DE69928006T2

DE69928006T2 - Lagerstabile flüssige zusammensetzungen von glucagon-ähnlichem peptid-1

Info

Publication number: DE69928006T2
Application number: DE69928006T
Authority: DE
Inventors: L. Mark BRADER; H. Allen PEKAR
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1998-12-22
Filing date: 1999-12-21
Publication date: 2006-07-13
Anticipated expiration: 2019-12-22
Also published as: ATE307603T1; DK1140148T3; EP1140148A1; JP2002532557A; CA2358107C; EP1140148B1; AU2373400A; CA2358107A1; WO2000037098A1; JP4689833B2; DE69928006D1; ES2249933T3

Description

Hintergrund der Erfindung
Das glukagonähnliche Peptid 1(7-37)-OH (GLP-1) (glucagon-like peptide-1) ist ein Hormon mit 31 Aminosäuren, das hergestellt wird durch posttranslationale Verarbeitung des Proglukagongenprodukts im Hirn, Magen, Darm und Pankreas. Die physiologische Hauptfunktion von GLP-1 ist es, die Insulinsekretion als Antwort auf Glucose zu regulieren, und daher weist es die Fähigkeit auf, Blutglucosewerte zu normalisieren. Als solches gab es ein Interesse an GLP-1, seinen Analoga und Derivaten als potentielle therapeutische Mittel für die Behandlung von Diabetes. Ein besonderer Vorteil der Verwendung von GLP-1 gegenüber anderen Arzneimitteln bei der Behandlung von Diabetes ist, dass die Verabreichung von GLP-1 bei Dosen oder Dosierungen in dem 1 bis 5 nmol Bereich wenig nachteilige Nebenwirkungen zeigt, wie Hypoglykämie. GLP-1 hat auch unerwartet gezeigt, dass es bei Patienten wirkt, die einen sekundären Defekt oder ein sekundäres Fehlschlagen oder Ausbleiben haben gegenüber Sulfonylharnstoffarzneimitteln, dem üblichsten Arzneimitteltyp für die Behandlung von Diabetes vom Typ II. GLP-1 ist auch ein potenter oder wirksamer Inhibitor oder Hemmer der Magensäuresekretion und Magenentleerung.
Im Allgemeinen kann eine wirksame therapeutische Verabreichung von Peptiden problematisch sein, da Peptide oft im Gastrointestinaltrakt durch verschiedene Peptidasen abgebaut werden. Außerdem benötigen bestimmte Peptidbehandlungsprotokolle entweder eine kontinuierliche oder wiederholte Verabreichung des Peptidmittels über einen ausgedehnten Zeitraum. Wiederholte Injektionen verursachen sowohl Unbequemlichkeit oder Misslichkeit und Beschwerden oder Unannehmlichkeiten beim Verbraucher. Daher würde die chronische Verwendung des Peptidmittels, das benötigt werden würde für Patienten, die unter Diabetes leiden, zu Unbequemlichkeit und Unannehmlichkeiten für den Verbraucher führen.
Die Langzeitstabilität von Peptiden, insbesondere GLP-1, als Bestandteile einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verabreichung an Säuger ist zweifelhaft. Ein solcher Mangel an Stabilität beeinträchtigt nachteilig die Bioverfügbarkeit. In der Tat wurden bereits elf Monate nach der Probenzubereitung Nebenprodukte von GLP-1(7-37) gefunden, wenn sie bei niedrigen Temperaturen von 4°C gelagert wurden (siehe Mojsov, Int. J. Peptide Protein Res., Band 40, Seiten 333 bis 343 (1992)). Außerdem ist die biologische Halbwertszeit von GLP-1 Molekülen ziemlich kurz, besonders von solchen Molekülen, die durch die Wirksamkeit von Dipeptidylpeptidase IV (DPPIV) beeinträchtigt wurden. Die biologische Halbwertszeit von GLP-1(7-37) beträgt z.B. nur 3 bis 5 min (siehe US-Patent mit der Nummer US 5 118 666 ), was zusätzlich vergrößert wird durch seine schnelle Absorption auf eine parenterale Verabreichung an einen Säuger.
Ein weiterer Faktor, der die Bioverfügbarkeit von GLP-1 senkt, ist die Löslichkeit von GLP-1, wenn es in eine wässrige Lösung einverleibt wird. Die Löslichkeit von GLP-1 ist in hohem Maße abhängig von der Umgebung, wie der Auswahl des Puffersystems, und der Behandlung, der das Peptid unterworfen wurde. Z.B. spielt eine Umwandlung eines Peptids in sein Salz eine Rolle bei seiner Löslichkeit. In diesem Zusammenhang ist synthetisches GLP-1 stark oder gut löslich in neutraler Phosphat gepufferter Salzlösung. Weil die Löslichkeit des Peptids hoch ist in solchen wässrigen Lösungen, kann die langsame Freisetzung des Peptids schwierig zu erreichen sein, es sei denn, dass das Peptid in ein System für eine langsame Freisetzung einverleibt wird.
Stabile Formulierungen von therapeutischen Mitteln werden besonders benötigt zur Verwendung bei Abgabesystemen, die diese Mittel freisetzen bei erhöhten Temperaturen und/oder mechanischer Belastung. Stabile GLP-1 Formulierungen werden z.B. benötigt zur Verwendung in kontinuierlichen Infusionssystemen und Stiftabgabevorrichtungen. Derzeitige Formulierungen stellen nur begrenzte Stabilität in diesen Typen von Abgabevorrichtungen bereit.
In kontinuierlichen Infusionssystemen wird eine Flüssigkeit, die ein therapeutisches Mittel enthält, aus einem Vorrat oder Reservoir, in der Regel in ein subkutanes, intravenöses oder intraperitoneales Depot gepumpt. Der Vorrat, der periodisch nachgefüllt werden muss, ist an dem Körper des Patienten befestigt oder ist in den Körper des Patienten implantiert. In jedem Fall verleihen die Körperwärme des Patienten und die Bewegung des Körpers und die Turbulenz in dem Leitungssystem und der Pumpe eine relativ hohe Menge an thermomechanischer Energie an die Formulierung. Im Interesse einer Minimierung der Frequenz, mit der der Vorrat wieder aufgefüllt wird, und der Minimierung der Größe des Vorrats sind Formulierungen vorteilhaft, die eine relativ hohe Konzentration des therapeutischen Mittels aufweisen.
Injektorstifte (injector pens) wurden auch entwickelt, um es Diabetespatienten zu erlauben, kontrollierte Dosen von insulinotropen Mitteln genau zu messen und zu verabreichen. Im Allgemeinen sind diese Stifte gesichert auf einer Kartusche, die eine besondere Menge der flüssigen Medikation aufweist, die darin verschlossen ist. Die Kartusche schließt einen Kolben oder Stempel ein und einen Mechanismus für den Vortrieb des Kolbens in der Kartusche in einer solchen Art und Weise, um die Medikation abzugeben. Injektorstifte können wieder verwendbar oder nur einmal verwendbar sein. In wieder verwendbaren Stiften kann ein Verbraucher eine verbrauchte Kartusche wechseln und die Führungsschraube des Stiftes zurück in seine Anfangsposition zurücksetzen. Bei einem Einmalstift ist die Kartusche permanent gefangen in dem Stift, der weggeworfen wird, nachdem die Inhalte der Kartusche aufgebraucht sind.
Mit der Entwicklung von GLP-1 sowie Analoga und Derivaten davon für die Behandlung von Diabetes gibt es einen Bedarf daran, Behandlungskuren zu verbessern, die eine chemische und physikalische Stabilität ausgleichen können mit chronischen Verwendungserfordernissen von diabetischen Patienten.
Die WO 96 20 005 A offenbart eine thixotrope Zusammensetzung, die eine GLP-1 Verbindung enthält, die eine lang anhaltende Wirkung aufweist.
Die EP 0 733 644 A1 offenbart Komplexe, die aus bestimmten GLP-1 Molekülen bestehen, die verbunden sind mit einem zweiwertigen Metallkation, das im Stande ist, zur Copräzipitatierung oder gemeinsamen Ausfällung mit einem GLP-1 Molekül.
Zusammenfassung der Erfindung
Um die Probleme der chemischen und physikalischen Stabilität von GLP-1 Formulierungen zu überwinden, entwickelten die Erfinder der vorliegenden Erfindung eine lagerstabile Lösungsformulierung von GLP-1. Insbesondere entdeckten die Erfinder, dass, wenn bestimmte physiologisch tolerierte Puffer verwendet werden in Formulierungen von GLP-1, die physikalische Stabilität von solchen Formulierungen unerwartet und beträchtlich größer ist im Vergleich zu GLP-1 Formulierungen, die hergestellt sind mit einem Phosphatpuffer. Außerdem verbessert das Beibehalten des pH in einem Bereich von 8,2 bis 8,8 unerwartet die chemische Stabilität der Formulierungen. Die lagerstabile Formulierung von GLP-1 der Erfindung umfasst eine therapeutisch wirksame Menge eines GLP-1 Moleküls, ein pharmazeutisch annehmbares Konservierungsmittel und einen Tonizitätsmodifikator, wobei der pH der Formulierung in dem Bereich von 8,2 bis 8,8 gehalten wird.
Gemäß den chemischen und physikalischen Stabilitätsanforderungen von GLP-1 Formulierungen stellt die vorliegende Erfindung eine lagerstabile pharmazeutische Lösungsformulierung bereit, die eine therapeutisch wirksame Menge eines GLP-1 Moleküls, ein pharmazeutisch annehmbares Konservierungsmittel und einen Tonizitätsmodifikator umfasst, wobei die Formulierung einen pH aufweist, der 8,2 bis 8,8 beträgt. In einer bevorzugten Ausführungsform schließt die Formulierung ferner einen Puffer ein, wie TRIS. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die Formulierung ein Tensid, wie Brij-35. In einer zusätzlich bevorzugten Ausführungsform ist das GLP-1 Molekül der Formulierung ein Analogon von GLP-1 und ist ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die folgende Aminosäuresequenz aufweist:
R₁-X-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Y-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Z-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₂ (SEQ ID NO: 2)
und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei R₁ für His oder Desamino-Histidin steht, X für Ala, Gly oder Val steht, Y für Glu oder Gln steht, Z für Glu oder Gln steht, und R₂ für Gly-OH steht. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das GLP-1 Molekül gemäß der SEQ ID NO: 2, wobei R₁ für L-Histidin steht, X für Val steht, Y für Glu steht, Z für Glu steht und R₂ für Gly-OH steht. In einer weiteren oder alternativ bevorzugten Ausführungsform ist das GLP-1 Molekül der Formulierung ein Derivat von GLP-1 und ist ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die Aminosäuresequenz aufweist:
NH₂-His⁷-Ala-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-X (SEQ ID NO: 3)
und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei X ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Lys und Lys-Gly; einem pharmazeutisch annehmbaren Niederalkylester des Peptids und einem pharmazeutisch annehmbaren Amid des Peptids, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amid, Niederalkylamid und Niederdialkylamid. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die Formulierung auch ein lang wirkendes Insulinmittel.
Die vorliegende Erfindung beschreibt auch die Steigerung der Expression von Insulin in einer Säugerpankreas-β-Typ-Inselchenzelle, die einer solchen Steigerung bedarf, umfassend eine Verabreichung einer wirksamen Menge einer lagerstabilen pharmazeutischen Formulierung an die Zelle, wobei die Formulierung eine therapeutisch wirksame Menge eines GLP-1 Moleküls, eines pharmazeutisch annehmbaren Konservierungsmittels und eines Tonizitätsmodifikators umfasst, und wobei die Formulierung einen pH aufweist, der 8,2 bis 8,8 beträgt. Bei einer bevorzugten Ausführungsform umfasst die Formulierung, die in einem therapeutischen Verfahren verwendet wird, einen Puffer, wie TRIS. Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die Formulierung, die in dem therapeutischen Verfahren verwendet wird, ein Tensid, wie Brij-35. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist das GLP-1 Molekül der Formulierung, die auf diese Weise verabreicht wird, ein Analogon von GLP-1, und ist ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die folgende Aminosäuresequenz aufweist:
R₁-X-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Y-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Z-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₂ (SEQ ID NO: 2)
und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei R₁ für His oder Desamino-Histidin steht, X für Ala, Gly oder Val steht, Y für Glu oder Gln steht, Z für Glu oder Gln steht, und R₂ für Gly-OH steht. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das verabreichte GLP-1 Molekül gemäß der SEQ ID NO: 2, wobei R₁ für L-Histidin steht, X für Val steht, Y für Glu steht, Z für Glu steht und R₂ für Gly-OH steht. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist das verabreichte GLP-1 Molekül ein Derivat von GLP-1 und ist ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die folgende Aminosäuresequenz aufweist:
NH₂-His⁷-Ala-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-X (SEQ ID NO: 3)
und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei X ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Lys und Lys-Gly; einem pharmazeutisch annehmbaren Niederalkylester des Peptids und einem pharmazeutisch annehmbaren Amid des Peptids, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amid, Niederalkylamid und Niederdialkylamid.
Die vorliegende Erfindung beschreibt auch die Behandlung von Diabetes durch Verabreichung einer wirksamen Menge einer lagerstabilen pharmazeutischen Formulierung an einen Patienten, der einer solchen Behandlung bedarf, wobei die Formulierung eine therapeutisch wirksame Menge eines GLP-1 Moleküls, eines pharmazeutisch annehmbares Konservierungsmittel und einen Tonizitätsmodifikator umfasst, und wobei die Formulierung einen pH aufweist, der 8,2 bis 8,8 beträgt. In einer bevorzugten Ausführungsform umfasst die Formulierung, die bei dem therapeutischen Verfahren verwendet wird, einen Puffer, wie TRIS. Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst die Formulierung, die in dem therapeutischen Verfahren verwendet wird, ein Tensid, wie Brij-35. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist das GLP-1 Molekül der Formulierung, das auf diese Weise verabreicht wird, ein Analogon von GLP-1 und ist ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die folgende Aminosäuresequenz aufweist:
R₁-X-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Y-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Z-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₂ (SEQ ID NO: 2)
und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei R₁ für His oder Desamino-Histidin steht, X für Ala, Gly oder Val steht, Y für Glu oder Gln steht, Z für Glu oder Gln steht, und R₂ für Gly-OH steht. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform steht das GLP-1 Molekül, das verabreicht wird, für eines gemäß der SEQ ID NO: 2, wobei R₁ für L-Histidin steht, X für Val steht, Y für Glu steht, Z für Glu steht und R₂ für Gly-OH steht. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist das GLP-1 Molekül, das verabreicht wird, ein Derivat von GLP-1 und ist ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die folgende Aminosäuresequenz aufweist:
NH₂-His⁷-Ala-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-X (SEQ ID NO: 3)
und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei X ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Lys und Lys-Gly; einem pharmazeutisch annehmbaren Niederalkylester des Peptids und einem pharmazeutisch annehmbaren Amid des Peptids, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amid, Niederalkylamid und Niederdialkylamid.
Die Erfindung beschreibt die Bereitstellung einer glykämischen Kontrolle einer Mahlzeit und einer grundlegenden oder basalen glykämischen Kontrolle mit einer einzelnen Injektion durch Verabreichung einer wirksamen Menge einer lagerstabilen pharmazeutischen Formulierung an einen Patienten, der dieser bedarf, wobei die Formulierung eine therapeutisch wirksame Menge eines GLP-1 Moleküls, ein lang wirkendes Insulinmittel, ein pharmazeutisch annehmbares Konservierungsmittel und einen Tonizitätsmodifikator umfasst, wobei die Formulierung einen pH aufweist, der 8,2 bis 8,8 beträgt.
Detaillierte Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen
Die vorliegende Erfindung stellt eine lagerstabile Lösungsformulierung von GLP-1, GLP-1 Analoga und GLP-1 Derivaten bereit. Da es bekannt ist, dass es Probleme gibt mit der Langzeitstabilität von GLP-1 als Bestandteil in einer pharmazeutischen Zusammensetzung, entwickelten die Erfinder der vorliegenden Erfindung eine pharmazeutische Formulierung, die GLP-1, seine Derivate und Analoga stabilisiert. Diese Entwicklung führte zu den lagerstabilen GLP-1 Formulierungen der Erfindung.
In einer weiteren Ausführungsform umfasst die vorliegende Erfindung eine GLP-1 Formulierung, die auch ein lang wirkendes Diabetesmittel umfasst. Es war seit langem ein Ziel der Insulintherapie, die Muster der endogenen Insulinsekretion bei normalen Individuen nachzuahmen. Der tägliche physiologische Bedarf nach Insulin fluktuiert und kann in zwei Phasen getrennt werden: (a) die absorptive Phase, die einen Puls an Insulin benötigt, um den mit einer Mahlzeit oder einem Essen in Verbindung stehenden Blutglucoseanstieg oder -schub zu beseitigen, und (b) die postabsorptive Phase, die eine nachhaltige oder anhaltende Abgabe von Insulin benötigt, um den hepatischen Glucoseausstoß zu regulieren zur Aufrechterhaltung der optimalen Nüchternblutglucose oder des Nüchternblutzuckerspiegels. Demzufolge schließt eine wirksame Behandlung für Personen mit Diabetes im Allgemeinen die kombinierte Verwendung von zwei Typen von exogenen Insulinformulierungen ein: ein schnell wirkendes Insulin zur Mahlzeit oder Essenszeit, bereitgestellt durch Bolusinjektionen und ein lang wirkendes so genanntes basales Insulin oder Basisinsulin, verabreicht durch Injektion einmal oder zweimal täglich, um Blutglucosewerte oder den Blutzuckerspiegel zwischen den Mahlzeiten zu steuern oder zu kontrollieren. Beispiele von kommerziellen Basisinsulinzubereitungen schließen NPH(Neutral-Protamin-Hagedorn)-Insulin, Protamin-Zink-Insulin (PZI) und Ultralent (UL) ein.
Der Begriff „Stabilität" wird so verwendet, dass er chemische als auch physikalische Stabilität bedeutet. Physikalische Stabilität bezieht sich auf Eigenschaften, wie Proteinaggregation, die gemessen werden kann durch eine Schwächung von Licht durch eine Probe. Die Messung bezieht sich auf die Trübheit oder Turbidität einer Formulierung. Die Trübheit wird erzeugt durch Aggregation oder Kristallisation oder Präzipitation von Proteinen oder Komplexen in der Formulierung und zeigt eine herabgesetzte Stabilität einer Lösungsformulierung. Je trüber eine Proteinzubereitung ist, desto weniger stabil ist die Zubereitung. Stabilität bezieht sich auch auf die chemische Stabilität der Formulierung, wie die Neigung der Proteine Polymere hoher Ordnung zu bilden, was eine herabgesetzte Stabilität anzeigt.
Ein Faktor, der eine Rolle spielt bei der Stabilität von GLP-1 Formulierungen, ist die Beibehaltung eines pH bei einem vorgeschriebenen Wert. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung fanden insbesondere, dass ein Erreichen und Beibehalten des pH der Formulierung bei 8,2 bis 8,8 vorteilhaft ist. Typische Peptidformulierungen weisen einen neutraleren pH von 7 bis etwa 7,8 oder einen sauren pH auf. Außerdem zeigt eine Zusammensetzung, die ein GLP-1 Molekül enthält, die einen pH in dem Bereich von 6,8 bis 7,5 aufweist, eine geringere physikalische Stabilität als eine Zusammensetzung eines GLP-1 Moleküls, die ein Konservierungsmittel enthält und einen pH aufweist in dem Bereich von 8,2 bis 8,8. Eine konservierte Formulierung, die einen pH aufweist von weniger als 8,0, neigt dazu Trübheit oder Turbidität zu zeigen, ein verräterisches Zeichen für herabgesetzte oder verringerte physikalische Stabilität der Peptidformulierung. Umgekehrt neigt eine Formulierung, die einen pH von größer als 8,8 aufweist dazu, eine herabgesetzte oder erniedrigte chemische Stabilität aufzuweisen.
Daher fasst die Erfindung GLP-1 Formulierungen ins Auge, die einen pH Bereich von etwa 8,2 bis etwa 8,8 aufweisen, was eine optimale chemische und physikalische Stabilität des GLP-1 Moleküls bewahrt. Ein besonders bevorzugter Bereich für die erfindungsgemäßen GLP-1 Formulierungen liegt bei 8,3 bis 8,6 und ein am meisten bevorzugter pH Bereich liegt im Bereich von 8,4 bis 8,5.
GLP-1 Moleküle selbst zeigen ein Puffervermögen. Um den pH der Zusammensetzung für eine langfristige Lagerung und Stabilität beizubehalten ist es jedoch bevorzugt, einen Puffer zuzugeben.
Die Auswahl eines Puffers beeinflusst die chemische und physikalische Stabilität der Formulierung, da sie den pH beeinflusst. Es gibt sehr wenige pharmazeutisch annehmbare Puffer im alkalischen Bereich. Phosphatpuffer, die typischerweise verwendet werden in pharmazeutischen Peptidformulierungen, können einen pH Bereich von 8,2 bis 8,8 nicht beibehalten. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung entdeckten jedoch, dass bestimmte andere Amin-enthaltende Puffer im Stande sind, den Formulierungen von GLP-1 Molekülen sowohl chemische als auch physikalische Stabilität zu verleihen.
Die Puffer, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, stellen vorzugsweise ein Puffervermögen bereit in dem Bereich von 8,2 bis 8,8. Die Puffer, die verwendet werden, können Tromethan (TRIS) und auf Aminosäure basierenden Puffer sein, wie Lysin und Hydroxylysin. Obwohl ein beliebiger Nichtphosphatpuffer, der ein Puffervermögen im Bereich von 8,2 bis 8,8 aufweist, verwendet werden kann, ist TRIS der bevorzugte Puffer für die Formulierungen der vorliegenden Erfindung. Der Begriff „TRIS" bezieht sich auf 2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol (auch bekannt in der Technik als Tromethan, Trimethylolaminomethan oder Tris(hydroxymethyl)aminomethan), und ein beliebiges pharmakologisch annehmbares Salz davon. Die freie Base und die Hydrochloridform sind zwei übliche Formen von TRIS. TRIS ist einer der wenigen Puffer, der im Stande ist, den pH an dem gewünschten alkalischen Wert beizubehalten, um dadurch die Formulierung zu stabilisieren.
Ein zweiter Faktor, der eine Rolle spielt bei der Stabilität von GLP-1 Formulierungen, ist die Konzentration von dem GLP-1 Molekül, das verwendet wird, in der erfindungsgemäßen Formulierung. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung bestimmten, dass eine Konzentration von 0,30 bis 0,65 mg/ml des GLP-1 Moleküls in den erfindungsgemäßen Formulierungen stabil war. Eine Konzentration, die jedoch gleich oder größer war als 1 mg/ml war instabil. Diese Stabilität wurde bewiesen durch die Entwicklung der Trübung in der Formulierung. Eine besonders stabile Formulierung schließt 0,5 mg/ml von einem GLP-1 Molekül ein.
Ein zusätzlicher Faktor, der zu der Gesamtstabilität der GLP-1 Formulierungen der vorliegenden Erfindung beiträgt, ist die Wahl des Konservierungsmittels. Das Konservierungsmittel ist ein wesentlicher Bestandteil in der Formulierung, da er vielfache Verwendungen der Formulierung ermöglicht. Während es typisch ist, dass die meisten Konservierungsmittel in der Lage sein würden zur Stabilisierung einer pharmazeutischen Formulierung, wirken einige pharmazeutisch annehmbare Konservierungsmittel, um eine physikalische Instabilität der Formulierung zu fördern. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung fanden, dass ein phenolisches Konservierungsmittel bevorzugt ist. Das Konservierungsmittel kann insbesondere m-Cresol, Phenol, Benzylalkohol oder Methylparaben sein und liegt in einer Menge von etwa 2 mg/ml bis etwa 6 mg/ml vor. Schließlich hängt die Konzentration des Konservierungsmittels, das notwendig ist für eine wirksame Konservierung, ab von dem verwendeten Konservierungsmittel, dem pH der Formulierung und ob Substanzen ebenso vorliegen, die das Konservierungsmittel binden oder in Beschlag nehmen. Vorzugsweise wird m-Cresol in den Formulierungen als Konservierungsmittel verwendet.
Während ein Puffer und ein Konservierungsmittel am meisten bevorzugt in die Formulierung eingeschlossen werden, können andere zusätzliche Hilfsstoffe eingeschlossen werden, wie ein Tonizitätsmodifikator und/oder ein Tensid sowie destilliertes Wasser für Injektionen.
Der Tonizitätsmodifikator kann eingeschlossen werden, um die Formulierung isotonisch zu machen mit Körperflüssigkeit, in Abhängigkeit von dem Modus der Verabreichung oder dem Weg der Verabreichung. Die Konzentration des Tonizitätsmodifikators ist gemäß der bekannten Konzentration eines Tonizitätsmodifikators in einer Peptidformulierung. Ein vorzugsweise in der vorliegenden Erfindung verwendeter Tonizitätsmodifikator ist Glycerin.
Ein Tensid, das in die Formulierung der vorliegenden Erfindung eingeschlossen werden kann, kann kationisch, anionisch oder nicht ionisch sein. Eine bevorzugte Klasse an Tensiden ist die der Polyoxyethylenether. Ein bevorzugtes Tensid, das nützlich ist in der vorliegenden Erfindung, ist Brij-35, ein Polyoxyethylen-23-laurylether, erhältlich von ICI United States, Inc.
Die vorliegende Erfindung schließt die Verwendung nicht nur von natürlichem GLP-1, sondern auch von Analoga, Derivaten und Salzen von GLP-1 ein. Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „ein GLP-1 Molekül" auf (1) das natürlich auftretende GLP-1, das für GLP-1(7-37)-OH steht; (2) GLP-1(7-36)NH₂ sowie (3) GLP-1(7-37); (4) natürliche und synthetische funktionelle GLP-1 Analoga; (5) Derivate von GLP-1 und (6) Salze der vorstehend genannten Moleküle.
Ein „GLP-1 Analogon" ist definiert als ein Molekül, das eine oder mehrere Aminosäuresubstitutionen, -deletionen, -inversionen oder -additionen aufweist in Bezug auf GLP-1(7-37) und die D-Aminosäureformen einschließen kann. Zahlreiche GLP-1 Analoga sind in der Technik bekannt und schließen – ohne darauf beschränkt zu sein – ein: GLP-1(7-34), GLP-1(7-35), GLP-1(7-36)NH₂, Gln⁹-GLP-1(7-37), d-Gln⁹-GLP-1(7-37), Thr¹⁶-Lys¹⁸-GLP-1(7-37) und Lys¹⁸-GLP-1(7-37), Gly⁸-GLP-1(7-36)NH₂, Gly⁸-GLP-1(7-37)OH, Val⁸-GLP-1(7-37)OH, Met⁸-GLP-1(7-37)OH, Acetyl-Lys⁹-GLP-1(7-37), Thr⁹-GLP-1(7-37), D-Thr⁹-GLP-1(7-37), Asn⁹-GLP1(7-37), D-Asn⁹-GLP-1(7-37), Ser²²-Arg²³-Arg²⁴-Gln²⁶-GLP-1(7- 37), Arg²³-GLP-1(7-37), Arg²⁴-GLP-1(7-37), α-Methyl-Ala⁸-GLP1(7-36)NH₂ und Gly⁸-Gln²¹-GLP-1(7-37)OH.
Andere GLP-1 Analoga werden im Einklang mit der vorliegenden Erfindung beschrieben durch die folgende Formel:
R₁-X-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Y-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Z-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₂ (SEQ ID NO: 2),
wobei R₁ ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus L-Histidin, D-Histidin, Desamino-Histidin, 2-Aminohistidin, beta-Hydroxyhistidin, Homohistidin, alpha-Fluormethylhistidin und alpha-Methylhistidin; X ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Ala, Gly, Val, Thr, Ile und alpha-Methyl-Ala; Y ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Glu, Gln, Ala, Thr, Ser und Gly; Z ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Glu, Gln, Ala, Thr, Ser und Gly; und R₂ ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus NH₂ und Gly-OH.
GLP-1 Analoga wurden auch beschrieben in WO 91 11 457 A und schließen GLP-1(7-34), GLP-1(7-35), GLP-1(7-36) oder GLP-1(7-37) oder die Amidform davon und pharmazeutisch annehmbare Salze davon ein, die mindestens eine Modifikation aufweisen, die ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus:

(a) Substitution von Lysin an der Position 26 und/oder Position 34 durch Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin, Phenylalanin, Arginin oder D-Lysin; oder eine Substitution von Arginin an Position 36 durch Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin, Phenylalanin, Lysin oder eines D-Arginins;
(b) Substitution von Tryptophan an Position 31 durch eine oxidationsbeständige Aminosäure;
(c) Substitution von mindestens einem von: Valin an der Position 16 durch Tyrosin; Serin an der Position 18 durch Lysin; Glutaminsäure an der Position 21 durch Asparaginsäure; Glycin an der Position 22 durch Serin; Glutamin an der Position 23 durch Arginin; Alanin an der Position 24 durch Arginin; und Lysin an der Position 26 durch Glutamin; und
(d) Substitution von mindestens einem von: Alanin an der Position 8 durch Glycin, Serin oder Cystein; Glutaminsäure an der Position 9 durch Asparaginsäure, Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin oder Phenylalanin; Glycin an der Position 10 durch Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin oder Phenylalanin; und Asparaginsäure an der Position 15 durch Glutaminsäure; und
(e) Substitution von Histidin an der Position 7 durch Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin oder Phenylalanin oder die D- oder N-acylierte oder -alkylierfe Form von Histidin;

Bevorzugte GLP-1 Moleküle, die in der vorliegenden erfindungsgemäßen Formulierung verwendet werden, schließen auch Analoga von GLP-1(7-37)NH₂ und GLP-1(7-37) ein, in denen eine oder meh rere Aminosäuren, die nicht in der Originalsequenz vorliegen, addiert oder weggelassen werden; und Derivate davon. insbesondere sind His und Desaminohistidin für R₁ bevorzugt. Ala, Gly und Val sind bevorzugt an der „X"-Position. Auch Glu und Gln sind bevorzugt für die „Y"-Position. Glu und Gln sind bevorzugt an der „Z"-Position, und Gly-OH steht bevorzugt für R₂.
Ein besonders bevorzugtes GLP-1 Analogon ist bekannt als Val(8)GLP-1 (V8GLP-1) und weist eine Formel auf gemäß der SEQ ID NO: 2, wobei R₁ für L-Histidin steht, X für Val steht, Y für Glu steht, Z für Glu steht und R₂ für Gly-OH steht.
Ein „GLP-1 Derivat" ist definiert als ein Molekül, das die Aminosäuresequenz aufweist von GLP-1(7-37) oder von einem GLP-1 Analogon, aber zusätzlich eine chemische Modifikation aufweist von ein oder mehreren von seinen Aminosäureseitengruppen, α-Kohlenstoffatomen, terminalen Aminogruppen oder terminalen Carbonsäuregruppen. Eine chemische Modifikation schließt – ohne darauf beschränkt zu sein – ein: ein Zugeben oder Addieren von chemischen Resten, ein Bilden neuer Bindungen und ein Entfernen chemischer Reste. Modifikationen an Aminosäureseitengruppen schließen ohne Beschränkung ein: eine Acylierung von Lysin-ε-Aminogruppen, N-Alkylierung von Arginin, Histidin oder Lysin, Alkylierung von Glutamin- oder Asparagincarbonsäuregruppen und Deamidierung von Glutamin oder Asparagin. Modifizierungen der terminalen Aminogruppe schließen ohne Beschränkung die Desamino-, N-Niederalkyl-, N-Diniederalkyl- und N-Acylmodifizierungen ein. Modifizierungen oder Modifikationen der terminalen Carboxygruppe schließen ohne Beschränkung die Amid-, Niederalkylamid-, Dialkylamid- und Niederalkylestermodifizierungen ein: Niederalkyl steht für C₁-C₄-Alkyl. Außerdem können eine oder mehrere Seitengruppen oder Endgruppen geschützt werden durch Schutzgruppen, die dem Proteinchemiker als Fachmann bekannt sind. Das α-Kohlenstoffatom einer Aminosäure kann mono- oder dimethyliert sein.
Andere GLP-1 Derivate schließen Moleküle ein, die ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das sie folgende Aminosäuresequenz aufweist:
NH₂-His⁷-Ala-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-X (SEQ ID NO: 3)
und pharmazeutisch annehmbare Salze davon, wobei X ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Lys und Lys-Gly; und einem Derivat von dem Peptid, wobei das Peptid ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus einem pharmazeutisch annehmbaren Niederalkylester des Peptids und einem pharmazeutisch annehmbaren Amid des Peptids, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Amid, Niederalkylamid und Niederdialkylamid.
Noch andere GLP-1 Derivate, geeignet zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung, schließen Verbindungen ein, die in dem US-Patent mit der Nummer US 5 512 549 A beansprucht sind und beschrieben werden durch die Formel:
wobei R¹ ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus 4-Imidazopropionyl, 4-Imidazoacetyl oder 4-Imidazo-α,α-Dimethylacetyl; R² ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus einem unverzweigten C₆- C₁₀-Acyl oder es fehlt; R³ ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Gly-OH oder NH₂; und Xaa für Lys oder Arg steht, können in der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
„DPP-IV geschützte GLPs" beziehen sich auf GLP-1 Analoga, die resistent oder beständig sind gegen die Wirkung von DPP-IV. Diese schließen Analoga ein, die einen modifizierten oder D-Aminosäurerest in der Position 8 aufweisen und biosynthetische GLP-1 Analoga einschließen, die Gly, Val, Thr, Met, Ser, Cys oder Asp in der Position 8 aufweisen. Andere DPP-IV geschützte GLPs schließen Desamino-His⁷-Derivate ein.
„GLP-1 Peptidanaloga" sind definiert als GLP-1 Analoga oder Derivate, die acylierte Formen ausschließen.
„Biosynthetische GLP-1 Analoga" sind definiert als beliebige GLP-1 Analoga oder Derivate, die nur natürlich auftretende Aminosäurereste enthalten und daher im Stande sind, exprimiert zu werden durch lebende Zellen, einschließlich rekombinante Zellen und Organismen.
Verfahren zur Herstellung der GLP-1 Moleküle, die einverleibt werden in die lagerstabilen Formulierungen der Erfindung, sind den Fachleuten gut bekannt. In einem Verfahren werden GLP-1 Moleküle hergestellt durch gut bekannte Verfahren der Peptidsynthese, wie solche, die beschrieben sind in Merrifield (Chem. Soc., Band 85, Seite 2149, 1962). Es wird auch in Erwägung gezogen, dass die Moleküle hergestellt werden können durch Fragmentierung der natürlichen Aminosäuresequenz von GLP-1(7-37) mit z.B. einem proteolytischen Enzym. Es wird auch in Erwägung gezogen, dass rekombinante DNS- oder DNA-Techniken verwendet werden können, um die Moleküle herzustellen, wie die Verfahren von Maniatis et al. (Molecular Biology: A Laboratory Manual, CSH, 1982).
Die Verabreichung kann über eine beliebige Route oder einen beliebigen Weg erfolgen, die/der wirksam ist gemäß dem Arzt von herkömmlichem Fachwissen. Eine parenterale Verabreichung ist bevorzugt. Die parenterale Verabreichung wird im Allgemeinen verstanden als Verabreichung durch einen anderen Weg oder eine andere Route als durch eine gastrointestinale Route. Bevorzugte parenterale Wege zur Verabreichung der Formulierungen der vorliegenden Erfindung schließen intravenöse, intramuskuläre, subkutane, intraperitoneale, intraarterielle, nasale, Lungenwege und bukkale Wege ein. Intravenöse, intraperitoneale, intramuskuläre und subkutane Wege der Verabreichung der Verbindungen, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, sind die am meisten bevorzugten parenteralen Wege der Verabreichung. Intravenöse, intraperitoneale und subkutane Wege der Verabreichung der Formulierungen der vorliegenden Erfindung sind noch mehr bevorzugt. Der am meisten bevorzugte Weg der Verabreichung erfolgt über ein Stiftinjektionssystem (pen injection system), wobei entweder eine 1,5 ml Kartusche oder eine 3,0 ml Kartusche verwendet wird.
Eine Verabreichung über bestimmte parenterale Wege kann einschließen eine Einführung der Formulierung der vorliegenden Erfindung in den Körper eines Patienten durch eine Nadel oder einen Katheter, angetrieben durch eine sterile Spritze oder eine andere mechanische Vorrichtung, wie ein kontinuierliches Infusionssystem. Eine Formulierung, die durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, kann verabreicht werden unter Verwendung einer Spritze, eines Injektors, einer Pumpe oder einer anderen Vorrichtung, die in der Technik anerkannt ist für eine parenterale Verabreichung. Eine Formulierung der vorliegenden Erfindung kann auch verabreicht werden als ein Aerosol zur Absorption in eine Lunge oder in die Nasenhöhle oder in die nasale Kavität. Die Formulierungen können auch verabreicht werden durch Absorption durch Schleimhäute, wie bei einer bukkalen Verabreichung.
Die Menge einer Formulierung der vorliegenden Erfindung, die verabreicht wird, um Diabetes oder Hyperglykämie zu behandeln, hängt von einer Vielzahl von Faktoren ab, unter denen ohne Beschränkung eingeschlossen sind das Geschlecht, Gewicht und Alter des Patienten, die den Zustand oder die Erkrankung, die behandelt wird, zugrunde liegenden Ursachen, der Weg der Verabreichung und die Bioverfügbarkeit, die Persistenz des verabreichten GLP-1, seines Analogons oder seines Derivats im Körper, die Formulierung und die Stärke oder Wirksamkeit oder der Wirkstoffgehalt des GLP-1 Moleküls. Wenn die Verabreichung intermittierend oder periodisch ist, sollte die Menge pro Verabreichung auch den Zeitraum oder das Intervall zwischen den Dosen oder Dosierungen in Betracht ziehen, und die Bioverfügbarkeit des GLP-1 Moleküls der Formulierung. Eine Verabreichung der Formulierung der vorliegenden Erfindung könnte kontinuierlich sein. Es ist innerhalb des Könnens des durchschnittliches Arztes, die Dosis und Infusionsgeschwindigkeit oder Frequenz der Verabreichung der Formulierung der vorliegenden Erfindung zu titrieren, um das gewünschte klinische Ergebnis zu erreichen.
Die Formulierungen der vorliegenden Erfindung weisen insulinotrope Wirksamkeit oder Aktivität auf. Daher stellt ein weiterer Gesichtspunkt der vorliegenden Erfindung ein Verfahren bereit zur Steigerung der Freisetzung von Insulin aus Pankreasinselzellen, umfassend eine Bereitstellung der erfindungsgemäßen Formulierung, die eine wirksame Menge an GLP-1, einem GLP-1 Analogon, einem GLP-1 Derivat oder einem Salz davon enthält, an eine pankreatische Säuger-β-Typ-Inselzelle.
Dass die vorliegende Erfindung Formulierungen von GLP-1, seinen Analoga und seinen Derivaten bereitstellt, die eine außerordentlich erhöhte physikalische und chemische Stabilität aufweisen in Bezug auf Peptidformulierungen der Technik, wird aus den folgenden Daten und Beispielen leicht ersichtlich.
Die folgenden Beispiele und Zubereitungen werden nur bereitgestellt zur weiteren Veranschaulichung der Zubereitung der Formulierungen der Erfindung. Der Schutzbereich der Erfindung wird durch die folgenden Beispiele nicht beschränkt.
Beispiel 1 – Zubereitung und Testen der chemischen Stabilität
66,2 mg Val(8) GLP-1 wurde gelöst in Wasser mit 1,0 mg/ml und eingestellt auf einen pH von 8,51. Drei Formulierungen wurden wie folgt hergestellt:

(A) Ein 21,5 ml Aliquot einer Peptidlösung in Wasser wurde gemischt mit 21,5 ml 0,63% m-Cresol-3,2% Glycerin und der End-pH wurde auf 8,48 eingestellt. Die Lösung wurde durch einen 0,2 μm Filter gegeben. Dann wurden Aliquote der Lösung, die 0,5 mg/ml Peptid in 0,315% m-Cresol-1,6% Glycerin bei pH 8,48 enthielten, in parenterale Gläschen pipettiert und mit Stopfen versehen.
(B) Ein 21,5 ml Aliquot einer Peptidlösung in Wasser wurde gemischt mit 21,5 ml 0,63% m-Cresol-3,2% Glycerin-0,02 molarem L-Lysin bei pH 8,5, und der End-pH wurde auf 8,48 eingestellt. Die Lösung wurde durch einen 0,2 μm Filter gegeben. Dann wurden Aliquote der Lösung, die 0,5 mg/ml Peptid in 0,315% m-Cresol-1,6% Glycerin-0,01 molares L-Lysin bei pH 8,48 enthielten, in parenterale Gläschen pipettiert und mit Stopfen versehen.
(C) Ein 21,5 ml Aliquot einer Peptidlösung in Wasser wurde gemischt mit 21,5 ml 0,63% m-Cresol-3,2% Glycerin-0,02 molarem TRIS-Puffer bei pH 8,5, und der End-pH wurde auf 8,50 eingestellt. Die Lösung wurde durch einen 0,2 μm Filter gegeben. Dann wurden Aliquote der Lösung, die 0,5 mg/ml Peptid in 0,315% m-Cresol-1,6% Glycerin-0,01 molares TRIS bei pH 8,5 enthielten, in parenterale Gläschen pipettiert und mit Stopfen versehen.

Ein Satz an Gläschen wurde im Kühlschrank bei 4°C aufbewahrt. Ein zweiter Satz wurde bei 30°C (Raumtemperatur) aufbewahrt. Ein dritter Satz wurde im Kühlschrank aufbewahrt, aber dreimal am Tag, 5 Tage in einer Woche herausgenommen und man ließ auf Raumtemperatur erwärmen. Dann wurde der Satz zurück in den Kühlschrank gegeben.
Zu verschiedenen Zeitpunkten wurden Gläschen der drei Formulierungen bei den drei Temperaturbedingungen visuell untersucht, mit einem pH-Meter kontrolliert und nach der Hauptpeakreinheit getestet und der Gesamtkonzentration in mg/ml des Peptids gemäß HPLC. Vor einem Testen auf einer HPLC wurde das in Gläschen verschlossene Material in einer Zentrifuge zentrifugiert; der Überstand wurde auf die Säule injiziert. Die Konzentration einer frisch zubereiteten Lösung von Val(8) GLP-1 in 0,01 molarem HCl wurde durch UV-Spektroskopie bestimmt. Standards bekannter Konzentrationen wurden hergestellt durch Verdünnung dieser Lösung; diese wurden auf eine HPLC injiziert, um eine Mehrpunktstandardkurve zu erhalten. Die Hauptpeakreinheit wurde bestimmt durch Vergleich der Hauptpeakfläche mit der Gesamtfläche. Die gesamte Fläche (Hauptpeakfläche + zugehörige Substanzen) wurde überführt in die Gesamtkonzentration in mg/ml unter Verwendung der Standardkurvenparameter.
Die unten angeführte Tabelle fasst eine chemische Stabilitätsuntersuchung zusammen unter Verwendung von HPLC, um die Stärke oder Wirksamkeit oder den Wirkstoffgehalt zu quantifizieren, was zeigt, dass die Formulierung stabil ist, wenn es keinen bemerkenswerten Verlust an Peptid aus der Lösung gibt. % Reinheit ist ein Maß der Stabilität der Formulierung. Der chemische Abbau des Peptids in lösliche zugehörige oder verwandte Substanzen führt zu einem niedrigeren Reinheitswert. Die Ergebnisse in dieser Tabelle zeigen, das GLP-1 in TRIS-Puffer die höchste Reinheit und daher die höchsten Stabilitätswerte hatte.
Tabelle 1
Beispiel 2
Herstellung und physikalische Stabilitätstests
Eine Lösung von Val(8) GLP-1 in Wasser wurde eingestellt auf einen pH von 8,50 und filtriert. Die Konzentration wurde bestimmt, dass sie 5,28 mg/ml nach UV-Analyse betrug. Aliquote, die 5,00 mg Peptid enthielten, wurden in 10 ml parenterale Gefäße pipettiert und gefriergetrocknet. Nach dem Gefriertrocknen wurden die Stopfen wieder hergestellt durch Zugabe von 10,00 ml von entweder:

a) 0,315% m-Cresol-1,6% Glycerin bei pH 8,5
b) 0,315% m-Cresol-1,6% Glycerin-0,005 molarem TRIS-Puffer bei pH 8,5
c) 0,315% m-Cresol-1,6% Glycerin-0,01 molarem TRIS-Puffer bei pH 8,5

Die Trübheitsmessungen wurden am Beginn und nach 1 Monat im Kühlschrank gemessen. Alle Trübheiten für die Proben (bei Raumtemperatur) betrugen weniger als 10 NTU. Die Messungen am Anfang wurden durchgeführt auf einem Hach 2100N Turbidimeter, während die 1-Monatsmessungen durchgeführt wurden auf einem Hach 2100 AN Turbidimeter.

Claims

Lagerstabile pharmazeutische Lösungsformulierung, umfassend eine therapeutisch wirksame Menge eines GLP-1-Moleküls, ein pharmazeutisch annehmbares Konservierungsmittel und einen Tonizitätsmodifikator, wobei die Formulierung einen pH aufweist, der 8,2 bis 8,8 beträgt.
Die Lösungsformulierung nach Anspruch 1, wobei das GLP-1-Molekül ein Analogon ist von GLP-1 und ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus einem Peptid, das die folgende Aminosäuresequenz aufweist: R₁-X-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Y-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Z-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₂ (SEQ ID NO: 2) und einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon, wobei R₁ für His oder Desamino-Histidin steht, X für Ala, Gly oder Val steht, Y für Glu oder Gln steht, Z für Glu oder Gln steht, und R₂ für Gly-OH steht.
Die Lösungsformulierung nach Anspruch 2, wobei R₁ für L-Histidin steht, X für Val steht, Y für Glu steht, Z für Glu steht und R₂ für Gly-OH steht.
Die Lösungsformulierung nach Anspruch 1, wobei das GLP-1-Molekül ein Analogon ist von GLP-1 und ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus GLP-1(7-34), GLP-1(7-35), GLP-1(7-36) oder GLP-1(7-37) oder der Amidform davon ist, und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon, das mindestens eine Modifikation aufweist, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus: (a) Substitution von Lysin an der Position 26 und/oder Position 34 durch Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin, Phenylalanin, Arginin oder D-Lysin; oder eine Substitution von Arginin an Position 36 durch Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin, Phenylalanin, Lysin oder eines D-Arginins; (b) Substitution von Tryptophan an Position 31 durch eine oxidationsbeständige Aminosäure; (c) Substitution von mindestens einem von: Valin an der Position 16 durch Tyrosin; Serin an der Position 18 durch Lysin; Glutaminsäure an der Position 21 durch Asparaginsäure; Glycin an der Position 22 durch Serin; Glutamin an der Position 23 durch Arginin; Alanin an der Position 24 durch Arginin; und Lysin an der Position 26 durch Glutamin; und (d) Substitution von mindestens einem von: Alanin an der Position 8 durch Glycin, Serin oder Cystein; Glutaminsäure an der Position 9 durch Asparaginsäure, Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin oder Phenylalanin; Glycin an der Position 10 durch Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin oder Phenylalanin; und Asparaginsäure an der Position 15 durch Glutaminsäure; und (e) Substitution von Histidin an der Position 7 durch Glycin, Serin, Cystein, Threonin, Asparagin, Glutamin, Tyrosin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Methionin oder Phenylalanin oder die D- oder N-acylierte oder -alkylierte Form von Histidin; wobei bei den Substitutionen, die unter (a), (b), (d) und (e) beschrieben sind, die substituierten Aminosäuren gegebenenfalls in der D-Form vorliegen können, und die Aminosäuren, die an der Position 7 substituiert sind, gegebenenfalls in der N-acylierten oder N-alkylierten Form vorliegen können.
Die Lösungsformulierung nach Anspruch 4, wobei das GLP-1-Molekül eine Substitution von Lysin an der Position 34 durch Arginin aufweist.
Die Lösungsformulierung von Anspruch 1, wobei das GLP-1-Molekül für ein GLP-1-Analogon steht, das beständig ist gegenüber der Wirkung von Dipeptidylpeptidase IV.
Die Lösungsformulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Formulierung einen pH aufweist, der 8,3 bis 8,6 beträgt.
Die Lösungsformulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, die zusätzlich einen Puffer umfasst.
Die Lösungsformulierung nach Anspruch 8, wobei der Puffer für TRIS steht.