DE3226398C2

DE3226398C2 - Liquid chromatograph

Info

Publication number: DE3226398C2
Application number: DE19823226398
Authority: DE
Inventors: Helmut Dipl.-Phys. 8039 Puchheim Apfel
Original assignee: Abc-Analytische Biochemie 8039 Puchheim De GmbH; Abc Analytische Biochemie 8039 Puchheim GmbH
Current assignee: Abc-Biotechnologie/bioverfahrenstechnik 8217 GmbH
Priority date: 1982-07-15
Filing date: 1982-07-15
Publication date: 1985-06-05
Also published as: DE3226398A1

Abstract

Durch die Erfindung wird ein Flüssigkeitschromatograph beschrieben, der es erlaubt, die einzelnen Fraktionen einer Probe mit gleichförmiger Geschwindigkeit unabhängig von Druckverhältnissen in der Trennsäule an einem Detektor zur meßtechnischen Erfassung vorbeizuführen. Hierzu wird auf der Detektorseite (Niederdruckseite) der Trennsäule ein Dosierelement angeordnet, das das aus der Trennsäule kommende Eluat dosiert austreten läßt. Nur dann ist es möglich, das Eluat mit gleichförmiger Geschwindigkeit am Detektor vorbeizuführen, so daß exakte Meßergebnisse erhalten werden.The invention describes a liquid chromatograph which allows the individual fractions of a sample to be fed past a detector for metrological detection at a uniform speed, regardless of the pressure conditions in the separation column. For this purpose, a metering element is arranged on the detector side (low pressure side) of the separation column, which allows the eluate coming from the separation column to emerge in a metered manner. Only then is it possible to feed the eluate past the detector at a uniform speed so that exact measurement results are obtained.

Description

Die Erfindung betrifft einen Flüssigkeitschromatographen nach dem Oberbegriff des Anspruches 1.The invention relates to a liquid chromatograph according to the preamble of claim 1.

Flüssigkeitschromatographen dieser Art sind bekannt (DE-OS 26 49 596) und werden dazu verwendet, die einzelnen Fraktionen einer Probe voneinander zu trennen und ineßtechnisch zu erfassen. Hierzu wird eine in Lösung befindliche Probe auf eine Trennsäule aufgebracht, in der sich ein Material befindet, das die einzelnen Fraktionen der gelösten Probe mehr oder weniger stark zurückhält wenn durch die Trennsäule ein Lösungsmittel (Eluent) gepumpt wird. Als Folge davon durchwandern die einzelnen Fraktionen der Probe die Säule mit verschiedenen Geschwindigkeiten vom Säulenanfang auf der Hochdruckseite aus. Die Komponenten der Probe treten daher am Säulenende auf der Niederdruckseite getrennt in einzelnen Fraktionen aus. Sie werden dort durch einen Detektor geleitet und meßtechnisch erfaßt Das resultierende Meßsignal wird in bekannter Weise registriert z. B. mit einem Kompensationsschreiber. Die aufgezeichneten Diagramme geben im allgemeinen in Abszissenrichtung die Durchlaufzeit (durch die Küvette des Detektors) und in Grdinatenrichtung die Konzentration der Fraktionen an. Das Integral (Peakfläche gegen Basislinie) ist ein Maß für die Substanzmenge, die Relation der Peakflächen gegeneinander ergibt die gewünschte Information über die mengenmäßige Zusammensetzung der Einzelkomponenten in der Probe.Liquid chromatographs of this type are known (DE-OS 26 49 596) and are used to measure the individual To separate fractions of a sample from one another and to record them in measuring technology. To do this, one is in solution The sample is placed on a separation column in which there is a material that separates the individual fractions the dissolved sample retains more or less strongly when a solvent passes through the separation column (Eluent) is pumped. Wander through as a result the individual fractions of the sample up the column at different speeds from the beginning of the column the high pressure side. The components of the sample therefore occur at the end of the column on the low pressure side separately in individual fractions. There they are passed through a detector and recorded by measurement The resulting measurement signal is registered in a known manner, for. B. with a compensation recorder. the The recorded diagrams generally show the flow time (through the cuvette of the detector) and the concentration of the fractions. The integral (peak area versus Baseline) is a measure of the amount of substance, the relation of the peak areas to each other gives the desired one Information about the quantitative composition of the individual components in the sample.

