DE69716461T2

DE69716461T2 - Antithrombotische organische nitrate

Info

Publication number: DE69716461T2
Application number: DE69716461T
Authority: DE
Inventors: Piero Del Soldato
Original assignee: Nicox SA
Current assignee: Nicox SA
Priority date: 1996-11-14
Filing date: 1997-11-12
Publication date: 2003-06-26
Anticipated expiration: 2017-11-13
Also published as: BR9712959A; EP0941218A1; ITMI962368A1; ITMI962368A0; BR9712959B1; KR100504122B1; IT1295694B1; CA2272063A1; JP4264137B2; ES2186013T3; AU729423B2; PT941218E; DE69716461D1; IL129768A; JP2001507676A; CA2272063C; KR20000053251A; US6242432B1; AU5551998A; CN1094931C

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Produkte, welche eine antithrombotische Wirkung aufweisen.
Cyclooxygenase (COX)-hemmende, entzündungshemmende Produkte sind aus vorhergehenden Patentanmeldungen im Namen der Anmelderin bekannt. Siehe im einzelnen die veröffentlichten Patentanmeldungen WO 94/04484, WO 94/ 12463, WO 95/09831, WO 95/30641. Diese Patentanmeldungen bezogen sich auf nicht-steredide enzündungshemmende Produkte mit nicht-sauren Endungen und auf solche mit Säure- Endungen, welche als Produkte, die aus dem Stand der Technik bekannt sind, erwahnt werden.
Besagte Produkte zeigten im Vergleich zu den Referenzprodukten, die keine -ONO&sub2;- Gruppe enthalten eine viel geringere Toxizität.
WO 95 30641 offenbart Verbindungen, die eine COX-hemmende Wirkung zeigen und die antithrombotische und antihypertensive Wirkung zeigen.
EP 637583 betrifft 1-Aryloxy-3-Alkylaniino-2-Propanolnitratesther der allgemeinen Formel
wobei R&sub1; -(CH&sub2;)m -Z-R&sub2; ist, m gleich 1 oder 2 ist, Z ein -O-Ether, -CONH-Amid oder eine -COO-Esterfunktion ist und R&sub2; eine C&sub2;&submin;&sub3; unverzweigte oder verzweigte Alkylkette ist, die wenigstens eine Nitroxygruppe aufweist. Besagte. Verbindungen sind als Heilmittel im Cardiovaskularen Bereich nützlich.
Es entstand das Bedürfnis nach verfügbaren Produkten, welche antithrombotische Wirkungen haben, die mit einer geringeren Toxizität bei der Langzeitbehandlung verbunden sind. Insbesondere sind die Wirksamkeit und Sicherheit von Anti-Thrombose- Mitteln eng miteinander verknüpft und die Forschung zielt darauf ab neue Moleküle mit erhöhtem therapeutischen Index zu finden, d h mit verbesserter Wirksamkeit und reduzierter Toxizität (Goodman & Gilman: "The pharmacological basis of therapeutics", Ed. J. Hardman, L. Limbrid, page 1357, 1996).
Unerwarteterweise und überraschenderweise wurde gefunden, daß die wie unten definierten Produkte der Erfindung wirksam sind bei der Hemmung von Thrombozytenaggregation, welche durch unterschiedliche Arten von Stimuli indiziert wird, insbesondere Collagen und Trombin, und gleichzeitig eine höhere Sicherheit im allgemeinen, speziell eine hohe gastrische Sicherheit aufweist, ohne Schädigungen in der Gastro-Intestinal Mucosa der behandelten Tiere zu verursachen.
Die Ergebnisse der vorliegenden Erfindung sind viel überraschender, wenn man beachtet, daß die neue Klasse der Produkte der Erfindung keine Cyclooxigenase (COX) hemmende Produkte sind und sie können daher nicht auf irgendeine Weise von den im Stand der Technik beschriebenen Produkte, insbesondere nach obigen Patenten, hergeleitet werden.
Ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen oder ihre Zusammensetzungen der allgemeinen Formel.
A - (X&sub1;-NO&sub2;)t&sub0;
oder ihre Salze für die Verwendung als Medikamente, insbesondere als Anti-Thrombose- Mittel, da sie wirksam bei der Hemmung von Thrombozytenaggregation, in welcher:
t&sub0; ist ein Integer gleich 1 oder 2;
A=RN&sub0; mit N&sub0; = (COXu)t - oder COON&sub1;, wobei t ein Integer gleich Null oder 1 ist; u ein Ineger gleich 0 oder 1 ist;
X = O, NH, NR1C wobei R1C ein lineares oder verzweigtes Alkyl ist, welches 1 bis 10 Kohlenstoffatome aufweist; N, ein lineares oder verzweigtes Alkyl ist, welches 1 bis 10 Kohlenstoffatome oder Wasserstoff aufweist;
R ausgewählt ist aus den folgenden Gruppen: - Gruppe A)
wobei R1a und R11a gleich oder unterschiedlich zueinander sind und H oder ein lineares oder falls möglich ein verzweigtes Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen sind, vorzugsweise R1a=R11a=H; n1a ein Integer von 1 bis 6 ist, vorzugsweise von 2 bis 4;
R&sub1; ist ausgewählt aus:
wobei N&sub2; die gleiche Bedeutung wie N&sub0; hat; wenigstens eine der Gruppen N&sub0; oder N&sub2; eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X, geeignet ist, 1b)
R1a, R11a, n1a definiert sind in 1a;
N&sub3; ist H, (CH&sub3;)&sub2;CH-CH-OCOCH&sub2;CH&sub3;, oder eine freie Valenz mit welcher X&sub1; verbunden ist
(das heißt, daß N&sub3; abwesend ist),
R1b ist ausgewählt aus
N&sub2; ist wie oben definiert, wobei wenigstens eine der Gruppen N&sub3; oder N&sub2; eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X&sub1; geeignet ist,
1c) wobei u = 1
wobei N&sub0; wie oben definiert ist, wobei t = 1, d. h. es weist eine freie Valenz auf, welche zu einer Verbindung mit X&sub1; geeignet ist,
R1c ausgewählt ist aus H. -COCH&sub3;, oder
1d)
wobei N&sub2; wie definiert ist, und wenigstens eine der Gruppen N&sub2; eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X&sub1; geeignet ist;

- Gruppe B

wobei t = 1 und u = 0;
11a)
wobei R1a, R11a wie in 1a) definiert sind,
R11b hat die Bedeutung von R1a;
RBA ist ausgewählt aus:
wobei in Gruppe B), N&sub2; wie oben definiert ist und wenigstens eine der N&sub2; Gruppen eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X, geeignet ist;
X&sub1; ist eine bivalente Verbindungsbrücke ausgewählt aus den folgenden:
- YO wobei Y ein lineares oder, falls möglich, ein verzweigtes C&sub1;-C&sub2;&sub0; Alkylen, welches vorzugsweise 2 bis 5 Kohlenstoffatome aufweist, oder einen optional substituiertes Cyclo- Alkylen, welches 5 bis 7 Kohlenstoffatome aufweist,
- Y&sub1; ausgewählt aus
wobei n&sub3; ein Integer von 0 bis 3 ist;
wobei nf ein Integer von I bis 6 ist, vorzugsweise von 2 bis 4
wobei R1f = H, CH&sub3; und nf ein integer von 1 bis 6 ist, vorzugsweise von 2 bis 4,
Die Verbindungen welche erwähnt werden können und welche die bevorzugten Verbindungen sind, sind diejenigen, welche unten aufgeführt sind, wo R durch die aus dem Stand der Technik bekannten Verfahren erhalten werden kann.
Es können zum Beispiel die Verbindungen und Verfahren, die in The Merck Index, Ed 12 aus 1996 als Vorläufer und zugehörige Verfahren erwähnt werden. Die Vorläufer (entsprechend der Merck Nomenklatur) sind diejenigen, die unten dargestellt sind, bei welchen die verschiedenen Substituenten, die in den Formeln in Gruppe A) und Gruppe B) dargestellt sind, solche sind, die in den aufgeführten Verbindungen definiert sind: Alacepril, Benazepril, Captopril, Ceronapril, Cilazapril, Delapril, Enalapril, Enalaprilat, Fosinapril, Imidapril, Lisinopril, Quinapril, Ramipril, Spirapril, Temocapril, Trandolapril, Moveltilpril, Perindopril, Befunolol, Betaxolol, Bupranolol, Carteolol, Levobunolol, Metipranolol, Timolol, Oxprenolol, Mepindolol, Atenolol, Labetalol.
Die wie oben definierten Verbindungsbrücken X&sub1; können durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren erhalten werden oder durch Modifizieren der bekannten Verfahren, indem X&sub1;-Brücken durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren eingeführt werden, wenn diese zu den anderen Verbindungsbrücken unterschiedliche sind, die in den erwähnten Patenten beschrieben sind. Im allgemeinen ist die Verbindung zwischen A und Xr, wie gezeigt, vom Ester- oder Amidtyp (NH oder NR1c, wie in X definiert). Jeder Syntheseweg, der zur Ausbildung solcher Bindungen gut bekannt ist, kann verwendet werden.
Im Fall von Estern umfasst der direkteste Syntheseweg die Reaktion von Acylchloriden A- C0-Cl oder A-(CO-Cl)2 in Halogenalkoholen des Typs HO-Ya-Cl, HO-Ya-Br, HO-Ya-I, wobei Ya gleich Y oder Y1 wie oben definiert ist, ohne das Sauerstoff-Atom -O-, bei experimentellen Bedingungen, welche Teil des bekannten Standes der Technik sind.
Die Reaktionsprodukte der Formel A-CO-O-Ya-C1(Br, 1) können ebenfalls durch Reagieren von Natrium- oder Kaliumsalzen der besagten Sauren A-CO-OH mit Di- Halogenderivaten der allgemeinen Formel YaCl&sub2;, YaBr&sub2; oder YaI&sub2; erhalten werden Die Reaktionsprodukte werden in das fertige Produkt durch Reaktion mit AgNO&sub3; in Acetonitril entsprechend den aus dem Stand der Technik bekannten Verfahren konvertiert.
Das allgemeine Schema ist folgendes:
A-COCl + HO-Ya-Br ---------> A-CO-O-Ya-Br + AgNO&sub3; ---------> A-X&sub1;NO&sub2;
wobei X&sub1; = YaO.
Das allgemeine Schema kann also folgendes sein:
> A-C&sub0;-0-~'a-Br + AgNO&sub3; > A-X,NOz
A-CO-ONa + Br&sub2;Ya --------> ACO-OYa-Br + AgNO&sub3; ----------> A-X&sub1;NO&sub2;
wobei X&sub1; = YaO
Im Fall von Amiden umfasst die Synthesesequenz die Reaktion der gleichen Acylchloride A-CO-Cl mit Aminoalkoholen der allgemeinen Formel NH&sub2;-Ya-OH oder NHR1c-Ya-OH, damit Amide der allgemeinen Formel:
A-CO-NH-Ya-OH oder A-CO-NR1c-Ya-OH
entsprechend den bekannten Verfahren entstehen.
Die Reaktion dieser Amide mit halogenierenden Mitteln wie, zum Beispiel PCl&sub5;, PBr&sub3;, SOCl&sub2;, etc. führt zu Halogen-Derivaten der allgemeinen Formel:
A-CO-NH-Ya-Br(Cl) und A-CO-NR1c-Ya-Br(Cl).
Durch die Reaktion mit AgNO&sub3; in Acetonitril entsprechend den bekannten Literaturverfahren führen die besagten letzteren Produkte zu den endgültigen Produkten AX&sub1;NO&sub2;.
Die Sequenz kann wie folgt dargestellt werden:
wobei YaO gleich X&sub1; ist.
Ein alternativer Weg zur Ausbildung eines Esters ist die Reaktion des Natrium- oder Kaliumsalzes der Säuren mit dem Stickstoffester der Halogenalkohole der allgemeinen Formel:
NO&sub2;O-Ya-Cl(Br, I)
damit die Produkte der Erfindung direkt erzeugt werden.
Das Reaktionsschema ist folgendes:
A-CO-ONa + Br-Ya-ONO&sub2; ------------> A-CO-O-Ya-ONO&sub2;
wobei YaO gleich X&sub1; ist.
Andere Synthesewege, die ähnlich zu den oben beschriebenen sind, sind solche, bei denen Dihalogen-Derivate Br&sub2;Y, mit Enolaten reagieren. Die Reaktionsprodukte werden dann durch Reaktion mit AgNO&sub3; in Acetonitril entsprechend der obigen Reaktion konvertiert. Das allgemeine Schema, dargestellt für ein -OH, welches zu Gruppe A gehört, ist folgendes:
Ein allgemeines Verfahren für die -OH-Gruppe ist in Beispiel 1 nur für illustrative Zwecke beschrieben.
Die Prozesse zur Erzeugung dieser Verbindungsgruppen X&sub1; sind in der Patentanmeldung WO 95/30641 beschrieben.
Die Produkte der Erfindung, wie sie oben beschrieben sind, sind als Medikamente allgemein neu. Insbesondere sind sie aufgrund ihrer antithrombotischen Wirkung neu und sind als Verbindungen als solche neu.
Zusätzliche pharmazeutische Verwendungen, welche für die Produkte der Erfindung erwähnt werden können, sind, zum Beispiel, ihre antihypertensive Wirkung (d. h. arterielle Hypertension, Glaukom) und ihre cardioprotektive Wirkung (d. h. Angina Pectoris, Herzversagen, Coronar Ischaemia).
Bezüglich der antihypertensiven Wirkung sollte bemerkt werden, daß die Produkte der Erfindung ein extrem befriedigendes pharmaco-therapeutisches Profil gezeigt haben, mit verbesserter Wirksamkeit im Vergleich zu den Vorläufern, welche keine -ONO&sub2;-Gruppe enthalten und gleichzeitig eine überlegene Sicherheit zeigten.
Es sollte ebenfalls bemerkt werden, daß die Produkte der Erfindung eine antihypertensive Wirkung in Kombination mit einer antithrombotischen Wirkung zeigen. Die ist ein außergewöhnlicher Vorteil bei der Behandlung von cardiovaskularen Krankheiten im allgemeinen, da es der Zweck jedes therapeutischen Weges ist, für den Patienten ein insgesamt reduziertes Risiko für cardiovaskulare Krankheit, wie myocardial oder cerebrale infarction und atherosclerosis zu sichern (Goodman & Gilman "The pharmacological basis of therapeutics", Ed J Hardman, L Limbrid, Seiten 747, 1354-7, 1996).
Die folgenden Beispiele werden nur als Erklärung gegeben und nicht als Begrenzung der vorliegenden Erfindung.

Beispiele

Beispiel 1: Chemische Synthese und Charakterisierung von NO-timolol (NO-TIM)

Synthese von (R)-(4-nitroxy)butanoat aus 1-[(1,1-dimethyl)amino]-3-{[4-(4- morpholinyl)-1,2,5-thiadiazol-3-yl]oxy}-2-propyl maleat.

Der Ausgangspunkt ist timolol maleate (ein kommerzielles Produkt), wobei das timolol die folgende Formel hat:
(S)-1-[(1,1-dimethylethyl)amino]-3-{[4-morpholinyl)-1,2,5-thiadiazol-3yl]oxy-2- propanol.
Timolol maleate (2.0 g) wurde mit einer Lösung aus 10% NaOH (30 ml) behandelt. 30 ml CH&sub2;Cl&sub2; wurde hinzugefügt und dann die Phasen getrennt. Die wässrige Phase wurde mehrere Male mit CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert. Die zusammengefassten organischen Phasen wurden getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;) und das Lösungsmittel bei reduziertem Druck abgesaugt 14 g des reinen Produkts wurde erhalten (entsprechend 96%).
¹H NMR (300 MHz CDCl&sub3;): δ 1.05 (9H, s, 3CH&sub3;), 2.7 (2H, 2dd, CH&sub2;-NH), 35 (4H, m, Morpholin), 3,8 (4H, t, Morpholin), 3.85 (1H, m, CH), 4.4 (2H, 2dd, O-CH&sub2;).
(S)-1-[(1,1-dimethylethyl)amino]-3-{[4-(4-morpholinyl)-1,2,5-thiadiazol-3-yl]oxy}-2- propanolhydrochlorid.
0.8 ml einer 7M HCl-Lösung in Isopropanol wurde tropfenweise zu einer magnetisch gerührten Lösung aus Timolol (1.4 g) in isopropanol (30 ml) zugefügt. Die Losung wurde 30 Minuten gerührt. Die Reaktionsmischung wurde bei reduziertem Druck vom Lösungsmittel befreit. 1.47 g des reinen Produkts wurden erhalten (entsprechend 91%).
¹H NMR (300 MHz CDCl&sub3;): δ 1 45 (9H, s, 3CH; ). 3.0S (2H, 2dd, CH&sub2;-NE). 3.5 (4H, t, Morpholin), 3.8 (41-1, t, Morpholin), 4.5 (2H, d, O-CH&sub2;), 4.55 (1H, m, CH).
(R)-(4-bromo)butanoat von 1-[(1,1,-dimethylethyl)amino]-3-{[4-(4-Morphinyl)-1,2,5- thiadiazol-3-yl]oxyl}-2-propyl
4-Bromobutyrylchlorid (0.4 ml) wurde tropfenweise in einer Stickstoffatmosphäre zu einer magnetisch gerührten Lösung aus Timololhydrochlorid (0.82 g) in CHCl&sub3; zugefügt, welches über P&sub2;O&sub5; getrocknet wurde (2U ml). Es wurde für 4 Tage gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann bei reduziertem Druck vom Lösungsmittel befreit Der Rest wurde auf Silica Gel chromatographiert, wobei Diethylether mit 3% Et3 N als Extraktionsmittel verwendet wurde. 0.830 g des reinen Produkts wurde aus den Zwischenfraktionen erhalten (entsprechend 78%).
¹H NMR (300 MHz CDCl&sub3;): δ 1.05 (9H, s, 3-CH&sub3;), 2.05 (2H, m, COCH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;- ONO&sub2;), 2.5 (2H, m, COCH&sub2;-CH&sub2;CH&sub2;ONO&sub2;), 2.8 (2H, d, CH,-NH), 3.5 (6 V m, Morpholin), 3.8 (4H, t, Morpholin), 4.65 (2H, 2dd, O-CH&sub2;), 5 25 (1H, m, CH) d)
(R)-(nitroxy)butanoate von 1-[(1,1-dimethylethyl)amino]-3-{[4-(4-morpholinyl)-1,2,5- thiadiazol-3-yl]oxy}-2-propyl.
Eine Lösung aus AgNO&sub3; (0.450 g) in CH&sub3;CN (5 ml) wurde tropfenweise bei Umgebungstemperatur zu einer magnetisch gerührten Losung von Timolol (4- bromo)butanoat (0.830 g) in CH&sub3;CN (10 ml) zugefügt. Die Temperatur wurde nach und nach auf 60ºC erhöht und die Reaktion für 24 Stunden fortgesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei reduziertem Druck vom Lösungsmittel befreit. Der Rest wurde auf Silica Gel chromatographiert, wobei Diethylether mit 3% Et&sub3;N als Extraktionsmittel verwendet wurde. 0.51 g des reinen Produkts wurde aus den ersten Fraktionen erhalten (entsprechend 64%).
¹H NMR (300 MHz CDCl&sub3;): δ 1.05 (9H, s, 3CH&sub3;), 2.05 (2H, m, COCH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;- ONO&sub2;), 2.5 (2H, 2t, COCH&sub2;-CH&sub2;-CHrONO2), 2.8 (2H, d, CH&sub2;-NH), 3.5 (4H, m, Morpholin), 3.8 (4H,t, Morpholin), 4.5 (2H, t, -CH&sub2;-ONOz), 4.58 (2H. 2dd, O-CH&sub2;), 5.25 (1H, m, CH).
MS: M&spplus; 448
(R)-(4-nitroxy)butanoate von 1-[(1,1-dimethylethyl)amino]-3-{[4-(4-morpholinyl)-1,2,5- thiadiazol-3-yl]}-2-propylmaleat.
Eine Lösung von Maleinsäure (0.132 g) in Aceton (5 ml) wurde tropfenweise zu einer magnetisch gerührten Lösung von Timolol (4-nitroxy)butanoate (0.50 g) in Aceton (10 ml) zugefügt. Es wurde 2 Stunden gerührt. Die Reaktionsmischung wurde bei reduziertem Druck vom Lösungsmittel befreit. Der rohe Rest wurde mit Diethylether vermahlen, wodurch 0.5 g eines weißen Feststoffes erzeugt wurden (S. P. 133-136ºC, Ergebnis 70%).
¹H NMR (300 MHz CDCl&sub3;): δ 1.48 (9H, s, 3CH&sub3;), 2.05 (2H, m, -COCH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;- ONO&sub2;), 2.58 (2H, 2td, COCH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-ONOz), 3.3 (214, Zm, CH&sub2;-NHz), 3.5 (4H, m, Morpholin), 3.8 (4H, t. Morpholin), 4.5 (2H, t, CH&sub2;-ONO&sub2;) 4.7(2H, 2dd, O-CH&sub2;), 5.55 (1H, m, CH), 6,47 (2H, s, Malein).

BEISPIEL 2A: Chemische Synthese und Charakterisierung von NO-Enalapril (NO-ENA)

Das Reaktionsschema ist wie folgt:

Schritt 1

3 g Diterbutyldicarbonyl (DTBC) wurde bei Umgebungstemperatur zu einer Lösung von 5 g Enalapril in 100 ml Dimethylformamid (DMF) und Triethylamin (TEA) (276 g) zugefügt. Die Lösung wurde 16 Stunden gerührt. Dann wurde die Losung zweimal mit verdünnter HCl und Wasser gewaschen, 3 Mal mit 100 ml Portionen Ether extrahiert Die getrockneten und abgesaugten organischen Phasen ergaben 3 g des Formel-2) Produkts (ein Öl). In Formel 2) ist tBOC = t-Butyldicarbonyl.

Schritt 2

1.4 g Dicyclohexylcarbodümid (DCC), und dann 30 ml einer Lösung von 1.1 g Nitroxymethylphenol in CH&sub2;Cl&sub2; wurden zu 3 g N-geschütztem Enalapril (einer Verbindung nach Formel 2) gelöst in 50 ml Methylendichlorid zugefügt. Die Mischung wurde über Nacht gerührt, Dicyclohexylurea wurde herausgefiltert und das Lösungsmittel bis zur Trocknung abgezogen. Der Rest wurde auf Silica Gel 60 Merck chromatographiert, wobei eine Ethylacetat/Hexanmischung verwendet wurde. Eine Fraktion von 2 g der Zwischenprodukte aus Formel 3), bei welcher R der Rest von Nitrooxymethylphenol ohne OH war, wurde gesammelt.

Schritt 3

1 g des Produkts aus Formel 3 wurde bei 0ºC in einer 4 N Lösung von 30 ml trockenem HCl-Gas in Ethylacetat (ACO-Et) gelöst und 10 Stunden lang gerührt. Der erhaltende Niederschlag wurde gefiltert und unter Vakuum getrocknet, wobei 0.5 g eines Produkts 4) erhalten wurde.

BEISPIEL 2B: Chemische Synthese und Charakterisierung von NO-Enalaprilat (NO- ENP)

Das Reaktionsschema ist wie folgt:

Schritt 1

3 g Diterbutyldicarbonyl (DTBC) wurde bei Umgebungstemperatur zu einer Lösung von 5 g Enalaprilat in 100 ml Dimethylformamid (DMF) und Triethylamin (TEA) (2.76 g) zugefügt. Die Lösung wurde 16 Stunden gerührt. Dann wurde die Lösung zweimal mit verdünnter HCl und Wasser gewaschen, 3 Mal mit 100 ml Portionen Ether extrahiert. Die getrockneten und abgesaugten organischen Phasen ergaben 3 g des Produkts 2) als ein Öl. In Formel 2) ist tBOC = t-Butyldicarbonyl

Schritt 2

2.75 g Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), und dann 30 ml einer Losung von 2.25 g Nitroxymethylphenol wurden zu 3 g N-geschütztem Enalaprilat gelöst in 50 ml Methylendichlorid zugefügt. Die Mischung wurde über Nacht gerührt, Dicyclohexylurea wurde herausgefiltert und das Lösungsmittel bis zur Trockenheit abgezogen. Der Rest wurde auf Silica Gel 60 Merck chromatographiert, wobei eine Ethylacetat/Hexanmischung verwendet wurde. Eine Fraktion von 3 g. des Zwischenprodukts aus Formel 3) wurde gesammelt R hat die Bedeutung wie in Beispiel 2A definiert.

Schritt 3

1 g des Produkts 3) wurde bei bei 0ºC in einer 4 N Lösung voll 30 ml trockenem HCl-Gas in ACOEt gelöst und 10 Stunden lang gerührt. Der erhaltende Niederschlag wurde gefiltert und unter Vakuum getrocknet 0.7 g eines Produkts 4) wurden erhalten.

BEISPIEL 3: Pharmakologische Studien

Die Produkte der Beispiele 1 und 2 wurden immer als 2 Gew.-%ige Suspensionen in Carboxymethylcellulose in vivo appliziert.
Die experimentellen Gruppen bestanden aus 6 bis 8 Proben um eine angemessene statistische Auswertung zu ermöglichen, welche ausgeführt wurde, wenn sie gebraucht wurde.
Bis zu akuter Toxizität für die Verbindungen, welche das Objekt der Erfindung sind, wurde nach jeder einzelnen oralen Dosis zu den Gruppen aus 10 Mausen ausgewertet.
Die Todesrate und das Vorliegen von toxischen Symptomen wurde während der Beobachtungszeit von 14 Tagen aufgenommen. Selbst nach einer 50 mg/kg Dosis zeigten die Tiere keine Anzeichen von augenscheinlicher Toxizität.

BEISPIEL 3A

STUDIE VON ANTI-THROMBOZYTEN WIRKUNGEN

Die Fähigkeit von NO-ENA und NO-TIM die Thrombozytenaggregation zu hemmen wurde durch Anwendung des in vivo Modells, welches von Pinon (J. Phamacol Methods 12, 79., 1989) beschrieben wurde, ausgewertet. 5 Gruppen von männlichen Wistar-Ratten (200-250 g) erhielten über 5 Tage jeweils eine orale tägliche Dosis von 10 mg/kg NO- ENA, Enalapril, NO-TIM, Timolol oder den Träger. Zu einer angemessenen Zeit wurde am vierten Tag die Nahrung (aber nicht Wasser) entzogen. 18 bis 20 Stunden später erhielten die Tiere ihre letzte Behandlung. Eine Stunde später wurden die Tiere mit 10% Urethan (1 mg/kg intraperitoneal) anaesthetisiert. Collagen (Typ 6, Sigma) wurde intravenös bei einer Dosis von 2 mg/kg appliziert. Drei Minuten später wurden zwei Blutproben (A und B) von der Arteria Carotis auf die folgende Weise entnommen, wobei 2.5-ml Kunststoffspritzen verwendet wurden: Probe A, 0.4 ml Blut in 1 6 ml EDTA/Formalinpuffer (EDTA Tetranatriumsalz 24 mM, KH&sub2;PO&sub4; 1.3mM, Na&sub2;PO&sub4; 13 4 mM), die Proben wurden dann in eine 5-ml Polystyren-Reagenzglas überführt und konnten sich dort bei Umgebungstemperatur setzen lassen. Nach dieser Zeit wurden die Thrombozytenaggregationen in Probe A in Formalin fixiert, während die von Probe B mit EDTA. behandelt wurden. Es wurden dann eine Thrombozyten-Zählung für jede Probe durchgeführt, wobei ein konventionelles Mikroskop verwendet wurde. Die Zählung für Probe B war die Gesamtzahl der Thrombozyten, während bei Probe A nur die nichtaggregierten Thrombozyten berücksichtigt wurden. Die Ergebnisse wurden als prozentuale Aggregation ausgedrückt, die wie folgt berechnet wurde {[1-(Zahl der Thrombozyten in Probe A)/(Zahl der Thrombozyten in Probe B)] · 100}. Die Ergebnisse sind als prozentuale Hemmung der Kontrollgruppe (Träger) ausgedrückt und in Tabelle ' dargestellt.

TABELLE I

STUDIE DER ANTITHROMBOZYTEN-WIRKUNG VON NO-ENA ODER NO-TIM GEGENÜBER ENALAPRIL ODER TIMOLOL BEI RATTEN

Verbindung / Antithrombozyten Wirkung (%)
NO-ENA 65
NO-TIIM 58
ENALAPRIL 15
TIMOLOL 2
Wie in Tabelle 1 gezeigt, waren die Nitroderivate der Erfindung im Unterschied zu den Referenzprodukten in der Lage die von Collagen induzierte Aggregation zu hemmen.

BEISPIEL 3B: STUDIE DER ANTITHROMBOTISCHEN WIRKUNG

5 Gruppen aus männlichen Charles River Ratten der Schweizer Linie, 15 bis 20 g, erhielten fünf Tage lang eine tägliche orale Dosis von 10 mg/kg von NO-ENA, Enalapril, NO-TIM, Timolol oder den Träger. Zu einer angemessenen Zeit wurde am vierten Tag die Nahrung (aber nicht Wasser) entzogen. 18 bis 20 Stunden später erhielten die Tiere ihre letzte Behandlung. Eine Stunde später wurden den Tieren in die Caudal Vene eine 0. 1 ml Collagen (Typ 6, Sigma) Mischung plus Adrenalinhydrochlorid (100 uM) verdünnt in einer Lösung aus 0.154 M Natriumchlorid injeziert. Wie bereits erläutert (Cirino G et al, Thrombosis Reasearch 79, 73, 1995), verursachte diese Mischung den Tod innerhalb von 3 Minuten bei 90% der Kontrolltiere.
Die Ergebnisse werden als prozentuale Hemmung im Vergleich zur Kontrollgruppe ausgedrückt und sind in Tabelle 2 dargestellt.

TABELLE 2

STUDIE DER ANTITHROMBOTISCHEN WIRKUNG VON NO-ENA ODER NO- TIM GEGENÜBER ENALAPRIL ODER TIMOLOL BEI RATTEN

Verbindung / Antithrombotische Wirkung (%)
NO-ENA 53
NO-TIM 44
ENALAPRIL 11
TIMOLOL 6
Wie in Tabelle 2 gezeigt, waren die Nitroderivate der Erfindung im Unterschied zu den Referenzprodukten in der Lage die von Collagen induzierte Thrombose zu hemmen.

BEISPIEL 3C: STUDIE DER ANTIHYPERTENSIVEN WIRKUNG

Die Fähigkeit von N&sub0;-ENA Hypertension zu hemmen wurde durch Anwendung des in vivo Modells, welches von Ribeiro et al. (Hypertension 20, 298, 1992) beschrieben wurde, ausgewertet. 5 Gruppen von männlichen Wistar-Ratten (235-284 g) erhielten intravenös über 5 Tage jeweils eine tägliche Dosis von 10 mg/kg NO-ENA, Enalapril, NO-TIM, Timolol oder den Träger. Die arterielle Hypertension wurde durch Applikation von Nw-Nitro-L-Argininemethylester (L-NAME) im Trinkwasser über 6 Wochen induziert. L-NAME wurde in dem Trinkwasser mit einer Konzentration von 60 bis 70 mg 100 ml&supmin;¹ gelöst, damit eine tägliche Menge von etwa 60 mg kg&supmin;¹ appliziert wird. Eine Stunde nach der Behandlung wurde der systemische Blutdruck nach dem Tail-Cap- Verfahren (Zats, Lab. Anim. Sci. 42, 198, 1990) gemessen.

TABELLE 3

STUDIE DER ANTIHYPERTENSIVEN-WIRKUNG VON NO-ENA GEGENÜBER ENALAPRIL BEI RATTEN

Verbindung / Antithrombozyten Wirkung (%)
TRÄGER 170±7
NO-ENA 115±4*
ENALAPRIL 163±5
*P < 0.05 gegenüber den beiden anderen Gruppen
Wie in Tabelle 3 gezeigt, waren die Nitroderivate der Erfindung im Unterschied zu den Referenzprodukten in der Lage die von durch L-NAME verursachte Thrombose induzierte Bluthypertension zu hemmen.

BEISPIEL 3 B: STUDIE VON OCULARER HYPERTENSIVER WIRKUNG UND OCULARER SICHERHEIT VON NO-ENA ODER NO-TIM GEGENÜBER ENALAPRIL ODER TIMOLOL BEI KANINCHEN

Bei Kaninchen ergab die örtliche Anwendung von 100 ug NO-ENA oder NO-TIM eine stärker ausgebildete und länger andauernde (mehr als 6 Stunden) Verringerung des intraocularem Druck (jeweils 6-7 mmHg) als die Referenzprodukte Timolol und Enalapril. Weiterhin wurde für NO-TIM das Verhältnis zwischen der Produktkonzentration im Plasma (P) und wässrigem Humor gegenüber Timolol mittels des HPLC-Verfahrens bestimmt. Es wurde gefunden, daß das P/AH-Verhältnis für NO-TIM 5,5 mal geringer war als das für Timolol, was darauf hinweist, daß die systemische Absorption der Nitroderivate (und konsequenterweise jede potentielle Nebenwirkung von besagtem Derivat) im Vergleich zum Referenzprodukt bemerkenswert reduziert wurde.

BEISPIEL 3E: STUDIE VON NO-ENA WIRKUNGEN AUF INDUZIERTE BRONCHOCONSTRICTION BEI MEERSCHWEINCHEN GEGENÜBER ENALAPRIL

Bronchoconstriction welches bei Meerschweinchen durch Capsaicin induziert wurde ist ein Tiermodell, welches mit der Fähigkeit von ACE (Angiotensin-konvertierendes Enzym)-Hemmern verbunden ist, damit bei Patienten Husten hervorgerufen wird (Subissi et al., J. Cardiovasc. Pharmacol 20/l, 139-146, 1992).
Die angepassten Testbedingungen waren wie vorher von Del Soldato et al (J. Pharmacological Methods 5, 279, 1981) beschrieben. Weibliche Meerschweinchen mit einem Gewicht von 300 bis 400 g wurden durch intraperitoneale Injektion von Natrium 5,5-Diiethylbarbiturat (200 mg/kg) anaesthetisiert und unter künstlicher Beatmung bei einem konstanten positiven Druck gehalten. Die rechte Jugularis wurde für die Applikation mit der Testverbindung kanüliert. Durch mittlere Eröffnung des Abdomen wurde der Duodenum entfernt und durch einen schmalen Schnitt die Spitze einer geeigneten Polyethylen-Kanüle eingeführt und fixiert. Das andere Ende der Kanüle wurde mit einer Spritze für die intraduodenale Applikation von NO-ENA (10 mg/kg), Enalapril (10 mg/kg) oder Träger verbunden 45 Minuten später wurde 0.1 ml Capsaicin (1 ug/kg) in die Jugolaris der Tiere injeziert. Vor und nach der Injektion von Capsaicin wurden die Änderungen des Atmungsbereichs mit einem modifizierten Konzett-Gerät gemessen, welches mit einem geeigneten polygraphischen Verstärker (Hewlett Packard) verbunden war.
Die Ergebnisse wurden als Verhältnis der Antworten, die vor und nach der Applikation der Testverbindung erhalten wurden, berechnet, ausgedrückt als eine prozentuale Antwort, die allein mit dem Träger erhalten wurde, dargestellt in Tabelle 4.

TABELLE 4

STUDIE DER WIRKUNGEN VON NO ENA AUF BRONCHOCUNSTRICTION INDUZIERT BEI MEERSCHWEINCHEN IM VERGLEICH ZU ENALAPRIL

BEHANDLUNG / BRONCHOCONSTRICTIVE ANTWORT (%)
TRÄGER 100
NO-ENA 72
ENALAPRIL 327
Wie in Tabelle 4 gezeigt, reduziert das Nitroderivat der Erfindung eine von Capsaicin induzierte Bronchoconstriction im Unterschied zum Referenzprodukt, welches die bronchoconstrictive Antwort tatsächlich bemerkenswert verstärkte.

SCHLUSSFOLGERUNGEN

Wie bei obigen Beispielen beobachtet werden kann, zeigen die Nitroderivate, welche der Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind, eine bemerkenswerte antithrombotische und cardiovasculare Wirkung bei exzellenter Sicherheit wenn sie mit den Referenzprodukten verglichen werden.

Claims

1. Verbindungen oder ihre Zusammensetzungen der allgemeinen Formel:

A-(X&sub1;-NO&sub2;)t&sub0;

oder ihre Salze, in welcher:

t&sub0; ist ein Integer gleich 1 oder 2;

A = RN&sub0; mit N&sub0; = (COXu)t - oder COON, wobei t ein Integer gleich Null oder 1 ist; u ein Integer gleich 0 oder 1 ist;

X = O, NH, NR1c wobei R1c ein lineares oder verzweigtes Alkyl ist, welches 1 bis 10 Kohlenstoffatome aufweist; N&sub1; ein lineares oder verzweigtes Alkyl ist, welches 1 bis 10 Kohlenstoffatome oder Wasserstoff aufweist;

R ausgewählt ist aus den folgenden Gruppen:

* Gruppe A)

wobei R1a und R11a gleich oder unterschiedlich zueinander sind und H oder ein lineares oder falls möglich ein verzweigtes Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen sind, vorzugsweise R1a = R11a = H; n1a ein Integer von 1 bis 6 ist, vorzugsweise von 2 bis 4;

R&sub1; ist ausgewählt aus

wobei N&sub2; die gleiche Bedeutung wie N&sub0; hat; wenigstens eine der Gruppen N&sub0; oder N&sub2; eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X, geeignet ist, 1b)

R1a, R11a, n1a definiert sind in 1a;

N&sub3; ist H, (CH&sub3;)&sub2;CH-CH-OCOCH&sub2;CH&sub3;, oder eine freie Valenz mit welcher X, verbunden ist

(das heißt, daß N&sub3; abwesend ist);

R1b ist ausgewählt aus:

N&sub2; ist wie oben definiert, wobei wenigstens eine der Gruppen N&sub3; oder N&sub2; eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X&sub1; geeignet ist;

1c) wobei t = 1

wobei N&sub0; wie oben definiert ist wobei t = 1, d. h. es weist eine freie Valenz auf, welche zu einer Verbindung mit X, geeignet ist;

R1c ausgewählt ist aus H, -COCH&sub3;, oder

wobei N&sub2; wie definiert ist, und wenigstens eine der Gruppen N&sub2; eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X&sub1; geeignet ist;

*Gruppe B

wobei t = 1 und u = 0;

wobei R1a, R118 wie in Ia) definiert sind;

R11b hat die Bedeutung von R1a;

RBA ist ausgewählt aus:

wobei in Gruppe B), N&sub2; wie oben definiert ist und wenigstens eine der N&sub2; Gruppen eine freie Valenz aufweist, welche zu einer Verbindung mit X1 geeignet ist,

X&sub1; ist eine bivalente Verbindungsbrücke ausgewählt aus den folgenden:

- YO wobei Y ein lineares oder, falls möglich, ein verzweigtes C&sub1;-C&sub2;&sub0; Alkylen, welches vorzugsweise 2 bis 5 Kohlenstoffatome aufweist, oder einen optional substituiertes Cyclo- Alkylen, welches 5 bis 7 Kohlenstoffatome aufweist;

- Y&sub1; ausgewählt aus

wobei n&sub3; ein Integer von 0 bis 3 ist;

wobei nf ein Integer von 1 bis 6 ist, vorzugsweise ovn 2 bis 4.

wobei R1f = H, CH&sub3; und nf ein Integer von 1 bis 6 ist, vorzugsweise von 2 bis 4;

2. Verbindungen nach Anspruch 1, in welchem R, R&sub1;, R1b, R1c, RBA und die Verbindungen 1d) und IIb) die Reste von Alacepril, Benazepril, Captopril, Ceronapril, Cilazapril, Delapril, Enalapril, Enalaprilat, Fosinapril, Imidapril, Lisinopril, Quinapril, Ramipril, Spirapril, Remocapril, Trandolapril, Moveltilpril, Perindopril, Befunolol, Betaxolol, Bupranolol, Carteolol, Levobunolol, Metipranolol, Timolol, Oxprenolol, Mepindolol, Atenolol, Labetalol sind.

3. Verbindungen nach Anspruch 1 und 2, in welchen X, ausgewählt ist aus

- YO, wobei Y ein lineares oder, falls möglich, verzweigtes C&sub1;-C&sub2;&sub3;-Alkylen ist, welches vorzugsweise 2 bis 5 Kohlenstoffatome aufweist, oder einen optional substituiertes Cyclo-Alkylen, welches 5 bis 7 Kohlenstoffatome aufweist;

- Y&sub1; ausgewählt ist aus

wobei n&sub3; ein Integer von 0 bis 3 ist;

4. Verbindungen oder Zusammensetzung nach den Ansprüchen 1 bis 3 für die Verwendung als Medikamente.

5. Verwendung von Verbindungen oder Zusammensetzungen nach den Ansprüchen 1 bis 3 für die Zubereitung von Medikamenten zur Anwendung als Anti-Thrombose-Mittel.

6. Verwendung von Verbindungen oder Zusammensetzungen nach den Ansprüchen 1 bis 3 für die Zubereitung von Medikamenten zur Anwendung als Anti-Hypertensiva.

7. Verwendung von Verbindungen oder Zusammensetzungen nach den Ansprüchen 1 bis 3 für die Zubereitung von Medikamenten zur Anwendung als Cardioprotektiva.