EA029558B1 - Способы лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности с использованием аминопиридинов - Google Patents

Abstract

В изобретении описаны способы и композиции, связанные с терапевтическим использованием аминопиридинов у пациентов со связанной с инсультом недостаточностью, в частности у пациентов со связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточностью.

Description

Изобретение относится к лечению недостаточности, в частности сенсорно-двигательной недостаточности, связанной с инсультом.

2. Предпосылки

Повреждения центральной нервной системы (ЦНС) представляют собой серьезную проблему со здоровьем. Излечение повреждений ЦНС обычно происходит не полностью, при этом у пациента сохраняется некоторая степень перманентного нарушения функции. Остаточное нарушение функции может включать двигательные, сенсорные, когнитивные, эмоциональные и автономные отклонения от нормы.

Ключевая категория повреждений ЦНС включает повреждение головного мозга вследствие инсульта. Инсульт представляет собой третью по значимости причину смерти и основную причину недееспособности в западном мире. Инсульт, следовательно, влечет большое социально-экономическое бремя. Этиология инсульта может носить или ишемический характер, что имеет место при большинстве инсультов, или геморрагический. Ишемический инсульт может быть обусловлен сгустком, который образуется в другом месте в организме и перемещается с кровотоком в головной мозг (эмболический инсульт) или тромбом, который образуется внутри артерии головного мозга (тромботический инсульт). После массивной гибели клеток в непосредственном центре инфаркта из-за недостатка глюкозы и кислорода область инфаркта расширяется в течение суток, вследствие вторичных механизмов, таких как глутаматная эксайтотоксичность, механизмы апоптоза и образование свободных радикалов. После повреждений нервной системы (например, ишемического события) животные и люди могут восстанавливать функцию за несколько суток, недель и месяцев без какого-либо терапевтического вмешательства. Однако слишком часто это восстановление является только частичным и животные и люди страдают от долгосрочной или перманентной недееспособности, которая может включать двигательную, сенсорную и когнитивную недостаточности. Двигательная, сенсорная и когнитивная недостаточности из-за инсульта могут оказывать значительное влияние на активность в повседневной жизни и качество жизни. Выжившие после инсульта часто остаются с перманентной неврологической недостаточностью, причем предположительно 15-30% выживших после инсульта становятся перманентно недееспособными (Кодег с1 а1., Циркуляция, 2012; 125:22-е220).

Факторы риска, которые увеличивают вероятность инсульта у индивидуума, хорошо известны. Они включают, и без ограничения этим, факторы риска, которые не могут быть изменены: преклонный возраст, наследственность, расу, пол, анамнез, предшествующий инсульту, или сердечный приступ; и факторы риска, которые можно изменять, лечить или контролировать: высокое кровяное давление, курение сигарет, сахарный диабет, заболевания сонной или других артерий, фибрилляция предсердий, другие заболевания сердца, серповидно-клеточная болезнь, высокий холестерин крови, плохое питание и отсутствие физической активности и ожирение.

На сегодняшний день непосредственная лекарственная терапия ишемического инсульта сводится к лекарственным средствам, вводимым в острой фазе после инсульта. Острая фаза соответствует диапазону от момента начала повреждения (например, инсульта) до приблизительно 6 ч после повреждения. Для геморрагического инсульта лекарственная терапия в настоящее время отсутствует.

Помимо тканевого активатора плазминогена ("1РЛ") и определенных устройств для механического извлечения сгустка для использования в острой фазе (см. Бека е1 а1., 2011, Ехрей Кеу №иго1йег. 11(8): 1125-1139), в настоящее время нет терапии, одобренной в США для лечения инсульта. После доступного лечения пациенты часто остаются с некоторым уровнем нарушения функции, которые в лучшем случае могут улучшаться эндогенно до некоторой степени в течение приблизительно 60 суток и затем крайне слабо в течение вплоть до года или больше. Это восстановление можно усиливать только посредством физиотерапии. К сожалению, многие пациенты остаются перманентно недееспособными, с небольшой надеждой на улучшение.

Лечение острого инсульта сопровождается восстановлением потока крови в закупоренном сосуде посредством использования тромболитиков, которое зависит от времени, в частности 1РА. 1РА разрушает тромб в артерии, несущей кровь к головному мозгу, что содействует восстановлению потока крови и снабжение головного мозга кислородом. Однако только малая процентная доля пациентов с инсультом получают успешную терапию 1РА: 1РА в настоящее время только одобрен ΡΌΑ для использования в течение 3 ч с начала симптомов инсульта и его дают только приблизительно не более чем 3% индивидуумов с инсультом. Многие пациенты не подходят для терапии 1РА, не прибывают в больницу во время для 1РА или имеют множественные мелкие инфаркты с течением времени, которые нельзя лечить с 1РА. Кроме того, даже те пациенты, которых успешно лечат с использованием 1РА, часто имеют некоторую степень повреждения клеток головного мозга.

(РА представляет собой сериновую протеазу, которая превращает плазминоген в плазмин. Затем плазмин разрушает фибрин, который является компонентом сгустков, которые закупоривают сосуды в головном мозге и вызывают инсульт. В идеальном случае (РА вводят в течение первых 3 ч после закупоривания, но некоторые клиницисты могут вводить его даже через 6 ч после закупоривания. К сожалению, подавляющее большинство пациентов, которые пережили инсульт, не могут попасть в больницу в течение времени, подходящего для этого лечения. Тем пациентам, которые прибывают в больницу в пре- 1 029558

делах эффективного временного интервала, ίΡΆ вводят в попытке обратить окклюзию потока крови, восстановить снабжение головного мозга кислородом и ограничить степень утраты структуры головного мозга. Однако имеют место определенные существенные противопоказания, которые ограничивают использование ίΡΆ. Пациенты, получающие ίΡΆ после 3 ч, подвержены повышенному риску серьезного кровотечения, причем эффективность ίΡΑ снижена. По этим причинам введение ίΡΑ ограничено острой фазой для достижения какой-либо терапевтической эффективности.

На сегодняшний день никакие другие лекарственные средства не опробированы в ΡΌΑ для лечения инсульта. Существующие экспериментальные способы лечения, такие как артериально доставляемая проурокиназа, находятся в разработке в качестве потенциального средства для разрушения сгустков и восстановления потока крови. Однако в научной литературе описаны средства, для которых доказана полезность для защиты вещества головного мозга и восстановления функции в экспериментальных животных моделях инсульта. Большинство этих средств сосредоточено на снижении острой гибели клеток, воспалении и апоптозе и, следовательно, их следует доставлять в течение часов (некоторые вплоть до 24 ч) после ишемического события.

Аспирин (ΑδΑ) также рекомендован несколькими организациями, когда индивидуумы страдают от симптомов инсульта. Некоторые другие антитромбоцитарные способы лечения используют для того, чтобы помогать снижать вероятность инсульта.

До настоящего времени обычно было принято, что требуется срочное лечение инсульта (ЛЬс е! а1., 2008, ί СегеЬ В1ооб Ηο\ν Ме!аЬ. Ди1 23, ЕриЬ акеаб оГ ρτίηΐ, δυη е! а1., 2008, 81гоке Ди1 10, ЕриЬ акеаб оГ рпп!; Покате е! а1., 2008, Веках Вгаш Кез. 193 (2): 289-97; Ве1ауех е! а1., 2001, δΐ-гоке 32 (2): 553-60). За некоторыми исключениями, например за исключением глиального фактора роста 2 (ССР2) (см. 1ас1 е! а1., 2010, №игоркагтасо1оду 59:640-649), не было показано, что средства ограничивают повреждение головного мозга, восстанавливают функцию или увеличивают восстановление после инсульта, когда их вводят после времени задержки в несколько часов, и, по большей части, в некоторых экспериментальных животных моделях, приблизительно через одни сутки после инсульта.

После острого закупоривания имеет место часто локализованная область разрушенного вещества головного мозга, которое окружает полутеневая зона, которая погибнет в течение часов, если не восстановить циркуляцию. Время до гибели этой полутеневой зоны можно увеличивать на несколько часов в экспериментальных моделях с использованием нейропротекторов, таких как антагонисты ΝΜΌΑ, блокаторы кальциевых каналов, поглотители свободных радикалов и улавливающие средства, средства против апоптоза, ингибиторы каспаз, ингибиторы ΡΑΡΡ и т.д. Однако после 24-48 ч существует небольшая надежда на защиту клеток от некротической гибели и, хотя апоптотическая гибель длится в течение нескольких суток, не доказано, что терапевтическое окно для антиапоптотических способов лечения намного шире, чем срочные протективные способы лечения ^с1ш1/ е! а1., 1998, Се11 Пеа1к ЭДГег. 5(10): 84757; Кош)ак е! а1., 2004, Ιη! 1 Мо1 Меб. 13(3): 373-82).

Перманентная сенсорно-двигательная недостаточность у индивидуумов, которые пережили инсульт, обычно только частично затрагивается реабилитацией с применением физиотерапии. Несмотря на это, уделяется небольшое внимание возможности фармакологического вмешательства для лечения перманентной функциональной недостаточности у таких пациентов. Это может быть обусловлено тем, что обычно сохраняется убеждение в том, что не так много можно осуществлять для замещения нервных клеток и цепей, которые утрачены в результате инсульта.

Блокаторы калиевых каналов.

Образцовым свойством определенных аминопиридинов является то, что они представляют собой блокаторы калиевых каналов. 4-Аминопиридин (4-АР) представляет собой пример аминопиридина с такими свойствами блокирования калиевых каналов. При концентрациях 4-АР в плазме, достигаемых в клинических исследованиях, которые типично составляют <1 мкМ (94 нг/мл^-1), блокирующая калиевые каналы активность 4-АР, по-видимому, является избирательной для определенных типов этих каналов. Что интересно, при высоких концентрациях (таких как миллимолярные концентрации) 4-АР представляет собой блокатор калиевых каналов широкого спектра. Клинические неврологические эффекты 4-АР соответствуют молекулярному механизму блокирования калиевых каналов.

Проводили исследования 4-аминопиридина (далфампридин, фампридин) с использованием внутривенного (ί.ν.) введения и составов пероральных капсул с немедленным высвобождением (ΙΚ) в дополнение к составам с контролируемым высвобождением или замедленным высвобождением. Введение ΙΚ капсул ведет к быстрым и краткосрочным пикам 4-аминопиридина в плазме. Ранее фармакокинетические исследования проводили с использованием состава с немедленным высвобождением (ΙΚ) для перорального введения, который состоял из порошка 4-аминопиридина в желатиновой капсуле, или перорального раствора. Введение приводит к быстрому изменению уровней 4-аминопиридина в плазме, которые не обладают хорошей переносимостью. После этого разработаны таблетки с матрицей замедленного высвобождения (известные как Фампридин-δΚ или ΑΜΡΎΚΑ®, Ткегареибсз, На\\1когпе. ΝΥ). Таблетки

с матрицей замедленного высвобождения демонстрировали улучшенную стабильность и подходящий фармакокинетический профиль для дозирования два раза в сутки. Композиции с замедленным высвобождением 4-аминопиридина и связанное использование таких композиций изложены, например, в патенте

- 2 029558

США 5370879, патенте США 5540938; патенте США 8007826 и публикации патента США И820050228030. Например, подходящие составы, способы производства, фармакокинетические характеристики композиций с замедленным высвобождением аминопиридина и способы лечения различных неврологических нарушений дополнительно описаны в патенте США № 8007826, озаглавленном "8и51;йпеб Ке1еа8е Атторупбше Сотрокйюп", который выдан 30 августа 2011 г.; и публикации патента США № 20050228030, озаглавленном "МеШобк о£ Иктд 8и51;ппеб Ке1еа8е Атиюрупбте Сотрокйюпк", которая опубликована 13 октября 2005 г.; содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки во всей их полноте.

Соединение 4-аминопиридин представляет собой блокатор калиевого (К+) канала, который одобрен в и.8. Рооб апб Эгид АбтииДгайоп в качестве лечения пациентов с М8. Как изложено на фиг. 1, далфампридин представляет собой Присвоенное в США название (И8 ΑΝ) для химического соединения 4аминопиридин (4-АР), которое имеет молекулярную формул С₅Н₆М и молекулярную массу 94,1; прежним и8 названием для этого соединения является фампридин (которое остается 1п1егпа1юпа1 Шпргорпе1агу Анне). Термины "далфампридин", "фампридин" и "4-аминопиридин" использованы на всем протяжении этого описания, чтобы отослать к активному веществу лекарственного средства.

В международной публикации № АО 89/09600 раскрыто использование комбинации блокатора калиевых каналов и холина или источника холина для того, чтобы лечить определенные заболевания, включая "синдромы после инсульта или после отравления, влияющие на память или когнитивность" (см. с. 6).

В данной области существует давняя неудовлетворенная потребность в эффективном лечении недостаточности, вызванной инсультом, например, сенсорно-двигательной недостаточности. В частности, существует необходимость в таком лечении в отсроченных, не острых ситуациях больше 1 ч, суток или недели после острого повреждения. В дополнение к лечению за пределами острого периода, существует значимая неудовлетворенная медицинская потребность в какой-либо терапии, которую можно доставлять в хронической фазе, которая будет улучшать сенсорную, двигательную, когнитивную, эмоциональную или автономную функцию.

3. Краткое изложение сущности изобретения

Изобретение относится к способам лечения пациента, у которого развился инсульт, посредством введения терапевтически эффективного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления описано лечение связанной с инсультом недостаточности у пациента, который имел инсульт. В частности, описано лечение, которое вызывает улучшение одного или нескольких видов сенсорно-двигательной недостаточности, связанных с инсультом или вызванных им. В частности, раскрыто использование аминопиридинов в таком лечении. В одном из вариантов осуществления один или несколько аминопиридинов используют в способах, описанных здесь. В одном из вариантов осуществления аминопиридин представляет собой моно- или диаминопиридин. В некоторых вариантах осуществления моноаминопиридин представляет собой 3-аминопиридин или 4аминопиридин. В одном из вариантов осуществления диаминопиридин представляет собой 3,4диаминопиридин.

В некоторых вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии с описанными здесь способами, представляет собой млекопитающее. В предпочтительном варианте осуществления пациент, которого лечат в соответствии с описанными здесь способами, представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления инсульт, который лечат в соответствии с изобретением, представляет собой ишемический инсульт. Подтипы ишемического инсульта, которые можно лечить в соответствии с изобретением, включают, без ограничения, атеросклероз крупной артерии (эмбол/тромбоз), кардиоэмболию (кардиоэмболический инсульт), закупоривание мелких сосудов (лакунарный инсульт), а также инсульт другой определенной или неопределенной этиологии. В некоторых вариантах осуществления инсульт, который лечат в соответствии с изобретением, связан с неатеросклеротическими васкулопатиями, состояниями гиперкоагуляции или гематологическими нарушениями. В другом варианте осуществления инсульт, который лечат в соответствии с изобретением, представляет собой геморрагический инсульт. Подтипы геморрагического инсульта, которые можно лечить в соответствии с изобретением, включают, без ограничения, субарахноидальную геморрагию и интрацеребральную геморрагию.

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с замедленным высвобождением. В других вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с немедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления способ в соответствии с изобретением включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли один раз в сутки, два раза в сутки или три раза в сутки. В частном варианте осуществления аминопиридин (например, 4-АР) или его фармацевтически приемлемая соль находятся в композиции с замедленным высвобождением, и его вводят один или два раза в сутки, предпочтительно перорально. В другом частном варианте осуществления, аминопиридин (например, 4-АР) или его фармацевтически приемлемая соль находится в композиции с немедленным высвобождением, и его вводят три раза или больше трех раз в сутки, предпочтительно перорально.

В частных вариантах осуществления сам аминопиридин, а не его фармацевтически приемлемую

- 3 029558

соль, используют в каком-либо из способов, описанных здесь.

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, предпочтительно терапевтически эффективное количество аминопиридина или соли, вводят пациенту перорально, внутривенно, внутримышечно или подкожно. В одном из вариантов осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально. В некоторых из вариантов осуществления, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально, его формулируют в форме таблетки, драже или капсулы. В одном из вариантов осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту внутривенно.

В частном варианте осуществления аминопиридин или фармацевтически приемлемую соль, предпочтительно терапевтически эффективное количество аминопиридина или соли, вводят пациенту перорально, в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки. В некоторых вариантах осуществления введение два раза в сутки включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли каждые 12 ч. В частном варианте осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемая соль в композиции с замедленным высвобождением обеспечивает Т_тах приблизительно от 2 ч приблизительно до 6 ч у человека. В другом частном варианте осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, предпочтительно терапевтически эффективное количество аминопиридина или соли, вводят пациенту перорально, в композиции с замедленным высвобождением один раз в сутки.

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 17,5 мг, или от 4 до 17,5 мг, (например, приблизительно 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17 или 17,5 мг), которое в частных вариантах осуществления один или два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве в диапазоне от приблизительно 8 до приблизительно 30 мг, или от 8 до 30 мг, (например, приблизительно 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17, 17,5, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 мг), которое в частных вариантах осуществления один или два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве в диапазоне от 4 до 40 мг. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от приблизительно 5 до 15 мг, 5 и 10 мг, 5 и 7,5 мг или 7,5 и 10 мг два раза в сутки предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением или приблизительно от 5 до 15 мг, от 5 до 10 мг, от 5 до 7,5 мг или от 7,5 до 10 мг два раза в сутки предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В одном из вариантов осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе 5 мг два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В другом варианте осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе 10 мг два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В другом варианте осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе 10 мг один раз в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В некоторых из этих вариантов осуществления, аминопиридин представляет собой 4-аминопиридин. В других вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят между приблизительно 8 и 30 мг, 8 и 20 мг, 10 и 15 мг или 10 и 20 мг один раз в сутки (например, в композиции с замедленным высвобождением).

Любые из доз и схем дозирования, описанных в этой заявке, могут служить в качестве терапевтически эффективного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, используемой в способах по изобретению.

В некоторых вариантах осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли во время ранней хронической фазы и/или во время стабильной хронической фазы после инсульта. В других вариантах осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли во время острой фазы после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение инициируют во время острой фазы, и продолжают во время ранней хронической фазы и/или стабильной хронической фазы после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение инициируют во время ранней хронической фазы и продолжают во время стабильной хронической фазы. В одном из вариантов осуществления лечение инициируют во время стабильной хронической фазы. В частных вариантах осуществления, лечение инициируют во время периода после инсульта, когда самопроизвольное восстановление сенсорно-двигательных функций ожидают или наблюдают у пациента. В других частных вариантах осуществления лечение инициируют во время периода после инсульта, когда у пациента ожидают или наблюдают небольшое поддающееся измерению или не поддающееся измерению самопроизвольное восстановление или улучшение сенсорно-двигательных функций. В некоторых вариантах осуществления лечение инициируют во время периода после инсульта, когда самопроизвольное восстановление сенсорно-двигательных функций ожидают или наблюдают у пациента, но продолжают в течение какого-либо периода времени за пределами такого периода (например, продолжают в течение 6 месяцев, 1 года, 5, 10, 20 лет за пределами такого

- 4 029558

периода, или продолжают в течение всего времени жизни пациента, который проходил лечение).

В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением начинают на или после 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 или 28 суток; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 недель; или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением продолжают в течение больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 недель; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев; или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет, с начала лечения. В определенном варианте осуществления лечение в соответствии с изобретением начинают в любое время после инсульта.

В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают больше чем через 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 8 недель от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 4 недели от момента времени, когда пациент имел инсульт. В другом варианте осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 1 неделю от момента времени, когда пациент имел инсульт. В еще одном другом варианте осуществления, стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают между 2 и 7 сутками от момента времени, когда пациент имел инсульт. В некоторых вариантах осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 недель от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 4 месяца от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 6 месяцев от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 8 месяцев от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 12 месяцев от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают больше чем через 4 месяца от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают больше чем через 6 месяцев от момента времени, когда пациент имел инсульт.

В частных вариантах осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 3, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 48 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 6 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 12 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В другом варианте осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 24 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В другом варианте осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают по меньшей мере через 48 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В одном из вариантов осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно

- 5 029558

терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают больше чем через 6 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В другом варианте осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают больше чем через 24 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт.

В другом варианте осуществления стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают незамедлительно после инсульта или в течение 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 36 или 48 ч от момента времени, когда пациент имел инсульт. В частных вариантах осуществления, стадию введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно терапевтически эффективного количества аминопиридина или соли, начинают в течение 1 суток или в течение 2 суток от момента времени, когда пациент имел инсульт. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением начинают незамедлительно после инсульта или в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 36 или 48 ч после инсульта и продолжают в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 недель; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет с начала лечения.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе предоставлены способы лечения одного или нескольких видов сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, который страдал инсультом. В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе предоставлены способы лечения одного или нескольких видов двигательной или сенсорной недостаточности у пациента, который страдал инсультом. Сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, включают, без ограничения: атаксию, общую недостаточность владения телом, недостаточность координации или равновесия, недостаточность чувства тела, недостаточность выносливости, недостаточность функции руки, утрату или недостаточность тонкой координации руки, гиперрефлексию, недостаточность силы хватания, недостаточность силы руки, недостаточность ловкости руки, мышечную слабость, недостаточность мышечного тонуса, ряд видов двигательной недостаточности, спастичность, недостаточность силы/слабость, тремор, недостаточность функции конечности, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность мышечной силы нижней конечности, недостаточность ходьбы (например, сниженная скорость ходьбы или анормальная походка), недостаточность речи (например, дизартрия), недостаточность функции челюсти, недостаточность жевания и недостаточность артикуляции челюсти.

В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность ходьбы, такую как сниженная скорость ходьбы. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность проприорецепции. В других вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность общего владения телом или чувства тела. В другом варианте осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции конечности (например, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность мышечной силы нижней конечности или недостаточность функции верхней конечности). В одном из вариантов осуществления сенсорнодвигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции нижней конечности и/или мышечной силы нижней конечности. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции верхней конечности. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность спастичности верхней конечности. В еще одном другом варианте осуществления, сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции руки, недостаточность тонкой координации руки или недостаточность силы хватания. В другом варианте осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность силы руки. В другом варианте осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность ловкости руки. В частном варианте осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции моторики рта. В частном варианте осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность речи (например, дизартрия, апраксия или дисфония). В частном варианте осуществления сенсорнодвигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность жевания и/или глотания (например, дисфагия). В частном варианте осуществления сенсорнодвигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой паралич лицевого нерва. В частном варианте осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой паралич конечности. В частном варианте

- 6 029558

осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой паралич руки. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность равновесия. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность чувствительности. В некоторых вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность зрения, такую как сенсорная и/или глазодвигательная недостаточность зрительной функции.

В частных вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением является эффективным для того, чтобы лечить (например, улучшать, облегчать, снижать тяжесть или уменьшать длительность) симптомы одного или нескольких видов связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением является эффективным для того, чтобы лечить (например, улучшать, облегчать, снижать тяжесть или уменьшать длительность) симптомы одного или нескольких видов связанной с инсультом двигательной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением является эффективным для того, чтобы лечить (например, улучшать, облегчать, снижать тяжесть или уменьшать длительность) симптомы одного или нескольких видов связанной с инсультом сенсорной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением восстанавливает одну или несколько двигательных, сенсорных или сенсорно-двигательных функций, ослабленных из-за инсульта. В некоторых вариантах осуществления дополнительно предоставлены способы оценки уровня указанной двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной недостаточности после (или до и после) повторного введения аминопиридина. Такой способ может представлять собой какой-либо способ оценки двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной функции, описанный в настоящем документе или известный в данной области.

В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, используемых в способах, описанных в настоящем документе, является таким, что у человека получают С_тш8 или среднее С_т||К:, приблизительно по меньшей мере 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл. В одном из вариантов осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является таким, что у человека получают С_тш8 или среднее в диапазоне приблизительно от 12 до 20 нг/мл. В некоторых из этих вариантов осуществления, аминопиридин представляет собой 4-аминопиридин.

В частных вариантах осуществления какие-либо из способов, доз и схем дозирования, описанных в этой заявке, можно использовать для того, чтобы лечить пациента со стабильной двигательной недостаточностью после инсульта.

3.1 Терминология.

Для того чтобы обеспечить ясное и согласованное понимание описания и формулы изобретения, предоставлены следующие определения.

Как используют в настоящем документе, термин "приблизительно" содержит точно определенное значение плюс или минус 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15% точно определенного значения. В одном из вариантов осуществления "приблизительно" обозначает 98-102% точно определенного значения. В одном из вариантов осуществления "приблизительно" обозначает 95-105% точно определенного значения. В частности, однако, значение "приблизительно" конкретно нг/мл включает плюс или минус 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 или 0,1 нг/мл. Значение термина "приблизительно" ясно в зависимости от контекста, в котором он встречается.

Как используют в настоящем документе, если текучее вещество не указано или контекст не указывает на иное, значения С_тшж С_тахж, С_ате8 обычно относятся к плазме крови.

Термин "положительная динамика" относительно недостаточности обозначает изменение параметра в терапевтическом направлении. Как используют в настоящем документе, "положительная динамика" также включать стабилизацию параметра, который иначе бы ухудшался или двигался в нетерапевтическом направлении.

Под "фармацевтически приемлемым" понимают носитель, разбавитель или эксципиент, который должен быть совместим с другими ингредиентами состава и не запрещен для введения человеку или ветеринарного введения (в зависимости от случая) регулирующим органом, таким как Ροοά апб Эгид ΑάпишЧгаЦоп или Еигореап Мебютек Адепсу.

Термин "фармацевтически приемлемая соль(и)" в отношении аминопиридина, как используют в настоящем документе, относится к соли, полученной из фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоты или основания, включая неорганическую кислоту или основание или органическую кислоту или основание. В одном из вариантов осуществления фармацевтически приемлемую соль получают из фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоты, которая может представлять собой неорганическую или органическую кислоту. В одном из вариантов осуществления нетоксичные кислоты включают, но не ограничиваясь этим, неорганические и органические кислоты, такие как уксусная, альгиновая, аминобензойная, бензолсульфоновая, бензойная, камфоросульфоновая, лимонная, этенсульфоновая, муравьиная,

- 7 029558

фумаровая, фуранкарбоновая, галактуроновая, глюконовая, глюкуроновая, глутаминовая, гликолевая, бромисто-водородная, соляная, изотионовая, молочная, малеиновая, яблочная, миндальная, метансульфоновая, муциновая, азотная, памоевая, пантотеновая, фенилуксусная, фосфорная, пропионовая, салициловая, стеариновая, янтарная, сульфаниловая, серная, винная кислота и п-толуолсульфоновая кислота. В одном из вариантов осуществления нетоксичная кислота представляет собой соляную кислоту. Подходящие фармацевтически приемлемые соли очевидны специалистам в данной области и включают те, которые описаны в 8.М. Вагде е! а1., "РйагшасеиЕса1 ЗаПз", 1977, I. Рйагш. 8с1. 66: 1-19, включенной в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.

Как используют в настоящем документе, термин "стационарное состояние" указывает на систему, которая имеет одно или несколько свойств, которые не меняются с течением времени, или "стационарное состояние" указывает на систему, которая имеет одно или несколько свойств, которые меняют в ограниченном диапазоне с течением времени. Типично, стационарное состояние представляет собой более общую ситуацию, чем динамическое равновесие. Если система находится в стационарном состоянии, то поведение системы, наблюдаемое в последнее время, обычно будет продолжаться в будущем. Во многих системах стационарное состояние не достигается до тех пор, пока некоторое время не истечет после запуска или инициации системы. Эту начальную ситуацию часто идентифицируют как переходное состояние, период титрования, период запуска или разогрева.

Как используют в настоящем документе, "инсульт" также можно обозначать как "удар". Инсульт возникает, когда происходит обструкция потока крови к определенной области головного мозга, которая перекрывает подачу кислорода и питательных веществ в клетки головного мозга, что вызывает гибель частей клеток. Существует два основных типа инсульта: ишемический и геморрагический. Ишемический инсульт является результатом блокирования потока крови к головному мозгу (ишемия) и почти всегда обусловлен тромбом, блокирующим кровеносный сосуд, тогда как геморрагический инсульт является результатом кровотечения (геморрагии) из разорванного кровеносного сосуда.

Другие термины и/или сокращения предоставлены ниже._

Сокращение или специальный термин	Объяснение
Ь. ί. а.	Два раза в сутки
ст	Сантиметр
Стах	Максимальная измеренная концентрация в плазме
Стахзз	Максимальная измеренная концентрация в плазме в стационарном состоянии
Ста η	Минимальная измеренная концентрация в плазме
ст1ПЗЗ	Минимальная измеренная концентрация в плазме в стационарном состоянии
ЦНС	Центральная нервная система
Далфампридин	Фампридин, 4-аминопиридин
ΌΑΡ	диаминопиридин
Фампридин	Далфампридин, 4-аминопиридин
г, кг, мг, мкг, нг	Грамм, килограмм, миллиграмм, микрограмм, нанограмм
СЬР	Надлежащая лабораторная практика
ч	Час
ВЭЖХ	Высокоэффективная жидкостная хроматография
ΙΗ	Немедленное высвобождение

- 8 029558

IV, ί.ν.,	или ίν	Внутривенно
К+		Ион калия
л, мл		Литр, миллилитр
ЬЕММТ		Ручной тест для мышц нижней конечности
ЬСМЗ, ЬС/МЗ/МЗ	Жидкостная хроматография/массспектрометрия
ЗСМА		Закупоривание срединной мозговой артерии
мин		Минута
мМ, мкМ		Миллимолярный, микромолярный
МЗ		Рассеянный склероз
МЗИЗ-12		Шкала для хождения при рассеянном склерозе из 12 пунктов
ΝΕ		Национальный формуляр
р.о.		Перорально
д.сГ		Один раз в сутки
ЗН		Замедленное высвобождение
33		Стационарное состояние
Т25ЕИ		Ходьба на 25 футов на время
ί.ί.ά.		Три раза в сутки
Ттах		Время максимальной измеренной концентрации в плазме после дозы
изр		Фармакопея США
М5		Скорость ходьбы
ЗАР или 3	-АР	3-аминопиридин
4-АР или	4-АР	4-аминопиридин
3,4 ШАР, РАР	или 3,4-	3,4-диаминопиридин

4. Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлена информация, касающаяся 4-аминопиридина.

На фиг. 2 представлена схема, показывающая временную диаграмму дозирования и тестирования поведения.

На фиг. 3 представлены результаты теста на размещение передней конечности: на оси х представлено число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку (от 0 до 12, где 0 представляет собой нормальную функцию, а 12 представляет собой максимально ослабленную). График показывает среднюю поведенческую оценку животных в каждой тестовой группе (т.е. группах 1-3) в Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60, как описано в примерах ("О"=сутки).

На фиг. 4Α-Ό представлены результаты теста на размещение задней конечности: ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. суток после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку (от 0 до 6, где 0 представляет собой нормальную функцию, а 6 представляет собой максимально ослабленную). На фиг. 4А представлена средняя поведенческая оценка животных в каждой тестовой группе (т.е. группах 1-3) в Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60, как описано в примерах. На фиг. 4В представлена средняя поведенческая оценка животных в группе 1 в Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60, как описано в примерах. На фиг. 4С представлена средняя поведенческая оценка животных в группе 2 в Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60, как описано в примерах. На фиг. 4Б представлена средняя поведенческая оценка животных в группе 3 в Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60, как описано в примерах.

На фиг. 5 представлены результаты теста на качание туловища: ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку. На графике представлена средняя поведенческая оценка животных в каждой тестовой группе (т.е. группах 1-3) в Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60, как описано в примерах.

На фиг. 6 представлена средняя масса (г) животных в каждой тестовой группе (т.е. группы 1-3) в дни (т.е. Ό-1, Ό1, Ό7, Ό14, Ό21, Ό28, Ό30, Ό32, Ό42, Ό44, Ό46, Ό56, Ό58, Ό60) после эпизода инсульта (т.е. ЗСМА).

- 9 029558

На фиг. 7 представлены результаты теста в цилиндре: ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку. График показывает среднюю поведенческую оценку животных в каждой тестовой группе (т.е. группы 1-3) в сутки -1 (до операции), 7, 21, 30, 32, 44, 46, 58, 60, как описано в примерах.

На фиг. 8 представлена общая оценка движения животных, которых подвергали тесту в цилиндре: Ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку. График показывает среднюю поведенческую оценку животных в каждой тестовой группе (т.е. группы 1-3) в сутки -1 (до операции), 7, 21, 30, 32, 44, 46, 58, 60.

На фиг. 9 представлен средний объем инфаркта (%) животных в группах 1, 2 и 3 после ЗСМА.

На фиг. 10 представлен план исследования из клинического протокола, описанного в примере 16.

На фиг. 11 представлены результаты теста на размещение передней конечности: ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку (от 0 до 12, где 0 представляет собой нормальную функцию, а 12 представляет собой максимально ослабленную). График показывает среднюю поведенческую оценку животных в каждой тестовой группе (т.е. наполнитель и 4-АР), как описано в примере 17 ("О"=сутки). Данные выражают в виде средних ± стандартная ошибка среднего. *=р<0,05; 1=р<0,001; 1=р<0,0001.

На фиг. 12 представлены результаты теста на размещение задней конечности: ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку (от 0 до 6, где 0 представляет собой нормальную функцию, а 6 представляет собой максимально ослабленную). График показывает среднюю поведенческую оценку животных в каждой тестовой группе (т.е. наполнитель и 4-АР), как описано в примере 17 ("О"=сутки). Данные выражают в виде средних ± стандартная ошибка среднего. *=р<0,05; !=р<0,001; *=р<0,0001.

На фиг. 13 представлены результаты теста на качание туловища: ось х представляет число суток после эпизода инсульта (т.е. сутки после ЗСМА). Ось у представляет поведенческую оценку. График показывает среднюю поведенческую оценку животных в каждой тестовой группе (т.е. наполнитель и 4-АР) как описано в примере 17 ("О"=сутки). Данные выражают в виде средних ± стандартная ошибка среднего. *=р<0,05; 1=р<0,001; *=р<0,0001.

5. Подробное описание

В качестве осложнения инсульта индивидуумы страдают повреждением нервной системы и, как результат, часто сохраняют некоторую степень двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной недостаточности. Экспериментальные терапевтические средства сосредоточены на защите нейронов от гибели во время и вскоре после ишемии. Не существует одобренного ΡΌΑ лекарственного средства, отличного от ограниченного по времени введения ίΡΑ, которое восстанавливает функцию у людей после инсульта, синдромов ΤΙΑ или множественного инфаркта.

Изобретение относится к лечению пациентов, которые имели инсульт, и в некоторых вариантах осуществления для лечения пациентов, которые страдали повреждением нервной системы из-за инсульта. В частности, изобретение относится к лечению пациентов, которые сохранили некоторую степень двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной недостаточности после инсульта. Эта недостаточность может находиться в диапазоне от чрезвычайно легкой до тяжелой и инвалидизирующей. Такая недостаточность может быть обусловлена утратой нейронов и миелина от ишемического события или от воспаления и иммунного ответа после эпизода ишемии. Такая недостаточность может быть обусловлена утратой или повреждением нейронов или миелина в определенных областях головного мозга (например, корковой, подкорковой или некорковой), которые регулируют сенсорно-двигательные функции, в результате инсульта. Например, такая недостаточность может быть обусловлена утратой или повреждением нейронов или миелина в двигательной коре, сенсорной коре, или соматосенсорной коре, или утратой или повреждением нейронов или миелин в сенсорно-двигательной коре или областях коры, отвечающих за сенсорно-двигательные функции. В некоторых вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, имел ишемический инсульт. В одном из вариантов осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, имел инсульт срединных мозговых артерий (например, из-за закупоривания срединной мозговой артерии). В других вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, имел геморрагический инсульт. В некоторых вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, имеет стабильную или хроническую сенсорно-двигательную недостаточность из-за инсульта (такого как геморрагический инсульт или ишемический инсульт, например инсульт срединных мозговых артерий). В одном из вариантов осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, не имеет рассеянный склероз.

В настоящем документе описано использование аминопиридина (например, 4-АР или 3,4-ΌΑΡ) или его фармацевтически приемлемой соли для того, чтобы лечить связанные с инсультом утрату или повреждение нейронов, в частности, в области головного мозга (например, корковой, подкорковой или некорковой), которая регулирует сенсорно-двигательную функцию. В частности, в настоящем документе опи- 10 029558

сано, что 4-АР и другие аминопиридины или их фармацевтически приемлемые соли, можно использовать при восполнении утраты сенсорно-двигательных функций после эпизода инсульта. Как указано в настоящем документе, в предпочтительных вариантах осуществления аминопиридин (например, 4-АР) или его фармацевтически приемлемую соль вводят индивидуумам, которые демонстрируют утрату сенсорно-двигательной функции, связанную с эпизодом инсульта или после него. В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе описано использование аминопиридина (например, 4-АР или 3,4ΌΑΡ) или его фармацевтически приемлемой соли для того, чтобы лечить связанную с инсультом недостаточность неврологической функции. В некоторых из этих вариантов осуществления лечение пациента с использованием эффективного количества аминопиридина возвращает или улучшает неврологическую функцию, ослабленную из-за инсульта.