Um miteinander vergleichbare Integrale der einzelnen Fraktionsanteile zu erhalten und damit eine exakte Auswertung möglich zu machen, ist es entscheidend, daß die Einzelfraktionen durch den Detektor mit gleichförmiger Geschwindigkeit transportiert werden, da sonst die Peakbasen entweder zu schmal oder zu breit und damit die Peakflächen verfälscht werden. Aus diesem Grunde weisen die bekannten Flüssigkeitschromatographen eine den Durchfluß durch die Trennsäule beeinflussende Regelvorrichtung auf, die bei den bekannten Flüssigkeitschromatographen eine Hochdruckdosierpumpe ist die auf der Hochdruckseite der Trennsäule angeordnet ist und den Eluenten gleichmäßig durch die Trennsäule drückt. Nachteilig dabei ist, daß selbst dann, wenn mit einer Hochdruckdosierpumpe von der Hochdruckseite her der Eluent gleichmäßig durch die Säule gedrückt wird, ein mit gleichförmiger Geschwindigkeit erfolgender Austritt des Eluates nicht garantiert werden kann. Dies liegt darin begründet, daß der strömungsmechanische Widerstand in der Trennsäule während der Analyse sich in Abhängigkeit verschiedener Betriebsparameter, wie z. B. Säulentemperatur, pH-Wert, Ionenstärke und Viskosität des Eluenten stark ändert. Auch wird bei manchen Trennvorgängen die sogenannte Gradientenmethode angewendet bei der verschiedene Versuchsparameter, wie der pH-Wert, die Konzentration des Eluenten, seine chemische Zusammensetzung, die Säulentemperatur während der Trennung bewußt geändert werden, um bessere Trennergebnisse zu erzielen. Auch in diesen Fällen kann eine Hochdruckdosierpumpe vor der Säule nicht für einen gleichmäßigen Austritt des Eluates zur Niederdruckseite hin sorgen.In order to obtain integrals of the individual fractions that can be compared with one another and thus an exact one To make evaluation possible, it is crucial that the individual fractions through the detector with uniform Speed, otherwise the peak bases are either too narrow or too wide and thus the peak areas are falsified. For this reason, the known liquid chromatographs a control device influencing the flow through the separation column, which is used in the known Liquid chromatographs are a high pressure dosing pump on the high pressure side of the separation column is arranged and pushes the eluent evenly through the separation column. The disadvantage here is that even when the eluent flows evenly through the high pressure side with a high pressure metering pump Column is pressed, an exit of the eluate taking place at a constant speed is not guaranteed can be. This is due to the fact that the fluid mechanical resistance in the separation column during the analysis depends on various operating parameters, such as B. Column temperature, pH value, Ionic strength and viscosity of the eluent changes significantly. In some separation processes, the so-called gradient method used in the various test parameters, such as the pH value, the Concentration of the eluent, its chemical composition, the column temperature during the separation be changed consciously in order to achieve better separation results. A high-pressure metering pump can also be used in these cases in front of the column not for a uniform discharge of the eluate to the low-pressure side care for.

Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, einen Flüssigkeitschromatographen zu schaffen, bei dem die Einzelfraktionen unabhängig von den Druckveränderungen in der Trennsäule mit gleichförmiger Geschwindigkeit durch den Detektor transportiert werden können.The invention is therefore based on the object to provide a liquid chromatograph in which the individual fractions regardless of the pressure changes in the separation column at a uniform rate can be transported through the detector.

