DE69929464T2

DE69929464T2 - Zyklische polyamine zur behandlung der thrombozytopenie

Info

Publication number: DE69929464T2
Application number: DE69929464T
Authority: DE
Inventors: I. Juan Audubon LUENGO; I. Peter San Diego LAMB
Original assignee: Ligand Pharmaceuticals Inc; SmithKline Beecham Corp
Current assignee: Ligand Pharmaceuticals Inc; SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1998-11-17
Filing date: 1999-11-17
Publication date: 2006-09-07
Anticipated expiration: 2019-11-18
Also published as: ES2257090T3; EP1133291A1; EP1133291A4; US6498155B1; EP1133291B1; AU1732900A; WO2000028987A1; ATE315390T1; JP2002529502A; DE69929464D1

Description

Gebiet der Erfindung
Diese Erfindung betrifft die Verwendung von TPO-Rezeptorliganden als Agonisten des TPO-Rezeptors.
Hintergrund der Erfindung
Megakaryozyten sind aus Knochenmark stammende Zellen, die verantwortlich für die Erzeugung von Blutplättchen im Kreislauf sind. Obwohl sie < 0,25 % der Knochenmarkzellen in den meisten Arten umfassen, besitzen sie das mehr als 10-fache des Volumens typischer Markzellen. Siehe Kuter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:11104-11108 (1994). Megakaryozyten erfahren einen als Endomitose bekannten Prozeß, wodurch sie ihre Kerne vervielfältigen, aber keine Zellteilung erfahren und dadurch zu polyploiden Zellen führen. Als Reaktion auf eine verringerte Blutplättchenzahl erhöht sich die Endomitoserate, höher ploide Megakaryozyten werden gebildet, und die Anzahl von Megakaryozyten kann bis zum 3-fachen zunehmen. Siehe Harker, J. Clin. Invest., 47:458-465 (1968). Im Gegensatz nimmt die Endomitoserate als Reaktion auf eine erhöhte Blutplättchenzahl ab, niedriger ploide Megakaryozyten werden gebildet, und die Anzahl von Megakaryozyten kann um 50 % abnehmen.
Der genaue physiologische Rückkopplungsmechanismus, durch den die Masse der Blutplättchen im Kreislauf die Endomitoserate und die Anzahl von Knochenmark-Megakaryozyten reguliert, ist unbekannt. Es wird jetzt angenommen, daß der thrombopoetische Kreislauffaktor, der an der Vermittlung dieses Rückkopplungskreises beteiligt ist, Thrombopoietin (TPO) ist. Insbesondere wurde gezeigt, daß TPO der humorale Hauptregulator in Situationen ist, die Thrombozytopenie involvieren. Siehe z.B. Metcalf, Nature, 369:519-520 (1994). Es wurde in mehreren Studien gezeigt, daß TPO die Blutplättchenzahlen erhöht, die Blutplättchengröße erhöht und die Isotopenaufnahme in die Blutplättchen von Empfängertieren erhöht. Spezifisch wird angenommen, daß TPO die Megakaryozytopoese auf mehrere weisen beeinflußt: (1) Es erzeugt Zunahmen der Megakaryozytengröße und -zahl; (2) es erzeugt eine Zunahme des DNA-Gehalts in Form von Polyploidie in Megakaryozyten; (3) es erhöht die Megakaryozyten-Endomitose; (4) es erzeugt eine erhöhte Reifung von Megakaryozyten; und (5) es erzeugt eine Zunahme des Prozentanteils von Vorläuferzellen in Form von kleinen Acetylcholinesterase-positiven Zellen im Knochenmark.
Weil Blutplättchen (Thrombozyten) notwendig für die Blutgerinnung sind und ein Patient, wenn ihre Zahlen sehr niedrig sind, ein Risiko für Tod aufgrund katastrophaler Blutung aufweist, besitzt TPO eine potentielle nützliche Anwendung sowohl in der Diagnose als auch in der Behandlung verschiedener hämatologischer Störungen, zum Beispiel von Krankheiten, die primär auf Blutplättchendefekten beruhen. Fortgesetzte klinische Versuche mit TPO haben gezeigt, daß TPO sicher an Patienten verabreicht werden kann. Zusätzlich haben kürzliche Untersuchungen eine Basis für die Projektion der Effizienz der TPO-Therapie in der Behandlung von Thrombozytopenie und insbesondere von Thrombozytopenie bereitgestellt, die aus Chemotherapie, Bestrahlungstherapie oder Knochenmarktransplantation als Behandlung für Krebs oder Lymphom resultiert. Siehe z.B. McDonald, Am. J. Ped. Hematology/Oncology, 14:8-21 (1992).
Das Gen, das TPO codiert, wurde kloniert und charakterisiert. Siehe Kuter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:11104-11108 (1994); Barley et al., Cell, 77:1117-1124 (1994); Kaushansky et al., Nature, 369:568-571 (1994); Wendling et al., Nature, 369:571-574 (1994) und Sauvage et al., Nature, 369:533-538 (1994). Thrombopoietin ist ein Glycoprotein mit zwei besonderen Regionen, die durch einen potentiellen Arg-Arg-Spaltort getrennt sind. Die Amino-terminale Region ist hoch konserviert im Menschen und in der Maus und besitzt eine gewisse Homologie mit Erythropoietin und Interferon-alpha und Interferon-beta. Die Carboxy-terminale Region zeigt weite Art-Unterschiede.
Die DNA-Sequenzen und codierten Peptidsequenzen für den humanen TPO-Rezeptor (TPO-R; auch als c-mpl bekannt) wurden beschrieben. Siehe Vigon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5640-5644 (1992). TPO-R ist ein Mitglied der Hämatopoietin-Wachstumsfaktorrezeptorfamilie, einer Familie, die durch einen gemeinsamen strukturellen Aufbau der extrazellulären Domäne gekennzeichnet ist, einschließlich konservierter C-Reste in N-terminalen Teil und eines WSXWS-Motivs in der Nähe der Transmembranregion. Siehe Bazan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6934-6938 (1990). Der Nachweis, daß dieser Rezeptor eine funktionelle Rolle in der Hämatopoese spielt, schließt die Beobachtungen ein, daß seine Expression auf Milz, Knochenmark oder fötale Leber in Mäusen (siehe Souyri et al., Cell, 63:1137-1147 (1990)) und auf Megakaryozyten, Blutplättchen und CD34⁺-Zellen in Menschen beschränkt ist (siehe Methia et al., Blood, 82:1395-1401 (1993)). Ein weiterer Nachweis für TPO-R als Schlüsselregulator der Megakaryopoese ist die Tatsache, daß der Kontakt von CD34⁺-Zellen mit synthetischen Oligonukleotiden antisense zu TPO-R-RNA signifikant das Auftreten von Megakaryozytenkolonien ohne Beeinflussung der Erythroid- oder Myeloid-Koloniebildung hemmt. Einige Forscher postulieren, daß der Rezeptor als Homodimer funktioniert, ähnlich der Situation mit den Rezeptoren für G-CSF und Erythropoietin.
Die langsame Erholung der Blutplättchenspiegel in Patienten, die an Thrombozytopenie leiden, ist ein ernsthaftes Problem und hat die Suche nach einem Blutwachstumsfaktoragonisten dringend gemacht, der die Blutplättchenregeneration beschleunigen kann. Es wäre wünschenswert, Verbindungen bereitzustellen, die die Behandlung von Thrombozytopenie durch Wirkung als TPO-Mimetikum erlauben.
Die internationale Anmeldung PCT/GB92/02334 (internationaler Anmeldetag 16. Dezember 1992; WO 93/12096, veröffentlicht am 24. Juni 1993, nachfolgend "Bridger") offenbart verbundene cyclische Polyamine der Formel (I): Z-R-A-R'-Y (I)worin Z und Y unabhängig cyclische Polyamineinheiten mit 9 bis 32 Ringgliedern und 3 bis 8 Amin-Stickstoffatomen im Ring sind, die durch 2 oder mehr Kohlenstoffatome voneinander getrennt sind; A eine aromatische oder heteroaromatische Einheit ist; und R und R' jeweils eine substituierte oder unsubstituierte Alkylenkette oder heteroatomhaltige Kette sind, die die cyclischen Polyamine und die Einheit A trennt; sowie Säureadditionssalze oder Metallkomplexe davon.
Bridger offenbart weder noch beansprucht er die Verbindungen der Formel (I) als TPO-Mimetika oder zur Behandlung von Thrombozytopenie.
Wie hier offenbart wird, wurde unerwartet festgestellt, daß bestimmte kleine organische Moleküle, bevorzugt die verbundenen cyclischen Polyamine von Bridger, wirksam als Agonist für den TPO-Rezeptor sind, d.h. sie sind wirksame TPO-Mimetika.
Zusammenfassung der Erfindung
Die Erfindung stellt die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung von Thrombozytopenie bereit.
Die Erfindung stellt ebenfalls die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Steigerung der Blutplättchenproduktion in einem Säugetier, das dies benötigt, und zur Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge der Verbindung der Formel (I) an ein solches Säugetier bereit.
Die Erfindung kann gegebenenfalls in einem oder für ein Verfahren zur Behandlung von Thrombozytopenie verwendet werden, wobei dies das Verabreichen einer wirksamen Menge einer TPO-mimetischen Verbindung der Formel (I) an einen Patienten umfaßt, der dies benötigt.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch den Befund, daß die Verbindungen der Formel (I) wirksam als Agonist des TPO-Rezeptors sind.
Die vorliegend erfundenen TPO-mimetischen Verbindungen können mit weiteren aktiven Bestandteilen co-verabreicht werden.
Diese Erfindung betrifft auch den Befund, daß bestimmte Nicht-Peptidverbindungen wirksam als TPO-Mimetika sind.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Die Herstellung der Verbindungen der Formel (I) und von Säureadditionssalzen und Metallkomplexen davon und Formulierungen davon wird in der internationalen Anmeldung PCT/GB92/02334 offenbart (internationaler Anmeldetag 16. Dezember 1992; WO 93/12096, veröffentlicht am 24. Juni 1993, Bridger). In Bridger werden Metallkomplexe der beanspruchten verbundenen cyclischen Polyamidverbindungen als alternative Verfahren zur Verabreichung offenbart und nicht als Teil eines Aktivierungsmechanismus als antivirale Verbindungen offenbart.
Mit dem Begriff "bifunktioneller Nicht-Peptidligand", wie er hier verwendet wird, ist ein Ligand gemeint, der zwei positiv geladene Regionen enthält, die über einen Linker mit 6 bis 16 Atomen verbunden sind, und der den TPO-Rezeptor durch Binden an zwei nicht-benachbarte Orte aktivieren kann.
Mit dem Begriff "behandeln" und Abwandlungen davon, wie sie hier verwendet werden, ist die prophylaktische oder therapeutische Therapie gemeint.
Die Behandlung von Thrombozytopenie wie hier beschrieben wird durch Steigerung der Produktion von Blutplättchen erreicht.
Mit dem Begriff "Co-Verabreichen" und Abwandlungen davon, wie sie hier verwendet werden, ist entweder die gleichzeitige Verabreichung oder jede Art und weise der getrennten aufeinanderfolgenden Verabreichung einer TPO-mimetischen Verbindung wie hier beschrieben und eines weiteren aktiven Bestandteils oder weiterer aktiver Bestandteile gemeint, die zur Behandlung von Thrombozytopenie bekannt sind, einschließlich Chemotherapie-induzierter Thrombozytopenie und Knochenmarktransplantation und anderer Bedingungen mit verringerter Blutplättchenproduktion. Falls die Verabreichung nicht gleichzeitig ist, werden die Verbindungen bevorzugt in zeitnaher Weise zueinander verabreicht. Außerdem ist es unerheblich, ob die Verbindungen in der gleichen Arzneiform verabreicht werden sollen, z.B. kann eine Verbindung topisch verabreicht werden und eine andere Verbindung kann oral verabreicht werden.
Weil die pharmazeutisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung aktiv als TPO-Mimetika sind, weisen sie einen therapeutischen Nutzen in der Behandlung von Thrombozytopenie und anderen Zuständen mit verringerter Blutplättchenproduktion auf.
Bei der Bestimmung der Wirksamkeit als TPO-Mimetika wurden die folgenden Assays eingesetzt:
Luciferase-Assay
Erfindungsgemäße Verbindungen wurden auf Wirksamkeit als Mimetika des TPO-Rezeptors in einem Luciferase-Assay untersucht, wie beschrieben in Lamb et al., Nucleic Acids Research, 23:3283-3289 (1995) und Seidel et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:3041-3045 (1995), indem die darin verwendeten HepG2-Zeilen gegen eine TPO-reaktive BaF3-Zellinie ersetzt wurden (Vigon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5640-5644 (1992)). Die murinen BaF3-Zellen exprimieren TPO-Rezeptoren und ähneln sehr dem Muster der in primären murinen und humanen Knochenmarkzellen als Reaktion auf TPO beobachteten STAT-Aktivierung (STAT = Signalwandler und -aktivatoren der Transkription).
Einige der am meisten bevorzugten Verbindungen dieser Erfindung waren auch aktiv in einem in-vitro-Vermehrungsassay unter Verwendung der murinen 32D-mpl-Zellinie (T.D. Bartley et al., Cell, 177:1117-1124 (1994)).
32D-mpl-Zellen exprimieren TPO-R, und ihr Überleben ist abhängig von der Gegenwart von TPO. In ähnlicher Weise waren einige der am meisten bevorzugten Verbindungen dieser Erfindung auch positiv in der Stimulation der Reifung von Megakaryozyten aus humanen Knochenmarkzellen. In diesem Assay wurden gereinigte humane CD34⁺-Vorläuferzellen in Flüssigkultur mit Testverbindungen für 10 Tage inkubiert, und die Anzahl von Zellen, die das Transmembran-Glycoprotein CD41 (gpIIb), einen megakaryozytischen Marker, exprimieren, wurde dann durch Durchflußzytometrie gemessen (siehe S.E. Cwirla et al., Science, 276:1696-1699 (1997)).
Die pharmazeutisch aktiven Verbindungen im Umfang dieser Erfindung sind nützlich als TPO-Mimetika in Säugetieren, einschließlich Menschen, die dies benötigen.
Verbindungen der Beispiele 1 und 2 zeigten eine Aktivierung von über 30 % der Kontrolle (die Kontrolle ist die maximale Reaktion auf TPO) zwischen dem Konzentrationsbereich von 10 und 100 μM im Luciferase-Assay. Die Verbindung aus Beispiel 1 förderte die Vermehrung von 32D-mpl-Zellen bei einer Konzentration von 1-30 μM. Die Verbindung aus Beispiel 1 zeigte Aktivität im megakaryozytischen CD41-Assay bei Konzentrationen von 1-30 μM.
Die vorliegende Erfindung kann deshalb in einem oder für ein Verfahren zur Behandlung von Thrombozytopenie und anderen Zuständen mit verringerter Blutplättchenproduktion verwendet werden, welches das Verabreichen einer Verbindung der Formel (I) in einer Menge umfaßt, die wirksam zur Steigerung der Blutplättchenproduktion ist: Z-R-A-R'-Y (I)worin Z und Y unabhängig cyclische Polyamineinheiten mit 9 bis 32 Ringgliedern und 3 bis 8 Amin-Stickstoffatomen im Ring sind, die durch 2 oder mehr Kohlenstoffatome voneinander getrennt sind; A eine aromatische oder heteroaromatische Einheit ist; und R und R' jeweils eine substituierte oder unsubstituierte Alkylenkette oder heteroatomhaltige Kette sind, die die cyclischen Polyamine und die Einheit A trennt, und Säureadditionssalze oder Metallkomplexe davon. Die Verbindungen der Formel (I) können in einem oder für ein Verfahren zur Behandlung der oben angegebenen Krankheitszustände wegen ihrer aufgezeigten Fähigkeit, als TPO-Mimetika zu wirken, verwendet werden. Der Wirkstoff kann an einen bedürftigen Patienten durch jeden herkömmlichen Verabreichungsweg verabreicht werden, einschließlich intravenös, intramuskulär, oral, subkutan, intradermal und parenteral.
Die pharmazeutisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden in zweckmäßige Arzneiformen wie Kapseln, Tabletten oder injizierbare Zubereitungen aufgenommen. Feste oder flüssige pharmazeutische Träger werden eingesetzt. Feste Träger schließen Stärke, Lactose, Calciumsulfatdihydrat, Kaolin, Saccharose, Talkum, Gelatine, Agar, Pectin, Gummi arabicum, Magnesiumstearat und Stearinsäure ein. Flüssige Träger schließen Sirup, Erdnußöl, Olivenöl, Kochsalzlösung und Wasser ein. In ähnlicher Weise kann der Träger oder das Verdünnungsmittel jedes Material zur verlängerten Freisetzung einschließen, wie z.B. Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat, allein oder mit einem Wachs. Die Menge des festen Trä gers variiert stark, aber wird bevorzugt circa 25 mg bis circa 1 g pro Dosierungseinheit sein. Wenn ein flüssiger Träger verwendet wird, wird die Zubereitung in Form eines Sirups, Elixirs, einer Emulsion, einer Weichgelatinekapsel, einer sterilen injizierbaren Flüssigkeit, wie z.B. als Ampulle, oder einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen flüssigen Suspension sein.
Die pharmazeutischen Zubereitungen werden unter Befolgen herkömmlicher Techniken eines pharmazeutischen Chemikers hergestellt, die das Vermischen, Granulieren und, wenn notwendig, Verpressen für Tablettenformen oder Vermischen, Abfüllen und Auflösen der Bestandteile nach Bedarf beinhalten, um die gewünschten oralen oder parenteralen Produkte zu ergeben.
Die Dosen der vorliegend erfundenen pharmazeutisch aktiven Verbindungen in einer pharmazeutischen Dosierungseinheit wie oben beschrieben werden eine wirksame, nicht-toxische Menge sein, die bevorzugt aus dem Bereich von 0,001-100 mg/kg an aktiver Verbindung, bevorzugt 0,001-50 mg/kg, ausgewählt wird. Bei der Behandlung eines menschlichen Patienten, der eines TPO-Mimetikums bedarf, wird die ausgewählte Dosis bevorzugt 1-6 mal täglich oral oder parenteral verabreicht. Bevorzugte Formen der parenteralen Verabreichung schließen die topische, rektale, transdermale, durch Injektion und kontinuierliche durch Infusion ein. Orale Dosierungseinheiten für die humane Verabreichung enthalten bevorzugt 0,05-3.500 mg aktive Verbindung. Die orale Verabreichung, die niedrigere Dosierungen verwendet, ist bevorzugt. Die parenterale Verabreichung kann jedoch auch bei höheren Dosierungen verwendet werden, wenn sie sicher und zweckmäßig für den Patienten ist.
Optimale Dosierungen zur Verabreichung können leicht durch die Fachleute festgestellt werden und werden mit dem besonderen verwendeten TPO-Mimetikum, der Konzentration der Zubereitung, dem Verabreichungsmodus und dem Fortschreiten des Krankheitszustands variieren. Zusätzliche Faktoren, die vom besonderen behandelten Patienten abhängen, werden zu der Notwendigkeit führen, die Dosierungen anzupassen, einschließlich Patientenalter, -gewicht, -ernährung und Zeitpunkt der Verabreichung.
Diese Erfindung kann in einem oder für ein Verfahren zur Induzierung von TPO-mimetischer Aktivität in Säugetieren, einschließlich Menschen, verwendet werden, umfassend das Verabreichen einer wirksamen TPO-mimetischen Menge einer pharmazeutisch aktiven Verbindung der vorliegenden Erfindung an einen Patienten, der solcher Aktivität bedarf.
Die Erfindung stellt auch die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung als TPO-Mimetikum bereit.
Die Erfindung stellt auch die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Steigerung der Blutplättchenproduktion bereit.
Die Erfindung stellt auch die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung von Thrombozytopenie bereit.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung als TPO-Mimetikum, die eine Verbindung der Formel (2) und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst, kann in der Erfindung verwendet werden.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in der Behandlung von Thrombozytopenie, die eine Verbindung der Formel (I) und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst, kann in der Erfindung verwendet werden.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in der Steigerung der Blutplättchenproduktion, die eine Verbindung der Formel (I) und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst, kann in der Erfindung verwendet werden.
Keine inakzeptablen toxikologischen Wirkungen werden erwartet, wenn Verbindungen der Erfindung in Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung verabreicht werden.
Zusätzlich sind die pharmazeutisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung nützlich zur Co-Verabreichung mit weiteren aktiven Bestandteilen, wie zum Beispiel anderen Verbindungen, die zur Behandlung von Thrombozytopenie bekannt sind, einschließlich Chemotherapie-induzierter Thrombozytopenie und Knochenmarktransplantation und anderer Zustände mit verringerter Blutplättchenproduktion, oder mit Verbindungen, deren Nutzen bekannt ist, wenn sie in Kombination mit einem TPO-Mimetikum verwendet werden.
Ohne weitere Ausführung wird angenommen, daß ein Fachmann unter Verwendung der vorangehenden Beschreibung die vorliegende Erfindung in ihrem weitestgehenden Ausmaß nutzen kann. Die folgenden Beispiele sollen daher bloß als Illustration und nicht als Beschränkung der Erfindung in irgendeiner weise aufgefaßt werden.
Experimentelle Einzelheiten
Beispiel 1
Herstellung der Verbindung 1: 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrochloriddihydrat

a) 4,8,11-Tris(p-tolylsulfonyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan Eine Lösung aus Tosylchlorid (8,1 g, 43 mmol) in Chloroform (300 ml) wurde über einen Zeitraum von 2 h zu einer Lösung aus 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecan (4,28 g, 21 mmol) in Chloroform (150 ml) und Triethylamin (18 ml), die auf 45°C gehalten wurden, getropft. Nach Stehenlassen der Mischung bei Raumtemperatur über Nacht wurde Wasser (40 ml) hinzugetropft. Die organische Schicht wurde abgetrennt, getrocknet (Na₂SO₄) und zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand wurde in heißem Methanol (40 ml) gelöst und auf Raumtemperatur abgekühlt, um ein weißes Öl zu liefern. Die Methanollösung wurde abdekantiert und das Öl mit weiterem Methanol verrieben, um weiße Kristalle von 7-H₂O der Titelverbindung (5,5 g, 33 %) zu ergeben. Eine zweite Ausbeute des Tritosylderivats wurde durch Eindampfen der Mutterlauge der ersten Ausbeute zur Trockene, Auflösen des resultierenden klebrigen Öls in Chloroform (150 ml) und Triethylamin (10 ml) und Zugeben von Tosylchlorid (2 g, 10 mmol), das in Chloroform (10 ml) gelöst war, zur Lösung bei 45°C in 40 min erhalten. Standardaufarbeitung der Lösung ergab weiße Kristalle von 7-H₂O der Titelverbindung (2,1 g, 13 %). MS (ESP) m/z 663 [M + H]⁺.
b) 1,1'-(1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[4,8,11-tris(p-tolylsulfonyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan] Zu einer Lösung aus der Verbindung aus Beispiel 1(a) (5,5 g, 8,3 mmol) in Acetonitril (80 ml) wurden α,α'-Dibrom-p-xylol (1,08 g, 4,1 mmol) und Kaliumcarbonat (3,4 g, 25 mmol) gegeben. Die Reaktion wurde für 18 h unter schnellem Rühren refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen und aufkonzentriert, und der Rückstand wurde zwischen Methylenchlorid und Wasser aufgetrennt. Die wäßrige Phase wurde abgetrennt und mit zwei weiteren Teilen Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol gewaschen, um die Titelverbindung als gelben Feststoff (5,62 g, 89%) zu ergeben. MS (ESP) m/z 714 [M + 2H]²⁺.
c) 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrobromiddihydrat Eine schnell gerührte Lösung der Verbindung aus Beispiel 1(b) (1,94 g, 1,36 mmol) in 9 ml Essigsäure und 6 ml Bromwasserstoffsäure (Aldrich, 48 %ig, wäßrig) wurde für 48 h auf 100°C erwärmt, wobei ein kristalliner Feststoff aus der brauen Lösung ausfiel. Nach Abkühlen wurde der Feststoff durch Filtration aufgefangen und mit Essigsäure und Diethylether gewaschen und im Vakuum über Nacht getrocknet, um das Hydrobromidsalz der Titelver bindung als weißes Pulver (0,77 g, 48 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 503 [M + H]⁺.
d) 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrochloriddihydrat Die wäßrige Lösung (5 ml) des Hydrobromidsalzes der Verbindung aus Beispiel 1(c) (0,47 g) wurde mit 1 N Natriumhydroxid auf pH 7 neutralisiert. Die Lösung wurde mit 2 ml Methylenchlorid extrahiert. Die wäßrige Schicht wurde auf pH > 14 neutralisiert und mit Methylenchlorid extrahiert. Die organische Schicht wurde getrocknet (Na₂SO₄) und aufkonzentriert. Der Rückstand wurde in 1 ml Ethanol, das in einem Eisbad gekühlt war, gelöst. Circa 1 ml konzentrierte Salzsäure (Aldrich, 38 %ig, wäßrig) wurde hinzugetropft, um einen weißen Niederschlag zu ergeben. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethanol und Diethylether gewaschen und im Vakuum getrocknet, um die Titelverbindung (0,124 g, 38 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 503 [M + H]⁺.

Beispiel 2
Herstellung der Verbindung 2: 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrobromiddihydrat

a) 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[4,8,11-tris(p-tolylsulfonyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan] Zu einer Lösung aus der Verbindung aus Beispiel 1(a) (0,98 g, 1,48 mmol) in Acetonitril (40 ml) wurden α,α'-Dibrom-m-xylol (0,20 g, 0,74 mmol) und Kaliumcarbonat (0,61 g, 4,4 mmol) gegeben. Die Reaktion wurde für 18 h unter schnellem Rühren refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen und aufkonzentriert, und der Rückstand wurde zwischen Methylenchlorid und Wasser aufgetrennt. Die wäßrige Phase wurde abgetrennt und mit zwei weiteren Teilen Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol gewaschen, um die Titelverbindung als gelben Feststoff (0,86 g, 81 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 714 [M + 2H]²⁺.
b) 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrobromiddihydrat Eine schnell gerührte Lösung aus der Verbindung aus Beispiel 2(a) (0,49 g, 0,34 mmol) in 6 ml Essigsäure und 3 ml Bromwasserstoffsäure (Aldrich, 48 %ig, wäßrig) wurde für 48 h auf 100°C erwärmt, wobei ein kristalliner Feststoff aus der braunen Lösung ausfiel. Nach Abkühlen wurde der Feststoff durch Filtration aufgefangen und mit Essigsäure und Diethyl ether gewaschen und im Vakuum über Nacht getrocknet, um die Titelverbindung als weißes Pulver (0,25 g, 59 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 503 [M + H]⁺.

Beispiel 3: Kapselzusammensetzung
Eine orale Arzneiform zur Verabreichung eines vorliegend erfundenen Agonisten des TPO-Rezeptors wird durch Füllen einer zweiteiligen Standard-Hartgelatinekapsel mit den Bestandteilen in den in der nachfolgenden Tabelle I gezeigten Anteilen hergestellt.
Tabelle I
Beispiel 4: Injizierbare parenterale Zusammensetzung
Eine injizierbare Form zur Verabreichung eines vorliegend erfundenen Agonisten des TPO-Rezeptors wird durch Rühren von 1,5 Gew.% 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrochloriddihydrat (Verbindung 1) in 10 Vol.% Propylenglycol in Wasser hergestellt.
Beispiel 5: Tablettenzusammensetzung
Saccharose, Calciumsulfatdihydrat und ein vorliegend erfundener Agonist des TPO-Rezeptors, wie in der nachfolgenden Tabelle II gezeigt, werden vermischt und in den gezeigten Anteilen mit einer 10 %igen Gelatinelösung granuliert. Die feuchten Granalien werden gesiebt, getrocknet, mit der Stärke, dem Talkum und der Stearinsäure vermischt, gesiebt und zu einer Tablette verpreßt.
Tabelle II

Claims

Verwendung einer Verbindung der Formel (I): Z-R-A-R'-Y (I)worin Z und Y unabhängig cyclische Polyamineinheiten mit 9 bis 32 Ringgliedern und 3 bis 8 Amin-Stickstoffatomen im Ring, die durch 2 oder mehr Kohlenstoffatome voneinander getrennt sind, sind; A eine aromatische oder heteroaromatische Einheit ist; und R und R' jeweils eine substituierte oder unsubstituierte Alkylenkette oder heteroatomhaltige Kette sind, die die cyclischen Polyamine und die Einheit A trennt, oder eines Säureadditionssalzes oder Metallkomplexes davon in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung von Thrombozytopenie.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin die Verbindung 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan] oder ein Säureadditionssalz oder Metallkomplex davon ist.
Verwendung gemäß Anspruch 1, worin die Verbindung 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan] oder ein Säureadditionssalz oder Metallkomplex davon ist.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in Anspruch 1 definiert, in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Steigerung der Blutplättchenproduktion in einem Säugetier, das dies benötigt, und zur Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge der Verbindung der Formel (I) an ein solches Säugetier.
Verwendung gemäß Anspruch 4, worin die Verbindung 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan] oder ein Säureadditionssalz oder Metallkomplex davon ist.
Verwendung gemäß Anspruch 4, worin die Verbindung 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan] oder ein Säureadditionssalz oder Metallkomplex davon ist.