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DE1768985C3 - Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven Steroid-Verbindungen, die einen am 13 ß -Kohlenstoffatom (C1 bis C4)alkylsubstituierten 17-Hydroxy-8,14-secogona-polyen- 14-on-kern enthalten - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven Steroid-Verbindungen, die einen am 13 ß -Kohlenstoffatom (C1 bis C4)alkylsubstituierten 17-Hydroxy-8,14-secogona-polyen- 14-on-kern enthalten

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Publication number
DE1768985C3
DE1768985C3 DE1768985A DE1768985A DE1768985C3 DE 1768985 C3 DE1768985 C3 DE 1768985C3 DE 1768985 A DE1768985 A DE 1768985A DE 1768985 A DE1768985 A DE 1768985A DE 1768985 C3 DE1768985 C3 DE 1768985C3
Authority
DE
Germany
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secogona
substituted
carbon atom
methoxy
alkyl
Prior art date
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Application number
DE1768985A
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English (en)
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DE1768985A1 (de
DE1768985B2 (de
Inventor
Masao Nishinomiya Isono
Takuichi Amagasaki Miki
Takeshi Suita Takahashi
Yoshio Takarazuka Yamasaki
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Chemical Industries Ltd filed Critical Takeda Chemical Industries Ltd
Publication of DE1768985A1 publication Critical patent/DE1768985A1/de
Publication of DE1768985B2 publication Critical patent/DE1768985B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE1768985C3 publication Critical patent/DE1768985C3/de
Expired legal-status Critical Current

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    • C07C49/00—Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
    • C07C49/587—Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring
    • C07C49/753—Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing ether groups, groups, groups, or groups
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  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

a) zur Herstellung von Verbindungen, die einen am 13/3-KohIenstoffatom (Cr bis G))-alkyI-substituierten 17j9-Hydroxy-8,14-secogona-13,5(10),9(ll),15-pentaen-14-on-kern enthalten, Verbindungen, die einen am ^-Kohlenstoffatom (Cr bis C))-alkylsubstituierten
8,14-Secogona-l,3,5(10),9(ll)-pentaen-14,17-dion-kern enthalten, der Einwirkung eines Enzymsystems von Debaryomyces vini IFO 1214, Pichia wickerhamii IFO 1278, Pichio pijperi IFO 1290, Hansenula capsulata IFO 0984 (NRRL Y-1842) oder Hansenula holst« IFO 0980 (NRRL Y-2155) unterwirft, oder
b) zur Herstellung von Verbindungen, die einen am 130-Kohlenstoffatom (Cr bis Gi)-alkyl-
substituierten 17«-Hydroxy-8,14-secogona-13,5( 10)3( 11 ),15-pentaen- 14-on-kern enthalten, Verbindungen, die einen am 13/?-Koh!enstoffatom (Ci- bis C»)-alkylsubstituierten
8,l4-Secogona-l33(l0)3(ll),15-pentaen-14,17-dion-kem enthalten, der Einwirkung eines E^zymsystems von Kloeckera magna IFO 0868 unterwirft, oder
c) zur Herstellung von Verbindungen, die einen am 13jS-Kohlenstoffs<tom (Ci- bis Gt)-alkylsubstituierten 170-Hyiiroxy-8,14-secogona-U^(10),9(l l)-tetraen-14-on-kern enthalten, Verbindungen, die einen am 13/J-Kohlenstoffatom (Ci- bis Gt)-alkylsubstituierten 8,14-Secogona-13,5( \ 0),9( 11), 15-pentaen-14,17-dion-kern enthalten, der Einwirkung eines Enzymsystems von Candida utiiis IFO 1086, Debaryomyces nicotianae IFO 0855, Pichia etchellsii IFO 128.3, Rhodotorula rubra IFO 0891, Schizosaccharomyces pombe IFO 0362, Hansenula saturnus IFO 0993 oder Hansenula holstii IFO 0980 (NRRL Y-2155) unterwirft.
bindung, die einen am 13/l·Kohlenstoffatom substituierten 8,14-Secogona-polyen-14,l 7-dion-kern enthält, einer Ringschlußreaktion zum entsprechenden 13/?-kohlenstoffsubstituierten Gonapolyen-17-on-kern unterworfen wird, entsteht ein Racemat in bezug auf den 13-Substituenten, wobei eine Ausbeute erhalten wird, die bestenfalls die Hälfte der stöchiometrischen Ausbeute beträgt Ferner wird das Steroid des natürlichen Typs (bei dem der 13-Substituent ^-orientiert ist) nur
ίο durch optische Aufspaltung erhalten.
Ferner wurden zwei chemische Verfahren zur Herstellung von Verbindungen, die einen am 13/?-Kohlenstoffatom substituierten Ua-Hydroxy-e.H-secogona-13,5(10),9(ll)-tetraen-14-on-kern enthalten, von Miki (einem der Erfinder) und seinen Mitarbeitern und von C. H. Kuo und Mitarbeitern (Chemistry and Industry 1340 (1966)) entwickelt.
Die nach diesen Verfahren erhältlichen Verbindungen sind jedoch immer 50 :50-Gemische einer Verbindung, die einen am 13/?-Kohlenstoffatom substituierten
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven ungesättigten Steroiden, die einen am 130-Kohlenstoflatom (Ci- bis Ct)-alkylsubstituierten 17-Hydroxy-8,l4-secogonapolyen· 14-on-kern enthalten (nachstehend »Verbindungen (II)«) genannt, aus Verbindungen, die einen am 13/?-Kohlenstoffatom (Ci- bis C.)alky!substituierten 8,I4-Secogona-I,3,5(10),9(l 1),15-pentaen-14,17-dion-kern enthalten (nachstehend »Verbindungen (I)« genannt), unter Verwendung von Mikroorganismen.
Kürzlich wurden Verfahren zur Totalsynthese von 19-nor-Steroiden entwickelt (siehe beispielsweise Miki und Mitarbeiter »Proceedings of the Chemical Society« 1963, Seite 139, Crispin und Mitarbeiter, ibid, 1963, Seite 22, Windholz und Mitarbeiter »Journal of the Organic Chemistry«. 28, Seite 1092, und Smith und Mitarbeiter »Experienta«, 19, Seite 394).
Diese Verfahren haben jedoch bei ihrer Anwendung für die Großherstcllung Nachteile: Wenn eine Ver14-on-kern enthält, mit ihrem Enantiomeren. Um diese Verbindungen in natürliches östron u.dgl. umzuwandeln, müssen sie einer optischen Aufspaltung in irgendeiner geeigneten Stufe unterworfen werden.
Gegenstand der Erfindung ist das im Patentanspruch bezeichnete, großtechnisch durchführbare Verfahren zur Herstellung der Verbindungen (II) unmittelbar aus der Verbindung (I) in guter Ausbeute.
Der Substituent am 13-Kohlenstoffatom ist ein (Cr bis Gt)-AIkylrest wie Methyl, Äthyl, Propyl, Butyl.
Die als Ausgangsmaterial verwendete Verbindung (I), die beispielsweise nach dem Verfahren der NL-PS 66 12 205 (ausgelegt 1.3.1967) hergestellt werden kann, trägt einen (Ci- bis C4)-Alkylsubstituenten am 13-Kohlenstoffatom und beliebig in der 1 -, 2-, 3-, 4-, 6-, 7-, 11 -, 12-, 15- oder 16-Stellung 1 bis 3 andere Substituenten aus der aus Sauerstoffgruppen, Halogengruppen und niederen Alkylresten bestehenden -Gruppe.
Als Sauerstoffgruppen kommen beispielsweise Hydroxylgruppen, niedere Acyloxyreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und Alkoxyreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und als Halogenatome beispielsweise Fluor, Chlor und Brom in Frage. Als niedere Alkylreste kommen beispielsweise geradkettige Reste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder Dreiringe oder Sechsringe einschließlich der vorstehend als Substituenten genannten Reste, die eine oder mehrere Sauerstoffgruppen enthalten, in Frage.
Als Beispiele von Ausgangsverbindungen für das Verfahren gemäß der Erfindung seien genannt:
8,14-Secoöstra-1,3,5( 10),9( 11 ),15-pen taen-
14,17-dion,
3-Methoxy-8,14-secoöstra-1,3,5(10),9(11),15-pen-
taen-14,17-dion,
3-Äthoxy-8,14-secoöstra-l,3,5(10),9(11),15-pen-
taen-14,17-dion,
S-Methoxy-n-äthyl-e.H-secogonal,3,5(10),9(ll),15-pentaen-14,17-dion,
3-Ät hoxy-13-äthyl-8,14-secogona-1,3,5( 10),9( 11), 15-
pentaen-14,17-dion,
3-Methoxy-13-isopropyl-8,14-secogona-
l,3,5(10),9(11)115-pentaen-14,17-dion,
β--, 3-Ä thoxy-13-isopropy 1-8,14-secogona-
I,3,5(lü),9(ll),l5-pentaen-14,l 7-dion,
3-Benzyloxy-8,14-secoöstra-l,3,5(10),9(ll),15-pen-
taen-14,l7-dion.
2,3-Dimethoxy-13-äthyl-8,14-secogona-
13^(lO),9(n),l5-pentaen-l4,l7-dion,
S-Methoxy-e-methyl-e.M-secoöstra-
13,5{10),9(11),15-pentaen-14,17-dion und
a-Methoxy-e.e-dimethyl-e.H-secoöstra-U,5(10),9(ll),15-pentaen-14,17-dion.
Die gewünschten Verbindungen (H) gehören zu den folgenden Gn'j>pen:
IO
1) Verbindungen mit einem am 13/3-Kohlenstoffatom (Ci- bis Ct)-alkyisübstituierten 17/J-Hydroxy-8,14-secogona-U> 5(10),9(l l),15-pentaen-14-on-kern, die von Mikroorganismen wie Debaryomyces vini, Pichia wickerhamii, Pichia pijperi, Hansenula holstii und Hansenula capsulata gebildet werden;
2) Verbindungen, die einen am 13/3-Kohlenstoffatom (Ci- bis Ct)-alkylsubstituierten 17«-Hydroxy-8,14-
secogona-1,3,5( 10),9( 11), 15-pentaen-14-on-kern
enthalten und durch Mikroorganismen wie Kioeckera Msgna gebildet werden;
3) Verbindungen, die einen am 13/J-Kohleistoffatom (Ci- bis QJ-alkylsubstituierten 17/?-Hydroxy-8,14-secogona-l,3,5(10),9(l l)-tetraen-14-on-kem enthalten und durch Mikroorganismen wie Candida utilis, Debaryomyces nicotianae, Pichia etchellsii, Rhodotorula rubra, Schizosaccharomyces pombe, Hansenula saturnus, Hansenula holstii, gebildet werden.
JO
Die Nährmedien für das Wachstum dieser Mikroorganismen enthalten Kohlenstoff- und Stickstoffquellen, die von den Mikroorganismen assimilierbar und verwertbar sind, und können anorganische Salze, verschiedene Vitamine und Aminsäuren enthalten. js
Im einzelnen eignen sich als Kohlenstoffquellen beispielsweise Glucose, Saccharose, Dextrin, Glycerin usw. und alle Stickstoffquellen, beispielsweise anorganische stickstoffhaltige Materialien, wie Pepton, Fleischextrakt, Casein, Maisquellwasser, Trockenhefe und Hefeextrakt, und anorganische Stickstoffverbindungen, wie Ammoniumnitrat, Ammoniumphosphat und Ammoniumsulfat.
Beispiele der obengenannten anorganischen Salze sind Natriumchlorid, Kaliumsulfat und Magnesiumsulfat. Die Nährstoffe, die das Wachstum der Mikroorganismen begünstigen, werden in geeigneten Mengenanteilen in einem Kulturmedium verwendet. Die Kultivierung kann beliebig als Schüttelkultur, stationäre Kultur und Submerskulur unter Bewegung und Belüftung erfolgen.
Die Ausgangsverbindung (I) kann entweder zu Beginn der Kultivierung oder in einer geeigneten Phase im Verlauf der Kultivierung kontinuierlich oder in Abständen oder auf einmal zugesetzt werden. Die Endkonzentration der Verbindung (I) im Medium beträgt vorzugsweise etwa 0,05 bis 0,6% (Gewicht/Volumen).
Die Verbindung (I) kann in Form eines Pulvers oder als Lösung oder Suspension in einem geeigneten Lösungsmittel, z. B. Aceton, Methanol, Äthanol, ω Äthylenglykot, Propylengiykol, Dimethylformamid oder Dioxan, mit oder ohne Zusatz einen oberflächenaktiven Mittels, Dispergiermittels u.dgl. verwendet werden.
Wenn der Mikroorganismus nach Abtrennung von der Kulturflüssigkeit verwendet wird, können die bs Mikrobienzellen in einer Pufferlösung von geeignetem pH-Wert und geeignet;- lonenstärke oder in Wasser suspendiert und dann mit der Ausgangsverbindung (I) zusammengeführt werden, um diese umzuwandeln.
Die Reaktion verläuft gewöhnlich bei tinem pH-Wert von etwa 2 bis 11 und oei einer Temperatur zwischen etwa 10 und 50° C, vorzugsweise zwischen etwa 25 und 400C, für eine Dauer von etwa 2 Tagen. Die optimalen Bedingungen variieren jedoch mit Faktoren, wie den Ausgangsverbindungen und den Mikroorganismen, und es ist zweckmäßig, in jedem Einzelfall die optimalen Bedingungen zu wählen.
Das auf diese Weise im Reaktionsmedium gebildete und angereicherte Endprodukt (II) kann nach verschiedenen bekannten Methoden davon abgetrennt werden, z. B. durch Adsorption an einem geeigneten Adsorptionsmittel, z. B. Silicagel, und anschließende Elution mit einem geeigneten Lösungsmittel, z. B. einem Benzol-Aceton-Gemisch oder Chloroform-Aceton-Gemisch, oder durch Ausnutzung des Unterschiedes im Verteilungskoeffizienten zwischen zwei Flüssigphasen beispielsweise bei der Gegenstromverteilung oder nach üblichen chromatographischen Met'·öden.
Die optisch aktiven, einen am 13£· Kohlenstoffatom (Ci- bis C4)-alkylsubstituierten 17-Hydroxy-8,14-secogona-pentaen-14-on-kern enthaltenden Verbindungen, werden unter Verwendung des Enzymsystems einer Hefe, ζ B. Candida solani, in das entsprechende Tetraen überführt.
Die in der oben beschriebenen Weise hergestellten optisch aktiven Verbindungen, die einen am 13j3-Kohlenstoffatom (Ci- bis C4)-alkyIsubstituierten 17-Hydroxy-e.H-secogona-tetraen-H-on-kern enthalten, werden beispielsweise nach der Methode, die in »Chemistry and Industry« 1966, S. 1340 beschrieben ist, in Östron und andere 19-nor-Steroide umgewandelt.
Zur Zeit bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung werden in den folgenden Beispielen beschrieben, in denen die Prozentsätze auf Gewicht/Volumen bezogen sind. Gewichtsteile verhalten sich zu Raumteilen wie Gramm zu Kubikzentimeter.
Die Mikroorganismen, die in den in den Beispielen beschriebenen Versuchen verwendet wurden, sind beim Infinite for Fermentation, Osaka, Japan unter den Hinterlegungsnummern, die in den Beispielen als »IFO-Nummern« genannt sind, hinterlegt. Einige Mikroorganismen, die durch »N.R.R.L.« mit einer Zahl gekennzeichnet sind, sind beim Northern Regional Research Laboratory, USA, hinterlegt
Beispiel 1
Je 40 Raumteile eines flüssigen Mediums (pH 5,8), das 0,3% Hefeextrakt, 0,5% Polypepto-. 0,2% Maisquellwasser, 5% Glucose und 5% Saccharose enthält, werden mit einer Siebentage-Schrägagarkultur eitles der \p Tabelle 1 genannten Mikroorganismen geimpft. Das geimpfte Medium wird 2 Tage bei 28°C gehalten. Nach dieser Zeit wird eine Lösung von 0,0? Gew.-Teilen
yOJOJ
14,17-dion (nachstehend als »Substrat (I)« bezeichnet) in 0,8 Raumteilen Äthanol zugesetzt. Die Kultivierung wird weitere 2 Tjge fortgesetzt. Die erhaltene Brühe wird dann mit insgesamt der gleichen Menge Äthylacetat in zwei Portionen gemischt. Die in die Äthylacetatphase überführten Reaktionsprodukte werden mit Wasser gewaschen, dehydratisiert und zur Trockene eingeengt.
Die Säulenchroniitographie wird unter Verwendung von Silicagel durchgeführt. Die Reaktionsprodukte werden von der Fraktion isoliert, die mit einem 9 :1 -Gemisch von Benzol und Aceton eluiert worden ist. Die
Produkte werden nach ihren Rotationsdispersionskurven in Äthanol bestimmt. Fi g. l(a) bis (g) zeigt die Spektren dieser Verbindungen und anderer damit eng verwandter Steroide:
a) 3-Methoxy-8.14secoöstra-l,3,5(10),9(l l)-tetraen-170-ol-14-on (in der Tabelle als ßß bezeichnet);
b) 3-Methoxy-8,14-secoöstra-1,3,5(10),9(1l),15-pentaen-170-ol-14-on (in der Tabelle als Δ"-ββ bezeichnet);
c) 3-Methoxy-13«-methyl-8,14-secogona-1,3,5(10),9( 11)-tetraen-17/?-ol-l 4-on;
d) 3-Methoxy-l3i\-methyl-8,14-secogona-1,3.5(I0),9(ll),15-pentaen-17j3-ol-14-on;
c) Gemisch von S-Methoxy-S.H-sccoöstra-1.3,5(10),9(]l)-tetraen-l7/3-ol-l4-on und
3-Methoxy-8,14-secoöstra-I,3.5(10),9(11).l5-pentaen-!7/3-ol-l4-on;
f) Gemisch von 3-Methoxy-13.x-methyl-8,14-secogona-1,3.5(IO),9(l l)-tetraen-l7/J-ol-l4-on und
3-Methoxy-13«-methyl-8,)4-secogona-1,3,5( 10),9,l 5-pentaen-170-ol-14-on und
g) 3-MeIhOXy-S1M-SeCOOsIrB-1,3,5( 10),9(11 ),15-pentaen-17λ-οΙ-1 4-on (in der Tabelle als Δ^-ßtx be zeichnet).
Die Proben, die aus F i g. 1 nicht voneinander unter schieden werden können, z. B. 3-Methoxy-8,l4-seco östra-l,3,5(lO),9(U),15-pentaen-l70-ol-14-on um
3-Methoxy-13«-methyl-8,14-secogona-1,3,5( 10),9( 11 ),15 pentaen-l7^-ol-14-on, werden in Methanol zusammei mit einer geringen Menge p-Toluolsulfonsäure be Raumtemperatur stehen gelassen und auf die Bildunj von 3-Methoxy-9,14-oxido-8,14-secoöstra-1,3,5( 10), 15 tetra^n-^-on durch Dünnschichtchromatographie un tersucht (ein 9.14-Oxyd tritt nur im Falle der letztge nannten Verbindung auf). Auf diese Weise wird festge stellt, ob die sterische Orientierung /wischen dei I3-Methylgruppe und der 17-Hydroxylgruppe eis odei trans ist.
Mikroorganismus IFO-Nr. Produkt Umsatz
NRRL-Nr. Gew.-%
Candida utilis (1086) ßß 72
Debaryomyces nicotianae (0855) ßß 75
Debaryomyces vini (1214) A^-ßß 68
Debaryomyces vanriji (1285) "-ßß 70
Kloeckera magna (0868) /115-00 75
Piöhia wickerhamii (1278) Δ^-ββ 65
Pichia etchellsii (1283) ßß 70
Pichia pijperi (1290) Δ"-ββ 80
Rhodotorula rubra (0891) ßß 75
Schizosaccharomyces pombe (0362) ßß 78
Hansenula holstii (0980) ßßA»-ßß 78
NRRL-Y-2155
Hansenula capsulata (0984) Δΐί-ββ 70
NRR1-Y-1842
Hansenula saturnus (0993) ßß 75
Beispiel 2
snmiAil.» pinAc fli'iccicron MpHinmQ inH SRJ Hac
0.3% Hefeextrakt, 0,5% Proteosepepton (Difco), 0.2% Maisquellwasser, 5% Glucose und 5% Saccharose enthält, werden mit einer Kultur von Debaryomyces nicotianae IFO-0855 geimpft. Der Mikroorganismus wird 2 Tage bei 28= C gezüchtet. Dann wird eine Lösung von 1 Teil des Substrats (1) in 40 Raumteilen Äthanol zur Kultur gegeben, worauf noch weitere 2 Tage bebrütet wird. Das Reaktionsprodukt wird zweimal mit je 1000 Raumteilen Äthylicetat extrahiert und nach dem Abdestillieren des Lösungsmittels durch Säulenchromatographie an Silicagel mit einem Benzol-Aceton-Gemisch als Elutionsmittel gereinigt Das Lösungsmittel wird von der Fraktion, die das Produkt enthält, abdestilliert Der Rückstand wird aus Äthanol umkristallisiert, wobei 0,42 Gew.-Teile 3-Methoxy-8,14-secoöstra-13,5(10),9(l I)-tetraen-17ß-ol-14-on als farblose Plättchen vom Schmelzpunkt 112—113sC erhalten werden. Die Verbindung zeigt die negative Cottoneffektkurve und eine spezifische Drehung [λ] » von -39° (C= 03% in Dioxan).
Beispiel 3
Auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise wird eine Lösung von 1 Gew.-Tei! des Substrats (I) in 40 Raumteilen Äthanol zu 1000 Raumteilen einer Zweitagekultur
von Pichia etchellsii (IFO-1283) gegeben, die dann zwei weitere Tage bebrütet wird. Das Reaktionsprodukt wird mit Äthvlarptat pYtrahiprt Hiirrh ^äiilpnrhrnmatn.
graphie gereinigt und der Kristallisation aus Äthanol überlassen, wobei 0,52 Gew.-Teile 3-Methoxy-8,14-secoöstra-l,3,5(lO).9(ll)-tetraen-170-ol-14-on als farblose Plättchen vom Schmelzpunkt 111 —113°C erhalten werden.
[*]:-· -39° (C=],O0Zo Dioxan).
Beispiel 4
Auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise winden 8 Raumteile einer 2,5%igen Lösung des Substrats (I) in Äthanol zu 200 Raumteilen einer Zweitagekultur von Hansenula holstii (IFO-0980) gegeben, die dann bei 28° C bebrütet wird Die Probenahme erfolgt 12, 24, 36 und 48 Stunden nach der Zugabe des Substrats (I). Die Proben werden jeweils mit Äthylacetat extrahiert Die Extrakte werden durch Säulenchromatographie ar Silicagel gereinigt und in Äthanol gelöst
Die Rotationsdispersion der äthanolischen Lösung wird gemessen. Die Ergebnisse sind in Fig.2 dargestellt (a, b, c und d).
Diese Rotationsdispersionskurven variieren mit der Kultivierungs-(Reaktions)-dauer. Beispielsweise stimmen die Kurven für die Produkte, die einer Kultivierungsdauer von 12, 24, 36 und 48 Stunden entsprechen mit den Kurven für S-Methoxy-e.M-secoöstra-
l3,5(10),9(1l),15-pentaen-17/?-ol-14-on, ein Gemisch von 3-Methoxy-8,l 4-secoöstra-1,3,5(10),9( II),l5-pentaen-17j3-ol-14-on und S-Methoxy-e.U-secoöstra-I,3,5(10),9(11)-tetraen-17jj-ol-l4-on bzw. 3-Methoxy-8,14-secoöstra-1,3,5{10),9( 11 )-tetraen-170-ol-14-on überein.
Während das Produkt, das der Reaktionsdauer von 1? Stunden entspricht, nicht kristallisiert, zeigt sein in einer Chloroformlösung aufgenommenes Absorptionsspektrum die Absorption für Hydroxy (3620 cm-') und «,/^-ungesättigtes Keton (1680 cm~').
Die Rotationsdispersion dieses Produkts, die in F i g. 2a dargestellt ist, ergibt die negative Cottoneffektkurve mit einem Fuß bei 360 Γημ. Da weder 3-Methoxy-9,14-oxido-8,14-secoöstra-1,3,5( 10),9( 11 )-pentaen-17-on noch dessen Enantiomeres gebildet wird, wenn dieses Produkt mit einer geringen Menge p-ToIuolsulfonsäure in Benzol behandelt wird, ist es offensichtlich, daß dieses Produkt die Verbindung S-Methoxy-e.H-secoöstra-1,3,5(10),9(11).15-pentaen-17/9-ol-14-on ist.
Das Produkt, das nach einer Kultivierungsdauer von 36 bzw. 48 Stunden erhalten wird, wird aus Äthanol in Form von farblosen Blättchen vom Schmelzpunkt 111-1130C kristallisiert (Ausbeute 78 Gew.-°/o). Die spezifische Drehung [λ] '„' und die Infrarotspektren der Produkte stimmen mit denen von S-Methoxy-e.H-secoöstra-l,3,5(1O),9(ll)-tetraen-170-ol-14-on völlig überein.
Aus den vorstehenden Feststellungen ist zu folgern, daß Hansenula holstii IFO-0980die Fähigkeit hat, zuerst die 17-Carbonylgruppe des Substrats (I) unter Bildung von 3-Methoxy-8,14-secoöstra-l,3,5(10),9(l l),15-pentaen-17j3-ol-14-on zu reduzieren und dann das zl15 des letzteren zu 3-Methoxy-8,14-secoöstra-1,3,5( 10),9(l I)-tetraen-17/?-ol-14-on zu reduzieren.
Beispiel 5
Auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise wird eine Lösung von 0,5 Gew.-Teilen des Substrats (I) in 40 Raumteilen Äthanol zu 1000 Raumteilen einer Zweitagekultur von Debaryomyces vanriji IFO-1285 gegeben, die dann 2 Tage kultiviert wird. Das Reaktionsprodukt wird mit Athylacetat extrahiert und der Extrakt durch Säulenchromatographie auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise gereinigt, wobei 0,35 Teile 3-Meth-
ygU.f^
14-on als Öl erhalten werden.
Die Rotationsdispersion des in Äthanollösung
κι gelösten öligen Produkts ist identisch mit der in Fig. l(b) dargestellten Rotationsdispersion. Wenn das Produkt mit p-Toluolsulfonsäure behandelt wird, tritt kein 9,14-Oxyd auf.
'"' Beispielö
Auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise gibt man 40 Raumteile einer 2,5%igen Lösung des Substrats (I) in Äthanol zu 1000 Raumteilen einer Zweitagekultur von
_'ii Kloeckera magna IFO-0868 und läßt dann die Reaktion 2 Tage bei 28°C vonstatten gehen. Nach dieser Zeit wird das Produkt mit Athylacetat extrahiert.
Der Extrakt wird durch Säulenchromatographie an Silicagel auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise ge-
r, reinigt, wobei 3-Methoxy-8,14-secoöstra-l,3,5(10),9,15-pentaen-17<x-ol-14-on als Öl erhalten wird (Ausbeute 75 Gew.-%).
Das kernmagnetische Resonanzspektrum des Produkts in CDCh (D; Deuterium) zeigt Peaks, die für die
jo /)'M7-ol-Struktur: 17-H (r 5,52, Dublett), 16-H (τ 2,62. Quartett) und 15-H (r 3,89 Quartett) charakteristisch sind.
Die Rotationsdispersion des Produkts, gemessen in einer Äthanollösung, ergibt die in Fig. l(g) darge-
j) stellten positiven Cottoneffektkurven. Der erste Peak tritt bei 360 ιτιμ auf. Dieses Produkt ergibt durch Behandlung mit p-Toluolsulfonsäure in Benzol ein 9,14-Oxyd.
Hierzu 3 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven Steroidverbindungen, die einen am 130-Kohlenstoffatom (Cr bis Ct)-alkylsubstituierten 17-Hydroxy-8,14-secogonapolyen-14-on-kern enthalten, dadurch gekennzeichnet, daß man
DE1768985A 1967-07-24 1968-07-19 Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven Steroid-Verbindungen, die einen am 13 ß -Kohlenstoffatom (C1 bis C4)alkylsubstituierten 17-Hydroxy-8,14-secogona-polyen- 14-on-kern enthalten Expired DE1768985C3 (de)

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