EA022803B1 - Polymeric conjugates of paclitaxel and docetaxel with ph-controlled releasing of the cancerostatic agent - Google Patents
Polymeric conjugates of paclitaxel and docetaxel with ph-controlled releasing of the cancerostatic agent Download PDFInfo
- Publication number
- EA022803B1 EA022803B1 EA201190315A EA201190315A EA022803B1 EA 022803 B1 EA022803 B1 EA 022803B1 EA 201190315 A EA201190315 A EA 201190315A EA 201190315 A EA201190315 A EA 201190315A EA 022803 B1 EA022803 B1 EA 022803B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- polymer
- drug
- ptx
- polymeric
- paclitaxel
- Prior art date
Links
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 title claims abstract description 72
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 title claims abstract description 65
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 title claims abstract description 65
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 title claims abstract description 23
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 title claims abstract description 22
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 title description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 150000004715 keto acids Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 66
- JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 4-oxopentanoic acid Chemical compound CC(=O)CCC(O)=O JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- -1 glycylglycilyl Chemical group 0.000 claims description 21
- 229940040102 levulinic acid Drugs 0.000 claims description 15
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 12
- FLZUYXUBDVKWPO-UHFFFAOYSA-N 4-(2-oxopropyl)benzoic acid Chemical compound CC(=O)CC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 FLZUYXUBDVKWPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 5
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 75
- 229950005692 larotaxel Drugs 0.000 abstract description 7
- SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N larotaxel dihydrate Chemical compound O.O.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@@]23[C@H]1[C@@]1(CO[C@@H]1C[C@@H]2C3)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N 0.000 abstract description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 70
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000003118 drug derivative Substances 0.000 description 16
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 11
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 10
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 7
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 7
- WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 6-phosphonohexylphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCCCCP(O)(O)=O WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 125000005597 hydrazone group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- XQAHOFAHGMZYNU-UHFFFAOYSA-N 5-oxohex-2-enoic acid Chemical compound CC(=O)CC=CC(O)=O XQAHOFAHGMZYNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 2
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000007073 chemical hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940058352 levulinate Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- XGTKSWVCNVUVHG-UHFFFAOYSA-N 4-oxopent-2-enoic acid Chemical compound CC(=O)C=CC(O)=O XGTKSWVCNVUVHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-M 4-oxopentanoate Chemical compound CC(=O)CCC([O-])=O JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SPBQWHPKNVUQLO-UHFFFAOYSA-N 6-oxohept-2-enoic acid Chemical compound CC(=O)CCC=CC(O)=O SPBQWHPKNVUQLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 241001409001 Maera Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150062708 Uso1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N hydrazine group Chemical group NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 150000004722 levulinic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920005684 linear copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- LYUQWAGPWZUFNV-UHFFFAOYSA-N n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NCCCCCC(=O)NN LYUQWAGPWZUFNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 229920001562 poly(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide) Polymers 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 150000004579 taxol derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к структуре и свойствам водорастворимых полимерных терапевтических агентов (пролекарств) на основе производных паклитакселя (РТХ), доцетакселя (ЭТХ) и ларотакселя (ЬТХ), предназначенных в основном для лечения солидных опухолей в терапии опухолевых заболеваний в человеческой медицине.
Предшествующий уровень техники
В настоящее время тенденции разработки лекарств очень часто фокусируются на разработке лекарственных форм, активирующих специфический эффект лекарства только в месте желаемого терапевтического эффекта. Биологически активные вещества, обладающие таким направленным действием, главным образом наносят в области, где нежелательные побочные эффекты лекарства могут повредить здоровые части организма. Эта опасность, в частности, связана с лечением цитостатическими веществами при химиотерапии опухолевых заболеваний. Известно, что присоединение цитостатического агента к водорастворимому полимерному носителю с помощью химической связи делает возможным повышение растворимости иным образом нерастворимых или плохо растворимых лекарств и значительно снижает их прямую токсичность. Высокая молекулярная масса полимеров предотвращают быструю экскрецию лекарства из организма путем клубочковой фильтрации, обеспечивая более длительное время циркуляции в крови и присутствие в организме, и, таким образом, более длительное время биологической доступности лекарства.
В прошлом изготавливали и изучали многие полимерные конъюгаты канцеростатических агентов, в которых лекарство, обладающее действием против рака, присоединяли к полимеру при помощи нерасщепляемой ковалентной связи, гидролитически нестабильной ионной связи и/или ковалентной связи, позволяющей контролируемое высвобождение лекарства и, таким образом, его активацию, на основе ферментативного или простого химического гидролиза этой связи. Системы полимерных носителей обычно конструируются таким образом, чтобы происходило высвобождение терапевтически активного канцеростатического агента из носителя в опухоль или, более специфически, непосредственно в опухолевую клетку. Важная группа полимерных терапевтических агентов представлена полимерными лекарствами, изготовленными на основе сополимеров Ы-(2-гидроксипропил)метакриламида (НРМА), большое количество которых активно направлено на опухоли путем того, что нацеливающая структура присоединена к полимеру (антителу, лектину, гормону) [Эипсап 1985, РПюха 2000, Коресек 2001, 2000, Эипсап, 2005; §а!сЫ-Рашато е! а1., 2006]. Однако их синтез очень сложен. Во время разработки полимерных канцеростатических агентов было доказано, что для специфического транспорта лекарства в место нахождения опухоли нет необходимости применять активно нацеливающий носитель, но значительно повышенного накопления полимерных цитостатических агентов, особенно в солидных опухолях, можно достичь путем повышения молекулярной массы полимерного лекарственного средства выше предела выделения носителя почками (т.е. пассивное нацеливание на солидные опухоли). Эта способность макромолекул накапливаться в солидных опухолях была названа эффектом ЕРК (Повышенная Проницаемость и Удерживание), и было доказано, что этот эффект значительно проявляется у носителей на основе сополимеров НРМА [ЫодисЫ е! а1., 1998; §еушоит е! а1., 1995].
Одна из главных проблем применения сополимеров НРМА в качестве пассивно нацеливающих высокомолекулярных носителей возникает из-за нерасщепляемой углеродной цепи, и единственные полимеры, чья молекулярная масса не превышает 40-50000 г/мол., могут выводиться из организма. Это означает, что если накопление полимера в организме после повторного введения лекарства не происходит, и если молекулярная масса носителя является настолько высокой, насколько это возможно для осуществления пассивного нацеливания настолько эффективно, насколько это возможно, полимерный носитель нужно конструировать как разрушающийся в организме. Такие полимерные носители на основе сополимеров НРМА были недавно разработаны, и их структура была запатентована [СЬуШ е! а1., 2008; ЕПусЬ е! а1., 2008, СЬуШ РУ 2006-207, ЕйусЬ РУ 2006-592].
В литературе упоминают огромное количество информации о изготовлении и исследовании свойств полимеров, несущих канцеростатический агент, прикрепленный к полимеру с помощью связи, чувствительной к гидролизу в водной среде |Кга1/ 1999]. Среди них сополимеры НРМА, несущие канцеростатический агент доксорубицин, связанный с полимерной цепью с помощью гидролитически расщепляемой гидразоновой связи, занимают важное место [Е1тусЬ 2002, ШЬпсН 2004а, ШЬпсН 2004Б, ШЬпсН ра! С2 293787 В6]. Эта связь относительно стабильна в среде кровотока (на пути транспорта в организме) и гидролитически нестабильна в слабокислой окружающей среде живой клетки. Скорость гидролиза этой связи также управляет скоростью высвобождения лекарства и, следовательно, концентрацией активного вещества в месте желаемого эффекта. При проведении испытаний ш уйто, а также ш утуо у мышей такие полимерные канцеростатические агенты проявляли значительно более выраженное противоопухолевое действие против большого числа опухолевых линий, чем свободное лекарство, и в большом количестве случаев их применение приводило к полному восстановлению тестируемого животного даже в случае терапевтического способа введения [КШоуа 2001, ЕПусЬ 2001]. Повышение молекулярной массы носителя (биодеградируемые привитые полимеры, мицеллярные и наногелевые системы) всегда приводит к повышению эффективности противоопухолевого действия лекарства, проверенного в ш утуо системах.
- 1 022803
Паклитаксель и доцетаксель относятся к группе таксанов, лекарств против рака, обычно применяемых для лечения опухолей яичников и молочной железы, легких, предстательной железы и других опухолей [УаиЬоеГег а! а1., 1997]. Кроме их вторичной токсичности, обычной для канцеростатических агентов, они обладают другим недостатком, очень низкой растворимостью в водных растворах, что приводит к необходимости введения в разных вспомогательных веществах, особенно в СгеторЬог ЕЬ, который также приводит к другим побочным эффектам лекарственной формы. В некоторых схемах введения таксанов в СгеторЬог ЕЬ может быть даже значительно снижена эффективность терапии [Ν§ а! а1., 2006]. При связывании этих лекарств с полимерными носителями (РЕО, НРМА сополимер, поли(глютаминовая кислота)) получают очень хорошо растворимые в воде неактивные формы лекарства, обладающие повышенным временем циркуляции в организме и повышенным накоплением в солидных опухолях. Их противораковую активность проверяли ίη У1уо на животных моделях и в некоторых случаях клинически. Таким образом, паклитаксель (РТХ) ковалентно связывали с полиэтиленгликолем (РЕО) с помощью нерасщепляемой сложноэфирной или 7-карбаматной связи (С2-ОН группа) или с помощью гидролитически нестабильного аминокислотного спейсера (А1а, О1у) [ОгееитаМ е! а1., 1995; ОгееитаШ, 2001; ОгееитаШ е! а1., 2003; Репбп е! а1., 1998]. Было показано, что противоопухолевая активность конъюгатов зависит от структуры связи, применяемой между полимером и лекарством, и что молекулярная масса носителя является другим важным фактором. Конъюгат с РТХ тестировали в фазе I клинических испытаний [Ба1сЫРа1иаго е! а1., 2006], но очевидно, что с небольшим успехом.
Конъюгат паклитакселя с поли(глютаминовой кислотой) (Хуо!ах), как оказалось, является более успешным в клинических испытаниях ЦУииег 2005, Кга!/ е! а1., 2008]. В этом конъюгате РТХ связан с полиаминокислотным носителем с помощью сложноэфирной связи через -ОН группу в положении 2. Лекарство высвобождается из-за деградации полимерной цепи, образования О1и производных РТХ и их последующего гидролиза. В настоящее время этот конъюгат находится в фазе III клинических испытаний.
Паклитаксель также соединяли с сополимерами НРМА с помощью эфирной связи с использованием биодеградируемого олигопептидного О1уРЬеЬеиО1у спейсера. Продемонстрировали, что РТХ после инкубирования с лизосомальными ферментами высвобождается из носителя, и это высвобождение важно для достижения противораковой активности ίη У1уо. ΡΝυ166945 представляет собой конъюгат сополимера НРМА, связанного эфирной связью с РТХ, который клинически тестировали в фазе I [Тегоод! е! а1., 2000; Теглуод! е! а1., 2001], однако после этой фазы дальнейшее тестирование прекратили. Описанные выше результаты показывают, что конъюгация паклитакселя с полимерным носителем приводит к значительному улучшению свойств лекарства (растворимости, улучшенной биологической доступности). Однако, если лекарство применяют для лечения людей, то структуру и молекулярную массу носителя, так же как структуру спейсера между полимером и лекарством, контролирование уровня и, таким образом, концентрации лекарства в месте желаемого эффекта следует тщательно выбирать и готовить индивидуально. При разработке оптимальных структур важно проверять функцию этих структур в подходящих ίη У1уо моделях.
Описание изобретения
Полимерное лекарство в соответствии с настоящим изобретением характеризуется тем, что канцеростатический агент из группы таксанов, паклитаксель (РТХ), доцетаксель (ΌΤΧ) или ларотаксель (ЬТХ) (здесь и далее лекарства) связан с водорастворимым полимерным носителем, изготовленным на основе линейного или привитого сополимера НРМА. Лекарство связано с полимерными цепями через сложноэфирную группу, образующуюся при ацилировании группы -ОН в позиции 2 с помощью спейсеров, содержащих чувствительные к рН расщепляемые гидразоновые связи. Эти спейсеры могут состоять из кислотных остатков различных оксокислот, с помощью которых карбонильную группу внедряют в структуру лекарства, связанную с остатками индивидуальных аминокислот, олигопептидов или других структур, позволяя тем самым завершение боковых цепей полимерного носителя гидразоновой группой. В случае линейного полимера молекулярную массу полимерной цепи выбирают ниже предела выведения сополимеров НРМА из организма, предпочтительно в диапазоне 10-50000 г/моль. В случае привитого сополимера выбранная молекулярная масса находится в диапазоне 50-250000 г/моль. Полимерное лекарство по настоящему изобретению предназначено для внутривенного (инъекция или инфузия) введения в растворе, но его также можно ввести внутрь опухоли или внутрибрюшинно, и оно предназначено для лечения солидных опухолей. Полимер с химически связанным цитостатическим агентом конструируется таким образом, чтобы оставаться стабильным во время циркуляции в кровотоке и для предотвращения гидролиза гидразоновой связи между данным таксаном и полимером, или, возможно, сохранять уровень гидролиза во время транспорта через организм настолько низким, насколько это возможно (при значении рН 7,4 в кровотоке), таким образом, чтобы цитотоксический эффект высвобождаемого лекарства или его производного не мог проявиться. Цельную систему конструируют как двухфазную систему. Благодаря подходящему выбору молекулярной массы носителя, позволяющего просачивание, а также эффективное накопление в опухолевой ткани, взаимодействие с клеточной мембраной должно происходить после первичного накопления лекарства в опухолевой ткани, и молекулярно растворенное полимерное лекарство должно проникнуть в отдельные опухолевые клетки путем пиноцитоза. Внутри клеток-мишеней должен
- 2 022803 происходить немедленный гидролиз гидразоновой связи и высвобождение лекарства или его производного из носителя благодаря снижению рН с внешнего значения (7,4) до внутриклеточного значения (5-6). На следующей стадии гидролиз сложноэфирной связи производного лекарства, уже выделившего из полимера, должен осуществляться путем химического гидролиза, или, более специфически, с помощью эффекта внутриклеточных ферментов, например карбоксиэстераз. Осуществимость описанного выше механизма действия полимерных лекарств по изобретению доказана в экспериментах с моделью высвобождения лекарств из полимерного носителя. Результаты этих тестов, включая тесты на активность против рака, приведены в экспериментальной части заявки на изобретение.
Полимерные конъюгаты с направленным эффектом против рака по изобретению отличаются тем, что цитостатический агент (таксол, доцетаксель, ларотаксель) прикреплен с помощью сложноэфирной связи и спейсера к полимерному носителю, образованному линейным [Е!тусЬ ра! ΟΖ 297827 В6, риЫ. 2008] или привитым [Е!тусЬ ра! ΟΖ 298945 (В6), риЫ. 2008] сополимером НРМА через гидролитически нестабильную гидразоновую группу, образованную путем взаимодействия карбонильной группы молекулы производного лекарства с гидразидной группой полимерного носителя. Полимерные носители готовят, главным образом, путем радикальной сополимеризации НРМА с сомономерами, соответствующими желаемой композиции. Связывание соответствующего таксана с полимерным носителем приводит к заметному снижению цитотоксичности, заметному повышению молекулярной массы лекарства и, таким образом, увеличению времени циркуляции в кровотоке; т.е. увеличению общей продолжительности пребывания лекарства в организме и, следовательно, повышению его биологической доступности. Полимерное лекарство согласно изобретению далее характеризуется тем, что связь лекарства с полимерным носителем относительно стабильна в ходе транспорта в кровотоке и жидкостях тела, и она гидролитически расщепляема в слабокислой окружающей среде опухоли и особенно внутри опухолевых клеток мишеней в эндосомах, характеризующихся слабокислым значением рН. Это означает, что лекарство транспортируется через кровоток в инактивированной форме, связанной с полимером, и оно высвобождается и активируется преимущественно после проникновения в опухолевые клетки-мишени. Факт, что лекарство активируется только в клетках-мишенях, устраняет побочные эффекты токсических цитостатических агентов и направляет их действие преимущественно на опухолевые клетки. Существует полимерный носитель, приготовленный на основе сополимеров НРМА, чьи молекулярные массы, т.е. эффективность накопления в опухолевой ткани, могут контролироваться путем изменения в структуре скелета полимерного носителя (не способный к расщеплению линейный полимер, высоко молекулярный биодеградируемый привитой полимер), который отвечает за направленный (пассивный) транспорт к опухоли или опухолевым клеткам.
Область применения настоящего изобретения включает применение полимерных лекарств по изобретению для лечения солидных опухолей при злокачественных заболеваниях человека.
Синтез и структуры полимерных конъюгатов
Синтез полимерных конъюгатов согласно изобретению проводят в несколько стадий; подробная конечная структура конъюгата сильно зависит от выбранного способа синтеза. На первой стадии синтеза основных мономеров синтезируют: НРМА, метакрилоилированные производные аминокислот и олигопептидов, оканчивающиеся гидразидной (ί'.ΌΝΗΝΗ2) группой, или, возможно, заканчивающиеся гидразидной группой, защищенной трет-бутилоксикарбонильной группой (Вос).
На второй стадии синтезируют полимерные предшественники, т.е. сополимеры НРМА, несущие функциональные группы (статистические сополимеры), служащие в качестве полимерных носителей для лекарства. Полимерный предшественник, несущий функциональные гидразидные группы вдоль цепи, можно приготовить с помощью радикальной сополимеризации упомянутых выше функциональных мономеров с НРМА или с помощью превращения основного сополимера, несущего функциональные группы, аналогичного полимерному. Привитые сополимеры готовят из многовалентных и полутелехелатных сополимеров НРМА в соответствии со способом, описанным в |Е1гусН 2008 ра!, риЫ.].
Основной сополимер (предшественник) представляет собой сополимер НРМА и метакрилоилированных гидразидов аминокислот или олигопептидов, выбранных из группы глицила, глицилглицила, βаланила, 6-аминогексаноила (АН), 4-аминобензоила, или смешанного ацила, происходящего из олигопептидов С1уРНсС1у. О1уЬеиО1у, О1уЬеиРЬеО1у и О1уРЬеЬеиО1у, характеризующегося тем, что он содержит 70-98 моль.% НРМА и 2-30 моль.% единиц с гидразидными функциональными группами (см. схему 2 со спейсером, состоящим из 6-аминогексаноила).
Производное лекарства представляет собой соединение лекарства (РТХ, ΌΤΧ или ЬТХ), полученное путем ацилирования гидроксильной группы в положении 2 лекарства, с соответствующей оксокислотой. Предпочтительно применяли следующие оксокислоты: левулиновую кислоту, 4-(2оксопропил)бензойную кислоту, 4-оксопенто-2-еноевую кислоту и 5-оксогекса-2-еноевую и 6-оксогепта2-еноевую кислоту (см. схему 1).
Полимерный конъюгат представляет собой соединение полимерного предшественника с производным лекарства, где производное лекарства связано с полимерным предшественником гидразоновой связью, образованной при взаимодействии карбонильной группы производного лекарства с гидразидными группами полимера, характеризующегося тем, что он содержит 70-98 моль.% НРМА, 1,5-29,5 моль.%
- 3 022803 единиц с гидразидными функциональными группами и 0,5-10 моль.% единиц с производным лекарства, связанным с гидразоном (см. схему 3 со спейсером, состоящим из 6-аминогексаноиловой и левулиновой кислот).
Описание фигур
Фиг. 1 - диаграмма уровня высвобождения РТХ и его производных из линейных полимерных конъюгатов в буфере со значением рН 5 (модель внутриклеточной окружающей среды).
Фиг. 2 - диаграмма уровня высвобождения РТХ и его производных из линейных полимерных конъюгатов в буфере со значением рН 7,4 (модель кровотока).
Фиг. 3 - уровень выживания мышей С57ВЬ/6 с ЕЬ-4 лимфомой, которым вводили ΌΤΧ, производное ЬЕУ-ОТХ и ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΌΤΧ-ΕΕν линейный полимерный конъюгат. Дозы лекарства составляли 2x20 мг эквивалента ΌΤΧ/кг, конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΌΤΧ-ΕΕν вводили в дозах 2x20 и 2x40 мг эквивалента ΌΤΧ/кг.
Фиг. 4 - уровень выживания мышей С57ВЬ/6 с ЕЬ-4 лимфомой, которым вводили производное паклитакселя ΕΕν-ΡΤΧ и ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν линейный полимерный конъюгат. Из-за ограниченной растворимости РТХ не могли вводить в свободной форме.
Фиг. 5 - уровень выживания мышей ВЛЬВ/е с 4Т1 карциномой молочной железы, которым на 8 и 12 сутки вводили паклитаксель, производное паклитакселя ΕΕν-ΡΤΧ и ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν линейный полимерный конъюгат. РТХ и ΡΤΧ-ΕΕν инъецировали в дозе 2x30 мг эквивалента РТХ/кг на 8 и 12 сутки (смотри текст) и конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν в дозе 2x60 мг эквивалента РТХ/кг.
Фиг. 6 - уровень выживания мышей С57ВЬ/6 с ΕΕ-4 лимфомой, которым на 9 и 13 сутки вводили ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-^ΌΤΧ-ΕΕν линейные полимерные конъюгаты с содержанием ΌΤΧ 8,2 и 16,3% в дозе 2x30 мг эквивалента ΌΤΧ.
Примеры.
Примеры проведения синтеза промежуточных соединений и конъюгатов по изобретению.
Пример 1. Синтез мономеров и производных лекарств.
НРМА готовили в соответствии с ранее описанным способом [ШЪгюй с1 а1., 2000]. Элементарный анализ: вычислено 58,8% С, 9,16% Н, 9,79% Ν; найдено 58,98% С, 9,18% Н, 9,82% Ν. Продукт был хроматографически чистым.
6-(Метакрилоиламино)гексаноилгидразин (Ν1 -(6-гидразино-6-оксогексил)-2-метилакриламид) (ΜΑΑΗ-ΝΗΝΗ2) готовили в соответствии с ранее описанным способом [патенты и1Ъг1сП. патент ΕΙγ^όΗ|.
Эфир левулиновой кислоты и паклитакселя (в положении-ОН 2) (ΕΕν-ΡΤΧ) готовили путем взаимодействия левулиновой кислоты с паклитакселем путем карбодиимидного способа (дициклогексилкарбодиимид, ЭСС) в Ν,Ν'-диметилформамиде (ΌΜΡ).
Левулиновую кислоту (19,4 мг, 0,167 ммоль) и ЭСС (37,5 мг, 0,182 ммоль) растворяли каждый в 0,15 мл ΌΜΡ при температуре лаборатории. Оба раствора охлаждали до -18°С и смешивали. Через 20 мин раствор паклитакселя (100 мг, 0,117 ммоль) и Ν,Ν-диметиламинопиридина (ΌΜΑΡ) (14 мг, 0,117 ммоль) в 0,3 мл ΌΜΡ добавляли к этому раствору. Взаимодействие происходило при -18°С в течение 30 мин и при 4°С в течение 16 ч. За ходом реакции наблюдали с помощью планшетов на силикагеле для ΤΕΕ’ (тонкослойной хроматографии) - 60 Р254 (этилацетат:гексан 1:1, Κί(ΡΤΧ)=0,25, ΡΓ(^ΕV-РТХ)=0.15. ΡΓ(левулиновой кислоты)=0,45). Продукт очищали от низкомолекулярных примесей с помощью хроматографии на колонке (60x4 см), заполненной силикагелем в этилацетате. Фракцию, содержащую продукт ΡΤΧ-ΕΕν, собирали и концентрировали до 0,4 мл, и продукт осаждали с 20 мл диэтилового эфира. Продукт отбирали, промывали небольшим количеством эфира и сушили в условиях вакуума до постоянной массы. Выход составлял 98 мг продукта (84%) с точкой плавления от 136 до 138°С. ТСХ (этилацетат:гексан 1:1): одно пятно с РГ=0,15. ΜΑΣΌΙ-ΤΟΡ Μδ: 970 (Μ+№).
Чистоту мономеров и производных лекарства проверяли с использованием системы ВЭЖХ [система ВЭЖХ δΐιίιηαύζιι. оборудованная обращенно-фазовой колонкой СЬготоШЬ ЕсгГогтапсс ΡΡ-18ο (100x4,6 мм) и υν-νΐδ детектором - δΐιίιηαύζιι δΡΌ- ΙΟΑννρ (230 нм); элюент: вода-ацетонитрил с градиентом 50-100 об.% ацетонитрила, скорость потока жидкости 0,5 мл мин-1].
Эфир левулиновой кислоты и доцетакселя (в позиции 2 -ОН) (ΌΕν-ΌΤΧ) готовили по аналогии с ΕΕν-ΡΤΧ путем карбодиимидного способа (ЭСС) в ΌΜΡ.
Левулиновую кислоту (38 мг, 0,327 ммоль) и ЭСС (100 мг, 0,487 ммоль) растворяли каждый в 0,25 мл ΌΜΡ при температуре лаборатории. Оба раствора охлаждали до -18°С и смешивали. Через 20 мин раствор доцетакселя (200 мг, 0,247 ммоль) и Ν,Ν-диметиламинопиридин (ΌΜΑΡ) (28 мг, 0,229 ммоль) в 0,6 мл ΌΜΡ добавляли к этому раствору. Взаимодействие происходило при -18°С в течение 30 мин и при 4°С в течение 16 ч. За ходом реакции наблюдали с помощью пластин силикагеля для ТСХ (тонкослойная хроматография) 60 Р254 (этилацетат:гексан 1:1, ΚΓ(ΌΤΧ)=0,3, ΡΓ(ΕΕν-ΌΤΧ)=0,2, ΡΓ(левулиновой кислоты)=0,45). Продукт очищали от низкомолекулярных примесей дважды с использованием колоночной хроматографии (60x4 см), заполненной силикагелем в этилацетате. Фракцию, содержащую продукт ΌΤΧ-ΌΕν, собирали каждый раз и концентрировали до 0,6 мл, а продукт осаждали с 20 мл диэтилового эфира. Продукт отбирали, промывали небольшим количеством диэтилового эфира и сушили в условиях
- 4 022803 вакуума до постоянной массы. Выход продукта составлял 179 мг продукта (80%) с точкой плавления от 86 до 89°С. ТСХ (этилацетат:гексан 1:1): одно пятно с Κί=0,20. ΜΑΡΌΙ-ТОР (время-пролетная ионизация лазерной десорбцией с использованием матрицы) Μδ: 929 (Μ+Ыа).
Структуры сложных эфиров левулиновой кислоты и 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты с паклитакселем и доцетакселем: А) эфир левулиновой кислоты и паклитакселя, ЬЕУ-РТХ; В) эфир 4-(2оксопропил)бензойной кислоты и паклитакселя, ОРВ-РТХ; С) эфир левулиновой кислоты и доцетакселя, ЬЕУ-ОТХ.
Сложный эфир 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты и паклитакселя (в положении 2 -ОН) (ОРВРТХ) готовили с помощью такого же вышеописанного способа для приготовления ЬЕУ-РТХ, а именно путем взаимодействия 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты и паклитакселя с использованием реагента для конъюгации ЭСС в ΌΜΡ. Выход продукта составил 85%. Точка плавления от 143 до 145°С. ТЬС (этилацетат:гексан 1:1): одно пятно с Κί=0,25. ΜΑΣΌΙ-ТОР Μδ: 1032 (Μ+Ыа).
Сложный эфир 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты и доцетакселя (в положении 2 -ОН) (ОРВ-РТХ) готовили с помощью такого же вышеописанного способа для приготовления ΌΤΧ-ЬЕУ, а именно путем взаимодействия 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты с доцетакселем с использованием ЭСС в ΌΜΡ. Выход продукта составил 81%. Точка плавления от 94 до 96°С. ТЬС (этилацетат:гексан 1:1): одно пятно с Κί=0,28. ΜΑΣΌΙ-ТОР Μδ: 990 (Μ+Ыа).
Сложный эфир 4-оксопентеноевой [3-ацетилакриловой] кислоты и паклитакселя (в положении 2 ОН) (ААК-РТХ) готовили с помощью такого же вышеописанного способа для приготовления ЬЕУ-РТХ, а именно путем взаимодействия 4-оксопентеноевой кислоты с паклитакселем с использованием ЭСС в ΌΜΡ. Выход составлял 86%. Точка плавления от 138 до 139°С, ТСХ (этилацетат:гексан 3:1): одно пятно с Ρί=0,6. ΜΑΣΌΙ-ТОР Μδ: 968 (Μ+Ыа).
