DE19907493A1 - Verfahren zum Erhalten von Zell- und Tiermodellen neurodegenerativer Erkrankungen und Mittel zur Durchführung dieser Verfahren - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die technischen Gebiete der Biotechnologie, der Medizin, der Biologie und der Biochemie. Ihre Anwendungen betreffen die Bereiche des Human- und Tierge­ sundheitswesens. Die Erfindung betrifft insbesondere Verfahren zum Erhalten von Zell- und Tiermodellen neurodegenerativer Er­ krankungen und die Mittel (wie Nukleinsäuren oder Vektoren), welche zur Durchführung dieser Verfahren verwendbar sind.

Die neurodegenerativen Erkrankungen stellen ein großes und zu­ nehmendes Problem des öffentlichen Gesundheitswesens dar, hauptsächlich verbunden mit der Verlängerung der durchschnitt­ lichen Lebenserwartung in den Industrieländern. Demzufolge weisen die Alzheimer-Demenz und die Parkinson-Krankheit einen tatsächlichen wirtschaftlichen Einschlag nicht nur aufgrund ihres tödlichen Ausgangs, sondern auch aufgrund der Kosten für eine lange und verpflichtende Belastung, welche sie mit sich bringen auf. Sogar wenn die Beschreibung klinischer Symptome und die Identifizierung einiger Suszeptibilitätsgene es ermög­ licht haben, bedeutende Schritte in der Kenntnis dieser Patho­ logien zu machen, sind die molekularen Grundlagen, welche die Entwicklung dieser Krankheiten unterstützen, immer noch sehr unklar. Die Aufklärung von Signalkaskaden, welche bei diesen pathologischen Zuständen unregelmäßig bzw. außer Reihe ge­ bracht sind, werden wahrscheinlich zur Entdeckung geeigneter Ziele bei einer therapeutischen Behandlung führen. Diese neu­ rodegenerativen Erkrankungen sind ziemlich sicher zum Teil durch eine schlechte Balance zwischen Überlebensfaktoren und den Zelltod induzierenden Faktoren charakterisiert. In dieser Beziehung ist die Literatur reich an Beispielen, welche die Wichtigkeit der alternativen Spaltung bei der Erzeugung von Proteinen unterstreichen, welche bei diesen Vorgängen die Rol­ len von Antagonisten spielen (Familie Bcl2, Caspases, Grb2, etc.). Die Innovation in diesen Bereichen wird einen enormen Einschlag haben, da bis heute keine wirksame Behandlung von Qualität existiert.

Die Natur der neurodegenerativen Erkrankungen macht ihre Stu­ die schwierig, insbesondere da die Analyse der Genexpression in den erkrankten Geweben und den gesunden Kontrollen aufgrund der Schwierigkeit, Biopsien in ausreichender Menge und Quali­ tät zu erhalten, quasi unmöglich ist. Es ist daher offensicht­ lich, daß das Erhalten von Tier- und Zellmodellen einen ent­ scheidenden Fortschritt im Verständnis der Physiopathologie dieser Störung des Nervensystemes darstellt.

Diese Modelle werden es erlauben:

• - neue cDNS zu identifizieren, welche in die verschiede­ nen Stadien der Entwicklung von neurodegenerativen Erkrankun­ gen verwickelt sind,
• - die Einwirkung dieser cDNS oder aller Konstruktionen, welche von dieser cDNS abgeleitet sind, am Tier- oder Zellmo­ dell des Ausgangs zu testen.

Es kann jedoch nicht jedes Tiermodell in Betracht gezogen wer­ den, um die Gesamtheit einer Humanpathologie widerzuspiegeln. Es besteht daher ein tatsächliches Interesse, verschiedene Mo­ delle für ein und dieselbe Krankheit zur Verfügung zu stellen, welche es erlauben, die identifizierbaren Gene von Interesse zu multiplizieren bzw. zu vermehren, bevor man sie unter einer komplexen human-physiopathologischen Situation bewertet.

Es sind Rattenmodelle für verschiedene neurodegenerative Er­ krankungen geschaffen worden:

• - durch Transgenese für die Alzheimer-Krankheit (Johnson- Wood et al., 1997, PNAS, 94, S. 1550-1555), die laterale amyotrophe Sklerose (SLA) (Gurney et al., 1997, J. Neurol, 244, S15-S20), das Huntington-Chorea (Davies et al., 1997, Cell, 90, S. 537) sowie die Prionen-Krankheiten (Moore, R.C. und Melton, D.W., 1997, Mol.Hum.Reprod., 3, Seiten 529-544),
• - durch homologe Rekombination für die Tay-Sachs- und Sandhoff-Krankheiten (Sango, K. et al., 1996, Nat.Genet., 14, S. 348-352),
• - durch Erhalten von mutanten Mäusen für die metaboli­ schen Wege im Fall des Modells der infantilen cerebralen Lipo­ fuscinose (Vance et al., Biochim.Biophys.Acta, 1997, 1344, S. 286-299).

Diese Modelle reproduzieren mehr oder weniger genau die Ver­ haltens- und Histologiestörung, welche für diese Pathologien charakteristisch sind.

Darüber hinaus sollen diese Modelle die durch die dominanten Mutationen hervorgerufenen Störungen reproduzieren, die von jenen kopiert sind, welche bei Patienten beobachtet wurden, sind aber nicht in einzelnen Fällen informativ, welche mit keiner Mutation identifizierter Suszeptibilitätsgene verbunden sind und keine familiären Bestandteile aufweisen.

Die vorliegende Anmeldung ermöglicht es, die Nachteile des Standes der Technik zu beseitigen. Die vorliegende Erfindung beschreibt tatsächlich neue Verfahren und Mittel, um Zell- und Tiermodelle von neurodegenerativen Erkrankungen zu erhalten.

Die vorliegende Erfindung resultiert zum Teil aus der Beobach­ tung, daß die oben erwähnten neurodegenerativen Erkrankungen alle mit anormalen Anhäufungen von Proteinen oder Peptiden in genauen Zellkompartimenten oder mit Anhäufungen von Proteogly­ canen in pathologischen zellulären Ultrastrukturen (Lewy- Körper) verbunden sind.

Im Falle der Alzheimer-Krankheit liegen die akkumulierten Pep­ tide dort in aggregierter Form vor. Es handelt sich um das 1-42 β-Amyloidpeptid aus der proteolytischen Spaltung des APP- Proteins APP (Amyloid-Vorläuferprotein). Obwohl dieses in Amy­ loid-Plättchen aggregierte Peptid im cerebralen, interzellulä­ ren Zwischenraum vorhanden ist, findet seine Produktion nach der spezifischen Spaltung von APP im endoplasmatischen Reticu­ lum statt, wo günstige Bedingungen bei seiner Aggregation vor­ liegen (Hartmann, T., et al., 1997, Nat.Med., Seite 1016-1020). Diese Anhäufung in diesen intrazellulären Kompartimen­ ten provoziert wahrscheinlich einen Stress des endoplasmati­ schen Reticulums, welcher dafür bekannt ist, eine Erhöhung der Konzentration von intracytoplasmatischem Calcium, den Initiie­ rungsfaktor von apoptotischen Kaskaden, auszulösen.

Das Prionprotein (Prp) liegt in den cerebralen Geweben, welche von schwammartigen Encephalien (BSE, Kuru, Kreutzfeld-Jakob- Krankheit) befallen sind, in einer anormalen Konformation vor. Diese Konformation ist durch eine Resistenz gegen die Verdau­ ung durch die K-Proteinase charakterisiert. Das endosomale Kompartiment wurde als der Ort beschrieben, wo sich die Um­ wandlung, dann die Aggregation der anormalen Form von Prp vollzieht (Arnold, J.E., 1995, J. Pathol., 176, S. 403-411).

Die Huntington-Chorea ist durch die Aggregation einer modifi­ zierten Form eines zellulären Proteins charakterisiert. Es handelt sich um das Huntingtin, das durch Wiederholungen von Glutaminsäuren variabler Länge am NH2-Ende des Proteines modi­ fiziert ist. Die Aggregate werden in den dystrophischen Neuri­ ten sowie in nucleären Einschlüssen festgestellt, wobei diese beiden Orte einen rückläufigen Transport des Huntingtins wi­ derspiegeln, welcher mit seiner noch nicht aufgeklärten Funk­ tion verbunden ist (DiFiglia, M., et al., 1997, Science, 277, S. 1990-1993).

Diese drei Beispiele veranschaulichen die Akkumulierungsphäno­ mene von Proteinen oder Peptiden in Zellkompartimenten in der Entwicklung dieser Krankheiten. Das Ziel der vorliegenden Er­ findung ist genau das Zurverfügungstellen von Modellen, welche in der Lage sind, die zellulären Unregelmäßigkeiten, welche mit der Aggregation von Proteinen verbunden sind, zu reprodu­ zieren. Diese Modelle können Tiermodelle sein, welche durch Transgenese erhalten werden oder zelluläre Modelle. Diese zel­ lulären Modelle können durch Transfektion erhalten werden und sowohl von neuronalen Zellen, als auch anderen Zelltypen, wie den Fibroblasten, abgeleitet sein.

Ein erster Aspekt der Erfindung betrifft insbesondere rekombi­ nante Nukleinsäuren, welche für Proteine oder Peptide, die mit den neurodegenerativen Erkrankungen verwickelt sind, codieren, welche modifiziert sind, um die Adressierung der Proteine oder Peptide in den gegebenen Zellkompartimenten zu erlauben.

Ein besonderer Aspekt der Erfindung betrifft rekombinante Nuk­ leinsäuren, welche für Proteine oder Peptide, die mit neurode­ generativen Erkrankungen verwickelt sind, codieren und welche modifiziert sind, um die Adressierung der Proteine oder Pepti­ de in den gegebenen Zellkompartimenten zu erlauben, damit ihre Aggregation oder konformative Änderungen übertragen werden.

Ein weiterer Aspekt der Erfindung betrifft die Produkte der Expression der obigen rekombinanten Nukleinsäuren sowie jeden Vektor, welcher eine solche rekombinante Nukleinsäure enthält.

Die Erfindung betrifft auch alle Zellen, welche eine rekombi­ nante Nukleinsäure oder einen Vektor, wie sie oben beschrieben sind, umfassen. Vorteilhaft handelt es sich um eine Zelle, welche die rekombinante Nukleinsäure in der Weise exprimieren kann, daß das Protein oder das Peptid in einem gegebenen Zell­ kompartiment produziert wird.

Die Erfindung betrifft auch jedes (nicht-humane) Tier, das ei­ ne oder mehrere rekombinante Nukleinsäuren oder Vektoren, wie oben definiert, in bestimmten oder allen seiner Zellen auf­ weist.

Die Erfindung betrifft schließlich die Verwendung dieser Zel­ len oder Tiere zur Identifizierung von Molekülen, welche ge­ eignet sind, mit der Entwicklung von neurodegenerativen Er­ krankungen zu interferieren.

Die Möglichkeiten, Modelle durch Adressieren von Proteinen oder Peptiden in bestimmten Zellkompartimenten zu erhalten, kann beispielsweise für die Alzheimer-, Kreutzfeld-Jakob- und Huntington-Erkrankung veranschaulicht werden.

So ist eine besondere rekombinante Nukleinsäure gemäß der Er­ findung durch alle Modifikationen der cDNS vertreten, welche für das amylogene β1-42-Peptid codieren, um dieses Peptid in einem gegebenen Zellkompartiment zu adressieren, damit dort seine Aggregation hervorgerufen wird. Insbesondere kann diese Modifikation zum einen Teil das Hinzufügen oberhalb der für das β1-42-Peptid codierenden Sequenz einer Nukleinsäuresequenz sein, welche einer Sekretionssequenz, welche die Sekretion in dem endoplasmatischen Reticulum erlaubt, entspricht und für eine Sukzession von hydrophoben Aminosäuren codiert (dem Fach­ mann wohlbekannte Sequenzen), und andererseits das Hinzufügen unterhalb der Verkettung von KDEL-Aminosäuren sein, welche so die Retention in dem endoplasmatischen Reticulum (Griffiths, G., et al., 1994, J. Cell. Biol., 127, S. 1557-1574) der ag­ gregierenden Form des Amyloidpeptids spezifizieren.

Eine weitere besondere rekombinante Nukleinsäure gemäß der Er­ findung ist durch alle Modifikationen der cDNS des Prionpro­ teins dargestellt, um dieses Protein in einem gegebenen Zell­ kompartiment zu adressieren, damit dort seine pathologische Konformation hervorgerufen wird. Insbesondere kann diese Modi­ fizierung das Hinzufügen unterhalb der für das Prp-Protein co­ dierenden Sequenz der cDNS-Sequenz sein, welche für den cytoplasmatischen Bereich des Rezeptors codiert, der von Man­ nose-6-Phospat kationabhängig ist. (Rohrer, J. et al., 1995, J. Cell. Biol., 130, 1297-1306). Diese Modifikation kann die Lokalisierung des so modifizierten Prp-Proteines in den Endo­ somen erlauben, um dort seine pathologische Transkonformation zu begünstigen.

Eine weitere besondere rekombinante Nukleinsäure gemäß der Er­ findung wird auch durch alle Modifikationen der cDNS des Hun­ tingtin-Proteines dargestellt, um dieses Protein in einem ge­ gebenen Zellkompartiment zu adressieren, damit dort seine Ag­ gregation hervorgerufen wird. Genau gesagt findet diese Modi­ fikation an der cDNS von Huntingtin, addiert am 5'-Ende einer Sequenz statt, welche für eine Wiederholung von 115 bis 156 Glutaminsäuren codiert, welche diesem Protein aggregierende Eigenschaften verleiht (Davies et al., 1997, Cell, 90, S. 537). Insbesondere kann diese Modifikation stattfinden, indem in dieses Protein eine Sequenz der Kernstelle eingeführt wird, deren Archetyp durch die Verkettung von PKKKRKV-Aminosäuren dargestellt ist (Efthymiadis, A., et al., 1997, 272, S. 22134-22139). Vorteilhafterweise kann diese Sequenz der Kernstelle am C-terminalen Ende von Huntingtin zugefügt werden, welche so nicht mit den Wiederholungen von Glutaminsäuren mit anfänglich aggregierenden Eigenschaften interferieren und welche am NH2-ter­ minalen Ende dieses Proteines liegen.

Die rekombinanten Nukleinsäuren der Erfindung können DNS (kom­ plementäre, genomische, synthetische, halbsynthetische, etc.) oder RNS sein. Des weiteren können diese Nukleinsäuren Tran­ skriptionssignale (Promotoren, Terminatoren, etc.) tragen.

Die rekombinanten Nukleinsäuren der Erfindung können in alle viralen und nicht-viralen Vektorkonstruktionen (Retrovirus, Adenovirus, AAV, Herpesvirus) inseriert sein, welche die Ex­ pression in Zellen von einem der oben beschriebenen modifi­ zierten Proteine oder Peptide ermöglichen. Vorteilhafterweise handelt es sich um einen adenoviralen Vektor, welcher die In­ fektion von nicht-proliferierenden Zellen, wie primären Kultu­ ren von Neuronen, erlaubt. Ein weiterer besonderer Vektor ge­ mäß der Erfindung ist eine Vektorenkonstruktion, welche es er­ laubt, transgene Tiere zu erhalten, welche in ihren Neuronen eines der vorher beschriebenen modifizierten Proteine expri­ mieren.

Die Erfindung sieht auch die Bereitstellung von zellulären Klonen vor, welche in konstitutiver oder induktibler Weise ei­ nes der oben beschriebenen modifizierten Proteine exprimieren. Vorteilhafterweise können diese Klone von Zellen abgeleitet sein, welche bestimmte Eigenschaften neuronaler Differenzie­ rung zeigen, wie die PC12-Zellen.

Die Erfindung zieht auch die oben beschriebenen Tiere in Be­ tracht und alle Verwendungen solcher transgener Tiere, um Neu­ ronen in Primärkultur zu bringen, welche eines der modifizier­ ten Proteine, wie sie vorher beschrieben wurden, zu exprimie­ ren.

Die Erfindung zieht auch die Verwendung eines der wie oben be­ schriebenen, modifizierten Proteine und die Exprimierung in nicht-zellulären, zellulären oder tierischen Modellen in Be­ tracht, um Verbindungen oder Zusammensetzungen insbesondere chemische, auf ihre Fähigkeit die Aggregation von den in Rede stehenden Proteinen zu inhibieren, herauszusieben oder zu identifizieren.

Die Erfindung sieht auch die Verwendung eines der wie oben be­ schriebenen, modifizierten Proteine in Zell- oder Tiermodellen vor, um Verbindungen oder Zusammensetzungen, insbesondere che­ mische, im Hinblick auf ihre Fähigkeit, die durch die Aggrega­ tion der erwähnten Proteine induzierte Apoptose zu inhibieren, herauszufiltern oder zu identifizieren.

Die Erfindung betrifft auch die Verfahren zum Herausfiltern oder Identifizieren von Verbindungen, welche die Eigenschaft, die Aggregationen der Proteine, welche mit den neurodegenera­ tiven Erkrankungen verwickelt sind, oder die Fähigkeit, die durch Aggregation solcher Proteine induzierte Apoptose zu in­ hibieren, aufweisen. Diese Verfahren umfassen insbesondere das Inkontaktbringen einer Zelle oder eines Tieres, wie sie oben beschrieben sind, mit einer Testverbindung oder -zusammensetzung und den Nachweis der Wirkung auf die Aggrega­ tion oder Apoptose.

Die vorliegende Erfindung wird im Detail mittels der folgenden Beispiele beschrieben werden, welche lediglich zur Veranschau­ lichung dienen und nicht beschränkend sind.

1. Modellbeispiel von zellulärem Stress, welcher durch Akkumu­ lierung von Amyloidpeptid im endoplasmatischen Reticulum induziert ist

Das Hinzufügen der Sekretionssequenz und der Retentionssequenz im endoplasmatischen Reticulum zum 1-42-β-Amyloidpeptid, d. h. die Verkettung von KDEL-Aminosäuren, wird nach klassischen Me­ thoden der Molekularbiologie, die dem Fachmann bekannt sind, durchgeführt.

Während der Zweck dieser Konstruktion das Exprimieren von Pro­ teinen ist, welche die Eigenschaft aufweisen, sich zu aggre­ gieren und dementsprechend die Apoptose der Zellen zu induzie­ ren, wird vorteilhafterweise vorgezogen, die cDNS-Sequenz, welche für das modifizierte Amyloidpeptid codiert, in einen induktiblen Expressionsvektor einzuführen. Vorteilhafterweise wird der induktible Vektor für eine strenge Repression des Transgenes unter nicht-induzierenden Bedingungen sicherzustel­ len ausgewählt, insbesondere in Gegenwart von Tetracyclin, und um eine starke Induktion während der Rücknahme dieses Antibio­ tikums zu ermöglichen.

Während es das Ziel dieses Modelles ist, Strategien oder che­ mische Zusammensetzungen zu identifizieren, um die Aggregation von β-Amyloidpeptid zu inhibieren oder die zelluläre Lebensfä­ higkeit zu verbessern, erstreckt sich die Wahl des Zellmodel­ les, in welchem ein induktibles Expressionssystem des gewähl­ ten Transgenes aufbaut, auf der HeLa-Linie humanen Ursprungs. Diese nicht-neuronale Linie besitzt eine gute Transfektions­ wirkung und in Gegenwart von Tetracyclin die Abwesenheit einer Basalexpression.

Die HeLa-Linie, welche in konstitutiver Weise den Repressor tet exprimiert, ist im Handel erhältlich (Clontech).

Der die cDNS enthaltende Vektor, welcher für das modifizierte 1-42-β-Amyloidpeptid gemäß den obigen Ansprüchen codiert, wird durch Transfektion nach dem Fachmann bekannten Methoden einge­ führt. Die Auswahl der HeLa-Klone, welche diese genetische Konstruktion integriert enthalten, wird dank der Co- Transfektion eines zweiten Plasmides durchgeführt, welches die Resistenz auf ein Selektionsmittel erlaubt. Vorteilhafterweise ist das ausgewählte Mittel Hygromycin.

Die Selektionierung der auf Hygromycin resistenten HeLa-Klone vollzieht sich durch die Charakterisierung der Expression des modifizierten Peptides während der Expression durch Rücknahme von Tetracyclin.

Typischerweise werden die fünf Klone, welche die stärkste Ex­ pression zulassen, für eine spätere Untersuchung ausgewählt.

Unter diesen fünf wird der Klon 15.09, welcher die beste Le­ bensfähigkeit in Gegenwart von Tetracyclin zeigt und welcher die stärkste Apoptose in Gegenwart dieses Antibiotikums zeigt (bewiesen durch Abbau der genomischen DNS), dann in morpholo­ gischer Hinsicht charakterisiert.

Die Methoden der Zellbiologie und Immunohistochemie offenbaren eine Anhäufung des modifizierten Peptides im endoplasmatischen Reticulum und das insbesondere in Abwesenheit von Tetracyclin. Darüber hinaus ist eine überraschende Vergrößerung dieses Or­ ganelles in den Stunden sichtbar, welche der Rücknahme der Ex­ pression des modifizierten Peptides folgen.

Über die Degradierungsmotive der genomischen DNS hinaus, wel­ che durch Elektrophorese sichtbar werden, ist die Apoptose, welche in den HeLa-Zellen induziert ist, mit einer erhöhten Aktivierung der Kinasen von JNK1- und JNK2-Stress korreliert.

Keiner dieser apoptotischen Marker wurde in den Klonen beob­ achtet, welche das β-Amyloidpeptid exprimieren, das mit der nicht mehr KDEL-Sequenz fusioniert ist, sondern mit ELKD, das als Kontrolle in der Start-HeLa-Linie verwendet wird. Desglei­ chen wird, wenn ein Peptid von 42 Aminosäuren, entsprechend den gleichen Aminosäuren, wie das β-Amyloidpeptid, jedoch in verschiedener Ordnung, mit der KDEL-Sequenz verschmolzen wird, keinerlei Veränderung der zellulären Ultrastrukturen, keiner­ lei Modifikation der genomischen DNS und keinerlei konstituti­ ve Aktivierung von Stress-Kinasen beobachtet.

Diese Ergebnisse dokumentieren das Erhalten eines Apoptosemo­ delles durch Retention im endoplasmatischen Reticulum des Pep­ tides, das die wichtigsten Symptome der Alzheimer-Krankheit aggregiert.

Die Anwendungen dieses Modelles sind die folgenden:

• - die Verwendung eines zellulären Modelles, basierend auf der oben dargelegten Strategie, um die chemischen Verbindungen zu identifizieren, welche die Aggregation von β-Amyloidpeptid inhibieren können,
• - die Verwendung eines zellulären Modelles, basierend auf der oben dargelegten Strategie, um die chemischen Verbindungen zu identifizieren, welche die durch Aggregation von β-Amyloid­ peptid induzierte Apoptose inhibieren können.

Claims (10)

1. Rekombinante Nukleinsäure, codierend für ein Protein oder ein Peptid, das in eine neurodegenerative Erkrankung ver­ wickelt ist, und modifiziert ist, um die Adressierung dieses Proteines oder Peptides in einem gegebenen Zell­ kompartiment zu ermöglichen.

2. Protein oder Peptid resultierend aus der Expression einer rekombinanten Nukleinsäure gemäß Anspruch 1.

3. Vektor, umfassend eine solche rekombinante Nukleinsäure gemäß Anspruch 1.

4. Zelle, umfassend eine rekombinante Nukleinsäure gemäß An­ spruch 1 oder einen Vektor gemäß Anspruch 3.

5. Tier (nicht-human), das eine oder mehrere rekombinante Nukleinsäuren gemäß Anspruch 1 oder Vektoren gemäß An­ spruch 3 in bestimmten oder allen seiner Zellen aufweist.

6. Verwendung einer Zelle oder eines Tieres gemäß den An­ sprüchen 5 oder 6 zur Identifizierung von Molekülen, wel­ che mit der Entwicklung neurodegenerativer Erkrankungen interferieren können.

7. Verwendung einer Zelle oder eines Tieres gemäß den An­ sprüchen 5 oder 6 zum Herausfiltern oder Identifizieren von Verbindungen oder Zusammensetzungen, welche die Ei­ genschaft aufweisen, die Aggregationen von erzeugten Pro­ teinen oder Peptiden zu inhibieren.

8. Verwendung einer Zelle oder eines Tieres gemäß den An­ sprüchen 5 oder 6 zum Herausfiltern oder Identifizieren von Verbindungen oder Zusammensetzungen, welche die durch die Aggregation von produzierten Proteinen oder Peptiden induzierte Apoptose inhibieren.

9. Verwendung nach Anspruch 7 zum Herausfiltern oder Identi­ fizieren von Verbindungen oder Zusammensetzungen, welche die Aggregation des β-Amyloidpeptides inhibieren.

10. Verwendung nach Anspruch 8 zum Herausfiltern oder Identi­ fizieren von Verbindungen oder Zusammensetzungen, welche die durch Aggregation von β-Amyloidpeptid induzierte Apoptose inhibieren können.