DE19930253A1 - Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von Biomolekülen - Google Patents
Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von BiomolekülenInfo
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Abstract
Die Erfindung beschreibt eine Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen und ist anwendbar insbesondere bei der ein- oder zwei-dimensionalen Trennung von Biomolekülen in Gelen durch Elektrophorese in einer Elektrophoreseapparatur, beispielsweise der Auftrennung von Proteinen, Glycoproteinen, Lipoproteinen, Nukleinsäuren oder Zellkomplexen in Gelen. DOLLAR A Die Kombinationskammer zur zwei-dimensionalen Trennung von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen in waagerecht übereinander angeordneten Gelen durch Elektrophorese weist eine Rückwandplatte und eine Deckplatte auf, wobei zwischen Rückwandplatte und Deckplatte mindestens zwei Umlenkelemente zur Führung von Isolierelementen angeordnet sind. DOLLAR A Es wird weiterhin das Verfahren zur ein-dimensionalen sowie zwei-dimensionalen Trennung und die Rezeptur spezifischer Gele beschrieben.
Description
Die Erfindung betrifft eine Kombinationskammer und
Verfahren zur Trennung von Biomolekülen oder anderen
Stoffgemischen und ist anwendbar insbesondere bei der
ein- oder zwei-dimensionalen Trennung von Biomolekülen
in Gelen durch Elektrophorese in einer
Elektrophoreseapparatur, beispielsweise der Auftrennung
von Proteinen, Glycoproteinen, Lipoproteinen,
Nukleinsäuren oder Zellkomplexen in Gelen.
Aus der DE 198 31 210 ist ein Verfahren und eine
Vorrichtung zur zwei-dimensionalen Trennung von
Biomolekülen in Gelen durch Elektrophorese in einer
Elektrophoreseapparatur bekannt, welche insbesondere
der Auftrennung von beispielsweise Proteinen,
Glycoproteinen, Lipoproteinen, Nukleinsäuren oder
Zellkomplexen dienen. Die dort beschriebene Vorrichtung
ist dadurch gekennzeichnet, daß eine Elektrophorese-
Kombikammer einen Kern mit Kühlelementen aufweist,
wobei die Kühlelemente unter den beidseitig des Kerns
durch innere Platten und äußere Platten im
Zusammenwirken mit entfernbaren oder schaltbaren
Isolierelementen gebildeten Gelkammern und
Puffergefäßen angeordnet sind.
Das Verfahren basiert darauf, daß in der
Elektrophorese-Kombikammer senkrecht nebeneinander
angeordnete Gele bearbeitet werden.
Eine Behandlung von waagerecht übereinander
angeordneten Gelen ist mit der beschriebenen Lösung
nicht möglich.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine
Kombinationskammer und ein Verfahren zur Trennung von
Biomolekülen zu schaffen, mit welchen mit einfachen
Mitteln in einer einzigen Apparatur mit
selbstgegossenen Gelen und/oder getrockneten Fertig
gelen effektive Gelelektrophoresen der ersten und zwei
ten Dimension vollautomatisch durchgeführt werden
können. Es ist weiterhin Aufgabe der Erfindung,
spezifische Fertiggele anzugeben.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch die
Merkmale in den Ansprüchen 1, 10, 19 und 20.
Zweckmäßige Ausgestaltungen der Erfindung sind in den
Unteransprüchen enthalten.
Ein besonderer Vorteil der Erfindung besteht darin, daß
eine Vollautomatisierung der gesamten 2DE einfach
durchgeführt werden kann, indem die Gele für die
Trennung in der ersten Dimension und die Gele für die
Trennung in der zweiten Dimension waagerecht
zueinander, also übereinander angeordnet werden.
Diese waagerechte Anordnung wird dadurch ermöglicht,
daß die Isolierelemente zwischen den Gelen der ersten
Dimension und den Gelen der zweiten Dimension ebenfalls
in einem definierten Bereich waagerecht verlaufen,
gleichwohl jedoch über Umlenkelemente zur Führung nach
obenhin aus der Kombinationskammer herausgezogen werden
können.
Ein weiterer Vorteil der Erfindung besteht darin, daß
mit der gleichen Kombinationskammer auch die ein-
dimensionale Trennung durchgeführt werden kann, indem
anstelle des Gels für die Trennung in der ersten
Dimension sowie des Isolierelementes ein Kamm mit
Probentaschen für verschiedene Proben in das SDS-Gel
eingesetzt und dieses auspolymerisiert wird, der Kamm
nach dem Auspolymerisieren entfernt, die Proben in die
entstandenen Aussparungen eingebracht und nachfolgend
die ein-dimensionale Elektrophorese durchgeführt wird.
Hierzu wird auf den Einsatz des Isolierelementes
verzichtet und statt dessen ein Kamm mit Probentaschen
beim Auspolymerisieren des SDS-Geles mit eingesetzt,
der nach Auspolymerisierung des Geles herausgenommen
wird, so daß nunmehr multiple Ports für das Auftragen
verschiedener Proben im Gel enthalten sind. Diese
können alle parallel zueinander in der ein-
dimensionalen Elektrophorese getrennt werden. Die
Konstruktion der Kombinationskammer bleibt also
erhalten und es können sowohl ein-dimensionale wie
zwei-dimensionale Gele im gleichen Kammersystem
durchgeführt werden. Vorteilhaft ist auch, daß lange
Laufstrecken, z. B. 32 cm lange ein-dimensionale Gele,
durchgeführt werden können.
Die Erfindung soll nachstehend anhand von in den
Figuren dargestellten Ausführungsbeispielen näher
erläutert werden. Es zeigen die Fig. 1 bis 5:
eine Prinzipdarstellung der Kombinationskammer in den einzelnen Komplettierungsstufen.
eine Prinzipdarstellung der Kombinationskammer in den einzelnen Komplettierungsstufen.
Die Kombinationskammer besteht aus zwei Teilen, die
übereinander angeordnet sind, dem oberen IEF-Teil für
die Durchführung der IEF-Elektrophorese in der ersten
Dimension und dem unteren Teil für die Durchführung der
SDS-Elektrophorese in der zweiten Dimension.
Die Kombinationskammer besteht aus mehreren
Bestandteilen, die beispielsweise durch Verschraubung
oder Klemmen zusammengesetzt werden. Die Rückwandplatte
28A bildet mit dem oberen Pufferreservoir 29 der
zweiten Dimension sowie den Gießgefäßen 30 zum Gießen
der zweiten Dimension, dem Puffergefäß 31 zum Einfüllen
des Puffers der zweiten Dimension eine Einheit. Die als
Glasplatte ausgebildete Deckplatte 28B wird mit der
Rückwandplatte 28A und dem oberen Pufferreservoir 29
z. B. durch Verschraubung verbunden. Flache Dichtungen
23 rechts und links dichten nach außen ab und legen die
Dicke der Gele zwischen den Platten 28A und 28B fest.
Die Platte 28B hat eine Höhe, die sich aus der Höhe der
Platte 28A und der Höhe des oberen Pufferreservoirs 29
ergibt. Die Platten 28A, 28B können transparent sein.
Insbesondere die obere Deckplatte 28B sollte
durchsichtig sein, um die einzelnen Verfahrensschritte
beobachten zu können.
Zwischen den Umlenkelementen 22 befindet sich U-förmig
ein im vorliegenden Ausführungsbeispiel als
Schlauchdichtung ausgebildetes Isolierelement 24, daß
das Gel 25 der ersten Dimension vom Gel 36 der zweiten
Dimension trennt. Neben den Umlenkelementen 22 befinden
sich die Elektroden 26 und 27 für die Elektrophorese
der ersten Dimension.
Die zusammengesetzte Konstruktion aus den Platten 28A,
28B und den oberen Reservoirs wird in den unteren
Puffertank 32 der zweiten Dimension gestellt. Dort
befindet sich eine Dichtung 33, die z. B. pneumatisch
angehoben werden kann (Zustand 33a), um den Leerraum
zwischen den Platten 28A und 28B nach unten
abzudichten, damit das Gel 36 der zweiten Dimension
über eine Verbindung (z. B. einen Schlauch) aus dem
Gießgefäß 30 gegossen werden kann. Das Pufferfüllgefäß
31 dient dem Füllen des unteren Puffertanks 32. In dem
Puffergefäß 29 und dem Puffertank 32 befinden sich die
Elektroden 38 und 39 der zweiten Dimension.
Nachfolgend soll das Zusammensetzen der
Kombinationskammer beschrieben werden.
Zur Vorbereitung der 2DE werden auf eine Glasplatte
28B, aus der zwei Umlenkelemente 22, z. B. Bolzen,
herausragen, rechts und links jeweils Flachdichtungen
23 als Spacer aus Kunststoff gelegt (vgl. Fig. 1). Die
Bereiche der ersten und zweiten Dimension sind
lediglich durch ein Isolierelement 24, hier einen
dehnbaren Kunststoffschlauch voneinander getrennt, der
U-förmig zwischen den zwei Umlenkelementen 22 so
angeordnet ist, daß sich eine gerade Abgrenzung nach
unten ergibt. Er ragt an beiden Enden der oberen Kammer
heraus und läßt sich leicht herausziehen. Zwischen den
Umlenkelementen 22 wird im vorliegenden
Ausführungsbeispiel ein IEF-Fertiggelstreifen 25
positioniert (weiße waagerechte Fläche) und in direkten
Kontakt mit den beiden Elektroden 26, 27 gebracht, die
bei den Umlenkelementen 22 durch die Glasplatte 28B
ragen und die Elektrophorese in der ersten Dimension
ermöglichen. Dann wird die obere Glasplatte 28B
aufgelegt (Fig. 2) und im vorliegenden
Ausführungsbeispiel mittels Klammern mit der unteren
Rückwandplatte 28A und dem oberen Pufferreservoirs 29
zusammengehalten. Das Glasplattensandwich wird darauf
in den Puffertank 32 gestellt (Fig. 3). Das Gießgefäß
30 dient zum Gießen des SDS-PAGE-Geles und das
Reservoir 29 und der Puffertank 32 als Pufferreservoir
für die SDS-PAGE, wobei der Puffertank 32 über eine
Verbindungsleitung aus Pufferfüllgefäß 31 gefüllt wird.
Im Puffertank 32 befindet sich eine Dichtung 33, die
beim Abdichten den Schlitz zwischen den beiden
Glasscheiben 28A, 28B an der Unterseite verschließen
kann. In Fig. 3 ist sie im nicht-abdichtenden Zustand
dargestellt.
Die Vorbereitung und Durchführung der Elektrophorese
verläuft im vorliegenden Ausführungsbeispiel wie folgt:
Das IEF-Gel 25 wird zur Rehydratisierung mit
Rehydratisierungspuffer zwischen den Glasplatten 28A,
28B im Raum 34 überschichtet und rehydratisiert. Nach
der Rehydratisierung (<2 h) wird der überschüssige
Puffer entfernt. Dann wird die Probe in eine Aussparung
35 eingebracht, deren Platz durch Einbringung eines
Spacer-Einsatzes während der Rehydratisierung
ausgespart blieb. Dann wird die Elektrophorese durch
Anlegen einer Spannung zwischen den Elektroden 26, 27
durchgeführt. Nach der Durchführung der IEF-
Elektrophorese wird das IEF-Gel 25 durch Zusatz von
Reequilibrierungspuffer, der in Raum 34 eingebracht
wird, umgepuffert (30 min. bei pH 6,9).
Das SDS-Gel 36 für die zweite Dimension wird vor, nach
oder während der Durchführung der ersten Dimension
gegossen, indem die Gellösung über das Gießgefäß 30
eingefüllt wird und durch eine Leitung nach unten
zwischen die Glasplatten 28A, 28B geleitet wird (Fig.
4). In diesem Zustand dichtet die Dichtung 33A das
Glasplatten-Sandwich nach unten ab, so daß die
Gellösung nicht auslaufen kann. Das Gel 36 wird
zwischen den Glasplatten 28A, 28H für mindestens zwei
Stunden polymerisiert. Danach wird die Abdichtung durch
die Dichtung 33A wieder aufgehoben und es resultiert
die Dichtung 33.
Nach Beendigung der IEF-Elektrophorese und erfolgter
Umpufferung des Gelstreifens 25 wird der
Reequilibrierungspuffer aus dem Raum 34 entfernt, der
Kunststoffschlauch 24 aus der Apparatur seitlich nach
oben z. B. mit einem Schrittmotor herausgezogen und der
entstehende Zwischenraum 37 zwischen erster und zweiter
Dimension mit Kontaktgel (z. B. Agarose-Sammelgel)
befüllt (Fig. 5). Dann wird Puffer in das
Pufferreservoir 29 und den Puffertank 32 eingefüllt und
über ein elektrisches Feld zwischen den Elektroden 38,
39 der zweiten Dimension in den mit Puffer gefüllten
Puffergefäßen 29, 32 die SDS-Elektrophorese in der
zweiten Dimension durchgeführt. Nach Ende der
Elektrophorese wird das Platten-Sandwich
herausgenommen, das Gel abgehoben und nach bekannten
Methoden entwickelt, z. B. mit Silbernitratlösung oder
Coomassielösung angefärbt.
Die Kühlung beider Elektrophorese-Dimensionen erfolgt
durch Eintauchen der Gelsandwiche in thermostatisierte
Pufferlösung der zweiten Dimension, die sich in dem
Puffertank 32 befindet, oder es werden die
Kammersandwiche durch an die Glasplatten 28A, 28B
angelegte Kühlkammern gekühlt.
Eine andere vorteilhafte Ausführung des
Isolierelementes 24 besteht darin, daß es sich um einen
Schlauch handelt, welcher zur Erhöhung der
Abdichtungseigenschaften zwischen den beiden Gelen
mittels eines Fluides aufgepumpt werden kann und um die
Entfernung des Schlauches nach der Durchführung der
ersten Dimension zu erleichtern evakuiert werden kann.
Eine weitere vorteilhafte Ausführung besteht darin, daß
ein dünnwandiger Schlauch als Isolierelement verwendet
wird. Der Schlauch kann in einer Rille in den Platten
28A und/oder 28B geführt sein und wird nach der
Durchführung der ersten Dimension evakuiert und
verbleibt aber in der Kombinationskammer. Der durch die
Evakuierung freiwerdende Raum zwischen den beiden Gelen
wird mit einem Kontaktgel befüllt. Der sonstige Ablauf
der zwei-dimensionalen Elektrophorese verläuft analog
dem beschriebenen.
Gegenstand der Erfindung sind auch neue IEF-Gele
(isoelektrische Fokussierungsgele) gemäß der Ansprüche
20 bis 25, die einen hervorragenden Trenneffekt für
Biomoleküle bieten, insbesondere für Proteine, und
einen erweiterten Auftrennungsbereich auf der sauren
und basischen Trennseite. Nachfolgend werden
ausgewählte Rezepte von Gelen dokumentiert.
3.5-4% Acrylamidgel mit 9 M Harnstoff mit minimal 2%
Ampholinen (WITA Ampholyte), pH-Bereich pH 2.0 bis 11.0
(mit oder ohne Zusatz von Detergenzien und
Thioharnstoff).
3.5-4% Acrylamidgel mit 9 M Urea mit minimal 2%
Ampholinen (WITA Ampholyte), pH-Bereich pH 2.0 bis 11.0
(mit oder ohne Zusatz von Detergenzien und
Thioharnstoff)
seitliche Immobilingele: 10% Acrylamidgel unter Zusatz von 50 mM bis 100 mM Immobilinen.
seitliche Immobilingele: 10% Acrylamidgel unter Zusatz von 50 mM bis 100 mM Immobilinen.
SDS-PAGE mit 15% Acrylamid, 0,1% SDS, Tris/HCl-Puffer,
pH 8,8.
9 M Harnstoff, 2-4% Ampholine, pH Bereich 2-11
(mit oder ohne Zusatz von Detergenzien und
Thioharnstoff).
3% SDS, 70 mM DTT, Tris/Phosphat, pH 6,8.
0,1% SDS, 1% Agarose, Tris/Phosphat, pH 6,8.
Puffer A: 4% (v/v) Phosphorsäure
Puffer B: 5% (v/v) Ethylendiamin.
Puffer B: 5% (v/v) Ethylendiamin.
SDS-Laufpuffer: 192 mM Glycin, 25 mM Tris-Base, 0,1% SDS.
| 1 h | 100 V |
| 1 h | 200 V |
| 17,5 h | 400 V |
| 1 h | 600 V |
| 0.5 h | 800 V |
| 10 min | 1500 V |
| 5 min | 2000 V |
| 30 min | 40 mM |
| 6 h | 80 mM |
Die Erfindung ist nicht beschränkt auf die hier darge
stellten Ausführungsbeispiele. Vielmehr ist es möglich,
durch Kombination und Modifikation der genannten Mittel
und Merkmale weitere Ausführungsvarianten zu realisie
ren, ohne den Rahmen der Erfindung zu verlassen.
22
Umlenkelement
23
Dichtung
24
Isolierelemente
25
Gel der ersten Dimension
26
Elektrode der ersten Dimension
27
Elektrode der ersten Dimension
28
A Rückwandplatte
28
B Deckplatte
29
oberes Pufferreservoir der zweiten Dimension
30
Gießgefäß der zweiten Dimension
31
Pufferfüllgefäß
der zweiten Dimension
der zweiten Dimension
32
unterer Puffertank der zweiten Dimension
33
Dichtung (kann z. B. pneumatisch angehoben werden)
33
A Dichtung (ist z. B. pneumatisch angehoben)
34
Raum zwischen Platten (
28
A,
28
B)
über der Schlauch (
24
),
der zur Rehydratisierung und Umpufferung des Gels der
ersten Dimension mit Puffer gefüllt wird
35
Aussparung im Gel der ersten Dimension für Probenauftrag
36
Gel der zweiten Dimension
37
Zwischenraum zwischen Platten (
28
A,
28
B), der mit
Kontaktgel gefüllt wird
38
Elektrode im oberen Puffergefäß für Elektrophorese
der zweiten Dimension
38
Elektrode im unteren Puffergefäß für
Elektrophorese der zweiten Dimension
Claims (25)
1. Kombinationskammer zur zweidimensionalen Trennung
von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen in
waagerecht übereinander angeordneten Gelen durch
Elektrophorese mit einer Rückwandplatte (28A) und
einer Deckplatte (28B), wobei zwischen
Rückwandplatte (28A) und Deckplatte (28B)
mindestens zwei Umlenkelemente (22) zur Führung von
Isolierelementen (24) angeordnet sind.
2. Kombinationskammer nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Kammeranordnung aus einem oberen IEF-Teil für
die Durchführung der IEF-Elektrophorese in der
ersten Dimension und einem unteren Teil für die
Durchführung der SDS-Elektrophorese in der zweiten
Dimension besteht und die Gele (25) und (36)
waagerecht übereinander angeordnet sind.
3. Kombinationskammer nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Platten (28A, 28B) nach außen durch Dichtungen
(23) abgedichtet werden und die Gestaltung der
Dichtungen (23) die Dicke der Gele (25, 36)
festlegt.
4. Kombinationskammer nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
neben den Umlenkelementen (22) Elektroden (26, 27)
für die Elektrophorese der ersten Dimension
eingelassen sind.
5. Kombinationskammer nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Platte (28A) aus Keramik oder Glas besteht und
die Platte (28B) eine transparente Platte ist.
6. Kombinationskammer nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Rückwandplatte (28A) mit dem oberen
Pufferreservoir (29) der zweiten Dimension sowie
dem Gießgefäß (30) und dem Pufferfüllgefäß (31)
eine Einheit bildet.
7. Kombinationskammer nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
die zusammengesetzte Konstruktion aus den Platten
(28A, 28B) und dem oberen Pufferreservoir (29), dem
Gießgefäß (30) und dem Pufferfüllgefäß (31) in den
unteren Puffertank (32) gestellt angeordnet ist.
8. Kombinationskammer nach Anspruch 7,
dadurch gekennzeichnet, daß
eine Dichtung (33) angeordnet ist, welche anhebbar
ausgebildet ist.
9. Kombinationskammer nach Anspruch 7,
dadurch gekennzeichnet, daß
in dem oberen Pufferreservoir (29) und in dem
unteren Puffertank (32) Elektroden (38, 39) für die
Elektrophorese der zweiten Dimension angeordnet
sind.
10. Verfahren zur zwei-dimensionalen Trennung von
Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen in Gelen
oder Polymerträgern durch Elektrophorese in einer
Elektrophorese-Kombinationskammer, wobei
- - ein IEF-Gel in der Kombinationskammer waagerecht angeordnet und zur Rehydratisierung mit Rehydratisierungspuffer überschichtet wird,
- - nachfolgend eine Biomolekül- oder Stoffgemischprobe am IEF-Gel eingebracht oder am IEF-Gel angebracht und die Elektrophorese der ersten Dimension durchgeführt wird,
- - vor, nach oder während der Durchführung der ersten Dimension ein SDS-Gel für die Durchführung der zweiten Dimension waagerecht zu dem IEF-Gel und von diesem isoliert in die Kombinationskammer eingebracht und das SDS-Gel polymerisiert wird,
- - nach Beendigung der IEF-Elektrophorese die Isolierung aufgehoben, in die hierdurch entstehenden Räumen Kontaktgel eingeführt, Pufferlösung zugeführt und die SDS-Elektrophorese in der zweiten Dimension durchgeführt wird und anschließend die Gele nach bekannten Methoden entwickelt und angefärbt werden.
11. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
nach der Rehydratisierung des IEF-Gels
überschüssige Pufferlösung entfernt wird.
12. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Aussparung im IEF-Gel durch Einbringen eines
Spacer-Einsatzes während der Rehydratisierung
erzeugt wird.
13. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
das IEF-Gel nach der Elektrophorese durch Zusatz
von Reequilibrierungspuffer umgepuffert wird.
14. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Isolierung durch Entfernen eines
Kunststoffschlauches durch Herausziehen mittels
eines Schrittmotors aufgehoben wird.
15. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Isolierung durch Evakuieren eines
Kunststoffschlauches aufgehoben wird, wobei der
Kunststoffschlauch wahlweise anschließend entfernt
wird oder in der Kombinationskammer verbleibt.
16. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Kühlung beider Elektrophorese-Dimensionen durch
Eintauchen der Gelsandwiche in thermostatierte
Pufferlösung der zweiten Dimension erfolgt.
17. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Kühlung beider Elektrophorese-Dimensionen durch
in der Kombinationskammer angeordnete Kühlkammern
realisiert wird.
18. Verfahren nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Biomolekül- oder Stoffgemischprobe in eine
Aussparung im IEF-Gel eingebracht wird.
19. Verfahren zur eindimensionalen Trennung von
Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen durch
Elektrophorese,
dadurch gekennzeichnet, daß
- - anstelle des Gels für die Trennung in der ersten Dimension sowie des Isolierelementes ein Kamm mit Probentaschen für verschiedene Proben in das SDS-Gel eingesetzt und dieses auspolymerisiert wird,
- - der Kamm nach dem Auspolymerisieren entfernt,
- - die Proben in die entstandenen Aussparungen eingebracht und
- - nachfolgend die ein-dimensionale Elektrophorese durchgeführt wird.
20. Hydratisiertes IEF-Gel hergestellt durch Gießen
eines Immobilin-Gels mit niedrigem pK auf einer
Gelpolymerisationsfolie und dessen Polymerisation,
Gießen eines Acrylamidgels auf dem Immobilin-Gel
und dessen Anpolymerisation, Gießen eines
Immobilin-Gels mit hohem pK auf dem Acrylamidgel
und dessen Anpolymerisation und nachfolgendes
Rehydratisieren mittels eines Rehydratisierungs
puffers, der 1-4% von solchen Ampholinen enthält,
die einen pH-Bereich innerhalb von 2-11
ermöglichen.
21. IEF-Gel nach Anspruch 20,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Immobilin-Gele aus 6-10%, vorzugsweise 10%,
Acrylamid unter Zusatz von 50-200 mM, vorzugsweise
50-100 mM, Immobilin hergestellt sind.
22. IEF-Gel nach Anspruch 20,
dadurch gekennzeichnet, daß
das Acrylamidgel aus 3,5-4,5%, vorzugsweise 3,5-4%,
Acrylamid hergestellt ist.
23. IEF-Gel nach Anspruch 20,
dadurch gekennzeichnet, daß
der Rehydratisierungspuffer von 5-9,5 M,
vorzugsweise 9 M, Harnstoff und gegebenenfalls
Detergenzien, vorzugsweise Tween 20, Chaps oder
Triton X-100 enthält.
24. IEF-Gel nach Anspruch 20,
dadurch gekennzeichnet, daß
vor der Rehydratisierung gegebenenfalls
Waschschritte durchgeführt werden und getrocknet
wird.
25. Trockengel hergestellt durch Gießen eines
Immobilin-Gels mit niedrigem pK auf einer
Gelpolymerisationsfolie und dessen Polymerisation,
Gießen eines Acrylamidgels auf dem Immobilin-Gel
und dessen Anpolymerisation, Gießen eines
Immobilin-Gels mit hohem pK auf dem Acrylamidgel
und dessen Anpolymerisation.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1999130253 DE19930253A1 (de) | 1999-06-25 | 1999-06-25 | Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von Biomolekülen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1999130253 DE19930253A1 (de) | 1999-06-25 | 1999-06-25 | Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von Biomolekülen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19930253A1 true DE19930253A1 (de) | 2000-12-28 |
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ID=7913244
Family Applications (1)
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| DE1999130253 Ceased DE19930253A1 (de) | 1999-06-25 | 1999-06-25 | Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von Biomolekülen |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
| 8127 | New person/name/address of the applicant |
Owner name: WITA PROTEOMICS AG, 14513 TELTOW, DE |
|
| 8131 | Rejection |