DE3881566T2 - Antitumor-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische zusammensetzungen, die sie enthalten. - Google Patents

Description

• Die Erfindung betrifft neue Verbindungen mit antitumoraler und Proteinkinase C hemmender Wirkung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten.
• In Übereinstimmung mit der Erfindung wurden zwei neue Verbindungen, die hier als UCN-1028A und UCN-1028C bezeichnet werden, gefunden, die antitumorale und Proteinkinase C hemmende Wirkung zeigen, und die potentiell als Antitumorwirkstoffe, Carcino-suppressive Wirkstoffe, usw. geeignet sind.
• Die zwei Verbindungen UCN-1028A und UCN-1028C sind strukturell verwandt mit dem Phleichrome, isoliert als ein Pflanzengift aus Cladosporium phlei, das Flecken auf Viehfutter verursacht [Agricultural and Biological Chemistry, Bd, 39 (1975), Seite 1683 und J. Jap. Pasture, Bd. 28 (4) (1983), Seite 426], und sind entsprechend erhältlich aus Kulturen von Mikroorganismen der Art Cladosporium.
• Die neuen Verbindungen UCN-1028A und UCN-1028C der Erfindung werden durch die folgende allgemeine Formel wiedergegeben
• in der R
• oder
• bedeutet.
• Die physikalisch-chemischen Eigenschaften, physiologischen Wirkungen und Antitumorwirkungen der Verbindungen UCN-1028A und UCN-1028C werden nachstehend beschrieben unter Bezugnahme auf die beigefügten Zeichnungen, bei denen:
• Fig. 1 das EI-Massenspektrum von UCN-1028A zeigt;
• Fig. 2 das UV-Absorptionsspektrum von UCN-1028A zeigt;
• Fig. 3 das IR-Absorptionsspektrum von UCN-1028A zeigt;
• Fig. 4 das ¹³C-NMR-Spektrum von UCN-1028A zeigt;
• Fig. 5 das CD-Spektrum von UCN-1028A zeigt;
• Fig. 6 das EI-Massenspektrum von UCN-1028C zeigt;
• Fig. 7 das UV-Absorptionsspektrum von UCN-1028C zeigt;
• Fig. 8 das IR-Absorptionsspektrum von UCN-1028C zeigt;
• Fig. 9 das ¹³C-NMR-Spektrum von UCN-1028C zeigt;
• Fig. 10 das CD-Spektrum von UCN-1028C zeigt.
(A) Physikalisch-chemische Eigenschaften von UCN-1028A
• (1) Molekül-Formel: C&sub4;&sub4;H&sub3;&sub8;O&sub1;&sub2;
• (2) Molekulargewicht: 758
• (3) Massenspektrum: EI-Massenspektrum, gezeigt in Fig. 1.
• (4) UV-Absorptionsspektrum: gezeigt in Fig. 2 (gemessen in Methanol)
• (5) IR-Absorptionsspektrum: gezeigt in Fig. 3 (gemessen in CHCl&sub3;)
• (6) Löslichkeit: unlöslich in Wasser; löslich in alkalischem Wasser, Methanol, Aceton und n-Hexan; leicht löslich in Chloroform und Ethylacetat;
• (7) ¹H-NMR-Spektrum: (gemessen bei 400 MHz in CDCl&sub3;, interner Standard TMS)
• δ(ppm) 1,3 (d, 6H), 3,2 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 3,8 (s, 6H), 4,3 (s, 6H), 5,0 (m, 2H), 6,2 (s, 2H), 6,9 (m, 8H), 7,2 (m, 2H), 15,9 (s, 2H)
• (8) ¹³C-NMR-Spektrum: (gemessen bei 400 MHz in CDCl&sub3;, interner Standard TMS)) δ (ppm), gezeigt in Fig. 4
• (9) Dünnschichtchromatographie: RF ist 0,60 an Silikagel-Dünnschichtchromatographie (Art 5715, hergestellt von E. Merck) mit einem Chloroform : Methanol (97 : 3 v/v) Entwicklungssystem.
• (10) CD-Spektrum: gezeigt in Fig. 5 (gemessen in CH&sub3;OH).
(B) Physikalisch-chemische Eigenschaften von UCN-1028C
• (1) Molekül-Formel: C&sub4;&sub4;H&sub3;&sub8;O&sub1;&sub4;
• (2) Molekulargewicht: 790
• (3) Massenspektrum: EI-Massenspektrometrie, gezeigt in Fig. 6.
• (4) UV-Absorptionsspektrum: gezeigt in Fig. 7 (gemessen in CH&sub3;OH)