Сложный эфир 5-оксогексеновой кислоты и паклитакселя (в положении 2 -ОН) (ОНЕ-РТХ) готовили с помощью такого же вышеописанного способа для приготовления РТХ-ЬЕУ, а именно путем взаимодействия 5-оксогексеновой кислоты с паклитакселем с использованием реагента для конъюгации ЭСС в ΌΜΡ. Выход составлял 85%. Точка плавления от 132 до 134°С, ТСХ (этилацетат:гексан 3:1): одно пятно с Ρί=,65. ΜΑΣΌΙ-ТОР Μδ: 982 (Μ+Ыа).
Сложный эфир 5-оксогексеновой кислоты и доцетакселя (в положении 2 -ОН) (ОНЕ-ОТХ) готовили с помощью такого же вышеописанного способа для приготовления ЭТХ-БРУ. а именно путем взаимодействия 5-оксогексеновой кислоты с доцетакселем с использованием реагента для конъюгации ЭСС в ΌΜΕ. Выход продукта составлял 86%. Точка плавления от 84 до 86°С. ТСХ (этилацетат:гексан 3:1): одно пятно с Κί=0,7. ΜΑΡΌΙ-ТОР Μδ: 940 (Μ+Ыа).
Пример 2. Синтез полимерного предшественника - сополимера ΗΡΜΑ с ΜΑ-ΑΗ-ΝΗΝΗ2.
Поли(ΗРΜΑ-СО-ΜΑ-ΑΗ-NΗNΗ2) сополимер готовили путем радикальной сополимеризации НРМА и ΜΑ-ΑΗ-ΝΗΝΗ2 в метаноле при 60°С в соответствии с описанным ранее способом [патент ЕйусЬ].
Структуры предшественника полимера, поли(НРМА-со-МА-АН-МНМН2) сополимер.
- 5 022803
Пример 3. Получение полимерных конъюгатов, содержащих производные лекарств (ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗΝ=ΕΕν-ΡΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΕΕν-ΌΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΟΡΒ-ΡΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΟΡΒΌΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΟΗΕ-ΡΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΟΗΕ-ΌΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΑΚΚ-ΡΤΧ и ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΑΚΚ(-ΌΤΧ).
Сополимеры с производными РТХ, ΌΤΧ и ΕΤΧ, связанные с носителем РНРМА с помощью гидролитически расщепляемой гидразоновой связью, получали путем взаимодействия предшественников полимеров, содержащих гидразиновые группы, с соответствующими производными лекарств в метаноле в условиях катализа уксусной кислотой.
Раствор 100 мг поли(НРМА-со-МА-АН-NΗNΗ2) сополимера в 1,1 мл метанола смешивали с раствором ΕΕν-ΡΤΧ в 0,2 мл метанола. Через 1 мин к перемешиваемой реакционной смеси при 25°С добавляли 40 мкл уксусной кислоты. За ходом реакции (утрата ΕΕν-ΡΤΧ) наблюдали с помощью ТСХ (пластины силикагеля 60Р254, этилацетат, Ρί(ΕΕν-ΡΤΧ)=0,8). Через 2 ч реакционную смесь очищали от свободных производных лекарств путем гель-фильтрации на колонке, заполненной Сефадексом ΕΗ-20 в метаноле. Полимерную фракцию выделяли, концентрировали в вакуумном испарителе, и продукт осаждали 50 мл этилацетата, выделяли с помощью фильтрации на фритте 84, отмывали 150 мл этилацетата и высушивали до постоянной массы.
Содержание общего РТХ или его производных в полимерном конъюгате определяли с помощью способа ВЭЖХ (система для ВЭЖХ δΐιίιηαύζιι) после полного гидролиза полимерного конъюгата в растворе Η0 (рН 2) при 37°С в течение 1 ч и экстракции производного РТХ хлороформом. Μν и распределение молекулярной массы определяли с помощью жидкостной хроматографии (колонка Τ8ΚΟβ1 4000 (300x10 мм), 20% 0,3М ацетатный буфер (ΕΗ3ΕΟΟΝα/ΕΗ3ΕΟΟΗ: рН 6,5; 0,5 г/л ΝαΝ3) и 80% метанол, скорость потока 0,5 мл/мин, детекцию осуществляли с помощью дифференциального рефрактометра, детектора рассеивания света (ΌΑνΝ-ΌΞΡ-Ρ, \УуаЦ Τοαίιηοίοβν, υ8Α) и УФ-детектора (250 нм). Описание полимерного лекарства: общий выход реакции связывания лекарства 96 мг (88%), содержание общего ΕΕν-ΡΤΧ составило 9,2 мас.%, содержание свободного РТХ<0,2% от общего содержания РТХ. Способ связывания производного РТХ с предшественниками полимеров с помощью гидразоновой связи являлся таким же, как и для всех типов предшественников и производных лекарств.
Схема 3.
Структуры полимерного конъюгата ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΌΤΧ-ΕΕν со связывающим производным, сложным эфиром левулиновой кислоты и доцетакселем.
Пример 4. Высвобождение РТХ, ΌΤΧ или их производных из полимерных конъюгатов. Количества РТХ, ΌΤΧ или их производных, высвобождающихся из полимерных конъюгатов, измеряли после их инкубации в фосфатном буфере со значением рН 5,0 (0,1М фосфатный буфер, содержащий 0,05 М Ν;·ιΟ), имитирующем внутриклеточную среду, и в фосфатном буфере со значением рН 7,4, имитирующем среду кровотока. Количества высвобождающихся лекарств или их производных в растворах для инкубации определяли с помощью ВЭЖХ (δΐιίιηαύζιι). Через определенные временные интервалы 200 мкл дозы растворов для инкубации отбирали и после экстракции высвободившегося лекарства и его производных хлороформом их количества определяли с использованием системы ВЭЖХ [система ВЭЖХ δΐιίιηαύζιι, оборудованная обращенно-фазовой колонкой СйгошоШЪ ΡοιΤοπηαηοο ΚΡ-18β (100x4,6 мм) и детектором υν-νΐ8 - δΐιίιηαύζιι 8ΡΌ - 10Αννρ (230 нм); элюент:вода-ацетонитрил с градиентом 50-100 об.% ацетонитрила, скорость потока 0,5 мл мин-1.
После инкубации конъюгатов (концентрация 5 мг/мл) в физиологической окружающей среде при 37°С (фосфатный буфер, рН 7,4) лекарства (РТХ и ΌΤΧ) (или их производные) высвобождались значительно медленнее (фиг. 2), чем в слабокислой среде с рН 5,0, имитирующей среду эндосом и лизосом опухолевых клеток (фиг. 1). Для обоих лекарств на уровень высвобождения из полимерного конъюгата и пропорцию выделенных компонентов (лекарств и их производных) принципиально влияла структура оксокислотного спейсера. Спейсер, состоящий из левулиновой кислоты или 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты, позволял очень быстрое высвобождение производного лекарства при рН 5; однако гидролиз эфирной связи между лекарством и кислотой происходил очень медленно. С другой стороны, спейсер,
- 6 022803 состоящий из 4-оксопентеновой кислоты, стабилизировал и гидразоновую, и эфирную связь, таким образом, что не происходило значительного высвобождения лекарства или его производного. Во время инкубации в физиологической среде с рН 7,4 происходил частичный гидролиз гидразоновой связи в случае полимерного конъюгата со спейсером, состоящим из левулиновой кислоты или 4-(2оксопропил)бензойной кислоты, со значительно более низким уровнем по сравнению со средой со значением рН 5. Доказано, что стабильность сложноэфирной связи между левулиновой кислотой и лекарством при рН 7,4 ниже, и свободные лекарства высвобождаются в объеме одной трети. С другой стороны, в случае спейсера, состоящего из 4-(2-оксопропил)бензойной кислоты, высвобождается только производное лекарства, эфирная связь стабильна. Распад производного лекарства до свободного лекарства или прямого расщепления лекарства из полимерного конъюгата предположительно происходит из-за действия ферментов, в основном карбоксиэстераз.
Пример 5. Демонстрация биологической активности ίη νίίτο линейных полимерных конъюгатов доцетакселя и паклитакселя во время инкубации с клетками опухолевых линий; ЕЬ-4 Т клеточной лимфомы и 4Т1 карциномы молочной железы.
Таблица 1
Значения 1С50 (в нг/мл).
Пример 6. Демонстрация биологической активности ίη νίνο линейных полимерных конъюгатов доцетакселя и паклитакселя у мышей, иноколурованных ЕЬ4 Т клетками лимфомы.
Для демонстрации ίη νίνο активности конъюгатов доцетакселя и палитакселя применяли модель мышиной изогенной Т клеточной лимфомы ЕЬ-4. На 0 сутки мышам линии С57ВЬ/6 (самки) подкожно имплантировали 1х105 ЕЬ-4 опухолевых клеток. Лекарства вводили внутривенно (ί.ν.) двумя дозами, которые вводили на 8 и 12 сутки после трансплантации опухолевых клеток. Первую дозу вводили, когда опухоли были хорошо развиты, прощупываемы, размером приблизительно 300 мм3. В эксперименте наблюдали размер опухоли, массу тела мыши, общее состояние здоровья и уровень выживания. Эффект конъюгата все время сравнивали с эффектом свободного лекарства (ЭТХ, РТХ) и его производных (ЭТХ-ЬБУ, РТХ-ЬЕУ). Средняя продолжительность жизни контрольных мышей с лимфомой ЕЬ-4, которым ничего не вводили, составило 31,3 суток (8Ό (3Ό 3,66, средняя продолжительность жизни 30,5 суток). ΌΤΧ, РТХ, а также производные ЭТХ-ЬБУ, РТХ-ЬЕУ растворяли для внутривенного введения в смеси Сгеторйог ЕЬ (Зщта. ИЗА) и этанола (1:1); после растворения лекарства объем дополняли 4 объемными частями РВЗ (физиологического раствора, забуференного фосфатом). Конъюгаты РНРМА-АНХН-Х=ПТХ-ЬЕУ, РНРМА-АН-ХН-Х=РТХ-ЬЕУ растворяли в РВЗ. Объем каждой отдельной дозы лекарства составлял 0,2 мл. Применяли следующие дозы лекарственных средств: ЭТХ и производное ЭТХЬЕУ-2х20 мг эквивалента ЭТХ/кт, конъюгат РНРМА-АН-ХН-Х=ПТХ-ЬЕУ - 2x20 и 2x40 мг эквивалента ЭТХ/кт, РТХ и производное РТХ-ЬЕУ - 2x30 мг эквивалента РТХ/кг, конъюгат РНРМА-АН-ХН-Х=РТХЬЕУ - 2x60 мг эквивалента РТХ/кг.
A. Противораковая активность конъюгата РНРМА-АН-ХН-Н=ПТХ-ЬЕУ (фиг. 3).
Свободный ЭТХ привел к полной регрессии опухолей ЕЬ-4 у 4 мышей из 7 тестируемых мышей. Производное ЬЕУ-ЭТХ обладало более слабым эффектом и привело к полной регрессии опухоли ЕЬ-4 у 1 из 8 тестируемых мышей. Конъюгат РНРМА-АН-ХН-Х=ПТХ-ЬЕУ в дозе, эквивалентной свободному ЭТХ (2x20 мг эквивалента ЭТХ/кг), также вылечил 1 мышь из группы, состоящей из 8 мышей. Однако удвоение дозы конъюгата (2x40 мг эквивалента ЭТХ/кг) привело к исцелению 7 мышей из группы (η=8). Ни в одной из тестируемых групп не наблюдали потери массы (как индикатора токсичности лекарства). У мышей, у которых произошла полная регрессия опухоли, не наблюдали никаких симптомов роста опухоли или токсичности до 94 суток, когда им снова трансплантировали клетки ЕЬ-4 в той же (т.е. летальной) дозе, и мыши были оставлены без лечения. Эту вторую трансплантацию проводили для доказательства иммунологически опосредованной устойчивости против опухоли. Статистически значимая часть мышей, которых лечили с помощью конъюгата РНРМА-АН-№Н-К=ЭТХ-ЬЕУ (2x40 мг экв. ЭТХ/кг), была устойчива к ЕЬ-4 опухоли (5 устойчивых мышей из 7, т.е. 71%). Среди мышей, которых лечили свободным ЭТХ, также обнаружилась сходная часть устойчивых индивидуумов (3 мыши из 4 вылеченных были устойчивы).
Вывод: конъюгат РНРМА-АН-ХН-Х=ПТХ-ЬЕУ обладает значительным противораковым эффектом у мышей С57ВЬ/6 с ЕЬ-4 лимфомой, его введение не сопровождалось токсическими побочными эффектами и способствовало установлению устойчивости к опухоли в 71% излеченных индивидуумов.
B. Противораковая активность конъюгата РНРМА-АН-ХН-Н=РТХ-ЬЕУ (фиг. 4).
- 7 022803
Невозможно вводить свободный РТХ мышам из-за его очень ограниченной растворимости (мыши погибали немедленно после инъекции). Производное ΡΤΧ-ΌΕν не обладало противораковым действием на ЕЬ-4 лимфому (оно не продлевало среднюю продолжительность жизни, ни одна мышь не была вылечена; п=8). Конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν в дозе 2x60 мг эквивалента РТХ/кг не вылечил ни одной мыши или не продлил среднее времени жизни (п=8). Ни в одной группе не было отмечено потери массы как индикатора токсичности лекарства.
Вывод: производное ΡΤΧ-ΕΕν (2x30 мг экв. РТХ/кг) или конъюгат, содержащий производное РТХ (2x60 мг экв. РТХ/кг), не обладали никаким лечебным эффектом при лечении изогенной ЕЬ-4 лимфомы у мышей.
Пример 7. Демонстрация биологической активности ίη νίνο линейного полимерного конъюгата паклитакселя у мышей, инокулированных 4Т1 карциномой молочной железы (фиг. 5).
Применяли модель мышиной изогенной карциномы молочной железы 4Т1. Мышам линии ВАЬВ/с (самкам) подкожно имплантировали 1х 106 4Т1 клеток карциномы на 0 сутки. Лекарства вводили внутривенно (ΐ.ν.) двумя дозами на 8 и 12 день после трансплантации опухолевых клеток. Первую дозу вводили, когда опухоль была хорошо развита, прощупывалась, с размером приблизительно 300 мм3. В ходе эксперимента наблюдали за размером опухоли, массой тела мышей, общим состоянием здоровья и уровнем выживания. Эффект конъюгата всегда сравнивали с эффектом свободного лекарства (РТХ) и его производного (ΡΤΧ-ΕΕν). Среднее время выживания контрольных мышей, которым не водили лекарства, составило 34,9 суток (8Ό 2,59; среднее время выживания 35 суток).
