DE19780092B3

DE19780092B3 - Verwendung eines Extrakts von Eriobotrya japonica insbesondere auf dem Gebiet der Kosmetik zur Stimulierung der Synthese der Glycosaminoglycane

Info

Publication number: DE19780092B3
Application number: DE19780092T
Authority: DE
Inventors: Frédéric Bonte; Marc Dumas
Original assignee: LVMH Recherche GIE
Current assignee: LVMH Recherche GIE
Priority date: 1996-01-03
Filing date: 1997-01-03
Publication date: 2012-05-24
Anticipated expiration: 2017-01-04
Also published as: GB9718684D0; FR2742987B1; WO1997006659A3; IT1290991B1; US5955083A; GB2314272A; NL1004939A1; WO1997006659A2; ITTO970001A1; DE19780092T1; ES2129014A1; NL1004939C2; FR2742987A1; JPH11501325A; ES2129014B1; AU1181097A; BE1010042A3; CH692902A5

Abstract

Verwendung eines Extrakts aus der Pflanze Eriobotrya japonica als kosmetisches Agens zum Stimulieren der Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) durch die Zellen der Haut, insbesondere durch die Fibroblasten und/oder die Keratinocyten, wobei das genannte kosmetische Agens einer kosmetischen Zusammensetzung einverleibt wird, die ein kosmetisch akzeptables Vehiculum (Träger) enthält, wobei die kosmetische Zusammensetzung weiterhin enthält: – mindestens ein Additiv, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinoiden, Feuchthaltemitteln oder Hydratisierungsmitteln, Vitaminen, Ceramiden, Substanzen, welche die Synthese von Collagen fördern und Aminosäuren, und/oder – einen oder mehrere der folgenden Wirkstoffe (aktiven Prinzipien): – einen Hyaluronidase-Inhibitor – einen Elastase-Inhibitor – einen Aminozucker – einen Cyclaseadenylat-Aktivator, der die Synthese von AMPc fördert – AMPc oder einen dieses enthaltenden Extrakt – einen Phosphodiesterase-Inhibitor, der dem Abbau von AMPc entgegenwirkt.

Description

Die Erfindung betrifft eine neue Verwendung eines Extrakts von Eriobotrya japonica insbesondere auf dem Gebiet der Kosmetik als Agens zur Stimulierung der Synthese der Glycosaminoglycane.
Bei der Pflanze Eriobotrya japonica handelt es sich um einen 5 bis 7 m hohen Baum mit glatten Zweigen, mit wechselständigen länglichen und dicken Blättern, der zwischen den Monaten September und Februar blüht. Die Blätter sind erwähnt in dem vietnamesischen Arzneibuch (Rote Liste) wegen ihrer antitussiven und antispasmodischen Eigenschaften. Der Absud wird auch zum Waschen von Wunden verwendet. Diese Pflanze weist nach der Literatur auch antiinflammatorische (entzündungshemmende) Aktivitäten auf. Kosmetische Aktivitäten für die Haare oder die Haut sind ebenfalls bereits erwähnt.
Was die bereits bekannten Anwendungen (Verwendungszwecke) der Pflanze Eriobotrya japonica auf dem pharmazeutischen Gebiet angeht, so können insbesondere genannt werden:

– die Monographie bezüglich dieser Pflanze, erschienen in ”Chinese Herbal Medicine”, S. 296, in der die wesentlichen Anwendungszwecke als Antihustenmittel und als Magenmittel angegeben sind,
– die Monographie ”Medicinal Plants in Vietnam”. S. 171, publiziert unter der Schirmherrschaft der Organisation Mondiale de la Santé de Manille et de I'Institut des matériaux médicaux de Hanoi, in der ebenfalls therapeutische Anwendungszwecke als antitussives und antispasmodisches Mittel genannt sind,
– Chinese Medicine Series 1, Chinese Materi Medica Vegetable Kingdom, wo auf den Seiten 164–165 ebenfalls Verwendungszwecke dieser gleichen Pflanze als Antihustenmittel und als Antibrechmittel genannt sind,
– das japanische Patent JP 56-073027 (TEIJIN Ltd.), welches Verwendungen von Blättern dieser gleichen Pflanze zur Herstellung eines antiphlogistischen (entzündungshemmenden) Mittels betrifft, und
– vor kurzem erschienene Artikel, in denen Anwendungszwecke von Extrakten dieser gleichen Pflanze auf dem kosmetischen Gebiet, insbesondere zur Pflege der Haut oder der Haare, beschrieben sind.

So sind in dem japanischen Patent JP 05-017206 Verwendungen von Extrakten dieser gleichen Pflanze als Mittel zur Verhinderung oder Behandlung einer Abschilferung der Epidermis im Falle einer runzligen Haut und der Nachweis der Aktivität dieser Pflanze auf die Reproduktion von Zellen der Haut beschrieben.
In dem japanischen Patent JP 62-249907 sind Verwendungen von Blättern von Eriobotrya japonica zur Herstellung von kosmetischen Produkten, die insbesondere der Verbesserung des Blut-Mikrokreislaufs dienen sollen, beschrieben.
In dem japanischen Patent JP 03-188008 sind Anwendungen einer sehr großen Familie von Pflanzen, d. h. der Rosaceae, auf dem Gebiet der Kosmetik beschrieben, wobei dieses Pflanzen eine Verbesserung der Weichheit und der Hydratation der Haut und eine Behandlung der Blattern (Pocken) erlauben.
In dem japanischen Patent JP 03-188014 sind ebenfalls kosmetische Zusammensetzungen, die insbesondere für die Behandlung der Haare bestimmt sind, beschrieben, die einen Extrakt von verschiedenen Pflanzen einer sehr großen Familie der Rosaceae enthalten. Diese Pflanzenextrakte sind mit zwei speziellen oberflächenaktiven Agentien, d. h. einem anionischen Agens und mindestens einem Stickstoff enthaltenden Agens, kombiniert (assoziiert).
Es wurde jetzt gefunden, daß die Extrakte der Pflanze Eriobotrya japonica einen wichtigen Vorteil in der Kosmetik, in der Pharmazie und insbesondere in der Dermatologie aufweisen aufgrund ihrer Eigenschaft, die Bildung von Glycosaminoglycanen durch die Fibroblasten und die Keratinocyten und insbesondere durch die Fibroblasten der Lederhaut, speziell der menschlichen Lederhaut und der menschlichen Keratinocyten zu stimulieren.
Sowohl JP 7-215838 A als auch JP 63-115807 A und JP 62-263113 A sehen vor diesem Hintergrund die Verwendung von Extrakten aus der Pfllanze Eriobotrya japonica in kosmetischen Zusammensetzungen vor. Keines dieser Dokumente offenbart jedoch die Verwendung eines Additives oder weiteren Wirkstoffs.
Dem Fachmann ist bekannt, daß die Glycosaminoglycane (GAG) Polymere darstellen, die aus Disaccharid-Einheiten bestehen. In der menschlichen Haut können unter den GAG, die am häufigsten anzutreffen sind, zunächst genannt werden die Hyaluronsäure, die in sehr reichlicher Menge zu finden ist. Man findet auch die Chondroitin-4- und -6-sulfate, das Dermatansulfat und in geringerer Menge das Heparin und das Heparansulfat.
Die Disaccharid-Einheiten der GAG werden durch ein Hexosamin (D-Glucosamin oder D-Galactosamin) gebildet, das ziemlich häufig sulfatiert ist, im Wechsel mit einer Uronsäure (D-Glucuronsäure oder L-Iduronsäure).
Die GAG sind im allgemeinen durch kovalente Bindungen an Proteine gebunden unter Bildung der Proteoglycane. Unter den bekannten GAG wird nur die obengenannte Hyaluronsäure nicht in an ein zentrales Protein gebundener Form synthetisiert.
Die Struktur der Proteoglycane ist in der Arbeit von E. D. HAY mit dem Titel ”Cell Biology of Extracellular Matrix”, erschienen bei Plenum Press, New York, 1991, und in der Publikation von J. E. SILBERT mit dem Titel ”Structure and Metabolism of Proteoglycans and Glycosaminoglycans”, erschienen in ”J. Invest. Dermatol.”, 1982, 79, S. 31s–37s, beschrieben.
Die Proteoglycane kommen insbesondere in allen Säugetier-Geweben vor einschließlich der Haut und ihren Anhangorganen (J. R. COUCHMAN, ”J. Invest. Dermatol.”, 1993 (Juli), 101 (1. Ergänzung), S. 60S–64S). Es ist derzeit allgemein anerkannt, daß die Proteoglycane nach unterschiedlichen Prozessen zum Wachstum, zur Aufrechterhaltung und zur Reparatur von Geweben beitragen. Es wurde gezeigt, daß bestimmte Proteoglycane Mediatoren für die Zelladhäsion und die Transmembran-Kommunikation darstellen, während andere mit anderen Strukturelementen der extrazellulären Matrix in Wechselwirkung treten. Wie weiter oben bereits angegeben, bestehen die Proteoglycane aus einem zentralen Protein, an das auf kovalente Weise eine oder mehrere Glycosaminoglycan-Ketten gebunden sind. Die Glycosaminoglycane sind somit vorhanden im Bereich der Dermis, wobei sie an der Zusammensetzung der extrazellulären Matrix beteiligt sind und es wurde gefunden, daß sie an bestimmte Stellen der Collagen-Fasern gebunden sind, wie von J. E. SCOTT in ”Int. J. Biol. Macromol.”, 1991, 13, Seiten 157–161, beschrieben. Sie wurden auch identifiziert zwischen den Keratinozyten im Bereich der Epidermis, wie von J. G. HAGGERTY et al. in der Zeitschrift ”J. Invest. Dermatol.”, 1992, 99, S. 374–380, beschrieben. Schließlich wurden Glycosaminoglycane in der extrazellulären Matrix der Haut-Papille des Haarfollikels gefunden. Ihre Menge variiert als Funktion des Pilar-Zyklus. Sie erreicht ein Maximum während der anagenen Phase, die dem Wachstum des Haares entspricht. Was die Proteoglycane und die Glycosaminoglycane der Haar-Follikel angeht, so kann insbesondere Bezug genommen werden auf die Publikation von J. R. COUCHMAN, s. oben, und auf diejenige von M. TAYLOR et al., ”Glycosaminoglycan synthesis by cultured human hair follicle dermal papilla cells: comparison with nonfollicular dermal fibroblasts” in ”Brit. J. Dermatol.”, 1992 (Mai) 126 (5) 479–484. Es sei darauf hingewiesen, daß gezeigt wurde, daß das Minoxidil, eine Substanz, die bekannt dafür ist, daß sie eine bestimmte Aktivität auf das Wachstum und die Abstoßung (das Nachwachsen) der Haare aufweist, die Biosynthese der Glycosaminoglycane stimuliert (Y. MORI et al., ”Ann. N. Y. Acad. Sci.”, 1991 (26. Dez.), 642, 473–475). Die Beobachtungen der obengenannten Autoren, kombiniert mit weiteren klinischen Versuchen lassen vermuten, daß die Glycosaminoglycane an der Regulierung des Wachstums der Haare beteiligt sind.
Die GAG gewährleisten aufgrund ihrer Haupt-Eigenschaft, sich stark an Wassermoleküle anzulagern und Gele zu bilden, die Hydratation der Dermis (Unterhaut bzw. Lederhaut) und der Epidermis (Oberhaut). Eine gut hydratisierte Haut trägt bei zu einem guten Aussehen, zu einem zufriedenstellenden physiologischen und funktionellen Zustand mit insbesondere guten mechanischen Eigenschaften. Die Abnahme der GAG im Verlaufe der Alterung der Haut wurde von zahlreichen Autoren gezeigt (s. z. B.: SMITH et al. in ”J. Invest. Dermatol.”, 1962, 39, S. 347–350; oder FLEISCHMAJER et al. in ”Biochim Biophys. Acta”, 1972, 279, S. 265–275; oder auch von LONGAS et al. in ”Carbohydr. Res.”, 1987, 159 S. 127–136).
Es ist daher vorteilhaft, die Synthese der Glycosaminoglycane zu stimulieren, um insbesondere einer Haut, die Mängel im Bereich ihrer mechanischen Eigenschaften oder ihrer Wasserrückhalte-Eigenschaften aufweist, wie z. B. eine dehydratisierte oder gealterte Haut, die Qualitäten und Eigenschaften einer normalen und jungen Haut zu verleihen oder Störungen des Wachstums der Haare vorzubeugen oder diese zu behandeln oder auch den Glanz und die Weichheit des Haarwuchses wieder herzustellen oder zu verstärken.
Hauptziel der vorliegenden Erfindung ist es somit, das neue technische Problem zu lösen, das darin besteht, eine Lösung bereitzustellen, welche die Stimulierung der Bildung von Glycosaminoglycanen durch die Hautzellen, insbesondere die Zellen der menschlichen Haut, z. B. die Fibroblasten oder Keratinozyten, erlaubt, eine Bildung, die besonders wertvoll ist im Rahmen der Herstellung von kosmetischen oder pharmazeutischen und insbesondere dermatologischen Behandlungs-Produkten.
Die Erfindung basiert auf der überraschenden Entdeckung, daß ein Extrakt aus der Pflanze Eriobotrya japonica die Bildung von Glycosaminoglycanen durch die Zellen der Haut, insbesondere durch die Fibroblasten und die Keratinozyten, stimuliert, was insbesondere nützlich ist für die Herstellung von kosmetischen oder pharmazeutischen und insbesondere pharmakologischen Behandlungsmitteln.
Insbesondere wurde gefunden, daß der Extrakt von Eriobotrya japonica die Synthese der Hyaluronsäure durch die Fibroblasten und die Keratinozyten stimuliert.
Gemäß einer ihrer wesentlichen Charakteristika betrifft die Erfindung daher die Verwendung eines Extrakts der Pflanze Eriobotrya japonica als kosmetisches Mittel, das dazu bestimmt ist, die Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) durch die Zellen der Haut, insbesondere durch die Fibroblasten und/oder die Keratinozyten, zu stimulieren, wobei das genannte kosmetische Mittel einem in der Kosmetik akzeptablen Vehiculum (Träger) einverleibt wird, nämlich die Verwendung eines Extrakts aus der Pflanze Eriobotrya japonica als kosmetisches Agens zum Stimulieren der Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) durch die Zellen der Haut, insbesondere durch die Fibrolasten und/oder die Keratinozyten, wobei das genannte kosmetische Agens einer kosmetischen Zusammensetzung einverleibt wird, wie ein kosmetisch akzeptables Vehiculum (Träger) enthält, wobei die kosmetische Zusammensetzung weiterhin enthält:

i) mindestens ein Additiv ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Retinoiden, Feuchthaltemitteln, oder Hydratisierungsmitteln, Vitaminen, Keramiden, Substanzen, welche die Synthese von Kollagen fördern und Aminosäuren, und/oder
ii) einen oder mehrere der folgenden Wirkstoffe (aktiven Prinzipien):
– einen Hyaluronidase-Inhibitor,
– einen Elastase-Inhibitor,
– einen Aminozucker,
– einen Zyklaseadenylat-Aktivator, der die Synthese vom AMP_c fördert
– oder einen dieses enthaltende Extrakt
– einen Phosphodiesterase-Inhibitor, der den Abbau von AMP_c entgegenwirkt.

Sie betrifft ganz speziell solche Anwendungen, bei denen dieses kosmetische Mittel dazu bestimmt ist, die Synthese der Hyaluronsäure durch die Fibroblasten und/oder die Keratinozyten zu stimulieren, was sich als besonders vorteilhaft zur Förderung der Hydratation der Epidermis erwiesen hat.
Als Beispiele für Extrakte von Eriobotrya japonica, die erfindungsgemäß verwendbar sind, können handelsübliche Extrakte, insbesondere der wässrige Ethanolextrakt aus Blättern dieser Pflanze, genannt werden, der in dem Katalog der Firma Maruzen Pharmaceutical, Hiroshima, Japan, zu finden ist.
Gemäß einer vorteilhaften Ausführungsform der Erfindung wird der Extrakt aus der Pflanze erhalten aus gemahlenen oberirdischen Teilen der Pflanze Eriobotrya japonica, vorzugsweise aus Blättern, Blüten, Stengeln, der Stengelrinde oder Früchten.
Gemäß einer anderen bevorzugten Ausführungsform ist der obengenannte Extrakt ein Extrakt aus gemahlenen Blättern der Pflanze Eriobotrya japonica.
Gemäß einer anderen vorteilhaften Ausführungsform handelt es sich bei dem obengenannten Extrakt aus der Pflanze Eriobotrya japonica um einen Extrakt, der erhalten wird durch Extraktion mit einem polaren Lösungsmittel oder einer Mischung von polaren Lösungsmitteln. Vorzugsweise verwendet man einen Alkohol wie Methanol, Ethanol, Propanol, Isopropanol, Propylenglycol oder Butylenglycol oder eine Mischung dieser Alkohole oder auch eine Wasser/Alkohol-Mischung.
Als Lösungsmittel zur Durchführung dieser Extraktion wählt man zweckmäßig das 1,3-Butyenglycol oder eine Mischung dieses Lösungsmittels mit Wasser, vorzugsweise eine 50:50 Volumen-Mischung.
In diesem Rahmen können die dem Fachmann allgemein bekannten klassischen Extraktions-Verfahren angewendet werden. Insbesondere kann die Extraktion bei dem gemahlenen Material, vorzugsweise bei den überirdischen Teilen, beispielsweise den Blättern, Blüten, Stengeln, Stengelrinden oder Früchten, durchgeführt werden. Zweckmäßig wird die Extraktion unter Verwendung der Blätter durchgeführt. Das gemahlene Pflanzenmaterial wird in das Extraktions-Lösungsmittel eingeführt, das vorzugsweise aus dem obengenannten polaren Lösungsmittel oder aus dem obengenannten Gemisch von polaren Lösungsmitteln besteht. Die Extraktion kann mehrmals wiederholt werden, bis das Material erschöpft ist, unter Anwendung von dem Fachmann allgemein bekannten Verfahren. Die Extraktion kann bei Umgebungstemperatur oder in der Wärme und insbesondere beim Rückfluß des Lösungsmittels durchgeführt werden. Das Gewichtsverhältnis zwischen dem Lösungsmittel und dem zu extrahierenden Material kann in breiten Grenzen variieren. Insbesondere kann es zwischen 1:1 und 50:1, vorzugsweise zwischen 5:1 und 20:1, liegen.
Es wurde darüber hinaus festgestellt, daß die Stimulierung der Synthese der Glycosaminoglycane einen leichten Hautschwellungs-Effekt, insbesondere der Dermis, mit sich bringt und infolgedessen die Erzielung unterschiedlicher kosmetisch vorteilhafter Ergebnisse erlaubt, z. B. eine Verbesserung der Festigkeit der Haut, eine Verhinderung der Faltenbildung oder ihre Verringerung durch eine Verminderung der Faltentiefe, eine Glättung der Oberfläche der Haut aufgrund eines Tensor(Spannungs)-Effekts darunter.
Im übrigen trägt die Verbesserung der Synthese der GAG zu einer Verbesserung der Hydratation der Haut bei.
Infolgedessen betrifft die Erfindung gemäß einem andereren wesentlichen Charakteristikum auch ein Verfahren zur kosmetischen oder pharmazeutischen, insbesondere dermatologischen Behandlung, welches die Stimulierung der Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG), insbesondere die Synthese der Hyaluronsäure, erlaubt, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es umfaßt die Verwendung (Applikation) einer kosmetisch oder pharmazeutisch, insbesondere dermatologisch wirksamen Menge eines Extrakts der Pflanze Eriobotrya japonica, um eine Stimulierung der genannten Synthese zu erzielen, wobei der genannte Extrakt insbesondere in einem kosmetisch oder pharmazeutisch, insbesondere dermatologisch akzeptablen Exzipienten enthalten ist. Die Erfindung erlaubt somit die Verbesserung der Festigkeit und der Weichheit der Haut, die Bekämpfung der Faltenbildung oder die Verringerung der Tiefe derselben oder auch die Erzielung einer Glättung der Oberfläche der Haut aufgrund einer Spannungswirkung oder die Verbesserung der Hydratation der Haut.
Die Erfindung betrifft auch jedes Verfahren zur therapeutischen Behandlung der Haut, durch das man versucht, die Synthese der Glycosaminoglycane, insbesondere der Hyaluronsäure, zu stimulieren.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung von Extrakten von Eriobotrya japonica zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen, insbesondere dermatologischen Zusammensetzungen, die dazu bestimmt sind, Patienten zu behandeln, die unter einer Insuffizienz der Synthese von Glycosaminoglycanen, insbesondere der Synthese der Hyaluronsäure, leiden, um die negativen Effekte der genannten Insuffizienz zu korrigieren, insbesondere die Festigkeit und Weichheit der Haut zu verbessern, um die Faltenbildung zu bekämpfen oder um die Tiefe der Falten herabzusetzen oder um eine Glättung der Oberfläche der Haut aufgrund einer Spannungswirkung zu erzielen oder um die Hydratation der Haut zu verbessern.
Diese Extrakte und Zusammensetzungen können in jedem Verfahren zur kosmetischen oder therapeutischen Behandlung eingesetzt werden, bei dem man versucht, die Synthese der GAG zu stimulieren. Diese Verfahren bestehen darin, eine kosmetisch bzw. pharmazeutisch wirksame Menge des genannten Extrakts oder der ihn enthaltenden Zusammensetzung auf das zu behandelnde Hautgewebe aufzubringen, um die Stimulierung der genannten Synthese zu erzielen, wobei der genannte Extrakt gegebenenfalls in einem kosmetisch bzw. pharmazeutisch akzeptablen Vehikulum (Träger) enthalten ist.
Es können verschiedene Formen von Formulierungen hergestellt werden. Eine der am häufigsten verwendeten Formen ist eine topische Form, die zum Auftragen auf das Hautgewebe einschließlich der Haut und der äußeren und inneren Schleimhäute geeignet ist. Die geeigneten topischen Formulierungen umfassen, ohne daß die Erfindung darauf bechränkt ist, Emulsionen, Cremes, Milche, Salben, Gele, Lotionen, kleiner Körner (Eier) sowie Behandlungsschminken wie Masken, Rouge für die Lippen, wobei diese verschiedenen Formulierungs-Typen dem Fachmann allgemein bekannt sind.
Diese Zusammensetzungen enthalten 0,001 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 5 Gew.-%, des genannten Extrakts, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, wobei der genannte Extrakt vorzugsweise einem kosmetisch oder pharmazeutisch akzeptablen Exzipienten einverleibt wird.
Diese Zusammensetzungen können außerdem verschiedene Zusätze enthalten, insbesondere solche, die ausgewählt werden aus der Gruppe, die besteht aus Retinoiden, Feuchthaltemitteln oder Hydratisierungsmitteln, Vitaminen, Ceramiden, Substanzen, welche die Synthese von Collagen fördern und von Aminosäuren.
Gemäß diesen Varianten wird das obengenannte Retinoid ausgewählt aus der Gruppe Retinasäure und ihren Salzen und Estern, Retinaldehyd, Retinol und seinen Estern, wie dem Propionat, Palmitat, Acetat; das obengenannte Feuchthaltemittel oder Hydratationsmittel wird ausgewählt aus der Gruppe Glycerin, Polyethylenglycol und Hyaluronsäure; das obengenannte Vitamin wird ausgewählt aus der Gruppe Vitamin A, Vitamin C und Derivaten davon, insbesondere Natrium- oder Magnesiumsalzen davon, Vitamin E, Vitamin PP und den Vitaminen der B-Gruppe, insbesondere Vitamine B6 und B12; die Substanz, welche die Synthese von Collagen fördert, wird ausgewählt aus einem Extrakt von Centella asiatica, einem Madecassosid, der Madecassinäure, der Asiatsäure und dem Asiaticosid; und die Aminosäure wird ausgewählt aus der Gruppe Serin, Threonin, Asparaginsäure, Leucin, Lysin, Prolin und Hydroxyprolin.
Der Extrakt von Eriobotrya japonica kann in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen zweckmäßig auch mit einem oder mehreren der folgenden Wirkstoffe (aktiven Prinzipien) kombiniert sein:

– einem Hyaluronidase-Inhibitor, beispielsweise einem Extrakt von Echinacea angustifolia,
– einem Elastase-Inhibitor, beispielsweise einem Soja-Extrakt oder einem Algen-Extrakt, als Aosain bezeichnet,
– einem Aminozucker, beispielsweise dem Glucosamin oder dem Galactosamin,
– einem Cyclaseadenylat-Aktivator, der die Synthese der AMP_cfördert, wie z. B. das Forskolin, ein Extrakt von Coleus forskholii oder ein Extrakt von Tephrosia,
– mit AMP_c oder einem es enthaltenden Extrakt, z. B. einem Extrakt von Taisoh,
– einem Phosphodiesterase-Inhibitor, der dem Abbau des AMP_c entgegenwirkt, wie Coffein oder Theophyllin.

Schließlich betrifft die vorliegende Erfindung gemäß einem letzten Aspekt auch ein Verfahren zur Behandlung von Zellen, insbesondere von Fibroblasten oder Keratinozyten in einer Kultur durch eine wirksame Konzentration eines Extrakts von Eriobotrya japonica zur Erzielung einer Stimulierung der Synthese der Glycosaminoglycane, insbesondere der Hyaluronsäure.
So erhält man beispielsweise im Rahmen der Herstellung von künstlicher Haut, insbesondere von künstlicher Dermis, durch Kultivierung von Zellen nach dem Fachmann allgemein bekannten Verfahren dank des erfindungsgemäßen Verfahrens eine künstliche Haut oder künstliche Dermis von sehr guter Qualität, insbesondere was die biomechanischen Eigenschaften angeht.
Nach einer bevorzugten Variante der Durchführung des obengenannten Verfahrens behandelt man die Zellenkultur mit einem Extrakt von Eriobotrya japonica in einer Konzentration zwischen 0,3 und 30 μg/ml Kulturmedium.
Nach einer anderen vorteilhaften Variante enthält das Kulturmedium außerdem eine oder mehrere der folgenden Substanzen: Glucosamin, Galactosamin, L-Prolin und 4-Hydroxy-L-prolin, wobei die genannten Substanzen jeweils in einer Konzentration zwischen 2 und 10 mM vorliegen können, oder wobei das Kulturmedium auch Ascorbinsäure oder eines ihrer Derivate in einer nicht-zytotoxischen Konzentration, insbesondere zwischen 0,001 und 0,5 mM, enthalten kann.
Weitere Ziele, Charakteristika und Vorteile der Erfindung ergeben sich für den Fachmann auch aus der folgenden Beschreibung von mehreren Ausführungsbeispielen, die nur zur Erläuterung angegeben sind und in keiner Weise den Bereich der Erfindung beschränken sollen. In den Beispielen sind die Prozentsätze, wenn nichts anderes angegeben ist, auf das Gewicht bezogen.
Beispiele
I – Herstellung von Extrakten aus den oberirdischen Teilen von Eriobotrya japonica
Beispiel 1
Herstellung eines Extrakts A
Nach dem Mahlen bringt man 1 kg Blätter der Pflanzen mit 10 l Methanol unter Rückfluß in Kontakt. Der Extrakt wird filtriert. Der Rückstand der Pflanze wird dann nach dem gleichen Verfahren noch zweimal extrahiert. Die Filtrate werden vereinigt und eingeengt, bis man einen trockenen Extrakt erhält, der als Extrakt A bezeichnet wird.
Beispiel 2
Herstellung eines Extrakts B
Man arbeitet wie in Beispiel 1, wobei man jedoch als Extraktions-Lösungsmittel ein 50/50-Volumengemisch von Wasser und Ethanol verwendet.
Beispiel 3
Herstellung eines Extrakts C
Eine Extraktionsphase wird wie folgt durchgeführt: nach dem Mahlen bringt man 1 kg Blätter der Pflanze mit 15 l Methanol in Kontakt. Anschließend erhitzt man 30 min lang unter Rückfluß, dann filtriert man. Der Rückstand wird anschließend zweimal mit 15 l Methanol wie in Beispiel 1 erneut extrahiert.
Man gewinnt die verschiedenen Filtrate. Man engt sie bis zum Minimum der Löslichkeit ein. Dann mischt man das Konzentrat mit 5 Volumen-Teilen Aceton. Man wäscht den Niederschlag mit Aceton bis zum Verschwinden der sichtbaren Färbung. Der erhaltene Filterkuchen wird anschließend in Wasser suspendiert, bis man eine homogene Milch erhält, die man lyophilisiert. Auf diese Weise erhält man ein Lyophilisat, das als Extrakt C bezeichnet wird.
Beispiel 4
Herstellung eines Extrakts D
Man extrahiert 1 kg trockene Blätter der Pflanze, die vorher gemahlen worden sind, mit 15 bis 20 l einer Mischung aus 1,3-Butylenglycol und Wasser im Volumenverhältnis 50/50 bei 35°C unter Rühren für 1 h. Man gewinnt eine Suspension, die man filtriert, wobei man einen Extrakt erhält, der als Exrakt D bezeichnet wird.
II – Nachweis der Aktivität zur Stimulierung der Bildung von Glycosaminoglycanen
Beispiel 5
Nachweis der Aktivität zur Stimulierung der Bildung von Glycosaminoglycanen durch die Human-Fibroblasten mit dem Extrakt des Beispiels 1
Nachstehend wird der Test beschrieben, der zum Nachweis einer Aktivität zur Stimulierung der Bildung der GAG durch Fibroblasten angewendet wurde. Dieser in vitro-Test ist im übrigen vom Fachmann als zuverlässig und signifikant anerkannt.
Versuchsprotokoll
Fibroblasten aus einer Brust einer Frau von 49 Jahren werden hergestellt aus einem Mikroeinschnitt in die Dermis, wie von R. I Fresheny in ”Culture of anima cells; A manual of basic technique”, A. R. Liss, New York, 104–106, 1983, beschrieben.
10 000 Fibroblasten pro Kultivierungsvertiefung einer Platte mit mehreren Vertiefungen (6 Vertiefungen pro Platte) werden 24 h lang bei 37°C in ein Kulturmedium E199C (Gibco), das 10% fötales Kalbsserum enthält, eingeimpft.
Nach 24 h wird das Medium abgezogen und durch 100 μl des Mediums E199C ohne Serum, welches das zu prüfende Produkt, gelöst in DMSO, oder die gleiche Menge an DMSO im Falle der ”Vergleichs”-Kulturen und 4 μCl 3H-Glucosamin (vgl. TRK 398 Amersham) enthält. Man inkubiert 48 h lang bei 37°C. Dann entnimmt man die überstehenden Flüssigkeiten, teilt sie in Zweier-Gruppen ein und überführt sie in Eppendorf-Reagensgläser mit Schraubverschluß. In jedes der Reagensgläser gibt man 200 μl einer Lösung mit 0,2 mg/ml Pronase (Sigma P5147) in PBS, das 0,02% Natriumazid enthält. Man läßt eine Nacht lang bei 37°C reagieren. Die Pronase wird dann inaktiviert, indem man die Reagensgläser 5 min lang in siedendes Wasser eintaucht.
Nach dem Abkühlen auf Umgebungstemperatur werden die radioaktiv markierten GAG mit einer wäßrigen Lösung einer Mischung von Hyaluronsäure, Dermatansulfat, Chondroitinsulfat (1/1/1), 8 mg/ml auf 40 μl einer Lösung mit 100 mg/ml CPC (Sigma C9002) copräzipitiert. Man rührt und inkubiert 30 min lang bei Umgebungstemperatur. Man zentrifugiert den Niederschlag ab, saugt die überstehende Flüssigkeit ab und erhält den Zentrifugen-Rückstand mit 400 μl einer Lösung von CPC mit 10 mg/ml. Man rührt 5 min lang und nimmt den Zentrifugen-Rückstand in 500 μl Methanol wieder auf. Man rührt und überführt in Szintillationsphiolen, dann gibt man 10 ml Szintillations-Flüssigkeit zu und zählt die Radioaktivität aus.
Parallel dazu wird die Cytotoxizität des zu untersuchenden Produkts nach einem Test mit XTT (Tetrazoliumsalz) bewertet, wie von N. W. Roehm et al. im ”Journal of Immunological Methods” 1991, 142, 257–265, beschrieben. Dieser Test mißt die Lebensfähigkeit der Zellen. Die Aktivitäts-Ergebnisse sind nur für Konzentrationen angegeben, welche die Lebensfähigkeit der Zellen nicht verändern. Ergebnisse:

Gehalt an GAG, ausgedrückt in cpm % Aktivität Signifikanz

Vergleich 6977 ± 771

2,5 μg/ml 11808 ± 647 +69 S

10 μg/ml 12764 ± 734 +83 S
Die obige Tabelle zeigt auf eindeutige Weise, da der getestete Extrakt die Bildung der Gesamt-GAG durch die Human-Fibroblasten der Dermis stimuliert.
Beispiel 6
Nachweis der Aktivität zur Stimulierung der Bildung von Glycosaminoglycanen durch Human-Fibroblasten auf einem handelsüblichen Extrakt
Man führt einen Versuch durch, wie in Beispiel 5 beschrieben, unter Verwendung eines handelsüblichen Extrakts Ethanol/Wasser mit einem Volumenverhältnis von 50/50 von der Firma Maruzen (Japan).
Dieser Extrakt wurde blind getestet. Dieser Extrakt wurde lyophilisiert, dann in DMSO wieder aufgenommen zur Herstellung einer Mutterlösung mit 10 mg/ml und auf dem gleichen Stamm von Fibroblasten, wie sie in Beispiel 5 verwendet worden waren, unter den gleichen Bedingungen getestet. Es wurde festgestellt, daß eine Lösung mit 10 μg/ml die Synthese der GAG um mehr als 22,5%, ausgedrückt in cpm, stimuliert.
III – Anwendungsbeispiele
Beispiel 7 Kosmetische Creme zur Verbesserung der Festigkeit der Haut

alkoholischer Extrakt C aus Blättern von

Eriobotrya japonica nach Beispiel 3 2 g

Extrakt von Centella asiatica 0,5 g

parfümierter Exzipient ad 100 g

Diese Creme wird verwendet durch topischen Auftrag auf das Gesicht, den Hals und den Oberkörper. Diese Zusammensetzung verbessert auch die Weichheit der Haut. Beispiel 8 Gel zur Erzielung eines Spannungseffekts auf die Haut

Glycol-Extrakt D aus Blättern von Eriobotrya japonica,
wie er in Beispiel 4 erhalten wurde	3 g
Magnesiumphosphat-Ascorbinsäuresalz	1 g
Asiaticosid	0,1 g
in ein Gel überführter, mit Konserviermungsmittel
parfümierter Exzipient	ad 100 g

Dieses Gel wird verwendet durch lokalen Auftrag auf das Gesicht. Beispiel 9 Lotion zur Verstärkung der Tonizität der Dermis und zur Verminderung der Tiefe der Falten

Glycolextrakt aus Blättern von Eriobotrya japonica,
wie er in Beispiel 4 erhalten wurde	0,8 g
Extrakt von Panax Ginseng	0,2 g
Extrakt von Capsicum	0,01 g
wäßriger parfümierter Exzipient	ad 100 g

Diese Lotion wird durch Aufsprühen als Präventivum nach der Toilette verwendete. Beispiel 10 Antifalten-Creme

Glycol-Extrakt von Blättern von Eriobotrya japonica
gemäß Beispiel 4	2 g
AMP_c	0,05 g
Extrakt von Taisoh	1 g
Theophyllin	0,1 g
mit Parfüm und Konservierungsmittel emul-
gierter Exzipient	ad 100 g

Diese Creme verbessert bei täglicher Anwendung die Struktur der Dermis und gibt der Haut ihre Festigkeit und Tonizität (Spannung) wieder zurück.

Claims

Verwendung eines Extrakts aus der Pflanze Eriobotrya japonica als kosmetisches Agens zum Stimulieren der Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) durch die Zellen der Haut, insbesondere durch die Fibroblasten und/oder die Keratinocyten, wobei das genannte kosmetische Agens einer kosmetischen Zusammensetzung einverleibt wird, die ein kosmetisch akzeptables Vehiculum (Träger) enthält, wobei die kosmetische Zusammensetzung weiterhin enthält: – mindestens ein Additiv, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinoiden, Feuchthaltemitteln oder Hydratisierungsmitteln, Vitaminen, Ceramiden, Substanzen, welche die Synthese von Collagen fördern und Aminosäuren, und/oder – einen oder mehrere der folgenden Wirkstoffe (aktiven Prinzipien): – einen Hyaluronidase-Inhibitor – einen Elastase-Inhibitor – einen Aminozucker – einen Cyclaseadenylat-Aktivator, der die Synthese von AMP_c fördert – AMP_c oder einen dieses enthaltenden Extrakt – einen Phosphodiesterase-Inhibitor, der dem Abbau von AMP_c entgegenwirkt.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte kosmetische Agens dazu bestimmt ist, die Synthese der Hyaluronsäure durch die Keratinozyten zu stimulieren.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt aus der Pflanze Eriobotrya japonica zur Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung verwendet wird, welche die Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) stimuliert und dazu bestimmt ist, die Faltenbildung zu bekämpfen oder die Tiefe der Falten zu verringern.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt aus der Pflanze Eriobotrya japonica verwendet wird zur Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung, welche die Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) stimuliert und dazu bestimmt ist, die Festigkeit und die Weichheit der Haut zu verbessern oder eine Glättung der Oberfläche der Haut durch einen Spannungs-Effekt zu erzielen.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt aus der Pflanze Eriobotrya japonica zur Herstellunge einer kosmetischen Zusammensetzung vewendet wird, die bestimmt ist zur Verbesserung der Hydratation der Haut.
Verwendung eines Extrakts aus der Pflanze Eriobotrya japonica zur Herstellung von pharmazeutischen, insbesondere dermatologischen, Zusammensetzungen für die Behandlung von Patienten, die unter einer Insuffizienz der Synthese von Glycosaminoglycanen, insbesondere der Synthese der Hyaluronsäure, leiden, um die negativen Effekte der genannten Insuffizienz zu korrigieren, insbesondere die Festigkeit und Weichheit der Haut zu verbessern, die Faltenbildung zu bekämpfen oder die Tiefe der Falten zu verringern oder zur Erzielung einer Glättung der Oberfläche der Haut durch einen Tensor(Spannungs)-Effekt oder zur Verbesserung der Hydratation der Haut, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung weiterhin enthält: – mindestens ein Additiv, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinoiden, Feuchthaltemitteln oder Hydratisierungsmitteln, Vitaminen, Ceramiden, Substanzen, welche die Synthese von Collagen fördern und Aminosäuren, und/oder – einen oder mehrere der folgenden Wirkstoffe (aktiven Prinzipien): – einen Hyaluronidase-Inhibitor – einen Elastase-Inhibitor – einen Aminozucker – einen Cyclaseadenylat-Aktivator, der die Synthese von AMP_c fördert – AMP_c oder einen dieses enthaltenden Extrakt – einen Phosphodiesterase-Inhibitor, der dem Abbau von AMP_c entgegenwirkt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt ein Extrakt aus gemahlenen oberirdischen Teilen der Pflanze Eriobotrya japonica, wie Blättern, Blüten, Stengeln, Stengelrinden oder Früchten, ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt ein Extrakt aus gemahlenen Blättern der Pflanze Eriobotrya japonica ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt erhalten wird durch Extrahieren mit einem polaren Lösungsmittel, beispielsweise einem Alkohol wie Methanol, Ethanol, Propanol, Isopropanol, Propylenglycol oder Butylenglycol oder einer Mischung dieser Alkohole oder einer Wasser/Alkohol-Mischung.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß die genannte Zusammensetzung 0,001 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 5 Gew.-%, des genannten Extrakts, bezogen auf das Gesamtgewicht der genannten Zusammensetzung, in einem kosmetisch oder pharmazeutisch akzeptablen Exzipienten enthält.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß das genannten Retinoid ausgewählt wird aus der Gruppe Retinasäure und ihren Salzen und Estern, Retinaldehyd und Retinol und seinen Estern, wie das Propionat, Palmitat, Acetat; das obengenannte Feuchthaltemittel oder Hydratisierungsmittel ausgewählt wird aus der Gruppe Glycerin, Hyaluronsäure und Polyethylenglycol; das obengenannte Vitamin ausgewählt wird aus der Gruppe Vitamin A, Vitamin C und seinen Derivaten, insbesondere seinen Natrium oder Magnesiumsalzen, Vitamin E, Vitamin PP und den Vitaminen der Gruppe B, insbesondere B6 und B12; die Substanz, welche die Synthese von Collagen fördert, ausgewählt wird aus einem Extrakt von Centella asiatica, dem Madecassosid, der Madecassinäure, der Asiatsäure und dem Asiaticosid; und die Aminosäure ausgewählt wird aus der Gruppe Serin, Threonin, Asparaginsäure, Leucin, Lysin, Prolin und Hydroxyprolin.
Vewendung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem Hyaluronidase-Inhibitor um einen Extrakt von Echinacea angustifolia handelt; daß es sich bei dem Elastase-Inhibitor um einen Soja-Extrakt oder einen Algen-Extrakt, als Aosain bezeichnet, handelt; daß es sich bei dem Aminozucker um das Glucosamin oder das Galactosamin handelt; daß es sich bei dem Cyclaseadenylat-Aktivator, der die Synthese von AMP_c fördert, um das Forskolin, einen Extrakt von Cofeus forskholii oder einen Extrakt von Tephrosia handelt; daß das AMP_c oder ein dieses enthaltender Extrakt ein Extrakt von Taisoh ist; daß es sich bei dem Phosphodiesterase-Inhibitor, der dem Abbau von AMP_c entgegenwirkt, um Coffein oder Theophyllin handelt.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung, das die Stimulierung der Synthese der Glycosaminoglycane (GAG), insbesondere der Synthese der Hyaluronsäure, erlaubt, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt die Applikation einer kosmetisch wirksamen Menge eines Extrakts aus der Pflanze Eriobotrya japonica zur Erzielung einer Stimulierung der genannten Synthese, wobei der genannte Extrakt insbesondere in einem kosmetisch akzeptablen Exzipienten enthalten ist, wobei die Zusammensetzung weiterhin enthält: – mindestens ein Additiv, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinoiden, Feuchthaltemitteln oder Hydratisierungsmitteln, Vitaminen, Ceramiden, Substanzen, welche die Synthese von Collagen fördern und Aminosäuren, und/oder – einen oder mehrere der folgenden Wirkstoffe (aktiven Prinzipien): – einen Hyaluronidase-Inhibitor – einen Elastase-Inhibitor – einen Aminozucker – einen Cyclaseadenylat-Aktivator, der die Synthese von AMP_c fördert – AMP_c oder einen dieses enthaltenden Extrakt – einen Phosphodiesterase-Inhibitor, der dem Abbau von AMP_c entgegenwirkt.
Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß der genannte Extrakt in einer Zusammensetzung vorliegt, die eine Konzentration an Extrakt zwischen 0,001 und 10 Gew.-%, vorzugsweise zwischen 0,01 und 5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der genannten Zusammensetzung, enthält.
Verfahren nach einem der Ansprüche 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet, daß es sich dabei um eine kosmetische Behandlung handelt zur Verbesserung der Festigkeit und Weichheit der Haut, zur Bekämpfung der Faltenbildung oder zur Verringerung der Faltentiefe oder zur Erzielung einer Glättung der Oberfläche der Haut durch einen Tensor(Spannungs)-Effekt.