В частных вариантах осуществления недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, не влияет на память или когнитивность. В других частных вариантах осуществления композиция, содержащая аминопиридин, которую вводят пациенту в соответствии с изобретением, не содержит холин, источник холина, предшественник ацетилхолина или предшественник холина.

Пациенты или субъекты, которых лечат способами по изобретению, включают, но не ограничиваясь этим, человека и не относящихся к человеку позвоночных, таких как дикие, домашние и сельскохозяйственные животные. В некоторых вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии с изобретением, представляет собой млекопитающее, например человека, корову, собаку, кошку, козу, овцу, лошадь или свинью. В предпочтительном варианте осуществления пациентом является человек.

Как указано в настоящем документе, авторы настоящего изобретения показали, что аминопиридин и, в частности, 4-аминопиридин эффективен при восстановлении неврологической функции после закупоривания срединной мозговой артерии у крыс, которые представляют собой модель ишемического инсульта у человека. В исследованиях, описанных в примере 2 и примере 17, использовали модель инсульта с перманентным закупориванием срединной мозговой артерии (ЗСМА) на крысах для того, чтобы оценивать эффекты 4-аминопиридина, оказываемые на сенсорно-двигательную функцию в то время, когда эндогенное восстановление стабилизировалось. Как описано в настоящем документе, авторы настоящего изобретения с удивлением обнаружили, что 4-аминопиридин эффективен для лечения сенсорно-двигательной недостаточности после ишемического события. Данные, полученные авторами изобретения и описанные в настоящем документе, показывают эффективность даже, когда дозирование инициируют во время хронической фазы, следующей за ишемическим событием, например через 4 или 8 недель после ишемического события. Соответственно в некоторых вариантах осуществления в настоящем документе описаны способы лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента с использованием аминопиридина, например 4-аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли. В частных вариантах осуществления лечение протекает во время ранней хронической фазы и/или стабильной хронической фазы после инсульта. В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе описано лечение пациентов в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, на или после 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 недели; 1, 2, 3, 4, 5, 6 месяца; или 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 лет или какого-либо времени после инсульта. В других вариантах осуществления в настоящем документе описано лечение пациентов в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, в пределах или после 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 или 22 ч; или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 суток после инсульта.

5.1. Аминопиридины и композиции, содержащие аминопиридины.

Структура аминопиридина хорошо известна в данной области. Как показано в патенте США № 5952357, моно- или диаминопиридин имеет следующую структуру:

где х равен 1 или 2.

Аминопиридины, имеющие приведенную выше структурную формулу, где х равен 1, представляют собой, например, 2-аминопиридин, 3-аминопиридин и 4-аминопиридин. Соединения аминопиридина, которые имеют приведенную выше структурную формулу, где х равен 2, представляют собой, например, 2,3-диаминопиридин; 2,5-диаминопиридин; 2,6-диаминопиридин; 3,4-диаминопиридин; 4,5диаминопиридин и 4,6-диаминопиридин.

В одном из вариантов осуществления аминопиридин представляет собой моно- или диаминопиридин. В одном из вариантов осуществления моноаминопиридин представляет собой 3-аминопиридин или 4-аминопиридин. В одном из вариантов осуществления диаминопиридин представляет собой 3,4диаминопиридин.

Как признают, фармацевтически приемлемую соль аминопиридина можно использовать вместо или в дополнение к аминопиридину в любых или всех способах лечения, рассмотренных в настоящем доку- 11 029558

менте. Таким образом, в частных вариантах осуществления, фармацевтически приемлемую соль аминопиридина (т.е. какую-либо фармацевтически приемлемую соль любого из соединений аминопиридина, перечисленную выше) используют в способах лечения связанной с инсультом недостаточности, например сенсорно-двигательной недостаточности, предусмотренной в настоящем документе. Эти соли можно получать, например, ίη δίΐπ во время финального выделения и очистки соединений или посредством отдельной реакции очищенного соединения в форме его свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделения таким образом сформированной соли. В некоторых вариантах осуществления соль моно- или диаминопиридина используют в способах по изобретению. В другом варианте осуществления используют соль 3-аминопиридина или 4-аминопиридина. В еще одном другом варианте осуществления, используют соль 3,4-диаминопиридина. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемую соль аминопиридина получают с использованием уксусной, альгиновой, аминобензойной, бензолсульфоновой, бензойной, камфоросульфоновой, лимонной, этенсульфоновой, муравьиной, фумаровой, фуранкарбоновой, галактуроновой, глюконовой, глюкуроновой, глутаминовой, гликолевой, бромисто-водородной, соляной, изэтиновой, молочной, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, муциновой, азотной, памоевой, пантотеновой, фенилуксусной, фосфорной, пропионовой, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, серной, винной кислоты или птолуолсульфоновой кислоты. В одном из вариантов осуществления один эквивалента аминопиридина, как используют в настоящем документе, может образовывать кислую соль с меньше чем одним или с одним или больше чем одним эквивалентом кислоты. В одном из вариантов осуществления аминопиридин, как используют в настоящем документе, может образовывать соль дигидрохлорид. В одном из вариантов осуществления аминопиридин, как используют в настоящем документе, может образовывать соль фосфат. Дополнительное описание фармацевтически приемлемых солей, которые можно использовать в способах, описанных в настоящем документе, см., например, 8.М. Вагде с1 а1., "Рйагтасеи1юа1 δαίΐδ”. 1977, I. Рйатт. §с! 66: 1-19, включенный в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.

В предпочтительных вариантах осуществления сам аминопиридин, а не его фармацевтически приемлемую соль, используют в каком-либо из способов лечения связанной с инсультом недостаточности, описанной в настоящем документе.

Предпочтительные аминопиридины или их фармацевтически приемлемые соли для использования в соответствии с изобретением представляют собой соединения, которые ингибируют конкретно калиевые каналы. Такие соединения предпочтительно демонстрируют профиль или паттерн избирательного ингибирования калиевых каналов нейронов по отношению к другим тканям, аналогично профилю ингибирования 4-аминопиридина или 3,4-диаминопиридина, или демонстрируют профиль избирательного ингибирования калиевых каналов нейронов по отношению к другим тканям, аналогично профилю ингибирования, общего с 3,4-диаминопиридином и 4-аминопиридином. Предпочтительные аминопиридины включают, без ограничения, 4-аминопиридин и 3,4-диаминопиридин.

Аминопиридины или их фармацевтически приемлемые соли для использования в соответствии с изобретением могут быть в композициях с немедленным высвобождением или замедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления аминопиридины или их фармацевтически приемлемые соли для использования в соответствии с изобретением формулируют для перорального, подкожного, внутримышечного или внутривенного введения.

В частном варианте осуществления композиция с замедленным высвобождением аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли ведет к высвобождению аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли из дозированного состава с постоянной скоростью так, что терапевтически полезный уровень в крови поддерживают в течение периода приблизительно по меньшей мере 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ч, или больше чем 18, или больше чем 24, или больше чем 30 ч. Предпочтительно количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли в пероральных дозированных составах согласно вариантам осуществления настоящего изобретения создает терапевтически эффективную концентрацию в плазме или ЦНС посредством введения фармацевтической композиции три раза в сутки, два раза в сутки или один раз в сутки. Термины "замедленное высвобождение" и "длительное высвобождение" обычно являются синонимами, если контекст явно не указывает на иное.

В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли составляет между 4 и 17,5 мг (например, 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17 или 17,5 мг) или в диапазоне от 4 до 40 мг, и в частном варианте осуществления его вводят один раз в сутки или два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В частных вариантах осуществления, аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с замедленным высвобождением. В других частных вариантах осуществления, аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с немедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество 4-аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли составляет между 4 и 17,5 мг (например, 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17 или 17,5 мг), или в диапазоне от 4 до 40 мг, и в частном варианте осуществления его вводят один раз в сутки или два раза в сутки, предпочтительно в

- 12 029558

композиции с замедленным высвобождением. В одном из вариантов осуществления введение два раза в сутки представляет собой введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли каждые 12 ч.

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве в диапазоне между 4 и 17,5 мг (например, 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17 или 17,5 мг), или от 4 до 17,5 мг, или от 4 до 40 мг, один раз в сутки или два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В частных вариантах осуществления, аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с замедленным высвобождением. В других частных вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с немедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления количество 4-аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли вводят в диапазоне между 4 и 17,5 мг (например, 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17 или 17,5 мг), или от 4 до 17,5 мг, или от 4 до 40 мг, один раз в сутки или два раза в сутки, предпочтительно в композиции с замедленным высвобождением. В одном из вариантов осуществления введение два раза в сутки представляет собой введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли каждые 12 ч.

В частном варианте осуществления какого-либо из способов лечения, описанных в настоящем документе, аминопиридин (например, 4-аминопиридин) вводят в количестве в диапазоне от 4 до 17,5 мг (например, 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17 или 17,5 мг) два раза в сутки в композиции с замедленным высвобождением или вводят в количестве в диапазоне от 8 до 40 мг (например, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 мг) один раз в сутки в композиции с замедленным высвобождением.

В одном из вариантов осуществления предоставлен способ в соответствии с изобретением, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (такого как 3,4-диаминопиридин, 4аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 10 миллиграммов в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки.

В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 мг в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7,5 мг в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 10 мг в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 12,5 мг в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 15 мг в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 17,5 мг в композиции с замедленным высвобождением два раза в сутки.

В некоторых вариантах осуществления предоставлен способ, где терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 20 мг в композиции с замедленным высвобождением один раз в сутки. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 8, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17, 17,5, 18, 19, 20, 20,5, 21, 21,5, 22, 22,5, 23, 23,5, 24, 24,5, 25, 25,5, 26, 26,5, 27,5, 30 или 35 миллиграммов в композиции с замедленным высвобождением один раз в сутки.

В другом варианте осуществления способ в соответствии с изобретением включает введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, в общем суточном количестве 8, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17, 17,5, 18, 19, 20, 20,5, 21, 21,5, 22, 22,5, 23, 23,5, 24, 24,5, 25, 25,5, 26, 26,5, 27,5, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 мг в композиции с замедленным высвобождением. Образцовый вариант осуществления включает введение два раза в сутки, где 15 мг в композиции с замедленным высвобождением вводят утром; и 10 мг в композиции с замедленным высвобождением вводят вечером. Образцовый вариант осуществления включает введение два раза в сутки, где 12,5 мг в композиции с замедленным высвобождением вводят утром и 7,5 мг в композиции с замедленным высвобождением вводят вечером. Другой образцовый вариант осуществления включает введение общего суточного количества в композиции для введения один раз в сутки.

В еще одном другом варианте осуществления способ в соответствии с изобретением включает введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли в общем суточном количестве 8, 10, 11, 12, 12,5, 13, 14, 15, 16, 17, 17,5, 18, 19, 20, 20,5, 21, 21,5, 22,

- 13 029558

22,5, 23, 23,5, 24, 24,5, 25, 25,5, 26, 26,5, 27,5, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 мг в композиции с немедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления композиция с немедленным высвобождением, которая содержит аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, вводят три раза в сутки или больше трех раз в сутки (например, 4, 5 или 6 раз в сутки).

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин (например, 4-аминопиридин) или его фармацевтически приемлемую соль формулируют в виде таблетки с матрицей с замедленным высвобождением (8К) или длительным высвобождением (ЕК) различной мощности, например, от 4 до 40 мг, где 5-, 7,5-, 10-, 12,5-, 15- и 17,5 в настоящее время предпочтительны. Один из вариантов осуществления 4аминопиридина-ЗК составляет 10 мг, который предпочтительно дозировать два раза в сутки, другие схемы дозирования входят в объем изобретения; соответственно другие количества активного ингредиента в составах с замедленным высвобождением также входят в объем изобретения.

В других вариантах осуществления состав с замедленным высвобождением, который используют в способах, описанных в настоящем документе, представляет собой 4-аминопиридин-§К, или ΑΜΡΥΚΑ® (Лсогйа ТЬегареийск, На\\11югпс. ΝΥ), или композицию с замедленным высвобождением для 4аминопиридина, как изложено в патенте США 5370879, патенте США 5540938; патенте США 8007826; или публикации патента США И82005-0228030 (содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме).

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемая соль может присутствовать в фармацевтических композициях, таких как таблетка, жевательная таблетка, драже, капсула, микрокапсула, раствор, суспензия, парентеральный раствор, пастилка, порошок, гранула, лепешка, сироп, суппозиторий, инъекция или блистерная упаковка. Композиции можно формулировать так, чтобы они содержали суточную дозу, полусуточную дозу или удобную долю суточной дозы, в единице дозирования, которая может представлять собой одну таблетку или капсулу или удобный объем жидкости. В одном из вариантов осуществления растворы получают из водорастворимых солей, таких как соль гидрохлорид. Обычно все композиции получают согласно известным способам в фармацевтической химии. Капсулы можно получать посредством смешивания аминопиридин или его фармацевтически приемлемой соли с подходящим носителем или разбавителем и заполнения капсул надлежащим количеством смеси. Обычные носители и разбавители включают, но не ограничиваясь этим, инертные порошкообразные вещества, такие как крахмал многих различных типов, порошкообразная целлюлоза, в частности кристаллическая и микрокристаллическая целлюлоза, сахара, такие как фруктоза, маннит и сахароза, мука из зерновых и схожие съедобные порошки.

Подходящие составы можно получать обыкновенно применяемыми способами с использованием стандартных, органических или неорганических добавок, таких как один или несколько из: эксципиент (например, сахароза, крахмал, маннит, сорбит, лактоза, глюкоза, целлюлоза, тальк, фосфат кальция или карбонат кальция), связующее средство (например, целлюлоза, метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, полипропилпирролидон, поливинилпирролидон, желатин, аравийская камедь, полиэтиленгликоль, сахароза или крахмал), дезинтегрирующее средство (например, крахмал, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилкрахмал, гидроксипропилцеллюлоза низкой степени замещения, бикарбонат натрия, фосфат кальция или цитрат кальция), смазывающее средство (например, стеарат магния, легкая безводная кремниевая кислота, тальк или лаурилсульфат натрия), ароматизатор (например, лимонная кислота, ментол, глицин или апельсиновый порошок), консервант (например, бензоат натрия, бисульфит натрия, метилпарабен или пропилпарабен), стабилизатор (например, лимонная кислота, цитрат натрия или уксусная кислота), суспендирующее средство (например, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон или стеарат алюминия), диспергирующее средство (например, гидроксипропилметилцеллюлоза), разбавитель (например, вода), и основной воск (например, кокосовое масло, белый вазелин или полиэтиленгликоль). В некоторых вариантах осуществления подходящие составы аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли можно получать с использованием одной, двух, трех или больше или всех следующих добавок: коллоидный диоксид кремния, гидроксипропилметилцеллюлоза, стеарат магния, микрокристаллическая целлюлоза, полиэтиленгликоль и диоксид титана.

В одном из вариантов осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемая соль, используемые в способах по изобретению, формулируют в виде таблетки. Таблетки можно получать непосредственным сжатием, посредством влажного гранулирования или посредством сухого гранулирования. В некоторых вариантах осуществления их составы включают разбавители, связующие средства, смазывающие средства и дезинтегрирующие средства, а также соединение. Типичные разбавители включают, например, различные типы крахмала, лактозу, маннит, каолин, фосфат или сульфат кальция, неорганические соли, такие как хлорид натрия и порошкообразный сахар. Порошкообразные производные целлюлозы также можно использовать. В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция не содержит лактозу. Типичные связующие средства таблеток представляют собой такие вещества, как крахмал, желатин и сахара, такие как лактоза, фруктоза, глюкоза и т.п. Также удобно использовать натуральные и синтетические камеди, включая аравийскую, альгинаты, метилцеллюлозу, поливинилпирролидин и т.п. Полиэтиленгликоль, этилцеллюлоза и воски также могут служить в качестве связующих средств. В некоторых вариантах осуществления следующие эксципиенты можно включать в таблетку:

- 14 029558

гидроксипропилметилцеллюлоза, И8Р; микрокристаллическая целлюлоза, И8Р; коллоидный диоксид кремния, ΝΡ; стеарат магния, И8Р; и/или Орайгу \УНПс.

Фармацевтические композиции, используемые в способах, описанных в настоящем документе, могут представлять собой то, что описано, например, в публикации патентной заявки США № 2005/0276851, опубликованной 15 декабря 2005 г., и публикации патентной заявки США № 2005/0228030, опубликованной 13 октября 2005 г., содержание каждой из которых включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Аминопиридины согласно настоящему изобретению могут существовать в нерастворенных, а также растворенных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п. Обычно, растворенные формы считают эквивалентами нерастворенных форм в целях настоящего изобретения.

В другом варианте осуществления описан способ в соответствии с изобретением, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина, например 4-аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли достигает по меньшей мере или больше чем 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл. В другом варианте осуществления описан способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли достигает средней С_тш8 по меньшей мере или больше чем 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления способ описан, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли достигает средней С_т||К:, приблизительно 20 нг/мл, которая содержит среднее значение нижнего предела от 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл, и среднее значение верхнего предела 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нг/мл. В одном из вариантов осуществления отдельному пациенту дают определенное количество лекарственного средства (например, количество дозы), где это количество дозы соответствует количеству, которое при введении нормативной или эталонной популяции достигает средней С_|1|||к, по меньшей мере или больше чем 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл. Уровни в текучих веществах или тканях (например, С_тш88, С_тажж С_ау88) в эталонной популяции можно обозначать как нормативные значения. В другом варианте осуществления описан способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тш8 в диапазоне приблизительно от 5 до 25 нг/мл, от 10 до 18 нг/мл, от 13 до 15 нг/мл или от 15 до 30 нг/мл. В другом варианте осуществления описан способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тш88 приблизительно 20 нг/мл. В другом варианте осуществления описан способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тш88 приблизительно 20 нг/мл; в некоторых вариантах осуществления С_тш8 приблизительно 20 нг/мл содержит значение нижнего предела от 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл, и значение верхнего предела 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нг/мл.

В альтернативных вариантах осуществления предоставлен способ лечения связанной с инсультом двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, который включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту так, что получают С_тш8 в диапазоне от 5 до 25 нг/мл, от 10 до 20 нг/мл, от 15 до 30 нг/мл или от 12 до 20 нг/мл. В другом варианте осуществления способ лечения связанной с инсультом двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной недостаточности у пациента включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту так, что получают Спщ^ в диапазоне по меньшей мере от 12 до 15 нг/мл. В другом варианте осуществления способ лечения связанной с инсультом двигательной, сенсорной или сенсорно-двигательной недостаточности у пациента включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту так, что получают С_т1ГВ8 в диапазоне по меньшей мере от 13 до 15 нг/мл. В одном из вариантов осуществления определенное количество лекарственного средства дают отдельному пациенту (например, количество дозы), где это количество дозы соответствует дозе, которая при введении нормативной или эталонной популяции достигает средней С_тш88 по меньшей мере или больше чем 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл; уровни в плазме (например, С_т||к, С_тахж/ С_ау88) в эталонной популяции можно обозначать как нормативные значения. В одном из вариантов осуществления способ в соответствии с изобретением включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли пациенту так, что получают С_тш88 по меньшей мере 11 или 12 нг/мл.

В некоторых вариантах осуществления предоставлен способ в соответствии с изобретением, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли достигает Т_тах приблизительно от 2 приблизительно до 6 ч у пациента. В некоторых из этих вариантов осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в композиции с замедленным высвобождением (например, один раз в сутки, два раза в сутки или три раза в сутки). В одном из этих вариантов осуществления аминопиридин представляет собой 4-аминопиридин. Терапев- 15 029558

тически эффективное количество 4-аминопиридина может представлять собой какое-либо количество, описанное в настоящем документе. В одном из вариантов осуществления пациентом является человек. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество 4-аминопиридина, вводимое один раз в сутки, два раза в сутки или три раза в сутки в композиции с замедленным высвобождением, достигает Т_тах приблизительно от 2 приблизительно до 6 ч у человека.

В другом варианте осуществления предоставлен способ в соответствии с изобретением, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина, например 4-аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тах88 со следующими или меньше, чем следующие значения: 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21 или 20 нг/мл. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли достигает средней С_тах88 со следующими или меньше, чем следующие значения: 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27,

26, 25, 24, 23, 22, 21 или 20 нг/мл. В одном из вариантов осуществления определенное количество лекарственного средства дают отдельному пациенту (например, количество дозы), где это количество дозы соответствует количеству, которое при введение нормативной или эталонной популяции достигает средней С_тах88 со следующими или меньше, чем следующие значения: 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21 или 20 нг/мл. Уровни в текучем веществе или ткани (например, С_т1П88, С_тах88, С_ау88) в эталонной популяции можно обозначать как нормативные значения. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тах88 в диапазоне приблизительно от 15 до 30 нг/мл, от 25 до 35 нг/мл, от 25 до 40 нг/мл или от 35 до 55 нг/мл. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тах88 приблизительно 30 нг/мл. В другом варианте осуществления предоставлен способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли достигает С_тах88 в диапазоне, которые содержит значение нижнего предела от 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 нг/мл, и значение верхнего предела 25, 26,

27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 или 60 нг/мл.

В другом варианте осуществления описан способ, где указанное терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли достигает средней С_тах88, которая равна или меньше чем 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21 или 20 нг/мл. В одном из вариантов осуществления определенное количество лекарственного средства дают отдельному пациенту (например, количество дозы), где это количество дозы соответствует дозе, которая при введении нормативной или эталонной популяции достигает средней С_тах88, равной или меньше чем 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21 или 20 нг/мл; уровни в плазме (например, С_т1_П88, С_тах88, С_ау88) в эталонной популяции можно обозначать как нормативные значения.

В другом варианте осуществления используют стандартную дозу композиции, как, по существу, описано в настоящем документе.

Фактическое количество дозы аминопиридина, его фармацевтически приемлемой соли или композиции, содержащей аминопиридин, вводимое субъекту, можно определять с помощью физических и физиологических факторов, таких как возраст, пол, масса тела, тяжесть состояния, тип заболевания, подлежащего лечению, предыдущие или параллельные терапевтические вмешательства, идиопатии субъекта и пути введения. Эти факторы легко определит специалист в данной области. Практик, отвечающий за введение, типично определяет концентрацию активного ингредиента(ов) в композиции и подходящую дозу(ы) для отдельного субъекта. Дозу может корректировать индивидуальный практик в случае какоголибо осложнения или изменения состояния пациента.

Особенно благоприятно формулировать парентеральные композиции в форме единиц дозирования для легкого введения и однородности дозы. Форма единицы дозирования, как используют в настоящем документе, относится к физически отдельным единицам, предназначенным в качестве единичных доз для субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит предварительно определяемое количество терапевтического соединения, вычисленное для того, чтобы получать желаемый терапевтический эффект, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Описание форм единиц дозирования по изобретению продиктовано и непосредственно зависит от (а) уникальных характеристик терапевтического соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, и (Ь) ограничений, накладываемых в области компаундирования такого терапевтического соединения для лечения выбранного состояния у пациента. Стандартные дозированные формы могут представлять собой таблетки или блистерные упаковки. В определенных протоколах введения пациент может использовать больше чем одну стандартную дозу за раз, например может употреблять две таблетки, содержащиеся в отдельных блистерах блистерной упаковки.

- 16 029558

Оптические изомеры - диастереомеры - геометрические изомеры - таутомеры: соединения, описанные в настоящем документе, могут содержать асимметричный центр и, таким образом, могут существовать в виде энантиомеров. Когда соединения в соответствии с изобретением обладают двумя или более асимметричными центрами, они могут дополнительно существовать в виде диастереомеров. Настоящее изобретение включает все такие возможные стереоизомеры, такие как, по существу, чистые разрешенные энантиомеры, их рацемические смеси, а также смеси диастереомеров. Формулы приведены без определяющей стереохимии в определенных положениях. Настоящее изобретение включает все стереоизомеры с такими формулами и их фармацевтически приемлемые соли. Диастереоизомерные пары энантиомеров можно разделять, например, посредством фракционной кристаллизации из подходящего растворителя, и пару энантиомеров, полученных таким образом, можно разделять на отдельные стереоизомеры стандартными средствами, например посредством оптически активной кислоты или основания в качестве расщепляющего средства или на хиральной колонке ВЭЖХ. Кроме того, какой-либо энантиомер или диастереомер соединения с общей формулой можно получать посредством стереоспецифичного синтеза с использованием оптически чистых исходных материалов или реактивов с известной конфигурацией.

Аминопиридины по изобретению или их фармацевтически приемлемые соли вводят в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы лечить у пациента недостаточность, связанную с инсультом. В некоторых вариантах осуществления лечение снижает количество симптомов недостаточности у пациента приблизительно по меньшей мере на 10, более предпочтительно на 20, более предпочтительно приблизительно по меньшей мере на 40, даже более предпочтительно приблизительно по меньшей мере на 60 и еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 80% по отношению к субъектам, которых не лечили. Такое процентное количественное определение изменения предпочтительно применяют к тестам на сенсорно-двигательную функцию, которые обеспечивают измерения результатов на непрерывных линейных шкалах, таких как Τ25ΡΥ, и т.д. Другие тесты на сенсорнодвигательную функцию не выражают в виде процентного изменения, но по предсказаниям будут вести к значительному изменению при подходящем статистическом сравнении. Такие тесты включают полуколичественные меры, которые присваивают значения способности осуществлять определенные навыки. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением ведет к статистически значимой положительной динамике связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности (например, как измеряют посредством способности пациента осуществлять определенные задания или навыки) в сравнении с контролем. Такой контроль может представлять собой способность пациента осуществлять оцениваемое задание или навык перед тем как приступить к лечению.

5.2. Сенсорно-двигательная недостаточность и исходы введения аминопиридина в соответствии с изобретением.

Настоящее изобретение представляет способы лечения вызванного инсультом повреждения нервной системы у млекопитающего и, в частности, способ лечения связанной с инсультом сенсорнодвигательной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, имеет один или несколько видов сенсорнодвигательной недостаточности (например, диагностированных по одному или нескольким симптомам сенсорно-двигательной недостаточности или проявляющейся в них). В некоторых вариантах осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, имеет недостаточность из-за повреждения нейронов (например, утраты или демиелинизации нейронов) в области коры или другой области головного мозга, которая отвечает за или вовлечена в сенсорнодвигательные функции. Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способам использования 4-аминопиридина для лечения недостаточности сенсорно-двигательной функции, являющейся результатом инсульта. Такое лечение может опосредовано введением какой-либо из доз и схем дозирования, описанных в этой заявке.

Сенсорно-двигательная недостаточность, или недостаточность сенсорно-двигательной функции, которую лечат в соответствии с изобретением, включает без ограничения атаксию, общую недостаточность владения телом, недостаточность координации или равновесия, недостаточность чувства тела, недостаточность проприорецепции, недостаточность походки, недостаточность рефлексов, недостаточность ловкости, недостаточность выносливости, недостаточность функции руки, утрату или недостаточность тонкой координации руки, гиперрефлексию, недостаточность силы руки, недостаточность ловкости руки, недостаточность силы хватания, мышечную слабость, недостаточность мышечного тонуса, ряд видов двигательной недостаточности, спастичность, недостаточность силы/слабость, тремор, недостаточность функции конечности, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность мышечной силы нижней конечности, недостаточность ходьбы (например, сниженная скорость ходьбы), недостаточность речи (например, дизартрия), недостаточность функции челюсти, недостаточность жевания или недостаточность артикуляции челюсти. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность проприорецепции. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность функции

- 17 029558

моторики рта. В частных вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность речи (например, дизартрия, апраксия или дисфония) или недостаточность жевания и/или глотания (например, дисфагия). В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность зрения, такую как сенсорная и/или глазодвигательная недостаточность зрительной функции. В других частных вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность скорости ходьбы, недостаточность ловкости руки, недостаточность силы руки или спастичность верхней конечности. В некоторых вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность двигательной и/или сенсорной функции, как измеряют с использованием оценки по Рид1-Меуег. В частных вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой недостаточность двигательной функции, недостаточность равновесия, недостаточность чувствительности или недостаточность функции сустава. В частных вариантах осуществления, сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой паралич лицевого нерва, паралич конечности или паралич руки.

В некоторых вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, включает, но не ограничиваясь этим, недостаточность ходьбы, недостаточность функции конечности, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность мышечной силы нижней конечности, недостаточность мышечного тонуса, спастичность, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции руки, недостаточность тонкой координации руки, недостаточность силы хватания, недостаточность равновесия или координации, недостаточность общего владения телом, недостаточность функции челюсти, недостаточность жевания или недостаточность артикуляции челюсти.

В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции нижней конечности и/или мышечной силы нижней конечности. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность двигательной функции нижней конечности. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность ходьбы (такую как сниженная скорость ходьбы). В одном из вариантов осуществления сенсорнодвигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции верхней конечности (например, двигательной функции верхней конечности). В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой паралич конечности. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность мышечного тонуса или спастичность (например, спастичность верхней конечности). В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность равновесия или координации. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность чувствительности. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции моторики рта. В частном варианте осуществления недостаточность функции моторики рта представляет собой недостаточность силы мышц губ и/или языка (такую как при дизартрии). В другом частном варианте осуществления недостаточность функции моторики рта представляет собой недостаточность координации мышц губ и/или языка (такую как при апраксии). В еще одном другом частном варианте осуществления недостаточность функции моторики рта представляет собой недостаточность силы мышц, участвующих в дыхании. В одном из вариантов осуществления сенсорнодвигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность речи (например, дизартрия, апраксия, дисфония). В некоторых вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой сенсорно-двигательное нарушение на лице, в языке и/или языкоглоточных мышцах. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность жевания и/или глотания (например, дисфагия). В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции челюсти или артикуляции челюсти. В одном из вариантов осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой паралич лицевого нерва. В одном из вариантов осуществления сенсорнодвигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность функции руки, недостаточность координации руки (например, недостаточность тонкой коор- 18 029558

динации руки), недостаточность силы хватания, недостаточность ловкости руки или паралич руки. В некоторых вариантах осуществления сенсорно-двигательная недостаточность, которую лечат в соответствии с изобретением, представляет собой недостаточность или нарушение зрения. Недостаточность зрения, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, может представлять собой сенсорную и/или глазодвигательную недостаточность зрительной функции. В одном из вариантов осуществления недостаточность зрения, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой сенсорную недостаточность зрительной функции. В одном из вариантов осуществления недостаточность зрения, которую лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, представляет собой глазодвигательную недостаточность зрительной функции.

В одном из вариантов осуществления введение аминопиридина восстанавливает одну или несколько сенсорно-двигательных функций. Это проявляется или измеряется в виде положительной динамики, например, в отношении способности ходить, равновесия, способности стоять, силы руки, ловкости, рефлексов, ответов на принятые в данной области мерки качества жизни, или положительной динамики в какой-либо другой сенсорно-двигательной функции, описанной в настоящем документе или известной в данной области.

В некоторых вариантах осуществления лечение пациента посредством введения определенного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является эффективным для того, чтобы облегчать или предотвращать связанную с инсультом сенсорно-двигательную недостаточность. В одном из вариантов осуществления лечение пациента посредством введения определенного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является эффективным для того, чтобы предотвращать начало симптомов сенсорно-двигательной недостаточности. В других вариантах осуществления лечение пациента посредством введения определенного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является эффективным для того, чтобы облегчать симптомы (например, снижать тяжесть) связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности. В других вариантах осуществления лечение пациента посредством введения определенного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является эффективным для того, чтобы уменьшать длительность связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности. В частном варианте осуществления лечение пациента посредством введения определенного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является эффективным для того, чтобы устранять связанную с инсультом сенсорно-двигательную недостаточность, и/или эффективным для того, чтобы восстанавливать сенсорнодвигательную функцию, ослабленную инсультом. В некоторых вариантах осуществления введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли является эффективным для того, чтобы восстанавливать сенсорно-двигательную функцию, ослабленную инсультом. В некоторых из этих вариантов осуществления, инсульт представляет собой ишемический инсульт. В одном из вариантов осуществления инсульт представляет собой инсульт срединных мозговых артерий (например, из-за закупоривания срединной мозговой артерии). В других вариантах осуществления инсульт представляет собой геморрагический инсульт.

В другом варианте осуществления представлен способ поддержания положительной динамики сенсорно-двигательной функции у пациента, где такая функция ослаблена в результате инсульта, указанный способ включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (такого как 3,4диаминопиридин, 4-аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту после предварительного достижения положительной динамики такой ослабленной сенсорнодвигательной функции у указанного пациента во время введения 4-аминопиридина.

В одном из вариантов осуществления способ поддержания положительной динамики сенсорнодвигательной функции у пациента со связанной с инсультом недостаточностью такой функции включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту в течение продолжительного периода времени. В другом варианте осуществления способ достижения непрерывной положительной динамики у пациента со связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточностью включает продолжение введения терапевтически эффективного количества аминопиридина (такого как 3,4-диаминопиридин, 4-аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту в течение продолжительного периода времени.

В частных вариантах осуществления положительная динамика среди пациентов, испытывающих связанную с инсультом сенсорно-двигательную недостаточность, возникает в течение периодов по меньшей мере или больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недели; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или больше чем 5 лет лечения.

Сенсорно-двигательные функции, включая недостаточность сенсорно-двигательных функций и положительную динамику сенсорно-двигательных функций, можно оценивать с использованием какоголибо известного в данной области способа. Например, оценочные тесты могут включать, без ограничения, ходьбу на 25 футов на время (Т25Е\У). ходьбу 2 мин, ходьбу 6 мин (6Μν), тест с коробкой и блоками, 6-пунктовый шаговый тест, ручной мышечный тест для функции нижней конечности, ЬЕММТ,

- 19 029558

оценку Эшворта, модифицированную шкалу Эшворта, тест на силу хватания, тест с колышком и 9 отверстиями, мелкие движения пальцем, быстрое чередование пальцев для функции верхней конечности, функциональную системную оценку для сенсорной функции и пальце-носовую пробу и пяточноколенную пробу для атаксии. В частности, Т25А можно использовать для того, чтобы измерять ходьбу, ЬЕММТ можно использовать для того, чтобы измерять мышечную силу нижней конечности, модифицированную шкалу Эшворта можно использовать для того, чтобы измерять спастичность. Принятые в данной области оценки функции верхней конечности включают, без ограничения, самостоятельно сообщаемые измерения по шкале эффективности, ручную динамометрию и Индекс верхней конечности (ИЕ1). Другие оценочные тесты, которые можно использовать для того, чтобы измерять сенсорно-двигательные функции, включают, но не ограничиваясь этим: шкалу равновесия Берга (ВВ§), тест на координацию по Ке1а, тест на постуральную стабильность, тестовую ходьбу на 10 м на время, тест на натяжение плеча, силу хватания, максимальное изометрическое усилие разгибателей колена, тесты на мышечную выносливость, пассивный подъем прямой ноги, ТЕМРА (тест на производительность верхней конечности для пожилых), тест на функцию руки по 1еЬ§еи-Тау1ог, опросник по нарушению функций руки, плеча и кисти (ΌΑδΗ) и меру способности руки-36 (МАМ-36). Другой оценочный тест, который можно использовать для того, чтобы измерять сенсорно-двигательные функции, представляет собой оценку по Рид1-Меуег. В некоторых вариантах осуществления оценку по Рид1-Меуег можно использовать для того, чтобы измерять двигательную функцию (например, двигательную функцию нижней конечности и/или двигательную функцию верхней конечности), равновесие, чувствительность и/или функцию сустава. В частных вариантах осуществления оценку по Рид1-Меуег используют для того, чтобы измерять двигательную функцию нижней конечности, двигательную функцию верхней конечности и/или чувствительность. Такую оценку можно осуществлять до и после введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли пациенту в соответствии со способами, описанными в настоящем документе. Например, сенсорнодвигательную функцию пациента, страдающего от связанной с инсультом недостаточности такой функции, можно оценивать до введения аминопиридина и/или после введения аминопиридина, например, на или после 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 суток; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 недель; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5 лет с начала лечения в соответствии со способами, описанными в настоящем документе.

В частном варианте осуществления терапевтический исход при связанной с инсультом сенсорнодвигательной недостаточности анализируют и обнаруживают в любой один, два, три, четыре, пять или больше или в каждый из следующих моментов времени и/или в момент времени более поздний, чем любой один из следующих моментов времени: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 и 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 и 6,5 года после начала лечения аминопиридином или его фармацевтически приемлемой солью.

5.3. Способы введения аминопиридинов.

В некоторых вариантах осуществления способ в соответствии с изобретением включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли один раз в сутки, два раза в сутки или три раза в сутки. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально. В других вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят внутривенно. В других вариантах осуществления, аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят, например, внутримышечно или подкожно.

В некоторых вариантах осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли во время острой фазы после инсульта. Острая фаза, следующая за инсультом, отличается продолжающимся повреждением ткани головного мозга (например, расширение ишемического повреждения) после инсульта. Например, во время острой фазы, продолжающееся повреждение ткани головного мозга может происходить в полутеневой зоне, окружающей центральную часть, где возникло начальное повреждение из-за инсульта. Такое повреждение может включать гибель клеток, например, из-за лишения кислорода. Типично, острая фаза длится от момента начала инсульта приблизительно до 6 ч после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли пациенту во время периода после инсульта, в котором продолжается повреждение ткани головного мозга. В одном из вариантов осуществления такое лечение происходит во время периода после инсульта, когда ишемическое повреждение все еще расширяется. Например, пациента можно лечить в соответствии с изобретением во время острой фазы в пределах 1, 2, 3, 4, 5 или 6 ч после инсульта.

В некоторых вариантах осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли во время ранней хронической фазы после инсульта. За острой фазой после инсульта следует период самопроизвольного восстановления неврологической функции, ранняя хроническая фаза, которая может длиться в течение нескольких недель у видов грызунов (например, вплоть до 4, 5 или 6 недель), и в течение нескольких месяцев у человека (например, вплоть до 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11 или 12 месяцев). Ранняя хроническая фаза отличается продолжающимся постоянным эндогенным восстановлением неврологической функции, ослабленной посредством инсульта, и, в частности,

- 20 029558

сенсорно-двигательной функции. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением включает введение аминопиридин или его фармацевтически приемлемой соли пациенту во время периода после инсульта, во время которого наблюдают самопроизвольное или эндогенное восстановление неврологической функции, например сенсорно-двигательной функции. Например, пациентачеловека можно лечить в соответствии с изобретением во время ранней хронической фазы на или после 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 ч; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 суток; 1, 2, 3, 4, 5, 6 недель или 1, 2, 3 или 4 месяцев после инсульта и раньше 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или 1 года после инсульта.

В других вариантах осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли во время стабильной хронической фазы после инсульта. Стабильная хроническая фаза после инсульта отличается небольшой или неизмеримой самопроизвольной или эндогенной положительной динамикой неврологической функции, ослабленной инсультом, в частности сенсорно-двигательной функции. Типично, виды грызунов достигают стабильной хронической фазы после от 4 до 6 недель после инсульта; и человек достигает ее после от 4 до 8 месяцев (и, иногда, после 1 года) после инсульта. Манифестация стабильной хронической фазы часто имеет вид стабильной пожизненной недееспособности и, в частности, стабильной пожизненной сенсорно-двигательной недостаточности, которая не демонстрирует измеримое улучшение в отсутствие лечения. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемая соль являются эффективными для улучшения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента при введении во время стабильной хронической фазы после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением включает введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли пациенту во время периода после инсульта, во время которого наблюдают небольшую или неизмеримую самопроизвольную или эндогенную положительную динамику неврологической функции, например сенсорно-двигательной функции. Например, пациента-человека можно лечить в соответствии с изобретением во время стабильной хронической фазы на или после 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев; 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 12, 15, 20 лет, или какого-либо времени после инсульта.

В одном из вариантов осуществления изобретения лечение инициируют после острой фазы после инсульта. В одном из вариантов осуществления изобретения лечение инициируют во время и также продолжают после острой фазы после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение инициируют после ранней хронической фазы после инсульта. В другом варианте осуществления лечение инициируют во время и также продолжают после ранней хронической фазы после инсульта. В еще одном другом варианте осуществления лечение инициируют во время стабильной хронической фазы после инсульта.

Терапевтической пользы от аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли можно достичь посредством введения терапевтически эффективного количества млекопитающему. В некоторых вариантах осуществления лечение осуществляют до, во время или после часа 1, 2, 6, 8, 12, 24, 30, 36, 42, суток 2, 3, 4, 5, недели 1, 2, 3, 4 или позже после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение осуществляют во время или после часа 3, 6, 8, 12, 24, 30, 36, 42, суток 2, 3, 4, 5, недели 1, 2, 3, 4, 8 или позже после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после часа 6 после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после часа 24 после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 7 суток (1 недели) после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 14 суток (2 недель) после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 1 месяца после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 4 месяцев после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 6 месяцев после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 8 месяцев после инсульта. В одном из вариантов осуществления лечение осуществляют во время или после 12 месяцев после инсульта. В частном варианте осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающем, где введение осуществляют по меньшей мере двое, трое, четверо, семеро или десятеро суток после ишемического события, и в терапевтически эффективном количестве, достаточном для того, чтобы способствовать положительной динамике сенсорно-двигательной функции во время ранней хронической фазы и/или во время стабильной хронической фазы после ишемического события у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением осуществляют через какое-либо время после инсульта. В частных вариантах осуществления способ по изобретению включает введение аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающему, где введение осуществляют в какое-либо время после инсульта, в количестве, достаточном для того, чтобы способствовать положительной динамике сенсорно-двигательной функции.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает введение аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающему, начиная с суток 1, 2 или 3 и вплоть до и включая сутки 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 сутки после инсульта; неделю или больше чем одна неделя после инсульта, две недели или больше чем две недели после инсульта; три недели или больше чем три недели после инсульта; четыре недели или больше чем четыре недели

- 21 029558

после инсульта; один месяц или больше чем один месяц после инсульта; два месяца или больше чем два месяца после инсульта; три месяца или больше чем три месяца после инсульта; четыре месяца или больше чем четыре месяца после инсульта; пять месяцев или больше чем пять месяцев после инсульта; шесть месяцев или больше чем шесть месяцев после инсульта. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин (например, 4-аминопиридин) или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациентам во время или после 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 недели после инсульта.

В соответствии с другим аспектом изобретения представлен способ содействия положительной динамике неврологической функции, например сенсорно-двигательной функции, во время периода за пределами острой фазы после ишемического события у млекопитающего. В частном варианте осуществления лечение в соответствии с изобретением можно начинать в пределах острой фазы, но включает по меньшей мере одно, два три, четыре, пять, шесть или больше чем шесть повторений лечения за пределами острой фазы.

В некоторых вариантах осуществления стадию введения начинают в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 ч; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 суток; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недель; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25 или 30 лет, или позже, после инсульта. В других вариантах осуществления стадию введения начинают после 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 ч; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 суток; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недель; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25 или 30 лет, или позднее, после инсульта.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (такого как 3,4-диаминопиридин, 4-аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту в течение определенного периода времени. В некоторых вариантах осуществления стадию введения начинают в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 ч; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 суток;

I, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недель; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25 или 30 лет, или позднее, после эпизода инсульта. В дополнительном варианте осуществления приведенного выше, стадию введения продолжают в течение периода по меньшей мере или больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 и 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25, 30 или 35 лет.

В некоторых вариантах осуществления схема лечения (конкретная доза и частота введения, которые можно выбирать из любых описанных в настоящем документе), стабильная в течение определенного периода времени, например в течение по меньшей мере 4 суток, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 недель, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4 или по меньшей мере 6 месяцев.

В частном варианте осуществления настоящее изобретение включает способ эффективного лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента в течение краткосрочной, начальной или нехронической фазы, который включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (такого как 3, 4-диаминопиридин, 4-аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту. В некоторых вариантах осуществления, предусмотренных в настоящем документе, пациента лечат с использованием аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли в течение периода 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 суток; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,

II, 12, 13, 14, 15 недель; 1, 2, 3 или 4 месяцев. Понятно, что можно продолжать за пределами такого периода и все еще находиться в пределах объема изобретения.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение включает способ эффективного лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента в течение ранней хронической и/или стабильной хронической фазы, который включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (такого как 3,4-диаминопиридин, 4-аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту в течение продолжительного периода времени. В другом варианте осуществления изобретение включает способ длительного лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности, который включает введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (такого как 3,4-диаминопиридин, 4-аминопиридин и т.п.) или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту в течение продолжительного периода времени. В некоторых вариантах осуществления расширенный период составляет по меньшей мере или больше чем 10, 11, 12,

- 22 029558

13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недели; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше чем 10 лет.

В определенном варианте осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина, например 4-аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли вводят внутривенно во время острой фазы после инсульта. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина, например 4-аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли вводят внутривенно в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 суток или 1, 2, 3, 4, 8 недель после инсульта. Внутривенное введение может происходить один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, один раз в двое суток, один раз в трое суток или один раз в неделю. В одном из вариантов осуществления пациента лечат с использованием одного внутривенного введения аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом варианте осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина, например 4-аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли вводят перорально во время острой фазы, ранней хронической фазы и/или стабильной хронической фазы после инсульта. В частном варианте осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина, например 4аминопиридина, или его фармацевтически приемлемой соли вводят перорально только во время ранней хронической фазы и/или стабильной хронической фазы после инсульта. Пероральное введение может происходить один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, или больше трех раз в сутки, в композиции или с замедленным или с немедленным высвобождением.

Введение соединения аминопиридина можно выполнять посредством различных способов, как описано в настоящем документе. Введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с изобретением можно осуществлять, например, посредством введения соединения в или на целевую ткань; предоставления соединения системно пациенту, например, посредством внутривенной инъекции (например, парентерально) или перорального введения (например, энтерально) или местного введения (например, трансдермально, чрескожно, пластырь, суппозиторий) или ингаляции (например, чресслизистая), посредством чего соединение достигает целевой ткани. Введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли пациенту может происходить с помощью самого пациента или с помощью лица, осуществляющего уход, такого как профессиональный медик; включая акт глотания или применения к пациенту или тому подобное, где соединение может проявлять свои эффекты.

В одном из вариантов осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят локально, например, посредством прямого введения через несистемный путь на или вблизи места повреждения, нарушения или ощущаемой боли.

В некоторых вариантах осуществления пациента лечат внутривенно, начиная в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22 ч или начиная в сутки 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7, после инсульта с использованием аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг на дозу, один раз в сутки, два раза в сутки, через день, или один раз в неделю, в течение больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 суток, больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 недель или больше чем 1, 2, 3, 4, 5 месяцев (или между 1 и 5 сутками, между 2 и 10 сутками, между 10 сутками и 1 месяцем, между 10 сутками и 6 месяцами или между 10 сутками и 1 годом).

Альтернативно, пациента лечат перорально, начиная с суток 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 (или после суток 1,

2, 3, 4, 5, 6 или 7), начиная с или после 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 недель, или начиная с или после 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10 или 12 месяцев после инсульта с использованием аминопиридина (например, 4-аминопиридина) или его фармацевтически приемлемой соли в количестве между 4 мг и 17,5 мг (например, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или 17 мг), один раз в сутки или два раза в сутки, в течение больше чем 5, 10, 15, 20 суток, больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 недель, больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 месяцев или больше чем 1, 2,

3, 4, 5, 10, 15, 20 лет (или между 10 сутками и 3 месяцами, между 10 сутками и 6 месяцами, между 10 сутками и 1 годом, между 3 месяцами и 1 годом, между 6 месяцами и 1 годом, между 6 месяцами и 5 годами, или между 1 годом и 50 годами). В некоторых вариантах осуществления пациента лечат, начиная с 4 недель после инсульта (или после 4 недель после инсульта) с использованием 5, 7,5, 10 или 12,5 мг 4аминопиридина два раза в сутки. В других вариантах осуществления пациента лечат, начиная с 4 месяцев после инсульта (или после 4 месяцев после инсульта) с использованием 5, 7,5, 10 или 12,5 мг 4аминопиридина два раза в сутки. В других вариантах осуществления, пациента лечат, начиная на или после 4, 5, 6, 7, 8 недель или 3, 4, 5, 6, 7 или 8 месяцев после инсульта с использованием 8, 10, 12, 12,5, 15, 20 или 25 мг 4-аминопиридина один раз в сутки.

5.4. Комбинированное лечение.

Композиции и способы по настоящему изобретению можно использовать в контексте множества терапевтических или профилактических применений. Для того чтобы увеличивать эффективность лечения с использованием аминопиридинов или чтобы увеличивать защитное действие другой терапии (второй терапии), может быть желательно комбинировать эти композиции и способы с другими средствами и способами, эффективными при лечении заболеваний и патологических состояний, например сенсорнодвигательной недостаточности и т.д., связанных с инсультом.

Таким образом, в частном варианте осуществления можно комбинировать аминопиридин или его

- 23 029558

фармацевтически приемлемую соль с одним или несколькими другими средствами и/или физиотерапией или трудовой терапией для лечения связанной с инсультом недостаточности, например сенсорнодвигательной недостаточности. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту параллельно или последовательно с одним или несколькими дополнительными лекарственными средствами или видами терапии. Например, аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить пациенту одновременно, до или после введения другого лекарственного средства, эффективного для связанной с инсультом недостаточности. Такое другое лекарственное средство может представлять собой, например, ингибитор холинэстеразы, такой как донепезил, ривастигмин или галантамин, или иммуномодулятор, такой как интерферон. В частных вариантах осуществления комбинация аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли и одного, двух или больше дополнительных лекарственных средств представляет собой комбинацию с фиксированной дозой. Например, аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль и одно или несколько дополнительных лекарственных средств (таких как какие-либо из тех других лекарственных средств, описанных выше) можно формулировать в одной композиции, такой как драже, таблетка или капсула. В других вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту, который страдал инсультом, параллельно (например, одновременно, до или после) с физиотерапией, трудовой терапией или речевой терапией и т.д. В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту, который использует корсет, вертикализатор или другое ортопедическое устройство, такое как катящиеся ходунки, или коммуникационный помощник, такой как компьютер с присоединенным синтезатором голоса. В частном варианте осуществления аминопиридин (или его соль) и другое лекарственное средство или терапию вводят в одно и то же посещение врача, или в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 12 ч или в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 суток друг от друга.

Можно использовать различные комбинации; например, аминопиридин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой "А", а вторичная терапия (например, ингибиторы холинэстеразы, такие как донепезил, ривастигмин и галантамин, и иммуномодуляторы, такие как интерферон, и т.д.) представляет собой "В", неограничивающие комбинированные циклы включают

А/В/А В/А/В В/В/А А/А/В А/В/В В/А/А А/В/В/В В/А/В/В

В/В/В/А В/В/А/В А/А/В/В А/В/А/В А/В/В/А В/В/А/А

В/А/В/А В/А/А/В А/А/А/В В/А/А/А А/В/А/А А/А/В/А

При введении композиции по настоящему изобретению субъекту будут следовать общим протоколам для введения, описанным в настоящем документе, и общих протоколов для введения конкретной вторичной терапии также будут придерживаться, учитывая токсичность лечения, если она имеет место. Ожидают, что циклы лечения будут повторять по мере необходимости. Также предусмотрено, что различные виды стандартной терапии можно применять в комбинации с описанными видами терапии.

В некоторых вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту параллельно с трудовой терапией или физиотерапией. В других вариантах осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту после того, как пациента подвергали трудовой терапии или физиотерапии после инсульта. В другом варианте осуществления аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту без трудовой терапии или физиотерапии. В одном из вариантов осуществления пациент, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, параллельно не получает трудовую терапию или физиотерапию. В еще одном другом варианте осуществления, пациента, которого лечат в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, не подвергали трудовой терапии или физиотерапии после инсульта. В некоторых вариантах осуществления лечение в соответствии с изобретением (или с использованием или без использования трудовой терапии или физиотерапии) является более эффективным, чем только трудовая терапия или физиотерапия.

5.5. Наборы.

Наборы содержат образцовый вариант осуществления изобретения. Набор может содержать внешнее вместилище или контейнер, выполненный с возможностью принимать один или несколько внутренних вместилищ/контейнеров, принадлежности и/или инструкции. Принадлежности в соответствии с изобретением могут включать предмет(ы) для того, чтобы вводить лекарственное средство, такие как пластырь, ингаляционный аппарат, крышку контейнера с текучим веществом, шприц или иглу. Композиция, содержащая аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, может содержаться внутри вместилища по изобретению. Вместилище по изобретению может содержать достаточное количество аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, чтобы его можно было использовать для множества доз, или может иметь форму единичной или однократной дозы. В некоторых вариантах осуществления набор содержит композицию, содержащую аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль в форме таблетки, драже, блистерной упаковки или капсулы.

Наборы по изобретению обычно содержат инструкции для введения в соответствии с настоящим

- 24 029558

изобретением. Инструкции могут содержать лечение одного или нескольких из: атаксии, общей недостаточности владения телом, недостаточности координации или равновесия, недостаточности чувства тела, недостаточности выносливости, недостаточности функции руки, утраты или недостаточности тонкой координации руки, гиперрефлексии, недостаточности силы хватания, мышечной слабости, недостаточности мышечного тонуса, ряда видов двигательной недостаточности, спастичности, недостаточности силы/слабости, тремора, недостаточности функции конечности, недостаточности функции верхней конечности, недостаточности функции нижней конечности, недостаточности мышечной силы нижней конечности, недостаточности ходьбы (например, сниженной скорости ходьбы), дизартрии, недостаточности функции челюсти, недостаточности жевания или недостаточности артикуляции челюсти. Какой-либо способ введения, изложенный или предложенный в настоящем документе, может составлять некоторую часть инструкций.

В одном из вариантов осуществления инструкции указывают, что аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль следует принимать два раза в сутки. В одном из вариантов осуществления инструкции указывают, что аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль следует принимать один раз в сутки. В одном из вариантов осуществления инструкции указывают, что композицию, содержащую аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль следует принимать один или больше чем один раз во время острой фазы после инсульта. В одном из вариантов осуществления инструкции указывают, что композицию следует принимать один или больше чем один раз во время ранней хронической фазы и/или во время стабильной хронической фазы после инсульта.

Инструкции можно прикреплять к какому-либо контейнеру/вместилищу по изобретению. В одном из вариантов осуществления инструкции указывают, что аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль следует принимать с тем, чтобы или для того, чтобы достигать терапевтического диапазона в соответствии с настоящим изобретением. Инструкции можно прикреплять к какому-либо контейнеру/вместилищу по изобретению или они могут представлять собой отдельный лист внутри контейнера или вместилища по изобретению. Альтернативно, инструкции можно печатать, выбивать или формировать в качестве компонента вместилища по изобретению. Альтернативно, инструкции можно печатать на материале, который заключен во вместилище или контейнере набора по изобретению. В одном из вариантов осуществления набор имеет внешнее вместилище, такое как коробка, в котором расположен контейнер, такой как бутылка; и инструкции предоставляют на и/или внутри внешнего вместилища и/или бутылки. Набор также может содержать инструкции по использованию компонентов набора, а также использованию любых других реактивов, не включенных в набор; предусмотрено, что такие реактивы представляют собой варианты осуществления наборов по изобретению. В соответствии с изобретением, наборы не ограничены конкретными предметами, идентифицированными выше, и могут включать какой-либо реактив, используемый непосредственно или опосредованно в целях лечения.

5.6. Дополнительные варианты осуществления.

Варианты осуществления настоящего изобретения включают способы эффективного лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности, у пациента в течение хронического или расширенного или пролонгированного или продленного или длительного периода времени; это также обозначают как "долговременное" лечение или "долговременный" способ лечения; это также обозначают как "длительное" лечение или "длительный" способ лечения. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способам поддержания положительной динамики связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, которые включают введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4-аминопиридина) указанному пациенту после предварительного достижения положительной динамики связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у указанного пациента во время смежного или продолжающегося или предшествующего введения аминопиридина. Какие-либо из таких способов включают введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4-аминопиридина) указанному пациенту в течение расширенного, пролонгированного, продленного длительного или хронического периода времени (как используют в настоящем документе, расширенный, пролонгированный, продленный, длительный и хронический являются синонимами до тех пор, пока контекст ясно не указывает на иное). В некоторых вариантах осуществления расширенный, пролонгированный, продленный или хронический или длительный период составляет по меньшей мере или больше чем 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недели; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или больше чем 5 лет. В некоторых вариантах осуществления расширенный, пролонгированный, продленный, хронический или длительный период длится в течение жизни пациента. Эти способы также могут включать введение аминопиридина на или до терапевтического уровня (такого как С_тш88 или средняя С^Д или диапазона (такого как диапазон С_тш88 или эталонный диапазон средних значений С_тшД в соответствии с настоящим изобретением.

В одном из вариантов осуществления определенное количество лекарственного средства дают отдельному пациенту (например, количество дозы), где это количество дозы соответствует дозе, которая при введении нормативной или эталонной популяции достигает средней С_т||К:, по меньшей мере или больше чем 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл.

- 25 029558

В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество 4-аминопиридина составляет 10 мг в композиции с замедленным высвобождением, которую вводя два раза в сутки. Способы введения также могут включать введение 4-аминопиридина на или до терапевтического уровня (такого как С_тш88) или диапазона (такого как диапазон С_т||К:,) в соответствии с настоящим изобретением.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способам поддержания улучшенной сенсорно-двигательной функции, например общего владения телом, координации, равновесия, чувства тела, выносливости, функции руки, тонкой координации руки, силы хватания, мышечного тонуса, ряда движений, силы, функции конечности, функции верхней конечности, функции нижней конечности, мышечной силы нижней конечности, ходьбы (например, скорости ходьбы), дизартрии, функции челюсти, жевания или артикуляции челюсти у пациента со связанной с инсультом недостаточностью одной из этих сенсорно-двигательных функций, содержащих введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4-аминопиридина) указанному пациенту в течение продолжительного периода времени. В некоторых вариантах осуществления расширенный, пролонгированный, продленный, длительный или хронический период составляет по меньшей мере или больше чем 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недели; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или больше чем 5 лет. В некоторых вариантах осуществления расширенный, пролонгированный, продленный, хронический или длительный период длится в течение жизни пациента. Это поддержание может быть относительно согласованным в том отношении, что имеет место, по существу, одинаковая процентная положительная динамика по отношению к эталонной или нормативной популяции, или это поддержание можно относительно варьировать в том отношении, что имеют место колебания процентной положительной динамики по отношению к эталонной или нормативной популяции; когда поддержание относительно варьирует, это может включать периоды, когда рассматриваемому пациенту может становиться хуже по отношению к эталонной или нормативной популяции.

Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения направлены на способы достижения длительной или относительно длительной положительной динамики какого-либо одного или нескольких признаков или симптомов инсульта, таких как любой один или несколько видов сенсорнодвигательной недостаточности, вызываемых инсультом или связанных с ним, которые включают продолжение введения терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4аминопиридина) указанному пациенту в течение продолжительного периода времени. В отношении контрольного или стандартного количества или значения понятно, что иногда имеет место прогрессирующее ухудшение сенсорно-двигательной функции у пациента после инсульта и что увеличение или относительное увеличение можно должным образом рассматривать по отношению к ухудшению функции, сопровождающему присущий прогресс связанной с инсультом сенсорно-двигательной патологии. В некоторых вариантах осуществления длительная положительная динамика присутствует в течение расширенного периода, например в течение по меньшей мере или больше чем 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недель; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или больше чем 5 лет. В некоторых вариантах осуществления расширенный период длится в течение жизни пациента. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество 4аминопиридина составляет 10 мг в композиции с замедленным высвобождением. В некоторых вариантах осуществления композицию с замедленным высвобождением можно вводить два раза в сутки. В некоторых вариантах осуществления композицию с замедленным высвобождением можно вводить один раз в сутки. Эти способы также могут включать введение аминопиридина на или до терапевтического уровня (такого как С_т|пх,) или диапазона (такого как диапазон С_т|пх,) в соответствии с настоящим изобретением. Эта длительная положительная динамика может иметь относительный рост в том отношении, что имеет место продолжающийся рост процентной доли положительной динамики относительно эталонной или нормативной популяции, или эта положительная динамика может относительно варьировать в том отношении, что имеет место такая колеблющаяся процентная положительная динамика по отношению к эталонной или нормативной популяции, что имеет место тенденция к улучшению по сравнению с эталонной группой; когда положительная динамика относительно варьирует, это может включать периоды, когда рассматриваемому пациенту может становиться хуже по отношению к эталонной или нормативной популяции.

В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-аминопиридина) представляет собой стабильную или постоянную или согласованную или неизменную или неколеблющуюся или неизменную схему дозирования, которая содержит терапевтически эффективное количество аминопиридина, которое вводят по равномерному паттерну (например, миллиграммовое количество или конкретное миллиграммовое количество в конкретные момент времени в сутках, например, может иметь место более высокая доза утром и более низкая доза вечером или наоборот) и в равномерном режиме (например, два раза в сутки), где изменения количества дозы или режима не происходят во время стабильной или постоянной или согласованной или неизменной или неколеблющейся схемы дозирования. Как используют в настоящем документе, термины "стабильный" или "постоянный" или "согласованный" или "неизменный" или "неколеблющийся" или "неизмененный" являются синонимами до тех пор, пока контекст явно не указывает на иное. Следует понимать, что, напри- 26 029558

мер, случайное несоблюдение или отклонение пациентом от в других отношениях стабильного, постоянного, согласованного, неизменного, неколеблющегося или неизмененного хода лечения входит в определение такого лечения. В некоторых вариантах осуществления титрование (или увеличение или уменьшение) дозы (например, миллиграммового количества) аминопиридина не происходит во время всей стабильной схемы дозирования.

Варианты осуществления настоящего изобретения также направлены на способы лечения или улучшения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, которые включают введение количества или диапазона 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают минимальную концентрацию в стационарном состоянии (С_тш88) в диапазоне по меньшей мере от 5 до 20 нг/мл, от 10 до 20 или от 12 до 20 нг/мл или С_т|||88 в диапазоне 20 нг/мл. Варианты осуществления настоящего изобретения также направлены на способы лечения или улучшения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, которые включают введение количества или диапазона 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают среднюю минимальную концентрацию в стационарном состоянии (среднюю С_т|||88) в диапазоне по меньшей мере от 7 до 20 нг/мл или от 12 до 20 нг/мл или получают среднюю С_т1|88 в диапазоне 20 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления С_т1|88 в диапазоне 20 нг/мл достигаете С_т1|88 приблизительно 20 нг/мл. В других вариантах осуществления получают С_т|||88 приблизительно 20 нг/мл; в некоторых вариантах осуществления С_т1|88 в диапазоне 20 нг/мл включает значение нижнего предела от 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл, и значение верхнего предела 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают С_т1|88 в диапазоне по меньшей мере от 12 до 15 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают С_т1|88 в диапазоне по меньшей мере от 13 до 15 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают С_т|||88 в диапазоне по меньшей мере от 15 до 25 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают С_т1|88 по меньшей мере или больше чем 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нг/мл. В других вариантах осуществления получают среднюю С_т1|88 приблизительно 20 нг/мл; в некоторых вариантах осуществления средняя С_т|||88 в диапазоне 20 нг/мл содержит среднее значение нижнего предела от 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нг/мл, и среднее значение верхнего предела 20, 21, 22, 23, 24, 25, 2 6 или 27 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают среднюю С_т1|88 в диапазоне по меньшей мере от 12 до 15 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают среднюю С_т1|88 в диапазоне по меньшей мере от 13 до 15 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают среднюю С_т1|88 в диапазоне по меньшей мере от 15 до 25 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления получают среднюю С_т|||88 по меньшей мере или больше чем 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нг/мл.

Альтернативно, способ в соответствии с изобретением (например, для лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности или способ улучшения симптома связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента или способ получения терапевтически эффективного уровня аминопиридина у пациента со связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточностью) включает введение аминопиридина (например, 4-аминопиридина) указанному пациенту так, что получают С_т|||88 в диапазоне 5-12 нг/мл; получают С_т|||88 в диапазоне 10-20 нг/мл; получают С_т|||88 в диапазоне 1525 нг/мл; получают С_т|||88 в диапазоне 15-30 нг/мл; получают С_т1|88 в диапазоне 17-23 нг/мл; получают С_т|||88 в диапазоне 18-22 нг/мл или получают которая находится в диапазоне 19-21 нг/мл. В частных

вариантах осуществления С_т|||88 находится в диапазоне, где нижнее значение выбирают из группы из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 нг/мл и верхнее значение выбирают из группы из 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нг/мл, и понятно, что это указывает на то, что предусмотрена какая-либо конкретная комбинация, например, без ограничения, диапазон: 16-23, 12-24, 13-27 нг/мл и т.д.

В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество аминопиридина (например, 4-АР) вводят для того, чтобы достигать Ст^ или среднюю Ст^ (или ее соответствующий диапазон) для расширенного периода, который составляет по меньшей мере или больше чем 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недели; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или больше чем 5 лет. В некоторых вариантах осуществления расширенный период длится в течение жизни пациента.

Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности или ее симптомов, который включает введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают среднюю концентрацию в плазме приблизительно от 13 приблизительно до 15 нг/мл, и средняя максимальная концентрация в плазме составляет не больше чем приблизительно 15 нг/мл.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе описан способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности или ее симптомов, который включает введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают среднюю концентрацию в плазме в стационарном состоянии (С_ау88) приблизительно от 15 приблизительно до 27 нг/мл. В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе описан способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности или ее симптомов, который включает введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают среднюю концентрацию в плазме в стационарном состоянии (С_ау88) приблизительно от 20 приблизитель- 27 029558

но до 40 нг/мл. В одном из вариантов осуществления в настоящем документе описан способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности или ее симптомов, который содержит введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают среднюю концентрацию в плазме в стационарном состоянии (С_ау88) приблизительно от 10 приблизительно до 20 нг/мл. В другом варианте осуществления в настоящем документе описан способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности или ее симптомов, который включает введение терапевтически эффективного количества 4-аминопиридина указанному пациенту так, что получают среднюю концентрацию в плазме в стационарном состоянии (С_ау88) приблизительно от 5 приблизительно до 15 нг/мл.

В некоторых вариантах осуществления способов по изобретению в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, идентифицируют и лечат пациентов, которые имеют или предполагают наличие связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности и которые не имеют или не предполагают наличия рассеянного склероза.

В некоторых вариантах осуществления положительная динамика связанной с инсультом сенсорнодвигательной недостаточности может составлять приблизительно по меньшей мере (или больше чем) 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере (или больше чем) 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 20%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 25%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере (или больше чем) 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 40%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 45%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере (или больше чем) 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 50%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 55%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 60%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 65%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 70%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 75%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 80%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 85%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 90%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере или больше чем 95%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять приблизительно по меньшей мере 100%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять больше чем приблизительно 100%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять больше чем приблизительно 150%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять больше чем приблизительно 200%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять больше чем приблизительно 250%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять больше чем приблизительно 300%. В некоторых вариантах осуществления положительная динамика может составлять 4-100%, 4-20%, 5-20%, 6-20%, 720%, 8-20%, 9-20%, 10-20%, 10-30%, 10-60%, 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-100%, 30-100%, 50100%, 30-150%, 50-150%, 100-150%, 100-200%, 50-250%, 100-250% или 100-300%. Такое процентное изменение количественного определения предпочтительно применяют к тестам сенсорно-двигательной функции, которые обеспечивают измерения результатов на непрерывных линейных шкалах, таких как Т25Р№, и т.д.

Варианты осуществления настоящего изобретения также направлены на способы монотонного улучшения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, которые включают введение терапевтически эффективного количества аминопиридина (например, 4-АР) указанному пациенту в течение продолжительного периода времени. В некоторых вариантах осуществления расширенный период составляет по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 недели; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 месяцев или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или больше чем 5 лет. В некоторых вариантах осуществления расширенный период длится в течение жизни пациента. Как используют в настоящем документе, монотонное увеличение параметров представляет собой согласованное увеличение без какого-либо снижения относительно базового уровня (т.е. до лечения аминопиридином).

- 28 029558

Различные параметры, известные как качество жизни или активность повседневной жизни, известны в данной области. Эти параметры можно измерять для того, чтобы оценивать положительную динамику состояния (например, сенсорно-двигательной функции) у пациента, который страдал инсультом после периода лечения в соответствии с изобретением. Это включает, например, влияние недостаточности на повседневную жизнь:

перемещение между комнатами в своем доме,

посещение ванной,

душ,

уход за детьми,

безопасное пересечение улицы, сохранение трудовой занятости, покупка продуктов питания, приготовление пищи, подъем по лестнице, упражнения,

участие в общественной жизни.

В некоторых вариантах осуществления способы в соответствии с изобретением позволяют субъекту достичь любого из перечисленного выше, где ранее он не мог достичь такое активности. В частных вариантах осуществления, способы в соответствии с изобретением позволяют субъекту достичь любого из перечисленного выше на более высоком уровне, где ранее он был ограничен своей способностью достигать такой активности.

В некоторых вариантах осуществления способы в соответствии с изобретением делают возможным поддержание положительной динамики симптома, параметра, характеристики, значения, показателя или манифестации связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности, где такой на симптом, параметр, характеристику, значение, параметр или манифестацию предварительно эффективно воздействовали аминопиридином посредством введения терапевтически эффективного количества аминопиридина указанному пациенту (после предварительного достижения положительной динамики такого симптома, параметра, характеристики, значения, показателя или манифестации). Предыдущий период эффективности может составлять 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 недель; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 месяцев; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше чем 10 лет.

6. Примеры

6.1. Пример 1. Модель инсульта на грызунах.

Самцов крыс (приблизительно 300-400 г, Зргадие-ЭаМеу) подвергали хирургическому вмешательству, чтобы вызвать ишемическое повреждение головного мозга. Животным дозировали перорально 4АР (0,1, 0,3 и 1 мг/кг) в виде одной дозы или в виде ежедневной дозы в течение 2 недель, начиная на 1 сутки, 10 сутки и 4 неделю после ишемического инсульта. Неврологическое поведение оценивают посредством осуществления тестов на размещение передней конечности, размещение задней конечности, качание туловища, теста в цилиндре и коробки активности на 4 ч [равно 1 ч после С_тах (~3 ч)] после дозирования (для однократного лечения) или последнего дозирования (для многократного лечения). Неврологические функции также оценивают после периода отмены лекарственного средства. Кроме того, небольшие образцы крови (100 мкл) брали из латеральной хвостовой вены в несколько моментов времени после дозы наполнителя или 4-АР, чтобы устанавливать концентрации 4-АР в плазме с использованием способа ВЭЖХ М8/М8. Это взятие образцов крови делает возможным определение воздействия в плазме около момента времени, когда у животных оценивают положительную неврологическую динамику.

В конце эксперимента животным делают глубокую анестезию пентобарбиталом и осуществляют транскардиальную перфузию с использованием ΡΒ8 и параформальдегида для измерения объема инфаркта головного мозга, а степень повреждения нейронов оценивают с помощью окрашивания гематоксилином и эозином и окрашивания быстрым голубым Ьихо1 соответственно.

В табл. 1 представлена сводка по группам лечения и конечным точкам.

- 29 029558

Таблица 1

Сводка по группам лечения и конечным точкам

Частота дозирования	Начало дозирования	Уровень дозы (мкг/кг)	Неврологическая оценка	Измерение инфаркта	Гистологическая оценка
Однократно	1 сутки, 10	0, 0,1,	Тесты на размещение	Окрашивание	Миелинизация
	суток, 4 недели	0,3 и 1,0	передней конечности, размещение задней конечности, качание туловища, цилиндр, коробка активности	гематоксилином и эозином	посредством окрашивания быстрым голубым Ьихо1, выживание аксонов
Многократно (14	1 сутки, 10	0, 0,1,	Тесты на размещение	Окрашивание	Миелинизация
последовательных суток)	сутки и 4 недели	0,3 и 1,0	передней конечности, размещение задней конечности, качание туловища, цилиндр, коробка активности	гематоксилином и эозином	посредством окрашивания быстрым голубым Ъихо1, выживание аксонов

После завершения исследования, неврологическую функцию после инфаркта головного мозга анализируют на предмет положительной динамики неврологической функции, относительного уменьшения инфаркта, относительной миелинизации и/или выживаемости аксонов (как описано в табл. 1).

6.2. Пример 2. Эффекты перорального введения 4-АР: восстановление функции после закупоривания СМА (ЗСМА) у крыс. Слепое двойное перекрестное исследование с наполнителем в качестве контроля.

4-АР оценивали по его способности способствовать положительной динамике сенсорнодвигательной функции после ишемического инсульта у крыс со стабильной двигательной недостаточностью в моменты времени, удаленные от их ишемических событий. Животная модель имитирует условия при ишемическом инсульте человека и ее получают посредством закупоривания срединной мозговой артерии (ЗСМА), результатом чего является обширный инфаркт в коре и полосатом теле головного мозга, включая кортикоспинальный тракт (белое вещество).

В частности, модель ЗСМА на крысах Бргадие Эа\1еу, которых использовали в экспериментах, представленных ниже, имитирует условия при ишемическом инсульте человека. В этой модели очаговые инфаркты головного мозга создавали посредством перманентного закупоривания проксимальных правых срединных мозговых артерий (СМА) с использованием модификации способа по Татига е! а1. (Νο То 8Ыпке1 1986; 38: 747-51). В кратком изложении, височную мышцу делили надвое и загибали через разрез, выполненный посреди между глазом и слуховым каналом. Проксимальную СМА обнажали посредством подвисочной краниэктомии без удаления скуловой дуги и без рассечения лицевого нерва. Затем артерию закупоривали посредством микробиоплярной коагуляции от немного проксимальнее относительно обонятельного тракта до внутренней мозговой вены и рассекали.

Модель ЗСМА, описанная в этом примере, ведет к паттерну восстановления, который во многом повторяет типичный паттерн неврологического восстановления человека после инсульта. После ЗСМА происходит немедленная и полсна утрата сенсорно-двигательной функции на сутки 1 после хирургического вмешательства, как измеряют с использованием специальных тактильных, проприоцептивных и сенсорных тестов (размещение передней конечности и задней конечности и симметрия качания туловища). За этим следует относительно быстрый период частичного восстановления в течение нескольких первых недель. В описанной модели ЗСМА восстановление начинает выходить на плато через 4 недели после ЗСМА, и в это время все еще имеет место измеримая недостаточность сенсорно-двигательной функции. Схожий, но более медленный паттерн восстановления возникает у человека в течение нескольких первых месяцев после инсульта (см. Сгатег, Апп №иго1 2008; 63: 272-87).

Схема эксперимента.

В этом эксперименте крыс Бргадие 1)а\\'1еу анестезировали, подвергали хирургическому вмешательству, которое вело к закупориванию срединной мозговой артерии (ЗСМА), лечили с использованием или без использования 4-аминопиридина и осуществляли поведенческую оценку, как описано ниже. Лечение инициировали на 4 неделе после инсульта.

Животные: использовали 45 самцов крыс Бргадие Эа\1еу, 300-400 г (получали из СНаг1е§ Клуег ЬаЪога1опе§, которые прибывали за 7-10 суток до хирургического вмешательства, 250-275 г). Животных случайным образом относили к группам лечения.

Номенклатура: номенклатура для суток исследования представляет собой следующее: сутки 0 представляют собой сутки ЗСМА, а последующие сутки нумеруют последовательно (сутки 1, 2, 3 и т.д.); сутки -1 представляют сутки перед ЗСМА.

Подробности о группировке: количество времени, необходимое для некоторых процедур в этом исследовании, вынудило разбить 3 группы лечения (как перечислено ниже), на 8 рабочих групп (как запи- 30 029558

сано в режиме, см. ниже). Шесть животных подвергали вызывающему инсульт хирургическому вмешательству в сутки. Если животное погибало во время 8-суточного хирургического периода исследования, его заменяли на запасное. Если нет, животное не заменяли. Большинство смертей животных (в общем <5%) наступало незамедлительно после вмешательства или в течение 7-суточного периода.

Анестезия: 1-3% изофлуран в Н₂О:О₂ (2:1). Анестезию вызывали в анестезионной камере с использованием 2-3% изофлурана в Н₂О:О₂ (2:1) и поддерживали с использованием 1-1,5% изофлурана через лицевую маску. Адекватную глубину анестезии оценивали по отсутствию отдергивания задней конечности при щипании и утрате мигательного рефлекса. После анестезии животные получали цефазолин натрия (40 мг/кг, интраперитонеально) и бупренорфин (0,1 мг/кг, подкожно). Цефазолин использовали в качестве профилактического антибиотика для этой процедуры (поскольку это гарантирует несущественный уровень инфекции). На глаза наносили ветеринарную офтальмологическую мазь ЕасгйиЬе.

Хирургическая процедура: небольшой очаговый инсульт (инфаркт) создавали на правой стороне поверхности головного мозга (коры головного мозга) посредством закупоривания срединной мозговой артерии (ЗСМА). Правую сторону головы брили электрической машинкой для стрижки (лоскут приблизительно 3x5 см между глазом и ухом). Область тщательно очищали септисолом. Используя асептический способ, разрез выполняли посредине между глазом и слуховым каналом. Височную мышцу выделяли, рассекали и отгибали. Из кости удаляли небольшое окошко с помощью дрели и кусачек (подвисочная краниэктомия) для того, чтобы обнажить срединные мозговые артерии (СМА). Заботились о том, чтобы не удалить скуловую дугу или не рассечь лицевой нерв, что ослабляло бы способность животного жевать после хирургического вмешательства. Используя препаровальный микроскоп, твердую мозговую оболочку рассекали и осуществляли электрокоагуляцию СМА от немного проксимальнее относительно обонятельного тракта до внутренней мозговой вены (уделяя внимание тому, чтобы не разрушить эту вену), используя микробиополярную электрокаустику. Затем СМА рассекали. Затем височную мышцу репозиционировали и разрез закрывали подкожно с использованием швов. Кожный разрез закрывали хирургическими скобами (требовалось 2-3). На всем протяжении процедуры температуру тела поддерживали равной 37,0±1°С, используя саморегулирующуюся нагревающуюся подушку, соединенную с ректальным термометром.

Послеоперационный мониторинг: после хирургического вмешательства животные оставались на нагревающейся подушке до тех пор, пока они не приходили в себя после анестезии. Затем их возвращали в чистые домашние клетки. Их наблюдали часто в сутки вызывающего ЗСМА хирургического вмешательства (сутки 0) и по меньшей мере один раз в сутки после этого.

Временная диаграмма содержания, хирургического вмешательства и инъекций: животных содержали по 2-3 в каждой клетке до и после хирургического вмешательства, если не было проявлений сильной агрессии или гибели обитателя(ей) клетки. За животными ухаживали в течение 7 суток до хирургического вмешательства. Цефазолин натрия интраперитонеально (40 мг/кг) вводили прямо перед хирургическим вмешательством. Бупренорфин подкожно (0,1 мг/кг) вводили прямо перед хирургическим вмешательством.

Дозирование и лечение: крыс лечили в соответствии с режимом дозирования, представленным в табл. 2А, 2В, 3 и на фиг. 2, причем каждая фаза представляла собой двухнедельный период времени. Раствор 4-АР использовали в этом эксперименте. Дозирование начинали на 4 неделе после ишемического события. 4-Аминопиридин растворяли в воде для инъекций (^ΡΙ, Се11дго) и осуществляли стерильное фильтрование. Конечные концентрации 0,315 или 1,0 мг/мл 4-аминопиридина доставляли по 2 мл/кг посредством желудочного зондового кормления, что вело к конечным дозам 0,63 и 2 мг/кг соответственно. Лечение наполнителем в качестве контроля доставляли в ΑΡΙ по 2 мл/кг посредством желудочного зондового кормления. Это исследование делили на три фазы лечения (1-3), причем каждая рандомизированная когорта животных получала отличающийся уровень дозы во время каждой из фаз лечения. Начиная с суток 30 после ЗСМА (сутки 30, начало фазы 1), животные получали дозирование зондовым кормлением растворами (2 мл/кг) приблизительно через 12 ч, всего пять доз. Тот же режим повторяли с использованием другого лечения на сутки 44 и сутки 58 для фазы 2 и 3 исследования соответственно. Животных не лечили во время 10 суток между фазами (период выведения).

Таблица 2А

Идентификатор лечения	Лечение (дозы ΤΒϋ)
V	Носитель (вода)
Ъ	Низкий 4-АР (0,63 мг/кг, два раза в сутки, перорально)
Н	Высокий 4-АР (2,0 мг/кг, два раза в сутки, перорально)

- 31 029558

Таблица 2В

Группа (п=15)	Фаза 1 лечения	Фаза 2 лечения	Фаза 3 лечения
1	Н	Ь	V
2	Ь	V	Н
3	V	Н	Ь

Группы лечения: дозирование начинали через 4 недели после вызывающего ЗСМА хирургического вмешательства. Во время этих 4 недель осуществляли еженедельную поведенческую оценку, как определено ниже. Оценивали два уровня дозы 4-АР плюс наполнитель в качестве контроля, причем лечение начинали на 4 неделе после ишемического события. Все дозирование осуществляли через желудочное зондовое кормление, объем не превышал 2 мл/кг. Животным давали первую дозу и осуществляли поведенческую оценку, начиная с 60 мин после дозирования. Затем животные получали вторую дозу в эти сутки в подходящий момент времени и два раза в сутки (предпочтительно каждые 12 ч) после этого в течение еще 2 суток (всего 3 суток дозирования, 5 суммарных доз). Через один час после 5 дозы животных подвергали поведенческой оценке, как определено ниже. После конечной поведенческой оценки лекарственное средство отменяли на 10 или 11 суток, повторно оценивали поведение и затем животных подвергали перекрестному лечению (фаза 2 в табл. 2В), как описано в табл. 2А, 2В и 3, за чем следовали такие же поведенческое тестирование и схема дозирования. Этот перекрест также повторяли еще один раз (фаза 3 табл. 2В) (см. фиг. 2).

Подробности о поведенческих тестах: поведенческую оценку выполняли с помощью оценщиков, не осведомленных о назначенном лечении. Слепую оценку сенсорно-двигательной функции осуществляли прямо перед вызывающим ЗСМА хирургическим вмешательством, через 24 ч после вызывающего ЗСМА хирургического вмешательства и еженедельно после этого до первой фазы дозирования с использованием поведенческих тестов на размещение конечности и качание туловища. Как описано выше, поведенческую оценку точно синхронизировали с временем дозирования. Животных тестировали через один час после первой и пятой доз в каждой фазе (т.е. сутки 30 и 32 первой фазы, сутки 44 и 46 второй фазы; и сутки 58 и 60 третьей фазы); животных также тестировали во время периода выведения на сутки 42 и 56. Животным давали первую дозу, осуществляли поведенческую оценку, начиная ее 60 минами позже, и брали кровь через 90 мин после дозирования. Затем животные получали вторую дозу в эти сутки в подходящее время и два раза в сутки (предпочтительно каждые 12 ч) после этого в течение еще 2 суток (всего 3 суток дозирования, 5 суммарных доз). Через один час после пятой дозы животных подвергали поведенческому тестированию. После конечной поведенческой оценки лекарственное средство отменяли на 10 или 11 суток, поведение повторно оценивали и затем животных повторно подвергали перекрестному лечению, как описано в табл. 2А, 2В, 3 и на фиг. 2, за чем следовали такие же поведенческое тестирование и схема дозирования.

Размещение конечности: оценивали в сутки -1 (до операции), 1, 7, 14, 21, 28, 30, 32, 42, 44, 46, 56, 58, 60. Тесты на размещение конечности делили на тесты передней конечности и задней конечности. Для теста на размещение передней конечности, исследователь держал крысу близко к крышке стола и оценивал способность крысы помещать переднюю конечность на крышку стола в ответ на стимуляцию волоском, визуальную, тактильную или проприоцептивную стимуляцию. Аналогичным образом, для теста на размещение задней конечности исследователь оценивал способность крысы помещать заднюю конечность на крышку стола в ответ на тактильную и проприоцептивную стимуляцию. Вместе эти тесты отражают функцию и восстановление сенсорно-двигательной системы (Эе Куск е! а1., Бгат Кез 1992; 573: 4460). Отдельные элементарные оценки получали для каждого режима сенсорной стимуляции и подсчитывали для того, чтобы получить общую оценку (для теста на размещение передней конечности: 0 = нормальное, 12 = максимально ослабленное; для теста на размещение задней конечности: 0 = нормальное; 6 = максимально ослабленное). Оценки давали с приращением в полпункта (см. ниже). Типично, имеет место медленное и устойчивое восстановление поведения размещения конечности во время первого месяца после инсульта.

Тест на размещение передней конечности (0-12): волосковое размещение (0-2); визуальное размещение (впереди (0-2), сбоку (0-2)); тактильное размещение (дорсально (0-2), латерально (0-2)); проприоцептивное размещение (0-2).

Тест на размещение задней конечности (0-6): тактильное размещение (дорсально (0-2), латерально (0-2)); проприоцептивное размещение (0-2).

Для каждого подтеста животных оценивали следующим образом:

0,0 = немедленная реакция,

0,5 = реакция в пределах 2 с,

1,0 = реакция 2-3 с,

1,5 = реакция >3 с,

- 32 029558

2,0 = нет реакции.

Качание туловища: оценивали в сутки -1 (до операции), 1, 7, 14, 21, 28, 30, 32, 42, 44, 46, 56, 58, 60. Качание туловища оценивали посредством подсчета движений головой в одну или другую сторону при подвешивании за хвост. Для этого теста крысу держали за хвост приблизительно на один (1) дюйм от основания. Затем ее поднимали на дюйм над поверхностью стола. Крысу держали по вертикальной оси, которая определена как не больше чем 10° в левую или в правую сторону. Качание регистрировали каждый раз, когда крыса двигала своей головой за пределы вертикальной оси в любую сторону. Перед попыткой другого качания, крыса должна была вернуться в вертикальное положение для следующего качания, подлежащего подсчету. Подсчитывали всего тридцать (30) качаний. Тест отражает симметрию функции полосатого тела (Вог1оидаи с1 а1., 1. №иго8С1 1995; 15: 5372-8), и нормальная крыса типично имела равное число качаний в каждую сторону. После очаговой ишемии крыса стремится качаться в контралатеральную сторону (в этом случае, левую сторону). Оценки качания туловища выражали в виде процентной доли правосторонних относительно всех качаний. Имеет место самопроизвольное частичное восстановление оценок качания туловища (к 50%) во время первого месяца после инсульт. Тест на качание туловища осуществляли одновременно с тестом на размещение конечности.

Тест в цилиндре: оценку осуществляли в сутки -1 (до операции), 7, 21, 30, 32, 44, 46, 58, 60. В этом тесте оценивали асимметрию использования конечностей. Крыс помещали в прозрачный цилиндр (20 см в диаметре и 30 см в высоту) на 3-6 мин. Зеркало помещали перед цилиндром для того, чтобы определять движения передних конечностей, когда животное отворачивалось от камеры. Степень асимметрии использования передней конечности, которую проявляли животные, определяли посредством подсчета числа раз, когда левая или правая передние конечности контактируют со стенкой во время полного подъема на задние конечности. Одновременное использование левой и правой передних конечностей при контакте со стенкой во время полного подъема на задние конечности также оценивали. Во время испытания подсчет проводили для общего числа в 20 размещений передней конечности. Данные выражали в пересчете на процент использования неослабленной и или ослабленной передней конечности по отношению к общему числу наблюдений использования конечности для движений стенки.

Взятие образцов крови: после завершения оценки поведения на лекарственном средстве (сутки 30, 32, 44, 46, 58 и 60), образец крови приблизительно 300 мкл брали точно через 90 мин после дозирования для того, чтобы оценивать уровни 4-АР в плазме в этот момент времени. Брали кровь из подкожной вены каждого животного. Кровь брали в пробирки КЗ БИТА и центрифугировали на 10000 об./мин в течение 10 мин при 4°С. Плазму получали, замораживали и хранили приблизительно при -80°С. В образцах анализировали уровни 4-АР. Концентрацию 4-АР определяли с использованием валидированной жидкостной хроматографии и способа тандемного масс-спектрометрического обнаружения в режиме положительного электрораспыления.

Эвтаназия и обработка после смерти: анализ объема инфаркта. После последней поведенческой оценки крыс глубоко анестезировали кетамином/ксилазином (100 мг/кг кетамина, 10 мг/кг ксилазина, интраперитонеально) и перфузировали транскардиально нормальным физиологическим раствором (с гепарином 2 Ед/мл), за чем следовал 4% параформальдегид или формалин на сутки 63. Головной мозг извлекали и обрабатывали для гистологической оценки. Поднабор из 10 головных мозгов на группу обрабатывали для измерения объема инфаркта (окрашивание гематоксилином и эозином).

Измерение инфаркта: головной мозг заливали в парафин и делали фронтальные срезы 5 мкм толщиной с использованием микротома. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, используя стандартные способы. Семь фронтальных срезов (+4,7, +2,7, +0,7, -1,3, -3,3, -5,3 и -7,3 по сравнению с брегмой соответственно) из каждого головного мозга фотографировали на цифровую камеру, и область инфаркта на каждом срезе определяли посредством ΝΙΗ изображения (изображения 1) с использованием "непрямого способа" (площадь интактного контралатерального [левого] полушария - площадь интактных областей ипсиатерального [правого] полушария) для того, чтобы осуществлять коррекцию отека головного мозга. Затем области инфаркта суммировали по срезам и умножали на толщину среза (расстояние между срезами), чтобы получить полный объем инфаркта, который выражали в виде процентной доли интактного контралатерального полусферического объема.

Соответствие нормативным документам: это исследование проводили в среде, не отвечающей СЬР, в аккредитованном АААЬАС учреждении и в соответствии со стандартными надлежащими научными принципами и практикой.

Обеспечение качества (ЦА): в ходе прогресса исследования собранные данные верифицировал второй ученый в лаборатории, который не участвовал в сборе этого набора данных. Эту верификацию документировали в исходных данных и сохраняли с пакетом данных для этого исследования. По завершении исследования, весь пакет данных (все исходные данные, измерения, тетради и вычисления) верифицировали и проверяли на соответствие конечному отчету.

Статистические способы.

Статистические способы: изменение значений поведения относительно базового уровня вычисляли для каждой группы лечения в каждой фазе. Базовый уровень определяют как поведенческое значение, который измеряют, пока животные не получают лечение перед началом фаз* дозирования (сутки 28, 42 и

- 33 029558

56 для фазы 1, 2 и 3 соответственно). Данные средних поведенческих параметров для каждой целой фазы дозирования подвергали дисперсионному анализу (АЫОУА). Данные также подвергали анализу смешанной модели, исследующему дозу, последовательность, эффект переноса и фазу эксперимента согласно ковариациям с использованием попарного сравнения 8А8 между каждой парой лечений с использованием разности наименьших квадратов из способа средних. Значения с р<0,005 считали статистически значимыми.

В каждой фазе базовый уровень определяли как измерение в первые сутки этой фазы, которые соответствуют суткам 28, 42 и 56. Изменение относительно базового уровня брали в качестве разности с измерениями на другие сутки относительно базового уровня. Среднее изменение относительно базового уровня для каждого субъекта вычисляли посредством суммирования двух изменений относительно значений базового уровня в каждой фазе (например, сутки 30 и 32 в фазе 1) и деления на два.

Описательную статистику (среднее и стандартное отклонение) представляли в таблицах Ехсе1 для различных поведенческих конечных точек. Изменение относительно базового уровня вычисляли в различные фазы для каждой группы лечения (N=15), независимо от того, в какие сутки в фазе выполняли измерения. В пределах фазы однофакторный дисперсионный анализ с лечением в качестве единственной ковариаты использовали для того, чтобы сравнивать средние при различных лечениях. Нулевая гипотеза заключалась в том, что все средние были одинаковы при различных лечениях. При р-значении <0,01 (для качания туловища) и <0,0001 (для задней и передней конечность) убедительно демонстрировали статистическую значимость. Нулевые гипотезы отбрасывали при 99% уровне значимости и, таким образом, заключали, что три уровня доз показывают значительно различающиеся эффекты лечения, оказываемые на изучаемые мышечные функции.

Два набора смешанных моделей использовали для того, чтобы дополнительно исследовать другие эффекты, оказываемые на исход. В первом наборе смешанных моделей переменная исхода представляла собой среднее изменение относительно двух постбазовых измерений в пределах определенной фазы. Фиксированные эффекты включали ковариаты: "доза", "последовательность", "перенос" и "фаза", "доза" относилась к трем лечениям, "последовательность" относилась к последовательности лечения, присвоенной каждой группе (т.е. "высокий-низкий-наполнитель"), "перенос" представлял собой эффект переноса, который определяли как дозу из предыдущей фазы, в которой эффект переноса для фазы 1 задавали равным 0. Имел место только один случайный эффект, идентификатор, который представлял собой идентификатор субъекта, вставленный в последовательность. Во втором наборе смешанных моделей переменная исхода представляла собой непосредственное изменение (без получения среднего двух постбазовых измерений) относительно базового уровня в пределах определенной фазы. Сутки, когда зафиксированный эффект добавляли в модель с тем, чтобы фиксированные эффекты включали ковариаты: "доза", "последовательность", "перенос", "фаза" и "сутки", "сутки" представляли сутки, когда выполняли измерение, и они находились внутри фазы. Остальные фиксированные эффекты аналогичны тем, что в предыдущей смешанной модели. Имел место только один случайный эффект, идентификатор, который представлял собой идентификатор субъекта, включенного в последовательность. В обеих смешанных моделях, имеют место две части выходных данных из представленного 8А8. Первая часть представляет собой "Тесты фиксированных эффектов 3 типа". При статистически значимом р-значении (<=0,05), можно сделать заключение о том, что эффект в значительной мере предсказывает исход. Вторая часть представляла собой "Разности средних наименьших квадратов", где попарное сравнение проводили между каждой парой лечений, т.е. высокая против низкой, р-значение меньше чем или равное 0,05 говорит о статистической значимости различий в исходах при различных лечениях.

Для функции передней конечности первая модель демонстрировала, что фаза, доза и эффект переноса представляли собой значимые эффекты, но не последовательность. Высокая доза значительно улучшала функцию передней конечности по сравнению с низкой (р=0,0334) и наполнителем (р=0,001); тогда как низкая не показывала статистически значимой положительной динамики по сравнению с наполнителем на уровне 0,05. Во второй смешанной модели показано, что сутки представляют собой другой значимый эффект и все три лечения показывали значимые отличия друг от друга (т.е. высокая против низкой, высокая против наполнителя и низкая против наполнителя) с р<0,0001. В целом, для функции передней конечности обе модели показали, что фаза, доза и эффект переноса представляли собой значимые эффекты, но не последовательность. Обе модели демонстрировали, что высокая доза значительно улучшает функцию передней конечности по сравнению с более низкой дозой и наполнителем. Вторая смешанная модель оказалась более чувствительной для того, чтобы обнаруживать эффекты лечения на основе более низких р-значений.

Ту же процедуру анализа применяли для каждого измерения исхода, включая переднюю конечность, заднюю конечность и качание туловища.

Для функции задней конечности первая модель демонстрировала, что фаза и доза представляли собой значимые эффекты, но последовательность или эффекты переноса не имели значения. Высокая доза значительно улучшала функцию задней конечности по сравнению с наполнителем (р<0,0001), и низкая доза также значительно улучшала функцию задней конечности по сравнению с наполнителем (р=0,0027), хотя высокая доза не показывала статистическую значимость при уровне 0,05, по сравнению с низкой

- 34 029558

дозой. Во второй смешанной модели все эффекты, за исключением последовательности, показывали значимый эффект, и все три лечения показывали значительное отличие друг от друга (т.е. высокая против низкой, высокая против наполнителя, и низкая против наполнителя) с р<0,0001. В целом, для функции задней конечности, обе модели демонстрировали, что фаза и доза представляли собой значимые эффекты. Обе модели также демонстрировали, что высокая доза и низкая доза значительно улучшают функцию задней конечности по сравнению с наполнителем. Вторая смешанная модель оказалась более чувствительной для того, чтобы обнаруживать эффекты лечения на основе более низких р-значений.

Для функции качания туловища первая модель демонстрировала, что только доза представляла собой значимый эффект. Высокая доза значительно улучшала функцию качания туловища по сравнению с наполнителем (р=0,0131), и низкая доза также значительно улучшала функцию качания туловища по сравнению с наполнителем (р=0,033), хотя высокая доза не показывала статистическую значимость при уровне 0,05, по сравнению с низкой дозой. Во второй смешанной модели показано, что фаза представляет собой другой значимый эффект. Высокая доза значительно улучшала функцию качания туловища по сравнению с низкой (р=0,006) и наполнителем (р<0,0001); хотя низкая доза не показывала статистически значимую положительную динамику по сравнению с наполнителем на уровне 0,05. В целом, для функции качания туловища, обе модели показали, что доза представляла собой значимые эффекты.

Смешанная модель представляет собой изменение относительно базового уровня = доза последовательность перенос фаза сутки, причем идентификатор включен в последовательность в качестве случайного эффекта. Базовый уровень определяют в сутки 28, 46 и 56 для каждой фазы соответственно. Доза имеет три фиксированных уровня, высокий, низкий и наполнитель; последовательность (зец) имеет три фиксированных значения в виде трех различных последовательностей дозирования, а именно "Ъ1у", "ΙνΗ" и "νΗΙ"; эффект переноса (со) определяют как дозы из предыдущей фазы, в которой эффект переноса для фазы 1 устанавливали равным 0. Ιά представляет собой идентификатор крысы из данных. * обозначает статистическую значимость на основе двустороннего критерия при а=0,05.

Результаты.

В табл. 3 представлено распределение животных между группами лечения.

В табл. 4-6 представлена общая оценка теста на размещение передней конечности для каждой из групп 1-3. В табл. 7-9 представлена общая оценка теста на размещение задней конечности для каждой из групп 1-3. На табл. 10-12 представлена общая оценка теста на качание туловища для каждой из групп 13. В табл. 13-15 представлена масса животных в моменты тестирования в каждой из групп 1-3. В табл. 16-18 представлена общая оценка теста в цилиндре (% общей асимметрии) для каждой из групп 1-3. В табл. 19-21 представлена общая оценка теста в цилиндре движения для каждой из групп 1-3.

Таблица 3

Распределение животных по группам лечения

- 35 029558

Таблица 4

Общая оценка размещения передней конечности . для группы 1

Группа 1	0-1	01	07	Ш41	021	Э28	эзо	Э32	Э42	Э44	Э46	056	058	Э60
№2	0,00	12,00	9,00	8,50	7,00	6,50	4,50	4,00	6,00	4,00	3,00	3,50	4,50	6,00
№3	0,00	11,50	9,00	7,50	6,50	6,00	4,50	3,00	5,00	3,00	2,50	2,50	2,50	2,50
№7	0,00	11,00	7,00	6,00	6,00	6,00	3,50	3,50	4,50	0,00	0,00	2,00	3,00	3,00
№ 12	0,00	11,50	6,00	4,50	4,50	4,00	1,50	0,50	1,50	0,50	0,00	1,50	1,50	1,50
№ 18	0,00	12,00	7,00	6,50	5,50	4,50	3,00	2,00	4,00	1,00	1,00	2,50	2,00	2,00
№21	0,00	12,00	9,50	7,00	6,50	6,00	4,50	3,00	5,00	3,50	3,50	4,00	4,00	3,00
№23	0,00	11,50	6,00	5,00	5,00	5,00	3,50	2,00	2,50	1,50	1,50	1,50	1,50	1,50
№24	0,00	11,50	7,50	7,00	6,50	6,00	4,00	3,50	4,50	4,00	3,00	3,00	3,50	3,50
№25	0,00	11,50	7,00	6,00	6,00	6,00	5,50	2,00	6,00	4,00	1,50	5,50	5,50	5,50
№28	0,00	11,50	8,00	7,00	6,00	6,00	4,50	3,00	5,00	3,00	3,50	5,00	5,50	4,00
№30	0,00	12,00	7,50	6,50	6,00	6,00	3,00	3,00	5,50	4,00	4,00	4,50	4,00	4,00
№31	0,00	11,50	7,00	6,50	6,00	6,00	3,50	2,50	5,00	2,00	2,50	3,50	3,50	3,00
№37	0,00	12,00	6,50	6,00	6,00	6,00	3,50	3,50	6,00	3,50	3,00	5,00	5,50	5,50
№38	0,00	10,50	7,00	5,00	3,50	3,50	0,50	0,50	2,00	1,50	1,50	1,50	1,50	1,50
№42	0,00	12,00	7,00	6,50	4,00	3,50	1,00	0,50	2,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	0,00	11,60	7,40	6,37	5,67	5,40	3,37	2,43	4,30	2,37	2,03	3,03	3,20	3,10
Стандартная ошибка средней	0,00	0,11	0,27	0,26	0,26	0,26	0,36	0,30	0,40	0,39	0,35	0,41	0,44	0,44
Стандартное отклонение	0,00	0,43	1,06	1,03	0,99	1,02	1,41	1,16	1,56	1,52	1,36	1,59	1,69	1,70

Таблица 5

Общая оценка размещения передней конечности для группы 2

Группа 2	041	1ш1	07	014	021	Э28	030	032	042	Ό44 1	Э46	056	058	Э60
№5	0,00	11,50	9,50	6,50	6,00	5,50	4,00	3,00	3,50	3,50	3,00	2,50	0,50	0,50
№9	0,00	11,00	8,50	7,00	6,50	6,00	5,00	4,50	6,00	6,00	5,00	5,50	3,00	2,50
№ 11	0,00	12,00	7,00	6,00	5,50	5,50	3,00	3,00	4,50	4,00	3,50	3,50	1,00	0,00
№ 13	0,00	11,50	8,50	7,00	6,00	6,00	4,50	4,00	5,00	4,50	4,00	4,00	2,50	2,50
№ 14	0,00	12,00	9,00	6,50	7,00	6,00	6,00	5,50	6,00	6,00	6,00	5,50	3,50	3,00
№ 19	0,00	12,00	7,00	6,00	6,00	6,00	5,50	5,50	6,00	5,00	5,00	5,00	2,50	1,00
№20	0,00	12,00	9,00	6,00	4,00	4,00	4,00	2,00	2,00	1,50	1,00	0,50	0,00	0,00
№27	0,00	12,00	7,50	6,00	6,00	6,00	3,50	2,00	5,00	4,50	4,50	4,50	1,50	1,00
№32	0,00	12,00	8:00	6,50	6,50	6,50	5,50	4,00	5,00	4,50	3,50	5,00	2,50	1,50
№33	0,00	12,00	8,50	6,50	6,00	6,00	5,00	5,00	6,00	6,00	5,50	5,00	3,00	0,00
№35	0,00	12,00	7,50	6,50	6,00	6,00	4,00	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	1,50	1,00
№39	0,00	11,00	7,00	6,00	6,00	6,00	4,50	4,50	4,50	5,00	5,00	5,00	5,00	3,50
№41	0,00	11,00	6,00	4,50	4,50	4,00	1,50	1,00	2,50	3,00	3,00	2,50	0,00	0,00
№44	0,00	11,00	6,50	4,50	4,50	3,00	1,50	1,00	1,00	1,00	1,00	1,00	0,00	0,00
№45	0,00	11,00	6,00	6,00	6,00	6,00	5,50	3,00	6,00	6,00	6,00	6,00	2,00	1,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	0,00	11,60	7,70	6,10	5,77	5,50	4,20	3,43	4,40	4,23	3,93	3,90	1,90	1Д7
Стандартная ошибка средней	0,00	0,12	0,29	0,19	0,21	0,26	0,35	0,38	0,42	0,41	0,41	0,43	0,38	0,31
Стандартное отклонение	0,00	0,47	1Д1	0,74	0,82	1,00	1,37	1,47	1,64	1,59	1,58	1,68	1,45	1,19

Таблица 6

Общая оценка размещения передней конечности для группы 3

Группа 3	041	ш	Р7	014	1)21	Э28	юо	Ю2	042	Ό44	Э46	1 056	058	Э60
№1	0,00	12,00	9,00	7,00	6,50	6,00	6,00	6,00	6,00	5,00	1,00	4,50	3,00	3,00
№4	0,00	12,00	7,00	6,00	6,00	6,00	4,00	4,00	4,00	1,50	1,00	3,00	1,50	1,00
№6	0,00	11,50	8,00	5,00	5,00	5,00	5,00	5,00	4,50	3,00	1,50	3,50	3,00	3,00
№8	0,00	11,00	6,00	4,50	4,50	4,50	3,00	3,00	1,50	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
№ 10	0,00	11,50	8,00	6,00	6,00	6,00	6,00	6,00	5,50	4,50	2,50	4,50	3,00	2,50
№15	0,00	12,00	8,00	7,00	6,00	6,00	6,00	6,00	5,50	4,00	3,00	4,00	3,00	3,00
№16	0,00	12,00	7,00	6,00	5,50	5,00	3,50	3,00	2,00	1,00	0,00	0,50	0,50	1,00
№17	0,00	11,50	8,50	7,00	6,50	6,00	5,50	6,00	5,50	4,00	2,00	3,00	2,00	2,00
№22	0,00	12,00	9,00	7,00	6,50	6,50	6,50	6,50	6,00	4,00	3,00	6,00	3,50	3,50
№26	0,00	12,00	9,00	6,00	5,00	5,50	5,00	4,00	3,00	2,50	1,50	3,00	1,50	0,50
№29	0,00	12,00	8,50	7,00	6,50	6,50	6,00	6,00	6,00	3,00	0,00	6,00	2,50	2,00
№34	0,00	12,00	8,50	6,50	6,00	6,00	6,00	6,00	6,00	4,50	1,50	6,00	4,00	3,00
№36	0,00	12,00	7,50	6,50	5,00	5,50	4,50	4,50	6,00	3,00	3,00	4,00	2,50	2,50
№40	0,00	11,00	6,50	6,00	5,00	4,00	3,00	1,50	2,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
№43	0,00	11,50	6,00	5,00	4,00	3,00	1,50	1,50	1,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	0,00	11,73	7,77	6,17	5,60	5,43	4,77	4,60	4,30	2,67	1,33	3,20	2,00	1,80
Стандартная ошибка средней	0,00	0,10	0,27	0,21	0,21	0,25	0,38	0,44	0,49	0,45	0,30	0,56	0,35	0,33
Стандартное отклонение	0,00	0,37	1,05	0,82	0,81	0,98	1,47	1,70	1,89	1,76	1,18	2,18	1,35	1,26

36

029558

Таблица 7

Общая оценка размещения задней конечности для группы 1

Группа 1	о·1	О!	07	0141	1)21	ϋ28	юо	Ю2	042	Ό44 (	ϋ46	056	058	ύ60
№2	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	1,50	1,50	2,50	2,50	2,00	2,50	2,50	2,50
№3	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	2,50	1,50	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
№7	0,00	6,00	3,50	3,50	3,00	2,50	1,50	1,50	2,50	0,00	0,00	1,50	1,50	1,50
№12	0,00	5,00	3,00	3,00	2,50	2,00	0,50	0,00	1,50	0,50	0,50	0,50	1,00	1,00
№18	0,00	6,00	4,00	3,50	3,00	3,00	1,50	0,50	2,50	1,00	1,00	1,50	1,50	1,50
№21	0,00	6,00	4,50	3,00	3,00	3,00	1,50	1,00	2,50	2,00	2,00	2,00	2,00	2,00
№23	0,00	6,00	4,50	3,50	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	2,00	3,00	2,00
№24	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	1,50	1,50	3,00	2,00	1,50	1,50	2,00	2,00
№25	0,00	6,00	4,00	3,00	3,00	3,00	2,50	1,50	3,00	2,00	0,00	2,00	2,50	2,50
№28	0,00	6,00	4,00	3,50	3,00	3,00	3,00	1,50	2,50	1,50	1,50	2,50	3,00	2,50
№30	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	1,50	0,00	2,50	2,00	2,00	3,00	3,00	3,00
№31	0,00	6,00	4,00	3,00	3,00	3,00	2,50	0,50	3,00	1,50	1,50	1,50	1,50	1,50
№37	0,00	6,00	4,00	3,00	3,00	3,00	2,00	1,50	2,50	1,50	1,50	2,50	2,50	2,50
№38	0,00	5,50	3,50	3,00	3,00	3,00	1,00	0,50	1,50	0,50	0,50	0,50	0,50	0,50
№42	0,00	6,00	3,00	3,00	3,00	2,50	0,00	0,00	1,50	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	0,00	5,90	3,73	3,13	3,00	2,83	1,67	0,97	2,27	1,33	1,13	1,57	1,77	1,67
Стандартная ошибка средней	0,00	0,07	0,12	0,06	0,05	0,08	0,22	0,22	0,21	0,25	0,24	0,24	0,27	0,24
Стандартное отклонение	0,00	0,28	0,46	0,23	0,19	0,31	0,84	0,85	0,82	0,96	0,93	0,94	1,03	0,94

Таблица 8

Общая оценка размещения задней конечности для группы 2

Группа 2		1ш1	1)7	014	021	ϋ28	ϋ30	1932	1)42	Ό44 I	ϋ46	056	058	ύ60
№5	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	2,00	1,00	2,50	2,00	2,00	2,00	0,50	0,50
№9	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	1,50	1,50	2,50	3,00	3,00	3,00	1,50	0,00
№11	0,00	6,00	3,50	2,50	2,50	2,00	1,50	1,50	1,50	1,50	2,00	1,50	0,00	0,00
№13	0,00	6,00	4,00	3,00	3,00	3,00	2,00	2,00	2,50	2,50	2,50	2,50	2,00	0,50
№ 14	0,00	5,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	1,50	2,00	2,00	2,00	2,00	0,50	0,00
№19	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	2,50	2,00	3,00	2,50	2,50	2,50	2,00	0,50
№20	0,00	6,00	4,50	3,00	3,00	3,00	1,50	1,00	2,50	1,50	0,50	0,50	0,00	0,00
№27	0,00	6,00	3,00	3,00	2,50	2,50	2,00	1,50	2,00	2,00	2,00	2,00	1,00	1,00
№32	0,00	6,00	4,00	3,00	3,00	2,50	2,00	1,50	2,00	2,00	2,00	2,00	1,50	0,50
№33	0,00	6,00	4,50	3,50	3,00	3,00	2,00	1,50	3,00	3,00	3,00	3,00	1,50	0,00
№35	0,00	6,00	3,50	3,00	2,50	2,50	1,50	1,50	1,50	1,50	1,50	0,50	0,00	0,00
№39	0,00	5,50	3,00	3,00	3,00	3,00	1,50	1,00	1,50	2,00	1,50	1,50	1,50	0,50
№41	0,00	5,00	3,00	2,50	2,50	2,00	1,00	1,00	1,50	1,50	1,50	1,00	0,00	0,00
№44	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	1,50	0,50	0,50	1,00	1,00	1,00	1,00	0,00	0,00
№45	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	1,50	1,50	2,00	2,00	2,00	2,00	0,50	0,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	0,00	5,87	3,57	2,97	2,87	2,67	1,73	1,37	2,07	2,00	1,93	1,80	0,83	0,23
Стандартная ОПП-О-Д средней	0,00	0,08	0,13	0,06	0,06	0,13	0,15	0,10	0,15	0,15	0,18	0,21	0,20	0,08
Стандартное отклонение	0,00	0,30	0,50	0,23	0,23	0,49	0,59	0,40	0,59	0,57	0,68	0,80	0,77	0,32

Таблица 9

Общая оценка размещения задней конечности для группы 3

Группа 3	м!		07	014	021	028	030	032	042	044 1	Ό46	056	058	060
№ 1	0,00	6,00	4,00	4,00	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	1,50	3,00	1,50	1,50
№4	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	2,50	2,00	2,00	0,00	0,00	1,50	0,00	0,00
№6	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	2,50	0,50	0,00	0,50	0,50	0,50
№8	0,00	5,50	4,00	3,50	2,50	2,50	2,50	1,50	2,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
№ 10	0,00	5,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	2,50	1,50	0,50	2,00	1,00	1,00
№ 15	0,00	6,00	3,50	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	2,00	1,00	2,00	1,50	1,50
№ 16	0,00	6,00	3,00	3,00	3,00	3,00	2,50	2,00	1,50	0,00	0,00	1,00	0,50	1,00
№ 17	0,00	5,50	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	2,00	0,50	1,50	1,00	1,00
№22	0,00	6,00	4,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	1,50	0,50	1,50	0,50	0,50
№26	0,00	6,00	3,50	3,00	2,50	3,00	2,50	2,00	1,50	1,00	0,50	1,50	1,00	0,50
№29	0,00	6,00	4,50	3,50	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	1,00	0,00	3,00	3,00	2,00
№34	0,00	6,00	3,50	3,00	3,00	3,00	2,00	2,00	2,50	0,50	0,00	2,50	1,00	1,00
№36	0,00	6,00	3,00	2,50	2,50	2,50	1,50	1,50	2,00	0,50	0,00	1,50	0,50	0,00
№40	0,00	5,50	4,00	3,00	2,50	2,50	2,00	1,50	1,50	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
№43	0,00	5,50	3,50	3,00	3,00	3,00	2,00	1,50	1,00	0,00	0,00	1,00	0,00	0,00
Ν	15	18	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	0,00	5,83	3,63	3,13	2,90	2,90	2,57	2,33	2,27	0,90	0,30	1,50	0,80	0,70
Стандартная ошибка средней	0,00	0,06	0,12	0,09	0,07	0,05	0,13	0,17	0,18	0,24	0,12	0,24	0,21	0,17
Стандартное отклонение	0,00	0,24	0,48	0,35	0,28	0,21	0,50	0,67	0,68	0,93	0,46	0,93	0,80	0,65

37

029558

Таблица 10

Тест на .качание туловища (% качаний вправо) для группы 1

Группа 1	12)-1 | Ό1 | Ό7 | Ό14 | Ό21 | Ό28 | Ό30 | Ό32 | Ό42 | Ό44 | Ό46 | Ό56 | Ό58 | Ό60
№2	50,00	0,00	6,67	13,33	23,33	36,67	33,33	33,33	40,00	46,67	53,33	50,00	46,67	43,33
№3	46,67	0,00	3,33	6,67	10,00	33,33	26,67	30,00	23,33	30,00	20,00	16,67	26,67	40,00
№7	50,00	0,00	10,00	16,67	10,00	13,33	36,67	40,00	16,67	40,00	20,00	26,67	13,33	20,00
№12	50,00	6,67	33,33	30,00	26,67	36,67	36,67	33,33	26,67	30,00	33,33	36,67	26,67	36,67
№ 18	50,00	0,00	0,00	23,33	26,67	33,33	46,67	50,00	30,00	43,33	40,00	43,33	30,00	26,67
№21	53,33	0,00	0,00	6,67	13,33	20,00	33,33	43,33	26,67	33,33	36,67	33,33	30,00	26,67
№23	50,00	0,00	20,00	46,67	46,67	46,67	53,33	50,00	46,67	56,67	43,33	43,33	40,00	43,33
№24	50,00	0,00	0,00	6,67	23,33	16,67	33,33	53,33	40,00	43,33	43,33	40,00	36,67	36,67
№25	46,67	0,00	6,67	26,67	10,00	16,67	40,00	53,33	33,33	26,67	33,33	23,33	30,00	33,33
№28	50,00	0,00	6,67	3,33	6,67	33,33	30,00	26,67	33,33	33,33	36,67	40,00	33,33	33,33
№30	50,00	0,00	0,00	13,33	30,00	23,33	36,67	43,33	33,33	33,33	36,67	30,00	30,00	30,00
№31	46,67	0,00	0,00	10,00	6,67	16,67	36,67	33,33	33,33	26,67	30,00	23,33	33,33	43,33
№37	50,00	0,00	0,00	26,67	20,00	13,33	43,33	53,33	50,00	50,00	43,33	33,33	33,33	33,33
№38	46,67	0,00	0,00	10,00	6,67	33,33	40,00	50,00	50,00	43,33	43,33	40,00	40,00	36,67
№42	50,00	0,00	0,00	3,33	3,33	13,33	36,67	40,00	43,33	40,00	33,33	33,33	36,67	30,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	49,33	0,44	5,78	16,22	17,56	25,78	37,56	42,22	35,11	38,44	36,44	34,22	32,44	34,22
Стандартная ошибка средней	0,48	0,44	2,44	3,15	3,08	2,81	1,70	2,38	2,54	2,30	2,29	2,33	1,96	1,77
Стандартное отклонение	1,87	1,72	9,47	12,21	11,92	10,87	6,60	9,23	9,83	8,90	8,86	9,04	7,61	6,84

Таблица 11

Тест на качание туловища (% качаний вправо) для группы 2

Тест на качание туловища (% качаний вправо) для группы 3

38

029558

Таблица 13

Масса (г) для группы 1

39

029558

Таблица 16

Оценка теста в цилиндре (общая асимметрия (%)) для группы 1

Группа 1	ϋ-1 | 197 | ϋ21 | ϋ30 | Ό32 | Ό44 | Ρ46 | Ό58 | Ρ60
№2	24,49	36,51	53,85	50,00		40,00	50,00	28,57	50,00
№3	28,36	-38,89			50,00	33,33	33,33	43,75	53,13
№7	0,97	-6,45	-56,25	-100,00	-100,00	9,30	7,69	10,87	-10,81
№ 12	11,90	60,87	-32,00	80,00	16,67	10,00	-8,33	0,00	-9,52
№18	-11,76	34,62	28,13		-56,52	-28,57		75,00	28,57
№21	25,00	51,91	52,94		36,36	60,71	63,64	57,14	71,43
№23	0,00	40,00	24,49	9,33	24,07	25,81	14,89	27,74	32,10
№24	-1,23	48,05	41,94	0,00	22,73	39,58	30,23	33,33	39,39
№25	-5,77	22,81	28,36	50,00	5,13	22,81	33,33	32,10	29,55
№28	6,00	24,46	43,60		-30,00	31,91	36,96	39,62	42,86
№30	-9,43	-8,57	28,57	16,67	-100,00	33,33	-8,33	12,50	11,11
№31	0,00	36,84	34,29	50,00	50,00	39,02	33,33	43,24	36,47
№37	-7,14	26,67	-12,50	38,46	-60,00	-45,45	25,00
№38	-6,45	37,50	-1,92			-60,00		9,09	-33,33
№42	-26,09	7,14	-22,73	-16,67	-65,79	-56,06	-100,00	-65,38	-100,00
N	15	15	14	10	13	15	13	14	14
Среднее	1,92	24,90	15,05	17,78	-15,95	10,38	16,29	24,83	17,21
Стандартная ошибка средней	3,90	6,84	9,15	15,94	15,28	10,00	11,25	8,76	11,76
Стандартное отклонение	15,09	26,48	34,24	50,40	55,10	38,73	40,58	32,79	43,99

Таблица 17

Оценка теста в цилиндре (общая асимметрия (%)) для группы 2

Группа 2	ϋ-1 ϋ7 Ώ21 ГЗО ϋ32 Г44 Ό46 ϋ58 Ό60
№ 5	-2,70	14,29	-25,00	20, 00	-33,33	-20,00	2,86		-100,00
№ 9	-5, бб	31,82	16, 67	12,50	9, 09	0, 00	-11,54	42,86	0, 00
№ 11	-9, 52	40,54	0, 00	б, 90	50, 00	-9,76	10, 00	-б, 67	23, 08
№ 13	-14,08	20, 00	-19,35	23,53	4,35	2, 63	-16,67	33,33	-22,22
№ 14	-10,59	57,89	60,00	38,10	0, 00	0, 00	42,86		-100,00
№ 19	-15,58	55, 47	56,25	51,72	63,29	58,33	56, 67	29, 17	64,00
№ 20	-1,96	28,85	-23,17	0, 00	18,18	14,04	28,57	50, 00	20, 00
№ 27	-24,39	25, 00	66, 67	4,17	33,33	38,96	34,85	66, 67	14,29
№ 32	2,38	51,56	49, Об	56, 64	54,78	52,53	31,40	54,76	62,50
№ 33	0, 00	50, 00	46,43	27,59	22,73	11,54	19, 05	30, 00	10, 00
№ 35	1, 65	58,33	бб, 67	75, 00	62,50	54,93	29, 33	88,00	76, 47
№ 39	-2,20	42,36	25,32	20, 99	16, 00	7,14	40,35	-7, 69	13, 95
№ 41	-7,58	28,57	47,83	27,50	20, 00	18,18	46, 15
№ 44	21,05	43, 14	22,22	23,33	3, 85	-27,08	16, 95	-16,67	0, 00
№ 45	8,45	24,32	17,86	16, 67	27, 66	17, 65	42,86	62,50	0, 00
Ν	15	15	15	15	15	15	15	12	14
Среднее	-4,05	38,14	27,16	26, 98	23,50	14, 61	24,91	35, 52	4,43
Стандартная ошибка средней	2,78	3,75	8,37	5, 35	6, 81	6, 82	5, 51	9, 35	13, 97
Стандартное отклонение	10,76	14,51	32,41	20,70	26, 38	26,40	21,35	32,38	52,26

Таблица 18

Оценка теста в цилиндре (общая асимметрия (%)) для группы 3

Группа 3	ϋ-1 Ό7 Ό21 Ό30 Ό32 Ό44 Ό46 Ό58 Ό60
№ 1	-17,65	28,57	25, 00	35, 59	16, 67	48,28	19, 23	23, 91	16, 00
№ 4	6,41	40, 00	41, 67	50, 00	42,11	36, 36	0, 00	5, 00	31,25
№ 6	0, 00	28,13	12,96	21,57	42,11		36,36	14,29	-б, 67
№ 8	0, 00	25, 81	8,33	8,57	0, 00	-33,33	б, 90	21,43	-5,71
№ 10	10, 00	0, 00	0, 00	-7,41	57,14	28,57	-22,22	14,29	0, 00
№ 15	-4,05	54,47	46, 30	28,57	34,15	56, 67	32,35	24,24	б, 25
№ 16	4,82	46, 67	-80,00	-21,31	-46, 15	-16,67	-28,57	5, 56	9, 09
№ 17	3,75	41, 89	15, 52	30, 89	29, 68	40, 00	32,73	17,95	16, 13
№ 22	-7,55	44,74	64,81	56, 82	46, 88	20, 00	50, 00	55, 56	52,70
№ 26	-4,55	36, 51	0, 00	-17,74	20, 00	37,50		0, 00	-23,33
№ 29	-20,00	42,35	46, 94	49, 18	23, 91	100,00	-60,00	21,74	-25,00

- 40 029558

№ 34	8,33	51,09	42,86	47, 69	15, 00	0, 00	55, 56	0, 00	0, 00
№ 36	-6, 25	58,46	30, 00	35,21	15, 22	35, 90	17,07	26, 03	22,45
№ 40	-2, 80	18,18	-10,87	-9, 09	-10,81	10,53	-7,14	-8,82	-36,36
№ 43	0, 97	26, 09	21,74	2,27	28,57			-36,36	-8,33
N	15	15	15	15	15	13	13	15	15
Среднее	-1, 90	36,20	17, 68	20,72	20, 96	27,98	10, 17	12,32	3,23
Стандартная ошибка средней	2,23	3, 96	8,84	6, 80	6, 63	9, 37	9, 25	5, 24	5, 93
Стандартное отклонение	8, 65	15, 32	34,25	26, 33	25, 68	33,78	33,36	20,29	22, 96

Таблица 19

Тест в цилиндре (общее движение) для группы 1

Группа 1	ϋ-1	ΌΊ	Ό21	Ό30	Ό32	Ό44	Ό46	Ό58	Ό60
№ 2	49, 00	63, 00	13, 00	4,00	0, 00	25, 00	2,00	7,00	4,00
№ 3	67,00	18,00	0, 00	0, 00	2,00	6, 00	6, 00	16, 00	32,00
№ 7	103,00	31,00	16, 00	5, 00	1, 00	43,00	39, 00	46, 00	37,00
№ 12	42,00	46, 00	25, 00	5, 00	6, 00	20,00	24,00	16, 00	21,00
№ 18	68,00	26, 00	32,00	0, 00	23, 00	7,00	0, 00	32,00	14,00
№ 21	64,00	131,00	51,00	0, 00	11,00	28,00	11,00	14,00	14,00
№ 23	152,00	130,00	98,00	75, 00	54,00	93,00	47,00	137,00	81,00
№ 24	81,00	77, 00	31,00	2,00	22,00	48,00	43, 00	18,00	33, 00
№ 25	52,00	57,00	67,00	10, 00	39, 00	57,00	48,00	81, 00	44,00
№ 28	100,00	139,00	172,00	0, 00	10, 00	47,00	46, 00	53, 00	28,00
№ 30	53, 00	35, 00	28,00	6, 00	8,00	9, 00	12,00	16, 00	9, 00
№ 31	47,00	57,00	70, 00	10, 00	14,00	123,00	63, 00	74,00	85, 00
№ 37	14,00	15, 00	8,00	13, 00	15, 00	11,00	4,00	0, 00	0, 00
№ 38	31,00	32,00	52,00	0, 00	0, 00	5, 00	0, 00	11, 00	3, 00
№ 42	23, 00	14,00	22,00	12,00	38,00	66, 00	13, 00	26, 00	6, 00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	63, 07	58,07	45, 67	9, 47	16,20	39,20	23, 87	36, 47	27,40
Стандартная ошибка средней	9, 10	11, 12	11,33	4,83	4,20	8,95	5, 56	9, 50	6, 80
Стандартное отклонение	35, 25	43, 05	43, 89	18,71	16, 27	34,66	21,53	36,78	26, 32

Тест в цилиндре (общее движение) для группы 2

Таблица 20

Группа 2	0-1	07	021	Ό30	Ό32	Ό44	Ό46	Ό58	Ό60
№ 5	74,00	14,00	8,00	35, 00	9, 00	35, 00	35, 00	0, 00	1, 00
№ 9	53, 00	44,00	6, 00	8,00	11, 00	31,00	26, 00	7,00	1, 00
№ 11	42,00	37,00	14,00	29, 00	2,00	41,00	30, 00	15, 00	13, 00
№ 13	71,00	50, 00	31,00	17,00	23, 00	38,00	24,00	3, 00	9, 00
№ 14	85, 00	19, 00	5, 00	21,00	1,00	6, 00	7,00	0, 00	1, 00
№ 19	77,00	137,00	64,00	87,00	79, 00	60,00	60, 00	24,00	25, 00
№ 20	51,00	104,00	82,00	17,00	11,00	57,00	35, 00	12,00	10, 00
№ 27	41,00	4,00	15, 00	24,00	3, 00	77,00	66, 00	9, 00	7,00
№ 32	126, 00	64,00	53, 00	143,00	115,00	99, 00	86, 00	42,00	16, 00
№ 33	46, 00	24,00	56, 00	29, 00	22,00	26, 00	21,00	10, 00	20, 00
№ 35	182,00	60, 00	21,00	28,00	32,00	71,00	75, 00	25, 00	17,00
№ 39	91,00	144,00	79, 00	81,00	75, 00	84,00	114,00	13, 00	43, 00
№ 41	66, 00	14,00	46, 00	40, 00	35, 00	22,00	26, 00	0, 00	0, 00
№ 44	95, 00	51,00	108,00	120,00	78, 00	48, 00	59, 00	6, 00	28,00
№ 45	71,00	37,00	28,00	24,00	47,00	51,00	21,00	8,00	3, 00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	78,07	53,53	41,07	46, 87	36,20	49,73	45, 67	11, 60	12,93
Стандартная ошибка средней	9,49	11,16	8,23	10,59	9, 08	6, 54	7, 68	2,95	3, 17
Стандартное отклонение	36, 77	43,22	31,87	41,02	35, 18	25,34	29, 74	11,41	12,26

- 41

029558

Таблица 21

Тест в цилиндре (общее движение) для группы 3

Группа 3	ϋ-1 ΌΊ Ό21 Ό30 Ό32 Ό44 Ό46 Ό58 Ό60
№ 1	51,00	14,00	12,00	59, 00	18,00	29, 00	52, 00	46, 00	50, 00
№ 4	78,00	50, 00	36, 00	80, 00	57,00	11, 00	11, 00	20, 00	16, 00
№ б	52,00	32,00	54,00	51,00	19, 00	0, 00	11, 00	28,00	30, 00
№ 8	36, 00	31,00	24,00	35, 00	52,00	27,00	29, 00	28,00	35, 00
№ 10	20, 00	16, 00	3, 00	27,00	7,00	7,00	9, 00	7,00	5, 00
№ 15	74,00	123,00	54,00	63, 00	82,00	60, 00	34, 00	33, 00	32,00
№ 16	83, 00	15, 00	10, 00	61,00	13, 00	12,00	7,00	18,00	11,00
№ 17	80, 00	74,00	58,00	123,00	155,00	60, 00	55, 00	78,00	31,00
№ 22	53, 00	38,00	54,00	44,00	32,00	5, 00	4,00	63, 00	74,00
№ 26	22,00	63, 00	71,00	62,00	10, 00	8,00	0, 00	12,00	30, 00
№ 29	85, 00	85, 00	49, 00	61,00	46, 00	4,00	5, 00	23, 00	4,00
№ 34	48,00	92,00	7,00	65, 00	60, 00	б, 00	9, 00	11,00	10, 00
№ 36	32,00	65, 00	10, 00	71,00	46, 00	39, 00	41, 00	73, 00	49, 00
№ 40	107,00	22,00	46, 00	22,00	37,00	19, 00	14, 00	34,00	11,00
№ 43	103,00	23, 00	23, 00	44,00	28,00	0, 00	0, 00	11,00	12,00
N	15	15	15	15	15	15	15	15	15
Среднее	61, 60	49, 53	34,07	57,87	44,13	19, 13	18,73	32,33	26, 67
Стандартная ошибка средней	7,18	8,54	5, 80	б, 25	9, 64	5, 17	4,80	5, 90	5, 12
Стандартное отклонение	27,82	33, Об	22,46	24,22	37,32	20, 03	18,58	22,86	19, 83

ЗСМА вело к значительной острой утрате сенсорно-двигательной функции, которая восстанавливалась частично, приближаясь к плато стабильной недостаточности у всех животных к концу 4-недельного периода перед лечением.

Все группы (1-3) демонстрировали типичную восстановительную реакцию на вызванную ЗСМА ишемию с нормальными оценками 0 прямо перед хирургическим вмешательством (сутки -1) с последующей полной утратой функции (оценка 12, передняя конечность; 6, задняя конечность) в течение 24 ч после закупоривания (сутки 1). Во время следующих 4 недель, фазы без лечения, оценки передней конечности и задней конечности улучшались приблизительно до 5,5 и 3 соответственно и приближались к уровню плато восстановления (фиг. 3 и 4). В тесте на качание туловища животные демонстрировали меньше чем 5% качаний вправо через сутки после хирургического вмешательства и восстанавливались приблизительно до 25% качаний вправо к концу 4-недельного периода без лечения (фиг. 5). Хотя это не имеет значения, базовые поведенческие измерения слегка улучшались относительно уровней до лечения во время периодов без лекарственных средств между фазами 1 и 2 и фазами 2 и 3. Это может быть обусловлено медленным продолжающимся эндогенным восстановлением, эффектами натренированности, повторяющимися поведенческими оценками и, возможно, эффектами переноса лечения.

Все животные получали каждое из лечений к концу исследования. 4-АР вводили крысам два раза в сутки (в этом исследовании и в исследовании, представленном в примере 17). При времени полужизни 11,5 ч (Науез е! а1., I. СНп. РНагшасо1. 2003; 43: 379-85) этот режим не поддерживал долгосрочные уровни соединения в плазме, но он допускал повторяющееся ежедневное воздействие на животных. Поведенческие оценки осуществляли через 1 ч после дозирования, чтобы гарантировать достаточное воздействие во время оценки, а трехсуточный интервал для каждой фазы дозирования мог помогать адаптировать животных к стрессу от перорального зондового кормления перед проведением поведенческих оценок. Кровь брали через 30 мин, чтобы подтверждать связанный с дозой уровень далфампридина у животных по завершении поведенческой оценки (табл. 22). Следует отметить, что невозможно уравнять использованные здесь дозы или получаемые концентрации в плазме с тем, что ожидается у пациентов, которых лечат составом с замедленным высвобождением лекарственного средства, где фармакокинетические показатели сильно различаются. Также имеет место задержка пиковой концентрации, которую измеряют в цереброспинальной жидкости по сравнению с таковой в крови, которая составляет приблизительно час у человека (Эопоуап е! а1., Зрша1 Согд 2000; 38: 7-15). Следовательно, концентрация 4-АР, которую достигают в центральной нервной системе для данного уровня в плазме, вероятно, будет значительно меньше для переходного пика в плазме после зондового кормления по сравнению со схожей концентрацией, поддерживаемой в течение более длительного периода времени.

Тест на размещение передней конечности показывает эффект лечения, оказываемый на функцию передней конечности. На фиг. 3 показано, что лечение с использованием или низкой дозы или высокой дозы 4-аминопиридина через 4 недели после ишемического повреждения головного мозга эффективно для того, чтобы улучшать функцию передней конечности у крыс. На фиг. 3 также показано, что эффект зависит от дозы. Этот эффект также является обратимым, поскольку он уменьшается после отмены лекарственного средства.

Тест на размещение задней конечности показывает эффект лечения, оказываемый на функцию зад- 42 029558

ней конечности. На фиг. 4А-Э показано, что лечение с использованием или низкой дозы или высокой дозы 4-аминопиридина через 4 недели после ишемического повреждения головного мозга эффективно для того, чтобы улучшать функцию задней конечности у крыс. На фиг. 4А-Э также показано, что эффект является обратимым. Стоит отметить, что эффект зависит от дозы, поскольку лечение с использованием более высокой дозы ведет к улучшенной поведенческой оценке, относительно лечения с использованием более низкой дозы или наполнителя в качестве контроля.

Тест на качание туловища демонстрирует эффект лечения, оказываемый на общее владение телом. На фиг. 5 показано, что лечение с использованием или низкой дозы или высокой дозы 4-аминопиридина эффективно для того, чтобы повышать процентную долю качаний вправо относительно всех качаний у крыс, и, таким образом, эффективно для того, чтобы улучшать один из симптомов ишемического инсульта. Таким образом, на фиг. 5 показано, что 4-аминопиридин эффективен для того, чтобы улучшать общее владение телом у крыс. На фиг. 5 также показано, что этот эффект обратим и зависит от дозы.

Животные группы 1 (фиг. 3-5), которые получали 4-аминопиридин по 2 мг/кг во время первой фазы дозирования, показывали значительную положительную динамику в оценках передней конечности, задней конечности и качания туловища по сравнению с базовыми оценками до лечения (сутки 28 в сравнении с сутками 32; р-значения <0,05). Между фазами дозирования 1 и 2 (период выведения, сутки 33-42), эффекты, оказываемые на размещение конечности, возвращались к почти базовым уровням. Во время второй фазы дозирования животные в группе 1 получали 4-аминопиридин по 0,63 мг/кг. Все поведенческие оценки значительно улучшались по сравнению с оценками во время выведения прямо перед дозированием (сутки 42 в сравнении с сутками 46; р-значения <0,05), хотя они и не достигали той же степени положительной динамики, как во время первой фазы с более высокой дозой. Во время выведения между второй и третьей фазами (сутки 47-56) поведенческие оценки опускались до уровня, схожего с базовыми оценками (сутки 56). Животные в этой группе получали наполнитель во время третьей фазы дозирования и не показывали изменения поведенческих оценок по сравнению с сутками непосредственно перед дозированием (на 56 сутки).

Животные группы 2 (фиг. 3-5), получавшие 4-аминопиридин по 0,63 мг/кг во время первой фазы дозирования, показывали значительно улучшенные поведенческие оценки во всех измерениях по сравнению с базовыми оценками до лечения (сутки 28 в сравнении с сутками 32; р-значения <0,05). Между фазами дозирования 1 и 2, хотя животные не получали лекарственное средство, эффекты, оказываемые на поведение, опускались до уровней, схожих с уровнями до фазы дозирования (сутки 42). Во время фазы дозирования 2, животные в этой группе получали наполнитель и не демонстрировали изменение в оценках поведенческих тестов. У них функции оставались на базовом уровне во время выведения между фазами 2 и 3 (сутки 47-56). Животные в этой группе получали 4-аминопиридин по 2 мг/кг во время фазы 3 дозирования, а все оценки поведенческих тестов значительно улучшались по сравнению с базовыми оценками до фазы (сутки 56 в сравнении с сутками 60; р-значения <0,05).

Животные в группе 3 (фиг. 3-5) имели результаты, схожие с таковыми, наблюдавшимися в группе 1 и 2 во время различных фаз лечения. Животные получали наполнитель во время фазы 1. Изменения в какой-либо поведенческой оценке отсутствовали, а животные оставались на этом уровне функции на протяжении выведения между фазами 1 и 2. Лечение 4-аминопиридином по 2 мг/кг во время фазы 2 и по 0,63 мг/кг во время фазы 3 создавало значительную положительную динамику размещения конечности по сравнению с оценками в отсутствие лекарственного средства прямо перед каждой фазой (сутки 42 в сравнении с сутками 46 и сутки 56 в сравнении с сутками 60 соответственно; р-значения <0,05). Оценки качания туловища улучшались во время лечения высокими дозами в фазе 2 (сутки 42 в сравнении с сутками 46; р<0,05), но не менялись при лечении низкими дозами во время третьей фазы лечения. Имело место возвращение к базовому поведению во время выведения между фазами 2 и 3 (сутки 56).

Взятые все вместе, животные реагировали аналогичным образом на соответствующее лечение, независимо от порядка, в котором их лечили. Во всех случаях наивысшая доза во время какой-либо фазы дозирования вела к значительной положительной динамике (р-значения <0,05) по сравнению с наполнителем и более низкой дозой, и более низкая доза была статистически лучше или проявляла тенденцию в направлении значимости по сравнению с наполнителем, в зависимости от используемой статистической модели (дисперсионный анализ или анализ смешанных моделей, см. Статистические способы, выше).

В дополнение к еженедельной оценке перед лечением, оценки осуществляли два раза во время любой заданной фазы дозирования (после первой и пятой доз). Отмечали легкую положительную динамику между этими оценками (например, группа 3, между сутками 30 и 32, когда животные получали лечение наполнителем). Это могло быть обусловлено адаптацией к стрессу от перорального зондового кормления или, возможно, отражает реакцию на обучение, поскольку животные ознакамливались с тестами и предвидели их. Этот эффект не наблюдали в исследовании, представленном в примере 17 (см. группа наполнителя, сутки 56 и далее), где животных тестировали только один раз во время каждого из трехсуточных периодов дозирования. Поскольку базовый уровень все еще слегка улучшен и поскольку не тестировали все возможные последовательности дозирования, было невозможно определять, что предыдущее воздействие 4-АР предрасполагает животных к большей или меньшей реакции, когда дозировали 4-АР на поздней фазе. Для того чтобы устранить этот возможный эффект переноса от вариабельности порядка доз,

- 43 029558

исследование, представленное в примере 17, организовано как исследование с увеличением дозы без периодов выведения.

Тест в цилиндре показывает эффект лечения, оказываемый на аспекты общего владения телом, такие как симметрия и координация тела. На фиг. 7 представлено, что лечение с использованием 4аминопиридина является эффективным для того, чтобы улучшать асимметрию использования конечностей, являющуюся результатом инсульта, посредством демонстрации увеличения процентной доли использования ослабленной передней конечности относительно общего использования конечностей у крыс. Таким образом, на фиг. 7 представлено, что 4-аминопиридин является эффективным для того, чтобы улучшать симметрию и координацию тела у крыс. На фиг. 7 также продемонстрировано, что этот эффект является обратимым и зависит от дозы.

На фиг. 9 представлено, что различия в объеме инфаркта не наблюдали между группами 1-3. В частности, средний объем инфаркта (% контралатерального полушария) не различался между какой-либо из групп. Средний объем инфаркта (%) в группе 1 составлял 45,0 (±1,8), в группе 2 составлял 41,4 (±2,3) и в группе 3 составлял 39,0 (±3,3).

Уровни 4-аминопиридина в плазме: образцы крови брали, когда животные, которые получали лечение наполнителем, имели уровни 4-аминопиридина ниже нижнего предела количественного определения для способа. Образцы, которые брали, когда животные получали 4-аминопиридин, подтверждали воздействие в момент поведенческого тестирования, соответствующим образом связанное с уровнем дозы. Уровни 4-аминопиридина в плазме представлены в табл. 22.

Таблица 22

Уровни 4-аминопиридина в плазме

Группа	Средний уровень 4-аминопиридина в плазме (стандартная ошибка), нг/мл
	Фаза лечения
	Фаза 1	Фаза 2	Фаза 3
Группа 1 - Н, Ъ, V	142,4 (6,7)	64,0 (2,3)	ВЪО<2*
Группа 2 - Ъ, V, Н	78,1 (10,3)	ВЪО<2*	144,1 (7,4)
Группа 3 - V, Н, Ъ	ВЪО<2*	128,6 (5,6)	61,8 (3,3)

ЛН.ОС) ниже нижнего предела количественного определения (<1,0 нг/мл).

Данные показывают, что во время каждой отдельной фазы лечения и в целом лечение 4аминопиридином вело к значительной положительной динамике функции передней конечности, задней конечности и качания туловища. Кроме того, несколько перекрестных статистических моделей, использованных авторами изобретения, показывали, что высокая доза была значительно лучше (р<0,0001 для теста на размещение конечности и р<0,001 для качания туловища), чем и наполнитель в качестве контроля и низкая доза на согласованной основе. Низкая доза показывала или сильную тенденцию или достигала значимости для положительной динамики по сравнению с наполнителем в качестве контроля. Дополнительно, оценки во время второй оценки в пределах фазы дозирования были значительно лучше, чем первая оценка на лекарственном средстве. Таким образом, этот пример демонстрирует значимую обратимую и зависящую от дозы положительную динамику сенсорно-двигательной функции передней конечности и задней конечности в моменты времени, когда 4-АР находился на поддающихся обнаружению уровнях в плазме животных. Данные теста на качание туловища также указывают на эффект зависимости от дозы, оказываемый на восстановление постуральной функции. Это может представлять собой доказательство эффектов, оказываемых на пути в полосатом теле, или, возможно, эффектов, оказываемых на подкорковые области белого вещества. Кроме того, этот пример демонстрирует ясную и зависящую от дозы реакцию на лечение с использованием 4-АР в каждой группе и между группами в каждой фазе.

Кроме того, результаты на фиг. 3-8 показывают, что продолжающееся лечение с использованием 4аминопиридина может давать дополнительную положительную динамику сенсорно-двигательного поведенческого исхода. В частности, поведенческие оценки после введения множества доз 4-аминопиридина в среднем улучшаются относительно поведенческих оценок после однократной дозы 4-аминопиридина.

Эти результаты указывают на то, что лечение с использованием 4-аминопиридина является эффективным для того, чтобы улучшать сенсорно-двигательные функции у млекопитающих, страдающих связанной с инсультом недостаточностью таких функций. Эти результаты также демонстрируют положительную динамику связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности, когда лечение инициируют во время хронического периода, при стабильной двигательной недостаточности, после события инсульта. Основываясь на этих данных, можно заключить, что 4-аминопиридин значительно улучшает хроническую сенсорно-двигательную недостаточность после инсульта.

- 44 029558

6.3. Пример 3. Лечение ишемического инсульта.

Пациент поступает в медицинское учреждение с признаками и симптомами ишемического инсульта. Пациента реваскуляризируют с использованием 1РА или другой терапии для того, чтобы восстановить поток крови. Несмотря на то, что поток крови восстановлен, имеет место некоторый уровень повреждения головного мозга. Через трое суток после инсульта пациента оценивают неврологически и демонстрируют наличие измеримой сенсорно-двигательной недостаточности. Начиная с суток 4, после суток 2 и 3, этого пациента лечат с использованием 4-аминопиридина в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг на дозу, внутривенно в течение от 10 суток до 3 месяцев. Во время лечения и после лечения оценивают сенсорнодвигательную функцию.

6.4. Пример 4. Лечение инсульта и получаемого паралича правой руки.

Пациент поступает в отделение неотложной помощи с параличом правой руки. После оценки и визуализации, определяют, что пациент страдает ишемическим инсультом. Пациент получает 1РА в соответствии с одобренными способами, и восстанавливают поток крови через тромбоз. Однако, через неделю после лечения 1РА, пациент имеет остаточный паралич правой руки, как измеряют посредством стандартных неврологических измерений двигательной активности руки. Этого пациента начинают лечить с использованием 4-аминопиридина 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта (от 0,01 до 1,0 мг/кг, внутривенно) один раз в неделю в течение 4 недель. Положительную динамику функции руки периодически измеряет невролог или другой врач с использованием стандартного неврологического тестирования, включающего динамометр и другое тестирование на силу. Во время лечения и после лечения оценивают сенсорно-двигательную функцию правой руки.

6.5. Пример 5. Лечение ишемического инсульта.

Пациент поступает в медицинское учреждение с признаками и симптомами ишемического инсульта. У него обнаруживают паралич левой стороны. Пациент не пребывает во время для реваскуляризирующей терапии. При клинической оценке находят, что произошло некоторое повреждение головного мозга. Через трое суток после инсульта пациента оценивают неврологически и выявляют наличие измеримой сенсорно-двигательной недостаточности. Этого пациента начинают лечить с использованием 4аминопиридина 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг на дозу внутривенно каждые сутки в течение четырех недель; после этого он получает еженедельные дозы в течение шести месяцев. Он также получает физиотерапию. Во время лечения (например, после 2 недель) и после лечения оценивают сенсорно-двигательную функцию левой стороны.

6.6. Пример 6. Лечение ишемического инсульта.

Пациент поступает в отделение неотложной помощи с параличом левой руки. Пациент сообщает, что проблема с его рукой возникла "больше недели назад". После оценки и визуализации определяют, что пациент страдал ишемическим инсультом. Пациент не получает 1РА. После неврологического осмотра находят, что пациент имеет остаточный паралич левой руки, как измеряют посредством стандартных неврологических измерений двигательной активности руки; пациент также имеет сенсорную недостаточность. Пациент отказывается участвовать в физиотерапии или трудовой терапии. Этого пациента начинают лечить с использованием 4-аминопиридина 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,

19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта (от 0,01 до 1,0 мг/кг, внутривенно) один раз в неделю в течение 12 недель. Положительную динамику функции руки периодически измеряет невролог или другой врач с использованием стандартного неврологического тестирования, включающего динамометр и другое тестирование на силу. Во время лечения (например, после 2 недель лечения) и после лечения оценивают сенсорнодвигательную функцию левой руки.

6.7. Пример 7. Лечение геморрагического инсульта.

Пациент поступает в медицинское учреждение с признаками и симптомами, соответствующими ишемическому инсульту или кровоизлиянию в мозг. Пациента стабилизируют. При неврологической оценке находят, что возник некоторый уровень повреждения головного мозга. Через одну неделю после инсульта пациента снова оценивают неврологически и обнаруживают наличие измеримой сенсорнодвигательной недостаточности. Этого пациента начинают лечить с использованием 4-аминопиридина 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19,

20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 6 6 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг

- 45 029558

ежедневно, внутривенно в течение 10 суток, с последующим введением этой дозы еженедельно в течение 2 месяцев, после чего все лечение прерывают. Сенсорно-двигательную функцию оценивают (например, после 1, 2, 3, 4, 5, 6 недель и/или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев после инсульта и/или от начала терапии).

6.8. Пример 8. Лечение 4-аминопиридином связанного с инсультом повреждения, включая лечение в хроническом периоде.

Критерии включения в исчерпывающее исследование включают взрослых, мужчин и женщин, с клиническими признаками повреждения нервной системы.

Показания, подлежащие исследованию: ишемический инсульт с использованием тромболитиков, ишемический инсульт без использования тромболитиков, геморрагический инсульт.

Диапазоны доз, подлежащие исследованию: от 0,001 мг/кг до 10,0 мг/кг на дозу.

Частоты доз, подлежащие исследованию: ежедневно,

через сутки,

каждые четвертые сутки, один раз в неделю, через неделю, один раз в месяц.

Режимы со смешанной периодичностью:

ежедневно в течение одной или двух недель и затем еженедельно, раз в две недели или ежемесячно в течение оставшейся части исследования,

через сутки в течение одной или двух недель и затем еженедельно, раз в две недели или ежемесячно после этого.

Инициация лечения, подлежащая исследованию: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта.

Длительность лечения, подлежащая исследованию: лечение в течение 1, 2, 4, 10, 30 недель, лечение в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев, лечение в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 лет.

Функция, подлежащая исследованию: двигательная функция руки, двигательная функция лица, выживаемость,

время возвращения к работе.

Восстановление измеряют посредством стандартных неврологических измерений.

Результаты: при лечении, как описано выше, сенсорно-двигательную функцию оценивают у пациентов, которых лечили с использованием 4-аминопиридина, и у пациентов, которых лечили с использованием плацебо и способов, известных в данной области, и сравнивают результаты тестов.

В альтернативных вариантах осуществления исследуют комбинации меньше, чем всех приведенных выше параметров.

6.9. Пример 9. Лечение 4-аминопиридином ишемического инсульта с односторонней слабостью и/или параличом руки (без тромболизиса).

Критерии включения: взрослые, мужчины и женщины, признаки инсульта, основанные на утрате сознания, дезориентации, затруднениях речи, параличе лица или конечности. Ишемический инсульт подтверждали с использованием рентгенографической визуализации.

Отбирают пациентов с односторонней слабостью и/или параличом руки, которые не являются кандидатами на 1ΡΆ (или другой тромболитик) или которые ранее не получали ΙΡΆ по какой-либо причине. От пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов получают согласие.

Пациентов вводят в исследование и рандомизируют для приема 4-аминопиридина или плацебо 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 2 3 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта и начиная, как только они поступают в медицинское учреждение, включая больницу или кабинет врача, получают диагноз, визуализацию.

Для этого исследования лечение инициируют между 1 ч и 7 сутками после повреждения. Лечение

- 46 029558

продолжают в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем еженедельно в течение остальной части периода лечения. Пациентам дают дозы по от 0,0001 до 1,0 мг на 1 кг, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Восстановление измеряют посредством стандартных неврологических измерений сенсорнодвигательной активности руки через неделю в течение всей длительности исследования.

Результаты: при лечении, как описано выше, функцию руки оценивают у пациентов, которых лечили с использованием 4-аминопиридина, и пациентов, которых лечили с использованием плацебо и способов, известных в данной области, и сравнивают результаты тестов.

6.10. Пример 10. Лечение 4-аминопиридином инсульта при одностороннем параличе лицевого нерва без использования тромболитиков.

Отбирают тех пациентов с односторонним параличом лицевого нерва, которые не получали или не могли получать тромболитики. Функцию оценивают посредством способов, известных в данной области, через неделю во время 3-месячного периода дозирования. От пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов получают согласие.

Пациентов вводят в исследование и рандомизируют для приема 4-аминопиридина или плацебо. Лечение инициируют на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4,

5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 неделе; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,

13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяце; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта. Лечение продолжают в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем еженедельно в течение остальной части периода лечения. Пациентам дают дозы по от 0,0001 до 1,0 мг на 1 кг, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Результаты: при лечении, как описано выше, движение лица оценивают у пациентов, которых лечили с использованием 4-аминопиридина, и пациентов, которых лечили с использованием плацебо; сравнивают результаты тестов.

6.11. Пример 11. Лечение ишемического инсульта 4-аминопиридином (с использованием тромболизиса).

Критерии включения: взрослые, мужчины и женщины, признаки инсульта, основанные на потере сознания, дезориентации, затруднении речи, параличе лица или конечности. Ишемический инсульт подтверждают с помощью рентгенографической визуализации.

Отбирают пациентов с односторонней слабостью и/или параличом руки, которых лечили с использованием ίΡΑ или другого тромболитика. От пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов получают согласие.

Пациентов вводят в исследование и рандомизируют для приема 4-аминопиридина или плацебо, начиная, как только они поступают в медицинское учреждение, выполнять постановку диагноза и визуализацию.

Лечение инициируют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта. Лечение продолжают в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем еженедельно в течение остальной части периода лечения. Пациентам дают дозы по от 0,0001 до 1,0 мг на 1 кг, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Восстановление измеряют посредством стандартных неврологических измерений сенсорнодвигательной активности руки через неделю в течение всей длительности исследования.

Результаты: при лечении, как описано выше, функцию руки у пациентов, которых лечили с использованием 4-аминопиридина, измеряют посредством способов, известных в данной области, и сравнивают с таковой у пациентов, которых лечили с использованием плацебо.

6.12. Пример 12. Лечение 4-аминопиридином инсульта с дизартрией без тромболитиков.

Отбирают пациентов с дизартрией, которые не получали или не могли получать тромболитики.

Функцию оценивают посредством способов, известных в данной области, через неделю во время 3месячного периода дозирования. От пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов получают согласие.

Пациентов вводят в исследование и рандомизируют для приема 4-аминопиридина или плацебо. Лечение инициируют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,

14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 6 6 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта. Лечение продолжают в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем еженедельно в течение остальной части периода лечения. Пациентам дают дозы по от 0,0001 до 1,0 мг на 1 кг, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Результаты: при лечении, как описано выше, недостаточность речи из-за дизартрии у пациентов,

- 47 029558

которых лечили с использованием 4-аминопиридина, оценивают с использованием способов, известных в данной области, и сравнивают с таковой у пациентов, которых лечили с использованием плацебо.

6.13. Пример 13. Лечение 4-аминопиридином пациентов с дизартрией (с использованием тромболитиков).

Критерии включения: взрослые, мужчины и женщины, признаки инсульта, основанные на потере сознания, дезориентации, затруднении речи, параличе лица или конечности. Ишемический инсульт подтверждают с использованием рентгенографической визуализации. Отбирают пациентов с дизартрией, которые не получают тромболитики.

Лечение инициируют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта. Лечение продолжают в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем еженедельно в течение остальной части периода лечения. Пациентам дают дозы по от 0,0001 до 1,0 мг на 1 кг, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Функцию оценивают посредством способов, известных в данной области, через неделю во время 3месячного периода дозирования.

Результаты: при лечении, как описано выше, оценивают и сравнивают недостаточность речи из-за дизартрии у пациентов, которых лечили с использованием 4-аминопиридина, и пациентов, которых лечили с использованием плацебо.

6.14. Пример 14. Лечение 4-аминопиридином пациентов с геморрагическим инсультом.

Критерии включения: взрослые, мужчины и женщины, признаки инсульта, основанные на потере

сознания, дезориентации, затруднении речи, параличе лица или конечности. Геморрагический инсульт подтверждали с использованием рентгенографической визуализации. От пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов получают согласие.

Отбирают пациентов с односторонней слабостью руки.

Пациентов вводят в исследование и рандомизируют для приема 4-аминопиридина или плацебо, начиная, как только они поступают в медицинское учреждение, включая больницу или кабинет врача, получают диагноз, визуализацию и согласие.

Лечение инициируют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта. Лечение продолжают в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем еженедельно в течение остальной части периода лечения. Пациентам дают дозы по от 0,0001 до 1,0 мг на 1 кг, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Восстановление измеряют посредством стандартных неврологических измерений сенсорнодвигательной активности руки через неделю в течение всей длительности исследования.

Результаты: при лечении, как описано выше, функцию руки у пациентов, которых лечили с использованием 4-аминопиридина, измеряют посредством способов, известных в данной области, и сравнивают с таковой у пациентов, которых лечили с использованием плацебо.

6.15. Пример 15. Лечение 4-аминопиридином пациентов с геморрагическим инсультом.

У человека эффекты введения однократной дозы или множественных суточных доз 4-АР при уровне дозы 0,05 и 0,1, оказываемые на функциональный исход после тромботического инсульта, оценивают с использованием протокола, приведенного ниже.

Цель: оценивать эффективность и безопасность перорально или внутривенно вводимого 4-АР при хроническом ишемическом инсульте.

Дизайн: многоцентровое, рандомизированное, двойное слепое, с плацебо в качестве контроля исследование безопасности и эффективности.

Критерии включения: пациенты с ишемическим инсультом и слабостью конечности и полная функциональная независимость до инсульта.

Критерии исключения: пациенты с тяжелой болезнью и ожидаемой продолжительностью жизни меньше чем 6 месяцев, известное тяжелое почечное нарушение, известное текущее злоупотребление или зависимость от спирта или запрещенных лекарственных средств. Исключают пациентов с геморрагическим инсультом.

Участие пациентов: пациентов рандомизируют для приема однократной дозы 4-АР или плацебо, или 2-недельной суточной дозы 4-АР или плацебо, начиная 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сутки; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 недели; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 48, 54, 60 или 66 месяцев; 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6 или 6,5 года или дольше после эпизода инсульта. Образцы крови брали в несколько моментов времени после лечения с использованием 4-АР для того, чтобы определять концентрации лекарственного средства в плазме при- 48 029558

близительно в момент оценки исхода сенсорно-двигательной функции.

Первичный исход: общее восстановление и восстановление сенсорно-двигательной функции на 2 сутки (одна доза) или через 2 недели (множество доз) после лечения измеряют посредством модифицированной шкалы Рэнкина и шкалы ΝΙΗ.

При лечении с использованием 4-АР сенсорно-двигательную функцию у пациентов с инсультом после одного или множества введений измеряют и по сравнению с базовой функцией и лечением с использованием плацебо.

6.16. Пример 16. Исследование таблеток далфампридина 10 мг с длительным высвобождением у субъектов с хронической недостаточностью после ишемического инсульта.

6.16.1. Список сокращений.

Следующие сокращения и специальные термины используют в протоколе этого исследования.

Сокращение или специальный термин	Объяснение
АЭЪ	Активность в повседневной жизни
АЕ	Нежелательное явление
А5Т	Аспартатаминотрансфераза
ΒϋΙ	Шкала оценки депрессии Бека
ΒΜΙ	Индекс массы тела

- 49 029558

вш	Азот мочевины крови
с	Градус Цельсия
СРВ	Изменение относительно базового уровня
С61	Общее впечатление клинициста
СР	Церебральный паралич
СЕР	Индивидуальная регистрационная карта
ЕО5	Пароксизм с ранним началом
ЕЕ	Длительное высвобождение
Е	Градус Фаренгейта
ЕАР	Полный анализ популяции
ΕΙΜ	Мера функциональной независимости
ЕМА	Оценка по Еид1-Меуег
ССР	Надлежащая клиническая практика
ΗΌΡΕ	Полиэтилен высокой плотности
ΗΕΕΝΤ	Голова уши глаза нос горло
1СН	Международная конференция по гармонизации
1ЕС	Независимый комитет по этике
ΙΝΌ	Новое исследуемое лекарственное средство
ΙΝΝ	Международное непроприетарное название
ΙΕΒ	Институтский наблюдательный совет
ЪО5	Пароксизм с поздним началом
ЪЕММТ	Ручное мышечное тестирование нижней конечности
мг	Миллиграмм
ΜΕΙ	Магнитно-резонансная визуализация
М5	Рассеянный склероз
М5И5-12	Шкала для хождения при рассеянном склерозе из 12 пунктов
РРР	Популяция по протоколу
ЕВ С	Красная клетка крови
5АЕ	Серьезное нежелательное явление
561	Общее впечатление субъекта
55ΕΙ	Ингибиторы обратного захвата серотонина
Т25ЕИ	Ходьба на 25 футов на время
ТМ5	Транскраниальная магнитная стимуляция
ирт	Исследование мочи на беременность
из	США
υ5ΑΝ	Принятое в США название
υτι	Инфекция мочевых путей
иве	Белая клетка крови

6.16.2. Цели исследования.

Изучение эффектов далфампридина-ЕК 10 мг (т.е. состав 10 мг 4-аминопиридина с замедленным высвобождением), который вводили два раза в сутки приблизительно через 12 ч, оказываемых на следующие клинические функции:

скорость ходьбы, как измеряют посредством теста на ходьбу на 25 футов на время (Т25Е^), ловкость руки, как измеряют посредством теста с коробкой и блоками, сила руки, как измеряют посредством теста на хватание и теста на щипание,

- 50 029558

двигательная и сенсорная функция, как измеряют посредством оценки по Рид1-Меуег (ΡΜΑ), необязательно, спастичность верхней конечности, как измеряют посредством шкалы оценки недееспособности (ΌΑδ),

помощь, необходимая для того, чтобы осуществлять активность в повседневной жизни (ΑΌΡ), посредством шкалы меры функциональной независимости (ΡΙΜ),

шкала общего впечатления субъекта (δΟΙ), шкала общего впечатления клинициста (СО^,

необязательно, депрессия, как измеряют посредством шкалы оценки депрессии Бека (ΒΌΙ) (чтобы исключать тяжелую депрессию).

6.16.3. План исследования.

Это исследование далфампридина-ЕК 10 мг, который принимали два раза в сутки, приблизительно через 12 ч, у субъектов с хронической стабильной сенсорно-двигательной недостаточностью после ишемического инсульта. Исследование планируют как двойное слепое перекрестное исследование из двух периодов с плацебо в качестве контроля. Его проводят в нескольких местах, запланировано 66 субъектов. Длительность исследования 8 недель включает 2-недельный период скрининга, 2 недели лечения в первом периоде, 1-недельный период выведения, 2 недели лечения во втором периоде и после лечения 1недельное сопровождение по телефону. Мониторинг нежелательных явлений осуществляют на всем протяжении исследования. Дополнительно, короткий физикальный осмотр и измерение показателей жизнедеятельности осуществляют во время каждого периода исследования для того, чтобы оценивать потенциальные изменения относительно базового уровня. Также проводят набор функциональных и субъективных клинических оценок, описанных ниже.

После получения информированного согласия субъекта, при скрининговом посещении определяют пригодность (посещение 1) посредством изучения медицинского анамнеза, результатов предыдущей визуализации головного мозга, химических тестов δΜΑ-12, включая оценку клиренса креатинина, анализ мочи и исследование мочи на беременность (υΡΤ) у женщин с возможностью беременности. Шкалу оценки депрессии Бека (ΒΌΙ) применяют для того, чтобы исключать тяжелую депрессию. Также при скрининге применяют измерение скорости ходьбы (Т25Г^), ловкости руки (коробка и блоки), силы руки (тесты на хватание и щипание), двигательной функции верхних и нижних конечностей (ΡΜΑ), двигательной спастичности верхней конечности (ΌΑδ) и помощи, необходимой для того, чтобы осуществлять активность в повседневной жизни (ΡΙΜ). Период скрининга (от суток -14 до -1) завершают при посещении 2, что обозначает начало периода 1 для подходящих субъектов.

При посещении 2 (сутки 1) субъектов рандомизируют в соотношении 2:1 в одну из двух слепых последовательностей лечения: плацебо с последующим далфампридином-ЕК (последовательность А) или далфампридин-ЕК с последующим плацебо (последовательность В). Применяют те же клинические оценки, как при предыдущем посещении. Субъектов отпускают домой с запасом приписанного им лечения на одну неделю. Они получают инструкцию принимать первую дозу в этот вечер и одну дозу приблизительно каждые 12 ч до утра их следующего посещения. У них будет два дополнительных посещения с интервалами в одну неделю во время этого периода: посещение 3 (сутки 8) и посещение 4 (сутки 15). В каждое из этих посещений осуществляют схожую панель клинических оценок, дополняя общим впечатлением субъекта (δΟΙ) и общим впечатлением клинициста (СО^. Детальный режим оценок при каждом посещении см. в табл. 23. Новый запас исследуемого продукта выдают по завершении исследовательских процедур при посещении 3.

По завершении исследовательских процедур при посещении 4, которое представляет собой конец периода 1, начинают недельный период выведения, во время которого все субъекты принимают плацебо. Субъектов отпускают домой с запасом одностороннего слепого плацебо и дают им инструкции принимать свою первую дозу вечером и одну дозу приблизительно каждые 12 ч до утра их следующего посещения.

Посещение 5 (сутки 22) означает начало периода 2 исследования для обеих групп. Во время этого посещения субъекты имеют новый набор клинических оценок, после которых они начинают свое перекрестное лечение согласно последовательности, установленной для каждой группы. Схожий набор оценок осуществляют во время двух дополнительных еженедельных посещений в течение этого периода: посещения 6 (сутки 29) и посещения 7 (сутки 36). Исследуемый продукт выдают по завершении исследовательских процедур при каждом посещении, за исключением посещения 7, конца периода 2. Инструкции по дозированию являются такими же, как при предыдущих посещениях.

Сопроводительное посещение по телефону, посещение 8 (сутки 43), происходит неделей позже, чтобы оценивать нежелательные явления. Участие в исследовании завершают после сопроводительного звонка.

Субъекты получают инструкции придерживаться режима дозирования, направленного на прием утренней дозы исследуемого продукта за 2 ч до начала запланированных оценок исследования во время посещений для оценки лечения (посещения 3, 4, 6 и 7), чтобы соответствовать приблизительной пиковой концентрации далфампридина-ЕК в плазме.

Для того чтобы осуществлять мониторинг соблюдения лечения, образцы крови получают для опре- 51 029558

деления концентрации исследуемого лекарственного средства в плазме при всех посещениях клиники после скринингового посещения.

План исследования отображен графически на фиг. 10. Расписание процедур исследования по посещениям представлен в табл. 23, а описания процедур можно найти ниже.

Таблица 23

Расписание оценок

		Период 1	Выведение	Период 2
Процедура	Скрининг	Плацебо или далфампридин-ЕК	Плацебо	Плацебо или далфампридин-ЕК	Сопроводительный звонок
посещение 1	посещение 2	посещение 3	посещение 4		посещение 5	посещение 6	посещение 7	посещение 8
сутки -14	сутки I1	сутки 8±1	сутки 15±1		сутки 221 ±1	сутки 29± 1	сутки 36± 1	сутки 43±1
Подписанное информированное согласие	X
Критерии включения/исключения	X
Медицинский анамнез	X
Исследование найденного при предыдущей визуализации (сканирование ΜΚΙ/САТ) для того, чтобы подтверждать ишемический инсульт	X
Физикальное исследование, включающее показатели жизнедеятельности1 2	X	X	X	X		X	X	X
Сопутствующие лекарственные средства /терапия	X	X	X	X		X	X	X
8МА-123	X			X				X
Анализ мочи3,4 5	X
Исследование мочи на беременность3	X	X
Рандомизация		X
801			X	X		X	X	X
Т25РА	X	X	X	X		X	X	X
Коробка и блоки3	X	X	X	X		X	X	X
Тесты на хватание и щипание6	X	X	X	X		X	X	X
РМА	X	X	X	X		X	X	X
ΌΑ5	X	X	X	X		X	X	X
ΡΙΜ	X	X	X	X		X	X	X
СО1			X	X		X	X	X
ΒΌΙ	X	X		X		X		X
Концентрация далфампридина в плазме3		X	X	X		X	X	X
Исследование АЕ	X	X	X	X		X	X	X	X
Выдача исследуемого продукта7		X	X	X		X	X
Учет лекарственного средства			X	X		X	X	X
Конечная оценка состояния8									X

¹ Все измерения выполняют до начала первого лечения на сутки 1 и начала перекрестного на сутки 22.

² Полный физикальный, рост и масса только при скрининге; краткий физикальный при последующих посещениях.

³ Все образцы следует получать после выполнения функциональных клинических оценок.

⁴ Если результат является положительным, необходима подтверждающая культура.

⁵ Тестировать каждую руку, ведущую руку первой

⁶ Три испытания для каждой руки в тесте на хватание, щипок кончиками пальцев, держание ключа и ладонных тестах.

⁷ Выдать недельный запас исследуемого продукта и инструктировать субъекта принимать одну дозу приблизительно каждые 12 ч дома, начав в вечер посещения.

⁸ Сопроводительное посещение по телефону для того, чтобы оценивать нежелательные явления.

6.16.4. Отбор и удаление субъектов.

(а) Критерии включения.

Субъектов можно включать в исследование, если они отвечают всем следующим критериям.

1. История стабильной сенсорно-двигательной недостаточности из-за ишемического инсульта, как подтверждает оценщик с помощью находок при предшествующей визуализации (сканирование МК1/СТ).

2. >6 месяцев после инсульта.

3. Мужчина или женщина в возрасте от 18 до 85 лет включительно.

4. Индекс массы тела (ВМ1) в диапазоне 18,0-35 кг/м² включительно.

5. Отсутствие предшествующего использования Атруга, далфампридина, фампридина или 4аминопиридина (4-АР).

6. Достаточная способность ходить, чтобы выполнить Т25Е^ при скрининговом посещении и при каждом другом посещении, при необходимости.

7. Оценка двигательной функции нижней конечности по Ри§1-Меуег <27.

8. Способность осуществлять все необходимые процедуры в исследовании.

- 52 029558

9. Достаточная когнитивная способность для того, чтобы предоставить информированное согласие, как определяет оценщик.

10. Стабильный режим сопутствующей лекарственной терапии в пределах 4 недель скринингового посещения.

(b) Критерии исключения.

Субъекты, которые отвечали каким-либо из следующих критериев исключения, не могут участвовать в исследовании.

1. Сексуально активная женщина с возможностью деторождения, которую не стерилизовали хирургически меньше чем два года после менопаузы, или не использующая эффективный способ контроля рождаемости.

2. Беременность или кормление грудью.

3. История пароксизмов, за исключением простых фебрильных припадков.

4. Умеренная или тяжелая почечная недостаточность, как определено посредством вычисленного клиренса креатинина <50 мл/мин с использованием уравнения Кокрофта-Голта.

5. Признаки активной инфекции мочевых путей (ИТ1) при скрининговом посещении или в пределах 4 недель до скринингового посещения.

6. Инициация режима прописанных лекарственных средств или терапии в пределах четырех недель до скринингового посещения и/или предположительное изменение режима сопутствующего лекарственного средства или сопутствующей терапии во время хода исследования.

7. Инициация баклофена или тизанидина в пределах четырех недель перед скрининговым посещением или какое-либо изменение схемы дозирования в пределах четырех недель перед скрининговым посещением.

8. Инициация ингибиторов обратного захвата серотонина (88ΚΙ) в пределах 3 месяцев перед скрининговым посещением или какое-либо изменение схемы дозирования в пределах 3 месяцев перед скрининговым посещением.

9. Использование ботулинического токсина в пределах двух месяцев перед скрининговым посещением.

10. История злоупотреблением лекарственного средства или спирта в пределах последнего года.

11. Ортопедические хирургические процедуры на какой-либо из конечностей в пределах последних 6 месяцев.

12. Субъект имеет анормальное лабораторное значение, которое, по суждению оценщика, обладает клинической значимостью и имеет потенциал влияния на способность субъекта безопасно завершить исследование.

13. Нестабильная стенокардия, неконтролируемая гипертензия или какая-либо другая значительная сердечнососудистая аномальность, как посчитает оценщик.

14. Тяжелая депрессия, как показывает оценка >30 по шкале оценки депрессии Бека (ΒΌΙ).

15. Какое-либо другое медицинское состояние, по суждению оценщика, которое будет препятствовать проведению исследования или интерпретации результатов исследования.

16. Участие в исследовательском интервенционном испытании в пределах четырех недель перед скрининговым посещением.

17. Диагноз рассеянный склероз.

(c) Критерии удаления субъектов.

Критерии удаления, которые не являются обязательными, включают одну или несколько из следующих причин:

субъект испытывает нежелательное явление (такое как пароксизм), беременность,

субъект не соблюдает протокол, субъекта невозможно сопровождать,

субъект злоупотребляет спиртом или лекарственными средствами или более не отвечает другим критериям пригодности.

6.16.5. Лечение субъектов.

(а) Вводимое лечение.

Каждый субъект получает 28 доз (А) далфампридина-ЕК 10 мг и 42 дозы (В) плацебо (включая 14 доз во время периода выведения плацебо). Таблетки принимают дома, с водой. Порядок лечения определяют, как описано ниже, в разделе (Ь).

Исследуемый продукт выдают субъекту при посещениях 2, 3, 4, 5 и 6, после завершения оценок. Субъектов инструктируют принимать первую дозу в вечер посещения, а следующую дозу на следующее утро, приблизительно 12 ч позже. Субъектов инструктируют продолжать дозирование каждые 12 ч в моменты, которые согласованы настолько, насколько возможно. Субъектам говорят, что они не должны восполнять пропущенные дозы.

Последняя доза из каждого выданного запаса представляет собой дозу, которую принимают в утро следующего запланированного посещения. Субъектов инструктируют придерживаться режима дозиро- 53 029558

вания, направленного на прием утренней дозы исследуемого продукта за 2 ч до начала запланированных оценок исследования во время посещений для оценки лечения: посещения 3, 4, 6 и 7.

(b) Способ присвоения субъекта группе лечения.

Субъектов рандомизируют при посещении 1 в одну из двух слепых последовательностей лечения (А или В) в соотношении 2:1 соответственно согласно рандомизации, выполненной перед началом исследования:

А: плацебо, затем далфампридин-ЕК,

В: далфампридин-ЕК, затем плацебо,

(c) Маскирование.

Введение лекарственного средства является двойным слепым, что обозначает, что последовательность лечения не известна субъекту или персоналу места исследования.

Период выведения является односторонним слепым, что значит, что персонал места исследования, но не субъект, знает, что в течение этого периода вводят плацебо.

(й) Соблюдение лечения.

Субъектов стимулируют принимать все дозы, как предписано. Мониторинг соблюдения лечения осуществляют через опись числа таблеток в возвращенных бутылках, и посредством взятия образцов крови для определения концентрации далфампридина в плазме во время каждого периода лечения. Любые причине несоблюдения документируют.

(е) Предшествующие и сопутствующие лекарственные средства.

Следующие лекарственные средства исключают в течение всей длительности исследования и также в течение некоторого периода времени перед исследованием с целью поддержания стабильных симптомов:

баклофен или тизанидин, который инициируют или дозу которого модифицируют меньше чем за четыре недели до скринингового посещения,

δδΚΙ, который инициируют или дозирование которого модифицируют меньше чем за 3 месяца до скринингового посещения,

ботулинический токсин, который вводят меньше чем за два месяца до скринингового посещения, другие рецептурные препараты (или терапию), которые инициируют или изменяют меньше чем за 4

недели до скринингового посещения.

Изменения сопутствующего лечения не осуществляют во время исследования, за исключением требований безопасности субъекта.

6.16. Описание исследуемого продукта.

Активный: используют коммерческое лекарственное средство. Таблетки ΑΜΡΥΚΑ (далфампридин) с длительным высвобождением представляют собой от белых до белесых, двувыпуклые, овальной формы, покрытые пленкой, неделимые таблетки с плоской кромкой, с гравировкой "А10" на одной стороне, содержащие 10 мг далфампридина. Неактивные ингредиенты состоят из коллоидного диоксида кремния, гидроксипропилметилцеллюлозы, стеарата магния, микрокристаллической целлюлозы, полиэтиленгликоля и диоксида титана.

Плацебо: таблетки плацебо идентичны по внешнему виду таблеткам ΑΜΡΥΚΑ и содержат те же неактивные ингредиенты.

6.16.7. Процедуры исследования.

В следующих разделах описаны базовые и клинические функциональные измерения, которые получают в этом исследовании. Детализированное расписание процедур по посещениям исследования предоставлено ниже и кратко изложено в табл. 23.

Перед тем как приступать к какой-либо процедуре исследования, субъекты должны предоставлять подписанное информированное согласие.

(a) Концентрация далфампридина в плазме.

Образцы крови для определения концентрации далфампридина в плазме получают после выполнения всех функциональных клинических оценок. Цель этих измерений состоит в оценке соблюдения лечения. Минимум 7 мл цельной крови берут в соответствующим образом маркированные гепариновые пробирки и хранят на холоде (т.е. на влажном льду) до центрифугирования. Незамедлительно после взятия пробирку центрифугируют на низкой скорости и приблизительно 3 мл плазмы переносят из каждого образца в маркированную пробирку. Плазму хранят при -20°С, пока не потребуется отправка в центральную лабораторию. В этот момент замороженные образцы плазмы собирают вместе и посылают в защищенном контейнере, на сухом льду, в течение ночи посредством экспресс-доставки в специализированную центральную лабораторию.

(b) Клинические оценки.

Ходьба на 25 футов на время (Τ25Ρν).

Тест Τ25Ε\ν представляет собой количественную меру функции ходьбы. Субъекта инструктируют идти как можно быстрее от одного конца до другого конца четко маркированной 25-футовой траектории без препятствий. ТЬе Τ25Ρν осуществляют согласно подробным инструкциям, предоставляемым при введении и руководству по оценке, опубликованном в Ναΐίοηαΐ Ми1йр1е δ^τοδίδ δο^Ιν (ИксЬег 1.. е! а1.,

- 54 029558

Νηΐίοικιί МиШр1е 8с1его818 8ос1е1у. 2001; 1-410). Субъект становится мысками обуви на маркированную стартовую линию, а отсчет времени начинают, когда какая-либо часть обуви субъекта пересекает линию. Отсчет времени заканчивают, когда какая-либо часть обуви субъекта пересекает маркированную финишную линию. Время регистрируют в секундах и округляют до ближайшей десятой секунды с использованием секундомера, предусмотренного для этого исследования. Задание дают снова, с периодом отдыха максимум 5 мин, предусмотренным между двумя испытаниями, в виде ходьбы субъекта назад на то же расстояние. Если необходимо, субъект может использовать подходяще вспомогательное устройство. Субъекта нужно инструктировать поддерживать свою нормальную активность без репетиций или практических мер для того, чтобы нечестно улучшать свои оценки между посещениями. При каждой оценке прикладывают все усилия для того, чтобы использовать тоже тестовое помещение и ту же обозначенную область для Τ25Ε\ν. Возможность внешних отвлекающих факторов сводят к минимуму, насколько возможно.

Нормативные данные для скорости ходьбы доступны (Вοйаηηοη К., Аде амб Лдешд. 1997; 26: 1519). Для субъектов в возрасте >18 и <20 лет используют нормативные данные для 208 декадной возрастной группы.

Тест с коробкой и блоками.

Тест с коробкой и блоками (Мабйо\уе1/ V., е! а1., Ат ί Оссир Тйег. 1985; 36(6): 386-391) используют в качестве эффективной и надежной меры ловкости руки. Субъекта инструктируют быстро собирать блоки по одному за раз на одной стороне коробки, переносить каждый блок через разделение на другую сторону коробки и бросать его. Исходно тест разрабатывали для того, чтобы оценивать совокупную ловкость руки взрослых с церебральным параличом. Данные для нормальных взрослых доступны (Вοйаηηοη К., Аде и Лдешд. 1997; 26: 15-19). Для субъектов в возрасте >18 и <20 лет используют нормативные данные для возрастной группы от 20 до 24 лет.

Тест с коробкой и блоками согласованно осуществляют до тестов на щипание и хватание для того, чтобы минимизировать эффекты утомления. Тестируют как ведущую, так и не ведущую руку, начиная с ведущей руки.

Сила руки в тестах на хватание и щипание.

Тест на хватание (Мабио\уе1/ V., е! а1., Агсй Рйу8 Меб КейаЬй. 1985; 66: 69-72) используют в качестве простого, эффективной и надежной меры для того, чтобы идентифицировать проблемы с силой руки, чтобы обнаруживать изменение, которое может являться результатом программы трудовой терапии, течения заболевания или повреждения или показывать соотношение силы пациента и общей популяции. Силу руки измеряют с использованием динамометра.

Тесты на щипание (Ма!йюуек V., е! а1., Агсй Рйу8 Меб КейаЬй. 1985; 66: 69-72) используют в качестве простой, эффективной и надежной меры для того, чтобы идентифицировать проблемы с силой щипания, чтобы обнаруживать изменение, которое может быть результатом программы трудовой терапии, течения заболевания или повреждения или показывать соотношение силы пациента и общей популяции. Он имеет три компонента, щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок. Силу щипания измеряют с использованием прибора для измерения силы щипка.

Каждый раз, когда их измеряют, имеют место три испытания для каждой руки в тесте на хватание, тестах щипка кончиками пальцев, щипка с ключом и ладонного щипка.

Нормативные данные по тестам на хватание и щипание у взрослых доступны (Ма1йю\уе1/ V., е! а1., Агсй Рйу8 Меб КейаЬй. 1985; 66: 69-72). Для субъектов в возрасте >18 и <20 лет используют нормативные данные для возрастной группы от 20 до 24 лет.

Оценка по Рид1-Меуег (РМА).

РМА представляет собой основанную на производительности оценку недостаточности, которую разрабатывали для того, чтобы оценивать двигательную функцию, равновесие, чувствительность и функционирование суставов у пациентов с гемиплегией после инсульта (Рид1-Меуег А.К., е! а1., Зсамб ί КейаЬй Меб. 1975; 7(1): 13-31). Для этого исследования оценивают области двигательной функции верхней конечности (ИЕ), двигательной функции нижней конечности (ЬЕ) и чувствительности (см. табл. 24).

- 55 029558

Таблица 24

Таблица очков для оценки по Ри§1-Меуег Верхняя конечность Нижняя конечность

А. Плечо/Локоть/Предплечье ^Е- Бедро/колено/лодыжка

1- Рефлекторная активность Сгибатели - бицепс (двуглавая мышца)	1. Рефлекторная активность	□
О	Сгибатели - подколенные сухожилия
- сгибатели пальцев	а	-1 Ахилловы сухожилия	□
Разгибатели - трицепс (трехглавая мышца)	а	Разгибатели - надколенные сухожилия	□
11 а. Синергизм (совместное действие) сгибателей	Н. а. Синергизм (совместное действие) сгибателей
Плечо - сгибание	□	Бедро - сгибание	□
- подъем	□	Колено - сгибание	О
- отведение	□
- поворот кнаружи	о	Лодыжка - сгибание назад	□
Локоть - сгибание	□	Ь. Синергизм разгибателей
Предплечье - вращение кнаружи	а	Бедро - разгибание	□
Ь. Синергизм разгибателей		- отведение	□
Плечо - отведение/поворот внутрь	□	Колено - разгибание	п
Локоть - разгибание	□	Лодыжка - сгибание в плоскости	□
Предплечье - вращение внутрь	□	И. Колено - сгибание	□
111, рука - поясничный отдел позвоночника		Лодыжка - сгибание назад	□
Рука - перемещение к поясничному	□	IV. Колено - сгибание	□
отделу позвоночника Плечо - сгибание от 0° до 90°	а	Лодыжка - сгибание назад	□
Локоть 90° - вращение внутрь/вращение кнаружи □	V. Нормальная рефлекторная активность
IV. Плечо - отведение на 0°-90°	□	Сгибатели - подколенные сухожилия	□
- сгибание от 0° до 90°	□	- Ахилловы сухожилия	о
Локоть 0° - вращение внутрь/вращение кнаружи □	Разгибатели - надколенные сухожилия	о
V. Нормальная рефлекторная активность	□	Бедро/колено/лодыжка в целом	□
Плечо/Локоть/Предплечье в целом	о	Р. Координация/скорость
В. Запястье		Тремор	□
Локоть 90° - стабильность запястья	о	Дисметрия	о
Локоть 90° - сгибание/разгибание запястья	о	Скорость	□
Локоть 0° - стабильность запястья	□	Координация/скорость в целом	□
Локоть 0° - сгибание/разгибание запястья	о	Оценка моторики нижней конечности в целом	□
Круговые движения	о	С. Равновесие
Запястье в целом	□	Сидение без опоры	□
С. Рука		Рефлекс Моро, непораженная сторона	□
Одновременное сгибание всех пальцев	о	Рефлекс Моро, пораженная сторона	□
Одновременное разгибание всех пальцев	□	Стояние с опорой	□
Захват а	□	Стояние без опоры	□
Захват Ь	□	Вставание на непораженную ногу	□
Захват с	□	Вставание на пораженную ногу	□
Захват ά	о	Оценка равновесия в целом	□
Захват е	□	Н. Чувствительность
Рука в целом	□	а. Легкое касание
ϋ. Координация/скорость		Рука	□
Тремор	о	Ладонь	□
Дисметрия	о	Нога	а
Скорость	а	Ступня	о
Координация/скорость в целом	□
Оценка моторики верхней конечности в целом	□
Ь. Положение		Движение/Боль
Плечо	□	Бедро - Сгибание □	□
Локоть	о	- Отведение □	□
Запястье	а	- Поворот внутрь □	а
Большой палец (межфаланговое)	□	- Поворот кнаружи О	□
Бедро	□	Колено - Сгибание □	о
Колено	□	- Разгибание □	□
Лодыжка	□	Лодыжка - Сгибание назад □	о
Большой палец ноги	□	- Сгибание в плоскости □	о
Общая оценка чувствительности	□	Ступня - Вращение внутрь □	□
1. Пассивная подвижность сустава/боль		- Вращение кнаружи □	□
в суставе Движение/Боль	Общая оценка пассивной подвижности α	а
Плечо - Сгибание □	□	сустава/боли в суставе ИТОГ
- Отведение >90° о	□	А. Плечо/Локоть/Предплечье	□
- Поворот внутрь О	□	В. Запястье	а
- Поворот кнаружи О	□	С. Рука	□
Локоть - Сгибание о	□	β. Координация/скорость	а
- Разгибание О	□	Верхняя конечность в целом	о
Предплечье - Вращение внутрь О	□	Е. Бедро/Колено/Лодыжка	□
- Вращение кнаружи □	□	Р. Координация/скорость	□
Запястье - Сгибание О	□	Нижняя конечность в целом	□
- Разгибание □	□	С. Равновесие	□
Пальцы - Сгибание О	□	Н. Чувствительность	а
- Разгибание П	□	1. Пассивная подвижность сустава/боль в суставе □ Д	□ Б
		Общая оценка	□

Позиции оценивают по 3-пунктной шкале тяжести. Общую оценку можно определять для каждой области отдельно, а общие оценки ЦЕ и ЬЕ можно комбинировать для общей двигательной оценки.

Шкала оценки недееспособности (БАЗ).

Необязательно осуществляют БАЗ.

БАЗ разрабатывали для того, чтобы оценивать недостаточность в 4 функциональных областях, обыкновенно поражаемых у пациентов со спастичностью верхней конечности после инсульта: персональная гигиена, одевание, боль и положение конечности. Клиницист оценивает уровень недостаточности у субъекта в каждой из этих областей с использованием 4-пунктовой шкалы в диапазоне от "нет недееспособности" до "тяжелой недееспособности". Оценку 4 функциональных областей осуществляют

- 56 029558

согласно следующим руководствам (ВгазБеаг А, е! а1., АгсБ РИуз Мед КеБаЪП. 2002; 83 (10): 1349-54).

Гигиена: оценщик оценивает степень истощения, изъязвления и/или инфекции ладони; чистоту ладоней и рук; легкость поддержания чистоты; легкость подрезания ногтей; и степень помехи, обусловленной связанной с гигиеной недееспособностью в повседневной жизни пациента.

Одевание: оценщик оценивает трудность или легкость, с которой пациент может надевать одежду (например, рубашку, пиджак, перчатки) и степень помехи, обусловленной связанной с одеванием недееспособностью в повседневной жизни пациента.

Положение конечности: оценщик оценивает количество ненормального положения верхней конечности.

Боль: оценщик оценивает интенсивность боли или дискомфорта, связанных со спастичностью верхней конечности.

Каждую из 4 функциональных областей оценивают с использованием следующей шкалы: 0 = нет недееспособности; 1 = легкая недееспособность (заметна, но не препятствует нормальной активности в значительной мере); 2 = умеренная недееспособность (нормальная активность требует увеличенных усилий и/или помощи); 3 = тяжелая недееспособность (нормальная активность ограничена).

Измерение функциональной независимости (ИМ).

Шкала ИМ представляет собой широко используемую оценку недееспособности, которой измеряют, сколько помощи требуется индивидууму для того, чтобы осуществлять активность в повседневной жизни (ЛОБ). Она содержит 18 пунктов: 13 в физической области и 5 в когнитивной области. Оценки основаны на непосредственном наблюдении клинициста, причем каждый пункт оценивают по 7пунктовой шкале в диапазоне от "полной помощи" до "полной независимости". Оценивают следующие сферы: питание, уход за внешностью, купание, одевание верхней части тела, одевание нижней части тела, пользование туалетом, контроль мочевого пузыря, контроль кишечника, перемещение от кровати до стула, перемещение в туалет, перемещение в душ, локомоция (пешеходный уровень или на креслеколяске), лестницы, когнитивное понимание, выражение, социальные взаимодействия, решение проблем, память.

Критерии оценки представляют собой следующее (см. страницу на сайте КеБаЫШаНоп Меазигез Ба1аЪазе). _

7	Полная независимость
6	Измененная независимость
5	Надзор или установки
4	Минимальная контактная помощь (пациент может осуществлять 75% задания или больше)
3	Умеренная помощь (пациент может осуществлять от 50% до 74% задания)
2	Максимальная помощь (пациент может осуществлять от 25% до 49% задания)
1	Полная помощь

Общее впечатление субъекта (801).

3ΘΙ представляет собой широко используемую меру реакции на лечение, в которой субъекта просят оценить эффекты исследуемого лекарственного средства, оказываемые на его физическое благополучие во время предыдущей недели с использованием 7-пунктовой шкалы в диапазоне от "ужасных" до "восхитительных".

Субъектам дают заполнить форму, начинающуюся со следующего: "Мы хотим узнать, что вы думаете об эффектах исследуемого лекарственного средства, оказываемых на ваше физическое благополучие. Что вы думаете об эффектах исследуемого лекарственного средства за последние 7 суток?" Субъекту дают следующие варианты ответа: "ужасно", "плохо", "главным образом неудовлетворительно", "нейтрально/смешанно", "главным образом удовлетворительно", "хорошо" и "восхитительно". Субъекта просят объяснить ответ, который он дал, своими словами.

Общее впечатление клинициста (СО1).

СО1 представляет собой широко используемую меру реакции на лечение, в рамках которой клиницист предоставляет общее впечатление от изменений в неврологическом состоянии и общем состоянии здоровья субъекта после лечения исследуемым продуктом по сравнению с состоянием субъекта на базовом уровне (и не по сравнению с предшествующим посещением). СО1 оценивают согласно 7-пунктовой шкале в диапазоне от "намного лучше" до "намного хуже".

Клиницисту дают форму для заполнения, которая начинается со следующего: "В целом, учитывая симптомы и другие неврологические функции субъекта, как бы вы оценили неврологическое состояние субъекта на сегодняшний день по отношению к его скрининговому посещению? Пожалуйста, рассматривайте только неврологические изменения, безотносительно других факторов". Клиницисту предлагают

- 57 029558

следующие варианты ответа: "намного лучше", "лучше", "немного лучше", "без изменений", "несколько хуже", "хуже" и "намного хуже". Клинициста просят объяснить любой признак изменения, если возможно.

Шкала оценки депрессии Бека (ΒΌΙ).

ΒΌΙ (см. табл. 25) представляет собой широко используемый опросник для самостоятельного описания депрессии, в котором измеряют тяжесть симптомов депрессии. Каждый из 21 пункта оценивают по 4-пунктовой шкале в диапазоне от минимального до тяжелого. Субъектов с тяжелой депрессией, как указывает оценка >30 при скрининге, исключают из участия в исследовании. ΒΌΙ также применяют при других посещениях в качестве одной из клинических оценок.

Таблица 25

Шкала оценки депрессии Бека (ΒΌΙ)

1. Печаль

6. Чувство наказания

0 Я не печален.

0 Я не чувствую, что меня

1 Я много печалюсь.

наказывают.

2 Я печален все время.

1 Я чувствую, что меня могут

3 Я настолько печален или

наказать.

несчастен, что не могу терпеть

2 Я ожидаю, что меня накажут.

- 58 029558

это

2. Пессимизм

0 Меня не разочаровывает мое будущее.

1 Меня мое будущее

разочаровывает больше, чем

должно.

2 Я не думаю, что у меня что-то

получится.

3 Я чувствую, что мое будущее безнадежно и будет только хуже.

3. Прошлые неудачи

0 Я не чувствую себя

неудачником.

1 Я терплю больше неудач, чем

должен.

2 Когда я смотрю в прошлое, я вижу много неудач.

3 Я чувствую, что как человек я полный неудачник.

4. Меньше удовольствия

0 Я получаю столько же удовольствия от вещей, которые мне нравятся, сколько и всегда.

1 Я не получаю столько удовольствия от вещей, сколько

должен.

2 Я получаю очень мало удовольствия от вещей, которые мне нравились.

3 Я не могу получить какое-либо удовольствие от вещей, которые мне нравились.

5. Чувство вины

0 Я не испытываю особой вины.

3 Я чувствую, что меня

наказывают.

7. Отвращение к себе

0 Я думаю о себе то же, что и

всегда.

1 Я потерял уверенность в себе.

2 Я разочарован собой.

3 Я себе не нравлюсь.

8. Самокритика

0 Я не критикую или не порицаю себя больше обычного.

1 Я более критичен к себе, чем

должен.

2 Я критикую себя за все мои

неудачи.

3 Я порицаю себя за все

плохое, что происходит.

9. Суицидальные мысли или

желания

0 Я никогда не думал о том, чтобы убить себя.

1 Я думал убить себя, но я не буду осуществлять это.

2 Я хочу убить себя

3 Я убью себя, если у меня будет шанс.

10. Плачь

0 Я не плачу больше, чем

должен.

1 Я плачу больше, чем должен.

2 Я плачу по любому мелкому

поводу.

3 Я чувствую, будто я плачу,

но я не могу.

- 59 029558

1 Я чувствую вину за многие
вещи, которые я сделал или
которые следовало сделать.
2 Я испытываю некоторую вину
большую часть времени.
3 Я чувствую вину постоянно.
11. Возбуждение	17. Раздражительность
0 Я беспокоен или заведен не	0 Я не более раздражителен,
более обычного.	чем обычно.
1 Я чувствую, что беспокоен или	1 Я более раздражителен, чем
заведен более обычного.	обычно.
2 Я настолько беспокоен или	2 Я значительно более
возбужден, что не могу	раздражителен, чем <	обычно.
сохранять спокойствие.	3 Я раздражителен все время.
3 Я настолько беспокоен или	18. Изменения аппетита
возбужден, что я должен	0 Я не испытываю	какие-либо
двигаться или делать что-то.	изменения аппетита.
12. Потеря интереса	1а Мой аппетит	несколько
0 Я не потерял интерес к другим	меньше обычного.
людям или действиям.	1Ь Мой аппетит	несколько
1 Я меньше интересуюсь другими	больше обычного.
людьми или вещами, чем ранее	2а Мой аппетит	значительно
2 Я потерял большую часть моего	меньше обычного.
интереса к другим людям или	2Ь Мой аппетит	значительно
вещам.	больше обычного.
3 Трудно интересоваться чем-	За У меня вовсе нет	аппетита
либо .	ЗЬ Я ем все время.
13. Нерешительность	19. Проблемы с концентрацией
0 Я принимаю решения	0 Я могу концентрироваться
приблизительно также как	также, как раньше.
всегда.	1 Я не могу концентрироваться
1 Я нахожу, что принимать	также, как обычно.
решения труднее, чем обычно.	2 Мне сложно	сохранять
2 Принимать решения мне намного	внимание на чем либо в течение
сложнее, чем это должно быть.	длительного времени

- 60 029558

3 Я имею проблемы с принятием каких-либо решений.

14. Бесполезность

0 Я не чувствую себя

бесполезным.

1 Я не считаю себя настолько

ценным и полезным, насколько я

должен быть.

2 Я чувствую себя более бесполезным по сравнению с другими людьми.

3 Я чувствую себя совершенно бесполезным.

15. Утрата энергии

0 У меня столько же энергии,

сколько и всегда.

1 У меня меньше энергии, чем должно быть.

2 У меня не достаточно энергии, чтобы делать многое.

3 У меня не достаточно энергии, чтобы делать что-либо.

16. Изменения сна

0 Я не испытываю какие-либо

изменения сна.

1а Я сплю несколько больше

обычного.

1Ь Я сплю несколько меньше

обычного.

2а Я сплю значительно больше

обычного.

2Ь Я сплю значительно меньше

обычного.

За Я сплю большую часть суток. ЗЬ Я просыпаюсь на 1-2 часа

раньше и не могу снова заснуть.

3 Я думаю, что не могу концентрироваться на чем-либо.

20. Усталость или утомление

0 Я устаю или утомляюсь не

больше обычного.

1 Я устаю или утомляюсь легче, чем обычно.

2 Я слишком устал или утомлен, чтобы делать многие из тех вещей, которые должен делать.

3 Я слишком устал или утомлен, чтобы делать большинство из тех вещей, которые должен делать.

21. Потеря интереса к сексу

0 В последнее время я не отмечаю какие-либо изменения в

моем интересе к сексу.

1 Я меньше интересуюсь сексом,

чем должен.

2 Сейчас я значительно меньше

интересуюсь сексом.

3 Я полностью утратил интерес

к сексу.

(с) Последовательность исследования.

В следующих разделах описаны оценки, подлежащие осуществлению при каждом посещении клиники во время исследования.

Посещение 1, от суток -14 до суток -1 (скрининговое посещение).

Оценщик оценивает пригодность для исследования после осуществления следующих процедур. Эти процедуры выполняют в течение 14 суток до рандомизационного посещения. Их осуществляют в порядке, приведенном ниже:

получить подписанное информированное согласие, собрать медицинский анамнез, включая демографическую информацию, проверить предшествующие и сопутствующие лекарственные средства, заполнить ΒΌΙ,

выполнить полный физикальный осмотр,

выполнить стандартные измерения показателей жизнедеятельности сидя, определить рост и массу, вычислить ΒΜΙ, выполнить Т25Р^,

- 61 029558

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки, выполнить РМА, ΩΛδ и ΡΙΜ,

взять образцы крови и мочи для лабораторной оценки (8МА-12, вычисленный клиренс креатинина, анализ мочи и исследование мочи на беременность для женщин с возможностью деторождения),

проверить нежелательные явления,

если субъект подходит, запланировать возвращение субъекта в исследовательский центр в течение

14 суток.

Посещение 2, сутки 1 (рандомизационное посещение, начало периода 1).

Следующие оценки и процедуры осуществляют в порядке, приведенном ниже: выполнить краткий физикальный осмотр,

выполнить измерение показателей жизнедеятельности сидя, выполнить Τ25Ε\ν.

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки, выполнить РМА, ОА§ и ΡΙΜ, заполнить ΒΌΙ,

получить образец крови для концентрации далфампридина в плазме, исследование мочи на беременность для женщин с возможностью деторождения, проверить нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства, рандомизировать в одну из двух последовательностей лечения,

выдать недельный запас назначенного двойного слепого исследуемого продукта с инструкциями принять первую дозу этим вечером. Дополнительные инструкции для субъекта в отношении схемы дозирования см. в разделе 6.16.5(а),

отпустить субъекта и запланировать дату и время следующего посещения через одну неделю (±1 сутки).

Посещение 3, сутки 8.

Следующие оценки и процедуры осуществляют в порядке, приведенном ниже: выполнить краткий физикальный осмотр, выполнить измерение показателей жизнедеятельности сидя, заполнить 8ΟΙ,

выполнить Τ25Ρν,

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки, выполнить РМА, ОА§ и ΡΙΜ, заполнить ССР

получить образец крови для концентрации далфампридина в плазме, проверить нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства,

забрать исследуемый продукт с последнего посещения и выполнить опись лекарственного средства, выдать новый недельный запас назначенного двойного слепого исследуемого продукта с инструкциями принять дозу в этот вечер, приблизительно через 12 ч после последней дозы. Дополнительные

инструкции для субъекта в отношении схемы дозирования см. в разделе 6.16.5(а),

отпустить субъекта и запланировать дату и время следующего посещения через одну неделю (±1

сутки).

Посещение 4, сутки 15 (конец периода 1, начало выведения).

Следующие оценки и процедуры осуществляют в порядке, приведенном ниже: выполнить краткий физикальный осмотр, выполнить измерение показателей жизнедеятельности сидя, заполнить 8СР

выполнить Τ25Ρν,

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки, выполнить РМА, ОА§ и ПМ, заполнить ССР

заполнить ΒΌΙ,

получить образец крови для концентрации далфампридина в плазме и 8МА-12, проверить нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства,

- 62 029558

забрать исследуемый продукт с последнего посещения и выполнить опись лекарственного средства, выдать недельный запас одностороннего слепого плацебо с инструкциями принять первую дозу этим вечером. Дополнительные инструкции для субъекта в отношении схемы дозирования см. в разделе

6.16.5(а),

отпустить субъекта и запланировать дату и время следующего посещения через одну неделю (±1 сутки).

Посещение 5, сутки 22 (конец выведения, начало периода 2).

Следующие оценки и процедуры осуществляют в порядке, приведенном ниже: выполнить краткий физикальный осмотр, выполнить измерение показателей жизнедеятельности сидя, заполнить §0Ι,

выполнить Т25ЕШ,

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки, выполнить ЕМА, ΌΆδ и ΡΙΜ, заполнить СОЕ

заполнить ΒΌΙ,

получить образец крови для концентрации далфампридина в плазме, проверить нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства,

забрать исследуемый продукт с последнего посещения и выполнить опись лекарственного средства, выдать недельный запас перекрестного лечения с инструкциями принять первую дозу этим вечером. Дополнительные инструкции для субъекта в отношении схемы дозирования см. в разделе 6.16.5(а), отпустить субъекта и запланировать дату и время следующего посещения через одну неделю (±1

сутки).

Посещение 6, сутки 29.

Следующие оценки и процедуры осуществляют в порядке, приведенном ниже: выполнить краткий физикальный осмотр, выполнить измерение показателей жизнедеятельности сидя, заполнить §0Ι,

выполнить Т25ЕШ.

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки, выполнить ЕМА, ΌΑδ и ΕΙΜ, заполнить СОЕ

получить образец крови для концентрации далфампридина в плазме, проверить нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства,

забрать исследуемый продукт с последнего посещения и выполнить опись лекарственного средства, выдать новый недельный запас перекрестного лечения с инструкциями принять дозу этим вечером, приблизительно через 12 ч после последней дозы. Дополнительные инструкции для субъекта в отношении схемы дозирования см. в разделе 6.16.5(а),

отпустить субъекта и запланировать дату и время следующего посещения через одну неделю (±1 сутки).

Посещение 7, сутки 36 (конец периода 2).

Следующие оценки и процедуры осуществляют в порядке, приведенном ниже: выполнить краткий физикальный осмотр, выполнить измерение показателей жизнедеятельности сидя, заполнить §0Ι,

выполнить Т25ЕШ,

выполнить тест с коробкой и блоками (ведущая и не ведущая рука, ведущая первой),

выполнить тест на хватание, тесты на щипок кончиками пальцев, щипок с ключом и ладонный щипок; эти тесты выполняют три раза для каждой руки; выполнить ЕМА, ΌΑδ и ΕΙΜ, заполнить СОЕ

заполнить ΒΌΙ,

получить образец крови для концентрации далфампридина в плазме и §МА-12, проверить нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства,

забрать исследуемый продукт с последнего посещения и выполнить опись лекарственного средства.

Не выдавать исследуемый продукт,

отпустить субъекта и запланировать дату и время следующего посещения, посещения по телефону,

- 63 029558

через одну неделю (±1 сутки).

Сопровождение по телефону, сутки 43±1.

Место выполняет сопроводительный телефонный звонок, чтобы проверить любые нежелательные явления или изменения в медикаментозном лечении. Сопроводительный звонок можно осуществлять вплоть до 2 суток до или после суток 43 для того, чтобы учесть конец недели/праздники,

конечная оценка состояния.

6.16.8. Статистика.

(a) Статистическая мощность.

Шестьдесят шесть (66) субъектов рандомизируют в соотношении 2:1 в одну из двух последовательностей лечения: плацебо с последующим далфампридином-ЕК (последовательность а) или далфампридин-ЕК с последующим плацебо (последовательность В). Этот размер выборки обеспечивает достаточные оценки планирования, чтобы помочь в дизайне будущих исследований.

(b) Вторичные конечные точки и обработка данных.

Базовый уровень для анализа определяют как последнюю не отсутствующую оценку перед первой дозой двойного слепого лекарственного средства.

Возраст и время с момента ишемического инсульта вычисляют на основе даты в информированном согласии.

Возраст вычисляют как возраст = [дата информированного согласия - дата рождения]/365,25 с округлением в меньшую сторону до целого числа.

Вычисляют число суток с момента ишемического инсульта: сутки = дата информированного согласия - дата инсульта.

Базовые измерения получают согласно получению, описанному ниже в разделе с названием "Полученные переменные и обработка данных".

(c) Анализ функциональных оценок.

Подробности о вычислении всех применяемых переменных в этом разделе можно найти ниже в разделе с названием "Полученные переменные и обработка данных".

Функциональные оценки.

Функциональные оценки, которые изучают в этом исследовании:

скорость ходьбы, как измеряют посредством теста на ходьбу на 25 футов на время (Τ25ΡΥ),

ловкость руки, как измеряют посредством теста с коробкой и блоками,

сила руки, как измеряют посредством теста на хватание и тестов на щипание,

оценка общей двигательной функции по Рид1-Меуег (РМА) и индивидуальные двигательные оценки:

функция верхней конечности, функция нижней конечности,

спастичность верхней конечности, как измеряют посредством шкалы оценки недееспособности (ОА8),

помощь, необходимая для того, чтобы осуществлять активность повседневной жизни (АЭЬ), с помощью шкалы меры функциональной независимости (Р1М),

шкала общего впечатления субъекта (801), шкала общего впечатления клинициста (С01),

депрессия, как измеряют посредством шкалы оценки депрессии Бека (ΒΌΙ).

Полученные переменные и обработка данных.

Базовый уровень для анализа определяют как последнюю не отсутствующую оценку перед первой дозой двойного слепого лекарственного средства.

Скорость ходьбы.

При каждом посещении проводят два испытания в тесте Τ25ΡΥ. Скорость ходьбы для индивидуального испытания получают (в футах в 1 с) посредством умножения обратного значения времени до завершения ходьбы (в секундах) на 25 (футов). Скорость ходьбы для конкретного посещения исследования получают посредством вычисления средней скорости ходьбы для испытания 1 и испытания 2 в это посещение исследования. Если любое из испытаний отсутствует, то скорость ходьбы для этого посещения представляет собой скорость ходьбы из не отсутствующего испытания.

Тесты на хватание и щипание.

При каждом посещении проводят три испытания для каждого из тестов на хватание и щипание. Реакция для конкретного посещения исследования представляет собой среднее для трех испытаний в этом конкретном тесте. Тест на хватание и тесты на щипание суммируют для ведущей руки и не ведущей руки отдельно.

Тест с коробкой и блоками.

Реакция на тест с коробкой и блоками представляет собой число блоков, перенесенных на другую строну разделителя за 60 с. Переменную реакции не требуется извлекать. Тест с коробкой и блоками суммируют для ведущей руки и не ведущей руки отдельно.

- 64 029558

Оценка по Рид1-Меуег (РМА).

РМА представляет собой меру двигательной и сенсорной недостаточности верхней конечности и нижней конечности, которая состоит из 155 пунктов в 5 областях. Элементарные оценки можно определять для каждой области посредством суммирования оценок по связанным отдельным пунктам. Общую оценку РМА можно создавать посредством суммирования отдельных элементарных оценок областей. Общую оценку РМА и отдельные элементарные оценки областей суммируют отдельно.

Шкала оценки недееспособности (ЭЛЗ).

ЭАЗ используют для того, чтобы оценивать недостаточность в 4 функциональных областях, обыкновенно поражаемых у пациентов со спастичностью верхней конечности после инсульта. Четыре функциональные области анализируют отдельно. Переменную реакции не требуется извлекать.

Шкала меры функциональной независимости (Р1М).

Шкала Р1М представляет собой оценку физической и когнитивной недееспособности, состоящую из 18 пунктов. Для каждого посещения реакция по шкале Р1М представляет собой сумму отдельных реакций по 18 пунктам. Общая оценка может находиться в диапазоне от 18 (наименьший уровень функции) до 126 (наивысший уровень функции).

Шкала общего впечатления субъекта (ЗС).

Для каждого посещения реакция по ЗС представляет собой оценку исследуемого продукта субъектом по его или ее физическому благополучию во время предшествующей недели. Переменную реакции не требуется извлекать.

Шкала общего впечатления клинициста (ССТ).

Для каждого посещения, реакция по ССI представляет собой общее впечатление клинициста от изменений в неврологическом состоянии субъекта и общего состояния здоровья после лечения исследуемым продуктом по сравнению с базовым уровнем. Переменную реакции не требуется извлекать.

Шкала оценки депрессии Бека (ΕΌΙ).

ΒΌΙ представляет собой опросник для самостоятельного описания депрессии из 21 пункта, в котором измеряют тяжесть симптомов депрессии. Для каждого посещения реакция по ΒΌΙ представляет собой сумму отдельных реакций по 21 пункту. Общая оценка может находиться в диапазоне от 0 до 63.

Статистические способы.

Анализ осуществляют для того, чтобы определять эффект далфампридина-ЕК, оказываемый на функциональные оценки. Для каждой из функциональных оценок, за исключением 3ΟΙ и СС. изменение в рамках одного субъекта относительно базового уровня вычисляют в пределах каждого периода лечения:

период 1: оценка при посещении 4 - оценка при посещении 2, период 2: оценка при посещении 7 - оценка при посещении 5.

Для 3ΟΙ и ССI оценку при посещении 4 и оценку при посещении 7 используют в анализе.

Для любой функциональной оценки, если оценка при посещении 4 отсутствует, ее заменяют оценкой при посещении 3. Если оценка при посещении 7 отсутствует, ее заменяют оценкой при посещении 6.

Для всех клинических мер, за исключением 3ΟΙ и СС. осуществляют анализ следующих двух типов. Первый тип основан на различиях в изменениях в рамках одного субъекта относительно базового уровня для периода 1 (плацебо) в сравнении с периодом 2 (далфампридин-ЕК) с использованием 44 субъектов, рандомизированных в последовательность А. Изменения относительно базового уровня между двумя лечениями сравнивают с использованием двустороннего критерия Стьюдента. Анализ второго типа основан на сравнении изменений относительно базового уровня между группами лечения в течение только периода 1. Изменения относительно базового уровня между двумя лечениями сравнивают с использованием двухвыборочного критерия Стьюдента.

Для ЗС и СС также выполняют анализ двух типов. Однако анализ выполняют с использованием результатов ЗС и СС при посещениях 4 и 7, а не изменений относительно базового уровня. Статистические способы, описанные выше, также используют в анализе ЗС и СС

- 65 029558

6.16.9. Литературные источники для примера 16.

- СиЪШ 6. АсиЬе зЬгоке тападетепЬ апб р^епЫоп оЬ

гесиггепсез. Ιη Ενίάθηοθ-Β33θά Ыеиго1оду: МападетепЬ оЬ

пеиго1од1са1 бЬзеазез. В1аскме11 РиЬПзЫпд, МаЬбеп (МА), 2007: рр 113-126.

- 0етаегзсЬа1к, В, Нмапд НМ, Ьеипд 6. 63 созЬ Ьигбеп оЬ

ЬзсЬетЬс зЬгоке: А зузЬетаЫс геЫем. Ат б Мапад Саге. 2010,-16(7) :525-33.

- АтегЬсап НеагЬ АззосЬаЫоп. НеагЬ 01зеазе апб ЗЬгоке

ЗЬаЫзЫсз-2008 ирбаЬе. БаИаз, ТХ: АтегЬсап НеагЬ

АззосЬаЫоп; 2008 : 19.

- Ыоуб-бопез ϋ, Абатз К, СагпеЬЬоп М, еЬ а1. НеагЬ ОЬзеазе апб ЗЬгоке ЗЬаЫзЫсз 2009 ирбаЬе: А НерогЬ Ьгот ЬЬе АтегЬсап НеагЬ АззосЬаЫоп ЗЬаЫзЫсз СоттЬЬЬее апб ЗЬгоке ЗЬаЫзЫсз ЗиЬсоттЬЬЬее. СЫсиЬаЫоп 209,-119:480-486.

- 0νЫаде1е В, Ьубеп Ρ, 3ηνθΓ б, еЬ а1. 01заЫ11Ьу зЬаЬиз аЬ опе топЬЬ 13 а геПаЫе ргоху Ьог Ыпа1 ЬзсЬетЬс зЬгоке оиЬсоте. Ыеигободу 2010;75:688-692.

- Сагоб-АгЬа1 б, Едббо 6А, Сопга1ег бЬ, еЬ а1. фиаЫЬу оЬ ЫЬе атопд ЗЬгоке зипЫогз Θν3ΐη3ίθ6 1 уеаг аЬЬег ЗЬгоке. ЗЬгоке. 2000,-31 :2995-3000.

- Агепе Ν, Н1б1ег б. ТбпбегзЬапбЬпд тоЬог ЬтраЫтепЬ ίη ЬЬе рагеЫс 1омег ЫтЬ аЬЬег ЗЬгоке: А геЫем оЬ ЬЬе ЫЬегаЬиге. Тор ЗЬгоке НеЬаЫ1. 2009 ЗерЬ-ОсЬ;16(5):346-356.

- 01туап М, СоЬеп Ь. Иеигор1азЫс1Ьу ίη ЬЬе сопЬехЬ оЬ тоЬог геЬаЫЫЬаЫоп аЬЬег зЬгоке. ЫаЬ Ηθν Ыеиго1. 2011,-7:7685.

- ЕоггезЬег Ь, ИЬеаЬоп Ь, ЬиЬЬ А. ЕхегсЬзе-тебЬаЬеб 1осотоЬог Γθοονθ^ апб 1омег-ЫтЬ пеигор1азЫс1Ьу аЬЬег зЬгоке. б НеЬаЬ Нез ϋθν. 2 008,-45(2):205-220.

- Абатз НР, ВепбЬхеп ВН, Каре11е Ьб, еЬ а1. С1азз1ЫсаЫоп оЬ зиЬЬуре оЬ асиЬе ЬзсЬетЬс зЬгоке. ОеЫпШопз Ьог изе ίη а ти1ЫсепЬег сЫп1са1 ЬЫа1. ТОАЗТ. ТЫа1 оЬ Огд 10171 ίη асиЬе зЬгоке ЬгеаЬтепЬ. ЗЬгоке 1993;24:35-41.

- Абатз НР, Ое1 Ζορρο 6, А1ЬегЬз М, еЬ а1. БшбеПпез Ьог ЬЬе еаг1у тападетепЬ оЬ аби1Ьз ЫЬЬ ЬзсЬетЬс зЬгоке: А диЬбеЫпе Ьгот ЬЬе АтегЬсап НеагЬ АззосЬаЫоп/АтеЫсап Згоке АззосЬаЫоп ЗЬгоке СоипсЫ, СЫп1са1 Сагб1о1оду СоипсЫ, 3ηη6ίονη3ου1ηΓ Наб1о1оду апб 1пЬе^епЫоп СоипсЫ, апб ЬЬе АЬЬегозс1егоЫс РеЫрЬега1 Уазси1аг ОЬзеазе апб ОиаЫЬу оЬ Саге ОиЬсотез ίη гезеагсЬ 1пЬегб1зс1р11пагу ИогЫпд Сгоирз. ЗЬгоке 2007; 38: 1655-1711.

- ИесЬз1ег Ь. 1тадЬпд Ενη1υη5ίοη оЬ АсиЬе ЬзсЬетЬс ЗЬгоке. ЗЬгоке 201 1;42(зирр1 1):312-315.

- Тау1ог ΤΝ, ОаЫз РН, Тогпег 6С, еЬ а1. ЫЬеЫте созЬ оЬ зЬгоке ίη ЬЬе ТбпЬЬеб ЗЬаЬез. ЗЬгоке 1996; 27(9):1459-14 66.

- Сообтап Αϋ, Вгомп ТН, СоЬеп 6А, еЬ а1. Оозе сотраЫзоп ЬЫа1 оЬ зизЬа1пеб-ге1еазе ЬатрЫбЬпе ίη ти1Ыр1е зс1егоз1з. Ыеиго1оду. 2008; 71:1134-1141.

- 66 029558

- бообтап Αϋ, Вгомп ТЕ, Кгирр ЬВ, ек а1. 5изкакпеб-ге1еазе ога1 £атрг1сИпе ίη ти1Е1р1е зс1его51з: а гапбопАгеб, боиЫе ЪАпб, сопкгоНеб Ег1а1. Ьапсек. 2009;373:732-38.

- бообтап Αϋ, Вгомп ТН, Ебмагбз КН, ек а1. А РЬазе 2 Ег1а1 о£ ехкепбеб ге1еазе ога1 ба1£тарг1б1пе ίη ти1Е1р1е зс1егоз1з. Апп Ыеиго1. 2010;373:494-50.

- Мепоп В, ЗЬогуоп 3. 1зсЬает1с зкгоке ίη аби1кз апб ерИерзу. ЕрИерзу Нез. 2009;87: 1-11.

- ЬаЬоУ1кг ϋ, Наизег А, Зассо Н. Ргеча1епсе апб ргеб1скогз о£ еаг1у зе1гиге апб зкакиз ерИер£1сиз аккег £1гзк зкгоке. Ыеиго1оду. 2001,-57:200.

- Зрогкту Р, Ые1тап Е, Апбг1о1а М, ек а1. А ргаск1са1 геу1ем апб арргоаск ίο розкзкгоке зе1гигез. Неч Ыеиго1 ϋί3. 2011; 8(1/2): 10-15.

- В1аб1п С, А1ехапбгоч А, ВеПачапсе А, ек а1. Зе1гигез аккег зкгоке: А ргозресЫче ти1Е1сепкег зкибу. Агск Ыеиго1. 2000; 57: 1617-1622.

- Зга£1агзк1 б, Наск1еу А, К1е1пбог£ег ϋ, ек а1. 1пс1бепсе о£ зе1гигез ίη кке асике рказе о£ зкгоке: А рори1ак1оп-Ьазеб зкибу. ЕрИерз1а. 2008; 49(6):974-981.

- Кгаком К, 3ίίζθΓ М, Нозепом Е, ек а1. Ргеб1скогз о£ асике розк-зкгоке зе1гигез. СегеЬгочазс ϋί3. 2010; 30:584-589.

- Ие1 Ь, Уи ЗР, боккгоп Е, ак а1. Роказз1ит скаппе1 Ыоскегз аЕЕепиаЕе Ьурох1а апб 1зскет1а-1пбисеб пеигопа1 беакк ίη νίίΓΟ апб ίη νίνο. ЗЕгоке 2003; 34: 1281-1286.

- Ниапд Н, бао Т, бопд Ь, ек а1. Роказз1ит скаппе1 Ыоскег ТЕА ргеуепкз СА1 Ырросатра1 1пзигу £о11ом1пд кгапз1епк £огеЬга1п 13сЬет1а ίη аби1Е гакз. Ыеигозс1 ЬеЕЕ. 2001; 83-86.

- Ва1пз б, Ео11ме11 М, ЬакскАогб К, ак а1. 31ом1у 1паск1Уак1пд роказз1ит сопбискапсе (Ю): А рокепк1а1 кагдек ког зкгоке ккегару. ЗЕгоке 2001;32:2624-2634.

- Е1зсЬег б, ек а1. ТЬе Ми1Е1р1е Зс1егоз1з ЕипсЫопа1 Сотроз1ке Абт1п1зкгак1оп апб Зсог1пд Мапиа1. Ыак1опа1 Ми1Е1р1е Зс1егоз1з Зос1еку. 2001; 1-41.

- Вокаппоп Н. СотЕогкаЫе апб тах1тит ма1к1пд зрееб о£ аби1кз адеб 20-79 уеагз: гекегепсе уа1иез апб бекегпАпапкз. Аде

- 67 029558

апЛ Аде1пд. 1997; 26: 15-19.

- МаШоме1г V, Уо11апЬ 6, КазЬтап N , ек а1. Ас!и1к погтз

£ог кЬе Вох апЛ В1оск Тезк о£ тапиа1 Ьехкег1ку. Ат Ц Оссир

ТЬег. 1985; 36(6): 386-391.

- МакЫомекг V, КазЬтап Ν, Уо11апЬ 6, ек а1. 6г1р апЛ р1псЬ зкгепдЬЬ; погтакз-ме Лака ког аЬи1кз. АгсЬ РЬуз МеЬНеЬаЫ1. 1985; 66:69-72.

- Рид1-Меуег АН, Ьаазко Ъ, Ъеутап I, 01ззоп 3, ЗкедИпЬ 3.

ТЬе розк-зкгоке Ьет1р1ед1с раЫепк: а текЬоЬ ког ема1иаЫоп ок рЬуз1са1 регкогтапсе. ЗсапЬ Ь НеЬаЫ1 МесЬ 1975; 7(1): 13-31.

- СоЬе ок РеЬега1 Неди1ак1опз, Т1к1е 21 Ροοά апс! Огидз.

1п: Зе1ескеЬ Неди1ак1опз апЬ 6и1Ьапсе ког Огид ЗкиЫез.

РЫ1аЬе1рЫа, РА: С11п1са1 НезеагсЬ Незоигсез; Ηθν. АргИ 1,

2006.

- Иог1Ь МесИса1 Аззос1аЫоп. 0ес1агаЫоп ок Не1з1пзк1:

ЕкЫса1 Рг1пс1р1ез ког МеЫса1 НезеагсЬ 1пмо1м1пд Нитап ЗиЬдескз. Не1з1пк1, Р1п1апЬ, Ьипе 1964.

- ВгазЬеаг А, Ьакопке Н, Согсогап М, ек а1. 1пкег-апЬ 1пкгагакег геПаЫШу ок кЬе АзЬмогкЬ Зса1е апс( кЬе ОкзаЫНку Аззеззтепк Зса1е ίη рак1епкз м1кЬ иррег-ИтЬ розкзкгоке зразк1с1ку. АгсЬ РЬуз Мес! НеЬаЫ1. 2002; 83(10): 1349-54.

6.17. Пример 17. Эффекты перорального введения 4-АР: восстановление функции после закупоривания СМА (ЗСМА) у крыс. Слепое исследование с эскалацией дозы и наполнителем в качестве контроля.

4-АР оценивали по его способности улучшать положительную динамику сенсорно-двигательной функции после ишемического инсульта у крыс со стабильной двигательной недостаточностью в моменты времени, удаленные от ишемического события. Животная модель ишемического инсульта, т.е., модель ЗСМА, которую использовали в этом примере, является такой же, как животная модель, описанная в примере 2.

В модели ЗСМА восстановление начинает выходить на плато к 4 неделе после ЗСМА, и в это время все еще имеет место измеримая недостаточность сенсорно-двигательной функции. Однако через 4 недели после ЗСМА все еще может иметь место медленное продолжающееся эндогенное восстановление. По этим причинам лечение в этом примере инициировали на сутки 56 после ЗСМА, в момент времени, еще более удаленный от начального ишемического события, чтобы позволить животным достичь более стабильного уровня сенсорно-двигательной недостаточности после эндогенного восстановления.

Схема эксперимента.

В этом эксперименте крыс δρ^а§ие Ба^1еу подвергали хирургическому вмешательству, которое вело к закупориванию срединной мозговой артерии (ЗСМА), лечили наполнителем (водой) или 4аминопиридином, как описано ниже, и подвергали поведенческим оценкам, как описано ниже.

Животные: использовали 30 самцов крыс δρ^адие Ба^еу, 300-400 г (получены из Скаг1е§ КАег ЬаЬога!опе§, прибывали за 7-10 суток до хирургического вмешательства, 250-275 г). Животных случайным образом приписывали к группам лечения.

Номенклатура: номенклатура для суток исследования представляет собой следующее: сутки 0 представляют собой сутки ЗСМА, а следующие сутки нумеруют последовательно (сутки 1, сутки 2, сутки 3 и т.д.); сутки -1 представляют собой сутки перед ЗСМА.

Подробности группировки: количество времени, необходимое для некоторых процедур в этом исследовании, требовало разбить 2 группы лечения (ниже см. табл. 26) на 4 рабочие группы. В сутки вызывающему инсульт хирургическому вмешательству подвергали шесть животных. Если животное погибало во время 8-суточного хирургического периода исследования, его заменяли запасным. Если нет, животное не заменяли. Большинство смертей животных (<5% в общем) наступало в период первых 7 суток после операции.

Анестезия: анестезию осуществляли, как описано выше в примере 2.

Температура: 37,0±1°С.

Хирургическая процедура: хирургическую процедуру осуществляли, как описано выше в примере

2.

Послеоперационный мониторинг: послеоперационный мониторинг осуществляли, как описано выше в примере 2.

- 68 029558

Временная диаграмма содержания хирургического вмешательства и инъекций: временная диаграмма содержания, хирургического вмешательства и инъекции такая же, как описано выше в примере 2.

Лечение и дозирование: крыс лечили в соответствии со схемой лечения, представленной в табл. 26. Дозирование показано в табл. 27. 4-Аминопиридин растворяли в воде для инъекций (ТО!, Се11дго) и осуществляли стерильное фильтрование. Растворы по 0,25, 0,5 и 1,0 мг/мл 4-аминопиридина доставляли посредством желудочного зондового кормления по 2 мл/кг для конечных доз 0,5, 1 или 2,0 мг/кг соответственно. Лечение наполнителем в качестве контроля представляло собой доставку Ш1! по 2 мл/кг посредством желудочного зондового кормления. Начиная с суток 56 после ЗСМА, животные получали желудочное зондовое кормление растворами (2 мл/кг) приблизительно через 12 ч. Группу наполнителя в качестве контроля лечили водой для всех доз в сутки 56-65. Для группы лечения шесть доз 4аминопиридина по 0,5 мг/кг доставляли в течение суток 56-59, за которыми следовали шесть доз по 1,0 мг/кг в течение суток 59-62 и шесть доз по 2,0 мг/кг в течение суток 62-65. Животных во всех группах не лечили в течение суток 66-70. р.о. = перорально.

Таблица 26

	Фаза эндогенного восстановления нет лечения (с поведением тестов в сутки -1, 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56)	Сутки лечения 56 (вечер)-59 (утро) (поведение тесты на сутки 59). Перорально два раза в сутки	Сутки лечения 59 (вечер)-62 (утро) (поведение тестов на сутки 62). Перорально два раза в сутки	Сутки лечения 62 (вечер)-65 (утро) (поведение тестов на сутки 65 и 70). Перорально два раза в сутки
Группа 1 (п=15)	Сутки 1-56	Наполнитель (вода)	Наполнитель (вода)	Наполнитель (вода)
Группа 2 (п=15)	Сутки 1-56	Низкая доза 4-АР	Средняя доза 4-АР	Высокая доза 4-АР

Таблица 27

Идентификатор лечения	Лечение
V	Наполнитель (вода)
Низкая доза	0,5 мг/кг 4-АР два раза в сутки перорально
Средняя доза	1 мг/кг 4-АР два раза в сутки перорально
Высокая доза	2,0 мг/кг 4-АР два раза в сутки перорально

Группы лечения: животные имели вызывающее ЗСМА хирургическое вмешательство и им предоставляли возможность восстанавливаться в течение 56 суток. Затем животных рандомизировали на 2 группы, основываясь на их базовом поведении. Пероральное дозирование два раза в сутки инициировали вечером суток 56 после ЗСМА. Тестирование поведения во время периодов дозирования начинали через 1 ч после дозирования. Брали кровь из подкожной вены прямо перед фазами лечения и во время них прямо после поведенческого тестирования (90 мин после дозирования). Все дозирование осуществляли посредством желудочного зондового кормления, объем не превышал 2 мл/кг.

Получение образцов крови: образец крови 300 мкл брали из подкожной вены каждого животного на сутки 56 прямо перед первой дозой и затем точно через 90 мин после 6 дозы при каждом уровне дозы. Кровь брали, центрифугировали, хранили и анализировали, как описано выше в примере 2.

Подробности поведенческих тестов: поведенческие оценки осуществляли с помощью оценщиков, которые не имели информации о назначенном лечении. Слепые оценки сенсорно-двигательной функции осуществляли прямо перед вызывающим ЗСМА хирургическим вмешательством, через 24 ч после вызывающего ЗСМА хирургического вмешательства и еженедельно после этого до первой фазы дозирования с использованием тестов на размещение конечности и поведенческих тестов на качание туловища. Как описано выше, поведенческие оценки точно синхронизировали с временем дозирования. Животным давали первую дозу, осуществляли поведенческую оценку, начиная через 60 мин. Животных тестировали через один час после 6 дозы для каждого уровня дозы (на сутки 59, 62 и 65) и в конце 5 суток выведения на сутки 70.

Размещение конечности: оценивали на сутки -1 (до операции), 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 59, 62, 65, 70. Тест на размещение конечности делили на тесты передней конечности и задней конечности. Тест на передней конечности и размещение задней конечности и оценивание этих тестов описаны выше в примере 2.

Качание туловища: оценивали на сутки -1 (до операции), 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 59, 62, 65, 70. Тест на качание туловища и оценивание этого теста описаны выше в примере 2.

Эвтаназия и обработка после смерти: на сутки 70 после ЗСМА крыс анестезировали, как описано выше в примере 2.

- 69 029558

Измерение инфаркта: измерение инфаркта осуществляли, как описано выше в примере 2.

Статистические способы: изменения относительно базовых значений до лечения (сутки 56) вычисляли для каждой поведенческой оценки в каждый момент времени, оцениваемый после дозирования. Данные средних поведенческих параметров подвергали дисперсионному анализу (ЛNОVА). Данные объема инфаркта анализировали посредством ЛNОVА. Все данные выражали в виде средних ± стандартная ошибка среднего.

Соблюдение регламентирующих норм: соблюдали те же регламентирующие нормы для исследования, которые описаны выше в примере 2.

Обеспечение качества (фА): качество исследования обеспечивали так же, как описано выше в примере 2.

Результаты.

Обе группы животных (которые лечили наполнителем и 4-аминопиридином) демонстрировали типичные восстановительные реакции на вызванную ЗСМА ишемию с нормальными оценками 0 прямо перед хирургическим вмешательством (сутки -1), за чем следовала полная утрата функции (оценка 12, передняя конечность; 6, задняя конечность) в течение 24 ч после закупоривания (сутки 1). Во время следующих 8 недель, фазы без лечения, происходило улучшение оценок передней конечности и задней конечность приблизительно до 4,5 и 2,5 (соответственно) и восстановление приближалось к уровню плато (см. фиг. 11 и 12). В частности, после полной утраты функции животные восстанавливались частично и достигали плато приблизительно суток за 30. Животные оставались на этом уровне функции до суток 56, когда инициировали лечение.

Сенсорно-двигательную функцию оценивали с использованием тестов на размещение передней конечности и задней конечности и теста на качание туловища. Тест на размещение передней конечности демонстрирует эффект лечения, оказываемый на функцию передней конечности (см. фиг. 11). Тест на размещение задней конечности демонстрирует эффект лечения, оказываемый на функцию задней конечности (см. фиг. 12). Тест на качание туловища демонстрирует эффект лечения, оказываемый на общее владение телом (см. фиг. 13).

Группа наполнителя демонстрировала небольшие и статистически не значимые изменения поведения по сравнению с последней оценкой перед инициацией доз. В отличие от этого животные, которые получали 0,5 мг/кг 4-аминопиридина (низкая доза) значительно улучшали размещение передней конечности (р<0,001) по сравнению с наполнителем (см. фиг. 11, сутки 59). Оценка размещения задней конечности улучшалась при низкой дозе, но не достигала значимости (см. фиг. 12, сутки 59). Увеличение дозы 4-аминопиридина до 1 мг/кг вело к измеримой положительной динамике в тестах как передней конечности, так и задней конечности (р<0,001 и р<0,05 соответственно фиг. 11 и 12, сутки 62) по сравнению с наполнителем. Конечная эскалация дозы до 2 мг/кг 4-аминопиридина связано со значительной положительной динамикой как функции передней конечности, так и задней конечности (р<0,0001 и р<0,001 соответственно фиг. 11 и 12, сутки 65) по сравнению с животными, которых лечили наполнителем. Когда лечение отменяли на 5 суток, положительная динамика частично спадала в непосредственных оценках, хотя оценка задней конечности оставалась больше, чем в группе, которую лечили наполнителем (р<0,05, фиг. 12, сутки 70). Может быть так, что пролонгированный и согласованный период доз требует дополнительного времени для полного выведения по сравнению с группой, которую лечили наполнителем. Однако, с учетом короткого времени полужизни 4-аминопиридина в сыворотке, более вероятно, что может иметь место эффект тренировки за счет повторного тестирования, который возникал в течение относительно короткого периода времени. Животные, которых лечили наполнителем, сохраняли стабильную недостаточность, поскольку только легкую положительную динамику наблюдали у животных, которых лечили наполнителем, во время всего хода фазы лечения.

Таким образом, на фиг. 11 показано, что лечение низкой дозой, средней дозой или высокой дозой 4аминопиридина, через 8 недель после ишемического повреждения головного мозга, является эффективным для того, чтобы улучшать функцию передней конечности у крыс. Фиг. 11 также указывает на то, что эффект зависит от дозы. Этот эффект также является обратимым, поскольку он уменьшается после отмены лекарственного средства. Фиг. 12 указывает, что лечение низкой дозой 4-аминопиридина 8 недель после ишемического повреждения может быть эффективным для того, чтобы улучшать функцию задней конечности у крыс, и указывает на то, что лечение средней или высокой дозой 4-аминопиридина 8 недель после ишемического повреждения головного мозга является эффективным для того, чтобы улучшать функцию задней конечности у крыс. Кроме того, фиг. 12 указывает на то, что этот эффект зависит от дозы, поскольку лечение более высокой дозой ведет к улучшенной поведенческой оценке по отношению к лечению более низкой дозой или наполнителем в качестве контроля. Фиг. 12 также указывает на то, что эффект является, по меньшей мере, частично обратимым.

Эффективность в отношении качания туловища не охарактеризовывали широко в оцениваемые моменты времени. Хотя, по-видимому, имел место лечебный эффект в виде эффективности в отношении качания туловища, при первой оценке на лекарственном средстве (сутки 59) по сравнению с оценкой до лечения на сутки 56, нельзя сделать заключение по данным в целом в свете расхождения асимметрии качания туловища, которую наблюдали между группами наполнителя и 4-аминопиридина до инициации

- 70 029558

лечения (фиг. 13). Следует отметить, что возраст и размер животных, используемых в этом примере, был значительно больше, чем в исследовании, представленном в примере 2, что могло играть роль в общей мотивации и работоспособности животных в этом конкретном тесте.

Уровни 4-аминопиридина в плазме: образцы крови брали, когда животные, которые получали лечение наполнителем, имели уровни 4-аминопиридина ниже нижнего предела количественного определения для способа. Образцы, взятые, когда животные получали 4-аминопиридин, подтверждали воздействие в момент поведенческого тестирования, соответствующим образом связанное с уровнем дозы. Уровни 4аминопиридина в плазме представлены в табл. 28.

Таблица 28

Уровни 4-аминопиридина в плазме

Лечение	Средний	(ЗЕ	уровень 4-аминопиридина в плазме (нг/мл)
	Уровень дозы (мг/кг)
	0,5	1,0	2,0
4-аминопиридин	68,3 (3,3)	114,0 (5,5)	184,7 (13,1)
Наполнитель	ВЪО<2*		ВЬО<2*	ВЬО<2*
(вода)

8Е - стандартная ошибка;

*ВЬО0 - ниже нижнего предела количественного определения (<1,0 нг/мл).

Соответственно данные показывают значительную обратимую и зависимую от дозы положительную динамику сенсорно-двигательной функции передней конечности и задней конечности в моменты времени, когда 4-АР находился на поддающихся обнаружению уровнях в плазме животных.

В табл. 29 показано, что различия в объеме инфаркта не наблюдали между наполнителем (вода) и 4аминопиридином.

Таблица 29

Группа	Средний (ЗЕ) объем инфаркта (%)
Наполнитель (вода)	38,5 (2,4)
4-АР	40,0 (2,3)

8Е = стандартная ошибка.

Анализ объема инфаркта ткани головного мозга включали в исследование в качестве типичной меры исхода для доклинических исследований инсульта. Различия в объеме инфаркта не наблюдали между какими-либо группами в ходе этого исследования, и объемы инфарктов также схожи между исследованиями, представленными в этом примере и в примере 2.

- 71 029558

Литературные источники для примеров 2 и 17.

1. Кодег УЪ, Со АЗ, Ъ1оуб- Допез ЪМ, еЪ а1. НеагЪ сИзеазе апб зЪгоке 3£η£ί3θίθ3— 2012 ирбаке: а герогЪ £гот ЪНе Атег1сап НеагЪ АззосМаПоп. С1гси1аЪ1оп 2012; 125:е2-е220.

2. СЫба Υ, КокиЪо Υ, Зако 5, ек а1. ТЬе а1ЪегаЪ1опз о£ оИдобепбгосуке, туеПп ίη согриз са11озит, апб содпИАше буз£ипсЫоп £о11ом1пд сНгоп1с сегеЬга1 1зс]ает1а ίη гакз. Вга1п Кез 2011; 1414:22-31.

3. АЬои1-Епе1п В, КаизсНка Н, Когпек В, ек а1. Рге£егепЪ1а1 1озз о£ туеИп-аззос1акеб д1усоргоке1п ге£1ескз Нурох1а-Ике мЫЪе таккег батаде ίη зкгоке апб 1п£1аттакогу Ьга1п б1зеазез. Д ЫеигораЪЪоД Ехр Ыеиго1 2003; 62:25-33.

4. Но РИ, Кеикепз ОС, РЬап ТС, ек а1. 1з мЫЪе таккег

ίηνο1νθ6 ίη ра-Ыепкз епкегеб ίηίο Ъур1са1 Ъг1а1з о£

пеигоргокесЫоп? Зкгоке 2005; 36:2742-4.

5. ЫпбепЬегд К, Кепда V, гНи ЪЪ, ВекгДег Е, А1зор ϋ,

ЗсЫаид 6. ЗЪгискига1 ЕпкедгЮу о£ согЪ1созр1па1 токог £1Ьегз

ргебДскз токог ДтраДгтепк ίη сЬгопДс зкгоке. Ыеиго1оду 2010; 74:280-7.

6. Ыои ЪМ, СНеп СЕ, Сио УС, ек а1. СегеЬга1 мЫЪе таккег НурегЪпкепзЫЪез ргебЪск £ипсЫопа1 зкгоке оиксоте. СегеЬгошазс ϋί3 2010; 29:22-7.

- 72 029558

7. Рапкоп1 Ъ, 6агс1а ИН, СиНеггег ИА. СегеЬга1 мЬЛе

таккег 13 ЫдЫу ми1пегаЫе ίο 15сЬет1а. Зкгоке 1996; 27:16416.

8. Иахтап 36, Косз1з ЛО, Зкуз РК. ТЫ ахоп : зкгискиге, кипскаоп, апб раккор]ауз1о1оду. Νθμ Уогк: Охкогб ип1мегз1ку Ргезз; 1995.

9. Иахтап 36. 1оп скаппе1з апб пеигопа1 бузРипсЫоп ίη ти1"Ыр1е зс1егоз1з. Агск Ыеиго1 2002; 59: 1377-80.

10. Ыаз]ат1 К, ЕеЬИпдз Мб. Мескап1зтз ок ахопа1 бузРипсЫоп аккег зр1па1 согб 1пзигу: м1кк ап етрказ1з оп кке го1е ок νοΙ-Ьаде-дакеб роказз1ит скаппе1з. Вга1п Кез Вга1п Кез Ηβν 2001; 38: 165-91.

11. Ыаз]ат1 К, ЕеЬИпдз Мб. бкапдез ίη ахопа1 ркуз1о1оду апб тогркю1оду аккег скгоп1с сотргеззНе 1пзигу ок кбе гак кЫгаНс зр1па1 согб. Ыеигозс1епсе 2001; 104:235-51.

12. Тагд ЕЕ, Косз1з 6Ό. 4-Ат1поруг1б1пе 1еабз ко гезкогак1оп о£ сопбиск1оп ίη бетуеИпакеб гак зс1ак1с пегме. Вга1п Нез 1985; 328:358-61.

13. ЗЬеггакк КМ, Возкоск Н, Зеагз ТА. Еккескз ок 4ат1поруг1б1пе оп погта1 апб бетуеИпакеб таттаИап пегме НЪгез. Ыакиге 1980; 283:570-2.

14. Возкоск Н, Зеагз ТА, ЗЬеггакк КМ. ТЬе еккескз ок 4ат1поруг1б1пе апб кекгаекку1аттоп1ит 1опз оп погта1 апб бетуеИпакеб таттаИап пегме НЪгез. б РЪуз1о1 1981; 313:30115.

15. ЗЫ К, ВИдЪк АК. О1ккегепк1а1 еккескз ок 1ом апб ЫдЪ сопсепкгак1опз ок 4-ат1поруг1б1пе оп ахопа1 сопбиск1оп ίη погта1 апб 1пзигеб зр1па1 согб. Ыеигозс1епсе 1997; 77:553-62.

16. бепзеп 6М, ЗЫ К. Еккескз ок 4-ат1поруг1б1пе оп зкгексЪеб таттаИап зр1па1 согб: кЪе го1е ок роказзЫт сЪаппеЫ ίη ахопа1 сопбисНоп. б ЫеигорЪуз1о1 2003; 90:2334-40.

17. ВИдЪк АК. Еккеск ок 4-ат1поруг1б1пе оп ахопа1 сопбисНоп-Ыоск ίη скгопк зр1па1 согб 1пзигу. ВгаН Кез ВиИ 1989; 22:47-52.

18. Науез Кб. ТЫ изе ок 4-ат1поруг1б1пе (катрНбНе) ίη бетуеИпаНпд бтзогбегз. ЦНб Ргид Κθν 2004; 10:295-316.

- 73 029558

19. Сагбепаз ϋϋ, ϋίίηηηο Я, 6гаг1ап1 V, ек а1. Рказе 2 кг1а1 о£ зизка1пеб-ге1еазе £атрг1сИпе ίη сЬгоп1с зр1па1 согб 1п:)игу. Зр1па1 Согб 2007; 45: 158-68.

20. Сообтап Αϋ, Вгомп ТН, СоЬеп 6А, ек а1. Оозе сотраг1зоп 5г1а1 о£ зизка1пеб-ге1еазе £атрг1сИпе ίη ти1к1р1е зс1егоз1з. Ыеиго1оду 2008; 71: 1134-41.

21. Сообтап Αϋ, Вгомп ТН, Ебмагбз КН, ек а1. А рЬазе 3 5г1а1 о£ ехкепбеб ге1еазе ога1 ба1£атрг1б1пе ίη ти1к1р1е зс1егоз1з. Апп Ыеиго1 2010; 68:494-502.

22. Ве1ач1с 6М. Оа1£атрг1сИпе (Атруга) ког ти1к1р1е зс1егоз1з. Ыигзе Ргаск 2010; 35:7-9.

23. 6и1бе ίο кке саге апб изе о£ 1аЬогакогу ап1та1з. 2011.

24. Татига Α, Сокок О, Запо К. [Роса1 сегеЬга1 1п£агс£1оп ίη кке гак: I. ОрегаШче кесЬп1дие апб рбуз1о1од1са1 топ1£ог1пдз ког скгоп1с тобе1]. Νο То ЗЫпке1 1986; 38:747-51.

25. ϋθ Нуск М, Уап Неетркз б, ВиукзсЬаечег Н, Уап Оеигеп В, СИпске 6. Ыеосогк1са1 1осаИгак1оп о£ каскИе/ргорг1осерк1че ИтЬ р1ас1пд геасИопз ίη кке гак. Вга1п Нез 1992; 573:44-60.

26. Вог1опдап СУ, ЗапЬегд РН. Е1ечакеб Ьобу зм1пд кезк: а пем Ьекач1ога1 рагатекег ког гакз м1кЬ б-кубгохуборапыпе1пбисеб Ьет1рагк1пзоп1зт. б Ыеигозс1 1995; 15:5372-8.

27. Сгатег ЗС. Нера1г1пд кке Ьитап Ьга1п аккег зкгоке: I. МесЬап1зтз ок зропкапеоиз гесочегу. Апп Ыеиго1 2008; 63:272-87.

28. Оемаг ϋ, ипбегЫП ЗМ, 6о1бЬегд МР. ОИдобепбгосукез апб гзскеткс Ьга1п 1пзигу. б СегеЬ В1ооб Е1ом МекаЬ 2003; 23:263-74.

29. Рек1ко СК, О1агке 6Р, НоЬегкз В, Ыомак ТЗ, бг., Ри1з1пе111 ИА. Зе1еск1че дИа1 чи1пегаЫИку ко11ом1пд кгапзаепк д1оЬа1 кзскетка ίη гак Ьга1п. б Ыеигораккю1 Ехр Ыеиго1 1998; 57:231-8.

30. Иахтап 36. ОетуеНпаИоп ίη зр1па1 согб 1пзигу апб ти1к1р1е зс1егоз1з: мкак сап ме бо ко епкапсе £ипск1опа1 гесочегу? б Ыеигокгаита 1992; 9 Зирр1 1:3105-17.

31. Иахтап 36, икгзскпе1бег ΏΑ, Косз1з 6ϋ. Епкапсетепк ок аскгоп рокепкга! сопбиск1оп £о11ом1пд бетуеИпакгоп:

- 74 029558

ехрег1тепка1 арргоасНез Со гезкогаНоп о£ £ипсЫоп ίη ти1к1р1е зс1егоз15 апН зр1па1 согН 1пзигу. Ргод Вгаз_п Кез 1994; 100:23343.

32. Науез КС, Каки1аз ВА. ЫеигоракНо1оду о£ Нитап зр1па1 согН 1пзигу зизка1пеН ίη зрогкз-ге1акеН аск1ч1к1ез. Я Ыеигокгаита 1997; 14:235-48.

33. Каки1аз ВА. А геч1ем о£ кНе пеигоракНо1оду о£ Нитап зр1па1 согН 1пзигу μιΗΗ етрНаз1з оп зрес1а1 кеакигез. Я Зр1па1 СогН МеН 1999; 22: 119-24.

34. Ии ΖΖ, Ы ΏΡ, СНеп ЗК, Рап НЬ. Ат1поруг1сИпез рокепАаке зупарк1с апН пеиготизси1аг кгапзт1зз1оп Ьу кагдек1пд кНе чо1каде-аск1чакеН са1с1ит сНаппе1 Ьека зиЬип1к. Я ΒίοΙ СНет 2009; 284:36453-61.

35. ВИдНк АК, ТоотЬз ЯР, Ваиег МЗ, И1Нтег ИК. ТНе еккескз ок 4-ат1поругкЫпе оп пеиго1од1са1 Не£1с1кз ίη сНгоп1с сазез ок кгаитак1с зр1па1 согН 1пзигу ίη Нодз: а рНазе I с11п1са1 кг1а1.

И Ыеигокгаита 1991; 8:103-19.

36. СооЬтап Αϋ, Ну1апН М. Оа1катрг1сИпе ίη ти1к1р1е зс1егоз1з. Огидз ТоНау (Ваге) 2010; 46:635-9.

37. Науез КС, Какг МА, Оечапе ЯС, ек а1. РНагтасок1пек1сз ок ап 1ттеНкаке-ге1еазе ога1 £огти1ак1оп ок КатргкЫпе (4ат1поруг1с1кпе) ίη погта1 зик^ескз апН рак1епкз νόίΗ зр1па1 согН 1пзигу. И СНп РНагтасо1 2003; 43:379-85.

38. Оопочап ИН, На1кег ИА, Сгачез ΏΕ, ек а1. 1пкгачепоиз 1п£из1оп ок 4-АР ίη сНгоп1с зр1па1 согН А^игеН зиЬзескз.

Зр1па1 СогН 2000; 38:7-15.

39. Вгиз-Катег М, Сагте1 ИВ, МагНп ИН. Моког согкех Ы1акега1 токог гергезепкаНоп НерепНз оп зиЬсогк1са1 апН кпкегНет1зрНег1с 1пкегаск1опз. И Ыеигозск 2009; 29:6196-206.

40. Сгатег ЗС, ЫеПез 6, Вепзоп КК, ек а1. А £ипск1опа1 ΜΚΙ зкиНу ок зик^ескз гесочегеН кгот Нет1рагек1с зкгоке. Зкгоке 1997; 28:2518-27.

41. О1зкНи1геп КМ, Кеп И, МапНечШе ИВ, ек а1. Випск1опа1 тадпек1с гезопапсе 1тад1пд ок геогдап1гак1оп ίη гак Ьга1п аккег зкгоке. Ргос Ыак1 АсаН 3οί и 3 А 2001; 98: 12766-71.

В настоящем документе процитированы различные литературные источники, такие как патенты, патентные заявки и публикации, раскрытия которых включены, таким образом, посредством ссылки в настоящий документ в полном объеме.

- 75 029558

Claims (45)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился инсульт, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, причем аминопиридин имеет следующую структуру:

   в которой х=1 или 2.
2. 2. Способ лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился инсульт, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, причем аминопиридин имеет следующую структуру:

   в которой х=1 или 2,

   и причем пациент, представляющий собой человека, находится (ί) в стабильной хронической фазе после инсульта или (ίί) в момент 6 месяцев или позднее от момента развития инсульта.
3. 3. Способ по п.2, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли во время стабильной хронической фазы после инсульта.
4. 4. Способ по п.2, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли в 6 месяцев или позднее от момента развития инсульта у пациента.
5. 5. Способ по любому из пп.1-4, в котором связанная с инсультом сенсорно-двигательная недостаточность представляет собой недостаточность ходьбы, недостаточность функции конечности, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность мышечной силы нижней конечности, недостаточность мышечного тонуса, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции руки, недостаточность тонкой координации руки, недостаточность силы хватания, недостаточность равновесия или координации, недостаточность общего владения телом, дизартрию, недостаточность функции челюсти, недостаточность жевания или недостаточность артикуляции челюсти.
6. 6. Способ по п.5, в котором связанная с инсультом сенсорно-двигательная недостаточность представляет собой недостаточность ходьбы.
7. 7. Способ по п.6, в котором недостаточность ходьбы представляет собой сниженную скорость ходьбы.
8. 8. Способ по п.7, в котором сниженная скорость ходьбы демонстрируется в тесте Типе 25 Ροοΐ Аа1к (Т25РА).
9. 9. Способ по любому из пп.1-8, где аминопиридин представляет собой моноаминопиридин.
10. 10. Способ по любому из пп.1-9, где аминопиридин представляет собой 4-аминопиридин.
11. 11. Способ по любому из пп.1-10, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально.
12. 12. Способ по п.11, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль составляют в форме таблетки.
13. 13. Способ по любому из пп.1-12, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемая соль находятся в композиции с замедленным высвобождением.
14. 14. Способ по п.13, где указанная композиция с замедленным высвобождением обеспечивает у человека Т_тах приблизительно от 2 приблизительно до 6 ч.
15. 15. Способ по любому из пп.1-14, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту один раз в сутки.
16. 16. Способ по любому из пп.1-14, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту два раза в сутки.
17. 17. Способ по п.11 или 12, где аминопиридин находится в композиции замедленного высвобождения в диапазоне от 5 до 15 мг, причем композицию замедленного высвобождения вводят пациенту два раза в сутки.
18. 18. Способ по п.17, где количество аминопиридина в композиции замедленного высвобождения составляет 5 мг.
19. 19. Способ по п.17, где количество аминопиридина в композиции замедленного высвобождения составляет 7,5 мг.
20. 20. Способ по п.17, где количество аминопиридина в композиции замедленного высвобождения со- 76 029558

    ставляет 10 мг.
21. 21. Способ по п.17, где количество аминопиридина в композиции замедленного высвобождения составляет 12,5 мг.
22. 22. Способ по п.11 или 12, где аминопиридин находится в композиции замедленного высвобождения в диапазоне от 8 до 30 мг, причем композицию замедленного высвобождения вводят пациенту один раз в сутки.
23. 23. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента по меньшей мере через 4 недели от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
24. 24. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента по меньшей мере через 1 неделю от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
25. 25. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента между 2 и 7 сутками от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
26. 26. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента по меньшей мере через 8 недель от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
27. 27. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента по меньшей мере через 8 месяцев от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
28. 28. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента по меньшей мере через 4 месяца от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
29. 29. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента по меньшей мере через 6 месяцев от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
30. 30. Способ по любому из пп.1-22, включающий введение аминопиридина или его фармацевтически приемлемой соли, начиная с момента в пределах 2 суток от момента времени, когда пациент перенес инсульт.
31. 31. Способ по любому из пп.1-30, где инсульт представляет собой ишемический инсульт.
32. 32. Способ по любому из пп.1-16, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в таком количестве, чтобы при введении человеку получить С_ттж или среднюю С_тшж равную приблизительно по меньшей мере 11-19 или 20 нг/мл.
33. 33. Способ по любому из пп.1-16, где аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в таком количестве, чтобы при введении человеку получить С_ттж или среднюю С_т|пх, в диапазоне приблизительно от 12 до 20 нг/мл.
34. 34. Способ по любому из пп.1-33, в котором аминопиридин или фармацевтически приемлемая соль аминопиридина находятся в композиции, которая не содержит дополнительно холин или источник холина.
35. 35. Способ по любому из пп.1-34, в котором вводят аминопиридин.
36. 36. Применение 4-аминопиридина в композиции замедленного высвобождения для перорального введения для улучшения ходьбы у пациента, представляющего собой человека, который перенес инсульт и у которого наблюдается недостаточность ходьбы.
37. 37. Применение по п.36, в котором 4-аминопиридин находится в количестве 10 мг в композиции замедленного высвобождения, которую вводят пациенту два раза в сутки.
38. 38. Применение по п.36 или 37, в котором улучшение ходьбы представляет собой увеличение скорости ходьбы.
39. 39. Применение по любому из пп.36-38, причем применение имеет место (ί) во время стабильной хронической фазы после инсульта или (ίί) в 6 месяцев или позднее от момента развития инсульта у пациента.
40. 40. Применение по любому из пп.36-39, где инсульт представляет собой ишемический инсульт.
41. 41. Применение композиции, содержащей 4-аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, для перорального введения для лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился инсульт, в котором связанная с инсультом сенсорно-двигательная недостаточность представляет собой недостаточность ходьбы, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции руки, недостаточность равновесия или координации, недостаточность общего владения телом, дизартрию, недостаточность функции челюсти.
42. 42. Применение композиции, содержащей 4-аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, для перорального введения для лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился ишемический инсульт, в кото- 77 029558

    ром связанная с инсультом сенсорно-двигательная недостаточность представляет собой недостаточность ходьбы, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции руки, недостаточность равновесия или координации, недостаточность общего владения телом, дизартрию, недостаточность функции челюсти.
43. 43. Применение композиции замедленного высвобождения, содержащей 4-аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, для перорального введения для лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился инсульт, в котором связанная с инсультом сенсорно-двигательная недостаточность представляет собой недостаточность ходьбы, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции руки, недостаточность равновесия или координации, недостаточность общего владения телом, дизартрию, недостаточность функции челюсти.
44. 44. Применение композиции, содержащей 4-аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, для перорального введения для лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился инсульт, в котором связанная с инсультом сенсорно-двигательная недостаточность представляет собой недостаточность ходьбы, недостаточность функции нижней конечности, недостаточность функции верхней конечности, недостаточность функции руки, недостаточность равновесия или координации, недостаточность общего владения телом, дизартрию, недостаточность функции челюсти и в котором пациент, представляющий собой человека, находится (ι) в стабильной хронической фазе после инсульта или (й) в момент 6 месяцев или позднее от момента развития инсульта.
45. 45. Применение композиции замедленного высвобождения, содержащей 4-аминопиридин или его фармацевтически приемлемую соль, для перорального введения для лечения связанной с инсультом сенсорно-двигательной недостаточности у пациента, представляющего собой человека, у которого развился ишемический инсульт, причем пациент, представляющий собой человека, находится (ι) в стабильной хронической фазе после инсульта или (и) в момент 6 месяцев или позднее от момента развития инсульта.

    Химическое название: 4-аминопиридин

    ΙΙ5ΑΝ: далфампридин

    Регистрационный номер САЗ: 504-24-5 Химическая структура:

    ΝΗς

    Молекулярная формула: €₅ΙΊ₆Ν₂

    Относительная молекулярная масса: 94,1 Внешний вид: белое твердое вещество Растворимость: растворимость в воде >50 мг/мл Температура плавления: от 157 до 162°С