• (5) IR-Absorptionsspektrum: gezeigt in Fig. 8 (gemessen in CHCl&sub3;)
• (6) Löslichkeit: Unlöslich in Wasser; löslich in alkalischem Wasser, Chloroform, Aceton und Ethylacetat, leicht löslich in Methanol und DMSO
• (7) ¹H-NMR-Spektrum: (gemessen bei 400 MHz in CD&sub3;OD, interner Standard TMS)
• δ(ppm) 1,10 (d, 3H, J=6,3Hz), 1,22 (d, 3H, J=6,3Hz), 3,00 (dd, 1H, J=9,8, 13,5Hz), 3,11 (dd, 1H, J=10,1, 13,5Hz), 3,60 (dd, 1H, J=2,5, 13,5Hz), 3,62 (dd, 1H, J=1,8, 13,5Hz), 3,64 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 4,18 (s, 3H), 4,19 (s, 3H), 4,7 (m, 1H), 5,0 (m, 1H), 5,87 (d, 2H, J=8,9Hz), 6,30 (s, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,36 (d, 2H, J=8,9Hz), 6,74 (dd, 2H, J=8,1, 1,2Hz), 6,86 (t, 2H, J=8,1Hz), 7,22 (dt, 1H, J=8,1, 1,2Hz)
• (8) ¹³C-NMR-Spektrum: (gemessen bei 400 MHz in CDCl&sub3;, interner Standard TMS), δ(ppm), gezeigt in Fig. 9
• (9) Dünnschichtchromatographie: Rf ist 0,3 mit Silikagel-Dünnschichtchromatigraphie (Art 5715, hergestellt von E. Merck) mit einem Chloroform : Methanol (97 : 3 v/v) Entwicklungssystem.
• (10) CD-Spektrum: gezeigt in Figur 10 (gemessen in CH&sub3;OH).
(C) Physiologische Wirksamkeiten von UCN-1028A und UCN-1028C (1) Proteinkinase C Hemmwirkung
• Die Proteinkinase C Hemmwirkung wurde gemessen nach dem Verfahren von Kikkawa et al. [Journal of Biological Chemistry Bd. 257 (1982), S. 13341].
• Demnach wurden 10 ul einer Testlösung, die UCN-1028A, UCN-1028C oder Phleichrome enthielt, zu 250 ul einer Lösung gegeben, die 2,5 uMol Magnesiumacetat, 50 ug des Histon-Typs IIS (hergestellt von Sigma Co., Ltd.), 20 ug Phosphatidylserin, 0,8 ug Diolein, 25 nMol CaCl&sub2;, 5 ug rohes Enzym (teilweise gereinigt aus Rattenhirn gemäß dem Verfahren nach Kikkawa et al.) und 5 uMol des Tris-hydrochloridpuffer (pH 7,5) enthielt, und anschließend 3 Minuten bei 30ºC inkubiert. Dann wurde die Phosphorylierung eingeleitet durch Zugabe von 1,25 nMol [γ&supmin;³²P]ATP (5 bis 10 x 10³ cpm/nMol), gefolgt durch 3minütiges Inkubieren bei 30ºC. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 25 % Trichloressigsäure (TCA) gestoppt und die Reaktionslösung durch eine Celluloseacetatmembran (Porengröße 0,45 um) (hergestellt durch Toyo Filter Paper Co., Ltd.) filtriert. Nach 4maligem Waschen der Membran mit 5 %iger TCA, wurde die verbleibende Radioaktivität auf der Membran gemessen. Als Kontrolle wurde das gleiche vorstehend beschriebene Verfahren ohne Zugabe der Testlösung wiederholt und ebenso die Radioaktivität gemessen. Die Konzentration der Testlösung, die 50 % Hemmung zeigte, verglichen mit der Kontrolle, wird als IC&sub5;&sub0; bezeichnet.
• Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 wiedergegeben.
(2) Proteinkinase A Hemmwirkung
• Die Proteinkinase A Hemmwirkung wurde gemessen nach der Methode von Kuo et al. [Biochemistry, Bd. 64 (1969), S.1349].
• Demnach wurden 10 ul einer Testlösung zu 250 ul einer Lösung gegeben, die 5 uMol Tris-hydrochlorid-Puffer (pH 6,8), 2,5 uMol Magnesiumacetat, 100 ug Histon Typ IIS (hergestellt durch die Sigma Co., Ltd.), 0,25 nMol C-AMP und 200 ug des rohen Enzyms (teilweise gereinigt aus Kalbsherz gemäß der Methode von Kuo et al.), enthielt. Die nachfolgenden Verfahren wurden ähnlich der im Fall der Messung der Proteinkinase C Hemmwirkung vorstehend beschriebenen Weise durchgeführt, um den IC&sub5;&sub0;-Wert zu bestimmen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 wiedergegeben. Tabelle 1 IC&sub5;&sub0; (ug/ml) Testverbindung Proteinkinase C Proteinkinase A UCN-1028A UCN-1028C Phleichrom
