DK2447361T3 - Alpha-amylase- (AMYS) varianter af geobacillus stearothermophilus med forbedrede egenskaber - Google Patents

Claims (15)

1. Alpha-amylase- (AMYS) varianter af geobacillus stearothermophilus med forbedrede egenskaber PATENTKRAV

   1. Polypeptidvariant, der har α-amylaseaktivitet, hvor polypeptidvarianten har mindst én ændret egenskab, der forbedrer enzymperformance, hvilken polypeptidvariant omfatter: en aminosyresekvens, der er mindst 90 % aminosyresekvensidentisk med et parentalt a-amylase-polypeptid, der er udvalgt fra AmyS og har sekvensen SEQ ID NO: 1, eller en trunkeret variant af AmyS, der har sekvensen SEQ ID NO: 2, og der har mindst følgende mutation ved en aminosyrerest, der svarer til den af det parentale a-amylase-polypeptid som bestemt ved alignment af polypeptidvarianterne med det parentale polypeptid, hvor mutationen ændrer aminosyreresten fra den for de parentale polypeptider, og hvor mutationen er en substitution, der introducerer én eller flere af aminosyreresteme, der er udvalgt fra gruppen bestående af 188P og 188D.
2. 2. Variant ifølge krav 1, hvor substitutionen er 188P, og varianten har forbedret termostabilitet sammenlignet med det parentale polypeptid.
3. 3. Variant ifølge krav 1, hvor substitutionen er 188D, og varianten udviser forøget aktivitet eller ekspression sammenlignet med det parentale polypeptid.
4. 4. Variant ifølge krav 1, hvor substitutionen er E188P, og varianten udviser forøget viskositetsreduktion i en stivelsessmeltningsassay sammenlignet med det parentale polypeptid.
5. 5. Variant ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, hvor mutationen er til stede i kombination med glutamin ved positionen 242, eller hvor mutationen er til stede i kombination med en deletion ved positionerne 179 og 180.
6. 6. Variant ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, hvor det parentale polypeptid indbefatter en trunkering af C-terminale 29 aminosyrerester.
7. 7. Variant ifølge et hvilket som helst af kravene 1, 2 og 4, hvor substitutionen er E188P.
8. 8. Rengøringssammensætning, der omfatter polypeptidet ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7.
9. 9. Stivelsessmeltningssammensætning, der omfatter polypeptideme ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7.
10. 10. Fremgangsmåde til hydrolysering af et opløseligt stivelsessubstrat ved anvendelse af en a-amylasevariant, hvilken fremgangsmåde omfatter etablering af kontakt mellem stivelsessubstratet og en a-amylasevariant ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7.
11. 11. Fremgangsmåde ifølge krav 10, hvor varianten indbefatter en substitution, der introducerer én eller flere af aminosyreresteme, der er udvalgt fra gruppen bestående af I181A, I181P, I181C, I181E, I181Y, S242A, S242E, S242Q, G132A og N193Y.
12. 12. Fremgangsmåde ifølge krav 10 eller 11, der endvidere omfatter etablering af kontakt mellem stivelsessubstratet og en phytase forud for eller samtidigt med etablering af kontakt med a-amylasevarianten.
13. 13. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 10 til 12, hvor det hydrolyserede stivelsessubstrat fermenteres til ethanol.
14. 14. Fremgangsmåde til fremstillingen af sødemiddel, hvilken fremgangsmåde omfatter etablering af kontakt mellem et stivelsessubstrat og en α-amylasevariant ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7.
15. 15. Anvendelse af en α-amylasevariant ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7 i: (i) afsletning af tekstiler, stoffer og beklædningsgenstande eller (ii) i papirmasse- og papirproduktion.