DE4225353A1

DE4225353A1 - Neue Pteridine, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE4225353A1
Application number: DE19924225353
Authority: DE
Inventors: Armin Dipl Chem Dr Heckel; Uwe Dr Bamberger
Original assignee: Dr Karl Thomae GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG
Priority date: 1992-07-31
Filing date: 1992-07-31
Publication date: 1994-02-03

Description

Bei der Behandlung von neoplastischen Erkrankungen werden Cytostatika u. a. Naturprodukte, z. B. Vinca Alkaloide wie Vinblastin, Vincristin oder Vindesin, Epipodophyllotoxine wie Etoposid oder Teniposid und Antibiotica wie Actinomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Bleomycin, Mithra mycin oder Mitomycin (siehe Goodman and Gilman′s, The Phar macoligical Basis of Therapeutics, Macmillan Publishing Com pany, New York, 7. Auflage, Seiten 1240-1247 und 1277-1289 (1985)) oder synthetische Cytostatika wie 5-Fluoruracil, Methotrexat oder Cytarabine (Cytosinarabinosid) eingesetzt. Bei der Chemotherapie mit den oben aufgeführten Substanzen ist häufig zu beobachten, daß die zu behandelnden Tumoren auf Grund einer primären Resistenz oder auf Grund einer sich wegen einer vorgegangenen Therapie gebildeten sekundären Re sistenz auf die Therapie nicht ansprechen, oder, daß nach Remission der Tumoren therapieresistente Tumorzellen mög licherweise latent verbleiben. Diese resistente Tumorzellen führen in der Regel zu einem späteren Zeitpunkt zum Rezidiv.

Es wurde gefunden, daß die Pteridine der allgemeinen Formel I

deren geometrischen oder optischen Isomeren sowie deren Säu readditionssalze, insbesondere deren physiologisch verträg lichen Säureadditionssalze mit einer anorganischen oder or ganischen Säure, wertvolle Eigenschaften aufweisen, insbe sondere resistente Tumoren zur Remission bringen.

Durch die vorherige, gleichzeitige oder spätere Gabe eines Pteridins der obigen allgemeinen Formel I oder dessen phy siologisch verträglichen Säureadditionssalzes wird erfin dungsgemäß eine Sensibilisierung von Tumoren mit einer pri mären oder sekundären Resistenz gegenüber den oben erwähnten Chemotherapeutica erzielt.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher die neuen Pteridine der vorstehenden allgemeinen Formel I, diese Ver bindungen enthaltende Arzneimittel und Verfahren zu ihrer Herstellung.

Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind neue Arzneimittel, enthaltend ein Pteridin der obigen allgemeinen Formel I, eines seiner geometrischen oder optischen Isomeren oder dessen physiologisch verträgliches Säureadditionssalze, und mindestens ein Chemotherapeuticum aus der Reihe der Na turprodukte, sowie die Verwendung der obigen Pteridine zur Sensibilisierung von Tumoren bei der Chemotherapie mit den vorstehend erwähnten Chemotherapeutica aus der Reihe der Na turprodukte.

In der obigen allgemeinen Formel I bedeuten
R₃ eine geradkettige oder verzweigte Alkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, in welcher mit Ausnahme des zum Stick stoffatom benachbarten Kohlenstoffatoms ein oder zwei Kohlen stoffatome durch eine Hydroxygruppe substituiert sind, und
R₄ eine Benzylgruppe oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, in welcher mit Ausnahme des zum Stick stoffatom benachbarten Kohlenstoffatoms ein Kohlenstoffatom durch eine Hydroxygruppe substituiert sein kann, oder
R₃ eine Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen und
R₄ eine Phenylalkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen im Alkylteil,
R₂ und R₇, die gleich oder verschieden sein können, je weils eine gegebenenfalls durch eine oder zwei Methyl- oder Ethylgruppen substituierte Pyrrolidino-, Piperidino- oder Morpholinogruppe,
R₅ ein Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatom, eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe und
R₆ eine Nitro-, Amino- oder Azidogruppe.

Die neuen Verbindungen der obigen allgemeinen Formel I, in denen R₆ eine Nitro- oder Aminogruppe darstellt, stellen wertvolle Zwischenprodukte dar und die übrigen Verbindungen der obigen Formel I, deren geometrische oder optische Iso mere sowie deren physiologisch verträgliche Säureadditions salze mit einer anorganischen oder organischen Säure, weisen wertvolle pharmakologische Eigenschaften auf. Für die bei der Definition der Reste eingangs erwähnten Bedeutungen kommt beispielsweise für
R₂ und R₇ jeweils die der Pyrrolidino-, 2-Methyl-pyrro lidino-, 3-Methyl-pyrrolidino-, 3,3-Dimethyl-pyrrolidino-, 2-Ethyl-pyrrolidino-, 3-Ethyl-pyrrolidino-, 3,3-Diethyl-pyr rolidino-, Piperidino-, 2-Methyl-piperidino-, 3-Methyl-piper idino-, 4-Methyl-piperidino-, 2-Ethyl-piperidino-, 3-Ethyl piperidino-, 4-Ethyl-piperidino-, 3,5-Dimethyl-piperidino-, 3,5-Diethyl-piperidino-, Morpholino-, 2-Methyl-morpholino-, 2-Ethyl-morpholino-, 3-Methyl-morpholino-, 3-Ethyl-morpholi no-, 2,6-Dimethyl-morpholino-, cis-2,6-Dimethyl-morpholino-, trans-2,6-Dimethyl-morpholino-, 2,6-Diethyl-morpholino-, cis- 2,6-Diethyl-morpholino-, trans-2,6-Diethyl-morpholino-, 3,5- Dimethyl-morpholino- oder 3,5-Diethyl-morpholinogruppe,
für R₃ die der 2-Hydroxy-ethyl-, 2-Hydroxy-n-propyl-, 2-Hy droxy-isopropyl-, 3-Hydroxy-propyl-, 4-Hydroxy-n-butyl-, 2-Hydroxy-2-methyl-n-propyl-, 5-Hydroxy-n-pentyl-, 6-Hydroxy- n-hexyl-, 2,3-Dihydroxy-n-propyl-, Methyl-, Ethyl-, n-Propyl- oder Isopropylgruppe,
für R₄ die der Benzyl-, 2-Phenyl-ethyl-, 2-Phenyl-n-pro pyl-, 3-Phenyl-propyl-, 2-Hydroxy-ethyl-, 2-Hydroxy-n-pro pyl-, 3-Hydroxy-propyl-, 4-Hydroxy-n-butyl- oder 2-Hydroxy- 2-methyl-n-propylgruppe,
für R₅ die des Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatoms, der Methyl- oder Trifluormethylgruppe und
für R₆ die der Nitro-, Amino- oder Azidogruppe in Betracht.

Bevorzugte Pteridine der obigen allgemeinen Formel I sind hierbei diejenigen, in denen
R₂ und R₇, die gleich oder verschieden sein können, eine Piperidino-, 3,5-Dimethyl-piperidino-, Morpholino-, 2-Methyl- morpholino-, 2,6-Dimethyl-morpholino-, cis-2,6-Dimethyl-mor pholino- oder trans-2,6-Dimethyl-morpholinogruppe,
R₃ eine Methyl-, Ethyl-, Benzyl-, 2-Hydroxy-ethyl-, 2-Hy droxy-n-propyl-, 2,3-Dihydroxy-n-propyl- oder 2-Methyl-2-hy droxy-n-propylgruppe,
R₄ eine 2-Hydroxy-ethyl-, 2-Hydroxy-n-propyl- oder 2-Me thyl-2-hydroxy-n-propylgruppe und
R₅ ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und
R₆ eine Nitro-, Amino- oder Azidogruppe bedeuten, deren optische und geometrische Isomere sowie deren physiologisch verträgliche Säureadditionssalze.

Besonders bevorzugte Verbindungen sind jedoch diejenigen, in denen
R₂ und R₇ jeweils eine 2,6-Dimethyl-morpholinogruppe oder
einer der Reste R₂ oder R₇ eine Morpholinogruppe und
der andere der Reste R₂ oder R₇ eine 2,6-Dimethyl-morpho linogruppe,
R₃ und R₄ zusammen eine N-(2-Hydroxy-2-methyl-n-propyl)- ethanolaminogruppe und
R₅ ein Wasserstoffatom und
R₆ eine Azidogruppe bedeuten, insbesondere die Verbindung 4-(N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis- 2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido-phenyl)-pteridin und deren Salze.

Erfindungsgemäß erhält man die Verbindungen nach folgenden Verfahren:

a) Zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, in der R₆ eine Nitrogruppe darstellt:
Nitrierung einer Verbindung der allgemeinen Formel II in der
R₂ bis R₅ und R₇ wie eingangs definiert sind.
Die Nitrierung wird unter Verwendung von konzentrierter bis halbkonzentrierter Salpetersäure in Wasser, Eisessig oder Acetanhydrid, unter Verwendung eines Gemisches aus konzen trierter Salpetersäure und konzentrierter Schwefelsäure, mit Distickstoffpentoxid in Tetrachlorkohlenstoff und in Gegen wart von Phosphorpentoxid, mit Ethylnitrat, gegebenenfalls in Gegenwart einer Lewis- oder Brönstedt-Säure, mit Natrium nitrit in Gegenwart von Trifluoressigsäure oder unter Ver wendung eines Nitroniumsalzes, z. B. Nitroniumtetrafluoro borat oder Nitroniumtrifluormethansulfonat, bei Temperaturen zwischen 0 und 100°C, vorzugsweise bei Temperaturen zwischen 20 und 50°C, durchgeführt.
b) Zur Herstellung einer Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R₆ eine Aminogruppe darstellt:
Reduktion einer Verbindung der allgemeinen Formel III, in der
R₂ bis R₅ und R₇ wie eingangs definiert sind.
Die Reduktion der Nitrogruppe wird vorzugsweise in einem Lö sungsmittel wie Wasser, Wasser/Ethanol, Methanol, Eisessig, Essigsäurethylester oder Dimethylformamid zweckmäßigerweise mit Wasserstoff in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators wie Raney-Nickel, Platin oder Palladium/Kohle, mit Metallen wie Eisen, Zinn oder Zink in Gegenwart einer Säure, mit Sal zen wie Eisen(II)sulfat, Zinn(II)chlorid, Natriumsulfid, Natriumhydrogensulfit oder Natriumdithionit, oder mit Hydra zin in Gegenwart von Raney-Nickel bei Temperaturen zwischen O und 80°C, vorzugsweise jedoch bei Temperaturen zwischen 20 und 40°C, durchgeführt.
c) Zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, in der R₆ eine Azidogruppe darstellt:
Diazotierung einer Verbindung der allgemeinen Formel IV, in der
R₂ bis R₅ und R₇ wie eingangs erwähnt definiert sind, und an schließende Umsetzung des so erhaltenen Diazoniumsalzes mit einem Alkaliazid, z. B. mit Natriumazid.
Die Diazotierung erfolgt zweckmäßigerweise in einem geeigne ten Lösungsmittel, z. B. in Wasser/Salzsäure, Methanol/Salz säure, Ethanol/Salzsäure oder Dioxan/Salzsäure, durch Um setzung einer entsprechenden Aminoverbindung mit einem Ni trit, z. B. Natriumnitrit oder einem Ester der salpetrigen Säure, bei niedrigen Temperaturen, z. B. bei Temperaturen zwischen -10 und 5°C.
Die Umsetzung eines Diazoniumsalzes, z. B. des Tetrafluoro borats, des Hydrosulfates in Schwefelsäure, des Hydrochlorids oder des Hydrojodids, erforderlichenfalls in Gegenwart von Kupfer oder eines entsprechenden Kupfer-(I)-Salzes wie Kup fer-(I)-chlorid/Salzsäure oder Kupfer-(I)-Bromid/Bromwasser stoffsäure, mit einem Alkaliazid, z. B. Natriumazid, erfolgt bei Temperaturen zwischen -15 und 100°C, vorzugsweise in einem geeigneten Lösungsmittel wie Wasser/Methanol, Wasser/ Aceton, Ethanol, Tetrahydrofuran oder Dioxan, z. B. bei Tem peraturen zwischen 0 und 50°C, vorzugsweise bei Raumtempe ratur.
d) Zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, in der R₂ und R₇, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine gegebenenfalls durch eine oder zwei Methyl- oder Ethylgruppen substituierte Pyrrolidino-, Pipe ridino- oder Morpholinogruppe darstellen:
Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel V in der
R₃ bis R₆ wie eingangs definiert sind,
einer der Reste Z₂ oder Z₇ eine nukleophil austauschbare Gruppe wie ein Halogenatom, z. B. ein Chlor- oder Bromatom, darstellt und
der andere der Reste Z₂ oder Z₇ die für R₂ oder R₇ eingangs erwähnten Bedeutungen besitzt oder ebenfalls eine nukleophil austauschbare Gruppe wie ein Halogenatom, z. B. ein Chlor- oder Bromatom, darstellt, mit einem Amin der all gemeinen FormelH-X (VI)in der
X die für R₂ oder R₇ eingangs erwähnten Bedeutungen be sitzt.

Die Umsetzung wird zweckmäßigerweise in einem Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran, Dioxan, Benzol, Toluol, Dimethylsulfoxid oder Dimethylglycoläther bei Temperaturen zwischen 0 und 150°C, vorzugsweise bei Temperaturen zwischen der Raumtempe ratur und der Siedetemperatur des verwendeten Lösungsmittels oder in der Schmelze durchgeführt. Hierbei kann die Verwen dung eines säurebindenden Mittels wie Natriumcarbonat, Tri äthylamin oder Pyridin von Vorteil sein.

Bei den vorstehend beschriebenen Umsetzungen können gegebe nenfalls vorhandene reaktive Gruppen wie Hydroxy-, Amino- oder Alkylaminogruppen während der Umsetzung durch übliche Schutzgruppen geschützt werden, welche nach der Umsetzung wieder abgespalten werden.

Beispielsweise kommt als Schutzrest für eine Hydroxygruppe die Trimethylsilyl-, Acetyl-, Benzoyl-, Methyl-, Ethyl-, tert.Butyl-, Benzyl- oder Tetrahydropyranylgruppe, und als Schutzrest für eine Amino-, Alkylamino- oder Iminogruppe die Acetyl-, Benzoyl-, Ethoxycarbonyl-, Phthalyl- oder Benzyl gruppe in Betracht.

Die gegebenenfalls anschließende Abspaltung eines verwende ten Schutzrestes erfolgt vorzugsweise hydrolytisch in einem wäßrigen Lösungsmittel, z. B. in Wasser, Isopropanol/Wasser, Tetrahydrofuran/Wasser oder Dioxan/Wasser, in Gegenwart ei ner Säure wie Salzsäure oder Schwefelsäure oder in Gegenwart einer Alkalibase wie Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid bei Temperaturen zwischen 0 und 100°C, vorzugsweise bei der Sie detemperatur des Reaktionsgemisches. Die Abspaltung eines Benzylrestes erfolgt jedoch vorzugsweise hydrogenolytisch, z. B. mit Wasserstoff in Gegenwart eines Katalysators wie Palladium/Kohle in einem Lösungsmittel wie Methanol, Ethanol, Essigsäureethylester oder Eisessig gegebenenfalls unter Zu satz einer Säure wie Salzsäure bei Temperaturen zwischen 0 und 50°C, vorzugsweise jedoch bei Raumtemperatur, und einem Wasserstoffdruck von 1 bis 7 bar, vorzugsweise jedoch von 3 bis 5 bar.

Die als Ausgangsstoff verwendeten Verbindungen der allge meinen Formel II und VI sind zum größten Teil bekannt (siehe EP-A 0 362 645, CA-A 912 556, US-A 3 557 105 und US-A-3.574.206) bzw. man erhält diese nach den in der US-A 2 940 972 oder gemäß den in den vorstehend erwähnten Patentschriften beschriebenen Verfahren.

Beispielsweise wurde die Sensibilisierung durch die Verbin dung
A = 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis- (cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido-phenyl)- pteridin
am Beispiel von gegen Adriamycin resistenten Zellen wie folgt geprüft:
Proliferierende, adriamycinresistente S 180 Maus Sarcoma zellen werden in Anwesenheit unterschiedlicher Konzentra tionen Testsubstanzen für sechs Tage kultiviert. Zytotoxisch oder zytostatisch wirkende Konzentrationen der Testsubstan zen werden durch vermindertes Zellwachstum oder durch das Absterben der Zellen angezeigt. Endpunkt des Assays ist die Zahl der lebenden Zellen pro Kultur, die indirekt ermittelt wird, indem die Eigenschaft vitaler Zellen, den Farbstoff MTT [= 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid] zum farbigen Formazan zu reduzieren, ausgenützt wird. Als IC₅₀ wird die Konzentration einer Testsubstanz bezeich net, welche die Zahl der vitalen Zellen pro Kulturgefäß auf 50% der unbehandelten Kontrolle reduziert. Die Testsubstan zen werden sowohl in Abwesenheit von Adriamycin als auch in Anwesenheit einer unter Kulturbedingungen nicht prolifera tionshemmend wirkenden Menge Adriamycin getestet. Pro Test substanz erhält man daher zwei IC₅₀-Werte, einen in Anwe senheit (IC₅₀ ADR), den anderen in Abwesenheit (IC₅₀) von Adriamycin. Die Differenz der Zehnerlogarithmen der beiden IC₅₀-Werte: Δ = lgIC₅₀-lgIC₅₀ ADR ist ein Maß für die Erhö hung der Zytotoxizität der Testsubstanz durch Adriamycin.

Versuchungsdurchführung

Exponentiell wachsende, adriamycinresistente oder adriamycin sensitive S 180-Zellen werden in 96-Loch Flachboden-Mikro titerplatten zu 2000 Zellen pro Loch in 100 µl Wachstumsme dium (RPMI-1640, das 10% fötales Rinderserum enthält) aus plattiert. Die Kulturplatten werden im Brutschrank bei 37°C, 5% CO₂ und 100% relativer Luftfeuchtigkeit inkubiert. Nach 24 Stunden werden pro Loch 50 µl Wachstumsmedium, das unter schiedliche Konzentrationen an Testsubstanz enthält, und 50 µl Wachstumsmedium mit oder ohne Adriamycin hinzugefügt. Im An schluß an eine weitere sechstägige Kultivierung werden 50 µl Tetrazoliumsalzlösung [5 mg 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazoliumbromid pro ml Phosphat-gepufferter Saline lösung, vor Gebrauch 1 : 5 (v/v) mit RPMI-1640 verdünnt] in je des Loch pipettiert. Nach vier Stunden Inkubation wird das Kulturmedium vorsichtig abgesaugt und intrazellulär gebilde tes Formazan durch 150 µl Dimethylsulfoxid pro Loch solubi lisiert. Die Platten werden kurz geschüttelt und die optische Dichte bei 570 nm mit einem Photometer wie einem Dynatech MR-600-Gerät gemessen. Die Bildung des farbigen Formazans durch Reduktion des Tetrazoliumsalzes ist proportional der Zahl der lebenden Zellen. Die Mittelwerte von Dreifach-Be stimmungen wurden bei der Berechnung der IC₅₀-Werte verwen det (Verdünnungsstufe: 1 : 2).

Tabelle 1

Tabelle 2

Die Pteridine der obigen allgemeinen Formel I weisen somit eine ausgeprägte Sensibilisierung auf adriamycinresistente Sarcomazellen auf und eignen sich daher in Kombination mit Vinca Alkaloiden, Epipodophyllotoxinen oder Antibiotica wie Actinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Bleomycin oder Sub stanzen wie 5-Fluorurcil, Methothrexat oder Cytarabine (Cyctosinarabinosid), Mithramycin oder Mitomycin, zur Be handlung von neoplastischen Erkrankungen, um deren Resistenz gegenüber einer diesbezüglichen Chemotherapie aufzuheben und somit die Remission der gegenüber diesen Substanzen resi stenten Tumoren zu bewirken. Bei gegenüber den erwähnten Chemotherapeutica sensiblen Tumoren verhindern die Pteridine der Formel I also zusammen mit dem Chemotherapeuticum, daß therapieresistente Tumorzellsubpopulationen die Therapie überleben und zum Rezidiv führen können.

Die Application der Pteridine, die überdies gut verträglich sind, erfolgt getrennt oder kombiniert mit einem in der üb lichen Dosis applizierten Chemotherapeuticum; die Dosis des eingesetzten Pteridins liegt hierbei zwischen 1 und 50 mg/kg Körpergewicht pro Tag, vorzugsweise zwischen 3 bis 20 mg/kg Körpergewicht pro Tag, verteilt auf 1 bis 4 Einzeldosen.

Kombiniert mit einem entsprechenden Chemotherapeuticum kommt hierbei eine intravenöse Darreichungsform wie Ampullen und bei einer getrennten Application eine parallele Darreichungs form von Tabletten, Drage´s, Suspensionen, Säfte, Kapseln oder Zäpfchen in Betracht.

Auf Grund des literaturbekannten Applicationsschemas der bei der Chemotherapie von neoplastischen Erkrankungen eingesetz ten Naturprodukte (siehe Goodman and Gilman′s, The Pharmaco ligical Basis of Therapeutics, Macmillan Publishing Company, New York, 7. Auflage, Seiten 1240-1247 und 1277-1289 (1985)) erfolgt die erste Application eine Pteridins der Formel I oder dessen physiologisch verträglichem Säureadditionssalz zweckmäßigerweise zusammen mit oder vor dem verwendeten Che motherapeuticum bzw. mit oder vor einer Kombination mehrerer Chemotherapeutica, die mindestens eines der vorstehend er wähnten Chemotherapeutica enthält (siehe DeVita et al. in "Cancer, Principles & Practice of Oncology", 2nd Edition, J. B. Lippincott Company Philadelphia).

Die übrigen Applikationen eines Pteridins der Formel I oder dessen physiologisch verträglichen Säureadditionssalzes kön nen den Umständen entsprechend peroral oder ebenfalls intra venös erfolgen.

Eine erfindungsgemäß für die i.v.-Application geeignete Kom bination enthält somit zweckmäßigerweise 1 bis 25 mg/kg, vorzugsweise 1 bis 20 mg/kg Körpergewicht, eines Pteridins der Formel I oder dessen physiologisch verträgliches Säure additionssalz und ein geeignetes Chemotherapeuticum oder eine Kombination verschiedener geeigneter Chemotherapeuti ca, z. B.
0.1-0.15 mg/kg Vinblastin alle 7 Tage, wobei die Dosis ab hängig vom Grad der Nebenwirkungen in Stufen von 0,05 mg/kg erhöht werden kann,
ca. 2 mg/m² Körperoberfläche Vincristin alle 7 Tage bei juveniler Leukämie, wobei bei Erwachsenen die Therapie vor zugsweise mit 0.01 mg/kg alle 7 Tage beginnt und je nach der Verträglichkeit bis auf 0.02-0.05 mg/kg gesteigert werden kann,
3-4 mg/m² Körperfläche Vindesin alle 7 Tage,
2 mg/m² Körperfläche Mitomycin alle 5 Tage,
10-15 pg/kg Actinomycin alle 5 Tage,
25-30 kg/kg Mithramycin täglich oder alle 2 Tage,
60-75 mg/m² Körperoberfläche Adriamycin alle 21 Tage,
30-60 mg/m² Körperoberfläche Daunorubicin täglich für 3 Tage,
10-15 kg/kg Dactinomycin täglich für 5 Tage,
12 mg/kg 5-Fluoruracil täglich über 4 Tage,
2,5-10 mg Methotrexat täglich über 5 Tage,
100-200 mg/m² Cytarabine (Cytosinarabinosid) täglich über 7 Tage,
50-100 mg/m² Körperoberfläche Etoposid täglich für 5 Tage und
30 mg/m² Körperoberfläche Teniposid täglich bis 5 Tage, wo bei jeweils nach einer 10-tägigen Pause sich 6 - 10 Behand lungszyklen anschließen.

Die erfindungsgemäß erhaltenen neuen Verbindungen lassen sich in ihre Säureadditionssalze, insbesondere in ihre phy siologisch verträglichen Salze mit anorganischen oder orga nischen Säuren überführen. Als Säuren kommen beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphor säure, Milchsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure oder Fumarsäure in Betracht.

Enthalten die Verbindungen der Formel I mindestens ein chi rales Zentrum, so lassen sich diese mittels üblichen Metho den in ihre Enantiomeren auftrennen, beispielsweise durch Säulenchromatographie an einer chiralen Phase oder durch Kristallisation mit optisch aktiven Säuren, z. B. mit D- oder L-Monomethylweinsäure, D- oder L-Diacetyl-weinsäure, D- oder L-Weinsäure, D- oder L-Milchsäure oder D- oder L-Campher- Säure.

Außerdem können die Verbindungen der Formel I, sofern diese mindestens ein geometrisches Zentrum wie eine durch zwei Methyl- oder Ethylgruppen substituierte Pyrrolidino-, Piperi dino- oder Morpholinogruppe enthalten, insbesondere jedoch mindestens eine 2,6-Dimethyl-morpholinogruppe, mittels übli chen Methoden, beispielsweise durch Chromatographie, in ihre cis-/trans-Isomere aufgetrennt werden oder vorliegen.

Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläu tern:

Beispiel 1 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis- 2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-nitrophenyl)-pteridin

12 g (0,021 Mol) 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanol amino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-phenyl pteridin werden in 80 ml Methylenchlorid gelöst und bei -25°C während 2-3 Minuten zu 42 ml konz. Salpetersäure in 1,5 l Me thylenchlorid getropft. Nachdem die Lösung 1,5 Stunden bei -10°C berührt wurde, schüttelt man mit 500 ml Eiswasser aus, trocknet die organische Phase über Natriumsulfat und engt zur Trockne ein. Anschließend wird der Rückstand in 500 ml Essig ester aufgenommen, mit wäßriger Natriumhydrogencarbonatlö sung ausgeschüttelt, getrocknet und eingeengt. Das verblei bende Material kann zur weiteren Reinigung über eine Kiesel gelsäule mit Essigester/Methanol 20 : 1 chromatographiert und aus Essigester umkristallisiert werden.
Ausbeute: 6,5 g (75% der Theorie)

Beispiel 2 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis- 2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-aminophenyl)-pteridin

9,5 g (0,015 Mol) 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanol amino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-nitro phenyl)-pteridin werden in 150 ml Methanol gelöst. Dazu gibt man 40 ml Dioxan/HCl und hydriert anschließend unter Verwen dung von Palladiumkohle als Katalysator bei Raumtemperatur und 50 psi Wasserstoffdruck. Nach 30 Minuten wird vom Kataly sator abfiltriert und die Lösung einrotiert. Dabei wird der zunächst ölige Rückstand fest. Anschließend wird mit Ether gerührt und abgesaugt.
Ausbeute: 10,3 g (95% der Theorie)
Schmelzpunkt: ab 105°C (Zers.)
Ber.:
C 55,12; H 7,09; N 17,14%
Gef.:
C 55,75; H 6,91; N 16,83%

Beispiel 3 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis- 2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azidophenyl)-pteridin

1,3 g (0,002 Mol) 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanol amino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-amino phenyl)-pteridin-hydrochlorid werden mit 4 ml Wasser und 2,3 ml konz. Salzsäure versetzt und auf 2°C abgekühlt. Dann tropft man 0,145 g Natriumnitrit in 0,5 ml Wasser zu und rührt 1 Stunde bei 0°C. Anschließend gibt man 0,13 g Natrium azid in 0,5 ml Wasser zu und rührt eine weitere Stunde, wobei Stickstoff entweicht. Schließlich wird mit Wasser auf 80 ml verdünnt und die Lösung 80 bis 100 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dabei spaltet sich weiterer Stickstoff ab. Anschlie ßend wird die Lösung mit Natriumhydrogencarbonat neutrali siert, das ausgefallene Produkt abgesaugt, gewaschen und ge trocknet.
Ausbeute: 80% der Theorie
Schmelzpunkt: 160°C (Zers., sintert zwischen 140-146°C).

Beispiel I Drag´es mit 75 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanol amino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azidophe nyl)-pteridin

1 Drag´ekern enthält:
Wirksubstanz\|75,0 mg
Calciumphosphat	93,0 mg
Maisstärke	35,5 mg
Polyvinylpyrrolidon	10,0 mg
Hydroxypropylmethylcellulose	15,0 mg
Magnesiumstearat	1,5 mg
	230,0 mg

Herstellung

Die Wirksubstanz wird mit Calciumphosphat, Maisstärke, Poly vinylpyrrolidon, Hydroxypropylmethylcellulose und der Hälfte der angegebenen Menge Magnesiumstearat gemischt. Auf einer Tablettiermaschine werden Preßlinge mit einem Durchmesser von ca. 13 mm hergestellt, diese werden auf einer geeigneten Maschine durch ein Sieb mit 1,5 mm-Maschenweite gerieben und mit der restlichen Menge Magnesiumstearat vermischt. Dieses Granulat wird auf einer Tablettiermaschine zu Tabletten mit der gewünschten Form gepreßt.
Kerngewicht: 230 mg
Stempel: 9 mm, gewölbt.

Die so hergestellten Drag´ekerne werden mit einem Film über zogen, der im wesentlichen aus Hydroxypropylmethylcellulose besteht. Die fertigen Filmdrag´es werden mit Bienenwachs ge glänzt.
Drag´egewicht 245 mg.

Beispiel II Tabletten mit 100 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-etha nolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido phenyl)-pteridin

Zusammensetzung
1 Tablette enthält:
Wirkstoff\|100,0 mg
Milchzucker	80,0 mg
Maisstärke	34,0 mg
Polyvinylpyrrolidon	4,0 mg
Magnesiumstearat	2,0 mg
	220,0 mg

Herstellungverfahren

Wirkstoff, Milchzucker und Stärke werden gemischt und mit einer wäßrigen Lösung des Polyvinylpyrrolidons gleichmäßig befeuchtet. Nach Siebung der feuchten Masse (2,0 mm-Maschen weite) und Trocknen im Hordentrockenschrank bei 50°C wird erneut gesiebt (1,5 mm-Maschenweite) und das Schmiermittel zugemischt. Die preßfertige Mischung wird zu Tabletten ver arbeitet.
Tablettengewicht: 220 mg
Durchmesser: 10 mm, biplan mit beidseitiger Facette und einseitiger Teilkerbe.

Beispiel III Tabletten mit 150 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-etha nolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido phenyl)-pteridin

Zusammensetzung
1 Tablette enthält:
Wirksubstanz\|150,0 mg
Milchzucker pulv.	89,0 mg
Maisstärke	40,0 mg
Kolloide Kieselgelsäure	10,0 mg
Polyvinylpyrrolidon	10,0 mg
Magnesiumstearat	1,0 mg
	300,0 mg

Herstellung

Die mit Milchzucker, Maisstärke und Kieselsäure gemischte Wirksubstanz wird mit einer 20%igen wäßrigen Polyvinylpyr rolidonlösung befeuchtet und durch ein Sieb mit 1,5 mm-Ma schenweite geschlagen.

Das bei 45°C getrocknete Granulat wird nochmals durch das selbe Sieb gerieben und mit der angegebenen Menge Magnesium stearat gemischt. Aus der Mischung werden Tabletten gepreßt.
Tablettengewicht: 300 mg
Stempel: 10 mm, flach.

Beispiel IV Hartgelatine-Kapseln mit 100 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-pro pyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)- 6-(4-azidophenyl)-pteridin

1 Kapsel enthält:
Wirkstoff\|150,0 mg
Maisstärke getr.	ca. 180,0 mg
Milchzucker pulv.	ca. 87,0 mg
Magnesiumstearat	3,0 mg
	ca. 420,0 mg

Herstellung

Der Wirkstoff wird mit den Hilfsstoffen vermengt, durch ein Sieb von 0,75 mm-Maschenweite gegeben und in einem geeigne ten Gerät homogen gemischt.

Die Endmischung wird in Hartgelatine-Kapseln der Größe 1 ab gefüllt.
Kapselfüllung: ca. 320 mg
Kapselhülle: Hartgelatine-Kapsel Größe 1.

Beispiel V Suppositorien mit 150 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)- ethanolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)- 6-(4-azidophenyl)-pteridin

1 Zäpfchen enthält:
Wirkstoff\|150,0 mg
Polyäthylenglykol 1500	550,0 mg
Polyäthylenglykol 6000	460,0 mg
Polyoxyäthylensorbitanmonostearat	840,0 mg
	2000,0 mg

Herstellung

Nach dem Aufschmelzen der Suppositorienmasse wird der Wirk stoff darin homogen verteilt und die Schmelze in vorgekühlte Formen gegossen.

Beispiel VI Suspension mit 50 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-etha nolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido phenyl)-pteridin

100 ml Suspension enthalten:
Wirkstoff\|1,0 g
Carboxymethylcellulose-Na-Salz	0,1 g
p-Hydroxybenzoesäuremethylester	0,05 g
p-Hydroxybenzoesäurepropylester	0,01 g
Rohrzucker	10,0 g
Glycerin	5,0 g
Sorbitlösung 70%ig	20,0 g
Aroma	0,3 g
Wasser dest. ad	100 ml

Herstellung

Dest. Wasser wird auf 70°C erhitzt. Hierin wird unter Rühren p-Hydroxybenzoesäuremethylester und -propylester wobei Gly cerin und Carboxymethylcellulose-Natriumsalz gelöst. Es wird auf Raumtemperatur abgekühlt und unter Rühren der Wirkstoff zugegeben und homogen dispergiert. Nach Zugabe und Lösen des Zuckers, der Sorbitlösung und des Aromas wird die Suspension zur Entlüftung unter Rühren evakuiert.
5 ml Suspension enthalten 50 mg Wirkstoff.

Beispiel VII Ampullen mit 10 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanol amino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido phenyl)-pteridin

Zusammensetzung
Wirkstoff\|10,0 mg
0,01 n Salzsäure s.p. Aqua bidest ad	2,0 ml

Herstellung

Die Wirksubstanz wird in der erforderlichen Menge 0,01 n HCl gelöst, mit Kochsalz isotonisch gestellt, sterilfiltriert und in 2 ml Ampullen abgefüllt. Die Sterilisation erfolgt durch 20 minütiges Erhitzen auf 121°C.

Beispiel VIII Ampullen mit 50 mg 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanol amino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido phenyl)-pteridin

Zusammensetzung
Wirkstoff\|50,0 mg
0,01 n Salzsäure s.p. Aqua bidest ad	10,0 ml

Herstellung

Die Wirksubstanz wird in der erforderlichen Menge 0,01 n HCl gelöst, mit Kochsalz isotonisch gestellt, sterilfiltriert und in 10 ml Ampullen abgefüllt. Die Sterilisation erfolgt durch 20 minütiges Erhitzen auf 121°C.

Beispiel IX Trockenampullen mit 10 mg Doxorubicin und 10 mg 4-[N-(2-Hy droxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethyl morpholin-4-yl)-6-(4-azidophenyl)-pteridin

Zusammensetzung der Trockenampulle
Doxorubicin\|10,0 mg
Wirksubstanz	10,0 mg

Herstellung

Die beiden Wirksubstanzen werden in der erforderlichen Menge 0,01 n HCl gelöst, sterilfiltriert und lyophylisiert.

Die Lösungsmittelampulle enthält 5 ml Kochsalzlösung.

Vor der Anwendung wird das Lyophylisat in der sterilen phy siologischen Kochsalzlösung gelöst.

Beispiel X Trockenampullen mit 50 mg Doxorubicin und 50 mg 4-[N-(2-Hy droxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis(cis-2,6-dimethyl morpholin-4-yl)-6-(4-azidophenyl)-pteridin

Zusammensetzung der Trockenampulle
Doxorubicin\|50,0 mg
Wirksubstanz	50,0 mg

Herstellung

Die Lösungsmittelampulle enthält 25 ml Kochsalzlösung.

Selbstverständlich können alle übrigen Verbindungen der all gemeinen Formel I als Wirkstoffe in den vorstehenden galen ischen Zubereitungen eingesetzt werden.

Claims

1. Pteridine der allgemeinen Formel I in der
R₃ eine geradkettige oder verzweigte Alkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, in welcher mit Ausnahme des zum Stick stoffatom benachbarten Kohlenstoffatoms ein oder zwei Kohlen stoffatome durch eine Hydroxygruppe substituiert sind, und
R₄ eine Benzylgruppe oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, in welcher mit Ausnahme des zum Stick stoffatom benachbarten Kohlenstoffatoms ein Kohlenstoffatom durch eine Hydroxygruppe substituiert sein kann, oder
R₃ eine Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen und
R₄ eine Phenylalkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen im Alkylteil,
R₂ und R₇, die gleich oder verschieden sein können, je weils eine gegebenenfalls durch eine oder zwei Methyl- oder Ethylgruppen substituierte Pyrrolidino-, Piperidino- oder Morpholinogruppe,
R₅ ein Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatom, eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe und
R₆ eine Nitro-, Amino- oder Azidogruppe bedeuten,
deren geometrischen oder optischen Isomeren und deren Salze.

2. Pteridine der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1, in der
R₂ und R₇, die gleich oder verschieden sein können, eine Piperidino-, 3,5-Dimethyl-piperidino-, Morpholino-, 2-Methyl- morpholino-, 2,6-Dimethyl-morpholino-, cis-2,6-Dimethyl-mor pholino- oder trans-2,6-Dimethyl-morpholinogruppe,
R₃ eine Methyl-, Ethyl-, Benzyl-, 2-Hydroxy-ethyl-, 2-Hy droxy-n-propyl-, 2,3-Dihydroxy-n-propyl- oder 2-Methyl-2-hy droxy-n-propylgruppe,
R₄ eine 2-Hydroxy-ethyl-, 2-Hydroxy-n-propyl- oder 2-Me thyl-2-hydroxy-n-propylgruppe und
R₅ ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und
R₆ eine Nitro-, Amino- oder Azidogruppe bedeuten,
deren optische und geometrische Isomere und deren Salze.

3. Pteridine der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1, in der
R₂ und R₇ jeweils eine 2,6-Dimethyl-morpholinogruppe oder einer der Reste R₂ oder R₇ eine Morpholinogruppe und der andere der Reste R₂ oder R₇ eine 2,6-Dimethyl-morpho linogruppe,
R₃ und R₄ zusammen eine N-(2-Hydroxy-2-methyl-n-propyl)- ethanolaminogruppe und
R₅ ein Wasserstoffatom und
R₆ eine Azidogruppe bedeuten,
deren geometrischen oder optischen Isomeren und deren Salze.

4. 4-[N-(2-Hydroxy-2-methyl-propyl)-ethanolamino]-2,7-bis- (cis-2,6-dimethylmorpholin-4-yl)-6-(4-azido-phenyl)-pteridin und dessen Salze.

5. Physiologisch verträgliche Säureadditionssalze der Ver bindungen nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4 mit anorganischen oder organischen Säuren.

6. Arzneimittel, enthaltend eine Verbindung nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4 oder ein physiologisch verträg liches Salz gemäß Anspruch 5 neben gegebenenfalls einem oder mehreren inerten Trägerstoffen.

7. Arzneimittel gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß dieses zur Behandlung von neoplastischen Erkrankungen geeignet ist.

8. Arzneimittel gemäß den Ansprüche 6 und 7, dadurch gekenn zeichnet, daß diese zusätzlich ein oder mehrere Cytostatika enthalten.

9. Verfahren zur Herstellung der Arzneimittel gemäß den An sprüchen 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß auf nichtche mischem Wege eine Verbindung nach mindestens einem der An sprüche 1 bis 5 und gegebenenfalls ein oder mehrere Cytosta tika in eine oder mehrere inerte Trägerstoffe und/oder Ver dünnungsmittel eingearbeitet werden.

10. Verfahren zur Herstellung der Pteridine gemäß den An sprüchen 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß

a) zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, in der R₆ eine Nitrogruppe darstellt, eine Verbindung der allgemeinen Formel II in der
R₂ bis R₅ und R₇ wie in den Ansprüchen 1 bis 4 defi niert sind, nitriert wird oder
b) zur Herstellung einer Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R₆ eine Aminogruppe darstellt, eine Verbindung der allgemeinen Formel III, in der
R₂ bis R₅ und R₇ wie in den Ansprüchen 1 bis 4 defi niert sind, reduziert wird oder
c) zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel II in der R₆ eine Azidogruppe darstellt, eine Verbindung der allgemeinen Formel IV, in der
R₂ bis R₅ und R₇ wie in den Ansprüchen 1 bis 4 erwähnt definiert sind, diazotiert und anschließend das so erhaltene Diazoniumsalz mit einem Alkaliazid umgesetzt wird oder
d) zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, in der R₂ und R₇, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine gegebenenfalls durch eine oder zwei Methyl- oder Ethylgruppen substituierte Pyrrolidino-, Pipe ridino- oder Morpholinogruppe darstellen, eine Verbindung der allgemeinen Formel V in der
R₃ bis R₆ wie in den Ansprüchen 1 bis 4 definiert sind,
einer der Reste Z₂ oder Z₇ eine nukleophil austauschbare Gruppe und
der andere der Reste Z₂ oder Z₇ die für R₂ oder R₇ in den Ansprüchen 1 bis 4 erwähnten Bedeutungen besitzt oder ebenfalls eine nukleophil austauschbare Gruppe darstellt, mit einem Amin der allgemeinen Formel
H-X (VI)
in der
X die für R₂ oder R₇ in den Ansprüchen 1 bis 4 erwähnten Bedeutungen besitzt, umgesetzt wird und
gewünschtenfalls eine so erhaltene Verbindung der allgemei nen Formel I in ihr Säureadditionssalz, insbesondere in ihr physiologisch verträgliches Säureadditionssalze, mit anor ganischen oder organischen Säuren übergeführt wird.