекций чаще всего появляются такие грибки как АкрегдШ 1ик крр. и Сапб1ба крр. Существуют эффективные способы лечения инфекций Сапб1ба крр., однако остаются проблемы при лечении инфекций, вызванных АкрегдШик крр., которые связаны с высокой смертностью хозяев с ослабленным иммунитетом. В указанной группе пациентов такие инфекции трудно устраняются, поэтому существует потребность в лекарственных средствах, обладающих высокой активностью против данных грибков. Кроме того, менее тяжелые, но хронические и причиняющие беспокойство грибковые инфекции ногтей и кожи ног и рук, дерматофитозы, поражают миллионы людей во всем мире. По причине изменяющейся картины грибковых инфекций и отсутствия общего способа лечения данных инфекций, соединения 100 и 102 подвергают тестированию на пригодность для будущей разработки.

Материалы и методы.

Противогрибковое тестирование соединений 100 и 102 проводят по одному и тому же способу. Отвешивают порцию каждого порошка массой 10 мг и добавляют ее к 1 мл стерильной дистиллированной воды в случае соединения 100 и ДМСО в случае соединения 102. Полученный раствор каждого соединения с концентрацией 10 мг/мл разбавляют до рабочей концентрации 640 мкг/мл. Все последующие разведения осуществляют с использованием соответствующих разбавителей. Для тестирования используют конечные концентрации в интервале 0,125-64 мкг/мл.

Результаты.

Тестируют всего 23 изолята, включающие 3 Сапб1ба а1Ысапк, 3 Сапб1ба д1аЬга!а, 3 Сгур!ососсик пео- 25 023804

Гогшап5. 3 АзрегдШиз Гнтщаигу 3 К1и/ори5 огу/ае. 3 Ризагшт зо1ат, 3 РзеийаПезсЬепа Ьоуйи и 2 ТпсЬозрогои гиЬгит. Все изоляты представляют собой клинические изоляты, предназначенные для анализа в лаборатории тестирования грибков. Тестирование на чувствительность к противогрибковым средствам проводят с помощью способов, описанных в №Фопа1 СоттШее Гог СНтса1 ЬаЬогаШгу 81аийагйз, М27А2, КеГегепсе МеШой Гог ВгоШ ОЛийоп АийГиида1 ЗизсерйЬШГу Тезйид оГ Уеаз1з; Арргоуей 8Гаийагй, и М38-А КеГегеисе МеШой Гог ВгоШ ОЛийоп АийГии§а1 8и5серйЬййу Тезйид оГ Сотйшт-Рогтшд РйатеиЮи5 Риидр Арргоуей 8Гаийагй. Данные способы включают тестирование в КРМ1-1640, содержащей глутамин и не содержащей бикарбонат, с размером инокулята 0,5-2,5х10³ в случае дрожжей или 1-5х10⁴ в случае плесенных грибков, и инкубацией при 35°С в течение 24 и 48 ч. Минимальную ингибирующую концентрацию (М1С) определяют как самую низкую концентрацию, которая приводит к 50% уменьшению мутности по сравнению с контрольной пробиркой, не содержащей лекарственного средства, в случае дрожжей, и к 80% ингибированию в случае плесенных грибков.

Хотя соединение 100 на тестируемых уровнях не является активным, обнаружено, что соединение 102 проявляет значительную активность против Т.гиЬгит (табл. 6).

Вывод.

В зависимости от достигаемых уровней соединения у людей, профилей безопасности и других подходящих факторов данное соединение может являться жизнеспособным кандидатом в средства для лечения дерматофитных инфекций, вызываемых ТпсЬозрогои гиЬгит.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, имеющее структуру где связь α отсутствует;

К₁ и К₂ вместе обозначают =0;

К₃ обозначает ОН, О^-, 0К9, §Н, §^- или §К9, где К₉ обозначает С’^алкил, С_2-!2алкенил, С_2-!2алкинил или С6-10арил;

Кд обозначает где X обозначает ΝΚο или Ν' К|₀К_]0, где каждый Кю независимо обозначает С_1-12алкил, С₂С’₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил

- 29 023804

К₅ и К₆, взятые вместе, обозначают =0;

каждый К₇ и К₈ обозначает Н, или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения.
2. Соединение по п.1, имеющее структуру где связь α отсутствует;

К1 и К2 вместе обозначают =0; К₃ обозначает ОН, О^-;

К₄ обозначает где X обозначает ΝΡ₁₀ или ^К₁₀К₁₀, где каждый К₁₀ независимо обозначает С_1-12алкил, С₂С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил

К₅ и К₆, взятые вместе, обозначают =0;

каждый К₇ и К₈ обозначает Н, или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения.
3. Соединение по п.1, имеющее структуру где связь α отсутствует;

К1 и К2 вместе обозначают =0;

К₃ обозначает 0К₉, 8Η, §^- или §К₉, где К₉ обозначает С_1-12алкил, С_2-12алкенил, С_2-12алкинил или С₆10арил;

К₄ обозначает где X обозначает ΝΡ₁₀ или Ν+К^К^, где каждый К₁₀ независимо обозначает С₁-С₁₂алкил, С₂С₁₂алкенил, С₂-С₁₂алкинил, С₆-С₁₀арил

- 30 023804

К₅ и К₆, взятые вместе, обозначают =0;и каждый К₇ и К₈ обозначает Н, или соль, энантиомер или цвиттерион данного соединения.
4. Соединение по п.3, где К₃ обозначает 0К₉, где К₉ обозначает метил, этил или фенил.
5. Соединение по одному из пп.1-3, где

К4 обозначает

К10 обозначает или К4 обозначает

К10 обозначает или К4 обозначает
6. Соединение по п.4, где К₄ означает
7. Соединение, имеющее структуру где связь α отсутствует;

К₉ присутствует или отсутствует, а в случае присутствия обозначает Н, С’-С^алкил, С₂-С’₂алкенил, С₂-С1₂алкинил или фенил;

X обозначает Ν^₀ или Ν+НКю, где каждый К_!0 независимо обозначает С’-С^алкил, С₂-С’₂алкенил, С₂-С1₂алкинил, или соль, цвиттерион или энантиомер данного соединения.
8. Соединение по п.7, имеющее структуру где связь α отсутствует;

К₉ присутствует или отсутствует, а в случае присутствия обозначает Н или С’-С^алкил; X обозначает ΝΒ₁₀ или Ν+НК^, где К₁₀ обозначает С’-С^алкил, или соль или цвиттерион данного соединения.
9. Соединение по п.7, имеющее структуру

- 31 023804 где связь α отсутствует;

X обозначает Ν+ΗΚ₁₀, где К₁₀ обозначает СТС^алкил, С₂-С_!2алкенил, С₂-С1₂алкинил, или соль, цвиттерион или энантиомер данного соединения; или соединение, имеющее структуру где связь α отсутствует;

X обозначает ΝΚ₁₀, где К₁₀ обозначает С^С^алкил, С₂-С1₂алкенил, С₂-С1₂алкинил, или соль, цвиттерион или энантиомер данного соединения.
10. Соединение по п.7, имеющее структуру где К₉ обозначает С1-С1₂алкил, или соль или энантиомер данного соединения; или где К₉ обозначает С₂-С₇алкил, или соль или энантиомер данного соединения.
11. Соединение по любому из пп.7, 8, где К.ю обозначает метил.
12. Соединение по п.7, имеющее структуру или его соль или энантиомер.
13. Соединение по п.2, имеющее структуру

- 32 023804 или его соль, энантиомер или цвиттерион.
14. Соединение по п.3, имеющее структуру или его соль, энантиомер или цвиттерион.
15. Фармацевтическая композиция, обладающая протеинфосфатазной активностью, содержащая соединение по любому из пп.7-14 и фармацевтически приемлемый носитель.
16. Фармацевтическая композиция по п.15, в которой фармацевтически приемлемым носителем является липосома.
17. Фармацевтическая композиция по п.15, в которой соединение находится в липосоме или микросфере.
18. Способ получения соединения по п.12, имеющего структуру включающий:

а) растворение соединения, имеющего структуру в бензоле и добавление соединения, имеющего структуру

- 33 023804 при комнатной температуре с получением соединения, имеющего структуру

Ь) перекристаллизацию продукта, полученного на стадии а), из диметилформамида с получением целевого соединения.
19. Применение соединения по любому из пп.7-11, 13, 14 для получения лекарственного средства для лечения рака молочной железы, рака ободочной кишки, крупноклеточного рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака желудка, рака печени, аденокарциномы яичника, карциномы поджелудочной железы, карциномы простаты, промиелоцитарного лейкоза, хронического миелоцитарного лейкоза или острого лимфолейкоза.
20. Применение соединения, имеющего структуру для получения лекарственного средства для лечения рака.
21. Применение фармацевтической композиции, включающей соединение, имеющее структуру для получения лекарственного средства для лечения рака.
22. Применение соединения, имеющего структуру в комбинации с лигандом ретиноидного рецептора для получения лекарственного средства для лечения рака.
23. Применение соединения, имеющего структуру в комбинации с лигандом гистонацетилазы для получения лекарственного средства для лечения рака.
24. Применение по п.22 или 23, где лиганд ретиноидного рецептора представляет собой полностью трансретиноевую кислоту (АТКА) и лиганд гистондеацетилазы представляет собой 2-амино-8-оксо-9,10эпоксидеканоил, 3-(4-ароил-1Н-пиррол-2-ил)-^гидрокси-2-пропенамид, АРНА соединение 8, аписидин, аргинина бутират, масляную кислоту, депсипептид, депудецин, НЭАС-3. м-карбоксикоричной кислоты бис-гидроксамид, ^(2-аминофенил)-4-[№(пиридин-3 -илметоксикарбонил)аминометил]бензамид, Μδ 275, оксамфиатин, фенилбутират, пироксамид, скриптаид, сиртинол, бутират натрия, пробковую бисгидроксамовую кислоту, субероиланилид гидроксамовой кислоты, трихостатин А, трапоксин А, трапок- 34 023804 син В и вальпроевую кислоту.
25. Применение по любому из пп.19-24, где рак представляет рак молочной железы, рак ободочной кишки, крупноклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, мелкоклеточный рак легкого, рак желудка, рак печени, аденокарциному яичника, карциному поджелудочной железы, карциному простаты, промиелоцитарный лейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз или острый лимфолейкоз.