• UCN-1028A und UCN-1028C weisen selektive Hemmwirkung gegenüber Proteinkinase C, verglichen mit Phleichrome, auf.
(D) Antitumorwirksamkeit (1) MCF 7-Zellen
• MCF 7-Zellen (4,5 x10&sup4; Zellen/ml), hergestellt in einem Medium, bestehend aus RPMI 1640 Medium (hergestellt von Gibco Co., Ltd.), 10 % fötales Kalbserum, 10 ug/ml Insulin und 10&supmin;&sup8; M Östradiol (nachfolgend gekennzeichnet als Medium A), wurden in einer Menge von 0,1 ml pro Mulde in die Mulden einer 96 Mulden - Mikrotiterplatte gegeben. Nach 20stündigem Kultivieren bei 37ºC in einem Kohlenstoffdioxidgasinkubator wurden die einzelnen Testlösungen, in geeigneter Weise verdünnt mit Medium A (0,05 ml), zugegeben. Anschließend wurde die Kultivierung fortgesetzt für 1 Stunde bei 37ºC in einem Kohlendioxidgasinkubator und die überstehende Kulturlösung entfernt. Anschließend wurde der Rückstand einmal mit ProS (Zusammensetzung: 8 g/Liter NaCl, 0,2 g/Liter KCl, 1,5 g/Liter Na&sub2;HPO&sub4; und 0,2 g/Liter KH&sub2;PO&sub4;) gewaschen, mit 0,1 ml frischem Medium A versetzt und anschließend 72 Stunden bei 37ºC unter Kohlenstoffdioxid im Gasinkubator kultiviert. Anschließend wurde die überstehende Kulturlösung entfernt und der Rückstand mit 0,1 ml eines Medium versetzt, das das Medium A und 0,02 % Neutralrot enthält; es folgte eine einstündige Kultivierung bei 37ºC in einem Kohlenstoffdioxidgasinkubator, wobei die Zellen gefärbt wurden. Nach dem Entfernen der überstehenden Kulturlösung wurde der Rückstand einmal mit physiologischer Kochsalzlösung gewaschen. Dann wurde das Pigment mit 0,001 N Salzsäure/30 % Ethanol extrahiert und die Absorption bei 550 nm mit einem Mikroplattenmeßgerät gemessen. Durch Vergleich der Absorption von intakten Zellen mit derjenigen der mit einer Testlösung von bekannter Konzentration behandelten Zellen, wurde eine Konzentration der Testlösung berechnet, die 50 % des Wachstums der Zellen (IC&sub5;&sub0;) hemmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 wiedergegeben.
(2) He-La-S&sub3;-Zellen
• He-La-S&sub3;-Zellen (3 x 10&sup4; Zellen/ml), hergestellt in einem Medium enthaltend MEM-Medium (hergestellt von Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) und 2 mM Glutamin, wurden in einer Menge von 0,1 ml pro Mulde in die Mulden einer 96 Mulden- Mikrotiterplatte gegeben. In einer Art ähnlich der im Falle der vorstehend beschriebenen MCF 7-Zellen, wurde IC&sub5;&sub0; berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 wiedergegeben. Tabelle 2 IC&sub5;&sub0; (ug/ml) Testverbindung MCF-7-Zellen He-La-S&sub3;-Zellen UCN-1028A UCN-1028C Phleichrom
• Nachstehend wird ein Verfahren zur Herstellung von UCN-1028A und UCN-1028C beschrieben.
• UCN-1028A und/oder UCN-1028C können erhalten werden durch Kultivieren eines UCN-1028A und/oder UCN-1028C-produzierenden Stammes, der zur Gattung Cladosporium gehört, in einem Medium und Gewinnen von UCN-1028A und/oder UCN-1028C aus der Kultur. Als UCN-1028A und/oder UCN-1028C-produzierender Stamm kann jeder Stamm verwendet werden, solange er zur Gattung Cladosporium gehört und fähig ist, UCN-1028A und/oder UCN-1028C zu produzieren. Ein repräsentativer Stamm ist der Stamm KAC-2215, der von den Erfindern aus im Freien befindlichen Blockwänden in Osaka City isoliert wurde.
• Die taxonomischen Eigenschaften des Stammes KAC-2215 sind wie folgt.
• Beim Kultivieren bei 20ºC unter Verwendung eines Malzextrakt-Agar-Mediums, erreicht der Durchmesser der Kolonie 5,5 bis 6 cm in 3 Wochen. Das Zentrum der Kolonieoberfläche ist graugrün und seine Umrandung ist grau. Die rückseitige Oberfläche der Kolonie ist dunkelgrünlichschwarz. Die Hyphen sind septiert und erstrecken sich in und auf dem Medium. Die Hyphen haben einen Durchmesser von 1,5 bis 5 um und sind stark verzweigt. Der Konidienträger ist braun oder dunkelbraun, septiert und geht aus einer Hyphe hervor. Die kettenartig angeordneten Konidien oder ihre Zweig-Konidien entwickeln sich auf einem Konidienträger. Die Art der Ontogenese bei Konidien ist vom sprossenden Typ und das jüngste Konidium sitzt an der Spitze der konidialen Kette. Die an der Spitze des Konidienträgers lokalisierten verzweigten Zweig-Konidien bestehen aus 1 bis 2 Zellen mit einer Breite von 3 bis 4 um. Einzellige Konidien sind oval, citronenartig geformt oder ellipsoid und blaßbraun, und haben eine Länge von 4 bis 6 um und eine Breite von 3 bis 4 um.
• Als Ergebnis der vorstehend beschriebenen Beobachtungen, wurde dieser Stamm identifiziert als Cladosporium cladosporioides. Die mikrobiologischen Eigenschaften von Cladosporium cladosporioides sind beschrieben bei Ellis, "Dematiaceous hyphomycetes" (1971).
• Der vorstehend beschriebene Stamm wurde als Cladosporium cladosporioides KAC-2215 bezeichnet und beim Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology unter FERM BP-1285 am 10. Februar 1987 hinterlegt.
• Die in der vorliegenden Erfindung verwendeten Pilze können nach Methoden kultiviert werden, wie sie zur Kultivierung üblicher Schimmelpilze verwendet werden. Als Medium zum Kultivieren ist ein natürliches Medium oder ein synthetisches Medium geeignet, solange es übliche Kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen, anorganisches Material usw. enthält. Als Kohlenstoffquelle können Glucose, Stärke, Glycerin, Mannose, Fructose, Saccharose, Melassen, Kohlenwasserstoffe, Alkohole, wie Methanol und Ethanol, organische Säuren, wie Bernsteinsäure und Essigsäure etc. verwendet werden. Als Stickstoffquelle können Ammoniumchlorid, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Natriumnitrat, Harnstoff, Peptone, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Trockenhefe, Maisquellwasser, Sojabohnenpulver, Casaminosäure, usw. verwendet werden. Geeignete anorganische Materialien sind Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Eisen(II)-sulfat, Zinksulfat, Mangansulfat, Kupfersulfat, Calciumcarbonat, Phosphate, usw.. Zusätzlich können auch Substanzen das Medium vervollständigen, die die Produktion von UCN-1028A und/oder UCN-1028C beschleunigen, wie Biotin und Vitamine.
• Als Kulturmethode kann sowohl eine flüssige Kultur als auch eine feste Kultur benutzt werden, jedoch im allgemeinen wird eine flüssige Kultur, insbesondere eine Submersrührkultur verwendet. Die Kultivierungstemperatur liegt bei 20 bis 35ºC, vorzugsweise bei 23 bis 28ºC. Es ist vorteilhaft, den pH-Wert des Mediums durch Zugabe von wäßrigem Ammoniak, wäßrigem Ammoniumcarbonat etc. zum Medium auf 4 bis 10, vorzugsweise 5 bis 7 zu halten. Im allgemeinen werden bei Flüssigkulturen innerhalb von 1 bis 7 Tagen UCN-1028A und/oder UCN-1028C produziert und in der Kultur angesammelt. Wenn die Menge des Produkte in der Kultur das Maximum erreicht, wird die Kultivierung abgebrochen und UCN-1028A und/oder UCN-1028C aus der Kultur isoliert und gereinigt.
• Die Isolierung und Reinigung von UCN-1028A und/oder UCN-1028C aus der Kulturbrühe kann mit Hilfe einer üblichen Methode zum Isolieren eines mikrobiellen Metaboliten aus der Kulturbrühe erfolgen. Beispielsweise wird die Kultur durch Filtration, Zentrifugation, usw. in eine Kulturbrühe und in Mikrobenzellen getrennt. Die Mikrobenzellen werden mit einem Lösungsmittel extrahiert, das geeignet ist, UCN-1028A und/oder UCN-1028C aufzulösen, beispielsweise Chloroform und Aceton. Der Extrakt wird unter vermindertem Druck konzentriert, wobei das Lösungsmittel entfernt wird und der Rückstand wird in Wasser aufgelöst, um eine wäßrige Lösung herzustellen. Die zellfreie Kulturbrühe und die durch Behandeln der Mikrobenzellen erhaltene Lösung werden mit einem nichtionischen porösen Harz behandelt, beispielsweise HP-20 (hergestellt durch Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) um den wirksamen Teil auf dem Harz zu adsorbieren. Dann wird die aktive Komponente mit Methanol eluiert. Nachdem das Eluat einkonzentriert ist, können UCN-1028A und/oder UCN-1028C durch Extraktion mit einem Lösungsmittel, wie Ethylacetat und/oder Säulenchromatographie unter Verwendung eines Trägers, wie einem Gel-Filtermittel und Silikagel, isoliert werden.
• Besondere Einzelheiten der vorliegenden Erfindung sind in den folgenden Beispielen wiedergegeben.
Beispiel 1
• Der Stamm Cladosporium cladosporioides KAC-2215 wurde als Impfstamm verwendet. 50 ml eines Impfmediums folgender Zusammensetzung wurden in einem 300 ml Erlenmeyer-Kolben mit einer Schlinge mit diesem Stamm überimpft, gefolgt von Schütteln der Kulturbrühe bei 25ºC für 72 Stunden.
• Zusammensetzung des Impfmediums: 5 g/Liter Pepton, 5 g/Liter Ebios (hergestellt von Ebios Pharmaceutical Co.), 10 g/Liter Glucose, 200 ml/Liter V-8 Gemüsesaft (hergestellt von Campbell Japan), 3 g/Liter Calciumcarbonat (pH 6,0, eingestellt mit Natronlauge vor dem Sterilisieren).
• 5 Vol.-% der erhaltenen Impfkultur wurden in einem 30 Liter Kolbenfermenter in 18 Liter Fermentationsmedium der nachstehenden Zusammensetzung angeimpft und bei 25ºC unter Belüftung und Rühren (Drehung: 350 r.p.m., Belüftung: 18 Liter/min.) kultiviert.
• Zusammensetzung des Fermentationsmediums: 50 g/Liter lösliche Stärke, 20 g/Liter Trockenhefe, 0,5 g/Liter KH&sub2;PO&sub4;, 0,5 g/Liter MgSO&sub4; 7H&sub2;O, 5 g/Liter Calciumcarbonat (pH 7,0, eingestellt mit Natronlauge vor dem Sterilisieren).
• Das Kultivieren wurde für 80 Stunden fortgesetzt, ohne den pH-Wert zu kontrollieren.
• Die Kultur wurde zur Abtrennung der Mikrobenzellen filtriert. Die Mikrobenzellen wurden mit 30 Liter Aceton versetzt und das Gemisch gerührt, um UCN-1028A zu extrahieren. Nachdem 90 ml deionisiertes Wasser zu dem Acetonextrakt gegeben worden waren, wurde die Lösung durch eine Säule geführt, die mit 2 Liter eines nicht-ionischen porösen Harzes (HP-20; hergestellt durch Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) gefüllt war, um das UCN-1028A darauf zu absorbieren. Dann wurden Verunreinigungen mit 50%iger methanolischer Lösung eluiert, gefolgt von von Eluierung des UCN-1028A mit Methanol. Nachdem das Eluat konzentriert worden war, wurde der pH-Wert auf 1,7 eingestellt und die Extraktion mit Ethylacetat fortgeführt. Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und das Konzentrat auf 1 Liter Silikagel (Wako Gel C-200; Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) gegeben und mit 1,5 Liter Chloroform : Methanol (99 : 1 v/v) entwickelt, wobei Fraktionen erhalten wurden, die UCN-1028A enthielten. Die Fraktionen wurden konzentriert und das Konzentrat durch eine Säule geführt, die mit 300 ml eines nicht-ionischen porösen Harzes (HP-20-SS; hergestellt von Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.), gefüllt war. Nach dem Waschen der Säule mit 50%iger methanolischer Lösung, wurde das Konzentrat eluiert mit 70 % Methanol, 90 % Methanol und 100 % Methanol (jeweils 1 Liter), wobei Fraktionen erhalten wurden, die UCN-1028A enthielten. Das die Verbindung enthaltende Eluat wurde konzentriert und das Konzentrat einer Sephadex LH20- Säulenchromatographie unterworfen, gefolgt von Eluieren mit Methanol. Die Fraktionen, die den Wirkstoff enthielten, wurden konzentriert. Man erhielt UCN-1028A (8,2 mg).
• Während der Kultivierungs- und Reinigungsstufen, wurde UCN-1028A durch seine hemmende Wirkung auf Proteinkinase C und als rötlich oranger Fleck von UCN-1028A durch die Dünnschichtchromatographie nachgewiesen.
Beispiel 2
• Das in Beispiel 1 beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch wurde das Silikagelchromatogramm mit 1,5 Liter Chloroform : Methanol (99 : 1 v/v) und anschließend mit 1,5 Liter Chloroform zu Methanol (97 : 3 v/v) entwickelt, und als Ergebnis, wurden 647 mg UCN-1028C erhalten.
• Die vorliegende Erfindung betrifft auch pharmazeutische Präparate, die eine Anti-Tumorwirkung aufweisen und UCN-1029A und/oder UCN-1028C in einem Gemisch mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel enthalten.
• Ebenso eingeschlossen sind der Mikroorganismusstamm Cladosporium cladosporioides KAC-2215 (FERM BP-1285) in im wesentlichen biologisch reiner Form, UCN-1028A und UCN-1028C produzierende Mutanten und Transformanten davon, ihre Verwendung und die Herstellung von UCN-1028A und UCN-1028C.

Claims (6)

1. Verbindung der Formel:

in der R

oder

wiedergibt.

2. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach Anspruch 1, umfassend die Anzucht eines zur Gattung Cladosporium gehörigen Mikroorganismus, befähigt ist die Verbindung(en) im Anzuchtmedium zu erzeugen, Akkumulierenlassen der Verbindung(en) im Anzuchtmedium und anschließend Gewinnung der Verbindung(en) aus dem Anzuchtmedium.

3. Verfahren nach Anspruch 2, wobei der Mikroorganismus zur Art Cladosporium cladosporioides gehört.

4. Verfahren nach Anspruch 2, wobei der Mikroorganismus Cladosporium cladosporioides KAC-2215 (FERN-BP-1285) ist.

5. Arzneimittel, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 im Gemisch mit einem pharmazeutisch verträglichen Trägern- oder Verdünnungsmittel.

6. Mikroorganismus vom Stamm Cladosporium cladosporioides KAC-2215 (FERM BP-1285), und UCN-1028A und UCN-1028C erzeugende Mutanten und Transformanten davon, in im wesentlich biologisch reiner Form.