РТХ, ΡΤΧ-ΕΕν и конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν готовили для внутривенного введения таким же способом, как упоминалось выше (см. пример 6 А, В). Вводили следующие дозы: РТХ и ΡΤΧΕΕν в дозе 2x30 мг эквивалента РТХ/кг, конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν в дозе 2x60 мг эквивалента РТХ/кг.
Конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν полностью вылечил 3 из 8 тестируемых мышей. После введения производного ΡΤΧ-ΕΕν регрессия 4Т1 опухоли произошла у 1 из 8 мышей. Введение свободного лекарства (РТХ) сопровождалось значительными побочными эффектами: внутривенное введение второй дозы вызывало тяжелые реакции (спазмы, позднее плохое общее состояние - поднятая дыбом шерсть, вялость, которая продолжалась по меньшей мере 24 ч) у первой половины мышей. Для других мышей в группе вторую дозу уменьшили на 10% и вводили внутрибрюшинно вместо внутривенного введения. Вылечилась только одна мышь, которой вводили дозу лекарства внутривенно, у других мышей не было обнаружено лечебного эффекта РТХ. Ни в какой тестируемой группе не отмечали потерю массы в качестве индикатора токсичности.
Для проверки устойчивости к 4Т1 опухоли вылеченным мышам через 129 суток после первой трансплантации снова трансплантировали опухолевые клетки. Во второй раз инъецировали О105 4Т1 клеток подкожно, и мышей оставляли без лечения. У всех этих мышей (3 вылеченных конъюгатом РНРΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν, 1 вылеченная ΡΤΧ-ΕΕν) опухоли не росли, что означает, что эти мыши были устойчивы к данной опухоли.
Вывод: конъюгат ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΡΤΧ-ΕΕν обладает значительным противораковым эффектом у мышей ΒΑΌΒ/с с 4Т1 карциномой молочной железы, его введение не сопровождалось никаким побочным токсическим эффектом и способствовало установлению устойчивости к опухоли у 38% вылеченных индивидуумов.
Пример 8. Демонстрация биологической активности ίη νίνο линейного полимерного конъюгата доцетакселя с различным содержанием лекарства у мышей, инокулированных Т клетками ΕΕ4 лимфомы (рис. 6).
Применяли опухолевую модель ΕΕ-4 лимфомы, описанную выше (пример 6). Конъюгаты ΡΗΡΜΑΑΗ-ΝΗ-Ν=ΌΤΧ-ΕΕν с содержанием лекарства ΌΤΧ 8,2 мас.% (9,1 мас.% ΌΤΧ-ΌΕν) и 16,3 мас.% ΌΤΧ (18,0 мас.% ΌΤΧ-ΕΕν) растворяли в ΡΒδ (0,2 мл) для введения, и субоптимальную дозу 2x30 мг эквивалента ΌΤΧ/кг вводили внутривенно на 9 и 13 сутки после трансплантации опухолевых клеток.
Конъюгат с более низким содержанием лекарства (8,2% ΌΤΧ) вылечил 1 из 8 тестируемых мышей, и у других он продлил время выживания статистически значимым образом (не обработанные контроли: средняя продолжительность жизни 27,25 суток, δΌ 1,64, среднее 28 суток; обработанные мыши: среднее 41,75 суток, δΌ 6,54, медиана 45 суток; р<0.01). Конъюгат с более высоким содержанием лекарства (16,3% ΌΤΧ) также привел к вылечиванию 1 из 8 тестированных мышей, но время жизни других мышей не было значительно увеличено.
Вывод: содержание производного лекарства в конъюгате ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν=ΌΤΧ-ΕΕν оказывало значительное влияние на противораковый эффект у мышей С57ВЬ/6 с ΕΌ-4 лимфомой при введении в субоптимальной дозе 2x30 мг эквивалента ΌΤΧ/кг. Полимерный конъюгат с более низким содержанием обеспечил более высокую противораковую активность.
- 8 022803
Список литературы
Р. Оипсап, ΰ.Β. 1_1оус1, к Коресек, Р. Ре)тапоуа, ΰ. 81гоЬа1т, К. и1ЬпсН, В. Ρίίιονθ, V. СЬу(гу, ЗуШЬейС Ро1утепс Огидз (1985). СгесЬ. РУ 0095/85, Аиз(гаНа 589587, СапаРа 130053, Оептагк 164485, Еигоре 0187547, 1)5 5,037,883,1арап 000137/86.
Р. Оипсап, Ы-(2-НуРгохургору1)те1Масгу1ат1ре соро1утег соп]ида1ез, ίη ) Зу/агЬпск (еР), Огидз апР (Ье РНагтасеийиРса! Заепсез: Воса Ра(оп, Тау1ог & Ргапс15, р. 1-92 (2005).
Т. Е1гусЬ, М. ЗеПпкоУЭ, В. Рктоуа, К. 1ПЬпсЬ К., Νβνν НРМА соро1утегз соп1а1П1пд РохогиЬюп ЬоипР νίβ рН зепзкуе Ипкаде. Зуп1Ьез13, ίη νίίΓΟ апР ίη νίνο Ью1од1са1 ргорегЬез. ϋ. Соп1го11еР Ре1еазе 73,89-102 (2001).
Т. Е1гусЬ, Р. СЬуМ, М. ЬейпИоуа, В. ΡίΚονβ, К. 1НЬпсЬ, Зуп1Ьез!5 οΐ НРМА Соро1ушег8 Соп1а1П1пд ОохогиЬгап ВоипР νίβ а НуРгагопе ипкаде. ЕЯес1 οί Зрасег оп Огид Ре1еазе апР ίη νίίΓΟ Су1о1ох1С0у. Масгото1еси1аг Вюзск 2, 43-52 (2002).
Т. Е1гусЬ, Р. СЬуМ, М. РесЬаг, М. 51иРепоУзку, В. Ρίίιονθ, К. БИЬпсЬ, гризоЬ рпргауу ро1утегп1сИ коцидаШ РохогиЬюпи з рН-Ьгепут иуо1поуап1т Ιβανθ, ΟΖ 297 827 В6.
Т. Е1гусЬ, Р, СЬуЫ, К. БНЬпсЬ, Т. Мгкуап, В. Р+оуа, Ро1утегтн Ιθοίνο а гризоЬ )еГо уугоЬу. ΟΖ 298945 В6.
Т. Е1гусЬ, К. ШЬпсЬ: Ро1утет1 коп)ида1у РохогиЬгапи з рН-Ьгепут υνοίηονθπίιτι 1еота а гризоЬ ίβίίοίι рпргауу. ΟΖ РУ-2006-505, ΟΖ ра(. 299053 В6
Т. Е1гусН, Р. СЬуЫ, Т. Мгкуап, М. Зкоуа, В. Ρίίιονβ, К. (ЛЬпсЬ, Соп|ида1ез οί РохогиЬгап ννίΙΚ дгаЙ НРМА соро1утегз (ог раззке (итог 1агдеЬпд: Ьоита οΐ СотгоПеР Ре1еазе 132,184-192(2008)
Р.В. 6геепжа1Р, РЕС Огидз: ап оуегаечу, Ьоигпа1 οί Соп(го11еР Ре1еазе 74, 159-171 (2001).'
Р.В. Сгееп«/аЮ, Υ. Н. Сбое, 1. МсСике, СО. Сопоуег, ЕЯесМуе Огид РеНуегу Ьу РЕСу1а1еР Огид соп|ида1ез. АруапсеР Огид ϋβίίνβιγ Ρθνίβνβ 55, ρ. 217-250 (2003).
Р.В. СгеептаЮ, А. РепРп, О. ΒοίίΙοΙ, НдЫу Ма(ег-Зо1иЫе Тахо! ОепуаЙуез - 7-Ро1уе1Ьу1епе 61усо1 СагЬата1ез апР СагЬопа(ез, Зоита! οί Огдапю СЬет1з1гу 60, 331-336 (1995).
Р. СЬуЫ, Т. ЕЬусЬ, М. НгиЬу, К. 1ЛЬпсЬ, В. Ρίήονθ: М|се1агп1 поз1се Ιβοίν з ргойпарогоуои ак!м1ои. ΟΖ РУ 2006-207.
Р. СНуМ, Т, Е1гусЬ, С. Копак, М. 5(гоуа, Т. Мгкуап, ϋ. Воисек, В. Ρίίιονθ, К. ШЬпсЬ, Νβνν НРМА соро1утег-ЬазеР Огид сагпегз ννίΐίι соуа)епЙу ЬоипР ЬуРгорЬоЫс зиЬзЫиеп1з (ог 3θΙίΡ (итоиг (агдеЙпд, Ьоита1 οί Соп1го11еР Ре1еазе 127, 121-130 (2008).
ϋ. Коресек, Р Корескоуа, Т, Мюко, Ζ. Би, НРМА Соро1утег-Апйсапсег Огид Соп|ида(ез: Оез1дп, Асйуйу апР МесЬап1зт οί Асйоп. Еигор. ϋ. РЬагт. ВюрЬагт. 50, 61 - 81 (2000).
к Коресек, Р. Корескоуа, Т. Μίη ко, Ζ. Би, СМ. Ре(егзоп, \Л/а(ег зо1иЫе ро1утегз ίη (итог 1агде(еР РеНуегу, к СоШгоНеР Ре1еазе 74,165-173 (2001).
Е, Кга(г, и. Веуег, М.Т. ЗсЬийе, Огид-ро1утег соп)ида(ез ооп(аю1пд ас1рс1еауаЫе ЬопРз, Сп(. Реу. ТЬег. Огид Сагпег Зуз1. 16, 245-288 (1999).
Е. Кга(г, БА. МиИег, С Рурра, А. У/агпеске, РгоРгид з(га(ед1ез ίη апЬсапсег сЬето(Ьегару, СЬеттеРсЬет 3, 20-53 (2003).
3. Ид, А. ЗраггеЬоот, Υ. ЗЬакеР, С Бее, 3. Мап, Ν. 0еза1, Р. Зооп-ЗЬюпд, νν. ϋ. Р|дд, Р. КогЬеЬ 1п(1иепсе οί Еогти1а1юп\/еЫс1е опМе(гопоггнс Тахапе СЬетоШегару: А1Ьит1п-ВоипР уегзиз СгеторЬог ЕБ-ВазеР РасН(ахе1, СНп Сапсег Рез 26; 4331-4338, 2006
Υ. ЫодисЬ!, к УУи, Р. Оипсап, 3. 5(гоЬа1т, К. ШЬпсЬ, Т. Ака1ке, Н. МаеРа,
- 9 022803
ЕаИу рРазе (итог ассити1айоп οί тасгото1еси1ез: а дгеа( йНТегепсе ίη с1еагапсе га(е ЬеМееп (итог апй погта! Иззиез, Йрп. Л.Сапсег Рез. 89, 307-314 (1998).
A. Репйп, СО. Сопоуег, К.В. Сгеепжак!, Апй(итог ас(м(у οί расН1ахе1-2 '-д1уапа(е соп|ида(ей (о ро!у(е(Ру1епе д!усо1): а та(ег-зо1иЫе ргос!гид, Апй-Сапсег Огид 0ез|дп 13, 387-395 (1998).
B. ΡίΡονθ, М. ЙеНпкоуа, ϋ. 31гоРа1т, V. 5иЬг, ϋ. Р1осоуэ, О. Ноуогка, М.
Моуа к, ϋ. Р1ипйгоуа, Υ. Сегтапо, К. ШЬпсР, Ро1утепс Огидз Вазе<1 оп Соп]ида1ез οί 5уп(РеНс апй Ыа1ига1 Масгото1еси1ез II. Апй-сапсег АсйуКу οί апйЬойу ог (РаЬ')2-(агде(ей Соп|ида(ез апй СотЫпей ТРегару ννί(Ρ 1ттипотойи1а(огз. й.
СопйоПей Рек 64, 241-261 (2000)
В. гайоуа, Т. Е(гусР, М. РесРаг, М, ЙеНпкоуа, М. 5('аз1пу, О. Ноуогка, М.
Κονθί, К. ШЬпсР, ОохогиЬюп Ьоипй (о а НРМА соро1утег сагпег (РгоидР Руйгагопе Ьопй ίε ейесйуе а1зо ίη а сапсег сеН Нпе ууКР а НтКей соп(еп( οί 1узозотез, й. Соп(го11ей Ре1еазе 74,225-232 (2001)
Р. 5а(сР|-Ра1паго. Р. Оипсап, С Ватез, Ро1утег (Регареийсз Тог сапсег:
Сиггеп( з(а(из апй 1и(иге сРаНепдез, ίη Р За(сР|-Ра1паго апй Р Оипсап (ейз),
Айуапсез ίη Ро1утег Зс1епсе , Ро1утег ТРегареийсз II: ВегНп / Не1йе1Ьегд,
Зрппдег, р. 1-65 (2006).
1_.\Л/. Зеутоиг, Υ. М1уато(о, Н. Маейа, М. Вгегейэп, й. 3(гоРа1т, К. ШЬпсР,
Р. Оипсап, 1пйиепсе οί Мо1еси1аг-Ме1дР( оп Разз1уе Титог Ассити1айоп οί А Зо1иЫе Масгото1еси1аг Огид Сагпег. Еиг.Й.Сапсег 31 А, 766-770 (1995).
й.М.М. Тептодк νν.Τ. Ни1Шпк. й.Н.М. ЗсРеНепз, М. ЗсРо1,Ι.Α.Μ, Мапй)ез, М.
ΖυΠο, М. РоссРе(й, Н. Розтд, Р. й. Коортап, Й.Н. Вецпеп, РРазе I сРп1са1 апй ррагтасок1пейс з(ийу οί ΡΝΙ1166945, а ηονβΙ та(ег-зо!иЫе ро1утег-соп]ида(ей ргойгид οί расН(ахек АпЙ-Сапсег Огидз 12,315-323(2001).
Й.М.М. Теплюд(, Н. Розпд, М. РоссРе(й, Е. Рпдепо, ϋ, Рга1ег, Рй. Коортап,
Й.Н.М. ЗсРеНепз, νν.Τ, Ни(п1пк, Й.Н. Вецпеп, Н1дР-рег1огтапсе Нйик1 сРготаЮдгарРю те(Ройз Тог (Ре йе(егпгапайоп οί а ηονβΙ ро1утег-Ьоипй расН(ахе1 йепуайуе апй 1гее расН(ахе1 ίη Ритап р1азта, й.!йй.СРгота(одг.Ре1а(.ТесРпо1. 23,
1233-1251 (2000).
К, ШЬпсР, V. ЗиЬг, й. 5(гоРа1т, О. Р1осоуа, М. йеНпкоуа, В, ΡίΡονθ,
Ро1утепс Огидз Вазей оп Соп|ида(ез οί Зуп(Рейс апй 14а(ига1 Масгото1еси1ез I.
5уп(Рез13 апй РРузюо-сРет1са1 СРагайепзайоп. й. Соп(го11ей Рек 64,63-79 (2000)
К. ШЬпсР, Т. Е(гусР, Р. СРуШ, М. ЙеНпкоуа, В. ΡίΡονβ, АпИЬойу-Тагде(ей Ро1утег-ОохогиЬ1С1п СофидаТез ιλί(Ρ рН-Соп(гоНей Асйуайоп, й. Огид Тагдейпд 12,
477-489 (2004) (А).
К. ШЬпсР, V. ЗиЬг, Ро1утепс Апйсапсег Огидз ννίΐΡ рН-Соп(гоНей Асйуайоп,
Айу. Огид Оейуегу Реу. 56/7,1025-1052 (2004) (В).
К. ШЬпсР, Т. Е(гусР, В. Р|Роуа, М. ЙеНпкоуа, Μ. Κονθί: рН ββηζίίίνηί ро1утепга коп;ида(у ап(гасукНпоуеРо капсегоз(айка рго сНепои (егарН. СИ 293787 В6
1Й. УапРоеТег, е( ак, Сотрагайуе апй(итог екйсасу οί йосе(ахе1 апй расН(ахе! ίη пийе тисе Ьеаппд Ритап (итог хеподгаЙз (Ра( оуегехргезз (Ре тиШйгид гез15(апсе ρηοίβίη (МРР), Аппа1з οί Опсо1оду 8,1221 - 1228 (1997).
Й.УУ. ννίηίθΓ, РасНйхе! роНд1итех (ΧΥΟΤΑΧ, СТ-2103): А тасгото1еси!аг (ахапе, йоита! οί Соп(гоНей Ре1еазе 109,120-126 (2005).
The invention relates to the structure and properties of water-soluble polymeric therapeutic agents (prodrugs) based on derivatives of paclitaxel (PTX), docetaxel (ETX) and larotaxel (LTX), intended mainly for the treatment of solid tumors in the treatment of tumor diseases in human medicine.
Prior art
Currently, drug development trends very often focus on the development of dosage forms that activate the specific effect of a drug only at the site of the desired therapeutic effect. Biologically active substances with such a directional effect are mainly applied in areas where unwanted side effects of the drug can damage healthy parts of the body. This danger, in particular, is associated with the treatment of cytotoxic substances during chemotherapy of tumor diseases. It is known that the addition of a cytostatic agent to a water-soluble polymeric carrier using a chemical bond makes it possible to increase the solubility of otherwise insoluble or poorly soluble drugs and significantly reduces their direct toxicity. The high molecular weight of the polymers prevents the rapid excretion of the drug from the body by glomerular filtration, providing a longer circulation time and presence in the body, and thus a longer time of the bioavailability of the drug.
In the past, many polymer conjugates of cancerostatic agents were made and studied, in which a drug having an anti-cancer effect was attached to the polymer using a non-cleavable covalent bond, a hydrolytically unstable ionic bond and / or a covalent bond, allowing controlled release of the drug and thus its activation , based on the enzymatic or simple chemical hydrolysis of this bond. Polymeric carrier systems are typically designed to release a therapeutically active carcinostatic agent from the carrier to the tumor or, more specifically, directly into the tumor cell. An important group of polymeric therapeutic agents is represented by polymeric drugs made on the basis of copolymers of N- (2-hydroxypropyl) methacrylamide (NRMA), a large number of which are actively directed to the tumor by the fact that the target structure is attached to the polymer (antibody, lectin, hormone) [Eipsap 1985, PiPha 2000, Coresec 2001, 2000, Eipsap, 2005; §A! Sy-rashato e! A1., 2006]. However, their synthesis is very complex. During the development of polymeric cancerostatic agents, it was proved that there is no need to use an active targeting carrier for the specific transport of a drug to the tumor site, but a significantly increased accumulation of polymeric cytostatic agents, especially in solid tumors, can be achieved by increasing the molecular weight of the polymeric drug carrier kidney (i.e. passive targeting for solid tumors). This ability of macromolecules to accumulate in solid tumors was called the effect of the ERC (Increased Permeability and Retention), and it was proved that this effect is significantly manifested in carriers based on HPMA copolymers [Bodis e! A1., 1998; Еeoshoit e! A1., 1995].
One of the main problems with the use of HPMA copolymers as passively targeting high molecular weight carriers arises from the non-cleavable carbon chain, and only polymers whose molecular weight does not exceed 40-50000 g / mol. Can be eliminated from the body. This means that if the polymer does not accumulate in the body after re-injecting the drug, and if the molecular weight of the carrier is as high as possible to effect passive targeting as efficiently as possible, the polymer carrier must be designed as collapsing in the body. Such polymeric carriers based on HPMA copolymers have been recently developed, and their structure has been patented [LOVE e! A1., 2008; FULLED! A1., 2008, SUSH RU 2006-207, Eyus RU 2006-592].
The literature mentions a huge amount of information on the manufacture and study of the properties of polymers carrying a carcinostatic agent attached to the polymer by means of a bond that is sensitive to hydrolysis in an aqueous medium [Kgl / 1999]. Among them, HPMA copolymers carrying the cancer-causing agent doxorubicin, linked to the polymer chain with the help of hydrolytically cleavable hydrazone bonds, occupy an important place [ЕттЬЬЬ 2002, ШЬпсН 2004а, ШЬпсН 2004Б, ШЬпсН ра! C2 293787 B6]. This bond is relatively stable in the environment of the blood flow (on the path of transport in the body) and hydrolytically unstable in the weakly acidic environment of a living cell. The rate of hydrolysis of this bond also controls the rate of drug release and, therefore, the concentration of the active substance at the site of the desired effect. During testing, wrinkles, as well as mice in mice, such polymeric carcinostatic agents exhibited a significantly more pronounced antitumor effect against a large number of tumor lines than free medicine, and in a large number of cases, their use led to the complete restoration of the tested animal the introduction of [Kshoa 2001, ENU 2001]. Increasing the molecular weight of the carrier (biodegradable graft polymers, micellar and nano-gel systems) always leads to an increase in the effectiveness of the antitumor effect of the drug, tested in common systems.
- 1,022803
Paclitaxel and docetaxel belong to the group of taxanes, cancer drugs, commonly used to treat tumors of the ovaries and breast, lung, prostate, and other tumors. A1., 1997]. In addition to their secondary toxicity, common to cancer-causing agents, they have another disadvantage, very low solubility in aqueous solutions, which leads to the need for administration in various excipients, especially in Sterbog HB, which also leads to other side effects of the dosage form. In some regimens of introducing taxanes into Storby Hb, the effectiveness of therapy may even be significantly reduced [Ν§ a! A1., 2006]. When these drugs are bound to polymeric carriers (REO, HPMA copolymer, poly (glutamic acid)), very inactive water forms of the drug are obtained that have an increased circulation time in the body and an increased accumulation in solid tumors. Their anti-cancer activity was tested in animal models and, in some cases, clinically. Thus, paclitaxel (PTX) was covalently bonded to polyethylene glycol (PEO) using a non-cleavable ester or 7-carbamate bond (C2-OH group) or using a hydrolytically unstable amino acid spacer (Ala, O1y) [OgeitaM e! A1., 1995; Ogeeita, 2001; OgeitaSh e! A1., 2003; Rep e! A1., 1998]. It has been shown that the antitumor activity of the conjugates depends on the bond structure used between the polymer and the drug, and that the molecular weight of the carrier is another important factor. The conjugate with PTX was tested in phase I clinical trials [BaselPaigia e! A1., 2006], but it is obvious that with little success.
The conjugate of paclitaxel with poly (glutamic acid) (Huo! Ah), as it turned out, is more successful in clinical trials TSUiie 2005, Kg! / E! A1., 2008]. In this PTX conjugate is bound to the polyamino acid carrier via an ester bond through the –OH group in position 2. The drug is released due to degradation of the polymer chain, the formation of O1 and PTX derivatives and their subsequent hydrolysis. This conjugate is currently in phase III clinical trials.
Paclitaxel was also coupled with HPMA copolymers using an ester bond using a biodegradable oligopeptide OuirebO1 spacer. It has been demonstrated that PTX after incubation with lysosomal enzymes is released from the carrier, and this release is important for achieving anti-cancer activity of ίη U1o. 16υ166945 is a conjugate of an HPMA copolymer linked by an ether linkage with PTX, which was clinically tested in phase I [Tegood! e! A1., 2000; Tegluod! e! A1., 2001], however, after this phase, further testing was stopped. The results described above show that conjugation of paclitaxel with a polymeric carrier leads to a significant improvement in drug properties (solubility, improved bioavailability). However, if the drug is used to treat people, the structure and molecular weight of the carrier, as well as the structure of the spacer between the polymer and the drug, controlling the level and, thus, the concentration of the drug in the place of the desired effect should be carefully selected and prepared individually. When designing optimal structures, it is important to check the function of these structures in suitable ίη U1уо models.
Description of the invention
The polymer drug in accordance with the present invention is characterized in that the carcinostatic agent from the taxane group, paclitaxel (PTX), docetaxel (ΌΤΧ) or larotaxel (LTX) (hereinafter the drug) is bound to a water-soluble polymeric carrier made on the basis of a linear or graft copolymer NRMA. The drug is bound to the polymer chains through an ester group formed by acylating the —OH group at position 2 with spacers containing pH-sensitive cleavable hydrazone bonds. These spacers can consist of acidic residues of various oxo acids, by means of which the carbonyl group is incorporated into the structure of the drug, associated with residues of individual amino acids, oligopeptides, or other structures, thereby allowing the completion of the side chains of the polymeric carrier with a hydrazone group. In the case of a linear polymer, the molecular weight of the polymer chain is chosen below the limit of elimination of HPMA copolymers from the body, preferably in the range of 10-50000 g / mol. In the case of a graft copolymer, the selected molecular weight is in the range of 50-250000 g / mol. The polymer drug of the present invention is intended for intravenous (injection or infusion) administration in solution, but it can also be administered inside the tumor or intraperitoneally, and it is intended for the treatment of solid tumors. A polymer with a chemically bound cytostatic agent is designed to remain stable during circulation in the bloodstream and to prevent hydrolysis of the hydrazone bond between this taxane and the polymer, or possibly to keep the level of hydrolysis during transport through the body as low as possible (when pH 7.4 in the bloodstream), so that the cytotoxic effect of the released drug or its derivative cannot manifest. The whole system is designed as a two-phase system. Due to a suitable choice of molecular weight of the carrier, allowing leakage, as well as effective accumulation in the tumor tissue, interaction with the cell membrane should occur after the primary accumulation of the drug in the tumor tissue, and the molecularly dissolved polymeric drug should penetrate into individual tumor cells by pinocytosis. Inside the target cells should
- 2 022803 to immediately hydrolyze the hydrazone bond and release the drug or its derivative from the carrier due to a decrease in pH from the external value (7.4) to the intracellular value (5-6). In the next step, hydrolysis of the ester bond of a drug derivative that has already been isolated from the polymer should be carried out by chemical hydrolysis, or, more specifically, by the effect of intracellular enzymes, for example carboxyesterases. The feasibility of the above-described mechanism of action of polymeric drugs according to the invention has been proven in experiments with a model of drug release from a polymeric carrier. The results of these tests, including tests for activity against cancer, are given in the experimental part of the application for invention.
Polymer conjugates with a directed effect against cancer according to the invention are distinguished by the fact that the cytostatic agent (taxol, docetaxel, larotaxel) is attached by means of an ester bond and a spacer to a polymeric carrier formed by a linear [E! ΟΖ 297827 B6, Riy. 2008] or vaccinated [E! Tus ra! ΟΖ 298945 (B6), Riy. 2008] with HPMA copolymer through a hydrolytically unstable hydrazone group formed by reacting the carbonyl group of the drug derivative molecule with the hydrazide group of the polymer carrier. Polymeric carriers are prepared mainly by the radical copolymerization of HPMA with comonomers corresponding to the desired composition. The binding of the corresponding taxane to the polymer carrier leads to a marked decrease in cytotoxicity, a marked increase in the molecular weight of the drug and, thus, an increase in the circulation time in the bloodstream; those. increase the total duration of stay of the drug in the body and, consequently, increase its bioavailability. The polymer drug according to the invention is further characterized by the fact that the drug's relationship with the polymer carrier is relatively stable during transport in the bloodstream and body fluids, and it is hydrolytically cleaved in a slightly acidic tumor environment, and especially inside tumor cells of the target in endosomes characterized by a weakly acidic pH value. This means that the drug is transported through the bloodstream in an inactivated form associated with the polymer, and it is released and activated predominantly after penetration into the tumor target cells. The fact that the drug is activated only in target cells eliminates the side effects of toxic cytostatic agents and directs their action primarily on tumor cells. There is a polymeric carrier prepared on the basis of HPMA copolymers, whose molecular weights, i.e. accumulation efficiency in the tumor tissue can be controlled by changing the polymer carrier in the skeleton structure (incompatible linear polymer, highly molecular biodegradable graft polymer), which is responsible for the directional (passive) transport to the tumor or tumor cells.
The scope of the present invention includes the use of polymeric drugs according to the invention for the treatment of solid tumors in malignant human diseases.
Synthesis and structure of polymer conjugates
The synthesis of polymeric conjugates according to the invention is carried out in several stages; The detailed final structure of the conjugate is highly dependent on the method of synthesis chosen. At the first stage of the synthesis of basic monomers, they synthesize: HPMA, methacryloylated amino acid and oligopeptide derivatives ending in a hydrazide (ί'.ΌΝΗΝΗ 2 a group, or possibly ending with a hydrazide group protected by a tert-butyloxycarbonyl group (Boc).
In the second stage, polymer precursors are synthesized, i.e. HPMA copolymers carrying functional groups (random copolymers), serving as polymeric carriers for drugs. A polymer precursor carrying functional hydrazide groups along the chain can be prepared by radical copolymerization of the above-mentioned functional monomers with HPMA or by transformation of the main copolymer bearing functional groups similar to the polymer. Graft copolymers are prepared from multivalent and semi-chelate copolymers of HPMA in accordance with the method described in | E1 gusN 2008 pa !, RI.].
The main copolymer (precursor) is a copolymer of HPMA and methacryloylated hydrazides of amino acids or oligopeptides selected from the group of glycyl, glycylglycyl, β-alanyl, 6-aminohexanoyl (AH), 4-aminobenzoyl, or a mixed acyl derived from the oligopeptides CiPHCC) OybayOy, OybayerOe1y and OybueBeOyy, characterized by the fact that it contains 70-98 mol.% HPMA and 2-30 mol.% Of units with hydrazide functional groups (see diagram 2 with a spacer consisting of 6-aminohexanoyl).
A drug derivative is a drug compound (PTX, or LTH), obtained by acylation of the hydroxyl group at position 2 of the drug, with the corresponding oxo-acid. Preferably, the following oxo acids are used: levulinic acid, 4- (2oxopropyl) benzoic acid, 4-oxopento-2-enoic acid and 5-oxohexa-2-enoic and 6-oxohepta-2-enoic acid (see Scheme 1).
The polymer conjugate is a compound of a polymer precursor with a drug derivative, where the drug derivative is associated with a polymer precursor of a hydrazone bond formed by the interaction of the carbonyl group of the drug derivative with the hydrazide groups of the polymer, characterized in that it contains 70-98 mol.% HPMA, 1.5 -29.5 mol.%
- 3,022,803 units with hydrazide functional groups and 0.5–10 mol.% Of units with a drug derivative bound to hydrazone (see Scheme 3 with a spacer consisting of 6-aminohexanoic and levulinic acids).
Description of figures
FIG. 1 is a chart of the release rate of PTX and its derivatives from linear polymer conjugates in a buffer with a pH value of 5 (model of the intracellular environment).
FIG. 2 is a chart of the release rate of PTX and its derivatives from linear polymer conjugates in a buffer with a pH value of 7.4 (blood flow model).
FIG. 3 - the level of survival of C57Bb / 6 mice with EB-4 lymphoma, which were injected with ΌΤΧ, a derivative of LEU-OTH and ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΌΤΧ-ν linear polymeric conjugate. The doses of the drug were 2x20 mg equivalent ΌΤΧ / kg, the conjugate ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΌΤΧ-ΕΕν was administered in doses of 2x20 and 2x40 mg equivalent ΌΤΧ / kg.
FIG. 4 - the level of survival of C57Bb / 6 mice with EH-4 lymphoma, which were injected with the derivative of paclitaxel ν-ΡΤΧ and ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν linear polymer conjugate. Due to the limited solubility, PTX could not be administered in free form.
FIG. 5 - the survival rate of the VLV / e mice with 4T1 breast carcinoma, to which paclitaxel was introduced on days 8 and 12, paclitaxel derivative ΕΕν-ΡΤΧ and ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν linear polymer conjugate. PTX and ΡΤΧ-ΕΕν were injected with a dose of 2x30 mg equivalent of PTX / kg for 8 and 12 days (see text) and the conjugate ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν at a dose of 2x60 mg equivalent of PTX / kg.
FIG. 6 - the survival rate of C57Bb / 6 mice with ΕΕ-4 lymphoma, which on day 9 and 13 were injected with ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ- ^ кон-ΕΕν linear polymer conjugates with a content of ΌΤΧ 8.2 and 16.3% in a dose of 2x30 mg equivalent ΌΤΧ.
Examples
Examples of carrying out the synthesis of intermediate compounds and conjugates according to the invention.
Example 1. Synthesis of monomers and drug derivatives.
NRMA was prepared in accordance with the previously described method [Shgyuy C1 A1., 2000]. Elementary analysis: calculated 58.8% C, 9.16% H, 9.79%; found 58.98% C, 9.18% H, 9.82%. The product was chromatographically pure.
6- (Methacryloylamino) hexanoyl hydrazine (Ν one - (6-hydrazino-6-oxohexyl) -2-methyl acrylamide) (ΜΑΑΗ-ΝΗΝΗ 2 a) prepared in accordance with the previously described method [patents p1. patent ΕΙγ ^ όΗ |.
The ester of levulinic acid and paclitaxel (in the OH-2 position) (ΕΕν-готов) was prepared by reacting the levulinic acid with paclitaxel by the carbodiimide method (dicyclohexylcarbodiimide, ESS) in, Ν'-dimethylformamide (ΌΜΡ).
Levulinic acid (19.4 mg, 0.167 mmol) and ESS (37.5 mg, 0.182 mmol) were each dissolved in 0.15 ml at the laboratory temperature. Both solutions were cooled to -18 ° C and mixed. After 20 min, a solution of paclitaxel (100 mg, 0.117 mmol) and Ν, Ν-dimethylaminopyridine (ΌΜΑΡ) (14 mg, 0.117 mmol) in 0.3 ml was added to this solution. The reaction took place at -18 ° C for 30 minutes and at 4 ° C for 16 hours. The course of the reaction was observed using silica gel plates for для '(thin-layer chromatography) - 60 Р 254 (ethyl acetate: hexane 1: 1, Κί (ΡΤΧ) = 0.25, ΡΓ (^ ΕV-РТХ) = 0.15. ΡΓ (levulinic acid) = 0.45). The product was purified from low molecular weight impurities by chromatography on a column (60x4 cm) filled with silica gel in ethyl acetate. The fraction containing the ΡΤΧ-ν product was collected and concentrated to 0.4 ml, and the product was precipitated with 20 ml of diethyl ether. The product was collected, washed with a small amount of ether and dried under vacuum to constant weight. The yield was 98 mg of the product (84%) with a melting point of 136 to 138 ° C. TLC (ethyl acetate: hexane 1: 1): one spot with a WG = 0.15. ΜΑΣΌΙ-ΤΟΡ Μδ: 970 (Μ + №).
The purity of the monomers and drug derivatives was checked using an HPLC system [HPLC system δΐιίιηαύζιι. equipped with a reversed-phase column SCHGOTOSH EsgGogtaps ΡΡ-18ο (100x4,6 mm) and υν-νΐδ detector - δΐιίιηαύζιι δΡΌ- ΙΟΑννρ (230 nm); eluent: water-acetonitrile with a gradient of 50-100 vol.% acetonitrile, liquid flow rate 0.5 ml min -one ].
The ether of levulinic acid and docetaxel (at position 2 -OH) (ΌΕν-ΌΤΧ) was prepared by analogy with the ΕΕν-ΡΤΧ by the carbodiimide method (ESS) in ΌΜΡ.
Levulinic acid (38 mg, 0.327 mmol) and ESS (100 mg, 0.487 mmol) were each dissolved in 0.25 ml at the laboratory temperature. Both solutions were cooled to -18 ° C and mixed. After 20 min, a solution of docetaxel (200 mg, 0.247 mmol) and Ν,-dimethylaminopyridine (ΌΜΑΡ) (28 mg, 0.229 mmol) in 0.6 ml was added to this solution. The reaction took place at -18 ° C for 30 min and at 4 ° C for 16 h. The course of the reaction was observed using silica gel plates for TLC (thin layer chromatography) 60 P 254 (ethyl acetate: hexane 1: 1, ΚΓ (ΌΤΧ) = 0.3, ΡΓ (ΕΕν-ΌΤΧ) = 0.2, ΡΓ (levulinic acid) = 0.45). The product was purified from low molecular weight impurities twice using column chromatography (60x4 cm) filled with silica gel in ethyl acetate. The fraction containing the ΌΤΧ-ν product was collected each time and concentrated to 0.6 ml, and the product was precipitated with 20 ml of diethyl ether. The product was collected, washed with a small amount of diethyl ether and dried under conditions.
- 4 022803 vacuum to constant mass. The yield of the product was 179 mg of the product (80%) with a melting point of 86 to 89 ° C. TLC (ethyl acetate: hexane 1: 1): one spot with Κί = 0.20. ΜΑΡΌΙ-ТОР (time-of-flight ionization by laser desorption using a matrix) Μδ: 929 (Μ + Na).
Structures of esters of levulinic acid and 4- (2-oxopropyl) benzoic acid with paclitaxel and docetaxel: A) ester of levulinic acid and paclitaxel, LE-PTX; B) 4- (2oxopropyl) benzoic acid ester and paclitaxel, ODS-PTX; C) levulinate ester and docetaxel, LEU-OTH.
The 4- (2-oxopropyl) benzoic acid ester and paclitaxel (in the 2 -OH position) (ORPTH) was prepared using the same method described above for the preparation of BEU-PTX, namely by reacting 4- (2-oxopropyl) benzoic acid and paclitaxel using reagent for conjugating ESS to ΌΜΡ. The product yield was 85%. Melting point is from 143 to 145 ° С. TSB (ethyl acetate: hexane 1: 1): one spot with Κί = 0.25. ΜΑΣΌΙ-TOR Μ δ: 1032 (Μ + Na).
The 4- (2-oxopropyl) benzoic acid ester and docetaxel (in the 2 -OH position) (ODS-PTX) were prepared using the same method described above for the preparation of ΌΤΧ-ÜЕУ, namely by reacting 4- (2-oxopropyl) benzoic acids with docetaxel using ess in ΌΜΡ. The product yield was 81%. Melting point from 94 to 96 ° C. TSB (ethyl acetate: hexane 1: 1): one spot with Κί = 0.28. ΜΑΣΌΙ-TOR Μ δ: 990 (Μ + Na).
The 4-oxopenthenoic [3-acetyl-acrylic] acid ester and paclitaxel (in the 2-OH position) (AAK-PTX) was prepared using the same method described above for preparing BE-PTX, namely by reacting 4-oxopenthenoic acid with paclitaxel using the ESS in. The yield was 86%. Melting point from 138 to 139 ° C, TLC (ethyl acetate: hexane 3: 1): one spot with Ρί = 0.6. ΜΑΣΌΙ-TOR Μ δ: 968 (Μ + Na).
The 5-oxohexenoic acid ester and paclitaxel (in the 2 -OH position) (ONE-PTX) was prepared using the same method described above for preparing PTX-BEU, namely by reacting 5-oxohexenoic acid with paclitaxel using the ESS conjugate reagent ΌΜΡ. The yield was 85%. Melting point from 132 to 134 ° C, TLC (ethyl acetate: hexane 3: 1): one spot with Ρί =, 65. ΜΑΣΌΙ-TOR Μδ: 982 (Μ + Na).
The 5-oxohexenoic acid ester and docetaxel (in the 2 -OH position) (ONE-OTH) were prepared using the same method described above for the preparation of ETX-BRU. namely, by reacting 5-oxohexenoic acid with docetaxel using the reagent for conjugating ESS to ΌΜΕ. The product yield was 86%. Melting point from 84 to 86 ° C. TLC (ethyl acetate: hexane 3: 1): one spot with Κί = 0.7. ΜΑΡΌΙ-TOR Μ δ: 940 (Μ + Na).
Example 2. Synthesis of polymer precursor - copolymer ΗΡΜΑ with ΜΑ-ΑΗ-ΝΗΝΗ 2 .
Poly (ΗRΜΑ-CO-ΜΑ-ΑΗ-NΗNΗ 2 a) the copolymer was prepared by radical copolymerization of HPMA and ΜΑ-ΑΗ-ΝΗΝΗ 2 in methanol at 60 ° C in accordance with the previously described method [Patent Eyus].
Polymer Precursor Structures, Poly (HPMA-co-MA-AN-MNMN 2 ) copolymer.
- 5 022803
Example 3. Preparation of polymer conjugates containing drug derivatives -Ν = ΟΡΒΌΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΟΗΕ-ΡΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΟΗΕ-ΌΤΧ, ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΑΚΚ-ΡΤΧ and ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΑΚΚ (-ΌΤΧ)
Copolymers with PTX derivatives, ΌΤΧ and ΕΤΧ, bound to the PHPMA carrier with hydrolytically cleavable hydrazone bond, were obtained by reacting precursors of polymers containing hydrazine groups with the corresponding drug derivatives in methanol under catalysis with acetic acid.
A solution of 100 mg of poly (HPMA-co-MA-AN-NΗNΗ2) copolymer in 1.1 ml of methanol was mixed with a solution of ΕΕν-ΡΤΧ in 0.2 ml of methanol. After 1 min, 40 μl of acetic acid was added to the stirred reaction mixture at 25 ° C. Over the course of the reaction (loss of ΕΕν-ΡΤΧ) was monitored by TLC (silica gel plates 60P 254 , ethyl acetate, Ρί (ΕΕν-ΡΤΧ) = 0.8). After 2 h, the reaction mixture was purified from free drug derivatives by gel filtration on a column filled with Sephadex ΕΗ-20 in methanol. The polymer fraction was isolated, concentrated in a vacuum evaporator, and the product was precipitated with 50 ml of ethyl acetate, isolated by filtration on a frit 84, washed with 150 ml of ethyl acetate and dried to constant weight.
The content of total PTX or its derivatives in the polymer conjugate was determined using the HPLC method (HPLC system δίιίιηαιιι) after complete hydrolysis of the polymer conjugate in Η0 solution (pH 2) at 37 ° C for 1 h and extraction of the PTX derivative with chloroform. Μ ν and the molecular weight distribution was determined using liquid chromatography (column Τ8ΚΟβ1 4000 (300x10 mm), 20% 0.3 M acetate buffer ( 3 ΕΟΟΝα / ΕΗ 3 ΕΟΟΗ: pH 6.5; 0.5 g / l ΝαΝ 3 ) and 80% methanol, a flow rate of 0.5 ml / min, detection was carried out using a differential refractometer, a light scattering detector (ΌΑνΝ-ΌΞΡ-Ρ, \ WuaC Τοαίιηοίοβν, υΑΑ) and a UV detector (250 nm). Description of the polymeric drug: the total yield of the drug binding reaction is 96 mg (88%), the content of total ΕΕν-ΡΤΧ was 9.2 wt.%, The content of free PTX <0.2% of the total PTX content. The method of binding the PTX derivative with the precursors of polymers using a hydrazone bond was the same as for all types of precursors and derivatives of drugs.
Scheme 3.
The structures of the polymeric conjugate ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΌΤΧ-ΕΕν with a binding derivative, levulinate and docetaxel.
Example 4. The release of PTX, ΌΤΧ or their derivatives from polymer conjugates. The amounts of PTX, ΌΤΧ or their derivatives released from polymer conjugates were measured after their incubation in phosphate buffer with a pH value of 5.0 (0.1 M phosphate buffer containing 0.05 M; · ιΟ) imitating the intracellular environment, and phosphate buffer with a pH of 7.4, simulating the environment of the blood flow. The amounts of released drugs or their derivatives in incubation solutions were determined by HPLC (δ ιίιηαύζιι). At certain time intervals, 200 μl of the dose of solutions for incubation were taken and, after extraction of the released drug and its derivatives, the chloroform was determined using an HPLC system [HPLC system δΐιίιηα оборудовιι, equipped with a Reverse-Phase Phase Column ΡοιΤοπηα Ροιτα, equipped with a reversed-phase column ΤοιΤοπηα Ροιοηη, equipped with a reversed-phase column СοιΤοπηα Ροιοηη, equipped with a reversed-phase column СοιΤοπηα ΡοιΤοηη, equipped with a reversed-phase column СοιΤοπηα ΡοιΤοηη, equipped with a reversed-phase column СοιΤοπηα Reverse-phase column οιΤοπηα ΡοΤ οο οιιι, equipped with a reversed-phase column υν-νΐ8 - δΐιίιηαύζιι 8ΡΌ - 10Αννρ (230 nm); eluent: water-acetonitrile with a gradient of 50-100 vol.% acetonitrile, flow rate 0.5 ml min -one .
After incubation of the conjugates (concentration 5 mg / ml) in a physiological environment at 37 ° C (phosphate buffer, pH 7.4), the drugs (PTX and ΌΤΧ) (or their derivatives) were released much slower (Fig. 2) than in weakly acidic medium with pH 5.0, simulating the medium of endosomes and lysosomes of tumor cells (Fig. 1). For both drugs, the level of release from the polymer conjugate and the proportion of the selected components (drugs and their derivatives) were fundamentally influenced by the structure of the oxo-acid spacer. A spacer consisting of levulinic acid or 4- (2-oxopropyl) benzoic acid allowed for a very rapid release of the drug derivative at pH 5; however, the hydrolysis of the ester bond between the drug and the acid was very slow. On the other hand, the spacer,
- 6 022803 consisting of 4-oxopentenoic acid, stabilized both the hydrazone and ester bonds, so that a significant release of the drug or its derivative did not occur. During incubation in physiological medium with a pH of 7.4, a partial hydrolysis of the hydrazone bond occurred in the case of a polymer conjugate with a spacer consisting of levulinic acid or 4- (2oxopropyl) benzoic acid, with a significantly lower level compared to the medium with a pH value of 5. It has been proven that the stability of the ester bond between levulinic acid and the drug at pH 7.4 is lower, and the free drugs are released in a volume of one third. On the other hand, in the case of a spacer consisting of 4- (2-oxopropyl) benzoic acid, only the drug derivative is released, the ester bond is stable. The breakdown of a drug derivative to a free drug or direct cleavage of a drug from a polymer conjugate is presumably due to the action of enzymes, mainly carboxyesterases.
Example 5. Demonstration of the biological activity of линейη νίίτο linear polymer conjugates of docetaxel and paclitaxel during incubation with cells of tumor lines; EB-4 T cell lymphoma and 4T1 breast carcinoma.
Table 1
1C values 50 (in ng / ml).
Example 6. Demonstration of biological activity of линейη νίνο linear polymer conjugates of docetaxel and paclitaxel in mice inoculated with EB4 T lymphoma cells.
To demonstrate the activity of the conjugates of docetaxel and palitaxel, the mouse isogenic T cell lymphoma model EH-4 was used. On day 0, C57Bb / 6 mice (female) were implanted subcutaneously with 1x10 five EH-4 tumor cells. The drugs were administered intravenously (ί.ν.) in two doses, which were administered on days 8 and 12 after the transplantation of tumor cells. The first dose was administered when the tumors were well developed, palpable, approximately 300 mm in size. 3 . In the experiment, tumor size, mouse body weight, general health, and survival were observed. The effect of the conjugate was all the time compared with the effect of the free drug (ETH, PTX) and its derivatives (ETH-UBU, PTX-UEU). The average lifespan of the control mice with EH-4 lymphoma, which were not injected, was 31.3 days (8Ό (3Ό 3.66, average lifespan 30.5 days). Р, PTX, as well as ETX-BBU, PTX derivatives -BEU was dissolved for intravenous administration in a mixture of Stratetor EH (ZSChTA. IZA) and ethanol (1: 1); after dissolving the drug, the volume was supplemented with 4 volume parts of RVZ (saline solution, phosphate-buffered). , PHRMA-AN-XH-X = PTX-LEU was dissolved in RVZ. The volume of each individual dose of the drug was 0.2 ml. The following doses of drugs: ETXH and a derivative ETHEU-2x20 mg equivalent ETX / CT, a conjugate PHRMA-AN-XH-X = PTX-LEU - 2x20 and 2x40 mg equivalent ETX / CT, PTX and a derivative PTX-OHE - 2x30 mg equivalents PTX / kg, conjugate RNRMA-AN-XH-X = PTHEU - 2x60 mg equivalent PTX / kg.
A. The anticancer activity of the PHRMA-AN-XH-H = PTX-BE conjugate (Fig. 3).
Free ETX resulted in complete regression of EB-4 tumors in 4 mice of 7 tested mice. The LEU-ETH derivative had a weaker effect and led to the complete regression of the EB-4 tumor in 1 out of 8 tested mice. Conjugate PHRMA-AN-XH-X = PTX-LEU at a dose equivalent to free ETX (2x20 mg equivalent ETX / kg), also cured 1 mouse from the group consisting of 8 mice. However, doubling the dose of the conjugate (2x40 mg equivalent of ETX / kg) resulted in the healing of 7 mice from the group (η = 8). No weight loss was observed in any of the test groups (as an indicator of drug toxicity). In mice in which complete tumor regression occurred, no symptoms of tumor growth or toxicity were observed for up to 94 days, when they were again transplanted with EH-4 cells in the same (ie, lethal) dose, and the mice were left without treatment. This second transplantation was performed to prove immunologically mediated resistance against the tumor. The statistically significant part of the mice that were treated with the PHPMA-AN-HH-K = ETX-BEU conjugate (2x40 mg eq. ETX / kg) was resistant to an EB-4 tumor (5 resistant mice out of 7, i.e. 71%). A similar portion of resistant individuals was also found among mice that were treated with free ETX (3 out of 4 cured mice were resistant).
Conclusion: the RNPMA-AN-XH-X = PTH-LEU conjugate has a significant anti-cancer effect in C57Bb / 6 mice with HB-4 lymphoma, its administration was not accompanied by toxic side effects and contributed to the establishment of tumor resistance in 71% of cured individuals.
B. The anticancer activity of the PHRMA-AN-XH-H = PTX-Con conjugate conjugate (Fig. 4).
- 7 022803
It is not possible to inject free PTX in mice due to its very limited solubility (mice died immediately after injection). The ΡΤΧ-ΌΕν derivative did not have an anticancer effect on EH-4 lymphoma (it did not prolong life expectancy, no mice were cured; n = 8). The ъ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν conjugate at a dose of 2x60 mg equivalent to PTX / kg did not cure a single mouse or extended the average lifetime (n = 8). No weight loss was noted in any group as an indicator of drug toxicity.
Conclusion: a ΡΤΧ-ΕΕν derivative (2x30 mg eq. PTX / kg) or a conjugate containing a PTX derivative (2x60 mg eq. PTX / kg) did not have any therapeutic effect in treating isogenic EH-4 lymphoma in mice.
Example 7. Demonstration of the biological activity of the ίη νίνο linear polymer conjugate of paclitaxel in mice inoculated with 4T1 carcinoma of the mammary gland (Fig. 5).
A model of murine isogenic breast carcinoma 4T1 was used. VxB / s mice (females) were implanted subcutaneously with 1x 10 6 4T1 carcinoma cells for 0 day. The drugs were administered intravenously (ΐ.ν.) in two doses on the 8th and 12th day after the transplantation of the tumor cells. The first dose was administered when the tumor was well developed, palpable, with a size of about 300 mm. 3 . During the experiment, we observed the size of the tumor, the body weight of the mice, the general state of health and the level of survival. The effect of the conjugate was always compared with the effect of free drug (PTX) and its derivative (ΡΤΧ-ΕΕν). The average survival time of the control mice that did not receive drugs was 34.9 days (8Ό 2.59; average survival time was 35 days).
PTX, ΡΤΧ-ΕΕν and the conjugate ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν were prepared for intravenous administration in the same way as mentioned above (see example 6 A, B). The following doses were administered: PTX and ΡΤΧΕΕν at a dose of 2x30 mg equivalent of PTX / kg, conjugate ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν at a dose of 2x60 mg equivalent of PTX / kg.
The ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν conjugate completely cured 3 of the 8 test mice. After the introduction of the ΡΤΧ-ΕΕν derivative, regression of the 4T1 tumor occurred in 1 out of 8 mice. The introduction of free medication (PTX) was accompanied by significant side effects: the intravenous administration of the second dose caused severe reactions (spasms, later a poor general condition — raised hair, lethargy, which lasted at least 24 hours) in the first half of the mice. For other mice in the group, the second dose was reduced by 10% and administered intraperitoneally instead of intravenous administration. Only one mouse was cured, which was injected with a dose of the drug intravenously, in other mice no therapeutic effect of PTX was found. No test group reported weight loss as an indicator of toxicity.
To test the resistance to 4T1 tumors, tumor cells were transplanted to the cured mice 129 days after the first transplantation. The second time was injected with O10 five 4T1 cells were sc and mice were left without treatment. In all of these mice (3 cured with the PHPΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν, 1-cured ΡΤΧ-ΡΤΧν) conjugate, the tumors did not grow, which means that these mice were resistant to this tumor.
Conclusion: ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΡΤΧ-ΕΕν conjugate has a significant anti-cancer effect in ΒΑΌΒ / s mice with 4T1 breast carcinoma, its introduction was not accompanied by any toxic side effect and contributed to the establishment of tumor resistance in 38% of cured individuals.
Example 8. Demonstration of biological activity of линейη νίνο of linear polymer conjugate of docetaxel with different drug content in mice inoculated with T cells ΕΕ4 lymphoma (Fig. 6).
The tumor model ΕΕ-4 lymphoma described above (Example 6) was used. Conjugates ΡΗΡΜΑΑΗ-ΝΗ-Ν = ΌΤΧ-ΕΕν with a drug content of ΌΤΧ 8.2 wt.% (9.1 wt.% ΌΤΧ-ΌΕν) and 16.3 wt.% ΌΤΧ (18.0 wt.%-ΕΕν) was dissolved in ΡΒδ (0.2 ml) for administration, and a suboptimal dose of 2x30 mg equivalent ΌΤΧ / kg was administered intravenously on days 9 and 13 after the transplantation of tumor cells.
The conjugate with a lower drug content (8.2% ΌΤΧ) cured 1 of 8 test mice, and in others it extended the survival time in a statistically significant way (untreated controls: average life expectancy of 27.25 days, δΌ 1.64, average 28 days; treated mice: average 41.75 days, δΌ 6.54, median 45 days; p <0.01). A conjugate with a higher drug content (16.3%) also resulted in the cure of 1 out of 8 tested mice, but the lifetime of other mice was not significantly increased.
Conclusion: the content of the drug derivative in the conjugate ΡΗΡΜΑ-ΑΗ-ΝΗ-Ν = ΌΤΧ-ΕΕν had a significant effect on the anticancer effect in C57Bb / 6 mice with ΕΌ-4 lymphoma when administered in a suboptimal dose of 2x30 mg equivalent ΌΤΧ / kg. The lower conjugate polymer conjugate provided higher anti-cancer activity.
- 8 022803
Bibliography
R. Oipsap, ΰ.Β. 1_1оus1, to Koresek, R. Re) tapowa, ΰ. 81th, K.I1bnsN, V. Ρίίιονθ, V.Lyu (Gu, ZyucheyS Royteps Ogidz (1985). Shes. RU 0095/85, Aiz (HaH 589587, SapaRa 130053, Oeptagk 164485, Egor. 018758, Sapara 130053, Oeptagk 164485, Egor. 018758, Sapara 130053, Oeptagk 164485, Egor. 018758, 4730048, Sapara 130053, Oeptagk 164485, Egor. 018758, 47438, Sapara 130053, Oeptagk 164485, Egor 000137/86.
R. Oipsap, L- (2-NuRgohurgoru1) te1Mascoli1or Soroptera sop] idailez, ίη) Zu / Agnesk (eP), Ogidz APR (Le RNagtasiiiRsa! Zepsez: Vos Ra, op Tau1og & Hera-Heu-Heu-Heuha-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hexx-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex-Hex ).
T. E1gus, M. ZeppkoUE, V. Rktoua, K. 1Pbps K., Νβνν НРМА sorlo1tets comp1a1P1pd Rohogyüp hoipr νίβ pH zepzkue Ipkade. Buy 13, ίη νίίΓΟ apr η νίνο Ью1од1са1 burns. ϋ. Collaborative Release 73.89-102 (2001).
T. E1gus, R. Szoum, M. Leipou, W. βονβ, K. 1HHTs, Jouples! 5 οΐ NRMA Soro1usheg8 Sop1a1P1pd Oohogygop VoipR νίβ and NuRgopepe ikkade. EYAES1 οί Zraseg op Auged Rease apr ίη νίίΓΟ Su1о1х1С0у. Masgolescore Vyuzsk 2, 43-52 (2002).
T. E1gus, R. CiuM, M. Resbyag, M. 51i and RepoUzku, V. ιονθ, K. Bieps, griso rprgau ro1tegp1sI kocidashe Rohogyupi from the pH-point and his1-poup1t ααct, and θθαt βt β Ι ΟΖΟΖ рН rnrrrrrrrrrrrnrnrrnrnrn.
T. E1gus, P, Shuy, K. Bnbts, T. Mgkuap, V. P + oua, Po1utegtn Ιθοίνο and grisoi) himugo. ΟΖ 298945 B6.
T. E1gus, K. SHPPS: Routte1 kop) ida1u Rohogybazi rn-beput υνοίηονθπίιτι 1eota and grizzo ίβίοίι rprgauu. ΟΖ RU-2006-505, ΟΖ ra (. 299053 В6
T. E1gusN, R. CHUY, T. Mgkuap, M. Zkoua, V. ιονβ, K. )
R.V. 6Geepzha1R, Res Ogidz: ap ogeegeu, Loigpa1 οί Sop (GoRer Releaze 74, 159-171 (2001). '
R.V. Seep "/ aU, Υ. N. Sboye, 1. Mssike, CO. Sopoueg, EYAESMue Ogid ReNueg bye RESU1a1eR Ogid soo | idaiz. AruapseR Augid ϋβίίνββγ Ρθνίβνβ 55, ρ. 217-250 (2003).
R.V. I see, A. Reprp, O. ΒοίίΙοΙ, NdYu Ma (ernomi Taho! OepuaYuez - 7-Rolee1elee 61uso1 Sagatatize apr Saghiopa (ez, Zoita! Οί Ogrepete1eosteorus SaGyopa
R.SHUY, T. EBUS, M.NHYBU, K.L.L.S., W. Ρίήονθ: M | CEILER1 POS1SE Ιβοίν from the right carolina. ΟΖ RU 2006-207.
R. SNuM, T, E1gus, S. Kopak, M. 5 (goa, T. Mgkuap, C. Pryocek, V. Ρίίιονθ, K.SHypsy, βνν NRMA Soror-Uteg-Lazer Ogid Sagpegz ννίΐίίΐί Soua) EpIyo Cr CdeRrprIdRrpxrrgr ogr ogd Sagpegz ννίΐίίΐί soua) cIpeR, cpcrp ogrp ogr, cp. 3θΙίΡ (itoiG (AgdeYpd, Loita1 οί Collaborative Reuse 127, 121-130 (2008).
ϋ. Koresek, P Koreskoua, T, Myuko, Ζ. Bee, NRMA Soro1teg-Apysapseg Ogid Sopidida (ez: Oez1dp, Asyuyu apr Mesnup1zt οί Asyop. Eigor. Ϋ. Ryagt Vyuragt. 50, 61 - 81 (2000).
Koresek, R. Koreskoua, T. Μίη ko, Ζ. Bi, CM Re (Exercise, \ L / a (His Opportunities) (η (a total of 1HD (eReNueg, to CoSchgoNeR Release 74.165-173 (2001).
E, Kga (g, I. Vueg, MT Ssiye, Ogid-royuteg sop) ida (Ez oop (Ai1pd as1rsteeauye oprz, Cn (. Reu. Tyber. Ogid Sagpeg Zus1. 16, 245-288 (1999).
E. Kga (r, BA. Miieg, S Ruhrra, A. U / agpesque, Progid z (ha (edlez η apssapseg endo) (Leguaro, Sieterpet 3, 20-53 (2003).
3. Id, A. Zraggeoot, Υ. Zakeer, With Bee, 3. Map, Ν. 0sa1, R. Zoop-Zyupd, νν. ϋ. P | dd, R. Koge 1P (1iepse οί Eogti1a1yup \ / eYs1e opMe (gopoggns Tahape SetoShegaru: A1it1p-VoipR uegziz Sgetorog EB-VASER Red (ahe1, SNP Sapseg Res 26, 4331-4338, 2006
Υ. Adis! !, to Wuy, R. Oipsap, 3. 5 (Golat, K. Shps, T. Akalke, N. Maera,
- 9 022803
EaIu rRase (total assay iop οг tasgotolesies: a dgea (jTégépse ίη steagapse ga (e BeMeP (total apy mbyt! Izziez, Yrp. L.Sapseg Res. 89, 307-314 (1998).
A. Repipe, CO. Sopoueg, K.V. Szheipzhak !, Apy (total ac (m (u οί rasN1ahe1-2 '-d1uapa (e sop | ida (she (o ro! U (e (Rutepe d! Uso1)): a ta (his-zo-ti rgos! Guide, Api Sapseg Ogid Oez | dp 13, 387-395 (1998).
B. ΡίΡονθ, M. YeNpkoua, ϋ. 31Pa1t, V. 5iGr, ϋ. P1, Soe, O. Nouogka, M.
Moa k, ϋ. Pipougoua, Υ. Segtapo, K.SHPSR, Po1uteps Ogidz Vaze <1 op Sop.
SopioPay Rivers 64, 241-261 (2000)
V. Gayoua, T. E (GusR, M. ResRag, M, YeNpkoua, M. 5 ('az1pu, O. Nowogka, M.
Ονθί, K.SHPSR, OOHOGYÜP KOIPIP
R. 5a (cP | -Pa1pago. R. Oipsap, S Vatez, Poleteg (Regareiys Tog Sapseg:
Siggep (z (a (from api 1i (yoke sPaNepdez, ίηP za (cP | -Pa1pago apy P Oipsap (eyz),
Ayuapsez Рη Ro1uteg Scenese, RoTutera Regareys II: VegNp / He1e11egd,
Zrppdeg, p. 1-65 (2006).
1 _. \ L /. Zeutoig, Υ. M1uato (o, N. Maeia, M. Vgegeap, y. 3 (GoPaT, K. Shnsr,
R. Oipsap, 1st Opéra ί1 Molesiag-Me1dR (op Raz1ue Titog Assitiigiopió ο A Zo1iYe Masgotocieni Ogid Sagpeg. Eig.J.Sappseg 31 A, 766-770 (1995).
y.MM Tepodk νν.Τ. None y.N.M. ZsReNepz, M. ZsRo1, Ι.Α.Μ, Mapy) ez, M.
Suis, M. RossRe (y, N. Rosetd, R. y. Coorpap, JN Vecpep, Raze I cPp1sa1 apy rrattasok1peys z (iyu οί ΡΝΙ1166945, and ηονβΙ that (he-ro! she has a rhoigid οί rasN (ahek Ape-Sapseg Ogidz 12,315-323 (2001).
Y.M.M. Tepljud (, N. Rozpd, M. RossRe (y, E. Rdepo,, Rgater, Ry. Coorpat,
I.N.M. ZsReNeepz, νν.Τ, Nee (p1pk, JN Vecpep, H1dR-regiogtse Nyik1 srgotaYudgarRyu te (Royz Tohg) (Ree (Egpaypayop o and a n o f o f h o f o f h o f h y h o f h y h o f h y h o f h y h o h h і .! yy.Srgot (odg.Re1a (.TesRpo1. 23,
1233-1251 (2000).
K, SHPSR, V. ZiB, d. 5 (GoRaT, O. R1sowa, M. England, In, ΡίΡονθ,
Royteps Ogidz Vazei op Sop | ida (Ez οί Soup (Flight 14a 14) (Iga1 Masgotolesii I.)
5up (Rez13 apy RRuzyuo-sRet1sa1 Sragayepziop. Y. Sop (136) (Rek 64,63-79 (2000)
K.SHPSR, T.E. (GusR, R.SRUSH, M. YeNpkoua, V. ΡίΡονβ, ApIvoi-Tagde (her Roутuteg-Oohogi1S1p SophidaTez ιλ (12)
477-489 (2004) (A).
K. Schrüßr, V. Zebr, Po Рteps Apysapseg Ogidz ννίΐΡ rn-Sop (Goy Asyuayop,
Ayu. Ohid Oyeyuegu Reu. 56 / 7,1025-1052 (2004) (B).
K. SHPPSR, T. E (GusR, V. P | Rowa, M. Yeenpkoua, Μ. Νονθί: pH ββηζίίίνηί poultopepa kop; ida (in ap (gasukNpouero kapsegoz)
1Y. UapRoeTeg, e (ak, Sotragayue apy (total ekasasu οе yose (ache1 apy raN (ahe! Ίη 1228 (1997).
W.W. ννίηίθΓ, RasNyhe! RONTITECH (ΧΥΟΤΑΧ, ST-2103): A tsgotolesi! ag (akhape, yoita! οί Sop (goReasese 109,120-126 (2005).
Claims (5)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090085A CZ303072B6 (en) | 2009-02-13 | 2009-02-13 | Paclitaxel and docetaxel polymeric conjugates with pH controlled release of cancerostatic |
| PCT/CZ2010/000014 WO2010091650A1 (en) | 2009-02-13 | 2010-02-09 | Polymeric conjugates of paclitaxel and docetaxel with ph-controlled releasing of the cancerostatic agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201190315A1 EA201190315A1 (en) | 2012-05-30 |
| EA022803B1 true EA022803B1 (en) | 2016-03-31 |
Family
ID=42309667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201190315A EA022803B1 (en) | 2009-02-13 | 2010-02-09 | Polymeric conjugates of paclitaxel and docetaxel with ph-controlled releasing of the cancerostatic agent |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2413973A1 (en) |
| CZ (1) | CZ303072B6 (en) |
| EA (1) | EA022803B1 (en) |
| UA (1) | UA104187C2 (en) |
| WO (1) | WO2010091650A1 (en) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102964425B (en) | 2010-05-27 | 2016-02-24 | 深圳信立泰药业股份有限公司 | What Docetaxel and Muramyl dipeptide simplified thing sews thing and antitumor action altogether |
| WO2016187147A1 (en) | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Fl Therapeutics Llc | Docetaxel and human serum albumin complexes |
| GB2551979A (en) * | 2016-06-30 | 2018-01-10 | Rs Arastirma Egitim Danismanlik Llac Sanayi Ticaret Ltd | Cleavable polymer drug conjugates |
| CN110062622B (en) | 2016-10-27 | 2022-10-14 | 珠海贝海生物技术有限公司 | Neutral pH compositions of docetaxel and human serum albumin |
| JP7734677B2 (en) | 2020-02-04 | 2025-09-05 | 珠海貝海生物技術有限公司 | Docetaxel preparations |
| RU2753479C1 (en) * | 2020-10-14 | 2021-08-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермская государственная фармацевтическая академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | 2-amino-1-benzamido-5-[2-(naphthalene-1-yl)-2-oxoethylidene]-4-oxo-4,5-dihydro-1h-pyrrole-3-carboxamide exhibiting cytotoxic and proapoptogenic properties against human solid tumour cells, including those resistant to chemotherapeutic agents |
| AU2022443487A1 (en) | 2022-02-25 | 2024-09-05 | Zhuhai Beihai Biotech Co., Ltd. | Taxotere composition and method |
| CN114588272B (en) * | 2022-04-08 | 2023-05-26 | 皖西学院 | A kind of NO-loaded docetaxel nano-medicine and its preparation method and application |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9213077D0 (en) * | 1992-06-19 | 1992-08-05 | Erba Carlo Spa | Polymerbound taxol derivatives |
| CA2444483A1 (en) * | 2001-04-26 | 2002-11-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use |
| CZ2006207A3 (en) * | 2006-03-28 | 2008-01-16 | Zentiva, A. S. | Medicament micellar carriers exhibiting antitumor activity |
| CZ2006505A3 (en) * | 2006-08-09 | 2008-04-09 | Zentiva, A. S. | Doxorubicin polymeric conjugates with pH-controlled release of medicament and process of their preparation |
| CZ298945B6 (en) * | 2006-09-18 | 2008-03-19 | Zentiva, A. S. | Polymeric medicament and process for preparing thereof |
| US8017141B2 (en) * | 2006-12-15 | 2011-09-13 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings of acrylamide-based copolymers |
| WO2008088658A2 (en) * | 2007-01-17 | 2008-07-24 | Immunomedics, Inc. | Polymeric carriers of therapeutic agents and recognition moieties for antibody-based targeting of disease sites |
| CZ301004B6 (en) * | 2007-06-27 | 2009-10-07 | Ústav experimentální botaniky AV CR v. v. i. | Targeted paclitaxel derivatives, process of their preparation and their use |
-
2009
- 2009-02-13 CZ CZ20090085A patent/CZ303072B6/en not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-02-09 EA EA201190315A patent/EA022803B1/en not_active IP Right Cessation
- 2010-02-09 UA UAA201115172A patent/UA104187C2/en unknown
- 2010-02-09 WO PCT/CZ2010/000014 patent/WO2010091650A1/en not_active Ceased
- 2010-02-09 EP EP10716267A patent/EP2413973A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2413973A1 (en) | 2012-02-08 |
| EA201190315A1 (en) | 2012-05-30 |
| CZ303072B6 (en) | 2012-03-21 |
| UA104187C2 (en) | 2014-01-10 |
| CZ200985A3 (en) | 2010-08-25 |
| WO2010091650A1 (en) | 2010-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Enhanced tumour penetration and prolonged circulation in blood of polyzwitterion–drug conjugates with cell-membrane affinity | |
| Xie et al. | Furin-instructed aggregated gold nanoparticles for re-educating tumor associated macrophages and overcoming breast cancer chemoresistance | |
| EA022803B1 (en) | Polymeric conjugates of paclitaxel and docetaxel with ph-controlled releasing of the cancerostatic agent | |
| Shi et al. | Fullerene (C60)-based tumor-targeting nanoparticles with “off-on” state for enhanced treatment of cancer | |
| Sharma et al. | Dendrimer-mediated targeted delivery of rapamycin to tumor-associated macrophages improves systemic treatment of glioblastoma | |
| He et al. | Repurposing disulfiram for cancer therapy via targeted nanotechnology through enhanced tumor mass penetration and disassembly | |
| US11478493B2 (en) | Fabrication and application of a hetero-targeted nano-cocktail with traceless linkers | |
| Singh et al. | EGFR-targeted gelatin nanoparticles for systemic administration of gemcitabine in an orthotopic pancreatic cancer model | |
| AU2003230852B2 (en) | TNP-470 polymer conjugates and use thereof | |
| Shamay et al. | Inhibition of primary and metastatic tumors in mice by E-selectin-targeted polymer–drug conjugates | |
| Nakamura et al. | Pronounced cellular uptake of pirarubicin versus that of other anthracyclines: comparison of HPMA copolymer conjugates of pirarubicin and doxorubicin | |
| AU2017389094A1 (en) | Aptamer-drug conjugate and use thereof | |
| Chen et al. | Paclitaxel loaded phospholipid-based gel as a drug delivery system for local treatment of glioma | |
| EA026870B1 (en) | Combination and pharmaceutical composition for treating tumors | |
| Li et al. | Designing polymers with stimuli-responsive degradation for biomedical applications | |
| JP6462147B2 (en) | HSP90 inhibitory peptide conjugate and its application in tumor therapy | |
| Pickering et al. | Convection-Enhanced Delivery of Auristatin-Conjugated Layer-by-Layer Nanoparticles for Glioblastoma Treatment | |
| JP2010163417A (en) | Target protease-sensitive anticancer agent precursor | |
| CN113244175A (en) | Immune vesicle maytansine conjugate as well as preparation method and application thereof | |
| Colombo et al. | Intraperitoneal administration of novel doxorubicin loaded polymeric delivery systems against peritoneal carcinomatosis: experimental study in a murine model of ovarian cancer | |
| WO2020218390A1 (en) | Conjugate and cancer therapeutic agent | |
| Viale et al. | Fibrin gels entrapment of a doxorubicin-containing targeted polycyclodextrin: Evaluation of in vivo antitumor activity in orthotopic models of human Neuroblastoma | |
| EP2349343B1 (en) | Polymeric composition with synergistic effect in treatment of tumour diseases | |
| US20030161883A1 (en) | Composition consisting of an active ingredient and a therapeutically active delivery system, especially in the treatment of angiogenesis | |
| JP7555827B2 (en) | Combination medicine of anthracycline compound-containing micellar agent and immunostimulant |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |