DE2035814C3 - Pleuromutilin-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung - Google Patents
Pleuromutilin-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und VerwendungInfo
- Publication number
- DE2035814C3 DE2035814C3 DE2035814A DE2035814A DE2035814C3 DE 2035814 C3 DE2035814 C3 DE 2035814C3 DE 2035814 A DE2035814 A DE 2035814A DE 2035814 A DE2035814 A DE 2035814A DE 2035814 C3 DE2035814 C3 DE 2035814C3
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- nrrl
- species
- coo
- clitopilus
- fermentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- ZRZNJUXESFHSIO-VYTKZBNOSA-N pleuromutilin Chemical class C([C@H]([C@]1(C)[C@@H](C[C@@](C)(C=C)[C@@H](O)[C@@H]2C)OC(=O)CO)C)C[C@]32[C@H]1C(=O)CC3 ZRZNJUXESFHSIO-VYTKZBNOSA-N 0.000 title claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 17
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 229960002771 retapamulin Drugs 0.000 claims description 14
- OBUUFWIMEGVAQS-UHFFFAOYSA-N Pleuromutenol Natural products CC1C(O)C(C)(C=C)CC(O)C2(C)C(C)CCC31C2C(=O)CC3 OBUUFWIMEGVAQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- STZYTFJPGGDRJD-NHUWBDDWSA-N retapamulin Chemical compound C([C@H]([C@@]1(C)[C@@H](C[C@@](C)(C=C)[C@@H](O)[C@@H]2C)OC(=O)CS[C@@H]3C[C@H]4CC[C@H](N4C)C3)C)C[C@]32[C@H]1C(=O)CC3 STZYTFJPGGDRJD-NHUWBDDWSA-N 0.000 claims description 13
- 241001572230 Clitopilus passeckerianus Species 0.000 claims description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 241001237958 Clitopilus prunulus Species 0.000 claims description 5
- STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N LSM-4015 Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 241001572236 Agaricus pinsitus Species 0.000 claims description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 2
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims 1
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 42
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 11
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 10
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 10
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 10
- -1 pleuromutilin fatty acid ester Chemical class 0.000 description 10
- KUBKXMIPSJEXGM-UHFFFAOYSA-N 14-Acetylmutilin Natural products CC1C(O)C(C)(C=C)CC(OC(C)=O)C2(C)C(C)CCC31C2C(=O)CC3 KUBKXMIPSJEXGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZRZNJUXESFHSIO-UHFFFAOYSA-N Pleuromutilin Natural products CC1C(O)C(C)(C=C)CC(OC(=O)CO)C2(C)C(C)CCC31C2C(=O)CC3 ZRZNJUXESFHSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 7
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 6
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 4
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- QYDYPVFESGNLHU-KHPPLWFESA-N methyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC QYDYPVFESGNLHU-KHPPLWFESA-N 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- QYDYPVFESGNLHU-UHFFFAOYSA-N elaidic acid methyl ester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OC QYDYPVFESGNLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001237959 Clitopilus Species 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-QXMHVHEDSA-N gadoleic acid Chemical compound CCCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- XEJYCWVISZMIDA-SEYXRHQNSA-N methyl (z)-icos-9-enoate Chemical compound CCCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC XEJYCWVISZMIDA-SEYXRHQNSA-N 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
- C07C69/02—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
- C07C69/12—Acetic acid esters
- C07C69/16—Acetic acid esters of dihydroxylic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P15/00—Preparation of compounds containing at least three condensed carbocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
- C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
- C07C2603/58—Ring systems containing bridged rings containing three rings
- C07C2603/76—Ring systems containing bridged rings containing three rings containing at least one ring with more than six ring members
- C07C2603/80—Ring systems containing bridged rings containing three rings containing at least one ring with more than six ring members containing eight-membered rings
- C07C2603/82—Ring systems containing bridged rings containing three rings containing at least one ring with more than six ring members containing eight-membered rings having three condensed rings with in total fourteen carbon atoms and having a having a [5.4.3.0(1,8)] ring structure, e.g. pleuromutiline
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft Pleuromutilin-Derivate der Formell,
11
Q-C-CH2-R
O CH
worin R für eine
OH
CH3 -(CH2)? - CH=CH - (CH2), - COO-,
CH3-(CH2J4-CH= CH-CH2-CH = CH-(CH2)?-COO-
CH3 - (CH2J9 - CH=CH - (CH2)? - COO-Gruppe
oder für Wasserstoff steht,
sowie Verfahren zu ihrer Herstellung und Isolierung.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch gekennzeichnet,
daß man
a) zur Herstellung von Verbindungen der Forme! 1, worin R obige Bedeutung besitzt, einen Organismus
der Spezies Clitopilus passeckerianus· (Pil.) Sing. (NRRL 3100) bzw. dessen Variante (NRRL
3279), der Spezies Clitopilus prunulus (Scop, ex Fr.)
Kummer (NRRL 3473) sowie der Spezies Clitopilus
40 pinsitus (Fr.) ss. Romagn. Joss. (NRRL 3474) bzw. deren Varianten oder Mutanten in einer wäßrigen,
eine Stickstoff- und eine Kohlenstoffquelle enthaltenden Nährlösung in Gegenwart pflanzlicher oder
tierischer öle züchtet und zur Isolierung aus dem gewonnenen Rohprodukt die Verbindungen in an
sich bekannter Weise abtrennt oder b) zur Herstellung von 14-Desoxy-14-acetoxymutilin
der Formel Ia
CH= CH2
(la)
OH
Mutilin mit Hilfe eines Organismus der Spezies Clitopilus passeckerianus (Pil.) Sing. (NRRL 3100)
bzw. dessen Variante (NRRL 3279), der Spezies Clitopilus prunulus (Scop, ex Fr.) Kummer (NRRL
3473) sowie der Spezies Clitopilus pinsitus (Fr.) ss. Romagn. Joss. (NRRL 3474) bzw. deren Varianten
oder Mutanten oder mit Enzymextrakten bzw. Trockenmycelen dieser Mikroorganismen in einer
wäßrigen, eine Stickstoff- und eine Kohlenstoffquelle enthaltenden Nährlösung enzymatisch ace-
tyliert und zur Isolierung aus dem gewonnenen Rohprodukt die Verbindung in an sich bekannter
Weise abtrennt
Die erfindungsgemäß verwendeten Mikroorganismen gehören zur Familie Trictolomataceae, der
Ordnung Agricales und Klasse Basidiomycetes. Kulturen dieser Organismen sind bei der Fermentations
Division of the Northern Regional Research Laboratories (NRRL), Peoria, Illinois, unter den oben angegebenen
Nummern hinterlegt
Die in Verfahrensvariante a) beschriebene Fermentation
erfolgt üblicherweise nach dem Submersverfahren, wenn gleich auch die Anwendung des Oberflächenverfahrens
möglich ist Als Kohlenstoffquellen sind Zucker, insbesondere Glucose, Lactose oder Stärke, und als
Stickstoffquellen anorganische oder organische Stickstoffverbindungen,
wie Natriumnitrat Ammoniumsulfat, Hefeautolysat oder Cornsteepliquor, brauchbar. Diese
decken in ihren unreinen Formen gleichzeitig den üblichen Mineralstoffbedarf. Der Fe; inentationsverlauf
ist bezüglich pH-Änderung, Sauerstoffaufnahme, Nährstoffumsatz
und Bildung der gewünschten Produkte mit einer Penicillinfermentation vergleichbar. Gärtemperaturen
zwischen 25 und 28° C führen unter gutem Wachstum zu hohen Ausbeuten. Zusätze von Maisöl,
Sonnenblumenöl, Olivenöl, Spermöl und anderen ölen tierischer und pflanzlicher Herkunft werden zur Bildung
der erfindungsgemäßen Pleuromutilinderivate vorzugsweise in Mengen zwischen 0,05 und 5% (Vol.-°/o)
angewendet. Die Fermentationsdauer hängt entscheidend von den angewendeten Bedingungen ab. Normalerweise
liegt sie bei 3—5 Tagen; sie kann jedoch auch darunter oder darüber liegen. Die gewünschten
Produkte werden teils in das umgebende Medium abgeschieden, teils auch .in den Zellen akkumuliert. Ihre
Isolierung kann daher aus dem Kulturfiltrat und/oder aus dem abgetrennten, gegebenenfalls getrockneten,
Mycel erfolgen.
Eine bevorzugte Ausführungsform der in Verfahrensvariante a) beschriebenen Fermentation besteht darin,
daß man den Mikroorganismus der Spezies Clitopilus passeckerianus (PiL) Sing. (NRRL 3100) zuerst in einer
Vorkultur, die als Kohlenstoff- und Stickstoffquelle, Malzextrakt und ferner Bohnenmehl, Hefeextrakt,
Agar, Pepton sowie Mineralsalze enthält, züchtet und den dabei erhaltenen Fermentationsbrei anschließend
zur weiteren Züchtung in eine Fermentationslösung einträgt, die als Kohlehydratquelle Glucose und als
Stickstoffqaelle Bierhefeautolysat sowie Mineralsalze
enthält Der dabei erhaltene Fermentationsbrei wird gegebenenfalls erneut in eine Fermentationslösung der
letztgenannten Art zur weiteren Züchtung eingetragen. Nach beendeter Züchtung werden die so erhaltenen
Pleuromutilinderivate in bekannter Weise isoliert Gegebenenfalls er'folgt eine Auftrennung des Substanzgemisches
in ein Pleuromutilinfettsäureestergemisch und das H-Desoxy-M-acetox'ymutilin.
Eine weitere Ausführungsform der obigen Verfahrensvariante a) kann jedoch auch darin bestehen, daß
man eine analog zu oben gezüchtete Vorkultur in eine Fermentationslösung einbringt, die als Kohlenstoffquelle
Glucose und als Stickstoffquelle Preßhefeautolysat sowie Mineralsalze enthält Der dabei erhaltene
Mycelbrei wird erneut in eine Fermentationslösung obiger Art überführt Nach Beendigung dieser Züchtung
bringt man den so gewonnenen Fermentationsbrei schließlich in eine weitere Fermentationslösung, die als
Kohlenstoffquelle Glucose und als Stickstoffquelle Sojabohnen-Stickstoff sowie Mineralsalze enthält Nach
Beendigung dieser letzten Züchtung wird das dabei erhaltene Substanzgemisch in bekannter Weise isoliert,
wobei eine zu dem erstgenannten Verfahren analoge Aufarbeitung erfolgen kann.
Bei der enzymatischen Acetylierung von Mutilin zu 14-Desoxy-14-acetoxymuti!in gemäß Verfahrensvariante
b) kann als Enzymträger das durch Submers- oder Oberflächenverfahren gewonnene Mycel der Mikroorganismen
dienen. Trockenmycel oder Enzymextrakte der beschriebenen Fungi können jedoch ebenfalls
verwendet werden. Die Umwandlungsrate ist von der angebotenen Belüftung abhängig. Für große Umwandlungsraten
liegt die Substratkonzentration beispielsweise zwischen 0,5 und 5,0 g Mutilin pro Liter. Die
Acetylierung erfolgt mit Vorteil in einem gepufferten Medium bei pH-Werten zwischen 4,5 und 8,0 unter
Zusatz einer Kohlenstoffquelle und guter Belüftung. Als Kohlenstoffquelle kommen Zucker, wie Glucose oder
Lactose, in Frage. Es lassen sich jedoch auch Maisöl, Spermöl, Sonnenblumenöl, Oeisäuremethylester, Palmitinsäure,
Glycerin, Aethanol oder Aminosäuren verwenden. Die Konzentrationen hierfür liegen beispielsweise
zwischen 0,5 und 5 Gew.-%. Durch Zusatz von Cu-Ionen in geringer Konzentration, vorzugsweise 10 ppm, wird
die Acetylierung stimuliert
Eine bevorzugte Ausführungsform der obigen enzymatischen Acetylierung von Mutilin zu 14-Desoxy-14-acetoxymutilin
besteht darin, daß man die gemäß der Verfahrensvarianten a) erhaltene Vorkultur des Mikroorganismus
NRRL 3100 von Clitopilus passeckerianus in eine Fermentationslösung bringt, die als
Kohlenstoffquelle Glucose und als Stickstoffquelle Preßhefeautolysat sowie Mineralsalze enthält. Der
dabei erhaltene Mycelbrei wird in einer Fermentationslösung, die unter anderem Cornsteepliquor und Spermöl
enthält, gezüchtet und die so gewonnene Züchtung endlich in einem Replacementmedium suspendiert, das
mit Phosphat gepuffert ist und Maisöl als Kohienstoffquelle enthält Die Substratkonzentration beträgt
hierbei 3 g Mutilin pro Liter Kultur. Die Aufarbeitung der Ansätze zu dem gewünschten 14-Desoxy-14-acetoxymutilin,
welches nach 48stündiger Belüftung in hoher Ausbeute erhalten wird, erfolgt in bekannter Weise.
Die Struktur der erfindungsgemäß hergestellten Pleuromutilinfettsäureester ist durch UV- und IR-Spek-•tren,
Abbaureaktionen, Papier-, Dünnschicht- und Gaschromatographie gesichert. Die Dünnschichtchromatographie
der durch Umesterung der Pleuromutilinfettsäureester erhaltenen Fettsäuremethylester ergibt
auf AgNO3-imprägnierten Kieselgelplatten, auf denen'
eine Trennung der verschiedenen Isomeren möglich ist, den Hinweis auf Oelsäure, Linolsäure und Gadoleinsäure.
Die Struktur-des H-Desoxy-H-acetoxymutilins ist
durch IR-Spektren; Abbaureaktionen und Synthese von Pleuromutilin ausgehend gesichert
Die erfindungsgemäß erhaltenen Pleuromutilin-Derivate stellen wertvolle Antibiotika dar und bilden einen
hervorragenden Zusatz zu Fertigfuttermischungen.
Infolge der geringen Dosierung im Fertigfutter und wegen ihrer schlechten Resorption im tierischen
Organismus besteht beim Verzehr damit behandelter Tiere keine Gefahr einer Resistenzentwicklung von
Krankheitserregern im Menschen. Außerdem werden die erfindungsgemäßen Pleuromutilin-Derivate nicht im
Humanbereich eingesetzt, so daß die dort üblichen Antibiotika ihre volle Wirksamkeit behalten.
Die zu verabreichende Dosis an Pleuromutilin-Deri-
Die zu verabreichende Dosis an Pleuromutilin-Deri-
vaten der Formel I beträgt für Geflügel zweckmäßigerweise 2,5 bis 90 mg pro kg Fertigfuttermischung. Für
Schweine liegt die entsprechende Dosis bei 10 bis 180 mg pro kg Fertigfuttermischung. Bei Kälbern und
Mastrindern sollen die Verbindungen der Formel I in solchen Dosen verfüttert werden, daß vom Tier täglich
etwa 25 bis 120 mg Wirkstoff aufgenommen werden.
Die erfindungsgemäß hergestellten Pleuromutilin-Derivate zeigen ferner eine günstige Wirkung gegen
tierpathogene Keime, so daß sie in der Tierheilkunde verwendet werden können.
Beispiel 1
Fermentation
Zwei Kulturen von Clitopilus passeckerianus (NRRL 3100) auf Agar-Nährböden werden mit steriler,
physiologischer Kochsalzlösung abgespült, worauf man mit je 3 ml der erhaltenen Suspension jeweils 60 ml
steriler Fermentationsnährlösung beimpft, die sich in zwei 500-ml-Erlenmeyer- Weithalskolben befinden.
| Nährboden für Schrägagar | Glucose | 10,0 g |
| Bohnenmehl | Bierhefeautolysat-Stickstoff | 0,5 g |
| KH2PO4 | KH2PO4 | 1,0 m! |
| FeCI3 (l%ige Lösung) | MgSO4 - 7 H2O | 0,1g |
| Hefeextrakt | Ca(NO3J2 | 50,0 g |
| Malzextrakt | NaCi | 1,0 g |
| Pepton | FeSO4 - 7 H2O | 15,0 g |
| Agar | mit Aqua dest auf 1000 ml | |
| mit Aqua dest. auf 1000 ml | auffüllen; | |
| auffüllen; | pH vor der Sterilisation: 6,0 | |
| natürliches pH. | ||
| Fermentationsnährlösung | 50,0 g/l | |
| 1,0 g/l | ||
| 1,0 g/l | ||
| 0,5 g/l | ||
| 03 g/l | ||
| 0,1 g/l | ||
| 0,05 g/l | ||
Nach 120 Stunden Fermentation bei 25° C auf einer
Rundschüttelmaschine mit 40 mm Hub und 250 U/min wird der Inhalt der zwei 500-ml-Erlenmeyer-Weithalskolben dickbreiig. Je 10 ml davon werden zur Beimpfung von zehn 2-Liter-Erlenmeyer-Weithalskolben
verwendet, die mit je 200 ml der obigen sterilen
erfolgt unter denselben Bedingungen wie bei der Heranführung der Vorstufe. Nach 72 Stunden wird mit
dem in den zehn 2-liter-ErlenmeyerkoIben enthaltenen
Fermentationsbrei (jeder Kolben enthält 200 ml) ein mit
40 Liter obiger steriler Fermentationsnähriösung gefälltes Fermentationsgefäß beimpft, das mit den
Einrichtungen für eine Submersf fermentation nach dem
Schikanensystem ausgestattet ist Man fermentiert 120
Stunden bei 25° C unter Rühren und Belüften, worauf der dickbreiige Inhalt in einen größeren Fermenter
überfuhrt wird, der mit 140 Liter der gleichen sterilen
Nährlösung versehen ist Danach wird Spermöl in einer Konzentration von 2VoL-% (231) zugesetzt Nach
72stündigem Rühren und Lüften bei einem Gegendruck von 0,8 atü wird die Fermentation abgebrochen. Das
Erntegut wird über eine Druckfilternutzsche abgepreßt und der Mycelkuchen in einem Hordentrockner bei ca.
40° C getrocknet. Auf diese Weise erhält man 3,8 kg Trockenmycel, aus dem später die gewünschten
Substanzen isoliert werden.
Beispiel 2
Fermentation
Von einer auf gebrochenem Mais herangeführten Kultur von Clitopilus passeckerianus (NRRL 3100) wird
das Mycel mit steriler, physiologischer Kochsalzlösung abgespült Mit je 5 ml der erhaltenen Suspension
werden 4 Stück 500-ml-Erlenmeyer-Weithalskolben beimpft, die mit je 50 ml folgender steriler Fermentationsnähriösung beschickt sind.
| Preßhefeautolysat-Stickstoff | 1,5 g/l |
| Glucose | 30,0 g/i |
| Dextrin | 10,0 g/l |
| KH2PO4 | 4,0 g/l |
| (NH4)2SO4 | 5,0 g/l |
| mit Aqua dest. auf 1000 ml | |
| auffüllen; | |
| pH vor der Sterilisation: 6,0 |
| Sojabohnen-Stickstoff | 2,0 g/l |
| Rohrzucker | 20,0 g/l |
| Glucose | 20,0 g/l |
| mit Aqua dest auf 1000 ml | |
| auffüllen; | |
| pH vor der Sterilisation: 6,5 | |
| CaCO3 (getrennt sterilisiert) | 5,0 g/l |
Die Kolben werden 100 Stunden auf einer Längsschüttelmaschine mit 10 cm Ausladung und 90 Bewegungen pro Minute bei 25°C geschüttelt worauf mit
dem Inhalt je 6 Stück 2-Liter-Erienmeyerkolben
beimpft werden, die mit je 400 ml der gleichen sterilen Fermentationsnährlösung beschickt sind. Nach 36stündigem Schütteln unter den obigen Bedingungen wird
der erhaltene Mycelbrei in ein 100 Liter fassendes Submersgefäß überführt das 50 Liter folgender steriler
Nach 120stündiger Fermentation wird mit dem Inhalt
dieses Gefäßes ein Submerstank beimpft, der 1000 Liter
der letztgenannten Fermentationsnähriösung enthält Es wird 96 h belüftet und gerührt (0,5 Liter Luft/Liter
Nährlösung/min; 210 Umdrehungen/min.) Danach wird Spermöl in einer Konzentration von 2J5 VoL-% (2^ 1)
so zugesetzt Nach einem anfänglichen Absinken des pH-Wertes auf 5,5 steigt dieser nach 48 Stunden auf 6,8
an, hat nach 72 Stunden einen Wert von 6,5 und erreicht
gegen Fermeniationsende 7,ö. Das Myceigewicht beträgt nach 48 Stunden 18 g/L Das Mycel wird über
einen SaugzeUennindfflter abfUtriert und in einem
Hordentrockner bei ca 400C getrocknet Auf diese Weise erhält man 193 kg getrocknetes MyceL welches
den Hauptanteil der gewünschten biologisch aktiven Verbindungen enthält
Beispiel 3
Fermentation
Von einer auf gebrochenem Mais herangeführten es Kultur von Clitopilus passeckerianus (NRRL 3279) wird
das Mycel mit physiologischer Kochsalzlösung abgespült Mit je 7 ml der erhaltenen Suspension werden 2
Stück 500-ml-Erlenmeyerkolben beimpft, die mit je
230233/18
50 ml der im Beispiel 2 beschriebenen Fermentationslösung
für die Vorstufe beschickt sind.
Die Kolben werden auf einer Rundschüttelmaschine mit 40 mm Hub und 260 U/Minute bei 25° C während
120 Stunden geschüttelt, worauf mit dem Inhalt 4 Stück
2-Liter-Erlenmeyerkolben beimpft werden, die mit je 500 ml der gleichen sterilen Fermentationslösung
beschickt sind. Nach 48stündigem Schütteln unter den obigen Bedingungen wird der erhaltene Mycelbrei in
einen 12 Liter fassenden Glasfermenter überführt, der mit 7,5 Liter folgender steriler Nährlösung gefüllt ist:
Sojabohnenstickstoff 1,8 g/Liter
Rohrzucker 30,0 g/Liter
Glukose 10,0 g/Liter
Spermö! 5,0 g/Liter
mit Aqua dest. auf 1000 ml
auffüllen,
pH vor Sterilisation 6,5, CaCO3
(getrennt sterilisiert)
Nach 120stündiger Fermentation unter Belüftung und Rührung bei 25° C beträgt das Trockenmycelgewicht ca.
12 g/Liter. Das Mycel wird über einer Drucknutsche
abfiltriert, mit Wasser nachgewaschen und in einem Hordentrockner getrocknet Das so erhaltene Produkt'
wird in der nachfolgend beschriebenen Weise für die Isolierung der ungesättigten Pleuromutilinfettsäureester
eingesetzt.
Beispiel 4
Fermentation
Fermentation
Von einer auf gebrochenem Mais herangeführten Kultur von Clitopilus prunulus (Scop, ex Fr.) Kummer
(NRRL 3473) werden analog Beispiel 3 2 Liter Mycelbrei als Impf gut für einen 12 Liter fassenden
Glasfermenter bereitet Die Nährlösung für die Hauptstufe hat folgende Zusammensetzung:
Enzymatische Acetylierung von Mutilin zu
14-Desoxy- 14-acetoxymutilin
14-Desoxy- 14-acetoxymutilin
Mit einer auf gebrochenem Mais herangeführten Kultur von Clitopilus passeckerianus (NRRL 3100)
werden 120 ml der in Beispiel 2 genannten Fermentationsnährlösung in einem 500-ml-Erlenmeyerkolben
beimpft und 72 Std. bei 24° C unter guter belüftung geschüttelt. Mit dieser Impfgutstufe werden 20 Stück
500-ml-Erlenmeyerkolben beschickt, welche mit je 50 ml folgender Nährlösung gefüllt sind:
| N als Cornsteep solids | 1,2 g/l |
| Glucose | 50,0 g/l |
| MgSO4 · 7 H2O | 2,0 g/l |
| mit Aqua dest. auf 1000 ml | |
| auffüllen; | |
| pH vor der Sterilisation: 6,0 |
3,0 g/Liter 20 Die auf dieser Nährlösung bei 24° C und guter Belüftung während 72 Stunden herangeführte Hauptstufe
wird steril über Glasfiltemutschen abgesaugt und das Mycel jedes Kolbens in je 50 ml Replacementmedium
suspendiert, das aus Phosphatpuffer mit pH-Wert 6,5
(0,066 molar) und einer Kohienstoffquelle besteht. Als
Kohlenstoffquelle wird Maisöl in einer Konzentration von 2% verwendet. Die Substratkonzentration beträgt
3 g Mutilin pro Liter Kultur. Nach 48stündiger Belüftung der Ansätze bei 24° C ist das eingesetzte
Mutilin zu 95% in 14-Desoxy-14-acetoxymutilin umgewandelt.
N als Cornsteep Solids 1,0 g/Liter
Giukose 50,0 g/Liter
MgSO4 · 7 H2O 0,5 g/Liter
mit Aqua dest auf 1000 ml
auffüllen,
pH vor Sterilisation 6,5,
Nach 144stündiger Fermentation analog Beispiel 3 wird ein Trockenmycelgewicht von 14.5 g/Liter erreicht Nach der Ernte des Mycels werden aus diesem
die ungesättigten Pleuromutilinfettsäureester in nachfolgend beschriebener Weise isoliert
Beispiel 5
Fermentation
Es wird anstelle von Clitopflus prunulus der Stamm
Cutop3us pinsitus (Fr.) ss. Romagn. Joss. (NRRL 3474)
eingesetzt und analog Beispiel 4 vorgegangen.
Nach 144stündiger Fermentation in der Hauptstufe wird ein Trockenmycelgewicht von 12^ g/Liter erreicht Aus dem getrockneten Mycel werden die ■
ungesättigten Pleuromutilinfettsäureester in nachfol gend beschriebener Weise isoBert
Isolierung von 14-Desoxy-14-acetoxymuti!in,
gebildet durch enzymatische Acetylierung von
Mutilin im Replacementverfahren
Der Inhalt von 5 Kolben (ca. 230 ml), die (entsprechend
Beispiel 2) zu 95% acetyliertes Mutilin enthalten,
wird homogenisiert und dreimal mit je 115 ml
Essigsäureäthylester extrahiert Die vereinigten und entwässerten Extrakte werden mit 0,5 Gew.-% Aktiv
kohle behandelt, auf ca. 5 ml Vakuum eingeengt mit
15 ml Diisopropyläther versetzt und in den Eisschrank
gestellt Kurz darauf fällt das H-Desoxy-^acetoxymutilin
in kristalliner Form aus. Es wird anschließend zweimal umkristallisiert Die Ausbeute beträgt 401 mg
Kristallisat mit einem Smp. von 183° C (unkorr.).
. Beispiel 8
Isolierung der ungesättigten Pleuromutilinfettsäüreesierynddcsl4-Descxy-14-aceioxyiii'jti!ii!s
1 kg TrockenmyceL hergestellt gemäß Beispiel 1 oder 2, wird fünfmal mit je 5 Liter 60%igem Methanol
extrahiert, worauf man den Methanolextrakt zweimal mit je 2J5 Liter Petroläther entfettet Nach Entwässern
und weitgehendem Einengen der Petrolätherphase wird der «dickflüssige-Rückstand fiber IO Stufen zwischen
95%igem Methanol und Petroläther (Verhältnis 1 :1) verteilt Die 3. bis 8. Stufe enthält die Pleuromutilinfettsäureester, die 9. und 10. Stufe das 14-Desoxy-14-acetoxymutilin. Die 3. bis 8. Stufe wird vereinigt, entwässert,
soweit als möglich eingeengt, mit der lOfachen Menge Hexan versetzt, gekühlt und von ausgeschiedenem
Material abffltriert Nach abermaligem Einengen bleibt ein gelbes, dickflüssiges öl zurück. Dieses wird in
Diisopropyläther aufgenommen und mit 10 Gew.-%
-
60
Aktivkohle behandelt. Hierbei erhält man ein dünnschichtchromatographisch
reines Gemisch der verschiedenen Fettsäureester des Pleuromutilins. Die Ausbeute
beträgt 5,3 g.
Um Näheres über die prozentuelle Zusammensetzung zu erfahren, wird 1 g des Substanzgemisches in
20 ml Petroläther gelöst, mit 10 ml methanolischer Kalilauge überschichtet und eine Stunde unter ständigem
Schütteln und Lichtausschluß bei -5°C gehalten. Die Petrolätherphase wird mit l°/oiger Salzsäure sowie
mit Wasser gewaschen und getrocknet, worauf man die Methylester der jeweiligen Fettsäuren erhält. Ein Teil
der Methylester wird gaschromatographisch analysiert, wobei sich folgende Zusammensetzung ergibt:
40—45% ölsäuremethylester
45—50% Linolsäuremethyiesier
ca. 5% Gadoleinsäuremethylester
45—50% Linolsäuremethyiesier
ca. 5% Gadoleinsäuremethylester
200 mg Estergemisch werden in 20 ml Essigester mit 2,0 g Palladiumkohle hydriert. Die Wasserstoffaufnahme
kommt bereits nach 30 Minuten zum Stillstand. Eine IR-Aufnahme der hydrierten Ester zeigt, daß die
Verbindungen durchhydriert sind. Die Ester werden anschließend gespalten und die entstandenen Säuren
papierchromatographisch untersucht. Das Gemisch besteht zu über 90% aus einer C|g-Säure, der Rest aus
einer C2o-Säure.
Das bei einer Umesterung der Fettsäureester entstandene Pleuromutilin wird aus der Methanolphase
isoliert und mit einem durch Fermentation gewonnenen
Material im Smp., Ir und UV verglichen. Die Verbindungen sind identisch. Auch liefert eine alkalische
Verseifung in jedem Fall Mutilin.
Die 9. und 10. Stufe der Verteilung, welche das 14-Desoxy-14-acetoxymutilin enthält, wird entwässert
und im Vakuum stark eingeengt. Die weitere Reinigung erfolgt durch Chromatographie an einer Kieselgelsäule.
Das Verhältnis von aufgegebenem Material zu Adsorbens beträgt 1 :100. Man eluiert mit Chloroform und
erhält nach Einengen der aktiven Fraktionen und Zugabe von Diisopropyläther die gewünschte Verbindung
in kristalliner Form. Sie wird zweimal aus Diisopropyläther umkristallisiert und getrocknet. Ausbeute:
1,23 g mit einem Smp. von 183°C(unkorr.).
Vergleichsversuch
Die biologische Aktivität von 14-Desoxy-14-acetyl-mutilin
Die Untersuchungen der biologischen Aktivität von H-DesoxyH-acetyl-mutilin im Vergleich zu den
bekannten Verbindungen erfolgt im üblichen Reihenverdünnungstest mit dem Faktor 0,5 bei einer
Anfangskonzentration von lOOy/ml in der Bouillon der
jeweiligen Substanz. Die Einsaat beträgt jeweils etwa 105 Keime/ml.
Die Ergebnisse der Untersuchung können der nachfolgenden Versuchstabelle entnommen werden, in
welcher jeweils die minimale Hemmdosis in μg/m!
angegeben ist.
| Testorganismus | Minimale Hemmdosis | in ug/ml | 14-Desoxy- |
| Pleuromutilin | Mutilin | 14-acetylmutilin | |
| 0,08 | |||
| Staph. aureus SG 511 | 0,8 | >100 | 0,16 |
| Staph. aureus 209 P | 1,6 | >100 | 0,8 |
| Staph. aureus R I | 3,1 | >!00 | 0,06 |
| Staph. aureus R Il | 0,8' | >100 | 0,12 |
| Staph. aureus R IH | 3,1 | >100 | 0,12 |
| Staph. aureus 2595 | 0,8 | >100 | |
Claims (3)
1. Pleuromutilin-Derivate der Formel I,
CH3
CH=CH,
CH3 OH
CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-COO-,
()CH = CH-CH2-CH=CH-(CH2)7-COO-,
CH = CH-(CH2)7-COO-Gruppe
worin R für eine
oder für Wasserstoff steht
2. Verfahren zur Herstellung und Isolierung von Pleuromutilin-Derivaten der Formel I,
0-C-CH2-R
O CH
CH,
CH=CH2
worin R für eine
CH3
CH3-(CH2J7 - CH = CH - (CH2)? - COO-,
CH3-(CH2)4-CH = CH-CH:>-CH=CH-(CH2)7-COO-CH3
- (CH2)s - CH = CH - (CH2J7 - COO-Gruppe
oder für Wasserstoff steht,
dadurch gekennzeichnet, daß man
a) zur Herstellung von Verbindungen der Formel I, worin R obige Bedeutung besitzt, einen Organismus der Spezies Clitopilus passeckerianus (PiL) Sing. (NRRL 3100) bzw. dessen Variante (NRRL 3279), der Spezies Clitopilus prunulus (Scop, ex Fr.) Kummer (NRRL 3473) sowie der Spezies Clitopilus pinsitus (FR). ss. Romagn. Joss. (NRRL 3474) bzw. deren Varianten oder Mutanten in einer wäßrigen, eine Stickstoff- und eine Kohlenstoffquelle enthaltenden Nährlösung in Gegenwart pflanzlicher und tierischer öle züchtet und zur Isolierung aus dem gewonnenen Rohprodukt die Verbindungen in an sich bekannter Weise abtrennt oder
a) zur Herstellung von Verbindungen der Formel I, worin R obige Bedeutung besitzt, einen Organismus der Spezies Clitopilus passeckerianus (PiL) Sing. (NRRL 3100) bzw. dessen Variante (NRRL 3279), der Spezies Clitopilus prunulus (Scop, ex Fr.) Kummer (NRRL 3473) sowie der Spezies Clitopilus pinsitus (FR). ss. Romagn. Joss. (NRRL 3474) bzw. deren Varianten oder Mutanten in einer wäßrigen, eine Stickstoff- und eine Kohlenstoffquelle enthaltenden Nährlösung in Gegenwart pflanzlicher und tierischer öle züchtet und zur Isolierung aus dem gewonnenen Rohprodukt die Verbindungen in an sich bekannter Weise abtrennt oder
b) zur Herstellung von M-Desoxy-H-acetoxymutilin
der Formel Ia
CH3 (Ia)
CH=CH2
CH3 OH
Mutilin mit Hilfe eines Organismus der Spezies ClitopUus passeckerianus (PiL) Sing. (NRRL
3100) bzw. dessen Variante (NRRL 3279), der Spezies Clitopilus prunulus (Scop, ex Fr.)
Kummer (NRRL 3473) sowie der Spezies Clitopilus pinsitus (Fr.) ss. Romagn. Joss. (NRRL
3474) bzw. deren Varianten oder Mutanten oder mit Enzymextrakten bzw. Trockenmycelen
dieser Mikroorganismen in einer wäßrigen, eine Stickstoff- und eine Kohlenstoffquelle enthaltenden
Nährlösung enzymatisch acetyliert, und in Isolierung aus dem gewonnenen Rohprodukt
die Verbindung in an sich bekannter Weise abtrennt
3. Tierarzneimittel enthaltend mindestens ein Pleuromutilin-Derivat nach Anspruch 1.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT700469A AT301752B (de) | 1969-07-21 | 1969-07-21 | Verfahren zur Herstellung neuer Pleuromutilin-Derivate |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2035814A1 DE2035814A1 (de) | 1971-02-18 |
| DE2035814B2 DE2035814B2 (de) | 1980-05-29 |
| DE2035814C3 true DE2035814C3 (de) | 1982-08-19 |
Family
ID=3591824
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2035814A Expired DE2035814C3 (de) | 1969-07-21 | 1970-07-18 | Pleuromutilin-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3716579A (de) |
| JP (2) | JPS529759B1 (de) |
| AT (1) | AT301752B (de) |
| CA (1) | CA940851A (de) |
| CS (1) | CS149921B2 (de) |
| DE (1) | DE2035814C3 (de) |
| DK (1) | DK138315B (de) |
| ES (1) | ES381941A1 (de) |
| FR (1) | FR2059539B1 (de) |
| GB (1) | GB1303038A (de) |
| IL (1) | IL34955A (de) |
| NL (1) | NL167198C (de) |
| PL (1) | PL85120B1 (de) |
| SE (2) | SE388628B (de) |
| ZA (1) | ZA704964B (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4395491A (en) | 1980-02-15 | 1983-07-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Method for isolating solid matter from a salinomycin culture broth |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3979423A (en) * | 1969-07-25 | 1976-09-07 | Biochemie Gesellschaft M.B.H. | 14-Desoxy-14-tosyloxyacetoxy-mutilin |
| FR2526019A1 (fr) * | 1982-04-28 | 1983-11-04 | Sandoz Sa | Nouveaux derives de la pleuromutiline, leur preparation et leur utilisation comme medicaments |
| JP2755594B2 (ja) * | 1988-03-30 | 1998-05-20 | 株式会社 東芝 | セラミックス回路基板 |
| ES2205072T3 (es) * | 1996-01-03 | 2004-05-01 | Smithkline Beecham Plc | Derivados carbamoiloxi de mutilina y su uso como agentes antibacterianos. |
| RU2116867C1 (ru) * | 1997-09-12 | 1998-08-10 | Всероссийский научно-исследовательский институт авиационных материалов | Устройство для получения отливок с направленной и монокристаллической структурой |
| US6372462B2 (en) * | 1999-10-15 | 2002-04-16 | Medmyco Ltd. | Process for producing, methods and compositions of cholesterol lowering agents from higher basidiomycetes mushrooms |
| TWI260220B (en) * | 1999-11-22 | 2006-08-21 | Novartis Ag | A pharmaceutical composition for the transdermal treatment of bacterial infections in animals |
| BG64840B1 (bg) * | 2001-04-09 | 2006-06-30 | "Балканфарма-Разград" АД | Метод за получаване на плеуромутилин |
| GB0218578D0 (en) * | 2002-08-09 | 2002-09-18 | Glaxo Group Ltd | Novel method |
| CN100361976C (zh) * | 2005-12-06 | 2008-01-16 | 江苏赛奥生化有限公司 | 泰妙菌素合成过程中用的截短侧耳素原料的制备方法 |
-
1969
- 1969-07-21 AT AT700469A patent/AT301752B/de not_active IP Right Cessation
-
1970
- 1970-07-01 GB GB3202070A patent/GB1303038A/en not_active Expired
- 1970-07-10 NL NL7010227.A patent/NL167198C/xx not_active IP Right Cessation
- 1970-07-17 ES ES381941A patent/ES381941A1/es not_active Expired
- 1970-07-18 DE DE2035814A patent/DE2035814C3/de not_active Expired
- 1970-07-20 US US00056752A patent/US3716579A/en not_active Expired - Lifetime
- 1970-07-20 CA CA088,573A patent/CA940851A/en not_active Expired
- 1970-07-20 IL IL34955A patent/IL34955A/xx unknown
- 1970-07-20 DK DK376170AA patent/DK138315B/da unknown
- 1970-07-20 SE SE7009977A patent/SE388628B/xx unknown
- 1970-07-20 ZA ZA704964A patent/ZA704964B/xx unknown
- 1970-07-20 JP JP45062885A patent/JPS529759B1/ja active Pending
- 1970-07-20 CS CS5109A patent/CS149921B2/cs unknown
- 1970-07-20 FR FR707026640A patent/FR2059539B1/fr not_active Expired
- 1970-07-20 PL PL1970142186A patent/PL85120B1/pl unknown
-
1973
- 1973-08-09 SE SE7310910A patent/SE402451B/xx unknown
- 1973-09-27 JP JP48108051A patent/JPS5137350B1/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| NICHTS-ERMITTELT |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4395491A (en) | 1980-02-15 | 1983-07-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Method for isolating solid matter from a salinomycin culture broth |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL7010227A (de) | 1971-01-25 |
| JPS529759B1 (de) | 1977-03-18 |
| GB1303038A (en) | 1973-01-17 |
| PL85120B1 (de) | 1976-04-30 |
| ES381941A1 (es) | 1973-04-16 |
| DE2035814A1 (de) | 1971-02-18 |
| IL34955A (en) | 1975-02-10 |
| NL167198C (nl) | 1981-11-16 |
| CA940851A (en) | 1974-01-29 |
| IL34955A0 (en) | 1970-09-17 |
| SE402451B (sv) | 1978-07-03 |
| DK138315B (da) | 1978-08-14 |
| NL167198B (nl) | 1981-06-16 |
| DE2035814B2 (de) | 1980-05-29 |
| US3716579A (en) | 1973-02-13 |
| DK138315C (de) | 1979-01-29 |
| SE388628B (sv) | 1976-10-11 |
| FR2059539B1 (de) | 1974-02-22 |
| CS149921B2 (de) | 1973-08-23 |
| JPS5137350B1 (de) | 1976-10-15 |
| FR2059539A1 (de) | 1971-06-04 |
| ZA704964B (en) | 1972-02-23 |
| AT301752B (de) | 1972-09-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2524355C2 (de) | Tetrahydropyranderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| DE2634499C2 (de) | Tylosin-Acylderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen und Tierfutterzubereitungen | |
| DE3006215A1 (de) | Verfahren zur herstellung von monacolin k | |
| EP0035119B1 (de) | Polyätherverbindungen und ihre Herstellung, entsprechende Präparate und die Verwendung dieser Produkte als Heilmittel oder wachstumsfördernde Mittel bei Wiederkäuern | |
| DE2035814C3 (de) | Pleuromutilin-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung | |
| DE3502685A1 (de) | Forskolin, seine analoge und derivate, verfahren zu deren herstellung mittels mikrobieller umwandlungen und die anwendung dieser verbindungen als arzneimittel | |
| CH647749A5 (de) | Salze und ester von monacolin-k, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische praeparate. | |
| DE69818482T2 (de) | Physiologisch aktive substanzen tkr2449, verfahren zu ihrer herstellung und mikroorganismen | |
| DE68903907T2 (de) | Cyclisches peptid, seine herstellung und seine verwendung zur behandlung von cardiovasculaeren stoerungen. | |
| DE2239321A1 (de) | Herstellung von cephalosporin c | |
| DE60112482T2 (de) | Verbindungen mit antioxidierender Wirkung, diese enthaltende Zusammensetzungen zur Nahrungsmittelergänzung sowie Verfahren zu deren Herstellung | |
| DE2028403B2 (de) | Pepstatin | |
| EP0133971A1 (de) | Antibiotikum, dessen Herstellung sowie dessen Verwendung | |
| EP0482543B1 (de) | Oasomycine, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| DE69214737T2 (de) | Antibiotika NK374186A, NK374186B, NK374186B3 und NK374186C3, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| DE2209018A1 (de) | Neues Antibioticum A-4696 | |
| CH648846A5 (de) | Verfahren zur herstellung von mutterkornalkaloiden, insbesondere ergokornin und beta-ergokryptin. | |
| DE2525095C2 (de) | Polyetherantibiotika A-28086 A, B und D, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Futtermittel | |
| DE3248280A1 (de) | Salbomycin und verfahren zu seiner herstellung | |
| AT215077B (de) | Verfahren zur Herstellung 5, 6-Dimethylbenzimidazolcobalamin | |
| DE3416854A1 (de) | Verfahren zur herstellung von ubichinon-10 | |
| DE2921022C2 (de) | ||
| DE3248420C2 (de) | ||
| DE2652681A1 (de) | Verfahren zur herstellung des antibioticums 924a1 | |
| EP1049707A1 (de) | Ustilipide, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8227 | New person/name/address of the applicant |
Free format text: BIOCHEMIE GMBH, 6250 KUNDL, TIROL, AT |
|
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |