DE69733674T2

DE69733674T2 - Purinhemmer von cyclinabhängiger Kinase 2 und IκB-α

Info

Publication number: DE69733674T2
Application number: DE69733674T
Authority: DE
Inventors: T. Robert LUM; Lynn Cheri BLUM; Richard Mackman; M. Michael WICK; R. Steven SCHOW
Original assignee: CV Therapeutics Inc
Current assignee: Gilead Palo Alto Inc
Priority date: 1996-08-02
Filing date: 1997-08-01
Publication date: 2006-05-04
Anticipated expiration: 2017-08-02
Also published as: DK1021186T3; CN1231611A; KR100403336B1; CZ33899A3; GEP20022786B; NO323775B1; CA2262454C; EP1021186A4; SI1021186T1; IL128323A0; CN1161356C; ATE298572T1; WO1998005335A1; HUP9902414A3; US5866702A; ES2242981T3; EP1021186B1; AU731778B2; JP2000515550A; UA71890C2

Description

Die Erfindung betrifft 2,6,9-trisubstituierte Purine, die selektive Inhibitoren von Zellzyklus-Kinasen und Inhibitoren der Zellproliferation sind. Die Purine sind zum Beispiel beim Behandeln von Autoimmunerkrankungen, z.B. rheumatoider Arthritis, Lupus, Typ I-Diabetes, Multipler Sklerose, etc., beim Behandeln von Krebs, cardiovaskulärer Erkrankung wie Restenose, Wirt-Transplantat-Erkrankung, Gicht, polyzystischer Nierenerkrankung und anderen proliferativen Erkrankungen, deren Pathogenese eine abnormale Zellproliferation beinhaltet, verwendbar.
Die Erfindung betrifft auch 2,6,9-trisubstituierte Purine, von denen festgestellt wurde, dass sie wirksame und spezifische Inhibitoren der IκB-α-Kinase sind, die eine Signal-induzierte NF-κB-Aktivierung und Cytokin-Synthese in vitro und in vivo hemmt. Von solchen Inhibitoren wird erwartet, dass sie die Synthese von Cytokinen und Adhäsionsproteinen, deren Synthese transkriptionell durch NF-κB reguliert ist, hemmen. Proinflammatorische Cytokine wie IL-1, IL-6, TNF und Adhäsionsproteine (z.B. ICAM, VCAM und Selektine) gehören zu dieser Klasse von Molekülen und wurden mit der Pathogenese von inflammatorischen Erkrankungen in Zusammenhang gebracht. Folglich ist ein wirksamer Inhibitor der IκB-α-Kinase bei der klinischen Behandlung von Erkrankungen verwendbar, bei denen eine NF-κB-Aktivierung für die Induktion der Erkrankung benötigt wird.
In den letzten Jahren haben Fortschritte in der Molekular- und Zellbiologie zu unserem Verständnis der Mechanismen einer Zellproliferation und von spezifischen Vorgängen, die während einer Entwicklung von Zellen über Mitose auftreten, beigetragen. Vergleiche z.B. "Progress in Cell Cycle Research", Band 1, Herausgeber L. Meijer, S. Guidet und H. Y. L. Tung, Plenum Press, New York, 1995. Diese Untersuchungen zeigten, dass ein Voranschreiten durch den Zellzyklus durch eine Familie von Serin/Threonin-Kinasen, die Cyclin-abhängige Kinasen genannt werden, gesteuert wird. Diese Enzyme enthalten (a) ein katalytisches Protein, das Cyclin-abhängige Kinase (CDK) genannt wird, die ATP als ein Substrat verwendet, und (b) ein Regulatorprotein, das Cyclin genannt wird. Unterschiedliche Cyclin-CDK- Kombinationen steuern Vorgänge wie Wachstum, DNA-Replikation und Zellteilung. Ein Schlüsselmitglied der CDK-Enzymfamilie ist CDK2. Es wurde gezeigt, dass eine CDK2-Aktivität wesentlich für das Voranschreiten im Säugerzellzyklus an der G1/S-Grenze ist. Eine Mikroinjektion von Antikörpern, die gegen CDK2 gerichtet sind, blockiert das Voranschreiten von menschlichen diploiden Fibroblasten in die S-Phase des Zellzyklus. Eine Expression einer dominant negativen CDK2-Mutanten in humanen Osteosarkomzellen weist eine ähnliche Wirkung auf. Zusammen zeigen diese Untersuchungen, dass eine Hemmung einer zellulären CDK2-Aktivität ein Voranschreiten von Zellen durch den mithotischen Zyklus verhindern und einen Wachstumsstopp vor der S-Phase induzieren wird. Übereinstimmend mit dieser Ansicht haben in vitro-Untersuchungen mit Olomoucin (2-(Hydroxyethylamino)-6-benzylamino-9-methylpurin) gezeigt, dass diese Verbindung ein spezifischer Inhibitor von CDK2 mit einem IC₅₀-Wert von etwa 2,1 μg/ml ist; J. Vesely et al., Eur. J. Biochem. 224, 771–786 (1994), L. Meijer "Chemical Inhibitors of Cyclin-Dependent Kinases" Seiten 351–356 in "Progress in Cell Cycle Research", Band 1, Herausgeber L. Meijer, S. Guidet und H. Y. L. Tung, Plenum Press, New York, 1995. In vivo-Untersuchungen unter Verwendung von Säugerzellen in Kultur haben gezeigt, dass Olomoucin eine Zellproliferation bei einer ungefähren Konzentration von 50 μg/ml hemmt.
Erfindungsgemäß haben wir mehrere Verbindungen entwickelt, deren biologische Aktivität merklich wirksamer ist als die von Olomoucin. In vivo-Untersuchungen unter Verwendung von Säugerzellen zeigen, dass einige der beschriebenen Verbindungen eine Zellproliferation bei Konzentrationen hemmen, die signifikant niedriger sind als die von Olomoucin.
Kürzlich wurde eine IκB-α-Kinase-Aktivität in dem Cytoplasma von stimulierten menschlichen Nabelschnurvenen-Endothelzellen beschrieben (Bennett et al. (1996), J. Biol. Chem. 271, 19680–19688). Einige der erfindungsgemäßen Verbindungen wurden als wirksame und spezifische Inhibitoren von IκB-α-Kinase identifiziert, die eine Signal-induzierte NF-κB-Aktivierung und Cytokin-Synthese in vitro und in vivo verhindert. Die Aktivierung des heterodimerischen Transkriptionsfaktors NF-κB ist ein komplexer Vorgang. In nicht stimulierten Zellen befindet sich das NF-κB (p50/p65)-Heterodimer in dem Cytosol, in dem es mit einer inhibitorischen Untereinheit IκB-α komplexiert ist. IκB-α bindet an NF-κB, was folglich dessen Kernlokalisationssignal maskiert und eine Translokation zu dem Kern verhindert. Nach Stimulierung der Zellen mit einer Vielzahl von Signalen (z.B. Lipopolysaccharid) wird IκB-α schnell phosphoriliert, ubiquitiniert und durch das Proteasom abgebaut. Ein Abbau von IκB-α ermöglicht die Translokation von NF-κB zu dem Kern, wo es eine Transkription einer Reihe von inflammatorischen Antwort-Genen aktiviert.
Diese Feststellungen legen nahe, dass IκB-α-Kinase ein attraktives Ziel für die Identifizierung von Inhibitoren ist, die bei der Behandlung von inflammatorischen Erkrankungen, bei denen eine NF-κB-Aktivierung für die Induktion der Erkrankung benötigt wird, verwendbar sein können.
Veselý et al., European Journal of Biochemistry, Band 224, 771–786, beschreiben eine Untersuchung, die die Hemmung von Cyclin-abhängigen Kinasen durch Purinanaloga betrifft. Diese Referenz beschreibt unter anderem 2-(2-Hydroxyethylamino)-6-benzylamino-9-methylpurin.
Die US-A-5,508,277 betrifft Pyrimidinverbindungen für eine Verwendung als Arzneimittel, wobei die Verbindungen und physiologisch verträgliche Salze davon in Therapeutika, insbesondere zum Unterdrücken einer Tumorzellresistenz gegenüber antineoplastischen Mitteln, verwendet werden können.
Die US-A-5,498,819 betrifft Griseolsäure-Derivate mit verschiedenen Gruppen, die an den Zuckeranteil anstelle der Adeningruppe von Griseolsäure selbst gebunden sind. Diese Gruppen sind alle Purinderivate oder Ring-geöffnete Analoga. Diese Verbindungen sind als Inhibitoren von Phosphodiesterasen verwendbar.
Die WO-A-93/17020 betrifft bestimmte Purinnukleosid-Analoga mit einem carbocyclischen Ring anstelle des Zuckerrests, Salze, Ester und pharmazeutisch verträgliche Derivate davon, Verfahren zu deren Herstellung, pharmazeutische Formulierungen, die diese enthalten, und die Verwendung solcher Verbindungen in der Therapie, insbesondere der Behandlung oder Prophylaxe von bestimmten Infektionen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Eine erfindungsgemäße Aufgabe ist die Bereitstellung von 2,6,9-trisubstituierten Purinverbindungen, die die Cyclin-abhängige Kinase 2 hemmen.
Eine weitere erfindungsgemäße Aufgabe ist die Bereitstellung von 2,6,9-trisubstituierten Purinverbindungen, die zum Hemmen der Zellproliferation geeignet sind.
Die Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine 2,6,9-trisubstituierte Purinverbindung und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst und zum Hemmen der Zellproliferation in Säugern geeignet ist.
In einem Aspekt wird erfindungsgemäß eine Verbindung gemäß Anspruch 1 der allgemeinen Formel:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon bereitgestellt, worin
R₁ ein Halogenatom ist,
R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxygruppe, Halogenatom und -C(O)R-Gruppe, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder
eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -O-Alkylgruppe, Halogenatom, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, Mercapto-, Alkylthiol-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, Cyan-, Aryloxy-, Alkenyl-, Alkinyl-, -C(O)Alkylgruppe, oder
Aryl- oder Heteroarylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Niederalkyl-, Alkoxygruppe, Halogenatom, Mercapto-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, -C(O)Alkyl-, Hydroxy-, Aryl-, Aryloxy-, Heteroaryl-, Nitro- oder Cyangruppe, sind und
R₃ ein Halogenatom, eine -NR₄R₅-Gruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel:
ist, worin m, n und o unabhängig voneinander den Wert 1, 2 oder 3 aufweisen,
Y eine -NR₄R₅-, Hydroxy-, Mercapto-, -OR-, Alkylthiolgruppe ist und
R₄, R₄', R₄'', R₄''', R₅, R₅'' und R₅''' jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe,
Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, NRR'-Gruppe oder
Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, oder
Y und R₄' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder
R₄'' und R₅'' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder
R₄''' und R₅''' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können.
In einem weiteren Aspekt wird erfindungsgemäß eine Verbindung gemäß Anspruch 7 der allgemeinen Formel:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon bereitgestellt, worin
R₁ eine -NHR₁'-Gruppe ist,
R₁' eine Chinolin-3-yl- oder Chinolin-6-ylgruppe ist oder
R₁' eine Benzylgruppe ist, wobei der Ringanteil mit einer, zwei oder drei Gruppen substituiert ist, ausgewählt aus Halogenatom, -OR-, Thienyl-, Nitro-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder
Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, oder
R₁' eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Brom-, Iodatom, -OR''-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder
Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist,
R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxygruppe, Halogenatom und -C(O)R-Gruppe, ist R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder
eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -O-Alkylgruppe, Halogenatom, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, Mercapto-, Alkylthiol-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, Cyan-, Aryloxy-, Alkenyl-, Alkinyl-, -C(O)Alkylgruppe, oder
Aryl- oder Heteroarylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Niederalkyl-, Alkoxygruppe, Halogenatom, Mercapto-, Alkylthiol-, Acetylen-, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, -C(O)Alkyl-, Hydroxy-, Aryl-, Aryloxy-, Heteroaryl-, Nitro- oder Cyangruppe, sind,
R'' ein Wasserstoffatom oder
eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -O-Alkylgruppe, Halogenatom, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, Mercapto-, Alkylthiol-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, Cyan-, Aryloxy-, Alkenyl-, Alkinyl-, -C(O)Alkylgruppe, oder
Aryl- oder Heteroarylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Niederalkyl-, Alkoxygruppe, Halogenatom, Mercapto-, Alkylthiol-, Acetylen-, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, -C(O)Alkyl-, Hydroxy-, Aryl-, Aryloxy-, Heteroaryl-, Nitro- oder Cyangruppe, ist,
R₃ ein Halogenatom, eine -NR₄R₅-Gruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel:
ist, worin m, n und o unabhängig voneinander den Wert 1, 2 oder 3 aufweisen,
Y eine -NR₄R₅-, Hydroxy-, Mercapto-, -OR-, Alkylthiogruppe ist und
R₄, R₄', R₄'', R₄''', R₅, R₅'' und R₅''' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe,
Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe, oder
Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, oder
Y und R₄' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder
R₄'' und R₅'' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder
R₄''' und R₅''' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können.
Bevorzugte Ausführungsformen der Verbindung gemäß Anspruch 1 sind in den Ansprüchen 2 bis 6 beschrieben. Ferner sind bevorzugte Ausführungsformen der Verbindung gemäß Anspruch 7 in den Ansprüchen 8 bis 23 beschrieben.
In einem weiteren Aspekt wird erfindungsgemäß die Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung, wie in einem der Ansprüche 7 bis 25 beansprucht, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung bereitgestellt, die zum Hemmen der Zellproliferation in Säugern geeignet ist. Zellproliferationserkrankungen sind z.B. rheumatoide Arthritis, Lupus, Typ I-Diabetes, Multiple Sklerose, Krebs, Restenose, Wirt-Transplantat-Erkrankung und Gicht.
In einem noch weiteren Aspekt wird erfindungsgemäß eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 7 bis 25 in einem Gemisch mit einem oder mehreren pharmazeutischen Exzipienzien umfasst.
In einem noch weiteren Aspekt wird erfindungsgemäß eine Antipilzzusammensetzung bereitgestellt, die zum Behandeln von Pilzinfektionen in Menschen, Tieren und Pflanzen geeignet ist und eine Verbindung nach einem der Ansprüche 7 bis 25 umfasst.
BESCHREIBUNG DER FIGUR
1 ist eine graphische Darstellung der durchschnittlichen neointimalen Fläche einer Rattenhalsschlagader, die mit einem Kochsalzträger behandelt und mit der Verbindung 3 behandelt wurde, die gemäß Beispiel 2 hergestellt worden war, wobei der offene Balken dem nicht behandelten Abschnitt der Halsschlagader entspricht und der schattierte Balken dem behandelten Abschnitt der Halsschlagader entspricht.
Das Nachstehende sind Definitionen für bestimmte hierin verwendete Begriffe.
"Halogenatom" betrifft Fluor-, Brom-, Chlor- und Iodatome.
"Hydroxylgruppe" betrifft die Gruppe -OH.
"Thiolgruppe" oder "Mercaptogruppe" betrifft die Gruppe -SH.
"Niederalkylgruppe" betrifft eine cyclische, verzweigte oder geradkettige Alkylgruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen. Dieser Begriff wird weiter durch solche Gruppen wie Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, i-Propyl-, n-Butyl-, t-Butyl-, i-Butyl- (oder 2-Methylpropyl-), Cyclopropylmethyl-, i-Amyl-, n-Amyl-, Hexylgruppen und dergleichen veranschaulicht.
"Substituierte Niederalkylgruppe" betrifft eine wie vorstehend beschriebene Niederalkylgruppe, die eine oder mehrere Gruppen wie Hydroxyl-, Thiol-, Alkylthiolgruppe, Halogenatom, Alkoxy-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Cycloalkyl-, substituierte Cycloalkyl-, Heterocyclus-, Cycloheteroalkyl-, substituierte Cycloheteroalkyl-, Acyl-, Carboxyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Aryloxy-, Hetaryl-, substituierte Hetaryl-, Aralkyl-, Heteroaralkyl-, Alkylalkenyl-, Alkylalkinyl-, Alkylcycloalkyl-, Alkylcycloheteroalkyl-, Cyangruppe beinhaltet. Diese Gruppen können an ein jegliches Kohlenstoffatom der Niederalkylgruppe gebunden sein.
"Alkylalkenylgruppe" betrifft eine Gruppe -R-CR'=CR'''R'''', worin R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist, R', R''', R'''' unabhängig voneinander ein Wasserstoff-, Halogenatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Acyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Hetaryl- oder substituierte Hetarylgruppe, wie nachstehend definiert, sein können.
"Alkylalkinylgruppe" betrifft Gruppen -RC≡CR', worin R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist, R' ein Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Acyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Hetaryl- oder substituierte Hetarylgruppe, wie nachstehend definiert, ist.
"Alkoxygruppe" betrifft die Gruppe -OR, worin R eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Acyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Aralkyl-, substituierte Aralkyl-, Heteroalkyl-, Heteroarylalkyl-, Cycloalkyl-, substituierte Cycloalkyl-, Cycloheteroalkyl- oder substituierte Cycloheteroalkylgruppe, wie definiert, ist.
"Alkylthiogruppe" betrifft die Gruppe -SR und -S(O)_n=1-2-R, worin R eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Aralkyl- oder substituierte Aralkylgruppe, wie hierin definiert, ist.
"Acylgruppe" betrifft die Gruppen -C(O)R, worin R ein Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Arylgruppe und dergleichen, wie hierin definiert, ist.
"Aryloxygruppe" betrifft die Gruppen -OAr, worin Ar eine Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl- oder substituierte Heteroarylgruppe, wie hierin definiert, ist.
"Aminogruppe" betrifft die Gruppe NRR', worin R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Hetaryl- oder substituierte Hetarylgruppe, wie hierin definiert, oder Acylgruppe sein können.
"Amidogruppe" betrifft die Gruppe -C(O)NRR', worin R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Hetaryl- oder substituierte Hetarylgruppe, wie hierin definiert, sein können.
"Carboxylgruppe" betrifft die Gruppe -C(O)OR, worin R ein Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Hetaryl- oder substituierte Hetarylgruppe, wie hierin definiert, ist.
"Arylgruppe" oder "Ar" betrifft eine aromatische carbocyclische Gruppe mit mindestens einem aromatischen Ring (z.B. Phenyl- oder Biphenylgruppe) oder mehreren kondensierten Ringen, bei denen mindestens ein Ring aromatisch ist (z.B. 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl-, Naphthyl-, Anthryl- oder Phenanthrylgruppe).
"Substituierte Arylgruppe" betrifft eine Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer oder mehreren funktionellen Gruppen, z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen, substituiert ist.
"Heterocyclusgruppe" betrifft eine gesättigte, ungesättigte oder aromatische carbocyclische Gruppe mit einem einzigen Ring (z.B. Morpholino-, Pyridyl- oder Furylgruppe) oder mehreren kondensierten Ringen (z.B. Naphthpyridyl-, Chinoxalyl-, Chinolinyl-, Indolizinyl- oder Benzo[b]thienylgruppe) und mit mindestens einem Heteroatom wie N-, O- oder S-Atom innerhalb des Rings, die gegebenenfalls nicht substituiert oder mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen substituiert sein kann.
"Heteroarylgruppe" oder "Hetarylgruppe" betrifft einen Heterocyclus, bei dem mindestens ein heterocyclischer Ring aromatisch ist.
"Substituierte Heteroarylgruppe" betrifft eine Heterocyclusgruppe, die gegebenenfalls mit einer oder mehreren funktionellen Gruppen, z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen, mono- oder polysubstituiert ist.
"Aralkylgruppe" betrifft die Gruppe -R-Ar, worin Ar eine Arylgruppe ist und R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Arylgruppen können gegebe nenfalls nicht substituiert oder mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen substituiert sein.
"Heteroalkylgruppe" betrifft die Gruppe -R-Het, worin Het eine Heterocyclusgruppe ist und R eine Niederalkylgruppe ist. Heteroalkylgruppen können gegebenenfalls nicht substituiert oder mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen substituiert sein.
"Heteroarylalkylgruppe" betrifft die Gruppe -R-HetAr, worin HetAr eine Heteroarylgruppe ist und R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Heteroarylalkylgruppen können gegebenenfalls nicht substituiert oder mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, substituierten Niederalkyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen substituiert sein.
"Cycloalkylgruppe" betrifft eine bivalente cyclische oder polycyclische Alkylgruppe mit 3 bis 15 Kohlenstoffatomen.
"Substituierte Cycloalkylgruppe" betrifft eine Cycloalkylgruppe, die einen oder mehrere Substituenten mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, substituierten Niederalkyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen umfasst.
"Cycloheteroalkylgruppe" betrifft eine Cycloalkylgruppe, worin ein oder mehrere der Ringkohlenstoffatome durch ein Heteroatom (z.B. N-, O-, S- oder P-Atom) ersetzt sind.
"Substituierte Cycloheteroalkylgruppe" betrifft eine wie hierin definierte Cycloheteroalkylgruppe, die einen oder mehrere Substituenten wie ein Halogenatom, eine Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hy droxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierte Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierte Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen enthält.
"Alkylcycloalkylgruppe" betrifft die Gruppe -R-Cycloalkyl, worin Cycloalkyl eine Cycloalkylgruppe ist und R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Cycloalkylgruppen können gegebenenfalls nicht substituiert oder mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen substituiert sein.
"Alkylcycloheteroalkylgruppe" betrifft die Gruppe -R-Cycloheteroalkyl, worin R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Cycloheteroalkylgruppen können gegebenenfalls nicht substituiert oder mit z.B. einem Halogenatom, einer Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Acetylen-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierten Heterocyclus-, Hetaryl-, substituierten Hetaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und dergleichen substituiert sein.
Falls die erfindungsgemäße 2,6,9-trisubstituierte Purin-Endverbindung eine basische Gruppe enthält, kann sodann ein Säureadditionssalz der Zusammensetzung hergestellt werden. Säureadditionssalze der erfindungsgemäßen Verbindungen werden in einem Standardverfahren in einem geeigneten Lösungsmittel aus der Stammverbindung und einem Überschuss an Säure, wie in nicht begrenzender Weise Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Phosphor-, Essig-, Malein-, Bernstein- oder Methansulfonsäure, hergestellt. Die Chlorwasserstoffsalzform ist besonders geeignet.
Falls die 2,6,9-trisubstituierte Purin-Endverbindung eine saure Gruppe enthält, können sodann kationische Salze der Zusammensetzung hergestellt werden. Typischerweise wird die saure Stammverbindung mit einem Überschuss eines Alkali-Reagenzes, wie in nicht begrenzender Weise einem Hydroxid, Carbonat oder Alkoxid, das das geeignete Kation wie in nicht begrenzender Weise Na⁺, K⁺, Ca²⁺ und NH₄ ⁺ enthält, behandelt. Bestimmte Verbindungen bilden innere Salze oder Zwitterionen, die auch annehmbar sind.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind zum Hemmen der Zellproliferation in Säugern, einschließlich Menschen, geeignet. Die 2,6,9-trisubstituierten Purine sind zum Beispiel beim Behandeln von Autoimmunerkrankungen, z.B. rheumatoider Arthritis, Lupus, Typ I-Diabetes, Multipler Sklerose, etc., beim Behandeln von Krebs, cardiovaskulärer Erkrankung wie Restenose, Wirt-Transplantat-Erkrankung, Gicht, polyzystischer Nierenerkrankung und anderen proliferativen Erkrankungen, deren Pathogenese eine abnormale Zellproliferation beinhaltet, geeignet.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen umfasst die parenterale und orale Verabreichung einer wirksamen Menge der ausgewählten erfindungsgemäßen Verbindung, vorzugsweise dispergiert in einem pharmazeutischen Träger. Therapeutisch geeignete Mengen der erfindungsgemäßen Verbindungen werden allgemein 0,01 bis 100 mg/kg betragen, aber werden leicht durch den Fachmann abhängig von dem Verabreichungsweg und dem Alter und Zustand des Patienten bestimmt werden. Therapeutisch geeignete Mengen der erfindungsgemäßen Verbindungen können einmal bis zehnmal täglich oder mehr für eine akute oder chronische Erkrankung verabreicht werden. Keine nicht annehmbaren toxikologischen Wirkungen werden erwartet, wenn die erfindungsgemäßen Verbindungen erfindungsgemäß verabreicht werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind auch als antiinflammatorische und Antipilzmittel verwendbar. Als solche sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zum Behandeln von inflammatorischen und Pilzinfektionen in Menschen, Tieren und Pilzinfektionen in Pflanzen geeignet.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen und/oder Derivate davon enthalten, können als Lösungen oder lyophilisierte Pulver für eine parenterale Verabreichung formuliert werden. Pulver können durch Zugabe eines geeigneten Verdünnungsmittels oder eines anderen pharmazeutisch verträglichen Trägers vor einer Verwendung rekonstituiert werden. Falls die erfindungsgemäßen Verbindungen in flüssiger Form verwendet werden, werden sie vorzugsweise in eine gepufferte, isotonische, wässrige Lösung eingebaut. Beispiele für geeignete Verdünnungsmittel sind normale isotonische Kochsalzlösung, 5%ige Standard-Dextrose in Wasser und gepufferte Natrium- oder Ammoniumacetat-Lösung. Solche flüssigen Formulierungen sind für eine parenterale Verabreichung geeignet, können aber auch für eine orale Verabreichung verwendet werden.
Es kann erwünscht sein, Exzipienzien wie Polyvinylpyrrolidon, Gelatine, Hydroxycellulose, Gummi arabicum, Polyethylenglykol, Mannitol, Natriumchlorid, Natriumcitrat oder jegliches andere dem Fachmann bekannte Exzipienz den pharmazeutischen Zusammensetzungen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen enthalten, zuzusetzen. Alternativ dazu können die pharmazeutischen Verbindungen verkapselt, tablettiert oder in einer Emulsion oder einem Sirup für eine orale Verabreichung hergestellt werden. Pharmazeutisch verträgliche feste oder flüssige Träger können zugesetzt werden, um die Zusammensetzung zu verbessern oder zu stabilisieren oder die Herstellung der Zusammensetzung zu erleichtern. Flüssige Träger beinhalten in nicht begrenzender Weise Sirup, Erdnussöl, Olivenöl, Glycerin, Kochsalzlösung, Alkohole und Wasser. Feste Träger beinhalten in nicht begrenzender Weise Stärke, Laktose, Calciumsulfatdihydrat, Teffa alba, Magnesiumstearat oder Stearinsäure, Talk, Pectin, Gummi arabicum, Agar oder Gelatine. Der Träger kann auch ein Material mit verzögerter Freisetzung wie in nicht begrenzender Weise Glycerinmonostearat oder Glycerindistearat, allein oder zusammen mit einem Wachs, beinhalten. Die Menge an festem Träger variiert, wird aber vorzugsweise etwa 20 mg bis etwa 1 g pro Dosiseinheit betragen.
Die pharmazeutischen Dosen werden unter Verwendung herkömmlicher Techniken wie in nicht begrenzender Weise Vermahlen, Mischen, Granulieren und Verpressen, falls erforderlich, für Tablettenformen oder Vermahlen, Mischen und Befüllen für Hartgelatinekapselformen hergestellt. Wenn ein flüssiger Träger verwendet wird, wird die Zubereitung in der Form eines Sirups, Elixiers, einer Emulsion oder einer wässrigen oder nicht wässrigen Suspension vorliegen. Eine solche flüssige Formulierung kann direkt verabreicht werden oder in eine Weichgelatinekapsel gefüllt werden.
Die nachstehenden Beispiele dienen dazu, die Erfindung zu veranschaulichen. Die Beispiele sollen in keiner Weise den Umfang der Erfindung begrenzen, sondern werden bereitgestellt, um zu zeigen, wie die erfindungsgemäßen Verbindungen hergestellt und verwendet werden. In den Beispielen sind alle Temperaturen in Grad Celsius angegeben. RT bedeutet Raumtemperatur.
BEISPIEL 1
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden durch herkömmliche Verfahren der organischen Chemie hergestellt. Die Reaktionssequenz, die in dem nachstehenden Syntheseschema dargestellt ist, ist ein allgemeines Verfahren, das für die Synthese von erfindungsgemäßen Verbindungen geeignet ist. 2,6-Dichlorpurin wird in Butanol gelöst und das geeignete R₁-Amin wird zugesetzt. Nach mehrstündigem Erhitzen wird das Reaktionsgemisch abgekühlt und die Verbindung 1 wird erhalten. Zur Verbindung 1 wird Natriumhydrid zugesetzt, gefolgt von R₂, und Verbindung 2 wird isoliert. Zu der Verbindung 2 wird R₃ in Lösung mit N-Methylpyrrolidinon zugesetzt. Das Gemisch wird für eine geeignete Zeitspanne erhitzt, gefolgt von einer Aufreinigung, was zu der gewünschten Verbindung führt.
Die nachstehende Verbindung wurde gemäß dem vorstehenden Verfahren hergestellt.
Herstellung von 2-Chlor-6-(4-methoxybenzylamino)purin (1).
Das 2,6-Dichlorpurin (4,06 g, 21,5 mmol) wurde in n-Butanol (150 ml) suspendiert und das 4-Methoxybenzylamin wurde zugesetzt (3,4 ml, 26 mmol). Die Lösung wurde klar und sodann wenige Minuten später trüb. Die Lösung wurde bei 120°C zwei Stunden erhitzt und sodann abgekühlt. Das n-Butanol wurde verdampft, gefolgt von Suspendieren des Rückstands in einem Gemisch aus Wasser und Diethylether. Eine Lösung von 2 N NaOH (1,3 ml, 26 mmol) wurde zugesetzt und die Lösung 10 Minuten vor einer Filtration gerührt. Das filtrierte Präzipitat wurde mit Wasser und einem kleinen Anteil an Ether gewaschen und sodann unter vermindertem Druck getrocknet. Die Restflüssigkeit wurde über Nacht stehen gelassen und mehrere Kristalle wurden am nächsten Tag gesammelt und mit Diethylether gewaschen. Die Ausbeute betrug 71%.
Herstellung von 2-Chlor-6-(4-methoxybenzylamino)-9-isopropylpurin (2).
2-Chlor-6-(4-methoxybenzylamino)purin wurde in trockenem DMF (5 ml) suspendiert und mit Natriumhydrid, 60%ige Dispersion (82 mg, 2,06 mmol), behandelt. Die Suspension wurde 30 Minuten gerührt, währenddessen sie eine klare gelbe/grüne Lösung wurde. 2-Iodpropan (0,280 ml, 1,7 Äq.) wurde über 5 Minuten zugesetzt und die sich ergebende Lösung zwei Tage gerührt. Wasser wurde zugesetzt und die Lösung mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wurde verdampft, um das Produkt Isopropylpurin zu ergeben (Ausbeute von 508 mg, 89%).
Herstellung von 2-Diethanolamino-6-(4-methoxybenzylamino)-9-isopropylpurin (3).
Das Purin (1,65 g, 4,98 mmol) wurde in DMSO (12 ml) und Diethanolamin (4 ml) gelöst und sodann bei 140°C zwei bis drei Tage und sodann bei 160°C einen Tag erhitzt. Die Lösung wurde abgekühlt und Wasser-gesättigtes Butanol wurde zugesetzt (100 ml). Die Lösung wurde sodann mit Wasser (3 × 50 ml) gewaschen, bevor sie verdampft wurde, um ein braunes Öl zu ergeben. Der Rückstand wurde über Silicagel chromatographisch aufgetrennt, wobei mit Ethylacetat, gefolgt von 3% Methanol in Ethylacetat, eluiert wurde, um das Produkt (Ausbeute von 730 mg, 37%) als ein blassgelbes Öl zu ergeben. Die Ausbeute betrug 37%.
¹H-NMR (δ CDCl₃): 7,29 (br s, 1H), 7,25 (d, 2H), 6,94 (br s, 1H), 6,83 (d, 2H), 5,43 (br s, < 2H), 4,63 (br s, 2H), 4,53 (m, 1H), 3,86 (t, 4H), 3,76 (m, 7H), 1,47 (d, 6H).
Tabelle 1 identifiziert Verbindungen, die gemäß dem in diesem Beispiel beschriebenen Syntheseverfahren hergestellt wurden. Diejenigen Verbindungen, die nicht durch die angehängten Ansprüche abgedeckt sind, sind lediglich für Vergleichszwecke angegeben.
TABELLE 1 Durch das Verfahren von Beispiel 1 hergestellte Verbindungen
BEISPIEL 2
Dieses Beispiel beschreibt ein Verfahren zum Herstellen von erfindungsgemäßen Verbindungen. Das in diesem Beispiel beschriebene Syntheseverfahren ist lediglich leicht gegenüber dem in Beispiel 1 beschriebenen modifiziert.
Die nachstehende Verbindung wurde gemäß dem vorstehenden Verfahren hergestellt.
Herstellung von 2,6-Dichlor-9-isopropylpurin (4).
Zu einer Lösung von 0,67 g 2,6-Dichlorpurin in 5 ml trockenem DMF bei Raumtemperatur wurden 0,16 g (1,1 Äq.) 50%iges Natriumhydrid/Ölpulver gegeben. Nach Ende der Wasserstoffentwicklung wurde ein großer Überschuss (2 ml) Isopropyliodid zu der anionischen Lösung gegeben. Diese Reaktionslösung wurde 3 Tage bei Umgebungstemperatur gerührt. Die Reaktion wurde mit 30 ml Wasser abgestoppt und mit Ethylacetat (3 × 50 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt und mit 3 × 50 ml Wasser, gefolgt von 20 ml Kochsalzlösung rückgewaschen. Die Ethylacetat-Lösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und verdampft. Die Verbindung wurde einer Flash-Chromatographie mit variablem Gradienten auf Silicagel mit Hexan/Ethylacetat-Gemischen unterzogen und ergab 0,37 g des gewünschten N-9-Produkts (45%) und 0,08 g des N-7-Isomers (10%).
Herstellung von 2-Chlor-6-anilino-9-isopropylpurin (5).
2,6-Dichlor-9-isopropylpurin (0,019 g, 0,081 mmol) wurde in Butanol (0,5 ml) gelöst und Anilin (0,044 ml, 0,244 mmol) wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde auf 120°C 10 Stunden erhitzt, abgekühlt, mit EtOAc verdünnt und dreimal mit Wasser gewaschen. Das Gemisch wurde über MgSO₄ getrocknet und zu einem cremefarbenen Feststoff konzentriert.
Herstellung von 2-Diethanolamino-6-(4-phenylanilino)-9-isopropylpurin (6).
Eine Lösung von 67 mg 2,6-Dichlor-N-9-isopropylpurin und 100 mg 4-Phenylanilin in 1 ml n-Octanol wurde auf 80°C 24 Stunden erhitzt. Das n-Octanol wurde unter vermindertem Druck entfernt und sodann durch 1 ml 40%iges Diethanolamin in DMSO ersetzt. Die Lösung wurde bei 130°C 48 Stunden erhitzt. Die Reaktion wurde auf Umgebungstemperatur abgekühlt, sodann mit 10 ml Wasser verdünnt und anschließend mit Ethylacetat (3 × 30 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt und mit 3 × 20 ml Wasser, gefolgt von 10 ml Kochsalzlösung rückgewaschen. Die Ethylacetat-Lösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und gefiltert und das Lösungsmittel wurde verdampft. Die 65 mg an Rohprodukt wurden aus THF-Ether-Lösung kristallisiert, um 28 mg reines Produkt (23%) zu ergeben.
Die nachstehende Tabelle 2 identifiziert Verbindungen, die gemäß dem in diesem Beispiel beschrieben allgemeinen Syntheseverfahren hergestellt wurden. Diejenigen Verbindungen, die nicht durch die angehängten Ansprüche abgedeckt sind, sind lediglich für Vergleichszwecke angegeben.
TABELLE 2 Durch das Verfahren von Beispiel 2 hergestellte Verbindungen
BEISPIEL 3
Dieses Beispiel beschreibt ein Verfahren zum Herstellen von erfindungsgemäßen Verbindungen. Das in diesem Beispiel beschriebene Syntheseverfahren ist lediglich leicht gegenüber dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren modifiziert.
Die nachstehende Verbindung wurde gemäß dem vorstehenden Verfahren hergestellt.
Herstellung von 2,6-Dichlor-9-isopropylpurin (4).
Das 2,6-Dichlorpurin (5,00 g, 26,46 mmol) wurde in 55 ml trockenem DMF bei Raumtemperatur suspendiert und mit Natriumhydrid, 60%ige Dispersion (1,27 g, 31,75 mmol), das portionsweise zugegeben wurde, behandelt. Nach einstündigem Rühren wurde 2-Iodpropan (4,5 ml, 44,98 mmol) zugegeben und die Reaktion zwei Tage gerührt. Die Reaktion wurde in Diethylether geschüttet und einmal mit gesättigter Natriumbicarbonat-Lösung und einmal mit Wasser gewaschen. Das Gemisch wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert. Das Konzentrat wurde über Silicagel chromatographisch aufgetrennt, wobei mit einer 10%igen Aceton-Lösung in Dichlormethan eluiert wurde, um das gewünschte N-9-Alkylierungsprodukt als einen weißen Feststoff zu ergeben. Die Ausbeute betrug 47%.
Herstellung von 2-Chlor-6-(4-methylmercapto)anilino-9-isopropylpurin (5A).
2,6-Dichlor-9-isopropylpurin (0,15 g, 0,649 mmol) wurde in n-Butanol (4 ml) gelöst und 4-(Methylmercapto)anilin (0,089 ml, 0,714 mmol) und Triethylamin (0,20 ml, 1,43 mmol) wurden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei 80°C über Nacht erhitzt. Die abgekühlte Reaktion wurde mit Ethylacetat verdünnt und einmal mit 1 M HCl, einmal mit gesättigtem Natriumbicarbonat und einmal mit Kochsalzlösung gewaschen, bevor sie mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert wurde. Der Rückstand wurde über Silicagel chromatographisch aufgetrennt, wobei mit 2% Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um das gewünschte Produkt als einen weißen Feststoff zu ergeben. Die Ausbeute betrug 83%.
Herstellung von 2-Diethanolamin-6-(4-methylmercapto)anilino-9-isopropylpurin (6A).
Das Purin (0,18 g, 0,539 mmol) wurde in N-Methylpyrrolidinon (3 ml) und Diethanolamin (1 ml) gelöst und sodann bei 120°C über Nacht erhitzt. Die abgekühlte Reaktion wurde in Diethylether geschüttet und dreimal mit Wasser gewaschen, bevor sie über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert wurde. Der Rückstand wurde über Silicagel chromatographisch aufgetrennt, wobei mit 5% Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um das gewünschte Produkt als einen cremefarbenen Feststoff zu ergeben. Die Ausbeute betrug 82%.
¹H-NMR (δ, CDCl₃): 8,08 (s, 1H), 7,58 (d, 2H), 7,47 (s, 1H), 7,18 (d, 2H), 4,95 (br s, < 2H), 4,52 (m, 1H), 3,94 (m, 4H), 3,83 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 1,47 (d, 6H).
Herstellung von 4-(2-Thienyl)benzonitril.
Einige R₁'-Gruppen müssen zunächst synthetisiert werden, bevor sie mit dem 2,6-Dichlor-9-isopropylpurin umgesetzt werden. Diese Gruppen können über verschiedene Kopplungsverfahren und andere synthetische Verfahren, die dem Fachmann auf dem Gebiet der organischen Synthese bekannt sind, synthetisiert werden.
Zu einem Druckrohr wurden 4-Brombenzonitril (0,20 g, 1,10 mmol), Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0) (0,127 g, 0,1 Äq.) und 2-Thiophenboronsäure (0,211 g, 1,65 mmol) gegeben. Die Reaktion wurde unter vermindertem Druck gespült und mit trockenem Stickstoffgas dreimal gespült. Nach den Spülgängen wur den Ethylenglykoldimethylether (5,5 ml) und eine wässrige Natriumcarbonat-Lösung (2,53 ml, 1 M) zu dem Rohr gegeben. Das Rohr wurde sodann dicht verschlossen und bei 80°C über Nacht erhitzt. Die abgekühlte Reaktion wurde mit Diethylether verdünnt und zweimal mit Wasser gewaschen, bevor sie über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert wurde. Der Rückstand wurde über Silicagel chromatographisch aufgetrennt, wobei mit 10% Ethylacetat in Hexan eluiert wurde, um das gewünschte Produkt als einen weißen Feststoff zu ergeben. Die Ausbeute betrug 84%.
Herstellung von 4-(2-Thienyl)benzylamin.
Das 4-(2-Thienyl)benzonitril (0,086 g, 0,464 mmol) wurde in trockenem Tetrahydrofuran (1,6 ml) gelöst, bevor Lithiumaluminiumhydrid (0,46 ml, 0,464 mmol, 1 M in THF) tropfenweise zugegeben wurde. Der Reaktion wurde ermöglicht, über Nacht bei Raumtemperatur zu rühren. DSC (5% Methanol in Dichlormethan) zeigte noch verbliebenes Ausgangsmaterial an. Ein weiteres Äq. LAH wurde zugegeben. Nach einer zusätzlichen Stunde wurde die Reaktion durch das Fieser- und Fieser-Verfahren unter Verwendung von Wager (17,46 μl) abgestoppt, wobei wässrige Natriumhydroxid-Lösung (17,46 μl, 15%ige Lsg.) und Wasser (52,37 μl) nacheinander zu der Reaktion gegeben wurden. Die Reaktion wurde sodann mit Diethylether und Wasser verdünnt und zweimal mit Diethylether extrahiert, bevor sie über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert wurde. Der Rückstand wurde ohne eine jegliche weitere Aufreinigung unverarbeitet weiterverarbeitet. Die Ausbeute betrug 89%.
Die nachstehende Tabelle 3 identifiziert Verbindungen, die gemäß dem in diesem Beispiel beschriebenen allgemeinen Syntheseverfahren hergestellt wurden. Diejenigen Verbindungen, die nicht durch die angehängten Ansprüche abgedeckt sind, sind lediglich für Vergleichszwecke angegeben.
TABELLE 3 Durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellte Verbindungen
BEISPIEL 4
Dieses Beispiel beschreibt ein Verfahren zum Herstellen von erfindungsgemäßen Verbindungen. Das in diesem Beispiel beschriebene Syntheseverfahren ist lediglich leicht gegenüber dem in Beispiel 1 beschriebenen modifiziert.
Die nachstehende Verbindung wurde gemäß dem vorstehenden Verfahren hergestellt.
Herstellung von 2-Amino-6-chlor-9-methylpurin (7).
Das 2-Amino-6-chlorpurin (1,08 g, 6,4 mmol) wurde in trockenem DMF (75 ml) suspendiert und mit Natriumhydrid, 60%ige Dispersion (0,28 g, 7 mmol), behandelt. Die Suspension wurde 15 Minuten gerührt, bevor Iodmethan (0,44 ml, 7,06 mmol) zugesetzt wurde, und die sich ergebende gelbe Lösung eine Stunde 45 Minuten gerührt wurde. Der Feststoff wurde filtriert und das Filtrat vor einer Zugabe von Wasser 10 Minuten verdampft. Der sich ergebende Feststoff wurde filtriert und über Nacht getrocknet, um das Produkt als ein Gemisch der N-7- und N-9-Alkylierungsprodukte zu ergeben. Die Restflüssigkeit wurde über Nacht stehen gelassen und weitere Kristalle wurden am nächsten Tag gesammelt und getrocknet. Die Ausbeute betrug 77%.
Herstellung von 6-Chlor-2-(2-methoxyacetylamino)-9-methylpurin (8).
Das Gemisch von Isomeren aus dem Vorstehenden wurde in Dichlormethan und Pyridin (2 Äq.) gelöst, gefolgt von der Behandlung mit Methoxyacetylchlorid (4 Äq.). Die Reaktion wurde bei Raumtemperatur bis zum Abschluss gerührt. Die Reaktion wurde verdampft und durch einen Stopfen von Silicagel filtriert, wobei mit 2% Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, gefolgt von einer Aufreinigung auf einem Chromatotron unter Verwendung von Silicagel und Elution mit 2% Methanol in Dichlormethan, um das gewünschte Produkt zu isolieren. Die Ausbeute betrug 31%.
Die Tabelle 4 identifiziert Verbindungen, die gemäß dem in diesem Beispiel beschriebenen Syntheseverfahren hergestellt wurden.
TABELLE 4 Durch das Verfahren von Beispiel 4 hergestellte Verbindungen
BEISPIEL 5
Dieses Beispiel beschreibt ein Verfahren zum Herstellen von erfindungsgemäßen Verbindungen. Das in diesem Beispiel beschriebene Syntheseverfahren ist lediglich leicht gegenüber dem in Beispiel 1 beschriebenen modifiziert.
Die nachstehende Verbindung wurde gemäß dem vorstehenden Verfahren hergestellt.
Herstellung von 2-Chlor-6-(4-phenylbenzylamino)purin (9).
Das 2,6-Dichlorpurin (5,0 g, 26,45 mmol) wurde in n-Butanol (50 ml) suspendiert und das 4-Phenylbenzylamin (6,61 g, 29,1 mmol) und Triethylamin (4,1 ml, 29,1 mmol) wurden zugegeben. Die Lösung wurde bei 120°C über Nacht erhitzt, sodann abgekühlt. Das Produkt wurde unter Verwendung eines Überschusses von n-Butanol abfiltriert und das Präzipitat wurde mit 100 ml 1 M HCl und 200 ml Wasser gewaschen. Der Feststoff wurde unter vermindertem Druck über Nacht bei 70°C getrocknet, um das gewünschte Produkt als einen leichtgelben Feststoff zu ergeben. Die Ausbeute betrug 99%.
Herstellung von 2-Diethanolamino-6-(4-phenylbenzylamino)purin (10).
Das 2-Chlor-6-(4-phenylbenzylamino)purin (2,0 g, 5,96 mmol) wurde mit Diethanolamin (11,4 ml, 119,2 mmol) und N-Methylpyrrolidinon (10 ml) gemischt und bei 120°C über Nacht erhitzt. Die abgekühlte Reaktion wurde in Dichlormethan geschüttet und zweimal mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert, um das gewünschte Produkt als einen blassgrünen Feststoff zu ergeben, der weiter in einem Vakuumofen bei 70°C 2 Tage getrocknet wurde.
Herstellung von 2-Diethanolamino-6-(4-phenylbenzylamino)-9-methylpurin (11).
Das 2-Diethanolamino-6-(4-phenylbenzylamino)purin (0,050 g, 0,124 mmol) wurde in trockenem DMF gelöst und mit Natriumhydrid, 60%ige Dispersion (5,5 mg, 0,136 mmol), eine Stunde behandelt. Iodmethan (0,009 ml, 0,148 mmol) wurde zugegeben und die sich ergebende Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Reaktion wurde in Diethylether geschüttet und zweimal mit gesättigter Natriumbicarbonat-Lösung gewaschen, bevor sie über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert wurde. Der Rückstand wurde über Silicagel chromatographisch aufgetrennt, wobei mit 5% Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um das Produkt als einen weißen Feststoff zu ergeben. Die Ausbeute betrug 63%.
¹H-NMR (δ, CDCl₃): 7,55 (m, 4H), 7,41 (m, 4H), 7,35 (m, 4H), 6,41 (br s, < 1H), 5,10 (br s, < 2H), 4,72 (br s, 2H), 3,86 (m, 4H), 3,74 (m, 4H), 3,59 (s, 3H).
Die Tabelle 5 identifiziert Verbindungen, die gemäß dem in diesem Beispiel beschriebenen Syntheseverfahren hergestellt wurden. Diejenigen Verbindungen, die nicht durch die angehängten Ansprüche abgedeckt sind, sind lediglich für Vergleichszwecke angegeben.
TABELLE 5 Durch das Verfahren von Beispiel 5 hergestellte Verbindungen
BEISPIEL 6
Erfindungsgemäße Verbindungen wurden in den nachstehenden Tests bewertet.
CDK2-Tests:
Erfindungsgemäße Verbindungen wurden untersucht, um deren CDK2-inhibitorische Aktivität zu bestimmen. Das Testsystem (Gesamtvolumen von 50 μl) enthielt 50 mM Tris-HCl, pH-Wert von 7,4, 10 mM MgCl₂, 5 mM DTT, 1 μg Histon H1, 30 μM ATP (1 μCi γ³²P-markiertes ATP), 10 μg BSA und 1 ng aufgereinigte CDK2. Nach 30-minütiger Inkubation bei 30°C wurde die Reaktion durch die Zugabe von 10 μl 10%iger TCA abgestoppt und die Proben wurden auf Nitrocellulose-Filter geblottet. Diese Filter wurden ausgiebig in 10% TCA gewaschen und hinsichtlich Radioaktivität untersucht. Negativ-Kontrollen enthielten kein Enzym. Um die Wirksamkeit verschiedener erfindungsgemäßer Verbindungen zu ermitteln, wurden die Verbindungen zu dem vorstehenden Test bei Konzentrationen von 100 bis 0,02 μg/ml gegeben. Nach 30-minütiger Inkubation wurden die Teströhrchen wie vorstehend weiter behandelt. In allen Tests wurden verschiedene Konzentrationen an Olomoucin zugegeben und wurden als eine Standard-Positiv-Kontrolle verwendet. Der in Tabelle 6 aufgeführte IC₅₀-Wert (Enzym) ist als die Konzentration definiert, die benötigt wird, um die CDK2-Aktivität um 50% zu hemmen.
BEISPIEL 7
Zellproliferationstests:
Glatte Muskelzellen von Rattenaorta in einer frühen Passage (CV Therapeutics Zell-Lager) wurden in 48-Well-Platten (Falcon, ml/Well) bei einer Dichte von 20000 Zellen/ml an DME, das 5% Hitze-inaktiviertes Rinderserum enthielt, ausgebracht. Die Zellen wurden in einem Standard-Gewebe-Kultur-Inkubator 48 Stunden inkubiert. Das Medium wurde aufgesogen und die Wells wurden mit 0,2 ml frischem Medium aufgefüllt. Erfindungsgemäße Verbindungen wurden bei Konzentrationen von 100 bis 0,37 μg/ml zugegeben. Nach 48-stündiger Inkubation wurde das Medium aufgesaugt und die Kulturen wurden mit 0,2 ml Kochsalzlösung und 0,25 μl Phenazinmethosulfat-Lösung mit MTS behandelt (Cell Titer 96^®, wässriger nicht radioaktiver Zellproliferationstest-Kit, Katalog # G 5430, Promega, 2800 Woods Hollow Road, Madison, WI 53711-5399). Der in Tabelle 6 aufgeführte IC₅₀-Wert Zellen ist als die Konzentration definiert, die benötigt wird, um die Zellproliferation um 50% zu hemmen. Olomoucin wurde bei verschiedenen Konzentrationen zugegeben und wurde als eine Standard-Positiv-Kontrolle verwendet. Die Tabelle 6 gibt die Bioaktivität ausgewählter erfindungsgemäßer Beispiele an, wobei diejenigen Verbindungen, die nicht durch die angehängten Ansprüche abgedeckt sind, lediglich zu Vergleichszwecken getestet wurden.
TABELLE 6
Die Zellproliferations-Hemmungseigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen werden durch deren Fähigkeit, die Zellproliferation in einem Bereich von etwa 0,05 μg/ml bis 100 μg/ml, vorzugsweise weniger als 0,5 μg/ml, zu hemmen, gezeigt.
BEISPIEL 7
Eine erfindungsgemäße Verbindung wurde hinsichtlich der Wirksamkeit unter Verwendung des Mäuse-Leukämie-Modells bewertet. Das Mäuse-Leukämie-Modell ist ein Standardmodell, das bei der Bewertung von Antitumormitteln verwendet wird. CDF1-Mäusen wurden ip L1210-Zellen (1 × 10³ Zellen/Maus) injiziert. 24 Stunden später wurden diese Mäuse mit verschiedenen Dosen (ip) an Verbindung 3 des Beispiels 1 in Kochsalzlösung behandelt. Der in dieser Untersuchung verwendete Dosisplan ist in der nachstehenden Tabelle 7 beschrieben. Mäuse wurden mit der Verbindung 3 täglich oder an abwechselnden Tagen dosiert. Kontrollmäuse erhielten Kochsalzlösung. Nach 7 Tagen wurde die Dosierung abgestoppt und das Überleben beobachtet.
Tabelle 7
Die Ergebnisse zeigen, dass Ratten, denen Verbindung 3 verabreicht worden war, länger überlebten als die Kontrollratten.
BEISPIEL 8
Dieses Beispiel maß die Wirkung einer akuten lokalen Zufuhr von Verbindung 3 von Beispiel 1 beim Vermindern einer Neointima-Bildung nach einer Ballon-Angioplastie in dem Ratten-Karotis-Arterienmodell. In diesem Beispiel wurden die linken gemeinsamen Karotisarterien von erwachsenen männlichen Ratten (n = 10 pro Experimentgruppe) chirurgisch unter Verwendung eines Fogarty-Arterien-Embolektomie-Katheders verletzt. Sofort nach der Verletzung wurde die gemeinsame Karotis-Arterie mit einer Gefäßklemme halbiert, wodurch ein nicht behandeltes und ein behandeltes Segment erzeugt wurden. Ein Arzneimittelzufuhrkatheder wurde sodann in die distale Hälfte der gemeinsamen Karotis eingeführt. Nach einer Arzneimittelzufuhr wurde der Katheder entfernt und ein Überschuss an Arzneimittel wurde durch Entfernen der Gefäßklemme und Wiederherstellung des Blutflusses ausgewaschen, bevor die Arterie geschlossen wurde. Den Tieren wurde ermöglicht, sich 14 Tage zu erholen, bevor die gemeinsame Karotis-Arterie entnommen wurde. Das entnommene Gewebe wurde unterteilt und der Neointimal-Bereich wurde mit einem Computer-Planimetrie-System digitalisiert und vermessen. Für jedes Tier wurden 15 Messungen für das nicht behandelte Segment und 15 für das behandelnde Segment gemittelt.
Die Ergebnisse dieses Beispiels sind in 1 dargestellt. Gemäß 1 verminderte eine Verabreichung von Verbindung 3 von Beispiel 1 an eine geschädigte Karotis-Arterie die Neointimal-Fläche um etwa 88% im Vergleich zu der 6%igen Verminderung, die durch den Kochsalzträger allein erzeugt wurde.
BEISPIEL 9
IκB-α-Kinase-Tests:
Erfindungsgemäße Verbindungen wurden untersucht, um deren inhibitorische Aktivität auf IκB-α-Kinase zu bestimmen. Die menschliche Nabelschnurvenen-Endothelzelllinie (HUVEC), die in diesen Untersuchungen verwendet wurde, wurde von Clonetics (San Diego, CA) bezogen und wurde in Endothelzellwachstumsmedium, ergänzt mit 2% fötalem Rinderserum, 10 ng/ml menschlichem rekombinantem Epidermis-Wachstumsfaktor, 1 μg/ml Hydrocortison, 50 μg/ml Gentamicin, 50 ng/ml Amphotericin B und 12 μg/ml Rinderhirnextrakt, bei 37°C in einem Gewebekulturinkubator gehalten. Alle Wachstumsmedien und Zusätze wurden von Clonetics (San Diego, CA) bezogen. E. coli-Lipopolysaccharid (LPS) Serotyp 0111:B4 wurde von Sigma (Saint Louis, MI) bezogen. Alle anderen Chemikalien wiesen Reagenzgüte auf.
Herstellung von Zell-Lysat: Monoschichten (75 cm²) an HUVEC-Zellen wurden mit LPS (100 ng/ml) 5 Minuten behandelt, wonach das Zellmedium schnell entfernt wurde und die Monoschicht dreimal mit eiskaltem PBS gewaschen wurde. Die Zellschicht wurde in 10 ml PBS abgeschabt und die Zellen durch Zentrifugation (3000 UpM, 5 Minuten, 4°C) pelletiert. Ein Zell-Lysat wurde dadurch hergestellt, dass das Zell-Pellet in 0,2 ml Lyse-Puffer (20 mM HEPES, pH-Wert von 7,3, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM Natriumorthovanadat, 10 mM β-Glycerophosphat, 1 mM Phenylmethylsulfonylfluorid, 1 mM Dithiothreitol, 0,5% Nonidet P-40) 15 Minuten bei 37°C unter häufigem Vortexen inkubiert wurde. Zelltrümmer wurden von der Probe durch Mikrozentrifugation (10000 × g, 15 Minuten, 4°C) entfernt und der Überstand wurde durch die Zugabe von 100 ml einer Suspension von Sepharose 4B in Lyse-Puffer und vorsichtiges Mischen für eine Stunde bei 4°C "vorgeklärt". Die Sepharose 4B-Kügelchen wurden durch Mikrozentrifugation entfernt und der Überstand aliquotiert und bei –80°C gelagert.
Festphasen-IκB-α-Kinase-Test: 1 μg GST-IκB-α, das dem Volllängen-IκB-α von menschlichem Ursprung entsprach (Santa Cruz Biotechnology), wurde mit 20 μl einer 50%igen Aufschlemmung von Glutathion S-Sepharose 4B (Pharmacia) in Reak tionspuffer (20 mM HEPES, pH-Wert von 7,3, 10 mM MgCl₂, 15 mM β-Glycerophosphat, 0,5 mM Natriumorthovanadat, 0,5 mM EGTA) 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Der GST-IκB-Kügelchen-Komplex wurde dreimal mit 0,5 ml Reaktionspuffer durch erneutes Suspendieren und Mikrozentrifugation gewaschen. 10 μg HUVEC-Zell-Lysat-Protein in 100 μl Reaktionspuffer wurden sodann zu dem GST-IκB-Kügelchen-Komplex gegeben und das Gemisch wurde unter leichtem Mischen bei 4°C eine Stunde inkubiert. Der Kügelchen-Komplex wurde sodann dreimal mit Reaktionspuffer, der 0,2 M NaCl enthielt, und einmal mit Reaktionspuffer allein gewaschen. Schließlich wurde der Kügelchen-Komplex wieder in 20 μl Reaktionspuffer mit 5 μCi [γ-³²P]ATP (> 5000 Ci/mmol, New England Nuclear Corp. Boston, MA) suspendiert und bei Raumtemperatur 15 Minuten inkubiert. Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 10 μl SDS-PAGE-Probenpuffer abgestoppt und vor einer Auftrennung durch SDS-PAGE (10–20% Gradient Readygel, BioRad) drei Minuten gekocht. Nach der Elektrophorese wurde das Gel 15 Minuten fixiert (50% Methanol, 10% Essigsäure), dreimal jeweils 5 Minuten mit destilliertem Wasser gewaschen und mit 5% Glycerin 15 Minuten behandelt, bevor es getrocknet und einem Film für eine Audioradiographie (X-OMAT XAR-5 Kodak) ausgesetzt wurde.
In-Gel-Kinase-Test: IκB-α-Isoenzyme wurden hinsichtlich einer Aktivität unter Verwendung einer Modifikation von vorveröffentlichten Verfahren untersucht (11, 19, 20). Kurz gesagt, wurden Duplikat-Proben des IκB-Glutathion Sepharose 4B-Kügelchen-Komplexes wie vorstehend beschrieben hergestellt und durch Elektrophorese durch ein 12%iges SDS-PAGE-Gel aufgetrennt, das in Gegenwart von 15 μg/ml GST-IκB-α polymerisiert worden war. Nach der Elektrophorese wurde das Gel vorsichtig zweimal 30 Minuten mit jeweils 50 mM Tris-HCl mit einem pH-Wert von 8,0, 5 mM β-Mercaptoethanol, 20% Isopropanol gewaschen, um SDS zu entfernen. Die Proteine wurden sodann innerhalb des Gels durch 45-minütige Inkubation in 100 ml 50 mM Tris-HCl mit einem pH-Wert von 8,0, 5 mM β-Mercaptoethanol, 0,04% Tween 40 denaturiert. Das Gel wurde sodann halbiert, um die Duplikatproben zu trennen, eine Hälfte wurde in 10 ml Reaktionspuffer alleine inkubiert und die andere Hälfte wurde in 10 ml Reaktionspuffer mit 10 μg/ml 2-Diethanolamino-6-(4-phenylanilino)-9-isopropylpurin (Verbindung 6 von Beispiel 2) eine Stunde bei Raumtemperatur inkubiert, dem 10 μCi [γ-³²P]ATP zugegeben worden war, und die Inkubationen wurden eine weitere Stunde bei Raumtemperatur fortgesetzt. Die Gele wurden sodann mehreren 15-minütigen Waschgängen von jeweils 100 ml 5%iger Trichloressigsäure mit 1% Natriumpyrophosphat unterzogen, bis 1 ml an Waschlö sung eine Radioaktivität ergab, die nahe an der Hintergrundsradioaktivität lag. Die Gele wurden sodann getrocknet und für eine Audioradiographie einem Film ausgesetzt.
Herstellung von 2-Diethanolamino-6-(4-phenylbenzylamino)-9-isopropylpurin-Epoxy-aktivierter Sepharose 6B-Affinitätsmatrix. Gefriergetrocknete Epoxy-aktivierte Sepharose 6B (Pharmacia LKB, Piscataway, NJ) wurde für die Kopplungsreaktion aufgrund ihrer Fähigkeit, eine Ether-Bindung zwischen einem hydroxylhaltigen Liganden und der Epoxidgruppe auf der Sepharose auszubilden, ausgewählt. Das Gel wurde gemäß den Herstellerangaben gequollen, (100 mg) Verbindung 6 von Beispiel 2 wurden in 1 ml Kopplungslösung (1,2:1 v/v Dimethylformamid:0,1 N NaOH) gelöst und mit 0,5 ml gequollenem Gel bei einem pH-Wert von 10–11 72 Stunden bei Raumtemperatur unter leichtem Schütteln gemischt. Ein Überschuss an reaktiven Gruppen wurde mit 1 M Ethanolamin vier Stunden bei 50°C geblockt und die Gel-Aufschlemmung wurde in eine 1 ml-Spritzensäule geschüttet. Das Harz wurde mit drei abwechselnden Zyklen von jeweils 20 Säulenvolumina an Puffern mit einem pH-Wert von 4,0 (0,1 M Acetat, 0,5 M NaCl) und pH-Wert von 8,0 (0,1 M Tris-HCl, 0,5 M NaCl), gefolgt von 20 Säulenvolumina Reaktionspuffer (20 mM HEPES, pH-Wert von 7,3, 10 mM MgCl₂, 15 mM β-Glycerophosphat, 0,5 mM Natriumorthovanadat, 0,5 mM EGTA) aktiviert. Die Säule wurde bei 4°C in Reaktionspuffer mit 0,5% Natriumazid gelagert und vor jeder Verwendung mit sich abwechselnden Zyklen bei niedrigem und hohem pH-Wert, wie vorstehend beschrieben, regeneriert.
Aktiviertes HUVEC-Zell-Lysat (500 μg Protein in 1 ml Reaktionspuffer) wurde über die CVT-1545-Sepharose-Matrix nacheinander fünfmal geleitet und der Durchfluss wurde aufgefangen (nicht gebundenes Material). Die Matrix wurde sodann dreimal mit 1 ml Reaktionspuffer (Waschgänge 1–3), sodann dreimal jeweils mit Reaktionspuffer mit 0,5 M NaCl (Eluat 1–3) gewaschen. Aliquots (20 μl von 1 ml) jeder Probe wurden hinsichtlich ihrer Fähigkeit, an den GST-IκB-Sepharose-Kügelchen-Komplex zu phosphorylieren, untersucht und durch SDS-PAGE, wie vorstehend beschrieben, analysiert.
Test einer Affinitäts-angereicherten IκB-α-Kinase. Die gesammelten 0,5 M NaCl-Eluate von der Affinitätsmatrix wurden als die Quelle des Enzyms für die Entwicklung eines IκB-α-Kinase-Filtertests verwendet. Jede Reaktion enthielt Affinitäts-angereicherte IκB-α-Kinase (1 μg Protein), 10 ng GST-IκB-α-Kinase und 0,5 μCi [γ³²P]ATP (> 5000 Ci/mmol, New England, Nuclear Corp., Boston, MA) in 20 μl Reakti onspuffer. Die Reaktion wurde 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und durch die Zugabe von 2 μl 0,5 M EDTA abgestoppt. Reaktionsgemische wurden auf Phosphocellulose-Scheiben (Gibco BRL Life Technologies, Gaithersburg, MD) geblottet und die Filter wurden dreimal mit 0,15 M Phosphorsäure unter vorsichtigem Schütteln 15 Minuten gewaschen (bis zu zehn Filter wurden mit 300 ml 0,15 M Phosphorsäure gewaschen). Nach einem dritten Waschgang wurden die Filter luftgetrocknet, zu einer Szintillationsflüssigkeit gegeben und durch Flüssigszintillationsspektrometrie untersucht.
Elektrophoretischer Mobilitätsverschiebungs-Test: Kernextrakte wurden unter Verwendung eines Hochsalzpuffer-Extraktionsverfahrens hergestellt. 10 pmol doppelsträngiges NF-κB-Konsensus-Oligonukleotid (5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3') (Promega) wurden mit 5 μCi [γ-³²P]ATP (> 5000 Ci/mmol, New England Nuclear Corp., Boston, MA) durch Inkubation mit T4-Polynukleotid-Kinase eine Stunde bei 37°C 5'-endmarkiert. Nicht eingebaute Nukleotide wurden dadurch entfernt, dass das Reaktionsgemisch über 1 ml Sephadex G-5-Spinsäulen geleitet wurde. Bindungstests erfolgten bei Raumtemperatur für eine Stunde und bestanden aus 10 μg Nuklearextraktprotein, 1 μg Lachs-Sperma-DNA und 5 × 10⁴ cpm an ³²P-markiertem Konsensus-Oligonukleotid mit und ohne der 50fachen Menge an nicht markiertem Oligonukleotid. DNA-Protein-Komplexe wurden durch 8%ige nicht denaturierende Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese aufgetrennt, die Gele wurden auf einem Filterpapier getrocknet und durch Audioradiographie sichtbar gemacht. Die Tabelle 8 zeigt die Enzymaktivität ausgewählter erfindungsgemäßer Beispiele an, wobei diejenigen Verbindungen, die nicht von den angehängten Ansprüchen abgedeckt sind, lediglich zu Vergleichszwecken getestet wurden.
Tabelle 8

Claims

Verbindung der allgemeinen Formel:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, worin R₁ ein Halogenatom ist, R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxygruppe, Halogenatom und -C(O)R-Gruppe, ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -O-Alkylgruppe, Halogenatom, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, Mercapto-, Alkylthiol-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, Cyan-, Aryloxy-, Alkenyl-, Alkinyl-, -C(O)Alkylgruppe, oder Aryl- oder Heteroarylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Niederalkyl-, Alkoxygruppe, Halogenatom, Mercapto-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, -C(O)Alkyl-, Hydroxy-, Aryl-, Aryloxy-, Heteroaryl-, Nitro- oder Cyangruppe, sind und R₃ ein Halogenatom, eine -NR₄R₅-Gruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel:
ist, worin m, n und o unabhängig voneinander den Wert 1, 2 oder 3 aufweisen, Y eine -NR₄R₅-, Hydroxy-, Mercapto-, -OR-, Alkylthiolgruppe ist und R₄, R₄', R₄'', R₄''', R₅, R₅'' und R₅''' jeweils unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, NRR'-Gruppe oder Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, oder Y und R₄' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄'' und R₅'' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄''' und R₅''' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R₁ ein Chloratom ist.
Verbindung gemäß Anspruch 2, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, die gegebenenfalls mit einer, zwei oder drei Hydroxygruppen substituiert ist.
Verbindung gemäß Anspruch 2, wobei R₃ ein Halogenatom oder eine -NR₄R₅-Gruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 4, wobei R₃ ein Chloratom ist.
Verbindung gemäß Anspruch 4, wobei R₃ eine -NR₄R₅-Gruppe ist.
Verbindung der allgemeinen Formel
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, worin R₁ eine -NHR₁'-Gruppe ist, R₁' eine Chinolin-3-yl- oder Chinolin-6-ylgruppe ist oder R₁' eine Benzylgruppe ist, wobei der Ringanteil mit einer, zwei oder drei Gruppen substituiert ist, ausgewählt aus Halogenatom, -OR-, Thienyl-, Nitro-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, oder R₁' eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Brom-, Iodatom, -OR''-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist, R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxygruppe, Halogenatom und -C(O)R-Gruppe, ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -O-Alkylgruppe, Halogenatom, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, Mercapto-, Alkylthiol-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, Cyan-, Aryloxy-, Alkenyl-, Alkinyl-, -C(O)Alkylgruppe, oder Aryl- oder Heteroarylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Niederalkyl-, Alkoxygruppe, Halogenatom, Mercapto-, Alkylthiol-, Acetylen-, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, -C(O)Alkyl-, Hydroxy-, Aryl-, Aryloxy-, Heteroaryl-, Nitro- oder Cyangruppe, sind, R'' ein Wasserstoffatom oder eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -O-Alkylgruppe, Halogenatom, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, Mercapto-, Alkylthiol-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, Cyan-, Aryloxy-, Alkenyl-, Alkinyl-, -C(O)Alkylgruppe oder Aryl- oder Heteroarylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Niederalkyl-, Alkoxygruppe, Halogenatom, Mercapto-, Alkylthiol-, Acetylen-, Amino-, Mono- oder Dialkylamino-, -C(O)NH-Alkyl-, -C(O)N-Dialkyl-, -C(O)O-Alkyl-, -C(O)Alkyl-, Hydroxy-, Aryl-, Aryloxy-, Heteroaryl-, Nitro- oder Cyangruppe, ist, R₃ ein Halogenatom, eine -NR₄R₅-Gruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel:
ist, worin m, n und o unabhängig voneinander den Wert 1, 2 oder 3 aufweisen, Y eine -NR₄R₅-, Hydroxy-, Mercapto-, -OR-, Alkylthiogruppe ist und R₄, R₄', R₄'', R₄''', R₅, R₅'' und R₅''' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, oder Y und R₄' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄'' und R₅'' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄''' und R₅''' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können.
Verbindung gemäß Anspruch 7, wobei R₁ eine NHAr-Gruppe ist und Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Brom-, Iodatom, -OR''-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 8, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxygruppe und Halogenatom, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R'' ein Wasserstoffatom oder eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R₃ ein Halogenatom, eine -NR₄R₅-Gruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel:
ist, worin m, n und o unabhängig voneinander den Wert von 1, 2 oder 3 aufweisen, Y eine -NR₄R₅-, Hydroxy-, Mercapto-, -OR-, Alkylthiogruppe ist und R₄, R₄', R₄'', R₄''', R₅, R₅'' und R₅''' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom, eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, NRR'-Gruppe oder Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, Y und R₄' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄'' und R₅'' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄''' und R₅''' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können.
Verbindung gemäß Anspruch 8, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R'' ein Wasserstoffatom oder eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R₃ ein Halogenatom oder eine -NR₄R₅-Gruppe ist, worin R₄ und R₅ unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind.
Verbindung gemäß Anspruch 8, wobei: R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R'' ein Wasserstoffatom oder eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R₃ ein Halogenatom oder eine NR₄R₅-Gruppe ist, worin R₄ und R₅ unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, und Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Brom-, Iodatom, -OR''-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 8, wobei: R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R'' ein Wasserstoffatom oder eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R₃ ein Halogenatom oder eine -NR₄R₅-Gruppe ist, worin R₄ und R₅ unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Arylalkylgruppe sind, und Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Brom-, Iodatom, -OR''-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 7, wobei R₁ eine NHCH₂Ar-Gruppe ist, Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Halogenatom, -OR-, Thienyl-, Nitro-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 13, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxygruppe oder Halogenatom, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R₃ ein Halogenatom, eine -NR₄R₅-Gruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel:
ist, worin m, n und o unabhängig voneinander den Wert 1, 2 oder 3 aufweisen, Y eine -NR₄R₅-, Hydroxy-, Mercapto-, -OR-, Alkylthiogruppe ist und R₄, R₄', R₄'', R₄''', R₅, R₅'' und R₅''' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, oder Y und R₄' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄'' und R₅'' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können oder R₄''' und R₅''' zusammen ein einzelnes Sauerstoffatom sein können und Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Halogenatom, -OR-, Thienyl-, Nitro-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Mercapto-, Alkylthio-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 13, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R₃ ein Halogenatom oder eine -NR₄R₅-Gruppe ist, worin R₄ und R₅ unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Aryl-, Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind.
Verbindung gemäß Anspruch 13, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R₃ ein Halogenatom oder eine -NR₄R₅-Gruppe ist, worin R₄ und R₅ unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Heteroaryl- oder Arylalkylgruppe sind, und Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Halogenatom, -OR-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 13, wobei R₂ eine C₂- bis C₁₀-Alkylgruppe ist, R und R' unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe sind, R₃ ein Halogenatom oder eine -NR₄R₅-Gruppe ist, worin R₄ und R₅ unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe, gegebenenfalls substituiert mit einer oder zwei Gruppen, ausgewählt aus Hydroxy-, -NRR'-Gruppe oder Arylalkylgruppe sind, und Ar eine Phenylgruppe, substituiert mit einer, zwei oder drei Gruppen, ausgewählt aus Halogenatom, -OR-, Thienyl-, Pyridyl-, Piperonylgruppe oder Phenylgruppe, wobei die Phenylgruppe nicht substituiert oder mit Trifluormethylgruppe, Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Hydroxy-, Amino-, Nitro- oder Cyangruppe substituiert ist, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 7, wobei R₁ eine NHR₁'-Gruppe ist und R₁' eine Chinolin-3-ylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 8, wobei Ar eine 3-Iodphenyl-, 4-Bromphenyl- oder 4-Biphenylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 13, wobei CH₂Ar eine 4-Phenylbenzyl-, 4-Methoxybenzyl-, 3-Methoxybenzyl-, 4-(2-Thienyl)benzyl-, 4-(4-Methyl)phenylbenzyl-, 4-(4-Trifluormethyl)phenylbenzyl-, 3-(4-Cyanphenylbenzyl)-, 4-(4-Cyanphenyl)benzyl-, 4-(2-Pyridyl)benzyl-, 3-Methoxybenzyl-, 2-Chlorbenzyl-, 3-Chlorbenzyl-, 4-Chlorbenzyl-, 2,5-Difluorbenzyl- und 4-Nitrobenzylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 11, wobei R₃ ein Chloratom, eine Diethanolamino-, Diisopropanolamino-, 2-Aminoethylamino-, 2-Aminopropylamino-, 2-(Methylamino)ethylamino-, 1-Hydroxymethyl-2-methylpropylamin- oder 3-Amino-1,2-propandiolgruppe ist und R₂ eine Isopropylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 21, wobei R₃ ein Chloratom, eine Diethanolamino-, Diisopropanolamino-, 2-Aminoethylamino-, 2-Aminopropylamino-, 1-Hydroxymethyl-2-methylpropylamin- oder 3-Amino-1,2-propandiolgruppe ist und R₂ eine Isopropylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 7, die 2-{(2-Hydroxyethyl)-[9-isopropyl-6-(4-methoxybenzylamino)-9-H-purin-2-yl]amino}ethanol oder 2-[[6-(4-Brombenzylamino)-9-isopropyl-9-H-purin-2-yl]-(2-hydroxyethyl)amino]ethanol ist.
Kationisches Salz einer Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 7.
Säure-Additionssalz einer Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 7.
Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 7 bis 25 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Hemmen der Zellproliferation in einem Säuger.
Verwendung gemäß Anspruch 26, wobei die therapeutisch wirksame Menge der Verbindung 0,001 bis 100 mg/kg Gewicht des Säugers beträgt.
Verwendung gemäß Anspruch 26 oder 27, wobei die Zusammensetzung zum Verabreichen an einen Säuger geeignet ist, der an einer Zellproliferationserkrankung leidet, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rheumatoider Arthritis, Lupus, Typ I-Diabetes, multipler Sklerose, Krebs, Restenose, Wirt-Transplantat-Erkrankung, Gicht und polyzystischer Nierenerkrankung.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 26 bis 28, wobei der Säuger ein Mensch ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche 7 bis 25 und ein oder mehrere pharmazeutische Exzipienzien umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 30 in der Form einer Lösung.
Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 30 in der Form einer Tablette.
Antipilzmittel, das zum Behandeln von Pilzinfektionen in Menschen, Tieren und Pflanzen geeignet ist und das eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche 7 bis 25 umfasst.