DE19701665A1 - Coding and identifying synthesis stages, e.g. in peptide synthesis - Google Patents
Coding and identifying synthesis stages, e.g. in peptide synthesisInfo
- Publication number
- DE19701665A1 DE19701665A1 DE1997101665 DE19701665A DE19701665A1 DE 19701665 A1 DE19701665 A1 DE 19701665A1 DE 1997101665 DE1997101665 DE 1997101665 DE 19701665 A DE19701665 A DE 19701665A DE 19701665 A1 DE19701665 A1 DE 19701665A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- chemical reactions
- synthesis
- resin
- paramagnetic
- compounds
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 title description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 238000000804 electron spin resonance spectroscopy Methods 0.000 claims abstract description 29
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 24
- -1 azadienes porphins Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 15
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 11
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 9
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 5
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 claims description 4
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 3
- 239000013528 metallic particle Substances 0.000 claims description 3
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 claims description 3
- FDFVVBKRHGRRFY-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine Chemical class CC1(C)CCC(C)(C)N1O FDFVVBKRHGRRFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VUZNLSBZRVZGIK-UHFFFAOYSA-N 2,2,6,6-Tetramethyl-1-piperidinol Chemical class CC1(C)CCCC(C)(C)N1O VUZNLSBZRVZGIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 2
- 150000004038 corrins Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000005041 phenanthrolines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims description 2
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002678 macrocyclic compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 58
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 58
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 11
- UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C Chemical compound CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960003569 hematoporphyrin Drugs 0.000 description 8
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GVQKWFQBWZOJHV-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-1-ium-4-carboxylate Chemical compound CC1(C)CC(C(O)=O)CC(C)(C)N1O GVQKWFQBWZOJHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 6
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 description 4
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000001362 electron spin resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- MGHMWKZOLAAOTD-DEOSSOPVSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(=O)O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 MGHMWKZOLAAOTD-DEOSSOPVSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 2
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000004377 microelectronic Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000009482 thermal adhesion granulation Methods 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N Bipyridyl Chemical group N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005350 ferromagnetic resonance Effects 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002652 macrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012508 resin bead Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
- C40B50/14—Solid phase synthesis, i.e. wherein one or more library building blocks are bound to a solid support during library creation; Particular methods of cleavage from the solid support
- C40B50/16—Solid phase synthesis, i.e. wherein one or more library building blocks are bound to a solid support during library creation; Particular methods of cleavage from the solid support involving encoding steps
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Structural Engineering (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
Description
In der kombinatorischen Chemie sind vor allem Synthesen an Trägermaterialien, wie z. B. Harzen, [R. R. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, 1963, 2149; J. S. Früchtel et al., Angew. Chem., 108, 1996, 19.] in den letzten Jahren zu einer vielversprechenden Methode bei der Darstellung von Peptiden und zunehmend auch vieler anderer organischer Substanzen geworden. Kombinatorische Synthesestrategien sind dadurch gekennzeichnet, daß in einer Synthesestufe nicht nur mit einem, sondern mit vielen Synthesebausteinen parallel oder in Mischung - umgesetzt wird. In jeder Stufe werden alle bzw. eine große Anzahl möglicher Kombinationen gebildet, so daß aus nur wenigen Bausteinen eine Vielzahl an Produkten, eine "Verbindungsbibliothek", entsteht. Eine bedeutende Anwendung kombinatorischer Synthesestrategien besteht in der Darstellung von Substanzbibliotheken zur Optimierung pharmazeutischer Wirkstoffe. Auch ist die kombinatorische Synthese mit herkömmlichen oder neuen Bausteinen aufgrund der möglichen strukturellen Diversität bei der Suche nach neuen Leitstrukturen zur Entwicklung von Wirkstoffen mit Anwendungsbereichen in der Human- und Tiermedizin sowie im Pflanzenschutz unverzichtbar geworden [R. Hirschmann, Angew. Chem., 1991, 103, 1305.]. Reaktionen an Trägermaterialien sind nicht auf pharmazeutische Anwendungen beschränkt und können zum Beispiel ebenso dem Auffinden neuer Werkstoffe dienen [X.-D. Xiang et al., Science, 1995, 268, 1738.].In combinatorial chemistry, syntheses on carrier materials, such as. B. Harzen, [R. R. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, 1963, 2149; J. S. Früchtel et al., Angew. Chem., 108, 1996, 19.] in recent years to a promising method in Representation of peptides and increasingly also many other organic substances become. Combinatorial synthesis strategies are characterized in that in one Synthesis step not only with one but with many synthesis building blocks in parallel or in Mixture - is implemented. In each stage, all or a large number are possible Combinations formed so that a large number of products from just a few a "connection library" is created. An important application of combinatorial Synthesis strategies consist in the representation of substance libraries for optimization active pharmaceutical ingredients. The combinatorial synthesis is also conventional or new building blocks due to the possible structural diversity in the search for new lead structures for the development of active substances with application areas in the Human and veterinary medicine and crop protection have become indispensable [R. Hirschmann, Angew. Chem., 1991, 103, 1305.]. Reactions on carrier materials are not limited to pharmaceutical applications and can, for example, also Finding new materials serve [X.-D. Xiang et al., Science, 1995, 268, 1738.].
Während die Möglichkeiten kombinatorischer Synthesestrategien vielfältig sind, werden die Anwendungsbereiche durch eine Reihe von Faktoren eingeschränkt. Ein großes Hindernis für die praktische Anwendung ist dabei die beschränkte Anzahl an einfachen und effizienten Codierungstechniken. Die Codierung einzelner Reaktionsschritte bzw. verwendeter Substanzen bei der Synthese sind Voraussetzung, um zum Beispiel eine in einem biologischen Testsystem aufgefundene aktive Verbindung zu identifizieren. Da sich zum Beispiel an einem Harzpartikel einer Split-Mix-Bibliothek [A. Furka et al., Int. J. Peptide Protein Res., 1991, 37, 487.] in der Regel nur eine gewünschte Substanz befindet, können mittels der Codierung die einzelnen Syntheseschritte, die am Harz abgelaufen sind oder Synthesebausteine, die eingeführt wurden, ermittelt werden.While the possibilities of combinatorial synthesis strategies are diverse, the Areas of application limited by a number of factors. A big obstacle for practical use, the limited number of simple and efficient Coding techniques. The coding of individual reaction steps or used Substances in the synthesis are a requirement, for example one in one biological test system to identify found active compound. Since the Example of a resin particle from a split mix library [A. Furka et al., Int. J. Peptides Protein Res., 1991, 37, 487.] usually only one desired substance is located by means of the coding, the individual synthesis steps that have taken place on the resin or Synthesis building blocks that have been introduced are determined.
Bekannte Methoden zur Codierung sind die Nucleotid- und Aminosäurencodierung [K. D. Janda, Proc. Natl. Acad Sci. USA, 1994, 91, 10779; V Nikolaiev et al., Peptide Res., 1993, 6, 161.], die Markierung mit halogenierten Aromaten (TAG-Technik) [M. H. J. Ohlmeyer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 10922; A. Borchardt et al., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 373; H. P. Nester et al., J. Org. Chem., 1994, 59, 4723.], physikalische Techniken, wie IR, NMR, Fluoreszenzspektroskopie und andere [G. Jung et al., Angew. Chem., 1992, 104, 375; B. J. Egner et al., J. Org. Chem., 1995, 60, 2652; S. K. Sarkar et al., J. Am. Chem. Soc, 1996, 118, 2305; H.-U Gremlich et al., Applied Specfroscopy, 1996, 50, 532.], sowie Dekonvolutionstechniken [H. Han et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 6419.]. Kürzlich wurden auch Verfahren zur Radiofrequenz- Verschlüsselung mit Hilfe mikroelektronischer Schaltkreise vorgestellt [K. C. Nicolaou et al., Angew Chem., 1995, 107, 2476.].Known methods of coding are nucleotide and amino acid coding [K. D. Janda, Proc. Natl. Acad Sci. USA, 1994, 91, 10779; V Nikolaiev et al., Peptide Res., 1993, 6, 161.], the labeling with halogenated aromatics (TAG technique) [M. H. J. Ohlmeyer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 10922; A. Borchardt et al., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 373; H.P. Nester et al., J. Org. Chem., 1994, 59, 4723.], physical techniques such as IR, NMR, fluorescence spectroscopy and others [G. Jung et al., Angew. Chem., 1992, 104, 375; B. J. Egner et al., J. Org. Chem., 1995, 60, 2652; S.K. Sarkar et al., J. Am. Chem. Soc, 1996, 118, 2305; H.-U Gremlich et al., Applied Specfroscopy, 1996, 50, 532.], and deconvolution techniques [H. Han et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 6419.]. Recently, methods for radio frequency Encryption using microelectronic circuits presented [K. C. Nicolaou et al., Angew Chem., 1995, 107, 2476.].
