DE3118148A1

DE3118148A1 - Antiallergisches praeparat und verfahren zu seiner herstellung

Info

Publication number: DE3118148A1
Application number: DE19813118148
Authority: DE
Inventors: Makoto Shizuoka Enomoto; Fusae Nagasaki Iida; Hideyo Nagasaki Itakura; Yosuke Tokyo Kawasaki; Yasushi Higashikurume Tokyo Maeda; Yoshio Ueno; Hiroko Saitama Yoshizawa
Original assignee: Kyokuto Fatty-Acid Corp
Current assignee: Kyokuto Fatty-Acid Corp
Priority date: 1980-05-12
Filing date: 1981-05-07
Publication date: 1982-03-11
Also published as: FR2481927A1; GB2077101B; GB2077101A

Description

" Antiallergisches Präparat und Verfahren zu seiner
Herstellung II Beanspruchte Prioritäten: 12. Mai 1980, Japan, Nr. 55-61755 und 19. März 1981, Japan, Nr. 56-38790 Die Erfindung betrifft ein antiallergisches Präparat, das als Hauptwirkstoff einen Streptokokkenstamm aus der Familie der Lactobacteriaceaen enthält, sowie Verfahren zu seiner Herstellung.
Viele Medizinarten werden entweder aus Mikroorganismen oder Teilen von Mikroorganismen hergestellt. Arzneipräparate, die von Mikroorganismen stammen, werden vielfach verwendet, wie Präparate zur Kontrolle der intestinalen Funktionen, die aus Streptokokkenstämmen, insbesondere aus aktiven Enterokokken, hergestellt worden sind, sowie polyvalente Antigenpräparate, die aus verschiedenen pathogenen Mikroben oder Mikroben des Respirationstraktes hergestellt worden sind.
Der Hauptwirkstoff dieser Mikroorganismen ist eine Proteinart, die Menschen und Tieren fremd ist. Außer Urokinase leiten sich alle pharmakologischen Enzyme von Substanzen oder Körpern ab, die es beim Menschen nicht gibt; außerdem sind diese Enzyme in bezug auf den Menschen heterogen.
Wird eine gewisse, dem Körper fremde Proteinart einem Säugetier verabreicht, so bildet es automatisch Antikörper. Die Neigung zur Bildung von Antikörpern ist besonders ausgeprägt, wenn diese Proteine in den Muskel injiziert werden, obwohl sich dann das Problem stellt, daß der für Allergie verantwortliche Antikörper IgE auch produziert wird. Werden Allergene in einem lebenden Körper gebildet, so kann die Folge ein schwerer anaphylaktischer Schock sein, der durch die immunologische Antwort auf die toxische Wirkung der in den Körper eingeführten Antigene verursacht wird.
Die pathologischen Symptome, die aus den verschiedenen immunologischen Reaktionen entstehen, die durch den Eintritt fremder Heteroantigene in den Körper verursacht werden, werden "heteroimmune Krankheit" genannt.
Allergische Erkrankungen sind von P.G.H. Gell, R.R.A. Coombs und P.J. Lachmann in "Clinical Aspects of Immunology", 3. Ausgabe, Blackwell, 1975, in vier Typen, je nach Art der immunoloyischen Reaktion, eingeteilt worden: Typ I: Die auf den Zellen fixierten IgE-Antikörper reagieren mit dem Antigen, verursachen die Freisetzung von Histamin und die Aktivierung einer langsam reagierenden Substanz (SRS-A) und des Eosinophil-chemotaktischen Faktors (ECF-A).
Dies ist der Mechanismus, der für die Asthma-Atopie, Heufieber, Urticaria, atopische Dermatitis, Anaphylaxie und Angioödeme verantwortlich ist.
Typ II: Die IgE- oder IgM-Antikörper reagieren mit dem Antigen auf Zielzellen und aktivieren das Komplement, was zu einer Zellyse führt. Dieser Mechanismus tritt bei gewissen Arten von Arzneimittelreaktionen auf.
Typ III: Die IgG- oder IgH-Antikörper bilden Komplexe mit dem Antigen und den komplementären neutrophilen chemotakischen Faktoren, wodurch lokale Gewebeentzündungen entstehen.
Dieser Mechanismus tritt bei Serumkrankheiten auf.
Typ IV: Sensibilisierte Lymphozyten reagieren mit dem Antigen und verursachen durch die Wirkung der Lymphokinese Entzündungen.
Das Hauptbeispiel dafür ist die allergische Kontaktdermatitis.
Alle diese allergischen Reaktionen werden beim Menschen wie auch in verschiedenen Säugetieren gefunden.
Die Erfinder haben verschiedene Versuche über die Bildung von Antikörpern in Meerschweinchen durchgeführt, denen Fremdprotein verabreicht worden ist. Bei der Verabreichung von Streptokokken aus Kuhmilch an Meerschweinchen, die zu hohe Antikörperwerte hatten, wurde interessanterweise festgestellt, daß die Streptokokken die Überproduktion von IgE hemmen, unabhängig davon, ob der Mikroorganismus lebend oder tot ist.
Anhand dieser Fähigkeit der Streptokokken, die Überproduktion von IgE bei der Einführung von Heteroprotein in vivo zu hemmen, haben die Anmelder die Möglichkeit untersucht, Streptokokken auch als Vorbeugung und Therapie bei verschiedenen-heteroimmunen Krankheiten anzuwenden. Die Hemmwirkung einer allergischen Reaktion wurde mit einer typischen heteroimmunen Krankheit untersucht, für die ein experimentelles System leicht aufgebaut werden kann. Es konnten wertvolle und erfolgversprechende Ergebnisse erhalten werden.
Zu der Familie der Lactobacteriaceaen gehören viele Streptokokken-Arten, wie Streptococcus pyogenes, Streptococcus equismilis, Streptococcus zooepidemicus, Streptococcus equi, Streptococcus dysgalatiae, Streptococcus sanguis, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus anginosus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus acidominimus, Streptococcus salivarius, Streptococcus mitis, Streptococcus bovis, Streptococcus equinus, Streptococcus thermophilus, Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium, Streptococcus avium, Streptococcus uberis, Streptococcus lactis und Streptococcus cremoris.
Unter diesen Stämmen ist Streptococcus lactis ein typischer nichtpathogener Mikroorganismus, der in der Milch der meisten Tiere gefunden und für die Herstellung von Milchprodukten verwendet wird, wie Butter, Käse oder Joghurt.
Streptococcus bovis gehört zu den Lactobacteriaceaen und wird in der Milch der meisten Tiere gefunden.
Streptococcus faecalis stammt aus Pflanzen und wurde zur Herstellung von Arzneipräparaten, die für die Kontrolle der intestinalen Funktionen geeignet sind, verwendet.
Es wurden nun neue Arten von Streptococcus lactis gefunden, die eine wirkungsvolle, allergiehemmende Komponente haben und zur Herstellung von antiallergischen Präparaten verwendet werden können, nämlich Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-042 bzw. BK-045. Beide Stämme wurden im Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Japan, und beider American Type Culture Collection, Maryland, V.St.A., unter folgenden Nummern hinterlegt: Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-042: FERM-P 4590 und ATCC 31861 Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-045: FERM-P 4591 und ATCC 31862.
Die mykologischen Eigenschaften dieser beiden Mikroorganismen sind wie folgt: I) Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-042 a) Morphologische Eigenschaften (1) Form: Ketten von eiförmigen Zellen mit einem Durchmesser von 0,1 bis 1,0ßm (2) Beweglichkeit: nicht beweglich (3) Gram-Färbung: positiv.
b) Fermentationseigenschaften (1) Wachstumsbedingungen: fakultativ anaerob (2) Wachstum bei 450C: nicht feststellbar (3) Verflüssigung von Gelatine: negativ (4) Reduktion von Lackmusmilch: positiv (5) Fermentation von Sacchariden: Mannose + Mannit + Maltose + Salicin + Saccharose # Stärke -Glukose + Inulin -wobei + Fermentation, - keine Fermentation und + nicht feststellbar bedeuten.
c) Physiologische Eigenschaften (1) Oxydase-Test: negativ (2) Katalase-Test: negativ (3) Oxydation-Fermentationstest: Fermentation (4) Wachstum in einer Kulturbrühe, die 6,5 % Natriumchlorid enthält: kein Wachstum feststellbar (5) Wachstum bei pH 9,6: kein Wachstum feststellbar (6) Wirkung von Wärme auf das Wachstum (30-minütiges Erhitzen bei 600C): kein Wachstum feststellbar (7) Milchsäure-Produktion aus Glukose: 96 % (8) optische Drehung der durch den Stamm produzierten Milchsäure: D+ II) Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-45 a) Morphologische Eigenschaften (1) Form: Ketten von eiförmigen Zellen mit einem Durchmesser von 0,6 bis 1,0am (2) Beweglichkeit: nicht beweglich (3) Gram-Färbung: positiv b) Fermentationseigenschaften (1) Wachstumsbedingungen: fakultativ anaerob (2) Wachstum bei 450C: positiv (3) Verflüssigung von Gelatine: negativ (4) Reduktion von Lackmusmilch: positiv (5) Fermentation von Sacchariden: Mannose + Mannit + Maltose + Salicin + Saccharose -Stärke -Glukose + Inulin -wobei + Fermentation, - keine Fermentation und - nicht feststellbar bedeuten.
c) Physiologische Eigenschaften (1) Oxydase-Test: negativ (2) Katalase-Test: negativ (3) Oxydation-Fermentations-Test: Fermentation (4) Wachstum in einer Kulturbrühe, die 6,5% Natriumchlorid enthält: kein Wachstum feststellbar (5) Wachstum bei pH 9,6: kein Wachstum feststellbar (6) Wirkung von Hitze auf das Wachstum (30-minütiges Erhitzen bei 600C): kein Wachstum feststellbar (7) Milchsäure-Produktion aus Glukose: 92 % (8) optische Drehung der durch den Stamm produzierten Milchsäure: d) Hämolyse (1) Pferdeblut-Agar: Reaktion (2) Schafblut-Agar: -Reaktion.
Da festgestellt worden ist, daß auch noch andere Streptokokkenstämme wertvolle Komponenten zur Herstellung von antiallergischen Präparaten haben, wurden folgende Stämme hinterlegt: Streptococcus lactis BK-051 beim Institute For Fermentation of Osaka, Japan,unter der Nr. IFO 12007, Streptococcus bovis BK-052 sowie Streptococcus faecalis BK-026 beim Institute For Fermentation of Osaka, Japan, unter den Nummern IFO 12057 bzw. IFO 12964 und bei der American Type Culture Collection unter den Nummern ATCC 15351 bzw. ATCC 10100.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein antiallergisches Präparat, das als Hauptwirkstoff Streptococcus lactis, Streptococcus bovis oder Streptococcus faecalis aus der Familie der auch in Form von Zellfragmenten, Lactobacteriaceaen,/gegebenenfalls in Kombination mit üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln, enthält.
Im erfindungsgemäßen Präparat können lebende Mikroorganismen aber auch abgetötete Stämme, die durch Hitze oder durch Gefriertrocknen behandelt worden sind, oder Fragmente dieser Stämme als Wirkstoff verwendet werden. Das erfindungsgemäße antiallergische Präparat kann herkömmliche Zusätze oder Stabilisatoren enthalten und als Suspension, Körner, Granulat oder Pulver vorliegen. Auch die Verabreichungsart ist nicht kritisch,-das Präparat kann oral, intraperitoneal oder intravenös verabreicht werden.
Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung des antiallergischen Präparats, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Streptococcus lactis, Streptococcus bovis oder Streptococcus faecalis aus der Familie der Lactobacteriaceaen kultiviert, aus der Kulturbrühe isoliert und zu einem Pulver gefriertrocknet.
Versuchstieren (Meerschweinchen), die wegen einer Überproduktion an Immunoglobulin E (IgE) an allergischen Krankheiten litten, wurde das erfindungsgemäße antiallergische Präparat verabreicht. Die damit erreichte antiallergische Reaktion bestätigt die erfolgreiche Verabreichung dieses Präparats.
Die typischen Vorteile des erfindungsgemäßen antiallergischen Präparats sind folgende: (1) Das erfindungsgemäße antiallergische Präparat ist bei verschiedenen Arten von heterogenen Immunkrankheiten wirkungsvoll, wie allergischem Bronchialasthma, infantilem Asthma, allergischer Rhinitis (Heufieber, Pollinose), atopischer Dermatitis, Ernährungsallergie, Arzneimittelallergie, allergischer Lebertoxikose oder allergischer Gastroenteritis.
(2) Das erfindungsgemäS Präparat besteht im wesentlichen aus dem Mikroorganismus selbst. In den Versuchen konnten weder eine Toxizität noch Nebenwirkungen festgestellt werden, so daß das Präparat als pharmakologisch sehr sicher angesehen werden kann.
(3) Im Gegensatz zu herkömmlichen antiallergischen Präparaten, die aus polyvalenten Antigenen hergestellt werden, besteht das erfindungsgemäße Präparat aus einem einzigen Bacterium.
(4) Die verwendeten Mikroorganismen sind nicht pathogen, so daß sie keine Infektion hervorrufen und die Möglichkeit bieten, lebende Mikroorganismen zu verwenden.
(5) Im Gegensatz zu herkömmlichen mikrobiellen Präparaten, die durch Inokulation oder Injektion verabreicht werden, kann das erfidungsgemäße Präparat oral verabreicht werden, so daG es ¢ cLen Pati'nten die mit del Inokulation vcrbundene Angst und einen psychologischen Widerstand nicht gibt.
(6) Bei der Behandlung von Asthma führt die Verwendung des erfindungsgemäßen Präparats zu einem deutlichen Abfall des IsE-Spiegels, wodurch bestätigt wird, daß das erfindungsgemäße Präparat zufriedenstellend mit herkömmlichen Präparaten und Verfahren verglichen werden kann.
(7) Man kann im erfindungsgemäßen Präparat Extrakte der Mikroorganismen als antiallergischen Wirkstoff verwenden. Die Wirkung tritt schon bei sehr geringer Dosis ein, z.B.
1 mg/kg Körpergewicht/Tag bis zu 50 mg/kg/Tag, wobei das Präparat entweder unter die Haut, intramuskulär oder intravenös injiziert oder oral verabreicht werden kann.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1 Streptococcus lactis BK-042 und BK-045 werden kultiviert und mittels einer Zentrifuge isoliert. Die Mikroorganismen werden eingehend mit destilliertem Wasser gewaschen und in herkömm-1 scher Weise zu einem trockenen Pulver gefriergetrocknet.
Für die Versuche werden 4 Wochen alte weibliche Meerschweinchen mit einem Körpergewicht von 340 bis 460 g eine Woche lang beobachtet, dann werden gesunde Tiere ausgewählt. Während dieser Zeit und während des Versuchs werden die Meerschweinchen in einem kontrollierten Käfig bei einer Temperatur von 22 + 2 C und einer Feuchtigkeit von 50 + 5 % gehalten, wobei sie festes Futter und Wasser ohne Einschränkung erhielten Für die Sensibilisierung der Test-Meerschweinchen wird einem Kaninchen mit einem Körpergewicht von etwa 3 kg eine Suspension im Gewichtsverhältnis von 1:1 von 1 %iger i-Amylaselösung (kristalline s-Amylase aus Heubazillus) und Freund's Komplettadjuvans in einer Dosis von 1 ml/Tier zweimal wöchentlich während 4 Wochen injiziert. Für die passive Sensibilisierung wird das aus dem Kaninchen erhaltene Anti- s-amylase-Kaninchenserum (Antikörperwert: 32-fach) in einer Dosis von 2 ml/Tier 21 Meeschweinchen intraperitoneal injiziert.
Je einer Gruppe von drei Meerschweinchen wird eine, zwei bzw. drei Wochen vor der passiven Sensibilisierung mit dem Anti-£ -amylase-Kaninchenserum jeden Tag mittels einer Metallsonde Streptococcus lactis BK-042 bzw. BK-045 verabreicht und zwar in einer Dosis von 100 mg/Tier als Suspension in physiologischer Natriumchloridlösung.
Die Bildung von Antikörpern wird anhand der IgE-Werte unter Verwendung eines Rhadebas-IgE-Testpräparats bestimmt. Die Ergebnisse werden in Tabelle I mit der Kontrollgruppe verglichen, wobei alle Werte das Mittel von drei Tieren jeder Gruppe sind.
Tabelle 1 IgE - Werte in ßMol/ml

Dauer

Stamm nicht

verabreicht 1 Woche 2 Wochen Wochen

S. lactis 31,7 17,3 17,0

BK-042 68 7

S. lactis 33,0 16,3 l9,3

BK-045

Wie aus der Tabelle I ersichtlich, ist die Fähigkeit zur Antikörperbildung bei mit dem Mikroorganismus behandelten Gruppen deutlich gehemmt im Vergleich zu Kontrollgruppen. Der etwas niedrigere Wert nach zwei Wochen wird der Tatsache zugeschrieben, daß die untersuchten Meerschweinchen bei der Zwangsverabreichung des Mikroorganismus mit der Magensonde zum Erbrechen neigten und folglich an Bronchitis litten.
Die Hemmung der allergischen Reaktion durch die in Tabelle I angegebenen Mikroorganismen wird wie folgt untersucht: Sieben Meerschweinchen (Körpergewicht 340 bis 460 g) in einer Gruppe werden 48 Stunden nach Beendigung der passiven Sensibilisierung mit dem oben beschriebenen Anti-oC -amylase-Kaninchenserum in einer Kammer mit einer 1 %igen oc-Amylaselösung während 30 Minuten mit einer Geschwindigkeit von 1,46 ml/Minute mittels eines Ultraschall-Zerstäubers besprüht. Der dabei bei den Tieren auftretende allergische Schock wird beobachtet.
Die Tiere erhalten zwangsweise täglich Streptococcus lactis in einer Dosis von 400 mg/kg. Die Hemmung des allergischen Schocks wird durch Vergleich der mit dem Mikroorganismus behandelten Tiere mit Kontrolltieren bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II angegeben, der Schweregrad des Anfalls wird nach folgenden Stufen bestimmt: Grad 0: keine Anzeichen Grad 1: Zittern, Niesen Grad 2: Atemnot, Ataxie, Harn- und Stuhlentleerung Grad 3: Atemnot, Ataxie, Harn- und Stuhlentleerung, Krämpfe, Lähmung, Zyanose Grad 4: Tod.

T a b e l l e II

Stamm S. lactis BK-045 S. lactis BK-042

Kontrolle Kontrolle

Dosis (mg/kg/Tag) - 400 400 400 - 400 400 400

Dauer (Tage) - 1 2 3 - 1 2 3

Schwere Grad 4 2

und Grad 3 4 1 2 3 2 1

Häufigkeit Grad 2 3 6 6 2 2 5 4 3

der Grad 1 1 2 1 3

Anfälle Grad 0 1 1 1

Gesamtzahl an Meer-

schweinchen 7 7 7 7 7 7 7 7

mittlerer

Schweregrad 2,57 2,14 1,86 1,71 3,00 2,29 1,71 1,29

Standardabweichung 0,535 0,378 0,378 1,113 0,816 0,488 0,951 0,756

Sterblichkeit (%) 0 0 0 0 29 0 0 0

Student's t-Test - 1,740 2,872 1,845 - 1,977 0,613 1,690

In den unbehandelten Kontrollgruppen mußten alle Meerschweinchen etwa 3 Minuten nach dem Besprühen mit der 1 %igen «=Amylaselösung keuchen, während etwa 5 Minuten später einige erbrechen mußten und Krämpfe sowie Harnentleerung beobachtet wurden. Zwei Tiere litten an Zyanose, Lähmung der Hinterpfoten und waren am Ende des Besprühen am allgemeinen anaphylaktischen Schock gestorben.

Andererseits zeigen die mit den Bakterien behandelten Tiere im Vergleich zu den unbehandelten Gruppen eine ausgezeichnete Hemmung der allgemeinen Anaphylaxie.
Beispiel 2 Streptococcus lactis BK-042 bzw. BK-045 werden kultiviert und eingehend mit Wasser gewaschen. Je 150 g Mikroorganismus werden mit destilliertem Wasser auf ein Volumen von 500 ml aufgefüllt, die Zellen werden während 60 Minuten mit Ultraschall (20 kHz, 200 W) aufgebrochen. Die den zertrümmerten Mikroorganismus enthaltende Flüssigkeit wird 60 Minuten bei 11 000 UpS zentrifugiert, jeder überstand wird gefriergetrocknet. Man erhält etwa 8 bis 9 g Trockenprodukt.
Diese Produkte werden auf ihre Wirksamkeit zur Hemmung des anaphylaktischen Schocks untersucht: Weibliche Meerschweinchen mit einem mittleren Körpergewicht von 240 g werden eine Woche besbachtet, dann werden 30 gesunde Tiere in drei Gruppen eingeteilt. Während der Voruntersuchung und des Versuchs werden die Tiere in einer thermostatisierten Zuchtkammer bei einer Temperatur von 22 + 20C und einer Feuchtigkeit von 50 + 5 % gehalten, wobei sie ohne Beschränkungen handelsübliches gepulvertes Diät futter und Leitungswasser erhielten.
10 Meerschweinchen jeder Gruppe wird vor der passiven Sensibilisierung mit dem Anti-albumin-Kaninchenserum während 20 Tagen ein Futter verabreicht, das mit dem erfindungsgemäßen Präparat vermischt ist, wobei die Mengen so berechnet werden, daß eine Gesamtdosis von 100 mg/Tier/Tag erreicht wird.
Das Anti-albumin-Kaninchenserum erhält man durch intramuskuläre Injektion an ein Kaninchen mit einem Körpergewicht von etwa 4 kg von 1 ml einer Suspension im Gewichtsverhältnis von 1:1 einer 1 %igen Albuminlösung und Freund's Komplettadjuvans dreimal pro Woche während 5 Wochen.
2 ml dieses Anti-albumin-Kaninchenserums (Antikörperwert: 16-fach) werden intraperitoneal jedem Meerschweinchen injiziert. 48 Stunden später wird jedes Meerschweinchen in eine 52,5 Kammer gesetzt und mittels eines Ultraschall-Zerstäubers mit einer Geschwindigkeit von 1,5 ml/Minute während 30 Minuten mit 1 90iger Albuminlösung besprüht.
Der dabei auftretende anaphylaktische Schock wird mit dem von unbehandelten Tieren verglichen. Die Ergebnisse sind in Tabelle III angegeben, der Schweregrad wird gemäß Beispiel 1 bestimmt.

T a b e 1 1 e III

S. lactis

Stamm Kontrolle BK-042 BK-045

Dosis (mg/Tier/Tag) - 100 100

Dauer (Tage) 20 20

Grad 4 2

Schwere Grad 3 5 2 # 2

und Grad 2 2 1 2

Häufigkeit

der Grad 1 1 3 0

Anfälle Grad 0 4 # 6

Gesamtzahl der Meer- 10 10 10

schweinchen 10 10 10

mittlerer Schwere-

grad 2,8 1,1 1,0

Standardabweichung 0,919 1,197 1,333

Sterblichkeit (%) 20 0 0

Student's t-Test @ 3,564** 2,871*

(* :95 % Verläßlichkeit **:99 % Verläßlichkeit) Jedes Meerschweinchen nahm die Gesamtmenge an Futter auf, das mit dem wie oben beschrieben hergestellten Extrakt vermischt war, um 100 mg/Tier/Tag zu verabreichen. Die Meerschweinchen nahmen normal zu.

Zwei der nicht behandelten Tiere aus der Kontrollgruppe litten 30 Sekunden nach Beginn des Besprühens mit 1 %Tier Albuminlösung an schweren Krämpfen, eine Minute nach Sprühbeginn waren sie tot. Ein anderes Meerschweinchen litt an schwerer Zyanose, zwei Tiere litten an Zyanose und Lähmung der Hinterpfoten etwa 5 Minuten nach Sprühbeginn und fünf Tiere zeigten Kurzatmigkeit, Lähmung der Hinterpfoten und Ataxie.
Im Gegensatz dazu zeigten sechs mit S. lactis BK-045 behandelte Tiere und vier mit S. lactis BK-042 behandelte Meerschweinchen keinerlei Anzeichen einer Veränderung. Einige andere mit dem erfindungsgemäßen Präparat behandelte Tiere hatten jedoch schwere Zyanose und Krämpfe, doch starb keines der behandelten Meerschweinchen. Die Verminderung der Schocksymptome ist in diesen Gruppen deutlich zu beobachten.
Mit anderen Worten zeigten alle Tiere der Kontrollgruppe schwere Symptome, wogegen sechs der mit S. lactis behandelten zehn Tiere keine Symtome aufwiesen. Außerdem konnten bei den Meerschweinchen, die mit dem gemäß Beispiel 2 hergestellten Produkt behandelt worden waren, keine Nebenwirkungen festgestellt werden.
Fünf Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 200 bis 240 g wurde oral 50 bis 70 g/kg Körpergewicht/Tag gefriergetrocknetes Produkt (wie oben hergestellt) jeden Tag während einer Woche verabreicht. Bei der Autopsie konnten an keinem Tier Zeichen von Anomalität festgestellt werden.
Beispiel 3 Streptococcus lactis BK-042, BK-045, BK-051, Streptococcus bovis BK-052 und Streptococcus faecalis BK-026 werden gemäß der Arbeitsweise des Beispiels 2 kultiviert und der Extrakt gewonnen.
Jeder Extrakt wird vor der Sensibilisierung oral den Meerschweinchen durch Vermischen mit dem Futter verabreicht, die Dosierung wird gemäß Beispiel 2 berechnet. Die Tiere erhalten die Extrakte in gleicher Weise auch nach der Sensibilisierung.
Für die Sensibilisierung wird ein Anti-Heubazillus-a -Amylase-Kaninchenserum hergestellt, das mit physiologischer Kochsalzlösung auf 32-fache Verdünnung verdünnt wird und in einer Menge von 1,5 ml intraperitoneal jedem Meerschweinchen injiziert wird. Die allergische Reaktion wird 48 Stunden nach der Sensibilisierung induziert. Die Symptome der Reaktion werden gemäB Beispiel 1 angegeben.
Die allergische Reaktion wird dadurch induziert, daß man sieben Meerschweinchen jeder Gruppe in einem 52,2 l-Käfig mit einer 1 %igen 6-Amylaselösung in physiologischer Natriumchloridlösung zur Inhalation besprüht und zwar mit einer Geschwindigkeit von 1,5 ml/Minute während 10 Minuten unter Verwendung eines Ultraschall-Zerstäubers. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV angegeben.

