DE60036401T2

DE60036401T2 - Kosmetische mittel enthaltend anis-extrakt und retinoide

Info

Publication number: DE60036401T2
Application number: DE60036401T
Authority: DE
Inventors: David Joseph Pocalyko; Skreekumar Pillai; Manisha N. Mahajan; Stewart Paton Granger
Original assignee: Unilever NV
Current assignee: Unilever NV
Priority date: 1999-11-16
Filing date: 2000-11-13
Publication date: 2008-01-10
Anticipated expiration: 2020-11-14
Also published as: ATE372762T1; AR026491A1; MXPA02004934A; ZA200203869B; AU1289901A; CN1226995C; EP1229896B1; TW555566B; JP2003514002A; CN1423551A; DE60036401D1; EP1229896A1; US6395286B1; WO2001035921A1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft kosmetische Zusammensetzungen, die Anis-Extrakt in Kombination mit Retinoiden enthalten, und Verfahren zum Konditionieren der Haut durch die Auftragung von solchen Zusammensetzungen auf die Haut.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Retinol (Vitamin A) ist eine endogene Verbindung, die natürlich im menschlichen Körper auftritt und für normale Epithelialzellendifferenzierung wesentlich ist. Natürliche und synthetische Vitamin-A-Derivate wurden ausgiebig bei der Behandlung einer Vielzahl von Hautstörungen und als Hautreparatur- und -erneuerungsmittel eingesetzt. Retinsäure wurde verwendet, um eine Vielzahl von Hautzuständen, wie Akne, Falten, Psoriasis, Altersflecken und Hautverfärbung, zu behandeln.
Innerhalb der Zellen werden Retinol und Retinsäure an spezielle zelluläre Bindungsproteine gebunden, wobei zwei der Hauptproteine CRABP-1 und -2 darstellen (Roos et al., Pharmacological reviews: 50, 315-333, 1998). Diese Proteine wirken beim Regulieren der intrazellulären Konzentration von Retinoiden durch Wirken als sowohl Lagerungs- als auch Transportproteine im Retinoidmetabolismus. Die Anteile von diesem Protein werden durch die Menge an Retinsäure innerhalb der Zellen reguliert. Höhere zelluläre Anteile von Retinoiden erhöhen die Expression von CRABP-2. Deshalb ist die Menge von diesem Protein in den Zellen ein Maß der Retinoidaktivität der Zellen. Hautzellen enthalten CRABP-2 sowohl in der Epidermis als auch der Dermis. CRABP-2-Reaktion auf die Retinoidverabreichung in Fibroblasten in vitro wird als ein reproduzierbares Maß von der Retinoid bioaktivität verwendet, das die menschlichen Hautreaktionen vorhersagt (Elder et al., J. Invest. Dermatol., 106: 517-521, 1996). Deshalb ist die CRABP-2-Expression der Fibroblasten ein Maß von Retinoidaktivität, was zu verschiedenen kosmetischen Hautvorteilen führt (Antialterung, Antifaltenbildung, Hautkonditionierung usw.).
Anis-(auch bekannt als "Süßer Kreuzkümmel" oder durch den wissenschaftlichen Namen Pimpinella anisum)-Samenöl enthält verschiedene flüchtige Duftkomponenten. Eine der Hauptkomponenten von Anissamenöl ist trans-Anethol (bis zu 75% des Samens) (Embong M.B., Hadziyev D., Molnar S., Can. J. Plant Sci, 57: 681-8, 1977). Die anderen Bestandteile des Öls, die in Mengen von 1-5% vorliegen, sind cis-Anethol, Carvon, β-Caryophyllen, Dihydcarvylacetat, Östragol und Limonen. Die Agricultural Research Service Database schließt, hinsichtlich der Zusammensetzung von Anis, auch Dianethol und Photoanethol als weitere geringfügige Komponenten ein. Anethol, Dianethol, Photoanethol und Östragol sind dafür bekannt, dass sie östrogene Aktivität aufweisen. Ätherische Öle, einschließlich jene von Anis, wurden als nützliche Insekten abweisende Mittel (Shukla H.S., Upadhay P.D., Tripathi S.C., Pesticides, 23: 33-5, 1989); Insektizide (Eli S., Uzi R. et al., J. Chem. Ecol 17: 499-504, 1991; Craig M. und Lichtenstein EP., J. Agric. Food Chem. 30: 563-8, 1982); Konvulsantien (Okuyama E., Nakamura T. und Mikio Y., Chem. Pharm. Bull 41: 1670-1, 1993) und als ein toxisches Mittel gegen Schnecken (Maini P., Morallo-Rejesus B., Phillipp, J. Sci., 121: 391-7, 1992) beschrieben.
WO9112792 beschreibt die Verwendung von Anethol zum Fördern des Haarwachstums, Verhindern bzw. Vorbeugen oder Minimieren von Haarverlust und Verstärken der Haarfarbe. Verschiedene US-Patente beschreiben die Verwendung von Cyclodextrin zum Komplexieren von ätherischen Ölen, einschließlich Anisöl oder Anethol, als Komponenten für Duftstoffe, Parfüms, orale Hygienezusammensetzungen, Hautpflegezusammensetzungen oder Wäschewaschmittelzusammensetzungen (z.B. US-Pat.-Nr. 5 543 157 ). JP 6048934 offenbart Hautpflegezusammensetzungen, die Extrakte von Pflanzen enthalten, ausgewählt aus Dill, Estragon, Savi, Anis, usw., in Kombination mit Hautweißungsmitteln oder in Kombination mit mindestens einer Art Collagenbildungspromotor, wie Retinsäure.
Die vorliegende Erfindung basiert zum Teil auf dem Befund, dass der organische Lösungsmittelextrakt von Anissamen, in Kombination mit Retinol oder Retinylester, CRABP-2-Expression in Fibroblasten verstärkt.
KURZDARSTELLUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft kosmetische Hautpflegezusammensetzungen, umfassend:

(i) einen organischen Lösungsmittelextrakt von Anissamen in einer Menge von 0,00001 bis 10 Gewichtsprozent,
(ii) 0,001 bis 10 Gewichtsprozent eines Retinols, ausgewählt aus Retinol, Retinylester und Gemischen davon; und
(iii) einen kosmetisch verträglichen Träger.

Die vorliegende Erfindung schließt auch ein Verfahren zum Verbessern oder Verhindern des Zustands von faltiger, mit Linien durchzogener, trockener, schuppiger, gealterter oder lichtgeschädigter Haut und Verbessern der Hautdicke, Elastizität, Biegsamkeit, Strahlen, Glanz und Prallheit ein, wobei das Verfahren Auftragen der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen auf die Haut einschließt. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen sind zur örtlichen Auftragung auf menschliche Haut, die bereits trocken, schuppig, mit Linien durchzogen, faltig, gealtert, lichtgeschädigt ist, vorgesehen, sie können prophylaktisch aufgetragen werden, um die verschlechternden Veränderungen zu vermindern.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG IM EINZELNEN
Mit Ausnahme in den Beispielen oder wo anders explizit angezeigt, sind alle Zahlen in dieser Beschreibung, einschließlich Mengen von Material oder Reaktionsbedingungen, physikalische Eigenschaften der Materialien und/oder Anwendung, als durch das Wort "etwa" modifiziert zu verstehen. Alle Mengen sind auf das Gewicht der Zusammensetzung bezogen, sofern nicht anders ausgewiesen.
Anissamen ist zur Verwendung in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in Form eines organischen Extrakts geeignet. Der Anissamenextrakt zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung wird aus getrocknetem Anissamen hergestellt, der z.B. von Arrowhead Mills, von Reformhäusern oder Supermärkten erhalten werden kann.
Die organischen Extrakte des Anissamens werden durch Extrahieren der getrockneten Anissamen mit einem Lösungsmittel durch Rühren von 1 Teil des getrockneten Anissamens mit 2 bis 5 Teilen des Lösungsmittels für 4 bis 24 Stunden bei Raumtemperatur hergestellt. Geeignete Lösungsmittel werden nachstehend beschrieben. Die Extrakte werden durch Filtration und/oder Zentrifugierung gereinigt, dann durch Verdampfung (gegebenenfalls unter Vakuum) getrocknet, um den organischen Extrakt von Anissamen zu erhalten.
Zur Herstellung von Anissamenextrakt zur Verwendung hierin geeignete Lösungsmittel schließen ein, sind jedoch nicht darauf begrenzt: Ethanol, Methanol, Hexan, Chloroform, Dichlormethan und Essigsäureethylester. Die bevorzugten Lösungsmittel sind Dichlormethan, Methanol oder Ethanol, um die Wirksamkeit zu optimieren. Der Extrakt kann weiter aufkonzentriert, fraktioniert, erneut extrahiert oder gereinigt werden, z.B. durch organische Lösungsmittelextraktion oder durch Chromatographie.
Im Allgemeinen liegt die Menge des Anissamenextrakts in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen im Bereich von 0,00001% bis 10 Gewichtsprozent der Zusammensetzung. Um die Kosten zu senken und die Wirkung zu maximieren, liegt vorzugsweise die Menge des Anissamenextrakts im Bereich von 0,01 bis 10% und besonders bevorzugt im Bereich von 0,1% bis 5 Gewichtsprozent der Zusammensetzung.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen umfassen weiterhin ein Retinoid, ausgewählt aus Retinol oder Retinylester. Der Begriff "Retinol" schließt die nachstehenden Isomeren von Retinol ein: all-trans-Retinol, 13-cis-Retinol, 11-cis-Retinol, 9-cis-Retinol, 3,4-Didehydroretinol. Bevorzugte Isomeren sind all-trans-Retinol, 13-cis-Retinol, 3,4-Didehydroretinol, 9-cis-Retinol. Besonders bevorzugt ist all-trans-Retinol, aufgrund seiner breiten kommerziellen Verfügbarkeit.
Retinylester ist ein Ester von Retinol. Der Begriff "Retinol" wurde vorstehend definiert. Zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignete Retinylester sind C₁-C₃₀-Ester von Retinol, vorzugsweise C₂-C₂₀-Ester und besonders bevorzugt C₂-, C₃- und C₁₆-Ester, weil sie besser verfügbar sind. Beispiele für Retinylester schließen ein, sind jedoch nicht darauf begrenzt: Palmitinsäureretinylester, Ameisensäureretinylester, Essigsäureretinylester, Propionsäureretinylester, Buttersäureretinylester, Valeriansäureretinylester, Isovaleriansäureretinylester, Hexansäureretinylester, Heptansäureretinylester, Octansäureretinylester, Nonansäureretinylester, Decansäureretinylester, Undecansäureretinylester, Laurinsäureretinylester, Tridecansäureretinylester, Myristinsäureretinylester, Pentadecansäureretinylester, Heptadecansäureretinylester, Stearinsäureretinylester, Isostearinsäureretinylester, Nonadecansäureretinylester, Arachidonsäureretinylester, Behensäureretinylester, Linolensäureretinylester, Ölsäureretinylester.
Der bevorzugte Ester zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung ist ausgewählt aus Palmitinsäureretinylester, Essigsäureretinylester und Propionsäureretinylester, weil diese die am besten kommerziell verfügbaren sind und deshalb die kostengünstigsten sind. Linolensäureretinylester ist auch aufgrund seiner Wirksamkeit bevorzugt.
Retinol oder Retinylester wird in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung in einer Menge von etwa 0,001% bis etwa 10%, vorzugsweise in einer Menge von etwa 0,01% bis etwa 1% be sonders bevorzugt in einer Menge von etwa 0,01% bis etwa 0,5 Gewichtsprozent der Zusammensetzung, angewendet.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen umfassen auch ein kosmetisch verträgliches Vehikel, um als ein Verdünnungsmittel, Dispersionsmittel oder Träger für den Anissamenextrakt und das Retinoid in der Zusammensetzung zu wirken, sodass deren Verteilung erleichtert ist, wenn die Zusammensetzung auf die Haut aufgetragen wird.
Vehikel, verschieden von oder zusätzlich zu Wasser, können flüssige oder feste Erweichungsmittel, Lösungsmittel, Feuchthaltemittel, Verdickungsmittel und Pulver einschließen. Ein besonders bevorzugter, nichtwässriger Träger ist ein Polydimethylsiloxan und/oder ein Polydimethylphenylsiloxan. Die erfindungsgemäßen Silikone können jene mit Viskositäten im Bereich von irgendwo von etwa 10 bis 10000000 mm²/s (Centistokes) bei 25°C sein. Besonders erwünscht sind Gemische von Silikonen mit niederer und hoher Viskosität. Diese Silikone sind von der General Electric Company unter den Handelsmarken Vicasil, SE und SF, und von der Dow Corning Company unter den 200er- und 550er-Reihen verfügbar. Die Mengen an Silikon, die in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen angewendet werden können, liegen im Bereich von irgendwo von 5% bis 95% vorzugsweise 25% bis 90 Gewichtsprozent der Zusammensetzung.
Das kosmetisch verträgliche Vehikel wird gewöhnlich 5% bis 99,9% vorzugsweise 25% bis 80 Gewichtsprozent, der Zusammensetzung umfassen, und kann in Abwesenheit von anderen kosmetischen Hilfsmitteln den Ausgleich der Zusammensetzung bilden. Vorzugsweise ist das Vehikel mindestens 80 Gewichtsprozent Wasser, auf das Gewicht des Vehikels. Vorzugsweise umfasst Wasser mindestens 50 Gewichtsprozent der erfindungsgemäßen Zusammensetzung, besonders bevorzugt 60 bis 80 Gewichtsprozent, auf das Gewicht der Zusammensetzung.
Wahlweise Hautvorteilsmaterialien und kosmetische Hilfsmittel
Ein Öl oder öliges Material kann zusammen mit einem Emulgator vorliegen, um in Abhängigkeit von der Größe des mittleren hydrophilen-lipophilen Ausgleichs (HLB) von dem angewendeten Emulgator, entweder eine Wasser-in-Öl-Emulsion oder eine Öl-in-Wasser-Emulsion bereitzustellen.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen schließen vorzugsweise Sonnenschutzmittel ein. Sonnenschutzmittel schließen jene Materialien ein, die üblicherweise zum Blockieren von Ultraviolettlicht angewendet werden. Erläuternde Verbindungen sind die Derivate von PABA, Zimtsäureester und Salicylsäureester.
Zum Beispiel können Methoxyzimtsäureoctylester und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon (auch bekannt als Oxybenzone) verwendet werden. Methoxyzimtsäureoctylester und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon sind unter den Handelsmarken Parsol MCX bzw. Benzophenon-3 kommerziell erhältlich. Die exakte Menge an in den Emulsionen angewendetem Sonnenschutzmittel kann in Abhängigkeit von dem vor der UV-Sonnenstrahlung erwünschten Schutzgrad variieren.
Erweichungsmittel werden häufig in die erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen eingearbeitet. Anteile von solchen Erweichungsmitteln können im Bereich von 0,5% bis 50%, vorzugsweise zwischen 5% und 30 Gewichtsprozent, der Gesamtzusammensetzung liegen. Erweichungsmittel können unter solche allgemeinen chemischen Kategorien, wie Ester, Fettsäuren und Alkohole, Polyole und Kohlenwasserstoffe eingeteilt werden.
Ester können Mono- oder Diester sein. Annehmbare Beispiele für Fettsäurediester schließen Adipinsäuredibutylester, Sebacinsäurediethylester, Dimersäurediisopropylester und Bernsteinsäuredioctylester ein. Annehmbare verzweigtkettige Fettsäureester schließen Myristinsäure-2-ethyl-hexylester, Stearinsäureisopropylester und Palmitinsäureisostearylester ein. Annehmbare dreibasige Säureester schießen Trilinolensäuretri isopropylester und Zitronensäuretrilaurylester ein. Annehmbare geradkettige Fettsäureester schließen Palmitinsäurelaurylester, Milchsäuremyristylester und Ölsäurestearylester ein. Bevorzugte Ester schließen Cococaprylat/-caprat (ein Gemisch von Cococaprylat und Cococaprat), Propylenglycolmyristyletheracetat, Diisopropyladipat und Cetyloctanoat ein.
Geeignete Fettalkohole und -säuren schließen jene Verbindungen mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen ein. Besonders bevorzugt sind Verbindungen, wie Cetyl-, Myristyl-, Palmitin- und Stearylalkohole und -säuren.
Unter den Polyolen, die als Erweichungsmittel dienen können, sind lineare und verzweigtkettige Alkylpolyhydroxylverbindungen. Zum Beispiel sind Propylenglycol, Sorbit und Glycerin bevorzugt. Auch verwendbar sein können polymere Polyole, wie Polypropylenglycol und Polyethylenglycol. Butylen- und Propylenglycol sind auch als Eindringverstärker besonders bevorzugt.
Beispielhafte Kohlenwasserstoffe, die als Erweichungsmittel dienen können, sind jene mit Kohlenwasserstoffketten irgendwo von 12 bis 30 Kohlenstoffatomen. Spezielle Beispiele schließen Mineralöl, Vaseline, Squalen und Isoparaffine ein.
Eine weitere Kategorie von funktionellen Bestandteilen innerhalb der erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen sind Verdickungsmittel. Ein Verdickungsmittel wird gewöhnlich in Mengen im Bereich irgendwo von 0,1 bis 20 Gewichtsprozent, vorzugsweise von etwa 0,5% bis 10 Gewichtsprozent, der Zusammensetzung vorliegen. Beispielhafte Verdickungsmittel sind vernetzte Polyacrylatmaterialien, die unter der Handelsmarke Carbopol von der B.F. Goodrich Company erhältlich sind. Gummis können angewendet werden, wie Xanthan-, Carrageenan-, Gelatine-, Karaya-, Pektin- und Johannisbrotbaumgummi. Unter bestimmten Umständen kann die verdickende Funktion durch ein Material ausgeführt werden, das auch als ein Silikon oder Erweichungsmittel dient. Zum Beispiel haben Silikongummis oberhalb 10 Centistokes und Ester, wie Stearinsäureglycerylester, duale Funktionalität.
Pulver können in die erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen eingearbeitet werden. Diese Pulver schließen Kreide, Talkum, Kaolin, Stärke, Smectittone, chemisch modifiziertes Magnesiumaluminiumsilikat, organisch modifizierten Montmorillonitton, hydriertes Aluminiumsilikat, pyrogenes Siliziumdioxid, Aluminiumstärkeoctenylsuccinat und Gemische davon ein.
Andere geringe Hilfskomponenten können auch in die kosmetischen Zusammensetzungen eingearbeitet werden. Diese Bestandteile können färbende Mittel, Opazitätsmittel und Parfüms einschließen. Die Mengen von diesen anderen geringen Hilfskomponenten können im Bereich irgendwo von 0,001% bis zu 20 Gewichtsprozent der Zusammensetzung liegen.
Verwendung der Zusammensetzung
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist primär als ein Produkt zur örtlichen kosmetischen Auftragung auf menschliche Haut, insbesondere als ein Mittel zum Konditionieren, Befeuchten und Glätten der Haut, und Verhindern oder Vermindern des Aussehens von mit Linien durchzogener, faltiger oder gealterter Haut, beabsichtigt.
Bei der Verwendung wird eine kleine Menge der Zusammensetzung, z.B. 1 bis 100 ml, auf exponierte Flächen der Haut aus einem geeigneten Behälter oder Applikator aufgetragen, und, falls erforderlich, wird sie dann unter Verwendung von der Hand oder den Fingern oder einer geeigneten Vorrichtung über die Haut verbreitet und/oder in sie eingerieben.
Produktform und Verpackung
Die erfindungsgemäßen örtlichen Hautbehandlungszusammensetzungen können als eine Lotion, eine Creme oder ein Gel formuliert werden. Die Zusammensetzung kann in einen geeigneten Behälter zum Anpassen seiner Viskosität und beabsichtigten Verwendung durch den Verbraucher verpackt werden. Zum Beispiel kann eine Lotion oder Creme in eine Flasche oder einen Rollballapplikator oder eine mit Treibmittel betriebene Aerosolvorrichtung oder einen Behälter, der mit einer zur Fingerbetätigung geeigneten Pumpe ausgestattet ist, verpackt sein. Wenn die Zusammensetzung eine Creme ist, kann sie einfach in einer nichtverformbaren Flasche oder einem Quetschbehälter, wie einer Tube oder mit Deckel versehener Dose, gelagert werden. Die Zusammensetzung kann auch in Kapseln eingeschlossen sein, wie jene, die in US-Pat.-Nr. 5 063 507 beschrieben sind, welche hierin durch Hinweis einbezogen sind. Die Erfindung stellt folglich auch einen verschlossenen Behälter bereit, der eine wie hierin definierte kosmetisch verträgliche Zusammensetzung enthält.
Die nachstehenden speziellen Beispiele erläutern die Erfindung weiterhin, jedoch ist die Erfindung nicht darauf begrenzt. In allen Beispielen wurde Anissamen aus örtlichen Reformhäusern erhalten. Retinoide wurden von Sigma erhalten. Der Student-T-Test wurde verwendet, um alle p-Werte zu berechnen.
BEISPIELE
Die nachstehenden Verfahren wurden angewendet:
Verfahren:
1. Herstellung von Anis-Extrakten:
Getrocknete Sternanissamen (Pimpinella anisum) wurden von örtlichen Märkten bezogen und in einem Trockenvermahler gepulvert. Der alkoholische Extrakt von Anissamen wurde durch Rühren von 1 g des trockenen Anissamenpulvers in 10 ml Lösungsmittel, ausgewählt aus der Liste von vorstehend angegebenen Lösungsmitteln (z.B. Ethanol), für 4 bis 24 Stunden bei Raumtemperatur hergestellt. Die Extrakte wurden durch Filtration und Zentrifugierung gereinigt, um 10% Extrakt von Anissamen in dem jeweiligen Lösungsmittel zu erhalten.
2. Zellkulturverfahren:
Humane erwachsene Fibroblasten, die vom sonnengeschützten Innenarm von 25-30 Jahre alten, weiblichen Probanden erhalten wurden, wurden verwendet. Die Zellen wurden in 1:1 DMEM/Hams F12 Medien, enthaltend 10% FBS, gehalten bei 37°C in einer 5%igen CO₂-Atmosphäre unter Normalatmosphären-Sauerstoffspannung wachsen lassen. Die dritte Passage von erwachsenen Fibroblasten wurde in DMEM-Medien mit 10% FBS in 12-Vertiefungsplatten bei einer Samendichte von 40000 Zellen/ml/Vertiefung wachsen lassen. Die Zellen wurden bei 80% Zusammenfluss in serumfreien und Phenolrot-freien (PRF) DMEM-Medien zweimal gespült. Die Vorbehandlung mit Anissamenextrakt für 4 Stunden wurde durchgeführt und dann mit Retinoiden dosiert und für 48 Stunden inkubiert. Nach Inkubation wurden die Vertiefungen zweimal mit 1 × PBS gewaschen und die Zellmonoschicht wurde in 100 μl Zelllysepuffer (enthält 1 × PBS, 1% Triton X, 0,5% Natriumdesoxycholat, 0,1% SDS-enthaltenden Proteaseinhibitor (10 mg/ml PMSF in Isopropanol, 10 μl/ml)) geerntet. Die Suspension wurde bei 14000 U/min für 10 Minuten zentrifugiert, der Überstand gesammelt und eine aliquote Menge des Überstands zur Proteinquantifizierung verwendet. Die Proteinkonzentration wurde unter Verwendung eines Pierce-Protein-Kits bestimmt. Der Rest des 100 μl Überstands (Zelllysat) wurde in einem Gemisch von 40 μl Probenpuffer (NOVEX) und 0,5%igem β-Mercaptoethanol (BME) durch Sieden der Probe für 5 Minuten denaturiert. Gleiche Mengen Protein wurden dann auf 16% Trisglycin-Gele zur Proteinanalyse durch SDS PAGE und Western-Immuno-Blotting für CRABP-2 Proteinexpression beladen.
3. Nachweis von zellulärem Retinsäure-Bindungs-Protein 2 (CRABP-2) in Fibroblasten:
Um die Anteile von CRABP-2 in den wie vorstehend beschrieben hergestellten Fibroblasten zu messen, wurde der Zellüberstand in 4 × Probenpuffer und 0,5% BME resuspendiert und für 5 Minuten gekocht und zum Western-Blotting verwendet. Gleiche Mengen Protein wurden auf 16% Trisglycin-Gele zur CRABP-2 Proteinanalyse durch SDS Page und Western-Immuno-Blotting beladen. Die Gele wurden in Nitrocelluloseblots überführt und Western-Blotting wurde unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern auf CRABP-2 gemäß Standardverfahren ausgeführt. Die CRABP-2 Proteinbande wurde in den Western-Blots unter Verwendung des Chemilumineszenzsystems, erhalten von Santa Cruz Biotechnology (SantaCruz, CA), visualisiert. Die Banden in dem Film wurden durch densitometrisches Scanning quantifiziert, wobei die Daten auf dreifachen Proben als % der Kontrolle berechnet und in den nachstehenden Tabellen als % Erhöhung gegenüber der Kontrolle (mit Kontrolle als 100%) ± Standardabweichung von dreifachen Ausführungen ausgedrückt wurden.
BEISPIELE 1-4

Die nachstehenden Beispiele untersuchten die Wirkung auf CRABP-2 Expression von Fibroblasten von Kombinationen von verschiedenen Konzentrationen von Anissamenextrakt und Retinoiden. BEISPIEL 1: 100 nM Retinoide und 0,1 μl von einem 10%igen Anissamenextrakt

Gruppen	CRABP-2 Anteile	Als % Kontrolle	p-Wert gegen Kontrolle	p-Wert gegen Retinoid	p-Wert gegen Anis	Synergie
Kontrolle	0,43 ± 0,16	100 ± 38	1
Retinol	1,36 ± 0,17	317 ± 39	0,0002	1
Palmitinsäureretinylester	1,12 ± 0,15	262 ± 37	0,0064	1
Linolsäureretinylester	1,23 ± 0,28	286 ± 65	0,0012	1
Essigsäureretinylester	2,38 ± 0,81	553 ± 190	0,0154	1
Anisextrakt	1,27 ± 0,18	295 ± 43	0,0043		1
Anis + Retinol	2,77 ± 0,43	644 ± 101	0,000	0,0064	0,00053	Ja
Anis + Palmitinsäureretinylester	2,48 ± 0,2	576 ± 48	0,00001	0,00085	0,0016	Ja
Anis + Linolsäureretinylester	3,75 ± 0,24	872 ± 57	0,000004	0,0003	0,00015	Ja
Anis + Essigsäureretinylester	4,7 ± 0,1	1094 ± 24	0,000007	0,0032	0,00018	Ja

BEISPIEL 2: 100 nM Retinoide und 0,1 μl eines 10%igen Anissamenextrakts

Gruppen	CRABP-2 Anteile	Als % Kontrolle	p-Wert gegen Kontrolle	p-Wert gegen Retinoid	p-Wert gegen Anis	Synergie
Kontrolle	0,43 ± 0,16	100 ± 38	1
Retinol	1,36 ± 0,17	317 ± 39	0,00024	1
Palmitinsäureretinylester	1,12 ± 0,15	262 ± 37	0,0064	1
Linolsäureretinylester	1,23 ± 0,28	286 ± 65	0,00129	1
Essigsäureretinylester	2,38 ± 0,81	553 ± 190	0,0154	1
Anisextrakt	1,06 ± 0,44	247 ± 103	0,082		1
Anis + Retinol	2,87 ± 0,32	667 ± 75	0,000032	0,002	0,00047	Ja
Anis + Palmitinsäureretinylester	2,61 ± 0,31	606 ± 72	0,000043	0,0018	0,0078	Ja
Anis + Linolsäureretinylester	2,89 ± 0,25	673 ± 59	0,000015	0,0015	0,0035	Ja
Anis + Essigsäureretinylester	5,6 ± 0,86	1303 ± 200	0,000052	0,009	0,0012	Ja

BEISPIEL 3: 500 nM Retinoide und 0,1 μl von einem 10%igen Anissamenextrakt

Gruppen	CRABP-2 Anteile	Als % Kontrolle	p-Wert gegen Kontrolle	p-Wert gegen Retinoid	p-Wert gegen Anis	Synergie
Kontrolle	0,43 ± 0,16	100 ± 38	1
Retinol	0,66 ± 0,19	154 ± 44	0,187	1
Palmitinsäureretinylester	0,83 ± 0,5	193 ± 124	0,281	1
Linolsäureretinylester	0,99 ± 0,13	231 ± 30	0,01	1
Essigsäureretinylester	1,02 ± 0,56	237 ± 131	0,157	1
Anisextrakt	1,27 ± 0,18	295 ± 43	0,00435		1
Anis + Retinol	3,38 ± 0,17	787 ± 41	0,000031	0,000054	0,0011	Ja
Anis + Palmitinsäureretinylester	3,56 ± 0,5	829 ± 118	0,000053	0,003	0,0018	Ja
Anis + Linolsäureretinylester	3,7 ± 0,53	861 ± 123	0,000052	0,0011	0,0017	Ja
Anis + Essigsäureretinylester	3,21 ± 0,69	746 ± 162	0,00025	0,0135	0,0096	Ja

BEISPIEL 4: 500 nM Retinoide und 1,0 μl eines 10%igen Anissamenextrakts:

Gruppen	CRABP-2 Anteile	Als % Kontrolle	p-Wert gegen Kontrolle	p-Wert gegen Retinoid	p-Wert gegen Anis	Synergie
Kontrolle	0,43 ± 0,16	100 ± 38	1
Retinol	0,66 ± 0,19	154 ± 44	0,187	1
Palmitinsäureretinylester	0,83 ± 0,5	193 ± 124	0,281	1
Linolsäureretinylester	0,99 ± 0,13	231 ± 30	0,01	1
Essigsäureretinylester	1,02 ± 0,56	237 ± 131	0,157	1
Anisextrakt	1,06 ± 0,44	247 ± 103	0,082		1
Anis + Retinol	2,35 ± 0,13	546 ± 30	0,0000097	0,000023	0,0086	Ja
Anis + Palmitinsäureretinylester	2,84 ± 1,45	662 ± 338	0,0046	0,0145	0,112	Nein
Anis + Linolsäureretinylester	3,0 ± 0,5	697 ± 117	0,00011	0,087	0,0076	Nein
Anis + Essigsäureretinylester	2,64 ± 0,37	613 ± 86	0,000072	0,496	0,0093	Nein

Die in Beispielen 1-4 zusammengefassten Ergebnisse zeigen, dass Anisextrakt Synergie mit allen den Retinoiden zeigt, mit der Ausnahme der höchsten Konzentration von Retinoiden (500 nM) in Kombination mit der höchsten Konzentration des getesteten Anisextrakts (1 μl).
Es sollte selbstverständlich sein, dass die speziellen Formen der hierin erläuterten Erfindung nur als repräsentativ vorgesehen sind. Veränderungen, einschließlich jener, die in dieser Beschreibung vorgeschlagen werden, jedoch nicht darauf begrenzt, können in den erläuterten Ausführungsformen, ohne von den klaren Lehren der Offenbarung abzuweichen, ausgeführt werden. Folglich sollte beim Bestimmen des vollen Umfangs der Erfindung Bezug auf die nachstehend beigefügten Ansprüche erfolgen.

Claims

Kosmetische Hautpflegezusammensetzung, umfassend: (i) einen organischen Lösungsmittelextrakt von Anissamen in einer Menge von 0,00001 bis 10 Gewichtsprozent, (ii) 0,001 bis 10 Gewichtsprozent eines Retinols, ausgewählt aus Retinol, Retinylester und Gemischen davon; und (iii) einen kosmetisch verträglichen Träger.
Nichttherapeutisches kosmetisches Verfahren zum Verbessern des Aussehens von faltiger, mit Linien durchzogener, schuppiger oder gealterter Haut und Verbessern der Hautdicke, Elastizität, Biegsamkeit und Prallheit, wobei das Verfahren Auftragen der Zusammensetzung von Anspruch 1 auf die Haut umfasst.
Verfahren nach Anspruch 1 zum Verbessern des Aussehens von trockener oder lichtgeschädigter Haut.
Verwendung einer Zusammensetzung nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Arzneimittels zum Behandeln eines Menschen, der unter einem Zustand leidet oder dafür anfällig ist, welcher durch Erhöhen des Anteils von zellulärem Retinsäure-Bindungsprotein in den Hautfibroblasten verbessert oder verhindert werden kann.