Diese Aufgabe wird durch die Merkmale des Anspruchs 1 gelöst. Die Erfindung geht dabei von dem Gedanken aus, daß es mit einer auf der Detektorseite angeordneten Regelvorrichtung möglich ist, unabhängig von den Druckverhältnissen in der Säule während des Trennungsvorganges am Auslaß der Trennsäule ein konstantes Volumen pro Zeiteinheit zu entnehmen, so daß dannThis object is achieved by the features of claim 1. The invention is based on the idea from that it is possible with a control device arranged on the detector side, regardless of the pressure conditions in the column during the separation process at the outlet of the separation column a constant Volume per unit of time to be taken, so that then

auch die einzelnen Fraktionen mit einem konstanten Volumen pro Zeiteinheit, d. h. mit gleichförmiger Geschwindigkeit, den Detektor passieren. Nur dadurch sind exakte Meßergebnisse möglich.also the individual fractions with a constant volume per unit of time, d. H. at a constant speed, pass the detector. This is the only way to achieve exact measurement results.

Vorteilhafte Weiterbildungen der Erfindung ergeben sich aus den Unteransprüchen. Durch d\$ Merkmale des Anspruchs 2 ergibt sich die einfache Möglichkeit, das Strömungskanalvolumen während des Trennvorganges zeitlinear zu vergrößern. Wenn diese Volumenvergrößerung mit konstanter Geschwindigkeit vorgenommen wird, ist garantiert, daß pro Zeiteinheit jeweils gleiche Volumenmengen des Eluates der Trennsäule entnommen werden, wodurch die im Eluat enthaltenen Fraktionen mit gleichförmiger Geschwindigkeit den Detektor passieren. Der Detektor kann dabei vorteilhaft zwischen dem Ausla-3 der Trennsäule und dem Er.tnahmesystem in den Strömungskanal einbezogen werden.Advantageous further developments of the invention emerge from the subclaims. By d \ $ features of claim 2 results in the easy way, the flow channel volume during the separation process time-linear zoom. If this increase in volume is carried out at a constant speed, it is guaranteed that the same volume of eluate is removed from the separation column per unit of time, so that the fractions contained in the eluate pass the detector at a uniform speed. The detector can advantageously be included in the flow channel between the outlet 3 of the separation column and the collection system.

Die Merkmale der Ansprüche 3 bis 5 erlauben eine einfache Realisierung der Volumenregelung. Die Ausgestaltung nach Anspruch 6 stellt sicher, daß der Druck im Strömungskanal nicht über einen Druckwert ansteigt, der die Gefahr der Beschädigung des Detektors mit sich bringen würde. Ein typischer Druckbereich liegt zwischen 0,1 bis 2 bar über Luftdruck, da durch solche Drücke auf der Niederdruckseite eine Beschädigung des Detektors nicht zu befürchten ist. Verwirklichen läßt sich die Druckregelung vorteilhaft durch einen im Strömungskanal der Regeleinrichtung angeordneten Druckmesser, der den Ist-Wert des Druckes erfaßt und an ein Druckregelelement angeschlossen ist. Das Druckregelelement ist in Serie zur Trennsäule angeordnet und beispielsweise als Hochdrucknadelventil verwirklicht, das seinen strömungsmechanischen Widerstand so nachregelt, daß auf der Niederdruckseite im Strömungskanal der gewünschte niedere Druck gleichmäßig aufrechterhalten bleibt.The features of claims 3 to 5 allow a simple implementation of the volume control. The design according to claim 6 ensures that the pressure in the flow channel does not rise above a pressure value, which would bring with it the risk of damaging the detector. A typical pressure range is between 0.1 to 2 bar above air pressure, since such pressures on the low-pressure side damage the Detector is not to be feared. The pressure control can advantageously be implemented by means of one in the flow channel the control device arranged pressure meter, which detects the actual value of the pressure and a Pressure control element is connected. The pressure control element is arranged in series with the separation column and, for example realized as a high pressure needle valve that readjusts its fluid mechanical resistance so that that the desired low pressure is evenly maintained on the low-pressure side in the flow channel remain.

Die Ausgestaltung nach Anspruch 7 schließlich ermöglicht es auf einfache Weise, auch auf der Hochdruckseite für konstante Druckverhältnisse zu sorgen, wobei ein aufwendiges Pumpensystem überflüssig wird und zudem auch ein Vermischen oder Lösen des zur Druckerzeugung verwendeten Mediums mit dem Eluat vermieden wird.The embodiment according to claim 7 finally makes it possible in a simple manner, also on the high pressure side to ensure constant pressure conditions, whereby a complex pump system is superfluous and also mixing or dissolving of the medium used to generate pressure with the eluate is avoided.

In der Zeichnung ist die Erfindung anhand eines Ausführungsbeispiels gezeigt und im folgenden beschrieben. Es zeigtIn the drawing, the invention is based on an exemplary embodiment shown and described below. It shows

F i g. 1 eine Prinzipskizze eines Flüssigkeitschromatographen nach Anspruch 1,F i g. 1 a schematic diagram of a liquid chromatograph according to claim 1,

Fig.2a bis 2c den zeitlichen Ablauf eines mit dem Flüssigkeitschromatographen durchgeführten Trennvorgangs zu drei verschiedenen Zeitpunkten undFig.2a to 2c the timing of a with the Liquid chromatograph carried out the separation process at three different times and

Fig. 3 ein Meßdiagrarflm des in den Fig.2a bis 2c beschriebenen Meßvorgaⁿges.Fig. 3 is a Meßdiagrarflm of Meßvorga described in 2a to 2c ⁿ tot.

Ein Ausführungsbeispii?! des beanspruchten Flüssigkeitschromatographen ist in F i g. 1 dargestellt und im ganzen mit 1 bezeichnet· Kernstück des Flüssigkeitschromatographen ist eine Trennsäule 2, in der die einzelnen Fraktionen einer P^obe 11 voneinander getrennt werden. Auf der Hochdrückseite 3 der Trennsäule 2 befindet sich ein Hochdruckbehälter 4. in dessen Innenraum 8 ein elastischer Innenbeutel 5 angeordnet ist, in den ein Lösungsmittel 9 eingebracht ist. Der Innenraum 8 des Hochdruckbehälters 4 kann mit einem aus einer vorzugsweise mit Heliumgas gefüllten Gasflasche über das Druckminderventil 7 gesteuerten Hochdruck beaufschlagt werden, so daß der Innenbeutel 5 den Eluenten 9 unter Druck der Trennsäule 2 zuführt. In der Leitung zwischen dem Hochdruckbehälter 4 und der Trennsäule 2 ist ein Druckregelelement 10 angeordnet, das den tatsächlichen Druck des in die Trennsäule 2 eingeleiteten Eluenten regeltAn execution example ?! of the claimed liquid chromatograph is in Fig. 1 and designated as a whole with 1. The core of the liquid chromatograph is a separation column 2 in which the individual Fractions of a p ^ obe 11 are separated from one another. On the upward pressure side 3 of the separation column 2 there is a high-pressure container 4. in the interior 8 of which an elastic inner bag 5 is arranged, in which a solvent 9 is introduced. The interior 8 of the high-pressure container 4 can with one of a preferably with helium gas filled gas bottle is acted upon by the pressure reducing valve 7 controlled high pressure so that the inner bag 5 supplies the eluents 9 to the separation column 2 under pressure. On the line between the high-pressure container 4 and the separation column 2, a pressure control element 10 is arranged, which the actual Regulates the pressure of the eluent introduced into the separation column 2

Auf des Niederdruckseite der Trennsäule 2, d. h. also anschließend an den Auslaß 12, ist eine Regelvorrichtung angeschlossen, die es ermöglicht, das aus der Trennsäule kommende Eluat, bestehend aus den einzelnen Fraktionen der Probe 11 und dem Lösungsmittel, geregelt in gleichbleibenden Mengen austreten zu lassen. Hierzu weist die Regelvorrichtung eine Entnahmeeinrichtung 13 mit einem Auslaßkanal 17 auf, der unmittelbar an den Auslaß 12 der Trennsäule 2 angeschlossen ist In den Auslaßkanal 17 ist ein Detektor 14 mit einbezogen, den das aus dem Auslaß 12 austretende Eluat mit gleichförmiger Geschwindigkeit passiert Im Detektor 14 werden die einzelnen Fraktionen meßtechnisch erfaßt und entsprechende Meßsignale erzeugt, die dann mit einem Registriergerät 15 aufgezeichnet und/oder gespeichert werden.On the low pressure side of the separation column 2, d. H. so then to the outlet 12, a control device is connected, which makes it possible from the Eluate coming from the separation column, consisting of the individual fractions of sample 11 and the solvent, to let out regulated in constant quantities. For this purpose, the control device has a removal device 13 with an outlet channel 17 which is connected directly to the outlet 12 of the separation column 2 A detector 14 is included in the outlet channel 17, with which the eluate emerging from the outlet 12 is included uniform speed happened In the detector 14, the individual fractions are recorded by measuring technology and generates corresponding measurement signals, which are then recorded with a recording device 15 and / or get saved.

Um eine gleichförmige Durchtrittsgeschwindigkeit des Eluats durch den Detektor 14 zu ermöglichen, ist der Auslaßkanal 17 durch einen zylindrischen Strömungskanal 19 abgeschlossen, dessen Volumen vergrößerbar ist, in dem ein Kolben 18 während des Trennvorgangs mit Hilfe eines stufenlos regelbaren Schrittmotorantriebes 20 in F i g. 1 nach unten bewegt wird. Geschieht diese Bewegung des Kolbens 18 mit einer konstanten Geschwindigkeit, so vergrößert sich auch das Volumen des Strömungskanals 19 und damit das Gesamtvolumen des Auslaßkanales 17 pro Zeiteinheit um denselben Volumenanteil. Eine der Volumenvergrößerung entsprechende Menge des Eluats kann dadurch aus dem Auslaß 12 der Trennsäule 2 austreten und den Detektor passieren. Diese Austrittsmenge ist allein von der Volumenvergrößerung des Regelelementes 16, welches den Kolben 18 und das Volumen des Strömungskanal 19 umfaßt, bestimmt. Der Druck und daher auch Druckschwankungen innerhalb der Säule haben auf den Anteil der pro Zeiteinheit aus dem Auslaß 12 austretenden Menge keinen Einfluß und können somit auch nicht zu verfälschten Meßergebnissen führen, da die getrennten Fraktionen dann zwangsläufig mit konstanter Geschwindigkeit unter konstantem Druck und völlig pulsfrei den Detektor 14 passieren.In order to enable the eluate to pass through the detector 14 at a uniform rate, the Outlet channel 17 closed by a cylindrical flow channel 19, the volume of which can be increased, in which a piston 18 during the separation process with the help of an infinitely variable stepper motor drive 20 in FIG. 1 is moved down. If this movement of the piston 18 occurs at a constant speed, this also increases the volume of the flow channel 19 and thus the total volume of the Outlet channel 17 per unit of time by the same volume fraction. One corresponding to the volume increase As a result, the amount of eluate can exit the outlet 12 of the separation column 2 and pass the detector. This discharge amount is solely due to the increase in volume of the control element 16, which the piston 18 and the volume of the flow channel 19 is determined. The pressure and therefore pressure fluctuations within the column have none in the proportion of the amount emerging from outlet 12 per unit of time Influence and can therefore not lead to falsified measurement results, since the separate fractions then inevitably at constant speed under constant pressure and completely pulse-free the detector 14 happen.

Um zu verhindern, daß sich auf der Niederdruckseite im Auslaßkanal 17 ein zu hoher Druck aufbaut, der den Detektor 14 zerstören könnte, kontrolliert ein Druckmesser 21 permanent einen im Auslaßkanal 17 geregelten vorwählbaren Soll-Wert Wird dieser Soll-Wert überschritten, so drosselt automatisch das auf der Hochdruckseite angeordnete, als ansteuerbares Hochdrucknadelventil ausgebildete Druckregelelement 10 den Durchfluß. Wird der Soll-Wert unterschritten, so öffnet das Nadelventil den Strömungsweg. Das Regelverfahren ist also so gewählt, daß dann, wenn sich der strömungsmechanische Widerstand Rs der Trennsäule 2 ändert, durch Änderung der Einstellung des Doickregelelements 10 dessen strömungsmechanischer Widerstand R, gegenläufig beeinflußt wird. Es gill dann:In order to prevent too high a pressure from building up on the low-pressure side in the outlet channel 17, which could destroy the detector 14, a pressure gauge 21 permanently controls a preselectable setpoint value regulated in the outlet channel 17.If this setpoint value is exceeded, it automatically throttles Pressure regulating element 10 arranged on the high pressure side and designed as a controllable high pressure needle valve controls the flow. If the target value is not reached, the needle valve opens the flow path. The control method is chosen so that when the fluid mechanical resistance Rs of the separation column 2 changes, changing the setting of the Doick control element 10 has an opposing effect on the fluid mechanical resistance R 1. Then it gill:

Rt + /?v = konst. Der konstante Gesamtströmungswiderstand verursacht bei konstantem Arbeitsdruck, der an der Gasflasche 6 eingestellt wird, einen konstanten Fluß durch die Säule. Rt + /? V = const. The constant total flow resistance causes a constant flow through the column at a constant working pressure, which is set at the gas bottle 6.

In Fig. 2 ist zur Verdeutlichung ein Trennvorgang, wie er mit einem Flüssigkeitschromatographen nach Anspruch 1 durchgeführt werden kann, zu verschiedenen Zeitpunkten mit einem erhaltenen Meßdiagramm prinzipiell dargestellt. Durch den Trennvorgang werdenIn Fig. 2 is a separation process, as it is done with a liquid chromatograph for clarification Claim 1 can be carried out at different times with a measurement diagram obtained shown in principle. Be through the separation process

in bekannter Weise innerhalb der Trennsäule 2 die einzelnen Fraktionen einer Probe voneinander räumlich getrennt. In der F i g. 2 sind die einzelnen, unterschiedlichen Fraktionen der Probe mit 22 bis 25 bezeichnet und befinden sich zu einem Zeitpunkt ίο in verschiedenen Schichten übereinander in der Trennsäule 2. Solange der Kolben 18 die in Fig.2a dargestellte Positon innehat, wird der Auslaß 12 der Trennsäule 2 »zugehalten«, so daß kein Eluat aus der Trennsäule 2 austreten und den Detektor 14 passieren kann. Wird nun der Kolben 18 mit einer konstanten Geschwindigkeit Vkonn. (in den F i g, 2a bis 2c nach unten) bewegt, entsteht eine VoIu-S menvergrößerung des Auslaßkanals 17, so daß nun entsprechend dieser Volumensvergrößerung die einzelnen Fraktionen in der Reihenfolge 25, 24, 23, 22 am Detektor 14 vorbeigeführt und meßtechnisch erfaßt werden. Zum in Fig.2b dargestellten Zeitpunkt fi passiert die erste Funktion, die mit 25 bezeichnet ist, den Detektor 14, so daß ein Meßsignal erhalten wird, das sich am Registriergerät durch den entstandenen Peak (vgl. F i g. 3) festhalten läßt. Auf diese Weise werden nacheinander die einzelnen Fraktionen jeweils mit konstanter Geschwindigkeit, da die Bewegung des Kolbens 18 mit konstanter Geschwindigkeit durchgeführt wird, am Detektor entlang geführt, wobei jedesmal dann, wenn eine Fraktion den Detektor passiert, ein weiterer Peak entsteht, der je nach Konzentration der Fraktion unterschiedlich hoch wird. Am Ende des Trennvorgangs zum Zeitpunkt f2 haben alle Fraktionen den Detektor 14 mit konstanter Geschwindigkeit passiert, so daß die Aus-Wertung des in F i g. 3 gezeigten Meßdiagramms fehlerfrei möglich ist Hierzu werden die Integrale der einzelnen Peaks bestimmt, die ein Maß für die Substanzmenge sind.In a known manner, the individual fractions of a sample are spatially separated from one another within the separation column 2. In FIG. 2, the individual, different fractions of the sample are designated by 22 to 25 and are located at a point in time ίο in different layers one above the other in the separation column 2. As long as the piston 18 is in the position shown in FIG "Closed" so that no eluate can escape from the separation column 2 and pass the detector 14. If the piston 18 is now at a constant speed Vkonn. (Moved downwards in FIGS. 2a to 2c), a volume enlargement of the outlet channel 17 results, so that the individual fractions in the order 25, 24, 23, 22 are now passed by the detector 14 in accordance with this volume increase and are recorded by measurement will. At the point in time fi shown in FIG. 2b, the first function, which is designated 25, passes the detector 14, so that a measurement signal is obtained which can be recorded on the recording device by the resulting peak (cf. FIG. 3). In this way, the individual fractions are guided along the detector one after the other at a constant speed, since the movement of the piston 18 is carried out at a constant speed, with each time a fraction passes the detector a further peak arises which depends on the concentration the parliamentary group is different. At the end of the separation process at time f2, all fractions have passed the detector 14 at constant speed, so that the evaluation of the in FIG. 3 is possible without errors. For this purpose, the integrals of the individual peaks are determined, which are a measure of the amount of substance.

Die Relation der Peakflächen gegeneinander ergibt dann die gewünschte Information über die mengenmäßige Zusammensetzung der Einzelkomponente in der Probe, die dann nicht durch unterschiedliche Passiergeschwindigkeiten im Detektor verfälscht sind.The relation of the peak areas to each other then gives the desired information about the quantity Composition of the individual components in the sample, which is then not due to different passage speeds are falsified in the detector.

In der Praxis wird als Regelelement 16 bevorzugt eine Glaskolbenpumpe verwendet, die das dann zugeführte Eluat stetig nach außen fördert, so daß eine kontinuierliche Arbeitsweise möglich istIn practice, a glass piston pump is preferably used as the control element 16, which is then supplied Eluate constantly conveys to the outside, so that continuous operation is possible

Hierzu 2 Blatt ZeichnungenFor this purpose 2 sheets of drawings

6565

Claims

Patent claims:

1. Liquid chromatograph with a separating column that can be loaded with a sample, into which a A solvent for separating the individual fractions of the sample is introduced under high pressure is arranged with one at an outlet channel of the separation column on the low pressure side Detector for the measurement of the individual fractions of the eluate (sample and solvent), with a registration device for registering the measurement signals received at the detector and with one of the Control device influencing the flow of the eluate, characterized in that; the control device with one connected to the outlet channel (17) and assigned to the detector (14) Removal device (13) is provided, which ensures a constant discharge volume per unit of time

2. Liquid chromatograph according to claim 1, characterized in that the removal device (13) consists of a closed flow channel (19) with a movable wall which a controlled increase in the volume of the flow channel enables

3. Liquid chromatograph according to claim 1 and 2, characterized in that the movable wall is a piston (18) which is acted upon by a counterforce to the pressure in the separation column (2) and axially in a cylindrical flow channel (19) adjoining the outlet channel (17) is arranged displaceably and that the piston is moved axially at a certain speed (Vkamt) during the separation process in the sense of increasing the volume of the flow channel (19).

4. Liquid chromatograph according to claims 1 to 3, characterized in that the flask (18) is part of a glass piston pump.

5. Liquid chromatograph according to claim 4, characterized in that the displacement movement of the piston (18) takes place via an infinitely variable stepper motor drive (20).

6. Liquid chromatograph according to one of the preceding claims, characterized in that that in the outlet channel (17) between the separation column (2) and the removal device (13) a pressure gauge (21) is arranged, which detects the actual value of the pressure and is connected to a pressure control element (10), that in front of the separation column (2) on the high pressure side or behind the separation column on the low pressure side is arranged.

7. Liquid chromatograph according to claim 1, characterized in that the control device a closed high-pressure vessel (4) for generating the high pressure is assigned, in which a with the inner bag (5) filled with the eluent (9) is inserted, the inner bag (5) generated with a in the container (4) High pressure is applied.

6060