EA023757B1 - Method of producing oxaliplatin liposome form - Google Patents
Method of producing oxaliplatin liposome form Download PDFInfo
- Publication number
- EA023757B1 EA023757B1 EA201201596A EA201201596A EA023757B1 EA 023757 B1 EA023757 B1 EA 023757B1 EA 201201596 A EA201201596 A EA 201201596A EA 201201596 A EA201201596 A EA 201201596A EA 023757 B1 EA023757 B1 EA 023757B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- oxaliplatin
- emulsion
- liposomal
- phosphatidylcholine
- cholesterol
- Prior art date
Links
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 title claims abstract description 112
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 title claims abstract description 112
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title abstract description 47
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 61
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 50
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 49
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 42
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 38
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 25
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 20
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 10
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 8
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 12
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 abstract description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 70
- 239000000047 product Substances 0.000 description 39
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 32
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 22
- BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 1,2-palmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 0.000 description 20
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 18
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 9
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 8
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 8
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 8
- NKYAAYKKNSYIIW-XVFCMESISA-N 5-aminoimidazole ribonucleoside Chemical compound NC1=CN=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NKYAAYKKNSYIIW-XVFCMESISA-N 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 6
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 4
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 2
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229940045985 antineoplastic platinum compound Drugs 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- -1 diethanolate sodium chloride Chemical compound 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 2
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 2
- 150000003058 platinum compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010055114 Colon cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000031361 Hiccup Diseases 0.000 description 1
- 206010022653 Intestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 241000867418 Morion Species 0.000 description 1
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000604 Polyethylene Glycol 200 Polymers 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059516 Skin toxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- JLPULHDHAOZNQI-JLOPVYAASA-N [(2r)-3-hexadecanoyloxy-2-[(9e,12e)-octadeca-9,12-dienoyl]oxypropyl] 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC JLPULHDHAOZNQI-JLOPVYAASA-N 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- YAYRGNWWLMLWJE-UHFFFAOYSA-L carboplatin Chemical compound O=C1O[Pt](N)(N)OC(=O)C11CCC1 YAYRGNWWLMLWJE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940000910 oxaliplatin 5 mg/ml Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000079 pharmacotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000438 skin toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Хорошо известно использование препаратов платины [3, 11, 16-18], в частности оксалиплатина, в качестве противоопухолевого агента для лечения больных онкологическими заболеваниями: метастазирующий рак толстой и прямой кишки в качестве монотерапии или в составе комбинированной терапии, для лечения рака яичников в качестве второй линии терапии. Оксалиплатин представляет собой вещество с химической формулой С8Н14Ы2О4Р1, (М.м. 397,0):It is well known to use platinum preparations [3, 11, 16-18], in particular oxaliplatin, as an antitumor agent for treating cancer patients: metastatic colon and rectal cancer as a monotherapy or as part of combination therapy for treating ovarian cancer as second line of therapy. Oxaliplatin is a substance with the chemical formula C 8 H 14 N 2 O 4 P1, (M.M. 397.0):
Как и другие препараты платины, оксалиплатин обладает уникальным механизмом действия и широким спектром противораковой активности. Препарат взаимодействует с ДНК, образуя внутри - и межспиральные сшивки, что блокирует её синтез и последующую репликацию. Оксалиплатин эффективен для некоторых линиях опухолей резистентных к цисплатину и карбоплатину.Like other platinum drugs, oxaliplatin has a unique mechanism of action and a wide spectrum of anticancer activity. The drug interacts with DNA, forming inside - and intercoil cross-linking, which blocks its synthesis and subsequent replication. Oxaliplatin is effective for certain cisplatin and carboplatin resistant tumor lines.
В то же время, оксалиплатин отличает высокая токсичность, проявляющаяся в побочных действиях: со стороны системы кроветворения (очень часто: анемия, лейкопения, нейтропения, тромбоцитопения; часто: сепсис на фоне нейтропении, фибрильная нейтропения и др.); со стороны системы пищеварения (очень часто: тошнота, рвота, диарея, стоматит, боли в области живота, потеря аппетита; часто: диспепсия, кишечное кровотечение, икота, панкреатит и др.); со стороны нервной системы: очень часто нейропатия, головная боль, астения; часто депрессия, бессонница, головокружение и др.; наблюдаются также побочные действия со стороны костно-мышечной и сердечно-сосудистой систем, органов зрения, дыхания, кожи и др [3].At the same time, oxaliplatin is characterized by high toxicity, manifested in side effects: from the hematopoietic system (very often: anemia, leukopenia, neutropenia, thrombocytopenia; often: sepsis with neutropenia, fibril neutropenia, etc.); from the digestive system (very often: nausea, vomiting, diarrhea, stomatitis, abdominal pain, loss of appetite; often: dyspepsia, intestinal bleeding, hiccups, pancreatitis, etc.); from the nervous system: very often neuropathy, headache, asthenia; often depression, insomnia, dizziness, etc .; side effects are also observed from the musculoskeletal and cardiovascular systems, organs of vision, respiration, skin, etc. [3].
Одним из приоритетных направлений развития современных фармацевтических технологий является разработка и создание терапевтических систем направленного действия. Для решения этой задачи с успехом применяются наносомальные носители лекарственных веществ, которые способны увеличивать нацеленность действия и обеспечивают повышение биодоступности. За последние годы появились сообщения о включении препаратов платины в наночастицы из различных полимерных носителей, пегилированных частиц и в липосомы из природных и синтетических липидов [4, 5, 9, 12-14].One of the priority areas for the development of modern pharmaceutical technologies is the development and creation of therapeutic systems of directed action. To solve this problem, nanosomal carriers of medicinal substances are successfully used, which are able to increase the focus of action and provide increased bioavailability. In recent years, there have been reports of the inclusion of platinum preparations in nanoparticles from various polymer carriers, pegylated particles and in liposomes from natural and synthetic lipids [4, 5, 9, 12-14].
Опухолевые клетки имеют особенность в строении кровеносных капилляров - их эндотелиальные клетки не плотно прилегают друг к другу, давая возможность частицам до 200 нм проникать в межклеточное пространство. Этот факт, а так же замедленный лимфатический дренаж внутри опухоли создаёт возможности для целевого накопления липосом с цитотоксическим лекарственным средством внутри опухолей, с последующим высвобождением содержимого. Такой эффект даёт повышение концентрации активной субстанции в органе, нуждающемся в терапии, в сравнении с остальными тканями организма, что ведёт к снижению токсичности.Tumor cells have a peculiarity in the structure of blood capillaries - their endothelial cells do not fit tightly together, allowing particles up to 200 nm to penetrate into the intercellular space. This fact, as well as delayed lymphatic drainage inside the tumor, creates opportunities for the targeted accumulation of liposomes with a cytotoxic drug inside the tumors, followed by release of the contents. This effect gives an increase in the concentration of the active substance in the organ in need of therapy, in comparison with other tissues of the body, which leads to a decrease in toxicity.
В литературе описано множество попыток преодоления липосомальными лекарственными составами побочного действия. Известны лекарственные препараты на основе липосомальных композиций, в состав которых включены гидрофобные и гидрофильные противоопухолевые лекарственные субстанции [1, 2, 19, 20]. Проведенные клинические исследования липосомальных препаратов на основе различных субстанций продемонстрировали высокую фармакологическую активность в пульмонологии, онкологии, кардиологии, нефрологии, офтальмологии и других направлениях медицины [1-5]. Применение липосомальных форм цитостатиков [10, 12-14] является перспективным направлением для преодоления лекарственной устойчивости к химиопрепаратам, а также снижения токсического действия по сравнению со свободными формами противоопухолевых препаратов на органы и ткани [6-8]. Резистентность к препаратам платины приводит к снижению внутриклеточного накопления цитостатика, что обуславливает большое количество неудач в клинической практике. При этом увеличение дозы цитостатика неизбежно приводит к росту токсических эффектов (нефротоксичность, нейротоксичность, кардиотоксичность, тошнота, рвота и т.д.). Именно резистентность и высокая токсичность комплексных соединений платины привели к многочисленным попыткам создания липосомальных форм различных соединений платины и их использования в эксперименте и клинике.The literature describes many attempts to overcome the side effects of liposome drug formulations. Known drugs based on liposome compositions, which include hydrophobic and hydrophilic antitumor drug substances [1, 2, 19, 20]. Clinical studies of liposomal preparations based on various substances have demonstrated high pharmacological activity in pulmonology, oncology, cardiology, nephrology, ophthalmology and other areas of medicine [1-5]. The use of liposomal forms of cytostatics [10, 12-14] is a promising direction for overcoming drug resistance to chemotherapy drugs, as well as reducing the toxic effect compared with free forms of antitumor drugs on organs and tissues [6-8]. Resistance to platinum drugs leads to a decrease in the intracellular accumulation of cytostatics, which leads to a large number of failures in clinical practice. Moreover, an increase in the dose of cytostatic inevitably leads to an increase in toxic effects (nephrotoxicity, neurotoxicity, cardiotoxicity, nausea, vomiting, etc.). It is the resistance and high toxicity of platinum complex compounds that led to numerous attempts to create liposomal forms of various platinum compounds and their use in experiment and clinic.
Известны способы получения липосомальных форм препаратов платины [21, 22]. За прошедшее время были предложены различные способы получения липосом, содержащих соединения платины [1618]. Липосомальные препараты платины проявляют гораздо меньшую токсичность в нормальных клетках по сравнению со свободной формой. Также установлена более высокая противоопухолевая активность липосомальной формы препаратов платины [16-20].Known methods for producing liposomal forms of platinum preparations [21, 22]. Over the years, various methods have been proposed for the preparation of liposomes containing platinum compounds [1618]. Liposomal platinum preparations exhibit much lower toxicity in normal cells compared to the free form. A higher antitumor activity of the liposomal form of platinum preparations was also established [16–20].
Известен способ получения липосомальной композиции на основе природных и синтетических липидов и оксалиплатина, которая обладает противоопухолевой активностью [15]. Способ [15] выбран нами наиболее близким аналогом по сумме признаков, а именно: сутью и последовательностью выполнения основных операций и приемов, химической природой фосфофолипидов и оксалиплатина, липосомальной организацией целевого продукта и близостью его фармакотерапевтических проявлений.A known method of obtaining a liposomal composition based on natural and synthetic lipids and oxaliplatin, which has antitumor activity [15]. The method [15] was chosen by us as the closest analogue in terms of the sum of signs, namely: the essence and sequence of the main operations and techniques, the chemical nature of phosphofolipids and oxaliplatin, the liposomal organization of the target product and the proximity of its pharmacotherapeutic manifestations.
Известный способ [15] предусматривает следующие операции: оксалиплатин смешивают с дипальмитоилфосфатидилглицерином (или другими кислыми фосфолипидами) в молярном соотношении 1:1 или 1:2 в 20-40 % этаноле, 0,1 М трис НС1 рН-6,5-8,0 в конечной концентрации оксалиплатина 5 мг/млThe known method [15] provides the following operations: oxaliplatin is mixed with dipalmitoylphosphatidylglycerol (or other acidic phospholipids) in a molar ratio of 1: 1 or 1: 2 in 20-40% ethanol, 0.1 M Tris HC1 pH-6.5-8, 0 at a final concentration of oxaliplatin 5 mg / ml
- 1 023757 инкубируют в течение 20 мин - 3 ч. В этих условиях положительно заряженные аминогруппы на молекулах оксалиплатина вступают во взаимодействие с отрицательно заряженными группами на молекуле дипальмитоилфосфатидилглицерина, образуя в этанольных растворах обратные мицеллы. Полученные обратные мицеллы оксалиплатин - отрицательно заряженный липид преобразуют в липосомы, инкапсулируя монослой оксалиплатин- отрицательно заряженный липид путем быстрого смешивания с предварительно образованными липосомами, состоящими из холестерина, фосфатидилхолина и метоксиполиэтиленгликольдистеароил-фосфатидилэтаноламина (ПЭГ-2000), с последующим диализом против 0,9% натрия хлорида и экструзией через мембраны для уменьшения размера частиц до 80-120 нм. При этом инкапсуляция составила 50-100%.- 1,023757 are incubated for 20 minutes - 3 hours. Under these conditions, positively charged amino groups on oxaliplatin molecules interact with negatively charged groups on dipalmitoylphosphatidylglycerol molecule, forming reverse micelles in ethanol solutions. The resulting reverse micelles of oxaliplatin - a negatively charged lipid are converted into liposomes by encapsulating a monolayer of oxaliplatin - a negatively charged lipid by rapid mixing with preformed liposomes consisting of cholesterol, phosphatidylcholine and methoxypolyethylene glycol dististearoyl-phosphatidomethylene-ethanol-ethanomethylene diethol-ethanomethylene diethanol-ethanol-2-ethanomethylene diethanolate sodium chloride and extrusion through membranes to reduce particle size to 80-120 nm. In this case, encapsulation was 50-100%.
Однако, способ [15] предусматривает операции и методы, которые затрудняют его реализацию и способствуют снижению качества итогового липосомального продукта. Во-первых, это связано с использованием в составе липосом ПЭГ-2000. Согласно имеющимся в литературе данным [10] выявлено два главных дозолимитирующих фактора: стоматит и кожная токсичность (подошвенно-ладонная дисэстезия или Напб-Роо1 купбготе), связанные с присутствием в липосомальных препаратах ПЭГ-2000. Во вторых, в составе указанного продукта отсутствует криопротектор, что исключает возможность последующей лиофилизации, а следовательно не предусматривает длительного хранения препарата. В третьих, в способе [15] предусмотрено получение водно-спиртовых растворов цитостатика и отрицательно заряженного липида, что в свою очередь требует гарантированного удаления органических растворителей перед экструзией и получением липосом. Осуществление такого процесса возможно в лабораторных условиях, но крайне затруднительно в промышленных. Кроме того, предлагаемая в [15] температура 30-60°С и буферная смесь с рН 6,5-8,0 отрицательно влияет на сохранность липидов и оксалиплатина. Обращает внимание также факт низкого включения в способе [15] цитостика в липосомы (от 50 до 100%).However, the method [15] provides for operations and methods that impede its implementation and contribute to lowering the quality of the final liposome product. Firstly, this is due to the use of PEG-2000 as part of liposomes. According to the data available in the literature [10], two main dose-limiting factors were identified: stomatitis and skin toxicity (plantar-palmar diesesthesia or Napp-Roo1 kupbgote) associated with the presence of PEG-2000 in liposome preparations. Secondly, there is no cryoprotectant in the composition of this product, which excludes the possibility of subsequent lyophilization, and therefore does not provide for long-term storage of the drug. Thirdly, the method [15] provides for the production of aqueous-alcoholic solutions of a cytostatic agent and a negatively charged lipid, which in turn requires guaranteed removal of organic solvents before extrusion and production of liposomes. The implementation of such a process is possible in laboratory conditions, but is extremely difficult in industrial. In addition, the temperature proposed in [15] is 30–60 ° С and the buffer mixture with a pH of 6.5–8.0 negatively affects the preservation of lipids and oxaliplatin. Also noteworthy is the fact that the cytostatic in the liposome is low in the method [15] (from 50 to 100%).
Все вышеперчисленное снижает эффективность способа-прототипа в процессе его воспроизводства, а также стабильность целевого продукта как химиотерапевтического средства. Задачей заявленного способа является упрощение процесса получения и повышение качества липосомального препарата по показателям стабильности как липосомальной структуры, так и стабильности фармакологически активной субстанции оксалиплатина. При этом результат, полученный при решении поставленной задачи, состоит в стандартности и стабильности полученного препарата липосом (размер липосом представлен в узком диапазоне), содержащих оксалиплатин, высокой инкапсуляции оксалиплатина в липосомы, стабильности продукта в процессе хранения. Кроме того, предлагаемый способ является высоко технологичным и может применяться для промышленного получения липосомальной формы оксалиплатина с содержанием включенного оксалиплатина не менее 90%.All of the above reduces the effectiveness of the prototype method in the process of its reproduction, as well as the stability of the target product as a chemotherapeutic agent. The objective of the claimed method is to simplify the process of obtaining and improving the quality of the liposomal preparation in terms of stability of both the liposomal structure and the stability of the pharmacologically active substance oxaliplatin. Moreover, the result obtained in solving this problem consists in the standardization and stability of the obtained liposome preparation (the size of the liposomes is presented in a narrow range) containing oxaliplatin, high encapsulation of oxaliplatin in liposomes, and the stability of the product during storage. In addition, the proposed method is highly technological and can be used for the industrial production of the liposomal form of oxaliplatin with an incorporated oxaliplatin content of at least 90%.
Для достижения поставленного результата предлагается способ получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме, включающий получение эмульсии оксалиплатина и липидной пленки на основе фосфолипида и холестерина, их перемешивание, гомогенизацию, по меньшей мере, в два цикла, фильтрацию, ультрафильтрацию, стерилизацию и лиофилизацию, при этом эмульсию оксалиплатина получали из раствора оксалиплатина и липидной плёнки из отрицательно заряженных фосфолипидов, фосфатидилхолина и холестерина в соотношении (0,5-0,95):(6-8):1, соответственно, дополнительно вели дробное добавление криопротектора - до гомогенизации или экструдирование и после ультрафильтрации до конечной концентрации не менее 8,0%, а ультрафильтрацию вели через мембраны 10 кДа.To achieve the result, a method for producing an antitumor drug in liposomal form is proposed, which includes the preparation of an emulsion of oxaliplatin and a lipid film based on phospholipid and cholesterol, their mixing, homogenization, at least two cycles, filtering, ultrafiltration, sterilization and lyophilization, while the emulsion oxaliplatin was obtained from a solution of oxaliplatin and a lipid film from negatively charged phospholipids, phosphatidylcholine and cholesterol in the ratio (0.5-0.95) :( 6-8): 1, corresponding In addition, the cryoprotectant was added fractionally — before homogenization or extrusion and after ultrafiltration to a final concentration of at least 8.0%, and ultrafiltration was carried out through 10 kDa membranes.
В качестве отрицательно заряженных фосфолипидов возможно использование кардиолипина сердечной мышцы крупного рогатого скота, фосфатидилглицерина и фосфатидной кислоты яичного желтка, дипальмитоилфосфатидилглицерина, фосфатидилхолина или их смеси; в качестве криопротектора - лактозу, трегалозу, сахарозу, мальтозу, маннит или их смеси.As negatively charged phospholipids, cardiolipin of cattle heart muscle, phosphatidylglycerol and egg yolk phosphatidic acid, dipalmitoylphosphatidylglycerol, phosphatidylcholine or a mixture thereof may be used; as a cryoprotectant, lactose, trehalose, sucrose, maltose, mannitol, or mixtures thereof.
Изобретение иллюстрируется графиками усреднённых фармакокинетических профилей оксалиплатина в печени, мозге, почках и сердце крыс (фиг. 1-4, соответственно).The invention is illustrated by graphs of averaged pharmacokinetic profiles of oxaliplatin in rat liver, brain, kidneys and heart (Figs. 1-4, respectively).
Эффективность заявляемого способа по качественной и количественной идентификации в готовом продукте липидного компонента - фосфатидилхолина, отрицательно заряженных фосфолипидов и холестерина оценивали методом тонкослойной хроматографии на пластинках по хроматограмме раствора целевого продукта в метаноле, на которой основные пятна желтого цвета находится на уровне основных пятен растворов стандартных образцов липидов; индекс окисленности липидов определяли УФспектроскопией при двух длинах волн: 233 и 215нм.The effectiveness of the proposed method for qualitative and quantitative identification in the finished product of the lipid component - phosphatidylcholine, negatively charged phospholipids and cholesterol was evaluated by thin-layer chromatography on plates according to the chromatogram of a solution of the target product in methanol, on which the main yellow spots are at the level of the main spots of solutions of standard lipid samples ; the lipid oxidation index was determined by UV spectroscopy at two wavelengths: 233 and 215 nm.
Качество полученного продукта оценивалось методом гель-фильтрации на колонке 4,6x250 мм НуреткИ ΒΌδ С18 (5 мкм) или аналогичный в среде ацетонитрила и гептонатсульфоната с щавелевой кислотой для определения инкапсуляции. Количественное определение и определение состава примесей проводили высокоэффективной жидкостной хроматографией на колонке заполненной октадецилсиликагелем (на приборе δΐιίιηαύζιι ЬС-20, при длине волны 215 нм).The quality of the obtained product was evaluated by gel filtration on a 4.6x250 mm NurekI ΒΌδ C 18 (5 μm) column or similar in acetonitrile and heptonatesulfonate with oxalic acid to determine encapsulation. Quantitative determination and determination of the composition of impurities was carried out by high-performance liquid chromatography on a column filled with octadecyl silica gel (on a δΐιίιηαιζιι L-20 instrument at a wavelength of 215 nm).
Размер частиц оценивался на приборе фирмы МаКети 2е1ак1/ег папо Ζδ, методом фотонной корелляционной спектроскопии. Размер частиц измерялся при помощи полупроводникового лазера при длине волны 375 ни.Particle size was estimated using a MaKeti 2e1ak1 / er papo Ζδ instrument using photon correlation spectroscopy. Particle size was measured using a semiconductor laser at a wavelength of 375 ni.
Нижеследующие конкретные примеры иллюстрируют процесс получения липосомальной композиции согласно заявленному способу, (примеры 1-8) и способу, согласно прототипу (пример 9)The following specific examples illustrate the process of obtaining a liposome composition according to the claimed method (examples 1-8) and the method according to the prototype (example 9)
- 2 023757- 2 023757
Пример 1.Example 1
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,4, в которой находился криопротектор - лактоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Кардиолипин 0,5 г и фосфатидилхолин - 4 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и кардиолипин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Контроль эмульсии: концентрация 3,29 мг/мл оксалиплатина. Фосфатидилхолин - 4 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 90 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1,5 ч. Контроль эмульсии: концентрация 3,26 мг/мл оксалиплатина.Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.4, in which there was a cryoprotectant - lactose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Cardiolipin 0.5 g and phosphatidylcholine 4 g were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cardiolipin. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Emulsion control: concentration of 3.29 mg / ml of oxaliplatin. Phosphatidylcholine 4 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 90 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1.5 hours. Emulsion control: concentration 3.26 mg / ml oxaliplatin.
Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц не более 170 нм. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,2 мкм. Фильтрация проходила удовлетворительно: 280 мл фильтровали не более, чем за 15 мин. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 162,4 нм - 93,5%, 67,78 - 6,5%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 3,12 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 77,6%. Объем стерильной эмульсии 265,0 мл.The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of not more than 170 nm. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. Filtration was satisfactory: 280 ml was filtered in no more than 15 minutes. The particle size after sterilizing filtration of 162.4 nm is 93.5%, 67.78 - 6.5%. Concentration after sterilizing filtration 3.12 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration of 77.6%. The volume of the sterile emulsion is 265.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 10 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 160,0 до 200 нм, рН 6,55. Включение не менее 97,5%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей в липосомальном продукте на уровне исходной субстанции оксалиплатина.Oxaliplatin not included in liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was performed, 10 ml filling into bottles and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; particle size is stored in the nanoscale from 160.0 to 200 nm, pH 6.55. The inclusion of at least 97.5%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of impurities in the liposomal product at the level of the starting substance oxaliplatin.
Массовое соотношение компонентов в препарате: кардиолипин - фосфатидилхолин - холестерин в соотношении (0,5:8:1) и оксалиплатин - кардиолипин (1:0,5).The mass ratio of the components in the preparation: cardiolipin - phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.5: 8: 1) and oxaliplatin - cardiolipin (1: 0.5).
Пример 2.Example 2
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,5, в которой находился криопротектор - лактоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Фосфатидилглицерин - 0,75 г и фосфатидилхолин - 3 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 5 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 4245°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Контроль эмульсии: концентрация 3,23 мг/мл оксалиплатина.Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.5, in which there was a cryoprotectant - lactose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Phosphatidylglycerol 0.75 g and phosphatidylcholine 3 g were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and phosphatidylglycerol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 5 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 4245 ° C for 120 minutes. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. Emulsion control: concentration 3.23 mg / ml oxaliplatin.
Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц не более 170 нм. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,2 мкм. Фильтрация проходила удовлетворительно: 285 мл фильтровали не более, чем за 15 мин. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 172,4 нм - 100%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 3,08 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 73,1%. Объем стерильной эмульсии 270,0 мл.The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of not more than 170 nm. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. Filtration was satisfactory: 285 ml was filtered in no more than 15 minutes. The particle size after sterilizing filtration of 172.4 nm is 100%. The concentration after sterilizing filtration is 3.08 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration 73.1%. The volume of the sterile emulsion is 270.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 177,0 до 205 нм, рН-6,35. Включение не менее 98,1%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировалоOxaliplatin not included in the liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was carried out, pouring into 20 ml vials and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 177.0 to 205 nm, pH 6.35. Inclusion of at least 98.1%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated
- 3 023757 стабильность продукта. Количество примесей липосомального продукта на уровне исходной субстанции оксалиплатина. Массовое соотношение компонентов в препарате: фосфатидилглицерин фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (0,75:8:1) и оксалиплатин - фосфатидилглицерин (1:0,75).- 3,023,757 product stability. The amount of liposomal product impurities at the level of the starting substance oxaliplatin. The mass ratio of the components in the preparation: phosphatidylglycerol phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.75: 8: 1) and oxaliplatin - phosphatidylglycerol (1: 0.75).
Пример 3.Example 3
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,3, в которой находился криопротектор - трегалоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Дипальмитоилфосфатидилглицерин - 0,95 г и фосфатидилхолин - 4 г растворяли в 150 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и дипальмитоилфосфатидилглицерин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 3 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 90 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Контроль эмульсии: концентрация 3,25 мг/мл оксалиплатина.Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.3, in which there was a cryoprotectant - trehalose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Dipalmitoylphosphatidylglycerol - 0.95 g and phosphatidylcholine - 4 g were dissolved in 150 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and dipalmitoylphosphatidylglycerol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 3 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С within 90 minutes Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. Emulsion control: concentration 3.25 mg / ml oxaliplatin.
Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц не более 170 нм. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров с финишным фильтром 0,22 мкм. Фильтрация проходила удовлетворительно: 285 мл фильтровали не более, чем за 15 мин. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 172,4 нм - 100%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 3,12 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 83,1%. Объем стерильной эмульсии 270,0 мл.The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of not more than 170 nm. The emulsion was filtered through a cascade of filters with a 0.22 μm finish filter. Filtration was satisfactory: 285 ml was filtered in no more than 15 minutes. The particle size after sterilizing filtration of 172.4 nm is 100%. Concentration after sterilizing filtration 3.12 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration of 83.1%. The volume of the sterile emulsion is 270.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 177,0 до 205 нм, рН-6,35. Включение не менее 98,1%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей в липосомальном продукте на уровне исходной субстанции оксалиплатина. Массовое соотношение компонентов в препарате: дипальмитоилфосфатидилглицерин - фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (0,95:8:1) и оксалиплатин - дипальмитоилфосфатидилглицерин (1:0,95).Oxaliplatin not included in the liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was carried out, pouring into 20 ml vials and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 177.0 to 205 nm, pH 6.35. Inclusion of at least 98.1%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of impurities in the liposomal product at the level of the starting substance oxaliplatin. The mass ratio of the components in the preparation: dipalmitoylphosphatidylglycerol - phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.95: 8: 1) and oxaliplatin - dipalmitoylphosphatidylglycerol (1: 0.95).
Пример 4.Example 4
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,5, в которой находился криопротектор - трегалоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Фосфатидную кислоту - 0,95 г и фосфатидилхолин - 5 г растворяли в 100 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 4245°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и фосфатидную кислоту, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 3 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Контроль эмульсии: концентрация 3, 26 мг/мл оксалиплатина. Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц не более 170 нм. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,2 мкм. Фильтрация проходила удовлетворительно: 295 мл фильтровали не более, чем за 15 мин. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 152,4 нм - 100%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 2,95 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 68,1%. Объем стерильной эмульсии 277,0 мл.Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.5, in which there was a cryoprotectant - trehalose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Phosphatidic acid 0.95 g and phosphatidylcholine 5 g were dissolved in 100 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 4245 ° C for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and phosphatidic acid. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 3 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С within 120 minutes Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. Emulsion control: concentration of 3.26 mg / ml oxaliplatin. The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of not more than 170 nm. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. Filtration was satisfactory: 295 ml was filtered in no more than 15 minutes. The particle size after sterilizing filtration of 152.4 nm is 100%. The concentration after sterilizing filtration is 2.95 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration 68.1%. The volume of the sterile emulsion is 277.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0 %, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофили- 4 023757 зации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 167,0 нм до 200 нм, рН-6,45. Включение не менее 96,3%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей липосомального продукта на уровне исходной субстанции. Массовое соотношение компонентов в препарате: фосфатидная кислота фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (0,95:8:1) и оксалиплатин - фосфатидная кислота (1:0,95).Oxaliplatin not included in the liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was carried out, pouring into 20 ml vials and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the preparation is presented in the form of a light amorphous mass of almost white color with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 167.0 nm to 200 nm, pH-6.45. Inclusion of at least 96.3%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of impurities of the liposomal product at the level of the starting substance. The mass ratio of the components in the preparation: phosphatidic acid phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.95: 8: 1) and oxaliplatin - phosphatidic acid (1: 0.95).
Пример 5.Example 5
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,3, в которой находился криопротектор - лактоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Дипальмитоилфосфатидилглицерин - 0,4 г и фосфатидилхолин - 4 г растворяли в 150 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и дипальмитоилфосфатидилглицерин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 4 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.3, in which there was a cryoprotectant - lactose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Dipalmitoylphosphatidylglycerol - 0.4 g and phosphatidylcholine - 4 g were dissolved in 150 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in a vacuum on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and dipalmitoylphosphatidylglycerol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 4 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in a vacuum on a rotary evaporator at 42-45 ° С within 120 minutes Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to a lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion tank was mixed at 130-150 rpm for 1
ч. Контроль эмульсии: концентрация 3,22 мг/мл оксалиплатина.h. Control of the emulsion: the concentration of 3.22 mg / ml of oxaliplatin.
Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц не более 170 нм. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,22 мкм. Фильтрация проходила неудовлетворительно: 285 мл фильтровали более, чем 20 мин. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 172,6 нм - 95%, 45 нм -5,0% Концентрация после стерилизующей фильтрации 3,00 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 53,1%. Объем стерильной эмульсии 250,0 мл.The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of not more than 170 nm. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.22 μm finish filter. The filtration was unsatisfactory: 285 ml was filtered for more than 20 minutes. Particle size after sterilizing filtration 172.6 nm - 95%, 45 nm -5.0%. Concentration after sterilizing filtration 3.00 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration 53.1%. The volume of the sterile emulsion is 250.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин (46,9%) отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 187,0 нм до 200,0 нм, рН-6,5. Включение не менее 96,1%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей липосомального продукта на уровне исходной субстанции оксалиплатина. Массовое соотношение компонентов в препарате: дипальмитоилфосфатидилглицерин - фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (0,4:8:1) и оксалиплатин - дипальмитоилфосфатидилглицерин (1:0,4). Как видно из приведенных данных, снижение количества дипальмитоилфосфатидилглицерина в образцах приводит к снижению включения оксалиплатина в липосомы, затруднению при проведении стерилизующей фильтрации, повышению стоимости продукта т.к. значительно повышаются потери целевого продукта при ультрафильтрации.Oxaliplatin (46.9%) not included in liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, a cryoprotectant was added to a final concentration of at least 8.0%, sterilization filtration was performed, 20 ml filling into bottles and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 187.0 nm to 200.0 nm, pH-6.5. Inclusion of at least 96.1%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of liposomal product impurities at the level of the starting substance oxaliplatin. The mass ratio of the components in the preparation: dipalmitoylphosphatidylglycerol - phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.4: 8: 1) and oxaliplatin - dipalmitoylphosphatidylglycerol (1: 0.4). As can be seen from the data presented, a decrease in the amount of dipalmitoylphosphatidylglycerol in the samples leads to a decrease in the incorporation of oxaliplatin into liposomes, difficulty in sterilizing filtration, and an increase in the cost of the product since significantly increases the loss of the target product during ultrafiltration.
Пример 6.Example 6
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,3, в которой находился криопротектор - лактоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Кардиолипин 1,2 г и фосфатидилхолин - 4 г растворяли в 150 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (6080 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и кардиолипин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 3 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц 200-220 нм. Дальнейшая гомогенизация не приводила к снижению размера. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,2 мкм. Фильтрация проходила неудовлетворительно: 275 мл фильтровали более 30 мин (приходилось дважды заменять фильтры). Размер частиц после стерилизующей фильтрации 215,4 - 86,5%, 132 нм - 13,5%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 2,87Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.3, in which there was a cryoprotectant - lactose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Cardiolipin 1.2 g and phosphatidylcholine 4 g were dissolved in 150 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (6080 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cardiolipin. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 3 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С within 120 minutes Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of 200-220 nm. Further homogenization did not lead to a decrease in size. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. Filtration was unsatisfactory: 275 ml was filtered for more than 30 minutes (had to replace the filters twice). The particle size after sterilizing filtration is 215.4 - 86.5%, 132 nm - 13.5%. Concentration after sterilizing filtration 2.87
- 5 023757 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 77,1%. Объем стерильной эмульсии 230,0 мл.- 5,023,757 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration of 77.1%. The volume of the sterile emulsion is 230.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 187,0 нм до 245,5 нм, рН 6,35. Включение не менее 96,1%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей липосомального продукта на уровне исходной субстанции оксалиплатина. Массовое соотношение компонентов в препарате: кардиолипин - фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (1,2:8:1) и оксалиплатин - кардиолипин (1:1,2). Как видно из приведенных данных, увеличение количества кардиолипина в образцах приводит к увеличению размера липосом (при таком же количестве циклов), затруднению при проведении стерилизующей фильтрации и большим потерям эмульсии, нестабильности липосом при лиофилизации - размеры до 245,5 нм.Oxaliplatin not included in the liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was carried out, pouring into 20 ml vials and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 187.0 nm to 245.5 nm, pH 6.35. Inclusion of at least 96.1%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of liposomal product impurities at the level of the starting substance oxaliplatin. The mass ratio of the components in the preparation: cardiolipin - phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (1.2: 8: 1) and oxaliplatin - cardiolipin (1: 1.2). As can be seen from the above data, an increase in the amount of cardiolipin in the samples leads to an increase in the size of liposomes (with the same number of cycles), difficulty in sterilizing filtration and large losses of emulsion, instability of liposomes during lyophilization - sizes up to 245.5 nm.
Пример 7.Example 7
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,3, в котором находился криопротектор - лактоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Дипальмитоилфосфатидилглицерин - 0,95 г и фосфатидилхолин - 2 г растворяли в 150 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и дипальмитоилфосфатидилглицерин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 4 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Контроль эмульсии: концентрация 3,18 мг/мл оксалиплатина. Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц не более 170 нм. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,22 мкм. Фильтрация проходила неудовлетворительно: 285 мл фильтровали более, чем за 25 мин. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 162,8 нм - 100%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 3,08 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 63,1%. Объем стерильной эмульсии 270,0 мл.Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.3, in which there was a cryoprotectant - lactose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Dipalmitoylphosphatidylglycerol - 0.95 g and phosphatidylcholine - 2 g were dissolved in 150 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and dipalmitoylphosphatidylglycerol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 4 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in a vacuum on a rotary evaporator at 42-45 ° С within 120 minutes Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. Emulsion control: concentration 3.18 mg / ml oxaliplatin. The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of not more than 170 nm. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.22 μm finish filter. The filtration was unsatisfactory: 285 ml was filtered in more than 25 minutes. The particle size after sterilizing filtration of 162.8 nm is 100%. The concentration after sterilizing filtration is 3.08 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration 63.1%. The volume of the sterile emulsion is 270.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 180,0 нм до 235 нм, рН 6,35. Включение не менее 96,4%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей в липосомальном продукте на уровне исходной субстанции оксалиплатина. Массовое соотношение компонентов в препарате: дипальмитоилфосфатидилглицерин - фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (0,95:6:1) и оксалиплатин - дипальмитоилфосфатидилглицерин (1:0,95). Как видно из приведенных данных, уменьшение количества фосфатидилхолина в образцах приводит к увеличению размера липосом (при таком же количестве циклов), затруднению проведения стерилизующей фильтрации и большими потерями эмульсии, нестабильности липосом при лиофилизации - размеры до 235 нм.Oxaliplatin not included in the liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was carried out, pouring into 20 ml vials and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 180.0 nm to 235 nm, pH 6.35. The inclusion of at least 96.4%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of impurities in the liposomal product at the level of the starting substance oxaliplatin. The mass ratio of the components in the preparation: dipalmitoylphosphatidylglycerol - phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.95: 6: 1) and oxaliplatin - dipalmitoylphosphatidylglycerol (1: 0.95). As can be seen from the data presented, a decrease in the amount of phosphatidylcholine in the samples leads to an increase in the size of liposomes (with the same number of cycles), difficulty in sterilizing filtration and large losses of emulsion, instability of liposomes during lyophilization - sizes up to 235 nm.
Пример 8.Example 8
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 300 мл буферной смеси с рН 6,3, в котором находился криопротектор - лактоза. Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Дипальмитоилфосфатидилглицерин - 0,75 г и фосфатидилхолин - 6 г растворяли в 150 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и дипальмитоилфосфатидилглицерин, добавляли стерильный раствор оксалиплатина. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 2 ч. Фосфатидилхолин - 3 г и холестерин 1 г растворяли в 100 мл этанола, фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 42-45°С в течение 90 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 чOxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 300 ml of a buffer mixture with a pH of 6.3, in which there was a cryoprotectant - lactose. The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Dipalmitoylphosphatidylglycerol - 0.75 g and phosphatidylcholine - 6 g were dissolved in 150 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. A sterile solution of oxaliplatin was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and dipalmitoylphosphatidylglycerol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 2 hours. Phosphatidylcholine 3 g and 1 g cholesterol were dissolved in 100 ml of ethanol, filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 42-45 ° С within 90 minutes Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h
- 6 023757 до полного удаления растворителя. К липидной пленке, содержащей фосфатидилхолин и холестерин, прибавляли липидную эмульсию оксалиплатина Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-44°С. Первоначальное давление (2 цикла) 500 атм. Продолжали гомогенизацию при 800-1000 атм до размера частиц около 200 нм (дальнейшее проведение гомогенизации не приводило к существенному уменьшению размера). Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром 0,22 мкм. Фильтрация проходила с значительными трудностями и потерей эмульсии (за счет многократной замены фильтров) Размер частиц после стерилизующей фильтрации 192,4 нм 88,0%, 139,5 - 12%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 2,75 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации 70,1%. Объем стерильной эмульсии 212,0 мл.- 6,023,757 until the solvent is completely removed. Oxaliplatin lipid emulsion was added to the lipid film containing phosphatidylcholine and cholesterol. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-44 ° C. Initial pressure (2 cycles) 500 atm. Homogenization was continued at 800-1000 atm to a particle size of about 200 nm (further homogenization did not lead to a significant reduction in size). The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.22 μm finish filter. Filtration took place with significant difficulties and loss of emulsion (due to multiple filter changes). Particle size after sterilizing filtration is 192.4 nm, 88.0%, 139.5 - 12%. Concentration after sterilizing filtration 2.75 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration of 70.1%. The volume of the sterile emulsion is 212.0 ml.
Не включенный в липосомы оксалиплатин отделяли ультрафильтрацией через мембраны 10 кДа, добавляли криопротектор до конечной концентрации не менее 8,0%, проводили стерилизующую фильтрацию, розлив во флаконы по 20 мл и лиофилизацию. Флаконы герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу, после лиофилизации установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы почти белого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне от 225,0 нм до 265,0 нм, рН 6,25. Включение не менее 92,1%. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало стабильность продукта. Количество примесей в липосомальном продукте на уровне исходной субстанции оксалиплатина. Массовое соотношение компонентов в препарате: дипальмитоилфосфатидилглицерин - фосфатидилхолин - холестерина в соотношении (0,75:10:1) и оксалиплатин - дипальмитоилфосфатидилглицерин (1:0,75). Как видно из приведенных данных, увеличение количества фосфатидилхолина в образцах приводит к увеличению размера липосом (при таком же количестве циклов), затруднению проведения стерилизующей фильтрации и большими потерями эмульсии, нестабильности липосом при лиофилизации - размеры до 265 нм.Oxaliplatin not included in the liposomes was separated by ultrafiltration through 10 kDa membranes, cryoprotectant was added to a final concentration of not less than 8.0%, sterilization filtration was carried out, pouring into 20 ml vials and lyophilization. The bottles were sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method, after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of almost white with a characteristic odor; the particle size is stored in the nanoscale from 225.0 nm to 265.0 nm, pH 6.25. Inclusion of at least 92.1%. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months demonstrated the stability of the product. The amount of impurities in the liposomal product at the level of the starting substance oxaliplatin. The mass ratio of the components in the preparation: dipalmitoylphosphatidylglycerol - phosphatidylcholine - cholesterol in the ratio (0.75: 10: 1) and oxaliplatin - dipalmitoylphosphatidylglycerol (1: 0.75). As can be seen from the above data, an increase in the amount of phosphatidylcholine in the samples leads to an increase in the size of liposomes (with the same number of cycles), difficulty in sterilizing filtration and large losses of emulsion, instability of liposomes during lyophilization - sizes up to 265 nm.
Пример 9 (согласно способу прототипа).Example 9 (according to the prototype method).
Оксалиплатин в количестве 1,0 г растворяют в 100 мл натрий-фосфатного буфера (50 мМ) с рН 7,5 (концентрация оксалиплатина - 10,0 мг/мл). Раствор фильтруют через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Дипальмитоилфосфатидилглицерин (ДПФГ) растворяют в безводном этаноле при 65°С. Полученный раствор смешивают с раствором оксалиплатина таким образом, чтобы конечная концентрация оксалиплатина составляла 5 мг/мл, в молярном соотношении оксалиплатин : ДПФГ (1:1). При этом концентрация этанола в смеси 40%, доводя объем смеси натрий-фосфатного буфера (50 мМ) с рН 7,5 до объема 200 мл (конечная концентрация оксалиплатина 5,0 мг/мл). Смесь инкубировали при температуре 50°С в течение 2 ч. В этих условиях положительно заряженные аминогруппы на молекулах оксалиплатина вступают во взаимодействие с отрицательно заряженными группами на молекуле ДПФГ, образуя в этанольных растворах обратные мицеллы Полученные обратные мицеллы оксалиплатин - ДПФГ концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 65°С до удаления этанола. Затем, полученную водную эмульсию обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) до полного удаления растворителя (время проведения процесса удаления этанола из водного раствора составляло для 200 мл не мнеее 5 ч). Фосфатидилхолин гидрогенизированный сои, холестерин и ПЭГ-2000 растворяли в 150 мл смеси хлороформа и этанола (6:1), фильтровали через мембраны 0,22 мкм и концентрировали в вакууме на роторном испарителе при 60°С в течение 120 мин. Затем, полученную липидную пленку обрабатывали газообразным азотом при перемешивании (60-80 об/мин) в течение 1 ч до полного удаления растворителя. Соотношение фосфатидилхолин: холестерин: ПЭГ-2000 (78,0%:16,0%:4,0%). Соотношение оксалиплатин:фосфолипиды (1:10). К липидной пленке, содержащей липиды прибавляли натрий-фосфатный буфер (50 мМ) с рН 7,5. Емкость с эмульсией перемешивали при 130-150 об/мин в течение 1 ч. Затем преобразуют в липосомы, инкапсулируя монослой оксалиплатин - ДПФГ путем быстрого смешивания с предварительно образованными липосомами, состоящими из холестерина, фосфатидилхолина и ПЭГ200, с последующим диализом против 0,9% натрия хлорида.Oxaliplatin in an amount of 1.0 g is dissolved in 100 ml of sodium phosphate buffer (50 mm) with a pH of 7.5 (oxaliplatin concentration is 10.0 mg / ml). The solution is filtered through 0.22 μm membranes. Dipalmitoylphosphatidylglycerol (DPPH) is dissolved in anhydrous ethanol at 65 ° C. The resulting solution is mixed with a solution of oxaliplatin so that the final concentration of oxaliplatin is 5 mg / ml, in a molar ratio of oxaliplatin: DPPH (1: 1). The concentration of ethanol in the mixture is 40%, bringing the volume of the mixture of sodium phosphate buffer (50 mm) with a pH of 7.5 to a volume of 200 ml (final concentration of oxaliplatin 5.0 mg / ml). The mixture was incubated at a temperature of 50 ° С for 2 h. Under these conditions, positively charged amino groups on oxaliplatin molecules interact with negatively charged groups on a DPPH molecule, forming reverse micelles in ethanol solutions. The resulting reverse micelles of oxaliplatin - DPPH were concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 65 ° C until ethanol is removed. Then, the resulting aqueous emulsion was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) until the solvent was completely removed (the time for carrying out the process of removing ethanol from the aqueous solution was no more than 5 h for 200 ml). Hydrogenated soybean phosphatidylcholine, cholesterol and PEG-2000 were dissolved in 150 ml of a mixture of chloroform and ethanol (6: 1), filtered through 0.22 μm membranes and concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 60 ° C for 120 min. Then, the resulting lipid film was treated with nitrogen gas with stirring (60-80 rpm) for 1 h until the solvent was completely removed. The ratio of phosphatidylcholine: cholesterol: PEG-2000 (78.0%: 16.0%: 4.0%). The ratio of oxaliplatin: phospholipids (1:10). Sodium phosphate buffer (50 mM) at pH 7.5 was added to the lipid film containing lipids. The emulsion container was stirred at 130-150 rpm for 1 hour. Then it was converted into liposomes by encapsulating the oxaliplatin - DPPG monolayer by rapid mixing with preformed liposomes consisting of cholesterol, phosphatidylcholine and PEG200, followed by dialysis against 0.9% sodium chloride.
Полученную эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию экструзией через мембраны для уменьшения размера частиц до 80-120 нм. При этом инкапсуляция составила 54,8%. Проводили стерилизующую фильтрацию, розлив продукта во флаконы во флаконы по 20 мл. Необходимо отметить, что несмотря на небольшой размер частиц, фильтрация проходила весьма медленно, что связано с высокой вязкостью эмульсии и вероятно присутствием ПЭГ-2000 на поверхности липосом. Хранение препарата при температуре от 2 до 8°С в течение 4 месяцев продемонстрировало низкую стабильность продукта - в препарате появлялся осадок и размер частиц увеличивался до 180 нм, что свидетельствует о нестабильности продукта.The resulting emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized by extrusion through membranes to reduce particle size to 80-120 nm. At the same time, encapsulation amounted to 54.8%. Sterilized filtration was carried out, filling the product into 20 ml vials. It should be noted that despite the small particle size, the filtration was very slow, which is due to the high viscosity of the emulsion and probably the presence of PEG-2000 on the surface of liposomes. Storage of the drug at a temperature of 2 to 8 ° C for 4 months showed a low stability of the product - a precipitate appeared in the preparation and the particle size increased to 180 nm, which indicates the instability of the product.
Пример 10.Example 10
При исследовании фармакокинетики липосомального и нелипосомального оксалиплатина при однократном инъекционном введении крысам наблюдается его быстрое выведение из плазмы крови с максимальной концентрацией около 500-1300 нг/мл. Уровни концентраций в плазме липосомального и нелипосомального оксалиплатина существенно не различались. Для нелипосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 481,9 нг-ч/мл, для липосомальной - 305,5 нг-ч/мл.When studying the pharmacokinetics of liposomal and non-liposomal oxaliplatin with a single injection of rats, it is rapidly excreted from blood plasma with a maximum concentration of about 500-1300 ng / ml. Plasma concentrations of liposomal and non-liposomal oxaliplatin were not significantly different. For a non-liposomal dosage form, the AIS (72) was 481.9 ng-h / ml, for a liposomal one - 305.5 ng-h / ml.
- 7 023757- 7 023757
Существенные различия наблюдались при определении оксалиплатина в печени крыс. Стах для липосомальной формы составляла около 20,8 мкг/г (Ттах - 0,25 ч), для нелипосомальной - около 58,3 мкг/г (Ттах - 8 ч). Липосомальный оксалиплатин практически полностью выводился из печени к 72 ч, в отличие от нелипосомального, который сохраняется в печени к 72 ч после введения на уровне 46,6 мкг/г, причем наблюдается тенденция к его кумуляции. Для липосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 49,2 мкг-ч/мл, период полувыведения - 11,1 ч, МКТ - 16 ч. Для нелипосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 2465,8 мкг-ч/мл. Также различия наблюдались для мозга - липосомальный оксалиплатин практически не проникал через ГЭБ и обнаруживался в небольших (до 500 нг/г) не позднее 1,5 ч после введения. Нелипосомальный оксалиплатин обнаруживался в мозге крыс даже спустя 72 ч после введения в диапазоне концентраций 440 - 1940 нг/г).Significant differences were observed in the determination of oxaliplatin in rat liver. Stach for the liposomal form was about 20.8 μg / g (T max 0.25 h), for non-liposomal form about 58.3 μg / g (T max 8 h). Liposomal oxaliplatin was almost completely excreted from the liver by 72 hours, in contrast to non-liposomal oxaliplatin, which persists in the liver by 72 hours after administration at 46.6 μg / g, with a tendency to its cumulation. For the liposomal dosage form, the AIS (72) was 49.2 μg-h / ml, the half-life was 11.1 hours, and MKT was 16 hours. For the non-liposomal dosage form, the AIS (72) was 2465.8 μg / h / ml. . Differences were also observed for the brain - liposomal oxaliplatin practically did not penetrate the BBB and was detected in small ones (up to 500 ng / g) no later than 1.5 hours after administration. Non-liposomal oxaliplatin was detected in rat brain even 72 hours after administration in the concentration range 440–1940 ng / g).
Схожие фармакокинетические профили наблюдались для почек: для липосомального оксалиплатина Стах составила около 32 мкг/г, для нелипосомального - 25 мкг/г (Ттах - 0,25 ч в обоих случаях). Для липосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 175 мкг-ч/мл, период полувыведения - 18,1 ч, МКТ - 31,2 ч. Для нелипосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 175 мкг-ч/мл.Similar pharmacokinetic profiles were observed for the kidneys: for liposomal oxaliplatin, C max was about 32 μg / g, for non-liposomal, 25 μg / g (T max 0.25 h in both cases). For the liposomal dosage form, the AIS (72) was 175 μg-h / ml, the half-life was 18.1 hours, and MKT was 31.2 hours. For the non-liposomal dosage form, the AIS (72) was 175 μg / h.
Аналогичная, как и для почек, картина наблюдалась и для сердца. Для липосомального оксалиплатина Стах составила около 15 мкг/г, для нелипосомального - 9,2 мкг/г (Ттах - 0,25 ч в обоих случаях). Для липосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 130,8 мкг-ч/мл, период полувыведения - 27,4 ч, МКТ - 36,9 ч. Для нелипосомальной лекарственной формы величина АИС(72) составила 188 мкг-ч/мл, период полувыведения - 19,9 ч, МКТ - 46,4 ч.A similar pattern as for the kidneys was observed for the heart. For liposomal oxaliplatin, C max was about 15 μg / g, for non-liposomal oxaliplatin 9.2 μg / g (T max 0.25 h in both cases). For the liposomal dosage form, the AIS (72) was 130.8 μg-h / ml, the elimination half-life was 27.4 hours, and MKT was 36.9 hours. For the non-liposomal dosage form, the AIS (72) was 188 μg-h / ml. , half-life - 19.9 hours, MKT - 46.4 hours.
Таким образом, в связи с низким проникновением липосомального оксалиплатина в печень и мозг, можно предположить о его потенциально низкой гепатотоксичности и нейротоксичности.Thus, due to the low penetration of liposomal oxaliplatin into the liver and brain, we can assume its potentially low hepatotoxicity and neurotoxicity.
Таким образом, результаты физико-химических исследований свидетельствуют о том, что продукт, полученный согласно заявленному способу - гомогенизация в два цикла: первоначально при 500 атм, и последующая при 800 атм до указанного размера; и соотношениях компонентов в итоговом препарате: массовое соотношение компонентов в препарате: отрицательно заряженный фосфолипид - фосфатидилхолин -холестерина в соотношении (0,5 - 0,95:7-8:1) и оксалиплатин - отрицательно заряженный фосфолипид (1:0,5 - 0,95) (см. примеры 1-4), обеспечивают стабильность композиции липосом с включенным в них оксалиплатином. Воспроизведение заявленного способа при изменении параметров (см. примеры 58), а также способ согласно прототипу (пример 9) влечет трудности в реализации собственно способа и снижение качества целевого продукта, а именно:Thus, the results of physico-chemical studies indicate that the product obtained according to the claimed method is homogenization in two cycles: initially at 500 atm, and the subsequent at 800 atm to the specified size; and ratios of components in the final preparation: mass ratio of components in the preparation: negatively charged phospholipid - phosphatidylcholine-cholesterol in the ratio (0.5 - 0.95: 7-8: 1) and oxaliplatin - negatively charged phospholipid (1: 0.5 - 0.95) (see examples 1-4), ensure the stability of the composition of liposomes with incorporated oxaliplatin. Reproduction of the claimed method when changing parameters (see examples 58), as well as the method according to the prototype (example 9) entails difficulties in implementing the method itself and reducing the quality of the target product, namely:
увеличение размера и неоднородность дисперсионного состава липосом (пример 6, 7, 8); уменьшение включения оксалиплатина в липосомы и нестабильность размеров липосом (примерыthe increase in size and heterogeneity of the dispersion composition of liposomes (example 6, 7, 8); a decrease in the incorporation of oxaliplatin into liposomes and instability of liposome sizes (examples
5,6,9);5.6.9);
существенное увеличение времени фильтрации липосомальной эмульсии (пример 6, 7, 8, 9); трудоемкость и длительность проведения процесса (пример 8 и 9).a significant increase in the filtration time of the liposomal emulsion (example 6, 7, 8, 9); the complexity and duration of the process (example 8 and 9).
Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии было проведено изучение стабильности оксалиплатина после лиофилизации в образцах липосом по сравнению с исходной субстанцией. Подтверждена идентичность качественного и количественного состава образцов оксалиплатина после высушивания и последующей регидратации образцов липосом. Содержание примесей и время их удерживания не изменились, что может свидетельствовать о стабильности оксалиплатина в процессе получения липосом и их последующего сублимационного высушивания. Таким образом, использование наночастиц, представляющих собой искусственные мембраны - липосомы, нагруженные гидрофильным цитостатиком оксалиплатином представляют несомненный интерес для дальнейшего изучения. Кроме того, введение в практику препарата имеющего двойное действие - противоопухолевое и мембранопротекторное позволяет улучшить качество лечения за счет снижения токсических проявлений и направленного действия.The method of high performance liquid chromatography was used to study the stability of oxaliplatin after lyophilization in liposome samples compared to the starting substance. The identity of the qualitative and quantitative composition of oxaliplatin samples after drying and subsequent rehydration of liposome samples was confirmed. The content of impurities and their retention time have not changed, which may indicate the stability of oxaliplatin in the process of obtaining liposomes and their subsequent freeze-drying. Thus, the use of nanoparticles, which are artificial membranes - liposomes loaded with hydrophilic cytostatic oxaliplatin are of undoubted interest for further study. In addition, the introduction into practice of a drug with a double effect - antitumor and membrane-protective allows to improve the quality of treatment by reducing toxic manifestations and directed action.
Список литературыList of references
1. Григорьева А.С., Конахович Н.Ф., Стефанов А.В. Краснопольский Ю.М., Темиров Ю.П. Способ отримання липосомального гепатопротекторного засобу. Патент Украины № 465282003.1. Grigoryeva A.S., Konakhovich N.F., Stefanov A.V. Krasnopolsky Yu.M., Temirov Yu.P. The method of eliminating liposomal hepatoprotective zasob. Patent of Ukraine No. 465282003.
2. Дудниченко О.С., Темиров Ю.П. Швец В.И., Краснопольский Ю.М. Спосиб одержання липосомального форми протипухлинного антибиотика. Патент Украины 64591 2005.2. Dudnichenko O.S., Temirov Yu.P. Shvets V.I., Krasnopolsky Yu.M. How did you get the liposomal form of protipuhlinic antibiotic. Patent of Ukraine 64591 2005.
3. Компендиум - лекарственные препараты //пол ред. Коваленко В.Н.,Викторова А.П., Киев: изд. Морион. 2012, Т. 1. Т. 2.3. Compendium - drugs // Paul red. Kovalenko V.N., Viktorova A.P., Kiev: ed. Morion. 2012, T. 1. T. 2.
4. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Технологические аспекты получения липосомальных препаратов в условиях СМР. Биофармацевтический журнал. 2009. 1. № 3. С. 18-29.4. Krasnopolsky Yu.M., Stepanov A.E., Shvets V.I. Technological aspects of obtaining liposome preparations in the conditions of construction and installation. Biopharmaceutical Journal. 2009. 1. No. 3. S. 18-29.
5. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Липидная технологическая платформа для создания новых лекарственных форм и транспорта фармацевтических субстанций. Биофармацевтический журнал. 2011.Т. 3.№2. С. 10-18.5. Krasnopolsky Yu.M., Stepanov A.E., Shvets V.I. Lipid technology platform for the creation of new dosage forms and transport of pharmaceutical substances. Biopharmaceutical Journal. 2011.T. 3.№2. S. 10-18.
6. Кулик Г.И., Пономарева О.В., Король В.И., Чехун В.Ф. Токсичность и противоопухолевая активность липосомальной лекарственной формы доксорубицина. Онкология. 2004. 6. № 3. С. 1-4.6. Kulik G.I., Ponomareva O.V., King V.I., Chekhun V.F. Toxicity and antitumor activity of the liposomal dosage form of doxorubicin. Oncology. 2004. 6. No. 3. S. 1-4.
- 8 023757- 8 023757
7. Кулик Г.И., Пивнюк В.М., Носко М.М., Тодор И.Н., Чехун В.Ф. Липосомальные препараты: путь к преодолению лекарственной устойчивости к цисплатину. Онкология. 2009. 11. № 1. С. 76-80.7. Kulik G.I., Pivnyuk V.M., Nosko M.M., Todor I.N., Chekhun V.F. Liposomal drugs: a way to overcome drug resistance to cisplatin. Oncology. 2009. 11. No. 1. S. 76-80.
8. Пивнюк В.М. Використання липосомальних форм химиопрепаратив у хворих на резистентний до доксорубицину рак молочнои залози / В.М. Пивнюк, Ю.О. Тимовська, О.В. Пономарева, Г.1. Кулик, Г.П. Олейшченко, М.Ф. Аникусько, Ю. М. Краснопольський, В.Ф. Чехун- Онкология. 2007. Т.9. №2.-С. 120124.8. Pivnyuk V.M. Victorian liposomal forms of chemotherapeutic agents in ailments for doxorubicin-resistant breast cancer / V.M. Pivnyuk, Yu.O. Timovska, O.V. Ponomareva, G. 1. Kulik, G.P. Oleyshchenko, M.F. Anikusko, Yu.M. Krasnopolsky, V.F. Chekhun - Oncology. 2007.V.9. No. 2.-C. 120124.
9. Швец В.И., Каплун А.П., Краснопольский Ю.М. От липосом 70-х к нанобиотехнологии 21 столетия. Российские нанотехнологии. //2008. Т. 3. С. 643-655.9. Shvets V.I., Kaplun A.P., Krasnopolsky Yu.M. From liposomes of the 70s to nanobiotechnology of the 21st century. Russian nanotechnology. // 2008. T. 3.P. 643-655.
10. А1Ъег(5 Э.З., Мидд1а Р.М., Сагш1сНае1 Е.Р. е( а1. // Оценка эффективности и безопасности липосомальных антрациклинов: данные клинических исследований Ι-ΙΙ фаз // Современная онкология. 2006. Т. 8. С. 1-39.10. A1Eg (5 E.Z., Midd1a R.M., Sagsh1sNae1 E.R. e (a1. // Efficacy and safety of liposomal anthracyclines: data from clinical trials of S-phase // Modern Oncology. 2006. T. 8.P. 1-39.
11. Апепй С, Те88е1 А., Рауаюй А. е( а1. АсйуНу оГ Ырор1айп ίη (итог апй погта1 се11 ίη уйго // Апйсапсег йгид. 2008. V. 19. Р. 983-990.11. Apepei S, Te88e1 A., Rauayuy A. e (a1. AsyuNu oG Ylororayp ίη (total apy pohta1 se11 ίη uygo // Apsyapseg yyg. 2008. V. 19. P. 983-990.
12. ВоиПказ Р., З(а(Норои1о5 О.Р., Уо1ака1Й5 Ν., Уоидюка М. Зу51ет1с Ырор1айп тГизюп гезиЙз ίη ргеГегепйа1 (итог ир1аке ίη Ьитаη зШФез // Апйсапсег Ре5. 2005. V. 25. Р. 3031-3039.12. VoiPakaz R., Z (a (Noroi1o5 O.R., Uo1aka1Y5 Ν., Woiduka M. Zu51et1s Yororip, TGizyup GeziZ ίη ге ге й ег еп еп 1 (итог итог итог итог 1 η η η η Ф ез ез // Ап // Ap. 3039.
13. ВоиПказ Р. Мо1еси1аг тесНашзт оГ с15р1айп апй Нрозотайу епсар5и1а1ей Гогт, Ырор1айп // Сапсег ТНегару. 2007. V. 5. Р. 351-376.13. Warrior's order of R. Mo1esi1ag tesNaszt oG s15p1ayp apy Nrozotayu epsar5i1a1ey Gogt, Yoror1ayp // Sapseg TNegaru. 2007. V. 5. R. 351-376.
14. ВоиПказ Р. С1ййса1 оуеМеу оп Ырор1айп: а 5иссе55Ги1 Йро5ота1 Гогтп1а(1оп оГ с15р1айп // Ехрей орйиоп оп 1пуе5Йдайопа1 Эгид. 2009. V. 18. Р. 1197-1218.14. Military Order of R. S1yys1 oyeMeu op Yoror1ayp: a 5issu55Gi1 Yro5ota1 Gogtp1a (1op oG s15r1ayp // Expand oryop op 1puy5Idaiop1 Aegis. 2009. V. 18. P. 1197-1218.
15. ВоиНка5 Р. СА^ЕР ТРЕАТМЕЭТЗ. РАТЕЭТ ΑРР^IСΑТIОN ΝΙ.Α1ΒΕΡ 20090053302. РиЪйсайош Па(е 2009-02-26. ИЗРС с1а55 424450. АА 61 К9127 Ρί.15. Warrior5 R. CA ^ EP TREATMETZ. RATEET ΑРР ^ IСΑТИОN ΝΙ.Α1ΒΕΡ 20090053302. Ріййсайош Па (е 2009-02-26. IZRS s1a55 424450. AA 61 K9127 Ρί.
16. Вигдег Κ.Ν.Ι, З(аГПюг5( Р. ХУ.Н.М.. ^Дйег Н.С. е( а1. Nапосар5и1е5: Е1р1й-соа1ей аддгеда(е5 оГ с15р1айп уйН Ыдй суЮЮхюНу // №-1(иге Мей. 2002. V. 8. Р. 81-84.16. Vigdeg Κ.Ν.Ι, Z (aGPyug5 (R. KhU.N.M .. ^ Dieg N.S. e (a1. Naposar5i1e5: E1p1y-soa1 adddyda (e5 oG s15r1yp uyN uyu YuyuhyuNu // No.-1 (Yoke May. 2002. V. 8. R. 81-84.
17. НагппдЮп Κ.Ι, Ве\уап5к1 С.Р., №г(со(е А.Э. е( а1. РНа5е 1-11 51ийу оГ реду1а1ей Р1ро5ота1 с15р1айп (ЗР1 -077) ίη райей5 уНН шорегаЪ1е Неай апй песк сапсег // Апп. Опсо1., 2001, V. 12 Р. 493-496.17. NagppdUn Κ.Ι, Be \ uap5k1 S.R., No. g (co (e A.E. e (a1. RNa5e 1-11 51yu oG redu1a1 P1ro5ota1 s15p1ayp (ZR1-077) ίη rai5 uNN shorega1e Neai apy sand Sapseg // App. Opso1., 2001, V. 12 R. 493-496.
18. К1т Е.8., Ьи С, КНий Р.Р., е( а1. А рйа5е 11 51ийу оГ ЗТЕАЬТН с15р1айп(ЗР1-77) ίη Райеп15 уИН айуапсей поп-5та11 се11 1ипд сапсег // Ьипд Сапсег. 2001. V. 34 Р. 427-432.18. K1t E.8., L S, KNiy R.R., e (a1. A rya5e 11 51yyu OG ZTEATN s15p1ayp (ZR1-77) ίη Rayep15 uIN ayuapsey pop-5ta11 se11 1ipd sapseg // Lip Sapseg. 2001. V. 34 R. 427-432.
19. Рауаюй А., Рар1 М., Ра5ци1П1 Е. е( а1. Ыроркйп топо(Негару: А рНа5е II (па1 ίη 5есопй йпе 1геа1теп( оГ те(а5(айс поп-5та11 се11 1ипд сапсег // ί. оГ Сйтса1 Опсо1оду. 2007. V. 25. Р. 345-352.19. Rauayuy A., Rar1 M., Ra5tsi1P1 E. e (a1. Yororkyp topo (Negaru: A pH-5e II (pa1 ίη 5sopype 1geaepep (oG te (a5 (ice pop-5t11 se11 1yp sapseg // ί. OG Sitts1 Oppo1odu. 2007. V. 25. P. 345-352.
20. З(а(Норои1о5 С., Воийка5 Т., 1<ошуе(ап5 А., З(а(Норои1о5 ί. Р1ро5ота1 охайр1айп ίη (Не (геа(теп( оГ айуапсей сапсег А рНа5е I 5(ийу // ί. Апйсапсег Ре5. 2006. V. 26. Р. 1489-1493.20. Z (a (Noroi1o5 S., Voiyka5 T., 1 <oshuh (ap5 A., Z (a (Noroi1o5 ί. P1ro5ota1 ohai1yp ίη (He (tea (oh Oiuyapsei sapseg A pHa5e I 5 (uyu // ί. Apysapseg Re5. 2006. V. 26. P. 1489-1493.
21. СN 101897668А, РиЪйсайоп йа(е Рапде 01-Эес-2010 - 04-АНг-2012, ЗНапдНа1 1П5(рНагт тйи5(гу. Охайр1айп Е1ро5оте ргерагайоп те(Ной апй аррйсайоп (НегеоГ.21. СN 101897668А, Рійсайоп йа (е Рапде 01-Эес-2010 - 04-Eng-2012, ЗНапдНа1 1П5 (pHag tyy5 (gu. Ohayr1ayp E1ro5ote rgeragayop te (Noy apy arreysayop (NegeoG.
22. У1кЪ)егд А.Р., Ре(ег5еп 8.А., Ме1апйег Ρ., Непйк5еп ГР., Зогдеп5еп К. Р1ро5оте5 Гог йгид йеНушд апй те(Ной Гог ргерагайоп (НегеоГ. АррНсайоп ШтЪег 12/994031. РиЫюайоп5 Эа(е 01/12/2012. А61 К 9/127, А61 К 9/133 А61 К 31/192 А61 К 31/203.22. U1kj) ard R.R., Re (eg5ep 8.A., Me1apyeg Ρ., Nepyk5ep GR., Zogdep5ep K. P1ro5ote5 Gog yygid nNushd apy te (Noi Gog rgeragayop (Negeog. (e 01/12/2012. A61 K 9/127, A61 K 9/133 A61 K 31/192 A61 K 31/203.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA201201596A EA023757B1 (en) | 2012-12-24 | 2012-12-24 | Method of producing oxaliplatin liposome form |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA201201596A EA023757B1 (en) | 2012-12-24 | 2012-12-24 | Method of producing oxaliplatin liposome form |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201201596A1 EA201201596A1 (en) | 2014-06-30 |
| EA023757B1 true EA023757B1 (en) | 2016-07-29 |
Family
ID=51013734
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201201596A EA023757B1 (en) | 2012-12-24 | 2012-12-24 | Method of producing oxaliplatin liposome form |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA023757B1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1775216A (en) * | 2004-11-15 | 2006-05-24 | 胡才忠 | New formulation oxaliplatin liposome |
| CN101103972A (en) * | 2007-07-13 | 2008-01-16 | 陈祥峰 | Oxaliplatinum liposome glucose preparation and its preparation method and application |
| US20090053302A1 (en) * | 2006-03-03 | 2009-02-26 | Parthenios Boulikas | Cancer treatments |
| CN101897668A (en) * | 2009-05-27 | 2010-12-01 | 上海医药工业研究院 | A kind of oxaliplatin liposome and its preparation method and application |
-
2012
- 2012-12-24 EA EA201201596A patent/EA023757B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1775216A (en) * | 2004-11-15 | 2006-05-24 | 胡才忠 | New formulation oxaliplatin liposome |
| US20090053302A1 (en) * | 2006-03-03 | 2009-02-26 | Parthenios Boulikas | Cancer treatments |
| CN101103972A (en) * | 2007-07-13 | 2008-01-16 | 陈祥峰 | Oxaliplatinum liposome glucose preparation and its preparation method and application |
| CN101897668A (en) * | 2009-05-27 | 2010-12-01 | 上海医药工业研究院 | A kind of oxaliplatin liposome and its preparation method and application |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ZALBA S. et al. "Application of different methods to formulate PEG-liposomes of oxalipla-tin: evaluation in vitro and in vivo" Eur J Pharm Biopharm, 2012 Jun; 81(2):pp. 273-280, (реферат), [он-лайн], [найдено 07.06.2013]. Найдено из PubMed, PMID: 22369879 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201201596A1 (en) | 2014-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bazylińska et al. | Polymer-free cubosomes for simultaneous bioimaging and photodynamic action of photosensitizers in melanoma skin cancer cells | |
| EP3787607B1 (en) | Carotenoid compositions and uses thereof | |
| Ma et al. | Injectable self-assembled dipeptide-based nanocarriers for tumor delivery and effective in vivo photodynamic therapy | |
| HUE027467T2 (en) | Liposome of irinotecan or its hydrochloride and preparation method thereof | |
| CN102014870A (en) | Activated nitric oxide donors and methods of making and using thereof | |
| Ghosh | Mesoporous silica-based nano drug-delivery system synthesis, characterization, and applications | |
| JP7057434B2 (en) | Combination drug containing a liposome composition containing a drug and a platinum preparation | |
| US11344499B2 (en) | Nanoparticles as delivery vehicles of active ingredients and methods for the production thereof | |
| CN108295046A (en) | The preparation method and albumin nanoparticle obtained of a kind of albumin nanoparticle and application | |
| CN103479578A (en) | Pixantrone maleate liposome preparation and preparation process thereof | |
| CN108670954B (en) | Chemotherapeutic drug co-loaded glycyrrhetinic acid prodrug micelle and preparation method thereof | |
| KR102487437B1 (en) | Highly Efficient Encapsulation of Hydrophilic Compounds in Monolayer Liposomes | |
| PL226015B1 (en) | Liposome preparation containing anticancer active substance, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing thereof | |
| JP6251385B2 (en) | Liposome composition and production method thereof | |
| WO2015166985A1 (en) | Liposome composition and method for producing same | |
| CN107158377B (en) | Light-controlled temperature-sensitive liposome and preparation method and application thereof | |
| EA021352B1 (en) | Method of producing quercetin liposome form | |
| US11260031B2 (en) | Protein particle with a poorly water-soluble drug encapsulated therein and preparation method thereof | |
| CN103068395A (en) | Therapeutic agent for disease | |
| RU2514000C1 (en) | Liposomal composition and method of its preparation | |
| EA023757B1 (en) | Method of producing oxaliplatin liposome form | |
| CN101160354A (en) | Polymer-type cancer therapeutic agent and method for producing same | |
| JP2017095495A (en) | Molecular mixture comprising amphiphilic molecular species A and amphiphilic molecular species B and polyphenol C exhibiting a positive total charge in the hydrophilic region, method for producing the molecular mixture, and use thereof | |
| AU2021101545A4 (en) | Method for formation of lipid-polymer hybrid nanoparticles for combinatorial vincristine sulfate and lomustine drug delivery | |
| CN103690556A (en) | Hydroxycamptothecine long-circulating liposome |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |