DE1966521A1 - Verfahren zur herstellung von penicillin-derivaten - Google Patents

Description

Verfahren zur Her st ο llung von Penicillin-Pei'ivaten

liie Erfinjuii£ bc-trirft ein Verfahren zur Herstellung von Penicillin-Dorivaten. Insbenonuere bezieht sich die Erfindung auf ein Verfahren aur Herstellung von iJÜ-Aminobenzylpenioillin oder p-AmiiiOberizylpenicillin. Insbesondere befaßt sich die Erfindung üiit einem Verfahren zur Herstellung von oC-Aininobenzyl- >onicillin oder p-Aiiiinobenzylpenicillin durch eine enzyraati- :jche lieaxtiün.

Die ex-finiun; a_c-.emäß hergestellten Verbindungen, und zwar oC-Auinobenzy!penicillin und p-Aininobenzylpenicillin, sind Ver-

3 0 9 8 11/10 7

^BAD

1986521

bindungen., die sich in der Medizin verwenden lassen.

Durch die Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung von oC-Aminobenzylpenicillin und p-Arainobenzylpenicillin zur Verfugung gestellt. Dieses Verfahren läßt sich in einfacher und wirksamer Weise durchführen. Die Herstellung erfolgt durch eine enzymatische Reaktion, die gegebenenfalls in technischem = - Maßstabe, durchgeführt werden kann, wobei das jeweils gewünschte Produkt in hohen Ausbeuten erhalten wird. .

~ Erfindungsgemäß wird oC-Aminobsrizylpenicillin durch Verwendung von ICulturbrühen bestimmter Mikroorganismen, davon abgetrennter Zellen oder enzyamtischer lösungen _y die aus diesen Kulturbrühen extrahiert werden, hergestellt, wobei 6-Aniinopenicillansäure (nachstehend als 6APA abgekürzt) oder ein Pennicillin-Derivat und oC-lminophenylacetat oder ein Derivat davon verwendet wird. In entsprechender Weise wird p-Ainino- - benzylpenicillin aus 6APÄ oder einem Penicillin-Derivat und p—Aminophenylacetat oder einem Derivat davon hergestellt.

ψ , Die Herstellung von dC-Aminobenzylpenicillin und p-Aminobenzylpenicillin aus 6APÄ oder einem anderen Penicillin^Derivat ; undcC- oder p-Aminophenylacetat wird erfindungsgemäß unter Verwendung von ICulturbrühen, Zellen oder enzymatischen Iiösungen, die von einem Mikroorganismus erhalten werden, der

zu dem Genus Pseudomonas, Arthrobacter, Gorynebaoterium, Brevibacterium, Micrococcus, Mycobacterium, Focardia, Xluyvera, Rhodopseudümonas, Streptomyces oder dergleichen gehört, durchgeführt. Spezifische Bakterien, die zu den vorstehend erwähnten Genera gehören, zeichnen sich dadurch aus, daß sie

3Q8811/1O7S

BADOWQiNAl

eine "bemerkenswert starke enzymatische Aktivität 2ur Herstellung von ©S-Amlnobenzylpenicillin oder p-Aminobenzylpenicillin aus 6APA (oder einem Penicillin) und cC-Aminophenylacetat bzw. pi-Aminophenylacetat "besitzen.

Die Wii-kung der erfindungsgemäß en Enzyme geht aus folgenden Eeaktionaschemata hervor:

1. Herstellung von oC-AminolD ensylpenicillin, falls 6APA als Substrat verwendet wirdϊ

ΈΚ

H -H S

- c - c

- Έ

OH

- GQOH

cC-AininoTJhenylacetat

S-Äminopenicillansäure (6APA)

H H S

-ΟΙΪ - 0ΟΙΤΗ—C - C

G—

G -COOH

CJC-Aminob enzylpenicillin

3 0 9 Ö :1 >1 ^- -1 Q 7 S-

Wird Penicillin G als Substrat verwendet, dann verläuft die Reaktion nach folgendem Heafctionsmechanismusi

-OH- COOH +

H H ι ι

-0H₀CONH -0-0

^ 11

C - N

cO-Aminophenylacetat

C - COOH H

Penicillin G-

-OH₂OOOH +

CHCONH ι H
ι

- C-

H t

\ CH

CH,

C- Ν·

■ Q - COOH

Phenylacetät oC-Aminobenzylpenicillin

; 3U9 811/1Q75

ο ^τ·Γα

Herstellung von .p-ÄBiinobensylpenieillin, falls 6APA als Substrat vervvendet wird: - '

H H-- S .

SiH,

öooH + :πΐ₂ - ο - C-CH₇

\i

O'

n-_If M₃

G - GOOH

p-Aminophenylacetat 6-AniIiiope nie ill ansäure ( 6ApA)

Σ0 + IH

H-ι

O- -t

C -

G ^ö\

CTT

■. -3-H"— 'C - COOE

p-Aminqb enzylp.eni eillin

30981t/tß?S

t/ird Penicillin Q- als äuVaLrat tc rwenacrt, dann L"uft die Reaktion nach χ ölherd em iteal-ctionsme-clianisnius abs.--.

ITIL

-CH₂GOOH

p-Aminophenylacetat

CH₂GOITH

II H

- C - C

C _

-C - COOH H

Penicillin G

-GH₂COOH + Ii

H
ι

II

- C

GH,

CH,

II- --G - COOK

■Phenylaeetat

p- Auiinob enzy Ip e ni c illin.

3038 M/10 7 5-

8AD OWGJN

Andere bevorzugte Mikroorganismen, die ebenfalls erfindungsgeraäß eingesetzt werden können, sind ICohlenwasserstQff-assimilierende Mikroorganismen, zu den G-enera Pseudomonas, Arthrobacter, Corynebacterium, Brevihacterium,, Micröcoeeus, Mycobacterium, Mocardia, Kluyvera, Rhodopseudomas, Streptomyces oder dergleichen gehörend. Mutantenstamme, welche die enzymatische Aktivität besitzen, die zur Bewirkung des erfindungsgemäßen Verfahrens erforderlich ist, können ebenfalls verwendet werden. Mutanten mit einer derartigstarken enzymatisehen Wirkung werden in der Weise erhalten, daß eine genetische Mutation durchgeführt wird, wobei man sich beispielsweise einer Behandlung mittels ultravioletter Strahlen, einer Bestrahlung mittels Röntgenstrahlen, chemischer Mutationsmittel oder dergleichen bedient. .

Entweder ein synthetisches Kulturmedium oder ein natürliches Kahrffledium eignen sich nur Züchtung der erfindungsgemäß eingesetzten Stämme, sofern, das. jeweilige-Medium die zum- Wachs- -tumjäeje verwendeten Stämme wesentlichen Hähr-nittel enthält. Derartige ITährmlttel sind bekannt. Bs handelt sich beispielsweise um eine ICohlenstoffquelle, eine Stickstoff quelle, anorganische Verbindungen öder dergleichen. Diese 'Materialien werden von dem eingesetzten Mikroorganismus in den entsprechenden Mengen verbraucht. Als Kohlenstoffquelle kommen beispielsweise Saccharinmaterialien, wie z.B. Glukose",- Pruktose, Maltose, Rohrzucker, Stärke, Stärkehydrolysate, Melassen, Sorbit oder dergleichen in Frage. Ausserdem kann man,beispielsweise organische Säuren einsetzen, z.B. Essigsäure, Milch-

BA& QfUQiNAl 1/m? B

säure oder dergleichen. Diese Substanzen können entweder einzeln oder 'In Form von Mischungen aus zwei oder mehreren Substanzen verwendet werden. Bei der Verwendung von Sohlen-. wasserstoff-assirnilierenden Hikroorganisinen können Kohlenwasserstoffe, beispielsweise ii-Paraffine, rohe Urdölbestandteile, Kerosin, Leichtole, Schweröle oder dergleichen ■ in dein Fährmedium als einzige Ilohlenstoffquelle oder als Ilauptkohlenstoffquelle verwendet werden.

Als Stickstoffquelle korfimen verschiedene Arten anorganischer oder organischer Salze oder Verbindungen in Frage,. IDrwähnt * seien beispielsweise Harnstoff,-flüssiges Ammoniak oder Ammoniumsalze, wie beispielsweise Ammonium chi or id, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Ammoniuraacetat, AmnioniumphOsphat oder dergleichen, Ferner kommen natürliche Substanzen in Frage, die Stickstoff enthalten, wie beispielsweise Maisflüssigkeit, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton, Fischmehl, Fleischbrühe, Kaseinhydrolysate, Kasaminosäure, lösliche Fischbestandteile, Reiskleieextrakt oder dergleichen. Diese Substanzen können ebenfalls entweder für cd oh"allein oder" in Kombination aus zwei oder mehreren Substanzen verwendet werden. . - " " '

Anorganische Verbindungen, die dem Kulturmedium .zugesetzt werden können, sind beispielsweise Magnesiumsulfat, Eat-riumphqsphat, Kaliuiidihydro£:enphosphat, Kaliummonohydrogenphosphat, Eisensulfat, Mangan chlor id, Calciumchlorid, ifatriumchlorid, Zinksulfat oder dergleichen»

0,9811/1075 BAD

Pas Züchten wird unter aeroben Bedingungen durchgeführt, beispielsweise durch aerobes Schütteln der Kultur oder durch BUh ren und BeIUften einer Submerskultur, und 2warbei einer peratur von "beispielsweise" ungefähr 20 - 50°ö sowie la ei einem

Wert - ' . ' . ■ ·-

ply⁷ von "beispielsweise 5,Q"^:** 9»0» Das Züobttn ?fird im' allge-

raeinen während einer Zeitspanne von etwa 1 - 7 -Tagen duroh« geführt,, Die Bnsyme, die zuv Durchführung dir mtißen Eeaätionen erforderliGh-sind, ?/erd§n la diji nsQllen sowie in dar ICulturlorühi i

Inzyra kann üqu Auseaii£Siaaterialien entwsdir in, form der KulturbrLihe oelbgt, der Mikroorganisivienzelign, dgr Kultur« brühe j oie naoh der intfernung der MikroorganiBrii§ngellgn an fällt, gder in form einer Inajnalusuiig, dig durah dieegr !Sub.stanggn nach bekannten Methoden erhalten st, biigpiilswe.ise duroh Aussalzen niittell jtainiQai

§ine. Dialyse, dureh iugfallen äurah".'Algteä ©dir !,t ngl_? durali gauleneh^aniatggr^phig oder dirgleio fglli MikroQrgantgmenEelle.a tingeBttgit werden_? W§rggii

als ßol^hi, in BOr-m von iugpenslQiieii ödtr in form

i· fellen Yerwindit (dag iDrgelini£-.k vgn Alitön durchgeführt v/§i>ä@n)., Wird vor-V/@ndet_f dsan wird dag gubgtrat Ifnioillin d;e.r Ku alö ealeheg ^ugesetgt, Die asaktion wird durehgfftihrt, dein, dir PiI=WfVt mt bii§pIe 1 SvVElige 6y| *■ l_tQ itBi&itillt vrar« den Ui%t - : - _

-VQϊ^!stalltM grvmbnt, wfpian ßAi^ ßd@r· B"@gie±liiB©_t. wit

in f ©4§r

1171071 BADORtGINAL

1908521

als Substrat verwendet. Diese Verb indungen, werden gewöhnlich in form itaer Kalium-- otter iTatriunsalze eingesetzt. Als andere Substratausgangsßiateriaiien werden die Kalium- oder ETatriumsalze you ^-Äniwaopnenyl&cetat. bzw, p-Aminophenylacetat verwendet. Derivate dieser Yerbindungen., wie beispielsweise das Amid, der Methylester, der üthylester, der Ihiöglykolsäureester oder das Hydroohlorid, können ebenfalls verwendet werden. ■

Jm allgemeinen wird die Beaktion 1» einer Eeaktionslösung durshge führt, die dureh gugabg der zwei 8ub a tr ate sowie entsprechender Mengen der !ngymraaterialien zu einer Pufferlösung mit einem definierten pHMiitrt hergiisterit worden ist. Auss^rd§m kan» die Etaktion in einer ßärungsflüssigkeit, wie sie v&rstehtnd erwähnt wurde, durohgeführt werden, Dieser Gärungs-^ fliisäiikfit wtrdfn dit gwei Oubstrate zugesetzt. Die Reaktion kann innerhalb fines breiten pH-Bgreiches durchgeführt werden, b@igpiflgweise innerhalb eines pH-Bereioheg· von 2 - 8. Bin optimalfr pH-lereioh zur Durahführung der erfindungsgemäßen Reliegt gwiishen 5,5 und'7»-5 und vorzugsweise zwisohen

β, 5 und 7,3-, £i§ leaktion wird bei 25» 5O⁰G und'vorzugsweise b©i iinfm Vert g.wi§Gh§» J5 und 38°0 während einer Zeitspanne von 1 » 24 Stuadtn durohg©führt,

nmoh B-aendigueg der Äealctlon erhaltene cC-Aininobenzylpeni-

oder p-Aminotoesaylpenioillin läßt sich in einfacher Weise naoh ttfelishin Mtthodta abtrennen. In vorteilhafter Weise werden diese VerbinduBgea in- dfr Weist gewonnen, daß ,

3ö98imO7S

eine tiberführungsextraktion oder eine Ausfällung mittels organischer lösungsmittel mit einer Ausfällung am."".Is'öelektrischen Funkt, einer Ionenaustauscher-Harzhehandrung, einer Säulenchromatographie oder dergleichen kombiniert wird·

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie zu beschränken. Sofern nicht anders angegeben, beziehen si.ch die Prozentangaben auf das G-e wicht pro Mt er Wasser,

Beispiel 1

Als Impfmikroorganismus wird Pseudomonas sp. ATCG 21284 verwendet. Eine Platinschleife des Impfmikroorganismus wird auf einen 250 nil-Erlenmeyer-Kolben auf ge impft, der 20 ml einer Impfkultur enthält. Die se Impf fcul tür besteht aus 1$ Pepton, 1$ Fleischextrakt, 0,5$ Hefe extrakt und 0,3$ Natriumchlorid. Das Züchten wird unter aerobem Schütteln bei 30 G während einer Zeitspanne von 24 Stunden durch geführt_o Zwei ml der erhaltenen Impfkulturbrühe werden auf einen 250 ml-Erlenmeyer-Kolben aufgeimpft, der 20 ml eines Gärungsmediums enthält. Dieses Gärungsmedium besitzt folgende Zusammensetzungt

0,5$Pepton

0,5$ Hefeextrakt ^; " -

2,5$ Maisflüssigkeit

0,3$ Natriumchlorid

0,5$ Natrium-L-glutamat

Der pH-¥ert des Mediums vor der^Sterilis'atÄÄ-i&etMg-ti 7V3.' Der pH-Wert wird unter Verwendung von 5 n-lTAOH eingestellt

Fach der Durchführung des Züch'tens während einer Zeitspanne von 48 Stunden unter aerobem Schütteln bei 3O⁰C werden die erhaltenen Mikroorganismenzellen von der Gärungsbrühe ab- geschleudert, worauf ein zweimaliges Waschen mit einer 0,9- foigen NatriumChloridlösung erfolgt. Anschließend werden die ■Zellen in einem 1/30 molaren Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 6,8 in einer Menge von 10 mg/ml, bezogen auf die getrockneten Zellen, suspendiert. 6-Aminopenicillansäure und KaliumpC-aminophenylacetat werden zur Erzeugung von Mengen von 1,5 mg/ml bzw. 10 mg/ml zugesetzt. Anschließend wird die Reaktionslösung während einer"Zeitspanne von 40 Stunden bei 57 C reagieren gelassen.

Die Menge an oC-Aminobenzylpenicillin, .die in der Reaktionslö- ■ sung erzeugt wird, beträgt 1,53 mg/ml.

Beispiel 2 -

■öluyvera citrophila ATCG 21285 wird als Impfmikroorganismus verwendet. Die Züchtungsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 1, mit der Ausnahme, daß 0,2'/S Ammoniumphenylacetat dem Hauptgärungsmedium zugesetzt werden. Die Mikroorganismenzellen, die nach 48-stündiger Züchtung erhalten werden, v/er-. den in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 umgesetzt, mit der Ausnahme, daß weitere 0,6 mg/ml 6-Aminopenicillansäure der Reaktionslösung 3 Stunden nach Beginn der Reaktion zugesetzt werden. Die Reaktion wird nach Zugabe der 6APA während einer Zeitspanne von 1 Stunde fortgesetzt. Die Menge der; -in der erhaltenen ReaktionüIosung erzeugtenc£rAminobenzylpenic ill ins beträgt 2,38 m_L;/ml.

-,-,.,, 3 0 9 811/ 1 0 7 5

196S521

Betspiel 3

Es wird der gleiche Impf mikroorganismus wie in Beispiel .2 verwendet. Ausserdem werden die dort beschriebenen Züchtungsbedingungen eingehalten. Allerdings werden 3 rag/ml des Kaliumsalzes von Penicillin G- der Reaktionslösung gemäß Beispiel 1 anstelle von 6-Aminopenicillansäure zugesetzt. Ferner werden 10 mg/ml-=36-Aniinophenylacetatamid der Heaktionslösung anstelle von Kalium-^-aminophenylacetat zugegeben. Im übrigen sind die Reaktionsbedingungen die gleichen wie in Beispiel 1. Mach 5-stündirer Reaktion beträgt die Menge des in der Heaktionslösung erzeugten öG-Aminobenzylpeiiicillins 2,52 mg/ml.

Beispiel j4 . , ■ : · .

Ehodopseudomonas spheroides ATCG 21286 und Micrococcus ureae Al¹CO 21288 v/erden als ImpfuikroorganisiiLen verwendet* Die Züßhtungsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 1. Nach 48-stündigern Züchten werden 6-Aiiiiriopenicillansäure und oC-Amino— : phenylacetatäthjrlester der G-ärungsbrühe selbst in Mengen von 1,5 mg/ml bzw. 10 rag/ml züge"aetzt, ohne daß dabei die Mikrooiv'.anismenzellen abgetrennt werden_o Der pH-Wert der Garungsflüasigkeit v/ird auf 7,1 eingestellt. Dann wird "das. Züchten fortgesetzt. " ,

Y/ährend des Züchten^ wird der pH-.'/ert der (rärungsflüssigkeit unbur Verv/enduiif'i von öhlorv/aasers fcoffsäure oder Matriumhydro- xyd, und «war je nach Erfordernis, alle 30 Minuten auf 7,1 uin^eatellt. Die Menge deaaich in der erhaltenen öärungs-

" ^a 3.08β1 t / 1076 BAD ORIGINAL

flüssigkeit anreichernder^ cC-Aminohenzylpenicillins' "beträgt" :; : nach 5-stündiger Reaktion Mit den Substraten 1-, 20 mg/ml im --.λ Falle"von RhOdopseudömonas spheroides und 1,08. mg/ml im Falle, von Micröcoccus ureae. - ■-'■'■■ ' '.~ ■ ~ ~ ". , '.

Beispiel 5 -'..„.

Streptomyces phaeochromogenes AIOÖ =21289^: und Kobardia globe-• rula ATCC 21292 werden als Impf stamme verwendet. Bs v/ird ein Gärungsmed'ium eingesetzt, das folgende Zusammensetzung- "besitzt:

y/o lösliche Stärke

2^a/o So^abohnenpulver ⁼ ·

0,2?^ ITatriuraChlorid

0,5$ Hefeextrakt '

0, 5/i Bepton ·

Das Medium "besitzt vor der Sterilisierung einen pH-V/ert von 7,3· Sie anderen ZuchiEingsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 1.

Uach 4-tägigem Züchten werden 25 rag/ml Penicillin V im Falle von Streptomyces phaeochroüiogenes und 25 mg/ml Penicillin G im lalle von Nocardiä globerula zusammen mit 10 mg/ml rfc-Arninophenylacetatmethylester der Gärungsfliissigkeit zugesetzt» Der pH-Wert der Gärungsflüssigice it wird auf 6,8 eingestellt, worauf das Züchten fortgesetzt wird. Während des Züchtens wird der pH-Wert der .Gärungsflüssigkeit unter Verwendung von Chlorwasserstoff säure oder Ilatriumhydroxyd alle 50 Hinuten auf 6_t8 eingestellt. Die Menge des in der Gärungsflüssig-

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keif angereicherten (^Aminobenzylpenicillins beträgt 6 Stun- ~~den naciuder Zugabe des Substrats zu Streptomyees phaeochromogehes 1,27 mg/ml. Im Falle yon Uoeardia globerula werden 2,04 mg/ml oC-Aminobenzylpenioillin χ_η d_er G-ärung3flüssigkeit angereichert.

Beispiel 6

Pseudomonas aeruginosa ATCO 15246 wird als Impfmikroorganis— mus verwendet. Das Impf kai turinedium enthält Λ$ Pepton, 1$ Fleischextrakt, 0,5^ Hefeextrakt und 0,25$ Natriumchlorid. Eine Platinschleife des Impf mikroorganismus ?,iird auf einen 250 ml-Erlenmeyer-Kolben aufgeimpft, der 20 ml des Impfmediums enthält. Das Züchten wird unter aerobem Schütteln bei 3O⁰C während einer Zeitspanne von 24 Stunden durchgeführt. 2 ml der erhaltenen Impfkulturflüasigfceit werden auf einen 250 ml-Erlenmeyer-lCoIben auf^eimpft_r der 20 ml eines (xärungsmediums enthält, das folgende Zusasimensetzung aufweist»

5?° n-ParaffiniTiischung (eine Mischung aus äquivalenten

Mengen an C₁₁-C₁₄~n-Paräffinen)

Phenylaeetat

MgSO₄-7H₂O
0,001$ MnSO₄-4H₂O

0,55$ Hefe extrakt "■
0,2^ Maisflüssigkeit
2?S CaCO₃

Der pH-Wert des Mediums beträgt vor der Sterilisierung 7,3. Nachdem das Züchten während einer Zeitspanne von 72 Stunden bei 3O⁰O unter aerobem Schütteln der Kultur durchgeführt wor- , den ist, werden die Mikroorgänismenzellen von der G-ärungsflüssigkeit durch Zentrifugieren abgetrennt, zweimal mit einer 0,9- ^igen natriumchloridlösung gewaschen und anschließend in einem 1/30 molaren Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 6,9 in einer Menge von 8 mg/ml (bezogen auf die trockenen Zellen) suspendiert. Anschließend werden 2,5 mg/ml 6-Aminopenicillansäure und 10 mg/ml caC-Aminophenylacetatmethylester der Lösung zugesetzt. Die Reaktion wird bei 37°O während einer Zeitspanne von 5 Stunden fortschreiten gelassen. DieMenge des in der erhaltenen Reaktionslösung erzeugten qC-Aminobenzylpenicillins beträgt 3,05 mg/ml.

Beispiel 7 -

Brevibacterium cerinus.ATGC 15112 v/ird als Impfmilcroorganismus verwendet. Die Züchtungsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 6. Der Reaktionslösung werden 10 mg/ml p-Aminophenylacetatamid anstelle des ^-Aminophenylacetatmethylesters zugesetzt. Die anderen Reaktionsbedingungen sind jedoch die gleichen wie in Beispiel 6. liach 4-stundiger Reaktion beträgt die Menge des in der Reaktionslösung erzeugten p-Aminobenzylpenicillins .3,82 mg/ml-.

Beispiel 8

Arthrobacter simplex ATCC 15799 wird als Impfmikroorganismus •verwendet. Es wird das gleiche Gärungsmedium wie in Beispiel 6

"" "-VmV^; ,.. 309811/1075 _BAD

eingesetzt, mit der Ausnahme, daß 7$ Kerosin anstelle der n-Paraffinmischung eingesetzt werden. Ausserdem wird das Phenylacetat weggelassen. Die anderen Zuchtungsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 6. Nach 72-stündigem Züchten werden jedoch 2 mg/ml ö-Aminopenicillansäure. und 10 mg/ml e£-Aminophenylacetataraid der· Gäru-ngsflüssigkeit selbst ohne Abtrennung der Zellen zugesetzt. Der - pH-V/ert der Gärungsflüssigkeit wird auf 6,5 eingestellt, worauf das Züchten fortgesetzt wirdi Während des ZU elite ns wird der pH-Wert der Gärungsflüssigkeit unter ; Ve rwendung von Chlorwasserstoff säure oder ITatriumhydrO-xyd alle 30 Minuten eingestellt. Sechs Stunden nach Zugabe der Substrate haben sich 2*75 mg/ml eC-Aminobenzylpenicillin in der Gärungsflüssigkeit angereichert. ^:

Beispiel 9 -

Gorynebacterium fasoians_vATGC 12975 wird als Impfstamm verwendet. Die Züchtungsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 6. Eine Reaktionslösung wird durch Zugabe von 3 mg/ml Penicillin G (Kai i. ums al ζ) anstelle der β-Aminopenieillansäure zu der iteaktioruilüsung gemäß Beinriiel 1 hergestellt. Die anderen Reaktionsbedinfune.en alnd die gleichen wie in, Beispiel 6. Nach-•'i'i:,i dio Reaktion 5 Stunden fortgeschritten ist, werden. 1,86 mg/ ••ril. Qb-^=J inobGuaylpeniGillii-T in der Re akti ons lösung gefunden.

j(.1 10

Vnrachiedene Stänme, iJiid awar Micrococcus ureae ATCC 21288, ium smeynatis ATCC 21293 und llocärdia globerula

3 0 ta 11/10 7 5

ATCC 21022 werden als Impfmikroorganismen verwendet.. Das verwendete Hauptgärungsmedium entspricht demgemäß Beispiel 6'eingesetzten Medium, -wobei jedoch das Phenylacetat weggelassen 1st. Die anderen Züchtungsbedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 6. Fach 72-ständig em Züchten-werden jedoch das Kaliumsalz von Penicillin & sowie p-Aminophenylacetatäthylester der -Gärung sflüssigk ext selbst in Mengen von 4 rag/ml bzw. 15 -mg/ml zugesetzt, ohne daß dabei die iiikroorganismenzellen von der Flüssigkeit abgetrennt werden. Der pE-Wert der G-ärungsflüsslgkeit wird auf 5,8' eingestellt, worauf das Züchten fortgesetzt wird. Während des Züchtens wird-der pH-Wert der G-ärungsflüssigkeit unter Verwendung von Chlorwasserstoffsäure oder Eatriumhydroxyd auf 5,0 eingestellt. Der pH-Wert wird, nachdem. das Züchten während einer Seitspanne von 3 Stunden nach Zugabe der Substrate "fortgesetzt worden ist, auf 7,2 eingestellt. Dann wird das Züchten fortgesetzt, wobei der pH-Wert■alle 30 Minuten auf 7,2 eingestellt wird. Die Mengen an p-Aminobenzylpenicillin, welche sich in der erhaltenen Reaktionslösung angereichert haben, sind in der .Tabelle". I zusammengefaßt:

Tabelle I - : ■ . -

Menge an erze-B^ p-Aminobenzylperii Mikroorganismenstamme; cillin (mg/ml )

Micrococcus ureae ATCC 21288 2,37

Mycobaeterium smegrnatis ATCC. 21293 3,09

Foeardia globerula ATCG 21022 2,75

309811/107B

Claims (1)

1. P a t e η t a η s ρ rü c h e

   •^:1. Verfahren zur Herstellung von oC^Aminob enzylpeni cillin durch Umsetzung von 6-Aminopenicillansäure, von Penicillin oder eines Penieillinderivats mit oC-Aminobenz-ylacetat in G-egenwart eines unter aeroben Bedingungen in einem wäßrigen Uährmedium gezüchteten Mikroorganismus, dadurch gekennzeichnet, daß ein Mikroorganismus des G-enus Pseudomonas, Arthrobacter, Corynebacterium, Brevibacterium, Micrococcus, Mycobacterium, liocardia, Kluyvera, Rhodopseudomonas und Streptomyces verwendet viird.

   2«, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Pseudomonas sp. Al¹CC 21234 verwendet wird.

   3.. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Kluyvera citrophila ATCC 21285 verwendet wird,,

   4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Rhodopseudomonas spheroides ATCC 21286 verwendet wird.

   5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzei ohnet, daß als Mikroorganismus Micrococcus ureae ATCC 21288 verwendet wird_o

   6'«, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Streptomyoes p-haeochromogeiies ATCC 21289 verwendet wird.

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   7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Nocardia globerula ATCC 21292 verwendet wird.

   8. Verfahrennach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Pseudomonas aeruginosa ATCC 15246 verwendet wird.

   9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzelehnet, daß als Mikroorganismus Brevibacterium cerinus ATCG 15112 verwendet wird..

   10. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzelehnet, daß als Mikroorganismus Arthrobacter simplex ATCC 15799 verwendet wird. ₌

   .· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennze lehne t, daß als Mikroorganismus Gorynebacterium fascians ATGC 12975 verwendet wird. "■=..„.'

   12. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennze lehne t,. daß als Mikroorganismus Mycobacterium smegmatis ATCC 21293 verwendet

   wir do . _"■-...

   13. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeiohnet , daß als Mikroorganismus A^Tocardia globerula ATCC 21022 verwendet wird.

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