T a b e l l e IV

Stamm intakte Kon- S. lactis S. bovis S. faecalis

Kontrolle trolle BK-042 BK-045 BK-051 BK-052 BK-026

Dosis (mg/kg/Tag) 150 10 150 10 150 10 150 10 150 10

Dauer (Tage) 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14

Schwere Grad 4 2 1 2

und Grad 3 4 3 1 2 1 1 2 1 2 2 2

Häufigkeit Grad 2 1 2 3 3 2 1 1 1 1 3

der Grad 1 1 2 1 2 2 3 2 3 2 3

Anfälle Grad 0 5 1 1 1 2 2 1 1 1 2

Gesamtzahl an Meer-

schweinchen 5 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7

mittlerer

Schweregrad 0 3,14 2,00 1,57 1,86 1,29 1,57 1,57 2,14 1,57 2,00 1,29

Standardabweichung 0,690 1,155 0,976 1,069 1,113 1,512 1,134 1,574 1,134 0,816 1,254

Sterblichkeit (%) 28,6 0 0 0 14,3 28,6 0 0 0

* ** * * * * * **

Student's t-Test 2,336 3,476 2,242 2,607 2,308 3,130 1,540 2,018 2,240 3,144

(* : 95% Verläßlichkeit; ** : 99% Verläßlichkeit) Beispiel 4 Streptococcus lactis BK-045 wird in 100 ml einer Kulturbrühe, die 1 % Glukose, 1 % gepulverte Hefe und 1 % Pepton enthält, bei 320C während 18 Stunden kultiviert. Die Kulturbrühe wird dann bei 10 000 UpM zentrifugiert.

Der Mikroorganismus wird eingehend mit destilliertem Wasser gewaschen und in einer Menge von 150 g in einem 500 ml fassenden konischen Becher mit destilliertem Wasser auf 500 ml verdünnt. Diese Suspension wird in einem Eiswasserbad mit Ultraschall (200 kHz, 200 W) während einer Stunde aufgebrochen, dann bei 11 000 UpM eine Stunde zentrifugiert, um die hochmolekularen Substanzen, die hauptsächlich aus den Zellwänden bestehen, zu entfernen. Der Überstand wird bei niedriger Temperatur und vermindertem Druck eingeengt und während 48 Stunden durch eine semipermeable Cellulosemembran dialysiert.
Der Rückstand wird bei 12 000 UpM 20 Minuten zentrifugiert.
Der Überstand wird gefriergetrocknet, man erhält ein weißes bis schwachgelbes geruchloses Pulver in einer Ausbeute von etwa 500 mg je 100 g Lebendorganismus.
Das Produkt aus dem letzten Überstand wird auf seine Wirksamkeit zur Hemmung des anaphylaktischen Schocks untersucht: Weibliche Meerschweinchen mit einem mittleren Körpergewicht von 210 g werden 10 Tage beobachtet, dann werden fünf gesunde Tiere für jede Gruppe ausgewählt. Während der Vorversuche und des Versuchs werden die Tiere in einer thermostatisierten Kammer, in der die Temperatur 23 + 3"C beträgt, gehalten, die Meerschweinchen erhalten ohne Beschränkung gepulvertes Diätfutter und Leitungswasser.
Das oben beschriebene Pulver wird in physiologischer Natriumchloridlösung suspendiert, die Suspension wird intravenös in die Vorderpfoten in einer Dosis von 50 mg/kg Körpergewicht/Tag während zwei Tagen injiziert.
Zur Sensibilisierung wird den Meerschweinchen intraperitoneal 1,5 ml Anti-CC-amylase-Kaninchenserum (Antikörperwert: 32-fach) injiziert, das von einem Kaninchen mit einem Körpergewicht von 3 kg stammt, dem intramuskulär dreimal wöchentlich während 5 Wochen 1 ml einer Suspension von 1 %Tier d~Amylaselösung und Freund's Komplettadjuvans injiziert worden ist. 48 Stunden nach der Sensibilisierung wird jedes Meerschweinchen in einer 1,68 1 fassenden zylindrischen Kammer mit einer Geschwindigkeit von 0,5 ml/Minute mit einer 1 Eigen α-Amylaselösung unter Verwendung eines Ultraschall-Zerstäubers während 10 Minuten besprüht. Der dabei auftretende anaphylaktische Schock wird mit dem von Kontrolltieren verglichen. Die Ergebnisse sind in Tabelle V angegeben, die Schwere des Schocks wird wie in Beispiel 1 beschrieben.

Tabelle V

5. lactis

Stamm Kontrolle BK-045

Dosis (mg/Tier/Tag) - 50

Dauer (Tage) # 2

Grad 4 4

Schwere Grad 3 1

und

Häufigkeit Grad 2

der Grad 1 2

Anfälle Grad 0 2

Gesamtzahl an Meer- 5 5

Schweinchen

mittlerer. Schweregrad 3,8 0,8

Standardabweichung 0,447 0,837

Sterblichkeit (%) 80 0

Student's t-Test 7,076**

(**: 99 % Verläßlichkeit) Die Tiere der Kontrollgruppe hatten nach 30 Sekunden Besprühen mit der 1 %igen Albuminlösung schwere Krämpfe, eine Minute nach Beginn des Besprühens waren vier Meerschweinchen tot. Das fünfte litt an schwerer Zyanose, überlebte aber.

Die mit dem erfindungsgemäßen Präparat behandelten Tiere litten entweder an Atemnot, Krämpfen oder Ataxie, andere wiederum zeigten Kurzatmigkeit und Krämpfe, jedoch starb keines. Das beweist, daß das erfindungsgemäße, wie oben beschrieben hergestellte Präparat eine gute Wirkung gegen allergische Reaktionen hat.
Beispiel 5 Zwei 1935 getrocknete S. lactis BK-045-Stämme werden gemäß der Arbeitsweise des Beispiels 4 aufgebrochen, zentrifugiert und dialysiert. Die Dialysate werden 20 Minuten bei 12 000 UpM zentrifugiert. Der eine Niederschlag wird verworfen, ein überstand wird gefriergetrocknet, wobei man 10,05 g weißes oder schwachgelbes gepulvertes Produkt enthält. Der andere Niederschlag wird gefriergetrocknet, man erhält 4,95 g eines Produkts, das im weiteren als "B-1" bezeichnet wird.
Der Uberstand zu diesem Produkt wird mit 99,5 volumenprozentigem Äthylalkohol langsam versetzt, man erhält eine Lösung mit einer Athylalkoholkonzentration von etwa 25 Volumenprozent. Während der Zugabe des Äthylalkohols entsteht eine weiße Suspension, die 20 Minuten bei 12 000 UpM zentrifugiert wird. Nach dem Dekantieren wird der Niederschlag gefriergetrocknet, man erhält 4,60 g weißes oder schwachgelbes gepulvertes Produkt, das mit B-2" bezeichnet wird.
Der dekantierte Überstand wird mit weiterem 99,5 tigem Äthylalkohol versetzt, man erhält eine Lösung mit einer Äthylalkoholkonzentration von etwa 40 Volumenprozent. Die dabei entstehende weiße Suspension wird 20 Minuten bei 12 000 UpM zentrifugiert. Der Überstand wird dekantiert, der Niederschlag wird gefriergetrocknet, wobei man 4,23 g eines weißen oder schwachgelben gepulverten Produkts erhält, das die Bezeichnung "B-3" erhält.
Der dekantierte Überstand wird mit 99,5 % Äthylalkohol versetzt, man erhält eine Lösung mit einem Äthylalkoholgehalt von etwa 50 Volumenprozent. Die schwachweiße Suspension wird 20 Minuten bei 12 000 UpM zentrifugiert. Der Niederschlag wird nach dem Abddcantieren gefriergetrocknet, wobei man 0,05 g eines weißen oder schwachgelben gepulverten Produkts erhält, das mit "B-4" bezeichnet wird.
Jede dieser Fraktionen wird an Meerschweinchen zur Bestimmung der Antianaphylaxe-Wirkung verabreicht. Weibliche Meerschweinchen werden wie in Beispiel 3 beschrieben ausgewählt und in Gruppen zu sieben Meerschweinchen eingeteilt.
Die Versuchsbedingungen sind wie in Beispiel 3 beschrieben.
Jede Fraktion wird in das Futter der Meerschweinchen gemischt, die Dosierung für jedes Meerschweinchen beträgt 150 mg/kg Körpergewicht/Tag. Die Dosierung wird anhand der Futteraufnahme durch jedes Meerschweinchen am Tag zuvor berechnet. Der Versuch dauert 14 Tage, die Tiere werden wie in Beispiel 3 beschrieben behandelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengefaßt.

T a b e l l e VI

Fraktion Kontrolle B-1 B-2 B-3 B-4

Dosis (mg/kg/Tag) - 150 150 150 150

Dauer (Tage) - 14 14 14 14

Schwere Grad 4 5 4 3 1 1

und Grad 3 2 3 1 1 3

Häufigkeit Grad 2 1 3 1

der Grad 1 1 1 1

Anfälle Grad 0 1 1

Gesamtzahl an Meer-

schweinchen 7 7 7 7 7

mittlerer

Schweregrad 3,71 3,57 2,57 2,00 2,29

Standardabweichung 1,428 0,535 1,618 1,291 1,033

Sterblichkeit (%) 71 57 43 14 14

Student's t-Test 0,512 0,971 3,281** 2,569*

(* : 95% Verläßlichkeit; ** : 95% Verläßlichkeit) Nach dem Besprühen mit 1 %Tier >-Amylaselösung zeigten alle Kontrolltiere Atemnot und Niesen, wobei etwa 4 Minuten nach Beginn der Sprühbehandlung fünf Tiere tot waren. Zwei Meerschweinchen hatten schwere Zyanoseanfälle, Krämpfe und Lähmungen. Vier Meerschweinchen, denen die Fraktion B-i verabreicht worden war, starben, drei davon hatten schwere Symptome. Das heißt, daß die Fraktion B-1 gegen allergische Symptome nicht wirksam ist. Drei Meerschweinchen, die die Fraktion B-2 erhalten hatten, starben, nur eines überlebte mit schweren Symptomen. Da die anderen Tiere allergische Symptome in geringerem Ausmaß aufwiesen als die Tiere, die mit der Fraktion B-1 behandelt worden waren, hat die Fraktion B-2 eine gewisse Wirkung gegen allergische Symptome.

Andererseits sind die Fraktionen B-3 und B-4 deutlich wirksam gegen allergische Symptome. Eines der mit der Fraktion B-3 behandelten Tiere starb, ein anderes Meerschweinchen hatte schwere Symptome, die anderen zeigten nur leichte Symptome.
Das heißt, die Fraktion B-3 ist gegen allergische Symptome sehr wirksam. Eines der Tiere, das die Fraktion B-4 erhalten hatte, starb, drei hatten schwere Symptome, die anderen nur leichte Symptome. Die Fraktion B-4 ist daher gegen allergische Symptome wirksam.
Während der Untersuchung zeigten die Meerschweinchen keine Nebenwirkungen.
Beispiel 6 Erfindungsgemäß kann man Streptococcus lactis entweder in fester Form oder in einem flüssigen Kulturmedium kultivieren, das flüssige Kulturmedium ist jedoch vorzuziehen, um eine größere Ausbeute zu erhalten.
Obwohl verschiedene Kulturbrühen im Handel erhältlich sind, wurden für die Versuche verschiedene Kulturbrühen speziell hergestellt, um die Ausbeute an lebendem Bakterium je Mengeneinheit Kulturbrühe zu erhöhen.
Kulturbrühe I: 5 bis 50 g Glukose, 3 bis 20 g gepulverte Hefe, 3 bis 20 g Pepton und 0 bis 20 g Natriumbicarbonat werden in mit Ionenaustauscher behandeltem Wasser gelöst und auf 1 1 aufgefüllt. Die Lösung wird unter erhöhtem Druck und einer Temperatur von 1210C 20 Minuten sterilisiert, dann mit Natriumhydroxid auf pH 7,0 bis 8,5 eingestellt.
Kulturbrühe II: 5 bis 50 g Glukose, 0 bis 20 g Natriumcitrat, 0 bis 20 g Natriumbicarbonat und 0 bis 20 g Kaliumphosphat werden in mit Ionenaustauscher behandeltem Wasser gelöst und auf 500 ml aufgefüllt. Man erhält Brühe A.
Anschließend werden 5 bis 20 g gepulverte Hefe und 5 bis 20 g Pepton in mit Ionenaustauscher behandeltem Wasser gelöst. Man erhält 500 ml der Brühe B.
Beide Brühen A und B werden unter hohem Druck bei einer Temperatur von 1210C 20 Minuten sterilisiert und miteinander vermischt. Das Gemisch wird mit Natriumhydroxid auf pH 7,0 bis 8,5 eingestellt.
Kulturbrühe III: 5 bis 20 g Glukose, 5 bis 20 g gepulverte Hefe, 5 bis 20 g Pepton, 0 bis 20 g Natriumcitrat und 0 bis 20 g Kaliumphosphat werden in mit Ionenaustauscher behandeltem Wasser gelöst und auf 1 1 aufgefüllt. Die Lösung wird mit Natriumhydroxid auf pH 7,5 bis 8,5 eingestellt und durch ein Ultrafilter filtriert.
Streptococcus lactis BT<-042, BK-045 und BK-051, Streptococcus bovis BK-052 und Streptococcus faecalis BK-026 werden in den jeweiligen Brühen kultiviert. Am Ende der Fermentationszeit beträgt der pE-Wert der Kulturbrühe 4,3 bis 4,5. Die Stämme werden jeweils aus ihren Kulturbrühen isoliert, die Ausbeuten betragen für Streptococcus lactis und Streptococcus faecalis etwa 6,0 bis 6,5 g/l und für Streptococcus bovis etwa 8 g/l.
In der ersten Stufe werden die auf diese Weise erhaltenen Stämme zweimal eingehend mit etwa dem fünffachen Volumen an physiologischer Natriumchloridlösung, dann einmal mit genügend destilliertem Wasser gewaschen.
In der zweiten Stufe werden 150 g gewaschene Stämme mit so viel destilliertem Wasser versetzt, daß man etwa 1500 ml Suspension erhält, die mit Ultraschall behandelt wird, um die Zellen aufzubrechen. Die die Zelltrümmer enthaltende Suspension wird zentrifugiert, der Überstand wird gewonnen.
In der dritten Stufe wird der überstand in einem Gefriertrockner bis auf ein Zehntel seines ursprünglichen Volumens eingeengt. Das Konzentrat wird zweimal an einer semipermeablen Cellulosemembran gegen das zehnfache Volumen an destilliertem Wasser während 24 Stunden bei niedriger Temperatur dialysiert.
Das restliche Dialysat wird bei 12 000 UpM während 20 Minuten zentrifugiert, der Überstand wird gewonnen.
Dieser Uberstand wird allmählich mit 99,5 % Äthylalkohol versetzt. Während der Alkoholzugabe verändert das in dem Überstand unlösliche Protein seine Eigenschaften und wird in dem überstand suspendiert.. Die Alkoholzugabe wird bei einer Äthylalkoholkonzentration von 30 % beendet. Der Uberstand wird zentrifugiert, der Niederschlag wird gewonnen. In dieser vierten Stufe beträgt die Menge an zugegebenem 99,5 %igem Äthylalkohol 43 ml je 100 ml überstand.
Der erhaltene Niederschlag wird gefriergetrocknet, man erhält ein weißes oder schwachgraues, farb- und geruchloses Pulver in einer Ausbeute von 0;23 Gewichtsprozent des gewaschenen Stamms.
Beispiel 7 Die Arbeitsweise des Beispiels 6 wird wiederholt, man erhält in der vierten Stufe 10 g Niederschlag, der mit destilliertem Wasser versetzt wird. Man erhält 50 ml einer Suspension, die Heißwasserbad in einem / 15 Minuten erhitzt wird. Das thermisch denaturierte Protein wird bei 12 000 UpM 20 Minuten zentrifugiert. Der Niederschlag wird gefriergetrocknet. Das Pulver enthält im wesentlichen thermisch denaturiertes Protein, die an das Protein gebundenen löslichen Substanzen sind in dem Beispiel 6 in / beschriebenen Verfahren entfernt worden. Die Ausbeute an Pulver beträgt etwa 0,12 Gewichtsprozent, bezogen auf den gewaschenen Stamm.
Die Produkte der Beispiele 6 und 7 werden auf ihre antiallergische Wirkung untersucht, wobei Meerschweinchen verwendet werden, bei denen in vivo Antigene durch Einführen von Heteroprotein gebildet werden- und durch aktive Sensibilisierung mit dem Antigen allergisches Asthma hervorgerufen wird (siehe z.B. auch T. Yagura et al. "Experimental Allergic Asthma in Guinea Pigs", Allergology, Excepta Medica P. 148, Amsterdam, 1971). Die Ergebnisse sind in Tabelle VII zusammengefaßt.

T a b e l l e VII

Intakte

Kontrolle Kontrolle Beispiel 6 Beispiel 7

Dosis (mg/kg/Tag) 1 1

Dauer (Tage) 3 3

Schwere Grad 4 7 2

und Grad 3 2 3 3

Häufigkeit Grad 2 1 4 3

der Grad 1 2 1

Anfälle Grad 0 5 1 1

Gesamtzahl an Meerschweinchen 5 10 10 10

mittlerer Schweregrad 0 3,6 1,9 2,4

Standardabweichung 0,699 0,994 1,265

Sterblichkeit (%) 70,0 0 20,0

Student's t-Test 4,422** 2,626*

(* : 95% Verläßlichkeit;** : 99% Verläßlichkeit) Aus den Ergebnissen der Tabelle VII ist ersichtlich, daß die Produkte der Beispiele 6 und 7 erstaunliche Wirkungen bei der Hemmung der Bildung von Antikörpern, chemischen Angriffsinduktionssubstanzen, wie Histamin oder Serotonin, beim Antagonismus zwischen Antikörpern-und chemischen Produkten sowie zur Förderung der Bildung von antiallergischen Antikörpern haben.

Außerdem wird das experimentelle allergische Asthma bei den Meerschweinchen auch mittels passiver Sensibilisierung mit Anti-Kaninchenserum induziert. Die antiallergische Wirkung der Produkte der Beispiele 6 und 7 wird durch Verabreichen an die Meerschweinchen untersucht. Die Ergebnisse sind in den Tabellen VIII und IX zusammengefaßt.

T a b e l l e VIII

intakte Kontrolle S.latis S.bovis S.faecalis

Stamm Kontrolle BK-045 BK-052 BK-026

Dosis (mg/kg/Tag) 3 1 0.5 3 3

Dauer (Tage) 10 10 10 10 10

Schwere Grad 4 9 1 1 2 3 1

und Grad 3 7 2 2 4 1 3

Häufigkeit Grad 2 1 2 3 1 2 1

der Grad 1 2 3 2 1 1

Anfälle Grad 0 5 3 1 1 1

Gesamtzahl an Meer- 5 17 10 10 10 7 7

schweinchen

mittlerer Schweregrad 0 3,47 1,60 1,90 2,40 2,85 2,28

Standardabweichung 0,624 1,430 1,197 1,350 1,215 1,380

Sterblichkeit (%) 52,9 10,0 10,0 20,0 42,9 14,3

Student's t-Test 4,71** 4,48** 4,57** 1,67 2,96**

(* : 95% Verläßlichkeit** : 99% Verläßlichkeit) T a b e l l e IX

intakte Kontrolle S.lactis S.bovis S.faecalis

Stamm Kontrolle BK-045 BK-052 BK-026

Dosis (mg/kg/Tag) 1 1 1

Dauer (Tage) 7 7 7

Schwere Grad 4 6 1

und Grad 3 3 4 4 5

Häufigkeit Grad 2 1 1 1 2

der Grad 1 2 2 2

Anfälle Grad 0 5 3 2 1

Gesamtzahl an Meer- 5 10 10 10 10

schweinchen

mittlerer Schweregrad 3.5 1.6 2.0 2.1

Standardabweichung 0.707 1.350 1.414 1.101

Sterblichkeit (%) 60 0 10 0

Student's t-Test 3.943** 3.000** 3.385**

(* : 95% Verläßlichkeit** : 99% Verläßlichkeit) Bei der passiven Sensibilisierung wird der Anti-Kaninchen-IgE-Antikörper im Anti-Kaninchenserum gebildet. Wird dieser IgE-Antikörper dem Meerschweinchen verabreicht, so leidet dieses an allergischen Reaktionen, die mit den erfindungsgemäßen Präparaten gehemmt werden können.

Da Streptococcus lactis, Streptococcus bovis und Streptococcus faecalis sehr sicher sind, sind deren Extrakte und somit die erfindungsgemäßen antiallergischen Präparate natürlich auch sehr sicher. Die Tabellen X, XI, XII und XIII, in denen einige dieser Stämme und deren Extrakte auf ihre Sicherheit geprüft werden, bestätigen das.

T a b e 1 1 e X: LD50(mg/kg) Verbreichung (mg/kg)

Substanz Tier Substanz Tier Sex zahl ip po

BK-026 ddy - Mäuse M 8 190 480 >3000

" Wistar-Ratten M 8 250 >5000

BK-045 ddy - Mäuse M 10 250 600 >30000

" Wistar-Ratten M 10 >30000

BK-045 ICR-Mäuse F 10 720-1040

Extrakt des

Beispiels 2 ddy-Aläuse M 10 2000 >30000

T a b e l l e XI

An-

Substanz Tier Sex zahl Dosis(mg/kg) Tage Befund

BK-045 Wistar- M 4 50000-70000 5 kein Tier

Ratten starb,

Diarrhöe

1 ddy-Mäuse M 6 100000 5 3 Mäuse

starben an

Unterer-

näherung

T a b e l l e XII

Substanz Tier Sex An- Dosis Fütterungs- Befund

zahl dauer

BK-045 Wistar-Ratten F 10 5000 mg/kg 3 Monate

keine

BK-045 ddy- Mäuse F 10 3000 mg/kg 6 Monate histo-

chemi-

BK-045 ddy- Mäuse M 10 3000 mg/kg 6 Monate schen

- und pa-

BK-045 Wistar-Ratter M 10 10% des 4 Monate thologi-

Futters schen

BK-045 Wistar-Ratter F 10 10% des 4 Monate Ver-

Futters änderun-

BK-045 gen

Extrakt des Fischer- M 5 5% des 22 Wochen

Beispiels 2 Ratten Futters

* : 86 Wochen alte Tiere T a b e l l e XIII

Substanz Tier Sex An- Dosis Fütterungs Befund

zahl dauer

BK-045 Wistar-Ratter M 4 0.05% des 18 Monate keine

Futters histo-

0.5% des 18 Monate chemi-

Futters schen

5% des 18 Monate und pa-

Futters tholo-

Wistar-Ratter M 5 1500 mg/kg 18 Monate schen

BK-026 Veränder-

ddy-Mäuse M 6 250 mg/kg 24 Monate ungen

Claims

Patentansprüche 1. Antiallergisches Präparat, als Hauptwirkstoff Streptococcus lactis, Streptococcus bovis oder Streptococcus faecalis aus der Familie der Lactobacteriaceaen, auch in Form von Zellfragmenten, gegebenenfalls in Kombination mit üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln, enthaltend.
2. Antiallergisches Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Streptococcus lactis (Lister)Lohnis BK-042 (ATCC 31861) enthält.
3. Antiallergisches Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-045 (ATCC 31862) enthält.
4. Antiallergisches Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Streptococcus lactis BK-051 (IFO 12007) enthält.
5. Antiallergisches Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Streptococcus bovis BK-052 (ATCC 15351) enthält.
6. Antiallergisches Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Streptococcus faecalis BK-026 (ATCC 10100) enthält.
7. Antiallergisches Präparat nach Anspruch 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß es den Hauptwirkstoff in Form eines gefriergetrockneten Pulvers enthält.
8. Verfahren zur Herstellung eines antiallergischen Präparats nach Anspruch 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus lactis, Streptococcus bovis oder Streptococcus faecalis aus der Familie der Lactobacteriaceaen kultiviert, aus der Kulturbrühe isoliert und zu einem Pulver gefriertrocknet.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus lactis, Streptococcus bovis oder Streptococcus faecalis kultiviert, wäscht, mit destilliertem Wasser versetzt, zertrümmert, zentrifugiert und den überstand gewinnt.
10. Verfahren nach Anspruch 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus lactis, Streptococcus bovis oder Streptococcus faecalis kultiviert, eingehend wäscht, in Wasser suspendiert, zertrümmert, durch Ausfällen der Verunreinigungen einen ersten Überstand erhält, diesen ersten Überstand an einer semipermeablen Membran dialysiert, den Rückstand der Dialyse zentrifugiert und einen zweiten Überstand gewinnt.
11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß man diesen zweiten Überstand in Form eines Pulvers gefriertrocknet.
12. Verfahren nach Anspruch 8 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß man den zweiten Uberstand mit Äthylalkohol versetzt und den Niederschlag gewinnt.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet; daß man den Niederschlag aus der Äthylalkohollösung mit destilliertem Wasser versetzt, die entstandene Suspension erhitzt und das Protein als Niederschlag gewinnt.
14. Verfahren nach Anspruch 8 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-042 (ATCC 31861) verwendet.
15. Verfahren nach Anspruch 8 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus lactis (Lister) Lohnis BK-045 (ATCC 31862) verwendet.
16. Verfahren nach Anspruch 8 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus lactis BK-051 (IFO 12007) verwendet.
17. Verfahren nach Anspruch 8 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus bovis BK-052 (ATCC 15351) verwendet.
18. Verfahren nach Anspruch 8 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptococcus faecalis BK-026 (ATCC 10100) verwendet.