DK165381B - Immunoanalysemetode til bestemmelse af ligander ved hjaelp af biotin og antibiotin - Google Patents
Immunoanalysemetode til bestemmelse af ligander ved hjaelp af biotin og antibiotin Download PDFInfo
- Publication number
- DK165381B DK165381B DK209885A DK209885A DK165381B DK 165381 B DK165381 B DK 165381B DK 209885 A DK209885 A DK 209885A DK 209885 A DK209885 A DK 209885A DK 165381 B DK165381 B DK 165381B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- biotin
- ligand
- solid phase
- immunoassay method
- labeled
- Prior art date
Links
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 title claims abstract description 92
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 title claims abstract description 52
- 239000011616 biotin Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 title claims abstract description 47
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 title abstract description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 39
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 4
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 claims 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 21
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- YMXHPSHLTSZXKH-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 5-(2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl)pentanoate Chemical compound S1CC2NC(=O)NC2C1CCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O YMXHPSHLTSZXKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPUBPSKTFNYPHI-AYGRAXKESA-N 3-[5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoyl]-1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1N(O)C(=O)CC1C(=O)CCCC[C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1 GPUBPSKTFNYPHI-AYGRAXKESA-N 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 208000016610 ataxia-hypogonadism-choroidal dystrophy syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
i
DK 165381 B
Den foreliggende opfindelse angår en immunoanalysemetode til bestemmelse af ligander. Nærmere betegnet angår opfindelsen følsomme og specifikke immunoanalysemetoder, som udnytter en binding mellem biotin og antibiotin.
5
Tidligere analyseteknikker til bestemmelse af ligander har gjort brug af den stærke, men ikke-kovalente binding imellem biotin og det stærkt basiske protein, avid in. I en sådan analysemetode, der er beskrevet af Guesdon et al., J. Histochem. jO Cytochem. 27, 8: 1131-1139 (1979), der er kendt som den koblede avidin-biotin-teknik, bringes en testprøve, som f.eks. serum indeholdende et ukendt antigen eller antistof, til at reagere med en fast fase, belagt med det tilsvarende antistof eller antigen. Testprøven bringes dernæst til at reagere med en j5 biotinyleret proteinform af det samme antigen eller antistof, der er anvendt til belægning af kuglerne. Denne "sandwich" bringes dernæst til at reagere med frit avid in og et biotinmærket indikatorenzym. Den enzymaktivitet, der måles, er direkte proportional med mængden af ukendt 'antigen eller anti-2o stof, der er til stede i serumprøven.
Den koblede avidin-biotin-teknik, beskrevet ovenfor, har adskillige begrænsninger. Det stærkt basiske avidin bærer en stor positiv ladning og kan adsorberes ikke-specifikt til en-25 hver negativt ladet biologisk komponent i analysen. Indikatorenzymets katalytiske aktivitet kan ødelægges eller reduceres efter konjugation til biotin. Desuden kan denne metode ikke let tillempes til inhiberings-type-analysemetoder på grund af steriske forhold.
30
En variation af den koblede avidin-biotin-teknik består i at belægge en fast fase af antigen eller antistof, at bringe den belagte faste fase til at reagere med testserum, og at bringe testserum til at reagere med et konjugat af avidin og antigen 35 eller antistof. Testserumet bringes dernæst til at reagere med et biotin-mærket indikatorenzym. Denne analyseteknik har de samme ulemper som den koblede avidin-biotin-teknik, og desuden 2
DK 165381 B
er det svært at syntetisere og opnå acceptable mængder avidin-antigen- eller avidin-antistof-konjugater. Desuden mistes nogen immunologisk reaktivitet af antigenet eller antistoffet efter dannelse af konjugat med avidin.
5 I US patentskrift nr. 4.228.237 er beskrevet en anden biotin-avidin-analysemetode, hvori der anvendes et enzym-mærket avidin og et biotin-mærket reagens. I denne analysemetode inkuberes en fast fase, der indeholder en substans, der specifikt 10 binder en ligand af interesse, med et flydende medium, der er mistænkt for at indeholde liganden, som har interesse. Dernæst tilsættes en biotin-mærket substans, der specifikt binder liganden, og et enzym-mærket* avidin. Alternativt bindes den biotin-mærkede substans, der specifikt binder liganden, til det 15 enzym-mærkede avidin. Det ubundne reagens adskilles fra den uopløselige fase efter inkubation, og enzymaktiviteten af enten den uopløselige fase eller det fraskilte ubundne reagens bestemmes som et mål for mængden af ligand i det flydende medium.
20
Denne metode har samme begrænsninger som beskrevet ovenfor for den koblede avidin-biotin-metode, såsom den uspecifikke binding af det stærkt positivt ladede avidin. Desuden er avidin-enzym-komplekset ikke særlig stabilt, specielt når komplekset 25 optræder i høj koncentration eller ved temperaturer over 37°C.