Die bisher bekannten Markierungstechniken sind für eine breite praktische Anwendung nur bedingt einsetzbar. NMR-spektroskopische Methoden sind aufgrund der vorwiegend in geringen Mengen dargestellten Substanzen aus kombinatorischen Syntheseansätzen zeitintensiv [S. K Sarkar et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 2305.] und zum Teil werden die aufgenommenen Spektren durch starke Signalverbreiterung wenig aussagekräftig. Massenspektroskopische Methoden zur Identifizierung führen in der Regel zur Zerstörung der dargestellten Substanz. Die zur Markierung mit halogenierten Aromaten notwendigen z. B. photolabilen TAG's sind zur Zeit nur durch aufwendige Synthesen zugänglich. Dekonvolutionstechniken sind ebenfalls synthetisch aufwendig. Bei der Radiofrequenz- Codierung mittels mikroelektronischer Bauelemente steht zur Zeit noch der unproportional hohe Preis einer breiten praktischen Anwendung entgegen.The previously known marking techniques are for wide practical use only limited use. NMR spectroscopic methods are mainly in the small amounts of substances shown from combinatorial synthetic approaches time consuming [p. K Sarkar et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 2305.] and in part the recorded spectra are not very meaningful due to strong signal broadening. Mass spectroscopic methods of identification usually lead to destruction the substance shown. The ones necessary for marking with halogenated aromatics e.g. B. photolabile TAGs are currently only accessible through complex syntheses. Deconvolution techniques are also synthetically complex. With the radio frequency Coding using microelectronic components is currently disproportionate high price against a wide practical application.
Die einfache, schnelle und zerstörungsfreie Identifizierung bestimmter Substanzreste bzw. der an einem Trägermaterial durchgeführten Syntheseschritte in einer chemischen Bibliothek bleibt auch weiterhin ein offenes Problemfeld. Für die Identifizierung einzelner Substanzreste einer mittels kombinatorischer Synthese erzeugten Substanzbibliothek sind somit allgemein anwendbare und praktikable Lösungen erforderlich.The simple, quick and non-destructive identification of certain substance residues or the synthesis steps carried out on a support material in a chemical library remains an open problem area. For the identification of individuals Substance residues of a substance library generated by combinatorial synthesis are thus generally applicable and practicable solutions are required.
Der Erfindung liegt deshalb die Aufgabe zugrunde, eine möglichst einfach zu handhabende Codierung und möglichst zerstörungsfreie Identifizierung von Verbindungen in einer kombinatorisch dargestellten Substanzbibliothek an Trägermaterialien zu ermöglichen. Die Codierung soll dabei möglichst einfach durchführbar und allgemein anwendbar gestaltet werden. Außerdem soll die Methode eine Identifizierung von Substanzresten einer Bibliothek in kurzer Zeit und ohne Abspaltung vom Trägermaterial ermöglichen. The invention is therefore based on the object of being as easy to use as possible Coding and, if possible, non-destructive identification of connections in one To enable the combinatorial depiction of the substance library on carrier materials. The Coding should be as simple as possible and generally applicable will. The method is also intended to identify substance residues Enable the library in a short time and without splitting off the carrier material.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß durch das Einführen paramagnetischer Reporter, z. B. Metallionen in Form stabiler und chemisch inerter Koordinationsverbindungen bzw. Radikale, während des Reaktionsverlaufs mittels bekannter chemischer Reaktionen bzw. bekannter physikalisch-chemischer Techniken, z. B. durch Radikalerzeugung mittels energiereicher UV-, β-, γ- oder Röntgen-Strahlung, zur Codierung von Syntheseschritten und Substanzresten gelöst. Die Identifizierung erfolgt mit Hilfe der ESR-Spektroskopie. Überraschend wurde gefunden, daß sich paramagnetisch markierte Substanzreste bzw. Syntheseschritte in verhältnismäßig kürzen Zeiten identifizieren lassen, wofür nur geringe Substanzmengen nötig sind. Es wurde festgestellt, daß die eingeführten paramagnetischen Reporter im weiteren Reaktionsverlauf stabil und auch am Ende einer abgeschlossenen Synthese identifizierbar sind. Die paramagnetischen Reporter können dabei vor, nach oder während bestimmter Synthesestufen eingeführt werden, wobei auch mehrere paramagnetische Reporter nebeneinander identifizierbar sind.The object is achieved by the introduction of paramagnetic reporters, e.g. B. Metal ions in the form of stable and chemically inert coordination compounds or Radicals, during the course of the reaction by means of known chemical reactions or known physicochemical techniques, e.g. B. by means of radical generation high-energy UV, β, γ or X-ray radiation, for coding synthesis steps and substance residues solved. Identification is carried out with the help of ESR spectroscopy. It was surprisingly found that paramagnetically labeled substance residues or Let synthesis steps be identified in relatively short times, for which only minor Amounts of substance are necessary. It was found that the paramagnetic introduced Reporters stable in the further course of the reaction and also at the end of a completed Synthesis are identifiable. The paramagnetic reporters can do this before, after or are introduced during certain stages of synthesis, including several paramagnetic reporters can be identified side by side.
Mit der Anwendung dieser neuen Markierungstechnik in kombinatorischen Syntheseprogrammen können z. B. paramagnetisch codierte Substanzreste bzw. Syntheseschritte mit Hilfe der ESR-Spektroskopie auf empfindliche Weise zerstörungsfrei, z. B. direkt am Harzpartikel, nachgewiesen werden. Die ESR-Spektroskopie kann dabei eine eindeutige ja/nein Entscheidung hinsichtlich bestimmter durchgeführter Syntheseschritte und eingeführter Substanzreste, die mit paramagnetischen Reportern markiert wurden, liefern. Die Anwendung dieser neuen Methode dient u. a. der Identifizierung von in biologischen Testsystemen aktiven Verbindungen, die sich z. B. in kombinatorisch dargestellten Substanzbibliotheken befinden und damit der Wirkstoffsuche, Leitstrukturoptimierung sowie Werkstoffsuche und -optimierung.With the application of this new marking technique in combinatorial Synthesis programs can e.g. B. paramagnetically coded substance residues or Synthetic steps with the help of ESR spectroscopy in a sensitive, non-destructive way, e.g. B. directly on the resin particles. ESR spectroscopy can do one clear yes / no decision with regard to certain synthetic steps carried out and imported substance residues that have been marked with paramagnetic reporters. The application of this new method serves u. a. the identification of in biological Test systems active connections that z. B. shown in combinatorial Substance libraries are located and thus the drug search, lead structure optimization as well as material search and optimization.
Geeignete, mittels ESR-Spektroskopie identifizierbare Reporter können dabei folgende
paramagnetische Spezies sein:
Suitable reporters that can be identified by means of ESR spectroscopy can be the following paramagnetic species:
- a) Koordinationsverbindungen paramagnetischer Metallionen, insbesondere der 1., 2. odera) Coordination connections of paramagnetic metal ions, especially the 1st, 2nd or
- 3. Übergangsmetallreihe, wie z. B. Mn2+, Fe3+, Cu2+, Mo5+, Ru3+ oder La2+ [J. R. Pilbrow, Transition Ion Electron Paramagnetic Resonance, Clarendon Press, Oxford, 1990, 2.]. Die paramagnetischen Metallionen sind aber nicht beschränkt auf diese. Als Liganden können eine Vielzahl bekannter, stabile Komplexe bildende Verbindungen verwendet werden. Beispiele dafür sind substituierte Bipyridyle, Phenanthroline, Azadiene, Porphine, Porphyrine, Corrine, Phthalocyanine, Tetraazaanulene und andere [N4]-Makrocyden, komplexe Schiffscher Basen cyclische Polyazaverbindungen sowie Polyether. Sie sind aber nicht nur beschränkt auf diese.3rd transition metal row, such as. B. Mn 2+ , Fe 3+ , Cu 2+ , Mo 5+ , Ru 3+ or La 2+ [JR Pilbrow, Transition Ion Electron Paramagnetic Resonance, Clarendon Press, Oxford, 1990, 2.]. However, the paramagnetic metal ions are not limited to these. A variety of known stable complex-forming compounds can be used as ligands. Examples of these are substituted bipyridyls, phenanthrolines, azadienes, porphins, porphyrins, corrins, phthalocyanines, tetraazaanulenes and other [N 4 ] macrocytes, complex Schiff bases, cyclic polyaza compounds and polyethers. But you are not limited to this.
- b) Radikalische Verbindungen, insbesondere organische Oxylstickstoffverbindungen (Spin marker), wie zum Beispiel substituierte 1-Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin- oder 1- Oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-Verbindungen [A. M. Wassermann et al., Eur. Polym. J., 1983, 19, 333.]. Die radikalischen Verbindungen sind aber nicht beschränkt auf Spinmarker.b) radical compounds, in particular organic oxy nitrogen compounds (spin markers), such as substituted 1-oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine or 1- Oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidine compounds [A. M. Wassermann et al., Eur. Polym. J., 1983, 19, 333.]. The radical connections are not limited to Spin marker.
- c) Paramagnetische Defekte, die in bekannter Weise mit physikalisch-chemischen Techniken, wie z. B. durch Bestrahlung eines geeigneten Polymers oder eines geeigneten Polymerenkomposits mit energiereicher Strahlung, wie z. B. UV, Röntgen- oder γ- Strahlung sowie β-Strahlung, erzeugt werden [Transient EPR Specfrocospy of Photoinduced Elecfronic Spin States in Rigid Mafrices, D. Schlik et al., S. 371 in Advanced EPR Applications in Biology and Biochemistry, A. J. Hoff ELSEVIER, Amsterdam - Oxford - New York - Tokyo, 1989.].c) Paramagnetic defects in a known manner with physico-chemical Techniques such as B. by irradiation of a suitable polymer or a suitable Polymer composites with high-energy radiation, such as. B. UV, X-ray or γ- Radiation as well as β-radiation are generated [Transient EPR Specfrocospy of Photoinduced electronic spin states in Rigid Mafrices, D. Schlik et al., P. 371 in Advanced EPR Applications in Biology and Biochemistry, A. J. Hoff ELSEVIER, Amsterdam - Oxford - New York - Tokyo, 1989.].
- d) Metallische Partikel, wie z. B. Eisen, Kobalt und Nickel, die in bekannter Weise in geeignete Trägermaterialien, vorzugsweise Polymere, wie z. B. Polystyrol eingebettet werden (ferromagnetische Resonanz). Man ist aber nicht beschränkt auf diese Metalle und auf Polymere.d) Metallic particles, such as. B. iron, cobalt and nickel, which in a known manner suitable carrier materials, preferably polymers, such as. B. embedded polystyrene become (ferromagnetic resonance). But you are not limited to these metals and on polymers.
Es ist von Vorteil, als Zentralmetall, wie unter a) beschrieben, z. B. Cu2+, Fe3+, Mn2+ und
Ru3+ zu verwenden und als Liganden zum Beispiel Tetraazaannulene, Schiffsche Basen,
Polyaza-, Dipyridyl- oder Porphyrin-Verbindungen folgender Struktur einzusetzen:
It is advantageous as the central metal, as described under a), for. B. Cu 2+ , Fe 3+ , Mn 2+ and Ru 3+ and to use as ligands for example tetraazaannulenes, Schiff bases, polyaza-, dipyridyl or porphyrin compounds of the following structure:
Man ist aber nicht beschränkt auf diese. But you are not limited to this.
Es ist weiterhin von Vorteil beispielsweise folgende Koordinationsverbindungen, wie unter
a) beschrieben, einzusetzen:
It is also advantageous to use, for example, the following coordination connections, as described under a):
Man ist aber nicht beschränkt auf diese.But you are not limited to this.
Weiterhin von Vorteil ist der Einsatz der unter b) beschriebenen organischen Radikale
folgender Strukturen:
Another advantage is the use of the organic radicals of the following structures described under b):
Man ist aber nicht beschränkt auf diese.But you are not limited to this.
Paramagnetische Reporter werden zum Beispiel bei Reaktionen an geeigneten
Trägermaterialien, wie z. B. funktionalisierten Polymeren (Harze), Gläser oder Keramiken,
eingeführt, indem in bekannter Weise
Paramagnetic reporters are used, for example, for reactions on suitable carrier materials such as e.g. B. functionalized polymers (resins), glasses or ceramics, introduced by in a known manner
- a) durch geeignete und bekannte chemische Reaktionen verschiedene paramagnetische Metallkomplexe vor, nach oder während bestimmter Syntheseschritte bzw. parallel mit bestimmten Substanzresten eingeführt werden.a) various paramagnetic reactions using suitable and known chemical reactions Metal complexes before, after or during certain synthesis steps or in parallel with certain substance residues are introduced.
- b) durch geeignete und bekannte chemische Reaktionen paramagnetisch markierte Substanzreste eingeführt werden. b) paramagnetically marked by suitable and known chemical reactions Substance residues are introduced.
- c) durch geeignete chemische Reaktionen, stabile Komplexe bildende Liganden vor, nach oder während bestimmter Syntheseschritte bzw. parallel mit bestimmten Substanzresten eingeführt werden. Anschließend werden in bekannter Weise paramagnetische Metallionen gebunden.c) by means of suitable chemical reactions, stable complexes forming ligands before, after or during certain synthesis steps or in parallel with certain substance residues be introduced. Then paramagnetic in a known manner Metal ions bound.
- d) durch geeignete chemische Reaktionen Substanzreste, an die Chelatliganden gebunden sind, eingeführt werden und diese vor, während oder nach der Reaktion mit paramagnetischen Metallionen codiert werden.d) residual substances bound to the chelating ligands by suitable chemical reactions are introduced and before, during or after the reaction with paramagnetic metal ions can be encoded.
- e) vor der Synthese ein geeignetes Trägermaterial mittels geeigneter Chelatliganden modifiziert wird. Während der Synthese werden in bekannter Weise paramagnetische Metallionen gebunden.e) a suitable carrier material using suitable chelating ligands before the synthesis is modified. During the synthesis, paramagnetic ones are known Metal ions bound.
- f) während der Synthese mittels bekannter chemischer Reaktionen freie Radikalverbindungen eingeführt werden.f) free during the synthesis by means of known chemical reactions Radical compounds are introduced.
- g) durch Bestrahlung mit Röntgen-, β- oder γ-Strahlung paramagnetische Defekte in einem geeignetem Trägermaterial, vorzugsweise in einem Polymer, wie z. B. Polystyrol oder in einem Komposit erzeugt werden.g) paramagnetic defects in one by irradiation with X-ray, β or γ radiation suitable carrier material, preferably in a polymer, such as. B. polystyrene or in a composite.
- h) metallische Partikel in geeignete Trägermaterialien, vorzugsweise in Polymere, wie z. B. Polystyrol, eingebettet werden.h) metallic particles in suitable carrier materials, preferably in polymers, such as. B. Polystyrene to be embedded.
Zum Nachweis der paramagnetischen Reportermoleküle, die direkt am Trägermaterial bzw. an den Substanzresten gebunden sind, kann die Elektronenspinresonanz-Spektroskopie herangezogen und in üblicher Weise durchgeführt werden.For the detection of the paramagnetic reporter molecules that are directly attached to the carrier material or are bound to the substance residues, electron spin resonance spectroscopy used and carried out in the usual way.
Die ESR-Spektroskopie liefert im vorliegendem Zusammenhang eine ja/nein Entscheidung hinsichtlich der Markierung bestimmter Syntheseschritte, Substanzreste bzw. Trägermaterialien. Das konkrete Aussehen der Signale ist von sekundärer Bedeutung, obwohl z. B. die Spektren der Spinmarker auch Informationen zur Moleküldynamik liefern. Für die Auswertung ist u. a. von Bedeutung, ob ein Signal vorhanden ist oder nicht. Gegebenenfalls müssen verschiedene Signale im Spektrum getrennt und eindeutig zugeordnet werden können. Aus diesem Grunde kann mit sehr geringen Signal-Rausch- Verhältnissen (S/R) bis nahe an die Nachweisgrenze gearbeitet werden. Diese Werte, insbesondere für die Spinmarker, liegen im pmol-Bereich, was z. B. einigen wenigen bis hin zu Bruchteilen eines Harzkügelchen entspricht.In the present context, ESR spectroscopy provides a yes / no decision with regard to the marking of certain synthesis steps, substance residues or Carrier materials. The specific appearance of the signals is of secondary importance, although e.g. B. the spectra of the spin markers also provide information on molecular dynamics. For the evaluation u. a. important whether a signal is present or not. If necessary, different signals in the spectrum must be separated and clear can be assigned. For this reason, very low signal-to-noise Ratios (S / R) are worked close to the detection limit. These values, especially for the spin markers, are in the pmol range. B. a few to corresponds to fractions of a resin bead.
Die Markierung von Trägermaterialien, einzelner Substanzreste bzw. Reaktionsschritte bei kombinatorischen Synthesen mittels paramagnetischer Reporter und deren Nachweis mit Hilfe der paramagnetischen Elektronenspinresonanzspektroskopie stellt eine vorteilhafte Codierungstechnik dar und beseitigt damit ein wesentliches Hindernis für die breite praktische Anwendung dieser Synthesemethode.The marking of carrier materials, individual substance residues or reaction steps in combinatorial syntheses using paramagnetic reporters and their detection with Paramagnetic electron spin resonance spectroscopy provides an advantageous one Coding technology and thus eliminates a major obstacle for the broad practical application of this synthesis method.
Die Erfindung soll anhand der nachstehenden Ausführungsbeispielen, die die Erfindung in keiner Weise beschränken, näher erläutert werden.The invention is based on the following exemplary embodiments, which the invention in in no way limit, be explained in more detail.
Für folgende Reaktionen kamen als Trägermaterialien die Harze ArgoGel NH2 (Fa. Argonaut Technologies Inc.), Chlorotrityl-Harz (Fa. NovaBiochem/Calbiochem) und Tentagel S NH2 (Fa. RAPP Polymere) zur Anwendung. Prinzipiell sind auch andere geeignete Trägermaterialien verwendbar.For the following reactions, the resins ArgoGel NH 2 (Argonaut Technologies Inc.), chlorotrityl resin (NovaBiochem / Calbiochem) and Tentagel S NH 2 (RAPP Polymer) were used as carrier materials. In principle, other suitable carrier materials can also be used.
In einer Fritte läßt man 140 mg ArgoGel NH2-Harz (0.43 mmol/g) in 2 ml DMF 0.5 h quellen. Zu dem Harz werden in folgender Reihenfolge 3.6 mg (0.06 mmol) Hämatoporphyrin, 9.2 mg (mmol) N-Hydroxybenzotriazol (HOBt) und 9.3 µl (0.06 mmol) Diisopropylcarbodiimid (DIC) gegeben. Nach 6 h schütteln bei ca. 20°C wird das Harz abfiltriert und 3 Mal mit je 1 ml N-Methylpyrrolidon (NMP), 1 ml Isopropanol und 1 ml Diethylether (Ether) gewaschen. Das dunkelbraun gefärbte Harz wird an der Luft bei Raumtemperatur getrocknet.140 mg of ArgoGel NH 2 resin (0.43 mmol / g) in 2 ml of DMF are allowed to swell in a frit for 0.5 h. 3.6 mg (0.06 mmol) of hematoporphyrin, 9.2 mg (mmol) of N-hydroxybenzotriazole (HOBt) and 9.3 μl (0.06 mmol) of diisopropylcarbodiimide (DIC) are added to the resin in the following order. After shaking for 6 h at approx. 20 ° C., the resin is filtered off and washed 3 times with 1 ml of N-methylpyrrolidone (NMP), 1 ml of isopropanol and 1 ml of diethyl ether (ether). The dark brown colored resin is dried in air at room temperature.
36 mg des unter 1.) dargestellten Harzes werden in ca. 1 ml NMP 10 min gequollen. Dazu gibt man 4.0 mg (0.023 mmol) CuCl2(H2O)2 und ca. 2 Tropfen Diisopropylethylanim (DIEA). Nach 2 h wird das Harz abfiltiert, 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen. Die ESR-Untersuchung ergab ein starkes Signal für den Cu2+- Komplex.36 mg of the resin shown under 1.) are swollen in approx. 1 ml NMP for 10 min. Add 4.0 mg (0.023 mmol) CuCl 2 (H 2 O) 2 and approx. 2 drops of diisopropylethylanim (DIEA). After 2 h, the resin is filtered off, washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The ESR investigation gave a strong signal for the Cu 2+ complex.
38 mg des unter 1.) dargestellten Harzes werden in ca. 2 ml NMP 10 min gequollen. Dazu übt man 0.1 mg (0.59 µmol) CuCl2(H2O)2 und 1 Tropfen Diisopropylethylamin (DIEA). Nach 4 h wird das Harz abfiltiert, 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen. Die ESR-Untersuchung ergab ein starkes Signal für den Cu2+-Komplex. Die Stickstoffsuperhyperfeinstruktur ist gut aufgelöst (Abb. 1).38 mg of the resin shown under 1.) are swollen in approx. 2 ml NMP for 10 min. To do this, 0.1 mg (0.59 µmol) of CuCl 2 (H 2 O) 2 and 1 drop of diisopropylethylamine (DIEA) are practiced. After 4 h the resin is filtered off, washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The ESR investigation gave a strong signal for the Cu 2+ complex. The superfine nitrogen structure is well resolved ( Fig. 1).
47 mg des unter 1.) dargestellten Harzes werden in ca. 2.5 ml NMP 10 min gequollen. Dazu gibt man 2 Tropfen einer 0.01 M FeCl3(H2O)6-Lösung in NMP und 1 Tropfen Diisopropylethylamin (DIEA). Nach 2 h wird das Harz abfiltiert, 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen. Die ESR-Untersuchung ergab ein gut sichtbares Signal für den Fe3+-Komplex.47 mg of the resin shown under 1.) are swollen in approx. 2.5 ml NMP for 10 min. Add 2 drops of a 0.01 M FeCl 3 (H 2 O) 6 solution in NMP and 1 drop of diisopropylethylamine (DIEA). After 2 h, the resin is filtered off, washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The ESR examination revealed a clearly visible signal for the Fe 3+ complex.
100 mg Chlorotrityl-Harz (1.05 mmol/g) läßt man 10 min in 3 ml NMP quellen. Dann werden 2 mg (5.6 µmol) Hämatoporphyrin-IX und 5 Tropfen DIEA zugegeben. Nach 2 h schütteln bei ca. 20°C wird abfiltriert und 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen. Das rotbraune Harz wird bei Raumtemperatur getrocknet.100 mg of chlorotrityl resin (1.05 mmol / g) is allowed to swell in 3 ml of NMP for 10 min. Then 2 mg (5.6 µmol) hematoporphyrin-IX and 5 drops DIEA are added. After 2 hours shake at approx. 20 ° C, filter and filter 3 times with 1 ml NMP, 1 ml isopropanol and 1 ml ether washed. The red-brown resin is dried at room temperature.
30 mg des unter 5.) dargestellten Harzes werden in ca. 2 ml NMP 10 min gequollen. Dazu gibt man 3 Tropfen einer 0.01 M CuCl2(H2O)2-Lösung in NMP und 1 Tropfen DIEA. Nach 2 h wird das Harz abfiltiert, 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen. Die ESR-Untersuchung ergab ein gut sichtbares Signal für den Cu2+-Komplex.30 mg of the resin shown under 5.) are swollen in approx. 2 ml NMP for 10 min. Add 3 drops of a 0.01 M CuCl 2 (H 2 O) 2 solution in NMP and 1 drop of DIEA. After 2 h, the resin is filtered off, washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The ESR examination revealed a clearly visible signal for the Cu 2+ complex.
300 mg mit Valin beladenes Chlorotritylharz (0,79 mmol/g), welches auf bekannte Weise dargestellt wurde, läßt man in ca. 3 ml NMP 20 min quellen. Anschließend gibt man zum Harz 8.9 mg (15 µmol) Hämatoporphyrin, 249 mg (0.644 mmol) Fmoc-Phe-OH, 200 mg (1.31 mmol) HOBT und zum Schluß 100 µl (0.65 mmol) DIC. Das Reaktionsgemisch wird 4 h geschüttelt. Danach wird 3 Mal mit je 3 ml NMP, 3 ml Isopropanol und 3 ml Ether gewaschen.300 mg of valine-loaded chlorotrityl resin (0.79 mmol / g), which in a known manner was allowed to swell in about 3 ml of NMP for 20 min. Then you give to Resin 8.9 mg (15 µmol) hematoporphyrin, 249 mg (0.644 mmol) Fmoc-Phe-OH, 200 mg (1.31 mmol) HOBT and finally 100 µl (0.65 mmol) DIC. The reaction mixture is Shaken for 4 hours. Then 3 times with 3 ml of NMP, 3 ml of isopropanol and 3 ml of ether washed.
100 mg des unter 7.) dargestellten Harzes werden in 2.5 ml NMP 10 min gequollen.
Anschließend gibt man 1 mg (5.9 µmol) CuCl2(H2O)2 und 5 Tropfen DIEA zu. Nach 2 h
wird 3 Mal mit je 2 ml NMP, 2 ml Isopropanol und 2 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch kann ein starkes Signal für den Cu2+-Komplex beobachtet werden.100 mg of the resin shown under 7.) are swollen in 2.5 ml of NMP for 10 min. Then 1 mg (5.9 µmol) CuCl 2 (H 2 O) 2 and 5 drops of DIEA are added. After 2 h, the mixture is washed 3 times with 2 ml of NMP, 2 ml of isopropanol and 2 ml of ether.
A strong signal for the Cu 2+ complex can be observed by ESR spectroscopy.
100 mg des unter 7.) dargestellten Harz werden in 2.5 ml NMP 10 min gequollen.
Anschließend gibt man 2 mg (7.4 µmol) FeCl3(H2O)6 und 5 Tropfen DIEA zu. Nach 4 h
wird 3 Mal mit je 3 ml NMP, 3 ml Isopropanol und 3 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch kann das Signal für den Fe3+-Komplex beobachtet werden.100 mg of the resin shown under 7.) are swollen in 2.5 ml of NMP for 10 min. Then 2 mg (7.4 µmol) FeCl 3 (H 2 O) 6 and 5 drops of DIEA are added. After 4 h, the mixture is washed 3 times with 3 ml of NMP, 3 ml of isopropanol and 3 ml of ether.
The signal for the Fe 3+ complex can be observed by ESR spectroscopy.
100 mg des unter 7.) dargestellten Harz werden in 2.5 ml NMP 10 min gequollen.
Anschließend gibt man 2 mg (7.4 µmol) MnCl2(H2O)4 und 5 Tropfen DIEA zu. Nach 4 h
wird 3 Mal mit je 3 ml NMP, 3 ml Isopropanol und 3 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch kann das Signal für den Mn2+-Komplex beobachtet werden.100 mg of the resin shown under 7.) are swollen in 2.5 ml of NMP for 10 min. Then 2 mg (7.4 µmol) MnCl 2 (H 2 O) 4 and 5 drops of DIEA are added. After 4 h, the mixture is washed 3 times with 3 ml of NMP, 3 ml of isopropanol and 3 ml of ether.
The signal for the Mn 2+ complex can be observed by ESR spectroscopy.
100 mg des unter 7.) dargestellten Harz werden in bekannter Weise mit 2 ml 40% Piperidin
in DMF behandelt und anschließend 3 Mal mit je 2 ml DMF, 2 ml Isopropanol und 2 ml
Ether gewaschen. Danach wird das Harz in 2 ml NMP aufgenommen und mit 134 mg (0.36
mmol) Fmoc-Met-OH, 83 mg (0.54 mmol) HOBT und 61 µl (0.40 mmol) DIC umgesetzt.
Nach 4 h wird 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen.
Anschließend wird das Harz in 2 ml NMP aufgenommen und man gibt 1 mg (5.9 µmol)
CuCl2(H2O2 und 5 Tropfen DIEA zu. . Nach 4 h wird abermals 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1
ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch kann ein starkes Signal für den Cu2+-Komplex beobachtet werden.
100 mg of the resin shown under 7.) are treated in a known manner with 2 ml of 40% piperidine in DMF and then washed 3 times with 2 ml of DMF, 2 ml of isopropanol and 2 ml of ether. The resin is then taken up in 2 ml of NMP and reacted with 134 mg (0.36 mmol) of Fmoc-Met-OH, 83 mg (0.54 mmol) of HOBT and 61 μl (0.40 mmol) of DIC. After 4 h, the mixture is washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The resin is then taken up in 2 ml of NMP and 1 mg (5.9 μmol) of CuCl 2 (H 2 O 2 and 5 drops of DIEA are added. After 4 hours, again 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml ether washed.
A strong signal for the Cu 2+ complex can be observed by ESR spectroscopy.
100 mg des unter 7.) dargestellten Harzes werden in bekannter Weise mit 2 ml 40%
Piperidin in DMF behandelt und anschließend 3 Mal mit je 1 ml DMF, 1 ml Isopropanol und
1 ml Ether gewaschen. Danach wird das Harz in 2 ml NMP aufgenommen und mit 134 mg
(0.36 mmol) Fmoc-Met-OH, 83 mg (0.54 mmol) HOBT und 61 µl (0.40 mmol) DIC
umgesetzt. Nach 4 h wird 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether
gewaschen. Anschließend wird das Harz in 2 ml NMP aufgenommen und man gibt 2 mg
(7.4 µmol) MnCl2(H2O)4 und 5 Tropfen DIEA zu. Nach 4 h wird abermals 3 Mal mit je 1
ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch kann die Hyperfeinstruktur für den Mn2+-Komplex beobachtet
werden.100 mg of the resin shown under 7.) are treated in a known manner with 2 ml of 40% piperidine in DMF and then washed 3 times with 1 ml of DMF, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The resin is then taken up in 2 ml of NMP and reacted with 134 mg (0.36 mmol) of Fmoc-Met-OH, 83 mg (0.54 mmol) of HOBT and 61 μl (0.40 mmol) of DIC. After 4 h, the mixture is washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The resin is then taken up in 2 ml of NMP and 2 mg (7.4 μmol) of MnCl 2 (H 2 O) 4 and 5 drops of DIEA are added. After 4 h, the mixture is washed again 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether.
The hyperfine structure for the Mn 2+ complex can be observed by ESR spectroscopy.
100 mg eines wie unter 8.) dargestellten Harz werden in bekannter Weise 1 h mit 2 ml 40%
Piperidin in DMF behandelt und anschließend 3 Mal mit je 1 ml DMF, 1 ml Isopropanol und
1 ml Ether gewaschen. Danach wird das Harz in 2 ml NMP aufgenommen und mit 134 mg
(0.36 mmol) Fmoc-Trp-OH, 83 mg (0.54 mmol) HOBT und 61 µl (0.40 mmol) DIC
umgesetzt. Nach 4 h wird 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether
gewaschen.
ESR-spektroskopisch wird das Signal für den Cu2+-Komplex beobachtet.100 mg of a resin as shown under 8.) are treated in a known manner for 1 h with 2 ml of 40% piperidine in DMF and then washed 3 times with 1 ml of DMF, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The resin is then taken up in 2 ml of NMP and reacted with 134 mg (0.36 mmol) of Fmoc-Trp-OH, 83 mg (0.54 mmol) of HOBT and 61 μl (0.40 mmol) of DIC. After 4 h, the mixture is washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether.
The signal for the Cu 2+ complex is observed by ESR spectroscopy.
100 mg ArgoGel NH2 (0.43 mmol/g) läßt man in 1.5 ml NMP 10 min quellen. Nach der
Zugabe von 2 mg (0.011 mmol) DL-1-Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-carbonsäure 3
mg (0.02 mmol) HOBT und 2.2 µl (0.014 mmol) DIC wird 4 h geschüttelt. Danach wird 3
Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch ist das Signal des Spinmarkers sehr gut sichtbar.100 mg ArgoGel NH 2 (0.43 mmol / g) are allowed to swell in 1.5 ml NMP for 10 min. After the addition of 2 mg (0.011 mmol) of DL-1-oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine-3-carboxylic acid, 3 mg (0.02 mmol) of HOBT and 2.2 µl (0.014 mmol) of DIC are shaken for 4 h. It is then washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether.
The signal of the spin marker is very clearly visible by ESR spectroscopy.
100 mg TentaGel NH2 (0.24 mmol/g) läßt man in 1.5 ml NMP 10 min quellen. Nach der
Zugabe von 1 mg (0.005 mmol) 1-Oxyl-2,2,6,6-tetramethyipiperidin-4-carbonsäure 2 mg
(0.013 mmol) HOBT und 1.5 µl (0.01 mmol) DIC wird 2 h geschüttelt. Danach wird 3 Mal
mit je I ml NMP, 1 ml Isopropand und 1 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch ist das Signal des Spinmarkers sehr gut sichtbar (Abb. 2).100 mg of TentaGel NH 2 (0.24 mmol / g) are allowed to swell in 1.5 ml of NMP for 10 min. After the addition of 1 mg (0.005 mmol) of 1-oxyl-2,2,6,6-tetramethyipiperidine-4-carboxylic acid, 2 mg (0.013 mmol) of HOBT and 1.5 μl (0.01 mmol) of DIC are shaken for 2 hours. It is then washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropane and 1 ml of ether.
The signal of the spin marker is very clearly visible by ESR spectroscopy ( Fig. 2).
100 mg ArgoGel NH2 (0.43 mmol/g) läßt man in 1.5 ml NMP 10 min quellen. Nach der
Zugabe von 0.5 mg (2.5 µmol) 1-Oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-carbonsäure 1 mg
(6.5 µmol) HOBT und 1 µl (6.4 µmol) DIC wird 2 h geschüttelt. Danach wird 3 Mal mit je
1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch ist das Signal des Spinmarkers sehr gut sichtbar.100 mg ArgoGel NH 2 (0.43 mmol / g) are allowed to swell in 1.5 ml NMP for 10 min. After the addition of 0.5 mg (2.5 µmol) of 1-oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-4-carboxylic acid, 1 mg (6.5 µmol) of HOBT and 1 µl (6.4 µmol) of DIC is shaken for 2 hours. It is then washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether.
The signal of the spin marker is very clearly visible by ESR spectroscopy.
100 mg ArgoGel NH2 (0.43 mmol/g) läßt man in 1.5 ml NMP 10 min quellen. Nach der
Zugabe von 0.5 mg (2.5 µmol) 1-Oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-carbonsäure, 4 mg
Hämatoporphyrin-Cu-Komplex (5.4 µmol), 2 mg (13 µmol) HOBT und 1.5 µl (9.6 µmol)
DIC wird 4 h geschüttelt. Danach wird 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml
Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch sind die Signale des Spinmarkers und des Cu-Komplexes sehr gut
identifizierbar.100 mg ArgoGel NH 2 (0.43 mmol / g) are allowed to swell in 1.5 ml NMP for 10 min. After adding 0.5 mg (2.5 µmol) of 1-oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-4-carboxylic acid, 4 mg of hematoporphyrin-Cu complex (5.4 µmol), 2 mg (13 µmol) of HOBT and 1.5 µl (9.6 µmol) DIC is shaken for 4 h. It is then washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether.
The signals of the spin marker and the Cu complex can be identified very well by ESR spectroscopy.
100 mg Chlorotritylharz (ca. 1 mmol/g) läßt man in ca. 1.5 ml NMP 10 min quellen.
Anschließend gibt man zum Harz 1 mg (5.5 µmol) DL-1-Oxy1-2,2,5,5-
tetramethylpyrrolidin-3-carbonsäure, 83 mg (0.215 mmol) Fmoc-Phe-OH und 0.5 ml DIEA.
Das Reaktionsgemisch wird 3 h geschüttelt. Danach wird mit 2 ml DIEA/Methanol (1 : 2) 20
min behandelt. Anschließend wird 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanolanol und 1 ml
Ether gewaschen und getrocknet.
ESR-spektroskopisch ist das Signal des Spinmarkers sehr gut sichtbar.
100 mg chlorotrityl resin (approx. 1 mmol / g) is allowed to swell in approx. 1.5 ml NMP for 10 min. Then 1 mg (5.5 µmol) DL-1-Oxy1-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine-3-carboxylic acid, 83 mg (0.215 mmol) Fmoc-Phe-OH and 0.5 ml DIEA are added to the resin. The reaction mixture is shaken for 3 h. Then it is treated with 2 ml DIEA / methanol (1: 2) for 20 min. It is then washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanolanol and 1 ml of ether and dried.
The signal of the spin marker is very clearly visible by ESR spectroscopy.
100 mg eines wie unter 18.) dargestellten Harzes werden in bekannter Weise mit 2 ml 40%
Piperidin in DMF behandelt und anschließend 3 Mal mit je 1 ml DMF, 1 ml Isopropanol und
1 ml Ether gewaschen. Danach wird das Harz in 2 ml NMP aufgenommen und mit 8.9 mg
(15 µmol) Hämatoporphyrin, 125 mg (0.34 mmol) Fmoc-Met-OH, 83 mg (0.54 mmol)
HOBT und 61 µl (0.40 mmol) DIC umgesetzt. Nach 4 h wird 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml
Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen. Anschließend wird das Harz in 2.5 ml NMP
aufgenommen und man gibt 2 mg (11.8 µmol) CuCl2(H2O)2 und 5 Tropfen DIEA zu. Nach
4 h wird abermals 3 Mal mit je 1 ml NMP, 1 ml Isopropanol und 1 ml Ether gewaschen.
ESR-spektroskopisch sind die Signale des Spinmarkers und des Cu-Komplexes sehr gut
identifizierbar (Abb. 3).100 mg of a resin as shown under 18.) are treated in a known manner with 2 ml of 40% piperidine in DMF and then washed 3 times with 1 ml of DMF, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The resin is then taken up in 2 ml of NMP and reacted with 8.9 mg (15 μmol) of hematoporphyrin, 125 mg (0.34 mmol) of Fmoc-Met-OH, 83 mg (0.54 mmol) of HOBT and 61 μl (0.40 mmol) of DIC. After 4 h, the mixture is washed 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether. The resin is then taken up in 2.5 ml of NMP and 2 mg (11.8 μmol) of CuCl 2 (H 2 O) 2 and 5 drops of DIEA are added. After 4 h, the mixture is washed again 3 times with 1 ml of NMP, 1 ml of isopropanol and 1 ml of ether.
The signals of the spin marker and the Cu complex can be identified very well by ESR spectroscopy ( Fig. 3).
Die Empfindlichkeit beträgt für ein konventionelles ESR-Spektrometer, z. B. im X-Band (9.4 GHz), ca. 1010 Spins/G [C. Henry, ESR spins its elecfrons, Analytical Chemist'y News & Features, May 1, 1996, 323 A.]. Messungen sind auch in allen weiteren Frequenzbereichen (z. B. L- (2 GHz), Q- (32 GHz) oder W- (200 GHz) Band) möglich. Es müssen also z. B. 1010 Spins in der Meßprobe für ein S/R = 1 bei einer Linienbreite von z. B. 1 G und einer Spektrometerzeitkonstanten t von z. B. 1 s (Meßzeit im Minutenbereich) vorhanden sein. Durch längere Meßzeiten (größere Zeitkonstanten bzw. höhere Anzahl von Akkumulationen n, S/R ∼ √n) kann z. B. die Nachweisempfindlichkeit um ein bis zwei Größenordnungen verbessert werden. Für die Spinmarkerspektren mit einer Breite von DH » 50 G ergibt sich z. B. für t = 1 s ein Wert von ca. 5.1012 Spins. Wegen der größeren Linienbreite ist die erforderliche Spinzahl z. B. für Cu2+ ein bis zwei Größenordnungen höher. Die Beladung der zu untersuchenden Proben mit paramagnetischen Reportern liegt im Bereich von 0. 1-20%, vorzugsweise bei 3-7%, um gut auswertbare Signale zu erhalten. Es ist die Einführung einer Vielzahl von paramagnetischen Reportern möglich. Die Anzahl liegt vorzugsweise bei etwa 10 Reportern. Die Zahl der Reporter entspricht dabei möglichen Reaktionsschriften bzw. eingeführten Substanzresten.The sensitivity is for a conventional ESR spectrometer, e.g. B. in the X-band (9.4 GHz), approx. 1010 spins / G [C. Henry, ESR spins its elecfrons, Analytical Chemist'y News & Features, May 1, 1996, 323 A.]. Measurements are also possible in all other frequency ranges (e.g. L- (2 GHz), Q- (32 GHz) or W- (200 GHz) band). So there must be z. B. 10 10 spins in the test sample for an S / R = 1 with a line width of z. B. 1 G and a spectrometer time constant t of z. B. 1 s (measuring time in the minute range). Through longer measuring times (larger time constants or higher number of accumulations n, S / R ∼ √n) z. B. the detection sensitivity can be improved by one to two orders of magnitude. For the spin marker spectra with a width of DH »50 G, z. B. for t = 1 s a value of approx. 5.10 12 spins. Because of the larger line width, the required spin number is z. B. for Cu 2+ one to two orders of magnitude higher. The loading of the samples to be examined with paramagnetic reporters is in the range of 0-120%, preferably 3-7%, in order to obtain signals that can be easily evaluated. A large number of paramagnetic reporters can be introduced. The number is preferably around 10 reporters. The number of reporters corresponds to possible reaction documents or imported substance residues.
Die Proben werden in einem Probenröhrchen im Resonator eines ESR-Spektrometers beispielsweise bei Raumtemperatur unter Luft oder Schutzgas z. B. im X-Band vermessen, wobei die Meßzeit hierbei üblicherweise im Minutenbereich liegt und die Mikrowellenleistung im Bereich von 100 µW bis 1 W, vorzugsweise bei 1-250 mW, die Modulationsamplitude z. B. 3 G und die Zeitkonstante z. B. 1 s betragen. Grundsätzlich sind jedoch auch hiervon abweichende Meßparameter für die Analyse der Codierung möglich.The samples are placed in a sample tube in the resonator of an ESR spectrometer for example at room temperature under air or protective gas z. B. measured in the X-band, the measuring time is usually in the minute range and the Microwave power in the range of 100 µW to 1 W, preferably at 1-250 mW, the Modulation amplitude z. B. 3 G and the time constant z. B. 1 s. Are basically however, different measurement parameters for the analysis of the coding are also possible.
Als Beispiel für Cu(II)-Ionen ist in Abb. 1 das ESR-Spektrum eines am Harz gebundenen Cu-Porphyrinkomplexes (Ausführungsbeispiel 3) dargestellt. Das ESR-Spektrum hat das für Cu(II) erwartete Aussehen [J. R. Pilbrow, a.a.O., 19]. Bedingt durch das Präpara tionsverfähren werden die Moleküle auf der Harzoberfläche räumlich voneinander getrennt (diamagnetisch verdünnt), wodurch die Stickstoffsuperhyperfeinstruktur schon bei Raum temperatur gut aufgelöst wird.As an example of Cu (II) ions, the ESR spectrum of a Cu-porphyrin complex bound to the resin (exemplary embodiment 3) is shown in FIG. 1. The ESR spectrum has the appearance expected for Cu (II) [JR Pilbrow, loc. Cit., 19]. Due to the preparation procedure, the molecules on the resin surface are spatially separated from one another (diamagnetically diluted), which means that the nitrogen superhyperfine structure is well dissolved even at room temperature.
In Abb. 2 wird als ein Beispiel für Radikalverbindungen das ESR-Spektrum von 1-Oxyl- 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-carbonsäure, gebunden an ArgoGel-Harz, gezeigt (Ausführungsbeispiel 15). Ähnliche Spektren ergeben sich zum Beispiel auch für DL-1- Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3 -carbonsäure und andere Spinmarker. Die Spektren zeigen das für immobilisierte Spinmarker (Radikalverbindungen) typische Aussehen [D. Marsh et al., Spin Label Studies of the Siructure and Dynamics of Lipids and Proteins in Membranes, in Advanced EPR, Applications in Biology and Biochemistry, Ed. A. J. Hoff ELSEVIER, Amsterdam-Oxfort-New York-Tokyo 1989.].In Fig. 2, the ESR spectrum of 1-oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-4-carboxylic acid, bound to ArgoGel resin, is shown as an example of radical compounds (exemplary embodiment 15). Similar spectra also result, for example, for DL-1-oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine-3-carboxylic acid and other spin markers. The spectra show the appearance typical of immobilized spin markers (radical compounds) [D. Marsh et al., Spin Label Studies of the Siructure and Dynamics of Lipids and Proteins in Membranes, in Advanced EPR, Applications in Biology and Biochemistry, Ed. AJ Hoff ELSEVIER, Amsterdam-Oxfort-New York-Tokyo 1989.].
Um verschiedene Synthesestufen zu charakterisieren, besteht zum Beispiel die Möglichkeit, unterschiedliche paramagnetische Reporter während der Syntheseschritte einzuführen und mittels ESR-Spektroskopie zu identifizieren. Ein Beispiel dafür ist in Abb. 3 dargestellt, welche die Überlagerung eines Cu-Porphyrinspektrums mit einem Spin-Marker Spektrum zeigt. Diese Messung wurde an einem Chlorotrityl-Harz durchgeführt, welches zum Beispiel in einem 1. Schritt mit einer Aminosäure beladen und gleichzeitig mit einem Spinmarker markiert wurde. In einem anschließenden Syntheseschritt wurden in gewohnter Weise eine 2. Aminosäure sowie der Hämatoporhyrinligand gekuppelt. In einem weiteren Schritt wurden als paramagnetische Reporter zum Beispiel Cu2+-Ionen eingeführt (Ausführungsbeispiel 19). Ein Vergleich mit dem Spektrum des Cu- Hämatoporphyrinkomplexes (Abb. 1) zeigt, daß man die überlagerten Spektren der beiden paramagnetischen Reportermoleküle gut detektieren kann. Im gΠ-Bereich überlagern sich die Linien nicht und im g┴-Bereich sind die Signale deutlich unterscheidbar. Eine gute Signaltrennung ist bei Verwendung mehrerer paramagnetischer Reportermoleküle immer dann möglich, wenn sich zum Beispiel die g-Faktoren unterscheiden oder die Fein-, Hyperfein- oder Superhyperfeinaufspaltungen unterschiedlich sind oder die Linienbreiten voneinander abweichen. Andererseits ist eine Signaltrennung unter bestimmten Umständen auch bei ähnlichen g-Faktoren und Linienbreiten möglich. Ein Beispiel dafür wäre die Überlagerung eines Mn2+-ESR-Spektrums mit einem Spektrum eines Radikals, welches in der Lücke zwischen der 3. (m1 = +1/2) und 4. Mn2+-Hyperfeinstrukturlinie (mI = -½) erscheint.In order to characterize different synthesis stages, it is possible, for example, to introduce different paramagnetic reporters during the synthesis steps and to identify them using ESR spectroscopy. An example of this is shown in Fig. 3, which shows the superposition of a Cu porphyrin spectrum with a spin marker spectrum. This measurement was carried out on a chlorotrityl resin which, for example, was loaded with an amino acid in a 1st step and at the same time was marked with a spin marker. In a subsequent synthesis step, a second amino acid and the hematoporhyrin ligand were coupled in the usual way. In a further step, Cu 2+ ions, for example, were introduced as paramagnetic reporters (exemplary embodiment 19). A comparison with the spectrum of the Cu hematoporphyrin complex ( Fig. 1) shows that the superimposed spectra of the two paramagnetic reporter molecules can be detected well. The lines do not overlap in the g Π range and the signals are clearly distinguishable in the g Π range. Good signal separation is always possible when using several paramagnetic reporter molecules if, for example, the g factors differ or the fine, hyperfine or super hyperfine splits are different or the line widths differ. On the other hand, signal separation is possible under certain circumstances even with similar g factors and line widths. An example of this would be the superposition of an Mn 2+ ESR spectrum with a spectrum of a radical, which is in the gap between the 3rd (m 1 = +1/2) and 4th M n2 + hyperfine structure line (m I = -½ ) appears.
Claims (18)
12. The method according to claims 1, 7 to 11, characterized in that ligands are used with the following structure:
13. The method according to claims 1, 7 to 12, characterized in that coordination compounds having the following structure are introduced by means of suitable chemical reactions:
16. The method according to claims 1 and 15, characterized in that radical compounds having the following structure are introduced by means of suitable chemical reactions:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1997101665 DE19701665A1 (en) | 1997-01-18 | 1997-01-18 | Coding and identifying synthesis stages, e.g. in peptide synthesis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1997101665 DE19701665A1 (en) | 1997-01-18 | 1997-01-18 | Coding and identifying synthesis stages, e.g. in peptide synthesis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19701665A1 true DE19701665A1 (en) | 1998-07-23 |
Family
ID=7817735
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE1997101665 Withdrawn DE19701665A1 (en) | 1997-01-18 | 1997-01-18 | Coding and identifying synthesis stages, e.g. in peptide synthesis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE19701665A1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999010016A1 (en) * | 1997-08-21 | 1999-03-04 | Resolution Pharmaceuticals Inc. | Combinatorial library |
| WO2000078740A1 (en) * | 1999-06-23 | 2000-12-28 | Warner-Lambert Company | Solid-supported initiators and functional polymers for use in organic synthesis and combinatorial chemistry |
-
1997
- 1997-01-18 DE DE1997101665 patent/DE19701665A1/en not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999010016A1 (en) * | 1997-08-21 | 1999-03-04 | Resolution Pharmaceuticals Inc. | Combinatorial library |
| WO2000078740A1 (en) * | 1999-06-23 | 2000-12-28 | Warner-Lambert Company | Solid-supported initiators and functional polymers for use in organic synthesis and combinatorial chemistry |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bahureksa et al. | Soil organic matter characterization by Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry (FTICR MS): A critical review of sample preparation, analysis, and data interpretation | |
| DE60037267T2 (en) | SURFACE IMPROVED SPECTROSCOPIC ACTIVE COMPOSITE NANOPARTICLES | |
| DE69926260T3 (en) | COMPOSITE MATRIX WITH MICROBALLS | |
| DE60037671T2 (en) | COLLOIDAL PARTICLES THAN NANOBARCODES | |
| DE102005020384A1 (en) | Spectroscopic method for the detection of analytes | |
| EP1277055B1 (en) | Biochip for the archiving and medical laboratory analysis of biological sample material | |
| Czarnik | Peer Reviewed: Combinatorial Chemistry | |
| DE102004062573A1 (en) | Three-dimensional nano- and microstructured supports | |
| Alanazi | Recent Advances in Liquid Chromatography–Mass Spectrometry (LC–MS) Applications in Biological and Applied Sciences | |
| DE102012104504B4 (en) | Polypeptide markers | |
| DE19701665A1 (en) | Coding and identifying synthesis stages, e.g. in peptide synthesis | |
| DE19925402C2 (en) | Screening of target-ligand interactions | |
| DE69902678T2 (en) | CHEMICAL CONSTRUCTIONS AND THEIR USE | |
| DE69909312T2 (en) | METHODS FOR IDENTIFYING "HOT SPOT" REMAINING BINDING PROTEINS AND SMALL COMPOUNDS THAT BIND TO THESE | |
| EP1252507A2 (en) | Measuring method and sensor device for carrying out chemical and pharmaceutical analysis and synthesis | |
| EP1587624A1 (en) | Sample vessel for analyses | |
| EP1984739B1 (en) | Method and diagnostic kit for simultaneous identification and quantification of individual biomolecules or biomolecules which are present in mixtures and their modifications | |
| WO2010031471A1 (en) | Method for marking and/or identifying biomolecules | |
| DE102020129522A1 (en) | Indicator for determining a pH value of a solution | |
| EP1651959B1 (en) | Molecular probe and material for the detection of an analyte, and use thereof | |
| EP3176581A1 (en) | Construction kit for a multiplex drug discovery system with high-throughput properties | |
| Zhang | Comprehensive Characterization of Natural Organic Matter in Aquatic Environment with Integration of Mathematical Analysis Methods | |
| DE10220593A1 (en) | SPR sensor surface support | |
| DE10160177A1 (en) | Location of ligands for bonding to a given drug target, comprises using NMR with a reference and a test spectrum, to assess changes in the drug target signals without using isotopes for marking | |
| DE102017123744B4 (en) | High-throughput screening of combinatorial libraries using on-chip optical detection and mass spectrometric sequencing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8141 | Disposal/no request for examination |