EA027645B1

EA027645B1 - Соединения замещенного пиридин-2-карбоксамида в качестве ингибиторов регулирующей апоптотические сигналы киназы

Info

Publication number: EA027645B1
Application number: EA201591018A
Authority: EA
Inventors: Грегори Нотт
Original assignee: Джилид Сайэнс, Инк.
Priority date: 2012-12-21
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2017-08-31
Also published as: WO2014100541A1; UY35212A; CA2896060C; SI2935258T1; IL255799A; PT2935258T; US9051313B2; HRP20170112T1; LT2935258T; IL255799B; AU2013361140B2; US20150246910A1; TW201441221A; KR101712758B1; CA2896060A1; DK2935258T3; CN104918936B; HUE032988T2; MX2015008090A; US10307427B2

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулы (I)где переменные имеют значения, определённые в описании. Указанные соединения обладают ингибирующей активностью в отношении регулирующей апоптотические сигналы киназы ("ASK1") и, таким образом, являются подходящими для лечения ASK1-опосредованных состояний, включая аутоиммунные расстройства, воспалительные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания, диабет, диабетическую нефропатию, кардиоренальные заболевания, включая заболевания почек, фиброзные заболевания, заболевания органов дыхания, ХОБЛ, идиопатический легочный фиброз, острое повреждение лёгких, острые и хронические заболевания печени и нейродегенеративные заболевания.

Description

Изобретение относится к новым соединениям, обладающим ингибирующей активностью в отношении ферментов, и к применению указанных соединений для лечения состояний, опосредованных регулирующей апоптотические сигналы киназой 1 (А8К1), включая аутоиммунные расстройства, воспалительные заболевания, включая хроническое заболевание почек, сердечно-сосудистые заболевания и нейродегенеративные заболевания. Настоящее изобретение также относится к способам получения указанных соединений и к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения.

Уровень техники

Сигнальные каскады митоген-активируемой протеинкиназы (МАРК) связывают различные внеклеточные и внутриклеточные цепочки реакций с соответствующими клеточными ответными реакциями на стресс, включая рост клеток, их дифференциацию, воспаление и апоптоз (Кишат 8., ВоеЬт 1. аиб Ьее. ТС. (2003) Ναί. Кеу. Итид ϋΐδ. 2:717-726; Р1Ш1еи1а С., апб Раксиа1 1. (2007) Се11 Сус1е, 6: 2826-2632). МАРК существуют в виде трёх групп: МАР3К, МАР2К и МАРК, которые последовательно активируются. МАРК3 непосредственно реагируют на сигналы окружающей среды и фосфорилируют МАР2К, которые, в свою очередь, фосфорилируют конкретные МАРК. Затем МАРК опосредуют соответствующий клеточный ответ путём фосфорилирования клеточных субстратов, в том числе факторов транскрипции, которые регулируют экспрессию генов.

Регулирующая апоптотические сигналы киназа 1 (А8К1) является представителем семейства киназы киназы митоген-активируемой протеинкиназы (МАР3К), которое активирует сПип Ν-концевую протеинкиназу (ΊΝΧ) и р38-МАР-киназу (КЬуо Н., №кЫба Е., 1пе К., Иуке Р.Т., 8аЪоЬ М., МопдисЫ Т., Ма!кито!о К., М|уа/опо К. апб Со!оЬ Υ. (1997) 8шепсе, 275, 90-94). А8К1 активируется с помощью различных стимулирующих факторов, включая окислительный стресс, активные формы кислорода (КО8), липополисахариды (ЬР8), фактор некроза опухоли-альфа (ФНО-α), лиганд Рак (РакЬ), стрессы, связанные с эндоплазматическим ретикулумом (ЕК), и увеличивает внутриклеточные концентрации кальция (НаОоп К., Шдиго I, КипсЬе1 С., апб 1сЬуо Н. (2009) Се11 Сотт. 81дпа1. 7:1-10; Такеба К., №дисЫ Т., Вадито I. апб 1сЬуо Н. (2007) Аппи. Кеу. РЬагтасо1. Тохюо1. 48: 1-8,27; №щ;н Н., №дис1п Т., Такеба К. апб 1с1що I. (2007) 1. ВюсЬет. Мо1. Вю1. 40:1-6). А8К1 подвергается активации путём аутофосфорилирования по ТЬг838 в ответ на эти сигналы и, в свою очередь, фосфорилирует МАР2К, такие как МКК3/6 и МКК4/7, которые затем фосфорилируют и активируют р38 и ЖК МАРК соответственно. А8К2 является родственной МАР3К, последовательность которой на 45% гомологична последовательности А8К1 (Аапд Х.8., И1епет К., Тап Т.-Н. апб Υао Ζ. (1998) ВюсЬет. ВюрЬук. Кек. Соттип. 253, 33-37. Несмотря на то что распределение А8К2 в ткани ограничено, в некоторых типах клеток, как сообщалось, А8К1 и А8К2 взаимодействуют и функционируют совместно в виде белкового комплекса (Такеба К., 81ито/опо К., №дисЫ Т., Итеба Т., МоптоЮ Υ., №диго I., ТоЬште К., 8абоЬ М., Ма1ки/а\уа А. апб ЮЬуо Н. (2007) I. Вю1. СЬет. 282: 7522-7531; Ыуата Т. е! а1. (2009) ЕтЬо I. 28: 843-853). В нестрессовых условиях А8К1 поддерживается в неактивном состоянии посредством связывания с репрессором А8К1 тиоредоксином (Тгх) (8аЪоЬ М., №кЫ!оЬ Н., Рнр М., Такеба К., ТоЬште К., 8а\\аба Υ., Ка\уаЬа1а М., МЬ уа/опо К. апб ШЬуо Н. (1998) ЕтЬо I. 17:2596-2606), и посредством ассоциации с протеинкиназой В (АКТ) (ХЬапд Ь., СЬеп I. апб Ри Н. (1999) Ргос. №!1. Асаб. 8ά. И.8.А 96:8511-8515).

Фосфорилирование белка А8К1 может привести к апоптозу или другим клеточным ответам в зависимости от типа клеток. Активация А8К1 и передача сигнала посредством А8К1, как сообщалось, играют важную роль при многих заболеваниях, включая нейродегенеративные, сердечно-сосудистые, воспалительные, аутоиммунные расстройства и нарушения обмена веществ. Кроме того, А8К1 участвует в опосредовании повреждения органа после ишемии и реперфузии сердца, головного мозга и почек (Аа1апаЬе е! а1. (2005) ВВКС 333, 562-567; Ζ^^ е! а1., (2003) Ьбе 8οΐ. 74-37-43; Тегаба е! а1. (2007) ВВКС 364: 1043-49). Новые данные свидетельствуют о том, что А8К2 либо самостоятельно, либо в комплексе с А8К1 также может играть важную роль при заболеваниях человека. Поэтому терапевтические агенты, которые действуют как ингибиторы А8К1 и А8К2 сигнальных комплексов, представляют собой потенциальные агенты для обеспечения излечения или улучшения жизни пациентов, страдающих указанными заболеваниями.

В публикации заявки на патент США №2007/0276050 описаны способы идентификации ингибиторов А8К1, пригодных для профилактики и/или лечения сердечно-сосудистого заболевания, и способы профилактики и/или лечения сердечно-сосудистого заболевания у животного. Способы включают введение животному ингибитора А8К1 и необязательно гипертензивного соединения.

В публикации заявки на патент США №2007/0167386 описано лекарственное средство для по меньшей мере одного из профилактики и лечения сердечной недостаточности, содержащее соединение, которое ингибирует функциональную экспрессию А8К1 белка у кардиомиоцита, и способ скрининга лекарственного средства.

В АО 2009027283 раскрыты соединения триазолопиридина, способы их получения и способы лечения аутоиммунных расстройств, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и нейродегенеративных заболеваний.

- 1 027645

Краткое описание изобретения

Изобретение относится к новым соединениям, которые действуют как ингибиторы А8К1, композициям и способам применения указанных новых соединений. Согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)

где К¹ представляет собой С₁-С₃ алкил или С₃-С₆ циклоалкил, где алкил или циклоалкил необязательно замещен 1-3 атомами галогена;

К² представляет собой водород или С₁-С₆ алкил, где алкил необязательно замещён галогеном;

К³ представляет собой водород или С₁-С₃ алкил;

К⁴ представляет собой водород или С₁-С₃ алкил;

К⁵ представляет собой водород, С₁-С₃ алкил, ОК^а или -ΝΗΚ^α;

К⁶ представляет собой водород, С₁-С₃ алкил, С₁-С₃ галогеналкил или С₃-С₆ циклоалкил, где циклоалкил необязательно замещён С₁-С₃ алкилом, С₁-С₃ галогеналкилом или 1 или 2 атомами галогена;

К^а и К^ь независимо представляют собой водород, С₁ -С₃ алкил, или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-6-членного гетероциклического кольца, необязательно содержащего атом кислорода или азота в кольце;

или их фармацевтически приемлемым солям или стереоизомерам.

Согласно второму аспекту настоящее изобретение относится к способу применения соединений формулы (I) для лечения заболевания или патологического состояния у пациента, предпочтительно пациента, представляющего собой человека, которое поддается лечению с помощью ингибитора А8К1. Такие заболевания включают аутоиммунные расстройства, воспалительные заболевания, сердечнососудистые заболевания (включая диабет, диабетическую нефропатию и другие осложнения диабета), кардиоренальные заболевания, включая заболевание почек, фиброзные заболевания, заболевания органов дыхания (включая ХОБЛ, идиопатический лёгочный фиброз (ИЛФ) и острое повреждение лёгких), острые и хронические заболевания печени и нейродегенеративные заболевания.

Согласно третьему аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

В четвёртом варианте реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), пригодному для лечения хронической почечной недостаточности.

В пятом варианте реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), пригодному для лечения фиброза почек.

Согласно ещё одному аспекту настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в терапии.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для получения лекарственного средства для лечения аутоиммунных расстройств, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний (включая диабет, диабетическую нефропатию и другие осложнения диабета), кардиоренальных заболеваний, включая заболевание почек, фиброзных заболеваний, заболеваний органов дыхания (включая ХОБЛ, идиопатический лёгочный фиброз (ИЛФ) и острое повреждение лёгких), острых и хронических заболеваний печени и нейродегенеративных заболеваний.

Подробное описание изобретения

Определения и общие характеристики.

Применяемые в настоящем описании следующие слова и фразы, как правило, подразумевают те значения, которые указаны ниже, за исключением случаев, когда контекст, в котором они применяются, указывает иное.

Термин алкил относится к монорадикальной разветвлённой или неразветвлённой насыщенной углеводородной цепи, содержащей указанное число атомов углерода. Этот термин представлен такими группами, как метил, этил, н-пропил, изопропил и т.п.

Термин замещённый алкил относится к алкильной группе, как определено выше, содержащей 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из указанных групп.

Термин алкилен относится к бирадикалу разветвлённой или неразветвлённой насыщенной углеводородной цепи, содержащей, как правило, от 1 до 6 атомов углерода (например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода). Этот термин представлен такими группами, как метилен (-СН₂-), этилен (-СН₂СН₂-), изо- 2 027645 меры пропилена (например, -СН₂СН₂СН2- и СН(СН₃)СН₂-) и т.п.

Термин амино относится к группе -ΝΗ₂. Термин замещённый амино относится к группе ΝΗΚ'¹или ΝΡ'Κ¹’. где К³ и К^Ь (которые могут быть одинаковыми или разными) представляют собой замещающие группы.

Термин циклоалкил относится к циклическим алкильным группам с 3-6 атомами углерода, имеющим одно циклическое кольцо. Такие циклоалкильные группы включают, в качестве примера, одиночные кольцевые структуры, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил и т.п.

Термин галоген или гало относится к фтору, брому, хлору и йоду.

Термин галогеналкил относится к алкилу из 1-3 (или как указано) атомов углерода, замещённому 1, 2 или 3 атомами галогена или химически допустимым образом. Примеры галогеналкильных групп включают трифторметил, 1,1,1-трифторпропанил, 1,1,1- трифторизопропанил.

Термин ацил обозначает группу -С(О)К, в которой К представляет собой водород, необязательно замещённый алкил, необязательно замещённый циклоалкил, необязательно замещённый гетероциклил, необязательно замещённый арил и необязательно замещённый гетероарил.

Термин ацилгалогенид относится к группе -С(О)Х, где X представляет собой атом галогена, предпочтительно хлора.

Применяемые в настоящем описании, если не указано иное, термины гетероциклил, гетероциклический и гетероцикл являются синонимами и относятся к насыщенной или частично ненасыщенной циклической группе, содержащей одно кольцо и содержащей от 1 до 6 атомов углерода и от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из азота, серы и/или кислорода в кольце. Гетероциклические группы в контексте настоящего описания включают тетрагидрофуранил, морфолино, пиперидинил, пиперазино, дигидропиридино и т.п. Термин 4-6-членный гетероциклический, применяемый в настоящем описании, означает гетероциклическую группу, определённую выше, в которой общее число членов кольца составляет от 4 до 6, и выполнена корректировка по количеству атомов углерода в зависимости от количества гетероатомов в кольце.

Необязательный или необязательно означает, что впоследствии описанное событие или обстоятельство может произойти или может не произойти и что описание включает случаи, когда указанное событие или обстоятельство происходит, и случаи, в которых не происходит.

Соединение заданной формулы (например, соединение формулы (I)) охватывает соединения согласно настоящему изобретению, как описано, и фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сложные эфиры, гидраты, полиморфы и пролекарства таких соединений.

Настоящее изобретение также включает соединения формулы I, в которых один или более атомов водорода, присоединённых к атому углерода заменяется/заменяются на дейтерий. Такие соединения проявляют повышенную устойчивость к метаболизму и, следовательно, пригодны для увеличения периода полураспада любого соединения формулы I при введении млекопитающему. См., например, Ров1ет, Эси1етшш 1во1оре ЕЛссЕ ίη §1иб1ев о£ Огид Ме1аЬо11вт, Ттеибв Рйаттасо1. 8сь 5(12):524-527 (1984). Такие соединения синтезируют способами, хорошо известными в данной области, например путём использования исходных материалов, в которых один или несколько атомов водорода заменены на дейтерий.

Изомеры представляют собой различные соединения, которые имеют одинаковую молекулярную формулу.

Стереоизомеры представляют собой изомеры, которые различаются только способом расположения атомов в пространстве.

Энантиомеры представляют собой пару стереоизомеров, которые не являются зеркальными отражениями друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров является рацемической смесью. Термин (±) применяют для обозначения рацемической смеси, где это необходимо.

Диастереоизомеры представляют собой стереоизомеры, которые содержат по меньшей мере два асимметрических атома, но которые не являются зеркальными отражениями друг друга.

Также предполагается, что любая приведённая здесь формула или структура, включая соединения формулы I, отображает немеченые формы, а также меченные изотопами формы соединений.

Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству, которое достаточно для осуществления лечения, как определено ниже, при введении пациенту-млекопитающему, предпочтительно пациенту-человеку, при необходимости такого лечения. Терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от субъекта и болезненного состояния, которое лечат, веса и возраста субъекта, тяжести болезненного состояния, способа введения и т.п., и такое количество легко может быть определено специалистом в данной области техники.

Термин лечение или лечить означает любое введение соединения согласно настоящему изобретению или реализацию на практике способа согласно настоящему изобретению с целью:

(ί) защиты от заболевания, т.е. обеспечения отсутствия развития клинических симптомов заболевания;

(ίί) подавления заболевания, т.е. прекращения развития клинических симптомов; и/или (ίίί) ослабления заболевания, т.е. обеспечения регрессии клинических симптомов.

Во многих случаях соединения согласно настоящему изобретению способны образовывать кислот- 3 027645 ные и/или основные соли в силу наличия амино и/или карбоксильных групп или подобных им групп.

Термин фармацевтически приемлемая соль данного соединения относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства данного соединения и которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли могут быть получены из неорганических и органических оснований. Соли, полученные из неорганических оснований, включают, только в качестве примера, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция и магния. Соли, полученные из органических оснований, включают, но не ограничиваются ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, таких как алкиламины, диалкиламины, триалкиламины, замещённые алкиламины, ди(замещённый алкил)амины, три(замещённый алкил)амины, алкениламины, диалкениламины, триалкениламины, замещённые алкениламины и т.п. Также включены амины, где два или три заместителя вместе с атомом азота аминогруппы образуют гетероциклическую или гетероарильную группу.

Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли могут быть получены из неорганических и органических кислот. Соли, полученные из неорганических кислот, включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Соли, полученные из органических кислот, включают уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, пировиноградную кислоту, щавелевую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту и т.п.

Применяемый в описании фармацевтически приемлемый носитель включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и задерживающие всасывание агенты и т.п. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. Их применяют в терапевтических композициях за исключением случаев, когда любая обычная среда или агент несовместимы с активным ингредиентом. В композиции также могут быть включены дополнительные активные ингредиенты.

Ишемические заболевания или сердечно-сосудистые заболевания относятся к заболеваниям сердечно-сосудистой системы, возникающим вследствие одного или более чем одного из, например, сердечной недостаточности (в том числе застойной сердечной недостаточности, диастолической сердечной недостаточности и систолической сердечной недостаточности), острой сердечной недостаточности, ишемии, рецидивирующей ишемии, инфаркта миокарда, аритмии, стенокардии (включая вызванную физической нагрузкой стенокардию, вариантную стенокардию, стабильную стенокардию, нестабильную стенокардию), острого коронарного синдрома, диабета и перемежающейся хромоты.

Перемежающаяся хромота означает боль, связанную с заболеванием периферических артерий. Заболевание периферических артерий, или ЗПА, представляет собой тип окклюзионного заболевания периферических сосудов (ЗПС). ЗПА затрагивает артерии за пределами сердца и головного мозга. Наиболее распространённым симптомом ЗПА являются болезненные судороги в тазобедренных суставах, бёдрах или икрах при ходьбе, подъёме по лестнице или выполнений физических упражнений. Такая боль называется перемежающейся хромотой. При указании симптома перемежающейся хромоты предполагается, что он включает симптом как ЗПА, так и ЗПС.

Аритмия относится к аномальному сердечному ритму. Брадикардия относится к аномально медленному сердечному ритму, тогда как тахикардия относится к аномально быстрому сердечному ритму. В контексте настоящего описания предполагается, что лечение аритмий включает лечение наджелудочковых тахикардии, таких как фибрилляция предсердий, трепетание предсердий, АВ-узловая реентерабельная тахикардия, предсердная тахикардия, и желудочковых тахикардии (УТ), включая идиопатическую желудочковую тахикардию, фибрилляцию желудочков, синдром предварительно возбуждения и пируэтную желудочковую тахикардию (ТИР).

Фармацевтически приемлемые означает пригодные для применения в фармацевтических препаратах, как правило, рассматриваемые как безопасные для такого применения, официально одобренные регулирующим ведомством национального правительства или правительства штата для такого применения или перечисленные в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения у животных, и, в частности, у людей.

Пролекарство обозначает соединение, которое при введении ίη νίνο метаболизируется посредством одного или более этапов или процессов, или иным образом превращается в биологически, фармацевтически или терапевтически активную форму соединения. Например, пролекарство означает соединение, которое химически предназначено для эффективного высвобождения исходного лекарственного средства после преодоления биологических барьеров на пути пероральной доставки. Для получения пролекарства фармацевтически активное соединение модифицируют таким образом, что активное соединение будет регенерировано в результате метаболических процессов. Пролекарство может быть предназначено для изменения метаболической стабильности или характеристик доставки лекарственного средства, чтобы замаскировать побочные эффекты или токсичность, для улучшения вкуса лекарственного средства или изменения других характеристик или свойств лекарственного средства. Когда фармацевтически активное

- 4 027645 соединение является известным, специалисты в данной области техники могут разработать пролекарства такого соединения в соответствии со знаниями фармакодинамических процессов и метаболизма лекарств ίη νίνο (см., например, Ыодгайу (1985) Мейюта1 СЬеш181гу А В1осЬеш1са1 АрргоасЬ, ОхГогй ишусгзПу Рге88, Ыете Уогк, радев 388-392).

Полиморф относится к различным кристаллическим формам соединения, образующимся вследствие возможности по меньшей мере двух различных вариантов организации молекул соединения в твёрдом состоянии. Полиморфы данного соединения будет различаться по кристаллической структуре, но идентичны в жидком или парообразном состоянии. Различные полиморфные формы данного вещества могут отличаться друг от друга по одному или более физическим свойствам, таким как растворимость и диссоциация, абсолютная плотность, кристаллическая форма, характер упаковки, свойства текучести и/или стабильность в твёрдом состоянии. Специалисту в данной области техники известны способы для генерации полиморфов кристаллических соединений. Таким образом, полиморфные формы соединений согласно настоящему изобретению находятся в рамках настоящего изобретения.

В другом варианте реализации изобретение относится к соединению формулы (I), в которой

К¹ представляет собой С₁-С₃ алкил или С₃-С₆ циклоалкил, где алкил или циклоалкил необязательно замещены 1-3 атомами галогена;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой С₁-С₃ алкил или С₃-С₆ циклоалкил;

К^а и К^ь независимо представляют собой водород или С1 -С3 алкил; или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-6-членной гетероциклической группы, необязательно содержащей атом кислорода или атом азота в кольце; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, независимо выбранными из С1-С₃ алкила и гидроксила; или его фармацевтически приемлемой соли или стереоизомеру.

В ещё одном варианте реализации изобретение относится к соединению формулы (I), в которой

К¹ представляет собой циклопропил; К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой циклопропил;

К^а и К^ь оба представляют собой С₁-С₃ алкил, или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-6-членной гетероциклической группы, необязательно содержащей атом кислорода в кольце; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из С1-С3 алкила и гидроксила;

или его фармацевтически приемлемой соли или стереоизомеру.

В ещё одном варианте реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), в которой

К¹ представляет собой С₁-С₃ галогеналкил;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой циклопропил;

К^а и К^ь оба представляют собой С1-С3 алкил, или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-6-членной гетероциклической группы, необязательно содержащей атом кислорода в кольце; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из С1-С₃ алкила и гидроксила; или его фармацевтически приемлемой соли или стереоизомеру.

К¹ представляет собой С₁-С₃ алкил или циклопропил, где алкильная группа замещена тремя атомами фтора;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой циклопропил;

В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), в которой

К¹ представляет собой С₁-С₃ алкил или циклопропил, где алкильная группа замещена тремя атома- 5 027645 ми фтора;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой циклопропил;

К^а и К^ь оба представляют собой метил; или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием морфолиногруппы или азетидинильной группы, где указанная азетидинильная группа диалкилирована по одному атому углерода или замещена по одному атому углерода гидроксилом и метильной группой; или его фармацевтически приемлемой соли или стереоизомеру.

К¹ представляет собой С₁ -С₃ алкил или циклопропил, где алкильная группа замещена тремя атомами фтора;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой циклопропил;

В одном из вариантов реализации изобретение относится к соединению формулы (I), в которой

К¹ представляет собой С₁-С₃ алкил или С₁-С₃ циклоалкил, где алкил или циклоалкил необязательно замещены 1-3 атомами фтора;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ представляет собой водород;

К⁵ представляет собой водород;

К⁶ представляет собой С₁-С₃ алкил, С₁-С₃ галогеналкил или С₁-С₃ циклоалкил, где циклоалкил необязательно замещён 1-2 атомами фтора;

К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием гетероциклической группы, выбранной из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из С1-С3 алкила и гидроксила;

К¹ представляет собой метил, этил, пропил, фторметил, дифторметил, трифторметил, фторэтил, дифторэтил, трифторэтил, фторпропил, дифторпропил, трифторпропил, фторциклопропил, дифторциклопропил или циклопропил;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ представляет собой водород;

К⁵ представляет собой водород;

К⁶ представляет собой метил, этил, пропил, фторметил, дифторметил, трифторметил, фторэтил, дифторэтил, трифторэтил, фторпропил, дифторпропил, трифторпропил, фторциклопропил, дифторциклопропил или циклопропил;

К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием гетероциклической группы, выбранной из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из метила, этила, пропила и гидроксила; или его фармацевтически приемлемой соли или стереоизомеру.

Соединения согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются ими, следующие соединения, указанные ниже:

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Ы-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5морфолинопиколинамид (соединение 1)

- 6 027645

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Ы-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5(3-гидрокси-3-метилазетидин-1-ил)пиколинамид (соединение 2)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-морфолино-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 3)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(3 -гидрокси-3 -метилазетидин-1-ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 4)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(диметиламино)-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 5)

5-(азетидин-1-ил)-4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3тиазол-4-ил]пиридин-2-карбоксамид (соединение 6)

(8)-5-(азетидин-1-ил)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 7)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(пирролидин-1-ил)-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 8)

4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)-Ы-[2-(4-циклопропил- 1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5пирролидин-1-илпиридин-2-карбоксамид (соединение 9)

- 7 027645

4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(3гидроксипирролидин-1-ил)пиридин-2-карбоксамид (соединение 10)

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(3-гидроксипирролидин-1-ил)-Ы-(2-(4-((8)-1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 11)

4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)-Ы-[2-(4-циклопропил- 1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5пиперидин-1-илпиридин-2-карбоксамид (соединение 12)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(пиперидин-1-ил)-Ы-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 13)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(4-гидрокси-4-метилпиперидин-1 -ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 14)

4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)пиридин-2-карбоксамид (соединение 15)

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 16)

- 8 027645

4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-И-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-карбоксамид (соединение 17).

В одном из аспектов настоящей заявки предложены соединения, способы и композиции, в которых применяют или которые содержат рацемическую смесь, смесь, содержащую энантиомерный избыток (ЭИ) одного из энантиомеров, или смесь, содержащую диастереомерный избыток (ДИ) одного из диастереомеров. Соединения формулы (I) могут содержать по меньшей мере 1%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% одного стереоизомера, имеющего желаемую активность в отношении А8К-1. В качестве примера все исходные материалы хирального амина (например, К^аК^ьИН), применяемые в общем получении соединений формулы (I) (например, соединений 3, 4, 5, 7, 8, 11, 13, 14, 16), были применены в виде смеси энантиомеров. В другом примере промежуточное соединение Е в общей методике получения соединений формулы (I) получали и применяли в виде смеси, содержащей преимущественно (8)-4-(4циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-фтор-И-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид.

В другом аспекте настоящая заявка относится к способам, композициям, которые применяют или содержат оптические изомеры, рацематы или другие их смеси, соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, их пролекарства или их сольвата. Отдельный энантиомер или диастереомер, т.е. оптически активная форма, может быть получен с помощью асимметрического синтеза или разделения рацемата. Разделение рацематов может быть осуществлено, например, с помощью известных способов, таких как кристаллизация в присутствии расщепляющего агента или хроматография с применением, например, колонки для хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Например, существуют Ζ- и Е-формы (или цис- и транс-формы) соединений или их фармацевтически приемлемых солей, их пролекарства или их сольвата с двойными связями углерод-углерод.

Номенклатура.

Названия соединений согласно настоящему изобретению получены с применением системы наименования из СйетВюИгате ИНга 11 или компонента Мо1еси1е ΐο Сйет1са1 Иате программы Ρίροΐίηο Ρϊΐοΐ версии 9.1.0, настроенных согласно номенклатуре, установленной Международным союзом чистой и прикладной химии (ШРАС). Названия других соединений или радикалов могут быть приведены в соответствии с их традиционными названиями или систематическими или несистематическими названиями. Наименование и нумерация соединений согласно настоящему изобретению проиллюстрированы на примере соединения формулы (I)

которое называется (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(диметиламино)-Ы-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид. В другом примере соединение, имеющее приведённую ниже структуру

может упоминаться как 4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-И-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)1,3-тиазол-4-ил]-5-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-карбоксамид, где указанное название получено с применением компонента системы наименования Мо1еси1е ΐο Сйетюа1 Кате программы Р1ре1ше Ρϊΐοΐ версии 9.1.0, настроенного для наименования соединений в стиле ШРАС, или 4-(4-циклопропил-1Нимидазол-1 -ил)-И-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)-5 -(4-метилпиперазин-1 ил)пиколинамид, где указанное название получено с применением системы именования С'НетВюЭгаеу ИНга.

Комбинированная терапия.

У пациентов-людей, которых лечат от явления, связанного с острым сердечно-сосудистым заболе- 9 027645 ванием, путём введения ингибиторов А8К1, часто проявляются заболевания или состояния, на которые благоприятно действует лечение другими терапевтическими агентами. Данные заболевания или состояния могут иметь сердечно-сосудистую природу или могут быть связаны с лёгочными заболеваниями, нарушениями обмена веществ, желудочно-кишечными расстройствами и т.п. Кроме того, у некоторых пациентов с ишемическим заболеванием, которых лечат от явления, связанного с острым сердечнососудистым заболеванием, путём введения ингибитора А8К1, проявляются состояния, на которые благоприятно действует лечение терапевтическими агентами, которыми являются антибиотики, анальгетики и/или антидепрессанты и успокаивающие средства.

Заболевания или состояния, связанные с сердечно-сосудистой системой, на которые благоприятно действует комбинированная терапия ингибиторами А8К1 с другими терапевтическими агентами, включают, без ограничения, стенокардию, включая стабильную стенокардию, нестабильную стенокардию (НС), вызванную физической нагрузкой стенокардию, вариантную стенокардию, аритмию, перемежающуюся хромоту, инфаркт миокарда, включая не-8ТЕ инфаркт миокарда (ΝδΤΕΜΙ), сердечную недостаточность, включая застойную (или хроническую сердечную недостаточность), острую сердечную недостаточность или рецидивирующую ишемию.

Терапевтические агенты, пригодные для лечения связанных с сердечно-сосудистой системой заболеваний или состояний, включают антистенокардические средства, агенты для лечения сердечной недостаточности, антитромботические агенты, антиаритмические агенты, антигипертензивные агенты и гиполипидемические агенты.

Совместное введение ингибиторов А8К1 и терапевтических агентов, пригодных для лечения состояний, связанных с сердечно-сосудистой системой, позволяет улучшить стандарт лечения, которое пациент получает в настоящее время.

Антистенокардические средства включают бета-блокаторы, блокаторы кальциевых каналов и нитраты. Бета-блокаторы уменьшают потребность сердца в кислороде за счёт снижения его нагрузки, что приводит к снижению частоты сердцебиения и менее энергичным сокращениям сердца. Примеры бетаблокаторов включают ацебутолол, атенолол, бетаксолол, бисопролол/гидрохлоротиазид, бисопролол, картеолол, эсмолол, лабеталол, метопролол, надолол, пропранолол, соталол (Бетапейс) и тимолол.

Нитраты расширяют артерии и вены, тем самым увеличивая коронарный кровоток и уменьшая кровяное давление. Примеры нитратов включают нитроглицерин, нитратные пластыри, изосорбид динитрат и изосорбид-5-мононитрат.

Блокаторы кальциевых каналов препятствует нормальному притоку кальция в клетки сердца и кровеносных сосудов, вызывая расслабление кровеносных сосудов, тем самым увеличивая приток крови и кислорода к сердцу. Примеры блокаторов кальциевых каналов включают амлодипин, бепридил, дилтиазем, фелодипин, нифедипин, нимодипин (Нимотоп), нисолдипин, верапамил и никардипин.

Агенты, применяемые для лечения сердечной недостаточности, включают диуретики, ингибиторы АПФ, вазодилататоры и сердечные гликозиды. Диуретики устраняют избыток жидкости в тканях и кровотоке, тем самым ослабляя многие симптомы сердечной недостаточности. Примеры диуретиков включают гидрохлоротиазид, метолазон, фуросемид, буметанид, спиронолактон и эплеренон.

Ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) снижают нагрузку на сердце за счёт расширения кровеносных сосудов и уменьшения сопротивления кровотоку. Примеры ингибиторов АПФ включают беназеприл, каптоприл, эналаприл, фозиноприл, лизиноприл, моэксиприл, периндоприл, квинаприл, рамиприл и трандолаприл.

Вазодилататоры снижают давление на кровеносные сосуды, заставляя их расслабляться и расширяться. Примеры вазодилататоров включают гидралазин, диазоксид, празозин, клонидин и метилдопа. Ингибиторы АПФ, нитраты, активаторы калиевых каналов и блокаторы кальциевых каналов также выступают в качестве вазодилататоров.

Сердечные гликозиды являются соединениями, которые увеличивают силу сокращений сердца. Эти соединения усиливают насосную способность сердца и улучшают нерегулярное сердцебиение. Примеры сердечных гликозидов включают дигиталис, дигоксин и дигитоксин.

Антитромботические средства ингибируют свёртывающую способность крови. Существуют три основных типа антитромботических средств - ингибиторы тромбоцитов, антикоагулянты и тромболитические агенты.

Ингибиторы тромбоцитов ингибируют свёртывающую активность тромбоцитов, тем самым снижая свёртываемость в артериях. Примеры ингибиторов тромбоцитов включают ацетилсалициловую кислоту, тиклопидин, клопидогрел, дипиридамол, цилостазол, персантин сульфинпиразон, дипиридамол, индометацин и ингибиторы гликопротеинов 11Ь/111а, такие как абциксимаб, тирофибан и эптифибатид. Бетаблокаторы и блокаторы кальциевых каналов также обладают эффектом ингибирования тромбоцитов.

Антикоагулянты предотвращают разрастание тромбов и предотвращают образование новых тромбов. Примеры антикоагулянтов включают бивалирудин, варфарин, нефракционированный гепарин, низкомолекулярный гепарин, данапароид, лепирудин и аргатробан.

Тромболитические агенты действуют, чтобы разрушить существующий тромб. Примеры тромболитических агентов включают стрептокиназу, урокиназу, и тенектеплазу, и тканевой активатор плазмино- 10 027645 гена.

Антиаритмические агенты применяют для лечения нарушений частоты сердечных сокращений и ритма. Примеры противоаритмических средств включают амиодарон, прокаинамид, лидокаин и пропафенон. В качестве антиаритмических агентов также применяют сердечные гликозиды и бета-блокаторы.

Антигипертензивные агенты применяют для лечения гипертензии, состояния, при котором кровяное давление постоянно выше, чем нормальное. Гипертензия связана со многими аспектами сердечнососудистых заболеваний, включая застойную сердечную недостаточность, атеросклероз и тромбообразование.

Примеры антигипертензивных агентов включают альфа-1-адренергические антагонисты, такие как празозин (Минипресс), доксазозин мезилат (Кардура), празозина гидрохлорид (Минипресс), празозин, политиазид (Минизид) и теразозина гидрохлорид (Хайтрин); бета-адренергические антагонисты, такие как пропранолол (Индерал), надолол (Коргард), тимолол (Блокадрен), метопролол (Лопресор) и пиндолол (Вискен); агонисты центральных альфа-адренорецепторов, такие как клонидина гидрохлорид (Катапрес), клонидина гидрохлорид и хлорталидон (Клорпрес, Комбипрес), гуанабенз ацетат (Витензин), гуанфацина гидрохлорид (Тенекс), метилдопа (Альдомет), метилдопа и хлоротиазид (Альдоклор), метилдопа и гидрохлоротиазид (Альдорил); комбинированные альфа/бета-адренергические антагонисты, такие как лабеталол (Нормодин, Трандат), карведилол (Корег); адренергические нейронные блокирующие агенты, такие как гуанетидин (Измелин), резерпин (Серпазил); антигипертензивные средства, оказывающие действие на центральную нервную систему, такие как клонидин (Катапрес), метилдопа (Альдомет), гуанабенз (Витензин); агенты антиангиотензина II; ингибиторы АПФ, такие как периндоприл (Акеон) каптоприл (Капотен), эналаприл (Васотек), лизиноприл (Принивил, Цестрил); антагонисты рецепторов ангиотензина-П, такие как Кандесартан (Атаканд), Эпросартан (Теветен), Ирбесартан (Авапро), Лозартан (Козаар), Телмизартан (Микардис), Валсартан (Диован); блокаторы кальциевых каналов, такие как верапамил (Калан, Изоптин), дилтиазем (Кардизем), нифедипин (Адалат, Прокардия); диуретики; прямые вазодилататоры, такие как нитропруссид (Ниприд), диазоксид (Гиперстат IV), гидралазин (Апрезолин), миноксидил (Лонитен), верапамил; и активаторы калиевых каналов, такие как априкалим, бимакалим, кромакалим, эмакалим, никорандил и пинацидил.

Гиполипидемические агенты применяют, чтобы снизить количество холестерина или жирных сахаров, присутствующих в крови. Примеры гиполипидемических агентов включают безафибрат (Безалип), ципрофибрат (Модалим) и статины, такие как аторвастатин (Липитор), флувастатин (Лескол), ловастатин (Мевакор, Альтокор), мевастатин, питавастатин (Ливало, Питава) правастатин (Липостат), розувастатин (Крестор) и симвастатин (Зокор).

Пациенты, нуждающиеся в ингибиторе А8К1, часто страдают от вторичных заболеваний, таких как одно или более из нарушения обмена веществ, лёгочного расстройства, периферического сосудистого расстройства или желудочно-кишечного расстройства. Такие пациенты могут получить благоприятный эффект от комбинированного лечения, предусматривающего введение пациенту соединений согласно настоящему изобретению в комбинации с по меньшей мере одним терапевтическим агентом.

Лёгочное расстройство относится к любому заболеванию или состоянию, связанному с лёгкими. Примеры лёгочных заболеваний включают, без ограничения, астму, хроническую обструктивную болезнь лёгких (ХОБЛ), бронхит и эмфиземы.

Примеры терапевтических агентов, применяемых для лечения лёгочных заболеваний, включают бронхолитики, включая бета2-агонисты, и антихолинергические средства, кортикостероиды и электролитные добавки. Конкретные примеры терапевтических агентов, применяемых для лечения лёгочных заболеваний, включают эпинефрин, тербуталин, альбутерол, сальметерол, Серевент, теофиллин, бромид ипратропия, тиотропий, метилпреднизолон, магний и калий.

Примеры нарушений обмена веществ включают, без ограничения, диабет, включая диабет типа I и диабет типа II, метаболический синдром, дислипидемию, ожирение, нарушение толерантности к глюкозе, гипертензию, повышенный уровень холестерина в сыворотке крови и повышенные триглицериды.

Примеры терапевтических агентов, применяемых для лечения нарушений обмена веществ, включают антигипертензивные агенты и гиполипидемические агенты, как описано в разделе Комбинированная терапия с применением сердечно-сосудистого агента выше. Дополнительные терапевтические агенты, применяемые для лечения нарушений обмена веществ, включают инсулин, сульфонилмочевины, бигуаниды, ингибиторы альфа-глюкозидазы и миметики инкретина.

Расстройства, связанные с периферическими сосудами, представляют собой расстройства, связанные с кровеносными сосудами (артериями и венами), расположенными за пределами сердца и головного мозга, в том числе, например, заболевание периферических артерий (ЗПА), состояние, которое развивается, когда артерии, которые снабжают кровью внутренние органы, руки и ноги, становятся полностью или частично заблокированными в результате атеросклероза.

Желудочно-кишечные расстройства относятся к заболеваниям и состояниям, связанным с желудочно-кишечным трактом. Примеры желудочно-кишечных расстройств включают гастроэзофагеальное рефлюксное заболевание (ГЭРБ), воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), гастроэнтерит, гастрит, и пептическое язвенное заболевание, и панкреатит.

- 11 027645

Примеры терапевтических агентов, применяемых для лечения желудочно-кишечных расстройств, включают ингибиторы протонной помпы, такие как пантопразол (Протоникс), лансопразол (Превацид), эзомепразол (Нексиум), Омепразол (Прилосек), рабепразол; Н2-блокаторы, такие как циметидин (Тагамет), ранитидин (Зантак), фамотидин (Пепсид), низатидин (Аксид); простагландины, такие как мизопростол (Цитотек); сукральфат; и антациды.

Анальгетики представляют собой терапевтические агенты, которые применяют, чтобы уменьшить боль. Примеры анальгетиков включают опиаты и морфиномиметики, такие как фентанил и морфин; парацетамол; НПВП и ингибиторы ЦОГ-2.

Фармацевтические композиции и введение.

Соединения, предложенные в соответствии с настоящим изобретением, как правило, вводят в виде фармацевтических композиций. Поэтому настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента одно или более описанных соединений, или их фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир, и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, носителей, включая твёрдые инертные разбавители и наполнители, разбавители, включая стерильный водный раствор и различные органические растворители, усилители проницаемости, солюбилизаторы и адъюванты. Фармацевтические композиции можно вводить отдельно или в комбинации с другими терапевтическими агентами. Такие композиции получают способом, хорошо известным в области фармацевтики (см., например, РепипЦоЮ РЬаттасеийса1 Зс1спес5. Масе РиЬйккίη§ Со., РЫ1айе1рЫа, РА 17ΐΠ Εά. (1985); аий Мойет РЬаттасеийск, Магсе1 Оеккег, 1пс. 3τά Ей. (0.8. Ваикег & С.Т. Ккойез, Εάδ.)

Фармацевтические композиции можно вводить либо одной, либо несколькими дозами с помощью любого из приемлемых способов введения агентов, имеющих схожее применение, например, как описано в патентах и патентных заявках, которые включены в настоящее описание посредством ссылки, включая ректальный, буккальный, интраназальный и трансдермальный пути, путём внутриартериальной инъекции, внутривенно, внутрибрюшинно, парентерально, внутримышечно, подкожно, перорально, местно, в виде ингаляции или с помощью пропитанного устройства или устройства с покрытием, такого как стент, например, или путём вставки в артерию цилиндрического полимера.

Одним из режимов для введения является парентеральный, в частности путём инъекции. Формы, в которых новые композиции согласно настоящему изобретению могут быть включены для введения путём инъекции, включают водные или масляные суспензии, или эмульсии, с кунжутным маслом, кукурузным маслом, хлопковым маслом или арахисовым маслом, а также эликсиры, маннит, декстрозу или стерильный водный раствор и подобные фармацевтические носители. Водные растворы в физиологическом растворе также обычно применяют для инъекций, но они менее предпочтительны в контексте настоящего изобретения. Также могут быть применены этанол, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и им подобные (и их подходящие смеси), производные циклодекстрина и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путём применения покрытия, такого как лецитин, путём поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и применением поверхностноактивных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т.п.

Стерильные инъекционные растворы готовят путём введения соединения согласно настоящему изобретению в необходимом количестве в соответствующий растворитель с различными другими ингредиентами, как перечисленные выше, по мере необходимости, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают включением различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие требуемые ингредиенты из тех, которые перечислены выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами приготовления являются способы вакуумной сушки и сублимационной сушки, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любого дополнительного желаемого ингредиента из предварительно стерилизованного фильтрованием его раствора.

Пероральное введение является ещё одним путём для введения соединений в соответствии с настоящим изобретением. Введение может быть осуществлено с помощью капсулы или таблетки с кишечнорастворимым покрытием или т.п. При приготовлении фармацевтических композиций, которые содержат по меньшей мере одно соединение, описанное в данном документе, активный ингредиент обычно разбавляют вспомогательным веществом и/или заключают в таком носителе, который может быть в форме капсулы, саше, бумаги или другого контейнера. Когда вспомогательное вещество служит разбавителем, оно может быть в форме твёрдого, полутвёрдого или жидкого материала (как описано выше), который действует как растворитель, носитель или среда для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, пастилок, саше, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (как твёрдое вещество или в жидкой среде), мазей, содержащих, например, до 10 мас.% активного соединения, мягких и твёрдых желатиновых капсул, стерильных растворов для инъекций и стерильно упакованных порошков.

- 12 027645

Некоторые примеры подходящих вспомогательных веществ включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, стерильную воду, сироп и метилцеллюлозу. Композиции могут дополнительно содержать смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгирующие и суспендирующие агенты; консервирующие агенты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители; и вкусовые агенты.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены таким образом, чтобы обеспечить быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту с применением процедур, известных в данной области техники. Системы доставки лекарственных средств с контролируемым высвобождением для перорального введения включают осмотические насосные системы и системы растворения, содержащие резервуары с полимерным покрытием или составы лекарственных средств с полимерной матрицей. Примеры систем с контролируемым высвобождением приведены в патентах США №3845770; 4326525; 4902514; и 5616345. В другом составе для применения в способах настоящего изобретения используют устройства трансдермальной доставки (пластыри). Такие трансдермальные пластыри можно применять для непрерывной или периодической инфузии соединений согласно настоящему изобретению в регулируемых количествах. Устройство и применение трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны в данной области техники. См., например, патенты США №5023252, 4992445 и 5001139. Такие пластыри могут быть созданы для непрерывной доставки, пульсирующей доставки или доставки по требованию фармацевтических средств.

Композиции предпочтительно готовят в виде единичной лекарственной формы. Термин единичные лекарственные формы относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве разовых доз для человека и других млекопитающих, причём каждая единица содержит заданное количество активного материала, рассчитанное для обеспечения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с подходящим фармацевтическим вспомогательным веществом (например, таблетки, капсулы и ампулы). Соединения обычно вводят в фармацевтически эффективном количестве. Предпочтительно, если для перорального введения каждая лекарственная единица содержит от 1 мг до 2 г соединения, описанного в данном документе, и для парентерального введения - предпочтительно от 0,1 до 700 мг соединения, описанного в данном документе. Следует понимать, однако, что количество фактически вводимого соединения обычно будет определяться лечащим врачом в свете соответствующих обстоятельств, включая состояние, подлежащее лечению, выбранный путь введения, конкретное вводимое соединение и его относительную активность, возраст, вес и реакцию отдельного пациента, тяжесть симптомов пациента и т.п.

Для получения твёрдых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим вспомогательным веществом с образованием твёрдой предварительной композиции, содержащей гомогенную смесь соединения согласно настоящему изобретению. Когда речь идёт об этих предварительных композициях как о гомогенных, это означает, что активный ингредиент диспергирован равномерно по всей композиции, так что композицию можно легко разделить на равно эффективные единичные лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы.

Таблетки или пилюли согласно настоящему изобретению могут быть покрыты оболочкой или составлены иным образом, чтобы обеспечить лекарственную форму, позволяющую получить преимущество, заключающееся в пролонгированном действии, или обеспечить защиту от кислых условий желудка. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний дозированный и наружный дозированный компонент, причём последний находится в виде оболочки поверх первого. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для сопротивления разрушению в желудке и позволяет внутреннему компоненту проходить неповреждённым в двенадцатиперстную кишку или обеспечивает его отсроченное высвобождение. Различные материалы могут быть использованы для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий, и такие материалы включают ряд полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошках. Жидкие или твёрдые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, как описано выше. Предпочтительно, если композиции вводят пероральным или назальным респираторным путём для местного или системного эффекта. Композиции в предпочтительных фармацевтически приемлемых растворителях могут быть распылены с применением инертных газов. Распылённые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства, или распыляющее устройство может быть присоединено к тенту лицевой маски или дыхательному аппарату с прерывистым положительным давлением. Раствор, суспензия или порошковые композиции могут быть введены предпочтительно перорально или назально из устройств, которые доставляют состав соответствующим образом.

Синтез соединений формулы I.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены с помощью описанных здесь способов и их обычных модификаций, которые будут понятны с учётом данного здесь описания, и эти

- 13 027645 способы хорошо известны в данной области техники. В дополнение к излагаемым здесь способам могут быть использованы обычные и хорошо известные способы синтеза. Синтез типичных соединений, описанных здесь, например соединений, имеющих структуры, описанные с помощью одного или более из соединений формулы (I), может быть осуществлён, как описано в следующей схеме А и или как предусмотрено в следующих примерах. Если есть возможность, реагенты могут быть приобретены на коммерческой основе, например в компании §1§та АИпсН или у других поставщиков химических веществ.

4-Бромтиазолкарбоновую кислоту (1) превращают в карбогидразид сначала путём превращения в ацилхлорид с применением реагента, образующего ацилгалогенид, такого как тионилхлорид или оксалилхлорид. Указанный ацилгалогенид затем обрабатывают гидразином с образованием карбогидразида (2). Карбоксамид подвергают циклизации в присутствии диметилформамиддиметилацеталя и соответствующим образом замещённого первичного амина с получением триазола (3), содержащего желаемый заместитель К1. В качестве альтернативы, ацилгалогенид превращают в амин с помощью реакции с соответствующим образом замещённым амином (Κ^!ΝΗ₂) с образованием соответствующего амида соединения (1). Амид превращают в тиоамид реакцией с реагентом Лавессона с применением известных условий или как описано здесь. Тиоамид затем подвергают взаимодействию с гидразином с получением триазола (3). Триазол (3) превращают в аминоаналог (промежуточное соединение А) путём реакции с ацетатом меди и гидроксидом аммония в диметилформамиде (ДМФА) или других растворителях, известных обычному специалисту в данной области техники.

Получение промежуточного соединения С начинают путём сочетания соединения (4) с соответствующим образом замещённым имидазолом, содержащим желаемый заместитель К⁶. Полученный продукт (5) карбонилируют с применением палладийсодержащих реагентов, таких как РД(Дрр£)С1₂, в присутствии монооксида углерода в протонном растворителе, таком как бутанол. Полученную кислоту (6) выделяют в виде промежуточного соединения С. Промежуточное соединение С затем подвергают взаимодействию с промежуточным соединением А с образованием амида - промежуточного соединения Ό. Промежуточное соединение Ό подвергают реакции §_νΑγ и превращают в требуемый амин соединения формулы (I). Специалист в данной области техники способен выполнять описанные здесь реакции, сле- 14 027645 дуя вышеуказанной общей схеме, конкретным представленным здесь процедурам или другим литературным источникам, известным такому специалисту.

Общие способы синтеза.

Типичные варианты реализации соединений в соответствии с настоящим изобретением могут быть синтезированы с применением общих схем реакций, описанных ниже. Из представленного здесь описания будет очевидно, что общие схемы могут быть изменены путём замены исходных материалов на другие материалы, имеющие сходные структуры, что приведёт к получению продуктов, которые, соответственно, разные. Описания синтезов следуют для того, чтобы предоставить многочисленные примеры того, как исходные вещества могут варьироваться, чтобы обеспечить соответствующие продукты. С учётом желаемого продукта, для которого определены замещающие группы, необходимые исходные материалы, как правило, могут быть определены проверкой. Исходные материалы, как правило, получают из коммерческих источников или синтезируют с применением опубликованных способов. Для синтеза соединений, которые являются вариантами реализации настоящего изобретения, проверка структуры соединения, которое будет синтезировано, обеспечит идентичность каждой группы заместителей. Идентичность конечного продукта, как правило, будет делать очевидным идентичность необходимых исходных материалов с помощью простого процесса проверки с учётом приведённых здесь примеров.

Параметры реакций синтеза.

Термины растворитель, инертный органический растворитель или инертный растворитель относятся к растворителю, инертному в условиях реакции, описываемой в связи с ним (включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран (ТГФ), диметилформамид (ДМФА), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), диэтиловый эфир, метанол, пиридин и т.п). Если не указано иное, растворителями, применяемыми в реакциях согласно настоящему изобретению, являются инертные органические растворители, и реакции проводят в атмосфере инертного газа, предпочтительно азота.

Получение 2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-амина (промежуточное соединение А)

Этап 1. Получение 4-бромтиазол-2-карбогидразида.

К раствору 4-бромтиазол-2-карбоновой кислоты (2,0 г, 9,8 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли §ОС1₂(710 мкл, 9,8 ммоль) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали, остаток суспендировали в ЕЮН (10 мл), добавляли гидрат гидразина (2,4 мл, 49 ммоль) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 90 мин. Реакционную смесь концентрировали, суспендировали в СН₃СЫ, фильтровали и твёрдые вещества промывали СН₃СЫ, Е1₂О и сушили с получением 1,7 г (77%) 4-бромтиазол-2-карбогидразида в виде жёлтого твёрдого вещества. М+1 = 222,1.

Этап 2. Получение 4-бром-2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазола.

4-Бромтиазол-2-карбогидразид (620 мг, 2,8 ммоль) и толуол (9 мл) добавляли в герметичную ампулу, добавляли ДМФА ДМА (920 мкл, 6,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин. Добавляли циклопропиламин (770 мкл, 11 ммоль) и АсОН (160 мкл, 2,8 ммоль) и реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе при 150°С в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью флэш-хроматографии (1 7% МеОН в СН₂С1₂) с получением 740 мг 4-бром-2-(4циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазола (загрязнённого ДМФАДМА, но применяемого непосредственно на следующем этапе).

Этап 3. Получение 2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-амина.

В микроволновую ампулу добавляли синтезированный выше бромтиазол (1,0 г, 3,7 ммоль), Си(асас)₂ (97 мг, 0,37 ммоль) и С§₂СО₃ (2,4 г, 7,4 ммоль) и колбу заполняли Ν₂. Добавляли пентадион (150 мкл, 1,5 ммоль), ДМФА (8 мл) и гидроксида аммония (1,1 мл, 300 мкл/ммоль) и реакционную смесь нагревали до 90°С. Когда реакция считалась завершённой с помощью ВЭЖХ (~4 ч), смесь фильтровали через целит, целит промывали СН₂С1₂, фильтрат концентрировали и остаток очищали с помощью флэшхроматографии (6^ 13% МеОН в СН₂С1₂) с получением 480 мг (63% за два этапа) 2-(4-циклопропил-4Н1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-амина в виде масла. М + 1 = 208,2.

Получение 2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-амина (промежуточное соединение В)

- 15 027645

Этап 1. Получение 4-бромтиазол-2-карбоновой кислоты.

К раствору 2,4-дибромтиазола (50 г, 207 ммоль, 1,0 экв.) в Εΐ₂Ο (1000 мл) добавляли и-ВиЫ (90 мл, 2,5М, 1,1 экв.) при температуре -78°С по каплям и перемешивали в течение одного часа. Реакционный раствор выливали в сухой СО₂ при -78°С и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры. ТСХ и ЖХМС показывали завершение реакции. Смесь гасили водой (100 мл). Фазу Εΐ₂Ο удаляли. Водную фазу доводили до рН 2-3 и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили, фильтровали и концентрировали с получением 35 г (выход 82%) 4-бромтиазол-2-карбоновой кислоты. ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 8,23(1Н, 5).

Этапы 2-3. Получение (8)-4-бром-Ы-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2-карбоксамида.

К смеси 4-бромтиазол-2-карбоновой кислоты (80 г, 1,0 экв.) в §ОС1₂ (300 мл) добавляли ДМФА (10 капель). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 5 ч и концентрировали. Остаток растворяли в дихлорметане (300 мл) и добавляли к раствору (8)-1,1,1-трифторпропан-2-амина (60,5 г, 1,05 экв.) с Εΐ₃Ν (117 г, 3,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали в течение ночи. ТСХ и ЖХМС показывали завершение реакции. Смесь гасили водой и экстрагировали ДХМ. Органическую фазу сушили, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с получением 62 г (выход 53%) (§)-4-бром-^(1,1,1трифторпропан-2-ил)тиазол-2-карбоксамида. ¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ 7,47 (1Н, 5), 7,17 (1Н, Ьг 5), 4,74-4,76 (1Н, т), 1,39 (3Н, ά, ί = 6,8 Гц).

Этап 4. Получение (8)-4-бром-^(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2- карботиоамида.

К раствору (8)-4-бром-^(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2-карбоксамида (50 г, 1,0 экв.) в толуоле (1000 мл) добавляли реагент Лавессона (100 г, 1,5 экв.). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. ТСХ и ЖХМС показывали завершение реакции. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с получением 46 г (выход 88%) (§)-4-бром-№(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2карботиоамида.

Этап 5. Получение (8)-4-бром-^(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2-карбогидразонамида.

К раствору (8)-4-бром-^(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2-карботиоамида (46 г, 1,0 экв.) добавляли гидразина гидрат (15 г, 2,0 экв.). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. ТСХ и ЖХМС показывали завершение реакции. Смесь концентрировали и остаток очищали с помощью флэшколонки с получением 48 г (выход 100%) (§)-4-бром-^(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2карбогидразонамида.

Этап 6. Получение (8)-4-бром-2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазола.

(8)-4-Бром-^(1,1,1-трифторпропан-2-ил)тиазол-2-карбогидразонамид (55 г) в триэтоксиметане (500 мл) перемешивали при 90°С в течение 3 ч и затем при 130°С в течение ночи и реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали на колонке с получением 44 г (выход 77%) (§)-4-бром-2-(4-(1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазола. ¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ 8,46 (1Н, 5), 7,43 (1Н, 5), 6,48-6,52 (1Н, т), 1,83 (3Н, ά, ί = 7,2 Гц).

Этап 7. Получение (8)-2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-амина (промежуточное соединение В).

К раствору (8)-4-бром-2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазола (50 г, 120 ммоль, 1,0 экв.) в ДМФА (500 мл) добавляли Си(асас)₂ (3,2 г, 12 ммоль, 0,1 экв.), ацетилацетон (1,2 г, 0,1

- 16 027645 экв.) и ΝΗ₄ΟΗ (50 мл, конц.). Смесь перемешивали при 90°С в течение ночи и концентрировали. Остаток растворяли в МеОН (500 мл) и смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали и остаток очищали на колонке с получением 9,6 г (выход 24%) промежуточного соединения В.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 8,38 (1Η, 5), 6,58-6,65 (1Η, т), 6,14 (1Η, 5), 4,20 (2Н, Ьг 5), 1, 77 (3Н, Д, 1 = 7,2 Гц); ИЭР МС: 264 ([М + 1]).

Получение 4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-фторпиколиновой кислоты (промежуточное соединение С)

Этап 1. Получение 2-хлор-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-фторпиридина.

Суспензию 2-хлор-5-фтор-4-йодпиридина (1,8 г, 1,00 ммоль), 4-циклопропилимидазола (982 мг,

9,10 ммоль), Си₂О (100 мг, 0,700 ммоль), 8-гидроксихинолина (152 мг, 1,05 ммоль), карбоната цезия (4,60 г, 14,0 ммоль) и ПЭГ-3350 (1,4 г) в бутиронитриле (50 мл) нагревали при 65°С в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, концентрировали и остаток распределяли между дихлорметаном и водой. Слои разделяли и водный слой дважды промывали дихлорметаном. Объединённые органические слои сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью флэшхроматографии (15^60% ЕЮАс в гексане) с получением 2-хлор-4-(4-циклопропил-Ш-имидазол-1-ил)-5фторпиридина (702 мг, выход 42%).

Этап 2. Получение бутил-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-фторпиколината. 2-Хлор-4-(4-циклопропил-Ш-имидазол-1-ил)-5-фторпиридин (730 мг, 3,07 ммоль) и РД(Дрр1)С1₂ (112 мг, 0,159 ммоль) суспендировали в дегазированном ΒυΟΗ и реакционный сосуд продували монооксидом углерода, и баллон СО был прикреплён к реакционному сосуду. Смесь нагревали до 70°С в течение 90 мин, фильтровали через целит и концентрировали. Остаток пропускали через короткую пробку с силикагелем с получением бутил-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-фторпиколината (860 мг, 93%).

Этап 3. Получение 4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-фторпиколиновой кислоты. 4-(4-Циклопропил-Ш-имидазол-1-ил)-5-фторпиколинат (640 мг, 2,11 ммоль) растворяли в 1н. ΗΟ (5 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение ночи. Растворитель удаляли, добавляли ΟΗ₃ΟΝ и растворитель удаляли с получением 4-(4-циклопропил-Ш-имидазол-1-ил)-5-фторпиколиновой кислоты, которую применяли непосредственно в последующих реакциях (при условии 100% превращения).

Типовая методика реакции амидного сочетания.

Получение 4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-^(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5-фторпиколинамида (промежуточное соединение Ό)

К смеси промежуточного соединения С ΗΟ (340 мг, 1,2 ммоль), промежуточного соединения А (261 мг, 1,26 ммоль), ΗΑΤυ (638 мг, 1,68 ммоль) и Ν-метилморфолина (330 мкл, 3,00 ммоль) добавляли ДМФА (5 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. Смесь концентрировали, снова растворяли в минимальном количестве ΟΗ₃ΟΝ и добавляли воду по каплям до тех пор, пока густая суспензия не была сформирована. Твёрдые вещества выделяли фильтрованием и промывали ΟΗ₃ΟΝ с получением 320 мг (выход 61%). М+1 = 437,2.

Промежуточное соединение Е получали в соответствии с той же процедурой

- 17 027645

Типовая методика для 8\Лг замещения арилфторида с получением конечных продуктов.

Получение 4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Ы-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5-морфолинопиколинамида

К смеси промежуточного соединения Ό (450 мг, 1,03 ммоль) и К₂СО₃ (430 мг, 3,09 ммоль) в ДМФА (3 мл) добавляли морфолин (270 мкл, 3,09 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 80°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением 390 мг (выход 75%) 4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Ы-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3ил)тиазол-4-ил)-5-морфолинопиколинамида. Все конечные соединения были выделены в виде соли НС1 посредством препаративной ВЭЖХ.

С₂₄Н₂₅М₉О₂8. 504,2. (М+1). Ή ЯМР (ДМСО) δ 10,99 (5, 1Н), 9,57 (5, 1Н), 8,79 (5, 1Н), 8,64 (5, 1Н), 8,27 (5, 1Н), 7,99 (5, 2Н), 4,05-4,09 (1Н, т), 3,61-3,64 (т, 4Н), 2,90-3,05 (т, 4Н), 2,04-2,08 (1Н, т), 1,031,09 (т, 6Н), 0,85-0,90 (т, 2Н).

Следующие соединения были получены аналогичным образом с применением соответствующего амина и указанного промежуточного соединения

Получали с помощью промежуточного соединения Ό 4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Ы-(2-(4циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)-5 -(3 -гидрокси-3 -метилазетидин-1-ил)пиколинамид С₂₄Н₂₅М₉О₂8. 504,2. (М+1). 'Н ЯМР (ДМСО) δ 10,74 (5, 1Н), 9,32 (5, 1Н), 8,76 (5, 1Н), 8,14 (5, 1Н), 8,10 (5, 1Н), 7,93 (5, 1Н), 7,77 (5, 1Н), 4,02-4,06 (1Н, т), 3,67 (66, ί = 8,0, 20,4 Гц, 4Н), 2,01-2,06 (1Н, т), 1,37 (5, 3Н), 1,03-1,10 (т, 6Н), 0,83-0,86 (т, 2Н).

Получали с помощью промежуточного соединения Е (§)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5морфолино-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)пиколинамид С₂₄Н₂₄Р₃Ы₉О₂8. 560,2. (М+1). Ίί ЯМР (ДМСО) δ 11,46 (5, 1Н), 9,56 (5, 1Н), 9,23 (5, 1Н), 8,64 (5, 1Н), 8,27 (5, 1Н), 8,01 (5, 1Н), 7,99 (5, 1Н), 6,78-6,82 (1Н, т), 3,61-3,65 (т, 4Н), 2,90-2,94 (т, 4Н), 2,02-2,06 (т, 1Н), 1,83 (6, ί = 7,2 Гц, 3Н), 1,03-1,07 (т, 2Н), 0,86-0,88 (т, 2Н).

Получали с помощью промежуточного соединения Е (§)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(3гидрокси-3 -метилазетидин-1 -ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4ил)пиколинамид С₂₄Н₂₄Р₃Ы₉О₂8. 560,1. (М+1). Ή ЯМР (ДМСО) δ 11,21 (5, 1Н), 9,24 (Ъг 5, 1Н), 9,22 (5, 1Н), 8,13 (5, 1Н), 8,09 (5, 1Н), 7,96 (5, 1Н), 7,75 (5, 1Н), 6,79 (пент., ί = 7,2 Гц, 1Н), 3,67 (66, ί = 8,0, 19,6 Гц, 4Н), 2,68 (5, 1Н), 2,02-2,05 (1Н, т), 1,82 (6, ί = 7,2 Гц, 3Н), 1,37 (5, 3Н), 1,01-1,06 (т, 2Н), 0,81-0,85 (т, 2Н).

- 18 027645

Получали с помощью промежуточного соединения Е (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5(диметиламино)-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2-ил)-4Н- 1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)пиколинамид С₂₂Н₂₂Р₃М₉О8. 518,1. (М+1). Ή ЯМР (ДМСО) δ 11,32 (5, 1Н), 9,43 (5, 1Н), 9,23 (5, 1Н), 8,55 (5, 1Н), 8,17 (5, 1Н), 7,98 (5, 1Н), 7,84 (5, 1Н), 6,80 (пент., 1 = 7,2 Гц, 1Н), 2,73 (5, 6Н), 2,02-2,06 (1Н, т), 1,83 (4, 1 = 7,2 Гц, 3Н), 1,01-1,06 (т, 2Н), 0,84-0,88 (т, 2Н). Дополнительный общий способ получения соединений форму-

В реакционный 2 мл сосуд помещали соответствующий аминный нуклеофил (4,1 эквивалента) и К₂СО₃ (6,1 эквивалента). К этой смеси добавляли раствор промежуточного соединения И или Е (1,0 эквивалент) в ΝΜΡ (0,15 М). Смесь нагревали при 80°С в течение 16 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и к этому раствору добавляли ЕЮАс. Полученный супернатант переносили в отдельную пробирку. Растворитель удаляли с помощью Сепеуас и полученное твёрдое вещество промывали водой и сушили с получением целевого продукта. Идентичность продукта подтверждали посредством ЖХМС.

Получение 4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)^-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-

В реакционный 2 мл сосуд помещали пирролидин-3-ола гидрохлорид (22,7 мг, 0,19 ммоль) и К₂СО₃(38 мг, 0,28 ммоль). К этой смеси добавляли раствор промежуточного соединения И (20 мг, 0,046 ммоль) в ΝΜΡ (0,3 мл). Смесь нагревали при 80°С в течение 16 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и к этому раствору добавляли ЕЮАс (1 мл). Растворитель удаляли с помощью Сепеуас и полученное твёрдое вещество промывали водой и сушили с получением 4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-^[2-(4циклопропил-1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5 -(3 -гидроксипирролидин-1 -ил)пиридин-2карбоксамида (соединение 10). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₄Н₂₆^О₂8 504,2, 504,1.

Соединения 6, 9, 12, 15 и 17 были получены аналогичным образом с применением промежуточного соединения И хи |И

5-(Азетидин-1-ил)-4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)^-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3тиазол-4-ил]пиридин-2-карбоксамид (соединение 6). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₃Н₂₃^О8 474,2, найдено: 474,2.

- 19 027645

4-(4-Циклопропилимидазол-1 -ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5 пирролидин-1-илпиридин-2-карбоксамид (соединение 9). МСНР (ИЭР') т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₄Н₂₅Ы₉О8 488,2, найдено: 488,2.

4-(4-Циклопропилимидазол-1 -ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5 пиперидин-1-илпиридин-2-карбоксамид (соединение 12). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для

4-(4-Циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)пиридин-2-карбоксамид (соединение 15). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₆Н₂₉Ы₉О₂8 532,2, найдено: 532,1.

4-(4-Циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4метилпиперазин-1-ил)пиридин-2-карбоксамид (соединение 17). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₅Н₂₈А₀О8 517,2, найдено: 517,1.

Соединения 7, 8, 11, 13, 14 и 16 были получены с помощью аналогичной общей методики получения с применением промежуточного продукта Е

(8)-5-(Азетидин-1 -ил)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 7). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂зН₂₂РзАО8 530,2, найдено: 530,2.

(8)-4-(4-Циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(пирролидин-1 -ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 8). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₄Н₂₄Р_зЫ₉О8 544,2, найдено: 543,8.

4-(4-Циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(3-гидроксипирролидин-1-ил)-Ы-(2-(4-((§)-1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 11). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₄Н₂₄Р₃Ы₉О₂8 560,2, найдено: 560,2.

- 20 027645

(3)-4-(4-Циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(пиперидин-1 -ш1)-Ы-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 13). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₃Н₂₆Р₃М₉О3 558,2, найдено: 557,9.

(3)-4-(4-Циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)-Ы-(2-(4-(1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 14). МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₆Н₂₈Р₃Ы₉О₂3 588,2, найдено: 587,9.

(3)-4-(4-Циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(4-метилпиперазин-1 -ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1-трифторпропан2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (соединение 16) МСНР (ИЭР+) т/ζ [М+Н]+ рассчитано для С₂₃Н₂-Р₃Ц₀О3 573,2, найдено: 573,1.

Применение, тестирование и введение.

Общее применение.

Соединения формулы I, как полагают, являются эффективными для лечения состояний, которые реагируют на введение ингибиторов АЗК1. В частности, соединения формулы I являются подходящими для лечения широкого диапазона заболеваний, например аутоиммунных расстройств, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний (включая диабет, диабетическую нефропатию и другие осложнения диабета), кардиоренальных заболеваний, включая заболевания почек, фиброзных заболеваний, заболеваний органов дыхания (включая ХОБЛ, идиопатический лёгочный фиброз (ИЛФ) и острое повреждение лёгких), острых и хронических заболеваний печени и нейродегенеративных заболеваний.

Тестирование.

Тестирование активности проводили согласно тому, как описано в приведенных ниже примерах, и с помощью способов, очевидных специалисту в данной области техники.

Следующие примеры включены для демонстрации предпочтительных вариантов реализации настоящего изобретения. Специалистам в данной области техники должно быть понятно, что способы, раскрытые в примерах, представляют собой способы, предложенные изобретателем (-ми) для реализации настоящего изобретения на практике с хорошими результатами и, таким образом, могут рассматриваться как предпочтительные способы для практической реализации настоящего изобретения. Однако специалистам в данной области техники должно быть, в свете настоящего описания, понятно, что в конкретных вариантах реализации настоящего изобретения, которые раскрыты, может быть сделано большое количество изменений, и при этом будет достигнут похожий или аналогичный результат без отступления от сущности и объема настоящего изобретения.

Биологические исследования.

Для оценки ингибирующей активности соединений согласно настоящему изобретению в отношении АЗК1 (регулирующей апоптотические сигналы киназы 1) киназы их активность была исследована с применением ТК-РКЕТ-анализа АЗК1 киназы, который определяет количество фосфата, переносимого на пептидный субстрат из АТФ.

Материалы и способы.

Реагенты.

Дефосфорилированная рекомбинантная человеческая АЗК1 киназа была получена от ОИеай 3с1спсс5. Представляющий собой малую молекулу ингибитор киназы - стауроспорин (# 36942 по каталогу) и дитиотреитол (ЭТТ. # 43815-50 по каталогу) были получены от 31дта СНеписаР (31. Ьош8, МО). АТФ (# 7724 по каталогу) была получена от АГГуте1п\ (3ап1а С1ага, СА) и тестируемые соединения были по- 21 027645 лучены от СПеай §с1епсев. Набор НТКР ΚίηΕΑ§Ε™-δΤΚ §3 был получен от С1вЫо (ВейГогй, МА). Все остальные реагенты были самого высокого класса из коммерчески доступных.

Анализы.

Данный анализ позволяет определить уровень фосфорилирования биотинилированного пептидного субстрата с помощью киназы А§К1 с применением обнаружения НТКР (6,1). Это конкурентоспособный, обладающий большой разрешающей способностью по времени, передающий энергию посредством флуоресцентного резонанса (ТК-РКЕТ) иммунологический анализ на основе руководства НТКР® ΚίпЕА§Е™-§ТК от С1вЫо (6,1). Тестируемое соединение, 1 мкМ пептидный субстрат §ТК3, 4 нМ А§К1 киназы инкубировали с 10 мМ МОР буфером, рН 7,0, содержащим 10 мМ Мд-ацетата, 0,025% ΝΡ-40, 1 мМ ДТТ, 0,05% бычьего сывороточного альбумина и 1,5% глицерина в течение 30 мин, затем добавляли 100 мкМ АТФ, чтобы начать реакцию киназы, и инкубировали в течение 3 ч. К пептидному антителу, меченному 1Х Еи³⁺, добавляли криптатный буфер, содержащий 10 мМ ЭДТА и 125 нМ стрептавидина ХЬ665, чтобы остановить реакцию, и проводили детектирование фосфорилированного пептидного субстрата с помощью Εηνίβίοη 2103 МиШ1аЪе1еД геабег от компании Регк1пЕ1тег. Флуоресценцию измеряли при 615 нм (криптат) и 665 нм (ХЬ665) и для каждой лунки рассчитывали соотношение 665 нм/615 нм. Полученный уровень ТК-РКЕТ (соотношение 665 нм/615 нм) пропорционален уровню фосфорилирования. В этих условиях анализа степень фосфорилирования пептидного субстрата была линейной с увеличением времени и концентрации этого фермента. Данная система анализа позволила получить соответствующие результаты в отношении К_т и конкретных активностей для фермента. Для экспериментов по ингибированию (значения ТС₅₀), действия были выполнены с постоянными концентрациями АТФ, пептида и нескольких фиксированных концентраций ингибиторов. Стауроспорин, неселективный ингибитор киназы, применяли в качестве положительного контроля. Все данные по ферментативной активности представляли в виде среднего, рассчитанного при определении в четырех повторностях.

Анализ данных.

Величины !С, рассчитывали из следующего уравнения:

у = Диапазон / {1 + (х / IС5₀)³} + Фон, где х и у представляют собой концентрацию ингибиторов и активность фермента соответственно. Активность фермента выражена как количество фосфата, включенного в пептидный субстрат из АТФ. Диапазон представляет собой максимальный диапазон у (без ингибитора, контроль ДМСО), и 5 представляет собой угловой коэффициент (6,2).

Результаты.

В соответствии с описанным выше способом, тестируемые соединения формулы (I) ингибируют А§К1, как показано ниже.

Наименование соединения А8К1

1С₅о(нМ)

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 ил)-Ы-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,41,44 триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5морфолинопиколинамид 4-(4-циклопропил-1 Н-имидазол-1 ил )^-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4триазол-3-ил)тиазол-4-ил )-5-(31,58 гидрокси-З-метилазетидин-1ил)пиколинамид (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол1 -ил)-5-морфолино-1Ч-( 2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4- 2,62 триазол-3-ил)тиазол-4ил)пиколинамид (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол1 -ил)-5-(3-гидрокси-3метилазетидин-1 -нл)-М-(2 -(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4- 1,69 триазол-3-ил)тиазол-4ил)пиколинамид

Пример #

- 22 027645 (5)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол1-ил)-5-(диметиламино)-Ь-(2-(4(1,1,1 -трифторпропан-2-ил)-4Н- 1,88

1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-45 ил)пиколинамид

Стауроспорин ρ

Данные показывают, что тестируемые соединения формулы (I) являются сильными ингибиторами ΑδΚ-1 рецептора.

Анализ ΑδΚ1 (регулирующей апоптотические сигналы киназы 1) на основе 293-клеток (ЕС₅₀ для клеток).

Активность соединений в отношении клеток анализировали в клетках, стабильно экспрессирующих репортерную конструкцию АР-1:люцифераза (293/АР1-Ьис се11в - Раиоткв Шс, 6519 ЭитЬаПои С1гс1е, Ргетои!, СА). Клетки инфицировали аденовирусом, экспрессирующим киназу, активную в отношении ΑδΚ1 (631-1381 кДНК ΑδΚ1 крыс), который активирует транскрипционный фактор АР-1 и повышает экспрессию люциферазы. Ингибиторы ΑδΚ1 будут уменьшать ферментативную активность ΑδΚ1 и, следовательно, снижать активность транскрипционного фактора АР-1 и экспрессию люциферазы.

1. Материалы, необходимые для настоящего протокола

Среды и реагенты	Компания- поставщик	Номер по каталогу
ΑΡ-1-репортер- стабильная клеточная линия 293	Рапоппсз	Неизвестно
ΏΜΕΜ (с высоким уровнем глюкозы, без Ь-глутамина, с пируватом, с НЕРЕЗ	Ме(НаТесЬ	15-018-СМ
ϋΜΕΜ (с высоким	ЫуШ'осеп	31053-028

- 23 027645

уровнем глюкозы, без Ь-глутамина, без пирувата, без НЕРЕЗ, без фенолового красного
ΗΕΡΕδ, 1М	1пУ11го§еп	15630-080
Натрия пируват, 100 мМ	ΙηνϊίΓΟ£>βη	11360-070
Фетальная бычья сыворотка, ФБС	Нус1опе	8Н30088.03
Реп-31гер-О1и1, “РЗО”	ΙηνίΐΐΌίίίιι	10378-016
Гидромицин В	Са1ЫосЬет	400052
РВЗ в модификации Дульбекко (стерильный)	МесйаТесй	21-030-СМ
Трипсин-ЭДТА (0,25%)	ΙηνϊΐΐΌρεπ	25200-056
Система анализа люциферазы 31еа4у- О1о	Рготеда	Е2550
Лабораторное оборудование	Поставщик	Номер по каталогу

Колбы (с покрытием из поли-Э-лизина, 150 см², крышка с отверстием)	Βϋ Вюзаепсез	356538
Планшеты (с покрытием ИЗ ПОЛИ- ϋ-лизина, 384- луночные, белые/ прозрачные, стерильный ТСТ)	Отешет (через ν\νκ Заепййс)	781944 (82051-354)

Белая защитная лента	РегкшЕ1тег	6005199
Клеточные	ν\νρ	21008-949
фильтрационные сита (40 мкм нейлон, синее кольцо, подходят для 50 мл конических пробирок)	Заепййс

2. Вспомогательные материалы.

1. Листок-вкладыш для стабильной клеточной линии Рапот1С5 293/АР1-Ьис.

2. Листок-вкладыш для люциферазной системы анализа Рготеда 5>1еаДу-С1о.

- 24 027645

3. Необходимые среды.

3. Готовая питательная среда, СОМ:

a. ΌΜΕΜ (МеФаТесЬ);

b. 10% РВ8;

c. 1% Р8О;

ά. 100 мкг/мл гидромицина В.

4. Среда для анализа, АМ:

a. ΌΜΕΜ (1пуйгодеп);

b. 25 мМ НЕРЕЗ;

c. 1 мМ пирувата натрия; ά. 1% Р8О 4.

Способы.

Поддержание.

1. 293/АР1-Ьис поддержание 293/Асе11§ в соответствии с инструкциями поставщика; клетки собирали при ~ 80% конфлюентности в колбах Т150 следующим образом:

a. Аспирировали среду, аккуратно промывали ~12 мл стерильной Ό-ΡΒδ, аспирировали.

b. Добавляли 5 мл трипсин-ЭДТА, аккуратно наклоняли для покрытия колбы и инкубировали ~5 мин при 37°С.

c. Не закрывали колбу; добавляли 5 мл СОМ, промывали колбы 4Х клеточной суспензией, переносили в 50 мл коническую пробирку, центрифугировали 5 мин при 1200 оборотов в минуту.

ά. Аспирировали среду из клеточного осадка, добавляли от 20 до 30 мл СОМ, ресуспендировали осадок с помощью пипетирования 6Х, пропускали через клеточные фильтрационные сита, чтобы разогнать скопления (при необходимости) и считали клетки с помощью гемоцитометра.

1- й день анализа.

2. Собирали клетки, как указано выше, за исключением ресуспендирующего осадка клеток. Считали клетки и разбавляли до 1,5 χ 10⁵ клеток на мл; добавляли аденовирус, так чтобы приходилось 5 инфекционных образующих единиц на клетку.

3. Заливали (от 20 до 30 мл) и засеивали клетки в покрытые поли-Э-лизином 384-луночные планшеты Огешег при плотности 1,2 χ 10⁴ клеток на лунку с применением ВюТек иРШ (80 мкл на лунку).

4. Сразу планшеты с дозами по 0,4 мкл серий доз соединения (в 100% ДМСО) инкубировали 24 ч в увлажнённом инкубаторе (37°С, 5% СО2).

2- й день анализа.

5. Планшеты обрабатывали (в соответствии с инструкциями изготовителя) следующим образом:

a. устанавливали планшеты в ламинарный бокс и открывали на 30 мин для охлаждения при комнатной температуре;

b. удаляли 60 мкл АМ из анализируемых лунок;

c. добавляли 20 мкл на лунку субстрата 81еайу-О1о РпеЛу, оставляли на 10-20 мин при комнатной температуре;

ά. накрывали дно планшетов для анализа белой защитной лентой;

е. получали данные на флуоресцентном спектрофотометре для чтения планшетов.

Лунки положительного контроля со 100%-ным ингибированием получали путём инфицирования клеток аденовирусом, экспрессирующим каталитически неактивную мутантную АЗК1 с мутацией лизина в аргинин в остатке 709.

- 25 027645

Результат.

Пример #

Наименование соединения

4-(4-циклопропил-1 Н-имидазол-1 -ил)Я-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол3- ил)тиазол-4-ил)-5морфолинопиколинамид

4- (4-циклопропил-1 Н-имидазол-1 -ил)Т4-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол3-ил)тиазол-4-ил)-5-(3-гидрокси-3метилазетидин-1 -ил )пиколинамид

А8К1 ЕС50 (нМ)

13.15

11,17 (5)-4-(4-циклопропил-1 Н-имидазол-1ил)-5-морфолино-Т4-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид (8)-4-(4-циклопропил-1 Н-имидазол-1 ил)-5-(3-гидрокси-3 -метнлазетнднн-1 ил)-Я-(2-(4-( 1,1,1-трифторпропан-2ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4ил)пиколинамид (3)-4-(4-циклопропил-1 Н-имидазол-1 ил)-5-(диметиламино)-14-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид

6,74

5,21

7,12

Приведённые выше данные показывают, что соединения формулы (Ι), в частности протестированные соединения, обладают сильной эффективностью ш-уйго.

Анализ СХСЬ1 цельной крови человека.

Реагенты.

Кровь человека, собранная в стеклянные вакуумные пробирки с гепарином натрия (ΒΌ Вюкиепсек # 366480), была получена из Стэнфордского центра крови (Пало-Альто, Калифорния). Аммоний-хлоридкалийный (АХК) буфер для лизиса красных кровяных телец был получен из компании ΙηνίΐΓΟ^η (А10492-01). Фосфатный буфер (РВ§, 21-031-СУ) и среда КРМ1640 (10-040-СУ) были приобретены в компании Се11дго. Конические 50 мл пробирки были получены от компании ΒΌ Вюкиепсек (352070). Многоситовые фильтрующие планшеты (М§ВУ81210), применяемые вместе с вакуумным коллектором для 96-луночных планшетов (МАУМ0960К) были приобретены в компании ΕΜΌ МПИроге 1пс. Переносящие пипетки (13-711-20) и гемоцитометр (0267110) были приобретены в компании Тйегшо Икйет §С1епййс. А11едга ΧΙ5Κ от компании Весктапп СоиЙет применяли для всех этапов центрифугирования при выделении мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК).

Ингибиторы А8К1 и Ауранофин (Еп/о ИГе 8с1епсе8 1пс.ВМЬ-Е1206-0100) растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО, §1§та А1йпсй #472301 по каталогу) в концентрации 10 и 100 мМ соответственно. Аликвоты хранили в замороженном виде при -20 °С до момента применения, повторно не применяли или повторно не замораживали. Последовательные разбавления ингибиторов А8К1 были заранее приготовлены в физиологическом растворе (рН 4,5-7, Нокрйа 1пс., РЬ-2099). Клеточный буфер для экстракции (ΡΝΝ0011) и ингибирующая смесь протеазы/фосфатазы НаЙ (78442) были приобретены в компаниях ИГе Тесйпо1од1е8, 1пс. и Тйеттойкйет §аепййс 1пс. соответственно. Воеке1 киепййс Коскег II применяли для встряхивания планшетов между обработками. Определяли количество белка СХСЬ1 посредством иммуноферментного анализа (ЕЫ8А) от компании Мййроге.

Лечение соединением и стимуляция ауранофином.

Исходный 10 мМ раствор ингибитора А8К1 в ДМСО разбавляли в физиологическом растворе с образованием 100 мкМ (10х) рабочего раствора. Данный раствор подвергали серийному трёхкратному разбавлению в физиологическом растворе для получения 8 точек, где каждая концентрация составляла 10х

- 26 027645 от предполагаемой конечной концентрации. 10 мкл каждого 10х рабочего раствора добавляли в восемь лунок 96-луночного планшета, содержащего 90 мкл цельной крови, с обеспечением диапазона доз от 10 мкм до 1,5 нМ (конфигурация планшета для анализа показана на фигуре), с восемью повторностями для каждой концентрации. Образцы инкубировали в течение одного часа в инкубаторе при 37°С и 5% СО2. Исходный 100 мМ раствор ауранофина разбавляли до 100 мкМ в среде ΕΡМI и добавляли 5 мкл в каждую лунку планшета для анализа с получением конечной концентрации приблизительно 5 мкМ. В контрольные образцы, которые не были обработаны ингибитором А8К1 или ауранофином, добавляли ДМСО/физиологический раствор в эквивалентных количествах, а также в лунки, инкубируемые с самой высокой концентрацией тестируемого соединения (0,1% конечной концентрации ДМСО). Образцы инкубировали в инкубаторе при 37°С и 5% СО2 в течение 24 ч при мягком помешивании. В конце периода инкубации 100 мкл среды ΕΡМI 1640 добавляли в каждую лунку и содержимое планшетов осторожно перемешивали и затем центрифугировали при 1000хд в течение 10 мин при 4°С для осаждения клеток. 50 мкл полученного супернатанта из каждой лунки переносили в новый 96-луночный планшет для анализа и рассчитывали количество СХСЫ посредством иммуноферментного анализа с принадлежностями от компании Ргосаг1а в соответствии с инструкциями производителя. Каждое соединение тестировали на крови по меньшей мере двух независимых доноров.

Окончательная конфигурация планшета для анализа.

Тестируемое соединение, мкМ 0 0 0,0045 0,014 0,041 0,12 0,37 1,1 3,3 10

Анализ данных.

Для определения значений ЕС50 полученные данные анализировали с применением программного обеспечения ОгарЬРаб Рпзт 5 (ОгарЬРаб 8о£1^аге ^с., Ьа 1о11а, СА, И8А) с применением нелинейной регрессии для подбора кривой с переменным наклоном. В отчет вносили среднюю ЕС50 по меньшей мере от двух независимых доноров.

Результаты.

Пример №	Название соединения	\УВ ЕС50 нМ (п = 4)
1	4-(4-цикл0пропил-1Н- имид азол- 1-ил )-Ν-(2-(4- циклопропил-4Н-1,2,4- триазол-3-ил)тиазол-4- ил)-5- морфолинопиколинамид	243
3	(3)-4-(4-цикл опропил-1Н- им ид азол- 1 - и л)-5 - морфолино-1Ч-(2-(4- (1,1,1 -трифтор пропан-2- ил)-4Н-1,2,4-триазол-З- ил)тиазол-4- ил)пиколинамид	202

- 27 027645

Данные показывают, что соединения формулы (I) являются сильными ингибиторами ΑδΚ1 ίη νίνο. Активности соединений 6-17 были исследованы с применением анализа, который позволяет измерить уровень фосфорилирования биотинилированного пептидного субстрата киназой Ά8Κ1 с применением того же конкурентного ТК-РКЕТ иммуноанализа на основе руководства к НТКР® ΚίηΕΑδΕ™-δΤΚ от компании С'АЪю (6,1), как описано выше. Тестируемые соединения ингибировали Α8Κ1, как показано ниже.

Наименование соединения Юо в

Пример # отношении

А8К1 (нМ)

6	5-(азетидин-1 -ил )-4-(4циклопропилимидазол-1 -ил)-И-[2(4-циклопропил-1,2,4-триазол-З ил)-1,3-тиазол-4-ил]пиридин-2карбоксамид	2,4
7	(3)-5-(азетидин-1 -ил)-4-(4циклопропил- 1Н-имидазол-1 -ил)Ν-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан-2ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол4-ил)пиколинамид	1,7
8	(5)-4-(4-циклопропил-ΙΗимидазол- 1 -ил)-5-(пирролидин-1 ил)-К-(--(4-( 1,1,1 -трифторпропан2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-Зил)тиазол-4-ил)пиколинамид	2,2
9	4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)N-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5пирролидин-1 -илпиридин-2карбоксамид	1,9
10	4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)N-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(3гидроксипирролидин-1 - ил)пиридин-2-карбоксамид	3
11	4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)5 - (3 -гидроксипирролидин-1 - ιυι)-Ν[2-[4-( 1,1,1-трифторпропан-2-ил)1,2,4-триазол-З-ил] -1,3 -тиазол-4ил]пиридин-2-карбоксамид	2,2
12	4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)Ы-[2-(4-ииклопропил-1,2,4-триазолЗ-ил)-1 , З-тиазол-4-ил] -5пиперидин-1 -илпиридин-2карбоксамид	2
13	(8)-4-(4-циклопропил-1Нимидазол-1 -ил)-5 -(пиперидин-1 ι«ι)-Ν-(2-(4-( 1,1,1-трифторпропан2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-Зил)тиазол-4-ил)пиколинамид	0,7
14	4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)5 -(4-гидрокси-4-метилпиперидин1-ππ)-Ν-[2-[4-(1,1,1- трифторпропан-2-ил)-1,2,4триазол-З -ил] -1,3 -тиазол-4ил]пиридин-2-карбоксамид	1,8

- 28 027645

15	4-(4-циклОпропилимидазол-1-ил)Ν-[2-ι'4- щ ι клопроп нл-1,2,4-триазол3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4гидрокси-4-метилпиперидин-1 ил)пиридин-2-карбоксамид	2,5
16	(8)-4-(4- циклопропил-1Нимидазол-1 -ил)-5-(4мети лпиперазин-1 -ил)-Я-(2-(4(1,1,1 -трифторпропан-2-ил)-4Н1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4ил)пиколинамид	2,1
17	4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)Ч-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4мети лпиперазин-1 -ил)пиридин-2карбоксамнд	3,1

Полученные данные показывают, что тестируемые соединения формулы (I) являются сильными ингибиторами рецептора А8К-1.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) где К¹ представляет собой С1-С3 алкил или С₃-С₆ циклоалкил, где алкил или циклоалкил необязательно замещен 1-3 атомами галогена;

К² представляет собой водород или С1-С₆ алкил, где алкил необязательно замещён галогеном;

К³ представляет собой водород или Ц-С₃ алкил;

К⁴ представляет собой водород или Ц-С₃ алкил;

К⁵ представляет собой водород, С-С₃ алкил, ОК^а или -ΝΗΚ^α;

К⁶ представляет собой водород, С-С₃ алкил, Ц-С₃ галогеналкил или С₃-С₆ циклоалкил, где циклоалкил необязательно замещён С₁-С₃ алкилом, С₁-С₃ галогеналкилом или 1 или 2 атомами галогена;

К^а и К^ь независимо представляют собой водород, С1-С3 алкил, или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-6-членной гетероциклической группы, необязательно содержащей атом кислорода или азота в кольце; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, независимо выбранными из С₁-С₃ алкила и гидроксила;

или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

К¹ представляет собой Ц-С₃ алкил или С₃-С₆ циклоалкил, где алкил или циклоалкил необязательно замещен 1-3 атомами галогена;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой С-С₃ алкил или С₃-С₆ циклоалкил;

К^а и К^ь независимо представляют собой водород или С1 -С₃ алкил; или К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-6-членной гетероциклической группы, необязательно содержащей атом кислорода в кольце; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, независимо выбранными из С1-С3 алкила и гидроксила; или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.
3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

К¹ представляет собой С1-С3 алкил или циклопропил, где алкильная группа замещена тремя атомами фтора;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой циклопропил;

- 29 027645 они присоединены, с образованием 4-6-членной гетероциклической группы, необязательно содержащей атом кислорода в кольце; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из С₁ -С₃ алкила и гидроксила;

или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.
4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

К¹ представляет собой С₁ -С₃ алкил или циклопропил, где алкил или циклопропил необязательно замещены 1-3 атомами фтора;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой С)-С₃ алкил, С₁-Сз галогеналкил или циклопропил, где циклопропил замещён 1-2 атомами фтора;

К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием гетероциклической группы, выбранной из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из С₁-С₃ алкила и гидроксила;

или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.
5. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

К¹ представляет собой метил, этил, пропил, фторметил, дифторметил, трифторметил, фторэтил, дифторэтил, трифторэтил, фторпропил, дифторпропил, трифторпропил, фторциклопропил, дифторциклопропил или циклопропил;

К² представляет собой водород;

К³ представляет собой водород;

К⁴ и К⁵ оба представляют собой водород;

К⁶ представляет собой метил, этил, пропил, фторметил, дифторметил, трифторметил, фторэтил, дифторэтил, трифторэтил, фторпропил, дифторпропил, трифторпропил, фторциклопропил, дифторциклопропил или циклопропил;

К^а и К^ь объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием гетероциклической группы, выбранной из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила; при этом гетероциклическая группа дополнительно необязательно замещена одной или двумя группами, выбранными из метила, этила, пропила и гидроксила;

или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.
6. Соединение, выбранное из группы, состоящей из

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)^-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5морфолинопиколинамида;

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)^-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5(3 -гидрокси-3 -метилазетидин-1 -ил)пиколинамида;

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-морфолино-^(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

,^Ν=ι о я-³, N

- 30 027645 (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(3 -гидрокси-3 -метилазетидин-1-ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамида; и (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(диметиламино)-Ы-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

или его фармацевтически приемлемая соль или энантиомер.
7. Соединение по п.6, отличающееся тем, что соединение представляет собой (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(диметиламино)-Н-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль или энантиомер.
8. Соединение по п.6, отличающееся тем, что соединение представляет собой (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(3 -гидрокси-3 -метилазетидин-1-ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль или энантиомер.
9. Соединение по п.6, отличающееся тем, что соединение представляет собой

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Н-(2-(4-циклопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)-5(3-гидрокси-3-метилазетидин-1-ил)пиколинамид или его фармацевтически приемлемую соль или энантиомер.
10. Соединение, выбранное из группы, состоящей из

5-(азетидин-1-ил)-4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-М-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3тиазол-4-ил]пиридин-2-карбоксамида;

(8)-5-(азетидин-1-ил)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)-4Н1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

- 31 027645 (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(пирролидин-1-ил)-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)-Ы-[2-(4-циклопропил- 1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5пирролидин-1 -илпиридин-2-карбоксамида;

4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(3гидроксипирролидин-1 -ил)пиридин-2-карбоксамида;

4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(3-гидроксипирролидин-1-ил)-Ы-(2-(4-((§)-1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

4-(4-циклопропилимидазол-1 -ил)-Ы-[2-(4-циклопропил- 1,2,4-триазол-3 -ил)-1,3-тиазол-4-ил] -5пиперидин-1 -илпиридин-2-карбоксамида;

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-5-(пиперидин-1-ил)-М-(2-(4-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)4Н-1,2,4-триазол-3 -ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

(8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(4-гидрокси-4-метилпиперидин-1 -ил)-Ы-(2-(4-( 1,1,1трифторпропан-2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамида;

4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-Ы-[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)пиридин-2-карбоксамида;

- 32 027645 (8)-4-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1 -ил)-5-(4-метилпиперазин-1 -ττ.τ)-Ν-(2-(4-( 1,1,1 -трифторпропан2-ил)-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)тиазол-4-ил)пиколинамида; и

4-(4-циклопропилимидазол-1-ил)-^[2-(4-циклопропил-1,2,4-триазол-3-ил)-1,3-тиазол-4-ил]-5-(4метилпиперазин-1 -ил)пиридин-2-карбоксамида;

или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.
11. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически эффективное количество соединения по пп.1-10 и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
12. Способ лечения аутоиммунных расстройств, воспалительных заболеваний, сердечнососудистых заболеваний, диабетов, диабетической нефропатии, кардиоренальных заболеваний, заболеваний почек, фиброзных заболеваний, заболеваний органов дыхания, острых и хронических заболеваний печени и нейродегенеративных заболеваний, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по пп.1-10.
13. Способ лечения по п.12, отличающийся тем, что заболевания органов дыхания включают ХОБЛ, идиопатический лёгочный фиброз (ИЛФ) и острое повреждение лёгких.
14. Способ лечения хронического заболевания почек, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по пп.1-10.
15. Способ лечения фиброза лёгких или фиброза почек, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по пп.1-10.
16. Применение соединения по пп.1-10 для получения лекарственного средства для лечения аутоиммунных расстройств, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний, диабет, диабетическую нефропатию, кардиоренальных заболеваний, заболеваний почек, фиброзных заболеваний, заболеваний органов дыхания, острых и хронических заболеваний печени и нейродегенеративных заболеваний.
17. Применение по п.16, отличающееся тем, что заболевания органов дыхания включают ХОБЛ, идиопатический лёгочный фиброз (ИЛФ) и острое повреждение лёгких.