Fra Biol. Abstr., bind 76 (1983), nr. 46.212 kendes en analysemetode til bestemmelse af DNA ved hjælp af en biotinmærket ligand og interaktion mellem biotin og antibiotin. Herfra . 30 fremgår det imidlertid kun, at mærket antibiotin er nyttig ved DNA-hybridiseringsanalysemetoder. Der er imidlertid ingen antydning af, at biotin-antibiotinteknikken også ville kunne anvendes ved immunoanalysemetoder, der kræver helt andre betingelser, f.eks. med hensyn til temperatur og sal tkoncentrat io-35 ner, end DNA-hybridiseringsanalyser og andre prøvebehandlinger tilfrigivelseafanalyt.
3
DK 165381 B
Ifølge opfindelsen angives en biotin-antibiotin-immunoanalyse, som er direkte eller af inhiberingstypen, som er følsom og specifik, og som ikke har de ulemper, som en biotin-avidin-im-munoanalyse har.
5
Betegnelsen "ligand" anvendes i den foreliggende opfindelse i betydningen antigener, antistoffer, haptener, hormoner og deres receptorer, deoxyribonucleinsyre og andre organiske stoffer imod hvilke, der kan anvises et specifikt bindende stof.
10
Repræsentative ligander, som kan bestemmes ved hjælp af metoden ifølge den foreliggende opfindelse er virus-, bakterie-, svampe-, rickettsia- og tumor-associerede antigener og deres tilsvarende antistoffer og deoxyribonucleinsyre. Med betegnel-sen "testprøve” menes her biologiske væsker inklusive humane biologiske væsker, såsom humant serum, plasma eller urin.
Med betegnelsen "reagens" menes her enhver af de komponenter, som tilsættes i løbet af en immunoanalyse. Sådanne reagenser 20 omfatter f.eks. et biotin-mærket, ligand-specifikt bindende stof og antibiotin mærket med en markør.
Den direkte bi oti n-ant i biot i n-analysemetode består i først at immobilisere et ligand-specifikt bindende stof på en fast fa-25 se, såsom en kugle, reagensglas, mikrotiterplade, nitrocelluloseark eller der i vat i seret pap'ir. Den faste fase bringes dernæst til at reagere med en testprøve, såsom humant serum, der indeholder liganden, som skal bestemmes. Dernæst bringes den faste fase til at reagere med en biotin-mærket form af det li-30 gand-specifikt bindende stof og antibiotin, der er mærket med en anvendelig markør. Eksempler på hensigtsmæssige markører omfatter enzymer, radioaktive isotoper, og andre reagenser, som kan udføre målelig aktivitet, såsom kolorimetrisk eller f1uorometri sk aktivitet eller radioaktivitet.
Dernæst adskilles den faste fase og de ubundne reagenser i analysen, og tilstedeværelsen af markøren måles i enten den 35 4
DK 165381 B
faste fase eller det ubundne reagens. Hvis der anvendes enzym-mærket antibiotin, tilsættes et opløseligt substrat for enzymet, og enzymets omdannelse fra et farveløst udgangsstof til et farvet produkt måles spektrofotometrisk. Mængden af den 5 dannede farve er direkte proportional med mængden af ligand, der er til stede i testprøven.
Alternativt kan udføres en inhibitions-type-immunoanalyse under anvendelse af den foreliggende opfindelses ide. I inhibi-10 tions-type-analysemetoden immobi1iseres et ligand-specifikt bindende stof på en fast fase, og den faste fase bringes til at reagere med en testprøve, der indeholder liganden, som skal bestemmes. Derefter følger tilsætning af den biotin-mærkede form af liganden og antibiotin, der er mærket med en anvende-15 lig markør. I inhibitions-type-analysemetoden er mængden af markør, der er til stede i enten den faste fase eller i det ureagerede reagens, omvendt proportional med mængden af ligand, der er til stede i testprøven.
20 Både den direkte type og i nhiberings-typen af biotin-antibio-tin-immunoanalyse kan udføres i en tretrins-, totrins- eller enkelttrinsprocedure. I tretrinsproceduren for den direkte biotin-antibiotin-immunoanalyse består første trin i inkubation af en fast fase, belagt med et ligand-specifikt bindende 25 stof sammen med en testprøve, der indeholder en ukendt mængde ligand. Den faste fase vaskes, og i det andet trin inkuberes den faste fase med en biotin-mærket form af det ligand-specifikt bindende stof. Den faste fase vaskes for anden gang og dernæst inkuberes i det tredje trin den faste fase med anti-30 biotin, der er mærket med en anvendelig markør. Markøren, der er til stede i den faste fase eller i det ureagerede reagens, måles dernæst for at bestemme mængden af ligand, der er til stede i testprøven.
35 Totrinsproceduren består af det samme første trin som beskrevet for tretri nsproceduren. Det andet trin består i en samtidig tilsætning af den biotin-mærkede form af det ligand-specifikt bindende stof og det mærkede antibiotih.
5
DK 165381 B
Enkelttrinsproceduren består i samtidig tilsætning af testprøve, biotin-mærket, ligand-specifikt bindende stof og mærket antibiotin i et inkubationstidsrum, 5 Principperne i biotin-antibiotin-immunoanalysen er specielt anvendelig i en immunoanalyse til bestemme!se af antistof imod Hepatitis B overfladeantigen (anti-HBs). Imidlertid kan bio-tin-antibiotin-immunoanalysen også anvendes til bestemmelse af mange andre virus-, bakterie-, svampe-, rickettsia- og tumor-10 associerede antigener og respektive antistoffer. Biotin-anti-biotin-systemet er også anvendelig til påvisning af deoxyribo-nucleinsyre i en immunoanalyse.
Hed følgende eksempler er det hensigten at illustrere opfin-15 delsen.
Eksempel I
Dette eksempel demonstrerer en tretrins direkte immunoanalyse 2o til bestemmelse af antistof imod Hepatitis B overfladeantigen (anti-HBs).
En polystyrenkugle dækket med Hepatitis B overfladeantigen (HBsAg), i overensstemmelse med teknikker beskrevet af Jiulg 25 et al., J. Med. Virol. 13: 171-178 (1984) inkuberes i 18-22 timer ved stuetemperatur med en human serumprøve, der indeholder en ukendt mængde anti-HBs. Kuglen vaskes dernæst med deioniseret vand og inkuberes med biotin-mærket HBsAg i to (2) tinier ved 40°C. Kuglen vaskes for anden gang og inkuberes der-30 næst med enten 125I- eller peberrodperoxidase-mærket anti biotin (enten monoklont eller polyklont) i to (2) timer ved 40®C. Kuglen vaskes en tredje gang, og hvis der er anvendt peberrodperoxidasemærket antibiotin, tilsættes et peroxidase-substrat, såsom o-phenylendiamin for at producere et gul farvet 35 produkt. Mængden af farve måles dernæst spektrofotometri sk som et mål for mængden af anti-HBs i testprøven. Hvis der er anvendt l2®I-mærket antibiotin, måles radioaktiviteten som mængden af anti-HBs, der er til stede i testprøven.
Eksempel II
6
DK 165381 B
Dette eksempel illustrerer en totrins immunoanalyse til bestemmelse af anti-HBs.
5
En polystyrenkugle dækket med HBsAg inkuberes med en serumprøve og vaskes som beskrevet i eksempel I. Dernæst tilsættes biotin-mærket HBsAg og 125j_ eller peberrodperoxidase-mærket antibiotin samtidig til kuglen og inkuberes i to (2) timer ved 10 40°C. Farve udvikles og måles, eller radioaktiviteten bestem mes som beskrevet i eksempel I.
Eksempel III
15 Dette eksempel demonstrerer en enkelttrins immunoanalyse til bestemmelse af anti-HBs.
En polystyrenkugle dækket med HBsAg inkuberes sammen med en serumprøve, biotin-mærket HBsAg og 125j_ eyier peberrodoxida-20 se-mærket antibiotin i 18-22 timer ved stuetemperatur. Farve eller radioaktivitet bestemmes som beskrevet i eksempel I.
Eksempel IV
25 Dette eksempel demonstrerer fremstillingen af biotin-mærket HBsAg.
Biotinyl-N-hydroxysuccinimid (BNHS, 0,27 mikromol), der er opløst i destilleret dimethylformamid, tilsættes til 800 mikro-30 gram HBsAg i 1 ml puffer, bestående af 100 mM KH2PO4, pH 8,0 og 100 mM NaCl. Opløsningen blandes grundigt og roteres i 18-22 timer ved 4°C efterfulgt af dialyse imod samme puffer i 18-22 timer ved 4°C.
35
Eksempel V
7
DK 165381 B
Dette eksempel illustrerer en metode til fremstilling af poly-klone antibiotin-antistoffer i kaniner.
5
Kaniner immuniseres med biotinyleret bovint serumalbumin (bio-tinyleret-BSA), der er fremstillet som beskrevet ovenfor for HBsAg-biotin. Når antistofkoncentrationerne når toptitere, aflives kaninerne.
10
Anti bi ot i nantistofferne oprenses fra kaninserum ved en totrinsproces. Først cirkuleres serumet over en affinitetskolonne med BSA som liganden for at fjerne anti-BSA-antistoffer. I det andet trin passeres anti-BSA-frit serum over en affini-15 tetskolonne med biotin-BSA som liganden for selektivt at fjerne anti bi ot i n. Dernæst elueres antibiotin ved hjælp af et chaotropt reagens.
Eksempel VI
20
Dette eksempel illustrerer en metode til fremstilling af monoklone antibiotin-antistoffer i mus.
Mus immuniseres med biotinyleret-BSA, og mus med høje titere 25 af antibiotin-antistoffer aflives. Lymfocytter fra miltvæv fra den døde mus sammensluttes med BALB/c SP 2/o myelomaceller ifølge proceduren beskrevet af Galfrie, et al., Nature 226: 550-552 (1977). De resulterende antibiotinkloner screenes ved direkte og indirekte analyser for at bestemme antibiotin-posi-3o tive kloner. De positive kloner dyrkes i mus som tumorer i bughulevæsken, og de monoklone antibiotin-antistoffer oprenses og adskilles fra bughulevæsken ved hjælp af ionbytn ingskroma-tograf i.
35 Både de polyklone og monoklone antibiotin-antistoffer kan konjugeres med peberrodperoxidase efter metoden af Nakane, et al.
J. Histochem. Cytochem. 22: 1084-1091 (1974), eller mærkes med 8
DK 165381 B
125χ ifølge metoden af Greenwod, et al., J. Biochem. 89: 114-123 (1963).
Der er mange fordele ved biotin-antibiotin-immunoanalysemeto-5 den. For det første er denne immunoanalysemétode mere specifik og følsom end tidligere biotin-avidin-analysemetoder, fordi reagensernes immunokemiske og immunologiske aktivitet ikke forstyrres af konjugationsprocedurer, og fordi ikke-specifik binding imellem de meget positivt ladede reagenser, såsom avi-r 10 din og negativt ladede analysekomponenter, undgås. For det andet fordi reagenserne i immunoanalysemetoden ifølge opfindelsen, inklusive de biotin-mærkede ligand-specifikt bindende stoffer og det 125I- eller enzym-mærkede antibiotin er meget stabile og har højere opbevaringslevetider end komponentrea-15 genserne i en biotin-avidin-immunoanalysemetode, specielt ved højere temperaturer og koncentrationer. For det tredje kan der opnås store mængder antibiotin-antistoffer til analysemetoden ifølge opfindelsen. For det fjerde kan immunoanalysemetoden ifølge opfindelsen anvendes i en inhibitions-type-analysemeto-20 de og i enkelt-, to- eller tretrinsprocedurer. For det femte giver analysemetoden ifølge opfindelsen veldefinerede aflæsninger af positive og negative prøver og muliggør bedre kvantificering af ukendte ligander. Der er endnu flere fortrin, hvilket vil være åbenlyst for fagfolk.
25
Sammen!iqninqsforsøq.
Nærværende forsøg belyser den her omhandlede immunoanalyseme-todes overlegenhed i forhold til kendte immunoanalysemetoder 30 under anvendelse af avidin: enzym-konjugat.
Specificitet og følsomhed.
l25I-avidin og l25i-antibiotin blev anvendt i en et-trinsana-35 lysemetode til påvisning af antistof for hepatitis B-overfla-deantigen (anti-HBs). Som det fremgår af den efterfølgende tabel, er den negative kontrol tæl!ingshastighed for l25I-avidin- 9
DK 165381 B
prøven 3-4 gange større end for l25I-antibiotinprøven. Således opnås der et højere signal/støj* (S/N)-forhold for 1251-anti -biotin-prøven, hvilket er et tegn på forbedret- følsomhed og specifici tet.
5, TABEL 1
Sammenligning af et-trinsanalysemetoder for anti-HBs-påvisninq under anvendelse af et bioti n/anti biot i n-system og et biotin/ 10 avid i n-system.
125I-avidin l25I-antibiotin HBsAg - biotin HBsAg - biotin 0,25 ug/ml 0,5 gg/ml 0,25 uq/ml 0,5 uq/ml 15 A. PC-CPM 980 1474 1526 1446 NC-CPM 100 101 37 18 S/N 9,8 14,6 41,2 80,3 20 B. PC-CPM 921 1462 2380 2119 NC-CPM 93 105 38 26 S/N 9,9 13,9 62,6 81,5
Inkubationsbeti ngel ser:
25 A - 2 timer/40°C
B - 4 timer/40°C
Forkortelser: PC - positiv kontrol 30 NC -negativ kontrol CPM - tællinger pr. minut.
*Signal/støj-forhold svarer til positiv kontrol tæl 1inqshastiqhed 35 negativ kontroltællingshastighed
Det har også vist sig, at peroxidase-mærkede antibiotin-anti-stoffer er mere effektive end peroxidase-avidinkonjugater ikke
DK 165381 B
10 kun til anti-HBs-påvisning og kvantitering (se tabel 2), men også for herpes simplex virus (HSV)-antigen (se tabel 3).
TABEL 2 5
Sammenligning af biotin/antibiotin (BAB) og biotin/avidin (BAV) EIA-procedurer til påvisning af anti-HBs i et anti-HBs-følsomt panel (undertyper anti-HBs/ad og /av)
10 Panel-bestanddel Fortynding BAB BAV
ad 1 Std. 1.280 1,028 2 1:2 0,788 0,568 15 3 1:4 0,429 0,326 4 1:8 0,217 0,174 5 1:16 0,108 0,079 6 1:32 0,064 0,046 7 1:64 0,053 0,028 20 ay 1 Std. 0,636 0,511 2 1:2 0,318 0,261 3 1:4 0,162 0,134 25 4 1:8 0,090 0,072 5 1:16 0,051 0,042 6 1:32 0,036 0,032
Negativ kontrol 0,012 0,009 30 Positiv kontrol 1,831 1,590
Cutoff 0,062 0,059
Absorbans = 492 nm 35 TABEL 3 11
DK 165381 B
Sammenligning af biotin/antibiotin, biotin/avidin og biotin/ strep-avidin EIA-procedurer til påvisning af Herpes Simplex-5 virus (HSV)
Positiv kontrol
fortynding_ ANTIBIOTIN AVIDIN STREP-AVIDIN
10 1 s 4 0,471 0,087 0,052 1:8 0,300 0,051 0,035 1:16 0,182 0,042 0,021 1:32 0,133 0,037 0,017 1:64 0,089 0,030 0,016 15
Negativ kontrol 0,073 0,028 0,010
Cutoff 0,123 0,078 0,060
Absorbans = 492 nm 20 Dosis-respons-kurverne, der opnås med biotin-avidin- og biotin-antibiotin-konjugater ved en anti-HBs-immunoanalyseme-tode, er vist i fig. 1. Den opdagelse, at følsomheden ikke forøges, når antibiotin-antistoffer erstattes med avidin, kan forklares af den kendsgerning, at avidin har en højere affi-25 nitet end antibiotin til fri biotin, men en mindre affinitet til biotin kovalent bundet til et protein. Eftersom antibiotin-antistoffer blev opnået ved dyreimmuniseringer med biotinyleret-ovinserumalbumin (BSA), afspejler affiniteten målt med frit biotin ikke den sande affinitet af antibiotin-30 antistofferne. En anden forklaring på forøget følsomhed af antibiotin-systemet kan skyldes interaktionen eller vekselvirkningen af et anti-hapten-antistof (antibiotin) med en ekstrem lav koncentration (ca. 1 pg) af en multivalent ligand (en kraftigt biotinyleret HBsAg). Denne type af interaktion 35 eller vekselvirkning har potentialet for yderligere forstærkning (forstærkningsfaktorer), som ikke tidligere har været bemærket af andre.
DK 165381 B
12
Stabi1 i tet
Et enzymmærket avidinreagens (peberrodsperoxidase (HRPO)-avi-din) blev lagret ved stuetemperatur (RT) i 5 dage, derefter 5 ved 2-8°C i et 20-ugers tidsinterval. På tilsvarende måde blev et enzymmærket antibiotin (HRPO-antibiotin)-reagens lagret under hårdere betingelser, nemlig 16 timer ved RT, 6 timer ved 37°C, 2 timer ved 45°C , 16 timer ved RT, 8 timer ved 37°C, 18 timer ved RT og derefter ved 2-8°C i et 20-ugers tidsinter- 10 va1·
Anti-HBs-analyser blev udført under anvendelse af 10 gentagelser af hver af de negative og positive kontrollér. Procentvise fald i absorbans (492 nm) med tiden blev beregnet og op-tegnet til sammenligning. Dataene er vist i fig. 2. Som det fremgår bibeholdt en hovedandel af biotin/antibiotin-test-reagenserne ca. 84% af deres indledende aktivitet under en strengere lagringscyklus sammenlignet med 65% for biotin/avi-dinreagenserne efter 20 ugers lagring. Denne potentielle for- 2o del med hensyn til forbedret stabilitet kan direkte relateres til antallet af frie aminogrupper tilgængelige for konjugering til peberrodsperoxidase (40 for avi din og 90 for antiobiotin-IgG) .
25 Manglen på forbedring af signal efter udsættelse for en højere temperatur i et længere tidsrum for biotin/avidin-systemet fremgår også af den ovenstående tabel 1. Biotin/avidin-systemet udviste ingen forbedring i signal efter inkubering ved 40°C i 4 timer i forhold til inkuberingen i 2 timer. I mod- 30 sætning hertil udviste biotin/antibiotin-systemet en forøgelse i signal på 2 gange efter inkubering ved 4 timer ved 40°C.
35
Claims (10)
1. Immunoanalysemetode til bestemmelse af en ligand i en bio-5 logisk opløsning ved hjælp af biotin, kendetegnet ved, at den omfatter: a) immobilisering af et ligand-specifikt bindende stof på en fast fase, b) omsætning mellem den faste fase og den biologiske opløs- 10 ning, c) omsætning mellem den faste fase og en opløsning indeholdende et biotin-mærket ligand-specifikt bindende stof, d) omsætning mellem den faste fase og en opløsning indeholdende antibiotin, der er mærket med en markør, 15 e) adskillelse af ureageret reagens fra den faste fase, og f) måling af tilstedeværelsen af markøren i den faste fase, eller i det ureagerede reagens for at bestemme mængden af ligand, der er til stede i prøven.
2. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at markøren er et enzym.
3. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at markøren er en radioaktiv isotop. 25
4. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at trinnene (b), (c) og (d) udføres samtidig.
5. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet 30 ved, at trinnene (c) og (d) udføres samtidig.
6. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at liganden er et antigen.
7. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at liganden er valgt fra en gruppe bestående af antigener og antistoffer. DK 165381 B
8. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at liganden er valgt fra gruppen bestående af virus-, bakterie-, svampe-, rickettsia- og tumor-associerede antigener og deres respektive antistoffer. 5
9. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det ligand-specifikt bindende stof er Hepatitis B overfladeantigen.
10. Immunoanalysemetode ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den faste fase er valgt fra gruppen bestående af polystyrenkugler, prøverør, reagensglas, mi krot i terp!ader, nitro-cellulosef i 1 tre eller -ark eller derivatiseret papir. 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US60884984A | 1984-05-10 | 1984-05-10 | |
| US60884984 | 1984-05-10 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK209885D0 DK209885D0 (da) | 1985-05-10 |
| DK209885A DK209885A (da) | 1985-11-11 |
| DK165381B true DK165381B (da) | 1992-11-16 |
| DK165381C DK165381C (da) | 1993-04-05 |
Family
ID=24438293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK209885A DK165381C (da) | 1984-05-10 | 1985-05-10 | Immunoanalysemetode til bestemmelse af ligander ved hjaelp af biotin og antibiotin |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5895750A (da) |
| EP (1) | EP0160900B1 (da) |
| JP (1) | JPH0756487B2 (da) |
| AT (1) | ATE66302T1 (da) |
| AU (1) | AU584895B2 (da) |
| CA (1) | CA1255216A (da) |
| DE (1) | DE3583766D1 (da) |
| DK (1) | DK165381C (da) |
| ES (1) | ES8607561A1 (da) |
| GR (1) | GR851099B (da) |
| IE (1) | IE58512B1 (da) |
| IL (1) | IL75020A (da) |
| NZ (1) | NZ211888A (da) |
| ZA (1) | ZA853269B (da) |
Families Citing this family (60)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ212546A (en) * | 1984-07-16 | 1988-09-29 | Abbott Lab | Immunoassay for detecting antibody to hepatitis b surface antigen/a |
| EP0184701B1 (en) * | 1984-12-03 | 1994-06-08 | Hoechst Celanese Corporation | A method for determining a ligand |
| US4935339A (en) * | 1985-05-07 | 1990-06-19 | Nichols Institute Diagnostics | Delayed solid phase immunologic assay |
| JPH0711520B2 (ja) * | 1986-09-25 | 1995-02-08 | 三菱化成株式会社 | 細胞の永久標本の作成方法 |
| DE3705686C2 (de) * | 1987-02-23 | 1995-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von Antikörpern |
| US5028524A (en) * | 1987-04-24 | 1991-07-02 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Assay for anti-pre-S antibody |
| US4857471A (en) * | 1987-07-20 | 1989-08-15 | Eastman Kodak Company | Analyzer with wash station separate from incubator |
| CA1305664C (en) * | 1987-08-06 | 1992-07-28 | Stephen James Lovell | System and process for a visible assay for analyte |
| US5866322A (en) * | 1988-01-29 | 1999-02-02 | Abbott Laboratories | Method for performing Rubella assay |
| US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
| US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
| CA1333883C (en) * | 1988-04-07 | 1995-01-10 | Shashidhara H. M. Murthy | Immunoassay utilizing biotin bridge with universal solid phase |
| AU2684488A (en) | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
| EP0353895A1 (en) * | 1988-07-18 | 1990-02-07 | MITSUI TOATSU CHEMICALS, Inc. | Immunoassay method |
| JPH0754323B2 (ja) * | 1988-10-17 | 1995-06-07 | 三洋化成工業株式会社 | 免疫測定法および免疫測定試薬 |
| US5512659A (en) * | 1989-08-04 | 1996-04-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Compositions useful in heterogeneous immunoassays |
| US5437981A (en) * | 1990-02-26 | 1995-08-01 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method for the immunological determination of ligands |
| DE4006054A1 (de) * | 1990-02-26 | 1991-08-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur immunologischen bestimmung von liganden |
| WO1992008979A1 (en) * | 1990-11-09 | 1992-05-29 | Abbott Laboratories | Amplified heterogeneous chemiluminescent immunoassay |
| EP0510483A1 (en) * | 1991-04-22 | 1992-10-28 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. | Method for the detection of viruses |
| JPH04363659A (ja) * | 1991-06-10 | 1992-12-16 | Smithkline Beckman Corp | ビタミンｂ１２の分析 |
| DE4136010A1 (de) * | 1991-10-31 | 1993-08-12 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung einer immunologisch bindefaehigen substanz |
| US5637467A (en) * | 1992-10-13 | 1997-06-10 | Behringwerke Ag | Heterogeneous assay using a pendulous drop |
| DE4243375C2 (de) * | 1992-12-21 | 1998-04-23 | Brahms Diagnostica Gmbh | Bestimmungsverfahren zur Bestimmung von Antikörpern in biologischen Flüssigkeiten |
| EP0627625A1 (en) * | 1993-06-04 | 1994-12-07 | Abbott Laboratories | Immunoassay for differential diagnosis |
| US5705330A (en) * | 1995-04-14 | 1998-01-06 | Abbott Laboratories | Chemiluminescent immunoassay for antibody detection |
| US6103536A (en) | 1997-05-02 | 2000-08-15 | Silver Lake Research Corporation | Internally referenced competitive assays |
| US6203974B1 (en) | 1998-09-03 | 2001-03-20 | Abbott Laboratories | Chemiluminescent immunoassay for detection of antibodies to various viruses |
| GB0029154D0 (en) * | 2000-11-30 | 2001-01-17 | Lee Helen | Signal enhancement with multiple labelled-antibodies |
| US7262019B2 (en) * | 2001-05-03 | 2007-08-28 | Immunetics, Inc. | System and methods for detection of Bacillus anthracis related analytes in biological fluids |
| US7105311B2 (en) * | 2001-05-03 | 2006-09-12 | Immunetics, Inc. | Systems and methods for detection of analytes in biological fluids |
| US7923260B2 (en) | 2002-08-20 | 2011-04-12 | Illumina, Inc. | Method of reading encoded particles |
| US7508608B2 (en) | 2004-11-17 | 2009-03-24 | Illumina, Inc. | Lithographically fabricated holographic optical identification element |
| JP2005536769A (ja) * | 2002-08-20 | 2005-12-02 | シヴェラ コーポレイション | 回折格子をベースとする光学同定要素 |
| US7900836B2 (en) | 2002-08-20 | 2011-03-08 | Illumina, Inc. | Optical reader system for substrates having an optically readable code |
| US20050227252A1 (en) * | 2002-08-20 | 2005-10-13 | Moon John A | Diffraction grating-based encoded articles for multiplexed experiments |
| EP1535242A1 (en) * | 2002-08-20 | 2005-06-01 | Cyvera Corporation | Diffraction grating-based encoded micro-particles for multiplexed experiments |
| US7164533B2 (en) | 2003-01-22 | 2007-01-16 | Cyvera Corporation | Hybrid random bead/chip based microarray |
| US20040126875A1 (en) * | 2002-09-12 | 2004-07-01 | Putnam Martin A. | Assay stick |
| US7441703B2 (en) * | 2002-08-20 | 2008-10-28 | Illumina, Inc. | Optical reader for diffraction grating-based encoded optical identification elements |
| US7872804B2 (en) | 2002-08-20 | 2011-01-18 | Illumina, Inc. | Encoded particle having a grating with variations in the refractive index |
| US7901630B2 (en) | 2002-08-20 | 2011-03-08 | Illumina, Inc. | Diffraction grating-based encoded microparticle assay stick |
| EP1540591A1 (en) * | 2002-09-12 | 2005-06-15 | Cyvera Corporation | Diffraction grating-based encoded micro-particles for multiplexed experiments |
| US20100255603A9 (en) | 2002-09-12 | 2010-10-07 | Putnam Martin A | Method and apparatus for aligning microbeads in order to interrogate the same |
| US7092160B2 (en) | 2002-09-12 | 2006-08-15 | Illumina, Inc. | Method of manufacturing of diffraction grating-based optical identification element |
| WO2004025562A1 (en) * | 2002-09-12 | 2004-03-25 | Cyvera Corp. | Method and apparatus for labelling using diffraction grating-based encoded optical identification elements |
| EP1575707A1 (en) * | 2002-09-12 | 2005-09-21 | Cyvera Corporation | Method and apparatus for aligning elongated microbeads in order to interrogate the same |
| EP1552475A1 (en) * | 2002-09-12 | 2005-07-13 | Cyvera Corporation | Chemical synthesis using diffraction grating-based encoded optical elements |
| US7433123B2 (en) | 2004-02-19 | 2008-10-07 | Illumina, Inc. | Optical identification element having non-waveguide photosensitive substrate with diffraction grating therein |
| DE602005017375D1 (de) | 2004-04-21 | 2009-12-10 | A & T Corp | Immunologisches testverfahren und reagens |
| WO2006020363A2 (en) | 2004-07-21 | 2006-02-23 | Illumina, Inc. | Method and apparatus for drug product tracking using encoded optical identification elements |
| US7602952B2 (en) | 2004-11-16 | 2009-10-13 | Illumina, Inc. | Scanner having spatial light modulator |
| US7604173B2 (en) | 2004-11-16 | 2009-10-20 | Illumina, Inc. | Holographically encoded elements for microarray and other tagging labeling applications, and method and apparatus for making and reading the same |
| AU2005307746B2 (en) | 2004-11-16 | 2011-05-12 | Illumina, Inc. | And methods and apparatus for reading coded microbeads |
| US7623624B2 (en) * | 2005-11-22 | 2009-11-24 | Illumina, Inc. | Method and apparatus for labeling using optical identification elements characterized by X-ray diffraction |
| US7830575B2 (en) | 2006-04-10 | 2010-11-09 | Illumina, Inc. | Optical scanner with improved scan time |
| US8865454B2 (en) * | 2007-03-22 | 2014-10-21 | Scandinavian Micro Biodevices Aps | Flow through system, flow through device and a method of performing a test |
| CN107643399A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-01-30 | 广州佰芮慷生物科技有限公司 | 一种提高免疫检测系统灵敏性的方法及使用该方法的装置 |
| CN112129955B (zh) * | 2019-06-25 | 2023-04-07 | 迈克生物股份有限公司 | 睾酮检测试剂盒 |
| CN112129933B (zh) * | 2019-06-25 | 2024-01-05 | 迈克生物股份有限公司 | 一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5537949A (en) * | 1978-09-12 | 1980-03-17 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Measuring method for substance |
| US4228237A (en) | 1978-09-21 | 1980-10-14 | Calbiochem-Behring Corp. | Methods for the detection and determination of ligands |
| CA1219824A (en) * | 1981-04-17 | 1987-03-31 | David C. Ward | Modified nucleotides and methods of preparing and using same |
| US4535057A (en) * | 1982-07-26 | 1985-08-13 | Amf Incorporated | Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system |
| US4687732A (en) * | 1983-06-10 | 1987-08-18 | Yale University | Visualization polymers and their application to diagnostic medicine |
| DE3705686C2 (de) * | 1987-02-23 | 1995-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von Antikörpern |
-
1985
- 1985-04-24 NZ NZ211888A patent/NZ211888A/en unknown
- 1985-04-24 IL IL75020A patent/IL75020A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-04-25 CA CA000480101A patent/CA1255216A/en not_active Expired
- 1985-04-26 EP EP85105105A patent/EP0160900B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-26 DE DE8585105105T patent/DE3583766D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-26 AT AT85105105T patent/ATE66302T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-01 ZA ZA853269A patent/ZA853269B/xx unknown
- 1985-05-07 AU AU42034/85A patent/AU584895B2/en not_active Ceased
- 1985-05-07 ES ES542892A patent/ES8607561A1/es not_active Expired
- 1985-05-07 GR GR851099A patent/GR851099B/el unknown
- 1985-05-09 JP JP60096830A patent/JPH0756487B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-05-09 IE IE115285A patent/IE58512B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-05-10 DK DK209885A patent/DK165381C/da not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-05-03 US US08/434,251 patent/US5895750A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK209885D0 (da) | 1985-05-10 |
| ATE66302T1 (de) | 1991-08-15 |
| ZA853269B (en) | 1985-12-24 |
| IE851152L (en) | 1985-11-10 |
| DK165381C (da) | 1993-04-05 |
| IL75020A0 (en) | 1985-08-30 |
| US5895750A (en) | 1999-04-20 |
| IE58512B1 (en) | 1993-10-06 |
| DK209885A (da) | 1985-11-11 |
| NZ211888A (en) | 1987-08-31 |
| CA1255216A (en) | 1989-06-06 |
| AU4203485A (en) | 1985-11-14 |
| ES542892A0 (es) | 1986-05-16 |
| EP0160900A3 (en) | 1988-10-26 |
| GR851099B (da) | 1985-11-25 |
| EP0160900A2 (en) | 1985-11-13 |
| AU584895B2 (en) | 1989-06-08 |
| EP0160900B1 (en) | 1991-08-14 |
| ES8607561A1 (es) | 1986-05-16 |
| IL75020A (en) | 1988-10-31 |
| JPS60250257A (ja) | 1985-12-10 |
| DE3583766D1 (de) | 1991-09-19 |
| JPH0756487B2 (ja) | 1995-06-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK165381B (da) | Immunoanalysemetode til bestemmelse af ligander ved hjaelp af biotin og antibiotin | |
| US5089391A (en) | Threshold ligand-receptor assay | |
| US5939272A (en) | Non-competitive threshold ligand-receptor assays | |
| Yolken | Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA): a practical tool for rapid diagnosis of viruses and other infectious agents | |
| US6303325B1 (en) | Method for detecting analytes | |
| JPS5923251A (ja) | 多価抗原の測定法及び測定試薬 | |
| JPH0814579B2 (ja) | 特異的結合性物質の測定法及び試薬 | |
| EP0640216B1 (en) | Separation method | |
| JP3234947B2 (ja) | 生物流体中のリガンドの量を測定する方法及びその様な方法を実施する為のキット | |
| US5792606A (en) | Nucleic acid hybridization based assay for determining a substance of interest | |
| US6225043B1 (en) | Separation and analysis | |
| JPH0224559A (ja) | 免疫学的に検出可能な物質の測定法、反応容器及びイムノアツセイ原理による方法における種々のパラメーターの測定法 | |
| JPH03503566A (ja) | 天然結合タンパク質に対するモノクローナル抗体を用いたイムノアツセイ | |
| JPH05223817A (ja) | 免疫学的に結合可能な物質の定量方法 | |
| JPH0786507B2 (ja) | リガンドの測定方法 | |
| EP0903582B1 (en) | Ligand binding surfaces | |
| JPH0466871A (ja) | 高感度な免疫測定法 | |
| JP2002196000A (ja) | 類縁体に起因する非特異反応を抑制した新規測定法 | |
| JPH0266460A (ja) | 抗体を測定する方法および試薬 | |
| JPH01316660A (ja) | 物質の免疫学的検出方法及びこれに使用する組成物及びテストキット | |
| JP2007538228A (ja) | 自己抗体検出のためのキット及び方法 | |
| WO1990006512A1 (en) | Small analyte assays |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |