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DE69936855T2 - Anti Apoptosis Wirkstoffe - Google Patents

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DE69936855T2
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dge
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Jun Tomono
Nobuto Koyama
Katsushige Ikai
Hiroaki Sagawa
Ikunoshin Kato
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Takara Bio Inc
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Description

  • Technisches Gebiet
  • Die Erfindung betrifft einen physiologisch aktiven Stoff abgeleitet von einem natürlich vorkommenden Material. Weiterhin betrifft sie Verfahren zur Herstellung physiologisch aktiver Stoffe, ein Nahrungsmittel oder ein Getränk, das die physiologisch aktiven Stoffe enthält, und die Verwendung der physiologisch aktiven Stoffe.
  • Hintergrund
  • Kürzlich wurde die Aufmerksamkeit auf eine Art von Zell- oder Gewebetod gelenkt, der Apoptose genannt wird (Selbstvernichtung oder Selbstzerstörung von Zellen).
  • Apoptose ist ein Zelltod, der ursprünglich im Genom einer Zelle programmiert wurde und unterscheidet sich von Nekrose, die einen pathologischen Zelltod darstellt. Insbesondere kommen die nachstehenden Vorgänge, die zum Zelltod führen, in Frage. Die Aktivierung eines Gens, das die Apoptose programmiert, ausgelöst durch (einen) gewisse(n) externe(n) oder interne(n) Faktor(en), bedingt die Biosynthese eines programmierten Zelltod-Proteins. In einigen Fällen wird ein programmiertes Zelltod-Protein, das in einer Zelle in seiner inaktiven Form existiert, aktiviert. Das so erzeugte aktive programmierte Zelltod-Protein zerstört die Zelle.
  • Auslösung der Apoptose in erwünschten Geweben oder Zellen ist sehr erstrebenswert, weil sie ermöglicht, unnötige oder schädliche Zellen aus einem lebenden Körper auf eine natürliche Art und Weise zu beseitigen.
  • Anet, E.F.L.J. (Aust. J. Chem. 16, 1962, Seiten 270-277) beschreibt zwei stereospezifische Verfahren zur Ausbildung des cis-Isomers von ungesättigtem D-Hexoson, 1,5-Epoxy-laß,6-dihydroxy-D-glycero-hex-cis-3-en-2-on.
  • Die EP 1 050 525 A1 offenbart einen Stoff mit einer Apoptose-auslösenden Fähigkeit, der auf dem Gebiet der pharmazeutischen Wirkstoffe, Nahrungsmittel und Getränke verwendbar ist, ein Verfahren für die Herstellung davon und pharmazeutische Wirkstoffe, Nahrungsmittel und Getränke, die den Stoff enthalten.
  • Die JP 06-080565 beschreibt einen Wirkstoff, der ein Enonderivat als einen aktiven Bestandteil enthält, und der für die Behandlung von rheumatoider Arthritis, systemischem Lupus erythematodes, chronischer Gastritis, chronischer Thyroiditis, autoimmuner hämolytischer Anämie, immunologischer Abstoßung, allergischen Erkrankungen und entzündlichen Erkrankungen verwendbar ist.
  • Aufgaben der Erfindung
  • Die Hauptaufgabe der Erfindung ist es, einen hochgradig sicheren Stoff mit einer physiologischen Funktion, wie einer Apoptose-auslösenden Aktivität, abgeleitet von einem natürlich vorkommenden Material, sowie ein Verfahren zur Herstellung und Verwendung des Stoffes, bereitzustellen.
  • Zusammenfassung der Erfindung
  • Die Erfindung wird wie nachstehend zusammengefasst. Die Erfindung zeigt, dass eine pharmazeutische Zusammensetzung, die als einen Wirkstoff eine Verbindung ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus:
    einer Verbindung der Formel (I):
    Figure 00020001
    worin X und Y H-Atom oder CH2OH-Gruppe sind, mit der Maßgabe, dass, wenn X eine CH2OH-Gruppe ist, Y ein H-Atom ist, während, wenn X ein H-Atom ist, Y eine CH2OH-Gruppe ist,
    einer Verbindung der Formel (II):
    Figure 00030001
    worin R ein Rest ist, der durch Freisetzen einer SH-Gruppe von einer SH-Gruppenhaltigen Verbindung erhalten wird, und Salzen davon, enthält,
    zur Behandlung oder Verhinderung einer Krankheit, die für ihre Behandlung oder Verhinderung die Auslösung von Apoptose erfordert, einer krebsartigen Erkrankung, einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Herstellung von aktivem Sauerstoff erfordert, einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Herstellung von Stickstoffmonoxid erfordert, einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Prostaglandinsynthese erfordert, einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Proliferation von synovialen Zellen erfordert, einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Auslösung der Herstellung von Hitzeschockprotein erfordert, oder einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung von α-Glykosidase erfordert, verwendbar ist.
  • Der erste erfindungsgemäße Aspekt betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I), dadurch charakterisiert, dass das Verfahren ein Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende unter neutralen bis alkalischen Bedingungen umfasst.
  • Der zweite erfindungsgemäße Aspekt betrifft eine Verbindung der Formel (II) oder ein Salz davon.
  • Der dritte erfindungsgemäße Aspekt betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (II), dadurch charakterisiert, dass das Verfahren ein Umsetzen einer Verbindung der Formel (I) mit einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung umfasst.
  • Der vierte erfindungsgemäße Aspekt betrifft ein Nahrungsmittel oder ein Getränk, das eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der Formel (I), einer Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, enthält, durch Verdünnen davon hergestellt wird und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt wird.
  • Der fünfte erfindungsgemäße Aspekt betrifft ein Nahrungsmittel oder ein Getränk, das eine Verbindung der Formel (I), die durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten wird, enthält, durch Verdünnen davon hergestellt wird und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt wird.
  • Der sechste erfindungsgemäße Aspekt betrifft die Verwendung mindestens einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der Formel (I), einer Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Behandeln oder Verhindern von Krebs, Diabetes, Arteriosklerose, neurologischen Erkrankungen, ischämischer Re-Perfusionserkrankung, systemischer Hypotonie, Verminderung der Blutdruckantwort, vaskulärer Dysfunktion, durch Erkrankungen verursachte Angiektasie, Gewebeverletzung, kardiovaskulärer Ischämie, Hyperalgesie, cerebraler Ischämie, Erkrankungen, die mit einer Vaskularisierung einhergehen, Clonorchiose, Zirrhose, Schädigung von Cerebralgewebe während cerebraler Ischämie und nach Re-Perfusion, viralen Erkrankungen, Hyperlipidämie oder Fettleibigkeit.
  • Der siebte erfindungsgemäße Aspekt betrifft die Verwendung mindestens einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der Formel (I), einer Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, zur Herstellung einer Zusammensetzung zum Bewahren von Frische.
  • Der achte erfindungsgemäße Aspekt betrifft die Verwendung mindestens einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der Formel (I), einer Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, zur Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung.
  • Bevorzugte Ausführungsformen gemäß der vorstehenden erfindungsgemäßen Aspekte sind in Ansprüchen 2 bis 4 und 9 bis 11 dargelegt.
  • Nachstehend wird die Erfindung mit Bezug auf die anhängenden Zeichnungen im Detail beschrieben.
  • Kurze Beschreibung der Zeichnungen
  • 1 stellt das Normalphasen-HPLC-Chromatogramm der Probe 2 dar.
  • 2 stellt das Massenspektrum der Fraktion bei der Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten dar.
  • 3 stellt das 1H-NMR-Spektrum der Fraktion bei der Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten dar.
  • 4 stellt die NO2 –-Konzentration in einem Medium dar, das durch Kultivieren unter verschiedenen Kulturbedingungen in Gegenwart von DGE erhalten wird.
  • 5 stellt die NO2 –-Konzentration in einem Medium dar, das durch Inkubieren unter verschiedenen Kulturbedingungen, in denen DGE während der Vorkultur zugegeben wird, erhalten wird.
  • 6 stellt die Prostaglandin E2-Konzentration in einem Medium dar, das durch Inkubieren unter verschiedenen Kulturbedingungen, in denen DGE während der Vorkultur zugegeben wird, erhalten wird.
  • 7 stellt das Massenspektrum eines Produkts einer Reaktion zwischen DGE und GSH dar.
  • 8 stellt das 1H-NMR-Spektrum eines Produkts einer Reaktion zwischen DGE und GSH dar.
  • 9 stellt das 13C-NMR-Spektrum eines Produkts einer Reaktion zwischen DGE und GSH dar.
  • 10 stellt die 3H-Thymidinaufnahme bei Kultivieren in Gegenwart von DGE dar.
  • Genaue Beschreibung der Erfindung
  • Wie hier verwendet, bedeutet 3,6-Anhydrogalactose 3,6-Anhydrogalactopyranose der Formel (III):
    Figure 00060001
    ein Aldehyd davon der Formel (IV):
    Figure 00060002
    oder ein Hydrat davon der Formel (V):
    Figure 00060003
  • Außerdem beinhaltet es ein sulfatiertes Derivat und ein methyliertes Derivat davon. Die Strukturen der Verbindungen der Formeln (III) bis (V), können unter Verwendung verschiedener Ausdrucksformen dargestellt werden. Es ist vorgesehen, dass die Verbindungen der Formeln (III) bis (V) Verbindungen, die durch solche verschiedenen Ausdrucksformen und deren mögliche Tautomere dargestellt sind, beinhalten. Außerdem ist die Konfiguration der Formeln (III) bis (V) nicht auf eine spezifische beschränkt, sofern eine gewünschte Aktivität ausgeübt wird. Die D-Form oder L-Form oder ein Gemisch davon kann verwendet werden.
  • Erfindungsgemäß kann z.B. eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende, ohne Einschränkung, durch Hydrolyse unter sauren Bedingungen unter einem pH-Wert von 7 und/oder enzymatischem Verdau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials erhalten werden. Alternativ kann sie chemisch synthetisiert werden.
  • Die Verbindungen mit 3,6-Anhydrogalactose, die vorzugsweise erfindungsgemäß verwendet werden, beinhalten z.B. ein lösliches Saccharid, dessen nicht reduzierendes Ende ein Zucker ist, der verschieden von L-Galactose-6-Sulfat ist, wie ein Oligosaccharid, das von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit Agarobiose, k-Carabiose oder 3,6-Anhydrogalactose an seinem reduzierenden Ende. Ein Agarooligosaccharid, d.h. ein Saccharid, dessen nicht reduzierendes Ende L-Galactose ist, ist für ein Pro-Pharmakon sehr geeignet.
  • Beispiele der erfindungsgemäß verwendeten 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materialien beinhalten in nicht begrenzender Weise viskose Polysaccharide von roten Algen, wie Agar, Agarose, Agaropektin, Funoran, Porphyran, Carrageen, Furcelleran und Hypnean [Kyoritsu-shuppan Inc., "Tatouseikagaku 1 – Kagakuhen – (Biochemistry of Polysaccharides 1 – Chemistry – ), Seite 314 (1969)]. Die erfindungsgemäß verwendeten 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materialien beinhalten auch Materialien, die diese Polysaccharide enthalten.
  • Zum Beispiel werden rote Algen, zugehörig zu Gelidiaceae, wie Gelidium amansii, Gelidium japonicum, Gelidium pacificum, Gelidium subcostatum, Pterocladia tenuis und Acanthopeltis japonica, rote Algen zugehörig zu Gracilariaceae, wie Gracilaria verrucosa und Gracilaria gigas, rote Algen zugehörig zu Ceramiaceae, wie Ceramium kondoi und Campylaephora hypnaeoides, sowie andere rote Algen als Rohmaterialien für Agarose und Agaropektin verwendet. Gewöhnlich werden mehrere Algenarten in Kombination als die Rohmaterialien verwendet. Gelidiumgallerte wird durch Extrahieren von Rohmaterialalgen mit heißem Wasser und dann Abkühlen des Extraktes erhalten. Agar wird durch Entfernen von Wasser von dem Gelidiumgallert durch Gefrierentwässerung oder Kompressionsentwässerung und Trocknen davon erhalten. Agar enthält normalerweise etwa 70% Agarose und etwa 30% Agaropektin. Der Agar kann weiter gereinigt werden, um Agarose mit hoher Reinheit herzustellen.
  • Die erfindungsgemäß verwendeten 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materialien beinhalten die vorstehend beschriebenen Rohmaterialalgen für Agar, Gelidiumgallert, Agar, aufgereinigte Agarose, aufgereinigtes Agaropektin und Zwischenprodukte oder Nebenprodukte, die während der Herstellung dieser Stoffe erhalten werden.
  • Gewöhnlich werden in der Sonne getrocknete Algen als die Rohmaterialien verwendet. Sowohl frische Algen als auch getrocknete Algen können erfindungsgemäß verwendet werden. Algen, die während der Wasserzerstäubung bei dem Trocknen gebleicht werden, so genannte gebleichte Rohalgen, können auch verwendet werden. Agar in verschiedenen Formen, einschließlich Stab, Band, Platten, Faser und Pulver, kann ungeachtet der Herkunft der Algen verwendet werden. Aufgereinigte Agarose mit niedriger Reinheit oder hoher Reinheit mit verschiedenen Agarosegehalten kann verwendet werden.
  • Agarose ist ein Polysaccharid, das eine Hauptstruktur aufweist, in der D-Galactose und 3,6-Anhydro-L-Galactose miteinander alternierend verbunden sind. In der Struktur ist die 1-Position von D-Galactose mit der 4-Position von 3,6-Anhydro-L-Galactose über eine β-glykosidische Bindung verbunden und die 1-Position von 3,6-Anhydro-L-Galactose ist mit der 3-Position von D-Galactose über eine α-glykosidische Bindung verbunden. Die α-1,3-Bindung wird selektiv durch milde Hydrolyse mit einer verdünnten Säure oder α-Agarase hydrolysiert [Carbohydr. Res., 66: 207 (1978)]. Die β-1,4-Bindung wird selektiv durch β-Agarase hydrolysiert.
  • Carrageen ist ein Polysaccharid, das in roten Algen zugehörig zu Gigartinaceae, Solieriaceae, Hypneaceae und dergleichen enthalten ist. k-Carrageen, λ-Carrageen und η-Carrageen sind bekannt. k-Carrageen hat eine Grundstruktur, in der die 1-Position von D-Galactose-4-Sulfat mit der 4-Position von 3,6-Anhydro-D-Galactose über eine β-glykosidische Bindung verbunden ist, die 1-Position von 3,6-Anhydro-D-Galactose mit der 3-Position von D-Galactose-4-Sulfat über eine α-glykosidische Bindung verbunden ist, und sie alternierend wiederholt sind. λ-Carrageen hat eine Grundstruktur, in der die 1-Position von D-Galactose mit der 4-Position von D-Galactose-2,6-Disulfat über eine β-glykosidische Bindung verbunden ist, die 1-Position von D-Galactose-2,6-Disulfat mit der 3-Position von D-Galactose über eine α-glykosidische Bindung verbunden ist, und sie alternierend wiederholt sind. Carrageen wird als Geliermittel für Nahrungsmittel verwendet.
  • Ein Produkt des Teilabbaus des 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials erhalten durch chemische, physikalische und/oder enzymatische Mittel kann auch erfindungsgemäß als ein 3,6-Anhydrogalactose-haltiges Material verwendet werden. Darüber hinaus kann eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende durch Teilabbau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials durch chemische, physikalische und/oder enzymatische Mittel hergestellt werden.
  • Ein aufgereinigtes, teilweise aufgereinigtes oder Rohmaterial, das eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende enthält, kann abhängig vom Zweck erfindungsgemäß verwendet werden.
  • Beispiele für ein Mittel eines chemischen Abbaus des 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials beinhalten Hydrolyse unter sauren Bedingungen unter pH 7. Beispiele für ein Mittel eines physikalischen Abbaus beinhalten Bestrahlung mit elektromagnetischen Wellen oder Ultraschallwellen. Beispiele für ein Mittel eines enzymatischen Verdaus beinhalten Hydrolyse mit einer Hydrolase, wie Agarase und Carrageenase.
  • Die Bedingungen, die für den Abbau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials unter sauren Bedingungen unter pH 7 verwendet werden, sind nicht auf spezifische beschränkt, sofern der Abbau eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende herstellt, wie eine Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit Agarobiose, k-Carabiose oder 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende.
  • Beispielsweise wird eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende durch Lösen oder Suspendieren eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials in einer Säure bei einer Konzentration von 0,0001 bis 5 N und Umsetzen des Gemisches für wenige Sekunden bis wenige Tage hergestellt. Die erforderliche Reaktionszeit für die Herstellung der Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende wird durch Erhitzen des Gemisches während der Reaktion verkürzt.
  • Eine jegliche Säure kann verwendet werden, um ein 3,6-Anhydrogalactose-haltiges Material zu lösen oder zu suspendieren. Anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure und Salpetersäure, sowie organische Säuren, wie Zitronensäure, Fumarsäure, Essigsäure, Milchsäure und Ascorbinsäure, können ver wendet werden. Die Säure kann ohne Beschränkung bei einer Konzentration von 0,0001 bis 5 N, vorzugsweise 0,001 bis 1 N, verwendet werden. Außerdem kann die Reaktion ohne Beschränkung bei einer Temperatur von 0 bis 200°C, vorzugsweise 20 bis 130°C, erfolgen. Weiterhin kann die Reaktion ohne Beschränkung für ein paar Sekunden bis ein paar Tage erfolgen. Die Säure und die Konzentration davon und die Reaktionstemperatur und -zeit können passend ausgewählt werden. Solch eine Auswahl hängt von dem Nachstehenden ab: dem 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Material, das als das Rohmaterial verwendet wird, wie Agarose oder Carrageen, der Ausbeute der Verbindung von Interesse mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende, wie Agarobiose und k-Carabiose, und einer Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende, und dem Polymerisationsgrad der Verbindung von Interesse, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende. Im Allgemeinen schreitet die Säureabbaureaktion schneller fort durch die Auswahl einer starken Säure eher als einer schwachen Säure, einer hohen Säurekonzentration eher als einer niedrigen Säurekonzentration und einer hohen Temperatur eher als einer niedrigen Temperatur.
  • Beispielsweise geliert ein Säureabbauprodukt nicht mehr, das durch Suspendieren von Agar in 0,1 N HCl bei einer Konzentration von 10 Gew.-% und Lösen des Agars durch Erhitzen bei 100°C für 13 Minuten erhalten wurde, selbst wenn die Lösung auf ihren Gefrierpunkt abgekühlt wird. Wenn die Saccharide, die in der Lösung enthalten sind, mit Gelfiltrations-HPLC, Normalphasen-HPLC und dergleichen analysiert werden, werden die Saccharide mit hohem Molekulargewicht kaum beobachtet und man stellt fest, dass die meisten der Saccharide zu löslichen Sacchariden abgebaut wurden, die aus 10 oder weniger Zuckern zusammengesetzt sind.
  • Beispielsweise ist die erfindungsgemäß verwendete Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende ohne Beschränkung eine, in der ein Zucker an eine Hydroxygruppe, die von der an der 1-Position von 3,6-Anhydrogalactose verschieden ist, gebunden ist. Beispiele davon beinhalten Produkte, die durch Säureabbau oder Verdau mit α-Agarase von Agarose, wie Agarobiose, Agarotetraose, Agarohexaose, Agarooctaose und Agarodecaose, erhalten werden. Des Weiteren können Produkte, die durch Säureabbau oder Verdau mit Carrageenase von Carrageen erhalten werden, beispielhaft angeführt werden. Weiterhin beinhalten die erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden sind, mit 3,6-Anhydroga lactose an ihren reduzierenden Enden diejenigen, in denen eine oder mehrere, ausgewählt aus den nachstehenden, an eine Hydroxygruppe, die von der an der 1-Position von 3,6-Anhydrogalactose verschieden ist, gebunden ist: eine Hexose, wie Glucose, Mannose und Galactose, eine Pentose, wie Xylose, Arabinose und Ribose, eine Uronsäure, wie Glucuronsäure, Galacturonsäure, Mannuronsäure und Guluronsäure, ein Aminozucker, wie Glucosamin und Galactosamin, eine Sialinsäure, wie N-Acetylneuraminsäure, ein Desoxyzucker, wie Fucose, sowie Ester, Amide und/oder Lactone davon. Des Weiteren sind auch die nachstehenden als die erfindungsgemäß verwendete Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende definiert: diejenigen, in denen eine Pyruvatgruppe und/oder eine Sulfatgruppe an Agarobiose, k-Carabiose oder die Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende gebunden ist, sowie diejenigen, deren Hydroxygruppe methyliert ist.
  • Da der Kohlenstoff an der 1-Position von 3,6-Anhydrogalactose an dem reduzierenden Ende einen anomeren Kohlenstoff darstellt, existiert ein α-Isomer und ein β-Isomer für eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende. Beide können erfindungsgemäß als die Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende verwendet werden. Des Weiteren kann eine mit einer Aldehydgruppe an der 1-Position von 3,6-Anhydrogalactose an dem reduzierenden Ende auch als Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende verwendet werden. Entweder kann ein D-Isomer oder ein L-Isomer von 3,6-Anhydrogalactose verwendet werden. Außerdem kann ein Gemisch des α-Isomers, des β-Isomers und des Aldehyds sowie ein Gemisch des D-Isomers und des L-Isomers verwendet werden.
  • Erfindungsgemäß kann ein Apoptose-auslösender Stoff durch Behandeln einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende (beispielsweise eine Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit Agarobiose, k-Carabiose oder 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende) unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten werden. Er kann auch durch Säureabbau bei einem pH von unter 7 und/oder enzymatischen Verdau von einem 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Material, gefolgt von einer Behandlung des Produkts des Säureabbaus und/oder des enzymatischen Verdaus unter neutralen bis alkalischen Bedingungen, erhalten werden.
  • Ein jegliches Alkali kann bei der Behandlung der Verbindung unter alkalischen Bedingungen über pH 7 verwendet werden, um mindestens eine Verbindung, ausgewählt aus Verbindungen mit 3,6-Anhydrogalactose an ihren reduzierenden Enden, wie Verbindungen, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden sind, mit Agarobiose, k-Carabiose oder 3,6-Anhydrogalactose an ihren reduzierenden Enden, zu lösen oder zu suspendieren. Anorganische Basen, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Calciumhydroxid und Ammonium, sowie organische Basen wie Tris, Ethylamin und Triethylamin, können verwendet werden. Das Alkali kann ohne Beschränkung bei einer Konzentration von 0,0001 bis 5 N, vorzugsweise 0,001 bis 1 N, verwendet werden. Außerdem kann die Reaktion ohne Beschränkung bei einer Temperatur von 0 bis 200°C, vorzugsweise 20 bis 130°C, erfolgen. Des Weiteren kann die Reaktion ohne Beschränkung für ein paar Sekunden bis ein paar Tage erfolgen. Das Alkali und die Konzentration davon und die Reaktionstemperatur und die -zeit können passend ausgewählt werden. Solch eine Auswahl hängt von dem Nachstehenden ab: der Verbindung, die als das Rohmaterial verwendet wird, und der Ausbeute des Apoptose-auslösenden Stoffes von Interesse. Im Allgemeinen schreitet die Herstellung des Apoptose-auslösenden Stoffes schneller fort durch die Auswahl einer hohen Alkalikonzentration eher als einer niedrigen Alkalikonzentration (obwohl ein jeglicher pH-Wert von über 7 verwendet werden kann) und einer hohen Temperatur eher als einer niedrigen Temperatur.
  • Beispielsweise wird der Apoptose-auslösende Stoff durch Herstellen einer Lösung einer Agarobiose oder k-Carabiose bei einem pH-Wert von 11,5 und Inkubieren davon bei 37°C für 5 Minuten produziert.
  • Die alkalische Lösung, die den so hergestellten Apoptose-auslösenden Stoff enthält, kann, abhängig vom Zweck, nachdem sie neutralisiert wurde oder als eine saure Lösung bei einem pH-Wert von unter 7 verwendet werden.
  • Die Apoptose-auslösende Aktivität des Apoptose-auslösenden Stoffes kann gemessen werden, z.B. indem man die Antiproliferationsaktivität gegenüber Tumorzellen als Index verwendet. Der Apoptose-auslösende Stoff kann durch Verwenden der Aktivität als Index aufgereinigt werden. Bekannte Mittel zur Aufreinigung, die chemische und physikalische Mittel beinhalten, können verwendet werden. Der Stoff kann unter Verwendung von Aufreinigungsmitteln, wie Gelfiltration, Fraktionierung mittels einer Molekulargewichtfraktionierungsmembran, Lösungsmittelextraktion und verschiedenen Chromatographien unter Verwendung von Ionenaustauscherharzen oder dergleichen in Kombination, aufgereinigt werden.
  • Der Apoptose-auslösende Stoff in einer aufgereinigten Form wird beispielhaft durch die Verbindung der Formel (I) wie vorstehend beschrieben veranschaulicht.
  • Beispielsweise wird eine Verbindung der Formel (I), worin X eine CH2OH-Gruppe und Y ein H-Atom ist, aufgereinigt aus einem Produkt, das durch Behandeln von Agarobiose unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten wurde. Andererseits wird eine Verbindung der Formel (I), worin X ein H-Atom und Y eine CH2OH-Gruppe ist, aufgereinigt aus einem Produkt, das durch Behandeln von k-Carabiose unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten wurde.
  • Die Verbindung der Formel (I) wird wie vorstehend beschrieben durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende (beispielsweise eine Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit Agarobiose, k-Carabiose oder 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende) unter neutralen bis alkalischen Bedingungen, hergestellt.
  • Ein Pro-Pharmakon, das die Ausübung der Aktivität der Verbindung der Formel (I) zum Ziel hat, kann in vivo verwendet werden. 3,6-Anhydrogalactose mit einem Liganden, der eine Affinität für ein Organ oder ein Gewebe aufweist, wird vorzugsweise als ein Pro-Pharmakon verwendet. Solch ein Pro-Pharmakon wird unter physiologischen Bedingungen, nachdem es in Zellen eingebaut wurde, in eine Verbindung der Formel (I) umgewandelt und übt verschiedene physiologische Funktionen aus. Galactose wird beispielhaft als ein Ligand erwähnt. Ein wirksamer zielgerichteter Transport zu Lebergeweben neben anderen wird durch Verwenden von Galactose als Ligand erreicht. Verbindungen mit solch einem Liganden beinhalten Agarooligosaccharide wie Agarobiose, Agarohexaose und Agarooctaose mit Galactose an deren nicht reduzierenden Ende. Die Agarooligosaccharide sind als Pro-Pharmaka verwendbar.
  • Seit Langem nehmen Menschen Agarooligosaccharide mit Galactose an deren nicht reduzierenden Enden ein. Das Agarooligosaccharid übt seine physiologische Aktivität aus, nachdem die 3,6-Anhydrogalactose an dem reduzierenden Ende unter neutralen oder alkalischen Bedingungen freigesetzt wird und in eine Verbindung der Formel (I) umgewandelt wird. Das heißt, dass ein Agarooligosaccharid, das als ein Pro-Pharmakon in einen lebenden Körper aufgenommen wird, in eine Verbindung der Formel (I) umgewandelt wird, um seine physiologische Aktivität auszuüben. Die Agarooligosaccharide haben ein geeignetes Molekulargewicht für ihre wirksame Aufnahme. Daher werden sie bereitwillig von dem Verdauungstrakt aufgenommen. Des Weiteren trägt die Galactose an dem nicht reduzierenden Ende zur aktiven Aufnahme von dem Agarooligosaccharid in der Leber bei und fördert dessen Zirkulation in dem Blutstrom durch die Leber. Nach Absorption wird das Agarooligosaccharid in eine Verbindung der Formel (I) an einer lokalen Stelle in einem Gewebe, das eine Affinität für die Galactose an dem nicht reduzierenden Ende aufweist, umgewandelt, um seine physiologische Aktivität auszuüben. Somit kann ein Agarooligosaccharid als ein Pro-Pharmakon verabreicht werden, das hochgradig stabil ist, wirksam eingebaut wird und an einer lokalen Stelle in einem konzentrierten Zustand in eine Verbindung der Formel (I) umgewandelt wird, um seine physiologische Aktivität auszuüben.
  • Die Salze der Verbindungen der Formel (I) beinhalten pharmazeutisch verträgliche Salze. Bekannte Verfahren können verwendet werden, um die Verbindungen in die Salze umzuwandeln.
  • Die Verbindung der Formel (II) wird in einem Reaktionsgemisch erzeugt, das durch Umsetzen einer Verbindung der Formel (I) mit einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung erhalten wird.
  • Beispiele für die zu verwendenden SH-Gruppen-haltigen Verbindungen beinhalten in nicht begrenzender Weise Methanthiol, Butanthiol, Mercaptoethanol, SH-Gruppen-haltige Aminosäuren und SH-Gruppen-haltige Aminosäurederivate. Beispiele für die SH-Gruppen-haltigen Aminosäuren beinhalten Cystein und Homocystein.
  • Beispiele für die SH-Gruppen-haltigen Aminosäurederivate beinhalten die Derivate der vorstehend beschriebenen Aminosäuren, wie Cysteinderivate, Cystein-haltige Peptide und Cysteinderivat-haltige Peptide. Das Cystein-haltige Peptid ist nicht auf ein spezifisches beschränkt, sofern das Peptid Cystein als seinen Konstituenten aufweist. Die erfindungsgemäß verwendeten Cystein-haltigen Peptide beinhalten kleine Moleküle wie Oligopeptide (beispielsweise Glutathion) und Makromoleküle, wie Proteine. Des Weiteren können Peptide, die Cystein oder Homocystein enthalten, als Cystein- oder Homocystein-haltige Peptide erfindungsgemäß dadurch ver wendet werden, dass eine Behandlung unter Bedingungen eingebaut wird, die Cystein- oder Homocystein-haltige Peptide während der Reaktion erzeugt, z.B. unter reduzierenden Bedingungen. Die Cystein-haltigen Peptide beinhalten auch Cystein-haltige Peptide, die ein Saccharid, ein Lipid oder dergleichen enthalten. Alternativ können die Salze, Säureanhydride, Ester und dergleichen der verschiedenen vorstehend beschriebenen Stoffe verwendet werden.
  • Die Reaktion zwischen einer Verbindung der Formel (I) und einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung zum Herstellen einer Verbindung der Formel (II) kann unter bekannten Reaktionsbedingungen ausgeführt werden. Die Reaktion kann unter jeglichen Bedingungen ausgeführt werden, in denen die SH-Gruppe der SH-Gruppenhaltigen Verbindung reaktiv ist.
  • Bekannte Mittel zur Aufreinigung, die chemische und physikalische Mittel beinhalten, können zum Aufreinigen und Isolieren einer Verbindung der Formel (II), die durch Reagieren einer Verbindung der Formel (I) mit einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung oder einem Derivat davon erzeugt wurde, verwendet werden.
  • Die Verbindung der Formel (I) reagiert in vivo beispielsweise mit einer SH-Gruppenhaltigen Verbindung wie Cystein und Glutathion, um ein metabolisches Derivat der Formel (II) zu erzeugen, das als ein Arzneimittel verwendbar ist. Folglich kann die Arzneimittelwirksamkeit, die durch das metabolische Derivat ausgeübt wird, auch durch Verabreichen einer Verbindung der Formel (I) erhalten werden. Deshalb schließt die Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) mit dem Ziel der Erzeugung einer Verbindung der Formel (II) in vivo ein.
  • Die Salze der Verbindungen der Formel (II) beinhalten pharmazeutisch verträgliche Salze. Bekannte Verfahren, um die Verbindungen in die Salze umzuwandeln, können verwendet werden.
  • Die Verbindungen der Formel (I), die Verbindungen der Formel (II) sowie die Salze davon haben physiologische Aktivitäten, wie eine Apoptose-auslösende Aktivität, eine karzinostatische Aktivität, antioxidative Aktivitäten, wie eine Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, eine Aktivität, die Lipidperoxidradikalproduktion zu hemmen, und eine Aktivität, die Stickstoffmonoxidproduktion zu hemmen, eine antimikrobielle Aktivität gegen krankheitserregende Mikroorganismen, eine antimutagene Aktivität, eine α-Glykosidase-hemmende Aktivität, eine immunregulierende Aktivität, eine Aktivität, die Prostaglandinsynthese zu hemmen, eine entzündungshemmende Aktivität, eine antiallergische Aktivität, eine Aktivität, die Cytokinproduktion zu regulieren, eine antirheumatische Aktivität, eine antidiabetische Aktivität, eine Aktivität, die Synovialzellproliferation zu hemmen, und eine Aktivität, die Hitzeschockproteinproduktion auszulösen. Basierend auf diesen Aktivitäten können pharmazeutische Zusammensetzungen zum Behandeln oder Verhindern der nachstehenden Erkrankungen unter Verwendung einer Verbindung als Wirkstoff, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Verbindungen der Formel (I), den Verbindungen der Formel (II) und Salzen davon, hergestellt werden. Solche Erkrankungen beinhalten eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung die Auslösung von Apoptose erfordert, eine krebsartige Erkrankung, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Produktion von aktivem Sauerstoff erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Lipidperoxidradikalproduktion erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Stickstoffmonoxidproduktion erfordert, eine Erkrankung, die durch einen krankheitserregenden Mikroorganismus erzeugt wird, eine Erkrankung, die durch ein Mutagen ausgelöst wird, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung von α-Glykosidase erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Immunregulation erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Prostaglandinsynthese erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Entzündungshemmung erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Allergiehemmung erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Regulierung der Cytokin-Produkion erfordert, Rheuma, Diabetes, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der Synovialzellproliferation erfordert, und eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Auslösung von Hitzeschockproteinproduktion erfordert. Mit anderen Worten können die nachstehenden pharmazeutischen Zusammensetzungen hergestellt werden: eine Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose, eine karzinostatische Zusammensetzung, antioxidative Zusammensetzungen, wie eine Zusammensetzung zum Hemmen der Produktion von aktivem Sauerstoff, eine Zusammensetzung zum Hemmen von Lipidperoxidradikalproduktion und eine Zusammensetzung zum Hemmen von Stickstoffmonoxidproduktion, eine antimikrobielle Zusammensetzung, eine antivirale Zusammensetzung, eine antimutagene Zusammensetzung, eine antihyperglykämische Zusammensetzung, eine antihyperlipidämische Zusammensetzung, eine immunregulatorische Zusammensetzung, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Prostaglandinsynthese, eine entzündungshemmende Zusammensetzung, eine antiallergene Zusammensetzung, eine Zusammensetzung zum Regulieren der Cytokinproduktion, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Synovialzellproliferation, eine antirheumatische Zusammensetzung, eine antidiabetische Zusammensetzung und eine Zusammensetzung zum Auslösen der Hitzeschockproteinproduktion.
  • Eine Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose, die als einen Wirkstoff eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Verbindungen der Formel (I), den Verbindungen der Formel (II) und Salzen davon, enthält, ist zum Entfernen von autoreaktiven Lymphozyten aus Patienten mit Autoimmunerkrankungen, Tumorzellen, Zellen infiziert mit einem Virus und dergleichen, verwendbar. Sie kann verwendet werden, um unnötige oder schädliche Zellen auf eine natürliche Art und Weise aus einem lebenden Körper durch Auslösen von Apoptose in gewünschten Geweben oder Zellen zu entfernen. Beispiele für Erkrankungen, für die die Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose wirksam ist, beinhalten Autoimmunerkrankungen, wie systemischer Lupus erythematodes, immunvermittelte Glomerulonephritis, Multiple Sklerose und Collagenkrankheit und Rheuma.
  • Die Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose kann in einem Verfahren zum Auslösen von Apoptose verwendet werden. Das Verfahren ist zum Aufklären des Mechanismus der Apoptoseauslösung sowie zum Screenen von Apoptoseauslösern und Hemmstoffen der Apoptoseauslösung verwendbar.
  • Die Apoptose-auslösende Aktivität der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose wird durch einen Caspaseinhibitor, wie Inhibitor 5 des IL-1β-umwandelnden Enzyms [Z-Val-Ala-DL-Asp (OMe)-Fluormethylketon: Takara Shuzo], gehemmt. Folglich wird die Apoptose, die durch die Zusammensetzung ausgelöst wird, als ein Zelltod aufgrund von Apoptose, die von Caspasen abhängt, angesehen.
  • Für Caspase wurde aus den nachstehenden Gründen gezeigt, dass sie als ein wichtiger Vermittler von Apoptose wirkt: vor verschiedenem Zelltod wächst sie an, ihre Überexpression löst Zelltod aus, die Apoptose wird durch einen Peptidinhibitor oder ein hemmendes Protein, wie CRMA und P35, gehemmt, und die Apoptose ist in einer Caspase 1- oder Caspase 3-knockout-Maus teilweise gehemmt im Vergleich zu einer normalen [Seikagaku (Biochemistry), 70:14-21 (1998)]. Das heißt eine Cysteinprotease, Caspase, wird während des apoptotischen Vorgangs aktiviert, um nu kleäre oder cytoplasmatische Proteine abzubauen. Caspase wird zunächst als ein Vorläufer synthetisiert und dann durch Prozessieren aktiviert. Die Regulierung des Caspaseaktivierungsweges entscheidet über das Schicksal von Zellen. Säuger haben 10 oder mehr Typen von Caspasen. Vorgelagerte Caspasen verarbeiten nachgelagerte Caspasen, um die intrazellulären proteolytischen Aktivitäten in einer kaskadenartigen Art und Weise zu verstärken [Saibo Kogaku (Cell Technology), 17:875-880 (1998)]. Im Gegensatz dazu kann eine Hemmung der Prozessierungsaktivität mittels eines Inhibitors der Cysteinprotease, Caspase, den Zelltod aufgrund der Caspase-abhängigen Apoptose beenden.
  • Die Verbindungen der Formel (I), die Verbindungen der Formel (II) und Salze davon sind für die Hemmung der Produktion von oxidierenden Stoffen, wie aktivem Sauerstoff, verwendbar. Deshalb ist eine antioxidative Zusammensetzung, wie eine Zusammensetzung zum Hemmen der Produktion von aktivem Sauerstoff, die die Verbindung als Wirkstoff enthält, verwendbar zum Behandeln oder Verhindern von Erkrankungen, die durch Produktion und/oder Überschuss von aktivem Sauerstoff ausgelöst werden.
  • Aktiver Sauerstoff kann im Allgemeinen in radikalen aktiven Sauerstoff und nicht radikalen aktiven Sauerstoff eingeordnet werden. Der radikale aktive Sauerstoff beinhaltet Hydroxyradikal, Hydroxyperoxyradikal, Peroxyradikal, Alkoxyradikal, Stickstoffdioxid, Stickstoffmonoxid (nachstehend bezeichnet als NO), thyl-Radikal und Superoxid. Demgegenüber beinhaltet der nicht radikale aktive Sauerstoff Singulett-Sauerstoff, Wasserstoffperoxid, Lipid-Hydroperoxid, Hypochlorsäure, Ozon und Peroxonitrit. All diese sind an etlichen pathologischen Zuständen, wie verschiedenen entzündlichen Erkrankungen, Diabetes, Krebs, Arteriosklerose, neurologischen Erkrankungen und ischämischer Re-Perfusionserkrankung, beteiligt.
  • Aktiver Sauerstoff wird in einem lebenden Körper durch verschiedene Wege andauernd in einer geringen Konzentration erzeugt. Der so erzeugte aktive Sauerstoff ist unvermeidbar und beinhaltet das Nachstehende: Superoxid und Wasserstoffperoxid, die physiologisch einem Elektronentransportsystem, wie dem in den Mitochondrien, entweichen, Hydroxyradikal, dessen Erzeugung durch ein Übergangsmetall wie Kupfer und Eisen katalysiert wird, Hypochlorsäure, die von Neutrophilen oder Monozyten zur Verteidigung gegen Infektionen erzeugt wird, und NO, das durch den Abbau von Arginin erzeugt wird. Ein lebender Körper hat ein System zum Beseitigen von aktivem Sauerstoff, das Enzyme und kleine Molekülverbindun gen gegen die Produktion des aktiven Sauerstoffs beinhaltet, um das Gleichgewicht zwischen der Produktion und der Beseitigung aufrechtzuerhalten. Jedoch wird der lebende Körper oxidativ geschädigt, falls das Produktionssystem vorherrschend über das Beseitigungssystem in Folge von der Aktivierung des Produktionssystems aus irgendeinem Grund oder im Gegensatz dazu in Folge der Inaktivierung des Beseitigungssystems wird. Solche Bedingungen werden oxidativer Stress genannt. Des Weiteren ist der lebende Körper zusätzlich zu dem internen Ungleichgewicht andauernd oxidativem Stress in Folge von externen Stoffen, wie Atmosphäre und Nahrungsmitteln, ausgesetzt. Deshalb ist oxidativer Stress in jedermanns täglichem Leben unvermeidbar.
  • Mit anderen Worten ist ein lebender Körper andauernd Umständen ausgesetzt, die zu den Erkrankungen führen, die durch oxidativen Stress verursacht werden oder die zum Verschlechtern von Erkrankungszuständen in Folge von oxidativem Stress führen, der an verschiedenen Erkrankungen wie vorstehend beschrieben beteiligt ist. Deshalb ist die erfindungsgemäß beschriebene antioxidative Zusammensetzung, wie die Zusammensetzung zum Hemmen der Produktion von aktivem Sauerstoff, auch zum Verhindern und Behandeln der Erkrankungen, die durch den oxidativen Stress verursacht werden, oder Verhindern des Verschlechterns der Krankheitszustände in Folge von oxidativem Stress verwendbar.
  • Eine Lipidperoxidationsreaktion ist immer mit dem oxidativen Stress verbunden. Sobald ein Lipidperoxidradikal erzeugt wird, schreitet die Reaktion fort. 4-Hydroxy-2-nonenal (HNE), das in der Reaktion erzeugt wird, ist ein toxisches Aldehyd, das spezifisch auf Glutathion oder Proteine abzielt. Die Produkte der Reaktion zwischen HNE und Proteinen werden in verschiedenen Erkrankungsgeweben nachgewiesen und werden als Auslöser von mit oxidativem Stress verbundenen Erkrankungszuständen angesehen. Dementsprechend ist die antioxidative Zusammensetzung, die den erfindungsgemäß beschriebenen antioxidativen Stoff (d.h. eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Verbindungen der Formel (I), den Verbindungen der Formel (II) und Salzen davon) als Wirkstoff enthält, die die Produktion von Lipidperoxidradikalen hemmen kann, verwendbar zum Verhindern und Behandeln altersbedingter Erkrankungen, die durch oxidativen Stress ausgelöst werden.
  • NO ist der wesentliche Bestandteil des von dem Endothel abstammenden relaxierenden Faktors (EDRF) [Nature, 327:524-526 (1987)]. Eine pharmazeutische Zu sammensetzung, wie hierin beschrieben, ist zum Behandeln oder Verhindern einer Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Hemmung der NO-Produktion erfordert, verwendbar.
  • Beispiele für Erkrankungen, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Hemmung der NO-Produktion erfordern, beinhalten erfindungsgemäß in nicht begrenzender Weise systemische Hypotonie, ausgelöst durch toxischen Schock, Behandlung mit bestimmten Cytokinen und dergleichen, Abschwächung der Blutdruckantwort, Diabetes, vaskuläre Dysfunktion, Angiektasie, ausgelöst durch Erkrankungen, Gewebeverletzung, kardiovaskuläre Ischämie, Hyperalgesie, cerebrale Ischämie, Erkrankungen, die mit Vaskularisierung einhergehen, Krebs und dergleichen.
  • Stickstoffmonoxidsynthase (NOS) erzeugt L-Citrullin und NO aus L-Arginin und Sauerstoff. Eine cNOS, die konstitutiv exprimiert wird, und eine iNOS, die induzierbar ist, sind als NOSs bekannt. iNOS wird durch Stimulierung mit Cytotoxin oder Cytokinen, wie LPS und IFN-γ, induziert, um NO in Makrophagen und dergleichen zu erzeugen. iNOS selbst ist unentbehrlich, um das System eines Organismus aufrecht zu halten. Andererseits wurde gezeigt, dass iNOS, wenn es aufgrund verschiedener Faktoren überexprimiert wird und einen Überschuss an NO erzeugt, verschiedene Erkrankungen verursacht.
  • Die Erfinder haben bestätigt, dass die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon die Expression von iNOS hemmen. Die Bestätigung erfolgte auf Proteinebene mittels Western Blot und auf Boten-RNS-Ebene mittels RT-PCR. So hemmt eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Verbindungen der Formel (I), den Verbindungen der Formel (II) und Salzen davon, die Expression von iNOS, die aufgrund verschiedener Faktoren überexprimiert wird, was zu der Produktion eines Überschusses an NO führt. Daher ist die Verbindung zum Behandeln und Verhindern von Erkrankungen, die für ihre Behandlung und Verhinderung eine Hemmung der NO-Produktion erfordern, wirksam.
  • Die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon hemmen NO-Produktion in Makrophagen. So sind sie zum Behandeln und Verhindern von Erkrankungen, die durch NO-Produktion in Makrophagen verursacht werden, Karzinogenese und dergleichen, verwendbar. Die Hemmung der NO-Produktion durch die erfindungsgemäß beschriebene Verbindung hemmt nicht antagonistisch die Auslöser der NO-Produktion, wie LPS oder IFN-γ. Die Wirkung der Hemmung der NO-Produktion wird verstärkt, wenn die erfindungsgemäß beschriebene Verbindung vorab zugegeben wird. Daher ist die Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus den Verbindungen der Formel (I), den Verbindungen der Formel (II) und Salzen davon, als ein Wirkstoff einer Zusammensetzung zum Verhindern der Produktion von antioxidativen Stoffen, sehr brauchbar.
  • Die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion ist zum Untersuchen des Mechanismus der NO-Produktion und der Wirkungsweise von NO verwendbar und kann zum Screenen von Stoffen verwendet werden, die an dem Mechanismus der NO-Produktion beteiligt sind.
  • Vaskularisierung ist nötig für das Wachstum eines soliden Tumors. Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor/vaskuläre Permeabilitätsfaktor (VEGF) spielt eine wichtige Rolle in diesem Vorgang. NO induziert VEGF in verschiedenen Tumorzellen. Die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion hemmt auch die VEGF-Produktion in Tumorzellen durch Hemmung der NO-Produktion, wodurch die Vaskularisierung um Tumorgewebe gehemmt wird. Wenn die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion einer Maus verabreicht wird, in der Tumorzellen subkutan transplantiert wurden, um solide Tumore zu bilden, wird die Vaskularisierung um das Krebsgewebe unzureichend und der Tumor geht zurück.
  • Nitrosamine sind eine Reihe von Verbindungen, in denen eine Nitrosogruppe mit einem sekundären Amin verknüpft ist. Viele von den etlichen Hundert Typen an Nitrosaminen, die im Stand der Technik bekannt sind, üben durch Schädigung ihrer DNS karzinogene Wirkung auf Tiere aus. Von Nitrosaminen wird angenommen, dass sie in enger Verbindung mit Karzinogenese in Menschen stehen. Nitrosamin wird üblicherweise durch eine Reaktion zwischen einem Nitrit und einem Amin in dem Magen erzeugt. NO erzeugt ein Nitrosamin durch Reaktion mit einem Amin sogar unter physiologischen Bedingungen bei neutralem pH. Die NO-Produktion ist in Patienten mit Clonorchiose oder Zirrhose, die epidemiologisch in enger Verbindung mit Krebs stehen, erhöht. Daher kann insbesondere die Karzinogenese einer Hochrisikogruppe durch Verabreichen der erfindungsgemäß beschriebenen Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion zum Verhindern des Anstiegs der NO-Produktion verhindert werden. Wie vorstehend beschrieben zeigt die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion ihre karzi nostatische Aktivität in zwei Schritten, d.h. Unterdrückung von Karzinogenese und Hemmung von Vaskularisierung in krebsartigen Geweben.
  • Die erfindungsgemäß beschriebene Verbindung übt ihre karzinostatische Aktivität als Ergebnis von zwei synergistischen Wirkungen aus. Eine ist eine direkte Wirkung, Apoptose auszulösen, um Tumorzellen zu zerstören. Eine andere ist eine indirekte Wirkung, Tumorzellen durch Hemmung der Vaskularisierung, die mit durch NO-induziertem VEGF einhergeht, zum Sterben zu zwingen, was durch Hemmen der NO-Produktion in den Tumorzellen erreicht wird.
  • NO induziert auch ein Ödem, was charakteristischerweise in entzündlichen Läsionen beobachtet wird. Mit anderen Worten erhöht es die vaskuläre Permeabilität [Maeda et al., Japanese Journal of Cancer Research, 85:331-334 (1994)]. NO erhöht die Biosynthese von Prostaglandinen, die Entzündungsvermittler sind [Salvemini et al., Proceedings of National Academy of Sciences, USA, 90:7240-7244 (1993)]. Andererseits reagiert NO schnell mit Superoxidradikalen, um Peroxonitritionen zu erzeugen. Von diesen Peroxonitritionen wird angenommen, dass sie entzündliche Schäden von Zellen und Geweben verursachen.
  • Die NO-Produktion wird induziert, wenn aktivierte Immunzellen in ein Organ eintreten und Cytokine freisetzen. Insulin-abhängiger Diabetes wird durch spezifische Zerstörung der β-Inselzellen ausgelöst, und man nimmt an, dass diese Zerstörung durch NO verursacht wird. Die Gelenkflüssigkeit in der Läsion eines Patienten mit rheumatoider Arthritis, Osteoarthrose, Gichtarthritis oder Arthritis verbunden mit der Behçet-Krankheit enthält höhere NO-Konzentrationen als die in dem normalen Gelenk desselben Patienten oder Gelenken eines gesunden Individuums. Wenn die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion einem solchen Patienten verabreicht wird, wird die NO-Produktion in der Läsion gehemmt, was zu einer Verbesserung der Krankheitszustände führt.
  • Die NO-Produktion ist während cerebraler Ischämie und nach Re-Perfusion erhöht, was zu Schäden in cerebralen Geweben führt. Eine Verabreichung der erfindungsgemäß beschriebenen Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion an einen Patienten während cerebraler Ischämie lindert den Schaden an cerebralem Gewebe und verbessert die Prognose.
  • Der Arachidonsäurestoffwechsel ist stark mit dem Anstieg von Entzündung und Schmerz in Geweben verbunden. Arachidonsäure, die von Phospholipiden in der Zellmembran stammt, wird in vivo durch die Wirkung von Cyclooxygenase in Prostaglandine, Prostacycline und Thromboxane verstoffwechselt. Unter diesen weist Prostaglandin eine angiektatische Aktivität und folglich eine Aktivität, den Blutstrom zu Organen zu erhöhen, auf. Insbesondere steigern die Prostaglandine E2 und I2 aufgrund ihrer Aktivität, den Blutstrom zu erhöhen, Ödeme und das Eindringen von Leukozyten an Entzündungsstellen. So können sedierende und entzündungshemmende Aktivitäten durch Verabreichen der erfindungsgemäß beschriebenen Zusammensetzung zum Hemmen der Prostaglandin E2-Synthese, um die Biosynthese von Prostaglandinen zu hemmen, ausgeübt werden. Des Weiteren erzeugen Leukozyten, die in Entzündungsstellen eingedrungen sind, aktiven Sauerstoff und verursachen oxidative Stressbedingungen. Dementsprechend ist die Zusammensetzung zum Hemmen der Prostaglandin E2-Synthese, die die Biosynthese von Prostaglandinen hemmt, auch für die Verhinderung, Behandlung oder Verhinderung des Verschlechterns von verschiedenen Erkrankungen, die durch oxidativen Stress verursacht werden, wie vorstehend beschrieben, verwendbar.
  • Außerdem induziert NO Ödeme, was charakteristischerweise in entzündlichen Läsionen beobachtet wird, d.h. es erhöht die vaskuläre Permeabilität und steigert die Biosynthese von Prostaglandinen, die, wie vorstehend beschrieben, Entzündungsvermittler sind. Die Wirkung der erfindungsgemäß beschriebenen Zusammensetzung, NO-Produktion zu hemmen, und die Wirkung, Prostaglandin E2-Synthese zu hemmen, agieren synergistisch, um sedierende und entzündungshemmende Aktivitäten sowie synergistische Wirkungen bei der Verhinderung, Behandlung oder Verhinderung des Verschlechterns von verschiedenen Erkrankungen, die durch oxidativen Stress verursacht werden, zu zeigen. Die erfindungsgemäß beschriebene immunregulatorische Zusammensetzung weist immunregulatorische Aktivitäten, wie eine Aktivität, Lymphozytenblastogenese zu hemmen, und eine Aktivität, Lymphozytenmischkultur zu hemmen, auf. So ist die immunregulatorische Zusammensetzung als eine pharmazeutische Zusammensetzung zum Behandeln oder Verhindern von Erkrankungen aufgrund einer Abnormalität der Immunsysteme oder Immunfaktoren verwendbar.
  • Lymphozytenblastogenese ist eine Reaktion, in der ein Mitogen an einen Rezeptor auf der Oberfläche eines Lymphozyten bindet, um den Lymphozyten zu aktivieren, und seine Teilung und Proliferation fördert. Lymphozytenmischkultur ist eine Reak tion, in der Lymphozyten, die von allogenetischen Tieren erhalten wurden, gemischt und kultiviert werden, wodurch eine Aktivierung der Lymphozyten aufgrund der Inkompatibilität der Haupthistokompatibilitätsantigene ausgelöst wird, um die Teilung und Proliferation der Lymphozyten zu fördern. Die erfindungsgemäß beschriebene immunregulatorische Zusammensetzung hemmt diese Reaktionen und ist besonders zum Behandeln und Verhindern von chronischen Erkrankungen, die durch einen abnormalen Anstieg an Lymphozyten ausgelöst wird, z.B. Autoimmunerkrankungen, wie chronische Nephritis, chronische Colitis, Typ I-Diabetes und rheumatoide Arthritis, verwendbar und ist auch zur Unterdrückung einer Transplantatabstoßung verwendbar.
  • Die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon weisen eine Aktivität auf die Produktion von Hitzeschockproteinen, wie das 70 kDa-Hitzeschockprotein (HSP70) auszulösen. Sie weisen antivirale Aktivitäten gegen RNS-Viren und DNS-Viren, wie Hepatitisvirus, AIDS-Virus, Influenzavirus, Vesicular-Stomatitis-Virus und Herpesvirus, auf. Hitzeschockproteine sind an Tumorimmunität beteiligt. So sind diese Verbindungen auch für Tumorimmunität wirksam. Außerdem sind Hitzeschockproteine an biologischer Verteidigung, einschließlich Entzündungshemmung, beteiligt. So können virale Erkrankungen, wie eine Erkältung aufgrund des Influenzavirus, durch Verabreichen der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon vermieden oder behandelt werden.
  • Die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose kann unter Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als Wirkstoff und dessen Formulieren mit einem bekannten pharmazeutischen Träger hergestellt werden. Die Zusammensetzung wird im Allgemeinen mit einem pharmazeutisch verträglichen flüssigen oder festen Träger und wahlweise mit Lösungsmittel, Dispergiermittel, Emulgator, Puffer, Stabilisierungsmittel, Exzipienz, Bindemittel, Sprengmittel, Gleitmittel und dergleichen gemischt, um sie zu formulieren. Die Formulierung kann in Form einer festen Zubereitung, wie Tablette, Körnchen, Pulver, Puder und Kapsel oder einer flüssigen Zubereitung, wie einer gewöhnlichen Lösung, Suspension und Emulsion, vorliegen. Außerdem kann die Zusammensetzung als eine getrocknete Zubereitung formuliert werden, die als flüssige Zubereitung durch Zugeben eines geeigneten Trägers vor Verwendung rekonstituiert werden kann.
  • Die Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose kann entweder als eine orale Zubereitung oder eine parenterale Zubereitung, wie eine injizierbare Zubereitung und Tropfinfusionen, verabreicht werden.
  • Der pharmazeutische Träger kann entsprechend des vorstehend beschriebenen spezifischen Verabreichungsweges und der Dosierungsform ausgewählt werden. Für eine orale Zubereitung werden z.B. Stärke, Lactose, Saccharose, Mannid, Carboxymethylcellulose, Maisstärke, anorganische Salze und dergleichen verwendet. Ein Bindemittel, Sprengmittel, Tensid, Gleitmittel, Fluiditäts-förderndes Mittel, Geschmacksstoff, Farbstoff, Aroma und dergleichen können auch in orale Zubereitungen eingeschlossen werden.
  • Eine parenterale Zubereitung kann entsprechend herkömmlicher Verfahren durch Lösen oder Suspendieren des Wirkstoffes, d.h. einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, in einem Verdünnungsmittel hergestellt werden. Die Verdünnungsmittel beinhalten injizierbares destilliertes Wasser, physiologische Salzlösung, wässrige Glukoselösung, injizierbares Pflanzenöl, Sesamöl, Erdnussöl, Sojabohnenöl, Maisöl, Propylenglykol und Polyethylenglykol. Wahlweise kann ein Sterilisierungsmittel, Stabilisator, osmotischer Regulator, Glättmittel und dergleichen zu der Lösung oder Suspension gegeben werden.
  • Die erfindungsgemäß beschriebene Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose wird über einen für die Dosierungsform der Zusammensetzung geeigneten Weg verabreicht. Der Verabreichungsweg ist nicht auf einen spezifischen beschränkt. Die Zusammensetzung kann intern oder extern (oder topisch) oder durch Injektion verabreicht werden. Die injizierbare Zubereitung kann beispielsweise intravenös, intramuskulär, subkutan, intradermal und dergleichen verabreicht werden. Externe Zubereitungen beinhalten ein Zäpfchen.
  • Eine Dosierung der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose wird angemessen bestimmt und variiert abhängig von der speziellen Dosierungsform, dem Verabreichungsweg und -zweck, sowie Alter, Gewicht und Zustand des zu behandelnden Patienten. Im Allgemeinen beträgt eine tägliche Dosierung für eine erwachsene Person 10 μg bis 200 mg/kg bezogen auf die Menge des Wirkstoffes, die in der Formulierung enthalten ist. Natürlich kann die Dosierung abhängig von verschiedenen Faktoren variieren. Deshalb kann in einigen Fällen eine niedrigere Dosierung als die vorstehend genannte ausreichend sein, aber in anderen Fällen eine höhere Dosierung als die vorstehend genannte erforderlich sein. Die erfindungsgemäß beschriebene pharmazeutische Zusammensetzung kann wie sie ist oral verabreicht werden, oder sie kann täglich durch Zusetzen davon zu ausgewählten Nahrungsmitteln und Getränken eingenommen werden.
  • Eine karzinostatische Zusammensetzung kann unter Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als ihr Wirkstoff und Formulieren davon mit einem bekannten pharmazeutischen Träger hergestellt werden. Die karzinostatische Zusammensetzung kann entsprechend der gleichen Art und Weise wie der vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose beschriebenen hergestellt werden.
  • Die karzinostatische Zusammensetzung wird über einen für die Dosierungsform der Zusammensetzung geeigneten Weg verabreicht. Der Verabreichungsweg ist nicht auf einen spezifischen beschränkt. Die Zusammensetzung kann intern oder extern (oder topisch) oder durch Injektion verabreicht werden. Eine injizierbare Zubereitung kann beispielsweise intravenös, intramuskulär, subkutan, intradermal und dergleichen verabreicht werden. Externe Zubereitungen beinhalten ein Zäpfchen.
  • Eine Dosierung der karzinostatischen Zusammensetzung wird angemessen bestimmt und variiert abhängig von der speziellen Dosierungsform, dem Verabreichungsweg und -zweck sowie Alter, Gewicht und Zustand des zu behandelnden Patienten. Im Allgemeinen beträgt eine tägliche Dosierung für eine erwachsene Person 10 μg bis 200 mg/kg bezogen auf die Menge des Wirkstoffes, die in der Formulierung enthalten ist. Natürlich kann die Dosierung abhängig von verschiedenen Faktoren variieren. Deshalb kann in einigen Fällen eine niedrigere Dosierung als die vorstehend genannte ausreichend sein, aber in anderen Fällen eine höhere Dosierung als die vorstehend genannte erforderlich sein. Die erfindungsgemäß beschriebene pharmazeutische Zusammensetzung kann wie sie ist oral verabreicht werden oder sie kann täglich durch Zusetzen davon zu ausgewählten Nahrungsmitteln und Getränken eingenommen werden.
  • Rheumatismus ist eine Autoimmunerkrankung, in der Knochenhautzellen und Knorpelzellen geschädigt werden. Die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon weisen eine Apoptose-auslösende Aktivität auf Synovialzellen auf. So kann eine antirheumatische Zusammensetzung unter Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als ihr Wirkstoff und Formulieren davon mit einem bekannten pharmazeutischen Träger hergestellt werden. Die antirheumatische Zusammensetzung kann entsprechend der gleichen Art und Weise wie der vorstehend beschriebenen hergestellt werden.
  • Die antirheumatische Zusammensetzung kann entweder als eine orale Zubereitung oder eine parenterale Zubereitung, wie eine injizierbare Zubereitung und Tropfinfusionen, verabreicht werden.
  • Der pharmazeutische Träger kann entsprechend des vorstehend beschriebenen spezifischen Verabreichungsweges und der Dosierungsform ausgewählt werden und kann entsprechend der gleichen Art und Weise wie der vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose beschriebenen verwendet werden.
  • Die antirheumatische Zusammensetzung wird über einen für die Dosierungsform der Zusammensetzung geeigneten Weg verabreicht. Der Verabreichungsweg ist nicht auf einen spezifischen beschränkt. Die Zusammensetzung kann intern oder extern (oder topisch) oder durch Injektion verabreicht werden. Eine injizierbare Zubereitung kann beispielsweise intravenös, intramuskulär, subkutan, intradermal und dergleichen verabreicht werden. Externe Zubereitungen beinhalten ein Zäpfchen.
  • Eine Dosierung der antirheumatischen Zusammensetzung, die eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als ihren Wirkstoff enthält, wird angemessen bestimmt und variiert abhängig von der spezifischen Dosierungsform, dem Verabreichungsweg und -zweck sowie Alter, Gewicht und Zustand eines zu behandelnden Patienten. Im Allgemeinen beträgt eine tägliche Dosierung für eine erwachsene Person 0,01 bis 50 mg, vorzugsweise 0,1 bis 10 mg bezogen auf die Menge des Wirkstoffes, die in der Formulierung enthalten ist. Natürlich kann die Dosierung abhängig von verschiedenen Faktoren variieren. Deshalb kann in einigen Fällen eine geringere Dosierung als die vorstehend genannte ausreichend sein, aber in anderen Fällen eine höhere Dosierung als die vorstehend genannte erforderlich sein. Die erfindungsgemäß beschriebene pharmazeutische Zusammensetzung kann wie sie ist oral verabreicht werden oder sie kann täglich durch Zusetzen davon zu ausgewählten Nahrungsmitteln und Getränken eingenommen werden.
  • Zusätzlich können die nachstehenden Zusammensetzungen unter Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als deren Wirkstoff entsprechend der gleichen Art und Weise wie der vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose beschriebenen hergestellt werden: eine antioxidative Zusammensetzung, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Produktion von aktivem Sauerstoff, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Lipidperoxidradikalproduktion, eine Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion, eine antimikrobielle Zusammensetzung gegen krankheitserregende Mikroorganismen, eine antimutagene Zusammensetzung, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Prostaglandinsynthese, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Synovialzellproliferation, eine Zusammensetzung zum Auslösen der Hitzeschockproteinproduktion und eine antivirale Zusammensetzung. Abhängig von den Bedingungen können dieselben Dosierungen und Verabreichungswege wie die vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose beschriebenen verwendet werden.
  • Die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon zeigen hemmende Aktivitäten gegen verschiedene α-Glykosidasen, wie Sucrase und Maltase. Deshalb können eine antihyperglykämische Zusammensetzung, eine antihyperlipidämische Zusammensetzung, eine antiadipöse Zusammensetzung, eine antidiabetische Zusammensetzung und dergleichen unter Verwendung der Verbindung der Formel (I) als ihr Wirkstoff hergestellt werden. Solche pharmazeutischen Zusammensetzungen können entsprechend der gleichen Art und Weise wie der vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose beschriebenen hergestellt werden. Abhängig von den Bedingungen können dieselben Dosierungen und Verabreichungswege wie die vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose beschriebenen verwendet werden. Eine Zusammensetzung zum Hemmen von α-Glykosidase kann unter Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als ihr Wirkstoff entsprechend eines herkömmlichen Verfahrens hergestellt werden. Ein Verfahren zum Hemmen von α-Glykosidase kann unter Verwendung der Zusammensetzung zum Hemmen von α-Glykosidase erfolgen.
  • Erfindungsgemäß werden Nahrungsmittel oder Getränke bereitgestellt, die eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden. Das erfindungsgemäße Nahrungsmittel oder Getränk weist eine Apoptose-auslösende Aktivität, eine karzinostatische Aktivität, eine antioxidative Aktivität, eine antimikrobielle Aktivität gegen krankheitserregende Mikroorganismen, eine antimutagene Aktivität, eine Aktivität zum Hemmen der Prostaglandinsynthese, eine Aktivität zum Auslösen der Hitzeschockproteinproduktion, eine antivirale Aktivität, eine Aktivität zum Hemmen der α-Glykosidase und dergleichen auf. Somit ist es sehr nützlich, um Krankheiten zu verhindern und Krankheitszustände solcher Krankheiten zu verbessern, die gegenüber einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, empfindlich ist, wie eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung eine Auslösung von Apoptose erfordert, eine cancerogene Erkrankung, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Hemmung der Produktion von aktivem Sauerstoff erfordert, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Hemmung der NO-Produktion erfordert, eine Erkrankung, die durch einen krankheitserregenden Mikroorganismus verursacht wird, eine Erkrankung, die durch ein Mutagen, Prostaglandinsynthese oder dergleichen ausgelöst wird, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder Verhinderung Auslösen der Hitzeschockproteinproduktion erfordert, eine virale Erkrankung, eine Erkrankung, die für ihre Behandlung oder ihre Verhinderung eine Regulierung von α-Glykosidase erfordert und dergleichen.
  • Das Verfahren zum Herstellen der erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke ist nicht auf ein spezifisches beschränkt. Jegliche Verfahren einschließlich Kochen, Verarbeiten und andere üblicherweise angewendeten Verfahren zum Herstellen von Nahrungsmitteln und Getränken können verwendet werden, sofern die sich daraus ergebenden Nahrungsmittel oder Getränke eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als ihren Wirkstoff enthalten, durch Zusetzen dazu hergestellt werden und/oder durch Verdünnen einer solchen Verbindung davon hergestellt werden.
  • Beispielsweise wird bei der Herstellung der Nahrungsmittel oder Getränke die Verbindung der Formel (I) durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten. 3,6-Anhydrogalactose und/oder eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende wird durch Hydrolyse unter sauren Bedingungen oder enzymatischen Verdau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials erhalten.
  • Beispielsweise können Agar, Agarose und/oder Carrageen als ein 3,6-Anhydrogalactose-haltiges Material verwendet werden. Mindestens eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Agarobiose, k-Carabiose und einer Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist, mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende kann als eine Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende verwendet werden.
  • Die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke beinhalten auch Nahrungsmittel oder Getränke, die die Verbindung der Formel (II), die durch die Reaktion zwischen der Verbindung der Formel (I) und einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung während der Herstellung der Nahrungsmittel oder Getränke erzeugt wird, enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden.
  • Die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke sind nicht auf spezifische beschränkt und Beispiele davon beinhalten die folgenden: Erzeugnisse aus verarbeitetem Getreide (beispielsweise Weizenmehlprodukt, Stärkeprodukt, vorgemischtes Produkt, Nudel, Macaroni, Brot, Bohnenpaste, Buchweizennudel, Weizenglutenbrot, Reisnudel, Gelatinenudel und komprimierter Reiskuchen), Erzeugnisse aus verarbeitetem Fett und Öl (beispielsweise plastisches Fett und Öl, Tempuraöl, Salatöl, Mayonnaise und Salatsoße), Erzeugnisse aus verarbeiteten Sojabohnen (beispielsweise Tofu, Miso und fermentierte Sojabohnen), Erzeugnisse aus verarbeitetem Fleisch (beispielsweise Schinken, Speck, gepresster Schinken und Wurst), verarbeitete Meeresprodukte (beispielsweise gefrorener gemahlener Fisch, gekochte Fischpaste, röhrenförmige Rolle aus gekochter Fischpaste, Kuchen aus gemahlenem Fisch, frittiertes Pastetchen aus Fischpaste, Fischball, Sehne, Fischfleischschinken oder -wurst, getrockneter Thunfisch, Erzeugnisse aus verarbeiteten Fischeiern, Meeresprodukte aus der Dose und Fisch gekocht in gesüßter Sojasoße), Milchprodukte (beispielsweise Rohmilch, Sahne, Joghurt, Butter, Käse, Kondens milch, Milchpulver und Speiseeis), Erzeugnisse aus verarbeitetem Gemüse und Obst (beispielsweise Paste, Marmelade, eingelegtes Gemüse, Fruchtsaft, Gemüsegetränk und gemischtes Getränk), Süßwaren (beispielsweise Schokolade, Plätzchen, süßes Brötchen, Kuchen, süßer Reiskuchen und süßer Reis), alkoholische Getränke (beispielsweise Sake, chinesische alkoholische Getränke, Wein, Whisky, Shochu, Wodka, Brandy, Gin, Rum, Bier, leichte alkoholische Getränke, alkoholisches Getränk aus Früchten und Likör), Luxusgetränke (beispielsweise grüner Tee, Tee, Oolongtee, Kaffee, Erfrischungsgetränk und Milchsäuregetränk), Würzmittel (beispielsweise Sojasoße, Soße, Essig und süßer Sake), Nahrungsmittel in Dosen, Flaschen oder Tüten (beispielsweise verschiedene gekochte Nahrungsmittel, wie gekochtes Rind und Gemüse auf Reis, Reis, der zusammen mit Fleisch und Gemüse in einem kleinen Topf gekocht wird, gedünsteter Reis mit roten Bohnen, und Curry), halbgetrocknete oder kondensierte Nahrungsmittel (beispielsweise Leberpaste, andere Brotaufstriche, Suppe für Buchweizennudel oder Udon und kondensierte Suppe), getrocknete Nahrungsmittel (beispielsweise tafelfertige Nudel, tafelfertiges Curry, löslicher Kaffee, Saftpulver, Suppenpulver, tafelfertige Misosuppe, gekochtes Nahrungsmittel, gekochtes Getränk und gekochte Suppe), gefrorene Nahrungsmittel (beispielsweise Sukiyaki, Chawan-mushi, gegrillter Aal, Hackfleischsteak, Shaomai, mit gehacktem Schweinefleisch gefüllter Knödel, verschiedene stäbchenförmige Nahrungsmittel und Fruchtcocktail), feste und flüssige Nahrungsmittel (beispielsweise Suppe), verarbeitete Landwirtschafts- oder Forsterzeugnisse (beispielsweise Gewürz), verarbeitete Vieherzeugnisse, verarbeitete Meeresprodukte und dergleichen.
  • Sofern die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, in einer Menge, die nötig ist, um ihre physiologische Funktion auszuüben, enthalten, durch Verdünnung davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden, sind deren Ausgestaltungen nicht auf eine spezifische beschränkt. Die Nahrungsmittel oder Getränke können jegliche essbare Ausgestaltungen, wie Tabletten, Granula und Kapseln, aufweisen.
  • Die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke enthalten eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, die eine physiologische Aktivität aufweist. Die physiologischen Funktionen der Verbindung, wie eine Apoptose-auslö sende Aktivität und eine karzinostatische Aktivität, stellen eine Wirkung, Karzinogenese zu verhindern, eine Wirkung, Krebs zu unterdrücken, oder dergleichen nach Einnahme der Nahrungsmittel oder Getränke bereit. Das heißt die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke sind gesunde Nahrungsmittel oder Getränke, die Wirkungen einer Verbesserung der Erkrankungszustände von oder Verhinderung von den Erkrankungen aufweisen, die empfindlich gegenüber der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon sind. Insbesondere sind sie zum Bewahren der gastrointestinalen Gesundheit verwendbar.
  • Zusätzlich sind die Nahrungsmittel oder Getränke, die eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden, als antihyperglykämische, antidiabetische, antiadipöse oder antihyperlipidämische Nahrungsmittel oder Getränke, basierend auf der Aktivität der Verbindung, α-Glykosidase zu hemmen, verwendbar.
  • Des Weiteren haben die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon antioxidative Aktivitäten, wie eine Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, und eine Aktivität, Lipidperoxidradikalproduktion zu hemmen. Daher können sie in der Herstellung von antioxidativen Nahrungsmitteln oder Getränken als antioxidative Zusammensetzungen für antioxidative Nahrungsmittel oder Getränke, wie eine Zusammensetzung zum Hemmen der Produktion von aktivem Sauerstoff, eine Zusammensetzung zum Hemmen der Lipidperoxidradikalproduktion und eine Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion, verwendet werden.
  • Die Formulierung der erfindungsgemäßen antioxidativen Zusammensetzung, die mindestens eine Verbindung, ausgewählt aus den vorstehend beschriebenen Verbindungen, als Wirkstoff enthält, ist nicht auf eine spezifische beschränkt. Die Zusammensetzung kann beispielsweise angemessen in Pulver, Pasten, Emulsionen und dergleichen abhängig von den Nahrungsmitteln und Getränken, in denen die Verbindung angewendet wird, entsprechend herkömmlicher Verfahren formuliert werden. Die Nahrungsmittel und Getränke, die die erfindungsgemäß beschriebenen Verbindungen enthalten, können in geeigneter Weise unter Verwendung der erfindungsgemäßen antioxidativen Zusammensetzung hergestellt werden.
  • Eine Verbindung der Formel (I) oder Formel (II) ist für Antioxidation verwendbar.
  • Beispielsweise kann die Verbindung für Antioxidation der Formel (I) durch Behandeln eines Produktes, das durch Säureabbau unter sauren Bedingungen unter pH 7 und/oder enzymatischen Verdau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials hergestellt wird, unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten werden. Sowohl die aufgereinigten als auch die teilweise aufgereinigten Materialien können verwendet werden.
  • Beispiele der 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materialien, die verwendet werden können, beinhalten diejenigen, die von roten Algen abstammen, wie Agar, Agarose und/oder Carrageen.
  • Die Verbindung für Antioxidation der Formel (II) kann durch Umsetzen der Verbindung der Formel (I) mit einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung erhalten werden. Sowohl die aufgereinigten als auch die teilweise aufgereinigten Materialien können verwendet werden.
  • Die Verbindung für Antioxidation ist zum Beseitigen oder Unterdrücken von Oxidationsmitteln, wie aktivem Sauerstoff, in einem lebenden Körper verwendbar. Somit ist die Verbindung zum Verbessern von Erkrankungszuständen von oder Verhindern von Erkrankungen, die durch Produktion und/oder Überschuss an aktivem Sauerstoff verursacht werden, verwendbar.
  • Wie vorstehend beschrieben geht oxidativer Stress, der durch oxidatives Schädigen eines lebenden Körpers erzeugt wird, wenn das System zur Produktion von aktivem Sauerstoff vorherrschend über das Beseitigungssystem in dem lebenden Körper wird, mit verschiedenen Erkrankungen einher. So ist ein lebender Körper andauernd Umständen ausgesetzt, die zu Erkrankungen, die durch oxidativen Stress verursacht werden, oder zum Verschlechtern der Krankheitszustände führen. Deshalb ist es wünschenswert jeden Tag eine angemessene Menge eines antioxidativen Stoffes zum Verhindern, Behandeln, Verhindern des Verschlechterns von Erkrankungen, die durch oxidativen Stress verursacht werden, einzunehmen. Für die tägliche Aufnahme einer geeigneten Menge eines antioxidativen Stoffes ist es wünschenswert, ihn durch Nahrungsmittel und/oder Getränke aufzunehmen. Die Nahrungsmittel und Getränke, die die Verbindung für Antioxidation enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt wer den, sind als antioxidative Nahrungsmittel oder Getränke oder Nahrungsmittel oder Getränke gegen oxidativen Stress sehr brauchbar.
  • Die erfindungsgemäß beschriebene Verbindung weist auch die Fähigkeit auf, Wasser zu speichern. Somit kann sie für die Herstellung von Zusammensetzungen gegen Verstopfung ebenso wie Nahrungsmitteln oder Getränken gegen Verstopfung verwendet werden.
  • Eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, ist in einer kosmetischen Zusammensetzung verwendbar.
  • Kosmetische Zusammensetzungen, die die vorstehend beschriebene Verbindung als Wirkstoff enthalten, können in die nachstehenden Formen formuliert werden: wesentliche kosmetische Zusammensetzungen, wie Creme, milchige Lotion, Lotion, Gesichtsreinigung und -packung, Make-up-Kosmetika, wie Lippenstift und Grundierung, Körperseife, Seife und dergleichen. Die Verbindung ist auch für Haare wirksam. Die kosmetische Zusammensetzung kann in der Form von Haarpflegeprodukten, beispielsweise Haarprodukten, wie Haarwasser, Haarfluid, Haarfestiger, Haarvolumenmittel ("hair blow agent"), Haarcreme und Haarkur ("hair coat") sowie Toilettenartikel für die Haare, wie Shampoo, Haarspülung und Haarbehandlung, hergestellt werden. Die Menge der Verbindung, die in die kosmetische Zusammensetzung gemischt wird, kann abhängig von ihrer bleichenden, feuchtigkeitsspendenden oder antioxidativen Aktivität angemessen bestimmt werden. Bezüglich der anderen Bestandteile in der kosmetischen Zusammensetzung können diejenigen, die in herkömmliche kosmetische Zusammensetzungen gemischt werden, verwendet werden. Die bleichende Aktivität und die feuchtigkeitsspendende Aktivität können mit herkömmlichen Verfahren wie denjenigen, die in der JP-A 8-310937 beschrieben sind, gemessen werden.
  • Die kosmetische Zusammensetzung weist exzellente Eigenschaften auf, basierend auf der bleichenden Aktivität, der feuchtigkeitsspendenden Aktivität, der antioxidativen Aktivität, der Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, und der Aktivität gegen oxidativen Stress gegenüber der. Haut sowie der feuchtigkeitsspendenden Aktivität, der antioxidativen Aktivität, der Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, und der Aktivität gegen oxidativen Stress gegenüber Haaren und dergleichen.
  • Eine Zusammensetzung, die eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, enthält, ist zum Bewahren von Frische verwendbar. Die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon haben eine antioxidative Aktivität, eine Aktivität zum Bewahren von Frische, eine Aktivität zum Hemmen der Tyrosinase-Aktivität, antimikrobielle Aktivität gegen krankheitserregende Mikroorganismen und eine antimutagene Aktivität. Folglich kann eine Zusammensetzung zum Bewahren von Frische von Nahrungsmitteln, die effektiv Farbveränderungen, Abbau, Oxidation und dergleichen von Nahrungsmitteln verhindert, entsprechend eines bekannten Formulierungsverfahrens durch Verwendung einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II) und Salzen davon, als einen Wirkstoff hergestellt werden. Die Zusammensetzung zum Bewahren von Frische ist zum Bewahren des Geschmacks und der Frische von verschiedenen Nahrungsmitteln, leicht verderblichen Waren, verarbeiteten Nahrungsmitteln und dergleichen sehr brauchbar.
  • Erfindungsgemäß kann eine Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose unter Verwendung eines Apoptose-auslösenden Stoffes, der durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende unter neutralen bis alkalischen Bedingungen hergestellt wird (nachstehend einfach als ein Apoptose-auslösender Stoff bezeichnet), als ein Wirkstoff hergestellt werden. Solch eine Zusammensetzung kann auf die gleiche Art und Weise wie die vorstehend bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen der Apoptose beschriebene hergestellt werden.
  • Eine Dosierung der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose, die den erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoff als ihren Wirkstoff enthält, wird angemessen bestimmt und variiert abhängig von der spezifischen Dosierungsform, dem Verabreichungsweg und -zweck sowie Alter, Gewicht und Zustand des zu behandelnden Patienten. Im Allgemeinen beträgt eine tägliche Dosierung für eine erwachsene Person 10 μg bis 200 mg/kg bezogen auf die Menge des Wirkstoffes, die in der Formulierung enthalten ist. Natürlich kann die Dosierung abhängig von verschiedenen Faktoren variieren. Deshalb kann in einigen Fällen eine niedrigere Dosierung als die vorstehend genannte ausreichend sein, aber in anderen Fällen eine höhere Dosierung als die vorstehend genannte erforderlich sein. Die erfindungsgemäß beschriebene pharmazeutische Zusammensetzung kann wie sie ist oral verab reicht werden, oder sie kann täglich durch Zusetzen davon zu ausgewählten Nahrungsmitteln und Getränken eingenommen werden.
  • Die Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose, die den erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoff als ihren Wirkstoff enthält, weist eine antiproliferative Aktivität gegen Tumorzellen auf. Somit kann unter Verwendung des Apoptose-auslösenden Stoffes als einen Wirkstoff eine karzinostatische Zusammensetzung hergestellt werden.
  • Es können dieselben Herstellungsverfahren, Dosierungen und Verabreichungswege wie diejenigen, die bezüglich der Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose vorstehend beschrieben wurden, für die karzinostatische Zusammensetzung, die den erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoff als ihren Wirkstoff enthält, verwendet werden.
  • Der Apoptose-auslösende Stoff kann als eine pharmazeutische Zusammensetzung zum Behandeln einer cancerogenen Erkrankung und dergleichen verwendet werden. Ein Verfahren zum Auslösen von Apoptose unter Verwendung einer Verbindung dargestellt durch den Apoptose-auslösenden Stoff als einen Wirkstoff ist zum Untersuchen eines Mechanismus der biologischen Abwehr, cancerogenen Erkrankungen und dergleichen sowie zum Entwickeln von Inhibitoren einer Apoptoseauslösung verwendbar.
  • Die Nahrungsmittel und Getränke, die den erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoff enthalten, durch Verdünnung davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden, enthalten eine wirksame Menge des Stoffes, um seine physiologische Aktivität auszuüben. Das Herstellungsverfahren für die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke (beispielsweise Nahrungsmittel oder Getränke zum Auslösen von Apoptose oder karzinostatische Nahrungsmittel oder Getränke) ist nicht auf ein spezifisches beschränkt. Jegliche Verfahren einschließlich Kochen, Weiterverarbeiten und andere herkömmlich angewendete Verfahren zum Herstellen von Nahrungsmitteln und Getränken können verwendet werden, sofern die sich ergebenden Nahrungsmittel oder Getränke eine wirksame Menge des Apoptose-auslösenden Stoffes enthalten, um eine Apoptoseauslösende Aktivität oder eine karzinostatische Aktivität auszuüben. Die Nahrungsmittel und Getränke, die den Apoptose-auslösenden Stoff, der durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder eines Rohmaterials mit 3,6-Anhydrogalactose an seinem reduzierenden Ende unter alkalischen Bedingungen bei einem pH-Wert von über 7 in der Herstellung der Nahrungsmittel oder Getränke erzeugt wurde, enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden, sind in den erfindungsgemäßen Nahrungsmitteln oder Getränken eingeschlossen.
  • Insofern die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke den erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoff enthalten, durch Zusetzen dazu hergestellt werden und/oder durch Verdünnen davon hergestellt werden, sind ihre Ausgestaltungen nicht auf eine spezifische beschränkt. Die Nahrungsmittel oder Getränke können jegliche essbare Ausgestaltungen, wie Tabletten, Granula und Kapseln, aufweisen.
  • Die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke weisen eine Apoptose-auslösende Aktivität und eine karzinostatische Aktivität auf. Deshalb sind sie zum Verbessern von Erkrankungszuständen von oder Verhindern von Krebsarten der Verdauungsorgane und dergleichen sehr brauchbar.
  • Es wurde kein Todesfall beobachtet, wenn eine Verbindung aus der Verbindung der Formel (I), der Verbindung der Formel (II), Salzen davon und dem erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoff einer Maus in einer einzigen Dosis von 100 μg/kg verabreicht wurde.
  • Wie vorstehend beschrieben sind die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II), Salze davon und der erfindungsgemäße Apoptose-auslösende Stoff basierend auf deren verschiedenen biologischen Funktionen in einer breiten Auswahl von Gebieten, einschließlich Medizin, Nahrungsmittel und Getränke, sehr brauchbar.
  • Die Verwendung der Verbindung der Formel (I) und/oder des erfindungsgemäß beschriebenen Apoptose-auslösenden Stoffes, der durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder eines Rohmaterials mit 3,6-Anhydrogalactose an seinem reduzierenden Ende unter alkalischen Bedingungen bei einem pH-Wert von über 7 in der Herstellung von Nahrungsmitteln oder Getränken künstlich erzeugt wird, ist auch erfindungsgemäß umfasst.
  • Die Verwendung der Verbindung der Formel (II), die in Nahrungsmitteln oder Getränken erzeugt wird oder als ein Produkt der Reaktion zwischen der Verbindung der Formel (I) und einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung, wie einer SH-Gruppenhaltigen Aminosäure oder eines Derivats davon, wie Cystein oder eines Cystein-haltigen Aminosäurederivats (beispielsweise Glutathion), künstlich erzeugt wird, ist auch erfindungsgemäß umfasst.
  • Die nachstehenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung im Detail, sollen aber nicht so ausgelegt werden, dass sie den Umfang davon beschränken.
  • Beispiel 1: Herstellung von L-Glycero-1,5-epoxy-laβ,6-dihydroxy-cis-hex-3-en-2-on (DGE) und D-Glycero-1,5-epoxy-laβ,6-dihydroxy-cis-hex-3-en-2-on (k-DGE)
    • (1) 2,5 g käuflich erhältlicher Agar (Agar Noble, Difco) wurde in 50 ml 0,1 N HCl suspendiert und die Suspension wurde bei 100°C 13 Minuten erhitzt, um eine Lösung herzustellen. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur und Einstellen des pH-Wertes auf einen etwa neutralen pH-Wert mit NaOH, wurde die Lösung durch einen Cosmonice-Filter filtriert und auf einer Normalphasen-HPLC wie folgt getrennt.
    • Säule: TSKgel Amid-80 (21,5 mm × 300 mm, Toso)
    • Lösungsmittel A: 90%ige wässrige Acetonitrillösung
    • Lösungsmittel B: 50%ige wässrige Acetonitrillösung
    • Flussrate: 5 ml/Minute
    • Elution: linearer Gradient von Lösungsmittel A zu Lösungsmittel B (80 Min.) →
    • Lösungsmittel B (20 Min.)
    • Detektion: Absorption bei 195 nm
    • Aufgetragene Probenmenge: 2 ml
  • Die Peaks bei einer Retentionszeit von 66,7, 78,5 oder 85,5 Minuten wurden gesammelt und einer massenspektrometrischen Analyse unterzogen. Dies zeigte, dass diese Stoffe Agarobiose, Agarotetraose bzw. Agarohexaose darstellen. Die Trennung mittels HPLC wie vorstehend beschrieben wurde achtmal wiederholt. Die so getrennten Fraktionen wurden unter vermindertem Druck bis zur Trockne eingedampft, um 122 mg Agarobiose, 111 mg Agarotetraose bzw. 55 mg Agarohexaose zu erhalten.
    • (2) 12 μl 1 N NaOH wurden zu 600 μl 100 mM wässriger Agarobioselösung, die in Beispiel 1-(1) (Probe 1) erhalten wurde, gegeben, um den pH-Wert auf 11,5 einzustellen. Die Lösung wurde bei 37°C 5 Minuten inkubiert. 12 μl 1 N HCl wurden dann zu der Lösung gegeben, um den pH-Wert auf etwa 5 einzustellen (Probe 2). 1 μl 1 N HCl wurde ferner zu 50 μl der Lösung gegeben, um den pH-Wert auf etwa 2 einzustellen (Probe 3).
  • Die Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen als Apoptose-auslösende Aktivitäten von Proben 1 bis 3 wurden wie folgt gemessen. Demzufolge wies jede der Proben fast gleichwertige Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen auf.
  • Proben 1 bis 3 wurden getrennt durch Filtration sterilisiert und angemessen mit sterilem Wasser verdünnt. 10 μl jeder Verdünnung wurden in ein Well einer 96-Well-Mikrotiterplatte gegeben. 90 μl RPMI 1640-Medium (Nissui) mit 10% fötalem Rinderserum (Gibco), das bei 56°C 30 Minuten behandelt worden war, und 5000 HL-60-Zellen (ATCC CCL-240) wurden dazu gegeben. Die Platte wurde bei 37°C 48 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. Die Zellenmorphologie wurde unter einem optischen Mikroskop untersucht. 10 μl 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (Sigma)-Lösung in Phosphat-gepufferter Salzlösung wurden ferner dazu gegeben, und die Inkubation wurde weitere 4 Stunden fortgeführt. 100 μl 2-Propanol mit 0,04 N HCl wurden zu dem Well gegeben und das Gemisch wurde gründlich gerührt. Die Absorption bei 590 nm wurde gemessen, um das Zellwachstumsniveau zu ermitteln.
    • (3) Proben 1 bis 3 wie beschrieben in Beispiel 1-(2) wurden auf eine Silicagelfolie 60F254 (Merck) platziert und unter Verwendung von Ethanol : 1-Butanol : Wasser = 5 : 5 : 1 entwickelt. Orzinol-Schwefelsäure-Reagenz wurde dann auf die Folie gesprüht, um Punkte nachzuweisen. Demzufolge wurde für Probe 2 oder Probe 3 mit mehreren beobachteten neuen Punkten kein Punkt für Agarobiose beobachtet.
  • 10 μl jeder der Proben 1 und 2 wurden auf Normalphasen-HPLC wie folgt getrennt.
    • Säule: PALPAK Typ S (4,6 × 250 mm, Takara Shuzo)
    • Mobile Phase
    • A: 90%ige wässrige Acetonitrillösung
    • B: 50%ige wässrige Acetonitrillösung
    • Flussrate: 1 ml/Min.
    • Elution: Mobile Phase A (10 Min.) → linearer Gradient von mobiler Phase A zu mobiler Phase B (40 Min.) → mobile Phase B (10 Min.)
    • Detektion: Absorption bei 195 nm
    • Säulentemperatur: 40°C
  • Demzufolge wurde der Peak, der für Agarobiose für Probe 1 beobachtet wurde, nicht für Probe 2 beobachtet, während vielfache neue Peaks beobachtet wurden. Die entsprechenden Peaks der Probe 2 wurden gesammelt, unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft und in Wasser gelöst. Die Antiproliferationsaktivität gegen Tumorzellen wurde für jede Fraktion in der gleichen Art und Weise wie die vorstehend beschriebene gemessen. Demzufolge war die Aktivität in der Fraktion bei der Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten vorhanden.
  • Diese Ergebnisse sind in 1 gezeigt. 1 stellt das Normalphasen-HPLC-Chromatogramm der Probe 2 dar. In 1 stellt die horizontale Achse die Retentionszeit (Minuten) dar und die vertikale Achse stellt die Absorption dar.
    • (4) Alkali-behandelte Zubereitungen wurden entsprechend des wie in Beispiel 1-(2) beschriebenen Verfahrens aus in Beispiel 1-(1) hergestellter Agarotetraose und Agarohexaose sowie aus k-Carabiose, die aus einem Abbauprodukt von k-Carrageen mit 0,1 N Salzsäure hergestellt wurde, hergestellt. Ihre Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen wurden dann wie in Beispiel 1-(2) beschrieben gemessen. Demzufolge wurden Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen für jede der Alkalibehandelten Zubereitungen beobachtet.
  • k-Carabiose wurde wie folgt hergestellt.
  • 2,5 g K-Carrageen (Sigma, C-1263) wurden in 50 ml 0,1 N HCl suspendiert, und die Suspension wurde bei 100°C 16 Minuten erhitzt, um eine Lösung herzustellen. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, auf einen etwa neutralen pH-Wert mit NaOH neutralisiert, durch einen Cosmonice-Filter filtriert und wie in Beispiel 1-(3) beschrieben auf einer Normalphasen-HPLC getrennt. Die K-Carabiose-haltige Fraktion bei einer Elutionszeit von 27,8 Minuten wurde gesammelt und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, um k-Carabiose herzustellen.
    • (5) 2,5 g käuflich erhältlicher Agar (Agar Noble) wurden in 50 ml 0,1 N HCl suspendiert, und die Suspension wurde bei 100°C 13 Minuten erhitzt, um eine Lösung herzustellen. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt. Der pH-Wert wurde mit NaOH auf 12 eingestellt. Die Lösung wurde dann neutralisiert.
  • Die neutralisierte Lösung wurde einer Normalphasen-HPLC wie in Beispiel 1-(3) beschrieben unterzogen. Die entsprechenden Peaks wurden gesammelt, unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft und in Wasser gelöst. Die Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen der entsprechenden Fraktionen wurden wie vorstehend beschrieben gemessen, was die Antiproliferationsaktivität der Fraktion bei einer Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten bestätigt. Außerdem wurde die Bildung apoptotischer Körper beobachtet.
  • Als nächstes wurde die Fraktion bei einer Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten in großen Mengen gesammelt, um eine Probe für die Strukturanalyse herzustellen.
  • Fast-Atom-Bombardment-Massenspektrometrie (FAB-MS) erfolgte dann unter Verwendung eines DX302-Massenspektrometers (Nippon Denshi). Des Weiteren wurde die Probe in schwerem Dimethylsulfoxid gelöst und einer Strukturanalyse durch Kernspinresonanz (NMR) unterzogen. Die Ergebnisse sind nachstehend gezeigt.
  • Das Massenspektrum der Fraktion bei einer Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten ist in 2 dargestellt. Das 1H-NMR-Spektrum der Fraktion bei einer Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten ist in 3 dargestellt. In 2 stellt die horizontale Achse den m/z-Wert dar, und die vertikale Achse stellt die relative Intensität (%) dar. In 3 stellt die horizontale Achse den chemischen Verschiebungswert (ppm) dar, und die vertikale Achse stellt die Signalintensität dar.
    • FAB-MS: m/z 145 [M+H]+
  • Die Probe wurde in Dimethylsulfoxid gelöst. Glycerin wurde als Matrix für die Messungen verwendet.
    1H-NMR:
    δ 3,50 (1H, m, 6-H), 3,59 (1H, m, 6-H), 4,52 (1H, m, 5-H), 4,95 (1H, d, J=5,0 Hz, 1-H), 5,02 (1H, t, J=6,0 Hz, H von 6-OH), 6,05 (1H, dd, J=2,5, 10,5 Hz, 3-H), 7,20 (1H, dd, J=1,5, 10,5 Hz, 4-H), 7,35 (1H, d, J=5,0 Hz, H von 1-OH)
  • Die Ergebnisse werden unter der Annahme wiedergegeben, dass der chemische Verschiebungswert des Restprotons des schweren Dimethylsulfoxids 2,49 ppm beträgt.
  • Die Zahlen zur Signalbestimmung in 1H-NMR sind wie in der nachstehenden Formel angegeben.
  • Figure 00420001
  • Aus diesen Ergebnissen wurde deutlich, dass die Fraktion bei einer Retentionszeit von 4,05 bis 4,16 Minuten L-Glycero-1,5-epoxy-laβ,6-dihydroxy-cis-hex-3-en-2-on (nachstehend einfach als DGE bezeichnet) enthielt.
  • In ähnlicher Weise wurde k-Carabiose mit Alkali wie vorstehend in diesem Beispiel beschrieben behandelt. D-Glycero-1,5-epoxy-laβ,6-dihydroxy-cis-hex-3-en-2-on (hierin nachstehend als k-DGE bezeichnet), das ein Apoptose-auslösender Stoff ist, wurde aus der Alkali-behandelten Zubereitung in der gleichen Art und Weise wie die oben beschriebene aufgereinigt.
    • (6) 45 g Agarpulver (Nacalai Tesque) wurden in 400 ml destilliertem Wasser suspendiert. 4,1 ml 11 N HCl und destilliertes Wasser wurden auf 450 ml zu der Suspension gegeben. Die sich ergebende saure Suspension wurde bei 90°C 35 Minuten erhitzt. Die erhitzte saure Lösung wurde mit 10 N NaOH neutralisiert. 2,7 ml 1 N NaOH wurden ferner dazu gegeben. Die Lösung wurde unter alkalischen Bedingungen bei 37°C 15 Minuten inkubiert. Die Alkali-behandelte Lösung wurde mit 1 N HCl neutralisiert und dann auf 150 ml unter Verwendung eines Verdampfers konzentriert. Das Konzentrat wurde mit einem gleichgroßen Volumen von Ethylacetat 10-mal extrahiert. Die Ethylacetatphasen der 10 Extraktionsrunden wurden gesammelt, unter Verwendung eines Verdampfers auf 2 ml konzentriert und dann in 20 ml Chloroform: Methanol = 9 : 1 gelöst. Die sich ergebende Lösung wurde durch Silicasäulenchromatographie unter den nachstehenden Bedingungen getrennt: Säulenvolumen: 250 ml; Flussdruck: 0,2 Kgf/cm2; Lösungsmittel der mobilen Phase: Chloroform : Methanol = 9 : 1; und Fraktionsvolumen: 8 ml. Ein Teil jeder Fraktion wurde mittels Dünnschichtchromatographie (entwickelt mit Chloroform: Me thanol = 9 : 1) analysiert. Fraktionen 52 bis 78, die nur Punkte mit RF-Werten von etwa 0,25 enthalten, wurden als DGE-haltige Fraktionen gesammelt, die unter Verwendung eines Verdampfers auf 2 ml konzentriert wurden. Das Konzentrat wurde abermals der Silicasäulenchromatographie wie vorstehend beschrieben unterzogen. Fraktionen 64 bis 96 wurden als DGE-haltige Fraktionen gesammelt, unter Verwendung eines Verdampfers konzentriert und in 8 ml destilliertem Wasser gelöst. Die wässrige DGE-Lösung wurde lyophilisiert, um 113 mg der DGE-Zubereitung zu erhalten.
  • Beispiel 2: Apoptoseauslösungstest
    • (1) HL-60-Zellen wurden bei 37°C in RPMI 1640-Medium (Bio Whittaker) mit 10% fötalem Rinderserum (JRH), das bei 56°C 30 Minuten behandelt worden war, kultiviert, und in RPMI 1640-Medium bei einer Konzentration von 2,5 × 105 Zellen pro 4,5 ml suspendiert.
  • 500 μl einer 125 μM, 250 μM, 500 μM, 1 mM, 2 mM oder 4 mM wässrigen DGE-Lösung wurden zu 4,5 ml der Suspension gegeben. Die Gemische wurden bei 37°C 24 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert.
  • Die kultivierten Zellen wurden unter einem optischen Mikroskop untersucht. Kondensation der Kerne, Schrumpfen der Zellen und Bildung von apoptotischen Körpern wurden für die Zellen beobachtet, die in Gegenwart von DGE bei einer Endkonzentration von 50 μM oder mehr kultiviert worden waren. Für die Kontrollzellen mit der Zugabe von 500 μl Salzlösung wurde kein solches Phänomen beobachtet.
  • Messung von apoptotischen Zellen mittels FACScan, wie in Saibo Kogaku, Bessatsu (Cell Technology, Suppl.) Jikken Protocol-Series: Apoptosis Jikken Protocol (Experimental Protocol Series: Experimental Protocols for Apoptosis) (Shujun-sha) Seiten 129-130 beschrieben und Analyse der DNA-Fragmentierung, wie in Bio Manual UP Series: Saishin Apoptosis Jikken-ho (Bio Manual UP Series: Current Experimental Methods for Apoptosis) (Yodo-sha) Seiten 61-63 beschrieben, erfolgten unter Verwendung von Zellen, die 24 oder 48 Stunden in der gleichen Art und Weise wie die vorstehend beschriebene kultiviert worden waren. Demzufolge wurden apoptotische Zellen für Zellen beobachtet, die in Gegenwart von DGE bei einer Endkonzentration von 50 μM oder mehr kultiviert worden waren. DNA-Fragmentierung wurde für Zellen beobachtet, die in Gegenwart von DGE bei einer Konzentration von 50 oder 100 μM kultiviert worden waren. Für die Kontrollzellen, die mit Zugabe von 500 μl Salzlösung kultiviert worden waren, wurde kein solches Phänomen beobachtet.
    • (2) Ein Teil der wie in Beispiel 2-(1) für 24 Stunden kultivierten Zellen wurde mit 0,4% Trypanblau angefärbt und unter einem optischen Mikroskop untersucht. Die Anzahl der lebenden Zellen, die nicht angefärbt wurden, und die Anzahl der toten Zellen, die blau angefärbt wurden, wurden gezählt. Die DGE-Konzentration, aus der sich eine Lebensfähigkeit von 50% [Lebensfähigkeit50 (μM)] ergibt, wurde zu 81,7 μM bestimmt. Wie vorstehend beschrieben zeigte DGE eine Antiproliferationsaktivität gegen Tumorzellen aufgrund der Apoptose-auslösenden Aktivität. Außerdem zeigte k-DGE eine ähnliche Aktivität.
  • Beispiel 3: Test der Hemmung einer Lipidperoxidradikalproduktion
  • Staphylococcus aureus 3A (National Collection of Type Culture, NCTC 8319) wurde in 5 ml Hirn-Herz-Bouillon (Difco, 0037-17-8) angeimpft und bei 37°C über Nacht kultiviert. Die Zellen wurden durch Zentrifugation gesammelt, mit Phosphat-gepufferter Salzlösung dreimal gewaschen und dann bei einer Konzentration von 1 × 107 Kolonie-formenden Einheiten/ml in Phosphat-gepufferter Salzlösung suspendiert. Ein Gemisch aus 100 μl der Zellsuspension, 100 μl der wässrigen DGE-Lösung bei 10 oder 100 mM, 100 μl 1 mg/ml wässriger Methämoglobinlösung (Sigma, M9250), 600 μl Phosphat-gepufferter Salzlösung und 100 μl 50 mM wässriger tert-Butylhydroperoxidlösung (Katayama Kagaku, 03-4 990) reagierte bei 37°C 30 Minuten. 1 ml 2 × NMP-Medium wurde zu dem Reaktionsgemisch gegeben, um die Reaktion zu stoppen. 2 × NMP wurde wie folgt hergestellt: 8 g Nutrient Broth (Difco, 0003-01-6), 5 g Trypton (Difco, 0123-17-3), 5 g NaCl, 10 g Mannitol (Nacalai Tesque, 213-03) und 0,035 g Phenolrot (Nacalai Tesque, 268-07) wurden in destilliertem Wasser gelöst, um ein Volumen von 500 ml zu erhalten, der pH-Wert wurde auf 7,4 mit NaOH eingestellt, und das Gemisch wurde dann durch Filtration sterilisiert, um 2 × NMP-Medium zu erhalten. Das sich ergebende Gemisch wurde jeweils dreifach mit NMP-Medium (hergestellt durch zweifaches Verdünnen des 2 × NMP-Mediums mit sterilisiertem Wasser) verdünnt, um 12 serielle Verdünnungen herzustellen. 160 μl jeder Verdünnung wurden in jedes Well einer 96-Well-Mikrotiterplatte gegeben. Die Platte wurde bei 37°C über Nacht inkubiert. Die Farbe des Mediums wurde mit dem unbewaffneten Auge beobachtet. Die Probe, aus der sich die Farbveränderung des Mediums in dem Well von rot nach gelb als Folge von dem Bakterienwachstum ergeben hat, wurde dahingehend identifiziert, dass sie eine Aktivität zum Hemmen von Lipidperoxidradikalproduktion aufwies.
  • Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt. In Tabelle 1 stellt + die Probe, für die das Bakterienwachstum in dem Well beobachtet wurde, dar, und – stellt die Probe, für die das Bakterienwachstum in dem Well nicht beobachtet wurde, dar. Die Zahl in der oberen Zeile in der Tabelle stellt die DGE-Konzentration in dem Reaktionsgemisch dar, das mit tert-Butylhydroperoxid und den Zellen bei 37°C 30 Minuten reagierte. Tabelle 1
    DGE 1 mM 10 mM
    Bakterienwachstum – +
  • Wie diese Ergebnisse zeigen, zeigte DGE eine Aktivität zum Hemmen der Lipidperoxidradikalproduktion. Außerdem wurden wie nachstehend beschrieben ähnliche Aktivitäten für k-DGE und DGE-GSH beobachtet.
  • Beispiel 4: Test der Hemmung einer NO-Produktion
    • (1) RAW264.7-Zellen (ATCC TIB 71) wurden in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Bio Whittaker, 12-917F) ohne Phenolrot mit 10% fötalem Rinderserum (Gibco) und 2 mM L-Glutamin (Life Technologies Oriental, 25030-149) bei einer Konzentration von 3 × 105 Zellen/ml suspendiert. 500 μl der Suspension wurden zu jedem Well einer 48-Well-Mikrotiterplatte gegeben und die Platte wurde bei 37°C 12 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. 10 μl einer wässrigen Lösung mit 25 μg/ml Lipopolysaccharid (LPS, Sigma L-2012) und 500 U/ml Interferon-γ (IFN-γ, vertrieben von Cosmobio, GZM-MG-IFN) und 10 μl der wässrigen DGE-Lösung bei 250 oder 500 μM wurden zu dem Well gegeben. Die Platte wurde weitere 12 Stunden inkubiert. Die NO2-Konzentration, die durch Oxidation von NO in dem Medium produziert worden war, wurde dann gemessen. Es wurden als Kontrollgruppen eine Gruppe, zu der LPS oder IFN-γ nicht gegeben worden war, und eine Gruppe, zu der DGE nicht gegeben worden war, bereitgestellt.
  • Nach der Kultivierung wurden 100 μl 4%iges Grieß-Reagenz (Sigma, G4410) zu 100 μl des Mediums gegeben, und dem Gemisch wurde ermöglicht, 15 Minuten bei Raumtemperatur zu stehen. Dann wurde die Absorption bei 490 nm gemessen. Die NO2-Konzentration in dem Medium wurde unter Bezugnahme auf eine Kalibrierungskurve berechnet, die durch Verwenden von NaNO2 bei einer festgelegten Konzentration, verdünnt in dem gleichen Medium wie dem vorstehend beschriebenen, hergestellt wurde. Alle Messungen erfolgten in dreifacher Ausführung.
  • Demzufolge hemmte DGE Dosis-abhängig die durch LPS und IFN-γ ausgelöste NO-Produktion. Die Ergebnisse sind in 4 gezeigt. 4 stellt die NO2 –-Konzentration in dem Medium, das unter den entsprechenden Kulturbedingungen in Gegenwart von DGE inkubiert wurde, dar. In 4 stellt die horizontale Achse die Kulturbedingungen dar, und die vertikale Achse stellt die NO2 –-Konzentration (μM) dar.
  • Die RNS wurde aus RAW264.7-Zellen, die für 4, 6 oder 8 Stunden unter ähnlichen Bedingungen wie denjenigen der vorstehend beschriebenen kultiviert wurden, präpariert. Die Menge der für induzierbare NO-Synthase [iNOS; Biochem. Biophys. Res. Commun., 215:148-153 (1995)] kodierenden mRNS, die in der RNS enthalten ist, wurde durch das RT-PCR-Verfahren bestimmt. Demzufolge wurde für die Kontrollzellen, zu denen die wässrige DGE-Lösung nicht gegeben worden war, eine Vervielfältigung eines DNS-Fragments der iNOS-mRNA beobachtet. Andererseits wurde für die Zellen, zu denen die wässrige DGE-Lösung gegeben worden war, keine Vervielfältigung des Fragments beobachtet. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Hemmung der NO-Produktion durch DGE durch die Hemmung der iNOS-Transkription verursacht wird.
    • (2) RAW264.7-Zellen wurden in Dulbecco's Modified Eagle's Medium ohne Phenolrot mit 10% fötalem Rinderserum und 2 mM L-Glutamin bei einer Konzentration von 3 × 105 Zellen/ml suspendiert. 500 μl der Suspension wurden in jedes Well einer 48-Well-Mikrotiterplatte gegeben. Die Platte wurde bei 37°C 6 Stunden in der Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. 10 μl einer wässrigen Lösung, die durch Lösen von DGE bei einer Konzentration von 0,5 mM in Wasser und Sterilisieren davon durch Filtration hergestellt worden war, wurden zu dem Well gegeben. Die Platte wurde weitere 0,5 oder 5 Stunden inkubiert. 10 μl einer wässrigen Lösung mit 5 μg/m1 LPS und 2000 U/ml IFN-γ wurden dann zu dem Well gegeben. Die Platte wurde weitere 12 Stunden inkubiert. Die durch Oxidation von NO erzeugte NO2 –-Konzen tration in dem Medium wurde gemessen. Es wurden als Kontrollgruppen eine Gruppe, zu der LPS oder IFN-γ nicht gegeben worden war, und eine Gruppe, zu der DGE nicht gegeben worden war, bereitgestellt.
  • Nach der Kultivierung wurden 100 μl 4%iges Grieß-Reagenz zu 100 μl des Kulturüberstandes gegeben, und dem Gemisch wurde ermöglicht, 15 Minuten bei Raumtemperatur zu stehen. Dann wurde die Absorption bei 490 nm gemessen. Die NO2 –-Konzentration in dem Medium wurde unter Bezugnahme auf eine Kalibrierungskurve berechnet, die durch Verwenden von NaNO2 bei einer festgelegten Konzentration gelöst in dem gleichen Medium wie dem vorstehend beschriebenen hergestellt wurde.
  • Alle Messungen erfolgten in dreifacher Ausführung.
  • Demzufolge wurde eine stärkere Hemmung der NO-Produktion für die Gruppe beobachtet, die vor der Zugabe von LPS und IFN-γ 5 Stunden in Gegenwart von DGE kultiviert worden war, im Vergleich zu der für 0,5 Stunden kultivierten Gruppe.
  • Die Ergebnisse sind in 5 gezeigt. 5 stellt die NO2 –-Konzentration in dem Medium dar, die durch Inkubieren unter verschiedenen Kulturbedingungen, in denen DGE während der Vorkultur zugegeben worden war, erhalten wurde. In 5 stellt die horizontale Achse die Kulturbedingungen dar, und die vertikale Achse stellt die NO2 –-Konzentration (μM) dar.
  • Wie vorstehend beschrieben zeigte DGE eine Aktivität, die NO-Produktion zu hemmen. Außerdem zeigte k-DGE eine ähnliche Aktivität.
  • Beispiel 5: Test für antimikrobielle Aktivität
  • Die antimikrobiellen Aktivitäten von DGE gegen Escherichia coli W3110 (Bakterium 1), Salmonella typhimurium LT2 (Bakterium 2), Bacillus subtilis IFO3021 (Bakterium 3), Pseudomonas aeruginosa IFO3080 (Bakterium 4) und Streptococcus mutans GS5 (Bakterium 5) wurden wie folgt untersucht.
  • Die Bakterien 1 bis 4 wurden über Nacht in L-Broth-Medium kultiviert. Die Kulturen wurden basierend auf der Trübung auf eine Konzentration von etwa 2 × 105 Zellen/180 μl mit sensitivem Bouillon-Medium (Nissui) verdünnt. Das Bakterium 5 wurde über Nacht in Hirn-Herz-Bouillon kultiviert. Die Kultur wurde basierend auf der Trübung auf eine Konzentration von etwa 2 × 105 Zellen/180 μl mit Hirn-Herz-Bouillon verdünnt. 180 μl jeder bakteriellen Verdünnung wurden in jedes Well einer 96-Well-Mikrotiterplatte gegeben. Andererseits wurden die entsprechenden bakteriellen Verdünnungen weiter verdünnt und auf Platten aus L-Broth-Medium oder Hirn-Herz-Bouillon ausplattiert. Die Platten wurden über Nacht bei 37°C inkubiert. Die sich daraus ergebenden Kolonien wurden gezählt, um die Anfangsanzahl der lebenden Zellen zu ermitteln.
  • Eine 14,4 mg/ml DGE-Lösung wurde jeweils zweifach verdünnt, um serielle Verdünnungen herzustellen. 20 μl jeder der Verdünnungen wurde in das Well, in das die bakterielle Verdünnung gegeben wurde, gegeben. Die Zellen wurden bei 37°C 24 Stunden ohne Schütteln kultiviert. Nach der Kultivierung wurde die Trübung jeder Kultur gemessen. Die Konzentration der Probe in dem Well, die zu geringerer Trübung führte als die einer Kontrolle, zu der Salzlösung gegeben worden war, wurde als die minimale Wachstums-hemmende Konzentration definiert.
  • Des Weiteren wurde die Kultur aus dem Well, für die Wachstum von bakteriellen Zellen nicht beobachtet wurde, auf Platten ausplattiert. Nachdem die Platten über Nacht bei 37°C inkubiert worden waren, wurde die Kolonieanzahl gezählt, um die Anzahl an lebenden Zellen zu ermitteln. Die Konzentration der Probe in der Kultur, die zu einer geringeren Anzahl an lebenden Zellen nach 24-stündiger Kultivierung ohne Schütteln ab der Zugabe der Probe führte, verglichen mit der Anfangsanzahl an lebenden Zellen, die vorab gemessen worden war, wurde als die minimale bakteriozide Konzentration definiert. Die minimalen Wachstums-hemmenden Konzentrationen und die minimalen bakterioziden Konzentrationen von DGE wurden für die Bakterien 1-5 wie in Tabelle 2 gezeigt ermittelt. Tabelle 2
    Minimale Wachstumshemmende Konzentration (μg/ml) Minimale bakteriozide Konzentration (μg/ml)
    Bakterium 1 360 720
    Bakterium 2 360 720
    Bakterium 3 360 720
    Bakterium 4 360 720
    Bakterium 5 90 180
  • Wie vorstehend beschrieben zeigte DGE eine antimikrobielle Aktivität. Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten.
  • Beispiel 6: Test für antimutagene Aktivität
  • Eine antimutagene Aktivität wurde entsprechend eines Verfahrens zum Nachweisen eines Umweltmutagens durch den umu-Test ermittelt, der Mutagenität unter Bezugnahme auf die β-Galactosidase-Aktivität bestimmen kann (Mutation Research, 147: 219 (1985)). Kurz gesagt wurden 25 μl Mutagen [Mitomycin C (ein DNA-Vernetzer) bei 10 μg/ml oder 4-Nitrochinolin-1-oxid (NQO, ein DNA-Methylierungsmittel) bei 7 μg/ml] zu 50 μl DGE-Lösung bei unterschiedlichen Konzentrationen (1,0, 5,0, 10 oder 15 mM) gegeben. Eine Salmonella typhimulium TA1535/pSK1002-Kultur in TGA-Medium bei einem OD600-Wert von 0,12 wurde zu dem Gemisch gegeben, um ein Endvolumen von 1,5 ml zu erhalten. Das Gemisch wurde dann bei 37°C 2 Stunden unter Schütteln inkubiert. 200 μl der Kultur wurden verwendet, um die β-Galactosidase-Aktivität entsprechend des Verfahrens nach Miller [Experiments in molecular genetics, Seite 352 (1972)] zu messen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3. β-Galactosidase-Aktivität
    Endkonzentration an DGE (mM) 0 0,03 0,17 0,33 0,5
    Mitomycin C 611 590 570 451 383
    NQO 1437 1376 1212 1038 926
  • Wie aus der Tabelle zu sehen, zeigte DGE bei einer Endkonzentration von 0,5 mM eine antimutagene Aktivität von 37% gegen Mitomycin C, einem DNA-Vernetzer, bzw. 36% gegen NQO, einem Methylierungsreagenz. Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten.
  • Beispiel 7: Test für karzinostatische Aktivität
    • (1) Agarpulver (Wako Pure Chemical Industries) wurde zu 50 mM Zitronensäurelösung gegeben, um eine Endkonzentration von 3% zu erreichen. Das Gemisch wurde bei 95°C 160 Minuten erhitzt, mit Alkali bei pH 12 behandelt und dann bei Verwendung neutralisiert, um eine Testlösung für einen Test für karzinostatische Aktivität herzustellen.
  • Männliche Nacktmäuse (SPF/VAFBalb/cAnNCrj-nu, 4 Wochen alt) wurden von Nippon Charles River bezogen und für eine Woche vorgezüchtet. Die humane Darmkrebszelllinie HTC116 (ATCC CCL-247) wurde den Mäusen bei 1,5 × 106 Zellen/Maus subkutan transplantiert.
  • Zwei Wochen nach der Transplantation der Darmkrebszelllinie wurde den Mäusen die Testlösung für den karzinostatischen Aktivitätstest, die direkt vor Gebrauch auf pH 6,5 eingestellt wurde, frei zugänglich als Trinkwasser für 5 Tage pro Woche verabreicht. Das durchschnittliche Volumen der täglichen Einnahme der Lösung pro Maus betrug 3,5 ml. Des Weiteren wurde den Mäusen MF von Oriental Yeast frei zugänglich als Futter verabreicht.
  • Vier Wochen nach dem Beginn der Verabreichung der Testlösung wurde ein solider Tumor von jeder Maus, die die Testlösung erhielt, entfernt, und das Gewicht des soliden Tumors wurde mit dem von einer Kontrollmaus, der normales Wasser verab reicht wurde, verglichen. Dieser Test erfolgte unter Verwendung von 10 Mäusen pro Gruppe.
  • Demzufolge wurde eine signifikante Hemmung des Krebswachstums in der Gruppe beobachtet, die die Testlösung für den karzinostatischen Aktivitätstest oral erhielt.
    • (2) Ehrlich-Karzinomzellen wurden 18 weiblichen ddY-Mäusen (5 Wochen alt, Gewicht etwa 25 g) intraperitoneal verabreicht (1,2 × 106 Zellen/Maus). Die Beobachtung wurde für 30 Tage fortgeführt. Die durchschnittliche Anzahl von Tagen des Überlebens, die Verlängerungsrate und die 30-Tagesüberlebensanzahl wurden dann berechnet. Die Mäuse wurden in drei Gruppen eingeteilt, die jeweils aus 6 Mäusen bestanden. Eine stellte eine Kontrollgruppe dar, und die anderen beiden Gruppen erhielten DGE bei 2 mg/kg bzw. 20 mg/kg. DGE wurde beginnend mit dem Tag nach der Krebsverabreichung für 4 Tage intraperitoneal verabreicht.
  • Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt. Die durchschnittliche Anzahl an Tagen des Überlebens für die Kontrollgruppe betrug 14,3 Tage. Die 30 Tage-Überlebensanzahlen betrugen 1 und 3 für die Gruppen, die DGE bei 2 mg/kg bzw. 20 mg/kg erhielten. Für die Gruppen, die DGE bei 2 mg/kg bzw. 20 mg/kg erhielten, betrug die durchschnittliche Anzahl der Tage des Überlebens 23,7 Tage bzw. 28,0 Tage und die Verlängerungsrate betrug 141% oder mehr bzw. 195% oder mehr. Folglich wurde eine signifikante Verlängerungswirkung beobachtet. Tabelle 4
    Durchschnittliche Anzahl der Tage des Überlebens (Tage) Verlängerungsrate (%) 30-Tage-Überlebensanzahl
    Kontrolle 14,3 100 0
    DGE bei 2 mg/kg 23,7 > 141 1
    DGE bei 20 28,0 > 195 3
    mg/kg
  • Wie vorstehend beschrieben zeigte DGE eine karzinostatische Aktivität. Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten.
  • Beispiel 8: Test für Melanogenesehemmung
  • Mausmelanom B16BL6-Zellen, die in RPMI 1640-Medium mit 10% fötalem Rinderserum suspendiert sind, wurden in eine 6-Wellplatte bei 5 × 104 Zellen/Well/2 ml Medium verteilt, und die Platte wurde bei 37°C inkubiert. Am zweiten Tag wurden 100 μl einer DGE-Lösung (2 mg/ml bis 0,2 mg/ml) dazu zugegeben. Am siebten Tag wurde das Medium gewechselt und gleichzeitig wurden 100 μl der DGE-Lösung (2 mg/ml bis 0,2 mg/ml) dazu gegeben. Am achten Tag wurden die Zellen geerntet. Nachdem DNS, RNS und Protein verdaut worden waren, wurde die Absorption bei 400 nm gemessen, um eine Aktivität, Melanogenese zu hemmen, zu ermitteln.
  • Kurz gesagt wurden, nachdem das Medium durch Absaugung entfernt worden war, zu jedem Well 0,3 ml einer 0,25%igen Trypsinlösung, gelöst in 20 mM EDTA, gegeben, und die Platte wurde bei 37°C 10 Minuten inkubiert. 2 ml frisches Medium wurden dann zu dem Well gegeben, und die Zellen wurden suspendiert. Die Suspension wurde in ein Röhrchen überführt. Nachdem das Medium durch Zentrifugation entfernt worden war, wurden die Zellen in 2 ml PBS suspendiert und abermals zentrifugiert. Nachdem der Überstand entfernt worden war, wurden 30 μl 50 mM Natriumacetatpuffer (pH 5,0) mit 5 mM Manganchlorid und 1 μl 70000 U/ml DNase I (Takara Shuzo) zu den Zellen gegeben. Das Gemisch wurde gründlich gemischt und dann bei 37°C 2 Stunden inkubiert, um DNS zu verdauen. 1 μl 10 mg/ml Ribonuklease A (Sigma) wurde dann zu dem Gemisch gegeben, und das sich ergebende Gemisch wurde bei 50°C 1 Stunde inkubiert, um RNS zu verdauen. Schließlich wurden 100 mM Tris-Hydrochloridpuffer (pH 7,8) mit 100 μg/ml Proteinase K (Sigma), 0,1% Triton X und 10 mM EDTA dazu gegeben, um ein Endvolumen von 200 μl für 2 × 106 Zellen zu erhalten. Nachdem das Gemisch bei 37°C 16 Stunden inkubiert worden war, wurde die Absorption bei 400 nm gemessen.
  • Demzufolge wurde für DGE eine Aktivität, Melanogenese zu hemmen, beobachtet, was die Bleichwirkung davon bestätigt. Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten.
  • Beispiel 9: Test für α-Glucosidase-Hemmung
    • (1) Die Aktivität von DGE, α-Glucosidasen zu hemmen, wurde durch Umsetzen von p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranosid, ein chromogenes Substrat für α-Glucosidase, mit α-Glucosidase aus Hefe und kolorimetrisches Quantifizieren von 4-Nitrophenol, das durch Hydrolyse freigesetzt wird, gemessen. Kurz gesagt wurden 10 μl α-Glucosidaselösung [40 mU/ml, aus S. cerevisiae stammend, Sigma, gelöst in 10 mM Phosphatpuffer (pH 7,2 bei 37°C)] und 10 μl einer Lösung, die eine in 10 mM Phosphatpuffer (pH 7,2 bei 37°C) gelöste Testprobe enthält, gemischt. 80 μl einer 1,5 mg/ml Substratlösung [Sigma, gelöst in 10 mM Phosphatpuffer (pH 7,2 bei 37°C)] wurden dazu gegeben, um die Reaktion zu starten. Nach dem Reagieren bei 37°C für 40 Minuten, wurde die Absorption bei 410 nm gemessen (Shimadzu uv2200). Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 gezeigt. Die Restaktivität darin wurde berechnet, wobei die Aktivität ohne die Testprobe als 100% definiert wurde.
  • Tabelle 5
    Zugegebene Menge an DGE (μM) Absorption (OD 410 nm) Restaktivität (%)
    0 0,444 100
    5 0,433 98
    50 0,401 90
    500 0,221 50
    1000 0,114 26
    5000 0,083 19
  • Wie aus diesen Ergebnissen zu sehen, zeigt DGE die Aktivität, α-Glucosidase zu hemmen. Die DGE-Konzentration, die α-Glucosidase-Aktivität um 50% inhibiert (IC50), betrug 500 μM.
    • (2) Eine Rohenzymzubereitung von α-Glucosidase aus Dünndarmschleimhaut der Ratte [hergestellt gemäß des Verfahrens wie beschrieben in Arne Dahlgvist, Anal. Biochem., 7:18-25 (1964)] wurde verwendet, um die Aktivität von DGE, α-Glucosidase zu hemmen, wie folgt zu messen.
  • Für die enzymatische Reaktion wurden 80 μl einer Lösung aus Saccharose, Maltose, Treharose oder lösliche Stärke als ein Substrat in 10 mM Phosphatpuffer (pH 7,0) mit einer Endkonzentration von 100 mM (0,5% für lösliche Stärke) zu 10 μl einer Testprobenlösung gegeben, die angemessen in dem gleichen Puffer verdünnt worden war. 10 μl der Rohenzymlösung, die aus Rattendünndarm hergestellt worden war, wurde dazu gegeben. Das Gemisch reagierte bei 37°C für 20 Minuten.
  • Die enzymatische Reaktion wurde durch Zugeben von 3 ml eines Reagenz zur Glucosemessung (Wako Pure Chemical Industries) zu dem Reaktionsgemisch, Reagieren bei 37°C für 5 Minuten und dann Messen der Absorption bei 505 nm als der Glucosegehalt des Gemisches bestimmt.
  • Die hemmende Aktivität von DGE auf den Verdau eines jeden Substrates durch α-Glykosidase wurde unter Verwendung von DGE bei vier verschiedenen Konzentrationen gemäß des vorstehend beschriebenen Verfahrens gemessen. Die Aktivität, α-Glykosidase zu hemmen, wurde als eine relative Aktivität (%) ausgedrückt, wobei die Aktivität der Kontrolle ohne DGE als 100% definiert wurde.
  • Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 gezeigt. Tabelle 6
    DGE (mM) 0,2 0,5 1,0 2,0
    Saccharose 91 92 83 71
    Maltose 96 97 100 96
    Treharose 98 96 99 100
    Lösliche Stärke 100 95 91 92
  • Die Hemmungskonstante (Ki) von DGE für Saccharose, wie sie mittels Dixon-Diagramm ermittelt wurde, betrug 6,0 mM.
  • Wenn Saccharose als ein Substrat verwendet wurde, zeigte DGE eine höhere Aktivität, α-Glykosidase zu hemmen, als die, die beobachtet wurde, wenn Maltose oder dergleichen verwendet wurde. Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten, α-Glykosidase zu hemmen.
  • Beispiel 10: Test für antirheumatische Aktivität
  • DSEK-Zellen sind eine Fibroblastenzelllinie, die aus einer Synovialis eines Patienten mit chronischem Rheumatismus erzeugt wurde, und wird in dem Department of Second Internal Medicine, Integrated Medical Center, Saitama College of Medicine als ein in vitro-Rheumamodell gehalten. DSEK-Zellen wurden in Iscov-MEM-Medium (IMDM: Gibco-BRL) mit 10% FBS (Bio Whittaker) bei 37°C in Gegenwart von 5% CO2 zur Konfluenz kultiviert. Die Zellen wurden in dem gleichen Medium bei einer Konzentration von 3 × 104 Zellen/ml unter Verwendung einer Trypsin-EDTA-Lösung (Bio Whittaker) suspendiert. 200 μl der Suspension wurden in jedes Well einer 96-Well-Mikrotiterplatte (Falcon) verteilt. Nach Kultivieren für 5 bis 7 Tage, dem Zeitpunkt, an dem die Zellen bis 80% Konfluenz wuchsen, wurde das Medium mit 200 μl des vorstehend beschriebenen Mediums mit DGE bei einer Konzentration von 25, 50, 75, 100, 200 oder 400 μM ausgetauscht.
  • Nach Inkubieren für 24 oder 72 Stunden, wurden 10 μl Premix WST-1 (Takara Shuzo, MK400) zu dem Well gegeben. Das Gemisch reagierte bei 37°C für 3,5 Stunden.
  • Der Zellwachstumsgrad wurde durch einen Wert ausgedrückt, der durch Subtraktion der Absorption bei 650 nm (A650) von der Absorption bei 450 nm (A450) erhalten wurde.
  • Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 gezeigt. Tabelle 7
    DGE-Konzentration (μM) Kultivierungsdauer
    24 Stunden 72 Stunden
    Zellwachstumsgrad) (A450-650)
    0 3,98 3,94
    25 3,86 3,33
    50 3,24 3,25
    100 2,88 2,05
    200 1,26 0,48
    400 0,71 0,35
  • Die Konzentrationen, aus denen sich die Hemmung des Wachstums der Hälfte der Zellen (IC50) ergeben, wie sie basierend auf den A450-650-Daten ermittelt werden, betrugen 207 μM bei 24 Stunden bzw. 112 μM bei 72 Stunden.
  • Wie vorstehend beschrieben wurde in dem in vitro-Rheumamodell (DSEK-Zellen) das Wachstum der rheumatoiden Zellen in den Wells, zu denen DGE gegeben worden war, stark gehemmt im Vergleich zu den Kontrollwells, zu denen PBS gegeben worden war. Des Weiteren wurde erkannt, dass die Verbindung nicht lediglich ihre wachstumshemmende Aktivität beibehält, sondern auch dazu neigt, die Aktivität über die Zeit zu steigern.
  • Diese Ergebnisse zeigen, dass DGE eine starke antirheumatische Aktivität aufweist. Deshalb ist zu erwarten, dass DGE als Therapeutika und gesunde Nahrungsmittel, die wirksam gegen chronischen Rheumatismus sind, entwickelt werden würde. Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten.
  • 150 μl/Well Kulturüberstand wurden aus DSEK-Zellkultur bei 24 oder 72 Stunden entnommen. Die Wirkungen von DGE auf die Produktion (Expression) von Cytokinen (humanes TGF-β, humanes FGF-β, humanes IL-1α und humanes IL-10) durch Zellen wurde unter Verwendung von ELISA-Kits, die spezifisch für die entsprechenden Cytokine sind (von Intergen für humanes FGF-β und humanes IL-10, und von Promega für humanes IL-1α und humanes TGF-β), ermittelt.
  • Demzufolge zeigte DGE Aktivitäten, die Produktion von humanem IL-1α und humanem FGF-β zu hemmen sowie die Produktion von humanem IL-10 und humanem TGF-β zu steigern.
  • Beispiel 11: Test für Hemmung der Prostaglandin E2-Produktion
  • RAW264.7-Zellen wurden in Dulbecco's Modified Eagle's Medium mit 10% fötalem Rinderserum bei einer Konzentration von 3 × 105 Zellen/ml suspendiert. 500 μl der Suspension wurden zu jedem Well einer 48-Well-Mikrotiterplatte gegeben und die Platte wurde bei 37°C 6 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. 10 μl einer wässrigen Lösung, die durch Lösen von DGE bei einer Konzentration von 0,5 mM in Wasser und Sterilisieren davon durch Filtration hergestellt wird, wurden zu dem Well gegeben. Die Platte wurde weitere 0,5 oder 5 Stunden inkubiert. 10 μl 50 μg/ml wässriger LPS-Lösung wurden dann zu dem Well gegeben. Nachdem die Platte weitere 12 Stunden inkubiert worden war, wurde die Menge an Prostaglandin E2 gemessen. Es wurden als Kontrollgruppen eine Gruppe, zu der LPS nicht gegeben worden war, und eine Gruppe, zu der DGE nicht gegeben worden war, bereitgestellt.
  • Nach der Kultivierung wurde die Menge an Prostaglandin E2 im Kulturüberstand unter Verwendung eines Prostaglandin E2-ELISA-Kits (Neogen, Code. 404110) gemessen. Alle Messungen erfolgten in dreifacher Ausführung.
  • Die Ergebnisse sind in 6 gezeigt. 6 stellt die Prostaglandin E2-Konzentration in dem Medium dar, die durch Inkubieren unter verschiedenen Kulturbedingungen, in denen DGE während der Vorkultur zugegeben wird, erhalten wird. In 6 stellt die horizontale Achse die Kulturbedingungen dar, und die vertikale Achse stellt die Prostaglandin E2-Konzentration (ng/ml) dar.
  • Demzufolge hemmte DGE die durch LPS induzierte Prostaglandin E2-Produktion. Außerdem wurde eine stärkere Hemmung der Prostaglandin E2-Produktion für die Wells beobachtet, die vor Zugabe von LPS für 5 Stunden in Gegenwart von DGE inkubiert worden waren, im Vergleich zu denen, die für 0,5 Stunden inkubiert worden waren.
  • Beispiel 12: Test für Hitzeschockproteinauslösung
  • 5 ml RPMI 1640 Medium mit 10% fötalem Rinderserum und HL-60-Zellen bei einer Konzentration von 2 × 105 Zellen/ml wurden in jedes Well einer 6-Well-Platte gegeben. Die Platte wurde bei 37°C 24 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. DGE bei einer Endkonzentration von 0, 6,25, 12,5, 25, 50 oder 100 μM wurde dann dazu gegeben. Die Inkubation wurde weitere 6 Stunden fortgeführt.
  • Nach der Kultivierung wurde die Zellzahl gezählt. Die Zellen wurden durch Zentrifugation geerntet, mit PBS gewaschen, um DGE-behandelte Zellen herzustellen. Zellen, die nach Erhitzen bei 45°C für 10 Minuten auf die gleiche Art und Weise kultiviert wurden, wurden auch hergestellt.
  • Diese behandelten Zellen wurden gemäß dem in Molecular Cloning [Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)] beschriebenen Verfahren für SDS-PAGE verwendet. Die behandelten Zellen wurden in SDS-PAGE-Probenpuffer bei einer Konzentration von 2,5 × 106 Zellen/ml suspendiert. Die Zellsuspensionen wurden bei 100°C 10 Minuten behandelt. 5 μl jeder Zellsuspension wurden auf 2 SDS-PAGE-Gele (5% Sammelgel, 10% Trenngel) aufgetragen und der Elektrophorese unterzogen. Eines der Gele wurde einer Coomassie-Färbung unterzogen. Das andere Gel wurde auf eine Polyvinylidenfluoridtransfermembran [ImmobilonTM, Millipore, Kat. # IPVH000-10] geblottet. Die Membran wurde bei 4°C über Nacht unter Verwendung von Block Ace (Dainippon Pharmaceutical, Kat. # UK-B25) blockiert.
  • Die blockierte Membran wurde mit einem monoklonalen Antikörper HSP72/73 (Ab-1) (Oncogene Research Products, Kat. # HSP01) reagiert, der spezifisch mit dem Hitze-induzierbaren 70-kDa-Hitzeschockprotein reagiert. Die Membran wurde mit TBS mit 0,05% Tween 20 gefolgt von TBS gewaschen. Die Membran wurde dann mit einem Peroxidase-konjugierten sekundären Antikörper, HRT-Kaninchen-Anti-Maus-IgG (H+L) (Zymed Laboratories, Inc., Kat. # 61-6520), reagieren gelassen und dann wie vorstehend beschrieben gewaschen. Die Membran, die mit den primären und sekundären Antikörpern inkubiert worden war, wurde mit einem Chemiluminolreagenz, RenaissanceTM (Dupont NEN, Kat. # NEL-100), reagieren gelassen. Die Membran wurde dann auf einem Röntgenfilm exponiert, um die Induktion des 70-kDa-Hitzeschockproteins zu bestätigen.
  • Demzufolge wurde die Induktion des 70-kDa-Hitzeschockproteins durch DGE beobachtet. Der Grad der Induktion ist in Tabelle 8 gezeigt. In Tabelle 8 stellt + den Induktionsgrad dar. Eine erhöhte Anzahl von + bedeutet eine erhöhte Induktion. Andererseits bedeutet –, dass keine Induktion beobachtet wurde.
  • Außerdem zeigten k-DGE und DGE-GSH, die nachstehend beschrieben sind, auch ähnliche Aktivitäten, ein Hitzeschockprotein zu induzieren. Tabelle 8
    Behandlung der Zellen Induktion des Hitzeschockproteins
    Erhitzen bei 45°C für 10 Minuten +++
    0 μM DGE –
    6.25 μM DGE +
    12.5 μM DGE +
    25.0 μM DGE ++
    50.0 μM DGE +++
    100 μM DGE ++++
  • Beispiel 13: Herstellung von 5-L-Glutathion-S-yl-2-hydroxy-3,7-dioxabicyclo[2.2.2]octan-1-ol (DGE-GSH)
    • (1) DGE und reduziertes Glutathion (GSH; Nacalai Tesque) wurden in PBS bei Konzentrationen von 20 mM gelöst, und das Gemisch wurde bei 37°C über Nacht inkubiert. 100 μl des Reaktionsgemisches wurden auf einer Normalphasensäule, PAL-PAK Typ S, fraktioniert. Chromatographie erfolgte unter den nachstehenden Bedingungen: Flussrate: 1 ml/Minute, 90%ige wässrige Acetonitrillösung mit 0,1% TFA (0 bis 10 Minuten), linearer Gradient von 90%iger wässriger Acetonitrillösung mit 0,1% TFA zu 50%iger wässriger Acetonitrillösung mit 0,1% TFA (10 bis 50 Minuten), Detektion: Absorption bei 195 nm, Sammeln der Fraktionen: alle 1,5 Minuten. Die entsprechenden Fraktionen wurden zur Trockne konzentriert und in 50 μl destilliertem Wasser wieder aufgelöst. Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen wurden unter Verwendung von HL-60-Zellen wie in Beispiel 1-(2) beschrieben gemessen. Demzufolge wurden apoptotische Körper für Gruppen beobachtet, zu denen die Fraktionen um 30 bis 40 gegeben worden waren. Die Absorption bei 590 nm dieser Gruppen war niedriger als die der Kontrollgruppe, zu der Wasser gegeben worden war, was die Hemmung des Zellwachstums anzeigt. 50 μl einer in der gleichen Art und Weise wie der vorstehend beschriebenen hergestellten aktiven Fraktion wurden mittels Chromatographie mit reverser Phase (TSK-Gel ODS-80Ts (5 μm), Toso, 4,6 × 250 mm) fraktioniert. Chromatographie erfolgte unter den nachstehenden Bedingungen: Flussrate 1 ml/Minute; destilliertes Wasser mit 0,1% TFA (0 bis 15 Minuten), linearer Gradient von destilliertem Wasser mit 0,1% TFA zu 50%iger wässriger Acetonitrillösung mit 0,1% TFA (15 bis 30 Minuten), 50%ige wässrige Acetonitrillösung mit 0,1% TFA (30 bis 45 Minuten), Detektion: Absorption bei 215 nm, Sammlung von Fraktionen: alle 1,5 Minuten. Die entsprechenden Fraktionen wurden zur Trockne konzentriert und in 50 μl destilliertem Wasser wieder gelöst. Antiproliferationsaktivitäten gegen Tumorzellen wurden unter Verwendung von HL-60-Zellen wie in Beispiel 1-(2) beschrieben gemessen. Demzufolge wurden apoptotische Körper für die Gruppen beobachtet, zu denen die Fraktionen um 4 bis 9 gegeben worden waren. Die Absorption bei 590 nm dieser Gruppen war niedriger als die der Kontrollgruppe, zu der Wasser gegeben worden war, was die Hemmung des Zellwachstums anzeigt. Diese Ergebnisse zeigen die Apoptose-auslösende Aktivität.
  • Die vorstehend beschriebene Normalphasenchromatographie wurde 10-mal wiederholt. Fraktionen mit Apoptose-auslösenden Aktivitäten wurden gesammelt, zur Trockne konzentriert, in 1 ml destilliertem Wasser wieder gelöst und dann einer Normalphasenchromatographie unterzogen, um aufgereinigte Fraktionen herzustellen. Die durch die Normalphasenchromatographie aufgereinigten Fraktionen wurden dann auf die vorstehend beschriebene Chromatographie mit reverser Phase aufgetragen. Fraktionen mit Apoptose-auslösenden Aktivitäten wurden gesammelt und zur Trockne konzentriert. Demzufolge wurden 5 mg einer Verbindung mit einer Apoptose-auslösenden Aktivität aus 1 ml des Reaktionsgemisches mit 20 mM DGE und 20 mM Glutathion erhalten. Diese Verbindung wurde für die Strukturbestimmung verwendet.
    • (2) Massenspektrometrische Analyse des in Beispiel 13-(1) erhaltenen Apoptoseauslösenden Stoffes, d.h. des Produkts der Reaktion zwischen DGE und Glutathion, erfolgte unter Verwendung eines DX302-Massenspektrometers. Des Weiteren wurde die Probe in schwerem Wasser gelöst, um die Struktur durch Kernspinresonanz (NMR) zu untersuchen. Die Ergebnisse sind nachstehend gezeigt.
  • Das Massenspektrum eines in Beispiel 13-(1) erhaltenen Apoptose-auslösenden Stoffes ist in 7 dargestellt. Das 1H-NMR-Spektrum des Stoffes ist in 8 dargestellt. Das 13C-NMR-Spektrum des Stoffes ist in 9 dargestellt. In 7 stellt die horizontale Achse den m/z-Wert dar, und die vertikale Achse stellt die relative Intensität (%) dar. In den 8 und 9 stellen die horizontalen Achsen den chemischen Verschiebungswert (ppm) dar, und die vertikalen Achsen stellen die Signalintensität dar.
    FAB-MS: m/z 452[M + H]+
    474[M + Na]+
    544[M + Glycerin + H]+
    566[M + Glycerin + Na]+
  • Glycerin wurde als Matrix verwendet.
    1H-NMR:
    δ 1,62 (1H, t, J=13,5 Hz, 6-H), 1,96 (1H, dd, J=4,0, 13,5 Hz, 6-H), 2,07 (2H, m, 5'-H), 2,42 (2H, m, 4'-H), 2,85 (1H, dd, J=8,5, 13,5 Hz, 1'-H), 2,90 (1H, ddd, J=4,0, 10,5, 13,5 Hz, 5-H), 3,06 (1H, dd, J=5,0, 13,5 Hz, 1'-H), 3,44 (1H, dt, J=5,0, 10,5 Hz, 4-H), 3,52 (1H, t, J=10,5 Hz, H-8), 3,66 (1H, dd, J=5,0, 10,5 Hz, H-8), 3,82 (1H, t, J=6,5 Hz, 6'-H), 3,88 (2H, S, 9'-H), 4,47 (1H, dd, J=5,0, 8,5 Hz, 2'-H), 4,65 (1H, S, 2-H)
  • Die Werte der chemischen Verschiebungen in 1H-NMR wurden unter der Annahme ausgedrückt, dass der chemische Verschiebungswert von HOD 4,65 ppm beträgt.
    13C-NMR:
    δ 26,6 (5'-C), 31,9 (4'-C), 32,7 (1'-C), 35,6 (6-C), 42,0 (9'-C), 45,2 (5-C), 53,9 (6'-C), 54,4 (2'-C), 64,7 (8-C), 70,4 (4-C), 92,1 (2-C), 97,2 (1-C), 173,4 (7'-C), 173,5 (8'-C), 173,8 (10'-C), 175,4 (3'-C)
  • Die Werte der chemischen Verschiebung in 13C-NMR werden unter der Annahme ausgedrückt, dass der chemische Verschiebungswert von Dioxan 67,4 ppm beträgt.
  • Die Zahlen zur Peak-Bestimmung in 1H-NMR und 13C-NMR sind wie in der nachstehenden Formel angegeben.
  • Figure 00610001
  • Aus diesen Ergebnissen wurde deutlich, dass der in Beispiel 13-(1) erhaltene Apoptose-auslösende Stoff 5-L-Glutathion-S-yl-2-hydroxy-3,7-dioxabicyclo[2.2.2]octan-1-ol (nachstehend einfach als DGE-GSH bezeichnet) war.
  • Beispiel 14: Test für Apoptoseauslösung
  • Eine 10 mg/ml-wässrige Lösung von in Beispiel 13-(1) erhaltenem DGE-GSH wurde durch Filtration sterilisiert und mit sterilem Wasser 2-, 4-, 8-, 16-, 32-, 64-, 128-, 256- oder 512-fach verdünnt. Die Antiproliferationsaktivitäten gegen. HL-60-Zellen dieser Verdünnungen wurden wie in Beispiel 1-(2) beschrieben gemessen. Demzufolge wurden apoptotische Körper für Gruppen beobachtet, zu denen DGE-GSH ge geben worden war. Die Absorption bei 590 nm dieser Gruppen war niedriger als die der Kontrollgruppe, zu der Wasser gegeben worden war, was die Hemmung des Zellwachstums anzeigt. GI50, die Konzentration, aus der sich eine 50%ige Wachstumshemmung, wie durch halbe Absorption bei 590 nm im Vergleich zu der Kontrollgruppe gezeigt, zu der Wasser gegeben worden war, ergibt und die basierend auf den vorstehend beschriebenen Ergebnissen berechnet wurde, betrug etwa 48,7 μg/ml.
  • Beispiel 15: Test für Hemmung der NO-Produktion
  • RAW264.7-Zellen wurden in Dulbecco's Modified Eagle's Medium ohne Phenolrot mit 10% fötalem Rinderserum und 2 mM L-Glutamin bei einer Konzentration von 3 × 105 Zellen/ml suspendiert. 500 μl der Suspension wurden zu jedem Well einer 48-Well-Mikrotiterplatte gegeben und die Platte wurde bei 37°C 12 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. 10 μl einer wässrigen Lösung mit 50 μg/ml Lipopolysaccharid und 5000 U/ml Interferon-γ und 10 μl einer wässrigen Lösung, die durch Lösen von in Beispiel 13-(1) hergestelltem DGE-GSH in Wasser bei einer Konzentration von 1 mM und Sterilisieren davon durch Filtration hergestellt worden war, wurden zu dem Well gegeben. Die Platte wurde weitere 16 Stunden inkubiert, die Konzentration an durch Oxidation von NO erzeugtem NO2 – in dem Medium wurde dann gemessen. Es wurden als Kontrollgruppen eine Gruppe, zu der LPS oder IFN-γ nicht gegeben worden war, und eine Gruppe, zu der DGE-GSH nicht gegeben worden war, bereitgestellt.
  • Nach der Kultivierung wurden 100 μl 4%iges Grieß-Reagenz (Sigma G4410) zu 100 μl des Mediums gegeben, und dem Gemisch wurde ermöglicht, 15 Minuten bei Raumtemperatur zu stehen. Dann wurde die Absorption bei 490 nm gemessen. Die NO2-Konzentration in dem Medium wurde unter Bezugnahme auf eine Kalibrierungskurve berechnet, die durch Verwenden von NaNO2 bei einer festgesetzten Konzentration hergestellt wurde, das in dem gleichen Medium wie dem vorstehend beschriebenen gelöst worden war.
  • Demzufolge betrug die NO2 –-Konzentration in dem Medium ohne Zugabe 4,6 μM. Die NO2 –-Konzentration in dem Kontrollmedium, zu dem LPS und IFN-γ gegeben worden waren, aber DGE-GSH nicht gegeben worden war, betrug 12,1 μM. Die NO2-Konzentration in dem Medium, zu dem DGE-GSH gegeben worden war, war niedrig (9,4 μM), was die hemmende Wirkung von DGE-GSH auf die durch LPS und IFN-γ ausgelöste NO-Produktion anzeigt.
  • Beispiel 16: Test für Hemmung der Prostaglandin E2-Produktion
  • RAW264.7-Zellen wurden in Dulbecco's Modified Eagle's Medium ohne Phenolrot mit 10% fötalem Rinderserum und 2 mM L-Glutamin bei einer Konzentration von 3 × 105 Zellen/ml suspendiert. 500 μl der Suspension wurden zu jedem Well einer 48-Well-Mikrotiterplatte gegeben, und die Platte wurde bei 37°C 12 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. 10 μl 50 μg/ml wässriger Lipopolysaccharidlösung und 10 μl einer wässrigen Lösung, die durch Lösen von in Beispiel 13-(1) hergestelltem DGE-GSH bei einer Konzentration von 1 mM in Wasser und Sterilisieren davon durch Filtration hergestellt worden war, wurden dann zu dem Well gegeben. Nachdem die Platte weitere 16 Stunden inkubiert worden war, wurde die Menge an Prostaglandin E2 gemessen. Es wurden als Kontrollgruppen eine Gruppe, zu der LPS nicht gegeben worden war, und eine Gruppe, zu der DGE-GSH nicht gegeben worden war, bereitgestellt.
  • Nach Kultivierung wurde die Menge an Prostaglandin E2 im Kulturüberstand unter Verwendung eines Prostaglandin E2 ELISA-Kits (Neogen, Code. 404110) gemessen.
  • Demzufolge betrug die Prostaglandin E2-Konzentration in dem Medium ohne Zugabe 50,3 ng/ml. Die Prostaglandin E2-Konzentration in dem Kontrollmedium, zu dem LPS gegeben worden war, aber DGE-GSH nicht gegeben worden war, betrug 63,4 ng/ml. Die Prostaglandin E2-Konzentration in dem Medium, zu dem DGE-GSH gegeben worden war, war niedrig (50,7 ng/ml), was die hemmende Wirkung von DGE-GSH auf die durch LPS ausgelöste Prostaglandin E2-Produktion anzeigt.
  • Beispiel 17: Test zur Hemmung der Lymphozytenaktivierung
  • Eine ddY-Maus (weiblich, 7 Wochen alt, Gewicht etwa 25 g) wurde von Nippon SLC bezogen und für eine Woche vorgezüchtet, bevor sie in Experimenten verwendet wurde. Die Milz wurde aus der Maus entfernt, fein gehackt und in RPMI-1640-Medium mit 10% fötalem Rinderserum (HyClone) suspendiert, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Adhäsive Zellen, die an Plastikpetrischalen anhafteten, wurden entfernt, und nicht adhäsive Zellen wurden als Milzlymphozyten verwendet. Die Milzlymphozyten wurden in RPMI 1640-Medium mit 10% fötalem Rinderserum bei einer Konzentration von 2 × 106/ml suspendiert. 200 μl der Suspension wurden in jedes Well einer 96-Well-Mikrotiterplatte ausgesät. DGE unterschiedlicher Konzentrationen wurde außer zu dem Kontrollwell zu jedem Well gegeben. Des Weiteren wurden 5 μg Con A (Nacalai Tesque) zu jedem Well gegeben. Die Platte wurde bei 37°C zwei Tage in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. 37 kBq 3H-Thymidin (Daiichi Pure Chemicals) wurde zu jedem Well gegeben, um die Zellen an dem Tag vor Beendung der Kultivierung einer Pulsmarkierung zu unterziehen. Nach der Kultivierung wurden die Zellen auf einem Glasfilter geerntet, um die Radioaktivität zu messen.
  • Die Ergebnisse sind in 10 gezeigt. DGE zeigte eine Dosis-abhängige hemmende Aktivität gegen Lymphozytenproliferation, die durch Stimulation mit einem Mitogen aktiviert wird, und hemmt die Proliferation fast vollständig bei einer Konzentration von 0,3 μg/ml. Folglich wurde die hemmende Aktivität von DGE gegen Lymphozytenaktivierung gezeigt.
  • Eine erfindungsgemäß beschriebene Verbindung der Formel (I), eine erfindungsgemäß beschriebene Verbindung der Formel (II), Salze davon und ein erfindungsgemäß beschriebener Apoptose-auslösender Stoff sind als ein Wirkstoff einer Zusammensetzung zum Auslösen von Apoptose, einer karzinostatischen Zusammensetzung, antioxidativen Zusammensetzungen, wie einer Zusammensetzung zum Hemmen der Produktion von aktivem Sauerstoff, einer Zusammensetzung zum Hemmen der Lipidperoxidradikalproduktion und einer Zusammensetzung zum Hemmen der NO-Produktion, einer Zusammensetzung zum Hemmen der Prostaglandinsynthese, einer antimikrobiellen Zusammensetzung gegen krankheitserregende Mikroorganismen, einer Zusammensetzung zum Bewahren von Frische, einer antimutagenen Zusammensetzung, einer antihyperglykämischen Zusammensetzung, einer antihyperlipidämischen Zusammensetzung, einer Zusammensetzung zum Auslösen der Hitzeschockproteinproduktion, einer antiviralen Zusammensetzung und einer Zusammensetzung zum Hemmen der α-Glykosidase verwendbar.
  • Nahrungsmittel oder Getränke, die solche Stoffe enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden, sind als funktionelle Nahrungsmittel oder Getränke verwendbar, die eine Apoptose-auslösende Aktivität, eine karzinostatische Aktivität, antioxidative Aktivitäten, wie eine Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, und eine Aktivität, die NO-Produktion zu hemmen, eine Aktivität, die Prostaglandinsynthese zu hemmen, eine antimikrobielle Aktivität gegen krankheitserregende Mikroorganismen, eine antimutagene Aktivität, eine antihyperglykämische Aktivität, eine antiadipöse Aktivität, eine Aktivität, die Hitzeschockproteinproduktion auszulösen, und eine antivirale Aktivität aufweisen. Folglich werden erfindungsgemäß Nahrungsmittel und Getränke bereitgestellt, die Apoptose in Zellen in Läsionen von Patienten mit Krebs oder viralen Erkrankungen auslösen, und sind deshalb zum Verhindern oder Verbessern der Krankheitszustände dieser Erkrankungen wirksam. Apoptose kann in Tumorzellen nach oraler Aufnahme der vorstehend beschriebenen Verbindungen in Nahrungsmitteln oder Getränken ausgelöst werden. Deshalb weisen die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke im Fall von Krebserkrankungen der Verdauungsorgane, wie unter anderem Darmkrebs und Magenkrebs, ausgezeichnete Wirkungen auf das Verhindern oder Verbessern des Krankheitszustandes von Krebserkrankungen der Verdauungsorgane auf. Des Weiteren sind die vorstehend beschriebenen Nahrungsmittel oder Getränke basierend auf deren antioxidativen Aktivitäten, wie die Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, als Nahrungsmittel oder Getränke gegen oxidativen Stress hervorragend.
  • Außerdem sind die Verbindungen der Formel (I) oder der Formel (II) als Antioxidationsverbindungen zur Hemmung der Produktion von aktivem Sauerstoff verwendbar. Die Nahrungsmittel oder Getränke, die die erfindungsgemäß beschriebene Antioxidationsverbindung enthalten, durch Verdünnen davon hergestellt werden und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt werden, sind zum Verbessern der Krankheitszustände von Erkrankungen, die durch oxidierende Stoffe in einem lebenden Organismus verursacht werden, wie durch aktiven Sauerstoff, verwendbar. Des Weiteren sind die erfindungsgemäßen Nahrungsmittel oder Getränke zur Verbesserung oder Verhinderung von Verstopfung wirksam.
  • Die Verbindung der Formel (I), die Verbindung der Formel (II) und Salze davon sind als neue funktionelle Verbindungen verwendbar, die antioxidative Aktivitäten, wie eine Aktivität, die Produktion von aktivem Sauerstoff zu hemmen, an Nahrungsmittel oder Getränke verleihen.
  • Die erfindungsgemäß beschriebenen Verbindungen weisen eine Aktivität auf, Frische zu bewahren. Daher sind sie sehr brauchbar, um Geschmack und Frische von Nahrungsmitteln oder leicht verderblichen Waren zu bewahren.
  • Des Weiteren sind die kosmetischen Zusammensetzungen, die die erfindungsgemäß beschriebenen Verbindungen enthalten, zum Bleichen oder Feuchtigkeitsspenden verwendbar.

Claims (14)

  1. Verfahren zum Herstellen einer Verbindung der Formel (I):
    Figure 00670001
    worin X und Y ein H-Atom oder eine CH2OH-Gruppe sind, mit der Maßgabe, dass, wenn X eine CH2OH-Gruppe ist, Y ein H-Atom ist, wohingegen, wenn X ein H-Atom ist, Y eine CH2OH-Gruppe ist, dadurch charakterisiert, dass das Verfahren ein Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende unter neutralen bis alkalischen Bedingungen umfasst.
  2. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei 3,6-Anhydrogalactose und/oder die Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende durch Hydrolyse unter sauren Bedingungen oder enzymatischen Verdau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials erhalten wird.
  3. Verfahren gemäß Anspruch 2, wobei die Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende mindestens eine Verbindung ist, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Agarobiose, k-Carabiose und einer Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist und 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende aufweist.
  4. Verfahren gemäß Anspruch 2, wobei das 3,6-Anhydrogalactose-haltige Material Agar, Agarose und/oder Carrageenan ist.
  5. Verbindung der Formel (II):
    Figure 00680001
    worin R ein Rest ist, der durch Freisetzen einer SH-Gruppe aus einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung erhalten wird, oder ein Salz davon.
  6. Verfahren zum Herstellen einer Verbindung der durch Anspruch 5 definierten Formel (II), dadurch charakterisiert, dass das Verfahren ein Umsetzen einer Verbindung der durch Anspruch 1 definierten Formel (I) mit einer SH-Gruppen-haltigen Verbindung umfasst.
  7. Nahrungsmittel oder Getränk, das eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der durch Anspruch 1 definierten Formel (I), einer Verbindung der durch Anspruch 5 definierten Formel (II) und Salzen davon, enthält, durch Verdünnen davon hergestellt wird und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt wird.
  8. Nahrungsmittel oder Getränk, das eine Verbindung der durch Anspruch 1 definierten Formel (I), die durch Behandeln von 3,6-Anhydrogalactose und/oder einer Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende unter neutralen bis alkalischen Bedingungen erhalten wird, enthält, durch Verdünnen hergestellt wird und/oder durch Zusetzen dazu hergestellt wird.
  9. Nahrungsmittel oder Getränk gemäß Anspruch 8, wobei 3,6-Anhydrogalactose und/oder die Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende durch Hydrolyse unter sauren Bedingungen oder enzymatischen Verdau eines 3,6-Anhydrogalactose-haltigen Materials erhalten wird.
  10. Nahrungsmittel oder Getränk gemäß Anspruch 9, wobei die Verbindung mit 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende mindestens eine Verbindung ist, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Agarobiose, k- Carabiose und einer Verbindung, die von Agarobiose und k-Carabiose verschieden ist und 3,6-Anhydrogalactose an ihrem reduzierenden Ende aufweist.
  11. Nahrungsmittel oder Getränk gemäß Anspruch 9, wobei das 3,6-Anhydrogalactose-haltige Material Agar, Agarose und/oder Carrageenan ist.
  12. Verwendung mindestens einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der durch Anspruch 1 definierten Formel (I), einer Verbindung der durch Anspruch 5 definierten Formel (II) und Salzen davon, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Behandeln oder Verhindern von Krebs, Diabetes, Arteriosklerose, neurologischen Erkrankungen, ischämischer Re-Perfusionserkrankung, systemischer Hypotonie, Verminderung der Blutdruckantwort, vaskulärer Dysfunktion, durch Erkrankungen verursachte Angiektasie, Gewebsverletzung, kardiovaskulärer Ischämie, Hyperalgesie, cerebraler Ischämie, Erkrankungen, die mit einer Vaskularisierung einhergehen, Clonorchiose, Zirrhose, Schädigung von Cerebralgewebe während cerebraler Ischämie und nach Re-Perfusion, viralen Erkrankungen, Hyperlipidämie oder Fettleibigkeit.
  13. Verwendung mindestens einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der durch Anspruch 1 definierten Formel (I), einer Verbindung der durch Anspruch 5 definierten Formel (II) und Salzen davon, zur Herstellung einer Zusammensetzung zum Bewahren von Frische.
  14. Verwendung mindestens einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer Verbindung der durch Anspruch 1 definierten Formel (I), einer Verbindung der durch Anspruch 5 definierten Formel (II) und Salzen davon, zur Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001181191A (ja) * 1999-12-24 2001-07-03 Cci Corp 慢性関節リウマチ疾患予防および治療剤
EP1254902A4 (de) * 2000-01-13 2004-12-08 Takara Bio Inc Mittel zur korrektor von fehlern in der regelung der gen-expression
KR20030040518A (ko) * 2000-10-03 2003-05-22 다카라 바이오 가부시키가이샤 생리활성 물질의 스크리닝 방법
KR100373776B1 (ko) * 2000-12-27 2003-02-26 한불화장품주식회사 화장료 조성물
CH692180A5 (it) * 2001-06-22 2002-03-15 Gecomwert Anstalt Preparato cosmetico con azione antirughe.
WO2003024446A1 (en) * 2001-09-11 2003-03-27 Mitsubishi Pharma Corporation Oxidation stress inhibitor and method of measuring oxidation stress
US20050063995A1 (en) * 2001-10-25 2005-03-24 Spaner David E Compositions and methods for selected tumour treatment
US20050124575A1 (en) * 2002-04-17 2005-06-09 Takara Bio Inc. Remedies
US7309589B2 (en) 2004-08-20 2007-12-18 Vironix Llc Sensitive detection of bacteria by improved nested polymerase chain reaction targeting the 16S ribosomal RNA gene and identification of bacterial species by amplicon sequencing
AU2006254548C1 (en) * 2005-05-31 2012-09-20 Arla Foods Amba Phosphatidylserine enriched milk fractions for the formulation of functional foods
WO2012148023A1 (ko) * 2011-04-29 2012-11-01 바이올시스템즈 주식회사 무수갈락토스의 분리정제 방법
CN102321153B (zh) * 2011-09-06 2013-06-05 中国科学院成都生物研究所 一种新奥苷肽粉状固体的制备方法
KR101525298B1 (ko) * 2012-01-18 2015-06-03 고려대학교 산학협력단 3,6-안하이드로-l-갈락토오스의 제조방법 및 이의 용도
JP6241644B2 (ja) * 2013-06-05 2017-12-06 伊那食品工業株式会社 ＰＰＡＲγ発現向上剤、並びにそれを含む基礎代謝向上剤、筋肉疲労回復向上剤、ＰＰＡＲγ発現向上用医薬組成物及びＰＰＡＲγ発現向上用飲食品
KR102011721B1 (ko) * 2017-11-28 2019-08-19 고려대학교 산학협력단 포도상구균의 생육을 억제하는 한천 유래 올리고당의 용도
CN108776121B (zh) * 2018-04-08 2021-07-30 广州卡马生物科技有限公司 一种基于荧光猝灭原理对药材中抗氧剂的高通量筛选方法
CN112375110A (zh) * 2020-11-20 2021-02-19 西安乐析医疗科技有限公司 一种化合物3,4-dge的制备方法
KR102608602B1 (ko) * 2020-11-27 2023-12-01 (주)헬스코치생명공학 Ahg를 이용한 자외선에 의한 피부 주름 개선용 조성물

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1202286B (de) * 1962-08-04 1965-10-07 Huels Chemische Werke Ag Verfahren zur Herstellung von beta-Pyronen
US3230233A (en) * 1964-03-04 1966-01-18 American Cyanamid Co Novel substituted 2, 3-dihydro-9-carbamo-yloxymethyl-6-methyl-pyrrolo[1, 2-a] indole-5, 8-diones
FR2541307A1 (fr) * 1983-02-23 1984-08-24 Korano Substance gelifiante semi-synthetique, son procede de preparation et ses applications, notamment dans les milieux de culture pour microorganismes
JPS62210958A (ja) * 1986-03-13 1987-09-17 Meiji Seika Kaisha Ltd 澱粉含有組成物の老化防止方法
JPH04316593A (ja) * 1991-02-21 1992-11-06 Japan Tobacco Inc Ｄ−アロサンの製造方法
JPH05565A (ja) * 1991-06-21 1993-01-08 Toyo Ink Mfg Co Ltd 皮膜形成方法
US5380834A (en) 1992-02-06 1995-01-10 Ishihara Sangyo Kaisha Ltd. Immuno-suppressive agent
EP0873691A3 (de) * 1992-05-15 1999-07-14 Ina Food Industry Co., Ltd. Nahrungsmittel enthaltend ein Agar mit niedriger Gelfestigkeit
AU666577B2 (en) * 1992-08-19 1996-02-15 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Apoptosis regulator
JP3193480B2 (ja) 1992-09-03 2001-07-30 石原産業株式会社 免疫機能抑制剤
JP3266343B2 (ja) * 1992-12-17 2002-03-18 芝浦メカトロニクス株式会社 クリームはんだ印刷装置
JP3865801B2 (ja) * 1995-04-27 2007-01-10 株式会社ヤクルト本社 新規なβ−アガラーゼ，その製造方法及びその用途
US5834257A (en) * 1995-11-06 1998-11-10 Japan Tobacco Inc. α-agarase and production process of oligosaccharides and monosaccharides
EP0941737B1 (de) * 1996-11-08 2004-06-09 Takara Bio Inc. Induktoren der apoptose
AU1890399A (en) * 1998-01-19 1999-08-02 Takara Shuzo Co., Ltd. Substances capable of inducing apoptosis

Also Published As

Publication number Publication date
KR20060086454A (ko) 2006-07-31
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JP2006117662A (ja) 2006-05-11
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WO1999064424A1 (en) 1999-12-16

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